CN105988008A - 测定装置、试剂盒及方法 - Google Patents

Abstract

本发明公开了一种用于检测样品中的分析物的测定装置，所述装置包含：放置样品的放置区；基质，其与所述放置区连接，使得样品加入所述放置区时可沿所述基质迁移；在所述基质上的捕获位置；存在于捕获位置的捕获工具，所述捕获工具为亲和素或链霉亲和素。本发明还公开了一种包含上述测定装置的试剂盒，以使用上述试剂盒确定样品中的分析物存在情况的方法。本发明的测定装置、试剂盒及方法灵敏度很高。

Description

测定装置、试剂盒及方法

技术领域

本发明涉及用于检测分析物存在的方法和装置。

背景技术

目前的免疫层析快速检测卡多以胶体金、彩色乳胶微粒或者荧光素作为标记物。基于胶体金标记技术开发的快速检测产品灵敏度低、批间差异较大，只能定性或者半定量。彩色乳胶微粒虽然批间差有所改进，但灵敏度依然较低，也只能定性或半定量。

基于荧光素标记技术的免疫层析灵敏度有了较大提高，也能进行定量检测，但因其STOCK位移小，荧光寿命短，检测灵敏度容易受背景荧光的影响。

CN102192983A公开了时间分辨荧光免疫层析定量检测试纸条及其制备方法和应用，膜上有加样区和微球区，微球区上载有时间分辨荧光微球；硝酸纤维素膜上有检测线和质控线，检测线上包被抗体或抗原，质控线上包被亲和素或链霉亲和素。待测样品通过层析作用与包被有抗体的时间分辨荧光纳米微球(检测微球)结合，在毛细作用下，依次通过Fusion5、硝酸纤维素膜，并与硝酸纤维素膜T线上固定的另一抗体结合，形成双抗体免疫夹心复合物。在层析过程中，质控微球(表面包被有生物素，混合在检测微球中)也随着样品的移动而前进，并在硝酸纤维素膜C线位置被固定的亲和素捕获。T线位置捕获的微球量与待测样品中的抗原浓度成正相关，而C线位置捕获的质控微球通常是固定的。但该专利技术的缺陷是：抗原抗体结合时间短、灵敏度低，试剂精密度差。

CN103792357A公开了大观霉素快速时间分辨荧光免疫层析定量检测试纸条，包括Fusion5膜、硝酸纤维素膜以及吸水纸三部分，硝酸纤维素膜位于中间，Fusion5膜与吸水纸分别搭接于硝酸纤维素膜左右两端，Fusion5膜上有加样区和微球区，微球区上载有大观霉素单克隆抗体时间分辨荧光微球；硝酸纤维素膜上有检测线和质控线，检测线上包被大观霉素抗原，质控线上包被抗兔抗体。该专利技术的缺陷：灵敏度低，试剂精密度差。

已知的另一种技术是：组分1：包被有抗体的荧光微球；组分2：硝酸纤维素膜上有检测线，检测线上包被抗体。使用时，先将待测样品与组分1混合，再将混合物加到组分2，并与硝酸纤维素膜检测线上固定的另一抗体结合，形成双抗体免疫夹心复合物上，最后在仪器上测量发光值。该技术的缺陷：抗体用量多，成本高，灵敏度较低。

在中国抗生素滥用现象严重，过度医疗的问题已成为民众关注的敏感话题。降钙素原能够区别细菌性感染和病毒性感染，为抗生素使用提供科学的依据。

心肌梗塞在我国是常见多发病，心肌梗塞发病非常的快，病人得不到及时准确的诊断，可能导致死亡。心肌梗塞以及心衰的诊断指标包括肌钙蛋白I、肌红蛋白、肌酸激酶同工酶、N末端脑钠肽前体蛋白、心型脂肪酸结合蛋白。其中部分标志物的检测灵敏度要求越来越高，以肌钙蛋白I为例，功能灵敏度要求在0.1ng/mL以下，传统的荧光素已不满足需求。

上述靶抗原检测试剂盒均采用双抗体夹心法原理，检测血液样本中的靶抗原含量，免疫分析主要有酶联免疫法(ELISA)，快速诊断以及化学发光法等。

发明内容

本发明的目的在于解决上述不足，提供一种检测灵敏度高的分析物的测定装置，包含了该分析物的测定装置的试剂盒，以及确定样品中的分析物存在情况的方法。

为解决上述的技术问题，本发明采用以下技术方案：

一种用于检测样品中的分析物的测定装置，所述装置包含：其上可放置样品的放置区；基质，其与所述放置区连接，使得样品加入所述放置区时可沿所述基质迁移；在所述基质上的捕获位置，捕获位置远离放置区，样品可跨越所述捕获位置迁移；存在于捕获位置的捕获工具，所述捕获工具为亲和素或链霉亲和素。

在一个实施方案中，所述放置区为吸收垫。

在一个实施方案中，所述放置区在所述基质的一端，即将基质与所述放置区可操作连接，使得样品可沿基质自放置区迁移。优选所述迁移为纵向的。优选所述迁移为诸如毛细管作用等液体迁移。

在一个实施方案中，所述基质为吸收性材料。优选所述基质为诸如硝酸纤维素等材料，例如硝酸纤维素或包含硝酸纤维素或醋酸纤维素或包含醋酸纤维素。

在一个实施方案中，所述样品来源于人或动物的体液。

在一个实施方案中，所述捕获位置和第二捕获位置均垂直于样品的迁移流。

在一个实施方案中，所述装置为条或棒。优选所述装置还包含封盖。

在一个实施方案中，所述测定装置还包括指示线，所述指示线用于指示所述测定装置是否正确运行。优选通过测试所述指示线的信号变化来指示所述装置已运行。指示线可包含抗体，这些抗体可针对试剂组分中的抗体产生，其中所述抗体与试剂组分中的抗体不相同。

在另一个实施方案中，本发明提供确定样品中分析物水平的方法，即将所述样品置于本发明的测定装置的放置区，样品可沿基质自放置区迁移，并被捕获位置的捕获工具捕获，通过测量捕获位置的信号即能确定样品中分析物含量。

在另一个实施方案中，本发明提供的测定装置用于半定量地或定量地评估人或动物的体液中的降钙素原或肌钙蛋白水平。

在另一个实施方案中，本发明提供包含本发明的测定装置或者能够形成本发明的测定装置的试剂盒。

在一个实施方案中，所述试剂盒还包含第一组分和第二组分，所述第一组份为荧光微球标记的第一抗体或荧光微球标记的第一抗原；所述第二组份为生物素标记的第二抗体或生物素标记的第二抗原。

在一个实施方案中，所述第一抗体为多克隆或单克隆抗体。所述第二抗体为多克隆或单克隆抗体。

在一个实施方案中，所述荧光微球为稀土铕螯合物的聚苯乙烯微球或量子点的聚苯乙烯微球。

在一个实施方案中，所述荧光微球的粒径为80nm-400nm。优选所述荧光微球的粒径为100nm-200nm。

在一个实施方案中，所述荧光微球的激发波长为260nm-380nm。

在一个实施方案中，所述荧光微球的发射波长为600nm-650nm。

在一个实施方案中，所述第一组份为荧光微球标记的第一抗体；所述第二组份为生物素标记的第二抗体。

在另一个实施方案中，本发明提供一种用于半定量地或定量地评估人或动物的体液中的降钙素原或肌钙蛋白水平的试剂盒。

在另一个实施方案中，本发明提供一种确定样品中的分析物存在情况的方法，所述方法包括以下步骤：

a)将样品与第一组份和第二组分混合在一起，形成第一混合物；

b)将第一混合物滴加在样品放置区，所述第一混合物沿所述基质迁移并跨越所述捕获位置，所述第一混合物被捕获工具捕获；

c)检测步骤b)中捕获位置的信号，所述信号与所述样品中分析物的存在情况和/或量相关。

在一个实施方案中，所述样品为上述任一项中所定义的样品。

在一个实施方案中，所述第一组份为上述任一项中所定义的第一组份。

在一个实施方案中，其中所述捕获工具为权利要求1-22的任一项中所定义的捕获工具。

在一个实施方案中，其中所述步骤b)中检测捕获位置的信号的方法是时间分辨法。

在一个实施方案中，其中所述步骤b)中检测捕获位置的信号的工具是荧光检测仪。

在一个实施方案中，其中所述待测的分析物为降钙素原或肌钙蛋白。

本发明针对不同的检测项目，配备不同的第一组分和第二组分。

例如，检测降钙素原时，第一组分为荧光微球标记的降钙素原单克隆抗体或多克隆抗体，第二组分为生物素标记的降钙素原单克隆抗体或多克隆抗体。

例如，检测肌钙蛋白I时，第一组分为荧光微球标记的肌钙蛋白I单克隆抗体或多克隆抗体，第二组分为生物素标记的肌钙蛋白I单克隆抗体或多克隆抗体。

标记用的荧光微球是市售的具有时间分辨特性的荧光颗粒，如稀土铕荧光微球或量子点等。

本文所用术语“半定量”意指相对量、近似量或已知范围内的量；“定量”意指精确定量测定。

与现有技术相比，本发明的有益效果是：

本发明的测定装置、试剂盒及方法灵敏度高，比普通测定装置、试剂盒提高了8倍。

本发明的测定装置，捕获位置的捕获工具为亲和素或链霉亲和素，由于生物素和亲和素或链霉亲和素结合稳定，专一性强，亲和常数比抗原抗体间的亲和力至少高1万倍，而且每个亲和素或链霉亲和素能结合4个分子的生物素，可起到多层次信号放大的作用，因此灵敏度高，并且达到同样检测信号效果比传统模式的试剂用量更少，因此检测成本更低。

本发明的试剂盒，当被检测物为抗原时，第一组分为荧光微球标记的第一抗体，第二组分为生物素标记的第二抗体，捕获位置的捕获工具为亲和素或链霉亲和素。将待测抗原与第一组份和第二组分混合，即待测抗原在溶液中与荧光微球标记的第一抗体、生物素标记的第二抗体充分反应，形成夹心复合物，该夹心复合物通过层析作用通过捕获位置(T线)时，夹心复合物上的生物素与捕获位置的亲和素或链霉亲和素结合。由于抗原与抗体在液相中反应，比传统模式灵敏度高至少2倍；同时，由于生物素和亲和素结合稳定，专一性强，亲和常数比抗原抗体间的亲和力至少高1万倍，由于每个亲和素能结合4个分子的生物素，可起到多层次信号放大的作用，因此灵敏度高，并且达到同样检测信号效果比传统模式的试剂用量更少，因此检测成本更低。

本发明的试剂盒，当被检测物为抗体时，第一组分为荧光微球标记的第一抗原，第二组分为生物素标记的第二抗原，捕获位置的捕获工具为亲和素或链霉亲和素。将待测抗体与第一组份和第二组分混合，即待测抗体在溶液中与荧光微球标记的第一抗原、生物素标记的第二抗原充分反应，形成夹心复合物，该夹心复合物通过层析作用通过捕获位置(T线)时，夹心复合物上的生物素与捕获位置的亲和素或链霉亲和素结合。由于抗原与抗体在液相中反应，比传统模式灵敏度高至少2倍；同时，由于生物素和亲和素结合稳定，专一性强，亲和常数比抗原抗体间的亲和力至少高1万倍，由于每个亲和素能结合4个分子的生物素，可起到多层次信号放大的作用，因此灵敏度高，并且达到同样检测信号效果比传统模式的试剂用量更少，因此检测成本更低。

附图说明

图1为本发明的测定装置的一种结构示意图；

图2为本发明的测定装置的另一种结构示意图；

图3为本发明的测定装置的另一种结构示意图；

图4为本发明不同浓度的捕获工具(T线)的试剂盒的标准曲线；

图5为本发明不同浓度的指示线(C线)的试剂盒的标准曲线；

图6为本发明不同体积的捕获工具的试剂盒的标准曲线；

图7为本发明不同干燥时间的试剂盒的标准曲线；

图8为对比实验的试剂盒的标准曲线。

具体实施方式

将仅仅举例的方式阐述本发明，并对附图进行参考。

图1为本发明测定装置结构示意图。本发明的用于检测样品中的分析物的测定装置(1)，所述装置包含：其上可放置样品的放置区(110)；基质(120)，其与所述放置区(110)连接，使得样品加入所述放置区(110)时可沿所述基质(120)迁移；在所述基质(120)上的捕获位置(130)，捕获位置(130)远离放置区(110)，样品可跨越所述捕获位置(130)迁移；存在于捕获位置(130)的捕获工具(140)，所述捕获工具(140)为亲和素或链霉亲和素。液体样品可以图1中箭头所示方向纵向流动。本发明的测定装置(1)可任选包含“指示线”(191)，其指示所述测定装置是否正确运行。

本文所用术语“放置区”是指其上可放置样品的测定装置(1)的区域。优选所述放置区(110)为吸收垫。所述放置区(110)与基质(120)可操作连接。所述放置区(110)可与基质(120)邻接或连续。所述放置区(110)可以是基质(120)的必备区域。优选所述放置区(110)在基质(120)的一端。

图2为本发明的测定装置的另一种结构示意图。本发明的用于检测样品中的分析物的测定装置(2)，所述装置包含：其上可放置样品的放置区(210)；基质(220)，其与所述放置区(210)连接，使得样品加入所述放置区(210)时可沿所述基质(220)迁移；在所述基质(220)上的捕获位置(230)，捕获位置(230)远离放置区(210)，样品可跨越所述捕获位置(230)迁移；存在于捕获位置(230)的捕获工具(240)，所述捕获工具(240)为亲和素或链霉亲和素；指示所述测定装置是否正确运行的指示线(291)；底板(260)。为了使样品流动的动力更大，增加了额外的吸水垫(250)。液体样品可以图2中箭头所示方向纵向流动。

本文所用术语“放置区”是指其上可放置样品的测定装置(2)的区域。优选所述放置区(210)为吸收垫。所述放置区(210)与基质(220)可操作连接。所述放置区(210)可与基质(220)邻接或连续。所述放置区(210)可以是基质(220)的必备区域。优选所述放置区(210)在基质(220)的一端。

图3为本发明的测定装置的另一种结构示意图。本发明的用于检测样品中的分析物的测定装置(3)，所述装置包含：其上可放置样品的放置区(310)；基质(320)，其与所述放置区(310)连接，使得样品加入所述放置区(310)时可沿所述基质(320)迁移；在所述基质(320)上的捕获位置(330)，捕获位置(330)远离放置区(310)，样品可跨越所述捕获位置(330)迁移；存在于捕获位置(330)的捕获工具(340)，所述捕获工具(340)为亲和素或链霉亲和素；指示所述测定装置是否正确运行的指示线(391)；底板(360)；为了使样品流动的动力更大，增加了额外的吸水垫(350)；所述装置还包含封盖(370)，以及由该封盖形成的加样孔(390)、观察窗(380)。液体样品可以图3中箭头所示方向纵向流动。

本文所用术语“放置区”是指其上可放置样品的测定装置(3)的区域。优选所述放置区(310)为吸收垫。所述放置区(310)与基质(320)可操作连接。所述放置区(310)可与基质(320)邻接或连续。所述放置区(310)可以是基质(320)的必备区域。优选所述放置区(310)在基质(320)的一端。

在本说明书的情况下，“可操作连接”意指在操作装置期间与之连接、固定在一起或与之接触。

优选所述基质为吸收材料或者包含吸收材料。更优选所述基质为硝酸纤维素或包含硝酸纤维素或醋酸纤维素或包含醋酸纤维素。例如所述基质可以是或者可包含MDI 90 CNPH、MDISS1212μ或SS1215μ型硝酸纤维素。

在本说明书的情况下，PB即Phosphate Buffer缩写，中文名称为磷酸盐缓冲液；mmoL，意思是毫摩尔；EDC，中文名称为碳二亚胺；DMSO，中文名称为二甲基亚砜；Biotin-X-X-NHS，中文名称为生物素酯；cTnI，即心肌肌钙蛋白I；PBS，中文名称为磷酸盐缓冲液；Tris，即三羟甲基氨基甲烷。

实施例1：测定装置的制备

(1)捕获位置的捕获工具(T线)溶液配制

用10mmoL PB(含有甲醇，且甲醇的体积分数为总PB溶液体积的3％)溶液将链霉亲和素稀释成2mg/mL。

(2)指示线(C线)溶液配制

用10mmoL PB(含有甲醇，且甲醇的体积分数为总PB溶液体积的3％)溶液将羊抗鼠IgG多克隆抗体稀释到1.5mg/mL。

(3)包被

将捕获工具溶液包被在硝酸纤维素膜的捕获位置(130)，将指示线溶液包被在硝酸纤维素膜的指示线(191)，捕获位置(130)包被的捕获工具体积为1μl/cm。

(4)烘干

将步骤(3)中制备完成的硝酸纤维素膜在恒温烘箱或者烘房中37摄氏度烘24小时。

(5)大卡粘贴

在底板上粘贴步骤(4)中烘干完成的硝酸纤维素膜、样品放置区、吸水垫。

(6)切条及装卡

将烘干的大卡切割成3～5mm宽度的纸条，装到塑料壳中，即制备出本发明的测定装置。与相应的试剂配合即可检测相应的抗原。

实施例2：肌钙蛋白I试剂盒的制备

第一组分：稀土铕荧光微球标记第一蛋白

取1毫克、粒径为200nm的稀土铕荧光微球，加入EDC至稀土铕荧光微球的终浓度为0.1mgEDC/mg荧光微球,室温25度下反应30分钟，离心去除游离的EDC，再加入第一肌钙蛋白I单克隆抗体，再离心，去除游离的抗体，用封闭液封闭未结合的位点，得到第一组分。

第二组分：生物素标记第二蛋白

用PBS将第二肌钙蛋白I单克隆抗体配制成1mg抗体/mLPBS的溶液A，用DMSO将Biotin-X-X-NHS配制成10mmolBiotin-X-X-NHS/mLDMSO的溶液B。取1mL溶液A与13.3μL溶液B混合均匀，室温25度反应30分钟，加入Tris终止反应，形成溶液C。将溶液C用PBS透析8-12小时后，加入等体积甘油，得到第二组分。

抗体可通过标准技术生产，例如通过使用作为混合物、纯化样品或其片段的目的酶的免疫法或者通过利用噬菌体展示文库来生产。

对于本发明的目的，除非规定意义相反，否则术语“抗体”包括限不限于多克隆抗体、单克隆抗体、嵌合抗体、单链抗体、Fab片段、通过Fab表达文库产生的片段及其模拟物。

如果需要多克隆抗体，则用待测分析物(或包含其免疫学表位的多肽片段)免疫所选动物(例如小鼠、兔、山羊、马、鸡等)。根据宿主物种，可使用不同的辅剂增加免疫反应。

如果含有针对待通过本发明测定装置检测的分析物和/或该分析物的氨基酸序列(或者包含其免疫学表位的序列)的多克隆抗体的血清含有针对其他抗原的抗体，则所述多克隆抗体可通过免疫亲和层析来纯化。用于生产和加工多克隆抗血清的技术为本领域所熟知。

实施例3：肌钙蛋白I样品处理液配制

将肌钙蛋白I试剂盒的第一组分和第二组分混合，形成测试肌钙蛋白I样品的处理液。

实施例4：肌钙蛋白I检测试剂标准曲线绘制

将1体积的肌钙蛋白I校准品(肌钙蛋白I校准品的浓度分别为0ng/mL、0.0625ng/mL、0.125ng/mL、0.25ng/mL、0.5ng/mL、1ng/mL、2ng/mL、4ng/mL、8ng/mL、16ng/mL、32ng/mL、64ng/mL、128ng/mL，每个浓度进行3次实验)分别与4体积的肌钙蛋白I样品处理液混合反应1min，将混合液加入到测定装置的样品放置区，15分钟后用荧光检测仪器测定(荧光检测仪器的参数设置为：激发波长360nm，检测波长为610nm)，以浓度为横坐标、信号为纵坐标绘制标准曲线。

肌钙蛋白I标准参考物购自美国国家标准与技术研究院(National Institute of Standards and Technology)。

实施例5：使用肌钙蛋白I试剂盒检测样本

将80μL血液样本加入到320μL实施例3的肌钙蛋白I样品处理液中，充分混合反应1分钟。取90μL混合液滴加在测定装置的样品放置区，15min后用荧光检测仪检测(荧光检测仪器的参数设置为：激发波长360nm，检测波长为610nm)，即能得出样本中肌钙蛋白I浓度。

实施例6：不同浓度的捕获工具(T线)的信号值

将实施例1中捕获工具(T线)溶液的浓度改变(即将链霉亲和素浓度改变为1mg/mL、1.5mg/mL)，其余条件不变(即其余条件均按照实施例1-5的参数进行)，进行信号值测试，结果见表1。

表1不同浓度的捕获工具的信号值

将表1中的数据绘制成标准曲线，见图4。

由此可见，改变捕获工具(T线)溶液的浓度对测试结果影响不大。

实施例7：不同浓度的指示线(C线)溶液的信号值

将实施例1中指示线(C线)溶液的浓度改变(即将羊抗鼠IgG多克隆抗体由1.5mg/mL改变为1mg/mL、2mg/mL)，其余条件不变(即其余条件均按照实施例1-5的参数进行)，进行信号值测试，结果见表2。

表2不同浓度的指示线(C线)的信号值

将表2中的数据绘制成标准曲线，见图5。

由此可见，改变指示线(C线)溶液的浓度对测试结果影响不大。

实施例8：不同体积的捕获工具(T线)的信号值

将实施例1中包被的捕获工具体积改变(即改变T线粗细，即将包被的捕获工具体积改变为0.5μl/cm、2μl/cm)，其余条件不变(即其余条件均按照实施例1-5的参数进行)，进行信号值测试，结果见表3。

表3不同体积的捕获工具的信号值

将表3中的数据绘制成标准曲线，见图6。

由此可见，包被的捕获工具体积对测试结果影响不大，但体积为1μl/cm以上时效果更好。

实施例9：不同干燥时间的信号值

将实施例1中硝酸纤维素膜在恒温烘箱或者烘房中的烘干时间改变(即将干燥时间改变为6小时、12小时、18小时)，其余条件不变(即其余条件均按照实施例1-5的参数进行)，进行信号值测试，结果见表4。

表4不同干燥时间的信号值

将表4中的数据绘制成标准曲线，见图7。

由此可见，不同干燥时间对测试结果基本无影响。

实施例10：不同粒径的荧光微球的信号值

将实施例2中稀土铕荧光微球的粒径改变(即将荧光微球的粒径改变为100nm)，其余条件不变(即其余条件均按照实施例1、3-5的参数进行)，进行信号值测试，结果见表5。

表5不同粒径的荧光微球的信号值

由此可见，不同粒径的荧光微球均能满足测试要求。

实施例11：肌钙蛋白I多克隆抗体试剂盒

将实施例2中第一肌钙蛋白I单克隆抗体改变为第一肌钙蛋白I多克隆抗体、第二肌钙蛋白I单克隆抗体改变为第二肌钙蛋白I多克隆抗体，其余条件不变(即其余条件均按照实施例1、3-5的参数进行)，进行信号值测试，结果与表1中链霉亲和素浓度T＝2mg/mL时的测试结果接近。

实施例12：降钙素原试剂盒的制备

第一组分：稀土铕荧光微球标记第一蛋白

取1毫克、粒径为200nm的稀土铕荧光微球，加入EDC至稀土铕荧光微球的终浓度为0.1mgEDC/mg荧光微球,室温25度下反应30分钟，离心去除游离的EDC，再加入第一降钙素原单克隆抗体，再离心，去除游离的抗体，用封闭液封闭未结合的位点，得到第一组分。

第二组分：生物素标记第二蛋白

用PBS将第二降钙素原单克隆抗体配制成1mg抗体/mLPBS的溶液A，用DMSO将Biotin-X-X-NHS配制成10mmolBiotin-X-X-NHS/mLDMSO的溶液B。取1mL溶液A与13.3μL溶液B混合均匀，室温25度反应30分钟，加入Tris终止反应，形成溶液C。将溶液C用PBS透析8-12小时后，加入等体积甘油，得到第二组分。

抗体可通过标准技术生产，例如通过使用作为混合物、纯化样品或其片段的目的酶的免疫法或者通过利用噬菌体展示文库来生产。

对于本发明的目的，除非规定意义相反，否则术语“抗体”包括限不限于多克隆抗体、单克隆抗体、嵌合抗体、单链抗体、Fab片段、通过Fab表达文库产生的片段及其模拟物。

如果需要多克隆抗体，则用待测分析物(或包含其免疫学表位的多肽片段)免疫所选动物(例如小鼠、兔、山羊、马、鸡等)。根据宿主物种，可使用不同的辅剂增加免疫反应。

如果含有针对待通过本发明测定装置检测的分析物和/或该分析物的氨基酸序列(或者包含其免疫学表位的序列)的多克隆抗体的血清含有针对其他抗原的抗体，则所述多克隆抗体可通过免疫亲和层析来纯化。用于生产和加工多克隆抗血清的技术为本领域所熟知。

实施例13：降钙素原样品处理液配制

将降钙素原试剂盒的第一组分和第二组分混合，形成测试降钙素原样品的处理液。

实施例14：钙素素原检测试剂标准曲线绘制

将1体积的降钙素原校准品(降钙素原校准品的浓度分别为0ng/mL、0.1ng/mL、0.2ng/mL、0.5ng/mL、1ng/mL、2ng/mL、5ng/mL、10ng/mL、50ng/mL、100ng/mL，每个浓度进行3次实验)分别与4体积的降钙素原样品处理液混合反应1min，将混合液加入到测定装置的样品放置区，15分钟后用荧光检测仪器测定(荧光检测仪器的参数设置为：激发波长360nm，检测波长为610nm)，以浓度为横坐标、信号为纵坐标绘制标准曲线。

实施例15：使用降钙素原试剂盒检测样本

将80μL血液样本加入到320μL实施例3的降钙素原样品处理液中，充分混合反应1分钟。取90μL混合液滴加在测定装置的样品放置区，15min后用荧光检测仪检测(荧光检测仪器的参数设置为：激发波长360nm，检测波长为610nm)，即能得出样本中降钙素原浓度。

实施例16：降钙素原I多克隆抗体试剂盒

将实施例2中第一降钙素原I单克隆抗体改变为第一降钙素原I多克隆抗体、第二降钙素原I单克隆抗体改变为第二降钙素原I多克隆抗体，其余条件不变(即其余条件均按照实施例1、3-5的参数进行)，进行信号值测试，结果与降钙素原I单克隆抗体试剂盒测试结果接近。

实施例17：测定装置、试剂盒及方法性能测试

(1)肌钙蛋白I性能测试

以实施例1-2的测定装置、试剂盒及方法性能测试进行性能测试，以0.1ng/ml、0.25ng/ml、16ng/ml、32ng/ml抗原作为样本测定精密度，平行测定10次，测试结果见表2。

表6肌钙蛋白I测定装置、试剂盒批内差

肌钙蛋白I浓度(ng/mL)	肌钙蛋白I检测试剂批内差
		0.1	12％
0.25	10％
		16	8％
32	10％

本发明的测定装置、试剂盒检测肌钙蛋白I范围为0～32ng/mL，灵敏度在0.1ng/mL以下，市场上同类快速诊断产品功能灵敏度(批内差小于20％)只能达到0.2ng/mL。

(2)降钙素原性能测试

将实施例11-12的测定装置、试剂盒进行性能测试，以0.5ng/mL和50ng/mL抗原作为样本测定精密度，平行测定10次，测试结果见表7。

表7降钙素原测定装置、试剂盒批内差

降钙素原抗原浓度(ng/mL)

降钙素原检测试剂批内差

0.5	7％
		50	6％

本发明的测定装置、试剂盒检测降钙素原范围为0.5～50ng/mL，批内精密度小于10％。

实施例18：对比实验

将实施例1-2制备的测定装置、试剂盒与对比文件CN102192983A公开的传统方法制备的试剂盒进行对比，对比试验(传统方法(CN102192983A))微球区采用与实施例2第一组分相同的浓度，捕获线上包被第二肌钙蛋白I单克隆抗体，包被浓度为2mg/ml,包被体积为1μl/cm，检测肌钙蛋白I，测试结果见表8。

表8对比实验标准曲线

将表8中的数据绘制成标准曲线，见图8。

由此可见，本发明可检测的灵敏度为0.0625ng/mL，而用对比文件方法可检测的灵敏度为0.5ng/mL，本发明的测定装置、试剂盒以及配合该试剂盒测试的方法比传统方法的检测灵敏度提高了8倍。

在本说明书中所谈到的“一个实施例”、“另一个实施例”、“实施例”、等，指的是结合该实施例描述的具体特征、结构或者特点包括在本申请概括性描述的至少一个实施例中。在说明书中多个地方出现同种表述不是一定指的是同一个实施例。进一步来说，结合任一实施例描述一个具体特征、结构或者特点时，所要主张的是结合其他实施例来实现这种特征、结构或者特点也落在本发明的范围内。

尽管这里参照本发明的多个解释性实施例对本发明进行了描述，但是，应该理解，本领域技术人员可以设计出很多其他的修改和实施方式，这些修改和实施方式将落在本申请公开的原则范围和精神之内。

Claims (31)

1.一种用于检测样品中的分析物的测定装置，所述装置包含：

其上可放置样品的放置区；

基质，其与所述放置区连接，使得样品加入所述放置区时可沿所述基质迁移；

在所述基质上的捕获位置，捕获位置远离放置区，样品可跨越所述捕获位置迁移；

存在于捕获位置的捕获工具，所述捕获工具为亲和素或链霉亲和素。

2.根据权利要求1的测定装置，所述放置区为吸收垫。

3.根据权利要求1或2的测定装置，所述放置区在所述基质的一端。

4.根据权利要求1-3中任一项的测定装置，所述基质为吸收性材料。

5.根据权利要求1-4中任一项的测定装置，所述基质为硝酸纤维素或包含硝酸纤维素或醋酸纤维素或包含醋酸纤维素。

6.根据权利要求1-5中任一项的测定装置，所述样品来源于人或动物的体液。

7.根据权利要求1-6中任一项的测定装置，所述迁移为纵向的。

8.根据权利要求1-7中任一项的测定装置，所述捕获位置和第二捕获位置均垂直于样品的迁移流。

9.根据权利要求1-8中任一项的测定装置，所述装置为条或棒。

10.根据权利要求1-9中任一项的测定装置，所述装置包含封盖。

11.根据权利要求1-10中任一项的测定装置，所述测定装置还包括指示线，所述指示线用于指示所述测定装置是否正确运行。

12.根据权利要求11中任一项的测定装置，所述指示线上存在有第三抗体。

13.一种用于半定量地或定量地评估人或动物的体液中的降钙素原或肌钙蛋白水平的测定装置。

14.一种试剂盒，所述试剂盒包含权利要求1-13中任一项的测定装置。

15.根据权利要求14的试剂盒，所述试剂盒还包含第一组分和第二组分，所述第一组分为荧光微球标记的第一抗体或荧光微球标记的第一抗原；

所述第二组分为生物素标记的第二抗体或生物素标记的第二抗原。

16.根据权利要求15的试剂盒，所述第一抗体为多克隆或单克隆抗体。

17.根据权利要求16或16的试剂盒，所述第二抗体为多克隆或单克隆抗体。

18.根据权利要求15-17中任一项的试剂盒，所述荧光微球为稀土铕螯合物的聚苯乙烯微球或量子点的聚苯乙烯微球。

19.根据权利要求15-18中任一项的试剂盒，所述荧光微球的粒径为80nm-400nm。

20.根据权利要求15-19中任一项的试剂盒，所述荧光微球的粒径为100nm-200nm。

21.根据权利要求15-20中任一项的试剂盒，所述荧光微球的激发波长为260nm-380nm。

22.根据权利要求15-21中任一项的试剂盒，所述荧光微球的发射波长为600nm-650nm。

23.根据权利要求15-22中任一项的试剂盒，所述第一组分为荧光微球标记的第一抗体；所述第二组分为生物素标记的第二抗体。

24.一种用于半定量地或定量地评估人或动物的体液中的降钙素原或肌钙蛋白水平的试剂盒。

25.一种确定样品中的分析物存在情况的方法，所述方法包括以下步骤：

a)将样品与第一组分和第二组分混合在一起，形成第一混合物；

b)将第一混合物滴加在样品放置区，所述第一混合物沿所述基质迁移并跨越所述捕获位置，所述第一混合物被捕获工具捕获；

c)检测步骤b)中捕获位置的信号，所述信号与所述样品中分析物的存在情况和/或量相关。

26.根据权利要求25的方法，所述样品为权利要求1-22的任一项中所定义的样品。

27.根据权利要求25或26的方法，所述第一组分为权利要求1-22的任一项中所定义的第一组分。

28.根据权利要求25-27中任一项的方法，所述捕获工具为权利要求1-22的任一项中所定义的捕获工具。

29.根据权利要求25-28中任一项的方法，所述步骤b)中检测捕获位置的信号的方法是时间分辨法。

30.根据权利要求25-29中任一项的方法，所述步骤b)中检测捕获位置的信号的工具是荧光检测仪。

31.根据权利要求25-30中任一项的方法，所述待测的分析物为降钙素原或肌钙蛋白。