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CN106166163A - 一种含有乳酸菌的发酵上清的女性洗液 - Google Patents

一种含有乳酸菌的发酵上清的女性洗液 Download PDF

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CN106166163A
CN106166163A CN201610804021.8A CN201610804021A CN106166163A CN 106166163 A CN106166163 A CN 106166163A CN 201610804021 A CN201610804021 A CN 201610804021A CN 106166163 A CN106166163 A CN 106166163A
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CN
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feminine wash
lactic acid
acid bacteria
mass parts
feminine
Prior art date
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CN201610804021.8A
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孙筱霞
那立亚
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Beijing Blue City Technology Co Ltd
Original Assignee
Beijing Blue City Technology Co Ltd
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Publication date
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Abstract

本发明公开了一种含有乳酸菌的发酵上清的女性洗液。本发明所提供的含有乳酸菌的发酵上清的女性洗液由20.00～30.00质量份所述乳酸菌的发酵上清、2.00～7.00质量份椰油酰胺丙基甜菜碱、5.00～15.00质量份月癸基葡糖苷、0.50～1.00质量份二(PPG‑2肉豆蔻油醇聚醚‑10)己二酸酯、2.00～5.00质量份无患子提取物、0.30～0.50质量份香精和40.00～71.00质量份水组成。所述乳酸菌为植物乳杆菌(Lactobacillusplantarum)Rs0228，其在中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心的保藏编号为CGMCC No.12881。实验证明，本发明所提供的女性洗液具有良好的抑菌效果，具有重要的应用价值。

Description

一种含有乳酸菌的发酵上清的女性洗液
技术领域
本发明属于卫生用品领域，具体涉及一种含有乳酸菌的发酵上清的女性洗液。
背景技术
由于妇科疾病发病率的上升，女性的个人健康，尤其是私处护理问题越来越受到现代女性的关注。调查表明，女性中滴虫性阴道炎和霉菌性阴道炎分别高达17.2％和17.3％，而这两种阴道炎均可以通过改进个人局部卫生而得到预防。据调查结果显示，95％以上的女性使用过女性洗液，其中又有约45％的女性是作为日常清洁护理使用，45％的女性作为缓解私处不适及治疗妇科炎症使用。现有洗液产品大多为中草药制剂或者中西药混合制剂，作用机理主要是采用清热解毒类的中药来抑菌杀菌或者抗生素来迅速灭杀病源菌。
女性生殖器是一个开放性腔道，是人体重要的微生态区系，有众多的微生物寄居在此，与健康和疾病关系密切。因此，从微生态的角度来解决女性阴道健康问题的课题一直是本技术领域研究人员关注的热点。
乳酸菌(lactic acid bacteria，LAB)是一类能够分解糖类以产生乳酸为主要代谢产物的细菌的通称，其在自然界分布极为广泛，具有丰富的物种多样性。
发明内容
本发明所要解决的技术问题是如何使女性洗液具有良好的清洁效果，而且具有抑菌的功能。
为解决上述技术问题，本发明首先提供了一种女性洗液。
本发明所提供的女性洗液，可包括a1)或a2)或a3)或a4)：
a1)乳酸菌的发酵上清；
a2)所述乳酸菌的发酵物；
a3)所述乳酸菌的发酵上清的提取物；
a4)所述乳酸菌的发酵物的提取物。
上述女性洗液中，所述乳酸菌的发酵物为包括所述乳酸菌的发酵上清和菌体在内的整个发酵后体系。
上述女性洗液中，所述乳酸菌可为乳酸球菌属的乳酸菌，具体可为乳酸球菌属乳酸亚种的菌种。所述乳酸球菌属乳酸亚种的菌种具体可为菌株J-2或菌株C-10。
上述女性洗液中，所述乳酸菌可为乳杆菌属的乳酸菌，具体可为鼠乳杆菌的菌种或干酪乳杆菌干酪亚种的菌种。所述鼠乳杆菌的菌种具体可为菌株6-2。所述干酪乳杆菌干酪亚种的菌种具体可为菌株3-3。
上述女性洗液中，所述乳杆菌属的乳酸菌可为植物乳杆菌。所述植物乳杆菌具体可为菌株N-1或B16植物乳杆菌。
上述女性洗液中，所述植物乳杆菌具体可为植物乳杆菌(Lactobacillusplantarum)Rs0228，该菌株已于2016年08月18日保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心(简称CGMCC，地址为：北京市朝阳区北辰西路1号院3号)，保藏编号为CGMCCNo.12881。
所述菌株N-1、所述B16植物乳杆菌、所述菌株6-2、所述菌株3-3、所述菌株J-2和所述菌株C-10均记载于如下文献中：四川地区自然发酵泡菜中乳酸菌的生物特性研究.周光燕.2006.四川农业大学硕士学位论文.
上述女性洗液中，所述乳酸菌的发酵物的制备方法可为：发酵培养所述乳酸菌，得到乳酸菌的发酵物。所述发酵的起始时刻，所述乳酸菌的初始菌浓度可为6×105cfu/mL。所述发酵培养的条件：30℃振荡培养24-72h(24h、48h或72h)。所述振荡培养的参数具体可为摇速220rpm，旋转半径50mm。
上述女性洗液中，所述乳酸菌的发酵上清的制备方法可为：取所述乳酸菌的发酵物，除菌，收集上清液，得到乳酸菌的发酵上清。所述收集上清液的实现方法为4000rpm离心10min。所述除菌的方法为过滤除菌(过滤孔径可为0.45mm)。
上述女性洗液中，所述发酵培养使用的培养基可用任何适合培养乳酸菌的培养基。
上述女性洗液中，所述发酵培养使用的培养基具体可含有9.00～11.00g/L蛋白胨、9.00～11.00g/L牛肉膏、4.50～5.50g/L酵母膏、1.80～2.20g/L柠檬酸氢二铵、18.00～22.00g/L葡萄糖、0.90～1.10mL/L吐温-80、1.80～2.20g/L磷酸氢二钾、0.52～0.64g/L硫酸锰和0.25～0.31g/L硫酸镁。
所述发酵培养使用的培养基具体可为含有9.00～11.00g/L蛋白胨、9.00～11.00g/L牛肉膏、4.50～5.50g/L酵母膏、1.80～2.20g/L柠檬酸氢二铵、18.00～22.00g/L葡萄糖、0.90～1.10mL/L吐温-80、1.80～2.20g/L磷酸氢二钾、0.52～0.64g/L硫酸锰和0.25～0.31g/L硫酸镁的水溶液，pH值为6.2-6.6。
所述发酵培养使用的培养基具体可为含有10.00g/L蛋白胨、10.00g/L牛肉膏、5.00g/L酵母膏、2.00g/L柠檬酸氢二铵、20.00g/L葡萄糖、1mL/L吐温-80、2.00g/L磷酸氢二钾、0.58g/L硫酸锰和0.28g/L硫酸镁的水溶液，pH值为6.4。
上述任一女性洗液主要可由如下质量份的原料组成：20.00～30.00质量份所述乳酸菌的发酵上清、2.00～7.00质量份椰油酰胺丙基甜菜碱、5.00～15.00质量份月癸基葡糖苷、0.50～1.00质量份二(PPG-2肉豆蔻油醇聚醚-10)己二酸酯、2.00～5.00质量份无患子提取物和0.30～0.50质量份香精。
上述任一所述女性洗液具体可由如下质量份的原料组成：20.00～30.00质量份所述乳酸菌的发酵上清、2.00～7.00质量份椰油酰胺丙基甜菜碱、5.00～15.00质量份月癸基葡糖苷、0.50～1.00质量份二(PPG-2肉豆蔻油醇聚醚-10)己二酸酯、2.00～5.00质量份无患子提取物、0.30～0.50质量份香精和40.00～71.00质量份水。
上述任一所述女性洗液具体可由20.00质量份所述乳酸菌的发酵上清、2.00质量份椰油酰胺丙基甜菜碱、5.00质量份月癸基葡糖苷、0.50质量份二(PPG-2肉豆蔻油醇聚醚-10)己二酸酯、2.00质量份无患子提取物、0.30质量份香精和70.20质量份水组成。
上述任一所述女性洗液具体可由25.00质量份所述乳酸菌的发酵上清、4.50质量份椰油酰胺丙基甜菜碱、10.00质量份月癸基葡糖苷、0.75质量份二(PPG-2肉豆蔻油醇聚醚-10)己二酸酯、3.50质量份无患子提取物、0.40质量份香精和55.85质量份水组成。
上述任一所述女性洗液具体可由30.00质量份所述乳酸菌的发酵上清、7.00质量份椰油酰胺丙基甜菜碱、15.00质量份月癸基葡糖苷、1.00质量份二(PPG-2肉豆蔻油醇聚醚-10)己二酸酯、5.00质量份无患子提取物、0.50质量份香精和41.50质量份水组成。
上述任一所述女性洗液的制备方法也属于本发明的保护范围。
上述任一所述女性洗液的制备方法可包括将20.00～30.00质量份所述乳酸菌的发酵上清、2.00～7.00质量份椰油酰胺丙基甜菜碱、5.00～15.00质量份月癸基葡糖苷、0.50～1.00质量份二(PPG-2肉豆蔻油醇聚醚-10)己二酸酯、2.00～5.00质量份无患子提取物、0.30～0.50质量份香精和40.00～71.00质量份水混合的步骤。
上述任一所述乳酸菌在制备女性洗液中的应用也属于本发明的保护范围。
上文中，香精具体可为罗伯特香精香料(北京)有限公司的产品。椰油酰胺丙基甜菜碱为赢创德固赛(中国)投资有限公司产品，产品目录号为61789-40-0。月癸基葡糖苷为LG Household&Healthcare Ltd的产品，产品目录号为110615-47-9。二(PPG-2肉豆蔻油醇聚醚-10)己二酸酯为禾大化学品(上海)有限公司公司的产品，产品目录号为397247-05-1。
上文中，无患子提取物具体可为昆明仟草生物科技有限公司的产品。
上文中，无患子提取物可为无患子果皮提取物。
上文中，无患子提取物可为无患子醇提物。所述醇具体可为乙醇。
所述无患子醇提物的制备方法可包括如下步骤：以无患子果皮为原料，依次进行乙醇回流提取、水沉并去杂、醇沉并去杂和干燥。
所述“乙醇回流提取”具体可为采用乙醇水溶液进行回流提取。所述乙醇水溶液具体可为78-82％(体积百分比)的乙醇水溶液。所述“乙醇回流提取”中，乙醇水溶液与原料的质量配比可为(7.9-8.1)：1。所述“乙醇回流提取”的时间具体可为2h±10min。为了增加产率，可多次重复提取，再将回流液混合。所述重复提取的次数具体可为3次。
所述制备方法中，具体可将所述“乙醇回流提取”得到的回流液过滤，收集上清液进行浓缩，然后将得到的浓缩液(浓缩液1)进行所述“水沉”。
所述“水沉”中，所述浓缩液1与水的体积配比为1:3。
所述“水沉”的具体条件参数为：先搅拌5h，再静置6h。
所述制备方法中，具体可将所述“水沉”得到的溶液过滤，收集上清液进行浓缩，然后将得到的浓缩液(浓缩液2)进行所述“醇沉”。
所述“醇沉”中，所述浓缩液2与水的体积配比为1:2。
所述“醇沉”的具体条件参数为：先搅拌5min，再静置2-4h。
所述制备方法中，具体可将所述“醇沉”得到的溶液过滤，收集上清液进行脱色，然后得到脱色后的溶液。
所述制备方法中，具体可将所述“脱色后的溶液”浓缩，然后依次进行干燥、粉碎。
所述干燥的具体条件参数为：75℃条件下干燥至恒重。
所述粉碎的具体条件参数为：筛网目数100目。
获得无患子的醇提物的步骤具体可如下：
(1)将无患子(Sap indusmukorossi Gaerth.)的果皮进行粉碎(筛网目数：10目)，得到粒度小于1.0cm的原料。
(2)完成步骤(1)后，取原料，加入(8±0.1)质量倍量78-82％(体积百分比)的乙醇水溶液进行回流提取，提取分别进行三次，每次提取时间为2h±10min，分别得到回流液1、回流液2和回流液3。
(3)完成步骤(2)后，取回流液1、回流液2或回流液3，过滤，收集上清液进行浓缩(目的为回收乙醇)，然后将浓缩液进行合并，得到溶液1。
(4)完成步骤(3)后，取溶液1，按体积比为1:3加入水，进行水沉(搅拌时间5h，水沉时间6h；杂质形成沉淀通过后续的过滤去除)，然后进行过滤，收集上清液进行浓缩，得到溶液2。
(5)完成步骤(4)后，取溶液2，按体积比为1:2加入水，进行醇沉(搅拌时间5min，醇沉时间2-4h；杂质形成沉淀通过后续的过滤去除)，然后进行过滤，收集上清液进行脱色，得到溶液3。
(6)完成步骤(5)后，取溶液3，先进行浓缩(目的为回收乙醇)和干燥(在75℃条件下干燥至恒重)，然后粉碎(筛网目数：100目)，最后混合均匀，获得无患子的醇提物。
实验证明，本发明所提供的女性洗液具有良好的抑菌效果，具有重要的应用价值。
具体实施方式
下面结合具体实施方式对本发明进行进一步的详细描述，给出的实施例仅为了阐明本发明，而不是为了限制本发明的范围。
下述实施例中的实验方法，如无特殊说明，均为常规方法。
下述实施例中所用的材料、试剂等，如无特殊说明，均可从商业途径得到。以下实施例中的定量试验，均设置三次重复实验，结果取平均值。
MRS培养基：将蛋白胨10.00g、牛肉膏10.00g、酵母膏5.00g、柠檬酸氢二铵2.00g、葡萄糖20.00g、吐温-80 1mL、磷酸氢二钾2.00g、硫酸锰0.58g和硫酸镁0.28g溶于1L蒸馏水，调节pH值至6.4。
固体培养基：将胰蛋白胨5.0g、淀粉2.5g、琼脂15.0g和葡萄糖1.0g溶于1L蒸馏水，调节pH值至5.5。
固体平板：用固体培养基制成固体平板。
金黄色葡萄球菌(Staphylococcus aureus)ATCC No.6538和白色念珠菌(Moniliaalbican)ATCC No.10231均保藏于美国模式培养物集存库(简称ATCC，地址：American TypeCulture Collection(ATCC)10801University Boulevard Manassas，VA 20110 USA)，公众可从美国模式培养物集存库获得该菌株。金黄色葡萄球菌(Staphylococcus aureus)ATCCNo.6538在下文中简称为金黄色葡萄球菌。白色念珠菌(Monilia albican)ATCC No.10231在下文中简称为白色念珠菌。
无患子提取物为昆明仟草生物科技有限公司的产品。香精为罗伯特香精香料(北京)有限公司的产品。椰油酰胺丙基甜菜碱为赢创德固赛(中国)投资有限公司的产品，产品目录号为61789-40-0；椰油酰胺丙基甜菜碱在下文中简称F50。月癸基葡糖苷为LGHousehold&Healthcare Ltd的产品，产品目录号为110615-47-9。二(PPG-2肉豆蔻油醇聚醚-10)己二酸酯为禾大化学品(上海)有限公司公司的产品，产品目录号为397247-05-1；二(PPG-2肉豆蔻油醇聚醚-10)己二酸酯在下文中简称SCE。
下述实施例中的菌株N-1、B16植物乳杆菌、菌株6-2、菌株3-3、菌株J-2和菌株C-10均记载于如下文献中：四川地区自然发酵泡菜中乳酸菌的生物特性研究.周光燕.2006.四川农业大学硕士学位论文.
实施例1、乳酸菌的分离与鉴定
一、菌的分离
1、样品的采集
采集女性(均为对试验内容知情同意的志愿者)的阴道分泌物作为样品，共10份。
2、菌的分离
(1)取样品，用无菌水稀释至10倍体积，得到样品稀释液。取1mL样品稀释液，搅拌接种于30-40℃的固体培养基中，37℃培养24-72h。
(2)完成步骤(1)后，挑选单菌落，点接接种于含1.6％(质量百分比)溴甲酚紫的双层的固体平板上，37℃培养24-72h。
(3)完成步骤(2)后，挑选产生黄色色素的单菌落，划线接种于含1.6％(质量百分比)溴甲酚紫的双层的固体平板上，37℃培养。
(4)完成步骤(3)后，挑选产生黄色色素的单菌落，接种于MRS培养基中，37℃培养24-72h。
(5)完成步骤(4)后，革兰氏染色涂片镜检。
革兰氏染色涂片镜检阳性、过氧化氢阴性、含溴甲酚紫平板上形成黄色菌落的菌株初步判定为乳酸菌。按照上述分离方法，从10份样品中分离到了7株乳酸菌，依次命名为菌株N1、菌株N2、菌株N3、菌株N4、菌株N5、菌株N6和菌株N7。
二、乳酸菌的鉴定
参考文献(陈强，2004；胡清华，2002)中记载的方法，测定菌株N1、菌株N2、菌株N3、菌株N4、菌株N5、菌株N6和菌株N7的生理生化特征。生理生化试验均设置重复、阴性对照和阳性对照。根据测定结果，与《伯杰细菌鉴定手册》(R.E.布坎南，N.E吉本斯，1984)、《常见细菌系统鉴定手册》(东秀株，蔡妙英，2001)、《Bergey’s Manual of SystematicBacteriology》(Peter H.A.Sneath，1984)和《乳酸菌分类鉴定及实验方法》(凌代文，东秀珠1999)对照进行判别。
菌株N1、菌株N2、菌株N3、菌株N4和菌株N5均无芽抱，革兰氏阳性，过氧化氢酶阴性，明胶液化试验、吲哚试验、联苯胺试验、硝酸盐还原试验中反应阴性，pH4.5生长，因此菌株N1、菌株N2、菌株N3、菌株N4和菌株N5均鉴定为乳杆菌属的乳杆菌。菌株N1、菌株N2和菌株N3的糖发酵结果与《伯杰细菌鉴定手册》和《乳酸菌分类鉴定及实验方法》中的植物乳杆菌描述一致，菌株N1为植物乳杆菌，菌株N2具体为菌株N-1，菌株N3具体为B16植物乳杆菌。菌株N4能利用甘露醇、乳糖、棉籽糖、鼠李糖、七叶苷、海藻糖、纤维二糖、阿拉伯糖、麦芽糖、葡萄糖、山梨醇发酵产酸、不发酵核糖、木糖、葡萄糖酸盐产酸，精氨酸不产氨，15℃不生长，所以菌株N4鉴定为鼠乳杆菌，具体为菌株6-2。菌株N5的糖发酵结果与《乳酸菌分类鉴定及实验方法》中描述一致，因此，将菌株N5鉴定为干酪乳杆菌干酪亚种，具体为菌株3-3。
菌株N6和菌株N7的生理生化特征如下：在10℃生长，45℃不生长，4％NaCl生长，葡萄糖发酵产酸不产气，革兰氏染色阳性的球形或卵球形细菌，在过氧化氢酶阴性，明胶液化试验、联苯胺试验、硝酸盐还原试验中反应阴性，因此菌株N6和菌株N7鉴定为乳酸球菌属的乳酸菌。菌株N6能利用甘露醇、乳糖、核糖、麦芽糖、葡萄糖、山梨醇发酵产酸，不利用棉籽糖、鼠李糖、海藻糖、木糖、甘油、淀粉发酵产酸、精氨酸水解，符合《乳酸菌分类鉴定及实验方法》的描述，将菌株N6鉴定为乳酸球菌属乳酸亚种，具体为菌株J-2。菌株N7能够发酵利用乳糖、海藻糖、核糖、麦芽糖、葡萄糖产酸，不利用棉籽糖、阿拉伯糖、山梨醇、木糖产酸，能从精氨酸产氨，并且能够水解精氨酸，发酵葡萄糖产酸不产气，在pH9.2、pH9.6的培养基中生长，符合《乳酸菌分类鉴定及实验方法》的描述，将菌株N7鉴定为乳酸球菌属乳酸亚种，具体为菌株C-10。
实施例2、女性洗液的制备
一、发酵上清的制备
1、取菌株N1，接种至MRS培养基(乳酸菌的初始菌浓度为6×105cfu/mL)，30℃振荡(摇速为220rpm，旋转半径为50mm)培养24h，收集整个培养体系，命名为体系1。
2、完成步骤1后，取体系1，按体积比为1:9接种至MRS培养基，30℃振荡(摇速为220rpm，旋转半径为50mm)培养24h，收集整个培养体系，命名为体系2。
3、完成步骤2后，取体系2，4000rpm离心10min，收集上清液。将上清液过滤除菌(过滤孔径为0.45mm)，即获得菌株N1的发酵上清。
按照上述方法，将菌株N1分别替换为菌株N2、菌株N3、菌株N4、菌株N5、菌株N6和菌株N7，其它步骤均不变，得到菌株N2的发酵上清、菌株N3的发酵上清、菌株N4的发酵上清、菌株N5的发酵上清、菌株N6的发酵上清和菌株N7的发酵上清。
二、女性洗液的制备
按照表2的配比，将水、F50、月癸基葡糖苷、菌株的发酵上清、SCE、无患子提取物和香精混合，获得表2所示的女性洗液。
表2不同女性洗液的原料组成(g)
实施例3、实施例2制备的女性洗液的沐浴效果
一、实施例2制备的女性洗液的抑菌试验
按照《消毒技术规范》2002版2.1.8.2的抑菌环试验的方法，测定待测女性洗液对待测菌的抑菌效果。待测女性洗液为女性洗液A1、女性洗液A2、女性洗液A3、女性洗液B1、女性洗液B2、女性洗液B3、女性洗液C1、女性洗液C2、女性洗液C3、女性洗液D1、女性洗液D2、女性洗液D3、女性洗液E1、女性洗液E2、女性洗液E3、女性洗液F1、女性洗液F2、女性洗液F3、女性洗液G1、女性洗液G2、女性洗液G3或女性洗液K。待测菌为金黄色葡萄球菌或白色念珠菌。抑菌试验重复三次，每次重复的步骤如下：
1、按照《消毒技术规范》2002版2.1.1.2.3的方法，制备待测菌的菌悬液，待测菌的菌悬液的浓度为5.2×106cfu/mL。
2、取20μL菌悬液，倒入15-20mL固体培养基中(固体培养基的温度约为50-55℃)，混合均匀，获得混合液。
3、取4个牛津杯置于培养皿，各牛津杯心之间相距25mm以上，与培养皿的周缘相距15mm以上，且各距离均匀；然后倒入混合液，冷却。
4、完成步骤3后，向牛津杯中加入1mL待测女性洗液(与培养皿中混合液的液面高度一致)，将培养皿置于37℃培养17h，然后用游标卡尺测量抑菌环的直径。
5、完成步骤3后，向牛津杯中加入1mL无菌水(与培养皿中混合液的液面高度一致)，将培养皿置于37℃培养17h，然后用游标卡尺测量抑菌环的直径，作为阴性对照。
抑菌试验结果判断：
(1)抑菌环直径大于7mm者，判断为有抑菌效果；抑菌环直径为7mm以下者，判断为无抑菌效果。
(2)三次重复试验均有抑菌作用结果者，判为合格。
(3)阴性对照应无抑菌环产生，否则试验无效。
抑菌试验结果见表3。结果表明，女性洗液A1、女性洗液A2、女性洗液A3、女性洗液B1、女性洗液B2、女性洗液B3、女性洗液C1、女性洗液C2、女性洗液C3、女性洗液D1、女性洗液D2、女性洗液D3、女性洗液E1、女性洗液E2、女性洗液E3、女性洗液F1、女性洗液F2、女性洗液F3、女性洗液G1、女性洗液G2和女性洗液G3均对待测菌有抑菌效果，抑菌效果依次为：(女性洗液A1、女性洗液A2或女性洗液A3)>(女性洗液B1、女性洗液B2、女性洗液B3、女性洗液C1、女性洗液C2或女性洗液C3)>(女性洗液D1、女性洗液D2、女性洗液D3、女性洗液E1、女性洗液E2或女性洗液E3)>(女性洗液F1、女性洗液F2、女性洗液F3、女性洗液G1、女性洗液G2或女性洗液G3)。女性洗液K对待测菌无抑菌效果。
表3女性洗液对金黄色葡萄球菌的抑菌效果
二、实施例2制备的女性洗液的清洁效果
1、清洁试验
将1150名阴道清洁度检测为Ⅲ级或Ⅳ级的志愿者(志愿者对试验内容均知情同意)随机分成女性洗液A1试验组、女性洗液A2试验组、女性洗液A3试验组、女性洗液B1试验组、女性洗液B2试验组、女性洗液B3试验组、女性洗液C1试验组、女性洗液C2试验组、女性洗液C3试验组、女性洗液D1试验组、女性洗液D2试验组、女性洗液D3试验组、女性洗液E1试验组、女性洗液E2试验组、女性洗液E3试验组、女性洗液F1试验组、女性洗液F2试验组、女性洗液F3试验组、女性洗液G1试验组、女性洗液G2试验组、女性洗液G3试验组、女性洗液K试验组和对照组(每组50人)，然后进行如下试验：
女性洗液A1试验组：试验第1天，采用女性洗液A1清洗私处；试验第4天，再次采用女性洗液A1清洗私处；试验第7天，再次采用女性洗液A1清洗私处。每人每次女性洗液A1的使用量为4-6mL。
女性洗液A2试验组：按照女性洗液A1试验组的操作步骤进行，仅将女性洗液A1替换为女性洗液A2。
女性洗液A3试验组：按照女性洗液A1试验组的操作步骤进行，仅将女性洗液A1替换为女性洗液A3。
女性洗液B1试验组：按照女性洗液A1试验组的操作步骤进行，仅将女性洗液A1替换为女性洗液B1。
女性洗液B2试验组：按照女性洗液A1试验组的操作步骤进行，仅将女性洗液A1替换为女性洗液B2。
女性洗液B3试验组：按照女性洗液A1试验组的操作步骤进行，仅将女性洗液A1替换为女性洗液B3。
女性洗液C1试验组：按照女性洗液A1试验组的操作步骤进行，仅将女性洗液A1替换为女性洗液C1。
女性洗液C2试验组：按照女性洗液A1试验组的操作步骤进行，仅将女性洗液A1替换为女性洗液C2。
女性洗液C3试验组：按照女性洗液A1试验组的操作步骤进行，仅将女性洗液A1替换为女性洗液C3。
女性洗液D1试验组：按照女性洗液A1试验组的操作步骤进行，仅将女性洗液A1替换为女性洗液D1。
女性洗液D2试验组：按照女性洗液A1试验组的操作步骤进行，仅将女性洗液A1替换为女性洗液D2。
女性洗液D3试验组：按照女性洗液A1试验组的操作步骤进行，仅将女性洗液A1替换为女性洗液D3。
女性洗液E1试验组：按照女性洗液A1试验组的操作步骤进行，仅将女性洗液A1替换为女性洗液E1。
女性洗液E2试验组：按照女性洗液A1试验组的操作步骤进行，仅将女性洗液A1替换为女性洗液E2。
女性洗液E3试验组：按照女性洗液A1试验组的操作步骤进行，仅将女性洗液A1替换为女性洗液E3。
女性洗液F1试验组：按照女性洗液A1试验组的操作步骤进行，仅将女性洗液A1替换为女性洗液F1。
女性洗液F2试验组：按照女性洗液A1试验组的操作步骤进行，仅将女性洗液A1替换为女性洗液F2。
女性洗液F3试验组：按照女性洗液A1试验组的操作步骤进行，仅将女性洗液A1替换为女性洗液F3。
女性洗液G1试验组：按照女性洗液A1试验组的操作步骤进行，仅将女性洗液A1替换为女性洗液G1。
女性洗液G2试验组：按照女性洗液A1试验组的操作步骤进行，仅将女性洗液A1替换为女性洗液G2。
女性洗液G3试验组：按照女性洗液A1试验组的操作步骤进行，仅将女性洗液A1替换为女性洗液G3。
女性洗液K试验组：按照女性洗液A1试验组的操作步骤进行，仅将女性洗液A1替换为女性洗液K。
对照组：按照女性洗液A1试验组的操作步骤进行，仅将女性洗液A1替换为无菌水。
2、效果评价
试验结果表明，与使用女性洗液K的志愿者或使用无菌水的志愿者相比，使用女性洗液A1、女性洗液A2、女性洗液A3、女性洗液B1、女性洗液B2、女性洗液B3、女性洗液C1、女性洗液C2、女性洗液C3、女性洗液D1、女性洗液D2、女性洗液D3、女性洗液E1、女性洗液E2、女性洗液E3、女性洗液F1、女性洗液F2、女性洗液F3、女性洗液G1、女性洗液G2或女性洗液G3的志愿者中，阴道清洁度检测为Ⅰ级或Ⅱ级的比例显著增加，使用效果依次为：(女性洗液A1、女性洗液A2或女性洗液A3)>(女性洗液B1、女性洗液B2、女性洗液B3、女性洗液C1、女性洗液C2或女性洗液C3)>(女性洗液D1、女性洗液D2、女性洗液D3、女性洗液E1、女性洗液E2或女性洗液E3)>(女性洗液F1、女性洗液F2、女性洗液F3、女性洗液G1、女性洗液G2或女性洗液G3)。
可见，本发明提供的女性洗液A1、女性洗液A2、女性洗液A3、女性洗液B1、女性洗液B2、女性洗液B3、女性洗液C1、女性洗液C2、女性洗液C3、女性洗液D1、女性洗液D2、女性洗液D3、女性洗液E1、女性洗液E2、女性洗液E3、女性洗液F1、女性洗液F2、女性洗液F3、女性洗液G1、女性洗液G2和女性洗液G3均具有良好抑菌效果。
按照上述实施例2的制备方法，将无患子提取物替换为无患子的醇提物，制备相应的女性洗液，然后将该女性洗液按照实施例3的方法进行检测，结果表明，该女性洗液的抑菌效果与女性洗液A1、女性洗液A2、女性洗液A3、女性洗液B1、女性洗液B2、女性洗液B3、女性洗液C1、女性洗液C2、女性洗液C3、女性洗液D1、女性洗液D2、女性洗液D3、女性洗液E1、女性洗液E2、女性洗液E3、女性洗液F1、女性洗液F2、女性洗液F3、女性洗液G1、女性洗液G2或女性洗液G3相比，无显著差异。获得无患子的醇提物的步骤具体可如下：
(1)将市售的无患子(Sap indusmukorossi Gaerth.)的果皮进行粉碎(筛网目数：10目)，得到粒度小于1.0cm的原料。
(2)完成步骤(1)后，取原料，加入(8±0.1)质量倍量78-82％(体积百分比)的乙醇水溶液进行回流提取，提取分别进行三次，每次提取时间为2h±10min，分别得到回流液1、回流液2和回流液3。
(3)完成步骤(2)后，取回流液1、回流液2或回流液3，过滤，收集上清液进行浓缩(目的为回收乙醇)，然后将浓缩液进行合并，得到溶液1。
(4)完成步骤(3)后，取溶液1，按体积比为1:3加入水，进行水沉(搅拌时间5h，水沉时间6h；杂质形成沉淀通过后续的过滤去除)，然后进行过滤，收集上清液进行浓缩，得到溶液2。
(5)完成步骤(4)后，取溶液2，按体积比为1:2加入水，进行醇沉(搅拌时间5min，醇沉时间2-4h；杂质形成沉淀通过后续的过滤去除)，然后进行过滤，收集上清液进行脱色，得到溶液3。
(6)完成步骤(5)后，取溶液3，先进行浓缩(目的为回收乙醇)和干燥(在75℃条件下干燥至恒重)，然后粉碎(筛网目数：100目)，最后混合均匀，获得无患子的醇提物。
实施例1分离纯化得到的菌株N1已于2016年08月18日保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心(简称CGMCC，地址为：北京市朝阳区北辰西路1号院3号)，保藏编号为CGMCC No.12881。菌株N1的全称为植物乳杆菌(Lactobacillus plantarum)Rs0228CGMCC No.12881。

Claims (10)

1.一种女性洗液，包括a1)或a2)或a3)或a4)：
a1)乳酸菌的发酵上清；
a2)所述乳酸菌的发酵物；
a3)所述乳酸菌的发酵上清的提取物；
a4)所述乳酸菌的发酵物的提取物。
2.如权利要求1所述的女性洗液，其特征在于：所述乳酸菌为乳酸球菌属的乳酸菌。
3.如权利要求1所述的女性洗液，其特征在于：所述乳酸菌为乳杆菌属的乳酸菌。
4.如权利要求3所述的女性洗液，其特征在于：所述乳杆菌属的乳酸菌为植物乳杆菌。
5.如权利要求4所述的女性洗液，其特征在于：所述植物乳杆菌为植物乳杆菌(Lactobacillus plantarum)Rs0228，其在中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心的保藏编号为CGMCC No.12881。
6.如权利要求1至5任一所述的女性洗液，其特征在于：
所述乳酸菌的发酵物的制备方法为：发酵培养所述乳酸菌，得到乳酸菌的发酵物；
所述乳酸菌的发酵上清的制备方法为：取所述乳酸菌的发酵物，除菌，收集上清液，得到乳酸菌的发酵上清。
7.如权利要求6所述的女性洗液，其特征在于：所述发酵培养使用的培养基含有9.00～11.00g/L蛋白胨、9.00～11.00g/L牛肉膏、4.50～5.50g/L酵母膏、1.80～2.20g/L柠檬酸氢二铵、18.00～22.00g/L葡萄糖、0.90～1.10mL/L吐温－80、1.80～2.20g/L磷酸氢二钾、0.52～0.64g/L硫酸锰和0.25～0.31g/L硫酸镁。
8.如权利要求1至6任一所述的女性洗液，其特征在于：所述女性洗液主要由如下质量份的原料组成：20.00～30.00质量份所述乳酸菌的发酵上清、2.00～7.00质量份椰油酰胺丙基甜菜碱、5.00～15.00质量份月癸基葡糖苷、0.50～1.00质量份二(PPG-2肉豆蔻油醇聚醚-10)己二酸酯、2.00～5.00质量份无患子提取物和0.30～0.50质量份香精。
9.权利要求1至8任一所述女性洗液的制备方法，包括将20.00～30.00质量份所述乳酸菌的发酵上清、2.00～7.00质量份椰油酰胺丙基甜菜碱、5.00～15.00质量份月癸基葡糖苷、0.50～1.00质量份二(PPG-2肉豆蔻油醇聚醚-10)己二酸酯、2.00～5.00质量份无患子提取物、0.30～0.50质量份香精和40.00～71.00质量份水混合的步骤。
10.权利要求1至5中任一所述乳酸菌在制备女性洗液中的应用。
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