CN105203747B - 一种精氨酸对标记抗体荧光粒子的封闭方法 - Google Patents
一种精氨酸对标记抗体荧光粒子的封闭方法 Download PDFInfo
- Publication number
- CN105203747B CN105203747B CN201510606548.5A CN201510606548A CN105203747B CN 105203747 B CN105203747 B CN 105203747B CN 201510606548 A CN201510606548 A CN 201510606548A CN 105203747 B CN105203747 B CN 105203747B
- Authority
- CN
- China
- Prior art keywords
- fluorescent particles
- arginine
- solution
- closing
- bsa
- Prior art date
- Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
- Active
Links
- 239000002245 particle Substances 0.000 title claims abstract description 133
- 239000004475 Arginine Substances 0.000 title claims abstract description 94
- ODKSFYDXXFIFQN-UHFFFAOYSA-N arginine Natural products OC(=O)C(N)CCCNC(N)=N ODKSFYDXXFIFQN-UHFFFAOYSA-N 0.000 title claims abstract description 94
- 238000000034 method Methods 0.000 title claims abstract description 22
- 238000004140 cleaning Methods 0.000 claims abstract description 18
- 230000004913 activation Effects 0.000 claims abstract description 6
- 238000004321 preservation Methods 0.000 claims abstract description 4
- 238000005119 centrifugation Methods 0.000 claims description 21
- 230000009514 concussion Effects 0.000 claims description 21
- 229920001213 Polysorbate 20 Polymers 0.000 claims description 18
- 235000010486 polyoxyethylene sorbitan monolaurate Nutrition 0.000 claims description 18
- 239000000256 polyoxyethylene sorbitan monolaurate Substances 0.000 claims description 18
- 239000000872 buffer Substances 0.000 claims description 12
- 239000002244 precipitate Substances 0.000 claims description 9
- UQLDLKMNUJERMK-UHFFFAOYSA-L di(octadecanoyloxy)lead Chemical compound [Pb+2].CCCCCCCCCCCCCCCCCC([O-])=O.CCCCCCCCCCCCCCCCCC([O-])=O UQLDLKMNUJERMK-UHFFFAOYSA-L 0.000 claims description 8
- 238000001556 precipitation Methods 0.000 claims description 7
- 239000000203 mixture Substances 0.000 claims description 4
- DWNBOPVKNPVNQG-LURJTMIESA-N (2s)-4-hydroxy-2-(propylamino)butanoic acid Chemical compound CCCN[C@H](C(O)=O)CCO DWNBOPVKNPVNQG-LURJTMIESA-N 0.000 claims description 3
- 210000002966 serum Anatomy 0.000 abstract description 6
- 238000001179 sorption measurement Methods 0.000 abstract description 6
- 238000001994 activation Methods 0.000 abstract description 5
- 238000004132 cross linking Methods 0.000 abstract description 5
- 230000007423 decrease Effects 0.000 abstract description 2
- 102000004169 proteins and genes Human genes 0.000 abstract description 2
- 108090000623 proteins and genes Proteins 0.000 abstract description 2
- 239000000243 solution Substances 0.000 description 94
- 238000006243 chemical reaction Methods 0.000 description 20
- PXIPVTKHYLBLMZ-UHFFFAOYSA-N Sodium azide Chemical compound [Na+].[N-]=[N+]=[N-] PXIPVTKHYLBLMZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 10
- 239000006228 supernatant Substances 0.000 description 10
- 230000006872 improvement Effects 0.000 description 9
- 239000007788 liquid Substances 0.000 description 6
- 238000001514 detection method Methods 0.000 description 5
- 238000002372 labelling Methods 0.000 description 4
- 239000004005 microsphere Substances 0.000 description 4
- 239000007853 buffer solution Substances 0.000 description 3
- 230000000052 comparative effect Effects 0.000 description 3
- 238000012805 post-processing Methods 0.000 description 3
- KCXVZYZYPLLWCC-UHFFFAOYSA-N EDTA Chemical compound OC(=O)CN(CC(O)=O)CCN(CC(O)=O)CC(O)=O KCXVZYZYPLLWCC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 239000007983 Tris buffer Substances 0.000 description 2
- 239000005018 casein Substances 0.000 description 2
- BECPQYXYKAMYBN-UHFFFAOYSA-N casein, tech. Chemical compound NCCCCC(C(O)=O)N=C(O)C(CC(O)=O)N=C(O)C(CCC(O)=N)N=C(O)C(CC(C)C)N=C(O)C(CCC(O)=O)N=C(O)C(CC(O)=O)N=C(O)C(CCC(O)=O)N=C(O)C(C(C)O)N=C(O)C(CCC(O)=N)N=C(O)C(CCC(O)=N)N=C(O)C(CCC(O)=N)N=C(O)C(CCC(O)=O)N=C(O)C(CCC(O)=O)N=C(O)C(COP(O)(O)=O)N=C(O)C(CCC(O)=N)N=C(O)C(N)CC1=CC=CC=C1 BECPQYXYKAMYBN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 235000021240 caseins Nutrition 0.000 description 2
- 230000000694 effects Effects 0.000 description 2
- 238000005516 engineering process Methods 0.000 description 2
- 239000004816 latex Substances 0.000 description 2
- 229920000126 latex Polymers 0.000 description 2
- 238000012986 modification Methods 0.000 description 2
- 230000004048 modification Effects 0.000 description 2
- 230000035945 sensitivity Effects 0.000 description 2
- 239000002904 solvent Substances 0.000 description 2
- LENZDBCJOHFCAS-UHFFFAOYSA-N tris Chemical compound OCC(N)(CO)CO LENZDBCJOHFCAS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 239000002250 absorbent Substances 0.000 description 1
- 230000002745 absorbent Effects 0.000 description 1
- 238000010521 absorption reaction Methods 0.000 description 1
- 239000000427 antigen Substances 0.000 description 1
- 102000036639 antigens Human genes 0.000 description 1
- 108091007433 antigens Proteins 0.000 description 1
- 230000015572 biosynthetic process Effects 0.000 description 1
- 230000000903 blocking effect Effects 0.000 description 1
- 238000011088 calibration curve Methods 0.000 description 1
- 125000003178 carboxy group Chemical group [H]OC(*)=O 0.000 description 1
- 230000008859 change Effects 0.000 description 1
- 239000003795 chemical substances by application Substances 0.000 description 1
- 238000005520 cutting process Methods 0.000 description 1
- 239000006185 dispersion Substances 0.000 description 1
- 238000004090 dissolution Methods 0.000 description 1
- 238000001035 drying Methods 0.000 description 1
- 238000003018 immunoassay Methods 0.000 description 1
- 150000002500 ions Chemical class 0.000 description 1
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 description 1
- 230000008569 process Effects 0.000 description 1
- 239000000047 product Substances 0.000 description 1
- 235000018102 proteins Nutrition 0.000 description 1
- 238000004445 quantitative analysis Methods 0.000 description 1
- 238000007789 sealing Methods 0.000 description 1
- 238000000926 separation method Methods 0.000 description 1
- 238000002604 ultrasonography Methods 0.000 description 1
Classifications
-
- G—PHYSICS
- G01—MEASURING; TESTING
- G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
- G01N33/00—Investigating or analysing materials by specific methods not covered by groups G01N1/00 - G01N31/00
- G01N33/48—Biological material, e.g. blood, urine; Haemocytometers
- G01N33/50—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing
- G01N33/53—Immunoassay; Biospecific binding assay; Materials therefor
- G01N33/531—Production of immunochemical test materials
- G01N33/532—Production of labelled immunochemicals
- G01N33/533—Production of labelled immunochemicals with fluorescent label
Landscapes
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Immunology (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Molecular Biology (AREA)
- Biomedical Technology (AREA)
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Hematology (AREA)
- Urology & Nephrology (AREA)
- Biotechnology (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- Cell Biology (AREA)
- Food Science & Technology (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- Physics & Mathematics (AREA)
- Analytical Chemistry (AREA)
- Microbiology (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- General Physics & Mathematics (AREA)
- Pathology (AREA)
- Peptides Or Proteins (AREA)
- Investigating Or Analysing Biological Materials (AREA)
- Solid-Sorbent Or Filter-Aiding Compositions (AREA)
Abstract
本发明公开的精氨酸对标记抗体荧光粒子的封闭方法，包括对荧光粒子的清洗、活化、交联、封闭以及保存，其中，封闭包括先后顺次进行的精氨酸封闭和BSA封闭；精氨酸封闭为将荧光粒子以精氨酸溶液重悬，精氨酸以离子键或者共价键键合到荧光粒子；BSA封闭为将精氨酸封闭后的荧光微粒以BSA溶液重悬，BSA以离子键或者共价键键合到荧光粒子；得到封闭后的荧光粒子。本发明通过精氨酸对荧光粒子的封闭，使荧光粒子上多余的或者未结合的区域被精氨酸占据，促使血清中的离子、免疫复合物、蛋白质等不与荧光粒子非特异性吸附，同时也降低了荧光粒子本身与膜的非特异性吸附，降低了检测信号值，减少了假阳性信号。
Description
技术领域
本发明涉及一种用抗体特异性检测抗原的制备方法，特别是一种精氨酸对标记抗体荧光粒子的封闭方法。
背景技术
在抗原抗体的免疫反应中，标记抗体都会存在各种不同的非特异性吸附。这些非特异性吸附中，有些通过抗干扰试剂处理来解决，但是有很多需要对标记抗体的标记后处理来解决。
精氨酸分子结构式如下：
精氨酸离子结构式如下：
发明内容
为解决上述问题，本发明公开的精氨酸对标记抗体荧光粒子的封闭方法，通过精氨酸对荧光粒子进行进一步的标记，可以进一步地降低检测时非特异性因素的干扰，从而达到降低背景信号，提高检测性能，增强灵敏度的目的。
本发明公开的精氨酸对标记抗体荧光粒子的封闭方法，包括对荧光粒子(含有荧光素的胶乳微球或者其他的胶乳微球以及其他的微球，其直径在10nm到1mm之间不等，均可以适用本发明技术方案)的清洗、活化、交联、封闭以及保存，
其中，封闭包括精氨酸封闭和BSA封闭；
所述精氨酸封闭为将荧光粒子以精氨酸溶液重悬，精氨酸以离子键或者共价键键合到荧光粒子上；
所述BSA封闭为将荧光微粒以BSA溶液重悬，BSA以离子键或者共价键键合到荧光粒子上；
得到封闭后的荧光粒子。
本发明公开的精氨酸对标记抗体荧光粒子的封闭方法的一种改进，精氨酸封闭时精氨酸溶液浓度为1-5.0M。溶剂为PBS缓冲液，pH6.8-8.5。
本发明公开的精氨酸对标记抗体荧光粒子的封闭方法的一种改进，荧光粒子以精氨酸溶液重悬为将添加荧光粒子的精氨酸溶液在50-80℃震荡20-60min。
本发明公开的精氨酸对标记抗体荧光粒子的封闭方法的一种改进，BSA封闭时BSA溶液的浓度为0.5-5wt％。溶剂为PBS缓冲液pH6.8-8.5。
本发明公开的精氨酸对标记抗体荧光粒子的封闭方法的一种改进，荧光粒子以BSA溶液重悬为将添加荧光粒子的BSA溶液在50-80℃震荡20-60min。
本发明公开的精氨酸对标记抗体荧光粒子的封闭方法的一种改进，封闭还包括对经精氨酸封闭和BSA封闭后的荧光粒子的清洗，清洗为将封闭后的荧光粒子经离心分离得到沉淀后，将沉淀以PBST缓冲液超声清洗至少一次。
本发明公开的精氨酸对标记抗体荧光粒子的封闭方法的一种改进，离心分离为在2-8℃下离心20-60min得到沉淀。
本发明公开的精氨酸对标记抗体荧光粒子的封闭方法的一种改进，PBST缓冲液的组成包括6-200mM PBS和0.01-0.10wt％tween20。其pH值为7.0-8.5。
本发明公开的精氨酸对标记抗体荧光粒子的封闭方法中清洗、活化、交联以及保存均可以采用现有的任何技术方案来进行实施例，以下的实施方案仅仅为对相应清洗、活化、交联以及保存与本发明封闭方法相结合的技术方案的一种说明，而并不代表对本发明技术方案保护范围的限定：
1、荧光粒子清洗：
用10mM Mes缓冲液清洗适量荧光粒子，而后在4℃，15000rpm离心30min，吸去上清液；沉淀再加入500μl Mes缓冲液中，超声2min，再次离心，去除上清液。同前述操作依次清洗3次。
具体操作步骤如下：
取3mg羧基荧光微球(3mg 200nm flash red)，分散于适量10mM Mes缓冲液，4℃下15000rpm离心30min，去上清液→沉淀中加0.5ml Mes缓冲液，4℃下15000rpm离心30min，去上清液→用Mes缓冲液溶解沉淀，超声2min，4℃下15000rpm离心30min，去上清液→用Mes缓冲液溶解沉淀，超声2min，4℃下15000rpm离心30min，去上清液，取沉淀，加入0.5ml Mes缓冲液溶解，超声2min，即可得到清洗完成的荧光粒子。
2、活化
①取清洗后的荧光粒子3mg，加入300μl Mes缓冲液，超声6min，
②依次加入50μl EDC(50mg/ml)，50μl NHS(50mg/ml)，
③混匀，在室温震荡避光反应30min，得到活化后的荧光粒子。
3、交联
①取活化后的荧光粒子3mg，在Mes缓冲液溶解，4℃下15000rpm离心60min，去上清液，取沉淀物，
②沉淀物用PBS(pH7.4)清洗后，4℃下15000rpm离心30min，去上清液，取沉淀物，
③沉淀物中加入0.5ml PBS缓冲液，超声6min，
④再加500μg PCT抗体(用PH7.4的PBS溶解，)，混匀，
⑤于37℃避光震荡反应4h；
⑥4℃下15000rpm离心30min，去上清液，取沉淀物，得到交联后的荧光粒子。
4、封闭
①将交联后的荧光粒子，用含1.0M精氨酸溶液(以pH7.4的PBS缓冲液溶解)重悬，60℃震荡反应30min，
②再用含1％的BSA溶液(以pH7.4的PBS缓冲液溶解)重悬，60℃震荡反应30min，4℃下15000rpm离心30min，去上清液，取沉淀物，
③沉淀物用PBST缓冲液(PH7.4，10mMPBS 0.05％tween20)溶解分散、超声清洗、离心三次，得到封闭后的荧光粒子
5、保存
封闭后的荧光粒子用50mM Tris(1％酪蛋白，0.5％BSA，0.05％TW20，10mM EDTA，3％PEG，0.1％NaN3，pH8.0)溶解成10mg/ml溶液保存。
本发明方案是用精氨酸在标记抗体荧光粒子做后处理后，可以减少血清中的非特异性吸附，并降低血清中的0值的本底信号(背景信号)，增加灵敏度，去除假阳性标本。通过对标记抗体荧光粒子的后处理，精氨酸通过共价键或者离子键作用结合到标记的荧光粒子上，以封闭抗体交联荧光粒子后，荧光粒子上多余的或者未结合的区域被精氨酸占据，促使血清中的离子、免疫复合物、蛋白质等不与荧光粒子非特异性吸附，同时也降低了荧光粒子本身与膜的非特异性吸附，降低了检测信号值，减少了假阳性信号。
具体实施方式
下面结合具体实施方式，进一步阐明本发明，应理解下述具体实施方式仅用于说明本发明而不用于限制本发明的范围。
本发明技术方案中对荧光粒子的清洗、活化、交联以及保存均可以采用现有的技术方案(故而在具体的实施例中予以省略而不做限定)，以下实施例所示均表示为相应的封闭方案与现有技术方案结合后形成完整的技术方案而得到标记抗体荧光粒子。
实施例1
本实施例中对荧光粒子的封闭为将荧光粒子顺次采用精氨酸封闭和BSA封闭，其中精氨酸封闭为将荧光粒子以精氨酸溶液重悬后，再以BSA溶液重悬即可得到封闭后的荧光粒子。其中，荧光粒子以精氨酸溶液重悬时，精氨酸溶液为1.0M的PBS缓冲液溶液，溶液为pH7.4，重悬是在60℃震荡反应30min；精氨酸封闭后的荧光粒子以BSA溶液重悬时，BSA溶液为1％的PBS缓冲液溶液，溶液为pH7.4，重悬是在60℃震荡反应30min，而后经清洗、离心分离后得到封闭后的荧光粒子样品。
对比例
本对比例中对荧光粒子的封闭为将荧光粒子采用BSA封闭，其中荧光粒子以BSA溶液重悬时，BSA溶液为1％的PBS缓冲液溶液，溶液为pH7.4，重悬是在60℃震荡反应30min，而后经清洗、离心分离后得到封闭后的荧光粒子样品。
实施例1和对比例得到的荧光粒子样品分别经配制成检测试剂盒，后测试得到如表一和表二所示结果：
PCT校准品浓度梯度：0，0.05，0.1，0.39，1.56，6.25，25，50，100ng/ml。校准品溶液配方：100mM PBS-BSA-NaN3(pH7.4，2.0％BSA，0.1％NaN3)。校准品加入量：50μl。
PCT包被抗体浓度：5mg/ml。包被抗体溶液：100mM PBS-NaN3(pH7.4，0.1％NaN3)。用PCT包被抗体划膜，然后烘干保存过夜后备用。在膜两头分别重叠接触式贴上吸水纸和样品垫后，用切割机分别切割成0.4cm宽的试纸条，装入卡壳内室温干燥备用。
PCT标记抗体荧光粒子浓度：0.05mg/ml。标记抗体荧光粒子溶液：50mM Tris(1％酪蛋白，0.5％BSA，0.05％Tw20，10mM EDTA，3％PEG，0.1％NaN3，pH8.0)。PCT标记抗体荧光粒子加入量：50μl。
反应10min后，用荧光免疫定量分析仪检测信号。
表一
表二精氨酸对标记抗体荧光粒子的后处理效果
从表一和表二数据可以看出，在精氨酸对标记抗体荧光粒子处理后，所有0值血清的检测信号都在1000以下，对照校准曲线，检测值在1.56ng/ml以下，比较接近于0值。而在常规处理时，所有0值血清的信号值在753到7000之间，即检测值在0.4ng/ml到6.25ng/ml之间，相对于原信号值,检测信号值下降了90％左右(88％到95％之间)，能显著降低非特异性信号。
鉴于本发明方案实施例众多，各实施例实验数据庞大众多，不适合于此处逐一列举说明，但是各实施例所需要验证的内容和得到的最终结论均接近，故而此处不对各个实施例的验证内容进行逐一说明，仅以实施例1作为代表说明本发明申请优异之处。
实施例2
本实施例中对荧光粒子的封闭为将荧光粒子顺次采用精氨酸封闭和BSA封闭，其中精氨酸封闭为将荧光粒子以精氨酸溶液重悬后，再以BSA溶液重悬即可得到封闭后的荧光粒子。其中，荧光粒子以精氨酸溶液重悬时，精氨酸溶液为1.3M的PBS缓冲液溶液，溶液为pH7.4，重悬是在50℃震荡反应20min；精氨酸封闭后的荧光粒子以BSA溶液重悬时，BSA溶液为3.7％的PBS缓冲液溶液，溶液为pH7.4，重悬是在63℃震荡反应60min，而后经清洗、离心分离后得到封闭后的荧光粒子样品。重悬是溶液的pH值还可以为7.0、7.2、7.3、7.5、7.6、7.8以及7.0-8.5范围内的其它任意值。
实施例3
本实施例中对荧光粒子的封闭为将荧光粒子顺次采用精氨酸封闭和BSA封闭，其中精氨酸封闭为将荧光粒子以精氨酸溶液重悬后，再以BSA溶液重悬即可得到封闭后的荧光粒子。其中，荧光粒子以精氨酸溶液重悬时，精氨酸溶液为2.0M的PBS缓冲液溶液，溶液为pH7.4，重悬是在70℃震荡反应40min；精氨酸封闭后的荧光粒子以BSA溶液重悬时，BSA溶液为2.3％的PBS缓冲液溶液，溶液为pH7.4，重悬是在56℃震荡反应20min，而后经清洗、离心分离后得到封闭后的荧光粒子样品。重悬是溶液的pH值还可以为7.0、7.2、7.3、7.5、7.6、7.8以及7.0-8.5范围内的其它任意值。
实施例4
本实施例中对荧光粒子的封闭为将荧光粒子顺次采用精氨酸封闭和BSA封闭，其中精氨酸封闭为将荧光粒子以精氨酸溶液重悬后，再以BSA溶液重悬即可得到封闭后的荧光粒子。其中，荧光粒子以精氨酸溶液重悬时，精氨酸溶液为3.0M的PBS缓冲液溶液，溶液为pH7.4，重悬是在80℃震荡反应50min；精氨酸封闭后的荧光粒子以BSA溶液重悬时，BSA溶液为1.2％的PBS缓冲液溶液，溶液为pH7.4，重悬是在72℃震荡反应38min，而后经清洗、离心分离后得到封闭后的荧光粒子样品。重悬是溶液的pH值还可以为7.0、7.2、7.3、7.5、7.6、7.8以及7.0-8.5范围内的其它任意值。
实施例5
本实施例中对荧光粒子的封闭为将荧光粒子顺次采用精氨酸封闭和BSA封闭，其中精氨酸封闭为将荧光粒子以精氨酸溶液重悬后，再以BSA溶液重悬即可得到封闭后的荧光粒子。其中，荧光粒子以精氨酸溶液重悬时，精氨酸溶液为4M的PBS缓冲液溶液，溶液为pH7.4，重悬是在67℃震荡反应57min；精氨酸封闭后的荧光粒子以BSA溶液重悬时，BSA溶液为0.5％的PBS缓冲液溶液，溶液为pH7.4，重悬是在55℃震荡反应45min，而后经清洗、离心分离后得到封闭后的荧光粒子样品。重悬是溶液的pH值还可以为7.0、7.2、7.3、7.5、7.6、7.8以及7.0-8.5范围内的其它任意值。
实施例6
本实施例中对荧光粒子的封闭为将荧光粒子顺次采用精氨酸封闭和BSA封闭，其中精氨酸封闭为将荧光粒子以精氨酸溶液重悬后，再以BSA溶液重悬即可得到封闭后的荧光粒子。其中，荧光粒子以精氨酸溶液重悬时，精氨酸溶液为5M的PBS缓冲液溶液，溶液为pH7.4，重悬是在72℃震荡反应33min；精氨酸封闭后的荧光粒子以BSA溶液重悬时，BSA溶液为4％的PBS缓冲液溶液，溶液为pH7.4，重悬是在53℃震荡反应29min，而后经清洗、离心分离后得到封闭后的荧光粒子样品。重悬是溶液的pH值还可以为7.0、7.2、7.3、7.5、7.6、7.8以及7.0-8.5范围内的其它任意值。
实施例7
本实施例中对荧光粒子的封闭为将荧光粒子顺次采用精氨酸封闭和BSA封闭，其中精氨酸封闭为将荧光粒子以精氨酸溶液重悬后，再以BSA溶液重悬封闭即可得到封闭后的荧光粒子。其中，荧光粒子以精氨酸溶液重悬时，精氨酸溶液为2.7M的PBS缓冲液溶液，溶液为pH7.4，重悬是在65℃震荡反应37min；精氨酸封闭后的荧光粒子以BSA溶液重悬时，BSA溶液为5％的PBS缓冲液溶液，溶液为pH7.4，重悬是在66℃震荡反应48min，而后经清洗、离心分离后得到封闭后的荧光粒子样品。重悬是溶液的pH值还可以为7.0、7.2、7.3、7.5、7.6、7.8以及7.0-8.5范围内的其它任意值。
与以上实施例相区别地，重悬封闭完成后清洗为采用PBST缓冲液中进行超声清洗三次，其中PBST缓冲液的组成为10mM PBS和0.05％tween20，其pH值为7.4(PBST缓冲液的组成还可以为以下任一：6mM PBS和0.07％tween20；9mM PBS和0.03％tween20；12mM PBS和0.08％tween20；20mM PBS和0.06％tween20；16mM PBS和0.04％tween20；120mM PBS和0.01％tween20；200mM PBS和0.1％tween20；180mM PBS和0.03％tween20；140mM PBS和0.09％tween20；160mM PBS和0.075％tween20；150mM PBS和0.063％tween20；40mM PBS和0.055％tween20；60mM PBS和0.036％tween20；90mM PBS和0.016％tween20。pH值还可以为7.0、7.2、7.3、7.5、7.6、7.8、7.9、8.0、8.1、8.2、8.3、8.4、8.5以及7.0-8.5范围内的其它任意值)。超声波清洗的次数还可以为一次或者两次或者四次。清洗后离心分离为在4℃(离心分离的温度还可以为2℃、3℃、5℃、6℃、7℃、8℃以及2-8℃范围内的其它任意值)下离心30min(离心时间还可以为20min、22min、27min、33min、36min、40min、44min、46min、48min、50min、55min、59min、60min以及20-60min范围内的其它任意值)。
本处实施例对本发明要求保护的技术范围中点值未穷尽之处以及在实施例技术方案中对单个或者多个技术特征的同等替换所形成的新的技术方案，同样都在本发明要求保护的范围内；同时本发明方案所有列举或者未列举的实施例中，在同一实施例中的各个参数仅仅表示其技术方案的一个实例(即一种可行性方案)，而各个参数之间并不存在严格的配合与限定关系，其中各参数在不违背公理以及本发明述求时可以相互替换，特别声明的除外。
本发明方案所公开的技术手段不仅限于上述技术手段所公开的技术手段，还包括由以上技术特征任意组合所组成的技术方案。以上所述是本发明的具体实施方式，应当指出，对于本技术领域的普通技术人员来说，在不脱离本发明原理的前提下，还可以做出若干改进和润饰，这些改进和润饰也视为本发明的保护范围。
Claims (6)
1.一种精氨酸对标记抗体荧光粒子的封闭方法，其特征在于：包括对荧光粒子的清洗、活化、交联、封闭以及保存，
其中，封闭包括先后顺次进行的精氨酸封闭和BSA封闭；
所述精氨酸封闭为将荧光粒子以精氨酸溶液重悬，精氨酸以离子键或者共价键键合到荧光粒子,所述荧光粒子以精氨酸溶液重悬为将添加了荧光粒子的精氨酸溶液在50-80℃震荡20-60min；
所述BSA封闭为将精氨酸封闭后的荧光微粒以BSA溶液重悬，BSA以离子键或者共价键键合到荧光粒子,所述荧光粒子以BSA溶液重悬为将添加了荧光粒子的BSA溶液在50-80℃震荡20-60min；
得到封闭后的荧光粒子。
2.根据权利要求1所述的精氨酸对标记抗体荧光粒子的封闭方法，其特征在于：所述精氨酸封闭时精氨酸溶液浓度为1-5.0M。
3.根据权利要求1所述的精氨酸对标记抗体荧光粒子的封闭方法，其特征在于：所述BSA封闭时BSA溶液的浓度为0.5-5wt％。
4.根据权利要求1所述的精氨酸对标记抗体荧光粒子的封闭方法，其特征在于：所述封闭还包括对经精氨酸封闭和BSA封闭后的荧光粒子的清洗，清洗为将封闭后的荧光粒子经离心分离得到沉淀后，将沉淀以PBST缓冲液超声清洗至少一次。
5.根据权利要求4所述的精氨酸对标记抗体荧光粒子的封闭方法，其特征在于：所述离心分离为在2-8℃下离心20-60min得到沉淀。
6.根据权利要求4所述的精氨酸对标记抗体荧光粒子的封闭方法，其特征在于：所述PBST缓冲液的组成包括6-200mMPBS和0.01-0.1wt％tween20。
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| CN201510606548.5A CN105203747B (zh) | 2015-09-22 | 2015-09-22 | 一种精氨酸对标记抗体荧光粒子的封闭方法 |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| CN201510606548.5A CN105203747B (zh) | 2015-09-22 | 2015-09-22 | 一种精氨酸对标记抗体荧光粒子的封闭方法 |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| CN105203747A CN105203747A (zh) | 2015-12-30 |
| CN105203747B true CN105203747B (zh) | 2017-03-08 |
Family
ID=54951533
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| CN201510606548.5A Active CN105203747B (zh) | 2015-09-22 | 2015-09-22 | 一种精氨酸对标记抗体荧光粒子的封闭方法 |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| CN (1) | CN105203747B (zh) |
Families Citing this family (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN113495156A (zh) * | 2020-03-20 | 2021-10-12 | 郑州达诺生物技术有限公司 | 一种酶结合物稀释液、一种amh定量检测试剂盒及其使用方法 |
Family Cites Families (5)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| JP4800739B2 (ja) * | 2005-10-20 | 2011-10-26 | デンカ生研株式会社 | アッセイ用媒体及びアッセイ方法 |
| WO2009104369A1 (ja) * | 2008-02-22 | 2009-08-27 | パナソニック株式会社 | 血漿に含まれる成分の検出方法ならびにそれに用いられる試薬および検出デバイス |
| JP5992703B2 (ja) * | 2012-03-22 | 2016-09-14 | 田中貴金属工業株式会社 | イムノクロマトグラフィー検出方法 |
| CN104634961A (zh) * | 2013-11-07 | 2015-05-20 | 珠海出入境检验检疫局检验检疫技术中心 | 狂犬病毒均质荧光复合微球的制备方法及其检测方法 |
| CN104530459A (zh) * | 2014-12-10 | 2015-04-22 | 南京邮电大学 | 一种偶联抗体的聚苯乙烯荧光微球的制备方法 |
-
2015
- 2015-09-22 CN CN201510606548.5A patent/CN105203747B/zh active Active
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| CN105203747A (zh) | 2015-12-30 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| Inglis et al. | Techniques to improve detection and analysis of extracellular vesicles using flow cytometry | |
| CN111474354B (zh) | 2019-nCoV新型冠状病毒检测层析试纸条、检测卡和试剂盒 | |
| CN106018792B (zh) | 一种胃功能检测用免疫层析试剂盒及其制备方法 | |
| KR20180016734A (ko) | 면역 측정법, 면역 크로마토그래프 키트 | |
| US5312744A (en) | Method of immobilizing and preserving an immunologically reactive substance | |
| CN105137096A (zh) | 一种用于血型抗体检测的试剂盒及其应用 | |
| CN114280296A (zh) | 一种新型冠状病毒（2019-nCOV）IgG/IgM抗体检测试剂盒及其制备方法 | |
| JPH06501555A (ja) | 固相結合アッセイの改良 | |
| CN105203747B (zh) | 一种精氨酸对标记抗体荧光粒子的封闭方法 | |
| JPWO2015037635A1 (ja) | インフルエンザウイルスの免疫測定における検体処理方法及び免疫測定法 | |
| CN107153021B (zh) | 循环肿瘤细胞染色的质控品及其制备方法 | |
| CN102707058A (zh) | 一种用于诊断肺癌的Tipe3免疫组织化学检测试剂盒 | |
| CN104741156B (zh) | 血小板筛选芯片及其制作方法和应用 | |
| CN111638327B (zh) | 一种胶体金免疫层析试纸金标垫和样品垫的处理液及处理方法 | |
| Li et al. | Covalent heparin modification of a polysulfone flat sheet membrane for selective removal of low‐density lipoproteins: A simple and versatile method | |
| CN107643399A (zh) | 一种提高免疫检测系统灵敏性的方法及使用该方法的装置 | |
| CN110672862A (zh) | 一种血型检测卡及其制备方法 | |
| CN104569443A (zh) | 一种Rh血型检测卡 | |
| CN110736839A (zh) | 细胞角蛋白19片段的胶乳增强免疫比浊检测试剂盒 | |
| CN116500279A (zh) | 一种巨细胞病毒抗体IgM的检测试剂盒及应用 | |
| CN105256053A (zh) | 一种dna-蛋白质缀合物及其在检测汞离子浓度中的应用 | |
| Durliat et al. | Coagulation in the Crayfish, Astacus leptodactylus: attempts to identify a fibrinogen-like factor in the hemolymph | |
| JPS63133064A (ja) | ＩｇＭおよびＩｇＡ免疫グロブリンの測定法およびその試薬 | |
| CN110824157B (zh) | 一种用于免疫层析检测试剂盒的快速分离红细胞的方法 | |
| CN103728452B (zh) | 一种检测黄曲霉素b1的胶体金免疫试剂盒及其制备方法 |
Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| C06 | Publication | ||
| PB01 | Publication | ||
| C10 | Entry into substantive examination | ||
| SE01 | Entry into force of request for substantive examination | ||
| C14 | Grant of patent or utility model | ||
| GR01 | Patent grant |