CN105708874A

CN105708874A - 青黛的经油萃取的产物及其制备方法与用途

Info

Publication number: CN105708874A
Application number: CN201510684501.0A
Authority: CN
Inventors: 林胤谷
Original assignee: Galderma SA
Current assignee: Galderma SA
Priority date: 2011-10-21
Filing date: 2011-10-21
Publication date: 2016-06-29

Abstract

本发明是有关于一种青黛的经油萃取的产物及其制备方法与用途，其揭示了一种青黛的经油萃取的产物暨其制备方法，同时也揭示了该青黛的经油萃取的产物可被用来治疗干癣(特别是皮肤干癣以及指甲干癣)。

Description

青黛的经油萃取的产物及其制备方法与用途

本申请是申请日为2011年10月21日，申请号为201110328749.5，发明名称为“青黛的经油萃取的产物及其制备方法与用途”的申请的分案申请。

技术领域

本发明涉及一种青黛的经油萃取的产物及其制备方法，特别是涉及一种使用该青黛的经油萃取的产物来治疗干癣(特别是皮肤干癣以及指甲干癣)。

背景技术

干癣(psoriasis)[也被称为银屑病(YinXieBing)]是一种与遗传有关联的慢性发炎性皮肤病(chronicinflammatoryskindisease)，它会侵犯全身的皮肤，其中较常见的部位包括：头皮、四肢的外侧、手肘以及膝盖等。干癣患者通常在皮肤上会出现红色(redness)且边界明显的丘疹(papular)或斑块(plaque)，并且皮肤病灶的表面会覆盖有银白色的鳞屑(silvery-whitescale)，而部分患者甚至会同时并发关节炎等病状。

目前临床上，干癣可依照患者的皮肤病状而被区分为下面4种常见的类型：(1)慢性斑块性干癣(chronicplaquepsoriasis)[也被称为寻常性干癣(vulgarispsoriasis)]，它是所有干癣类型当中最为常见者，大约有80％-90％的干癣患者都是属于此种类型；(2)点滴状干癣(guttatepsoriasis)，其特征在于病患的皮肤上会带有多数小的呈粉红色或红色的泪滴状病灶(teardrop-shapedlesions)，通常发生于7岁至10岁的儿童身上，并且大多数的患者在发病前的1至2周内曾遭受到一链球菌感染(streptococcalinfection)；(3)红皮性干癣(erythrodermicpsoriasis)，其特征在于患者的全身或超过90％的体表面积上的皮肤会出现红斑(erythema)或剥落(exfoliation)的现象，而严重者可能会全身搔痒(itching)，并且伴随有发烧(fever)以及不适(malaise)，甚至引起全身性的急性脓疱性干癣(generalizedacutepustularpsoriasis)；以及(4)脓疱性干癣(pustularpsoriasis)，其可分为全身性脓疱性干癣(generalizedpustularpsoriasis)与局部脓疱性干癣(localizedpustularpsoriasis)[例如，掌跖脓疱症(pustulosispalmarisetplantaris)以及稽留性肢端皮肤炎(acrodermatitisperstans)]。

此外，大约有10％的干癣患者会并发干癣性关节炎(psoriaticarthritis)，它是一种会影响患者的韧带(ligaments)、腱(tendons)、筋膜(fascia)以及脊椎或周边关节(spinalorperipheraljoints)的CD8T细胞驱动的自体免疫发炎(CD8Tcell-drivenautoimmuneinflammation)；而有高达90％的干癣患者曾经患有指甲干癣(nailpsoriasis)。

由于干癣的病理状况与症状相当复杂，至今对于它的发病机制(pathogenesis)仍不清楚，已有研究显示：遗传(inheritance)在干癣的发病机制上扮演一个重要的角色，而外伤(trauma)、感染(infection)、压力(stress)、内分泌因素(endocrinefactors)、代谢因素(metabolismfactors)、气候以及药物等都可能诱发或者加重干癣的发病。干癣患者一旦发病，此病将会终其一生反复地发作而无法根除。

现今西方医学大多是依照干癣患者的年龄、性别、职业、智力、病灶的形态与分布情形、对于先前所采用的疗法的反应以及其它相关病史等来采用最适当的治疗方式，而主要的治疗方式包括：

(1)局部性疗法(topicaltherapy)：例如，皮质类固醇(corticosteroids)、蒽三酚(anthralin)(商品名称为)、煤焦油(coaltar)(商品名称为)、促钙三醇(calcitriol)(商品名称为)、他扎罗汀(tazarotene)(商品名称为)以及水杨酸(salicylicacid)等，它们适用于具有轻微病况的干癣患者；

(2)全身性疗法(systemictherapy)：例如，胺甲碟呤(methotrexate，MTX)、环孢素(cyclosporin)以及类视色素(retinoids)等口服制剂(oralpreparations)，它们适用于具有中度至严重病况的干癣患者；

(3)生物制剂(biologics)的注射：例如，阿法赛特(alefacept)(商品名称为)、依法利珠单抗(efalizumab)(商品名称为)、依那西普(etanercept)(商品名称为)以及阿达木单抗(Adalimumab)(商品名称为)，它们也适用于具有中度至严重病况的干癣患者；以及

(4)光疗法(phototherapy)：例如，紫外线B光疗法[ultravioletB(UVB)phototherapy]、光化学疗法(photochemotherapy)[诸如，补骨脂素加紫外线A(psoralenplusultravioletA，PUVA)]等，它们适用于具有严重病况的干癣患者。

然而，长期使用上述的治疗方式可能会导致患者产生严重的副作用(sideeffect)或药物耐受性(drugtolerance)，进而降低顺从性(compliance)。有鉴于此，已有许多研究人员尝试从传统中药(traditionalChinesemedicines，TCM)中来寻找可用于治疗干癣的活性组分(activecomponents)。

青黛[英文名称为：indigonaturalis或naturalindigo；汉语拼音为：qingdai；中文俗名为：靛花(dianhua)、青蛤粉(qinggefen)、青缸花(qingganghua)、蓝露(lanlou)、淀花(dianhua)以及靛沫花(dianmohua)等]是一种从靛蓝-生成植物(indigo-producingplant)[诸如，爵床科植物马蓝(Baphicacanthuscusia(Nees)Bremek.)、蓼科植物蓼蓝(PolygonumtinctoriumLour.)以及十字花科植物菘蓝(lsatisindigoticaFort.)等]的叶子中所萃取出的呈深蓝色的植物色素。青黛在传统中医学的臨床使用上具有清热凉血(clearingtheheatandcoolingtheblood)的功用，而在现代医学的临床使用上则常被用来治疗慢性骨髓白血病(chronicmyeloidleukemia)、干癣、腮腺炎(mumps)、各种溃疡[例如消化性溃疡(pepticulcer)、口腔溃疡(oralulcer)等]、肝炎(hepatitis)、带状疱疹(herpeszoster)以及外耳道炎(otitisexternal)等。

已知从得自于不同的靛蓝-生成植物的青黛中可以分离出各种活性成分，其中较常见的有靛蓝(indigo)、靛玉红(indirubin)以及异靛蓝(isoindigo)等。有研究发现，靛玉红具有抗肿瘤(anti-tumor)、抗发炎(anti-inflammation)以及免疫调节(immunomodulation)等功效，并且被认为具有发展成为一供用于治疗阿兹海默症(Alzheimer’sdisease)的药物的潜力(G.Eisenbrandetal.(2000)，J.CancerRes.Clin.Oncol.，130：627-635；T.Kunikataetal.(2000)，EuropeanJournalofPharmacology，410：93-100；N.K.Maketal.(2004)，BiochemicalPharmacology，67：167-174；S.Leclercetal.(2001)，TheJournalofbiologicalChemistry，276：251-260)。

已有文献报导，青黛的水溶性(watersolubility)较差，因此目前最常使用有机溶剂来萃取青黛，以获得各种活性成分。在Q.S.Zhangetal.(2006)，JGuangxiNormalUniversity：NaturalScienceEdition，24：58-60中，Q.S.Zhang等人主要是分别以75％乙醇、氯仿(chloroform)、乙酸乙酯(ethylacetate)以及丙酮(acetone)来萃取青黛，借此而得到4种不同的有机萃取物，继而比较所述有机萃取物中所含有的靛玉红的含量。经由实验结果显示：当使用乙酸乙酯来进行青黛的萃取时，所得到的靛玉红的含量最高，其次分别是使用丙酮、氯仿以及75％乙醇。

有研究发现，青黛的经有机溶剂萃取的产物(organicsolvent-extractedproductofindigonaturalis)具有显著的抗发炎(anti-inflammation)或抗干癣(anti-psoriasis)的活性。例如，在Y.K.Linetal.(2009)，JournalofDermatologicalScience，54：168-174中，Y.K.Lin等人将青黛粉末以一为1∶10(w/v)的比例溶于二甲亚砜(dimethylsulfoxide，DMSO)中，继而借由过滤来灭菌而得到一青黛的经DMSO萃取的产物。该青黛的经DMSO萃取的产物被证实会减少经培养的正常人类表皮角质细胞(normalhumanepidermalkeratinocyte，NHEK)的细胞数目，并且会促使该NHEK细胞的细胞周期是停滞在G0/G1期(G0/G1phase)。此外，该青黛的经DMSO萃取的产物中所含有的2种主要活性成分(也就是靛蓝以及靛玉红)也被证实能引起角质细胞的细胞周期停滞，而其中仅有靛玉红可以调控增生细胞核抗原(proliferatingcellnuclearantigen，PCNA)以及套膜蛋白(involucrin)的表现。因此，Y.K.Lin等人认为：该青黛的经DMSO萃取的产物主要是以靛玉红作为活性成分来调控角质细胞的增生(proliferation)以及分化(differentiation)，借此达到抗干癣的效用。

虽然青黛的经有机溶剂萃取的产物具有抗干癣的效用，但是在临床使用上需要进一步将有机溶剂去除后才能被制成一可供人类个体使用的药物。因此，申请人尝试利用各种不同的植物油来进行青黛的萃取，而由此所得到的青黛的经油萃取的产物(oil-extractedproductofindigonaturalis)在经由临床试验后被证实可以有效地治疗干癣(特别是皮肤干癣以及指甲干癣)。

由此可见，上述现有的青黛的经油萃取的产物及其制备方法与用途在产品结构、方法与使用上，显然仍存在有不便与缺陷，而亟待加以进一步改进。为了解决上述存在的问题，相关厂商莫不费尽心思来谋求解决之道，但长久以来一直未见适用的设计被发展完成，而一般产品及方法又没有适切的结构及方法能够解决上述问题，此显然是相关业者急欲解决的问题。因此如何能创设一种新的青黛的经油萃取的产物及其制备方法与用途，实属当前重要研发课题之一，亦成为当前业界极需改进的目标。

发明内容

本发明的主要目的在于，克服现有的青黛的经油萃取的产物存在的缺陷，而提供一种新的青黛的经油萃取的产物，所要解决的技术问题是在提供一种青黛的经油萃取的产物，它是借由在加热的条件下以一油来萃取青黛而被制得，非常适于实用。

本发明的另一目的在于，克服现有的青黛的经油萃取的产物的制备方法存在的缺陷，而提供一种新的青黛的经油萃取的产物的制备方法，所要解决的技术问题是在提供一种用于制备一青黛的经油萃取的产物的方法，其包括：在加热的条件下以一油来萃取青黛，从而更加适于实用。

本发明的再一目的在于，克服现有的青黛的经油萃取的产物的制备用途存在的缺陷，而提供一种新的青黛的经油萃取的产物的制备用途，所要解决的技术问题是依据青黛的经油萃取的产物，经由临床试验而被证实对于人类个体的干癣(特别是皮肤干癣与指甲干癣)具有显著的治疗效用。因此，在第三个方面，本发明提供一种用于治疗干癣的药学组合物，其包含有一如上所述的青黛的经油萃取的产物，从而更加适于实用。

本发明的还一目的在于，克服现有的青黛的经油萃取的产物的制备用途存在的缺陷，而提供一种新的青黛的经油萃取的产物的制备用途，所要解决的技术问题是在提供一种用于治疗一具有或被怀疑具有干癣的个体的方法，其包括对该个体投药以一如上所述的青黛的经油萃取的产物，从而更加适于实用，且具有产业上的利用价值。

本发明的目的及解决其技术问题是采用以下技术方案来实现的。依据本发明提出的该青黛的经油萃取的产物是借由在加热的条件下以一油来萃取青黛而被制得。

本发明的目的及解决其技术问题还可采用以下技术措施进一步实现。

前述的青黛的经油萃取的产物，其中所述的该青黛的经油萃取的产物包含有靛玉红作为一活性成分。

前述的青黛的经油萃取的产物，其中所述的该青黛在被加热萃取后可进一步被进行一过滤处理。

前述的青黛的经油萃取的产物，其中所述的该青黛是在一范围落在100℃至155℃内的温度下被加热萃取。

前述的青黛的经油萃取的产物，其中所述的该油是选自于由下列所构成的群组：动物油、植物油、矿物油以及它们的组合。

前述的青黛的经油萃取的产物，其中所述的该油是一植物油并且该植物油是选自于由下列所构成的群组：棉籽油、橄榄油、芝麻油、葵花籽油、花生油、小麦胚芽油、大豆油、荷荷巴油、月见草油、椰子油、麻油、棕榈油、甜杏仁油、芦荟油、杏核桃仁油、酪梨油、琉璃苣油、大麻籽油、夏威夷果仁油、玫瑰果油、胡桃油、榛果油、山茶花油、米糠油、乳油木果油、玉米油、苦茶油、葡萄籽油、芥花油以及蓖麻油。

本发明的目的及解决其技术问题还采用以下技术方案来实现。依据本发明提出的该药学组合物包含有一如权利要求1所述的青黛的经油萃取的产物。

前述的用于治疗干癣的药学组合物，其中所述的该药学组合物是呈一供非经肠道投药的剂型。

前述的用于治疗干癣的药学组合物，其中所述的该药学组合物是呈一供口服投药的剂型。

本发明的目的及解决其技术问题另外再采用以下技术方案来实现。依据本发明提出的该药学组合物是呈一供口服投药的剂型。

前述的用于制备一青黛的经油萃取的产物的方法，其中所述的该青黛在被加热萃取后可进一步被进行一过滤处理。

前述的用于制备一青黛的经油萃取的产物的方法，其中所述的该青黛是在一范围落在100℃至155℃内的温度下被加热萃取。

前述的用于制备一青黛的经油萃取的产物的方法，其中所述的该油是选自于由下列所构成的群组：动物油、植物油、矿物油以及它们的组合。

前述的用于制备一青黛的经油萃取的产物的方法，其中所述的该油是一植物油并且该植物油是选自于由下列所构成的群组：棉籽油、橄榄油、芝麻油、葵花籽油、花生油、小麦胚芽油、大豆油、荷荷巴油、月见草油、椰子油、麻油、棕榈油、甜杏仁油、芦荟油、杏核桃仁油、酪梨油、琉璃苣油、大麻子油、夏威夷果仁油、玫瑰果油、胡桃油、榛果油、山茶花油、米糠油、乳油木果油、玉米油、苦茶油、葡萄籽油、芥花油以及蓖麻油。

借由上述技术方案，本发明青黛的经油萃取的产物及其制备方法与用途至少具有下列优点及有益效果：

提供一种借由在加热的条件下，以一油来有效的萃取青黛产品，同时提供一种高效率地制备一青黛的经油萃取的产物的方法。依据本发明的青黛的经油萃取的产物经由临床试验而被证实对于人类个体的干癣(特别是皮肤干癣与指甲干癣)具有显著的治疗效用。因此，本发明提供一种用于治疗干癣的药学组合物，其包含有一如上所述的青黛的经油萃取的产物。本发明提供一种用于治疗一具有或被怀疑具有干癣的个体的方法，其包括对该个体投药以一如上所述的青黛的经油萃取的产物。

综上所述，本发明是有关于一种青黛的经油萃取的产物及其制备方法与用途，其揭示了一种青黛的经油萃取的产物暨其制备方法，同时也揭示了该青黛的经油萃取的产物可被用来治疗干癣(特别是皮肤干癣以及指甲干癣)。本发明在技术上有显着的进步，并具有明显的积极效果，诚为一新颖、进步、实用的新设计。

上述说明仅是本发明技术方案的概述，为了能够更清楚了解本发明的技术手段，而可依照说明书的内容予以实施，并且为了让本发明的上述和其它目的、特征和优点能够更明显易懂，以下特举较佳实施例，并配合附图，详细说明如下。

附图说明

图1显示一供用于评估鳞屑、红斑与厚度的严重程度的比对标准图片。

图2A至图2D分别显示被分别地施用以本发明的粗制软膏以及精制软膏的病灶位置随着时间所测得的鳞屑、红斑以及厚度的个别平均计分值以及这3个项目的总平均计分值。

图3显示被分别地施用以本发明的粗制软膏以及精制软膏的病灶位置随着时间所测得的平均病灶面积相对于基准值的百分比值。

图4显示被分别地施用以本发明的粗制软膏以及精制软膏的病灶位置随着时间所测得的病灶外观的改善百分比值。

具体实施方式

为更进一步阐述本发明为达成预定发明目的所采取的技术手段及功效，以下结合附图及较佳实施例，对依据本发明提出的青黛的经油萃取的产物及其制备方法与用途其具体实施方式、结构、方法、步骤、特征及其功效，详细说明如后。

如本发明中所用的，术语“干癣(psoriasis)”意欲涵盖熟习此项技术者所详知的所有类型的干癣，包括慢性斑块性干癣(chronicplaquepsoriasis)[也被称为寻常性干癣(vulgarispsoriasis)]、点滴状干癣(guttatepsoriasis)、红皮性干癣(erythrodermicpsoriasis)、脓疱性干癣(pustularpsoriasis)、反转型干癣(inversepsoriasis)[也被称为屈侧干癣(flexuralpsoriasis)]、指甲干癣(nailpsoriasis)以及干癣性关节炎(psoriaticarthritis)等。

传统上通常是使用有机溶剂来萃取青黛中的各种活性成分，已有研究发现，青黛的经有机溶剂萃取的产物(organicsolvent-extractedproductofindigonaturalis)能借由调控角质细胞的增生以及分化来达到抗干癣的效用。但是，在青黛的经有机溶剂萃取的产物当中所含有的有机溶剂在临床应用上可能会对人体产生非所欲的副作用(sideeffect)，同时也会增加药物工艺的成本。因此，为了开发出在使用上更为安全与便利的抗干癣药物，申请人尝试以各种不同的植物油以及各种萃取操作条件来进行青黛的萃取。

于是，本发明提供一种青黛的经油萃取的产物(oil-extractedproductofindigonaturalis)，它是借由在加热的条件下以一油来萃取青黛而被制得。

依据本发明，该青黛的经油萃取的产物包含有靛玉红(indirubin)作为一活性成分。

本发明也提供一种用于制备一青黛的经油萃取的产物的方法，其包括：在加热的条件下以一油来萃取青黛。

依据本发明，适用于萃取青黛的油是选自于由下列所构成的群组：动物油(animaloils)、植物油(vegetableoils)、矿物油(mineraloils)以及它们的组合。在本发明的一个较佳具体例中，该青黛的萃取是借由使用一植物油而被进行。

依据本发明，该植物油可以是，但不限于：棉籽油(cottonseedoil)、橄榄油(oliveoil)、芝麻油(sesameoil)、葵花籽油(sunflowerseedoil)、花生油(peanutoil)、小麦胚芽油(wheatgermoil)、大豆油(soybeanoil)、荷荷巴油(jojobaoil)、月见草油(eveningprimroseoil)、椰子油(coconutoil)、麻油(sesameoil)、棕榈油(palmoil)、甜杏仁油(sweetalmondoil)、芦荟油(aloeoil)、杏核桃仁油(apricotkerneloil)、酪梨油(avocadooil)、琉璃苣油(borageoil)、大麻籽油(hempseedoil)、夏威夷果仁油(macadamianutoil)、玫瑰果油(rosehipoil)、胡桃油(pecanoil)、榛果油(hazeluntoil)、山茶花油(sasanquaoil)、米糠油(ricebranoil)、乳油木果油(sheabutter)、玉米油(cornoil)、苦茶油(camelliaoil)、葡萄籽油(grapeseedoil)、芥花油(canolaoil)以及蓖麻油(castoroil)。在本发明的一个较佳具体例中，该植物油是橄榄油。

依据本发明，该青黛与该橄榄油的萃取比例是落在1∶10(w/v)至1∶40(w/v)的范围内。在本发明的一个较佳具体例中，该青黛与该橄榄油的萃取比例是1∶10(w/v)。

依据本发明，该青黛是在一范围落在100℃至155℃内的温度下被进行萃取。在本发明的一个较佳具体例中，该青黛是在一为145℃的温度下被进行萃取。

依据本发明，该青黛在被加热萃取(heat-extracted)后可进一步被进行一过滤处理。

依据本发明，该青黛的经油萃取的产物可以借由该过滤处理来移除靛蓝(indigo)以及杂质等。该过滤处理可以采用熟习此项技术者所详知且惯用的技术来进行。例如，该过滤处理可以借由使用纱布(cheesecloth)，或者具有一选定的孔径大小的滤纸(filterpaper)或滤膜(filtermembrane)而被进行。在本发明的一个较佳具体例中，该过滤处理是借由使用一具有一孔径为6μm的滤纸而被进行。

依据本发明的青黛的经油萃取的产物已经由临床试验而被证实：对于病患的干癣病灶(特别是皮肤干癣病灶以及指甲干癣病灶)具有显著的治疗效用，并且不会对病患的皮肤产生严重的刺激性反应。基于上述，该青黛的经油萃取的产物被预期具有可用于治疗干癣的高潜力。于是，本发明提供一种用于治疗干癣的药学组合物，其包含有一如上所述的青黛的经油萃取的产物。

依据本发明，该药学组合物可利用熟习此技术者所详知的技术而被制造成一适合于非经肠地道(parenterally)、局部地(topically)或口服地(orally)投药的剂型(dosageform)，这包括，但不限于：无菌的粉末(sterilepowder)、锭剂(tablet)、片剂(troche)、丸剂(pill)、胶囊(capsule)、外部制剂(externalpreparations)、栓剂(suppositoriums)以及类似物。

依据本发明的药学组合物可进一步包含有一被广泛地使用于药物制造技术的药学上可接受的载剂。例如，该药学上可接受的载剂可包含一或多种选自于下列的试剂：溶剂(solvent)、乳化剂(emulsifier)、悬浮剂(suspendingagent)、分解剂(decomposer)、黏结剂(bindingagent)、赋形剂(excipient)、安定剂(stabilizingagent)、螯合剂(chelatingagent)、稀释剂(diluent)、胶凝剂(gellingagent)、防腐剂(preservative)、润滑剂(lubricant)、吸收延迟剂(absorptiondelayingagent)、脂质体(liposome)以及类似物。

在本发明的一个较佳具体例中，该药学组合物被制造成可直接地施用于干癣病灶上的外部制剂。

依据本发明，该外部制剂可以是，但不限于：乳剂(emulsion)、凝胶(gel)、软膏(ointment)、乳霜(cream)、贴片(patch)、擦剂(embrocation)、气溶胶(aerosol)、喷雾(spray)、乳液(lotion)、乳浆(serum)、糊剂(paste)、泡沫(foam)以及滴剂(drop)。

依据本发明，该外部制剂是借由将本发明的青黛的经油萃取的产物与一熟习此项技术者所详知的基底(base)相混合而被制备。

依据本发明，该基底可包含有一或多种选自于下列的添加剂(additives)：碳氢化合物(hydrocarbons)[诸如石油胶(petroleumjelly)以及白凡士林(whitepetrolatum)]、蜡(waxs)[诸如石蜡(paraffin)以及黄蜡(yellowwax)]、保存剂(preservingagents)、抗氧化剂(antioxidants)、界面活性剂(surfactants)、吸收增强剂(absorptionenhancers)、安定剂(stabilizingagents)、胶凝剂(gellingagents)、活性剂(activeagents)、气味吸收剂(odorabsorbers)以及香料(fragrances)等。有关这些添加剂的选用与数量是落在熟习此项技术人士的专业素养与例行技术范畴内。

在本发明的一个较佳具体例中，该药学组合物被制造成一软膏的剂型。在本发明的另一个较佳具体例中，该药学组合物被制造成一滴剂的剂型。

本发明也提供一种用于治疗一具有或被怀疑具有干癣的个体的方法，其包括对该个体投药以一如上所述的青黛的经油萃取的产物。

依据本发明，该青黛的经油萃取的产物的投药剂量与投药次数会视下列因素而变化：要被治疗的疾病的严重性，投药途径，以及要被治疗的个体的体重、年龄、身体状况与反应。一般而言，依据本发明的药学组合物的每日投药剂量通常是0.01mg/Kg体重至1mg/Kg体重，呈单一剂量或是分成数个剂量的形式，且可被口服地投药或非经肠地道投药。

依据本发明，该青黛的经油萃取的产物可被单独地投药，或是与其它药物一起组合使用。适合与本发明的青黛的经油萃取的产物一起组合使用的药物包括，但不限于：皮质类固醇(corticosteroids)、蒽三酚(anthralin)(商品名称为)、煤焦油(coaltar)(商品名称为)、促钙三醇(calcitriol)(商品名称为)、他扎罗汀(tazarotene)(商品名称为)、水杨酸(salicylicacid)、胺甲碟呤(methotrexate，MTX)、环孢素(cyclosporin)、类视色素(retinoids)、阿法赛特(alefacept)(商品名称为)、依法利珠单抗(efalizumab)(商品名称为)、依那西普(etanercept)(商品名称为)以及阿达木单抗(Adalimumab)。

本发明将就下面的实施例来做进一步说明，但应了解的是，所述实施例只是供例示说明用，而不应被解释为本发明的实施上的限制。

<实施例>

实验材料：

1、在下面实施例中所使用的青黛粉末是购自于光盛贸易有限公司(GuangShengTrading，Taipei，Taiwan)。

2、在下面实施例中所使用的各种植物油(vegetableoils)是购自于Sigma，USA。

一般实验方法：

1、借由高效能液相层析(highperformanceliquidchromatography，HPLC)来定量分析(quantitativeanalysis)在青黛的经油萃取的产物(oil-extractedproductofindigonaturalis)中的靛玉红(indirubin)：

已知靛玉红为青黛的主要活性成分之一，因此申请人选用靛玉红作为指标成分(indicatorcomponent)来评估不同的操作条件对于青黛的经油萃取的产物的萃取效用(extractionefficiency)。

将下面实施例中所获得的青黛的经油萃取的产物拿来进行高效能液相层析(HPLC)，而配于氯仿中的靛玉红(0.1mg/mL)(购自于Alexis，Lausen，Switzerland)被拿来作为对照标准品(controlstandard)并进行相同的HPLC分析。HPLC定量分析是使用安捷伦1100系列液相层析系统(Agilent1100seriesliquidchromatographysystem)(AgilentTechnologies，PaloAlto，CA，USA)来进行，而HPLC的各项操作条件被显示于下面的表1中。

表1.HPLC的操作条件

实施例1.不同的萃取条件对于青黛的经油萃取的产物(oil-extractedproductofindigonaturalis)的靛玉红含量的影响

实验方法：

A、不同的植物油对于青黛的经油萃取的产物的靛玉红含量的影响：

首先，对7种植物油[包括棉籽油(cottonseedoil)、橄榄油(oliveoil)、芝麻油(sesameoil)、葵花籽油(sunflowerseedoil)、花生油(peanutoil)、小麦胚芽油(wheatgermoil)以及大豆油(soybeanoil)]各取2mL并分别与0.1g青黛粉末相混合，继而将所形成的混合物置于110℃下加热历时30分钟，借此而得到7种青黛的经油萃取的粗产物(oil-extractedcrudeproductofindigonaturalis)(它们皆呈蓝紫色)。之后，将该7种青黛的经油萃取的粗产物以注射过滤器(syringefilter)(Millipore，France)来过滤并收取滤液(filtrate)，借此而分别得到7种青黛的经油萃取的产物(它们皆呈紫红色)。另外，为供比较，2种以往的有机溶剂(包括乙酸乙酯与乙醇)分别被拿来进行相同的萃取步骤，借此而得到2种青黛的经有机溶剂萃取的产物(organicsolvent-extractedproductofindigonaturalis)。

之后，对所获得的7种青黛的经油萃取的产物以及2种青黛的经有机溶剂萃取的产物各取100μL并分别以氯仿予以稀释10倍，继而依照上面“一般实验方法”的第1项“借由高效能液相层析来定量分析在青黛的经油萃取的产物中的靛玉红”当中所述的方法来量测靛玉红的含量。

结果：

表2显示借由使用不同的萃取溶剂而被获得的青黛的萃取产物的靛玉红定量分析结果。从表2可见，当使用植物油来萃取青黛时所得到的靛玉红含量是介于使用乙酸乙酯以及乙醇所具者之间。此外，在这些植物油当中，以芝麻油来进行青黛的萃取时所得到的靛玉红含量是最高的，其次是橄榄油。然而，芝麻油所含有的成分较为复杂并且气味较重，同时有报导指出芝麻油可能会引起个体的过敏反应。因此，申请人认为：青黛的经橄榄油萃取的产物在临床应用上是较佳且安全的。

表2.借由使用不同的萃取溶剂而被获得的青黛的萃取产物的靛玉红定量分析结果

B、加热温度对于青黛的经橄榄油萃取的产物的靛玉红含量的影响：

首先，将1g的青黛粉末与10mL的橄榄油相混合，继而将所形成的混合物分别置于100℃、110℃、125℃、145℃以及155℃下加热历时30分钟，然后以注射过滤器予以过滤并收取滤液，借此而分别得到5种青黛的经橄榄油萃取的产物。之后，对该5种青黛的经橄榄油萃取的产物各取100μL并分别以氯仿予以稀释10倍，继而依照上面“一般实验方法”的第1项“借由高效能液相层析来定量分析在青黛的经油萃取的产物中的靛玉红”当中所述的方法来量测靛玉红的含量。

结果：

表3显示在不同的加热温度下所获得的青黛的经橄榄油萃取的产物的靛玉红定量分析结果。从表3可见，在各个加热温度下皆可萃取出靛玉红，特别地，在145℃下来进行青黛的萃取时所得到的靛玉红含量是最高的。

表3.在不同的加热温度下所获得的青黛的经橄榄油萃取的产物的靛玉红定量分析结果

加热温度(℃)	靛玉红含量(mg/g)
		100	3.22
110	3.42
		125	4.18
145	4.66
		155	4.3

C、筛选青黛与橄榄油的较佳萃取比例(extractionratio)：

首先，将1g、0.5g以及0.25g的青黛粉末分别与10mL的橄榄油相混合，借此而使得青黛与橄榄油的萃取比例分别为1∶10(w/v)、1∶20(w/v)以及1∶40(w/v)。之后，将所形成的混合物置于145℃下加热历时30分钟，然后以注射过滤器予以过滤并收取滤液，借此而分别得到3种青黛的经橄榄油萃取的产物。之后，对该3种青黛的经橄榄油萃取的产物各取100μL并分别以氯仿予以稀释10倍，继而依照上面“一般实验方法”的第1项“借由高效能液相层析来定量分析在青黛的经油萃取的产物中的靛玉红”当中所述的方法来量测靛玉红的含量。

结果：

表4显示以不同的青黛与橄榄油的萃取比例来进行萃取时所获得的青黛的经橄榄油萃取的产物的靛玉红定量分析结果。从表4可见，以各种萃取比例来进行青黛的萃取时所得到的靛玉红含量差异不大。然而，以萃取比例为1∶20(w/v)与1∶40(w/v)来进行青黛的萃取，当青黛的用量为固定时，增加橄榄油的用量并不会增加在青黛的经橄榄油萃取的产物中的靛玉红含量，但是会使得该青黛的经橄榄油萃取的产物的浓度相对变低。因此，申请人认为：以一为1∶10(w/v)的青黛与橄榄油的萃取比例来进行萃取时可以得到一含有一较高浓度的靛玉红的青黛的经橄榄油萃取的产物。

表4.以不同的青黛与橄榄油的萃取比例来进行萃取时所获得的青黛的经橄榄油萃取的产物的靛玉红定量分析结果

青黛与橄榄油的萃取比例(w/v)	靛玉红含量(mg/g)
		1∶10	3.2
1∶20	3.44
		1∶40	3.48

综合上面第A至C项的实验结果，申请人将较佳的萃取操作条件汇整于下面的表5中。

表5.依据本发明的较佳的萃取操作条件

萃取操作参数	条件
		萃取溶剂	橄榄油
加热温度与时间	145℃，历时30分钟
		青黛与橄榄油的萃取比例(w/v)	1∶10

实施例2.本发明的青黛的经橄榄油萃取的产物的大规模制备(largescalepreparation)

首先，依据上面表5中所示的萃取操作条件，将90g青黛粉末与900mL的橄榄油置于一不锈钢锅中并予以混合，继而将所形成的混合物置于145℃下加热历时30分钟，借此而得到一呈蓝紫色的青黛的经橄榄油萃取的粗产物。此外，将另一个依据上述所获得的青黛的经橄榄油萃取的粗产物以一孔径为6μm的滤纸来进行过滤并收取滤液，借此而得到一呈紫红色的青黛的经橄榄油萃取的产物。依据上述所得到的青黛的经橄榄油萃取的粗产物与由之所分离出的青黛的经橄榄油萃取的产物被拿来进行下面的临床实验。

另外，为了解本发明的青黛的经橄榄油萃取的产物的主要成份分布，申请人将上面所得到的青黛的经橄榄油萃取的产物拿来进行高效能液相层析，而依据Y.K.Linetal.(2009)(同上述)当中所揭示的方法而得到的青黛的经DMSO萃取的产物被拿来进行相同的HPLC分析以供比较。HPLC分析是使用安捷伦1100系列液相层析系统，而HPLC的各项操作条件是如上面表1中所示者。经由所得到的HPLC洗提图形(HPLCelutionprofile)发现：依据本发明所得到的青黛的经橄榄油萃取的产物与依据Y.K.Lin等人所揭示的方法而得到的青黛的经DMSO萃取的产物具有不同的洗提波峰，这表示这两种萃取物所含有的成份是不相同的(数据未显示)。

实施例3.本发明的青黛软膏(indigonaturalisointment)在改善人类皮肤干癣上的效用以及安全性与便利性的评估

为了解依据本发明的青黛的经橄榄油萃取的粗产物与由之所分离出的青黛的经橄榄油萃取的产物对于患有皮肤干癣的人类个体的治疗效用(therapeuticeffect)以及在使用上的安全性与便利性，下面的临床试验(clinicaltrial)被进行。

实验材料、个体以及方法：

A、青黛的粗制软膏(crudeointment)与精制软膏(refinedointment)的制备：

对在上面实施例2中所获得的青黛的经橄榄油萃取的粗产物以及青黛的经橄榄油萃取的产物各取900mL，继而对这两种产物皆加入90g黄蜡(yellowwax)以及90g石油胶(petroleumjelly)，借此而分别得到一青黛粗制软膏(indigonaturaliscrudeointment)以及一青黛精制软膏(indigonaturalisrefinedointment)备用。

B、实验个体的筛选与临床信息(clinicalinformation)：

参与本临床试验的实验对象是来自于中国台湾长庚纪念医院(ChangGungMemorialHospital)的中医门诊(Chinesemedicineoutpatientdepartment)的人类个体，他们必须符合如下面表6中所示的纳入标准(inclusioncriteria)的每一者，并且不具有该表6中所示的排除标准(exclusioncriteria)的任一者。此外，本试验有经由中国台湾长庚纪念医院人体试验伦理委员会(lnstitutionalReviewBoardofChangGungMemorialHospital)的审查而被核准，并且针对所有参与试验的个体都有取得他们的告知同意书(informedconsent)。

表6.用于筛选实验个体的纳入标准以及排除标准

本试验共计有38位病患参加，有关这些病患的临床信息[诸如，性别、年龄、病程(duration)、干癣面积暨严重性指数(psoriasisareaandseverityindex，PASI)以及干癣病灶的体表面积(bodysurfacearea，BSA)]被显示在下面的表7中。

表7.在本试验中被研究的38位病患的临床信息

C、人体临床试验：

首先，从每位病患的身体部位(排除头部与颈部)中任选两处在病症程度上是相似的病灶位置并分别进行拍照与病灶面积的量测，继而分别施用以上面第A项当中所制得的青黛的粗制软膏以及精制软膏(剂量为：每100平方公分的面积施用以1g的软膏，每天一次)，试验时间总共历时8周。在施用软膏后的第2、4、6以及8周结束时，对所有病患的经粗制软膏治疗与经精制软膏治疗的部位分别进行拍照与量测，并依据下面第D项以及第E项当中所述的方法来进行评估。

在整个试验过程中，总计有35位病患完成所有试验，而有3位病患仅完成部分试验，其中1位病患在试验开始后的第5周因为被治疗的部位有出现搔痒(itching)的情形而退出，另外2位病患在试验开始后的第4周以及第6周分别因为工作因素以及搬家无法回诊而退出。

D、治疗效用的评估：

1.鳞屑(scaling)、红斑(erythema)以及厚度(thickness)的严重性评估：

在施用软膏前(也就是在第0周时)以及在施用软膏后的第2、4、6以及8周结束时，对各个病患的经粗制软膏治疗与经精制软膏治疗的部位进行拍照所得到的照片分别被皮肤科医师拿来与一比对标准图片(参阅图1)进行比对，比对项目包括鳞屑、红斑以及厚度的严重性，并以下列5种计分(score)来作为区别的依据：计分0，表示正常；计分1，表示轻微；计分2，表示中度；计分3，表示严重；以及计分4，表示非常严重。由此可得到经粗制软膏治疗与经精制软膏治疗的部位在不同测试时间点的鳞屑、红斑以及厚度的个别平均计分值以及这3个项目的总平均计分值。

所得到的实验数据是以平均值±标准偏差(S.D.)来表示。所有数据是借由双因子变异数分析(two-wayanalysisofvariance，two-wayANOVA)来作分析，以评估经相同的软膏治疗的部位在各个测试时间点间的差异性，以及在相同的测试时间点下经粗制软膏治疗与经精制软膏治疗的部位之间的差异性。若所得到的统计比对结果是p＜0.05，代表有统计学显著性(statisticalsignificance)。

2.病灶面积的变化：

在施用软膏前(也就是在第0周时)以及在施用软膏后的第2、4、6以及8周结束时，对各个病患的经粗制软膏治疗与经精制软膏治疗的部位分别进行病灶面积(以平方公分来表示)的量测，而这两处治疗部位的病灶面积随着时间的变化是以在不同测试时间点所量测出的平均病灶面积相对于基准值(baselinevalue)的百分比值来表示，其中基准值是在施用软膏前(也就是在第0周时)所测得的平均病灶面积。有关平均病灶面积相对于基准值的百分比值是参照下面的公式(1)而被计算出：

公式(1)：A＝(B/C)×100

其中：A＝平均病灶面积相对于基准值的百分比值(％)

B＝在第0周时以及在第2、4、6以及8周结束时所分别测得的平均病灶面积(cm²)

C＝在第0周时所测得的平均病灶面积(cm²)

所得到的实验数据是以平均值±标准偏差(S.D.)来表示，并参照上面第1点当中所述的方式来进行统计分析。

3.病灶外观的改善百分比值(improvementpercentageoflesionappearance)：

将在上面第1点中在各个测试时间点所测得的鳞屑、红斑以及厚度这3个项目的总平均计分值以及在上面第2点中在各个测试时间点所测得的平均病灶面积相对于基准值的百分比值相乘，借此可得到经粗制软膏治疗与经精制软膏治疗的部位在不同测试时间点的面积暨严重性计分值(areaandseverityscore)。而这两处治疗部位在不同测试时间点的病灶外观的改善百分比值是借由将所得到的面积暨严重性计分值代入下面的公式(2)而被计算出：

公式(2)：D＝[(E-F)/E]×100

其中：D＝病灶外观的改善百分比值(％)

E＝在第0周时所测得的面积暨严重性计分值

F＝在第2、4、6以及8周结束时所分别测得的面积暨严重性计分值

4.病灶外观的整体改善的评估：

由皮肤科医师以目测的方式来比较35位已完成整个试验的病患在第8周结束与第0周(也就是在施用软膏前)时所分别拍摄到的照片，借此可评估经粗制软膏治疗与经精制软膏治疗的部位的病灶外观的整体改善情形，并以下列6种计分来作为区别的依据：计分0，表示病灶恶化；计分1，表示没有改善；计分2，表示轻微改善；计分3，表示中度改善；计分4，表示病灶几近消失；以及计分5，表示病灶消失。另外，所述病患也自行目视观察这两处治疗部位的病灶外观的整体改善情形，并参照上述的方式来进行计分。

之后，将经由皮肤科医师评估与病患自行评估所得到的6种计分值所对应的病患人数分别进行统计，并计算出各个计分值所具有的病患人数相对于总病患人数的百分比值。所得到的实验数据是以百分比来表示，并借由麦内玛检定(McNemartest)来作分析，以了解医师所评估的结果与病患自行评估的结果之间的相关性。

E、安全性(safety)与便利性(convenience)的评估：

有关安全性评估是在施用软膏后的第2、4、6以及8周结束时，由研究人员询问并纪录病患是否有出现任何皮肤刺激性反应(skinirritationreaction)[包括搔痒(itching)、刺激(irritation)以及红斑(erythema)]，并以下列4种计分来作为区别的依据：计分0，表示无；计分1，表示轻微；计分2，表示中度；以及计分3，表示严重。而便利性评估是在整个试验结束后，由参与试验的每位病患针对该粗制软膏以及精制软膏在使用上的便利性来进行比较。

结果：

A、依据本发明的青黛的粗制软膏以及精制软膏的治疗效用的评估：

图2A至图2D分别显示被分别地施用以本发明的粗制软膏以及精制软膏的病灶位置随着时间所测得的鳞屑、红斑以及厚度的个别平均计分值以及这3个项目的总平均计分值。从图2A至图2D可见，与在第0周时(也就是在施用软膏前)所测得的计分结果相较下，分别被治疗以粗制软膏以及精制软膏的病灶位置所测得的鳞屑、红斑、厚度的个别平均计分值以及这3个项目的总平均计分值皆会随着时间而有显著的降低，但是这两处治疗部位在相同的时间点下所测得的各个计分值几乎没有差异。

图3以及图4分别显示被分别地施用以本发明的粗制软膏以及精制软膏的病灶位置随着时间所测得的平均病灶面积相对于基准值的百分比值以及病灶外观的改善百分比值。从图3以及图4可见，分别被治疗以粗制软膏以及精制软膏的病灶位置的面积皆会随着时间而显著地变小，而病灶外观的改善百分比值则会随着时间而有显著的增加，但是这两处治疗部位在相同的时间点下所测得的面积百分比值以及改善百分比值几乎没有差异。上面的实验结果显示：依据本发明的青黛的粗制软膏以及精制软膏皆可以显著地改善病患的皮肤干癣病灶。

另外，在整个试验结束后，皮肤科医师与每位病患有就病灶外观的整体改善情形来进行评估，所得到的结果被显示于下面的表8中。从表8可见，皮肤科医师与参与试验的病患大多认为依据本发明的青黛的粗制软膏以及精制软膏能有效地改善干癣病灶，并且这2种软膏具有相似的治疗效果。

表8.病灶外观的整体改善的评估结果

a：表示对应于该项评估意见的计分值；

b：表示针对该项评估意见所统计出的病患人数；以及

c：表示对应于该项评估意见的病患人数相对于总病患人数的百分比值。

B、依据本发明的青黛的粗制软膏以及精制软膏的安全性与便利性评估：

表9显示在施用软膏后的第2、4、6以及8周结束时，有产生皮肤刺激性反应的病患人数暨其计分结果。从表9可见，在整个试验过程中，仅有少数病患在被施用以本发明的粗制软膏以及精制软膏后会产生短暂且轻微的搔痒、刺激或红斑的现象，但是这并不会影响他们接受后续的治疗。特别地，该粗制软膏要比该精制软膏具有更高的总计分值，这表示本发明的青黛的经橄榄油萃取的粗产物可以经由过滤处理来去除杂质与色素，进而减少病患在使用时可能产生的皮肤刺激性反应。

表9.对于本发明的粗制软膏以及精制软膏的使用会产生皮肤刺激性反应的病患人数与计分结果

a：表示针对特定的皮肤刺激性反应的严重程度进行评估后所测得的计分值；以及

b：表示有产生特定的皮肤刺激性反应的病患人数。

另外，总共有35位病患完成整个试验并针对这2种软膏的使用便利性作一比较，其中有31位病患(88.6％)认为该精制软膏在使用上是优于该粗制软膏，有3位病患(8.6％)认为这2种软膏之间并没有差别，仅有1位病患(2.9％)认为该粗制软膏是较佳的。申请人据此而认为：将青黛的经橄榄油萃取的粗产物进行过滤后所得到的青黛的经橄榄油萃取的产物，由于所含有的杂质较少并且颜色较淡，因此较不会对病患的皮肤造成刺激性或者在衣物上产生严重的染色，进而增加病患在使用时的便利性以及意愿。

实施例4.本发明的青黛滴剂(indigonaturalisdrop)在改善人类指甲干癣(nailpsoriasis)上的效用以及安全性的评估

为了解依据本发明的青黛的经橄榄油萃取的产物对于人类的指甲干癣的治疗效用以及在使用上的安全性，下面的临床试验被进行。

实验材料、个体以及方法：

A、青黛滴剂与橄榄油滴剂的制备：

将上面实施例2中所获得的青黛的经橄榄油萃取的产物直接分装至滴瓶(droppingbottles)中并将之使用作为下面临床试验中的青黛滴剂。另外，将橄榄油分装至滴瓶中并将之使用作为下面临床试验中的橄榄油滴剂。

B、实验个体的筛选与临床信息：

参与本临床试验的实验对象是来自于中国台湾长庚纪念医院的中医门诊的人类个体，他们必须符合如下面表10中所示的纳入标准的每一者，并且不具有该表10中所示的排除标准的任一者。此外，本试验有经由中国台湾长庚纪念医院人体试验伦理委员会的审查而被核准，并且针对所有参与试验的个体都有取得他们的告知同意书。

表10.用于筛选实验个体的纳入标准以及排除标准

本试验共计有31位病患参加，有关这些病患的临床信息(诸如，性别、年龄、病程、PASI以及干癣病灶的BSA等)被显示在下面的表11中。

表11.在本试验中被研究的31位病患的临床信息

C、人体临床试验：

首先，将每位病患的左、右手以随机的方式区分为实验组以及对照组并针对指甲干癣的病灶位置进行拍照，继而将上面第A项当中所制得的青黛滴剂施用在实验组指甲的指甲板(nailplate)、指甲皱襞(nailfold)以及下甲床(hyponychium)上(剂量为：每个指甲施用以0.05至0.1mL的滴剂，每天2次，每次历时至少30分钟)，试验时间总共历时24周。另外，对照组指甲的临床试验是参照上述方法来进行，不同之处在于：在试验开始后至第12周结束时的试验期间，指甲是被施用以在上面第A项当中所制得的橄榄油滴剂，而在第13周开始至第24周结束时的试验期间，则是以青黛滴剂来进行治疗。在施用滴剂后的第4、8、12、16、20以及24周结束时，对所有病患的对照组与实验组的指甲进行拍照，并依据下面第D项以及第E项当中所述的方法来进行评估。

在整个试验过程中，总计有27位病患完成所有试验，而有4位病患仅完成部分试验，他们分别是在第8、16、20以及24周退出试验。

D、治疗效用的评估：

1.指甲干癣严重性指数(nailpsoriasisseverityindex，NAPSI)的评估：

在施用滴剂前(也就是在第0周时)以及在施用滴剂后的第4、8、12、16、20以及24周结束时，对各个病患的对照组以及实验组的指甲进行拍照所得到的照片分别被用来进行NAPSI评估，而有关NAPSI评估是参照RichP.andScherR.K.(2003)，J.Am.Acad.Dermatol，49：206-212当中所述的方法来进行。简言之，将对照组以及实验组的指甲分别以一假想水平线(imaginaryhorizontalline)与一假想垂直线(imaginarylongitudinalline)予以区分成四等分(quadrant)，继而依据下列步骤针对该四等分的指甲干癣[包括指甲基质干癣(nailmatrixpsoriasis)以及甲床干癣(nailbedpsoriasis)]的各项临床特征(clinicalfeatures)(参阅表12)来进行计分：

(a)指甲基质干癣的临床特征的评估：在该指甲的四等分中，针对指甲基质干癣的每一项临床特征来进行评估，并以下列5种计分来作为区别的依据：计分0，表示四等分皆未表现出任何临床特征；计分1，表示在四等分中有一等分表现出临床特征中的任一者；计分2，表示在四等分中有二等分表现出临床特征中的任一者；计分3，表示在四等分中有三等分表现出临床特征中的任一者；以及计分4，表示四等分皆有表现出临床特征中的任一者。据此，每个指甲可获得一关于指甲基质干癣的临床特征的计分值(0-4)。

(b)甲床干癣的临床特征的评估：在该指甲的四等分中，针对甲床干癣的每一项临床特征来进行评估，并参照上面第(a)点中所述的方式来进行计分。据此，每个指甲可获得一关于甲床干癣的临床特征的计分值(0-4)。

(c)令上述两点所测得的计分值相加，借此而得到各个指甲的总计分值(0-8)。

(d)将实验组与对照组的各个指甲(n＝5)所测得的总计分值进行加总，借此而分别得到实验组与对照组的NAPSI总计分值(0-40)。

依据上述方式可分别得到所有病患的实验组与对照组的指甲在不同测试时间点的NAPSI总平均计分值。

表12.被用来进行NAPSI评估的指甲干癣的各项临床特征

另外，在施用滴剂前(也就是在第0周时)，对所有病患的指甲所表现出的各项临床特征(参阅表12)分别进行统计，借此可得知在实验组以及对照组的指甲中分别对应于该8项临床特征的数目。然后，分别针对实验组以及对照组的指甲所具有的临床特征来进行NAPSI的评估，并以下列5种计分来作为区别的依据：计分0，表示该指甲的四等分皆未表现出该项临床特征；计分1，表示在该指甲的四等分中有一等分表现出该项临床特征；计分2，表示在该指甲的四等分中有二等分表现出该项临床特征；计分3，表示在该指甲的四等分中有三等分表现出该项临床特征；以及计分4，表示该指甲的四等分皆有表现出该项临床特征。据此，实验组以及对照组的指甲会分别针对它们所具有的临床特征而得到一NAPSI平均计分值(0-4)。

在施用滴剂后的第12周结束时，参照上述的方式来分别对实验组以及对照组的指甲进行计分。据此，实验组以及对照组的指甲会分别针对它们所具有的临床特征而得到一NAPSI平均计分值(0-4)。之后，将实验组以及对照组的指甲在第0周时与第12周结束时所分别测得的NAPSI平均计分值拿来进行比较，借此可了解病患的实验组以及对照组的指甲所表现出的各项临床特征在施用以本发明的青黛滴剂后的改善情形。

所得到的实验数据是以平均值±标准偏差(S.D.)来表示。所有数据是借由混合效果模式(mixedeffectmodel)，继之以邦弗朗尼检定(Bonferronitest)来作统计分析，以评估实验组或对照组内在各个测试时间点之间的差异性，以及在相同的测试时间点下实验组与对照组之间的差异性。若所得到的统计比对结果是p＜0.05，代表有统计学显著性。

2.经改良的标靶NAPSI(modifiedtargetNAPSI)的评估：

从各个病患的实验组与对照组指甲中分别选择一个在病症程度上是最严重的标靶指甲(targetnail)，继而将该标靶指甲在施用滴剂前(也就是在第0周时)以及施用滴剂后的第4、8、12、16、20以及24周结束时所分别拍摄到的照片拿来进行经改良的标靶NAPSI评估，而有关经改良的标靶NAPSI评估是参照ParrishC.A.etal.(2005)，J.Am.Acad.Dermatol，53：745-746当中所述的方法来进行。简言之，将各个病患的实验组以及对照组的标靶指甲分别以一假想水平线与一假想垂直线予以区分成四等分，继而依据下列步骤针对该四等分的指甲干癣的8项临床特征(参阅表12)暨其严重性来进行计分：

(a)指甲干癣的临床特征的评估：在该标靶指甲的四等分中，针对在上面表12中所示的每一项临床特征来分别进行评估，并以下列5种计分来作为区别的依据：计分0，表示四等分皆未表现出该项临床特征；计分1，表示在四等分中有一等分表现出该项临床特征；计分2，表示在四等分中有二等分表现出该项临床特征；计分3，表示在四等分中有三等分表现出该项临床特征；以及计分4，表示四等分皆有表现出该项临床特征。据此，该标靶指甲会针对各项临床特征而分别得到一计分值(0-4)。

(b)指甲干癣的严重性的评估：针对该标靶指甲所出现的每一项临床特征的严重性来进行评估，并以下列4种计分来作为区别的依据：计分0，表示正常；计分1，表示轻微；计分2，表示中度；以及计分3，表示严重。据此，该标靶指甲会针对各项临床特征的严重性而分别得到一计分值(0-3)。

(c)令上述两点所测得的计分值相乘，借此而得到该8项临床特征的个别总计分值(0-12)。

(d)将该标靶指甲所分别测得的该8项临床特征的总计分值进行加总，借此而得到经改良的标靶NAPSI总计分值(0-96)。

依据上述方式可分别得到所有病患的实验组以及对照组的标靶指甲在不同测试时间点的经改良的标靶NAPSI总平均计分值。

3.病灶外观的改善百分比值：

有关经青黛滴剂治疗与经橄榄油滴剂治疗的指甲的病灶外观的改善百分比值是借由将实验组与对照组在施用滴剂前(也就是在第0周时)以及在施用滴剂后的第12与24周结束时所分别测得的NAPSI总平均计分值或经改良的标靶NAPSI总平均计分值代入下面的公式(3)而被计算出：

公式(3)：G＝(H-I/H)×100

其中：G＝病灶外观的改善百分比值(％)

H＝在第0周时所测得的NAPSI总平均计分值或经改良的标靶NAPSI总平均计分值

I＝在第12与24周结束时所分别测得的NAPSI总平均计分值或经改良的标靶NAPSI总平均计分值

所得到的实验数据是以平均值来表示，并参照上面第1点当中所述的方式来进行统计分析。

4.病灶外观的整体改善的评估：

由皮肤科医师以目测的方式将各个病患在施用滴剂后的第12以及24周结束时所拍摄到的照片分别拿来与在第0周时所拍摄到的照片进行比较，借此可评估实验组与对照组指甲的病灶外观的整体改善情形，并以下列6种计分来作为区别的依据：计分0，表示病灶恶化；计分1，表示没有改善；计分2，表示轻微改善；计分3，表示中度改善；计分4，表示病灶几近消失；以及计分5，表示病灶消失。另外，所述病患也自行目视观察实验组与对照组的指甲的病灶外观的整体改善情形，并参照上述的方式来进行计分。

之后，将经由皮肤科医师评估与病患自行评估所得到的6种计分值所对应的病患人数分别进行统计，并计算出各个计分值所具有的病患人数相对于总病患人数的百分比值。所得到的实验数据是以百分比来表示。

E、安全性的评估：

有关安全性评估是在施用滴剂后的第4、8、12、16、20以及24周结束时，由研究人员询问并且纪录病患是否有出现任何皮肤刺激性反应(包括搔痒、刺激以及红斑)，并以下列4种计分来作为区别的依据：计分0，表示无；计分1，表示轻微；计分2，表示中度；以及计分3，表示严重。

结果：

A、依据本发明的青黛滴剂的治疗效用的评估：

表13分别显示实验组以及对照组的指甲随着时间所测得的NAPSI总平均计分值、经改良的标靶NAPSI总平均计分值以及病灶外观的改善百分比值。从表13可见，与在第0周时(也就是在施用滴剂前)所测得的计分结果相较下，在第4、8以及12周结束时，实验组指甲所测得的NAPSI总平均计分值与经改良的标靶NAPSI总平均计分值皆会随着时间而有显著地降低。但是，对照组所测得的各个计分值并没有随着时间而有明显的变化。特别地，在第8以及12周结束时，实验组指甲所测得的各个计分值皆显著地低于对照组指甲所具者，而在第12周结束时，实验组指甲的病灶外观的改善百分比值则是显著地高于对照组指甲所具者。

另外，在第16、20以及24周结束时，实验组以及对照组的指甲所测得的各个计分值皆会随着时间而有显著地降低，而在第24周结束时，实验组以及对照组的指甲所测得的病灶外观的改善百分比值也皆有显著的增加，并且这两组所测得的数据并无太大的差异存在。特别地，对照组指甲在第24周结束时所测得的改善百分比值是显著地高于在第12周结束时所具者。上面的实验结果显示：依据本发明的青黛滴剂可以有效地改善指甲干癣病灶。

此外，在施用滴剂前(也就是在第0周时)以及在施用滴剂后的第12周结束时，将30位病患的实验组以及对照组指甲拿来分别针对指甲干癣的8项临床特征进行NAPSI的评估，所得到的结果被显示于下面的表14中。从表14可见，在指甲基质干癣的各项临床特征中，以指甲凹陷的发生率为最高，其次为甲板碎裂；而在甲床干癣的各项临床特征中，以甲床分离的发生率为最高，其次为甲床变色，再者为甲下过度角化症。此外，与在第0周时所测得的数据相较下，在第12周结束时，实验组指甲针对8项临床特征所分别测得的计分值皆有降低的情形。特别地，在第12周结束时，实验组指甲在甲床分离、甲床变色以及指甲凹陷的改善程度上是显著地高于对照组所具者。这个实验结果显示：依据本发明的青黛滴剂对于病患的指甲干癣的临床特征(特别是甲床分离、甲床变色以及指甲凹陷)具有改善的效用。

表14.在第0周时以及在施用滴剂后的第12周结束时分别针对指甲病灶的各项临床特征进行NAPSI评估的结果

a：表示有表现出特定的临床特征的指甲数目；

b：表示针对特定的临床特征进行NAPSI评估后所测得的平均计分值：以及

＊＊：当实验组在第12周结束时所测得的计分值与对照组所具者相比较，p＜0.01。

另外，在施用滴剂后的第12以及24周结束时，皮肤科医师与每位病患有分别就病灶外观的整体改善情形来进行评估，所得到的结果被显示于下面的表15中。从表15可见，在第12周结束时，皮肤科医师与参与试验的病患大多认为实验组指甲的病灶外观相较于对照组有显著地改善；而在第24周结束时，皮肤科医师与病患则认为实验组以及对照组指甲的病灶外观皆有显著地获得改善。特别地，对照组指甲在第24周结束时所测得的病灶的整体改善情形是显著地优于在第12周结束时所具者。

表15.病灶外观的整体改善的评估结果

a：表示对应于该项评估意见的计分值；

b：表示针对该项评估意见所统计出的病患人数；以及

B、依据本发明的青黛滴剂的安全性的评估：

在整个试验过程中，所有被施用以本发明的青黛滴剂的指甲都没有产生任何的皮肤刺激性反应(数据未显示)。申请人据此而认为：本发明的青黛的经橄榄油萃取的产物具有发展成为一种抗指甲干癣的药物的高潜力，并且可供病患长期的使用而不会产生非所欲的副作用。

以上所述，仅是本发明的较佳实施例而已，并非对本发明作任何形式上的限制，虽然本发明已以较佳实施例揭露如上，然而并非用以限定本发明，任何熟悉本专业的技术人员，在不脱离本发明技术方案范围内，当可利用上述揭示的方法及技术内容作出些许的更动或修饰为等同变化的等效实施例，但凡是未脱离本发明技术方案的内容，依据本发明的技术实质对以上实施例所作的任何简单修改、等同变化与修饰，均仍属于本发明技术方案的范围内。

Claims

1.一种青黛的经油萃取的产物，其由包含以下步骤的方法所制得：

在100℃至155℃的温度范围内的加热条件下以橄榄油来萃取青黛，其中该青黛与该橄榄油的萃取比例在1：10(w/v)至1：40(w/v)的范围内，从而获得青黛的经油萃取的粗产物；且

通过过滤处理该青黛的经油萃取的粗产物，从而移除靛蓝。

2.根据权利要求1所述的青黛的经油萃取的产物，其中该青黛与该橄榄油的萃取比例为1：10(w/v)。

3.根据权利要求1或2所述的青黛的经油萃取的产物，其包含靛玉红作为活性成分。

4.一种药学组合物，其包含根据权利要求1至3中任一项所述的青黛的经油萃取的产物，且被调配成供非经肠道投药或供口服投药的剂型，其每日投药剂量是0.01mg/Kg体重至1mg/Kg体重，呈单一或多个剂量的形式。

5.一种药学组合物，其包含根据权利要求1至3中任一项所述的青黛的经油萃取的产物，且被调配成供局部投药的剂型。

6.根据权利要求5所述的药学组合物，其中该剂型选自乳剂、凝胶、软膏、乳霜、贴片、擦剂、气溶胶、喷雾剂、乳液、乳浆、糊剂、泡沫或滴剂。

7.根据权利要求5或6所述的药学组合物，其中该剂型为软膏。

8.根据权利要求7所述的药学组合物，其中该软膏包含以下赋形剂：

蜡，及

石油胶。

9.根据权利要求5或6所述的药学组合物，其中该剂型为滴剂。

10.一种药学组合物，其包含青黛的经油萃取的产物，该产物由包含以下步骤的方法所制得：

在100℃至155℃内温度范围内的加热条件下以油来萃取青黛，从而获得青黛的经油萃取的粗产物；且

通过过滤处理该青黛的经油萃取的粗产物，从而移除靛蓝；

其中该药学组合物被调配成供局部投药的剂型。

11.根据权利要求10所述的药学组合物，其中该剂型选自乳剂、凝胶、软膏、乳霜、贴片、擦剂、气溶胶、喷雾、乳液、乳浆、糊剂、泡沫或滴剂。

12.根据权利要求10或11所述的药学组合物，其中该剂型为软膏。

13.根据权利要求12所述的药学组合物，其中该软膏包含以下赋形剂：

蜡，及

石油胶。

14.根据权利要求10或11所述的药学组合物，其中该剂型为滴剂。

15.一种药学组合物，其包含由包含以下步骤的方法所制得的青黛的经油萃取产物：

在100℃至155℃温度范围内的加热条件下以油来萃取青黛，从而获得青黛的经油萃取的粗产物；且

通过过滤处理该青黛的经油萃取的粗产物，从而移除靛蓝；

其中每日投药剂量是0.01mg/Kg体重至1mg/Kg体重，呈单一或多个剂量的形式。

16.根据权利要求15所述的药学组合物，其呈供非经肠道投药或供口服投药的剂型。

17.一种制备根据权利要求4至9中任一项所述的药学组合物的方法，其包含将根据权利要求1至3中任一项所述的青黛的经油萃取的产物与一或多种选自以下的添加剂混合：碳氢化合物、蜡、保存剂、抗氧化剂、界面活性剂、吸收增强剂、安定剂、胶凝剂、活性剂、气味吸收剂或香料。

18.一种制备根据权利要求10至16中任一项所述的药学组合物的方法，其包含将青黛的经油萃取的产物与一或多种选自以下的添加剂混合：碳氢化合物、蜡、保存剂、抗氧化剂、界面活性剂、吸收增强剂、安定剂、胶凝剂、活性剂、气味吸收剂或香料；其中该青黛的经油萃取的产物由包含以下步骤的方法所制得：

通过过滤处理该青黛的经油萃取的粗产物，从而移除靛蓝。

19.根据权利要求17或18所述的方法，其中该碳氢化合物选自石油胶、白凡士林或其组合。

20.根据权利要求17或18所述的方法，其中该蜡选自石蜡、黄蜡或其组合。

21.一种制剂，其包含根据权利要求4至16中任一项所述的药学组合物与选自由以下所组成的群组的药剂的组合：皮质类固醇、蒽三酚、煤焦油、促钙三醇、他扎罗汀、水杨酸、胺甲碟呤、环孢素、类视色素、阿法赛特、依法利珠单抗、依那西普以及阿达木单抗。

22.一种根据权利要求1至3中任一项所述的青黛的经油萃取产物在制备用于治疗干癣的药剂中的用途，该青黛的经油萃取产物与选自由以下所组成的群组的药剂组合使用：皮质类固醇、蒽三酚、煤焦油、促钙三醇、他扎罗汀、水杨酸、胺甲碟呤、环孢素、类视色素、阿法赛特、依法利珠单抗、依那西普以及阿达木单抗。

23.一种青黛的经油萃取产物在制备用于治疗干癣的药剂中的用途，该青黛的经油萃取产物与选自由以下所组成的群组的药剂组合使用：皮质类固醇、蒽三酚、煤焦油、促钙三醇、他扎罗汀、水杨酸、胺甲碟呤、环孢素、类视色素、阿法赛特、依法利珠单抗、依那西普以及阿达木单抗；其中该青黛的经油萃取产物由包含以下步骤的方法所制得：

通过过滤处理该青黛的经油萃取的粗产物，从而移除靛蓝。