CN104803838B

CN104803838B - 一种剑叶耳草蒽醌类化合物及其制备方法

Info

Publication number: CN104803838B
Application number: CN201510242897.3A
Authority: CN
Inventors: 潘为高; 罗彭; 苏加乐; 庞宇舟
Original assignee: Guangxi University of Chinese Medicine
Current assignee: Guangxi University of Chinese Medicine
Priority date: 2015-05-13
Filing date: 2015-05-13
Publication date: 2016-08-17
Anticipated expiration: 2035-05-13
Also published as: CN104803838A

Abstract

本发明公开了一种剑叶耳草蒽醌类化合物及其制备方法，该化合物的结构式为：

Description

一种剑叶耳草蒽醌类化合物及其制备方法

技术领域

本发明属于药物化合物制备领域，特别涉及一种剑叶耳草蒽醌类化合物及其制备方法。

背景技术

剑叶耳草(Hedyotis caudatifolia Merr.et Metcalf)，为茜草科耳草属植物剑叶耳草的全草，别名少年红、长尾耳草、千年茶、产后茶、痨病草，是一种广西民间草药，有止咳化痰，健脾消积等功效，常用于治疗支气管哮喘、支气管炎、肺痨咯血、小儿疳积、跌打肿痛、外伤出血等。

剑叶耳草目前涉及到的研究主要有根、茎、叶显微结构的研究、挥发油成分的GC-MS分析和其提取物对肝脏的保护作用。民间常有老中医用于治疗乙型肝炎，效果显著。与其在民间广泛的使用相比，目前国内外对剑叶耳草的研究极少，对剑叶耳草化学成分的研究除挥发油成分以外几乎空白，尤其是对其有效成分的研究存在很多空白，这样的现状大大影响了剑叶耳草的合理推广及使用，因此，对剑叶耳草有效成分进行系统研究显得极为重要，不仅可以为阐明剑叶耳草药效作用机制提供物质基础，促进剑叶耳草资源的合理开发及利用，同时对推动剑叶耳草作为中医药走向规范化、国际化提供了物质依据，并对完善剑叶耳草的相关理论及推动中医药现代化有重要意义。

蒽醌类化合物具有广泛的生物活性，蒽醌类化合物大多具有一定的抗菌活性及致泻作用，某些蒽醌类成分还具有止血、抗肿瘤、抗骨质疏松、利尿等作用。

发明内容

本发明要解决的技术问题是提供一种剑叶耳草蒽醌类化合物及其制备方法，该蒽醌类化合物为首次发现的化合物，具有良好的药理生理活性，具有抗肿瘤、止血、抗菌、泻下、利尿作用，且从用药吸收方面极性适宜，进一步推进剑叶耳草的开发和利用。

为解决上述技术问题，本发明采用如下技术方案：

一种剑叶耳草蒽醌类化合物，结构式为：

所述的剑叶耳草蒽醌类化合物的制备方法，包括以下步骤：

(1)将剑叶耳草粉碎，置于溶剂中浸提，溶剂重量为剑叶耳草重量的4～12倍，溶剂为水、有机溶剂中的一种或两种混合物，有机溶剂为甲醇、乙醇、丙酮、乙腈、氯仿、丙酮、石油醚和乙酸乙酯中的一种或两种以上混合；将所得浸提液减压浓缩，回收溶剂至无醇味，得提取物，将所得浸提液减压浓缩，回收溶剂至无醇味，得提取物；

(2)将步骤(1)所得提取物加水稀释为浓度为0.02～1g/ml的水溶液，再用极性由小到大的溶剂石油醚、氯仿、乙酸乙酯、正丁醇依次萃取分别得到相应的萃取液，分别将萃取液减压浓缩，收集氯仿部位干燥浸膏；

(3)将步骤(2)所得氯仿部位干燥浸膏采用柱层析法进行分离纯化，获得所述剑叶耳草蒽醌类化合物；所述柱层析法的担体为硅胶、氧化铝、聚酰胺或十八烷基硅烷，洗脱液为体积比为100:1～5:1的氯仿/丙酮混合液或体积比为200:1～6:1的氯仿/甲醇混合液。

所述步骤(1)的浸提为：分别以体积浓度为95％的乙醇、体积浓度为80％的乙醇、体积浓度为60％的乙醇、体积浓度为40％的乙醇和水作为溶剂对剑叶耳草进行渗漉提取，剑叶耳草和每一溶剂的质量比均为1:8，合并提取液，将所得提取液减压浓缩，回收溶剂至无醇味，得提取物。

所述步骤(3)的柱层析法采用正相硅胶柱层析。

还包括将步骤(3)经正相硅胶柱层析获得的目标流份利用Sephadex LH-20、反相硅胶柱层析或高效液相色谱进行纯化，获得所述剑叶耳草蒽醌类化合物。

所述硅胶的粒度为200～300目。

所述步骤(3)还包括：将步骤(2)所得氯仿部位干燥浸膏进行柱色谱分离，然后使用氯仿/丙酮混合液梯度洗脱，氯仿/丙酮混合液中氯仿/丙酮的体积比依次为：100:1→80:1→50:1→20:1→10:1→5:1→2:1→1:1；收集的洗脱流份为氯仿/丙酮体积比为50:1的混合液洗脱下来的溶液，再经薄层色谱检测显色，合并相同流份，减压浓缩和干燥，得到暗绿色羽毛状结晶；再经硅胶柱层析分离，硅胶柱层析中采用体积比为5:1～1:2的氯仿/甲醇梯度洗脱，得到黄绿色羽毛状结晶，再经Sephadex LH-20柱色谱反复纯化，然后用体积比为1:1的氯仿/甲醇混合液洗脱，得到淡绿色羽毛状结晶，即为所述剑叶耳草蒽醌类化合物。

所述柱色谱的吸附剂用100～200目硅胶。

所述剑叶耳草采用剑叶耳草植株的全草。

与现有技术相比，本发明的有益效果为：

本发明剑叶耳草蒽醌类化合物为首次发现的化合物，丰富了现有化合物种类。该蒽醌类化合物具有良好的药理生理活性，具有抗肿瘤、止血、抗菌、泻下、利尿作用，且从用药吸收方面极性适宜，进一步推进剑叶耳草的开发和利用。

附图说明

图1为所述剑叶耳草蒽醌的质谱；

图2为所述剑叶耳草蒽醌的高分辨质谱；

图3为所述剑叶耳草蒽醌的400MHz ¹H-NMR谱；

图4为所述剑叶耳草蒽醌的600MHz ¹H-NMR谱；

图5为所述剑叶耳草蒽醌的100MHz ¹³C-NMR和DEPT谱；

图6为所述剑叶耳草蒽醌的150MHz ¹³C-NMR谱；

图7为所述剑叶耳草蒽醌的HSQC谱；

图8为所述剑叶耳草蒽醌的¹H-¹H COSY谱；

图9为所述剑叶耳草蒽醌的HMBC谱；

图10为化合物的结构式和关键相关关系。

具体实施方式

以下结合附图及实施例对本发明作进一步详细说明，但不构成对本发明权利保护范围的限制。

实施例1

(1)所用的剑叶耳草样品，采于广西金秀瑶族自治县。取剑叶耳草样品30kg，粉碎后分别以体积浓度分别为95％、80％、60％、40％的乙醇和水作为溶剂将剑叶耳草渗漉提取，剑叶耳草和每一溶剂的质量比均为1:8，合并提取液，合并提取液，减压浓缩，回收溶剂至无醇味，得总提取物。

(2)总提取物加水混悬至浓度为0.02～1g/ml，再依次用60～90℃石油醚、氯仿、乙酸乙酯、正丁醇进行萃取，分别减压浓缩回收溶剂，分别得到石油醚部位干燥浸膏、氯仿部位干燥浸膏、乙酸乙酯部位干燥浸膏和正丁醇部位干燥浸膏。

(3)将氯仿部位干燥浸膏用100～200目硅胶进行柱色谱分离，使用氯仿/丙酮混合液梯度洗脱，氯仿/丙酮混合液中氯仿/丙酮的体积比依次为：100:1→80:1→50:1→20:1→10:1→5:1→2:1→1:1；收集的洗脱流份为氯仿/丙酮体积比为50:1的混合液洗脱下来的溶液，经薄层色谱检测显色，合并相同流份，减压浓缩、干燥，得到暗绿色羽毛状结晶。

(4)暗绿色羽毛状结晶再经200～300目硅胶柱层析分离，硅胶柱层析中采用体积比为5:1～1:2的氯仿/甲醇梯度洗脱，得到黄绿色羽毛状结晶，再经Sephadex LH-20柱色谱反复纯化，然后用体积比为1:1的氯仿/甲醇混合液洗脱，得到淡绿色羽毛状结晶，即为所述剑叶耳草蒽醌类化合物。

实施例2：

(1)将剑叶耳草全草粉碎，置于溶剂中浸提，溶剂重量为剑叶耳草重量的4～12倍，溶剂为甲醇；将所得浸提液减压浓缩，回收溶剂至无醇味，得提取物，取少量提取物完全干燥，获得提取物干膏，并称重，根据所得的提取物干膏质量计算总的提取物净重；

(2)将步骤(1)所得提取物按实际净重加水稀释至浓度为0.02～1g/ml的水溶液，再用极性由小到大的溶剂石油醚、氯仿、乙酸乙酯、正丁醇依次萃取分别得到相应的萃取液，分别将萃取液减压浓缩，收集氯仿部位干燥浸膏；

(3)将步骤(2)所得氯仿部位干燥浸膏采用正相硅胶柱层析进行分离纯化，硅胶的粒度为200～300目，获得所述剑叶耳草蒽醌类化合物；所述正相硅胶柱层析的洗脱液为体积比为100:1～5:1的氯仿/丙酮混合液或体积比为200:1～6:1的氯仿/甲醇混合液。

剑叶耳草蒽醌类化合物的结构鉴定：

所述的化合物为淡绿色羽毛状结晶，易溶于氯仿。TLC检识，三种不同展开系统中展开，碘蒸气显色，显示黄色单斑，结果如下：体积比1:1的石油醚-乙酸乙酯，R_f＝0.28；体积比5:1的氯仿-丙酮，R_f＝0.53；体积比10:1的氯仿-甲醇，R_f＝0.64。

质谱如图1所示，高分辨质谱如图2所示，EI-MS m/z(％):314(M⁺,100),299,281,253,239,225；HR-EI-MS m/z:314.0791[M]⁺,高分辨质谱计算分子式为C₁₇H₁₄O₆.同时由¹³C-NMR及DEPT谱数据，也可推测分子式为C₁₇H₁₄O₆，不饱和度为8。

¹H-NMR和¹³C-NMR谱用TMS做内标，溶剂为CDCl₃。化合物的¹H-NMR(400MHz)如图3所示，¹H-NMR(600MHz)如图4所示，¹³C-NMR和DEPT(100MHz)如图5所示，¹³C-NMR(150MHz)如图6所示，HSQC如图7所示，¹H-¹H COSY如图8所示，HMBC如图9所示。

通过图1-9解析得出如图10所示的化合物结构式和关键相关关系。

其¹H-NMR、¹³C-NMR数据归属及二维谱相关关系如表1。

表1剑叶耳草蒽醌类化合物的一维和二维核磁共振谱(溶剂CDCl₃，内标TMS，600/150MHz及400/100MHz)

注：^*序号见图10所示；^**仅DEPT为100MHz，其他均为600/150MHz；***通过HSQC谱确定¹H信号与¹³C信号的对应关系；^****括号中表示二键相关关系。

Claims

1.一种剑叶耳草蒽醌类化合物的制备方法，所述剑叶耳草蒽醌类化合物结构式为：

其特征在于，制备方法包括以下步骤：

(1) 将剑叶耳草粉碎，置于溶剂中浸提，溶剂重量为剑叶耳草重量的4~12倍，溶剂为有机溶剂或有机溶剂和水的混合物，有机溶剂为甲醇或乙醇；将所得浸提液减压浓缩，回收溶剂至无醇味，得提取物；

(2) 将步骤（1）所得提取物加水稀释为浓度为0.02~1 g/ml的水溶液，再用极性由小到大的溶剂石油醚、氯仿、乙酸乙酯、正丁醇依次萃取分别得到相应的萃取液，分别将萃取液减压浓缩，收集氯仿部位干燥浸膏；

(3) 将步骤（2）所得氯仿部位干燥浸膏采用柱层析法进行分离纯化，获得所述剑叶耳草蒽醌类化合物；所述柱层析法的担体为硅胶、氧化铝、聚酰胺或十八烷基硅烷，洗脱液为体积比为100:1~5:1的氯仿／丙酮混合液或体积比为200:1~6:1的氯仿／甲醇混合液。

2.如权利要求1所述的剑叶耳草蒽醌类化合物的制备方法，其特征在于，所述步骤（1）的浸提为：分别以体积浓度为95%的乙醇、体积浓度为80%的乙醇、体积浓度为60%的乙醇、体积浓度为40%的乙醇和水作为溶剂对剑叶耳草进行渗漉提取，剑叶耳草和每一溶剂的质量比均为1:8，合并提取液，将所得提取液减压浓缩，回收溶剂至无醇味，得提取物。

3.如权利要求1所述的剑叶耳草蒽醌类化合物的制备方法，其特征在于，所述步骤（3）的柱层析法采用正相硅胶柱层析。

4.如权利要求3 所述的剑叶耳草蒽醌类化合物的制备方法，其特征在于，还包括将步骤（3）经正相硅胶柱层析获得的目标流份利用Sephadex LH-20、反相硅胶柱层析或高效液相色谱进行纯化，获得所述剑叶耳草蒽醌类化合物。

5.根据权利要求1 至4之一所述的剑叶耳草蒽醌类化合物的制备方法，其特征在于，所述硅胶的粒度为200~300目。

6.如权利要求1所述的剑叶耳草蒽醌类化合物的制备方法，其特征在于，所述步骤（3）还包括：将步骤（2）所得氯仿部位干燥浸膏进行柱色谱分离，然后使用氯仿／丙酮混合液梯度洗脱，氯仿／丙酮混合液中氯仿／丙酮的体积比依次为：100:1→80:1→50:1→20:1→10:1→5:1→2:1→1:1；收集的洗脱流份为氯仿／丙酮体积比为50:1的混合液洗脱下来的溶液，再经薄层色谱检测显色，合并相同流份，减压浓缩和干燥，得到暗绿色羽毛状结晶；再经硅胶柱层析分离，硅胶柱层析中采用体积比为5:1~1:2的氯仿／甲醇梯度洗脱，得到黄绿色羽毛状结晶，再经Sephadex LH-20柱色谱反复纯化，然后用体积比为1:1的氯仿／甲醇混合液洗脱，得到淡绿色羽毛状结晶，即为所述剑叶耳草蒽醌类化合物。

7.根据权利要求6所述的剑叶耳草蒽醌类化合物的制备方法，其特征在于，所述柱色谱的吸附剂用100~200目硅胶。

8.如权利要求1 所述的剑叶耳草蒽醌类化合物的制备方法，其特征在于，所述剑叶耳草采用剑叶耳草植株的全草。