CN106165648B - 一种紫荆组培培养基及培养方法 - Google Patents
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Abstract
本发明涉及组织培养技术领域，具体公开了一种紫荆组培培养基及紫荆快速组培繁殖方法。所述培养基组分包括：wpm，0.4～0.6mg/L 2.4‑D、0.2～0.4mg/L IBA、0.4～0.6mg/L KT；优选为：wpm+0.5mg/L 2.4‑D+0.3mg/L IBA+0.5mg/L KT+30g/L蔗糖+5g/L琼脂。组培繁殖时，取紫荆带芽茎段，采用本发明所述培养基可同时进行紫荆的繁殖、壮苗与生根，即可快速得到紫荆组培苗，所得的紫荆组培苗不需特殊炼苗，生长健壮，成活率高。通过本发明所述方法进行紫荆的组培繁殖，不仅可保持优良树种的遗传稳定性，而且能有效提高其繁殖系数，繁殖周期短，炼苗过程易成活，降低驯化成本，操作简便，为进一步开展品种改良奠定基础。
Description
技术领域
本发明涉及组织培养技术领域，具体地说，涉及一种紫荆组培培养基及培养方法。
背景技术
紫荆(Cercis chinensis Bunge)，豆科紫荆属，落叶乔木或灌木。原产于中国。喜光照，有一定的耐寒性。喜肥沃、排水良好的土壤，不耐淹。萌蘖性强，耐修剪。皮果木花皆可入药，其种子有毒。是家庭和美、骨肉情深的象征。其形态特征具有相当高的园林应用价值，是较为少见且优异的观花植物，具有很高的经济价值。
目前，紫荆繁殖主要集中在播种繁殖和扦插繁殖上，但这两种繁殖手段均受季节限制，且播种繁殖发芽率低，种子休眠时间较长，扦插繁殖效率低。
发明内容
为了解决现有技术中存在的问题，本发明的目的是提供一种紫荆组培培养基及培养方法。
为了实现本发明目的，本发明的技术方案如下：
第一方面，本发明提供了一种紫荆组培培养基，所述培养基组分包括：wpm，0.4～0.6mg/L 2.4-D、0.2～0.4mg/L IBA(吲哚丁酸)、0.4～0.6mg/L KT(激动素)。
所述培养基可以直接诱导紫荆茎段生根，同时通过诱导腋芽增殖，仅通过该培养基即可一步实现紫荆茎段的快速繁殖。
作为优选，所述培养基组分包括：wpm+0.5mg/L 2.4-D+0.3mg/L IBA+0.5mg/L KT。
进一步地，所述培养基组分还包括蔗糖和琼脂。
更为优选，所述培养基为：wpm+0.5mg/L 2.4-D+0.3mg/L IBA+0.5mg/L KT+30g/L蔗糖+5g/L琼脂。
本发明通过试验研究发现，该配方的培养基能够更好更快的实现紫荆茎段的快速繁殖。具体表现为：继代周期为30d，生根时间为7d；丛生芽增殖周期为30d，丛生芽单芽高1～3cm，增殖系数为2～6。
进一步地，经试验优化筛选，所述培养基的pH＝5.4～6.0为宜，优选pH＝6.0。
第二方面，本发明提供了一种采用前述培养基进行紫荆快速组培繁殖方法。
具体为：取紫荆带芽茎段，采用本发明前述培养基进行增殖生根培养，即可得到紫荆组培苗。
所得的紫荆组培苗不需特殊炼苗，生长健壮。将生根健壮的紫荆组培苗，洗掉残余的培养基后，直接移栽进温室大棚苗床中，注意遮光降温保湿，成活率高达100％。优选移栽基质为腐殖质混合珍珠岩，混合比例优选为2:1。
在本发明所述方法中，紫荆带芽茎段的增殖与生根过程可在所述培养基中同步进行，与现有技术需要分别配制培养基且分别进行增殖与生根培养具有显著区别。
进一步地，在前述培养基进行增殖生根培养的培养条件为光照强度2800LX，光照时间16h，温度24～28℃的培养室中培养，如光照强度低于2800LX，生根缓慢或不生根，高于2800LX，叶片出现黄叶，温度低于24℃或高于28℃，生长缓慢，甚至出现植株死亡现象。
进一步地，前述取紫荆带芽茎段，优选以健壮的紫荆无菌组培苗为母本，取带芽茎段，进行所述增殖生根培养。
所述健壮的紫荆无菌组培苗可通过常规培养方法得到，也可优选通过如下方法获得：
所述紫荆无菌组培苗的获得方法包括如下步骤：
S1、将灭菌后的紫荆种子，接种于萌发培养基中，于光照强度2700～2900lx(优选2800lx)，光照时间15～17h(优选16h)，温度22～25℃(优选24℃)的条件下培养2-3周，得到实生苗；
S2、将实生苗切下转移至初代培养基上，于光照2700～2900lx(优选2800lx)，光照时间15～17h(优选16h)，温度22～25℃(优选24℃)的条件下培养2周，获得生根紫荆无菌组培苗。
其中，作为优选，所述所述萌发培养基为：MS+蔗糖20g/L+琼脂5g/L，pH5.5～6.0；所述初代培养基为：1/2MS+0.5mg/L NAA+蔗糖30g/L+琼脂5g/L，pH5.5～6.0。
更进一步地，所述灭菌后的紫荆种子可通过如下方法获得：
8～10月紫荆种子成熟，晴天午后，先采集紫荆无病虫害的健壮枝条上的饱满种子，自然阴干；后用手搓去紫荆果皮，选取饱满的种子备用。将种子用无菌温水侵泡1～3h，用滤纸吸干多余水分，放入超净工作台上，用75％酒精灭菌30s，无菌水冲洗两遍，0.1％升汞灭菌10min，再用无菌水清洗六遍。用滤纸吸干多余水分后在超净工作台上备用。
本发明的有益效果在于：
本发明提供了一种可使紫荆带芽茎段同时进行繁殖，壮苗，生根的特殊配方的培养基。可仅利用该培养基诱导茎段生根，同时通过萌发腋芽增殖，从而实现紫荆的快速组培繁殖。
通过本发明所述方法进行紫荆的组培繁殖，不仅可保持优良树种的遗传稳定性，而且能有效提高其繁殖系数，繁殖周期短，炼苗过程易成活，降低驯化成本，操作简便，能够比较容易的获得紫荆无菌苗，是紫荆组培快繁的有效途径，为进一步开展品种改良奠定基础，为工厂化育苗提供了有力的技术支持。
附图说明
图1为本发明实验例1中的紫荆初代种子萌发；
图2为本发明实验例1中的紫荆一步法继代(增殖-生根)；
图3为本发明实验例1中的紫荆生根苗；
图4为本发明实验例1中的紫荆根系；
图5为本发明实验例1中的紫荆炼苗成活后2年。
具体实施方式
下面将结合实施例对本发明的优选实施方式进行详细说明。需要理解的是以下实施例的给出仅是为了起到说明的目的，并不是用于对本发明的范围进行限制。本领域的技术人员在不背离本发明的宗旨和精神的情况下，可以对本发明进行各种修改和替换。
下述实施例中所使用的实验方法如无特殊说明，均为常规方法。
下述实施例中所用的材料、试剂等，如无特殊说明，均可从商业途径得到。
实施例1培养基
本实施例所述培养基的具体配方为：wpm+0.5mg/L 2.4-D+0.3mg/L IBA+0.5mg/LKT+30g/L蔗糖+5g/L琼脂。
实施例2培养基
本实施例与实施例1的区别在于：具体配方为：wpm+0.4mg/L2.4-D+0.3mg/L IBA+0.5mg/L KT+30g/L蔗糖+5g/L琼脂。
实施例3培养基
本实施例与实施例1的区别在于：具体配方为：wpm+0.5mg/L2.4-D+0.4mg/L IBA+0.5mg/L KT+30g/L蔗糖+5g/L琼脂。
实施例4培养基
本实施例与实施例1的区别在于：具体配方为：wpm+0.5mg/L2.4-D+0.3mg/L IBA+0.4mg/L KT+30g/L蔗糖+5g/L琼脂。
实施例5培养基
本实施例与实施例1的区别在于：具体配方为：wpm+0.5mg/L2.4-D+0.3mg/L IBA+0.5mg/L KT+10g/L蔗糖+5g/L琼脂。
对比例1培养基
本对比例与实施例1的区别在于：将wpm替换为MS。
对比例2培养基
本对比例与实施例1的区别在于：将KT替换为NAA。
实验例1
本实验例用于说明本发明所述的紫荆快速组培方法，具体如下：
1、将灭菌后的紫荆种子，接种于萌发培养基中，于光照2800lx，光照时间16h，温度24℃的条件下培养2-3周，得到实生苗；
2、将实生苗切下转移至初代培养基上，于光照2800lx，光照时间16h，温度24℃的条件下培养2周，获得生根紫荆无菌组培苗(如图1所示)。
3、将紫荆无菌组培苗切割成3-6段带芽茎段，采用实施例1所述的培养基，在于光照2800LX，光照时间16h,温度24℃的条件下进行增殖生根培养，培养2周后，带芽茎段长成完整植株(如图2所示)，且植株均生根发达(如图3所示)，根系粗壮、茂密(如图4所示)。
以上，紫荆快速组培繁殖完成。
经组培繁殖的紫荆植株成活2年后依旧健康，生长情况良好(如图5所示)。
实验例2
本实验例用于比较实施例1～5与对比例1～2所述的培养基在组培繁殖紫荆上的差异，具体如下：
取紫荆带芽茎段，分别采用实施例1～5与对比例1～2所述的培养基，在于光照2800LX，光照时间16h，温度24℃的条件下进行增殖生根培养。
记录紫荆组培苗在培养温度为22—30℃，光照强度为2500—2800Lx，光照时间为14—18h/d。其中启动培养基采用WPM基本培养基，补充生长激素、蔗糖、琼脂。在WPM基本培养基、蔗糖、琼脂均相同的条件下，根据生长激素浓度和天数进行分组，观察并记录培养苗情况，具体培养情况结果见表1各项数据：
表1紫荆生长统计情况
由表1可知，实施例1所述培养基的生根情况和植株长势明显优于实施例2～5。在实施例1中生根时间是最短，根数最多，七天可萌发新叶片三片，三十天植株株高可以达到4cm，足以证明且长势较好，平均生根数和平均根长均较高，为生根培养基的最适合的生长激素条件。对比例1所述的培养基仅对继代株高有作用，黄叶较多，长势较差，无法实现生根。对比例2所述的培养基不能实现生根。
由此可见，本发明培养基的配方在快速组培繁殖紫荆方面具有明显的优势。
虽然，上文中已经用一般性说明及具体实施方案对本发明作了详尽的描述，但在本发明基础上，可以对之作一些修改或改进，这对本领域技术人员而言是显而易见的。因此，在不偏离本发明精神的基础上所做的这些修改或改进，均属于本发明要求保护的范围。
Claims (3)
1.一种紫荆快速组培繁殖方法，其特征在于，以健壮的紫荆无菌组培苗为母本，取其带芽茎段，采用紫荆组培培养基进行增殖生根培养，即得紫荆组培苗；
所述培养条件为于光照强度2800LX，光照时间16h，温度24℃的培养室中培养；
所述紫荆组培培养基为：wpm+0.5mg/L 2.4-D+0.3mg/L IBA+0.5mg/L KT+30g/L蔗糖+5g/L琼脂，所述培养基的pH值为5.4～6.0。
2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述紫荆无菌组培苗的获得方法包括如下步骤：
S1、将灭菌后的紫荆种子，接种于萌发培养基中，于光照强度2700～2900lx，光照时间15～17h，温度22～25℃的条件下培养2-3周，得到实生苗；
S2、将实生苗切下转移至初代培养基上，于光照2700～2900lx，光照时间15～17h，温度22～25℃的条件下培养2周，获得生根紫荆无菌组培苗。
3.根据权利要求2所述的方法，其特征在于，所述萌发培养基为：MS+蔗糖20g/L+琼脂5g/L，pH5.5～6.0；所述初代培养基为：1/2MS+0.5mg/L NAA+蔗糖30g/L+琼脂5g/L，pH5.5～6.0。
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2016
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| 紫叶加拿大紫荆组织培养研究;孟月娥等;《河南农业科学》;20101231(第12期);摘要、第1.1、1.6节 * |
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