CN104845928A - 一种利用复合菌种协同作用处理六价铬污染的方法 - Google Patents
一种利用复合菌种协同作用处理六价铬污染的方法 Download PDFInfo
- Publication number
- CN104845928A CN104845928A CN201510279005.7A CN201510279005A CN104845928A CN 104845928 A CN104845928 A CN 104845928A CN 201510279005 A CN201510279005 A CN 201510279005A CN 104845928 A CN104845928 A CN 104845928A
- Authority
- CN
- China
- Prior art keywords
- hexavalent chromium
- bacillus
- geotrichum
- medium
- beef extract
- Prior art date
- Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
- Pending
Links
Landscapes
- Micro-Organisms Or Cultivation Processes Thereof (AREA)
- Purification Treatments By Anaerobic Or Anaerobic And Aerobic Bacteria Or Animals (AREA)
Abstract
本发明涉及一种利用复合菌种协同作用处理六价铬污染的方法，属于环境生物工程技术领域；本发明的处理方法从六价铬污染土壤中分离、纯化，筛选得到一株芽孢杆菌(Bacillus):B1和一株地霉菌(Geotrichum):G1，将芽孢杆菌Bacillus和地霉菌Geotrichum单独培养，得到单一菌液，再将菌液按体积比1:1接种于同一污染水体中混合培养，用于处理六价铬污染；本发明利用芽孢杆菌和地霉菌混合接种于含铬废水中，利用两种菌剂的酸碱度(pH)耐受范围的不同，以及两者的协同作用克服单一菌种对进水pH要求苛刻的不足，提高接种微生物对废水的初始pH耐受范围，降低预处理费用，同时提高六价铬污染废水的治理效果。
Description
技术领域
本发明涉及一种处理重金属铬污染的方法，具体涉及一种利用复合菌种协同作用处理六价铬污染的方法，属于环境生物工程技术领域。
背景技术
铬被广泛应用于电镀、印染、制革、冶金等行业，含铬废水和铬渣的处理不当造成的污染越来越严重，铬在自然界主要以三价铬和六价铬的形态存在，三价铬不易溶于水，与土壤等介质的结合力强，流动性差，毒性较小，而六价铬迁移性强，具有较高的生物毒性，能引起畸变和癌症，损伤内脏器官，是对人体有较大危害的工业污染物。
目前治理含铬废水的方法主要有化学还原法、化学沉淀法、电化学沉淀法、萃取、反渗透、电渗析、液膜法等物理化学方法以及生物絮凝法、生物还原法、生物吸附法等生物学方法。物理化学方法存在有投资较大、运行维护成本较高、处理后的水质很难达到回用标准并且存在二次污染的可能；而生物法处理铬污染废水主要是通过生物还原和生物吸附作用，所具有的投资少，运行费用低，原料廉价，除铬效果好，无二次污染等优点，使该法具有广阔的发展前景。生物还原类型可分为：1.微生物以Cr6+作为呼吸链的最终电子受体被还原；2.微生物体内代谢过程中产生的可溶性酶将六价铬还原成三价铬；3.微生物代谢过程中产生的还原性次级代谢产物还原六价铬。生物吸附是利用微生物的细胞壁、细胞膜等结构的构成组分所含有的羧基、羟基、巯基等官能团的活性化学作用吸附六价铬，目前已经有大量的微生物被证实能够在好氧或者厌氧环境下能够还原六价铬，如Arthrobacter sp., Bacillus sp., Providencia sp., Microbacterium sp., Serratia sp. 等。但目前该方法的研究主要局限于单一菌株或菌群，由于纯培养自身的条件较为苛刻，菌种培养周期长、费用高，限制了其应用。
中国发明“一种用于铅铬污染修复的芽孢杆菌CP-1及其应用”，申请号201410807594.7；中国发明“铬污染土壤复合微生物修复剂及其制备方法和应用”，申请号201410681388.6；中国发明“一种碱性铬污染土壤的微生物修复方法”，申请号201210355258.4；中国发明“一株能生物修复重金属污染土壤的菌株及生物修复方法”，申请号201110050792.X，公开的都是采用单一菌株生物修复铬污染的方法。
因此通过筛选除铬菌株的驯化、分离、纯化、复合培养等技术手段，培养制备协同作用的复合菌剂，提高微生物对处理废水进水水质的耐受能力、降低处理成本，对生物处理法的实际应用有重要意义。
发明内容
本发明的目的是针对现有技术物理化学方法以及单一微生物治理六价铬污染的不足，提供一种利用复合菌种协同作用处理六价铬污染的方法。复合菌种从同一土壤环境中筛选得到，菌种之间无拮抗作用，利用地霉菌生长代谢的适宜pH偏酸，芽孢杆菌的适宜pH偏碱的特性，将两株菌种单独培养分别得到单一菌液，再将菌液（体积比1:1）接种于同一污染水体中混合培养用于处理六价铬污染，使混合菌能够处理酸性和碱性废水，扩大菌剂对进水酸碱度的适应范围，酸性进水时，芽孢杆菌优先大量繁殖，代谢产物积累，溶液pH降低，为地霉菌生长创造条件，地霉菌开始大量繁殖，生物量的增加使六价铬含量及有机物含量快速降低，水质得到净化，而碱性进水时适宜地霉菌生长，地霉菌短时间内大量增殖还原、吸附六价铬，消耗有机质，水质得到净化。
为实现上述目的，本发明采用的技术方案如下：
一种利用复合菌种协同作用处理六价铬污染的方法，驯化筛选步骤：
（1）取铬污染土壤样品10 g加入到100 ml牛肉膏蛋白胨液态培养基中，30℃培养24 h，摇床转速为120 rpm；
（2） 取步骤（1）培养液1 ml转移进100 ml无机盐液态培养基，培养基中含六价铬20 mg/L，六价铬以重铬酸钾配制，30℃培养24 h，摇床转速为120 rpm；
（3） 取步骤（2）培养液 1 ml转移至100 ml无机盐液态培养基，培养基中含六价铬30 mg/L，六价铬以重铬酸钾配制，30 ℃培养24 h，摇床转速为120 rpm，以此类推其余条件不变以10 mg/L的增量，逐步增加六价铬的含量，直至六价铬浓度达到50 mg/L，培养24 h后得到驯化菌液；
（4） 取驯化菌液1 ml转移至9 ml无菌生理盐水中，稀释10倍，菌液依次梯度稀释至菌液浓度为10-7；
（5）从10-6、10-7 g两个稀释组中分别取0.1 ml涂布在牛肉膏蛋白胨固体培养基上，培养箱中30℃培养24 h；
（6）从上述步骤中分别挑取单菌落，平板划线纯化，得到一株芽孢杆菌Bacillus 和一株地霉菌Geotrichum，斜面保存备用；
（7）将芽孢杆菌Bacillus（简称B1 ）和地霉菌Geotrichum（简称G1）单独培养，得到单一菌液，再将菌液按体积比1:1接种于同一污染水体中混合培养，用于处理六价铬污染，使混合菌能够处理酸性和碱性废水，扩大菌剂对进水酸碱度适应范围，酸性进水时，芽孢杆菌优先大量繁殖，代谢产物积累，溶液pH降低，为地霉菌生长创造条件，地霉菌开始大量繁殖，生物量的增加使六价铬含量及有机物含量快速降低，水质得到净化，而碱性进水时适宜地霉菌生长，地霉菌短时间内大量增殖还原、吸附六价铬，消耗有机质，水质得到净化。
所述牛肉膏蛋白胨液态培养基的成分为：牛肉膏3 g/L、蛋白胨10 g/L、氯化钠5 g/L、水1 L。
所述牛肉膏蛋白胨固态培养基为牛肉膏蛋白胨液态培养基中加入15~25 g琼脂。
所述无机盐液态培养基成分为0.5g/L K2HPO4，1g/L KH2PO4， 0.5g/L MgSO4，0.01g/L CaCl2，1g/L NH4Cl，0.01g/L FeSO4， 1.0g/L NaCl，0.003g/L MnSO4，5g/L葡萄糖。
所述依次梯度即每次取前一步骤的稀释液加入到9 ml无菌生理盐水中。
两株菌适宜生长pH：
挑取两株菌分别在100 ml无机盐培养基中培养24 h后各取1 ml菌液分别加入pH为1、2、3、4、5、6、7、8、9、10的150 ml无机盐培养基中，摇床转速为120 rpm， 30℃培养24 h后，取1 ml芽孢杆菌菌液稀释10倍，在600 nm测定吸光度值，计算菌液浓度，同时将地霉菌菌液滤膜过滤后，105℃烘干至恒重称重，结果如图1：可以看出地霉菌G1能够生长繁殖的pH范围为2~7，最适生长pH为4，碱性(pH>7)环境中无法生长繁殖；芽孢杆菌B2的适宜生长pH范围为5~10，最适生长pH为8。
本发明的有益效果是：本发明提供的复合菌剂处理方法能在较宽pH范围内100%去除废水中的六价铬污染，并能利用废水中的有机质作为碳源，去除六价铬的同时消耗有机质，净化水质；并且两株菌筛选自同一土壤环境中，经拮抗性实验证明无拮抗作用，亦可应用于六价铬污染土壤修复；本方法降低了菌剂对进水pH的要求，提高接种微生物对废水的初始pH耐受范围，提高了处理效率，降低了预处理成本，同时提高六价铬污染废水的治理效果，且复合菌剂简单易得。
单一菌种和复合菌种处理效果对比：
单一菌种处理六价铬污染：
挑取两株菌分别在含有40mg/L六价铬的100 ml无机盐培养基中培养，各取1 ml菌液分别加入pH为2、4、6、7、8、10的150 ml无机盐培养基（六价铬含量为40mg/L）中，摇床转速为120 rpm， 30℃培养，按一定时间间隔，分别取样5 ml，在9280×g离心力作用下离心15 min，取上清液，稀释10倍后按标准法（HJ687-2014）测定并计算六价铬残留量，结果如图2 (G1、B2)：从图中可以看出当pH大于、等于3或者小于、等于5时，地霉菌G1能够处理含六价铬的废水，并且在6天内100%去除六价铬；而当pH小于3或者pH大于5时G1菌对含六价铬的废水没有净化作用，微生物生长繁殖完全被抑制；而芽孢杆菌B2在pH6~10范围内能处理一定量的六价铬，但均不能100%处理，处理效率也较低；当pH低于6或者大于10时则生长繁殖完全被抑制，对六价铬含量没有影响。
复合菌种协同作用处理六价铬污染：
挑取两株菌分别在含40 mg/L六价铬的100 ml无机盐培养基中培养24 h后，各取1 ml菌液同时加入pH为2、4、6、7、8、10的150 ml无机盐培养基（六价铬含量为40mg/L）中，摇床转速为120 rpm， 30℃培养，每隔一定的时间取样5 ml，在9280×g离心力作用下离心15 min，取上清液，稀释10倍后按标准法（HJ687-2014）测定并计算六价铬残留量，结果如图3：由图可知进水pH在2~10的范围内均能处理六价铬，而且除pH=2外，其余酸碱度均能完全去除废水中的六价铬， pH小于5时，主要是地霉菌G1的生长繁殖使六价铬被去除，而当大于5时初期由芽孢杆菌生长代谢去除部分六价铬，同时代谢产物的积累使废水pH降低，为G1的生长繁殖创造条件，G1的快速繁殖加快六价铬的去除，提高六价铬的去除率，除pH=2外其余均能达到100%去除废水中的六价铬。
附图说明
图1 酸碱度对微生物生长繁殖的影响；
图2 酸碱度分别对两种微生物去除六价铬的影响 (G1、B2)；
图3 复合微生物不同酸碱度下对六价铬的去除。
具体实施方式
下面通过实例对本发明做进一步详细说明，这些实例仅用来说明本发明，并不限制本发明的范围。
实施例1
驯化筛选步骤：
（1）取铬污染土壤样品10 g加入到100 ml牛肉膏蛋白胨液态培养基中，30℃培养24 h，摇床转速为120 rpm；
（2） 取步骤（1）培养液1 ml转移进100 ml无机盐液态培养基，培养基中含六价铬20 mg/L，六价铬以重铬酸钾配制，30℃培养24 h，摇床转速为120 rpm；
（3） 取步骤（2）培养液 1 ml转移至100 ml无机盐液态培养基，培养基中含六价铬30 mg/L，六价铬以重铬酸钾配制，30℃培养24 h，摇床转速为120 rpm，以此类推其余条件不变以10 mg/L的增量，逐步增加六价铬的含量，直至六价铬浓度达到50 mg/L，培养24 h后得到驯化菌液；
（4） 取驯化菌液1 ml转移至9 ml无菌生理盐水中，稀释10倍，菌液依次梯度稀释至菌液浓度为10-7（即每次取前一步骤的稀释液加入到9 ml无菌生理盐水中）；
（5）从10-6、10-7 g两个稀释组中分别取0.1 ml涂布在牛肉膏蛋白胨固体培养基上，培养箱中30℃培养24 h；
（6）从上述步骤中分别挑取单菌落，平板划线纯化，得到一株芽孢杆菌Bacillus 和一株地霉菌Geotrichum，斜面保存备用。
所述牛肉膏蛋白胨液态培养基的成分为：牛肉膏3 g/L、蛋白胨10 g/L、氯化钠5 g/L、水1 L。
所述牛肉膏蛋白胨固态培养基为牛肉膏蛋白胨液态培养基中加入15~25 g琼脂。
所述无机盐液态培养基成分为0.5g/L K2HPO4，1g/L KH2PO4， 0.5g/L MgSO4，0.01g/L CaCl2，1g/L NH4Cl，0.01g/L FeSO4， 1.0g/L NaCl，0.003g/L MnSO4，5g/L葡萄糖。
挑取两株菌分别在含40 mg/L六价铬的100 ml无机盐培养基中培养24 h后，各取1 ml菌液同时加入pH为4的150 ml无机盐培养基（六价铬含量为40mg/L）中，摇床转速为120 rpm， 30℃培养，每隔一定的时间取样5 ml，在9280×g离心力作用下离心15 min，取上清液，稀释10倍后按标准法（HJ687-2014）测定并计算六价铬残留量，结果如图3：由图可知进水pH在4能处理六价铬，主要是地霉菌G1的生长繁殖使六价铬被去除。
实施例2
驯化筛选步骤：
（1）取铬污染土壤样品10 g加入到100 ml牛肉膏蛋白胨液态培养基中，30℃培养24 h，摇床转速为120 rpm；
（2） 取步骤（1）培养液1 ml转移进100 ml无机盐液态培养基，培养基中含六价铬20 mg/L，六价铬以重铬酸钾配制，30℃培养24 h，摇床转速为120 rpm；
（3） 取步骤（2）培养液 1 ml转移至100 ml无机盐液态培养基，培养基中含六价铬30 mg/L，六价铬以重铬酸钾配制，30℃培养24 h，摇床转速为120 rpm，以此类推其余条件不变以10 mg/L的增量，逐步增加六价铬的含量，直至六价铬浓度达到50 mg/L，培养24 h后得到驯化菌液；
（4） 取驯化菌液1 ml转移至9 ml无菌生理盐水中，稀释10倍，菌液依次梯度稀释至菌液浓度为10-7（即每次取前一步骤的稀释液加入到9 ml无菌生理盐水中）；
（5）从10-6、10-7 g两个稀释组中分别取0.1 ml涂布在牛肉膏蛋白胨固体培养基上，培养箱中30℃培养24 h；
（6）从上述步骤中分别挑取单菌落，平板划线纯化，得到一株芽孢杆菌Bacillus 和一株地霉菌Geotrichum，斜面保存备用。
所述牛肉膏蛋白胨液态培养基的成分为：牛肉膏3 g/L、蛋白胨10 g/L、氯化钠5 g/L、水1 L。
所述牛肉膏蛋白胨固态培养基为牛肉膏蛋白胨液态培养基中加入15~25 g琼脂。
所述无机盐液态培养基成分为0.5g/L K2HPO4，1g/L KH2PO4， 0.5g/L MgSO4，0.01g/L CaCl2，1g/L NH4Cl，0.01g/L FeSO4， 1.0g/L NaCl，0.003g/L MnSO4，5g/L葡萄糖。
挑取两株菌分别在含40 mg/L六价铬的100 ml无机盐培养基中培养24 h后，各取1 ml菌液同时加入pH为10的150 ml无机盐培养基（六价铬含量为40mg/L）中，摇床转速为120 rpm， 30℃培养，每隔一定的时间取样5 ml，在9280×g离心力作用下离心15 min，取上清液，稀释10倍后按标准法（HJ687-2014）测定并计算六价铬残留量，结果如图3：由图可知进水pH在10能处理六价铬，初期由芽孢杆菌生长代谢去除部分六价铬，同时代谢产物的积累使废水pH降低，为G1的生长繁殖创造条件，G1的快速繁殖加快六价铬的去除，提高六价铬的去除率，达到100%去除废水中的六价铬。
实施例3
驯化筛选步骤：
（1）取铬污染土壤样品10 g加入到100 ml牛肉膏蛋白胨液态培养基中，30℃培养24 h，摇床转速为120 rpm；
（2） 取步骤（1）培养液1 ml转移进100 ml无机盐液态培养基，培养基中含六价铬20 mg/L，六价铬以重铬酸钾配制，30℃培养24 h，摇床转速为120 rpm；
（3） 取步骤（2）培养液 1 ml转移至100 ml无机盐液态培养基，培养基中含六价铬30 mg/L，六价铬以重铬酸钾配制，30℃培养24 h，摇床转速为120 rpm，以此类推其余条件不变以10 mg/L的增量，逐步增加六价铬的含量，直至六价铬浓度达到50 mg/L，培养24 h后得到驯化菌液；
（4） 取驯化菌液1 ml转移至9 ml无菌生理盐水中，稀释10倍，菌液依次梯度稀释至菌液浓度为10-7（即每次取前一步骤的稀释液加入到9 ml无菌生理盐水中）；
（5）从10-6、10-7 g两个稀释组中分别取0.1 ml涂布在牛肉膏蛋白胨固体培养基上，培养箱中30℃培养24 h；
（6）从上述步骤中分别挑取单菌落，平板划线纯化，得到一株芽孢杆菌Bacillus 和一株地霉菌Geotrichum，斜面保存备用。
所述牛肉膏蛋白胨液态培养基的成分为：牛肉膏3 g/L、蛋白胨10 g/L、氯化钠5 g/L、水1 L。
所述牛肉膏蛋白胨固态培养基为牛肉膏蛋白胨液态培养基中加入15~25 g琼脂。
所述无机盐液态培养基成分为0.5g/L K2HPO4，1g/L KH2PO4， 0.5g/L MgSO4，0.01g/L CaCl2，1g/L NH4Cl，0.01g/L FeSO4， 1.0g/L NaCl，0.003g/L MnSO4，5g/L葡萄糖。
挑取两株菌分别在含有40mg/L六价铬的100 ml无机盐培养基中培养，各取1 ml菌液分别加入pH为4的150 ml无机盐培养基（六价铬含量为40mg/L）中，摇床转速为120 rpm， 30℃培养，按一定时间间隔，分别取样5 ml，在9280×g离心力作用下离心15 min，取上清液，稀释10倍后按标准法（HJ687-2014）测定并计算六价铬残留量，结果如图2 (G1、B2)：从图中可以看出当pH为4时，地霉菌G1能够处理含六价铬的废水，并且在6天内100%去除六价铬；而芽孢杆菌B2在pH4时则生长繁殖完全被抑制，对六价铬含量没有影响。
实施例4
驯化筛选步骤：
（1）取铬污染土壤样品10 g加入到100 ml牛肉膏蛋白胨液态培养基中，30℃培养24 h，摇床转速为120 rpm；
（2） 取步骤（1）培养液1 ml转移进100 ml无机盐液态培养基，培养基中含六价铬20 mg/L，六价铬以重铬酸钾配制，30℃培养24 h，摇床转速为120 rpm；
（3） 取步骤（2）培养液 1 ml转移至100 ml无机盐液态培养基，培养基中含六价铬30 mg/L，六价铬以重铬酸钾配制，30℃培养24 h，摇床转速为120 rpm，以此类推其余条件不变以10 mg/L的增量，逐步增加六价铬的含量，直至六价铬浓度达到50 mg/L，培养24 h后得到驯化菌液；
（4） 取驯化菌液1 ml转移至9 ml无菌生理盐水中，稀释10倍，菌液依次梯度稀释至菌液浓度为10-7（即每次取前一步骤的稀释液加入到9 ml无菌生理盐水中）；
（5）从10-6、10-7 g两个稀释组中分别取0.1 ml涂布在牛肉膏蛋白胨固体培养基上，培养箱中30℃培养24 h；
（6）从上述步骤中分别挑取单菌落，平板划线纯化，得到一株芽孢杆菌Bacillus 和一株地霉菌Geotrichum，斜面保存备用。
所述牛肉膏蛋白胨液态培养基的成分为：牛肉膏3 g/L、蛋白胨10 g/L、氯化钠5 g/L、水1 L。
所述牛肉膏蛋白胨固态培养基为牛肉膏蛋白胨液态培养基中加入15~25 g琼脂。
所述无机盐液态培养基成分为0.5g/L K2HPO4，1g/L KH2PO4， 0.5g/L MgSO4，0.01g/L CaCl2，1g/L NH4Cl，0.01g/L FeSO4， 1.0g/L NaCl，0.003g/L MnSO4，5g/L葡萄糖。
挑取两株菌分别在含40 mg/L六价铬的100 ml无机盐培养基中培养24 h后，各取1 ml菌液同时加入pH为6的150 ml无机盐培养基（六价铬含量为40mg/L）中，摇床转速为120 rpm， 30℃培养，每隔一定的时间取样5 ml，在9280×g离心力作用下离心15 min，取上清液，稀释10倍后按标准法（HJ687-2014）测定并计算六价铬残留量，结果如图3：由图可知进水pH在6时能处理六价铬，初期由芽孢杆菌生长代谢去除部分六价铬，同时代谢产物的积累使废水pH降低，为G1的生长繁殖创造条件，G1的快速繁殖加快六价铬的去除，提高六价铬的去除率，达到100%去除废水中的六价铬。
实施例5
驯化筛选步骤：
（1）取铬污染土壤样品10 g加入到100 ml牛肉膏蛋白胨液态培养基中，30℃培养24 h，摇床转速为120 rpm；
（2） 取步骤（1）培养液1 ml转移进100 ml无机盐液态培养基，培养基中含六价铬20 mg/L，六价铬以重铬酸钾配制，30℃培养24 h，摇床转速为120 rpm；
（3） 取步骤（2）培养液 1 ml转移至100 ml无机盐液态培养基，培养基中含六价铬30 mg/L，六价铬以重铬酸钾配制，30℃培养24 h，摇床转速为120 rpm，以此类推其余条件不变以10 mg/L的增量，逐步增加六价铬的含量，直至六价铬浓度达到50 mg/L，培养24 h后得到驯化菌液；
（4） 取驯化菌液1 ml转移至9 ml无菌生理盐水中，稀释10倍，菌液依次梯度稀释至菌液浓度为10-7（即每次取前一步骤的稀释液加入到9 ml无菌生理盐水中）；
（5）从10-6、10-7 g两个稀释组中分别取0.1 ml涂布在牛肉膏蛋白胨固体培养基上，培养箱中30℃培养24 h；
（6）从上述步骤中分别挑取单菌落，平板划线纯化，得到一株芽孢杆菌Bacillus 和一株地霉菌Geotrichum，斜面保存备用。
所述牛肉膏蛋白胨液态培养基的成分为：牛肉膏3 g/L、蛋白胨10 g/L、氯化钠5 g/L、水1 L。
所述牛肉膏蛋白胨固态培养基为牛肉膏蛋白胨液态培养基中加入15~25 g琼脂。
所述无机盐液态培养基成分为0.5g/L K2HPO4，1g/L KH2PO4， 0.5g/L MgSO4，0.01g/L CaCl2，1g/L NH4Cl，0.01g/L FeSO4， 1.0g/L NaCl，0.003g/L MnSO4，5g/L葡萄糖。
所述依次梯度即每次取前一步骤的稀释液加入到9 ml无菌生理盐水中。
挑取两株菌分别在含40 mg/L六价铬的100 ml无机盐培养基中培养24 h后，各取1 ml菌液同时加入pH为8的150 ml无机盐培养基（六价铬含量为40mg/L）中，摇床转速为120 rpm， 30℃培养，每隔一定的时间取样5 ml，在9280×g离心力作用下离心15 min，取上清液，稀释10倍后按标准法（HJ687-2014）测定并计算六价铬残留量，结果如图3：由图可知进水pH在8时能处理六价铬，初期由芽孢杆菌生长代谢去除部分六价铬，同时代谢产物的积累使废水pH降低，为G1的生长繁殖创造条件，G1的快速繁殖加快六价铬的去除，提高六价铬的去除率，达到100%去除废水中的六价铬。
Claims (6)
1.一种利用复合菌种协同作用处理六价铬污染的方法，其特征在于：包括如下步骤：
（1）取铬污染土壤样品10 g加入到100 ml牛肉膏蛋白胨液态培养基中，30℃培养24 h，摇床转速为120 rpm；
（2） 取步骤（1）培养液1 ml转移进100 ml无机盐液态培养基，培养基中含六价铬20 mg/L，六价铬以重铬酸钾配制，30℃培养24 h，摇床转速为120 rpm；
（3） 取步骤（2）培养液 1 ml转移至100 ml无机盐液态培养基，培养基中含六价铬30 mg/L，六价铬以重铬酸钾配制，30℃培养24 h，摇床转速为120 rpm，以此类推其余条件不变以10 mg/L的增量，逐步增加六价铬的含量，直至六价铬浓度达到50 mg/L，培养24 h后得到驯化菌液；
（4） 取驯化菌液1 ml转移至9 ml无菌生理盐水中，稀释10倍，菌液依次梯度稀释至菌液浓度为10-7；
（5）从10-6、10-7 g两个稀释组中分别取0.1 ml涂布在牛肉膏蛋白胨固体培养基上，培养箱中30℃培养24 h；
（6）从上述步骤中分别挑取单菌落，平板划线纯化，得到一株芽孢杆菌Bacillus 和一株地霉菌Geotrichum，斜面保存备用；
（7）将芽孢杆菌Bacillus 和地霉菌Geotrichum单独培养，得到单一菌液，再将菌液按体积比1:1接种于同一污染水体中混合培养，用于处理六价铬污染，使混合菌能够处理酸性和碱性废水，扩大菌剂对进水酸碱度适应范围，酸性进水时，芽孢杆菌优先大量繁殖，代谢产物积累，溶液pH降低，为地霉菌生长创造条件，地霉菌开始大量繁殖，生物量的增加使六价铬含量及有机物含量快速降低，水质得到净化，而碱性进水时适宜地霉菌生长，地霉菌短时间内大量增殖还原、吸附六价铬，消耗有机质，水质得到净化。
2. 根据权利要求1所述一种利用复合菌种协同作用处理六价铬污染的方法，其特征在于：所述芽孢杆菌Bacillus 和地霉菌Geotrichum单独培养包括如下步骤：挑取制备好的芽孢杆菌Bacillus 和地霉菌Geotrichum分别在含有40mg/L六价铬的100 ml无机盐培养基中培养，各取1 ml菌液同时加入pH为2、4、6、7、8、10的150 ml无机盐培养基中，其中六价铬含量为40mg/L，摇床转速为120 rpm， 温度为30℃培养，每隔一定的时间取样5 ml，在9280×g离心力作用下离心15 min，取上清液，稀释10倍后按标准法HJ687-2014测定并计算六价铬残留量。
3. 根据权利要求1所述一种利用复合菌种协同作用处理六价铬污染的方法，其特征在于：步骤（1）所述牛肉膏蛋白胨液态培养基的成分为：牛肉膏3 g/L、蛋白胨10 g/L、氯化钠5 g/L、水1 L。
4.根据权利要求1所述一种利用复合菌种协同作用处理六价铬污染的方法，其特征在于：步骤（2）和（3）所述无机盐液态培养基成分为0.5g/L K2HPO4，1g/L KH2PO4， 0.5g/L MgSO4，0.01g/L CaCl2，1g/L NH4Cl，0.01g/L FeSO4， 1.0g/L NaCl，0.003g/L MnSO4，5g/L葡萄糖。
5.根据权利要求1所述一种利用复合菌种协同作用处理六价铬污染的方法，其特征在于：步骤（5）所述牛肉膏蛋白胨固态培养基为牛肉膏蛋白胨液态培养基中加入15~25 g琼脂。
6.根据权利要求1所述一种利用复合菌种协同作用处理六价铬污染的方法，其特征在于：步骤（4）所述依次梯度即每次取前一步骤的稀释液加入到9 ml无菌生理盐水中。
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| CN201510279005.7A CN104845928A (zh) | 2015-05-28 | 2015-05-28 | 一种利用复合菌种协同作用处理六价铬污染的方法 |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| CN201510279005.7A CN104845928A (zh) | 2015-05-28 | 2015-05-28 | 一种利用复合菌种协同作用处理六价铬污染的方法 |
Publications (1)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| CN104845928A true CN104845928A (zh) | 2015-08-19 |
Family
ID=53845918
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| CN201510279005.7A Pending CN104845928A (zh) | 2015-05-28 | 2015-05-28 | 一种利用复合菌种协同作用处理六价铬污染的方法 |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| CN (1) | CN104845928A (zh) |
Cited By (8)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN106277586A (zh) * | 2016-08-24 | 2017-01-04 | 宁波枫叶杰科生物技术有限公司 | 一种快速治理水体铬污染并回收铬元素的微生物方法 |
| CN108441449A (zh) * | 2018-04-04 | 2018-08-24 | 中南民族大学 | 一种自主驯化的菌株y2及其应用 |
| CN109626591A (zh) * | 2018-12-06 | 2019-04-16 | 北京大学 | 利用微生物与赤铁矿在光照条件下协同还原六价铬的方法 |
| CN110143673A (zh) * | 2019-05-24 | 2019-08-20 | 中国地质大学（北京） | 一种铁矿石支持的微生物固定六价铬的方法 |
| CN111320286A (zh) * | 2018-12-14 | 2020-06-23 | 中国科学院天津工业生物技术研究所 | 一种利用电子载体快速去除六价铬污染物的方法 |
| CN115094005A (zh) * | 2022-07-06 | 2022-09-23 | 四川大学 | 枯草芽孢杆菌、生物材料及在六价铬污染治理中的应用 |
| CN116751594A (zh) * | 2023-05-29 | 2023-09-15 | 浙江省农业科学院 | 一种基于植物-微生物根际互作机制的铬污染土壤修复剂及其制备方法与应用 |
| CN119707127A (zh) * | 2024-12-20 | 2025-03-28 | 江南大学 | 一种肝素钠废水的厌氧处理方法 |
Citations (4)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN102676423A (zh) * | 2012-03-20 | 2012-09-19 | 河南省农业科学院 | 还原铬离子苏云金芽孢杆菌yb-03及其培养方法与应用 |
| CN103395893A (zh) * | 2013-07-29 | 2013-11-20 | 中国地质大学（武汉） | 赖氨酸芽孢杆菌Lysinibacillus sp Cr-6的应用 |
| CN103911331A (zh) * | 2014-04-04 | 2014-07-09 | 河南师范大学 | 一种用于修复麦田重金属铬污染土壤的复合菌剂 |
| CN104498404A (zh) * | 2014-12-23 | 2015-04-08 | 河南省科学院生物研究所有限责任公司 | 一种用于铅铬污染修复的芽孢杆菌cp-1及其应用 |
-
2015
- 2015-05-28 CN CN201510279005.7A patent/CN104845928A/zh active Pending
Patent Citations (4)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN102676423A (zh) * | 2012-03-20 | 2012-09-19 | 河南省农业科学院 | 还原铬离子苏云金芽孢杆菌yb-03及其培养方法与应用 |
| CN103395893A (zh) * | 2013-07-29 | 2013-11-20 | 中国地质大学（武汉） | 赖氨酸芽孢杆菌Lysinibacillus sp Cr-6的应用 |
| CN103911331A (zh) * | 2014-04-04 | 2014-07-09 | 河南师范大学 | 一种用于修复麦田重金属铬污染土壤的复合菌剂 |
| CN104498404A (zh) * | 2014-12-23 | 2015-04-08 | 河南省科学院生物研究所有限责任公司 | 一种用于铅铬污染修复的芽孢杆菌cp-1及其应用 |
Non-Patent Citations (5)
| Title |
|---|
| MAOMAO QU, ET AL.: "Bioremediation of hexavalent chromium contaminated soil by a bioleaching system with weak magnetic fields", 《INTERNATIONAL BIODETERIORATION & BIODEGRADATION》 * |
| 姜华,等: "抗重金属霉菌的筛选鉴定及其特性研究", 《辽宁师范大学学报(自然科学版)》 * |
| 许燕滨, 等: "生物除铬(VI)效果及机理探讨", 《水处理技术》 * |
| 许燕滨,等: "特定污泥对铬(Ⅵ)的吸附容量研究", 《水资源保护》 * |
| 赵欣欣,等: "Bacillus cereus Cr2 产NiR 酶能力及其与除Cr( Ⅵ) 效率的相关性", 《生物技术》 * |
Cited By (10)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN106277586A (zh) * | 2016-08-24 | 2017-01-04 | 宁波枫叶杰科生物技术有限公司 | 一种快速治理水体铬污染并回收铬元素的微生物方法 |
| CN108441449A (zh) * | 2018-04-04 | 2018-08-24 | 中南民族大学 | 一种自主驯化的菌株y2及其应用 |
| CN109626591A (zh) * | 2018-12-06 | 2019-04-16 | 北京大学 | 利用微生物与赤铁矿在光照条件下协同还原六价铬的方法 |
| CN109626591B (zh) * | 2018-12-06 | 2020-07-28 | 北京大学 | 利用微生物与赤铁矿在光照条件下协同还原六价铬的方法 |
| CN111320286A (zh) * | 2018-12-14 | 2020-06-23 | 中国科学院天津工业生物技术研究所 | 一种利用电子载体快速去除六价铬污染物的方法 |
| CN111320286B (zh) * | 2018-12-14 | 2022-10-04 | 中国科学院天津工业生物技术研究所 | 一种利用电子载体快速去除六价铬污染物的方法 |
| CN110143673A (zh) * | 2019-05-24 | 2019-08-20 | 中国地质大学（北京） | 一种铁矿石支持的微生物固定六价铬的方法 |
| CN115094005A (zh) * | 2022-07-06 | 2022-09-23 | 四川大学 | 枯草芽孢杆菌、生物材料及在六价铬污染治理中的应用 |
| CN116751594A (zh) * | 2023-05-29 | 2023-09-15 | 浙江省农业科学院 | 一种基于植物-微生物根际互作机制的铬污染土壤修复剂及其制备方法与应用 |
| CN119707127A (zh) * | 2024-12-20 | 2025-03-28 | 江南大学 | 一种肝素钠废水的厌氧处理方法 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| CN104845928A (zh) | 一种利用复合菌种协同作用处理六价铬污染的方法 | |
| CN103756947B (zh) | 一种不动杆菌及其菌剂的制备方法 | |
| CN103540544B (zh) | 一株可降解吡啶的根瘤杆菌、选育方法及其应用 | |
| CN110157639A (zh) | 一种耐受高盐的反硝化菌及其菌剂的制备方法与应用 | |
| CN102827787A (zh) | 一株反硝化聚磷菌蜡样芽孢杆菌H-hrb01及筛选方法和应用 | |
| CN119040157B (zh) | 一株耐盐耐酸热带假丝酵母菌及其在高盐强酸有机废水处理中的应用 | |
| CN113444661A (zh) | 一株新鞘氨醇杆菌及其在废水除磷中的应用 | |
| CN109706096B (zh) | 一株具有脱氮和高效絮凝能力的耐寒短杆菌及其应用 | |
| CN111996138B (zh) | 一种还原型菌株Ylb10及在还原Cr（VI）上的应用 | |
| CN114045238A (zh) | 高效降解二甲基乙酰胺的赤红球菌hjm-8及应用 | |
| CN108118008A (zh) | 高效耐盐的微生物菌剂及其制备方法和应用 | |
| CN110468078B (zh) | 一株莱茵海默氏菌hnad-02及其在废水脱氮中的应用 | |
| CN108977370B (zh) | 一株降解苯酚类化合物的酵母菌及其应用 | |
| CN113249273B (zh) | 一株耐盐枯草芽孢杆菌及其在高盐氨氮废水处理中的应用 | |
| CN107487868B (zh) | 一种纳米氧化铜与细菌协同去除水中六价铬的方法 | |
| CN106367364B (zh) | 一种高效去除镉污染的嗜碱贪铜菌、及其菌剂生产方法和应用方法 | |
| CN104694435B (zh) | 一株具有三氮唑降解功能的申氏杆菌及其应用 | |
| CN101811780B (zh) | 耐盐净污菌剂的制备方法及其用途 | |
| CN115094013B (zh) | 一株嗜根寡养单胞菌、菌剂及其在废水处理中的应用 | |
| CN117625467A (zh) | 一种二甲基亚砜高效降解菌剂、制备及其应用 | |
| CN114657089B (zh) | 一种铬还原杆菌及其用于修复铬污染土壤的方法 | |
| CN101054241A (zh) | 一株多食黄杆菌在低温污水处理中的应用 | |
| CN117645957A (zh) | 降解磺胺类抗生素的斯氏假单胞菌菌株及其应用 | |
| CN117660242A (zh) | 一种降解磺胺类抗生素的苏云金芽孢杆菌菌株及其应用 | |
| CN104805038A (zh) | 一种丙烯酸树脂降解菌及其筛选富集方法 |
Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| C06 | Publication | ||
| PB01 | Publication | ||
| EXSB | Decision made by sipo to initiate substantive examination | ||
| SE01 | Entry into force of request for substantive examination | ||
| RJ01 | Rejection of invention patent application after publication |
Application publication date: 20150819 |
|
| RJ01 | Rejection of invention patent application after publication |