CN105311636B - 一种抗疱疹病毒软膏剂及其制备方法 - Google Patents

Abstract

本发明属于制药技术领域，具体涉及一种抗疱疹病毒软膏剂及其制备方法。该抗疱疹病毒软膏剂主要由热休克蛋白90抑制剂、油相基质、乳化剂、渗透促进剂、防腐剂和水组成。本发明提供的抗疱疹病毒软膏剂可以直接涂抹于病变部位，克服了热休克蛋白90抑制剂溶解度差，给药困难和体内给药具有严重的肠毒性的缺陷，同时该软膏剂载药量和透皮率高，可以快速、有效的治疗疱疹病毒感染症，大大的减轻疱疹病毒感染症患者的痛苦。

Description

一种抗疱疹病毒软膏剂及其制备方法

技术领域

本发明属于制药技术领域，具体涉及一种抗疱疹病毒软膏剂及其制备方法。

背景技术

疱疹是一种常见的皮肤性疾病，一般通过皮肤接触传播。疱疹病毒最常见的是单纯疱疹病毒和水痘-带状疱疹病毒。单纯疱疹病毒（HSV）是一类引起皮肤病和性病的常见病原体，根据抗原性的不同，单纯疱疹病毒分为I型和II型单纯疱疹病毒。I型单纯疱疹病毒（HSV-1）常引起嘴唇或面部唇疱疹，同时还可以感染中枢神经系统。II型单纯疱疹病毒（HSV-2）多与生殖器感染或新生儿感染有关。有研究表明，HSV与艾滋病的传播有密切关系，是严重危害人们健康的病原体。

水痘-带状疱疹病毒（VZV）是引起儿童常见的一种急性、高传染性的水痘疾病的病原体。带状疱疹是水痘治愈后潜伏在体内的病毒被再激活所致，健康儿童感染VZV后症状一般轻微，预后良好。但在某些特殊人群，如免疫功能缺陷及使用免疫抑制剂治疗过的儿童，会导致严重后果，甚至引起死亡。

目前用于治疗疱疹病毒感染的药物主要是依赖病毒胸苷激酶磷酸化的核苷类似物，例如：阿昔洛韦。虽然这些核苷类似物能特异性阻断病毒DNA的复制过程，从而达到治疗疱疹病毒感染疾病。但是上述药物在治疗过程中存在靶点单一，极易产生耐药作用，生物利用度低，半衰期短以及有严重副反应的缺，而且这些药物不能有效的防止病毒的潜伏感染和复发频率，易于复发。

有大量的研究显示，四氢吲唑酮类Hsp90抑制剂具有抗病毒活性，其可以通过特异性调节宿主细胞Hsp90基因的蛋白水平，发挥其抗病毒活性，而且不会产生耐药性的问题。鞠怀强发表了一篇题目为“新型HSP90抑制剂BJ-B11抗病毒及抗肿瘤作用研究”的论文，该论文表明Hsp90抑制剂BJ-B11能够显著的抑制人单纯疱疹病毒(HSV-1/HSV-2)体外增殖的活性，可以有效的治疗单纯疱疹病毒感染症。

然而，四氢吲唑酮类Hsp90抑制剂的溶解度很小，在使用时难以达到临床用药浓度，而且其在体内分布无特异性，肠毒性较强，容易产生腹泻等肠道毒副作用，大大的限制了四氢吲唑酮类Hsp90抑制剂的应用。因此，研究和发开出一种治疗疱疹病毒效果好，不会产生耐药性，毒副作用小，不易于复发的抗疱疹病毒药物仍是当前研究的重点。

发明内容

为了克服现有技术中治疗疱疹病毒的药物存在的缺陷，本发明的目的在于提供一种抗疱疹病毒软膏剂及其制备方法，以解决上述的问题。

本发明提供了一种抗疱疹病毒软膏剂，包括以下组分及其重量百分比：

热休克蛋白90抑制剂1-5%、油相基质10-40%、乳化剂5-18%、渗透促进剂2-6%、防腐剂0.05-0.1%和水30.9-81.95%。

进一步地，所述抗疱疹病毒软膏剂包括以下组分及其重量百分比：

热休克蛋白90抑制剂2%、油相基质30%、乳化剂12%、渗透促进剂4%、防腐剂0.08和水51.92%。

进一步地，所述热休克蛋白90抑制剂为AT-533、SNX-2112、Xbj-B11或Xbj-B16。热休克蛋白90(heat shock protein 90，Hsp90)是热休克蛋白家族中重要的蛋白之一，参与调控，维持细胞内多种蛋白的构象和功能，在调节细胞的生长、分化和凋亡等方面发挥重要的作用。热休克蛋白90抑制剂（Hsp90抑制剂）是一类能与Hsp90调节位点结合，引起Hsp90构象改变干扰其执行分子伴侣的功能，阻碍蛋白质翻译后的加工修饰，使功能蛋白丧失相应的功能甚至诱导底物蛋白降解而发挥药理作用以Hsp90为作用靶点的化合物。

其中，AT-533的中文名称为2-（4-羟基环己氨基-4-（1-（3,6,6-三甲基-4-氧-4,5,6,7-四氢吲哚））苯甲酰胺，英文名称为2-[(4-hydroxycyclohexyl) amino]-4-(4,5,6,7-tetrahydro- 3,6,6-trimethyl-4-oxo-1H-indazol-1-yl)-benzamide；SNX-2112的中文名称为4-（6,6-二甲基-4-氧-3-三氟甲基-4,5,6,7-四氢-1-吲唑）-2-[1-（4-反式-羟基环已烷）氨基]苯甲酰胺，英文名称为4-(6,6-dimethyl-4-oxo-3-(trifluoromethyl)-4,5,6,7-tetrahydroindazol-1-yl)-2-((1r,4r)-4-hydroxycyclohexylamino)benzamide；Xbj-B11的中文名称为2-(4-乙酰氧环己氨基)-4-(1-(3,6,6-三甲基-4--4,5,6,7-四氢吲唑))苯甲酰胺，2-(4-acetyloxyclohexylamino)-4-(4,5,6,7-tetrahydro-3,6,6-trimethyl-4-oxo-1H-indazol-1-yl)-benzamide；Xbj-B16的中文名称为2-乙酰氧基-4-((4-((2-氨基甲酰-5-(3,6,6-三甲基-4- 氧-4,5,6,7-四氢吲唑)苯基)氨基)环己基)氧)-N,N,N-三甲基-4-氧丁烷-1-铵盐酸盐，英文名称为2-(4-acetyloxyclohexylamino)-4-(4,5,6,7-tetrahydro-3,6,6-trimethyl-4-oxo)- N, N, N- trimethyl-4- oxetane-1- ammoniumhydrochloride。

本发明提供的AT-533，SNX-2112，Xbj-B11和Xbj-B16是四氢吲唑酮类Hsp90抑制剂，是非核苷类物质。上述四种四氢吲唑酮类Hsp90抑制剂主要通过特异性调节宿主细胞Hsp90基因的蛋白水平，其抗病毒活性可以通过多种途径发挥，而且该药物药物全身毒性小，稳定性好，不会产生耐药性。

进一步地，所述热休克蛋白90抑制剂优选为AT-533。

进一步地，所述油相基质由凡士林、聚乙二醇400和丙二醇按体积比0.5-1:1-2:2-4组成。

进一步地，所述油相基质由凡士林、聚乙二醇400和丙二醇按体积比0.8:1:3组成。

进一步地，所述乳化剂为三乙醇胺、十二烷基苯磺酸钠硫酸钠、羊毛脂中的一种或其混合物。其中，羊毛脂是附着在羊毛上的一种分泌油脂，其CAS号为8006-54-0。

进一步地，所述渗透促进剂由冰片和薄荷醇按重量比1:0.8组成。

进一步地，所述防腐剂为羟基苯甲酸乙酯。

另外，本发明还提供了一种抗疱疹病毒软膏剂的制备方法，包括以下步骤：

S1取油相基质加热至75-92℃，加入热休克蛋白90抑制剂和渗透促进剂，搅拌至完全溶解，得油相液；

S2将乳化剂加入水中加热至75-92℃，搅拌至完全溶解，得水相液；

S3将步骤S1得到的油相液加入步骤S2得到的水相液中混合，接着加入防腐剂，在1000 rpm下搅拌30-60min，即得。

本发明提供的抗疱疹病毒软膏剂中由凡士林、聚乙二醇400和丙二醇按一定体积比组成的油相基质，可以有效的溶解Hsp90抑制剂，从而克服了Hsp90抑制剂溶解度小的问题。而且，该软膏剂中由冰片和薄荷醇按一定重量比组成的渗透促进剂可以有效的增加Hsp90抑制剂经皮肤或粘膜的透过率，经试验发现，该软膏剂的透皮吸收速率J = 4.11μg/cm²，可以快速、有效的治疗疱疹病毒感染症，大大的减轻疱疹病毒感染症患者的痛苦。

本发明提供的抗疱疹病毒软膏剂可以直接涂抹于病变部位，克服了Hsp90抑制剂在体内溶解度小、不稳定和具有严重的肠毒性的缺陷，同时该软膏剂载药量和透皮率高，可以快速、有效的治疗疱疹病毒感染症。

总之，本发明提供的抗疱疹病毒软膏剂，与现有技术相比具有如下优势：

1）本发明提供的抗疱疹病毒软膏剂有效成分明确，毒副作用小，载药量高，药理药效确切，对疱疹病毒引起的感染症具有显著的治疗效果；

2）本发明提供的抗疱疹病毒软膏剂克服了Hsp90抑制剂在体内溶解度小、不稳定和具有严重的肠毒性的缺陷，而且经皮吸收率高，是一种理想的抗疱疹病毒制剂，有利于该抗疱疹病毒软膏剂的推广和应用。

附图说明

图1为AT-533体外渗透动力学曲线图；

图2为疱疹病毒皮肤感染度等级线性图。

具体实施方式

以下通过具体实施例进一步描述本发明，本发明不仅仅限于以下实施例。在本发明的范围内或者在不脱离本发明的内容、精神和范围内，对本发明进行的变更、组合或替换，对于本领域的技术人员来说是显而易见的，且包含在本发明的范围之内。

实施例1、一种抗疱疹病毒软膏剂

所述抗疱疹病毒软膏剂包括以下组分及其重量百分比：

SNX-21121%、油相基质10%、乳化剂5%、渗透促进剂2%、防腐剂0.05%和水81.95%；所述所述油相基质由凡士林、聚乙二醇400和丙二醇按体积比0.5:1:2组成，所述渗透促进剂由冰片和薄荷醇按重量比1:0.8组成。

制备方法：

S1取油相基质加热至75℃，加入Hsp90抑制剂和渗透促进剂，搅拌至完全溶解，得油相液；

S2将乳化剂加入水中加热至75℃，搅拌至完全溶解，得水相液；

S3将步骤S1得到的油相液加入步骤S2得到的水相液中混合，接着加入防腐剂，在1000 rpm下搅拌50min，即得。

实施例2、一种抗疱疹病毒软膏剂

所述抗疱疹病毒软膏剂包括以下组分及其重量百分比：

AT-533 2%、油相基质30%、乳化剂12%、渗透促进剂4%、防腐剂0.08和水51.92%；所述油相基质由凡士林、聚乙二醇400和丙二醇按体积比0.8:1:3组成，所述渗透促进剂由冰片和薄荷醇按重量比1:0.8组成。

制备方法与实施例1类似。

实施例3、一种抗疱疹病毒软膏剂

所述抗疱疹病毒软膏剂包括以下组分及其重量百分比：

Xbj-B11 2.5%、油相基质40%、乳化剂18%、渗透促进剂6%、防腐剂0.1%和水33.4%；所述所述油相基质由凡士林、聚乙二醇400和丙二醇按体积比1:2:4组成，所述渗透促进剂由冰片和薄荷醇按重量比1:0.8组成。

制备方法与实施例1类似。

试验例一、溶解性试验

1、试验材料：AT-533粉末、SNX-2112粉末、Xbj-B11粉末和Xbj-B16粉末，凡士林、聚乙二醇400、丙二醇。

2、试验方法：精密称量AT-533粉末、SNX-2112粉末、Xbj-B11粉末和Xbj-B16粉末各10 mg，置于1.5 ml离心管中，加入1 ml加热溶解后的油相基质溶液。各油相基质如下：

基质1：油相基质由凡士林和丙二醇按体积比0.8:4组成；

基质2：油相基质由凡士林、聚乙二醇400和丙二醇按体积比0.5:1:2组成；

基质3：油相基质由凡士林、聚乙二醇400和丙二醇按体积比0.8:1:3组成；

基质4：油相基质由凡士林、聚乙二醇400和丙二醇按体积比1:2:4组成；

基质5：油相基质由凡士林、聚乙二醇400和丙二醇按体积比0.4:3:5组成；

超声溶解30 min后，加入转速为10,000 rpm的离心机中离心15 min，取上清液，并用0.22 μm滤膜过滤后，使用UPLC-MS/MS分析样品浓度，每组做3个重复，取3组的平均值作为各样品在各溶剂中的溶解度。

3、试验结果：

试验结果如表1所示。

表1 各样品在各油相基质的溶解度

由表1可知，本发明提供的油相基质可以大大的提高AT-533粉末、SNX-2112粉末、Xbj-B11粉末和Xbj-B16粉末的溶解度，其中以基质3的溶解度最佳。而基质1和基质5对AT-533粉末、SNX-2112粉末、Xbj-B11粉末和Xbj-B16粉末的溶解度较差，说明凡士林、聚乙二醇400和丙二醇在一定配比范围内组成的油相基质可以协同提高AT-533粉末、SNX-2112粉末、Xbj-B11粉末和Xbj-B16粉末的溶解度。

试验例二、稳定性试验

1、试验材料：实施例1、实施例2和实施例3制备的抗疱疹病毒软膏剂。

2、试验方法：

2.1、稳定性试验：参考《中国药典》2010 年版药物制剂稳定性的要求进行，取实施例1、实施例2和实施例3制备的抗疱疹病毒软膏剂，分别在(40±2)℃、室温(25±2)℃、冷藏(4±1)℃条件下进行稳定性考察3个月，分别于第0，1，2，3 月取样使用高效液相色谱测定Hsp90抑制剂的含量；

2.2、离心试验：取实施例1、实施例2和实施例3制备的抗疱疹病毒软膏剂，各称取3g，每样品3份，置15mL 刻度离心管中，在转速为3000rpm的离心机下离心30min，观察软膏的分离情况；

2.3、耐寒试验：取实施例1、实施例2和实施例3制备的抗疱疹病毒软膏剂，各称取3g，每样品3份，置铝管中，于-15℃冰箱保存24h，取出放置至室温，观察软膏的分离情况；

2.4、耐热试验：取实施例1、实施例2和实施例3制备的抗疱疹病毒软膏剂，各称取3g，每样品3份，置15mL刻度离心管中，在水浴温度为60℃下保存12h，取出放置至室温，观察软膏的分离情况。

3、试验结果

3.1、稳定性试验结果如表2所示。

表2抗疱疹病毒软膏剂的稳定性试验数据

由表2可知，本发明提供的抗疱疹病毒软膏剂在分别在(40±2)℃、室温(25±2)℃、冷藏(4±1)℃条件下进行稳定性考察3 个月，分别于第0，1，2，3 月取样测定Hsp90抑制剂的含量基本无变化；

3.2、离心试验：本发明提供的抗疱疹病毒软膏剂在转速为3000rpm的离心机下离心30min，无油水分离现象；

3.3、耐寒试验：本发明提供的抗疱疹病毒软膏剂于-15℃冰箱保存24h，取出放置至室温，无油水分离现象；

3.4、耐热试验：本发明提供的抗疱疹病毒软膏剂在水浴温度为60℃下保存12h，取出放置至室温，无油水分离现象。证明本发明提供的抗疱疹病毒软膏剂具有较好的稳定性。

试验例三、透皮吸收试验

1、试验对象：实施例2制备的抗疱疹病毒软膏剂。

2、试验方法：采用改良的Franz双室渗透装置，以离体小鼠皮肤为透皮屏障，以Hsp90抑制剂为指标，采用体外扩散池法，进行体外渗透试验。分别称取3 g实施例2制备的抗疱疹病毒软膏3份，均匀涂抹于离体小鼠皮肤后进行透皮试验，分别于给药后1、2、4、6、8、10、12、14h各取接受液1 mL，采用高效液相色谱法测定Hsp90抑制剂的累积渗透量，取样后即向接收池内补充1 ml 含2%吐温80的PBS液。其累积渗透量的计算公式如下：

其中：Cn为第n个取样点测得的药物浓度；A为渗透面积；Ci为第i （i < n—1）个取样点测得的药物浓度。以累积渗透量的平均值分别对时间t分别按零级、一级及Higuchi方程进行拟合，所得方程的斜率即为透皮速率常数J。其中扩散池面积为2.92 cm²，接收液体积为7 ml，接收液温度为37±0.5 ℃，磁振子转速200 r·min^-1，接收液为含2%吐温-80的PBS液。

3、试验结果：

试验结果如图1所示，以零级速率透皮转运，则Q-t直线的斜率即为透皮吸收速率，本发明提供的抗疱疹病毒软膏剂的透皮吸收速率J = 4.11μg/cm²，证明本发明提供的抗疱疹病毒软膏剂透皮吸收率高，更有利于疱疹病毒感染症的治疗。

试验例四、抗疱疹病毒软膏剂的药效学试验

1、试验材料：实施例2制备的抗疱疹病毒软膏剂。

2、试验对象：选取豚鼠15只，购于广东省医学实验动物中心。

3、试验方法：将15只豚鼠按性别、体重随机分为3组，分别为对照组、溶液组和软膏组, 每组5只。然后使用8 %的Na₂S脱毛剂将豚鼠背部的毛脱去，洗净，用7针梅花针深刺后，滴加30μLHSV-1原液感染。感染后2 h，各组进行给药处理：

对照组：均匀涂抹生理盐水；

溶液组：均匀涂抹使用DMSO溶液溶解2%的 AT-533粉末溶液；

软膏组：均匀涂抹实施例2制备的抗疱疹病毒软膏剂；

每天2次，连续给药5天。每天观察豚鼠背部皮肤的病变情况，连续观察8天，记录皮肤病变程度，皮肤病变级别的评判标准如下：

0.5级，皮肤发红；1级，出疱1-3个；2级，出疱3-5个；3级，出疱6-10个；4级，出疱>10个；20%～40 %结痂降1 级；50 %～100 %结痂降2 级；10 %～50%脱痂为0.5 级；60%～100%脱痂为0级。用t检验处理组间的差异显著性。

3、试验结果

试验结果如图2所示。从图2中可知，在感染第3天至第8天，软膏组与对照组和溶液组的豚鼠皮肤病变程度具有显著的改善，具有显著性(P<0.05)的差异，证明Hsp90抑制剂制成软膏剂更有利于其发挥抗疱疹病毒的作用。

Claims (8)

1.一种抗疱疹病毒软膏剂，其特征在于，由以下组分及其重量百分比组成：

热休克蛋白90抑制剂1-5%、油相基质10-40%、乳化剂5-18%、渗透促进剂2-6%、防腐剂0.05-0.1%和水30.9-81.95%;

所述油相基质由凡士林、聚乙二醇400和丙二醇按体积比0.5-1:1-2:2-4组成;

所述渗透促进剂由冰片和薄荷醇按重量比1:0.8组成。

2.如权利要求1所述的抗疱疹病毒软膏剂，其特征在于，由以下组分及其重量百分比组成：

热休克蛋白90抑制剂2%、油相基质30%、乳化剂12%、渗透促进剂4%、防腐剂0.08和水51.92%。

3.如权利要求1或2所述的抗疱疹病毒软膏剂，其特征在于，所述热休克蛋白90抑制剂为AT-533、SNX-2112、Xbj-B11或Xbj-B16。

4.如权利要求3所述的抗疱疹病毒软膏剂，其特征在于，所述热休克蛋白90抑制剂为AT-533。

5.如权利要求1所述的抗疱疹病毒软膏剂，其特征在于，所述油相基质由凡士林、聚乙二醇400和丙二醇按体积比0.8:1:3组成。

6.如权利要求1或2所述的抗疱疹病毒软膏剂，其特征在于，所述乳化剂为三乙醇胺、十二烷基苯磺酸钠硫酸钠、羊毛脂中的一种或其混合物。

7.如权利要求1或2所述的抗疱疹病毒软膏剂，其特征在于，所述防腐剂为羟基苯甲酸乙酯。

8.一种如权利要求1-7任一所述的抗疱疹病毒软膏剂的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：

S1取油相基质加热至75-92℃，加入热休克蛋白90抑制剂和渗透促进剂，搅拌至完全溶解，得油相液；

S2将乳化剂加入水中加热至75-92℃，搅拌至完全溶解，得水相液；

S3将步骤S1得到的油相液加入步骤S2得到的水相液中混合，接着加入防腐剂，在1000rpm下搅拌30-60min，即得。