CN105918308A - 一种用于移植供肺灌流的肺灌流液及其制备方法 - Google Patents
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Abstract
本发明提供了一种用于移植供肺灌流的肺灌流液及其制备方法，可以提供良好的肺保护和复苏作用，能够满足移植供肺的灌流和保存需要；同时灌流时间较长，在经本发明的肺灌流液6小时灌流后的供肺仍然能够保有良好的肺顺应性和氧合能力；最后，本发明的制备方法简单，原材料容易获得且经济实惠，适合在一般的实验室或医院推广应用。
Description
技术领域
本发明涉及医学生物技术领域，尤其涉及一种用于移植供肺灌流的肺灌流液及其制备方法。
背景技术
肺移植(Lung Transplantation,LTx)已经成为药物或外科手术无法治疗的终末期肺疾病的标准治疗方式。目前符合标准的供体肺数目已经无法满足移植需求，造成部分患者在等待供肺的过程中死亡。目前可改善供肺短缺现状的方法中，离体肺灌注(Ex Vivo Lung Perfusion,EVLP)是应用于肺移植领域一种延长供肺保存时间和修复供肺损伤的技术。EVLP可以即时评估供体肺功能，为药物甚至基因治疗提供平台，改善“边缘供肺”(Marginal Donor Lungs)功能，增加了符合移植条件移植肺的数量，在一定程度上缓解了供肺缺乏的现状。Steen等用基于perfadex液的灌流液应用于改善“边缘供肺”功能，3例“边缘供肺”通过EVLP灌注(61～121min)后成功移植。由于国外优质的灌流液配方保密，国内的肺灌流液的配方及配置工艺并不能满足移植供肺灌流的需要，肺保护和复苏作用不强，灌流时间短是通常存在的问题。
发明内容
本发明为解决现有技术中的上述问题提出的一种配制简单，同时肺保护和复苏作用，且灌流时间长的用于移植供肺灌流的肺灌流液及其制备方法。
为了实现上述技术目的，本发明所采取的技术措施为：
一种用于移植供肺灌流的肺灌流液，由纯化水、右旋糖苷20、氯化钠、氯化钾、硫酸镁、无水磷酸氢二钠、磷酸二氢钾、葡萄糖、氯化钙、白蛋白、硝酸甘油、甲强龙、肝素钠、头孢唑啉钠及缓冲剂配置而成。
为了进一步优化上述技术方案，本发明所采取的技术措施还包括：
优选地，本发明的肺灌流液在配制中，以1L纯化水作为溶剂计，内含有40-60g右旋糖苷20、6-10g氯化钠、0.2-0.6g氯化钾、0.09-0.1g硫酸镁、0.04-0.05g无水磷酸氢二钠、0.06-0.07g磷酸二氢钾、0.8-0.9g葡萄糖、0.05-0.07g氯化钙、30-60g白蛋白、1-4mg硝酸甘油、200-300mg甲强龙、4000-6000u肝素钠及0.4-0.6g头孢唑啉钠，并使用Tris-HCl缓冲剂调节pH至7.4-7.6。。
更加优选地，上述肺灌流液的配制中，以1L纯化水作为溶剂计，内含有50g右旋糖苷20、8g氯化钠、0.4g氯化钾、0.098g硫酸镁、0.046g无水磷酸氢二钠、0.063g磷酸二氢钾、0.9g葡萄糖、0.06g氯化钙、50g白蛋白、2mg硝酸甘油、250mg甲强龙、5000u肝素钠及0.5g头孢唑啉钠，使用Tris-HCl缓冲剂调节pH至7.5。
另一方面，本发明还提供一种如权利要求1所述的用于移植供肺灌流的肺灌流液的制备方法，包括以下步骤：
步骤1，基本液的配制
取右旋糖酐加热溶于纯化水中，依次加入氯化钠、氯化钾、硫酸镁、无水磷酸氢二钠、磷酸二氢钾和葡萄糖，使用Tris-HCl缓冲剂调pH至7.4-7.6，使用细菌滤器过滤，补入纯化水定容，得到基本液；
步骤2，预灌流液的配制
向步骤1中得到的基本液中依次加入氯化钙、白蛋白及硝酸甘油，使用Tris-HCl缓冲剂调pH至7.4-7.6，使用细菌滤器过滤，得到预灌流液；
步骤3，制备肺灌流液
向步骤2中得到的预灌流液加入甲强龙、肝素钠及头孢唑啉钠得到用于移植供肺灌流的肺灌流液。
上述的制备方法中，步骤1中基本液的配制优选为：为取50g右旋糖酐20加热溶于纯化水中，依次加入8g氯化钠、0.4g氯化钾、0.098g硫酸镁、0.046g无水磷酸氢二钠、0.063g磷酸二氢钾和0.9g葡萄糖，使用Tris-HCl缓冲剂调pH至7.4-7.6，使用细菌滤器过滤，补入纯化水定容至1000ml，得到基本液。
上述的制备方法中，步骤2中步骤2中预灌流液的配制为向所述步骤1中得到的基本液中依次加入0.06g氯化钙、50g白蛋白及2mg硝酸甘油，使用Tris-HCl缓冲剂调pH至7.4-7.6，使用细菌滤器过滤，得到预灌流液。
上述的制备方法中，步骤3中制备肺灌流液为向所述步骤2中得到的预灌流液加入250mg甲强龙、5000u肝素钠及0.5g头孢唑啉钠得到用于移植供肺灌流的肺灌流液。
进一步地，上述细菌滤器的孔径优选为0.22um。
本发明采用上述技术方案，与现有技术相比，具有如下技术效果：
本发明提供的用于移植供肺灌流的肺灌流液，首先可以提供良好的肺保护和复苏作用，能够满足移植供肺的灌流和保存需要；其次灌流时间较长，在经本发明的肺灌流液6小时灌流后的供肺仍然能够保有良好的肺顺应性和氧合能力；最后，本发明的制备方法简单，原材料容易获得且经济实惠，适合在一般的实验室或医院推广应用。
具体实施方式
本发明提供了一种用于移植供肺灌流的肺灌流液，由纯化水、右旋糖苷、氯化钠、氯化钾、硫酸镁、无水磷酸氢二钠、磷酸二氢钾、葡萄糖、氯化钙、白蛋白、硝酸甘油、甲强龙、肝素钠、头孢唑啉钠及缓冲剂配置而成。
下面通过具体实施例对本发明进行详细和具体的介绍，以使更好的理解本发明，但是下述实施例并不限制本发明范围。
具体实施例包括制备实施例和验证实施例，采用的实验仪器和试剂如下所示：
纯水机(Millipore,德国)；电子分析天平(Sartorius，德国)；体外循环机(JostraH20，Maquet，德国)；麻醉机(Detax Ohmeda，美国)；呼吸机(Detax Ohmeda，Generalelectric，美国)真空泵(SHZ-D(Ⅲ)型，上海)；一次性无菌过滤器(MF75，美国nalgene)。
右旋糖苷-20、氯化钠、氯化钾、硫酸镁、磷酸氢二钠(无水)、磷酸二氢钾、葡萄糖，(购自上海凌峰化学试剂有限公司)。
Tris-HCl缓冲剂(购自sigma公司)，牛血清白蛋白(Albumin from bovineserum，BSA，sigma)。
硝酸甘油注射液(北京益民药业有限公司)，甲泼尼龙琥珀酸钠(辉瑞制药)，肝素钠注射液(上海第一生化药业有限公司)，注射用头孢唑啉钠(珠海联邦制药股份有限公司)。
实施例一 肺灌流液的制备
采用下述步骤制备用于移植供肺灌流的肺灌流液
步骤1，基本液的配制
取50g右旋糖酐加热溶于纯化水中，依次加入8g氯化钠、0.4g氯化钾、0.098g硫酸镁、0.046g无水磷酸氢二钠、0.063g磷酸二氢钾和0.9g葡萄糖，使用Tris-HCl缓冲剂调pH至7.5，使用孔径为0.22um的细菌滤器过滤，补入纯化水定容至1000ml，得到基本液；
步骤2，预灌流液的配制
向步骤1中得到的基本液中依次加入0.06g氯化钙、50g白蛋白及2mg硝酸甘油，使用Tris-HCl缓冲剂调pH至7.4-7.6，使用孔径为0.22um的细菌滤器过滤，得到预灌流液；
步骤3，制备肺灌流液
向步骤2中得到的预灌流液加入250mg甲强龙、5000u肝素钠及0.5g头孢唑啉钠得到用于移植供肺灌流的肺灌流液。
实施例二 本发明的肺灌流液的猪肺灌流实验
获取猪的供肺，气管插管并连接到呼吸机。肺动脉和左心耳直接插管并连接到灌注回路。两根灌注管先放平，倒出里面的液体，然后看测压管是否充满液体，可以流入粗的灌注管内，此时打开三接头管与大气相同，调零后再开始加入灌流液，开始灌注，灌注使用实施例一制备得到的肺灌流液。
刚开始循环温度为12-13℃，当灌注液的温度达到32℃，进行呼吸机通气，氧浓度为0.21％，以7ml潮气量/公斤开始，7次呼吸/分钟和5cmH2O PEEP频率，肺的灌注液的脱氧将用氮气(86％)，二氧化碳(8％)，和氧的气体混合物中开始(6％)。I:E(吸/呼比)＝1:2。每小时做一次血气和一次肺通气，间隔30分钟。做血气前5分钟：即55分时把呼吸机设置为潮气量TV 7→10ml/kg，PEEP 5，RR(呼吸频率)7→10，氧浓度从21％升逐渐到100％。做完血气后把氧浓度调回21％。测定肺动脉氧分压、左房氧分压、计算肺动静脉氧分压差，测定肺动脉压和左房压，计算肺循环阻力。
本实施例中，利用本发明的肺灌流液灌流猪离体供肺，使用3个不同的猪离体供肺共进行了3次重复试验，均采用如实施例一制备的肺灌流液，均同时进行肺循环阻力和肺动静脉的氧分压差测定，结果如下表所示：
表1 三次灌流实验中肺循环阻力和肺动静脉的氧分压差测定
由上表可以看出，使用本发明的肺灌流液进行灌流，不但灌流时间可以维持较长，同时肺循环阻力和肺动静脉氧分压差均能达到预期效果。
本发明提供的用于移植供肺灌流的肺灌流液，首先可以提供良好的肺保护和复苏作用，能够满足移植供肺的灌流和保存需要；其次灌流时间较长，在经本发明的肺灌流液6小时灌流后的供肺仍然能够保有良好的肺顺应性和氧合能力；最后，本发明的制备方法简单，原材料容易获得且经济实惠，适合在一般的实验室或医院推广应用。
以上对本发明的具体实施例进行了详细描述，但其只是作为范例，本发明并不限制于以上描述的具体实施例。对于本领域技术人员而言，任何对本发明进行的等同修改和替代也都在本发明的范畴之中。因此，在不脱离本发明的精神和范围下所作的均等变换和修改，都应涵盖在本发明的范围内。
Claims (8)
1.一种用于移植供肺灌流的肺灌流液，其特征在于，所述肺灌流液由纯化水、右旋糖苷20、氯化钠、氯化钾、硫酸镁、无水磷酸氢二钠、磷酸二氢钾、葡萄糖、氯化钙、白蛋白、硝酸甘油、甲强龙、肝素钠、头孢唑啉钠及缓冲剂配置而成。
2.根据权利要求1所述的一种用于移植供肺灌流的肺灌流液，其特征在于，所述肺灌流液的配制中，以1L纯化水作为溶剂计，内含有40-60g右旋糖苷20、6-10g氯化钠、0.2-0.6g氯化钾、0.09-0.1g硫酸镁、0.04-0.05g无水磷酸氢二钠、0.06-0.07g磷酸二氢钾、0.8-0.9g葡萄糖、0.05-0.07g氯化钙、30-60g白蛋白、1-4mg硝酸甘油、200-300mg甲强龙、4000-6000u肝素钠及0.4-0.6g头孢唑啉钠，并使用Tris-HCl缓冲剂调节pH至7.4-7.6。
3.根据权利要求1所述的一种用于移植供肺灌流的肺灌流液，其特征在于，所述肺灌流液的配制中，以1L纯化水作为溶剂计，内含有50g右旋糖苷20、8g氯化钠、0.4g氯化钾、0.098g硫酸镁、0.046g无水磷酸氢二钠、0.063g磷酸二氢钾、0.9g葡萄糖、0.06g氯化钙、50g白蛋白、2mg硝酸甘油、250mg甲强龙、5000u肝素钠及0.5g头孢唑啉钠，使用Tris-HCl缓冲剂调节pH至7.5。
4.如权利要求1所述的用于移植供肺灌流的肺灌流液的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：
步骤1，基本液的配制
取右旋糖酐加热溶于纯化水中，依次加入氯化钠、氯化钾、硫酸镁、无水磷酸氢二钠、磷酸二氢钾和葡萄糖，使用Tris-HCl缓冲剂调pH至7.4-7.6，使用细菌滤器过滤，补入纯化水定容，得到基本液；
步骤2，预灌流液的配制
向步骤1中得到的基本液中依次加入氯化钙、白蛋白及硝酸甘油，使用Tris-HCl缓冲剂调pH至7.4-7.6，使用细菌滤器过滤，得到预灌流液；
步骤3，制备肺灌流液
向步骤2中得到的预灌流液加入甲强龙、肝素钠及头孢唑啉钠得到用于移植供肺灌流的肺灌流液。
5.根据权利要求4所述的制备方法，其特征在于，所述步骤1中基本液的配制为取50g右旋糖酐20加热溶于纯化水中，依次加入8g氯化钠、0.4g氯化钾、0.098g硫酸镁、0.046g无水磷酸氢二钠、0.063g磷酸二氢钾和0.9g葡萄糖，使用Tris-HCl缓冲剂调pH至7.4-7.6，使用细菌滤器过滤，补入纯化水定容至1000ml，得到基本液。
6.根据权利要求4所述的制备方法，其特征在于，所述步骤2中预灌流液的配制为向所述步骤1中得到的基本液中依次加入0.06g氯化钙、50g白蛋白及2mg硝酸甘油，使用Tris-HCl缓冲剂调pH至7.4-7.6，使用细菌滤器过滤，得到预灌流液。
7.根据权利要求4所述的制备方法，其特征在于，所述步骤3中制备肺灌流液为向所述步骤2中得到的预灌流液加入250mg甲强龙、5000u肝素钠及0.5g头孢唑啉钠得到用于移植供肺灌流的肺灌流液。
8.根据权利要求4所述的制备方法，其特征在于，所述细菌滤器的孔径为0.22um。
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