CN105266163B - 一种纳豆菌综合酵素原液的制备方法 - Google Patents
一种纳豆菌综合酵素原液的制备方法 Download PDFInfo
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Abstract
本发明公开了一种纳豆菌综合酵素原液的制备方法。首选将植物原料打浆，加入糖，胶原蛋白粉制成发酵液，然后加入纳豆菌种子液，32‑38℃条件下发酵50‑100天，取发酵液上清液，加入维生素，异黄酮和氨基酸等营养物质，置于8‑14℃条件下静置3‑6个月，400‑1000rpm条件下离心5‑10min,取上清液，置于低温蒸发浓缩机中浓缩制成。本发明的方法制备的纳豆菌综合酵素原液，营养物质含量高，溶栓能力强，是制备抗血栓药物及其保健品良好的原料物质。本发明的方法制备简单，无需复杂的分离纯化设备，制备出高纳豆激酶酶活的酵素原液。
Description
技术领域
本发明涉及一种纳豆菌的发酵液，特别涉及一种纳豆菌综合酵素原液的制备方法。
背景技术
纳豆菌属枯草芽孢杆菌纳豆菌亚种，是一类好氧型，内生抗逆胞子的杆状细菌，自身没有致病性，只具有单层细胞外膜，能产生多种抗菌素和酶，具有广谱抗菌活性和极强的抗逆能力，纳豆发酵过程中，会由纳豆菌产生的一种丝氨酸蛋白酶，名为纳豆激酶，直接分解血栓的纤维蛋白酶，具有强大的溶栓作用。
然而，天然的大豆发酵产生的纳豆激酶含量低，难以制备成为具有治疗功能的溶栓药物，因此，目前的纳豆菌发酵一般采用和具有保健功能的动植物原料进行发酵生产保健品，如，专利201210008190.2公开了一种纳豆菌和虫草菌复合酵素系列产品的生产方法；专利201010136617.8公开了纳豆菌综合酵素低分子化饮料的生产方法；专利201310598684.5公开了纳豆菌发酵法生产低分子樱桃酵素饮料的技术研究；专利201310604713.4公开了纳豆菌发酵法制备低分子人参皂苷肽的方法；专利201310617333.4公开了一种纳豆菌发酵法制备低分子海参肽的方法。上述专利中制备的产品均为保健品，具有一定的功效，但是使用效果不明显，营养成分依赖于特殊的动植物原料，制备成本高。
发明内容
本发明是为了克服上述现有技术中的缺陷，通过选择高产菌株和优化发酵工艺提出一种纳豆菌综合酵素原液的制备方法。
一种纳豆菌综合酵素原液的制备方法，按照如下步骤进行：
(1)按照重量份数，取植物原料80-100份，加入80-180份水打浆，然后加入糖1-2份，胶原蛋白粉1-2份，制成发酵液；
(2)按照发酵液2-4％的质量百分数加入纳豆菌种子液，32-38℃条件下发酵50-100天；
(3)取发酵液上清液，按照重量份数，加入0.01-0.2份维生素，0.2-0.5份异黄酮，0.3-0.6份氨基酸；
(4)置于8-14℃条件下静置3-6个月，400-1000rpm条件下离心5-10min,取上清液，置于低温蒸发浓缩机中浓缩至离心液体积的1/2-1/8,制成。
所述纳豆菌为枯草芽孢杆菌菌株QR，其保藏号为CGMCC No.11274。该菌种的保藏单位:中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心；地址：北京市朝阳区北辰西路1号院3号；保藏日期：2015年8月25日；分类命名：枯草芽孢杆菌Bacillus Subtilis。
所述植物原料为大豆，花生，玉米，南瓜，番茄，土豆，苹果，梨，红豆，豇豆，芝麻，葡萄，菠萝，苹果，白菜中的一种或一种以上。
所述维生素为维生素A，维生素C，维生素E，维生素D，维生素B1，维生素B2，维生素B5，维生素B6，维生素B12，维生素PP，维生素K中的一种或一种以上。
所述异黄酮为大豆异黄酮。
所述氨基酸为丙氨酸，缬氨酸，亮氨酸，异亮氨酸，蛋氨酸，天冬氨酸，谷氨酸，赖氨酸，精氨酸，甘氨酸，丝氨酸，苏氨酸，半胱氨酸，天冬酰胺，谷氨酰胺，苯丙氨酸，酪氨酸，组氨酸，色氨酸，脯氨酸中的一种或一种以上。
所述低温蒸发浓缩机的工作温度为4-12℃，真空度为-70kpa～-95kpa。
与现有技术相比，本发明具有如下有益效果：本发明的方法制备的纳豆菌综合酵素原液，营养物质含量高，含有活性的低分子肽，寡糖，皂苷，异 黄酮等对人体有益的成分，同时，含有的纳豆激酶酶活性高，溶栓能力强，是制备抗血栓药物及其保健品良好的原料物质。本发明的方法制备简单，无需复杂的分离纯化设备，制备出高纳豆激酶酶活的酵素原液。
具体实施方式
下面结合具体实施例对本发明进行进一步说明，但应当理解本发明的保护范围并不受具体实施方式的限制。
实施例1
一种纳豆菌综合酵素原液的制备方法，按照如下步骤进行：
(1)按照重量份数，取大豆90份，加入130份水打浆，然后加入糖1份，胶原蛋白粉1份，制成发酵液；
(2)按照发酵液3％的质量百分数加入纳豆菌种子液(枯草芽孢杆菌菌株QR，其保藏号为CGMCC No.11274)，37℃条件下发酵80天；
(3)取发酵液上清液，按照重量份数，加入0.12份维生素，0.4份大豆异黄酮，0.32份氨基酸；
所述维生素为维生素A 0.01份，维生素C 0.02份，维生素E 0.01份，维生素D 0.01份，维生素B1 0.01份，维生素B2 0.01份，维生素B5 0.01份，维生素B6 0.01份，维生素B120.01份，维生素PP 0.01份，维生素K 0.01份。
所述氨基酸为丙氨酸0.01份，缬氨酸0.01份，亮氨酸0.02份，异亮氨酸0.02份，蛋氨酸0.05份，天冬氨酸0.03份，谷氨酸0.01份，赖氨酸0.01份，精氨酸0.03份，甘氨酸0.02份，丝氨酸0.01份，苏氨酸0.01份，半胱氨酸0.01份，天冬酰胺0.01份，谷氨酰胺0.05份，苯丙氨酸0.01份，酪氨酸0.02份，组氨酸0.01份，色氨酸0.01份，脯氨酸0.01份。
(4)置于10℃条件下静置4个月，800rpm条件下离心6min,取上清液，置于低温蒸发浓缩机中，在工作温度为8℃，真空度为-80kpa的条件下，浓 缩至离心液体积的1/4，制成。
本实施例制备的纳豆菌综合酵素原液含有较多的活性低分子肽，寡糖，皂苷，异黄酮。采用传统工艺，将上述纳豆菌综合酵素原液低温蒸干并加入25wt％药学上可以接受的载体，制成粒剂量，每粒0.5g，含纳豆激酶3000FU。
实施例2
一种纳豆菌综合酵素原液的制备方法，按照如下步骤进行：
(1)按照重量份数，取花生20份，玉米30份，南瓜40份，加入80份水打浆，然后加入糖1份，胶原蛋白粉1份，制成发酵液；
(2)按照发酵液2％的质量百分数加入纳豆菌种子液(枯草芽孢杆菌菌株QR，其保藏号为CGMCC No.11274)，35℃条件下发酵90天；
(3)取发酵液上清液，按照重量份数，加入0.16份维生素，0.2份异黄酮，0.4份氨基酸；
所述维生素为维生素A 0.01份，维生素C 0.05份，维生素E 0.01份，维生素D 0.01份，维生素B1 0.01份，维生素B2 0.01份，维生素B5 0.01份，维生素B6 0.01份，维生素B120.04份。
所述氨基酸为丙氨酸0.02份，缬氨酸0.02份，亮氨酸0.02份，异亮氨酸0.02份，蛋氨酸0.05份，天冬氨酸0.03份，谷氨酸0.01份，赖氨酸0.01份，精氨酸0.03份，甘氨酸0.02份，丝氨酸0.01份，苏氨酸0.01份，半胱氨酸0.01份，天冬酰胺0.01份，谷氨酰胺0.05份，苯丙氨酸0.01份，酪氨酸0.02份，组氨酸0.01份，色氨酸0.01份，脯氨酸0.03份。
(4)置于8℃条件下静置3个月，400rpm条件下离心5min,取上清液，置于低温蒸发浓缩机中，在工作温度为4℃，真空度为-95kpa的条件下，浓缩至离心液体积的1/2,制成。
本实施例制备的纳豆菌综合酵素原液含有较多的活性低分子肽，寡糖，皂苷，异黄酮。采用传统工艺，将上述纳豆菌综合酵素原液低温蒸干并加入 25wt％药学上可以接受的载体，制成粒剂量，每粒0.5g，含纳豆激酶2800FU。
实施例3
一种纳豆菌综合酵素原液的制备方法，按照如下步骤进行：
(1)按照重量份数，取番茄30份，土豆30份，苹果30份，加入100份水打浆，然后加入糖2份，胶原蛋白粉2份，制成发酵液；
(2)按照发酵液4％的质量百分数加入纳豆菌种子液(枯草芽孢杆菌菌株QR，其保藏号为CGMCC No.11274)，38℃条件下发酵50天；
(3)取发酵液上清液，按照重量份数，加入0.015份维生素，0.5份大豆异黄酮，0.42份氨基酸；
所述维生素为维生素A 0.01份，维生素C 0.05份，维生素E 0.01份，维生素D 0.01份，维生素B1 0.01份，维生素B2 0.01份，维生素B5 0.01份，维生素B6 0.01份，维生素B120.03份。
所述氨基酸为丙氨酸0.02份，缬氨酸0.02份，亮氨酸0.02份，异亮氨酸0.02份，蛋氨酸0.05份，天冬氨酸0.03份，谷氨酸0.01份，赖氨酸0.01份，精氨酸0.03份，甘氨酸0.04份，丝氨酸0.01份，苏氨酸0.01份，半胱氨酸0.01份，天冬酰胺0.01份，谷氨酰胺0.05份，苯丙氨酸0.01份，酪氨酸0.02份，组氨酸0.01份，色氨酸0.01份，脯氨酸0.03份。
(4)置于14℃条件下静置3个月，1000rpm条件下离心10min,取上清液，置于低温蒸发浓缩机中，在工作温度为4℃，真空度为-80kpa的条件下，浓缩至离心液体积的1/6,制成。
本实施例制备的纳豆菌综合酵素原液含有较多的活性低分子肽，寡糖，皂苷，异黄酮。采用传统工艺，将上述纳豆菌综合酵素原液低温蒸干并加入25wt％药学上可以接受的载体，制成粒剂量，每粒0.5g，含纳豆激酶3200FU。
实施例4
一种纳豆菌综合酵素原液的制备方法，按照如下步骤进行：
(1)按照重量份数，取红豆35份，豇豆35份，芝麻20份，加入180份水打浆，然后加入糖2份，胶原蛋白粉2份，薰衣草精油1份，制成发酵液；
(2)按照发酵液3％的质量百分数加入纳豆菌种子液(枯草芽孢杆菌菌株QR，其保藏号为CGMCC No.11274)，36℃条件下发酵90天；
(3)取发酵液上清液，按照重量份数，加入0.12份维生素，0.4份大豆异黄酮，0.32份氨基酸；
所述维生素为维生素A 0.01份，维生素C 0.02份，维生素E 0.01份，维生素D 0.01份，维生素B1 0.01份，维生素B2 0.01份，维生素B5 0.01份，维生素B6 0.01份，维生素B120.01份，维生素PP 0.01份，维生素K 0.01份。
所述氨基酸为丙氨酸0.01份，缬氨酸0.01份，亮氨酸0.02份，异亮氨酸0.02份，蛋氨酸0.05份，天冬氨酸0.03份，谷氨酸0.01份，赖氨酸0.01份，精氨酸0.03份，甘氨酸0.02份，丝氨酸0.01份，苏氨酸0.01份，半胱氨酸0.01份，天冬酰胺0.01份，谷氨酰胺0.05份，苯丙氨酸0.01份，酪氨酸0.02份，组氨酸0.01份，色氨酸0.01份，脯氨酸0.01份。
(4)置于9℃条件下静置5个月，900rpm条件下离心8min,取上清液，置于低温蒸发浓缩机中，在工作温度为4℃，真空度为-80kpa的条件下，浓缩至离心液体积的1/4,制成。
本实施例制备的纳豆菌综合酵素原液含有较多的活性低分子肽，寡糖，皂苷，异黄酮。采用传统工艺，将上述纳豆菌综合酵素原液低温蒸干并加入25wt％药学上可以接受的载体，制成粒剂量，每粒0.5g，含纳豆激酶4000FU。
实施例5
一种纳豆菌综合酵素原液的制备方法，按照如下步骤进行：
(1)按照重量份数，取大豆90份，加入130份水打浆，然后加入糖1 份，胶原蛋白粉1份，玫瑰精油1份，制成发酵液；
(2)按照发酵液3％的质量百分数加入纳豆菌种子液(枯草芽孢杆菌菌株QR，其保藏号为CGMCC No.11274)，37℃条件下发酵80天；
(3)取发酵液上清液，按照重量份数，加入0.12份维生素，0.4份大豆异黄酮，0.32份氨基酸；
所述维生素为维生素A 0.01份，维生素C 0.02份，维生素E 0.01份，维生素D 0.01份，维生素B1 0.01份，维生素B2 0.01份，维生素B5 0.01份，维生素B6 0.01份，维生素B120.01份，维生素PP 0.01份，维生素K 0.01份。
所述氨基酸为丙氨酸0.01份，缬氨酸0.01份，亮氨酸0.02份，异亮氨酸0.02份，蛋氨酸0.05份，天冬氨酸0.03份，谷氨酸0.01份，赖氨酸0.01份，精氨酸0.03份，甘氨酸0.02份，丝氨酸0.01份，苏氨酸0.01份，半胱氨酸0.01份，天冬酰胺0.01份，谷氨酰胺0.05份，苯丙氨酸0.01份，酪氨酸0.02份，组氨酸0.01份，色氨酸0.01份，脯氨酸0.01份。
(4)置于10℃条件下静置4个月，800rpm条件下离心6min,取上清液，置于低温蒸发浓缩机中，在工作温度为8℃，真空度为-80kpa的条件下，浓缩至离心液体积的1/4，制成。
本实施例制备的纳豆菌综合酵素原液含有较多的活性低分子肽，寡糖，皂苷，异黄酮。采用传统工艺，将上述纳豆菌综合酵素原液低温蒸干并加入25wt％药学上可以接受的载体，制成粒剂量，每粒0.5g，含纳豆激酶4000FU。
对比例1
一种纳豆菌综合酵素原液的制备方法，按照如下步骤进行：
(1)按照重量份数，取大豆90份，加入130份水打浆，然后加入糖1份，制成发酵液；
(2)按照发酵液3％的质量百分数加入纳豆菌种子液(枯草芽孢杆菌菌株 QR，其保藏号为CGMCC No.11274)，37℃条件下发酵80天；
(3)取发酵液上清液，按照重量份数，加入0.12份维生素，0.4份大豆异黄酮，0.32份氨基酸；
所述维生素为维生素A 0.01份，维生素C 0.02份，维生素E 0.01份，维生素D 0.01份，维生素B1 0.01份，维生素B2 0.01份，维生素B5 0.01份，维生素B6 0.01份，维生素B120.01份，维生素PP 0.01份，维生素K 0.01份。
所述氨基酸为丙氨酸0.01份，缬氨酸0.01份，亮氨酸0.02份，异亮氨酸0.02份，蛋氨酸0.05份，天冬氨酸0.03份，谷氨酸0.01份，赖氨酸0.01份，精氨酸0.03份，甘氨酸0.02份，丝氨酸0.01份，苏氨酸0.01份，半胱氨酸0.01份，天冬酰胺0.01份，谷氨酰胺0.05份，苯丙氨酸0.01份，酪氨酸0.02份，组氨酸0.01份，色氨酸0.01份，脯氨酸0.01份。
(4)置于10℃条件下静置4个月，800rpm条件下离心6min,取上清液，置于低温蒸发浓缩机中，在工作温度为8℃，真空度为-80kpa的条件下，浓缩至离心液体积的1/4，制成。
本实施例制备的纳豆菌综合酵素原液含有较多的活性低分子肽，寡糖，皂苷，异黄酮。采用传统工艺，将上述纳豆菌综合酵素原液低温蒸干并加入25wt％药学上可以接受的载体，制成粒剂量，每粒0.5g，含纳豆激酶2200FU。
对比例2
一种纳豆菌综合酵素原液的制备方法，按照如下步骤进行：
(1)按照重量份数，取大豆90份，加入130份水打浆，然后加入糖1份，胶原蛋白粉1份，制成发酵液；
(2)按照发酵液3％的质量百分数加入纳豆菌种子液(枯草芽孢杆菌菌株QR，其保藏号为CGMCC No.11274)，37℃条件下发酵80天；
(3)取发酵液上清液，按照重量份数，加入0.12份维生素，0.4份大豆 异黄酮，0.32份氨基酸；
所述维生素为维生素A 0.01份，维生素C 0.02份，维生素E 0.01份，维生素D 0.01份，维生素B1 0.01份，维生素B2 0.01份，维生素B5 0.01份，维生素B6 0.01份，维生素B120.01份，维生素PP 0.01份，维生素K 0.01份。
所述氨基酸为丙氨酸0.01份，缬氨酸0.01份，亮氨酸0.02份，异亮氨酸0.02份，蛋氨酸0.05份，天冬氨酸0.03份，谷氨酸0.01份，赖氨酸0.01份，精氨酸0.03份，甘氨酸0.02份，丝氨酸0.01份，苏氨酸0.01份，半胱氨酸0.01份，天冬酰胺0.01份，谷氨酰胺0.05份，苯丙氨酸0.01份，酪氨酸0.02份，组氨酸0.01份，色氨酸0.01份，脯氨酸0.01份。
(4)置于10℃条件下静置4个月，取上清液，置于低温蒸发浓缩机中，在工作温度为8℃，真空度为-80kpa的条件下，浓缩至原液体积的1/4，制成。
本实施例制备的纳豆菌综合酵素原液含有较多的活性低分子肽，寡糖，皂苷，异黄酮。采用传统工艺，将上述纳豆菌综合酵素原液低温蒸干并加入25wt％药学上可以接受的载体，制成粒剂量，每粒0.5g，含纳豆激酶2000FU。
对比例3
一种纳豆菌综合酵素原液的制备方法，按照如下步骤进行：
(1)按照重量份数，取大豆90份，加入130份水打浆，然后加入糖1份，胶原蛋白粉1份，制成发酵液；
(2)按照发酵液3％的质量百分数加入纳豆菌种子液(枯草芽孢杆菌菌株QR，其保藏号为CGMCC No.11274)，37℃条件下发酵80天；
(3)取发酵液上清液，置于10℃条件下静置4个月，800rpm条件下离心6min,取上清液，置于低温蒸发浓缩机中，在工作温度为8℃，真空度为-80kpa的条件下，浓缩至离心液体积的1/4，制成。
本实施例制备的纳豆菌综合酵素原液含有的活性低分子肽，寡糖，皂苷， 异黄酮较少。采用传统工艺，将上述纳豆菌综合酵素原液低温蒸干并加入25wt％药学上可以接受的载体，制成粒剂量，每粒0.5g，含纳豆激酶2000FU。
以上公开的仅为本发明的具体实施例，但是，本发明并非局限于此，任何本领域的技术人员能思之的变化都应落入本发明的保护范围。
Claims (4)
1.一种纳豆菌综合酵素原液的制备方法，其特征在于，按照如下步骤进行：
(1)按照重量份数，取植物原料80-100份，加入80-180份水打浆，然后加入糖1-2份，胶原蛋白粉1-2份，制成发酵液；
(2)按照发酵液2-4％的质量百分数加入纳豆菌种子液，32-38℃条件下发酵50-100天；
(3)取发酵液上清液，按照重量份数，加入0.01-0.2份维生素，0.2-0.5份异黄酮，0.3-0.6份氨基酸；
(4)置于8-14℃条件下静置3-6个月，400-1000rpm条件下离心5-10min,取上清液，置于低温蒸发浓缩机中浓缩至离心液体积的1/2-1/8,制成；
所述纳豆菌为枯草芽孢杆菌菌株QR，其保藏号为CGMCC No.11274；
所述维生素为维生素A，维生素C，维生素E，维生素D，维生素B1，维生素B2，维生素B5，维生素B6，维生素B12，维生素PP，维生素K中的一种或一种以上；
所述氨基酸为丙氨酸，缬氨酸，亮氨酸，异亮氨酸，蛋氨酸，天冬氨酸，谷氨酸，赖氨酸，精氨酸，甘氨酸，丝氨酸，苏氨酸，半胱氨酸，天冬酰胺，谷氨酰胺，苯丙氨酸，酪氨酸，组氨酸，色氨酸，脯氨酸中的一种或一种以上。
2.根据权利要求1所述的纳豆菌综合酵素原液的制备方法，其特征在于，所述植物原料为大豆，花生，玉米，南瓜，番茄，土豆，苹果，梨，红豆，豇豆，芝麻，葡萄，菠萝，- 白菜中的一种或一种以上。
3.根据权利要求1所述的纳豆菌综合酵素原液的制备方法，其特征在于，所述异黄酮为大豆异黄酮。
4.根据权利要求1所述的纳豆菌综合酵素原液的制备方法，其特征在于，所述低温蒸发浓缩机的工作温度为4-12℃，真空度为-70kpa～-95kpa。
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