CN105431057A - 维持和改善肌肉功能的方法 - Google Patents

Abstract

提供了在受试者中减少肌肉功能下降和改善肌肉功能的方法。该方法利用有效量的表没食子儿茶素-3-没食子酸酯(EGCg)，以增加肌肉血管内皮生长因子A(VEGF)水平，减少肌肉生长抑制素水平或两者，并且从而减少肌肉功能下降或改善肌肉功能。EGCg可以作为营养组合物的部分提供。

Description

维持和改善肌肉功能的方法

相关申请的交叉引用

本申请要求于2013年3月15日提交的美国申请号61/792,489，以及于2013年5月15日提交的美国申请号61/823,832的优先权和利益，所述美国申请的全部内容通过引用并入本文。

领域

本公开内容涉及减少有需要的受试者中的肌肉功能下降的方法，和改善有需要的受试者中的肌肉功能的方法。更具体而言，本公开内容涉及有效量的表没食子儿茶素-3-没食子酸酯(EGCg)在有需要的受试者中减少肌肉功能下降、改善肌肉功能或两者的用途。

背景

一定水平的肌肉功能是移动和进行日常生活活动必须的。肌肉功能中的下降可以对个体具有许多不利效应，包括但不限于全身无力、疲劳、关节活动性的减轻、体力活动减少、易于跌倒和功能状态中的普遍下降。肌肉功能中的下降可能由于许多因素和状况而发生，包括但不限于衰老、肌少症、恶病质、由于卧床休息的不动、损伤或滑动引起的跌倒、糖尿病、炎症、缺血再灌注损伤、间歇性跛行、外周动脉疾病、慢性阻塞性肺病、抑郁症和认知功能下降。

概述

本文提供的是减少有需要的受试者中的肌肉功能下降的方法，和改善有需要的受试者中的肌肉功能的方法。该方法包括给有需要的受试者施用表没食子儿茶素-3-没食子酸酯(EGCg)(或EGCg的来源)，其量有效实现下述中的至少一种：(1)肌肉VEGF水平中的增加；(2)肌肉脉管系统中的增加；(3)肌血流量中的增加；(4)肌肉生长抑制素水平中的减少；和(5)肌肉生长抑制素活性的抑制。在某些实施方案中，该方法包括施用作为营养组合物的部分的EGCg。

在一个示例性实施方案中，提供了减少有需要的受试者中的肌肉功能下降的方法。该方法包括给有需要的受试者施用表没食子儿茶素-3-没食子酸酯(EGCg)，其量有效增加肌肉VEGF水平、肌肉脉管系统或肌血流量中的至少一种，并且从而减少有需要的受试者中的肌肉功能下降。

在一个示例性实施方案中，提供了减少有需要的受试者中的肌肉功能下降的方法。该方法包括给有需要的受试者施用表没食子儿茶素-3-没食子酸酯(EGCg)，其量有效减少有需要的受试者中的肌肉生长抑制素水平，并且从而减少有需要的受试者中的肌肉功能下降。

在一个示例性实施方案中，提供了改善有需要的受试者中的肌肉功能的方法。该方法包括给有需要的受试者施用表没食子儿茶素-3-没食子酸酯(EGCg)，其量有效增加肌肉VEGF水平、肌肉脉管系统或肌血流量中的至少一种，并且从而改善有需要的受试者中的肌肉功能。

在一个示例性实施方案中，提供了改善有需要的受试者中的肌肉功能的方法。该方法包括给有需要的受试者施用表没食子儿茶素-3-没食子酸酯(EGCg)，其量有效减少有需要的受试者中的肌肉生长抑制素水平，并且从而改善有需要的受试者中的肌肉功能。

在一个示例性实施方案中，提供了在有需要的受试者中用于减少肌肉功能下降、改善肌肉功能或两者的营养组合物。营养组合物包含至少一种蛋白质来源，其量足以提供6克至50克蛋白质/份，和0.1克至3克表没食子儿茶素-3-没食子酸酯(EGCg)/份。有需要的受试者消耗营养组合物导致下述中的至少一种：(1)肌肉VEGF水平中的增加；(2)肌肉脉管系统中的增加；(3)肌血流量中的增加；(4)肌肉生长抑制素水平中的减少；和(5)肌肉生长抑制素活性的抑制。相应地，营养组合物的消耗可以在有需要的受试者中减少肌肉功能下降、改善肌肉功能或两者。

附图简述

图1A和1B显示在老年SpragueDawley(SD)大鼠腓肠肌中，8周饮食EGCg补充引起VEGF水平中的显著增加和白介素-1A(IL1A)水平中的显著减少。

图2显示了饮食EGCg补充对老年SD大鼠腓肠肌肌肉标记物的作用。

图3显示了腓肠肌裂解物的条形图和蛋白质印迹分析结果的组合，显示与对照相比较，EGCg补充SpragueDawley大鼠中的肌肉生长抑制素水平中的减少。

图4显示了C₂C₁₂肌管裂解物的条形图和蛋白质印迹分析结果的组合，显示在血清饥饿的EGCg补充C₂C₁₂肌管中的肌肉生长抑制素水平中的减少。

详述

提供了减少有需要的受试者中的肌肉功能下降的方法，和改善有需要的受试者中的肌肉功能的方法。该方法包括给有需要的受试者施用表没食子儿茶素-3-没食子酸酯(EGCg)，其量有效实现下述中的至少一种：(1)肌肉VEGF水平中的增加；(2)肌肉脉管系统中的增加；(3)肌血流量中的增加；(4)肌肉生长抑制素水平中的减少；和(5)肌肉生长抑制素活性的抑制。在某些实施方案中，该方法包括施用作为营养组合物的部分的EGCg。

如本文所示的术语仅用于描述实施方案的目的，并且不应解释为限制整体公开内容。除非另有说明，否则“一个/种”、“一个/种”、“该/所述”和“至少一个/种”可互换使用。此外，如说明书和所附权利要求中使用的，单数形式“一个/种”、“一个/种”和“该/所述”包括其复数形式，除非上下文另有明确说明。

如本文使用的，除非另有说明，否则术语“营养组合物”指以各种形式的营养产品，包括但不限于液体、固体、粉末、半固体、半液体、营养补充剂、以及本领域中已知的任何其他的营养食物产品。以粉末形式的营养组合物通常可进行重构，以形成以液体形式的营养组合物。在某些实施方案中，营养组合物包含至少一种蛋白质来源，其量足以提供6克至50克蛋白质/份。在某些其他实施方案中，营养组合物进一步包含至少一种碳水化合物来源、至少一种脂肪来源或两者。本文公开的营养组合物一般适合于由人经口消耗。

如本文使用的，除非另有说明，否则术语“受试者”指哺乳动物，包括伴侣动物、家畜、实验室动物、工作动物、运动动物和人。在某些实施方案中，受试者是人。

如本文使用的，除非另有说明，否则术语“有需要的受试者”指至少部分由于年龄、不活动、损伤、疾病或其组合，而显示出肌肉损失的受试者。在某些实施方案中，有需要的受试者中的肌肉损失至少部分可归于增加的肌肉蛋白质降解、减少的肌肉蛋白质合成、减少的肌肉再生或其组合。在某些实施方案中，有需要的受试者是老年人，任选不活动的老年人，任选患病的老年人，且任选不活动和患病两者。在某些实施方案中，有需要的受试者是由于残疾、临时损伤、或从手术愈合，而经历临时或永久不活动期的人。在某些实施方案中，有需要的受试者是由于疾病、损伤、手术、入院及其组合，而经历康复(即躯体康复)的人。在某些实施方案中，由于内皮素依赖性肌血流量的减弱或其他机制，有需要的受试者具有减少的肌内血流量。在某些实施方案中，有需要的受试者是患有慢性疾病状况(例如癌症恶病质、慢性阻塞性肺病(COPD)或晚期肾病)的人。在某些实施方案中，有需要的受试者是经历使用糖皮质激素的治疗延长时间段的人。在某些实施方案中，有需要的受试者是患有肌肉疾病例如肌营养不良的人。

如本文使用的，术语“老人”指至少45岁的个体，包括至少50岁、至少55岁、至少60岁、至少65岁、至少70岁、至少75岁，并且包括至少80岁或更大的个体。术语“老人”还包括45岁到100岁的组，以及55岁到80岁的组。

如本文使用的，除非另有说明，否则术语“施用(administer)”、“施用(administering)”、“施用(administered)”和“施用(administration)”应理解为包括给受试者提供活性成分(或含有活性成分的营养产品)，消耗活性成分的动作及其组合。另外，应当理解本文公开的方法(例如施用)可以连同或不连同医生监督或其他医学指导进行实践。

如本文使用的，除非另有说明，否则术语“有效量”指实现下述中的至少一种的活性成分(例如EGCg)的足够量：(1)肌肉VEGF水平中的增加；(2)肌肉脉管系统中的增加；(3)肌血流量中的增加；(4)肌肉生长抑制素水平中的减少；和(5)肌肉生长抑制素活性的抑制；并且显示出治疗效应(例如维持肌肉功能、改善肌肉功能、减弱肌肉功能下降)。需要的确切量从受试者到受试者不等，取决于特定受试者的物种、年龄、重量、生活方式和一般状况。

如本文使用的，除非另有说明，否则术语“营养液”指以现成可饮的液体形式、浓缩的液体形式的营养组合物、以及在使用前通过重构本文描述的营养粉末制成的营养液。营养液还可以配制为悬浮液、乳状液、溶液等等。

如本文使用的，除非另有说明，否则术语“营养粉末”和“可重构粉末”指以可流动或可舀取形式的营养组合物，其可以在消耗前用水或另一种水性液体重构，并且包括喷雾干燥和干混合/干掺和粉末。

如本文使用的，除非另有说明，否则术语“营养半固体”指在特性例如刚性中是在固体和液体之间中等的营养产品。一些半固体实例包括布丁、酸奶、凝胶、明胶和面团。

如本文使用的，除非另有说明，否则术语“营养半液体”指在特性例如流动特性中是在液体和固体之间中等的营养组合物。一些半固体实例包括厚奶昔、液体酸奶和液体凝胶。

如本文使用的，除非另有说明，否则术语“份”预期解释为在一次就餐中或者在一小时或更少时间内，由受试者消耗的任何量。

如本文使用的，除非另有说明，否则术语“肌肉”指骨骼肌和其他非骨骼肌、横纹肌例如横膈膜、眼外肌等等。

如本文使用的，除非另有说明，否则术语“肌内的”指包含骨骼肌群的所有细胞部分，包括但不限于肌纤维、成肌细胞、卫星细胞、神经元、内皮细胞、周细胞、单核细胞、巨噬细胞、脂肪细胞和成纤维细胞。

如本文使用的，除非另有说明，否则术语“肌肉质量”指如通过肌重量、质量、面积或体积表示的肌肉或肌群的量或大小。肌肉质量还可以表示为总瘦体质量、机体区室例如腿的瘦体质量、或者腿或臂区室的横截面积。使用提供肌肉面积、体积或质量的任何已知或在其他方面有效的技术，例如DEXA，或使用视觉或成像技术，例如MRI或CT扫描，可以测定肌肉的体积或质量。

如本文使用的，除非另有说明，否则术语“肌肉萎缩”指肌肉质量的损失(也称为肌肉消瘦)。肌肉萎缩可以由正常衰老(例如肌少症)、不活动(例如肌肉废用或不动)或疾病相关性病症(例如恶病质)引起。

如本文使用的，除非另有说明，否则术语“肌肉强度”指肌肉或肌群总和可以发挥的力量。肌肉强度可以通过各种方法进行评估，例如握力、一次重复最大值强度试验、肌肉耐力的时间依赖性测试、肌肉疲劳的时间依赖性测试、或肌肉耐力和疲劳的时间依赖性测试等等。

如本文使用的，除非另有说明，否则术语“肌肉功能”指肌肉质量和肌肉强度中的至少一种。

如本文使用的，在根据某一方案或时间表给受试者提供营养组合物或一定量的活性成分(例如EGCg)的背景下，术语“提供”应理解为反映受试者已得到指示施用活性成分，并且实际上对于在方案或时间表的所需时期过程中的至少70%天数，施用营养组合物或一定量的活性成分。在其他实施方案中，根据某一方案或时间表给受试者提供营养组合物或一定量的活性成分(例如EGCg)，应理解为反映受试者已得到指示施用活性成分，并且实际上对于在方案或时间表的所需时期过程中的至少90%天数，施用营养组合物或一定量的活性成分。

如本文使用的，术语“VEGF”指血管内皮生长因子A(即VEGF-A)。

在一个示例性实施方案中，提供了减少有需要的受试者中的肌肉功能下降的方法。该方法包括给有需要的受试者施用表没食子儿茶素-3-没食子酸酯(EGCg)，其量有效增加肌肉VEGF水平、肌肉脉管系统或肌血流量中的至少一种，并且从而减少受试者中的肌肉功能下降。

在一个示例性实施方案中，提供了减少有需要的受试者中的肌肉功能下降的方法。该方法包括给有需要的受试者施用表没食子儿茶素-3-没食子酸酯(EGCg)，其量有效减少受试者中的肌肉生长抑制素水平，并且从而减少受试者中的肌肉功能下降。

在一个示例性实施方案中，提供了改善有需要的受试者中的肌肉功能的方法。该方法包括给有需要的受试者施用表没食子儿茶素-3-没食子酸酯(EGCg)，其量有效增加肌肉VEGF水平、肌肉脉管系统或肌血流量中的至少一种，并且从而改善受试者中的肌肉功能。

在一个示例性实施方案中，提供了改善有需要的受试者中的肌肉功能的方法。该方法包括给有需要的受试者施用表没食子儿茶素-3-没食子酸酯(EGCg)，其量有效减少受试者中的肌肉生长抑制素水平，并且从而改善受试者中的肌肉功能。

在一个示例性实施方案中，提供了在有需要的受试者中减少肌肉功能下降、改善肌肉功能或两者的方法。该方法包括给有需要的受试者施用表没食子儿茶素-3-没食子酸酯(EGCg)，其量有效：(a)增加下述中的至少一种：(i)肌肉VEGF水平；(ii)肌肉脉管系统；和(iii)肌血流量；(b)减少有需要的受试者中的肌肉生长抑制素水平；以及(c)(a)和(b)的组合；并且从而在有需要的受试者中减少肌肉功能下降、改善肌肉功能或两者。

在一个示例性实施方案中，提供了在有需要的受试者中用于减少肌肉功能下降、改善肌肉功能或两者的营养组合物。营养组合物包含至少一种蛋白质来源，其量足以提供6克至50克蛋白质/份，和0.1克至3克表没食子儿茶素-3-没食子酸酯(EGCg)/份。有需要的受试者消耗营养组合物导致下述中的至少一种：(1)肌肉VEGF水平中的增加；(2)肌肉脉管系统中的增加；(3)肌血流量中的增加；(4)肌肉生长抑制素水平中的减少；和(5)肌肉生长抑制素活性的抑制。相应地，营养组合物的消耗可以在有需要的受试者中减少肌肉功能下降、改善肌肉功能或两者。

根据某些示例性实施方案，本文描述的方法包括施用有效增加有需要的受试者中的肌肉(即肌内)VEGF水平的量的EGCg。VEGF是脉管系统中的循环蛋白质，其介导血管通透性且诱导血管生成。另外，VEGF帮助控制基底肌肉毛细血管化，且调节锻炼诱导的血管生成。此外，在肌细胞中VEGF和VEGF途径基因的表达增加促成肌源性分化。因此，肌肉VEGF水平中的增加可以经由血管生成来增加肌肉脉管系统、肌血流量和肌肉氧合，并且从而减少肌肉功能下降、改善肌肉功能或两者。另外，肌肉VEGF水平中的增加通过促进循环呼吸细胞的摄取来改善肌肉愈合，并且还改善肌肉生长，并且从而减少肌肉功能下降、改善肌肉功能或两者。

根据某些示例性实施方案的方法包括施用有效减少有需要的受试者中的肌肉生长抑制素水平的量的EGCg。肌肉生长抑制素(也称为生长分化因子‐8，GDF‐8)是占优势地在骨骼肌中表达的分泌细胞因子，其调节肌肉再生和肥大，以及反对某些生长因子的作用。具体地，肌肉生长抑制素部分负面调节肌肉质量、肥大和再生，以阻止肌肉组织的异常生长。例如，肌肉生长抑制素与浆细胞膜处的激活素受体结合，并且起始一系列下游信号传导级联，其：1)活化MAPK信号传导，导致肌生成-促进基因表达程序(例如myoD和肌形成蛋白)的抑制；和2)抑制Akt磷酸化，导致FoxO依赖性蛋白质降解的活化和细胞周期蛋白D1(细胞分裂调节物)的抑制。

已假设肌肉生长抑制素随着年龄增长而负面调节肌肉再生和生长。在一项特别研究中，发现与年轻(19‐35岁)女性和男性相比较，血清肌肉生长抑制素在年长(60‐92岁)女性和男性中是增加的。(Yarasheski等人，J.Nutr.HealthAging，6，343‐348(2002))。在相同研究中，血清肌肉生长抑制素也与老年受试者中的无脂肪质量和肌肉质量负关联。

此外，肌肉生长抑制素对肌肉再生的作用已在鼠模型中得到证实。例如，肌肉生长抑制素缺乏显示为导致在由于心脏毒素的急性损伤后更显著的再生性肌肉应答。(Wagner等人，Proc.Natl.Acad.Sci.U.S.A.，102，2519‐2524(2005))。在该项相同研究中，来自肌肉生长抑制素敲除小鼠的肌肉祖细胞显示为以比来自同窝对照的那些更高的速率增殖。另外的研究已显示肌肉生长抑制素的抑制增强肌肉祖细胞活化和增殖，或肌肉生长抑制素的施用抑制肌肉祖细胞活化和增殖。(Joulia等人，Exp.CellRes.，286，263‐275(2003))。此外，肌肉生长抑制素缺乏阻止肌肉萎缩，且阻断在小鼠中的地塞米松处理后糖皮质激素诱导的蛋白水解酶的表达。(Gilson等人，Endocrinology，148，452‐460(2007))。

相应地，抑制或减少肌肉中的肌肉生长抑制素表达促进肌肉再生和肌肉肥大。改善的肌肉再生和肥大可以导致肌肉质量和肌肉强度中的增加，并且从而减少肌肉功能下降、改善肌肉功能或两者。

EGCg是显示出抗氧化和抗炎特性的多酚，更具体而言黄烷-3-醇或儿茶素。如本文使用的，术语“EGCg”指表没食子儿茶素-3-没食子酸酯或其来源。一般地，EGCg是绿茶中存在的最丰富的多酚。许多研究已调查绿茶儿茶素并且特别是EGCg的治疗用途，并且已发现EGCg和绿茶儿茶素显示出抗血管生成(和因此抗肿瘤发生)活性，且抑制VEGF产生。相应地，依照本文公开的方法通过施用EGCg实现的肌肉VEGF水平中的增加是出乎意料和令人惊讶的结果。另外，本发明人已发现有效量的EGCg(或其来源)的施用减少肌肉生长抑制素水平，其依次又减少肌肉功能下降、改善肌肉功能或两者。

依照本文公开的方法，EGCg可以在合适组合物(例如营养组合物)中配制，并且随后，依照本文描述的方法，以适合所选择的施用途径的形式施用于受试者。根据本文公开的方法的组合物包括适合于经口施用的那些。如本文定义的，经口施用包括其中EGCg经过受试者食道的任何施用形式。例如，经口施用包括插鼻管，其中管从受试者的鼻运行到胃，以施用食物或药物。

含有EGCg的药物和营养组合物在本文中还可以被称为药剂。例如，EGCg可以用于制备药剂用于治疗需要肌肉功能改善的受试者。

在某些示例性实施方案中，EGCg经口施用于受试者。一般地，有效量的EGCg可以以适合于由受试者经口消耗的任何形式提供。例如，EGCg可以作为囊片、片剂、丸剂、胶囊、咀嚼片、速溶片剂、泡腾片剂、溶液、悬浮液、乳状液、多层片剂、双层片剂、软明胶胶囊、硬明胶胶囊、锭剂、可咀嚼锭剂、珠、颗粒剂、颗粒、微粒、可分散颗粒剂、扁囊剂及其组合提供。根据某些示例性实施方案，EGCg作为营养组合物的部分提供，所述营养组合物将在下文更详细地讨论。

与本文公开的方法结合使用的EGCg可以通过天然或合成来源提供。用于本文公开的方法中的合适EGCg来源是基于绿茶的来源，包括但不限于绿茶提取物，其中单独或与其他多酚化合物(例如黄烷-3-醇)组合的EGCg作为提取物从绿茶中分离。此类合适的绿茶提取物的实例呈具有高浓度多酚的液体、固体(例如粉末)及其混合物的形式。在其中利用绿茶提取物的某些实施方案中，提取物是脱咖啡因的，使得它含有按重量计小于1%咖啡因，或甚至按重量计小于0.5%咖啡因。除含有EGCg之外，与本文公开的方法结合使用的合适绿茶提取物可以含有其他多酚，包括其他黄烷-3-醇，例如儿茶素(例如(+)-儿茶素，也称为“C”)、表儿茶素(“EC”)、没食子儿茶素(“GC”)、表没食子儿茶素(“EGC”)、和表儿茶素没食子酸酯(“ECg”)及其立体异构体；黄酮例如芹菜素、异牡荆苷(isoviloxin)、皂草素(sapotarin)和文赛宁-2(vicenin-2)；黄酮醇例如山奈酚(kaempherol)、槲皮素和杨梅素；浓缩类黄酮；和单宁酸糖苷。相应地，在某些示例性实施方案中，除EGCg之外，受试者施用选自C、EC、GC、EGC和ECg的一种或多种黄烷-3-醇。另外，在某些示例性实施方案中，EGCg、C、EC、GC、EGC和ECg作为营养组合物的部分施用。

在某些示例性实施方案中，可以利用除基于绿茶的来源外的EGCg来源。这些来源包括但不限于基于乌龙茶的来源，例如乌龙茶、乌龙茶提取物等；基于白茶的来源，例如白茶、白茶提取物等；抹茶(matchatea)、抹茶提取物等；黄茶、黄茶提取物等；以及黑茶(即中国黑茶)、黑茶提取物等。

在某些示例性实施方案中，EGCg至少部分通过绿茶提取物提供。在某些示例性实施方案中，当EGCg作为绿茶提取物的部分提供时，绿茶提取物含有按重量计至少20%EGCg。在其他实施方案中，当EGCg作为绿茶提取物的部分提供时，绿茶提取物含有按重量计至少45%EGCg。在某些示例性实施方案中，EGCg至少部分通过绿茶提取物提供，所述绿茶提取物含有按重量计20-100%EGCg。在某些示例性实施方案中，EGCg作为绿茶提取物的部分提供，所述绿茶提取物含有按重量计45-100%EGCg，包括按重量计50-100%EGCg，包括按重量计60-100%EGCg，包括按重量计70-100%EGCg，包括按重量计80-100%EGCg，以及还包括按重量计90-100%EGCg。作为绿茶提取物的部分提供的商购可得EGCg来源的实例包括Teavigo?(>90%EGCg)(DSM，Netherlands)和Sunphenon?90D(TaiyoInternational，Inc.，Minneapolis，Minnesota)。

依照本文公开的方法，包括有效量的EGCg的组合物，例如绿茶提取物或含有EGCg的营养组合物可以经过一段时间，在一个或多个剂量或份中提供给有需要的受试者。在根据本文公开的方法的某些实施方案中，有效量的EGCg以两个剂量或份/天提供给或施用于有需要的受试者。在根据本文公开的方法的其他实施方案中，有效量的EGCg(或其来源)以多(例如二、三、四或更多)份/天提供给或施用于有需要的受试者。在某些其他实施方案中，在清醒2小时内、在睡觉2小时内、或在清醒2小时和睡觉2小时两者内，将有效量的EGCg(或其来源)提供给或施用于有需要的受试者。

依照本文公开的方法，有效量的EGCg(或其来源)可以一次或多次/天施用于有需要的受试者(或由其消耗)，持续适合实现所需效应的时期。例如，包含有效量的EGCg的组合物可以持续至少一周每天、持续至少两周每天、持续至少一个月每天、持续至少6个月每天、或者持续一年或更久每天施用于有需要的受试者。作为另一个实例，包含有效量的EGCg的组合物可以持续至少一周每天两次、持续至少两周每天两次、持续至少一个月每天两次、持续至少6个月每天两次、或者持续一年或更久每天两次施用于有需要的受试者。在给受试者提供剂量的背景下，每天预期反映受试者得到指示每天施用EGCg(或EGCg来源)，并且实际上对于在所需施用时期过程中的至少70%(和在某些实施方案中，至少90%)天数，施用EGCg。

在某些示例性实施方案中，长期施用有效量的EGCg(或其来源，或者含有EGCg或其来源的组合物)。在一个实施方案中，“长期施用”指无限期提供的有规律施用。在其他实施方案中，该术语指显著时间段的有规律施用。例如，在不同实施方案中，长期施用可以包括至少一个月的有规律施用、至少6周的有规律施用、至少两个月的有规律施用、至少3个月的有规律施用、至少4个月的有规律施用、至少5个月的有规律施用、至少6个月的有规律施用、或至少9个月的有规律施用。在进一步的实施方案中，长期施用指至少1年的有规律施用、至少1.5年的有规律施用、至少2年的有规律施用、或超过2年的有规律施用。“有规律施用”指根据其中预期有需要的受试者以有规律间隔接受EGCg(或其来源)的时间表的施用。

如本文使用的，“有规律间隔”指以重复、周期性方式的施用，其中施用之间的时间大致(或预期大致)相同。在多个实施方案中，以有规律间隔的施用包括每天施用或每周施用。在进一步的实施方案中，该术语指施用1-2次/周、施用1-3次/周、施用2-3次/周、施用1-4次/周、施用1-5次/周、施用2-5次/周、施用3-5次/周、施用1-6次/周、施用1-7次/周、施用2-6次/周、施用2-7次/周、施用1-2次/天、施用1-3次/天、施用1-4次/天、施用2-3次/天、施用2-4次/天、施用3-4次/天、施用2-5次/天、施用3-5次/天、或施用4-5次/天。

在某些示例性实施方案中，施用的EGCg总量范围为0.1g/天至3g/天，包括0.5g/天至2.5g/天，并且还包括1g/天至2g/天。在某些示例性实施方案中，施用的EGCg总量范围为0.05g/份至1.5g/份，包括0.1g/份至1.25g/份，并且还包括0.5g/份至1g/份。在某些实施方案中，EGCg总量以两份/天提供。在某些实施方案中，EGCg的有效量对应于施用于有需要的受试者的EGCg总量(例如0.1g/天至3g/天以及其他先前提及的量)。如先前提及的，EGCg的有效量指实现下述中的至少一种的EGCg的足够量：(1)肌肉VEGF水平中的增加；(2)肌肉脉管系统中的增加；(3)肌血流量中的增加；(4)肌肉生长抑制素水平中的减少；和(5)肌肉生长抑制素活性的抑制；并且显示出疗效(例如维持肌肉功能、改善肌肉功能、减弱肌肉功能下降)。另外，实现所需效应需要的EGCg的确切量将取决于特定受试者而改变。

如上所述，根据某些示例性实施方案，EGCg作为营养组合物的部分提供。在某些实施方案中，营养组合物配制为任何已知或在其他方面合适的经口产品形式，并且预期用于以任何已知或在其他方面合适的经口产品形式消耗。任何固体、液体、半固体、半液体或粉末产物形式，包括其组合或变化，适合于本文使用，条件是还如本文定义的，此类形式允许经由成分的经口消耗，对受试者的安全和有效的经口递送。

在某些示例性实施方案中，营养组合物是固体营养产品。固体营养产品的非限制性实例包括零食和膳食替代产品，包括配制成条、棒、饼干或面包或蛋糕或其他烘焙食品、冷冻液体、糖果、早餐谷物、粉末或颗粒状固体或其他微粒、零食片或口咬物(bites)、冷冻或蒸馏主菜等等的那些。在某些示例性实施方案中，当营养组合物是固体产品时，份在25克至150克的范围内。

在某些示例性实施方案中，营养组合物是营养液。营养液的非限制性实例包括零食和膳食替代产品、热或冷饮料、碳酸或非碳酸饮料、果汁或其他酸化饮料、基于乳或大豆的饮料、奶昔、咖啡、茶、用于通过插鼻管施用的组合物等等。一般地，营养液配制为悬浮液或乳状液，但营养液也可以以任何其他合适形式配制，例如澄清液体、溶液、液体凝胶、液体酸奶等等。

在其中营养组合物是液体的某些实施方案中，份在30毫升至500毫升(~1液体盎司至~17液体盎司)的范围内。在其中营养组合物是液体的某些实施方案中，份为237毫升(~8液体盎司)。在其中营养组合物是液体的某些实施方案中，份为125毫升(~4液体盎司)。在其中营养组合物是液体的其他实施方案中，份为177毫升至417毫升(~6液体盎司至~14液体盎司)。在其中营养组合物是液体的另外其他实施方案中，份为207毫升至266毫升(~7液体盎司至~9液体盎司)。在其中营养组合物是液体的另外其他实施方案中，份为30毫升至75毫升(~1液体盎司至~2.5液体盎司)。在其中营养组合物作为液体施用的某些实施方案中，每周给受试者施用一份至14份营养组合物。

在某些示例性实施方案中，营养组合物可以配制为半固体或半液体组合物(例如布丁、凝胶、酸奶等)，以及更常规的产品形式例如胶囊、片剂、囊片、丸剂等等。在其他实施方案中，营养组合物可以呈锭剂、片剂(例如可咀嚼的、包被的)、糊剂、凝胶或酸奶的形式。

本文公开的营养组合物可用于提供唯一的、主要的或补充性的营养来源，以及提供如本文描述的益处中的一种或多种。相应地，本文公开的营养组合物可以包括一种或多种大量营养素。例如，在某些示例性实施方案中，营养组合物包含至少一种脂肪来源、至少一种碳水化合物来源和至少一种蛋白质来源。在某些示例性实施方案中，营养组合物包含至少一种蛋白质来源、至少一种碳水化合物来源，但不包含脂肪来源(尽管营养组合物可以包含来自例如蛋白质来源的固有的痕量脂肪)。在某些示例性实施方案中，营养组合物提供高达1000千卡能量/份或剂量，包括20千卡至900千卡、25千卡至700千卡、50千卡至500千卡、100千卡至450千卡、或150千卡至400千卡/份。

依照某些示例性实施方案，营养组合物包含至少一种蛋白质来源，其量足以提供6克至50克蛋白质/份营养组合物。在某些示例性实施方案中，营养组合物包含6克至50克蛋白质/份，包括9克至40克蛋白质，包括9克至35克蛋白质，并且还包括9克至30克蛋白质/份。在某些其他示例性实施方案中，至少一种蛋白质来源占按营养组合物的重量计1%-40%，包括按组合物的重量计5%-30%，包括10%-25%，包括15%-20%，并且还包括1%-5%。可以使用广泛多样的蛋白质来源，只要它适用于经口营养组合物，并且在其他方面与营养组合物中的任何其他所选成分或特点相容。在某些示例性实施方案中，至少一种蛋白质来源可以包括已知用于营养产品中的氨基酸(通常描述为游离氨基酸)混合物，包括本文描述的氨基酸，或此类氨基酸与本文描述的完整的、水解的和部分水解的蛋白质的组合。氨基酸可以是天然存在的或合成氨基酸、或其组合。

蛋白质来源可以包括但不限于完整的、水解的和部分水解的蛋白质，其可以衍生自任何已知的或在其他方面合适的来源，例如乳(例如酪蛋白、乳清)、动物(例如肉、鱼)、谷物(例如稻、玉米)、蔬菜(例如大豆、豌豆)、昆虫(例如蟋蟀、蝗虫)及其组合。蛋白质来源的非限制性实例包括乳清蛋白浓缩物、乳清蛋白分离物、乳清蛋白水解产物、酸性酪蛋白、酪蛋白酸钠、酪蛋白酸钙、酪蛋白酸钾、酪蛋白水解产物、乳蛋白浓缩物、乳蛋白分离物、乳蛋白水解产物、脱脂奶粉、浓缩脱脂乳、大豆蛋白浓缩物、大豆蛋白分离物、大豆蛋白水解产物、豌豆蛋白浓缩物、豌豆蛋白分离物、豌豆蛋白水解产物、胶原蛋白、胶原蛋白浓缩物、胶原蛋白分离物、昆虫蛋白、蚯蚓蛋白及其组合。另外，足以提供6克至50克蛋白质/份的量的至少一种蛋白质来源可以包含在上文呈现的非限制性列表中提供的任何一种蛋白质来源或各种蛋白质来源的任何组合。

在某些示例性实施方案中，当营养组合物配制为具有范围为2至5的pH的澄清液体营养产品时，适用于澄清液体营养产品中的蛋白质来源选自乳清蛋白分离物、乳清蛋白浓缩物、乳清蛋白水解产物、酪蛋白水解产物、大豆蛋白水解产物、豌豆蛋白水解产物、胶原蛋白、胶原蛋白分离物、大豆蛋白分离物、昆虫蛋白分离物及其组合。这些特定蛋白质来源适用于澄清液体营养产品中，因为它们在较低pH范围下是可溶的，其允许液体营养产品提供所需蛋白质量，仍保持澄清。另外，在某些实施方案中，适用于澄清液体营养产品中的蛋白质来源可以提供6克至50克蛋白质/份，并且可以包含在用于澄清液体营养产品中的合适蛋白质的非限制性列表中提供的任何一种蛋白质来源或各种蛋白质来源的任何组合。

除至少一种蛋白质来源之外，在某些示例性实施方案中，营养组合物进一步包含至少一种碳水化合物来源、或至少一种脂肪来源或其组合。因此，在某些实施方案中，营养组合物进一步包含至少一种碳水化合物来源，而在其他实施方案中，营养组合物进一步包含至少一种脂肪来源，并且再在其他实施方案中，营养组合物进一步包含至少一种碳水化合物来源和至少一种脂肪来源。

在某些示例性实施方案中，营养组合物进一步包含至少一种碳水化合物来源。在其中营养组合物包含至少一种碳水化合物来源的一些示例性实施方案中，至少一种碳水化合物来源占按营养组合物的重量计10%-80%，包括按营养组合物的重量计30%-60%，并且还包括50%-70%。在其他示例性实施方案中，营养组合物包含15克至110克至少一种碳水化合物来源/份。在其他示例性实施方案中，营养组合物包含25克至90克至少一种碳水化合物来源/份，包括40克至65克至少一种碳水化合物来源/份，并且还包括45克至55克至少一种碳水化合物来源/份。

适用于本文公开的营养组合物的某些实施方案中的至少一种碳水化合物来源可以是简单的、复杂的、或其变化或组合。一般地，可以使用任何碳水化合物来源，只要它适用于经口营养组合物，并且在其他方面与营养组合物中存在的任何其他所选成分或特点相容。适用于本文描述的营养组合物的碳水化合物来源的非限制性实例包括麦芽糖糊精、水解或改性淀粉或玉米淀粉、葡萄糖聚合物、玉米糖浆、玉米糖浆固体、稻衍生的碳水化合物、蔗糖、葡萄糖、果糖、乳糖??、高果糖玉米糖浆、蜂蜜、糖醇(例如麦芽糖醇、赤藓醇、山梨糖醇)、异麦芽酮糖、舒可慢(sucromalt)、支链淀粉、马铃薯淀粉及其他缓慢消化的碳水化合物、膳食纤维包括但不限于低聚果糖(FOS)、低聚半乳糖(GOS)、燕麦纤维、大豆纤维、阿拉伯树胶、羧甲基纤维素钠、甲基纤维素、瓜尔胶、结冷胶、刺槐豆胶、魔芋粉、羟丙基甲基纤维素、黄蓍胶、刺梧桐树胶、金合欢树胶、壳聚糖、阿拉伯半乳聚糖(arabinoglactins)、葡甘露聚糖、黄原胶、海藻酸盐、果胶、低和高甲氧基果胶、谷物β-葡聚糖(例如燕麦β-??葡聚糖、大麦β-葡聚糖)、角叉菜胶、车前子、消化抗性麦芽糖糊精(例如可得自ADM/Matsutani，LLC(Iowa，USA)的Fibersol^?-2)、其他抗性淀粉及其组合。

在某些示例性实施方案中，营养组合物进一步包含至少一种脂肪来源。在其他示例性实施方案中，营养组合物不包含脂肪，或基本上不包含脂肪(即小于0.5克脂肪/份)。在其中营养组合物含有脂肪的某些示例性实施方案中，营养组合物包含0.5克至45克至少一种脂肪来源/份。在其他示例性实施方案中，营养组合物包含5克至35克至少一种脂肪来源/份，包括10克至30克至少一种脂肪来源/份，并且还包括15克至25克至少一种脂肪来源/份。在其中营养组合物包含至少一种脂肪来源的某些示例性实施方案中，至少一种脂肪来源占按营养组合物的重量计1%-30%，包括按营养组合物的重量计5%-25%，包括按营养组合物的重量计10%-20%，并且还包括按营养组合物的重量计12%-18%。

一般而言，可以使用任何脂肪来源，只要它适用于经口营养组合物，并且在其他方面与营养组合物中存在的任何其他所选成分或特点相容。脂肪来源可以衍生自植物、动物及其组合。用于本文描述的营养组合物中的合适脂肪来源的非限制性实例包括椰子油、分馏椰子油、大豆油、玉米油、橄榄油、红花油、高油酸红花油、高γ-亚麻酸(GLA)红花油、中链甘油三酯(MCT)油、向日葵油、高油酸向日葵油、棕榈和棕榈仁油、棕榈油精、芥花油、鱼油、棉籽油、二十碳五烯酸、二十二碳六烯酸、γ-亚麻酸、来自任何来源的共轭亚麻酸及其组合。

在某些示例性实施方案中，营养组合物进一步包含一种或多种功能成分，其增加肌肉蛋白质合成、或减少肌肉蛋白质降解、或降低肌肉坏死或细胞凋亡或其组合。例如，在某些示例性实施方案中，营养组合物进一步包含选自下述的功能成分：选自亮氨酸、异亮氨酸、缬氨酸的支链氨基酸，前述支链氨基酸中任一种的代谢产物及其组合；β-羟基-β-甲基丁酸酯(HMB)；β-丙氨酸；维生素D；肌酸；肉毒碱；肌肽；鹅肌肽；牛磺酸；α-羟基异戊酸；α-酮戊二酸盐；α-酮异己酸盐；α-羟基异己酸；瓜氨酸；精氨酸；及其组合。

在某些示例性实施方案中，营养组合物包含选自亮氨酸、异亮氨酸、缬氨酸的支链氨基酸，前述中任一种的代谢产物及其组合。支链氨基酸已显示为促进人骨骼肌中的阳性蛋白质平衡，并且相应地可以用于维持肌肉功能、改善肌肉功能或两者。

在某些示例性实施方案中，营养组合物包含β-羟基-β-甲基丁酸酯(HMB)。如本文使用的，术语HMB和β-羟基-β-甲基丁酸酯应理解为包括多重形式，包括但不限于盐、游离酸、酯和内酯，除非根据上下文明确仅意指一种形式。HMB是必需氨基酸亮氨酸的代谢产物，并且已显示增强肌肉质量和肌肉功能。可以利用的一种合适的HMB形式是HMB的钙盐，也指名为Ca-HMB，其最通常为一水合物钙盐。使用的HMB可以来自任何来源。HMB钙一水合物由SaltLakeCity，Utah的TechnicalSourcingInternational(TSI)商购可得。应当指出本文描述的所有HMB量均基于Ca-HMB的使用。当本文提及HMB的量时，该量基于HMB作为Ca-HMB提供的假设，除非另有具体说明。可以利用的其他合适的HMB形式包括但不限于游离酸、盐、无水盐、酯、内酯或其他产品形式，其提供适于经口施用的生物可利用形式的HMB。用于本文使用的合适的HMB盐(水合或无水的)的非限制性实例包括钠、钾、铬、钙以及其他无毒盐形式。

在某些示例性实施方案中，营养组合物包含0.4克至4克HMB/份。例如，在某些实施方案中，营养组合物包含0.5克至3.5克HMB/份，包括0.5克至2.5克HMB/份，包括1克至2克HMB/份，并且还包括1克至1.5克HMB/份。在某些实施方案中，营养组合物包含1.5克HMB/份。在其中营养组合物是液体的某些其他实施方案中，营养组合物中的HMB量范围可以为按营养组合物的重量计高达10%，包括按营养组合物的重量计0.01%-10%，包括0.1%-5.0%，包括0.5%-2%，并且还包括0.4%-1.5%。

在某些示例性实施方案中，营养组合物包含β-丙氨酸。β-丙氨酸是天然存在的β氨基酸，其是肌肽的限速前体。β-丙氨酸的饮食补充已显示增加肌肉中的肌肽浓度、延迟运动员中的疲劳，并且增加完成的总肌肉工作。在某些示例性实施方案中，营养组合物包含0.1克至10克β-丙氨酸/份。在某些示例性实施方案中，营养组合物包含0.1克至6克β-丙氨酸/份，包括1克至4克β-丙氨酸/份，包括1克至3.5克β-丙氨酸/份，包括1克至2克β-丙氨酸/份，并且还包括1.5克β-丙氨酸/份。在其中营养组合物包含β-丙氨酸的某些实施方案中，营养组合物中的β-丙氨酸量范围可以为按营养组合物的重量计0.1%-5%，包括按营养组合物的重量计0.1%-2%，包括0.1%-1%，并且还包括0.1%-0.5%。

β-丙氨酸可以以各种形式提供。例如，β-丙氨酸可以以游离形式或作为衍生物(例如盐、酯、内酯)提供。本文提及的所有β-丙氨酸量指游离β-丙氨酸或盐、酯、内酯等的β-丙氨酸部分。基本上任何β-丙氨酸来源均适用于本文描述的营养组合物的某些实施方案中。在某些示例性实施方案中，β-丙氨酸是游离β-丙氨酸。游离β-丙氨酸由Lonza(瑞士)和CompoundsSolutions(Escondido，California)商购可得。

在某些示例性实施方案中，营养组合物包含维生素D。维生素D是脂溶性维生素，其在少数食物中天然发现，但在人体中在暴露于日光后合成。如本文使用的，“维生素D”指维生素D2、维生素D3或其组合。维生素D的饮食补充已显示增加肌肉质量和骨骼肌蛋白质合成。此外，维生素D可以通过活化下述中的一种或多种来改善骨骼肌收缩：蛋白质激酶A、蛋白质激酶B、蛋白质激酶C、CAMK、MAPK和维生素D受体途径。在某些示例性实施方案中，营养组合物包含100-750IU维生素D/份，包括200-600IU，包括350-550IU，并且还包括500IU维生素D/份。

在某些示例性实施方案中，除有效量的EGCg之外，营养组合物还包含至少一种蛋白质来源、HMB和维生素D的组合。例如，在某些示例性实施方案中，营养组合物包含(每份)15克至25克蛋白质、1克至3克HMB、100IU至750IU维生素、以及有效量的EGCg。此外，在某些其他实施方案中，营养组合物包含(每份)18克至22克蛋白质、1克至2克HMB、400IU至600IU维生素D、以及有效量的EGCg。在另外其他实施方案中，营养组合物包含(每份)20克蛋白质、1.5克HMB、500IU维生素D、以及有效量的EGCg。可以利用先前讨论的蛋白质来源中的任一种(或其组合)，并且营养组合物可以以本文讨论的各种产品形式中的任一种提供。

依照某些示例性实施方案，营养组合物配制为具有范围为2至5的pH，并且还具有按营养组合物的重量计不超过0.5%脂肪的澄清液体。对于营养组合物的某些实施方案，有限的脂肪量促成所需澄清度，并且与pH2至5相容。通常，希望为澄清的、或至少基本上半透明的液体营养组合物基本上不含脂肪。如本文使用的，“基本上不含脂肪”指营养组合物含有按总组合物的重量计小于0.5%，包括小于0.1%的脂肪。“基本上不含脂肪”还可以指本文公开的营养组合物不包含脂肪，即零脂肪。此外，具有在2至5范围内的所需酸性pH的液体营养组合物的实施方案，例如果汁、水果果汁、水果调味的饮料等，通常基本上不含脂肪。其为澄清且具有范围为2至5的pH的液体营养组合物通常也基本上不含脂肪。在先前实施方案的某些中，营养组合物的pH可以为2.5-4.6，包括3-3.5的pH。更具体而言，在某些实施方案中，当营养组合物为液体时，液体营养组合物的pH为2.5-4.6，包括3-3.5，以提供用于EGCg的更稳定pH。在基本上不含脂肪、但具有一定量脂肪存在的营养组合物的那些实施方案中，脂肪可能由于固有地存在于另一种成分(例如蛋白质来源)中而存在，或可能由于作为一种或多种分开的脂肪来源添加而存在。

在本文公开的某些示例性实施方案中，营养组合物可以进一步包含其他任选组分或成分，其可以修饰营养组合物的物理、化学、美学或加工特征，或者充当药物或另外的营养组分。许多此类任选成分是已知的或在其他方面适用于医学食物或其他营养产品或药物剂型，并且还可以用于本文公开的营养组合物中，条件是此类任选成分对于经口施用是安全的，并且与所选产品形式中的必需成分及其他成分相容。

此类任选成分的非限制性实例包括防腐剂、乳化剂、缓冲剂、低聚果糖、低聚半乳糖、聚右旋糖、益生元、益生菌、药物活性物、抗炎剂、另外的营养素、着色剂、香料、增稠剂和稳定剂、乳化剂、润滑剂等等。

在本文公开的某些示例性实施方案中，营养组合物可以进一步包含至少一种甜味剂。在某些实施方案中，至少一种甜味剂是至少一种糖醇，例如麦芽糖醇、赤藓醇、山梨醇、木糖醇、甘露糖醇、异麦芽酮糖和乳糖醇，或至少一种人工或高效甜味剂如安赛蜜K、阿斯巴甜、三氯蔗糖、糖精、甜菊糖、僧果、塔格糖及其组合。甜味剂尤其作为糖醇和人工甜味剂的组合，尤其可用于配制具有所需有利概况的液体营养组合物。这些甜味剂组合尤其在掩蔽不希望的风味中有效，例如如有时与植物蛋白质加入液体营养组合物相关的风味。在本文公开的某些示例性实施方案中，营养组合物可以包含至少一种糖醇，其浓度范围为按营养组合物的重量计至少0.01%，包括约0.1%-约10%，并且还包括约1%-约6%。在本文公开的某些示例性实施方案中，营养组合物可以包含至少一种人工甜味剂，其浓度范围为按营养组合物的重量计0.01%-5%，包括0.05%-3%，并且还包括0.1%-1.0%。

流动剂或抗结剂可以包括在营养组合物的某些实施方案中，以延缓营养粉末实施方案随着时间过去的凝集或结块，并且使得营养粉末从其容器更容易的流动。已知的或在其他方面适用于营养粉末或产品形式的任何流动剂或抗结剂均适用于本文，其非限制性实例包括磷酸三钙、硅酸盐及其组合。取决于产品形式、其他所选成分、所选流动特性等等，在本文公开的营养组合物的某些实施方案中，流动剂或抗结剂的浓度改变，但最通常范围为按营养组合物的重量计0.1%-4%，包括按营养组合物的重量计0.5%-2%。

在某些示例性实施方案中，营养组合物可以包含稳定剂。已知的或在其他方面适用于营养组合物的任何稳定剂也适用于本文，其一些非限制性实例包括树胶例如黄原胶。在本文公开的某些示例性实施方案中，稳定剂可以代表按营养组合物的重量计0.1%-5%，包括按营养组合物的重量计0.5%-3%，并且还包括0.7%-1.5%。

在某些示例性实施方案中，营养组合物包含各种维生素或相关营养素中的任一种，其非限制性实例包括维生素A、维生素C、维生素E、维生素D2、维生素D3、维生素A棕榈酸酯、维生素E乙酸酯、维生素C棕榈酸酯(棕榈酸抗坏血酸酯)、维生素K、硫胺素、核黄素、吡哆醇、维生素B12、类胡萝卜素(例如β-胡萝卜素、玉米黄质、叶黄素、番茄红素)、烟酸、叶酸、泛酸、生物素、维生素C、胆碱、肌醇、其盐和衍生物、及其组合。在另外其他实施方案中，营养组合物包含各种另外的矿物质中的任一种，其非限制性实例包括钙、硒、钾、碘、磷、镁、铁、锌、锰、铜、钠、钼、铬、氯化物及其组合。

在某些示例性实施方案中，营养组合物任选包括一种或多种掩蔽剂，以降低或以其他方式隐藏随着时间过去在营养组合物中的任何残留苦味或余味的发展。合适的掩蔽剂包括天然和人工甜味剂；钠源例如氯化钠；水胶体如瓜尔胶、黄原胶、角叉菜胶和结冷胶；及其组合。取决于所选特定掩蔽剂、制剂中的其他成分、以及其他制剂或产品靶变量，在营养组合物的某些实施方案中，掩蔽剂的量可以改变。然而，此类量最通常范围为按营养组合物的重量计0.1%-3%，包括按营养组合物的重量计0.15%-3%，并且还包括0.2%-2.5%。

通过用于制备所选产品形式例如营养固体或营养液的任何过程或合适方法(目前已知或未来已知的)，可以制备本文描述的营养组合物的多个示例性实施方案。关于任何给定产品形式例如营养液或营养粉末的许多此类技术是已知的，并且可以由本领域普通技术人员容易地应用于本文描述的营养组合物的多个实施方案。

在用于液体营养组合物的一种合适制造过程中，例如，制备至少三种分开的浆料，包括脂肪包蛋白质(PIF)浆料、碳水化合物-矿物质(CHO-MIN)浆料、和水包蛋白质(PIW)浆料。PIF浆料通过下述形成：将油(例如芥花油、玉米油)加热且混合，并且随后伴随连续加热和搅拌，加入乳化剂(例如卵磷脂)、脂溶性维生素和总蛋白质(例如乳蛋白浓缩物)的一部分。CHO-MIN浆料通过伴随加热搅拌将下述加入水中而形成：矿物质(例如柠檬酸钾、磷酸氢二钾、柠檬酸钠)、痕量和超痕量矿物质(TM/UTM预混料)、增稠剂或悬浮剂(例如结冷胶、角叉菜胶)。将所得到的CHO-MIN浆料伴随连续加热和搅拌保持10分钟，然后加入另外的矿物质(例如氯化钾、碳酸镁、碘化钾)或碳水化合物(例如低聚果糖、蔗糖、玉米糖浆)或其组合。PIW浆料随后通过伴随加热和搅拌来混合剩余蛋白质而形成。

依照该过程，将三种所得到的浆料伴随加热搅拌掺和在一起，并且将pH调整至所需范围(例如6.6-7)，这之后对营养组合物实施高温短时间(HTST)加工。营养组合物在HTST期间进行热处理、乳化、匀浆化且冷却。加入水溶性维生素和抗坏血酸(如果适用的话)，再次调整pH(需要时)，加入香料，并且可以加入任何另外的水，以将固体含量调整至所需范围。通过加入水中且搅拌0-24小时，将EGCg或EGCg来源(例如绿茶提取物)制备为溶液(例如1%(w/w))。将EGCg溶液加入含有其他成分的组合物中，并且搅拌一段时间(例如5-60分钟)，以确保EGCg在组合物中的均匀分布。与含有EGCg的溶液制备相关的搅拌，连同EGCg溶液对其他成分的添加，可以在4℃-50℃下发生。在这点上，根据任何合适的灭菌技术例如无菌、高压釜或热填充灭菌，可以将液体营养组合物包装且灭菌。

营养粉末例如喷雾干燥的营养粉末或干掺和的营养粉末，可以通过适合于制备且配制营养粉末的已知或在其他方面有效的技术的任何集合进行制备。例如，当营养粉末是喷雾干燥的营养粉末时，喷雾干燥步骤可以同样包括已知或在其他方面适用于营养粉末的生产的任何喷雾干燥技术。许多不同的喷雾干燥方法和技术已知用于营养领域中，所有这些均适用于制造本文的喷雾干燥的营养粉末。

一种制备喷雾干燥的营养粉末的方法包括将水性浆料或液体形成且匀浆化，所述水性浆料或液体包含预消化的脂肪以及任选的蛋白质、碳水化合物及其他脂肪来源，并且随后将浆料或液体喷雾干燥，以产生喷雾干燥的营养粉末。该方法可以进一步包括喷雾干燥、干掺和或以其他方式将另外的营养或功能成分(包括本文描述的成分中的任何一种或多种)加入喷雾干燥的营养粉末中的步骤。

其他合适的制备营养产品的方法例如在美国专利号6,365,218(Borschel等人)、美国专利号6,589,576(Borschel等人)、美国专利号6,306,908(Carlson等人)、美国专利申请号20030118703A1(Nguyen等人)中得到描述，所述说明书通过引用并入本文，至它们一致的程度。

本文公开的示例性方法包括给有需要的受试者施用或提供有效实现下述中的至少一种的量的EGCg：(1)肌肉VEGF水平中的增加；(2)肌肉脉管系统中的增加；(3)肌血流量中的增加；(4)肌肉生长抑制素水平中的减少；和(5)肌肉生长抑制素活性的抑制；并且从而减少肌肉功能下降、改善肌肉功能或两者。如本文其他地方说明的，经由本文实施例中呈现的研究鉴定的肌内VEGF的增加是出乎意料的，因为EGCg先前已鉴定为抗癌剂，这是由于其下调VEGF表达且因此抑制肿瘤发生前组织的血管生成和后续血管化的能力。此外，实施例中举例说明的肌肉生长抑制素水平，特别是肌内肌肉生长抑制素水平中的减少，可以降低肌肉中的肌肉生长抑制素相关的信号传导，其可以促进肌细胞分化和增殖，以及增加肌肉蛋白质合成、减少肌肉蛋白质降解或其组合。另外，根据本文公开的方法给有需要的受试者施用或提供的EGCg量也有效降低受试者中的白介素-1-α(IL1A)的肌内水平。

IL1A是由T细胞、B细胞、巨噬细胞及其他炎性单核细胞释放的促炎细胞因子。增加水平的IL1A已在患有炎性肌肉疾病(例如多肌炎和皮肌炎)的患者的骨骼肌中观察到。另外，IL1A水平在恶病质患者中是升高的，并且IL1A已显示直接刺激肌肉蛋白质分解。相应地，根据本文描述的示例性方法，通过施用EGCg实现的肌内IL1A水平中的减少可以降低肌肉炎症和分解代谢，并且从而减少肌肉功能下降、改善肌肉功能或两者。

在某些示例性实施方案中，有需要的受试者是人。在某些其他示例性实施方案中，有需要的受试者是老年人。在某些示例性实施方案中，有需要的受试者是经历肌肉功能下降的受试者；由于患有下述中的一种或多种而需要肌肉功能改善的受试者：肌少症、恶病质、糖尿病、外周动脉疾病、间歇性跛行、缺血再灌注损伤或慢性阻塞性肺病(COPD)；卧床不起或在其他方面不动(临时或永久)且遭受肌肉废用的受试者；或其组合。在某些示例性实施方案中，有需要的受试者是患有肌肉功能下降或处于患有肌肉功能下降的危险中的受试者。肌肉功能下降的症状包括但不限于减少的肌肉生长、减少的肌肉氧合、肌肉炎症和增加的肌肉分解代谢。此类症状可以由于下述而体现：衰老、肌少症、恶病质、不活动、不动(例如卧床休息或由于打石膏)、糖尿病、慢性疾病(例如COPD、晚期肾病)、外周动脉疾病、间歇性跛行、缺血再灌注损伤或其组合。在某些其他示例性实施方案中，有需要的受试者是住院的。在另外其他示例性实施方案中，有需要的受试者经历损伤、疾病、手术、不动、住院及其组合时期后的康复。在另外其他示例性实施方案中，有需要的受试者具有升高的肌肉生长抑制素水平。

如本文使用的，短语“减少有需要的受试者中的肌肉功能下降”应理解为包括下述中的一种或多种：降低肌肉功能下降速度、维持肌肉功能或改善肌肉功能。如上所述，肌肉功能包括肌肉质量和肌肉强度中的至少一种。另外，“减少肌肉功能下降”或“改善肌肉功能”应理解为包括下述中的一种或多种：增加肌肉生长、增加肌肉氧合、增加肌肉耐力、降低肌肉炎症、减少肌肉分解代谢、增加肌肉脉管系统(即增加血管化和毛细血管化)、增加肌内血流量、增加肌肉质量和增加肌肉强度。

受试者中的肌肉功能可以通过广泛多样的方法进行评估。例如，通过使用提供肌肉面积、体积或质量的任何已知或在其他方面有效的技术，例如DEXA，或使用视觉或成像技术，例如MRI或CT扫描，可以测定受试者中就肌肉质量而言的肌肉功能。另外，使用最大力的急性测试、肌肉耐力的时间依赖性测试、肌肉疲劳的时间依赖性测试、肌肉耐力和疲劳的时间依赖性测试及其组合，可以定量测量受试者中就肌肉强度而言的肌肉功能。此外，通过使用握力计、通过使用测量等动力膝伸肌或膝屈肌力量的设备评估下肢力量、并且通过测量步态和平衡(例如Tinetti步态和平衡测试)，可以测量受试者中的肌肉功能。

在某些示例性实施方案中，通过测定得自受试者的生物样品中的VEGF、IL1A和肌肉生长抑制素中的一种或多种的水平，可以测量受试者中的肌肉功能。例如，在某些示例性实施方案中，肌肉组织样品得自受试者(例如经由针吸活组织检查)，并且进行测定以测量肌肉生长抑制素水平。当然，肌肉组织样品还可以进行测定，以测量VEGF水平、IL1A水平或两者。在某些示例性实施方案中，生物样品是得自受试者的血液样品，其随后进行测定以测量肌肉生长抑制素、VEGF、IL1A及其组合的循环水平。在某些示例性实施方案中，血液样品是全血样品、或血液级分的样品，包括但不限于血清和血浆。本领域技术人员已知的任何数量的测定均可用于测量生物样品中的VEGF、IL1A和肌肉生长抑制素中的一种或多种的水平。例如，生物样品中的VEGF、IL1A和肌肉生长抑制素水平可以通过测定进行测量，所述测定例如ELISA、蛋白质印迹、定量逆转录聚合酶链反应和RNA酶保护测定。

如上所讨论，“减少肌肉功能下降”或“改善肌肉功能”包括增加肌肉脉管系统(即增加血管化和毛细血管化)，且增加肌内血流量。肌内血流量可以使用多普勒超声方法非侵入性测量，所述多普勒超声方法的细节是本领域技术人员已知且了解的，并且如Olive等人，DynamicMedicine(2002)，第1卷(7页)中所述。此外，还能够使用实时超声成像来测量肌肉中的微血管血流量(Sjoberg等人，AmJPhysiolHeartCircPhysiol(2011)，第301卷，第H450–H458页)。另外，通过在股动脉和腕静脉中输注吲哚花青绿(ICG)，用于在805nm处(Timmerman等人，JClinEndocrinolMetab(2010)，第95卷，No.8，第3848–3857卷)的分光光度测定(BeckmanCoulter，Fullerton，CA)，可以测量肌内血流量。本领域技术人员应当理解可以利用其他测量肌内血流量的方法。

如先前讨论的，如本文使用的，在本文公开的方法的某些示例性实施方案中，“减少肌肉功能下降”还指受试者中的肌肉功能维持。在该上下文中，受试者中的肌肉功能维持指保留的肌肉功能量对应于在起始本文公开的方法之前的受试者中的肌肉功能测量值，或其百分比。相应地，在本文公开的方法的多个实施方案中，施用有效增加肌肉VEGF水平、减少肌肉生长抑制素水平或两者的量的EGCg(或含有EGCg的营养组合物)，导致受试者的肌肉功能的100%维持，或在其他实施方案中，更少的量。例如，在某些示例性实施方案中，该方法导致维持至少50%肌肉功能、60%肌肉功能、70%肌肉功能、80%肌肉功能、90%肌肉功能、95%肌肉功能，或者范围为50%-100%的任何量，包括50%-80%、50%-90%、60%-80%和60%-90%。在某些示例性实施方案中，肌肉功能下降完全被阻止；换言之，受试者维持100%肌肉功能，或甚至增加肌肉功能。一般地，当受试者中的肌肉功能“维持”超过100%时，这个结果在本文中描述为肌肉功能中的改善。

本文公开的方法的多个实施方案导致受试者中的肌肉功能的改善。当与肌肉功能结合使用时，术语“改善(improve)”、“改善(improves)”、“改善(improvement)”和“改善(improving)”指与本文公开的方法起始前一段时间相比较，肌肉功能中的增加，或可替代地，肌肉功能维持超过100%。例如，在某些示例性实施方案中，施用有效增加肌肉VEGF水平、减少肌肉生长抑制素水平或两者的量的EGCg可以使受试者的肌肉功能增加至少10%，例如10%-100%。在某些示例性实施方案中，肌肉功能可以改善1%、5%、10%、20%、30%、40%、50%、60%、70%、80%、90%、95%或100%。

就测量肌肉功能中的改善、肌肉功能下降中的减少或肌肉功能的维持而言，在起始本文公开的方法之前执行受试者的肌肉功能的第一次测量。在本文公开的方法的某些实施方案中，第一次测量在本文公开的方法起始前一周(例如1-7天或7天)执行。接下来，在起始本文公开的方法之后的某一时间点执行受试者的肌肉功能的第二次测量，并且将第二次测量与第一次测量相比较。使用上述测量技术，第二次测量与第一次测量的比较可能未显示立即结果。根据本文先前描述的剂量和间隔，所得到的效应可能花费数天、数周或数月的EGCg(或含有EGCg的组合物)施用，以获得上文描述的所述可测量的肌肉功能结果。对于肌肉或肌肉功能的慢性损失例如与肌少症或恶病质相关的那种，可能需要几周(例如4-8周)至数月(例如3-12个月)的施用，以实现所需效应。对于由于例如不动或住院的肌肉或肌肉功能的急性损失，3-10天的有规律的EGCg(或含有EGCg的组合物)施用可能足以实现所需效应。在根据本文公开的方法的某些示例性实施方案中，第一次肌肉功能测量和第二次肌肉功能测量之间的时间量为两周、一个月、两个月、六个月或更久。在某些示例性实施方案中，为了测定如本文公开的施用EGCg的方法的效应的目的，可以使用EGCg的有规律施用的3-12个月测试期。在某些其他示例性实施方案中，为了测定如本文公开的施用EGCg的方法的效应的目的，可以使用EGCg的有规律施用的2周至3个月测试期。

如上文讨论的，受试者中的肌肉功能下降中的减少或肌肉功能中的改善可以以各种方法进行测量。例如，在起始本文公开的方法之前和再次在起始本文公开的方法之后的时间点，可以从受试者获得生物样品(例如经由针吸活组织检查的肌肉组织样品)。生物样品随后可以进行测定，以测量且比较肌肉生长抑制素、VEGF和IL1A中的一种或多种的水平。另外，动物研究(例如根据实施例3或相似研究)可以用于显示根据本文公开的方法的EGCg(或含有EGCg的组合物)施用导致肌肉功能下降中的减少或肌肉功能中的改善。

实施例

下述实施例举例说明本文公开的示例性方法和组合物的某些实施方案。实施例仅为了举例说明的目的而给出，并且不应解释为限制本公开内容，因为其许多变动是可能的，而不背离公开内容的精神和范围。

实施例1

实施例1举例说明了本文描述的营养组合物的示例性实施方案。实施例1中列出的所有成分量作为千克/1000kg批产品列出，除非另有说明。实施例1显示了乳状液型液体营养组合物的示例性制剂，其含有蛋白质、碳水化合物和脂肪，并且具有在6.6至7范围内的pH。假定1.075g/mL的密度和约237mL(约8液体盎司)的份大小，根据实施例1中所示的制剂的营养组合物具有约177mgEGCg/份。另外，营养组合物包括11g蛋白质/份(或约0.047g/mL)、40g碳水化合物/份(或约0.17g/mL)和6g脂肪/份(或约0.24g/mL)。

实施例2

实施例2举例说明了本文描述的营养组合物的示例性实施方案。实施例2中列出的所有成分量作为千克/1000kg批产品列出，除非另有说明。实施例2显示了澄清型液体营养组合物的示例性制剂，其基本上不含脂肪，并且具有在3至3.5范围内的pH。假定1.05g/mL的密度和约296mL(约10液体盎司)的份大小，根据实施例2中所示的制剂的营养组合物具有约188mgEGCg/份。另外，营养组合物包括9g蛋白质/份(或约0.0304g/mL)、35g碳水化合物/份(或约0.118g/mL)、0g脂肪/份和180千卡/份(或约0.61千卡/mL)的能量含量。

实施例3

实施例3举例说明了8周饮食EGCg补充对老年SpragueDawley(SD)大鼠肌少症模型中的骨骼肌生物标记物的作用。更具体而言，施用EGCg的老年SD大鼠的腓肠肌裂解物就各种骨骼肌生物标记物中的变化进行分析。

体内研究1- 老年(25月龄)相对于成年(13月龄)-雄性SD大鼠(12月龄；成年大鼠；数据集A)和雄性SD大鼠(24月龄；成年大鼠；数据集B)购自(Indianapolis，IN)。将大鼠单独饲养于具有硬木片垫层的笼中，并且暴露于12小时光周期。在接受时，在适应动物设施期间，大鼠随意接近天然食物(TekladGlobal18%ProteinRodentDiet，目录#2018S，Harlan)和水。成年大鼠(数据集A)在处死时为13月龄，并且老年大鼠(数据集B)在处死时为25月龄。收集大鼠的右侧腓肠肌且在液氮上速冻。

体内研究2- EGCg补充-雄性SD大鼠(19月龄)购自Harlan(Indianapolis，IN)。将大鼠单独饲养于具有硬木片垫层的笼中，并且暴露于12小时光周期。在接受时，在适应动物设施期间，大鼠随意接近纯化饮食AIN-93M(ResearchDiets，#D10012M)和水。随后，大鼠以200mg/kg体重随意接近补充有富含EGCg(>95%)的Teavigo?的AIN-93M饮食(数据集C)，持续8周。

体内研究3- EGCg补充-雄性SD大鼠(19月龄)购自Harlan(Indianapolis，IN)。将大鼠单独饲养于具有硬木片垫层的笼中，并且暴露于12小时光周期。在接受时，在适应动物设施期间，大鼠随意接近纯化饮食AIN-93M(ResearchDiets，#D10012M)和水。随后，大鼠以50mg/kg体重随意接近AIN-93M饮食(数据集D)或补充有富含EGCg(>95%)的Teavigo?的AIN-93M饮食(数据集E)，持续8周。

肌肉裂解物的制备-整个腓肠肌收集自被安乐死的大鼠(数据集A、数据集B、数据集C、数据集D和数据集E)，并且在液氮上速冻且在铝箔中贮存于-80℃下。随后，使腓肠肌样品在干冰上部分解冻。通过机械活组织检查穿孔器，从每个肌肉样品获得大约200mg组织。使样品在液氮上快速成粉末，并且转移至15mL锥形管且称重。将温和的无去污剂裂解缓冲液(9X)加入锥形管中的干燥样品中。9X裂解缓冲液(50mMTris·HCl、2mMEDTA，pH7.4/NaOH)补充有以1:200稀释的哺乳动物蛋白酶抑制剂混合物(Sigma-Aldrich，Inc.)，并且贮存于冰上。样品随后涡旋10秒，然后以25x1000rpm匀浆化大约10秒。将裂解物再次涡旋10秒，且转移至1.5mL管。将裂解物在标准台式Eppendorf离心机中在4℃下以11000rpm离心/澄清5分钟。将上清液(1mL)等分到2mL冻存管中，且贮存于-80℃下。通过在RodentMAP?v.2.0抗原和大鼠METABOLIC?多分析物概况分析平台上的MyriadRulesBasedMedicine(Austin，Texas)，来分析裂解物。

结果-如图1-2以及下表1和2中可见的，与未接受EGCg补充的25月龄大鼠(数据集B)相比较，接受EGCg补充的22月龄大鼠(200mg/kg体重；数据集C)显示出增加的VEGF肌内水平(+86%，p<0.001)和降低的IL1A肌内水平(-69%，p=0.022)。

¹定量测定I和II在彼此独立的分开日期执行。

²每个体内研究为分开的实验，在分开的时间进行，其中每个研究具有其自身对照。来自体内研究2的对照饮食肌肉样品未进行分析。

³在所示剂量时补充有Teavigo?(>95%EGCg)(DSM，Netherlands)的对照饮食。

n.s.=不显著。

如指出的，与数据集B相比较，补充有EGCg的22月龄大鼠(200mg/kg体重；数据集C)显示出增加的VEGF肌内水平和减少的IL1A肌内水平。这些特定蛋白质与促进肌肉功能的生物途径相关。例如，VEGF经由血管生成而促进肌肉脉管系统(增加的肌血流量)和肌肉氧合。此外，增加的IL1A水平已显示直接刺激肌肉蛋白质分解。相应地，数据支持下述发现：通过增加VEGF的肌内水平、减少IL1A的肌内水平及其组合，并且特别是通过增加VEGF的肌内水平，EGCg补充减少肌肉功能下降、改善肌肉功能或两者。

实施例4

实施例4举例说明了8周饮食EGCg补充在老年SpragueDawley(SD)大鼠肌少症模型中的作用。更具体而言，分析且比较了在年幼SD大鼠(“年幼”)、老年SD大鼠(“年老”)、和施用EGCg的老年SD大鼠(“年老-EGCg”)的腓肠肌裂解物中的肌肉生长抑制素水平。

体内研究 -EGCg补充-雄性SD大鼠(20月龄)购自Harlan(Indianapolis，IN)。将大鼠单独饲养于具有硬木片垫层的笼中，并且暴露于12小时光周期。对于1周，在适应动物设施期间，大鼠随意接近纯化饮食AIN-93M(ResearchDiets，#D10012M)和水。AIN-93M饮食通常包含约13%(按重量计)蛋白质、约73%(按重量计)碳水化合物和约4%(按重量计)脂肪，并且具有约3.77千卡/克的能量含量。随后，大鼠以200mg/kg体重随意接近补充有EGCg(>95%)的AIN-93M饮食(Teavigo，DSM)(n=12)(“年老-EGCg”或“EGCg补充的”)或对照AIN-93饮食(n=11)(“年老”或“对照”)，持续8周。

肌肉裂解物的制备-整个腓肠肌收集自被安乐死的大鼠，称重并且在液氮上速冻且在铝箔中贮存于-80℃下。随后，使腓肠肌样品在干冰上部分解冻。通过机械活组织检查穿孔器，从每个肌肉样品获得大约200mg组织。使样品在液氮上快速成粉末，并且转移至15mL锥形管且称重。将温和的无去污剂裂解缓冲液(9X)加入锥形管中的干燥样品中。9X裂解缓冲液(50mMTris·HCl、2mMEDTA，pH7.4/NaOH)补充有以1:200稀释的哺乳动物蛋白酶抑制剂混合物(Sigma-Aldrich，Inc.)，并且贮存于冰上。样品随后涡旋10秒，然后以25x1000rpm匀浆化大约10秒。将裂解物再次涡旋10秒，且转移至1.5mL管。将裂解物在标准台式Eppendorf离心机中在4℃下以11000rpm离心/澄清5分钟。将上清液(1mL)等分到2mL冻存管中，且贮存于-80℃下。

使用抗肌肉生长抑制素抗体(抗GDF8/抗肌肉生长抑制素抗体-目录#ab996-Abcam)进行蛋白质印迹分析。简言之，通过在180V下大约1小时的10%十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)分辨细胞溶质蛋白质样品(10-15μg)，随后转移到0.45μm硝酸纤维素膜上，其随后用在Tris缓冲盐水，pH7.5中的5%Marvel在4℃下封闭过夜。使用抗肌肉生长抑制素抗体(1:50稀释)和二抗(1:1000稀释)。与一抗的孵育进行过夜，与二抗的孵育进行1小时，并且通过ECLReagent(GEHealthCareSciences)化学发光检测显色。印迹通过光密度测定法进行扫描，以定量差异。年幼肌肉裂解物由6月龄SD大鼠制备，并且用作蛋白质印迹中的年幼对照，以比较年老大鼠和年幼大鼠的肌肉生长抑制素水平。

结果-表3显示了在8周饲喂期结束时，来自对照大鼠和EGCg补充大鼠的平均腓肠肌湿重的比较。如可见的，与对照大鼠相比较，在EGCg补充大鼠中的腓肠肌湿重中存在显著增加。相应地，数据指示EGCg有效用于减弱由于肌少症的肌肉萎缩。

图3和表4显示了来自研究中使用的每组的随机选择的大鼠的蛋白质印迹结果。举例说明了来自三只年幼大鼠(6月龄；“年幼”)、三只老年大鼠(22月龄；“年老”)和三只老年EGCg补充大鼠(22月龄；“年老-EGCg”)的肌肉中的肌肉生长抑制素水平。结果指示与未接受EGCg补充的“年老”大鼠相比较，“年老-EGCg”大鼠显示出减少水平的肌内肌肉生长抑制素蛋白质。相应地，结果显示EGCg抑制体内肌肉生长抑制素表达。此外，“年老-EGCg”大鼠的肌肉生长抑制素水平类似于“年幼”大鼠的肌肉生长抑制素水平。因此，数据支持下述发现：EGCg补充减少肌肉生长抑制素的肌内水平，并且从而减弱肌肉功能下降、减弱肌肉质量损失，并且因此改善总体功能性。

实施例5

实施例5举例说明了EGCg对血清饥饿的C₂C₁₂肌管中的肌肉生长抑制素表达的作用。C₂C₁₂成肌细胞在DMEM中在空气中10%CO₂的大气下在37℃下进行传代，所述DMEM补充有10%胎牛血清(FCS)、1%谷氨酰胺和1%青霉素-链霉素。当成肌细胞达到约80%汇合时，它们在含有2%马血清(HS)的DMEM中分化成肌管，伴随每2天的培养基更换。分化在5-7天内完成，并且肌管再维持存活4-5天。

为了诱导肌管中的蛋白质降解，将补充HS的DMEM培养基替换为不含任何血清的DMEM培养基持续24小时，而肌管的阴性对照组(“NC”)未被剥夺血清(即NC组用含有2%HS的DMEM培养基再饲喂)。在该血清饥饿期，肌管用EGCg(10μM和25μM)进行处理。如实施例4中所述，对细胞裂解物进行蛋白质印迹分析。

图4和表5举例说明了在非血清饥饿的对照细胞(“NC”)、血清饥饿的对照细胞(“无血清”)、和EGCg处理的血清饥饿的细胞(“无血清+10μMEGCg”和“无血清+25μMEGCg”)中的肌肉生长抑制素表达。密度计分析基于三个分开的印迹。结果表示为平均值加上S.E.M.，并且组间的统计分析通过单因素ANOVA和随后的Tukey氏检验进行测定。与“NC”组的差异指示为“a”(p<0.01)，而与“无血清”组的差异指示为“b”(p<0.01)。

如图4和表5中可见的，与“无血清”组相比较，EGCg处理的组具有显著更低的肌肉生长抑制素水平。这些结果与EGCg在体内对肌肉生长抑制素水平的作用一致，如上文实施例3中观察到的。相应地，数据支持下述发现：EGCg补充通过减少肌肉生长抑制素水平，减少肌肉功能下降、改善肌肉功能或两者。

在术语“包括(includes)”或“包括(including)”用于说明书或权利要求的程度上，它预期以类似于术语“包含”的方式包括在内，如该术语用作权利要求中的过渡单词时解释的那样。此外，在采用术语“或”(例如A或B)的程度上，它意指“A或B或两者”。当申请人预期指示“仅A或B、但并非两者”时，那么将采用术语“仅A或B、但并非两者”。因此，术语“或”在本文中的使用是包括在内而不是排除的使用。另外，在术语“在……中”或“在……内”用于说明书或权利要求的程度上，它预期分别另外意指“在……上”或“在……之上”。

虽然本申请已通过其实施方案的描述进行举例说明，并且虽然实施方案已相当详细地进行描述，但申请人不预期使所附权利要求的范围局限于或以任何方式限制于此类细节。另外的优点和修饰对于本领域技术人员将是显而易见的。因此，本申请在其更广泛的方面并不限于所示和所述的具体细节、代表性方法和组合物以及举例说明性实例。相应地，可以由此类细节作出偏离，而不背离总体发明构思的精神或范围。

Claims (19)

1.在有需要的受试者中减少肌肉功能下降、改善肌肉功能或两者的方法，所述方法包括给有需要的受试者施用表没食子儿茶素-3-没食子酸酯(EGCg)，其量有效：

(a)增加下述中的至少一种：

　　(i)肌肉VEGF水平；

　　(ii)肌肉脉管系统；和

　　(iii)肌血流量；

(b)减少肌肉生长抑制素水平；和

(c)(a)和(b)的组合；和

从而在所述受试者中减少肌肉功能下降、改善肌肉功能或两者。

2.权利要求1的方法，其中所述EGCg经口施用。

3.权利要求1的方法，其中所述EGCg至少部分通过绿茶提取物提供，所述绿茶提取物含有20-100重量%EGCg。

4.权利要求1的方法，其中所述EGCg作为营养组合物的部分施用。

5.权利要求4的方法，其中所述营养组合物含有50-500千卡/份，并且呈液体、由粉末重构的液体或条的形式。

6.权利要求4的方法，其中所述EGCg作为液体营养产品施用，所述液体营养产品具有范围为30mL-500mL的份大小。

7.权利要求1-6中任一项的方法，其中所述EGCg每天施用一次或两次。

8.权利要求4-7中任一项的方法，其中所述营养组合物进一步包含至少一种蛋白质来源、至少一种碳水化合物来源和至少一种脂肪来源。

9.权利要求8的方法，其中所述蛋白质来源选自乳清蛋白浓缩物、乳清蛋白分离物、乳清蛋白水解产物、酸性酪蛋白、酪蛋白酸钠、酪蛋白酸钙、酪蛋白酸钾、酪蛋白水解产物、乳蛋白浓缩物、乳蛋白分离物、乳蛋白水解产物、脱脂奶粉、浓缩脱脂乳、大豆蛋白浓缩物、大豆蛋白分离物、大豆蛋白水解产物、豌豆蛋白浓缩物、豌豆蛋白分离物、豌豆蛋白水解产物、胶原蛋白、胶原蛋白分离物、昆虫蛋白及其组合。

10.权利要求4-9中任一项的方法，其中所述营养组合物进一步包含选自亮氨酸、异亮氨酸、缬氨酸及其组合的支链氨基酸。

11.权利要求4-9中任一项的方法，其中所述营养组合物进一步包含β-羟基-β-甲基丁酸酯、β-丙氨酸或两者。

12.权利要求4-9中任一项的方法，其中所述营养组合物进一步包含1克至3克β-羟基-β-甲基丁酸酯、15克至25克蛋白质和100IU至750IU维生素D。

13.权利要求1-12中任一项的方法，其中所述方法进一步包括施用选自下述的一种或多种黄烷-3-醇：儿茶素、没食子儿茶素、表儿茶素、表儿茶素没食子酸酯和表没食子儿茶素。

14.权利要求4的方法，其中所述营养组合物为具有范围为2至5的pH且包括0.5重量%或更少脂肪的澄清液体营养产品。

15.前述权利要求中任一项的方法，其中将总共0.1g/天至3g/天的EGCg施用于所述受试者。

16.前述权利要求中任一项的方法，其中所述受试者是人。

17.前述权利要求中任一项的方法，其中所述受试者是老年人。

18.前述权利要求中任一项的方法，其中所述受试者是住院的或不动的。

19.用于在有需要的受试者中减少肌肉功能下降、改善肌肉功能或两者的营养组合物，所述营养组合物包含：

至少一种蛋白质来源，其量足以提供6克至50克蛋白质/份，和0.1克至3克表没食子儿茶素-3-没食子酸酯(EGCg)/份。