CN104955811A

CN104955811A - 氘代的苯基氨基嘧啶化合物以及包含该化合物的药物组合物

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Publication number: CN104955811A
Application number: CN201480006430.2A
Authority: CN
Inventors: 吕彬华; 盛泽林; 曹本文
Original assignee: Suzhou Zelgen Biopharmaceutical Co Ltd
Current assignee: Shanghai Jing Ze Medical Technology Co Ltd
Priority date: 2013-01-28
Filing date: 2014-01-28
Publication date: 2015-09-30
Anticipated expiration: 2034-01-28
Also published as: CN104955811B; KR20150111362A; EP2949647A1; BR112015017963B1; BR112015017963A2; KR101797046B1; JP2016515997A; US9604935B2; WO2014114274A1; CN103965114A; CN103965114B; JP6524470B2; EP2949647A4; EP2949647B1; RU2015135722A; US20160060227A1; RU2633694C2

Abstract

本发明涉及氘代的苯基氨基嘧啶化合物以及包含该化合物的药物组合物。具体地，本发明公开了式(I)所示的氘代的苯基氨基嘧啶化合物以及含有该化合物、或其晶型、药学上可接受的盐、水合物或溶剂合物的药物组合物。本发明的化合物可用于治疗和/或预防JAK激酶相关性疾病，例如骨髓增殖性疾病、癌症、免疫性疾病等。

Description

氘代的苯基氨基嘧啶化合物以及包含该化合物的药物组合物技术领域

本发明属于医药领域。具体地，本发明涉及新型的氘代苯基氨基嘧啶化合物以及含该化合物的药物组合物。背景技术

JAK G'anus kinase)是一类非受体酪氨酸激酶家族，已发现四个成员，分别为 JAK1、 JAK2、 JAK3禾 B TYK1 , 其结构不含 SH2、 SH3， C端具有两个相连的激酶区。 JAK的底物为 STAT, 即信号转导子和转录激活子， STAT被 JAK磷酸化后发生二聚化，然后穿过核膜进入核内调节相关基因的表达，这条信号通路称为 JAK-STAT途径，在造血细胞和免疫细胞通讯上起作用。目前已知的 4种 JAK激酶有效且特异性抑制剂可以用于治疗癌症、炎症等疾病。 2012年 12月，辉瑞公司的选择性 JAK3抑制剂 tofacitinib (商品名 Xeljanz) 被美国食品药品管理局批准用于治疗类风湿关节炎。

苯基氨基嘧啶化合物及衍生物是一类非受体酪氨酸激酶如 JAK激酶的抑制剂。在专利 WO2008109943或 US2011212077中公开了系列嘧啶环 2， 4-位双取代的苯基氨基嘧啶衍生物。其中，化合物 CYT387是选择性的 JAK1和 JAK2 激酶抑制剂，化学名为 N- (氰基甲基 )-4-(2-(4-吗啡啉苯基氨基)嘧啶 -4-基)苯甲酰胺，具有治疗癌症和骨髓增殖性疾病以及其它相关疾病中的用途，目前该化合物正处于治疗骨髓增殖性疾病的临床二期研究中。

虽然靶向抑制不同蛋白激酶对于治疗激酶相关性疾病是有益的，但是发现具有特异性抑制某些蛋白激酶且具有很好口服生物利用度等具有成药性的新型化合物还是非常具有挑战性的工作。另外，目前市场上的一些蛋白激酶抑制剂存在一定毒副作用和耐药性等问题。

因此，本领域仍需要开发具有对 JAK激酶有抑制活性或更好药效学性能的化合物。发明内容

本发明的目的是提供一类新型的具有 JAK激酶抑制活性和更好药效学性能的化合物及其用途。

在本发明的第一方面中，提供了一种式 (I)所示的氘代的苯基氨基嘧啶化合物、或其晶型、药学上可接受的盐、

(I)

式中： I ¹、 R²、 R¹³、 R¹⁴、 R¹⁵、 R¹⁶、 R¹⁷、 R¹⁸、 R¹⁹、 R²⁰、 R²¹禾口 R²²各自独立地为氢或氘； R³、 R⁴、 R⁵、 R⁶、 R⁷、 R⁸、 R⁹、 R^1Q和 R¹¹各自独立地为氢、氘、卤素、未氘代的 C1-C6 烷基在在在或 C1-C6烷氧基、一次或多次氘代的或全氘代的 C1-C6烷基或 C1-C6烷氧基，或者水另另另

:A卤素取代的或全卤素取代的 C1-C6烷基或 C1-C6烷氧基；

, 23

R¹²为氢、氘、卤素、 OR"、 COOR"、 COSR^2J CONHR"或 CON(R")₂; 其中， R 选自氢、氘、取代或未取代的 C1-C6烷基或 C3-C8环烷基，其中所述取代基选自下组：卤素、氰基、 C1-C6烷基或 C1-C6烷氧基；

13

附加条件是 R R²、 R³、 R⁴、 R⁵、 R⁶、 R⁷、 R⁸、 R⁹、 R¹⁰、 R^U、 R R¹⁴ 5

、 R 1 R 16

R¹⁷、 R^l R^iy、 R^2U、 R²¹或 R²²中至少一个是氘代的或氘。

在另一优选例中，氘在氘取代位置的氘同位素含量至少是大于天然氘同位素含量 (约 0.015%), 较佳地大于 30%，更佳地大于 50%，更佳地大于 75%，更佳地大于 95%，更佳地大于 99%。

在另一优选例中，式 (I)化合物至少含有 1个氘原子，更佳地 2个氘原子，更佳地 4个氘原子，更佳地 6个氘原子。

在另一优选例中， R¹和 R²是氢或氘；

在另一优选例中， R¹²是氢或氘；

优选例中 R 13

R¹⁵和 R¹⁶是氢或氘;

优选例中 R 17

R¹⁹和 R^2Q是氢或氘;

R 13 , 15 16 17

优选例中 R^l R' R¹⁰、 R R^l\ R B R²"是氘;

在另一优选例中， R³、 R⁴、 R⁵、 R⁶ R⁷或 R⁸分别独立地选自：氢、氘、一次或多次氘代的或全氘代的甲基或甲氧基、或者一次或多次氘代的或全氘代的乙基或乙氧基。

在另一优选例中， R³、 R⁴、 R⁵、 R⁶ R⁷或 R⁸分别独立地选自：一氘甲基、二氘甲基、三氘甲基、一氘甲氧基、二氘甲氧基、三氘甲氧基、一氘乙基、二氘乙基、三氘乙基、四氘乙基、五氘乙基、一氘乙氧基、二氘乙氧基、三氘乙氧基、四氘乙氧基或五氘乙氧基。

在另一优选例中，所述化合物是选自下组的化合物或其药学上可接受的盐：

N- (氰基甲基) )-4- 胺；

N- (氰基甲基》 -4-(2-(4-(2'， 2'， 6'， 6' 吗啡啉)苯基氨基)嘧啶 -4-基)苯甲酰胺；

N- (氰基甲基) )-4-(2-(4-(3'， 3' 吗啡啉)苯基氨基)嘧啶 -4-基)苯甲酰胺；

N- (氰基甲基) -4-(2-(4-(^-吗啡啉)苯基氨基)嘧啶 -4-基)苯甲酰胺； N- (氰基甲基) -4-(2-(4- )苯甲酰胺;

N- (氰基甲基) -4-(2-(4-(3'， 3'， 5'， 5' 吗啡啉)苯基氨基)嘧啶 -4-基)苯甲酰胺;

N- (氰基甲基) )-4-(2-(4-吗啡啉苯基氨基)嘧啶 -4-基)苯甲酰胺;

在另一优选例中，；其具有如下特征： MS 计算值：422; MS 测量值：423 (M+H) ⁺， 445 (M+Na)

在另一优选例中，；其具有如下特征： MS 计算值：424; MS 测量值：425 (M+H) ⁺， 447 (M+Na)

在另一优选例中，具有如下特征： MS 计算值：41

在另一优选例中，其具有如下特征： MS 计算值：418; MS 测量值：419 (M+H) _ 441 (M+N 飞

p

在另一优选例中，所述的化合物为；其具有如下特征： MS 计算值：420; MS 测量值：421 (M+H) ⁺， 443 (M+Na) ⁺。

在另一优选例中，所述的化合物不包括非氘代的化合物。

在另一优选例中，所述的非氘代的化合物为 N- (氰基甲基) -4-(2-(4-吗啡啉苯基氨基）嘧啶 -4-基)苯甲酰胺。

在另一优选例中，所述的化合物由实施例 1-8所述的方法制备的。

在本发明的第二方面中，提供了一种制备药物组合物的方法，包括步骤：将药学上可接受的载体与本发明第一方面中所述的化合物，或其晶型、药学上可接受的盐、水合物或溶剂合物进行混合，从而形成药物组合物。

在本发明的第三方面中，提供了一种药物组合物，它含有药学上可接受的载体和本发明第一方面中所述的化合物，或其晶型、药学上可接受的盐、水合物或溶剂合物。

在另一优选例中，所述的药物组合物为注射剂、囊剂、片剂、丸剂、散剂或颗粒剂。在另一优选例中，所述的药物组合物还含有另外的治疗药物，所述的另外的治疗药物为癌症、心血管疾病、炎症、免疫性疾病、骨髓增殖性疾病、病毒性疾病、代谢性疾病、或器官移植的药物。

更佳地，所述的另外的治疗药物包括 (但并不限于)： 5-氟尿嘧啶、阿瓦斯 T™(_avaStin， bevacizumab) 贝沙罗汀（bexarotene)、硼替佐米（bortezomib)、骨化三醇（calcitriol)、卡奈替尼（canertinib)、卡培他滨（capecitabine)、碳铂（carboplatin)、塞来考昔（celecoxib)、西妥昔单抗（cetuximab)、顺铂（cisplatin)、达沙替尼（dasatinib)、地高辛（digoxin)、 enzastaurin 埃罗替尼（Erlotinib)、依托泊甙（etoposide)、依维莫司（everolimus)、氟维司群（Mvestrant)、吉非替尼（gefitinib)、 2，2-二氟脱氧胞嘧啶核苷（gemcitabine)、金雀异黄素 (genistein) 伊马替尼 (imatinib)、依立替康 (irinotecan) 拉帕替尼 (lapatinib) 来那度胺（lenalidomide)、来曲唑（letrozole)、亚叶酸（leucovorin)、马妥珠单抗 (matuzumab) 奥沙利铂 Coxaliplatin)、紫杉醇 Cpaclitaxel)、帕尼单抗 Cpanitumumab)、 PEG化的粒细胞集落刺激因子 Cpegfilgrastin)、 PEG化的 α-干扰素（； peglated alfa-interferon)、培美曲塞

(pemetrexed)、 Polyphenon® E 沙钼 (satraplatin)、西罗莫司 (sirolimus)、舒尼替尼 (sutent, sunitinib) 舒林酸 (sulindac) 泰索帝 (taxotere)、替莫唑胺 (temodar、 temozomolomide) 欤瑞塞尔 (Torisel)、替西罗莫司（temsirolimus)、替吡法尼（tipifamib)、曲妥单抗

(trastuzumab) 丙戊酸 (valproic acid)、长春氟宁 (vinflunine) Volociximab、 Vorinostat 索拉非尼 CSorafenib)、安贝生坦（ambrisentan)、 CD40禾或 CD154特异性抗体、融合蛋白、 NF-kB抑制剂、非甾体抗炎药、 β-激动剂如沙美特罗等、凝血因子 FXa抑制剂 (如利伐沙班等)、抗 -TNF抗体、前列腺素药物或孟鲁司特 (montelukast：)。

在本发明的第四方面中，提供了本发明第一方面中所述的化合物，或其晶型、药学上可接受的盐、水合物或溶剂合物的用途，它们被用于制备抑制蛋白激酶 (如 JAK激酶)的药物组合物。在另一优选例中，所述的药物组合物用于治疗和预防以下疾病：癌症、骨髓增殖性疾病、炎症、免疫性疾病、器官移植、病毒性疾病、心血管疾病或代谢性疾病。

在另一优选例中，所述的癌症包括 (但并不限于)：非小型细胞肺癌、子宫癌、直肠癌、结肠癌、脑癌、头癌、颈癌、膀胱癌、前列腺癌、乳腺癌、肾癌、血癌、肝癌、胃癌、甲状腺癌、鼻咽癌或胰腺癌。

在另一优选例中，所述的骨髓增殖性疾病包括 (但并不限于)：自发性血小板增多 (ET)、特发性骨髓纤维化 (IMF)、慢性髓性白血病 (CML)、原发性骨髓纤维化、慢性嗜中性粒细胞白血病 (CNL)或真心红细胞增多症 (PV)。

在另一优选例中，所述的免疫性或炎性疾病包括 (但并不限于)：类风湿关节炎、骨关节炎、类风湿性脊柱炎、痛风、哮喘、支气管炎、鼻炎、慢性阻塞性肺病、囊性纤维化病。

在本发明的第五方面中，提供了一种抑制蛋白激酶 (如 JAK激酶)的方法或一种疾病 (如癌症、骨髓增殖性疾病、炎症、免疫性疾病、器官移植、病毒性疾病、心血管疾病或代谢性疾病)的治疗方法，它包括步骤：给需要治疗的对象施用本发明第一方面中所述的化合物，或其晶型、药学上可接受的盐、水合物或溶剂合物，或施用本发明第三方面中所述的药物组合物。

应理解，在本发明范围内中，本发明的上述各技术特征和在下文 (如实施例)中具体描述的各技术特征之间都可以互相组合，从而构成新的或优选的技术方案。限于篇幅，在此不再累述。具体实施方式

本发明人经过研究，意外地发现，本发明的氘代的苯基氨基嘧啶化合物及其药学上可接受的盐与未氘代的化合物相比，具有明显更优异的药物动力学和 /或药效学性能，因此更适合作为抑制 JAK激酶的化合物，进而更适用制备治疗癌症以及 JAK激酶相关疾病的药物。在此基础上完成了本发明。

定义

如本文所用， "卤素 "指 F、 Cl、 Br、和 I。更佳地，卤原子选自 F、 C1和 Br。

如本文所用， "C1-C6烷基"是指包括 1-6个碳原子的直链或支链的烷基，例如甲基、乙基、丙基、异丙基、丁基、异丁基、叔丁基、或类似基团。

如本文所用， "C1-C6烷氧基 "包括 1-6个碳原子的直链或支链的烷氧基。例如甲氧基、乙氧基、丙氧基、异丙氧基、丁氧基、异丁氧基、叔丁氧基、或类似基团。

如本文所用， "C3-C8环烷基 "是指包含 3-8个碳原子的环烷基，例如环丙基、环丁基、环戊基、环己基、或类似基团。

如本文所用， "氘代"指化合物或基团中的一个或多个氢被氘所取代。氘代可以是一取代、二取代、多取代或全取代。术语"一个或多个氘代的"与"一次或多次氘代"可互换使用。

如本文所用， "非氘代的化合物"是指含氘原子比例不高于天然氘同位素含量 (约

0.015%)的化合物。

在另一优选例中，氘在氘取代位置的氘同位素含量是大于天然氘同位素含量

(0.015%), 更佳地大于 50%，更佳地大于 75%，更佳地大于 95%，更佳地大于 97%，更佳地大于 99%，更佳地大于 99.5%。在另一优选例中，式 (I)化合物至少含有 2个氘原子，更佳地 4个氘原子，更佳地 6个氘原子，更佳地 8个氘原子。

优选地，式 (I)化合物中， N为 ¹⁴N和 /或 0为 ¹⁶0。

在另一优选例中，所述化合物中， ¹⁴N在氮原子所在位置的同位素含量≥95%，更佳地≥99%。

在另一优选例中，所述化合物中， ^1δΟ在氧原子所在位置的同位素含量≥95%，更佳地≥99%。活性成分

如本文所用，术语"本发明化合物 "指式 (I)所示的化合物。该术语还包括及式 (I)化合物的各种晶型形式、药学上可接受的盐、水合物或溶剂合物。

其中，术语"药学上可接受的盐"指本发明化合物与酸或碱所形成的适合用作药物的盐。药学上可接受的盐包括无机盐和有机盐。一类优选的盐是本发明化合物与酸形成的盐。适合形成盐的酸包括但并不限于：盐酸、氢溴酸、氢氟酸、硫酸、硝酸、磷酸等无机酸；甲酸、乙酸、三氟乙酸、丙酸、草酸、丙二酸、琥珀酸、富马酸、马来酸、乳酸、苹果酸、酒石酸、柠檬酸、苦味酸、苯甲酸、甲磺酸、乙磺酸、对甲苯磺酸、苯磺酸、萘磺酸等有机酸；以及脯氨酸、苯丙氨酸、天冬氨酸、谷氨酸等氨基酸。另一类优选的盐是本发明化合物与碱形成的盐，例如碱金属盐 (例如钠盐或钾盐)、碱土金属盐 (例如镁盐或钙盐)、铵盐 (如低级的烷醇铵盐以及其它药学上可接受的胺盐)，例如甲胺盐、乙胺盐、丙胺盐、二甲基胺盐、三甲基胺盐、二乙基胺盐、三乙基胺盐、叔丁基胺盐、乙二胺盐、羟乙胺盐、二羟乙胺盐、三羟乙胺盐，以及分别由吗啉、哌嗪、赖氨酸形成的胺盐。

术语"溶剂合物"指本发明化合物与溶剂分子配位形成特定比例的配合物。 "水合物"是指本发明化合物与水进行配位形成的配合物。

此外，本发明化合物还包括式 (I)所示的苯基氨基嘧啶化合物的前药。术语"前药"包括其本身可以是具有生物学活性的或非活性的，当用适当的方法服用后，其在人体内进行代谢或化学反应而转变成式 (I)的一类化合物，或式 (I)的一个化合物所组成的盐或溶液。所述的前药包括 (但不局限于)所述化合物的羧酸酯、碳酸酯、磷酸酯、硝酸酯、硫酸酯、砜酯、亚砜酯、氨基化合物、氨基甲酸盐、偶氮化合物、磷酰胺、葡萄糖苷、醚、乙縮醛等形式。制备方法

下面更具体地描述本发明式 (I)结构化合物的制备方法，但这些具体方法不对本发明构成任何限制。本发明化合物还可以任选将在本说明书中描述的或本领域已知的各种合成方法组合起来而方便地制得，这样的组合可由本发明所属领域的技术人员容易地进行。

本发明使用的未氘代的苯基氨基嘧啶化合物及其生理上相容的盐的制备方法是已知的。对应氘代的苯基氨基嘧啶化合物的制备可以用相应的氘代起始化合物为原料，用同样的路线合成。例如，本发明式 (I)化合物可按 WO2008109943中所述的制备方法制备，不同点在于在反应中用氘代的原料代替非氘代的原料。

通常，在制备流程中，各反应通常在惰性溶剂中，在室温至回流温度 (如 0°C〜80°C，优选 0°C〜50°C)下进行。反应时间通常为 0.1小时 -60小时，较佳地为 0.5-48小时。

下面的通用制备路线可以用于合成本发明式 (I)结构的化合物。

合成路线

其中： X选自 F、 Cl、 Br、 I； R R²、 R³、 R⁴、 R⁵、 R⁶、 R⁷、 R⁸、 R⁹、 R¹⁰、 R^U、 R¹²、 R¹³、 R¹⁴、 R¹⁵、 R¹⁶、 R¹⁷、 R¹⁸、 R¹⁹或 R^2Q的定义同前； R²⁴选自氢、 C1-C6烷基。

如合成路线一所示，硝基苯化合物 Π和吗啡啉化合物 III反应生成 4-吗啡啉取代的硝基苯化合物 IV，再经还原得到 4-吗啡啉取代的苯胺化合物 V。苯硼酸化合物 VI和 2， 4- 二氯嘧啶化合物 VII经 Suzuki偶联得到化合物 VIII。化合物 VIII和化合物 V反应得到苯基胺基嘧啶化合物 IX。化合物 IX和氨基乙腈化合物 X经酰胺化得到本发明化合物 I。上述反应在惰性溶剂，如二氯甲烷、二氯乙烷、乙腈、正己烷、甲苯、四氢呋喃、 N，N-二甲基甲酰胺、二甲基亚砜等中，温度 0〜200°C下进行。药物组合物和施用方法

由于本发明化合物具有优异的对蛋白激酶 (Kinase) (例如 JAK激酶)的抑制活性，因此本发明化合物及其各种晶型，药学上可接受的无机或有机盐，水合物或溶剂合物，以及含有本发明化合物为主要活性成分的药物组合物可用于治疗、预防以及缓解由对蛋白激酶 (Kinase) (例如 JAK激酶)介导的疾病。根据现有技术，本发明化合物可用于治疗以下疾病：癌症、骨髓增殖性疾病、炎症、免疫性疾病、器官移植、病毒性疾病、心血管疾病或代谢性疾病等。

本发明的药物组合物包含安全有效量范围内的本发明化合物或其药理上可接受的盐及药理上可以接受的赋形剂或载体。其中"安全有效量"指的是：化合物的量足以明显改善病情，而不至于产生严重的副作用。通常，药物组合物含有 l-2000mg本发明化合物 /剂，更佳地，含有 10-500mg本发明化合物 /剂。较佳地，所述的"一剂"为一个胶囊或药片。

"药学上可以接受的载体"指的是：一种或多种相容性固体或液体填料或凝胶物质，它们适合于人使用，而且必须有足够的纯度和足够低的毒性。 "相容性"在此指的是组合物中各组份能和本发明的化合物以及它们之间相互掺和，而不明显降低化合物的药效。药学上可以接受的载体部分例子有纤维素及其衍生物 (如羧甲基纤维素钠、乙基纤维素钠、纤维素乙酸酯等)、明胶、滑石、固体润滑剂 (如硬脂酸、硬脂酸镁)、硫酸钙、植物油 (如豆油、芝麻油、花生油、橄榄油等)、多元醇 (如丙二醇、甘油、甘露醇、山梨醇等)、乳化剂 (如吐温 ®)、润湿剂 (如十二烷基硫酸钠)、着色剂、调味剂、稳定剂、抗氧化剂、防腐剂、无热原水等。

本发明化合物或药物组合物的施用方式没有特别限制，代表性的施用方式包括 (但并不限于)：口服、瘤内、直肠、肠胃夕卜 (静脉内、肌肉内或皮下)、和局部给药。

用于口服给药的固体剂型包括胶囊剂、片剂、丸剂、散剂和颗粒剂。在这些固体剂型中，活性化合物与至少一种常规惰性赋形剂 (或载体)混合，如柠檬酸钠或磷酸二钙，或与下述成分混合：（a) 填料或增容剂，例如，淀粉、乳糖、蔗糖、葡萄糖、甘露醇和硅酸；

(b) 粘合剂，例如，羟甲基纤维素、藻酸盐、明胶、聚乙烯基吡咯烷酮、蔗糖和阿拉伯胶;

(c) 保湿剂，例如，甘油；（d) 崩解剂，例如，琼脂、碳酸钙、马铃薯淀粉或木薯淀粉、藻酸、某些复合硅酸盐、和碳酸钠；（e) 缓溶剂，例如石蜡；（f) 吸收加速剂，例如，季胺化合物；（g) 润湿剂，例如鲸蜡醇和单硬脂酸甘油酯；（h) 吸附剂，例如，高岭土；和

(i) 润滑剂，例如，滑石、硬脂酸钙、硬脂酸镁、固体聚乙二醇、十二烷基硫酸钠，或其混合物。胶囊剂、片剂和丸剂中，剂型也可包含缓冲剂。

固体剂型如片剂、糖丸、胶囊剂、丸剂和颗粒剂可采用包衣和壳材制备，如肠衣和其它本领域公知的材料。它们可包含不透明剂，并且，这种组合物中活性化合物或化合物的释放可以延迟的方式在消化道内的某一部分中释放。可采用的包埋组分的实例是聚合物质和蜡类物质。必要时，活性化合物也可与上述赋形剂中的一种或多种形成微胶囊形式。

用于口服给药的液体剂型包括药学上可接受的乳液、溶液、悬浮液、糖浆或酊剂。除了活性化合物外，液体剂型可包含本领域中常规采用的惰性稀释剂，如水或其它溶剂，增溶剂和乳化剂，例知，乙醇、异丙醇、碳酸乙酯、乙酸乙酯、丙二醇、 1，3-丁二醇、二甲基甲酰胺以及油，特别是棉籽油、花生油、玉米胚油、橄榄油、蓖麻油和芝麻油或这些物质的混合物等。

除了这些惰性稀释剂外，组合物也可包含助剂，如润湿剂、乳化剂和悬浮剂、甜味剂、矫味剂和香料。

除了活性化合物外，悬浮液可包含悬浮剂，例如，乙氧基化异十八烷醇、聚氧乙烯山梨醇和脱水山梨醇酯、微晶纤维素、甲醇铝和琼脂或这些物质的混合物等。

用于肠胃外注射的组合物可包含生理上可接受的无菌含水或无水溶液、分散液、悬浮液或乳液，和用于重新溶解成无菌的可注射溶液或分散液的无菌粉末。适宜的含水和非水载体、稀释剂、溶剂或赋形剂包括水、乙醇、多元醇及其适宜的混合物。

用于局部给药的本发明化合物的剂型包括软膏剂、散剂、贴剂、喷射剂和吸入剂。活性成分在无菌条件下与生理上可接受的载体及任何防腐剂、缓冲剂，或必要时可能需要的推进剂一起混合。

本发明化合物可以单独给药，或者与其他药学上可接受的化合物联合给药。

使用药物组合物时，是将安全有效量的本发明化合物适用于需要治疗的哺乳动物 (如人)，其中施用时剂量为药学上认为的有效给药剂量，对于 60kg体重的人而言，日给药剂量通常为 l〜2000mg，优选 20〜500mg。当然，具体剂量还应考虑给药途径、病人健康状况等因素，这些都是熟练医师技能范围之内的。本发明的化合物与现有技术中已知的非氘代化合物相比，具有一系列优点。本发明的主要优点包括：

(1) 本发明化合物对蛋白激酶 (kinase) (例如 JAK激酶）具有优异的抑制性。

(2) 通过氘化这一技术改变化合物在生物体中的代谢，使化合物具有更好的药代动力学参数特性。在这种情况下，可以改变剂量并形成长效制剂，改善适用性。

(3) 用氘取代化合物中的氢原子，由于其氘同位素效应，能够提高化合物在动物体内的药物浓度，以提高药物疗效。

(4) 用氘取代化合物中的氢原子，由于某些代谢产物被抑制，可能提高化合物的安全性。下面结合具体实施例，进一步阐述本发明。应理解，这些实施例仅用于说明本发明而不用于限制本发明的范围。下列实施例中未注明具体条件的实验方法，通常按照常规条件，或按照制造厂商所建议的条件。除非另外说明，否则份数和百分比为重量份和重量百分比。本文中 "biotin"为生物素。实施例 1: 制备 N- (氰基甲基) -4-(2-(4-(^-吗啡啉)苯基氨基)嘧啶 -4-基)苯甲酰胺 (化合物 9)

1、制备 4-(4-硝基苯基）（d₈-吗啡啉) (化合物 3)

向烧瓶中依次加入化合物 4-氯硝基苯 (3.53 g， 22.4 mmol)、 d₈-吗啡啉 (2.35 g， 24.6 mmol) 和碳酸钾(；6.07 g，44 mmol)。加入二甲亚砜 (；40 mL)。加完后，升温到 100°C，搅拌 16小时。 TLC检测 (；乙酸乙酯 /石油醚 =1/10)显示反应完全。降温至室温后，加水 (100 mL)淬灭反应。二氯甲烷 (100 mL)萃取两次。合并有机层，依次用水和饱和食盐水洗涤。无水硫酸钠干燥。过滤，用旋转蒸发仪真空下浓縮滤液得到粗品。在乙酸乙酯和正己烷的混合溶剂 (1/5， v/v, 18 mL)中结晶得到黄色固体目标产物 (3.92 g，收率 81%); MS Calcd.: 216; MS Found: 217(M+H)+。

2、制备 4-( -吗啡啉)苯胺 (化合物 4)

向氢化反应瓶依次加入 4-(4-硝基苯基）（d₈-吗啡啉 )(3.80 g， 17.6 mmol)、乙醇 (30 mL) 和水 C3 mL)。氮气保护下加入 10%钯碳 C0.19 g)。用氢气置换体系 3〜4次后，在 10 atm氢气压力下， 40°C搅拌反应 10小时。高效液相检测反应完全后，反应液冷却到室温，用硅藻土过滤，乙醇洗涤滤饼。合并滤液，用旋转蒸发仪真空下浓縮滤液得到灰白色固体目标产物 (3.11 g，收率： 95%)。 MS Calcd.: 186; MS Found: 187(M+H) +。

3、制备 4-(2-氯嘧啶 -4-基)苯甲酸甲酯 (化合物 7)

向烧瓶中依次加入化合物 4- (甲氧基羰基)苯硼酸 (4.28 g， 23.78 mmol)、 2， 4-二氯嘧啶

(3.72 g, 24.97 mmol) 甲苯 (40 mL)和碳酸钠水溶液 (2N， 11.9 mL)。氮气保护下，向其加入四(三苯基膦)钯(1.10 g，0.95 mmol)。升温到 80°C，搅拌过夜。冷却到室温后，加水 (10 mL) 和乙酸乙酯 (50 mL)稀释反应液，搅拌 15min后，分层。再用乙酸乙酯 (30 mL)萃取水层两次。合并有机层，依次用水和食盐水洗涤。无水硫酸钠干燥。过滤，用旋转蒸发仪真空下浓縮滤液得到粗品。将粗品悬浮于甲醇 (10 mL)中，打浆 30min。过滤，甲醇洗涤滤饼。真空干燥得到灰色固体目标产物 (3.13 g，收率： 53%)。 MS Calcd.: 248; MS Found: 249 (M+H) +， 271 (M+Na) +。

4、制备 4-(2-(4-( -吗啡啉)苯基氨基）嘧啶 -4-基）苯甲酸甲酯 (化合物 8)

向烧瓶中依次加入化合物 4-(2-氯嘧啶 -4-基)苯甲酸甲酯 (1.24 g， 5.0 mmol)、 4-(^-吗啡啉)苯胺 (0.84 g， 4.5 mmol)和 1， 4-二氧六环 (10 mL)。搅拌下，向上述悬浮液加入对甲苯磺酸一水合物 (0.88 g， 5.0 mmol) 升温回流 48h。冷却到 30°C，用旋转蒸发仪真空下浓縮反应液。向其加入乙酸乙酯 (20 mL)和碳酸氢钠水溶液 (20 mL)，分层。乙酸乙酯萃取水层两次。合并有机层，依次用水、饱和碳酸氢钠水溶液和食盐水洗涤。无水硫酸钠干燥，过滤，用旋转蒸发仪真空下浓縮滤液得到粗品。粗品经柱层析分离纯化得到黄色固体。悬浮于甲醇 (5 mL)中，打浆 15min。过滤，甲醇洗涤滤饼。真空干燥得到固体目标产物 (1.09 g，收率： 61%)。 MS Calcd.: 398; MS Found: 399 (M+H) ⁺, 421 (M+Na

5、制备 N- (氰基甲基) -4-(2-(4-( 吗啡啉)苯基氨基)嘧啶 -4-基)苯甲酰胺 (化合物 9) 在氮气保护下，向烧瓶中依次加入化合物 4-(2-(4-(^-吗啡啉)苯基氨基）嘧啶 -4-基）苯甲酸甲酯 (0.50 g， 1.25 mmol)、无水碳酸钾 (325目， 0.35 g， 2.5 mmol)和四氢呋喃 (4 mL)。搅拌下，向其加入 2-氨基乙腈盐酸盐 (0.18 g， 1.88 mmol)。保持内温 35±2°C反应 13-17小时， HPLC监测反应完全。加入纯化水 (10 mL)，用旋转蒸发仪真空下浓縮反应液。乙酸乙酯萃取三次。合并有机层，依次用水和食盐水洗涤。无水硫酸钠干燥，过滤，用旋转蒸发仪真空下浓縮滤液得到粗品。粗品经柱层析分离纯化得到固体目标产物 (0.21g，收率 : 40%)。 MS Calcd.: 422; MS Found: 423 (M+H) ⁺, 445 (M+Na) +。实施例 2: 制备 N- (氰基甲基) -4-(2-(4-( -吗啡啉)苯基氨基)嘧啶 -4-基)苯甲酰胺 (化合物 9)

1、制备 4-(4-硝基苯基）（d₈-吗啡啉 )(化合物 3)

向烧瓶中依次加入化合物 4-氯硝基苯 (0.662g， 4.17 mmol)、吗啡啉 (0.400 g， 4.17 mmol, 购自 Cambridge Isotope Laboratories)和碳酸钾（1.733 g， 12.54 mmol)。加入二甲亚砜 (6 mL)。加完后，升温到 100 °C，搅拌 20小时。反应液降温至室温后，加水 (30 mL)淬灭反应，有黄色固体析出，搅拌 30 min后，过滤得粗品。粗品在乙酸乙酯和石油醚的混合溶齐 [ 1/2.5 , v/v， 14 mL)中结晶得到黄色固体目标产物 (0.600 g， HPLC纯度： 98.6 %，收率 67

2、制备 4-(^-吗啡啉)苯胺 (化合物 4)

向氢化反应瓶依次加入 4-(4-硝基苯基吗啡啉 )（ 0.600 g， 2.78mmol)和甲醇（40 ml) 。氮气保护下加入 10%钯碳 (0.060 g)。用氢气置换体系 3〜4次后，在氢气压力下， 40 °〔搅拌反应 20小时。高效液相检测反应完全后，反应液冷却到室温，用硅藻土过滤，甲醇洗涤滤饼。合并滤液，用旋转蒸发仪真空下浓縮滤液得到粉红色固体目标产物 (0.500 g， HPLC纯度： 98.1 %，收率： 96.5 %)。

3、制备 4-(2-氯嘧啶 -4-基)苯甲酸甲酯 (化合物 7)

向烧瓶中依次加入化合物 4- (甲氧基羰基)苯硼酸 (4.000 g， 22.23 mmol)、 2， 4-二氯嘧啶 (3.150 g， 21.1 1mmol) 甲苯 (40 mL)和碳酸钠水溶液 (2 N, 10.5 mL)。氮气保护下，向其加入四 (三苯基膦)钯 (0.513 g，0.45 mmol)。反应液升温 80 °C，搅拌过夜。冷却到室温后，加水 (10 mL)和乙酸乙酯 (50 mL)稀释反应液，搅拌 15min后，分层。再用乙酸乙酯 (30 mL) 萃取水层两次。合并有机层，依次用水和食盐水洗涤。无水硫酸钠干燥。过滤，用旋转蒸发仪真空下浓縮滤液得到粗品。粗品经硅胶柱层析（乙酸乙酯 /石油醚 =0〜30% )分离提纯，真空干燥得到白色固体目标产物 (2.50 g，收率： 48%)。 1H NMR(400 MHz, CDC13) δ 8.71-8.70 ( 1Η, d) , 8.19-8.14 ( 4H，m) , 7.71-7.70 ( 1H, d) , 3.97 ppm ( 3H, s) 。

向烧瓶中依次加入化合物 4-(2-氯嘧啶 -4-基)苯甲酸甲酯 (0.606g， 2.44 mmol)、 4-(d₈- 吗啡啉)苯胺 (0.500g， 2.68mmol)和 1， 4-二氧六环 (25 mL)。搅拌下，向上述悬浮液加入对甲苯磺酸一水合物 (0.510g， 2.68mmol 升温回流 20h。用旋转蒸发仪真空下浓縮反应液。向其加入乙酸乙酯 (15mL)和 5%碳酸氢钠水溶液 (15mL)，有黄色固体析出，搅拌 30min后，过滤得粗品，粗品悬浮于甲醇 (5 mL)中，打浆 5min。过滤，甲醇洗涤滤饼。真空干燥得到固体目标产物 (0.680g， HPLC纯度： 95 %，收率： 70%)。

5、 4-(2-(4-(^-吗啡啉)苯基氨基）嘧啶 -4-基）苯甲酸 (化合物 10)

向烧瓶中加入化合物 4-(2-(4-(^-吗啡啉)苯基氨基）嘧啶 -4-基）苯甲酸甲酯 (0.680 g， 1.706 mmol)、氢氧化钠 (0.137g， 3.413 mmol)、水（3.5 ml) 、甲醇与四氢呋喃的混合溶剂 (12 mL, 3： 1), 升温至 65 °C，反应 2 h。反应液冷却至室温，除去溶剂， 10%的稀盐酸调节 pH=3，过滤，干燥得灰色固体。粗品研磨成粉末，加入甲醇（5 mL ) ，打浆 5 min，然后过滤，干燥得固体目标产物 C0.570 g， HPLC纯度： 98.3 %，收率： 87 %)。

6、制备 N- (氰基甲基) -4-(2-(4-( 吗啡啉)苯基氨基)嘧啶 -4-基)苯甲酰胺 (化合物 9) 在氮气保护下，向烧瓶中依次加入化合物 4-(2-(4-(^-吗啡啉)苯基氨基）嘧啶 -4-基）苯甲酸（ 0.300 g， 0.780 mmol)、 1-乙基- ( 3-二甲基氨基丙基）碳酰二亚胺盐酸盐（0.180 g， 0.936 mmol), 1-羟基基苯丙三氮唑（ 0.127 g， 0.936 mmol)，三乙胺（ 0.473 g， 4.682 mmol) 和 N，N-二甲基甲酰胺（3 mL)。搅拌下，向其加入 2-氨基乙腈盐酸盐 (0.217 g，2.341 mmol)。室温反应 20h。反应液中加入纯化水 (5 mL)和饱和碳酸氢溶液（5 mL )，有黄色固体析出，搅拌 30 min后，过滤，清水洗涤，干燥得粗品。粗品经制备色谱分离提纯得黄色固体目标产物 (0.150 g， HPLC纯度： 98.1%,收率： 45%)。 MS Calcd. : 422; MS Found: 423 (M+H)⁺。 1H NMR(400 MHz, OMSO-d₆) δ 9.65 ( 1H， s)， 9.38-9.35 ( 1H, m)， 8.57-8.56 C 1H, d)， 8.29-8.27 ( 2H, d) , 8.05-8.03 ( 2H, d) , 7.75-7.72 ( 2H, d) , 7.46-7.45 ( lH，d) , 7.09-7.07 ( 2H, m)， 4.37-4.36 ppm ( 2H, d) 。实施例 3 制备 N- (氰基 (ί/₂-甲基) )-4-(2-(4-( -吗啡啉)苯基氨基)嘧啶 -4-基)苯甲酰胺 (化合物 13)

1、制备 2-

12

冰浴下，向烧瓶中依次加入氰化钠（ 1.59 g， 32.46 mmol)和氨水 (6.80 g， 99.87 mmol), 控制内温低于 5°C ，再加入氯化铵 (2.27 g， 42.25 mmol), 搅拌 lO min后，缓慢滴加氘代甲醛 G.00 g， 31.21 mmol)并控制内温 16-20 °C， lO min滴加完毕，保温搅拌 3 h后，加入二氯甲烷（100 ml),搅拌 45 min，分液得到有机相。水相二氯甲烷萃取两次（ 100 ml x2 )，合并有机相，无水硫酸钠干燥，过滤。冰浴下，滤液中加入氯化氢异丙醇溶液（15 mL )，搅拌 1 h，有白色固体析出，过滤，干燥得白色固体目标产物（1.70 g，收率： 58 %)。 1H NMR(400 MHz, OMSO-d₆) δ 9.12 ppm ( 3Η, s) 。

2、制备 N- (氰基 (ί/₂-甲基) )-4-(2-(4-(^吗啡啉)苯基氨基)嘧啶 -4-基)苯甲酰胺；（化合物 13)

10

在氮气保护下，向烧瓶中依次加入化合物 4-(2-(4-( -吗啡啉)苯基氨基）嘧啶 -4-基）苯甲酸（ 0.260 g， 0.676 mmol)、 1-乙基- ( 3-二甲基氨基丙基）碳酰二亚胺盐酸盐（0.156 g， 0.811 mmol), 1-羟基苯丙三氮唑 ( 0.109 g, 0.811 mmol) ，三乙胺（ 0.410 g， 4.056 mmol)禾口 N，N-二甲基甲酰胺 (2.5 mL) o 搅拌下，向其加入 2-氨基 -2， 2- -乙腈盐酸盐 (0.192 g， 2.029 mmol) o 室温反应 19 h。反应液中加入纯化水 (3 mL)和饱和碳酸氢溶液（3 mL) ，有黄色固体析出，搅拌 30 min后，过滤，清水洗涤，干燥得粗品。粗品经制备色谱分离提纯得黄色固体目标产物 (0.192 g， HPLC纯度: 98.2 %，收率: 67 %)。 MS Calcd.: 424; MS Found: 425 (M+H) ⁺ o 1H NMR(400 MHz, OMSO-d₆) δ 9.65 ( lH，s) , 9.35 ( lH，s) , 8.57-8.56 ( 1H, d)， 8.29-8.27 (2H, d)， 8.05-8.03 (2H, d)， 7.74-7.73 (2H, d)， 7.45 ( 1H， s)， 7.09 ppm (2H, s) 。实施例 4 制备 N- (氰基 (ί/₂ -甲基 ))-4-(2-(4-(2'， 2'， 6'， 6' - ^吗啡啉)苯基氨基)嘧啶 -4-基) 苯甲酰胺 (化合物 24)

1、制备 2，2，6，6-^-吗啡啉 (化合物 19)

14 15 16

TsO、 OTs

Ό' Benzylamine

D D D D toluene

17

18 19

1)制备二甘醇酸二甲酯 (化合物 15)

冰浴下，向烧瓶中依次加入化合物二甘醇酸 (3.00 g， 22.37 mmol)和无水甲醇 (30 mL)，缓慢滴加二甲亚砜 (7.98 g， 67.12 mmol), 滴加完后，升温至室温，搅拌 20 h，反应液浓縮得无色油状目标产物（2.50 g， HPLC纯度： 97.3 %，收率 69%)。 1H NMR(400 MHz, CDC1₃) 5 4.25 (4H，s) , 3.76 ppm ( 6H，s) 。

2)制备 2，2，-氧-二（1，1- -乙醇）（化合物 16)

氮气保护下，向烧瓶中依次加入化合物氘代氢化锂铝 (1.49 g， 35.5 mmol, 购自 J&K) 和无水四氢呋喃 ClO mL), 冰浴冷却至 0°C，缓慢滴加二甘醇酸二甲酯 C2.5 g， 15.4 mmol)的四氢呋喃（15 mL) 溶液，滴加完毕后，升温至 65 °C，搅拌反应 2 h，冷却至室温搅拌过夜。反应液中依次加入 5 mL水， 2.5 mL 15%氢氧化钠水溶液，搅拌 30min后，过滤，四氢呋喃（20 mL)洗涤，滤液浓縮得黄色油状目标产物（1.50 g， HPLC纯度： 92 %，收率 88%) 1H NMR(400 MHz, CDC1₃) δ 3.59 ppm (4Η， s)。

3)制备 2，2，-氧-二（1，1-ί/₂ -乙垸 -2,1-二基）二（4-对甲苯磺酸酯）（化合物 17) 冰浴下，向烧瓶中依次加入化合物 2，2'-氧-二（ 1，1- -乙醇）（1.49 g， 35.5 mmol)和 30% 氢氧化钠水溶液 (10 mL), 缓慢滴加对甲苯磺酰氯 (2.5 g， 15.4 mmol)的四氢呋喃（ 15 mL) 溶液，滴加完毕后，升温至室温搅拌过夜。反应液中加入水，乙酸乙酯萃取三次，有机相无水硫酸钠干燥，浓縮得白色固体目标产物 C4.2 g，收率 79%); 1H NMR(400 MHz, CDC1₃) δ 7.82-7.79 (4H，d) , 7.38-7.36 (4H，d) , 3.62 (4Η, s ) , 2.48 ppm ( 6H, s)。

4)制备 4-苄基 -2，2，6，6- -吗啡啉（化合物 18)

冰浴下，向烧瓶中依次加入化合物 2，2'-氧-二（U- -乙烷 -2,1-二基）二（4-对甲苯磺酸酯）（4.20 g， 10.04 mmol), 苄胺（5.37 g， 50.17 mmo)和甲苯（40 mL) ，升温回流反应 18 反应液中加入水，乙酸乙酯萃取三次，有机相无水硫酸钠干燥，浓縮得粗品，粗品经柱层析分离提纯得白色固体目标产物（1.3 g，HPLC纯度： 91 %，收率 72%); 1H NMR(400 MHz, CDCls) δ 7.36-7.28 (5H，m) , 3.73 (4H， s) , 3.53 ppm (2H, s)。

5)制备 2，2，6，6- -吗啡啉 (化合物 19)

氢气氛围下，向烧瓶中依次加入化合物 4-苄基 -2，2，6，6-^-吗啡啉（1.30 g， 7.17 mmol), 氢氧化钯（0.26 g， 20%)和甲醇（13 mL) ，升温至 40°C，反应 3天。反应液冷却至室温，过滤，滤液浓縮得黄色油状目标产物（0.4 g，收率 61%)。

2、制备 N- (氰基 (ί/₂-甲基) )-4-(2-(4-(2'， 2'， 6'， 6' - ^吗啡啉)苯基氨基)嘧啶 -4-基)苯甲酰

1 ) 、制备 4-(4-硝基苯基）（2'， 2'， 6'， 6'- ^吗啡啉) (化合物 20)

向烧瓶中依次加入化合物 4-氯硝基苯 (0.402 g， 4.411 mmol) 3, 3, 5， 5 吗啡啉 (0.694 g， 4.411 mmol)和碳酸钾 (1.830 g， 13.233 mmol)。加入二甲亚砜 (6 mL)。加完后，升温到 100 °C，搅拌 18 h。 HPLC监控反应。反应合格后，反应液降温至室温后，加水 (30 mL)淬灭反应，有黄色固体析出，搅拌 30 min后，过滤得粗品。粗品在乙酸乙酯和石油醚的混合溶齐 [JG/2.5， v/v， l l mL)中结晶得到黄色固体目标产物 C0.600 g， HPLC纯度： 99.5%，收率 64%)。

2) 、制备 4-(2'， 2'， 6'， 6' 吗啡啉)苯胺 (化合物 21) 向氢化反应瓶依次加入 4-(4-硝基苯基）（2'， 2'， 6'， 6' 吗啡啉）（ 0.600 g， 2.827 mmol) 和甲醇（60 ml) 。氮气保护下加入 10%钯碳 (0.060 g)。用氢气置换体系 3〜4次后，在氢气压力下， 40 °C搅拌反应 20小时。高效液相检测反应完全后，反应液冷却到室温，用硅藻土过滤，甲醇洗涤滤饼。合并滤液，用旋转蒸发仪真空下浓縮滤液得到固体目标产物 (0.420 g, HPLC纯度： 95 %，收率： 82 %)。

3 ) 、制备 4-(2-(4-(2'， 2'， 6'， 6Ά-吗啡啉)苯基氨基）嘧啶 -4-基）苯甲酸甲酯 (化合物

22)

向烧瓶中依次加入化合物 4-(2-氯嘧啶 -4-基)苯甲酸甲酯 (0.521 g, 2.096 mmol)、4-(2'， 2'， 6'， 6' 吗啡啉)苯胺 (0.420 g， 2.306 mmol)和 1， 4-二氧六环 (20 mL)。搅拌下，向上述悬浮液加入对甲苯磺酸一水合物 (0.439 g， 2.306 mmol)。升温回流 20 h。用旋转蒸发仪真空下浓縮反应液。向其加入乙酸乙酯 (5 mL)和 5%碳酸氢钠水溶液 (5 mL)，有黄色固体析出，搅拌 30 min后，过滤得粗品，粗品悬浮于甲醇 (5 mL)中，打浆 5 min。过滤，甲醇洗涤滤饼。真空干燥得到固体目标产物 C0.400 g， HPLC纯度： 92%，收率： 48%)。

4) 、 4-(2-(4-(2，， 2，， 6，， 6，吗啡啉)苯基氨基）嘧啶 -4-基）苯甲酸 (化合物 23) 向烧瓶中加入化合物 4-(2-(4-(2'， 2'， 6'， 6' 吗啡啉)苯基氨基）嘧啶 -4-基）苯甲酸甲酯 (0.400 g， 1.01 mmol)、氢氧化钠 (0.008 g， 2.02 mmol), 水（3 ml) 、甲醇与四氢呋喃的混合溶剂 (12mL， 3： 1), 升温至 65 °C，反应 2 h。反应液冷却至室温，除去溶剂， 10%的稀盐酸调节 pH=3，过滤，干燥得灰色固体。粗品研磨成粉末，加入甲醇（5 mL)，打浆 5 min, 然后过滤，干燥得固体目标产物 C0.340 g， HPLC纯度： 92%，收率： 88%)。

5) 、制备 N- (氰基 (ί/₂ -甲基 )-4-(2-(4-(2'， 2'， 6'， 6'- ^吗啡啉)苯基氨基)嘧啶 -4-基)苯甲酰胺 (化合物 24)

在氮气保护下，向烧瓶中依次加入化合物 4-(2-(4-(2'， 2'， 6'， 6' 吗啡啉)苯基氨基）嘧啶 -4-基）苯甲酸（0.170 g， 0.447 mmol)、 1-乙基- ( 3-二甲基氨基丙基）碳酰二亚胺盐酸盐 (0.103 g， 0.536 mmol), 1-羟基苯丙三氮唑 ( 0.724 g， 0.536 mmol), 三乙胺 ( 0.271 g， 2.682 mmol)和 N，N-二甲基甲酰胺（ 2 mL)。搅拌下，向其加入 2-氨基 -2， 2- -乙腈盐酸盐 (0.124 g， 1.341 mmol)。室温反应 20 h。反应液中加入纯化水 (2mL)和饱和碳酸氢溶液（2 mL) ，有黄色固体析出，搅拌 30 min后，过滤，清水洗涤，干燥得粗品。粗品经制备色谱分离提纯得黄色固体目标产物 (0.112 g, HPLC纯度： 98.9%, 收率： 60 %)。 MS Calcd.: 420; MS Found: 421 (M+H) ⁺。 1H NMR(400MHz， DMSO-A) δ 9.56 ( 1H， s)， 9.35 ( 1H， s)， 8.57-8.56 ( lH，d) , 8.29-8.27 (2H, d) , 8.05-8.03 (2H, d) , 7.70-7.68 (2H, d) , 7.44-7.42 ( lH，d)， 6.99 (2H, s) , 3.76 ppm (4H, s) 实施例 5 制备 N- (氰基甲基) -4-(2-(4-(2'， 2'， 6'， 6'-^-吗啡啉)苯基氨基)嘧啶 -4-基)苯甲酰胺（化合物 25)

在氮气保护下，向烧瓶中依次加入化合物 4-(2-(4-(2'， 2'， 6'， 6' 吗啡啉)苯基氨基）嘧啶 -4-基）苯甲酸（ 0.170g， 0.447 mmol)、 1-乙基- ( 3-二甲基氨基丙基）碳酰二亚胺盐酸盐 (0.103 g， 0.536 mmol), 1-羟基苯丙三氮唑 (0.724 g， 0.536 mmol) ，三乙胺 ( 0.271 g， 2.682 mmol)和 N，N-二甲基甲酰胺（2 mL)。搅拌下，向其加入 2-氨基乙腈盐酸盐 (0.124 g， 1.341 mmol)o 室温反应 20 h。反应液中加入纯化水 (2mL)和饱和碳酸氢溶液（2 ml) ，有黄色固体析出，搅拌 30min后，过滤，清水洗涤，干燥得粗品。粗品经制备色谱分离提纯得黄色固体目标产物（0.105 g， HPLC纯度： 98.1%，收率： 56%); MS Calcd.: 418; MS Found: 419 (M+H)⁺; 1H NMR(400MHz, OMSO-d₆) δ 9.65 ( lH，s ) , 9.38-9.36 ( 1H， m) , 8.58-8.56 ( 1H, d)， 8.29-8.27 ( 2H, d)， 8.05-8.03 ( 2H, d)， 7.75-7.73 ( 2H, d)， 7.46-7.45 ( 1H, d)， 7.09 ( 2H, s) , 4.37-4.36 ( 2H, d) , 3.79 ppm ( 4H，s) 。实施例 6制备 N- (氰基 (ί/₂-甲基) )-4-(2-(4-(3'， 3'， 5'， 5'-^-吗啡啉苯基氨基)嘧啶 -4-基)

26 27 28 29

1、制备 3，3，5，5- -吗啡啉 (化合物 29)

1) 、制备 2,2'- (苯甲基亚氨基)二 (1，1-ί/₂-乙醇) (化合物 27)

氮气保护下，向烧瓶中依次加入化合物苯甲基亚氨基二乙酸二乙酯 (3.5 g， 12.53 mmol) 和无水四氢呋喃 (35 mL), 分批加入氘代氢化锂铝 (1.49 g， 35.5 mmol, 购自 J&K)保持内温低于 10°C，升温至室温，搅拌反应过夜， HPLC监控反应，反应合格后，冰浴下，向反应液中依次加入 7 mL水， 3.5 mL 15%氢氧化钠水溶液，搅拌 30min后，过滤，四氢呋喃 ( 20 mL ) 洗涤，滤液浓縮得黄色油状目标产物（2.4 g， HPLC纯度: 100 %，收率: 96 %); 1H NMR(400 MHz, CDC1₃) δ 7.37-7.27 ( 5Η， m)， 3.72 ( 2Η, s)， 2.75 ( 2H, s)， 2.72 ppm ( 4H， s ) 。

2)、制备 N-苄基 -3，3，5，5- -吗啡啉 (化合物 28)

向烧瓶中依次加入化合物 2，2'- ( 苯甲基亚氨基）二（ 1，1- -乙醇）（1.49 g， 35.5 mmol) 和浓硫酸 (70%， 2mL), 升温至 150°C，反应 16 h。 HPLC监控反应，反应合格后，反应液冷却至室温，倒入 25 mL冰水中，加入固体碳酸钾中和至 pH约为 9，再加入二氯甲烷 (2 mL) 搅拌 30min，过滤，滤液二氯甲烷萃取三次，有机相无水硫酸钠干燥，浓縮得黄棕色油状目标产物（1.4 g， HPLC纯度： 98.9 %，收率 64%)。 i i NMR (400 MHz, CDC1₃) δ 7.36-7.28 ( 5H，m) , 3.53 ( 2Η, s) , 2.46 ppm ( 4H， s) 。

3)、制备 3，3，5，5- -吗啡啉 (化合物 29)

氢气氛围下，向烧瓶中依次加入化合物 N-苄基 -3，3，5，5- 吗啡啉 (1.40 g， 7.72 mmol), 氢氧化钯（0.28 g， 20%)和甲醇（14 mL) ，升温至 40°C，反应 18h。反应液冷却至室温，过滤，滤液浓縮得黄色油状目标产物 C0.4 g， HPLC纯度： 90 %，收率 57%)。

2、制备 N- (氰基 (ί/₂-甲基) )-4-(2-(4-(3'， 3'， 5'， 5'-^-吗啡啉)苯基氨基)嘧啶 -4-基)苯甲酰胺 (化合物 34)

1)、制备 4-(4-硝基苯基）（3'， 3'， 5'， 5'- ^吗啡啉) (化合物 30)

向烧瓶中依次加入化合物 4-氯硝基苯 (1.210 g， 7.68 mmol)、 3, 3, 5， 5 -φ-吗啡啉 (0.700 g，7.68 mmol)、碳酸钾 (3.18 g， 23.04 mmol)、二甲亚砜 (12 mL)。加完后，升温到 100 °C，搅拌 18 h。 HPLC监控反应。反应合格后，反应液降温至室温，加水 (50 mL)淬灭反应，有黄色固体析出，搅拌 30 min后，过滤得粗品。粗品在乙酸乙酯和石油醚的混合溶剂 (1/2.5， v/v， 15 mL)中结晶得到黄色固体目标产物 (0.500 g， HPLC纯度： 96%，收率 30 %)。

2)、制备 4-(3'， 3'， 5'， 5'-^-吗啡啉)苯胺 (化合物 31)

向氢化反应瓶依次加入 4-(4-硝基苯基）（3'， 3'， 5'， 5'- 吗啡啉）（ 0.500 g， 2.356 mmol) 和甲醇（50 ml) 。氮气保护下加入 10%钯碳 (0.050 g)。用氢气置换体系 3〜4次后，在氢气压力下， 40 °C搅拌反应 20小时。高效液相检测反应完全后，反应液冷却到室温，用硅藻土过滤，甲醇洗涤滤饼。合并滤液，用旋转蒸发仪真空下浓縮滤液粗品，粗品柱层析分离提纯得到固体目标产物 C0.170 g， HPLC纯度： 95%，收率： 40%)。

3)、制备 4-(2-(4-(3'， 3'， 5'， 5'-^-吗啡啉)苯基氨基）嘧啶 -4-基）苯甲酸甲酯 (化合物 32)

向烧瓶中依次加入化合物 4-(2-氯嘧啶 -4-基)苯甲酸甲酯 (0.255 g， 1.026 mmol)、4-(3'， 3'， 5'，5'- -吗啡啉)苯胺(0.170 §，0.933 1^^1)和 1， 4-二氧六环 (14 mL)。搅拌下，向上述悬浮液加入对甲苯磺酸一水合物 (0.195 g， 1.026 mmol) o 升温回流 20 h， HPLC检测反应。反应合格后，用旋转蒸发仪真空下浓縮反应液。向其加入乙酸乙酯 (5 mL)和 5%碳酸氢钠水溶液 (5 mL)，有黄色固体析出，搅拌 30 min后，过滤得粗品，粗品悬浮于甲醇 (5 mL)中，打浆 5 min。过滤，甲醇洗涤滤饼。真空干燥得到固体目标产物 (0.200 g， HPLC纯度： 92%，收率： 55%)。

4)、 4-(2-(4-(3'，3'，5'，5Ά-吗啡啉)苯基氨基）嘧啶 -4-基）苯甲酸 (化合物 33) 向烧瓶中加入化合物 4-(2-(4-(3'， 3'， 5'， 5Ά-吗啡啉)苯基氨基）嘧啶 -4-基）苯甲酸甲酯 (0.200 g， 0.507 mmol)、氢氧化钠 (0.041g， 1.014 mmol), 水 ( 1 ml) 、甲醇与四氢呋喃的混合溶剂 (4mL， 3： 1), 升温至 65 °C，反应 2 h。反应液冷却至室温，除去溶剂， 10%的稀盐酸调节 pH=3，过滤，干燥得灰色固体。粗品研磨成粉末，加入甲醇（2 mL)，打浆 5 min, 然后过滤，干燥得固体目标产物 (0.200 g，收率： 86 %)。

5)、制备 N- (氰基 (ί/₂-甲基) -4-(2-(4-(3'， 3'， 5'， 5'-^-吗啡啉)苯基氨基)嘧啶 -4-基)苯甲酰胺 (化合物 34) 在氮气保护下，向烧瓶中依次加入化合物 4-(2-(4-(3'， 3'， 5'， 5'- 吗啡啉)苯基氨基）嘧啶 -4-基）苯甲酸（ 0.100 g， 0.263 mmol)、 1-乙基- ( 3-二甲基氨基丙基）碳酰二亚胺盐酸盐 (0.061 g, 0.316 mmol), 1-羟基苯丙三氮唑 ( 0.043 g, 0.316 mmol) ，三乙胺（ 0.159 g， 1.578 mmol)和 N，N-二甲基甲酰胺（ 2 mL)。搅拌下，向其加入 2-氨基 -2，2- -乙腈盐酸盐 (0.073 g， 0.789 mmol)。室温反应 20 h。反应液中加入纯化水 (2 mL)和饱和碳酸氢溶液（2 ml) ，有黄色固体析出，搅拌 30min后，过滤，清水洗涤，干燥得粗品。粗品经制备色谱分离提纯得黄色固体目标产物（0.050 g， HPLC纯度： 98.9%，收率： 45%)。 MS Calcd.: 420; MS Found: 421 (M+H)⁺。 1H NMR(400MHz， DMSO-A) δ 9.57 ( 1H， s)， 9.35 ( 1H, s)， 8.56-8.55 ( 1H, d) , 8.29-8.27 (2H, d) , 8.04-8.02 (2H, d) , 7.70-7.68 (2H, d) , 7.44-7.42 ( lH，d)， 6.99-6.98 (2H, d) , 3.08 ppm (4H，s) 。实施例 7制备 N- (氰基甲基) -4-(2-(4-(3'，3'，5'，5'- -吗啡啉)苯基氨基)嘧啶 -4-基)苯甲酰（化合物 35) ；

在氮气保护下，向烧瓶中依次加入化合物 4-(2-(4-(3'， 3'， 5'， 5' -d4-吗啡啉)苯基氨基）嘧啶 -4-基）苯甲酸（ 0.100 g， 0.263 mmol)、 1-乙基- ( 3-二甲基氨基丙基）碳酰二亚胺盐酸盐 (0.061 g, 0.316 mmol), 1-羟基苯丙三氮唑 ( 0.043 g, 0.316 mmol) ，三乙胺（ 0.159 g， 1.578 mmol)和 N，N-二甲基甲酰胺（2 mL)。搅拌下，向其加入 2-氨基乙腈盐酸盐 (0.073 g， 0.789 mmol)o 室温反应 20 h。反应液中加入纯化水 (2 mL)和饱和碳酸氢溶液（2 mL) ，有黄色固体析出，搅拌 30 min后，过滤，清水洗涤，干燥得粗品。粗品经制备色谱分离提纯得黄色固体目标产物（0.060 g， HPLC纯度： 98.4%，收率： 55%); MS Calcd.: 418; MS Found: 419 (M+H)+。 1H NMR (400MHz, DMSO- ₆) δ 9.62 ( 1H, s)， 9.38-9.35 ( 1H, m)， 8.57-8.56 ( 1H, d) , 8.29-8.27 (2H, d) , 8.04-8.02 (2H, d) , 7.73-7.70 (2H, d) , 7.45-7.44 ( lH，d)， 7.05 (2H, s) , 4.37-4.36 (2H, d) , 3.14 ppm (4H， s) 。实施例 8 制备 N- (氰基甲基) )-4-(2-(4-吗啡啉苯基氨基)嘧啶 -4-基)苯甲酰胺（化合物 41)

1、制备 4-(4-硝基苯基）（吗啡啉) (化合物 37)

向烧瓶中依次加入化合物 4-氯硝基苯 (1.00 g， 6.35 mmol)、吗啡啉 (0.608 g， 7.68 mmol)、碳酸钾 (1.76 g， 12.7 mmol)、二甲亚砜 (l l mL)。加完后，升温到 100°C，搅拌 18h。 HPLC 监控反应。反应合格后，反应液降温至室温，加水 (50 mL)淬灭反应，有黄色固体析出，搅拌 30 min后，过滤得粗品。粗品在乙酸乙酯和石油醚的混合溶剂 (1/2.5， v/v, 16 mL) 中结晶得到黄色固体目标产物 (0.800g， HPLC纯度： 98.9%，收率 60 %)。 1H NMR (400MHz, CDCI3) δ 8.18-8.15 (2Η, d)， 6.87-6.84 (2H, d)， 3.90-3.88 (4H， t)， 3.41-3.38 ppm (4H， t)。

1、制备 ⁴- (吗啡啉)苯胺 (化合物 38)

向氢化反应瓶依次加入 4-(4-硝基苯基）吗啡啉（ 0.600 g， 2.882 mmol)和甲醇（60 mL) 。氮气保护下加入 10%钯碳 (0.060 g)。用氢气置换体系 3〜4次后，在氢气压力下， 40°C搅拌反应 18小时。高效液相检测反应完全后，反应液冷却到室温，用硅藻土过滤，甲醇洗涤滤饼。合并滤液，用旋转蒸发仪真空下浓縮滤液得到固体目标产物 (0.500 g， HPLC 纯度： 97.1%，收率： 97%)。 1H NMR(400MHz, DMSO- ₆) δ 6.83-6.80 (2Η, d) , 6.71-6.68 (2H, d) , 3.88-3.86 (4H，t) , 3.46 (2H, s) , 3.06-3.03 ppm (4H，t) 。

3、制备 ⁴-(²-( (⁴-吗啡啉）苯基氨基）嘧啶 -⁴-基）苯甲酸甲酯 (化合物 39)

向烧瓶中依次加入化合物 4-(2-氯嘧啶 -4-基)苯甲酸甲酯 (0.651 g， 2.617 mmol)、 4- (吗啡啉)苯胺 (0.513 g， 2.878 mmol)和 1， 4-二氧六环 (16 mL)。搅拌下，向上述悬浮液加入对甲苯磺酸一水合物 (0.547 g， 2.878 mmol)。升温回流 20h， HPLC检测反应。反应合格后，反应液冷却到 30°C，用旋转蒸发仪真空下浓縮反应液。向其加入乙酸乙酯 (5 mL)和 5%碳酸氢钠水溶液 (5 mL)，有黄色固体析出，搅拌 30min后，过滤得粗品，粗品悬浮于甲醇 (8 mL)中，打浆 5min。过滤，甲醇洗涤滤饼。真空干燥得到固体目标产物 (0.860 g， HPLC 纯度： 97.6%，收率： 84%); 1H NMR (400MHz, CDC1₃) δ 8.50-8.49 ( 1Η, d) , 8.17-8.13 (4H， m) , 7.60-7.58 (2H, d) , 7.17-7.16 (2H, d) , 6.99-6.97 (2H, d) , 3.98 (3H, s) , 3.92-3.89 (4H，t) , 3.18-3.15 ppm (4H，t) 。

4、 4-(²-(⁴- (吗啡啉)苯基氨基）嘧啶 -⁴-基）苯甲酸 (化合物 ⁴0)

向烧瓶中加入化合物 4-(2-(4- (吗啡啉)苯基氨基）嘧啶 -4-基）苯甲酸甲酯 (0.860 g， 2.203 mmol) 氢氧化钠 (0.176 g， 4.405 mmol), 水（3.5 ml) 、甲醇与四氢呋喃的混合溶剂 (12 mL, 3： 1), 升温至 65 °C，反应 2h。反应液冷却至室温，除去溶剂， 10%的稀盐酸调节 pH=3，过滤，干燥得灰色固体。粗品研磨成粉末，加入甲醇（10 ml) ，打浆 5 min，然后过滤，干燥得固体目标产物 (0.730 g， HPLC纯度： 97.7%，收率： 88 % 5、制备 N- (氰基 (ί/₂-甲基) )-4-(2-(4- (吗啡啉)苯基氨基)嘧啶 -4-基)苯甲酰胺 (化合物 41) 在氮气保护下，向烧瓶中依次加入化合物 4-(2-(4- (吗啡啉)苯基氨基）嘧啶 -4-基）苯甲酸（0.230 g， 0.61 1 mmol)、 1-乙基 - ( 3-二甲基氨基丙基）碳酰二亚胺盐酸盐（0.141 g， 0.733 mmol), 1-羟基苯丙三氮唑（ 0.099 g， 0.733 mmol) ，三乙胺（ 0.371 g， 3.666 mmol)和 N，N- 二甲基甲酰胺（ 2.5 mL 搅拌下，向其加入 2-氨基 -2， 2- -乙腈盐酸盐 (0.173 g， 1.833 mmol 室温反应 20 h。反应液中加入纯化水 (3 mL)和饱和碳酸氢溶液（3 ml) ，有黄色固体析出，搅拌 30min后，过滤，清水洗涤，干燥得粗品。粗品经制备色谱分离提纯得黄色固体目标产物（0.183 g， HPLC纯度： 99%，收率： 72%); MS Calcd.: 416; MS Found: 417 (M+H)⁺; 1H NMR(400MHz， OMSO-d₆) δ 9.65 ( 1H， s )， 9.35 ( 1H， s )， 8.57-8.56 ( 1H， d)， 8.29-8.27 ( 2H, d) , 8.05-8.03 ( 2H, d) , 7.75-7.73 ( 2H, d) , 7.46-7.45 ( lH，d) , 7.09-7.07 ( 2H, d) , 3.79-4.36 ( 4H，t) , 3.17 pm ( 4H， s) 。

实施例 9 制备 N- (氰基甲基) -4-(2-(4-吗啡啉苯基氨基)嘧啶 -4-基)苯甲酰胺（化合物 42，

在氮气保护下，向烧瓶中依次加入化合物 4-(2-(4- (吗啡啉)苯基氨基）嘧啶 -4-基）苯甲酸（ 0.500 g， 1.328 mmol)、 1-乙基- ( 3-二甲基氨基丙基）碳酰二亚胺盐酸盐（0.305 g， 1.594 mmol), 1-羟基苯丙三氮唑 ( 0.215 g, 1.594 mmol) ，三乙胺（ 0.805 g， 7.968 mmol)禾口 Ν,Ν- 二甲基甲酰胺 (； 5 mL)。搅拌下，向其加入 2-氨基乙腈盐酸盐 (0.368 g， 3.985 mmol)。室温反应 20 h。反应液中加入纯化水 (5 mL)和饱和碳酸氢溶液（5 ml) ，有黄色固体析出，搅拌 30min后，过滤，清水洗涤，干燥得粗品。粗品经制备色谱分离提纯得黄色固体目标产物（0.130 g， HPLC纯度： 98.3%，收率： 24%); MS Calcd. : 414; MS Found: 415 (M+H)+; 1H NMR(400MHz, DMSO δ 9.63 ( 1H， s )， 9.38-9.35 ( 1H, m)， 8.57-8.56 ( 1H, d)， 8.29-8.27 ( 2H, d) , 8.05-8.03 ( 2H, d) , 7.74-7.71 ( 2H, d) , 7.46-7.44 ( lH，d) , 7.07-7.05 ( 2H, d)， 4.37-4.36 ( 2H, d) , 3.80-3.78 ( 4H，t) , 3.15 pm ( 4H，s ) 。

实施例 10: 大鼠中的药代动力学评价

12只雄性 Sprague-Dawley大鼠， 7-8周龄，体重约 200g，分成 3组，每组 4只，单次联合口服灌胃给予 3 mg/kg剂量的 (a)实施例 9制备的对照化合物: N- (氰基甲基) -4-(2-(4- 吗啡啉苯基氨基)嘧啶 -4-基)苯甲酰胺和 (b)本发明化合物：实施例 1〜8制备的一些化合物，比较其药代动力学差异。

大鼠采用标准伺料伺养，给予水。试验前 16小时开始禁食。药物用 PEG400和二甲亚砜溶解。眼眶采血，采血的时间点为给药后 0.25小时、 0.5 小时、 1 小时、 2小时、 4 小时、 6小时、 8小时、 12小时、 24小时、 36小时和 48小时。大鼠吸入乙醚后短暂麻醉，眼眶采集 300 血样于试管。试管内有 30 μ 1% 肝素盐溶液。使用前，试管于 60°C烘干过夜。在随后一个时间点血样采集完成之后，大鼠乙醚麻醉后处死。

血样采集后，立即温和地颠倒试管至少 5次，保证混合充分后放置于冰上。血样在 4V 5000 rpm离心 5分钟，将血浆与红细胞分离。用移液器吸出 100 血浆到干净的塑料离心管中，表明化合物的名称和时间点。血浆在进行分析前保存在 -80°C。用 LC-MS/MS测定血浆中本发明化合物的浓度。药代动力学参数基于每只动物在不同时间点的血药浓度进行计算。从结果看出，相对于实施例 9对照化合物，本发明化合物（实施例 1〜8化合物）在动物体内具有更好的药代动力学（见表 1〜3 ) ，因而具有更好的药效学和治疗效果。

表 1 大鼠灌胃给予 3 mg/kg后的药动学参数

大鼠 Tmax Cmax AUClast AUCINF obs 组别化合物

编号 (h) (ng/ml) (h*ng/ml) (h*ng/ml)

G1 实施例 9 1 0.25 368 2288 2297

2 4 79.4 443 480

3 4 354 2445 2508

4 2 180 1317 1326

Mean 2.56 245 1623 1653

SD 1.81 140 932 936

实施例 8 1 0.25 469 3092 3105

2 4 101 574 616

3 4 438 3046 3129

4 2 227 1632 1642

Mean 2.56 309 2086 2123

SD 1.81 175 1215 1222

实施例 6 1 0.25 423 2726 2739

2 4 94.6 514 561

3 4 403 2841 2922

4 2 207 1519 1529

Mean 2.56 282 1900 1938

SD 1.81 158 1101 1106

结果显示，实施例 8化合物 (309±175 ng/mL) 的 Cmax显著高于实施例 9对照化合物 (245±140 ng/mL);实施例 8化合物 (2086±1215 ng-h/mL) 的 AUClast显著高于实施例 9 对照化合物 (1623±932 ng-h/mL) o

实施例 6化合物 (；282±158 ng/mL) 的 Cmax显著高于实施例 9对照化合物 (；245±140 ng/mL); 实施例 6化合物 (1900±1101 ng-h/mL) 的 AUClast显著高于实施例 9对照化合物（1623±932 ng-h/mL)。

表 2 大鼠灌胃给予 3 mg/kg后的药动学参数

Tmax Cmax AUClast AUCINF obs 组别化合物大鼠编号

(h) (ng/ml) (h*ng/ml) (h*ng/ml)

G2 实施例 9 5 2 858 4081 4106

6 4 567 3323 3340

7 4 514 3177 3207

8 4 415 2266 2301

Mean 3.5 589 3212 3238 SD 1 190 744 740 实施例 5 5 2 1410 6816 6848

6 4 922 5455 5492

7 4 875 5473 5524

8 4 686 3813 3897

Mean 3.5 972 5389 5440

SD 1 307 1229 1207

结果显示，实施例 5化合物 (972±307 ng/mL) 的 Cmax显著高于实施例 9对照化合物 (589±190 ng/mL);实施例 5化合物 (5389±1229 ng-h/mL) 的 AUClast显著高于实施例 9 对照化合物 (3212±744 ng-h/mL)

表 3 大鼠灌胃给予 3 mg/kg后的药动学参数

Tmax Cmax AUClast AUCINF obs 组别化合物大鼠编号

(h) (ng/ml) (h*ng/ml) (h*ng/ml)

G3 实施例 9 9 4 579 3415 3475

10 4 336 1803 1847

11 2 276 1752 1797

12 4 270 1807 1845

Mean 3.5 365 2194 2241

SD 1 146 814 823

实施例 1 9 4 1060 6168 6305

10 4 596 3251 3367

11 2 476 3157 3254

12 4 483 3244 3323

Mean 3.5 653 3955 4062

SD 1 275 1476 1496

实施例 3 9 4 694 4101 4180

10 4 419 2299 2354

11 2 329 2193 2265

12 4 344 2287 2346

Mean 3.5 447 2720 2786

SD 1 170 922 930

结果显示，实施例 1化合物 (653±275 ng/mL) 的 Cmax显著高于实施例 9对照化合物 (365±146 ng/mL);实施例 1化合物 (3955±1476 ng-h/mL) 的 AUClast显著高于实施例 9 对照化合物 (2194±814 ng-h/mL)

实施例 3化合物 (447±170 ng/mL) 的 Cmax显著高于实施例 9对照化合物 (365±146 ng/mL); 实施例 3化合物 (；2720±922 ng-h/mL) 的 AUClast显著高于实施例 9对照化合物 (2194±814 ng-h/mL) 实施例 11: 本发明化合物对 JAK激酶的体外药效学评价

激酶 JAK1和 JAK2抑制作用 IC_5Q的测定

在 96孔板中进行 JAK激酶活性抑制试验。将待测试化合物 (实施例 1〜7制备的任一化合物)溶解在 DMSO中，并配成不同浓度的测试液，在磷酸酪氨酸测定用缓冲液 (5 mM HEPES, H 7.5, 50mM MgCl₂， 50 mM NaCl, lOOmM钒酸钠和 0.1% Tween 20)中，与 JAK1 或 JAK2酪氨酸激酶温育 20分钟。加入底物（比如： biotin-EGPWLEEEEEAYGWMDF-NH₂ 或 biotin-EQEDEPEGDYFEWLEPE), 温育 60min。在光照下，向各反应孔中加入随后加入链霉亲合素供体珠，温育 150分钟。洗涤后读板，由这些数据计算得到 IC_5Q值。

结果如表 4所示。可见，本发明所述的化合物对激酶 JAK1和 JAK2均具有优异的抑制活性。

表 4

实施例 12: 本发明化合物抑制 STAT磷酸化活性的体外药效学评价

试剂：

DMEM培养基，购自 Mediatech公司

抗磷酸化 STAT3抗体，购自 Cell Signaling Technology公司

抗 -actin抗体，购自 Sigma公司

实验方法：

HCT116细胞（来自 ATCC) 培养于有 10%胎牛血清、 2mM谷氨酰胺、 100 U / ml 青霉素和 100mg/ml链霉素的 DMEM培养基中。化合物溶解于 DMSO中。不同浓度的化合物（0.6 μΜ， 1.2 μΜ)加入培养基中，以 DMSO作为阴性对照，实施例 9化合物（0.6 μΜ， 1.2 μΜ) 为阳性对照，处理细胞 2小时，然后收获蛋白质进行 Western Blotting分析。

实验结果：

图 1显示了本发明的化合物具有抑制 JAK-STAT信号通路活性，对 STAT3磷酸化的抑制活性比实施例 9对照化合物更佳或类似。实施例 13 药物组合物

化合物（实施例 1〜8) 10g

淀粉 140g

微晶纤维素 60g

按常规方法，将上述物质混合均匀后，装入普通明胶胶囊，得到 1000颗胶囊。在本发明提及的所有文献都在本申请中引用作为参考，就如同每一篇文献被单独引用作为参考那样。此外应理解，在阅读了本发明的上述内容之后，本领域技术人员可以对本发明作各种改动或修改，这些等价形式同样落于本申请所附权利要求书所限定的范围。

Claims

权利要求

1.一种式 (I)所示的氘代的苯基氨基嘧啶化合物、或其晶型、药学上可接受的盐、水合物或溶剂合物：

(I)

其巾：

14 15 , 17 , 18 , 19 , 20

R R² R¹³、 R R R¹⁶、 R¹⁷、 R¹⁸、 R¹⁹、 R²⁰、 R²¹和 R²²各自独立地为氢或氘;

R\ R R R。、 R'、 R⁸ R⁹、 R^1Q和 R¹¹各自独立地为氢、氘、卤素、未氘代的 C1-C6 烷基或 C1-C6烷氧基、一次或多次氘代的或全氘代的 C1-C6烷基或 C1-C6烷氧基，或者一个或多个卤素取代的或全卤素取代的 C1-C6烷基或 C1-C6烷氧基；

R¹²为氢、氘、卤素、 OR²³、 COOR²³、 COSR²³、 CONHR²³或 CON(R²³)₂; 其中， R²³ 选自氢、氘、取代的或未取代的 C1-C6烷基或 C3-C8环烷基，其中所述的取代基选自下组：卤素、氰基、 C1-C6烷基或 C1-C6烷氧基；

, 13 14 , 15 16 附加条件是 R R²、 R³、 R⁴、 R⁵、 R⁶、 R⁷、 R⁸、 R⁹、 R¹⁰ R^u、 R^1J、 R¹⁴、 R R

17

R R¹⁸、 R¹⁹、 R^2Q、 R²¹或 R²²中至少一个是氘代的或氘。
2. 如权利要求 1所述的化合物，其特征在于， R1和 R2是氘或氢。
3. 如权利要求 1所述的化合物，其特征在于， R12是氢或氘。

14
4. 如权利要求 1所述的化合物，其特征在于， R13、 R R15和 R16是氘或氢。

18
5. 如权利要求 1所述的化合物，其特征在于， R17、 R R19和 R2Q是氘或氢。

, 16 17 , 18 , 19
6. 如权利要求 1所述的化合物，其特征在于， R13、 R14、 ET , 15、 R10、 ΕΤ、 ΕΤ、 R 和 R2Q是氘。
7.如权利要求 1-6中任一所述的化合物，其特征在于， R3、 R4、 R5、 R6、 R7或 R8分别独立地选自：氢、氘、一次或多次氘代的或全氘代的甲基或甲氧基、或者一次或多次氘代的或全氘代的乙基或乙氧基。
8.如权利要求 1所述的化合物，其特征在于，所述化合物是选自下组的化合物或其药学上可接受的盐：
9.如权利要求 1所述的化合物，其特征在于，所述的化合物不包括非氘代的化合物。
10. 一种制备药物组合物的方法，其特征在于，包括步骤：将药学上可接受的载体与权利要求 1所述的化合物，或其晶型、药学上可接受的盐、水合物或溶剂合物进行混合，从而形成药物组合物。
11.一种药物组合物，其特征在于，它含有药学上可接受的载体和权利要求 1所述的化合物，或其晶型、药学上可接受的盐、水合物或溶剂合物。
12. 如权利要求 11所述的药物组合物，其特征在于，它还含有另外的治疗药物，所述的另外的治疗药物为癌症、骨髓增殖性疾病、心血管疾病、炎症、免疫性疾病、病毒性疾病、或代谢性疾病的药物。
13.—种权利要求 1所述的化合物，或其晶型、药学上可接受的盐、水合物或溶剂合物的用途，其特征在于，用于制备抑制蛋白激酶 (如 JAK激酶)的药物组合物。
14. 如权利要求 13所述的用途，其特征在于，所述的药物组合物用于治疗和预防以下疾病：癌症、骨髓增殖性疾病、炎症、免疫性疾病、器官移植、病毒性疾病、心血管疾病或代谢性疾病。