CN106163545A - 长效的新肉毒杆菌毒素配制剂 - Google Patents

Abstract

本发明涉及使用不含动物蛋白的肉毒杆菌毒素组合物来治疗有需要的患者的疾病、病症或病状，由此与含有动物蛋白的肉毒杆菌毒素组合物相比，所述不含动物蛋白的肉毒杆菌毒素组合物在所述患者中展现更持久的效果。

Description

长效的新肉毒杆菌毒素配制剂

相关申请的交叉引用

本申请要求2013年12月12日提交的美国临时申请序列号61/915,476的权益，该临时申请的全文特此以引用方式并入。

发明背景

开创于20世纪80年代中晚期，用A型肉毒杆菌毒素(BoNT/A)对皱眉肌和/或降眉间肌的化学去神经作用符合用于治疗眉间皱纹的理想美容技术的许多标准。当由有经验的人员进行时，BoNT/A注射快速且可逆地改善乃至消除眉间纹，几乎没有显著的副作用(Becker-Wegerich P等人，Clin Exp Dermatol，2001年10月；26(7)：619-30；LetessierS.，J Dermatol Treat，1999；10(1)：31-6以及Alam M等人，Arch Dermatol，2002年9月；138(9)：1180-5)。

在2002年，即首次公开报导使用BoNT/A治疗眉间皱纹(Carruthers JDA等人.JDermatol Surg Oncol，1992年1月；18(1)：17-21)十年后，最终在两个相同的大型多中心安慰剂对照试验中确认了BoNT/A对眉间纹的作用有被认知的功效和可容许性(CarruthersJA等人，J Am Acad Dermatol，2002年6月；46(6)：840-9以及Carruthers J等人，Journalof Plastic and Reconstructive Surgery 2003)。此后，BoNT/A已被以各种方式广泛用于暂时治疗眉间纹和其它高功能脸部线条，包括水平前额纹(‘思考者的皱纹’)和眶外侧线(‘鱼尾纹’)。

目前市售的BoNT/A全部都含有动物蛋白诸如白蛋白。其它市售BoNT/A组合物诸如用来治疗诸如鱼尾纹或眉间纹的病状时效果持续时间为大约3个月。

因此，在本领域需要一种比市售BoNT组合物(例如 或)具有更持久效果的安全有效的新型BoNT组合物。本发明满足这一需要。

附图简述

当结合附图阅读时，本发明的优选实施方案的以下详细说明将被更好地理解。出于说明本发明的目的，在附图中示出了目前优选的实施方案。然而，应理解，本发明不限于附图中所示实施方案的精确布置和手段。

图1是显示研究设计和评估安排的图像。

图2是显示注射部位的图像。眉间纹接受单次MT10109L或ona-BoN/T。将0.5mL(20U)的总注射量分为5次对称的肌内注射：0.1mL(4U)在降眉间肌，0.1mL(4U)在每个内侧皱眉肌，以及0.1mL(4U)在每个皱眉肌中间。

图3(包括图3A和3B)是显示通过现场评估(图3A)PP集和(图3B)FAS集在最大皱眉时的应答者比率的一系列图像。

图4(包括图4A和4B)是显示(图4A)受试者评估的应答者比率(PP集)和(图4B)受试者满意度(PP集)(图4A)的一系列图像。

图5是展示不同剂量的冻干MT10109(10U、20U和30U)与20U相比较的应答比例差异的图形，其根据研究者在第30天评估的纹在最大皱眉时的眉间严重程度等级(全分析套)。简写。CI＝置信区间；vs＝对。应答者被定义为在相应基线后访问时眉间纹严重程度等级为无(0)或轻微(1)。使用多重插补法基于输入数据进行分析。使用Mantel-Haenszel卡方检验来比较治疗(2乘2)并估算两次治疗之间的差异。

图6是根据研究人员在所有访问时评估的眉间纹严重程度等级(全分析集)而描绘的应答者百分比图形。分析中包括的受试者必须具有等级为中度(2)或重度(3)的基线眉间纹严重程度。应答者被定义为在相应基线后访问时的严重程度为无(0)或轻微(1)。

图7是根据受试者自我评估的眉间纹改善(全分析集)而描绘的应答者百分比图形。分析中包括的受试者必须具有等级为中度(2)或重度(3)的基线眉间纹严重程度。应答者被定义为在9分量表上评分为至少+2(中度改善，即，约50％)。

图8是根据受试者自我评估的对治疗效果的满意度(全分析集)而描绘的应答者百分比图形。分析中包括的受试者必须具有等级为中度(2)或重度(3)的基线眉间纹严重程度。应答者被定义为在7分量表上评分为至少6(满意)。

图9是一组描绘实验结果的图。数据包括应答百分比作为治疗后的天数的函数，其根据研究人员在最大皱眉时评估(左上)、研究人员在平静时评估(左中)、独立读出器在皱眉时(右上)、独立读出器在平静时(右中)、受试者整体评估(左下)和受试者满意度(右下)。

图10是一组描绘实验结果的图。数据包括根据研究人员在最大皱眉时的应答百分比。上面的图形显示汇集的数据。左中和左下的图形代表来自部位1的数据，而右中和右下的图形代表来自部位2的数据。

发明详述

本发明涉及使用不含动物蛋白的肉毒杆菌毒素组合物来治疗有需要的患者的疾病、病症或病状，由此与含有动物蛋白的肉毒杆菌毒素组合物相比，所述不含动物蛋白的肉毒杆菌毒素组合物在患者中展现更持久的效果。

在至少一个实施方案中，不含动物蛋白的肉毒杆菌毒素组合物被配制成液体形式。在某些实施方案中，不含动物蛋白的肉毒杆菌毒素组合物的液体配制剂是US20100291136中所公开的配制剂，该专利的全文以引用方式并入本文中。在某些实施方案中，不含动物蛋白的肉毒杆菌毒素组合物的液体配制剂使肉毒杆菌毒素的活性通过使用既不是动物来源蛋白诸如白蛋白或明胶，又不是极性或酸性氨基酸诸如谷氨酰胺、谷氨酸、天冬酰胺或天冬氨酸作为肉毒杆菌毒素的稳定剂在冷藏下或在高温情况下被稳定地保持。

在至少一个实施方案中，不含动物蛋白的肉毒杆菌毒素组合物被配制成冻干形式。在某些实施方案中，不含动物蛋白的肉毒杆菌毒素组合物的冻干制剂是PCT/KR2012/002418中所公开的配制剂，该专利的全文以引用方式并入本文中。在某些实施方案中，不含动物蛋白的肉毒杆菌毒素组合物的冻干配制剂即使在肉毒杆菌毒素的储存、运输或使用期间可能出现的高温情况下也保持肉毒杆菌毒素的活性并获得显著优良的长期稳定性。

在某些实施方案中，不含动物蛋白的肉毒杆菌毒素组合物(例如液体配制剂或冻干形式)的功效与含有动物蛋白的肉毒杆菌毒素组合物相比，在患者体内持续更长时间。在某些实施方案中，与使用含有动物蛋白的肉毒杆菌毒素以相同或相当的剂量以及在相同或相当的部位施用时的间隔时间相比，施用不含动物蛋白的肉毒杆菌毒素组合物(例如液体配制剂或冻干形式)允许在肉毒杆菌毒素组合物的施用之间有较长的间隔时间。

在某些实施方案中，本发明提供一种治疗方案，其包括使用不含动物蛋白的肉毒杆菌毒素组合物，其中向有需要的患者施用与使用含有动物蛋白的肉毒杆菌毒素组合物时的剂量相比，剂量较低的肉毒杆菌毒素组合物。

在某些实施方案中，本发明提供一种治疗方案，其包括使用不含动物蛋白的肉毒杆菌毒素组合物，其中与使用含有动物蛋白的肉毒杆菌毒素组合物(例如市售的A型肉毒杆菌毒素包括 和市售的B型肉毒杆菌毒素包括)时的时间间隔相比，以施用之间更长的时间间隔向有需要的患者施用肉毒杆菌毒素组合物。

定义

除非另有说明，否则本文中使用的所有技术和科学术语都具有与本发明所属领域的普通技术人员通常所理解的含义相同的含义。虽然可以使用与本文中所描述的方法和材料类似或等效的任何方法和材料来实践或测试本发明，但本文中描述优选的方法和材料。

如本文中所用，以下每个术语具有与其在本节中相关的含义。

本文中使用的冠词“一个/种(a和an)”是指一个或一个以上(即至少一个)该冠词的语法对象。例如，“一个要素”意指一个要素或一个以上要素。

本文中提及可测量值诸如量、瞬间持续时间等等时所用的“约”意指包括给定值的±20％、±10％、±5％、±1％或±0.1％的变化，因为此类变化适于实施所公开的方法。

如果一种疾病或病症的症状的严重程度、患者经受此种症状的频率、或此两者降低，则该疾病或病症得到“缓解”。

如本文中所用，术语“不含动物蛋白的肉毒杆菌毒素组合物”是指不含血液来源的、血液汇集的或其它动物来源的产物(例如不含白蛋白)的肉毒杆菌毒素组合物。在某些实施方案中，不含动物蛋白的肉毒杆菌毒素组合物不含人血清白蛋白或重组人白蛋白。

如本文中所用，术语“含有动物蛋白的肉毒杆菌毒素组合物”是指含有血液来源的、血液汇集的或其它动物来源的产物(例如含有白蛋白)的肉毒杆菌毒素组合物。在某些实施方案中，含有动物蛋白的肉毒杆菌毒素组合物含有人血清白蛋白或重组人白蛋白。

“肉毒杆菌毒素”意指纯毒素或复合的、天然的、重组的或被修饰的肉毒杆菌神经毒素，且包括A型、B型、C₁型、D型、E型、F型和G型肉毒杆菌毒素。如本文中所用，此术语不包括非神经毒素，诸如细胞毒性肉毒杆菌毒素C₂和C₃。

术语“患者”、“受试者”、“个体”等等在本文中可互换使用，且是指适用于本文中描述的方法的任何动物或无论体外或原位的其细胞。在某些非限制性实施方案中，患者、受试者或个体是人。

如本文中所用，术语“组合物”或“药物组合物”是指至少一种本发明化合物与其它化学组分，诸如载体、稳定剂、稀释剂、分散剂、悬浮剂、增稠剂和/或赋形剂的混合物。药物组合物便于将化合物施用到有机体。

如本文中所用，术语“有效量”、“药学上有效量”和“治疗有效量”是指无毒但足以提供想要的生物结果的药剂量。该结果可以是体征、症状或疾病起因的减少和/或缓解或者生物系统的任何其它想要的改变。任何个体病例中的适当治疗量可由本领域普通技术人员使用常规实验就可确定。

如本文中所用，术语“功效”是指在测定中获得的最大效果(E_max)。

“局部施用”意指通过非全身途径将药物剂施用到患者肌肉或皮下位置附近。因此，局部施用不包括全身施用途径，诸如静脉内或口服施用。

“持久”或“更持久”或“更长持续时间”是指与含有动物蛋白的肉毒杆菌毒素组合物相比，在以相同或相当的量投用以及以相同方式(例如通过注射)施用于相同或相当的位置时，不含动物蛋白的肉毒杆菌毒素组合物的功效持续时间更长。

与局部施用相对，“外周施用”意指在远离有症状位置的位置施用。

“药学上可接受的”是指其性质和/或物质从药理学/毒物学角度来看对于患者是可接受的，并且是指从有关组成、配方、稳定性、患者接受度和生物利用度的物理/化学角度来看对于药物制造化学工作者是可接受的。“药学上可接受的载体”是指不妨碍活性成分的生物活性有效性并且对它所施用的主体无毒的介质。

“治疗性”治疗是对展现出病理学体征或症状的受试者施用的治疗，其目的为减少或消除这些体征或症状。

如本文中所用，术语“治疗”被定义为将治疗剂，即本发明化合物(单独或与另一种药物剂组合)应用或施用于患者，或将治疗剂应用或施用于来自患者的分离组织或细胞系(例如用于诊断或离体应用)，该患者具有本文中涵盖的病状、本文中涵盖的病状的症状或发展成本文中涵盖的病状的可能性，其目的是为了治愈、医治、缓解、减轻、改变、补救、改善、改进或影响本文中涵盖的病状、本文中涵盖的病状的症状或发展成本文中涵盖的病状的可能性。可以基于从药物基因组学领域所获得的知识对这些治疗进行特定地改动或修改。

范围：在本公开通篇中，本发明的各方面可以范围的形式呈现。应理解，以范围形式描述仅仅为了方便以及简短起见，而不应被解释为对本发明范围的硬性限制。因此，对范围的描述应被认为是已具体地公开了该范围内所有可能的子范围以及各个数值。例如，描述诸如从1至6的范围应被认为是已具体地公开了诸如从1至3、从1至4、从1至5、从2至4、从2至6、从3至6等等子范围，以及该范围内的各个数字，例如1、2、2.7、3、4、5、5.3和6。无论范围宽度如何，皆适用此方式。

说明

本发明是基于以下发现，即当患者在施用肉毒杆菌毒素组合物16周后被评估时，与另一个接受含有动物蛋白的肉毒杆菌毒素组合物的在其它方面都相同的患者相比，不含动物蛋白的肉毒杆菌毒素组合物在接受患者中展现出改善的结果。也就是说，与含有动物蛋白的肉毒杆菌毒素组合物相比，不含动物蛋白的肉毒杆菌毒素组合物展现出更持久的有效性。

液体的不含动物蛋白的配制剂

适用于本发明的组合物包括不含动物蛋白的肉毒杆菌毒素组合物。在某些实施方案中，不含动物蛋白的肉毒杆菌毒素组合物呈液体配制剂形式。

在某些实施方案中，本发明中使用的液体药物组合物包含肉毒杆菌毒素、聚山梨醇酯20和甲硫氨酸。

在某些实施方案中，本发明中使用的液体药物组合物包含肉毒杆菌毒素、聚山梨醇酯20、甲硫氨酸和异亮氨酸。

在某些实施方案中，液体药物组合物包含肉毒杆菌毒素、聚山梨醇酯20和甲硫氨酸以及可选地异亮氨酸。

使用聚山梨醇酯20、甲硫氨酸和可选地异亮氨酸来代替动物来源蛋白诸如白蛋白或明胶作为肉毒杆菌毒素的稳定剂，本发明中使用的液体药物组合物排除了接受者被血清来源的病原体或微生物感染的潜在危险，且因此被摄入体内是安全的。此外，使用稳定剂聚山梨醇酯20、甲硫氨酸和可选地异亮氨酸使得肉毒杆菌毒素组合物在25℃左右至约37℃下具有较高稳定性。因此，关于肉毒杆菌毒素组合物在25℃至约37℃的储存稳定性，液体药物组合物非常适用于在紧急情况下，诸如在无法维持低温的环境下储存肉毒杆菌毒素组合物，因此优越于使用洗涤剂或氨基酸的常规液体药物组合物。

在某些实施方案中，每100单位的肉毒杆菌毒素中存在的甲硫氨酸的量为约0.5至100μmol，且优选浓度范围为约0.5至100mM且更优选为约25至约75mM。在另一个实施方案中，甲硫氨酸浓度范围为约0.5mM至约100mM。

每100单位的肉毒杆菌毒素中甲硫氨酸含量小于0.5μmol不能保证在室温下长期储存后肉毒杆菌毒素稳定在合意水平。另一方面，当每100单位的肉毒杆菌毒素中所使用的甲硫氨酸的量超过100μmol时，除了引起经济方面的缺点外，过多的增加量可能无法保证具有附加的稳定效果。在本发明中使用的液体药物组合物中，当肉毒杆菌毒素浓度为100单位/mL时，甲硫氨酸适当浓度范围为0.5至100mM。考虑到聚山梨醇酯20的浓度范围，其适当浓度调节为约25mM至约75mM。当本发明中使用的液体药物组合物中甲硫氨酸浓度低于25mM时，其对室温下肉毒杆菌毒素的长期稳定作用达不到在肉毒杆菌毒素的适当浓度范围内可获得的合意水平。另一方面，超过75mM的甲硫氨酸浓度不会带来任何附加效果。

在某些实施方案中，以每100单位肉毒杆菌毒素计，存在的聚山梨醇酯20的量为0.01至50mg，且优选地浓度范围为0.01至50mg/mL，且更优选为0.1至2.5mg/mL。

聚山梨醇酯是有些药物和食品制品中使用的一类乳化剂。它们经常被用于化妆品中以将精油溶解于水基(水包油)产物中。存在许多种聚山梨醇酯，它们可根据涉及的氧乙烯基总数的数值进行分类，诸如聚山梨醇酯20、40、60和80。在某些实施方案中，用于本发明的液体药物组合物使用聚山梨醇酯20(以商标名Tween 20市售)作为肉毒杆菌毒素的稳定剂。

如果以每100单位肉毒杆菌毒素计，在本发明某些实施方案中使用的液体药物组合物含有的聚山梨醇酯20的量小于0.01mg，则其对室温下肉毒杆菌毒素的长期稳定性的作用达不到合意水平。另一方面，聚山梨醇酯20浓度超过50mg/mL除了引起经济方面的缺点外，不能提供任何附加效果。肉毒杆菌毒素在本发明某些实施方案中使用的液体药物组合物中的浓度为100单位/mL时，聚山梨醇酯20存在的适当量为约0.01mg/mL至约50mg/mL，并且当考虑到甲硫氨酸浓度时，优选量为约0.1mg/mL至约2.5mg/mL。当在本发明某些实施方案中使用的液体药物组合物中聚山梨醇酯20的浓度小于0.1mg/mL时，其对室温下肉毒杆菌毒素的长期稳定性的作用达不到聚山梨醇酯20的目标浓度可获得的想要的水平。另一方面，聚山梨醇酯20浓度超过2.5mg/mL，不能提供任何附加效果。

肉毒杆菌毒素(在本发明的某些实施方案中使用的液体药物组合物的一种成分)可为选自血清型A、B、C、D、E、F和G的肉毒杆菌毒素。术语肉毒杆菌毒素是通用术语，包括由厌氧菌肉毒梭状芽孢杆菌(Clostridium botulinum)产生的毒素家族，且迄今为止，已鉴定了七种免疫学上有差别的神经毒素血清型。这些血清型已给出了名称A、B、C、D、E、F和G，它们对目标动物、麻痹程度以及持续时间的影响彼此不同。通过抑制神经肌肉接头处的神经递质乙酰胆碱，肉毒杆菌毒素的所有血清型已知可用作神经毒素。

在本发明的某些实施方案中使用的液体药物组合物的肉毒杆菌毒素可呈非复合形式或呈与另一蛋白的复合形式。通过肉毒梭状芽孢杆菌合成的单独的肉毒杆菌毒素血清型A、B、C、D、E、F或G自身具有大约150kDa的分子量。在肉毒梭状芽孢杆菌中表达时，肉毒杆菌毒素与帮助和保护其活性的血球凝集素蛋白和非血球凝集素蛋白形成各种复合物。天然存在的肉毒杆菌A型复合物具有大约900kDa、500kDa或300kDa的分子量。分子量的测量结果为，对于肉毒杆菌毒素B型复合物和C型复合物大约为500kDa，对于D型复合物大约为300kDa或500kDa，对于E型复合物和F型复合物大约为300kDa。

在某些实施方案中，肉毒杆菌毒素在液体药物组合物中的浓度优选范围从50至5,000单位/mL，取决于其一般用途。

在某些实施方案中，本发明中使用的液体药物组合物具有约5.5至7.0的pH值。在某些实施方案中，当将本发明中使用的液体药物组合物调整至约5.5至约7.0的pH值时，肉毒杆菌毒素在室温下(尤其40℃)稳定地长期保持。

所述液体药物组合物可以容易地制备，因为它使用洗涤剂和氨基酸(多种氨基酸)而无需冻干工艺。

冻干的不含动物蛋白的肉毒杆菌毒素配制剂

适用于本发明的组合物包括不含动物蛋白的肉毒杆菌毒素组合物。在某些实施方案中，不含动物蛋白的肉毒杆菌毒素组合物为肉毒杆菌毒素的冻干制剂。例如，适用于本发明的肉毒杆菌毒素组合物冻干制剂不含来源于动物的蛋白稳定剂。

在某些实施方案中，本发明提供一种肉毒杆菌毒素组合物的冻干制剂，其包含：1)肉毒杆菌毒素；2)聚山梨醇酯；3)甲硫氨酸；以及4)选自由糖、糖醇、离子化合物及其组合组成的组的一种或多种组分。

在某些实施方案中，当肉毒杆菌毒素组合物形成为冻干制剂时，组分起到维持肉毒杆菌毒素组合物活性的作用，同时有助于在大于室温的温度下稳定。在冻干时，含有1)肉毒杆菌毒素；2)聚山梨醇酯；以及3)甲硫氨酸的制剂展示降低的稳定性，而且当它们被配制为液体制剂时，它们在大于室温的温度下稳定性降低；然而，在本发明的某些实施方案中使用的肉毒杆菌毒素组合物冻干制剂不仅在大于室温的温度下维持肉毒杆菌毒素组合物的活性，而且还具有极佳的长期储存稳定性。

肉毒杆菌毒素可来源于肉毒梭状芽孢杆菌。肉毒杆菌毒素可通过已知方法从这些菌株中分离并精制而得，或可使用市售产品。

肉毒杆菌毒素可从肉毒杆菌血清型A、B、C、D、E、F和G中任意选取。

冻干制剂中存在的肉毒杆菌毒素可呈含有蛋白的复合物形式和不含有蛋白的复合物形式。肉毒杆菌毒素的活性不会因蛋白是否呈复合物形式而受影响。在本发明的某些实施方案中使用的肉毒杆菌毒素组合物冻干制剂中，聚山梨醇酯是肉毒杆菌毒素的一种稳定剂，其是非离子型表面活性剂，并且主要用作医药或食物工业中的乳化剂。基于氧乙烯基的总数，聚山梨醇酯的类型包括聚山梨醇酯20、40、60、80或100。对于本发明的某些实施方案中使用的肉毒杆菌毒素组合物的冻干制剂，可接受使用这些聚山梨醇酯中的任一种。聚山梨醇酯以每100单位肉毒杆菌毒素约0.01至约2mg的量存在。如果聚山梨醇酯存在于此范围内，则不仅可在大于室温的温度下维持肉毒杆菌毒素的活性，而且还可维持长期储存稳定性。

在某些实施方案中，甲硫氨酸(一种稳定剂)也可用作动物蛋白诸如白蛋白或明胶的代替物而作为肉毒杆菌毒素的稳定剂。甲硫氨酸可以每100单位肉毒杆菌毒素约0.01至10mg的量存在。如果甲硫氨酸包含在此范围内，则不仅可在大于室温的温度下维持肉毒杆菌毒素组合物的活性，而且还可维持长期储存稳定性。

不同于现存液体制剂，除了甲硫氨酸和聚山梨醇酯以外，在本发明的某些实施方案中使用的肉毒杆菌毒素组合物冻干制剂还包含糖、糖醇或离子化合物中的至少一种作为额外的组分。已知糖以能防止大分子的变性。作为可用于本发明的某些实施方案中使用的冻干制剂中的糖，可使用海藻糖、蔗糖、麦芽糖、果糖、棉子糖、乳糖或葡萄糖；然而，可用者不限于这些类型。糖的量可为每100单位肉毒杆菌毒素约0.1至50mg。如果糖存在于此范围内，则不仅可在大于室温的温度下维持肉毒杆菌毒素组合物的活性，而且还可维持长期储存稳定性。

已知糖醇在冻干情况下能稳定大分子并有效地防止其变性。作为可用于本发明的某些实施方案中使用的冻干制剂中的糖醇，可使用环糊精、甘露糖醇、山梨糖醇、甘油、木糖醇或肌醇等等。，糖醇的量可为每100单位肉毒杆菌毒素约0.1至50mg。如果糖醇存在于此范围内，则不仅可在大于室温的温度下维持肉毒杆菌毒素组合物的活性，而且还可维持长期储存稳定性。

在某些实施方案中，“离子化合物”是指盐、缓冲液等等。离子化合物通过特异性或非特异性结合与大分子协作。盐可以增加热稳定性、增加溶解度以及减少聚集度。然而，由于观察到高浓度的盐趋向于使蛋白质变性，因此需要注意。可使用氯化钠、磷酸钠、磷酸铵、硫酸镁、乙酸钠、乳酸钠、丁二酸钠、丙酸钠或磷酸钾作为离子化合物；然而，可用者不限于这些类型。离子化合物可以每100单位肉毒杆菌毒素约0.1至10mg的量存在。如果离子化合物存在于此范围内，则不仅可在大于室温的温度下维持肉毒杆菌毒素组合物的活性，而且还可维持长期储存稳定性。

在某些实施方案中，本发明中使用的肉毒杆菌毒素组合物冻干制剂可从已于特定培养基中培养的肉毒梭状芽孢杆菌培养物制备，但不限于此。通过一系列酸酸沉淀将肉毒杆菌毒素复合物纯化为由活性高分子量毒素蛋白和相关血球凝集素蛋白组成的结晶复合物。将该结晶复合物溶于含有盐和稳定剂的溶液中，并且通过进行冷冻干燥工艺来制造肉毒杆菌毒素组合物的冻干制剂。

方法

本发明涉及使用不含动物蛋白的肉毒杆菌毒素组合物来治疗有需要的患者的疾病、病症或病状，由此与含有动物蛋白的肉毒杆菌毒素组合物相比，所述不含动物蛋白的肉毒杆菌毒素组合物在患者中展现更持久的效果。例如，观察到与接受含有动物蛋白的肉毒杆菌毒素组合物的患者的结果相比，不含动物蛋白的肉毒杆菌毒素组合物对患者的治疗结果展现出更大的改善。

在某些实施方案中，不含动物蛋白的肉毒杆菌毒素组合物(例如液体配制剂或冻干形式)的功效与含有动物蛋白的肉毒杆菌毒素组合物相比，在患者体内持续更长时间。在某些实施方案中，与使用含有动物蛋白的肉毒杆菌毒素以相同或相当的剂量以及在相同或相当的部位施用时的间隔时间相比，施用不含动物蛋白的肉毒杆菌毒素组合物(例如液体配制剂或冻干形式)允许在肉毒杆菌毒素组合物的施用之间有较长的间隔时间。

在某些实施方案中，本发明提供一种治疗方案，其包括使用不含动物蛋白的肉毒杆菌毒素组合物，其中向有需要的患者施用与使用含有动物蛋白的肉毒杆菌毒素组合物时的剂量相比，剂量较低的肉毒杆菌毒素组合物。

在某些实施方案中，本发明提供一种治疗有需要的患者的病状的方法，所述方法包括局部施用治疗有效量的不含动物蛋白的肉毒杆菌毒素组合物的步骤，从而由此使所述病状的至少一个症状有效地缓解持续比含有动物蛋白的肉毒杆菌毒素组合物更长的时间段。

在某些实施方案中，本发明提供一种治疗方案，其包括使用不含动物蛋白的肉毒杆菌毒素组合物，其中与使用含有动物蛋白的肉毒杆菌毒素组合物时的时间间隔相比，以施用之间更长的时间间隔向有需要的患者施用肉毒杆菌毒素组合物。

在某些实施方案中，本发明提供一种治疗有需要的患者的病状的方法，所述方法包括局部施用治疗有效量的不含动物蛋白的肉毒杆菌毒素组合物的步骤，其中所述组合物以有效维持所述病状的至少一个症状缓解的第一次治疗与第二次治疗之间的时间间隔施用，所述时间间隔大于与所述不含动物蛋白的组合物相比以相同或相当的量投用且以相同方式(例如通过注射)施用至相同位置的含有动物蛋白的肉毒杆菌毒素组合物的时间间隔。

在某些实施方案中，在使用不含动物蛋白的肉毒杆菌毒素组合物对人类患者的病状进行第一次治疗与第二次治疗之间的时间为至少1个月、至少2个月、至少12周、至少13周、至少14周、至少15周、至少16周、至少17周、至少18周、至少19周、至少20周、至少21周、至少22周、至少23周、至少24周、至少25周、至少26周、至少27周、至少28周、至少29周、至少30周、至少31周、至少32周、至少33周、至少34周、至少35周、至少36周、至少37周、至少38周、至少39周、至少40周、至少41周、至少42周、至少43周、至少44周、至少45周、至少46周、至少47周、至少48周、至少49周、至少50周、至少51周、至少52周或更长时间。在某些实施方案中，在使用不含动物蛋白的肉毒杆菌毒素组合物来有效缓解患者病状的至少一个症状的第一次治疗与第二次治疗之间的时间大于3个月。在某些实施方案中，在使用本发明的不含动物蛋白的肉毒杆菌毒素组合物来有效缓解患者病状的至少一个症状的第一次治疗与第二次治疗之间的时间大于16周。

在某些实施方案中，本发明的不含动物蛋白的肉毒杆菌毒素组合物可以用于美容目的以便治疗个体的皮肤轮廓缺陷，包括皱纹。

在某些实施方案中，本发明的不含动物蛋白的肉毒杆菌毒素组合物可用于治疗眉间纹。

在某些实施方案中，本发明的不含动物蛋白的肉毒杆菌毒素组合物可用于治疗侧眼角纹。

在某些实施方案中，本发明的不含动物蛋白的肉毒杆菌毒素组合物可用于非美容目的。在某些实施方案中，本发明的不含动物蛋白的肉毒杆菌毒素组合物可用于治疗各种疾病和病症，包括但不限于与神经病学病状相关的逼尿肌活动过度、慢性偏头痛、上肢痉挛状态、颈肌张力障碍、原发性腋窝多汗症、睑痉挛和斜视、特发性膀胱活动过度等等。

在某些实施方案中，本发明的不含动物蛋白的肉毒杆菌毒素组合物可用于非美容目的。非美容目的的非限制性实例包括但不限于治疗对抗胆碱能药物无充分响应或不耐受的成年人由于与神经病学病状[例如脊髓损伤(SCI)、多发性硬化(MS)]相关的逼尿肌活动过度所造成的尿失禁、预防患有慢性偏头痛的患者的头痛(例如每个月≥15天会有一天持续4小时或更长时间的头痛)、治疗成年人患者的上肢痉挛状态、治疗成年人患者的颈肌张力障碍、降低头部位置和颈部异常疼痛的严重程度、治疗成年人患者通过局部药剂无法充分治疗的严重腋窝多汗症、治疗与肌张力障碍相关的睑痉挛、治疗年龄≥12岁的患者的斜视。

然而，本发明不应仅限于本文中公开的疾病、病症或病状。相反，本发明包括使用本发明的不含动物蛋白的肉毒杆菌毒素组合物来治疗已使用肉毒杆菌毒素的任何疾病。例如，肉毒杆菌毒素已被提议用于或已用于治疗耳朵中耳炎(美国专利第5,766,605号)、内耳病症(美国专利第6,265,379号；第6,358,926号)、紧张性头痛(美国专利第6,458,365号)、偏头痛(美国专利第5,714,468号)、术后疼痛和内脏疼痛(美国专利第6,464,986号)、毛发生长和毛发保持(美国专利第6,299,893号)、银屑病和皮炎(美国专利第5,670,484号)、受损的肌肉(美国专利第6,423,319号)、各种癌症(美国专利第6,139,845号)、平滑肌病症(美国专利第5,437,291号)以及神经源性炎症(美国专利第6,063,768号)。此外，肉毒杆菌毒素在临床背景中已用于美容应用以及治疗以骨骼肌活动过度为特征的神经肌肉病症。肉毒杆菌毒素目前被用于治疗多汗症，并且还可用于治疗弛缓不能、慢性病灶性神经病变、肛裂、阴道痉挛、与中枢神经系统损伤或疾病相关的痉挛病症(包括例如创伤、中风、多发性硬化、帕金森氏病、大脑性麻痹等等)、影响四肢、面、颌或声带的病灶性肌张力障碍、颞下颌关节障碍(TMJ)、糖尿病性神经病变、伤口愈合障碍、流涎过多、声带功能障碍(VCD)，包括痉挛性发声困难，以及震颤。A型肉毒杆菌毒素型已被美国食品和药品管理局批准用于治疗睑痉挛、斜视、半面痉挛、颈肌张力障碍、偏头痛、膀胱活动过度和与神经学病状相关的逼尿肌活动过度。

在某些实施方案中，本发明方法可用于治疗、减少症状和/或预防弛缓不能、肛裂、肛门痉挛、睑痉挛、大脑性麻痹、颈肌张力障碍、颈源性头痛、半面痉挛、出汗障碍性湿疹、咽下困难、发声困难、食管运动障碍、食管肌肉环、内斜视(婴儿型)、眼部上提(eyelift)、面部肌纤维颤搐、步态不稳(特发性脚尖行走)、全身性肌张力障碍、半面痉挛、高功能面部线条(眉间、前额、鱼尾纹、嘴角下翻)、多汗症、失禁(脊髓损伤)、偏头痛、肌阵挛、肌筋膜疼痛综合征、尿梗阻性症状、胰腺分裂性胰腺炎、帕金森氏病、耻骨直肠肌综合征、外科手术疤痕张力减少、唾液分泌过多、涎腺囊肿、第六神经麻痹、痉挛状态、说话/发音障碍、斜视、手术附属病(眼炎)、迟发性运动障碍、颞下颌关节病症、紧张性头痛、胸廓出口综合征、扭转性张力障碍、斜颈、图雷特综合征(Tourette′s syndrome)、震颤、颈部扭伤相关的颈部疼痛、疼痛、搔痒、炎症、过敏症、癌症和良性瘤、发烧、肥胖、感染性疾病(病毒性和细菌性)、高血压、心律不齐、血管痉挛、动脉粥样硬化、内皮增生、静脉血栓形成、静脉曲张、口疮性口炎、多涎、颞下颌关节综合征、出汗、狐臭、痤疮、酒渣鼻、色素沉着过度、肥厚性瘢痕、瘢痕疙瘩、胼胝和鸡眼、皮肤皱纹、皮脂产生过多、银屑病、皮炎、过敏性鼻炎、鼻充血、鼻涕后流、打喷嚏、耳垢、浆液性和化脓性中耳炎、扁桃体和腺样体肥大、耳鸣、昏眩、眩晕、嘶哑、咳嗽、睡眠呼吸暂停、打鼾、青光眼、结膜炎、葡萄膜炎、斜视、格雷夫病(Grave′s disease)、哮喘、支气管炎、肺气肿、粘液产生、胸膜炎、凝血障碍、脊髓增生性病症、涉及嗜曙红细胞、中性粒细胞、巨噬细胞和淋巴细胞的病症、免疫耐受和移植、自身免疫性病症、吞咽困难、胃酸反流、食管裂孔疝、胃炎和胃酸过多症、腹泻和便秘、痔疮、尿失禁、前列腺肥大、勃起功能障碍、阴茎异常勃起和佩罗尼氏病(Peyronie′s disease)、附睾炎、避孕、痛经、防止早产、子宫内膜异位症和子宫纤维肌瘤、关节炎、骨关节炎、类风湿病、粘液囊炎、肌腱炎、腱鞘炎、纤维肌痛、癫痫病症、大脑性麻痹、痉挛状态、头痛、抑郁症和神经痛。

在某些实施方案中，本发明的治疗方案包括局部施用不含动物蛋白的肉毒杆菌毒素组合物。在某些实施方案中，本发明的治疗方案包括肠胃外施用不含动物蛋白的肉毒杆菌毒素组合物。在某些实施方案中，通过局部注射或通过植入控释型植入物来施用不含动物蛋白的组合物。通过注射施用的实例包括肌内注射、非肌内注射、关节内注射、关节外注射、关节周围注射或皮下注射。

在某些实施方案中，本发明的治疗方案是有益的，因为与使用含有动物蛋白的肉毒杆菌毒素组合物相比，使用不含动物蛋白的肉毒杆菌毒素组合物与更长效和改善的结果相关。不希望受任何特定理论约束，认为在某些实施方案中，不含动物蛋白的肉毒杆菌毒素组合物长效允许与使用含有动物蛋白的肉毒杆菌毒素组合物时的间隔时间相比，使用不含动物蛋白的肉毒杆菌毒素组合物的治疗之间的间隔时间更长。

此外，不希望受任何特定理论约束，认为在某些实施方案中，本发明中使用的组合物的独特配方允许所述组合物在患者体内更长效。

在某些实施方案中，通过增加治疗之间的间隔时间，治疗方案允许治疗频率降低。因此，本发明提供增加患者便利的可能性。治疗之间的间隔时间增加以及较低频率的治疗还可能提供减少的副作用。

在某些实施方案中，本发明的治疗方案是有益的，因为使用如本文中所描述的液体的不含动物蛋白的肉毒杆菌毒素组合物或冻干的不含动物蛋白的肉毒杆菌毒素组合物与长效和改善的结果相关。

在某些实施方案中，在一种本发明的治疗方法中，使治疗有效水平的肉毒杆菌毒素在接受患者体内存在很长一段时间，该段时间为至少16周、至少18周、至少20周、至少22周、至少24周、至少26周、至少28周、至少30周、至少32周、至少34周、至少36周、至少38周、至少40周、至少42周、至少44周、至少46周、至少48周、至少50周或更长时间。

应了解，不论本文中在何处提供值和范围，这些值和范围包括的所有值和范围意欲包括在本发明的范围内。此外，本申请还涵盖落在这些范围内的所有的值以及值的范围的上限或下限。

以下实施例进一步说明本发明的不同方面。然而，它们决不是本文中阐述的本发明的教示或公开内容的限制。

实验实施例

通过参考以下实验实施例来进一步详细描述本发明。除非另有说明，否则这些实施例仅仅为了说明目的而提供，而并非旨在限制。因此，本发明决不应被解释为限于以下实施例，而是，应被解释为包括任何和所有变化，其由于本文中提供的教示的结果而变得显而易见。

无需进一步的说明，相信本领域普通技术人员使用前面的描述和下面的说明性实施例可制造和利用本发明的化合物并实施要求保护的方法。因此，以下工作实施例具体地指出了本发明的优选实施方案，而不应被解释为以任何方式限制本发明公开的其余部分。

实施例1：液体型A型肉毒杆菌毒素对处理中度至重度眉间皱纹的功效和安全性： 平行、随机、双盲、多中心、活性药物对照的III期临床试验

A型肉毒杆菌毒素(BoNT/A)已被以各种方式广泛用于矫正不需要的眉间纹和其它高功能的面部线条。然而，目前使用的BoNT/A大部分需要用盐水溶液稀释，这对于使用者极为不便，且通常很难每次制得精确浓度。本文中给出的结果是在实验的基础上进行的，这些实验比较了新开发的液体型BoNT/A(MT10109L)和奥纳A型肉毒杆菌毒素(onabotulinumtoxinA)(ona-BoNT/A)对于中度至重度眉间纹的功效和安全性。

现在描述在这些实验中所采用的材料和方法。

材料和方法

此项研究是预期的、随机化、双盲、平行、活性药物对照的III期临床试验，用于评价MT10109L对眉间皱纹矫正的功效和安全性，该试验在韩国的三个中心(St.Paul’shospital，Catholic university of Korea；Inha university hospital；Kyungheeuniversity hospital at Gangdong)进行。各参与中心的机构审查委员会根据赫尔辛基宣言中公开的指南(南非，1996年修正案)和药物临床试验管理规范指南对这项研究和所有适当的修正进行了审批。所有参与者均递交了参与该研究的书面知情同意书。

参与者

由研究人员筛选出年龄20-65岁的有眉间纹的男性和女性志愿者。根据面部皱纹量表(FWS)，具有中度至重度(严重程度评分2至3分)眉间皱纹的受试者被选入本研究(表1)。排除标准包括可使患者受肉毒杆菌毒素风险的任何医学病状(如重症肌无力、兰伯特-伊顿综合症、肌萎缩性侧索硬化)，之前使用过可能影响神经肌肉接头的药物(例如，肌肉松弛药、盐酸大观霉素、氨基糖苷类、多肽类抗生素、抗胆碱能药、苯二氮卓类)或对研究的药物或它们的组分有任何过敏或超敏反应。其它排除标准包括既往在3个月内用肉毒杆菌毒素治疗过，在6个月内有可能影响眉间和额头纹的任何其它手术，任何眉间治疗史(包括前额)，诸如面部除皱术和/或永久植入，或可能影响治疗结果的疤痕。眉间纹即使用手拉伸也不能获得令人满意地改善的患者也被排除。如果患者在可能的注射部位有皮肤病症或感染，或有面神经麻痹或上睑下垂的病史，则患者不合格。排除怀孕或哺乳的妇女。

表1.用于评估MT10109L和Ona-BoNT/A的有效性的量表

研究设计

所有合格受试者按1∶1的比例随机分为两组，随后进行16周持续时间的研究设计(图1.)。在访问2(0周，基线)，每个受试者以双盲方式接受5点肌内注射，总剂量20U(4U/0.1ml)的液体BoNT/A(MT10109L；Medytox公司，Cheonwon-gun，韩国)或奥纳A型肉毒杆菌毒素(ona-BoNT/A)。将0.5mL的总注射量分为5次注射：0.1mL(4U)在降眉间肌，0.1mL(4U)在每个内侧皱眉肌，以及0.1mL(4U)在每个皱眉肌中间(图2)。对于这项临床研究，使用MT10109L(0.625ml/小瓶(4U/0.1ml))和50U ona-BoNT/A。MT10109L由于其液体性质不需要额外稀释，但ona-BoNT/A溶于1.25ml 0.9％NaCl 1.25ml使它为每0.1ml 4U。

功效测量

在16周的观察期期间，在第4周、第10周、第16周对受试者进行了评估。在每次访问中，评估研究人员和患者的功效和安全性。此外，经治疗后的面部区域的标准化数字照片使用相同的设备(EOS 600d，日本东京佳能公司)在同一地点拍摄以确保可重复性(图1)。医生使用FWS通过现场评估来评估最大皱眉时和平静时的眉间纹严重程度。向每个中心的所有调查者提供了标准化的照片评级系统。三个不知情的评定员根据FWS评估最大皱眉时和平静时的照片(表1)。

主要功效终点是基于研究人员现场评估(面对面观察)的在第4周最大皱眉时的应答者百分比。次要功效终点包括：1)在第16周最大皱眉时的应答者百分比；2)在第4周和第16周基于研究人员现场评估的平静时的眉间纹的应答者百分比；和3)在4周基于照相评估的最大皱眉时和平静时的应答者百分比。根据以往对于ona-BoNT/A的研究，应答者被定义为那些在治疗后FWS评分为0或1分而在治疗前FWS评分为2或3分的人。这意味着对于具有中度皱纹的受试者而言改善至少1分，且对于具有重度皱纹的受试者改善至少2分。此外，还包括在第4周、第10周和第16周由受试者自身评估确定的眉间纹改善率以及满意度作为次要功效终点。受试者使用9分量表从+4(100％改善)至(0)(无变化)至-4(100％变差)来评估纹路严重程度的改变，并在7分量表中从-3(非常不满意)到+3(非常满意)来评价他们对治疗的满意度。超过+2分的评分(中等改善)视为改善。此外，超过6分的分数(满意)视为满意。

安全措施

在该研究期间，每次访问都进行身体检查和生命体征检查。在筛选日和16周进行研究人员和受试者报告的体征和症状，并进行实验室测试(全血细胞计数，和血液化学)。在筛选日、治疗日和第16周检查尿hCG。对有关于在收到知情同意后出现的所有不良事件进行不良事件的总结和分析。通过比较所有不良事件的发生率、与研究药物相关的不良事件的发生率以及严重不良事件的发生率来记录不良事件的发生率。

统计方法

所有受试者与主要终点数据被纳入全分析集(FAS)。符合方案(PP)集是没有作出任何重大的方案违背的FAS中受试者的子集。对于主要功效终点参数，计算两组之间应答者比率差异的97.5％单侧置信区间(CI)的下限。CI的解释是基于零假设，即治疗组之间的应答者比率的预期差异低于-15％的非劣效性界限值。如果估算CI的下限超过-15％的限值，则可断定MT10109L不亚于ona-BoNT/A。该验证分析是基于PP分析。对于次要功效终点，进行配对t检验、Peason卡方检验或Fisher精确检验。

对不良事件的组间差异进行了Fisher精确检验来检验。在组内分析中对实验室变量、血压和心率进行Wilcoxon符号秩检验，并且在退出时对组分析之间使用Wilcoxon秩和检验。

现在描述实验的结果。

基线人口学特征

在入选的168个受试者中，159个受试者完成研究，且因此构成了PP集：有78个受试者在MT10109L组，81个受试者在ona-BoNT/A组。入选受试者的年龄从20到65，在MT10109L组中平均年龄为48.94岁，且在ona-BoNT/A组中平均年龄为49.86岁。所有受试者均是韩国人。两组的人口统计数据是相当的，并且在治疗前，两个组平静时或最大皱眉时的治疗前皱纹严重程度没有差异。所有受试者在平静时具有中度至重度眉间皱纹，且大多数受试者在最大皱眉时具有重度眉间皱纹(MT10109L组56.41％；ona-BoNT/A组50.62％)(表2)。

表2.受试者人口学特征(N＝159，PP集)

^*：两个样本t检验

^*：Wileoxon秩和检验

^*：Pearson卡方检验

研究人员评估

两个组都显示显著的眉间纹改善。注射后4周，对于PP集现场评估的最大皱眉时的应答者百分比在MT10109L组中为87.18％，在ona-BoNT/A组中为87.65％。此外，FAS的MT10109L组和ona-BoNT/A组中的应答百分比与PP集相似，分别为85.54％和85.71％(图3A)。在两个治疗组之间的应答者百分比差异的97.5％CI(PP＞-15％时为-10.79％；FAS＞-15％时为-10.47％)表明，MT10109L不亚于ona-BoNT/A。

在第16周现场评估最大皱眉时的应答者百分比在ona-BoNT/A组中显著低于MT10109L组中。在PP集中，应答者百分比在MT10109L组中为62.34％且在ona-BoNT/A组中为40.51％(p值＝0.0064)(表3)。并且在FAS集中应答者百分比在MT10109L组中为60.71％且在ona-BoNT/A组中为41.67％(表3，图3B)。PP集和FAS集显示在两个组中有显著差异，且MT10109L优越。

在第4周和第16周评估平静时的应答者百分比，且注意到在第4周在PP集和FAS集中在MT10109L组和ona-BoNT/A组之间没有显著差异。在第16周，PP集中平静时应答者百分比在MT10109L组中为50.00％且在ona-BoNT/A组中为31.58％，在MT10109L组中显示显著改善(p值＝0.0482)。然而，在FAS集中，在MT10109L组(50.00％)和ona-BoNT/A组(33.33％)之间应答者百分比未显示显著差异。(p值：0.0641)(表3)。

表3.在最大皱眉时现场评估的应答者比率

^*：Pearson卡方检验

在照相评估中，由三个独立的不知情评估者评估的在第4周最大皱眉时的应答者比率在PP集和FAS集中MT10109L组和ona-BoNT/A组之间也未显示显著差异。结果示于表4中。

表4.通过照相评估的应答者比率(4周)

受试者评估

两个组中受试者对眉间纹改善的评估和满意度的得到相当的结果。在第4周、第10周和第16周评估峰值改善率，其定义为评分超过+2分(中等改善)的受试者的比例。在PP集和FAS集中，第4周、第10周和第16周的峰值改善率在MT10109L组和ona-BoNT/A组之间也未显示显著差异。在PP集的MT10109L组和ona-BoNT/A组中，主观评估改善率分别在第4周显示为89.74％和92.59％，在第10周显示为81.82％和91.14％，在第第16周显示为70.13％和68.35％。定义为患者表示“非常满意”或“满意”的满意度是在第4周、第10周、第16周评估，并且在PP集和FAS集中在MT10109L组和ona-BoNT/A组之间也未显示显著差异。在PP集的MT10109L组和ona-BoNT/A组中，满意度分别在第4周为78.21％和71.60％，在10周为74.03％和68.35％，在第16周为58.44％和48.10％。PP集的结果示于图4中。

安全性

在MT10109L组(21.43％)和对照组(16.67％)中报告了相当数量的治疗突发不良事件(表5)。在MT10109L组中没有不良药物反应。与注射有关的唯一不良药物反应是在对照组中所报告的一起面部水肿事件。在两个组中均没有观察到严重的不良药物反应。没有受试者因为不良事件而退出。

表5.不良事件(安全性集)

在患者接受测试药物之后发生的严重不良事件在MT10109L组中报告为1.19％(1/84个受试者，1起事件)，且在对照组中报告为2.38％(2/84个受试者，2起事件)。至于严重不良事件，在ona-BoNT/A组中的每一患者报告急性心肌梗塞和腹膜炎。发生急性心肌梗塞的患者的心脏问题已在心脏病学部门被处理，因此，这一事件似乎并不与测试药物注射相关。而且在患者接受测试药物之后，MT10109L组的一个患者报告肌腱套综合征。

关于实验室测试和生命体征，在MT10109L组和ona-BoNT/A组中在测试药物施用之后没有检测到显著异常改变。

液体型A型肉毒杆菌毒素的功效和安全性

本文中给出的结果表明MTl0109L对眉间纹的治疗是安全且有效的。通过在第4周和16周在最大收缩和平静时现场评估，结果得到MT10109L治疗显著改善眉间皱纹严重程度。在此项研究中不知情评估者照相评估和受试者评估的结果表明ona-BoNT/A和MT10109L不是在任何时点在任何变量下都有显著差别的。结果还显示在第16周MT10109L可提供比ona-BoNT/A更大的改善。本文给出的结果也表明，MT10109L的功效比ona-BoNT/A持续更长时间。

市售BoNT/A制剂多种多样且因为它们独特的生物性质而具有不同的功效和安全性(Klein AW等人，Plast Reconstr Surg.，2008；121(6)：413e-422e)。其中，ona-BoNT/A是占据肉毒杆菌毒素市场的最知名类型，因为它是1989年在美国首个获批并且上市的(YangGH等人，Dermatologic Surgery，2013；39(1pt2)：165-170)。因此，关于处理A型肉毒杆菌毒素的大部分信息是与ona-BoNT/A有关的发现(Trindade De Almeida AR等人，Dermatologic Surgery，2011；37(11)：1553-1565)。因此，本研究经设计以比较MT10109L和ona-BoNT/A的功效和安全性。

所有目前使用的BoNT/A产品建议使用可变物质在注射前进行复水，因为这些产品提供为冻干粉末配制剂。这些产品还有供应、稀释和储存上的不便。例如，Ona-BoNT/A在复水之后应储存在2℃与8℃之间，并且在复水24小时内使用(Huang W等人，J Am AcadDermatol 2000；43∶249-59)。

虽然瑞玛b型肉毒杆菌毒素(rimabotulinumtoxin b)(SolsticeNeurosciences，Louisville，KY)已作为B型肉毒杆菌毒素的液体注射形式使用，但它不像BoNT/A那般被广泛使用，且与BoNT/A等同剂量的瑞玛b型肉毒杆菌毒素尚未被充分研究(Trindade De Almeida AR等人，Dermatologic Surgery，2011；37(11)：1553-1565)。

MT10109L是BoNT/A的第一种液体注射形式。MT10109L含有分子量为900kD的BoNT/A型大分子蛋白质复合体，其类似于ona-BoNT/A(表6)。MT10109L展示与ona-BoNT/A类似的扩散能力。

MT10109L作为现用无菌液体提供；与大多数BoNT/A相比，不需要复水且更便于储存和再使用。MT10109L的保存期限目前估计为从制造日期起22个月左右，然而，不希望受任何特定理论约束，有望通过扩展稳定性试验得以延长。在该时段期间，MT10109L可以在任何时候不受时间限制再使用，而ona-BoNT/A则建议在复水后4小时至6周内使用(CarruthersJ等人，Plast Reconstr Surg.，2004；(增刊)；11(6)4：2S和Hexsel DM等人，DermatolSurg.，2003；29：523-9)。因为确认了如在本文中其它地方提及的MT10109L的较长时间稳定性，在重新使用时MT10109L优于复水的ona-BoNT/A。此外，MT10109L目前可以小包装单位(25单位/瓶)获得，其适用于治疗眉间纹(表6)。

表6.肉毒杆菌毒素制剂的特性

本文给出的结果表明，MT10109L的功效比ona-BoNT/A持续更长时间。BoNT/A的眉间纹改善的治疗效果可以在注射后4周内检测到，并且在3-6个月之间逐渐减小。事实上，与使用MT10109L相关的眉间纹改善的更长维持期提供了比其它类型BoNT/A更大的优势。来自Glogau R等人的meta分析的结果显示，用20单位ona-BoNT/A治疗眉间纹，在第16周在超过50％的应答者中有持续临床效果(Glogau R等人，Dermatol Surg.，2012；38(11)：1794-803)。然而，在此项研究中，ona-BoNT/A的应答者比率低于先前的报道。因此，需要大量研究(采用从多个医疗中心招募的患者以及采用更长的随访期)来确认此结果。

而目前使用的BoNT/A含有白蛋白或明胶用于稳定，MT10109L取消白蛋白以及在整个制造过程的组分中的动物来源材料。因此，MT10109L可使传染性疾病的风险最小化，包括传染性海绵状脑病。在本研究中没观察到任一毒素造成的严重不良药物反应。因此，MT10109L与ona-BoNT/A一样安全。

本文中给出的结果表明MT10109L在改善眉间纹方面不亚于ona-BoNT/A，并且安全性相对类似，因此可断定适用于相关症状的治疗。由于MT10109L具有眉间纹改善的更长维持期，便利而没有额外的稀释步骤，容易储存和再使用，并且没有动物来源蛋白的成分，因此MT10109L是常规BoNT/A粉末配制剂的合意代替品。

实施例2：用以确定MT10109对BOTOX的在具有中度至重度眉间纹的受试者中的安 全性和功效的随机、双盲、多中心、II期、最佳剂量寻找研究

本文中给出的结果比较了MT10109和的冻干配制剂在具有中度至重度眉间纹的受试者中的安全性和功效。这表明，最大皱眉时的应答在MT1010920U组中持续长达120天。

本文中所描述的实验比较了以10U、20U和30U投用MT10109与以20U投用MT10109的功效主要在第30天(访问4；±7天)评估且目标比较是MT1010920U和20U的应答者比率之间的比较。取决于分析，应答者被定义为在第30天最大皱眉时或平静时，眉间纹严重程度等级为无(0)或轻微(1)。

第14天(访问3)、第30天(访问4)、第60天(访问5)、第90天(访问6)和第120天(访问7)的时间点允许在访问目的前后7天，因此，第30天，例如，可能并非精确地为在研究治疗施用后30天。如本文中给出，时间点已被按天数标记的，而不是访问。所有功效分析均使用全分析集(FAS)进行并且使用符合方案(PP)集进行重复作为支持分析。

主要功效参数：研究人员通过现场评估的在第30天最大皱眉时的眉间纹严重程度 等级

研究人员现场评估的在第30天最大皱眉时的眉间纹严重程度概括于表7中(FAS)。使用Mantel-Haenszel卡方检验来比较治疗组并且图示于图5中。PP集的结果概括于表8中。

表7：研究人员现场评估的在第30天最大皱眉时的眉间纹严重程度，全分析集

简写：N＝分析集中的受试者数目；n＝有数据的受试者数目。

注意：分析中包括的受试者必须具有中度(2)或重度(3)的最大皱眉时基线眉间纹严重程度等级。应答者被定义为在相应基线后访问时的严重程度等级为无(0)或轻微(1)。百分比是基于在相关访问时评估的受试者数目。

对于FAS，基于研究人员现场评估的在第30天最大皱眉时受试者的眉间纹严重程度，MT10109 20U组中的应答者比例(严重程度等级为无[0]或轻微的[1])与20U组相似(表7)。

MT10109 20U组中的应答者比例为69.2％(26个受试者中的18个)且20U组中的应答者比例为73.1％(26个受试者中的19个)。

MT10109 20U和20U组中的应答者比例之间没有统计上显著的差异(-3.2[95％CI：-28.3至21.8]；p值0.760)(图5)。

MT10109 10U组中的应答者比例与20U组相比较小，且MT10109 30U组中的应答者比例与20U组相比较大(表7)。

MT10109 10U组中的应答者比例为60.0％(30个受试者中的18个)，且MT10109 30U组中的应答者比例为88.0％(25个受试者中的22个)，且20U组中的应答者比例为73.1％(26个受试者中的19个)。

MT10109 10U组和20U组中的应答者比例之间没有统计上显著的差异(-9.7[95％CI：-34.6至15.2]；p值0.448)，或在MT10109 30U组和20U组之间没有统计上显著的差异(17.6[95％CI：-4.1至39.3]；p值0.117)(图5)。

MT10109 10U组和MT10109 20U组中的应答者比例之间没有统计上显著的差异(-6.5[95％CI：-31.4至18.4]；p值0.614)，或在MT10109 30U组和MT10109 20U组中的应答者比例之间没有统计上显著的差异(20.8[95％CI：-0.9至42.5]；p值0.066)。MT10109 10U组中的应答者比例小于MT1010930U组中的应答者比例，并且差异是统计上显著的(-27.3[95％CI：-48.8至-5.8]；p值0.020)。

研究人员现场评估的在第30天最大皱眉时的眉间纹严重程度概括于表8中(PP集)。使用Mantel-Haenszel卡方检验来比较治疗组。

表8：研究人员现场评估的在第30天最大皱眉时的眉间纹严重程度等级，符合方案集

简写：N＝分析集中的受试者数目；n＝有数据的受试者数目。

注意：分析中包括的受试者必须具有等级为中度(2)或重度(3)的基线眉间纹严重程度。应答者被定义为在相应基线后访问时的严重程度等级为无(0)或轻微(1)。百分比是基于在相关访问时评估的受试者数目。

PP集中的结果支持FAS中的结果。

MT10109 20U组中的应答者比例为69.2％(26个受试者中的18个)且20U组中的应答者比例为73.1％(26个受试者中的19个)(表8)。

MT10109 20U组和20U组中的应答者比例之间的差异是-3.8(95％CI：-32.8至25.1；p值0.762)，其不是统计上显著的。

MT10109 10U组中的PP集的应答者比例与20U组相比较小，且MT1010930U组中的应答者比例与20U组相比较大：

MT10109 10U组中的应答者比例为60.0％(30个受试者中的18个)，且MT10109 30U组中的应答者比例为87.0％(23个受试者中的20个)，且20U组中的应答者比例为73.1％(26个受试者中的19个)(表8)。

MT10109 10U组和20U组中的应答者比例之间没有统计上显著的差异(-13.1[95％CI：-41.6至15.4]；p值0.307)，或MT10109 30U组和20U组之间没有统计上显著的差异(13.9[95％CI：-12.6至40.3]；p值0.234)。

次要功效参数：研究人员通过现场评估的直到第120天最大皱眉时和平静时的眉 间纹严重程度等级

在其它访问时最大皱眉时和平静时的眉间纹严重程度的研究人员现场评估概括于表9中(FAS)并且图示于图6中。使用Mantel-Haenszel卡方检验来比较治疗组。

表9：在其它访问时研究人员现场评估的眉间纹严重程度等级，全分析集

简写：N＝分析集中的受试者数目；n＝有数据的合格受试者数目。

注意：分析中包括的受试者必须具有等级为中度(2)或重度(3)的基线眉间纹严重程度。应答者被定义为在相应基线后访问时的严重程度等级为无(0)或轻微(1)。百分比是基于在相关访问时评估的合格受试者数目。

在全部治疗组中从第14天到第120天，最大皱眉时的应答者比例均减少(基于研究人员现场评估)。与20U组和其它MT10109组相比，在第120天MT10109 20U组中的比例更大(图6)。

在第60天和第120天，MT10109 20U组中最大皱眉时的应答者比例分别为65.2％(23个受试者中的15个)和52.2％(23个受试者中的12个)，且在20U组中分别为68.0％(25个受试者中的17个)和23.1％(26个受试者中的6个)(表9)。

在第60天MT10109 20U组和20U组中的应答者比例之间的差异是-4.3(95％CI：-30.7至22.1；p值0.714)，且在第120天为24.0(-0.7至48.7；p值0.058)。

在其它MT10109组中，与20U组(68.0％；25个受试者中的17个)相比，在第60天最大皱眉时的应答者比例在MT10109 10U组中较小(50.0％；30个受试者中的15个)，且在MT10109 30U组中是相似的(68.0％；25个受试者中的17个)。在第120天MT10109 10U组中的比例(32.1％；28个受试者中的9个)以及MT10109 30U组中的比例(28.0％；25个受试者中的7个)要大于20U组中的比例(23.1％；26个受试者中的6个)(表9)。在任何时间点，MT10109 10U组与20U组之间或MT10109 30U组与20U组之间在最大皱眉时应答者比例没有统计上显著的差异。在任何时间点，MT10109 10U组与MT1010920U组之间或MT10109 30U组与MT10109 20U组之间在最大皱眉时应答者比例没有统计上显著的差异。MT10109 10U组中的应答者比例通常小于MT10109 30U组中的应答者比例，且在第14天具有统计上显著的差异(-30.4[95％CI：-55.6至-5.2]；p值0.012)。

在研究人员现场评估平静时眉间纹严重程度的分析中，适合包括在分析中的受试者数目(即基线眉间纹严重程度为中度[2]或重度[3])较小。因此，治疗组之间的比较和任何所得p值应慎重对待。

在全部治疗组中从第14天到第120天，平静时的应答者比例减少(基于研究人员现场评估)(图9左中)。在每个时间点，MT10109 20U组中的比例与20U组相比都较小。

在第14天和第120天MT10109 20U组中平静时的应答者比例分别为25.0％(12个受试者中的3个)和10.0％(10个受试者中的1个)，且在20U组中分别为63.6％(11个受试者中的7个)和30.0％(10个受试者中的3个)(表9)。

与20U组相比(30.0％；10个受试者中的3个)，在第120天MT10109 10U组中平静时的应答者比例较小(10.0％；10个受试者中的1个)并且MT10109 30U组中的应答者比例较大(38.5％；13个受试者中的5个)(表9)。

次要功效参数：受试者对眉间纹改善的评估和对治疗效果的满意度

受试者对眉间纹改善的自我评估概括于表10中并图示于图7中。对治疗效果满意的受试者自我评估概括于表11中并图示于图8中。使用Mantel-Haenszel卡方检验来比较治疗。

表10：受试者对眉间纹改善的自我评估，全分析集

简写：N＝分析集中的受试者数目；n＝有数据的受试者数目。

注意：分析中包括的受试者必须具有等级为中度(2)或重度(3)的基线眉间纹严重程度。应答者被定义为在9分量表上评分为至少+2(中度改善，约50％)。百分比是基于在相关访问时评估的受试者数目。

在受试者对眉间纹改善的自我评估中，在第30天的应答者比例(在9分量表上评分为至少+2(中度改善，约50％))在MT10109 20U组和20U组中相似(FAS)，其反映了现场评估等级。在MT10109 30U组和20U组中比例也是相似的。在第60天，MT1010920U组和MT10109 30U组中的比例大于20U组，并且在第120天，与其它治疗组相比，MT10109 20U组中剩余的比例更大(图7)。

在第30天、第60天和第120天MT10109 20U组中的应答者比例分别为73.1％(26个受试者中的19个)、65.2％(23个受试者中的15个)和43.5％(23个受试者中的10个)，且在20U组中分别为69.2％(26个受试者中的18个)、52.0％(25个受试者中的13个)和30.8％(26个受试者中的8个)(表10)。在任何时间点，MT10109 20U组和20U组中的应答者比例之间没有统计上显著的差异。

在其它MT10109组中，在第30天和第60天，与20U组相比较，MT10109 10U组中的应答者比例较小，而MT10109 30U组中的应答者比例较大(表10)。在第120天，在三个治疗组中的比例相似(MT10109 10U，28.6％[28个受试者中的8个]；MT10109 30U，28.0％[25个受试者中的7个]；20U，30.8％[26个受试者中的8个])。在第14天MT1010910U与20U之间的应答者比例的差异是统计上显著的(-23.6[95％CI：-46.5至-0.6]；p值0.049)。在任何时间点均观察到MT10109 30U组和20U组中的应答者比例之间没有统计上显著的差异。在MT10109 30U与MT10109 20U组之间眉间纹改善的受试者评估中应答者比例没有统计上显著的差异。在每个时间点处，MT10109 10U组中的应答者比例小于其它两个组中的应答者比例。在第14天MT10109 10U组与MT10109 30U组之间具有统计上显著的差异(-30.4[95％CI：-52.0至-8.7]；p值0.011)并且在第90天MT10109 10U组与MT10109 20U组之间具有统计上显著的差异(-34.7[95％CI：-58.8至-10.7]；p值0.007)。

表11：受试者对治疗效果满意度的自我评估，全分析集

简写：N＝分析集中的受试者数目；n＝有数据的受试者数目。

注意：分析中包括的受试者必须具有等级为中度(2)或重度(3)的基线眉间纹严重程度。应答者被定义为在7分量表上评分为至少6(满意)。百分比是基于在相关访问时评估的受试者数目。

在受试者对治疗效果满意度的自我评估中，应答者被定义为在7分量表上评分为至少6(满意)。

如在改善的自我评估中所看到，在第30天在满意度评估中应答者比例在MT1010920U组和20U组中是相似的，其反映了现场评估等级。在第120天，MT10109 20U组中的应答者比率比任何其它治疗组都高(图8)。MT10109 20U组中的满意度看似一致，但在20U组及其它MT10109组中的模式难以辨别。

在第30天、第60天和第120天MT10109 20U组中应答者比例分别为65.4％(26个受试者中的17个)、60.9％(23个受试者中的14个)和56.5％(23个受试者中的13个)，且在20U组中分别为61.5％(26个受试者中的16个)、44.0％(25个受试者中的11个)和46.2％(26个受试者中的12个)(表11)。在任何时间点，MT10109 20U组和20U组中的应答者比例之间没有统计上显著的差异。

在第30天，在其它MT10109组中，与20U组相比较，MT10109 10U组中的应答者比例较小，而MT1010930U组中的应答者比例较大(表11)。在第60天，与20U相比，两个MT10109组中的比例更大。在第120天，与20U组相比(46.2％；[26个受试者中的12个])，MT10109 10U中的比例较小(39.3％；[28个受试者中的11个])以及MT1010930U治疗组中的比例较小(44.0％；[25个受试者中的11个])。在任何时间点，观察到MT1010910U组与20U组之间或MT10109 30U组与20U组之间应答者比例没有统计上显著的差异。

在MT10109 10U组与MT10109 20U组之间，或在MT10109 30U组与MT10109 20U组之间，受试者对治疗效果满意度的评估中应答者比例没有统计上显著的差异。在每个时间点上，MT10109 10U组中的应答者比例都小于MT10109 30U组中的应答者比例，且在第30天具有统计上显著的差异(-27.3[95％CI：-52.8至-1.9]；p值0.040)。

功效结果(FAS)-MT10109的持久改善功效

20U单次剂量的MT10109在减少受试者眉间纹方面展示与20U类似的效果。

在第30天研究人员现场评估最大皱眉时的眉间纹严重程度之后，MT10109 20U组中应答者比例为69.2％且在20U组中为73.1％。两个治疗组中应答者比例之间的差异是-3.2(95％CI：-28.3至21.8)，其不是统计上显著的(p值0.760)。

在眉间纹改善和对治疗效果满意度的受试者自我评估中，与20U相比，MT10109 20U和MT10109 30U组中应答者比例通常更高。在第30天，MT10109 20U组和20U组中的应答者比率相似，反映了现场评估等级(MT10109 20U组，对于改善为73.1％且对于治疗效果满意度为65.4％；20U组，分别为69.2％和61.5％)。

在MT10109 20U组中最大皱眉时的应答持续到第120天。根据研究人员现场评估，在第120天的应答者比例在MT10109 20U组中为52.2％，相比较而言，20U组中为23.1％。在大多数时间点，与20U组中的应答者比例相比，MT10109 30U组中最大皱眉时的应答者比例较大，而MT10109 10U组中的应答者比例较小。

基于照相评估，独立评审员认为较少数受试者是应答者；然而，在第30天和第60天最大皱眉时的应答者比例(使用平均评分)在MT10109 20U治疗组(分别为48.1％和40.7％)和20U治疗组(分别为51.7％和41.4％)中是相似的，其反映了研究人员现场评估。

在研究人员现场评估和独立评审员对平静时的眉间纹严重度的照相评估中，应答者比例在全部治疗组中都很小。在大多数时间点，与20U组相比，MT10109 20U组中的应答者比率较小。

在第30天最大皱眉时，使用逻辑回归，剂量反应曲线显示剂量和应答之间无相关性。

图9和图10中进一步说明来自实验的数据。图9给出了描绘最大皱眉时和平静时的研究人员评估、在最大皱眉时和平静时的独立读出器评估以及受试者评估和满意度的一系列图形。图10说明集体产生的数据，并且分成两个不同治疗部位。

总之，本文中给出的数据表明，在较早的时间点(例如第30天)以20U的投用的冻干MT10109与展现出相似性。此外，表明以20U投用的MT10109与相比显示持久效果增加，因为看到在治疗后120天时，与20U组相比，MT10109 20U组中的治疗应答增加。

本文中引用的各个和每个专利、专利申请和出版物的公开内容均以引用方式全文并入本文中。尽管已参考具体的实施方案公开了本发明，但显然本领域其它技术人员可在不背离本发明的真正精神和范围的情况下设计出本发明的其它实施方案和变化。随附权利要求书旨在解释成包括所有这类实施方案和等同变化。

Claims (27)

1.一种用于治疗有需要的患者的病状的方法，所述方法包括局部施用治疗有效量的不含动物蛋白的肉毒杆菌毒素组合物的步骤，从而由此使所述病状的症状有效地缓解持续比含有动物蛋白的肉毒杆菌毒素组合物更长的时间段。

2.根据权利要求1所述的方法，其中所述不含动物蛋白的肉毒杆菌毒素组合物呈选自由液体组合物和冻干组合物组成的组的形式。

3.根据权利要求2所述的方法，其中所述液体组合物包含肉毒杆菌毒素、聚山梨醇酯20和甲硫氨酸。

4.根据权利要求2所述的方法，其中所述冻干组合物包含肉毒杆菌毒素、聚山梨醇酯和甲硫氨酸，以及一种或多种选自由糖、糖醇和离子化合物组成的组的组分。

5.根据权利要求1所述的方法，其中所述肉毒杆菌毒素选自由肉毒杆菌毒素血清型A、B、C、D、E、F和G组成的组。

6.根据权利要求1所述的方法，其中所述不含动物蛋白的肉毒杆菌毒素组合物在所述患者体内持续比含有动物蛋白的肉毒杆菌毒素组合物更长的时间。

7.根据权利要求1所述的方法，其中所述病状选自由以下组成的组：眉间纹、木偶纹、额皱纹、侧眼角纹及其任何组合。

8.根据权利要求1所述的方法，其中所述病状的症状的有效缓解是在外观上暂时改善与皱眉肌和/或降眉间肌活动相关的中度至重度眉间纹。

9.根据权利要求8所述的方法，其中所述不含动物蛋白的组合物提供至少16周的时间段的有效缓解。

10.根据权利要求1所述的方法，其中所述病状的症状的有效缓解是在外观上暂时改善与眼轮匝肌活动相关的中度至重度侧眼角纹。

11.根据权利要求10所述的方法，其中所述不含动物蛋白的组合物提供至少16周的时间段的有效缓解。

12.根据权利要求1所述的方法，其中所述病状的症状的有效缓解是降低与颈肌张力障碍相关的异常头位和颈部疼痛的严重程度。

13.根据权利要求12所述的方法，其中所述不含动物蛋白的组合物提供至少16周的时间段的有效缓解。

14.根据权利要求1所述的方法，其中所述病状的症状的有效缓解是预防患有偏头痛的患者的头痛。

15.根据权利要求14所述的方法，其中所述不含动物蛋白的组合物提供至少16周的时间段的有效缓解。

16.根据权利要求1所述的方法，其中所述病状的症状的有效缓解是治疗抑郁症。

17.根据权利要求1所述的方法，其中所述病状的症状的有效缓解是选自由以下组成的组的抑郁等级评定量表的改善：贝克抑郁问卷、汉密尔顿抑郁等级评定量表、临床总体印象、住院焦虑及抑郁量表，和蒙哥马利-阿斯伯格抑郁等级评定量表。

18.根据权利要求16所述的方法，其中所述不含动物蛋白的组合物提供至少16周的时间段的有效缓解。

19.根据权利要求1所述的方法，其中所述病状选自由以下组成的组：与神经病学病状相关的逼尿肌活动过度、慢性偏头痛、上肢痉挛状态、颈肌张力障碍、原发性腋窝多汗症、睑痉挛和斜视、特发性膀胱活动过度及其任何组合。

20.一种用于治疗有需要的患者的病状的方法，所述方法包括局部施用治疗有效量的不含动物蛋白的肉毒杆菌毒素组合物的步骤，其中所述组合物以有效维持所述病状的至少一个症状缓解的第一次治疗与第二次治疗之间的时间间隔施用，所述时间间隔大于与所述不含动物蛋白的组合物相比以相同量投用且以相同方式施用至相同位置的含有动物蛋白的肉毒杆菌毒素组合物的时间间隔。

21.根据权利要求20所述的方法，其中所述不含动物蛋白的肉毒杆菌毒素组合物呈选自由液体药物组合物和药物冻干制剂组成的组的形式。

22.根据权利要求21所述的方法，其中所述液体药物组合物包含肉毒杆菌毒素、聚山梨醇酯20和甲硫氨酸。

23.根据权利要求10所述的方法，其中所述药物冻干制剂包含肉毒杆菌毒素、聚山梨醇酯和甲硫氨酸，以及一种或多种选自由糖、糖醇和离子化合物组成的组的组分。

24.根据权利要求20所述的方法，其中所述肉毒杆菌毒素选自由肉毒杆菌毒素血清型A、B、C、D、E、F和G组成的组。

25.根据权利要求20所述的方法，其中第一次治疗与第二次治疗之间的所述时间间隔大于3个月。

26.根据权利要求20所述的方法，其中所述病状选自由以下组成的组：眉间纹、木偶纹、鱼尾纹、额皱纹、侧眼角纹及其任何组合。

27.根据权利要求20所述的方法，其中所述病状选自由以下组成的组：与神经病学病状相关的逼尿肌活动过度、慢性偏头痛、上肢痉挛状态、颈肌张力障碍、原发性腋窝多汗症、睑痉挛和斜视、特发性膀胱活动过度及其任何组合。