CN104341499B - 抗麻疹与百白破四价卵黄抗体制剂的制备工艺 - Google Patents
抗麻疹与百白破四价卵黄抗体制剂的制备工艺 Download PDFInfo
- Publication number
- CN104341499B CN104341499B CN201410618386.2A CN201410618386A CN104341499B CN 104341499 B CN104341499 B CN 104341499B CN 201410618386 A CN201410618386 A CN 201410618386A CN 104341499 B CN104341499 B CN 104341499B
- Authority
- CN
- China
- Prior art keywords
- yolk
- yolk antibody
- measles
- vaccine
- igy
- Prior art date
- Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
- Expired - Fee Related
Links
- 210000002969 egg yolk Anatomy 0.000 title claims abstract description 52
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 title claims abstract description 29
- 201000005505 Measles Diseases 0.000 title claims abstract description 21
- 206010044684 Trismus Diseases 0.000 title abstract description 5
- 230000003053 immunization Effects 0.000 claims abstract description 25
- 238000002649 immunization Methods 0.000 claims abstract description 23
- 235000013601 eggs Nutrition 0.000 claims abstract description 16
- 238000000502 dialysis Methods 0.000 claims abstract description 11
- 241000287828 Gallus gallus Species 0.000 claims abstract description 10
- 239000007788 liquid Substances 0.000 claims abstract description 9
- 238000000034 method Methods 0.000 claims abstract description 9
- 229960005486 vaccine Drugs 0.000 claims abstract description 6
- 238000000926 separation method Methods 0.000 claims abstract description 5
- 229920001223 polyethylene glycol Polymers 0.000 claims abstract description 4
- 238000011081 inoculation Methods 0.000 claims abstract 3
- 102000002322 Egg Proteins Human genes 0.000 claims description 42
- 108010000912 Egg Proteins Proteins 0.000 claims description 42
- 210000003278 egg shell Anatomy 0.000 claims description 11
- 235000014103 egg white Nutrition 0.000 claims description 11
- 210000000969 egg white Anatomy 0.000 claims description 11
- QCVGEOXPDFCNHA-UHFFFAOYSA-N 5,5-dimethyl-2,4-dioxo-1,3-oxazolidine-3-carboxamide Chemical compound CC1(C)OC(=O)N(C(N)=O)C1=O QCVGEOXPDFCNHA-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 10
- 201000005702 Pertussis Diseases 0.000 claims description 10
- 238000002347 injection Methods 0.000 claims description 10
- 239000007924 injection Substances 0.000 claims description 10
- 239000006228 supernatant Substances 0.000 claims description 9
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N water Substances O XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 9
- 229940032024 DPT vaccine Drugs 0.000 claims description 6
- MTHSVFCYNBDYFN-UHFFFAOYSA-N diethylene glycol Chemical compound OCCOCCO MTHSVFCYNBDYFN-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 6
- 229940041323 measles vaccine Drugs 0.000 claims description 6
- 238000003756 stirring Methods 0.000 claims description 6
- 239000012153 distilled water Substances 0.000 claims description 5
- 239000000243 solution Substances 0.000 claims description 5
- 230000001954 sterilising effect Effects 0.000 claims description 5
- KCXVZYZYPLLWCC-UHFFFAOYSA-N EDTA Chemical compound OC(=O)CN(CC(O)=O)CCN(CC(O)=O)CC(O)=O KCXVZYZYPLLWCC-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 4
- 239000012528 membrane Substances 0.000 claims description 3
- 241000894006 Bacteria Species 0.000 claims description 2
- 239000008118 PEG 6000 Substances 0.000 claims description 2
- 229920002584 Polyethylene Glycol 6000 Polymers 0.000 claims description 2
- 238000004659 sterilization and disinfection Methods 0.000 claims description 2
- UIIMBOGNXHQVGW-UHFFFAOYSA-M Sodium bicarbonate Chemical compound [Na+].OC([O-])=O UIIMBOGNXHQVGW-UHFFFAOYSA-M 0.000 claims 2
- 239000003085 diluting agent Substances 0.000 claims 2
- 238000001556 precipitation Methods 0.000 claims 2
- 238000009835 boiling Methods 0.000 claims 1
- 238000004140 cleaning Methods 0.000 claims 1
- 239000004744 fabric Substances 0.000 claims 1
- 238000001914 filtration Methods 0.000 claims 1
- 230000003862 health status Effects 0.000 claims 1
- 239000000203 mixture Substances 0.000 claims 1
- 229940031348 multivalent vaccine Drugs 0.000 claims 1
- 229910000030 sodium bicarbonate Inorganic materials 0.000 claims 1
- 230000000694 effects Effects 0.000 abstract description 9
- 230000002265 prevention Effects 0.000 abstract description 5
- 239000003623 enhancer Substances 0.000 abstract description 2
- 231100000331 toxic Toxicity 0.000 abstract description 2
- 230000002588 toxic effect Effects 0.000 abstract description 2
- 239000002202 Polyethylene glycol Substances 0.000 abstract 2
- 239000003795 chemical substances by application Substances 0.000 abstract 1
- 230000036039 immunity Effects 0.000 abstract 1
- 235000021590 normal diet Nutrition 0.000 abstract 1
- 235000013345 egg yolk Nutrition 0.000 description 24
- 206010013023 diphtheria Diseases 0.000 description 11
- 206010043376 Tetanus Diseases 0.000 description 7
- 244000052616 bacterial pathogen Species 0.000 description 7
- 235000013330 chicken meat Nutrition 0.000 description 6
- 238000010790 dilution Methods 0.000 description 6
- 239000012895 dilution Substances 0.000 description 6
- 244000144977 poultry Species 0.000 description 5
- 235000013594 poultry meat Nutrition 0.000 description 5
- 206010011224 Cough Diseases 0.000 description 4
- 241000712079 Measles morbillivirus Species 0.000 description 4
- 230000001154 acute effect Effects 0.000 description 4
- 210000004027 cell Anatomy 0.000 description 4
- 230000034994 death Effects 0.000 description 4
- 231100000517 death Toxicity 0.000 description 4
- 201000010099 disease Diseases 0.000 description 4
- 208000037265 diseases, disorders, signs and symptoms Diseases 0.000 description 4
- 230000002163 immunogen Effects 0.000 description 4
- 239000002244 precipitate Substances 0.000 description 4
- 239000012154 double-distilled water Substances 0.000 description 3
- 230000036541 health Effects 0.000 description 3
- 208000015181 infectious disease Diseases 0.000 description 3
- 208000035473 Communicable disease Diseases 0.000 description 2
- LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N Ethanol Chemical compound CCO LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 102000057297 Pepsin A Human genes 0.000 description 2
- 108090000284 Pepsin A Proteins 0.000 description 2
- 108090000631 Trypsin Proteins 0.000 description 2
- 102000004142 Trypsin Human genes 0.000 description 2
- 230000017531 blood circulation Effects 0.000 description 2
- 210000001669 bursa of fabricius Anatomy 0.000 description 2
- 230000008859 change Effects 0.000 description 2
- 230000006378 damage Effects 0.000 description 2
- 230000007423 decrease Effects 0.000 description 2
- 239000000385 dialysis solution Substances 0.000 description 2
- 239000012634 fragment Substances 0.000 description 2
- 208000014674 injury Diseases 0.000 description 2
- 210000003205 muscle Anatomy 0.000 description 2
- 230000008520 organization Effects 0.000 description 2
- 230000001314 paroxysmal effect Effects 0.000 description 2
- 230000001717 pathogenic effect Effects 0.000 description 2
- 229940111202 pepsin Drugs 0.000 description 2
- 108090000765 processed proteins & peptides Proteins 0.000 description 2
- 230000000241 respiratory effect Effects 0.000 description 2
- 238000010254 subcutaneous injection Methods 0.000 description 2
- 239000007929 subcutaneous injection Substances 0.000 description 2
- 208000024891 symptom Diseases 0.000 description 2
- 239000003053 toxin Substances 0.000 description 2
- 231100000765 toxin Toxicity 0.000 description 2
- 108700012359 toxins Proteins 0.000 description 2
- 239000012588 trypsin Substances 0.000 description 2
- 238000002255 vaccination Methods 0.000 description 2
- 108090000317 Chymotrypsin Proteins 0.000 description 1
- 208000037384 Clostridium Infections Diseases 0.000 description 1
- 241000186227 Corynebacterium diphtheriae Species 0.000 description 1
- 102000016607 Diphtheria Toxin Human genes 0.000 description 1
- 108010053187 Diphtheria Toxin Proteins 0.000 description 1
- 206010013952 Dysphonia Diseases 0.000 description 1
- 208000000059 Dyspnea Diseases 0.000 description 1
- 206010013975 Dyspnoeas Diseases 0.000 description 1
- 238000002965 ELISA Methods 0.000 description 1
- 208000010473 Hoarseness Diseases 0.000 description 1
- 206010020751 Hypersensitivity Diseases 0.000 description 1
- 238000002768 Kirby-Bauer method Methods 0.000 description 1
- 201000008197 Laryngitis Diseases 0.000 description 1
- 206010067125 Liver injury Diseases 0.000 description 1
- 208000007101 Muscle Cramp Diseases 0.000 description 1
- 208000002740 Muscle Rigidity Diseases 0.000 description 1
- 206010049816 Muscle tightness Diseases 0.000 description 1
- 208000009525 Myocarditis Diseases 0.000 description 1
- 206010033799 Paralysis Diseases 0.000 description 1
- 241000711504 Paramyxoviridae Species 0.000 description 1
- 206010035664 Pneumonia Diseases 0.000 description 1
- 208000005374 Poisoning Diseases 0.000 description 1
- 208000000474 Poliomyelitis Diseases 0.000 description 1
- 206010037660 Pyrexia Diseases 0.000 description 1
- 208000019802 Sexually transmitted disease Diseases 0.000 description 1
- 208000005392 Spasm Diseases 0.000 description 1
- 208000032942 Vaccine-Preventable disease Diseases 0.000 description 1
- 241000700647 Variola virus Species 0.000 description 1
- 208000027418 Wounds and injury Diseases 0.000 description 1
- 210000001015 abdomen Anatomy 0.000 description 1
- 239000002253 acid Substances 0.000 description 1
- 230000009471 action Effects 0.000 description 1
- 208000030961 allergic reaction Diseases 0.000 description 1
- 239000000427 antigen Substances 0.000 description 1
- 108091007433 antigens Proteins 0.000 description 1
- 102000036639 antigens Human genes 0.000 description 1
- 210000003719 b-lymphocyte Anatomy 0.000 description 1
- 230000009286 beneficial effect Effects 0.000 description 1
- 230000004071 biological effect Effects 0.000 description 1
- 210000004369 blood Anatomy 0.000 description 1
- 239000008280 blood Substances 0.000 description 1
- 210000002421 cell wall Anatomy 0.000 description 1
- 230000007969 cellular immunity Effects 0.000 description 1
- 229960002376 chymotrypsin Drugs 0.000 description 1
- 230000008602 contraction Effects 0.000 description 1
- 102000038379 digestive enzymes Human genes 0.000 description 1
- 108091007734 digestive enzymes Proteins 0.000 description 1
- 229960003983 diphtheria toxoid Drugs 0.000 description 1
- 239000003814 drug Substances 0.000 description 1
- 206010014599 encephalitis Diseases 0.000 description 1
- 230000002708 enhancing effect Effects 0.000 description 1
- 230000007515 enzymatic degradation Effects 0.000 description 1
- 230000003203 everyday effect Effects 0.000 description 1
- 238000000605 extraction Methods 0.000 description 1
- 230000008921 facial expression Effects 0.000 description 1
- 235000012041 food component Nutrition 0.000 description 1
- 210000001035 gastrointestinal tract Anatomy 0.000 description 1
- 238000010438 heat treatment Methods 0.000 description 1
- 231100000234 hepatic damage Toxicity 0.000 description 1
- 230000004727 humoral immunity Effects 0.000 description 1
- 230000036737 immune function Effects 0.000 description 1
- 210000000987 immune system Anatomy 0.000 description 1
- 238000011534 incubation Methods 0.000 description 1
- 230000003434 inspiratory effect Effects 0.000 description 1
- 230000000968 intestinal effect Effects 0.000 description 1
- 210000004347 intestinal mucosa Anatomy 0.000 description 1
- 210000000936 intestine Anatomy 0.000 description 1
- 230000008818 liver damage Effects 0.000 description 1
- 210000003784 masticatory muscle Anatomy 0.000 description 1
- 230000010534 mechanism of action Effects 0.000 description 1
- 210000004379 membrane Anatomy 0.000 description 1
- 210000004400 mucous membrane Anatomy 0.000 description 1
- 210000004237 neck muscle Anatomy 0.000 description 1
- 230000037311 normal skin Effects 0.000 description 1
- 208000015380 nutritional deficiency disease Diseases 0.000 description 1
- 206010030306 omphalitis Diseases 0.000 description 1
- 210000001672 ovary Anatomy 0.000 description 1
- 210000002741 palatine tonsil Anatomy 0.000 description 1
- 244000052769 pathogen Species 0.000 description 1
- 230000007918 pathogenicity Effects 0.000 description 1
- 229940066827 pertussis vaccine Drugs 0.000 description 1
- 210000003800 pharynx Anatomy 0.000 description 1
- 210000004180 plasmocyte Anatomy 0.000 description 1
- 231100000572 poisoning Toxicity 0.000 description 1
- 230000000607 poisoning effect Effects 0.000 description 1
- 102000004196 processed proteins & peptides Human genes 0.000 description 1
- 208000023504 respiratory system disease Diseases 0.000 description 1
- 208000013220 shortness of breath Diseases 0.000 description 1
- 206010041232 sneezing Diseases 0.000 description 1
- 238000005728 strengthening Methods 0.000 description 1
- 239000000126 substance Substances 0.000 description 1
- 230000009885 systemic effect Effects 0.000 description 1
- 206010043378 tetanus neonatorum Diseases 0.000 description 1
- 229960000814 tetanus toxoid Drugs 0.000 description 1
- 229940124597 therapeutic agent Drugs 0.000 description 1
- 210000001541 thymus gland Anatomy 0.000 description 1
- 210000001519 tissue Anatomy 0.000 description 1
- 230000008733 trauma Effects 0.000 description 1
Landscapes
- Medicines Containing Antibodies Or Antigens For Use As Internal Diagnostic Agents (AREA)
Abstract
抗麻疹与百白破四价卵黄抗体制剂的制备工艺，包括如下步骤：免疫接种疫苗鸡的选择‑免疫接种疫苗制备及剂量‑免疫程序‑卵黄分离方法与技巧‑卵黄抗体水溶性组分液（WSF）制备‑卵黄抗体分离提取‑卵黄抗体提取物无菌处理‑PEG溶液配制‑透析袋处理。本发明从鸡蛋中制备高纯度和高效价的百白破的特异性卵黄抗体IgY,鸡蛋作为正常的膳食成分其IgY是没有毒副作用的，提纯的IgY是现代理想的免疫增强剂和治疗剂，制备方便，安全可靠，可用于人群麻疹与百白破的预防和治疗，特别是儿童暴露下的紧急预防和治疗。
Description
技术领域
本发明涉及医药生物技术领域，特别是涉及一种抗麻疹与百白破四价卵黄抗体制剂的制备工艺。
背景技术
麻疹（measles）是由麻疹病毒引起一种严重危害儿童健康的急性呼吸道传染病，传染性极强，儿童是主要易感人群（尤多见于婴儿）。麻疹病毒（measles virus）属副粘病毒科，是麻疹的病原体，麻疹病毒主要通过喷嚏、咳嗽和说话等途径由飞沫传播。麻疹最常见并发症为肺炎，是麻疹死亡主要原因，还有喉炎、脑炎、肝损害等，特别当儿童营养不良时，常常引起并发症死亡，迄今为止麻疹仍是低龄儿童中疫苗可预防性传染病导致死亡的首要原因之一。包括我国在内的世界卫生组织西太平洋区域每年大约有3万名儿童死于麻疹。因此其危害在疫苗可预防疾病中仍占有重要地位。目前WHO已将麻疹定为继天花、脊髓灰质炎之后的第三个将被消除或消灭的疾病。
百白破疫苗是百日咳、白喉、破伤风混合疫苗的简称，它是由百日咳疫苗、精制白喉和破伤风类毒素按适量比例配制而成，用于预防百日咳、白喉、破伤风三种疾病。百日咳（bronchocephalitis）是小儿常见的高传染性急性呼吸道传染病，感染对象多为5 岁以下婴幼儿，其致病菌是百日咳杆菌，主要通过空气传播，人类是百日咳杆菌的唯一宿主。其主要的临床表现特征为阵发性痉挛性咳嗽，咳嗽末伴有特殊的吸气吼声，病程可达数周甚至3个月左右，故有百日咳之称。据据报道，每年全球有200万-4000万例百日咳病例，且约35万死亡病例，即使在一些免疫接种覆盖率很高的发达国家，近年来百日咳发病率也呈明显上升趋势。白喉（diphtheritis）白喉是由白喉杆菌所引起的一种急性呼吸道疾病，由白喉棒状杆菌产毒株感染引起，具有极强的传染性，为乙类传染病，多发生于秋冬或早春季节，15岁以下儿童发病率约占90%，其中1～5岁儿童发病率最高。其主要的临床表现以发热，气憋，声音嘶哑，犬吠样咳嗽，咽、扁桃体及其周围组织出现白色伪膜为特征，严重者可并发心肌炎和神经麻痹，全身中毒症状明显。自从实施白喉毒素的接种以来，白喉的发病率明显下降，但大龄的患者构成比偏多，所以加强对大龄者的预防接种是防止白喉再次流行的重要手段。破伤风（lockjaw）是由梭状芽胞杆菌感染引起的常和创伤相关的一种急性致命性疾病，典型症状是在肌紧张性收缩（肌强直、发硬）的基础上，阵发性强烈痉挛，通常最先受影响的肌群是咀嚼肌，随后顺序为面部表情肌、颈、背、腹、四肢肌，最后为膈肌，破伤风杆菌及其毒素不能侵入正常的皮肤和黏膜，一切开放性损伤，均有可能发生破伤风，另外还可能发生于不洁条件下分娩的产妇和新生儿。新生儿破伤风由脐带感染引起，病死率很高，虽然世界卫生组织积极推行了全球免疫计划，据估计全世界每年仍有近百万破伤风病例，数十万新生儿死于破伤风。
IgY及理化性质：禽类的免疫系统包括细胞免疫和体液免疫系统，分别受胸腺和法氏囊的控制。当机体受到外来抗原刺激后，法氏囊内的B细胞分化成为浆细胞，分泌特异性抗体进入血液循环，当血液流经卵巢时，特异性抗体(主要是IgG)在卵细胞中逐渐蓄积，形成卵黄抗体（yolk antibody, IgY），IgY的理化性质与哺乳动物的IgG相似。正常鸡IgY的分子量约为180KDa，由两条轻链(2L)和两条重链(2H)组成，分子量分别为60-70KDa和22-30KDa。其等电点约为5.2。 IgY与一般哺乳动物IgG相比，具有较强的耐热、耐酸、抗离子强度和一定的抗酶降解能力。 在低于75℃条件下，IgY具有良好的热稳定性。IgY制剂在4℃贮存5年或在室温贮存6个月其活性仍无明显变化或下降，65℃时可保持24h以上，70℃时加热90min后其活性才明显下降，60℃，30min条件下巴氏消毒不影响IgY，高于80℃，大部分IgY失去活性。 IgY对胃蛋白酶有较高的抵抗力，但对胰蛋白酶十分敏感。将胃蛋白酶和IgY在pH2.0温育1h后，几乎所有活性丧失，但在pH4.0时1h后可保持91%的活性，甚至温育10h后仍有63%活性。IgY分别与胰蛋白酶和胰凝乳酶温育8h，活性分别保持39%和41%。
IgY的作用机理：特定病原菌的IgY能直接黏附于病原菌的细胞壁上，改变病原细胞的完整性，直接抑制病原菌的生长；IgY可黏附于细菌的菌毛上，使之不能黏附于肠道黏膜上皮细胞；一部分IgY在肠道消化酶作用下，降解为可结合片段，这些片段含有抗体的可变小肽(Fab)部分，这些小肽很容易被肠道吸收，进入血液后能与特定的病原菌黏附因子结合，使病原菌不能黏附易感细胞而失去致病性，而IgY的稳定区(Fe部分)留在肠内。
发明内容
本发明的目的在于提供一种抗麻疹与百白破四价卵黄抗体制剂的制备工艺，用于人群麻疹和百白破的预防和治疗，特别是儿童暴露下的紧急预防和治疗。
抗麻疹与百白破四价卵黄抗体制剂的制备工艺，包括如下步骤：
1）免疫接种疫苗鸡的选择：选择健康状态良好，17-18周龄粤禽鸡；
2）免疫接种疫苗制备及剂量：麻疹疫苗与百白破疫苗1：1比例混合，每只鸡免疫接种人用麻疹疫苗每次量为0.75ml；
3）免疫程序：免疫途径为皮下注射，免疫次数为4次，免疫时间为第1次与第2次间隔为3天，第3次与第4次间隔为7天，免疫注射技巧为3点注射；
4）卵黄分离方法与技巧：用75%酒精浸泡鸡蛋5-10分钟，取出鸡蛋用清水冲洗，干净纱布将蛋壳擦干，用剪刀打开蛋壳一个小孔，让蛋清缓慢流出，顺流尽蛋清，打开蛋壳，小心将整个蛋黄移至灭菌滤纸上，来回流动，除尽蛋清，取蛋黄加入量杯，记录卵黄量；
5）卵黄抗体水溶性组分液（WSF）制备：按卵黄量的8倍加入灭菌的双蒸水，用0.1MHCl调卵黄稀释液PH为5.0-5.1，放置在4℃环境下搅拌8小时取出，在4℃环境下将卵黄稀释液放入离心机中以10000-12000转/分钟，离心15分钟,收取得卵黄抗体水溶性组分液上清液；
6）卵黄抗体分离提取方法：将卵黄抗体水溶性组分液上清液加入8%PEG6000100ml，搅拌30分钟，然后在4℃环境下放入离心机中以10000-12000转/分钟，离心15分钟,收集沉淀，去上清液，沉淀装入透析袋透析；
7）卵黄抗体提取物无菌处理：将直径0.22µm过滤膜装入滤器，高压蒸汽灭菌后抗体提取物过滤，即为无菌抗体，将卵黄抗体置-20℃保存备用，保存期2年；
8）PEG溶液配制：用PBS(0.01mol/L PH7.4)配制；
9）透析袋处理：将透析袋放入300ml透析处理液（2%NaHCO3、1mmol/L EDTA,PH8.0）中煮沸10分钟后，以蒸馏水彻底漂洗后再用300ml（PH 8.0）1mmol/LEDTA液中煮沸10分钟，最后用灭菌的双蒸水里外彻底冲洗。
所述步骤3）免疫注射技巧3点注射为，胸部一点，两翼下各一点。
所述步骤4）打开蛋壳一个小孔后，从小孔内注入少量无菌NS洗净蛋清。
采用上述技术方案的有益效果是：
本发明从鸡蛋中制备高纯度和高效价的百白破的特异性卵黄抗体IgY, 鸡蛋作为正常的膳食成分其IgY是没有毒副作用的，提纯的IgY是现代理想的免疫增强剂和治疗剂，制备方便，安全可靠，可用于人群麻疹与百白破的预防和治疗，特别是儿童暴露下的紧急预防和治疗。
具体实施方式
一、免疫家禽：
1）免疫原制备： 免疫原为人用麻疹与百白破疫苗，将麻疹与百白破疫苗无菌条件下1：1比例进行混合；
2）免疫家禽：选择17-18周龄粤禽鸡四只，将免疫原注射到粤禽鸡体内，每只免疫原注射量0.75ml，免疫途径为皮下注射，免疫次数为4次，免疫时间为第1次与第2次间隔为3天，第3次与第4次间隔为7天，免疫注射技巧为3点注射；加强免疫时免疫剂量与方法与首次免疫相同；
3）收集鸡蛋：免疫结束后收集鸡蛋，收集从最后一次免疫算起每日鸡蛋，将鸡蛋编号并做好记录，并于4℃冰箱保存备用，（收集粤禽鸡未免疫前鸡蛋为阴性对照）。
二、提取卵黄抗体：
1）将收集的鸡蛋用75%酒精浸泡5-10分钟；
2）将鸡蛋取出，用清水冲洗，干净纱布将蛋壳擦干；
3）将鸡蛋蛋壳用剪刀打开一个小孔，让蛋清缓慢流出，直至流尽蛋清，并从小孔内注入少量无菌NS将残余蛋清洗净；
4）把只剩蛋黄的蛋壳用小镊子轻轻打开，小心将整个卵黄移至灭菌滤纸上，来回流动，除尽蛋清；
5）把卵黄加入无菌量杯，记录卵黄量（大约8-10g），然后加入8倍灭菌的双蒸水与量杯中制成卵黄稀释液；
6）用0.1M HCl小心调节卵黄稀释液的PH值，使其PH为5.0-5.1，然后将其置4℃冰箱搅拌8小时；
7）搅拌结束后，从冰箱取出卵黄稀释液，在4℃环境下将卵黄稀释液放入高速低温离心机中以10000-12000转/分钟，离心15分钟,收取得卵黄抗体水溶性组分液上清液（WSF）；
8）于水溶性组分液上清液（WSF）中加入PBS(0.01mol/L PH7.4)配制8%PEG6000100ml(20g卵黄时)，将其同一方向搅拌30分钟，在4℃的环境下置于高速低温离心机以10000-12000转/分钟，离心，收集沉淀，除去上清液；
9）将透析袋于300ml透析处理液（2%NaHCO3、1mmol/L EDTA,PH 8.0）中煮沸10分钟后，将透析袋以蒸馏水彻底漂洗后，再在300ml（PH 8.0）1mmol/LEDTA液中煮沸10分钟，再以灭菌水里外彻底冲洗；
10）将收集的沉淀装入透析袋，透析24h后，0.22µm膜过滤，然后于-20℃保存；
11）IgY含量测定（mg/ml）＝（OD280－OD403×0.3）×0.62；
12）IgY效价测定双向琼脂扩散试验效价≧1:16,ELISA试验≧1：8000。
本发明制剂具有特异性预防麻疹和百白破的功能，增强非特异性免疫功能。该制剂无过敏反应，服用安全，简便，采用口服给药途径，不受条件限制，不影响该制剂的生物学活性，是一种高效安全的制剂。
Claims (3)
1.抗麻疹与百白破四价卵黄抗体制剂的制备工艺，其特征在于：该工艺包括如下步骤：
1）免疫接种疫苗鸡的选择：选择健康状态良好，17-18周龄粤禽鸡；
2）免疫接种疫苗制备及剂量：麻疹疫苗与百白破疫苗1：1比例混合，每只鸡免疫接种人用麻疹疫苗与百白破疫苗的混合疫苗每次量为0.75ml；
3）免疫程序：免疫途径为皮下注射，免疫次数为4次，免疫时间为第1次与第2次间隔为3天，第3次与第4次间隔为7天，免疫注射技巧为3点注射；
4）卵黄分离方法与技巧：用75%酒精浸泡鸡蛋5-10分钟，取出鸡蛋用清水冲洗，干净纱布将蛋壳擦干，用剪刀打开蛋壳一个小孔，让蛋清缓慢流出，顺流尽蛋清，打开蛋壳，小心将整个蛋黄移至灭菌滤纸上，来回流动，除尽蛋清，取蛋黄加入量杯，记录卵黄量；
5）卵黄抗体水溶性组分液（WSF）制备：按卵黄量的8倍加入灭菌的双蒸水，用0.1M HCl调卵黄稀释液PH为5.0-5.1，放置在4℃环境下搅拌8小时取出，在4℃环境下将卵黄稀释液放入离心机中以10000-12000转/分钟，离心15分钟,收取得卵黄抗体水溶性组分液上清液；
6）卵黄抗体分离提取方法：将卵黄抗体水溶性组分液上清液加入8%PEG6000 100ml，搅拌30分钟，然后在4℃环境下放入离心机中以10000-12000转/分钟，离心15分钟,收集沉淀，去上清液，沉淀装入透析袋透析；
7）卵黄抗体提取物无菌处理：将直径0.22µm过滤膜装入滤器，高压蒸汽灭菌后抗体提取物过滤，即为无菌抗体，将卵黄抗体置-20℃保存备用，保存期2年；
8）PEG溶液配制：用0.01mol/L 、PH7.4的PBS配制；
9）透析袋处理：将透析袋放入2%NaHCO3、1mmol/L EDTA,PH 8.0的透析处理液300ml中煮沸10分钟后，以蒸馏水彻底漂洗后再用300ml PH 8.0的1mmol/LEDTA液煮沸10分钟，最后用灭菌的双蒸水里外彻底冲洗。
2.如权利要求1所述的抗麻疹与百白破四价卵黄抗体制剂的制备工艺，其特征在于：所述步骤3）免疫注射技巧3点注射为，胸部一点，两翼下各一点。
3.如权利要求1所述的抗麻疹与百白破四价卵黄抗体制剂的制备工艺，其特征在于：所述步骤4）打开蛋壳一个小孔后，从小孔内注入少量无菌生理盐水洗净蛋清。
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| CN201410618386.2A CN104341499B (zh) | 2014-11-06 | 2014-11-06 | 抗麻疹与百白破四价卵黄抗体制剂的制备工艺 |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| CN201410618386.2A CN104341499B (zh) | 2014-11-06 | 2014-11-06 | 抗麻疹与百白破四价卵黄抗体制剂的制备工艺 |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| CN104341499A CN104341499A (zh) | 2015-02-11 |
| CN104341499B true CN104341499B (zh) | 2017-05-24 |
Family
ID=52498020
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| CN201410618386.2A Expired - Fee Related CN104341499B (zh) | 2014-11-06 | 2014-11-06 | 抗麻疹与百白破四价卵黄抗体制剂的制备工艺 |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| CN (1) | CN104341499B (zh) |
Families Citing this family (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN106749640A (zh) * | 2016-12-07 | 2017-05-31 | 青岛奕奕和农牧科技有限公司 | 禽腺病毒ⅳ型卵黄抗体的提取方法及其用途 |
Family Cites Families (4)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| KR100385711B1 (ko) * | 2000-07-05 | 2003-05-27 | 녹십자백신 주식회사 | 디프테리아, 파상풍 톡소이드와 백일해균 및ｂ형간염표면항원을 포함한 4가 혼합백신 및 그 제조방법 |
| CN101513526B (zh) * | 2008-12-15 | 2012-12-26 | 张积仁 | 联合疫苗在肿瘤治疗中的应用 |
| CN102827273A (zh) * | 2012-02-16 | 2012-12-19 | 张小莺 | 抗痘苗病毒IgY抗体的制备 |
| US20140017257A1 (en) * | 2012-07-11 | 2014-01-16 | Xi Jiang | IgY From Norovirus P Particles And Their Derivatives |
-
2014
- 2014-11-06 CN CN201410618386.2A patent/CN104341499B/zh not_active Expired - Fee Related
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| CN104341499A (zh) | 2015-02-11 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| Korhonen et al. | Bovine milk antibodies for health | |
| Mitus et al. | Attenuated measles vaccine in children with acute leukemia | |
| US20210347858A1 (en) | Alimentary and systemic antiviral therapeutics | |
| CN105198988A (zh) | 抗灿烂弧菌卵黄抗体及其制备方法 | |
| CN104788561B (zh) | 抗猪传染性胃肠炎病毒与猪流行性腹泻病毒卵黄抗体及其制备方法 | |
| TW200918552A (en) | Composition and method for immunization | |
| CN107177001A (zh) | 一种防治猪流行性腹泻病的卵黄抗体及其制备方法 | |
| US20020009429A1 (en) | Pharmaceutical composition comprising a selected antigen and candida species antigen and methods | |
| Hirai et al. | Passive oral immunization by egg yolk immunoglobulin (IgY) to Vibrio cholerae effectively prevents cholera | |
| ES2378052T3 (es) | Uso de Lactobacillus casei para incrementar la protección inducida por la vacunación contra la gripe | |
| CN105198989A (zh) | 抗黄海希瓦氏菌卵黄抗体及其制备方法 | |
| Nguyen et al. | Low titer maternal antibodies can both enhance and suppress B cell responses to a combined live attenuated human rotavirus and VLP-ISCOM vaccine | |
| JPH02160726A (ja) | ワクチン | |
| CN104341499B (zh) | 抗麻疹与百白破四价卵黄抗体制剂的制备工艺 | |
| DK175528B1 (da) | Vaccine med E.coli septicaemia hos fjerkræ | |
| RU2429881C2 (ru) | Предотвращение аллергической сенсибилизации | |
| CN101980721A (zh) | 含有合成肽的抗原药物赋形剂和使用其的粘膜疫苗 | |
| EP2144617A1 (en) | Delivery of flu antibodies to surfaces in contact with air | |
| EP0640349A1 (en) | Vaccinal efficacy augmentor and efficacy-augmenting foods | |
| RU2438709C1 (ru) | Сыворотка против болезней крупного рогатого скота, вызываемых вирусами инфекционного ринотрахеита, парагриппа, рота, корона и диареи - болезни слизистых, полиспецифическая гипериммунная, способ профилактики и лечения болезней крупного рогатого скота, вызываемых вирусами инфекционного ринотрахеита, парагриппа, рота, корона и диареи - болезни слизистых | |
| CN106749650B (zh) | 抗感冒病毒及肺链菌、葡萄球菌复合IgY抗体制备方法及其应用 | |
| CN104402994A (zh) | 抗狂犬病毒鸡卵黄抗体的制备工艺 | |
| US6605285B2 (en) | Vaccine for protection of poultry against salmonellosis and a process for preparing the same | |
| CN1273193C (zh) | 抗幽门螺杆菌卵黄抗体生物制剂的制备方法 | |
| CN114073766A (zh) | 一种幽门螺杆菌表位肽及其应用 |
Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| C06 | Publication | ||
| PB01 | Publication | ||
| C10 | Entry into substantive examination | ||
| SE01 | Entry into force of request for substantive examination | ||
| GR01 | Patent grant | ||
| GR01 | Patent grant | ||
| CF01 | Termination of patent right due to non-payment of annual fee |
Granted publication date: 20170524 |
|
| CF01 | Termination of patent right due to non-payment of annual fee |