CN106220711A - 大蒜中提取得到的抗肿瘤活性的多肽 - Google Patents
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Abstract
本发明涉及从大蒜中分离得到的活性多肽，其氨基酸序列如SEQ ID NO.1‑7所示。该多肽具有较好的治疗乳腺癌的效果，同时对正常细胞无毒副作用。
Description
技术领域
本发明属于生物领域， 具体地涉及一种从大蒜中提取得到的能够治疗乳腺癌的抗肿瘤活性的多肽。
背景技术
癌症，亦称恶性肿瘤，为由控制细胞生长增殖机制失常而引起的疾病。癌细胞除了生长失控外，还会局部侵入周遭正常组织甚至经由体内循环系统或淋巴系统转移到身体其他部分。
癌症是一大类恶性肿瘤的统称。癌细胞的特点是无限制、无止境地增生，使患者体内的营养物质被大量消耗；癌细胞释放出多种毒素，使人体产生一系列症状；癌细胞还可转移到全身各处生长繁殖，导致人体消瘦、无力、贫血、食欲不振、发热以及严重的脏器功能受损等等。与之相对的有良性肿瘤，良性肿瘤则容易清除干净，一般不转移、不复发，对器官、组织只有挤压和阻塞作用，但癌症（恶性肿瘤）还可破坏组织、器官的结构和功能，引起坏死出血合并感染，患者最终由于器官功能衰竭而死亡。到了科学高速发展的今天，我们有理由相信癌症并非不治之症。致力于自然医学研究的医学专家们研究发现：负离子对抑制癌细胞转移有令人鼓舞的效果，重要的是利用自然因子负离子对癌症患者治疗对机体无任何损害，没有任何毒副作用。
在常规的癌症治疗中，主要有药物治疗、手术治疗、放射治疗以及化学治疗。目前已使用的抗肿瘤药物虽对大多数肿瘤有一定疗效，但仍存在着治疗有效率低、选择性差、毒副作用明显、易产生细胞耐药等问题。 因此，寻找高效、低毒、作用靶点明确的抗肿瘤药物仍是生物、医学科研领域的研究热点。
大蒜为百合科葱属植物蒜，植物学名称为AliurnSatlrum和AlliumCepa。多年生草木，具有强烈的臭辣味，为人工栽培。我国南北备省均有出产。大蒜在我国被用作药物有着悠久的历史，现代医学研究发现，大蒜具有抗菌、抗肿瘤、降血脂、抗血小板聚集等作用。而且已经分离得到了多种具有癌症抑制效果的蛋白质、脂类、多糖等。但是现实现有技术中还没有一种特别有限的针对癌症具有较好抑制活性的大蒜多肽。
发明内容
本发明的要解决的技术问题是提供一种抗乳腺癌活性物质的大蒜系列多肽。该多肽是从刚出土的大蒜蒜瓣中通过提取获得的。
本发明还提供了一种提取大蒜中活性多肽的方法，该方法包括，将新鲜出土的大蒜蒜瓣冷藏，成粉末，水提，超滤膜过滤，双向电泳分离，质谱，分离，干燥得到。
本发明还提供所述具体的肽的氨基酸序列为：
NB-DS-5：RCPSIGICLTT
NB-DS-8：LRMKSPPGGSRTT
NB-DS-9：SRLLMKGRRSPPMTT
NB-DS-10：GSPYLRMKGVGGSMRT
NB-DS-13：MYVSRLGSSGIGL
NB-DS-14：CPSRGSSAMARL
NB-DS-16：MARTSPYGEQSRP
本发明提供的一个技术方案是：
一种多肽，其序列为SEQ ID NO：1至7任一所示的具有30%以上同源性的多肽。
一种多肽，其序列为SEQ ID NO：1至7任一所示。
一种药物组合物，包括治疗有效量的SEQ ID NO：1至7任一所示的多肽和其药学上可接受的盐。
一种药物组合物，包括治疗有效量的SEQ ID NO：1至7任一所示的多肽和药学上可接受的载体或稀释剂。
本发明的药物组合物在制备用于治疗癌症的药物中的应用。
本发明的药物组合物在制备用于治疗乳腺癌的药物中的应用。
本发明的优点：
本发明的一系列从大蒜中提取的活性多肽对各种癌症均有良好的抑制效果，有望进一步制备成治疗癌症的药物。
具体实施方式
实施例1 大蒜多肽的提取
取刚出土的新鲜的大蒜（2日龄以内），去皮，成蒜瓣，液氮冷冻1h。研磨成粉末，加入pH7.0的PBS进行溶解，并过滤。上清采用超滤分离，超滤膜采用0.3KDa、5KDa、50kDa的超滤膜进行过滤，获得分子量0.3-5kDa和5-50kDa的不同组分， 检测各组分的抗肿瘤活性， 结果表明分子量 0.3-5kDa 的组分抗肿瘤活性最佳。
将超滤获得的具有最佳抗肿瘤活性组分，过DEAE FF阴离子交换层析预装柱， 上样缓冲液为 4mmol/L pH8.5 Tris-HCl 缓冲液， 每次上样量为 10mL， 洗脱液为含 1mol/L NaCl的4mmol/L pH8.5 Tris-HCl， 洗脱液先依次以3%(v/v)、 6%(v/v)、 9%(v/v)、 12%(v/v)、24%(v/v)、 100%(v/v) 的浓度进行梯度洗脱，流速为 5mL/min，检测波长为 280nm，层析图谱， 收集各峰， 检测各峰组分的抗肿瘤活性， 结果表明峰 5、8、9、10、13、14、16 组分具有最佳抗肿瘤活性， 把相应的峰组分脱盐后真空冷冻干燥保存。 即为本申请所要求保护的抗肿瘤活性多肽。
实施例2 所述多肽的抗乳腺癌活性检测
所述的各峰组分抗肿瘤活性分析为以MDA-MB-231 细胞， 采用MTT法追踪抗肿瘤活性组分。 采用PBS缓冲液作为对照。
MTT法： 取对数生长期的MDA-MB-231 细胞， 用胰酶消化后， 以4×104个/孔的密度接种于96孔板中， 每孔180μL， 在37℃， 培养24h。然后加样， 样品溶液应先经过微孔滤膜过滤除菌， 用培养液将样品稀释成 5 个浓度梯度， 每孔加入 20μL， 4 个平行孔， 置于细胞培养箱中继续培养 48h。然后， 加入MTT（5mg/mL） 20μL， 置 CO2 培养箱 37℃培养4h。弃除孔中培养液， 然后每孔加入DMSO 150μL， 37℃恒温振荡30min以充分溶解甲瓒结晶。酶标仪检测各孔在570nm波长处吸光度(A)值， 实验至少重复3次。细胞抑制率= ［(A对照-A样品 )/A对照］×100%。采用 Excel 分析软件计算半数抑制浓度 IC50。结果如表1所示：
| 多肽 | IC50 （μmol/L） |
| NB-DS-5 | 3.27 |
| NB-DS-8 | 3.56 |
| NB-DS-9 | 3.94 |
| NB-DS-10 | 4.02 |
| NB-DS-13 | 3.88 |
| NB-DS-14 | 4.02 |
| NB-DS-16 | 3.99 |
| PBS对照 | 无抑制效果 |
实施例 6 所述多肽对不同肿瘤细胞和正常细胞的细胞毒。
分别以人肝癌细胞BEL-7402、 人胶质瘤细胞U251、 人非小细胞肺癌细胞A549等肿瘤细胞为靶细胞，以正常的人肺成纤维细胞HFL1作为对照。采用MTT法，检测本申请的多肽对各种肿瘤细胞具有增殖抑制作用， 其中， 对BEL-7402的IC50 值为5.96μmol/L， 对HFL1的细胞毒性几乎没有。因此，本发明的多肽可以在治疗人肝癌、 胶质瘤、 肺癌、 乳腺癌的药物中进行应用。结果如表2所示：
| 多肽 | IC50 （μmol/L）BEL-7402 | IC50（μmol/L）U251 | IC50 （μmol/L）A549 | IC50（μmol/L）正常表皮细胞 |
| NB-DS-5 | 32.51 | 29.87 | 31.85 | 无明显抑制效果 |
| NB-DS-8 | 37.48 | 28.56 | 32.27 | 无明显抑制效果 |
| NB-DS-9 | 32.56 | 27.66 | 33.76 | 无明显抑制效果 |
| NB-DS-10 | 33.57 | 29.31 | 37.46 | 无明显抑制效果 |
| NB-DS-13 | 35.96 | 32.53 | 40.05 | 无明显抑制效果 |
| NB-DS-14 | 36.45 | 31.48 | 29.17 | 无明显抑制效果 |
| NB-DS-16 | 34.99 | 34.28 | 33.48 | 无明显抑制效果 |
| PBS对照 | 无明显抑制效果 | 无明显抑制效果 | 无明显抑制效果 | 无明显抑制效果 |
序列表
〈110〉马恒标
〈120〉大蒜中提取得到的抗肿瘤活性的多肽
〈160〉7
〈210〉1
〈211〉11
〈212〉PRT
〈213〉人工合成
〈400〉1
RCPSIGICLTT
〈210〉2
〈211〉13
〈212〉PRT
〈213〉人工合成
〈400〉2
LRMKSPPGGSRTT
〈210〉3
〈211〉15
〈212〉PRT
〈213〉人工合成
〈400〉3
SRLLMKGRRSPPMTT
〈210〉4
〈211〉16
〈212〉PRT
〈213〉人工合成
〈400〉4
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〈210〉5
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〈212〉PRT
〈213〉人工合成
〈400〉6
CPSRGSSAMARL
〈210〉7
〈211〉13
〈212〉PRT
〈213〉人工合成
〈400〉7
MARTSPYGEQSRP
Claims (6)
1.一种多肽，其序列为SEQ ID NO：4所示的具有30%以上同源性的多肽。
2.一种多肽，其序列为SEQ ID NO：4所示。
3.一种药物组合物，包括治疗有效量的权利要求1-2中任一所述的多肽和其药学上可接受的盐。
4.一种药物组合物，包括治疗有效量的权利要求1-2中任一所述的多肽和药学上可接受的载体或稀释剂。
5.权利要求3-4任一项所述的药物组合物在制备用于治疗癌症的药物中的应用。
6.权利要求3-4任一项所述的药物组合物在制备用于治疗乳腺癌的药物中的应用。
Priority Applications (1)
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