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CN104136626B - N‑末端修饰的寡肽及其用途 - Google Patents

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Abstract

本发明涉及N‑末端脂肪酸修饰的肽或寡肽及包含这些肽或寡肽的药物组合物。

Description

N-末端修饰的寡肽及其用途
技术领域
本发明涉及N-末端脂肪酸修饰的肽或寡肽及包含这些肽或寡肽的药物组合物。
技术背景
口服途径是迄今为止最广泛使用的用于药物施用的途径。然而肽和蛋白的施用经常限于胃肠外途径，而非优选的口服施用，由于几个障碍，例如在胃肠(GI)道和肠粘膜中的酶促降解、药物外排泵、从肠粘膜的不足的和可变的吸收，以及在肝脏中的首过代谢。
为了克服此障碍，在口服药物组合物中通常包括蛋白酶降解的抑制剂，和/或稳定化活性成分对抗蛋白水解降解。在公共领域中有许多蛋白酶抑制剂可用。但是，它们中的很多是有毒性的或变应原的，包括大豆胰蛋白酶抑制剂(Kunitz型，SBTI)并且因此不可应用于长期施用。
此外，公共领域描述的蛋白酶抑制剂例如SBTI具有在基于液体脂质和表面活性剂的药物组合物例如自纳米乳化药物递送系统(SNEDDS)中化学不稳定的缺点。存在于这些赋形剂中的醛和过氧化杂质已知与肽和蛋白的氨基基团反应，并因此将对保质期产生负面影响。
SBTI的另一个缺点是其在脂质药物组合物中的低溶解度，这导致物理不稳定的组合物。
因此，存在对具有改善的特性的新的蛋白酶抑制剂的需求。
总结
本发明涉及具有下列结构的N-末端酰化的肽或寡肽：
其中Cx是具有6和20个之间碳原子长度的脂肪酸，并且其中Aaa1是芳香族氨基酸；Aaa2是除了Lys或Asp之外的任何氨基酸；Aaa3是任何氨基酸；并且Aaa4-10是任何氨基酸或不存在。
在本发明的一个方面，N-末端酰化的肽或寡肽是来自胃肠道(GI道)的提取物中蛋白水解活性的抑制剂。
在本发明的一个方面，根据任一前述权利要求的N-末端酰化的肽或寡肽，其是蛋白水解活性，例如胰蛋白酶、胰凝乳蛋白酶、弹性蛋白酶、羧肽酶和/或氨肽酶的蛋白水解活性的抑制剂。
在本发明的一个方面，根据任一前述权利要求的N-末端酰化的肽或寡肽是吸收增强剂。
本发明还涉及包含本发明的N-末端酰化的肽或寡肽以及进一步的药物活性成分的口服药物组合物。在本发明的一个方面，所述进一步的药物活性成分是肽或蛋白。在一方面，本发明的口服药物组合物是液体或半液体组合物。在一方面，本发明的口服药物组合物是固体组合物。
本发明还可以解决根据示例性方面的公开内容将显而易见的进一步的问题。
描述
本发明涉及N-末端脂肪酸修饰的肽或寡肽。在一方面，所述脂肪酸具有6-20个碳原子的长度。在一方面所述肽或寡肽具有2-10个氨基酸。在一方面所述肽或寡肽具有2-8个氨基酸。在一方面所述肽或寡肽具有3-8个氨基酸。在一方面所述肽或寡肽具有3-6个氨基酸。
在一方面，本发明涉及具有下列结构的N-末端酰化的肽或寡肽：
其中Cx是具有6和20个之间碳原子长度的脂肪酸，并且其中Aaa1是芳香族氨基酸；Aaa2是除了Lys或Asp之外的任何氨基酸；Aaa3是任何氨基酸；并且Aaa4-10是任何氨基酸或不存在。
在一方面，本发明涉及具有下列结构的N-末端酰化的肽或寡肽：
其中Cx是具有6和20个之间碳原子长度的脂肪酸，并且其中Aaa1是芳香族氨基酸；Aaa2是除了Lys或Asp之外的任何氨基酸；Aaa3是Trp、Tyr、Phe、Arg、Lys或His；Aaa4-9是任何氨基酸或不存在，并且Aaa10是Leu、Thr、Lys、Arg或His或不存在。
在本发明的一方面，Cx是具有12-20个碳原子长度的脂肪酸，在一方面Cx是具有12-16个碳原子长度的脂肪酸。
术语“脂肪酸”指具有6个或更多碳原子的脂肪族单羧酸，优选无支链的，和/或偶数个的，并且其可以是饱和的或不饱和的。因此本发明的“脂肪酸”理解为饱和一元羧酸，例如式CH3- (CH2)n-COOH或CH3-(CH2)n-CH(CH3)-(CH2)n-COOH，或不饱和的一元羧酸，例如式CH3-(CH2)n-CH=CH-(CH2)n-COOH，其不包含任何杂原子。当与肽或多肽反应时，脂肪酸的羧酸基团通常与(多)肽的氮或另一个反应性基团反应并形成式R-C(=O)-(多)肽的脂肪酸修饰的(多)肽，其中R是烷烃或烯烃。
本文中，术语“氨基酸残基”是从中形式上羟基已从羧基基团去除和/或从中形式上氢原子已从氨基去除的氨基酸。
术语“氨基酸”包括蛋白原性(proteogenic)氨基酸(由遗传密码编码，包括天然氨基酸，和标准氨基酸)，以及非蛋白原性(在蛋白中没有发现，和/或不能在标准的遗传密码中编码)，和合成的氨基酸。因此，本发明的N-末端酰化的肽或寡肽的氨基酸可以选自蛋白原性氨基酸，非蛋白原性氨基酸，和/或合成的氨基酸。在一方面，所述氨基酸选自蛋白原性氨基酸、D-形式的蛋白原性氨基酸、OEG([2-(2-氨基乙氧基)乙氧基]乙基羰基)、γGlu和βAsp的一种或多种。在一方面，所述氨基酸选自蛋白原性氨基酸、OEG([2-(2-氨基乙氧基)乙氧基]乙基羰基)、γGlu和βAsp的一种或多种。在一方面所述氨基酸是蛋白原性氨基酸。
本文使用下列缩略语：“OEG”为8-氨基-3,6-二氧杂辛酸(dioxaoctanic acid)；“伽马-Glu”(或“gGlu”、“γGlu”或“γ-Glu”)为伽马谷氨酸；贝塔-Asp(或“bAsp”、“β-Asp”或“βAsp”)为贝塔天冬氨酸；和艾普西龙-Lys(或“eLys”或“e-Lys”、“Lys”或“-Lys”)为艾普西龙赖氨酸。
谷氨酸和天门冬氨酸本质上分别具有两个羧基(-COOH)基团，并且从而可以在每个这些基团中反应。在α-碳上的羧基称为α羧基基团，天冬氨酸的侧链羧基称为β羧基并且谷氨酸的侧链羧基称为γ羧基。
为了举例说明，谷氨酸的二价基（di-radical）（γGlu二价基）在化学式II中举例说明：
在化学式II中，所述α氨基和γ羧基基团表示为基团。化学式II因此还可以称为伽马-Glu，或简称γGlu，由于事实是谷氨酸的γ羧基在此用于连接另一个氨基酸残基。接下来谷氨酸的氨基与又另一个氨基酸的羧基或脂肪酸的羧基形成酰胺键。类似地，当天冬氨酸的贝塔羧基用于连接另一个氨基酸残基或脂肪酸的羧基时，天冬氨酸可以称为贝塔-Asp或简称βAsp，并且当赖氨酸的ε氨基用于连接另一个氨基酸残基或脂肪酸的羧基时，赖氨酸可以称为艾普西龙-Lys，或简称Lys。
不由遗传密码编码的氨基酸的非限制性实例是伽马-羧基谷氨酸、鸟氨酸和磷酸丝氨酸。合成的氨基酸的非限制性实例是氨基酸的D-异构体，如D-丙氨酸和D-亮氨酸，Aib(α-氨基异丁酸)，β-丙氨酸，脱氨基组氨酸(desH，替代名称咪唑丙酸，简称lmp)和OEG([2-(2-氨基乙氧基)乙氧基]乙基羰基)。
术语“芳香族氨基酸”在本文中用于包含芳香环的氨基酸。芳香族氨基酸的非限制性实例包括苯丙氨酸、色氨酸、组氨酸、酪氨酸和甲状腺素(也称为3,5,3',5'-四碘甲状腺原氨酸)。
术语“碱性氨基酸”在本文中用于在低于其pKa的pH值下是极性的和带正电的氨基酸，即包含在中性pH值是碱性的侧链的氨基酸。碱性氨基酸的非限制性实例包括精氨酸(Arg)、赖氨酸(Lys)和组氨酸(His)。
已令人惊讶地发现本发明的N-末端脂肪酸修饰的肽或寡肽当在口服组合物中使用时作为蛋白酶抑制剂发挥作用。
已令人惊讶地发现本发明的N-末端脂肪酸修饰的肽或寡肽结合蛋白水解酶类，以这样的方式来干扰肽/蛋白的降解。
通常化合物可以在许多不同的位点结合蛋白水解酶类，但是，当寻找蛋白水解抑制剂时，其只能结合干扰目的蛋白水解酶类功能的位点。寻找抑制剂的最佳方法是检查潜在抑制剂的存在对由所述蛋白酶催化的酶反应的影响。酶动力学描述了对于化合物抑制本领域技术人员已知的酶的几种可能性。酶抑制剂可以是例如竞争性的、非竞争性的、混合的。先前在很多科学论文和众多教科书中描述了用于区别不同种类的酶抑制剂的方法，例如Athel Cornish-Bowden的Fundamentals of Enzyme Kinetics ISBN-13: 978-3527330744。除了酶动力学，蛋白水解酶类与它们的抑制剂的相互作用还通过很多不同的方法进行常规检查，例如x-射线晶体学、NMR光谱、众多光谱技术(荧光、圆二色性、UV-VIS)、质谱法、量热法，诸如此类如本领域技术人员已知的方法。化合物也可强烈地结合酶，但不影响该催化反应的速率。
在开发本发明的N-末端酰化的(寡)肽的过程中，我们已发现，对于本发明的N末端酰化(寡)肽和胰凝乳蛋白酶之间的相互作用的 Ki取决于测定中使用的底物。例如，当使用N-琥珀酰-Ala-Ala-Pro-Phe-对硝基苯胺作为底物时，对于来自实施例34的化合物Ki是~130 µM，并且这是竞争性抑制(实施例202)的情况；而当A14E,B25H,B29K(N(eps)十八烷二酰基-γGlu-OEG-OEG)、desB30人胰岛素用作底物(实施例201)时，发现Ki ~15 µM，并且这是混合抑制的情况。这些结果与胰凝乳蛋白酶上两个结合位点一致；“高”亲和力(~15 μM)结合位点干扰胰岛素降解，但不干扰N-琥珀酰-Ala-Ala-Pro-Phe-对硝基苯胺的降解。此位点可以存在于活性位点附近，但不涉及结合和降解N-Ala-Ala-Pro-Phe-对硝基苯胺所需的P1-P4位点，并且“低”亲和力(~150μM)结合位点干扰N-琥珀酰-Ala-Ala-Pro-Phe-对硝基苯胺降解，并且的确非常可能涉及胰凝乳蛋白酶的P1-P4位点。
可以理解，当测试本发明的寡肽时本领域技术人员将选择合适的底物。通常使用可商购获得的显色/荧光底物用于酶测定，因为这些都是容易使用和适用于高通量设置的。例如，可以使用Suc-Ala-Ala-Pro-Phe-对硝基酰苯胺监测胰凝乳蛋白酶活性(A sensitivenew substrate for chymotrypsin. DelMar, E.G., 等 Anal. Biochem. 99, 316,(1979); Mapping the extended substrate binding site of cathepsin G and humanleukocyte elastase. Studies with peptide substrates related to the alpha 1-protease inhibitor reactive site. Nakajima, K., 等 J. Biol. Chem. 254, 4027,(1979))，类似地，可以例如通过使用苯甲酰基-Phe-Val-Arg-对硝基苯胺跟踪胰蛋白酶活性(Substrates for determination of trypsin, thrombin and thrombin-likeenzymes. Svendsen, L., 等 Folia Haematol. Int. Mag. Klin. Morphol.Blutforsch. 98, 446, (1972); Assay of coagulation proteases using peptidechromogenic and fluorogenic substrates. Lottenberg, R., 等 Meth. Enzymol. 80,341, (1981))。然而，使用这些显色/荧光底物将遗漏酶抑制剂不直接结合测试酶的活性位点(例如形式上可以描述为非竞争性的或混合抑制剂的抑制剂)的可能性。通过使用显色/荧光底物，可能看不见由结合酶的活性位点附近并干扰相关底物结合(所述相关底物通常比显色/荧光底物更大)的化合物的抑制。本领域技术人员会知道如何验证用显色/荧光底物观察到的酶抑制与对于“真正的”底物所观察到的酶抑制是相同的类型和幅度，即，在口服递送胰岛素的情况下对于胰岛素或在口服递送GLP-1的情况下对于GLP-1所观察到的酶抑制。或者，可以设计结构上类似于“真正的”底物的定制底物，例如通过利用福斯特共振能量转移(FRET，如例如实施例198和199中所述)。根据其关于显色，荧光和定制底物的知识，本领域技术人员会知道在选择最终底物用于筛选之前如何首先筛选或用相关底物验证筛选结果。
在一方面，本发明的N-末端脂肪酸修饰的肽或寡肽适合用于口服药物组合物。在本发明的一个方面，本发明的N-末端脂肪酸修饰的肽或寡肽当在口服药物组合物中使用时可完全生物降解为氨基酸和脂肪酸，其中生物可降解指体内可降解。即，在一方面，本发明的N-末端酰化的(寡)肽在体内完全降解。在一方面，所述N-末端脂肪酸修饰的肽或寡肽适合用于液体或半液体口服组合物，例如SNEDDS组合物。在本发明的一个方面，所述N-末端脂肪酸修饰的肽或寡肽适合用于固体(口服)药物组合物，也称为固体(口服)剂型，例如，如以粉末形式的片剂，其从粉末压制或压缩成任选地进一步包衣的固体剂量。在一方面，N-末端脂肪酸修饰的肽或寡肽适合用于在片剂中使用。在一方面，N-末端脂肪酸修饰的肽或寡肽适合用于在胶囊中使用。
在一方面，根据本发明的N-末端脂肪酸修饰的肽或寡肽稳定活性成分对抗由一种或多种蛋白水解酶类的降解。
本发明的N-末端脂肪酸修饰的肽或寡肽结合蛋白水解酶的结合常数Ki可以用作本发明的N-末端脂肪酸修饰的肽或寡肽如何很好地稳定活性成分对抗所述蛋白水解酶降解的量度。
在本发明的一个方面，当本发明的N-末端脂肪酸修饰的肽或寡肽结合胰凝乳蛋白酶时，Ki在100 nM至100 µM的范围。Ki越低，对于给定浓度的本发明的N-末端酰化的肽或寡肽观察到的抑制越强。在本发明的一个方面，当本发明的N-末端脂肪酸修饰的肽或寡肽结合胰凝乳蛋白酶时，Ki在500 µM至100 nM，50 µM至100 nM，10 µM至100 nM的范围。在本发明的一个方面，当本发明的N-末端脂肪酸修饰的肽或寡肽结合胰蛋白酶时，Ki在500 µM至100 nM，100 µM至100 nM，50 µM至100 nM，10 µM至100 nM的范围。在本发明的一个方面，当本发明的N-末端脂肪酸修饰的肽或寡肽结合弹性蛋白酶时，Ki在500 µM至100 nM，100 µM至100 nM，50 µM至100 nM，10 µM至100 nM的范围。
EC50，即本发明的N-末端脂肪酸修饰的肽或寡肽的半数最大有效浓度是经过一些指定的暴露时间后诱导基线和最大之间一半的反应的浓度的量度，并且可以用作本发明的N-末端脂肪酸修饰的肽或寡肽如何很好地稳定活性成分对抗所述蛋白水解酶降解的量度。EC50值取决于实验条件并且从而当比较EC50值时必须使用相同的条件。然而，只要附加的参数，例如Km(米氏常数)对于给定的反应是已知的，则EC50值可以被转换成Ki值(Brandt, R.B等 Biochemical medicine and metabolic biology 37, 344-349 (1987))。
在一方面，根据本发明的N-末端脂肪酸修饰的肽或寡肽稳定活性成分对抗选自下列的一种或多种酶类的降解：胰凝乳蛋白酶、胰蛋白酶、胰岛素降解酶(IDE)、弹性蛋白酶、羧肽酶、氨肽酶和组织蛋白酶D。在进一步的方面，根据本发明的N-末端脂肪酸修饰的肽或寡肽稳定活性成分对抗选自下列一种或多种蛋白水解酶类的降解：胰凝乳蛋白酶、胰蛋白酶和弹性蛋白酶。在又进一步的方面，根据本发明的N-末端脂肪酸修饰的肽或寡肽稳定活性成分对抗选自下列一种或多种蛋白水解酶类的降解：胰凝乳蛋白酶和胰蛋白酶。在又进一步的方面，根据本发明的N-末端脂肪酸修饰的肽或寡肽稳定活性成分对抗胰凝乳蛋白酶的降解。在又进一步的方面，根据本发明的N-末端脂肪酸修饰的肽或寡肽稳定活性成分对抗胰蛋白酶的降解。在又进一步的方面，根据本发明的N-末端脂肪酸修饰的肽或寡肽稳定活性成分对抗弹性蛋白酶的降解。在一方面，根据本发明的N-末端脂肪酸修饰的肽或寡肽稳定活性成分对抗来自胃肠道(GI提取物)的提取物，即酶混合物，例如来自胃肠道的组织提取物中的降解。
“蛋白酶”或“蛋白水解酶”是降解蛋白和肽的消化酶，并且其见于人体内的各种组织，例如，如胃(胃蛋白酶)、肠腔(胰凝乳蛋白酶、胰蛋白酶、弹性蛋白酶、羧肽酶等)或GI道的粘膜表面(氨肽酶、羧肽酶、肠肽酶、二肽基肽酶、内肽酶等)、肝(胰岛素降解酶，组织蛋白酶D等)以及其它组织。
可以确定TN-末端脂肪酸修饰的肽或寡肽获得的活性成分的蛋白水解稳定性的量度，其中所述蛋白水解稳定性对抗蛋白酶酶类，例如胰凝乳蛋白酶、胰蛋白酶和/或弹性蛋白酶，或对抗酶混合物，例如组织提取物(来自肝脏、肾脏、十二指肠、空肠、回肠、结肠、胃等)。在本发明的一个方面，相对无本发明的N-末端脂肪酸修饰的肽或寡肽的口服组合物TN-末端脂肪酸修饰的肽或寡肽的口服组合物T2倍。在又进一步的方面，相对无本发明的N-末端脂肪酸修饰的肽或寡肽的口服组合物T3倍。在又进一步的方面，相对无本发明的N-末端脂肪酸修饰的肽或寡肽的口服组合物T4倍。在又进一步的方面，相对无本发明的N-末端脂肪酸修饰的肽或寡肽的口服组合物T5倍。在又进一步的方面，相对无本发明的N-末端脂肪酸修饰的肽或寡肽的口服组合物T10倍。在又进一步的方面，相对无本发明的N-末端脂肪酸修饰的肽或寡肽的口服组合物T50倍。在又进一步的方面，相对无本发明的N-末端脂肪酸修饰的肽或寡肽的口服组合物T100倍。
在一方面，可以确定TN-末端脂肪酸修饰的肽或寡肽获得的蛋白水解稳定性的量度，其中所述蛋白水解稳定性对抗蛋白酶酶类，例如胰凝乳蛋白酶、胰蛋白酶和/或弹性蛋白酶，或对抗酶混合物，例如组织提取物(来自肝脏、肾脏、十二指肠、空肠、回肠、结肠、胃等)。在本发明的一个方面，相对无本发明的N-末端脂肪酸修饰的肽或寡肽的包含活性成分的水溶液，TN-末端脂肪酸修饰的肽或寡肽的包含活性成分的水溶液，T2倍。在又进一步的方面，相对无本发明的N-末端脂肪酸修饰的肽或寡肽的包含活性成分的水溶液，T3倍。在又进一步的方面，相对无本发明的N-末端脂肪酸修饰的肽或寡肽的包含活性成分的水溶液，T4倍。在又进一步的方面，相对无本发明的N-末端脂肪酸修饰的肽或寡肽的包含活性成分的水溶液，T5倍。在又进一步的方面，相对无本发明的N-末端脂肪酸修饰的肽或寡肽的包含活性成分的水溶液，T10倍。在又进一步的方面，相对无本发明的N-末端脂肪酸修饰的肽或寡肽的包含活性成分的水溶液，T50倍。在又进一步的方面，相对无本发明的N-末端脂肪酸修饰的肽或寡肽的包含活性成分的水溶液，T100倍。
令人惊讶地发现本发明的N-末端脂肪酸修饰的肽或寡肽当在口服组合物中使用时还作为吸收增强剂发挥作用。
令人惊讶地发现本发明的N-末端脂肪酸修饰的肽或寡肽当包括在口服药物组合物中时可以改善活性成分的吸收。
术语“渗透增强剂”和“吸收增强剂”在本文中可以互换使用，并且指能促进药物的肠吸收的生物制剂或化学品，即增加渗透性差的药物的渗透性，并从而改善口服药物的生物利用度。通过口服途径递送药物因此主要受由循环前(pre-systemic)降解和跨肠壁渗透性差的限制。口服药物递送中的主要挑战是支持渗透性差的药物跨肠上皮吸收的新剂型的开发。
为了评估化合物是否是吸收增强剂，该化合物通常在至少一种本领域已知的测定中检查，以测量药物或模型化合物跨细胞层的吸收。这些测定的非限制性实例是Caco-2细胞测定(例如如实施例中所述)或尤斯室测定(例如描述于Fetih G, Habib F, Okada N,Fujita T, Attia M, Yamamoto A. Nitric oxide donors can enhance the intestinaltransport and absorption of insulin and [Asu(1,7)]-eel calcitonin in rats. JControl Release. 2005;106(3):287-97; 或 Shimazaki T, Tomita M, Sadahiro S,Hayashi M, Awazu S. Absorption-enhancing effects of sodium caprate andpalmitoyl carnitine in rat and human colons. Dig Dis Sci. 1998;43(3):641-5;或Petersen SB, Nolan G, Maher S, Rahbek UL, Guldbrandt M, Brayden DJ.Evaluation of alkylmaltosides as intestinal permeation enhancers: comparisonbetween rat intestinal mucosal sheets and Caco-2 monolayers. Eur J Pharm Sci.2012;47(4):701-12.)。在本发明的一个方面，相对无本发明的N-末端脂肪酸修饰的肽或寡肽的包含活性成分的水溶液，吸收增强作用增加。在进一步的方面，相对无本发明的N-末端脂肪酸修饰的肽或寡肽的包含活性成分的水溶液，吸收增强作用增加至少1.5倍。在又进一步的方面，相对无本发明的N-末端脂肪酸修饰的肽或寡肽的包含活性成分的水溶液，吸收增强作用增加至少2倍。在又进一步的方面，相对无本发明的N-末端脂肪酸修饰的肽或寡肽的包含活性成分的水溶液，吸收增强作用增加至少3倍。I在又进一步的方面，相对无本发明的N-末端脂肪酸修饰的肽或寡肽的包含活性成分的水溶液，吸收增强作用增加至少4倍。在又进一步的方面，相对无本发明的N-末端脂肪酸修饰的肽或寡肽的包含活性成分的水溶液，吸收增强作用增加至少5倍。在又进一步的方面，相对无本发明的N-末端脂肪酸修饰的肽或寡肽的包含活性成分的水溶液，吸收增强作用增加至少6倍。在又进一步的方面，相对无本发明的N-末端脂肪酸修饰的肽或寡肽的包含活性成分的水溶液，吸收增强作用增加至少7倍。在又进一步的方面，相对无本发明的N-末端脂肪酸修饰的肽或寡肽的包含活性成分的水溶液，吸收增强作用增加至少8倍。在又进一步的方面，相对无本发明的N-末端脂肪酸修饰的肽或寡肽的包含活性成分的水溶液，吸收增强作用增加至少9倍。在又进一步的方面，相对无本发明的N-末端脂肪酸修饰的肽或寡肽的包含活性成分的水溶液，吸收增强作用增加至少10倍。
在一方面，本发明的N-末端脂肪酸修饰的肽或寡肽选自：
N-十二烷酰基-Ala-Ala-Pro-Phe-OH
N-十二烷酰基-DAla-DAla-DPro-DPhe-OH
N-十四烷酰基-Ala-Ala-Pro-Phe-OH
N-十二烷酰基-γGlu-OEG-Ala-Ala-Pro-Phe-OH
N-十四烷酰基-Ala-Ala-Pro-DPhe-OH
N-十四烷酰基-ßAla-Ala-Pro-Phe-OH
N-十二烷酰基-OEG-OEG-DPhe-OH
N-十二烷酰基-Ala-Ala-Ala-Ala-Pro-Phe-OH
N-十二烷酰基-γGlu-Ala-Pro-Phe-OH
N-十四烷酰基-γGlu-Ala-Pro-Phe-OH
N-十二烷酰基-Ala-Ala-Pro-Trp-OH
N-二十烷酰基-Ala-Ala-Pro-Phe-OH
N-十六烷酰基-Ala-Ala-Pro-Phe-OH
N-十六烷酰基-γGlu-Ala-Ala-Pro-Phe-OH
N-十六烷酰基-γGlu-OEG-Ala-Ala-Pro-Phe-OH
N-十六烷酰基-Glu-Ala-Ala-Pro-Phe-OH
N-十四烷酰基-bAla-bAla-Pro-Phe-OH
N-十四烷酰基-bAla-bAla-bAla-Pro-Phe-OH
N-十四烷酰基-Ala-Ala-Ala-Ala-Pro-Phe-OH
N-十二烷酰基-Ala-Ala-Ala-Ala-Ala-Pro-Phe-OH
N-肉豆蔻酰基-Leu-Ala-Ala-Pro-Tyr-OH
N-肉豆蔻酰基-Glu-Ala-Ala-Pro-Trp-OH
N-棕榈酰基-Glu-Ala-Ala-Pro-DPhe-OH
N-肉豆蔻酰基-Leu-bAla-Ala-Pro-DPhe-OH
N-十六烷酰基-γGlu-Ala-Pro-Phe-OH
N-十八烷酰基-γGlu-Ala-Pro-Phe-OH
N-二十烷酰基-γGlu-Ala-Pro-Phe-OH
N-十四烷酰基-Trp-Pro-Tyr-OH
N-十二烷酰基-Leu-Thr-Trp-Pro-Tyr-OH
N-十六烷酰基-γGlu-DAla-DPro-DPhe-OH
N-十四烷酰基-γGlu-DAla-DAla-DPro-DPhe-OH
N-十四烷酰基-Leu-Ala-Ala-Pro-Phe-OH
N-十八烷酰基-γGlu-Ala-Ala-Pro-Phe-OH
N-二十烷酰基-γGlu-Ala-Ala-Pro-Phe-OH
N-十四烷酰基-γGlu-Ala-Ala-Pro-Phe-OH
N-十四烷酰基-His-Ala-Ala-Pro-Phe-OH
N-十四烷酰基-Thr-Ala-Ala-Pro-Phe-OH
N-十六烷酰基-Thr-Ala-Ala-Pro-Phe-OH
N-十四烷酰基-γGlu-Ala-Pro-Trp-OH
N-十四烷酰基-His-Ala-Arg-Pro-Phe-OH
N-十四烷酰基-DAla-DAla-DPro-DPhe-OH
N-十四烷酰基-L-Ala-L-Ala-L-Pro-D-Phe-OH
N-十六烷酰基-Glu-Ala-Ala-Pro-D-Phe-OH
N-十四烷酰基-Glu-Ala-Ala-Pro-Trp-OH
N-十四烷酰基-His-Ala-Trp-Pro-Phe-OH
N-十四烷酰基-γGlu-His-Ala-Arg-Pro-Phe-OH
N-十四烷酰基-DHis-DAla-DArg-DPro-DPhe-OH
N-十四烷酰基-eLys-His-Ala-Arg-Pro-Phe-OH
N-十四烷酰基-Arg-His-Ala-Arg-Pro-Phe-OH。
在一方面，本发明的N-末端脂肪酸修饰的肽或寡肽选自：
N-二十烷酰基-γGlu-Ala-Ala-Pro-Phe-OH
N-二十烷酰基-γGlu-Ala-Pro-Phe-OH
N-十六烷酰基-Ala-Ala-Pro-Phe-OH
N-十六烷酰基-γGlu-Ala-Ala-Pro-Phe-OH
N-十六烷酰基-γGlu-Ala-Pro-Phe-OH
N-十六烷酰基-γGlu-DAla-DPro-DPhe-OH
N-十六烷酰基-γGlu-OEG-Ala-Ala-Pro-Phe-OH
N-十六烷酰基-Glu-Ala-Ala-Pro-Phe-OH
N-十六烷酰基-Thr-Ala-Ala-Pro-Phe-OH
N-肉豆蔻酰基-Leu-Ala-Ala-Pro-Tyr-OH
N-十八烷酰基-γGlu-Ala-Ala-Pro-Phe-OH
N-十八烷酰基-γGlu-Ala-Pro-Phe-OH
N-棕榈酰基-Glu-Ala-Ala-Pro-DPhe-OH
N-十四烷酰基-Ala-Ala-Pro-DPhe-OH
N-十四烷酰基-Ala-Ala-Pro-Phe-OH
N-十四烷酰基-DAla-DAla-DPro-DPhe-OH
N-十四烷酰基-γGlu-Ala-Pro-Phe-OH
N-十四烷酰基-γGlu-DAla-DAla-DPro-DPhe-OH
N-十四烷酰基-γGlu-DAla-DPro-DPhe-OH
N-十四烷酰基-His-Ala-Arg-Pro-Phe-OH
N-十四烷酰基-His-Ala-Trp-Pro-Phe-OH
N-十四烷酰基-Leu-Ala-Ala-Pro-Phe-OH
N-十四烷酰基-ßAla-Ala-Pro-Phe-OH
N-十四烷酰基-Thr-Ala-Ala-Pro-Phe-OH。
在一方面，本发明的N-末端脂肪酸修饰的肽或寡肽选自：
N-十二烷酰基-Ala-Ala-Pro-Phe-OH
N-十二烷酰基-Ala-Ala-Pro-Trp-OH
N-十二烷酰基-DAla-DAla-DPro-DPhe-OH
N-十二烷酰基-Leu-Thr-Trp-Pro-Tyr-OH
N-二十烷酰基-γGlu-Ala-Pro-Phe-OH
N-十六烷酰基-Ala-Ala-Pro-Phe-OH
N-十六烷酰基-γGlu-Ala-Ala-Pro-Phe-OH
N-十六烷酰基-γGlu-Ala-Pro-Phe-OH
N-十六烷酰基-γGlu-DAla-DPro-DPhe-OH
N-十六烷酰基-Thr-Ala-Ala-Pro-Phe-OH
N-肉豆蔻酰基-Glu-Ala-Ala-Pro-Trp-OH
N-肉豆蔻酰基-Leu-Ala-Ala-Pro-Tyr-OH
N-肉豆蔻酰基-Leu-bAla-Ala-Pro-DPhe-OH
N-十八烷酰基-γGlu-Ala-Pro-Phe-OH
N-棕榈酰基-Glu-Ala-Ala-Pro-DPhe-Ona
N-十四烷酰基-γGlu-OEG-Ala-Ala-Pro-Phe-OH
N-十四烷酰基-Ala-Ala-Pro-DPhe-OH
N-十四烷酰基-Ala-Ala-Pro-Phe-OH
N-十四烷酰基-bAla-bAla-Pro-Phe-OH
N-十四烷酰基-DAla-DAla-DPro-DPhe-OH
N-十四烷酰基-γGlu-Ala-Pro-Phe-OH
N-十四烷酰基-γGlu-DAla-DPro-DPhe-OH
N-十四烷酰基-Glu-Ala-Ala-Pro-Trp-OH
N-十四烷酰基-His-Ala-Arg-Pro-Phe-OH
N-十四烷酰基-Leu-Ala-Ala-Pro-Phe-OH。
在一方面，本发明的N-末端脂肪酸修饰的肽或寡肽选自：
N-十二烷酰基-Ala-Ala-Ala-Ala-Ala-Pro-Phe-OH
N-十二烷酰基-Ala-Ala-Pro-Trp-OH
N-十二烷酰基-DAla-DAla-DPro-DPhe-OH
N-十二烷酰基-γGlu-Ala-Pro-Phe-OH
N-十二烷酰基-Leu-Thr-Trp-Pro-Tyr-OH
N-十二烷酰基-OEG-OEG-DPhe-OH
N-二十烷酰基-γGlu-Ala-Ala-Pro-Phe-OH
N-十六烷酰基-Ala-Ala-Pro-Phe-OH
N-十六烷酰基-γGlu-Ala-Ala-Pro-Phe-OH
N-十六烷酰基-Glu-Ala-Ala-Pro-D-Phe-OH
N-十六烷酰基-Thr-Ala-Ala-Pro-Phe-OH
N-肉豆蔻酰基-Leu-Ala-Ala-Pro-Tyr-OH
N-棕榈酰基-Glu-Ala-Ala-Pro-DPhe-OH
N-十四烷酰基-Ala-Ala-Ala-Ala-Pro-Phe-OH
N-十四烷酰基-Ala-Ala-Pro-DPhe-OH
N-十四烷酰基-Ala-Ala-Pro-Phe-OH
N-十四烷酰基-DAla-DAla-DPro-DPhe-OH
N-十四烷酰基-γGlu-Ala-Pro-Phe-OH
N-十四烷酰基-Glu-Ala-Ala-Pro-Trp-OH
N-十四烷酰基-His-Ala-Arg-Pro-Phe-OH
N-十四烷酰基-Leu-Ala-Ala-Pro-Phe-OH
N-十四烷酰基-Thr-Ala-Ala-Pro-Phe-OH
N-十四烷酰基-Trp-Pro-Tyr-OH。
多肽的产生是本领域熟知的。多肽，例如本发明的N-末端脂肪酸修饰的肽或寡肽的肽部分，可以例如通过经典的肽合成产生，例如使用t-Boc或Fmoc化学的固相肽合成或其它广泛接受的技术，参见例如Greene and Wuts, “Protective Groups in OrganicSynthesis”, John Wiley & Sons, 1999。该多肽还可以通过这样的方法产生，所述方法包括培养宿主细胞，所述细胞包含编码所述多肽的DNA序列并且能够在允许该肽表达的条件下在合适的营养培养基中表达所述多肽。对于包含非天然氨基酸残基的多肽，所述重组细胞应该被修饰使得所述的非天然氨基酸例如通过使用tRNA突变体掺入到多肽。
在整个本申请中使用的用于本发明的N-末端酰化的肽或寡肽的命名法如下：
N-十二烷酰基-DAla-DAla-DPro-DPhe-OH指下面的结构，其中四肽D-丙氨酰-D-丙氨酰-D-脯氨酰-D-苯丙氨酸的N-末端用十二烷酸酰化。此结构的替代名称是(R)-2-({(R)-1-[(R)-2-((R)-2-十二烷酰基氨基-丙酰基氨基)丙酰基]-吡咯烷-2-羰基}-氨基)-3-苯基-丙酸。如果没有指定氨基酸的立体化学，则应理解为天然存在的L-氨基酸。γGlu指伽马-L-谷氨酰；βAla指贝塔-L-丙氨酰，诸如此类。
活性成分
术语“活性成分”在本文中用于制药药物中的任何生物活性的药物物质，即，在治愈、治疗或预防疾病中或为影响人或动物体的结构或任何功能提供药理学活性或其它直接作用的小分子、肽或蛋白。可替代的术语包括活性药物成分(API)和原料药。
术语“药物活性肽或蛋白”在本文中用于制药药物中的任何活性成分，其以肽或蛋白的形式，即，生物活性的并且从而在治愈、治疗或预防疾病中或为影响人或动物体的结构或任何功能提供药理学活性或其它直接作用的肽或蛋白。
在本发明的一个方面，所述活性成分是肽或蛋白。
在本发明的一个方面，所述活性成分选自胰岛素肽和GLP-1肽。
在本发明的一个方面，所述活性成分是GLP-1肽。
如本文所用的术语“GLP-1肽”指具有GLP-1活性的人GLP-1或其类似物或衍生物的肽。
如本文所用术语“人GLP-1”或“天然GLP-1”指人GLP-1激素，其结构和性质是众所周知的。人GLP-1也表示为GLP-1(7-37)，其具有31个氨基酸，并且是胰高血糖素分子选择性切割的结果。
本发明的GLP-1肽具有GLP-1活性。此术语指结合到GLP-1受体并启动信号转导途径导致促胰岛素作用或本领域中已知的其它生理作用的能力。例如本发明的类似物和衍生物可以使用标准GLP-1活性测定法测试GLP-1活性。
如本文所用术语“GLP-1类似物”指修饰的人GLP-1，其中人GLP-1的一个或多个氨基酸残基被其它氨基酸残基取代和/或其中一个或多个氨基酸残基已经从人GLP-1缺失和/或其中一个或多个氨基酸残基已被添加和/或插入到人GLP-1。
在一方面，GLP-1类似物相对于人GLP-1包含10个氨基酸修饰(取代，缺失，添加(包括插入)和它们的任何组合)或者更少，可替代地9、8、7、6、5、4、3或2个修饰或更少，又可替代地相对于人GLP-1包含1个修饰。
GLP-1分子中的修饰通过说明位置和用于取代天然氨基酸残基的氨基酸残基一个或三个字母代码来表示。
当使用序列表时，序列的第一个氨基酸残基分配编号1。然而，在下文中-根据用于GLP-1肽的本领域惯例-该第一残基称为编号7，并且随后的氨基酸残基被相应的编号，到编号37结束。因此，通常本文对GLP-1(7-37)序列的氨基酸残基数目或位置位置编号的任何提及是指从7位的His开始并在37位Gly结束的序列。使用一个字母代码用于氨基酸，术语如34E、34Q或34R分别指在位置34的氨基酸是E、Q和R。使用三个字母代码用于氨基酸，相应的表达分别是34Glu、34Gln和34Arg。
通过“des7”或“(或 Des7)”指缺少N-末端氨基酸组氨酸的天然GLP-1。因此，例如des7GLP-1(7-37)是人GLP-1的类似物，其中7位的氨基酸被缺失。此类似物也被表示为GLP-1(8-37)。类似地，关于GLP-1(7-37)的类似物(des7+des8)；(des7, des8)；(des7-8)；或(Des7, Des8)(其中可以隐含对GLP-1(7-37)的引用)，指其中对应天然GLP-1的两个N-末端氨基酸组氨酸和丙氨酸的氨基酸已被缺失的类似物。此类似物也被表示为GLP-1(9-37)。
GLP-1类似物的实例是这些的，其中GLP-1(7-37)的37位甘氨酸用赖氨酸取代得到K37-GLP-1(7-37)。本发明的类似物的另一个非限制性实例是[Aib8,Arg34]GLP-1(7-37)，其表示GLP-1(7-37)类似物，其中8位的丙氨酸已用α-氨基异丁酸 (Aib)取代，并且34位的赖氨酸已用精氨酸取代。此类似物也表示为(8Aib, R34) GLP-1(7-37)。本发明的类似物的又另一个非限制性实例是[Aib8,Arg34,Lys37]GLP-1(7-37)，其表示GLP-1(7-37)类似物，其中8位的丙氨酸已用α-氨基异丁酸 (Aib)取代，34位的赖氨酸已用精氨酸取代，并且37位的甘氨酸已用赖氨酸取代。此类似物也表示为(8Aib, R34, K37) GLP-1(7-37)。本发明的类似物的再进一步的非限制性实例是包含Imp7和/或(Aib8 或S8)的类似物，其指这样的 GLP-1(7-37)类似物，其当与天然GLP-1比较时，包含7位组氨酸用咪唑丙酸(Imp)的取代；和/或8位丙氨酸用α-氨基异丁酸 (Aib)，或用丝氨酸的取代。
GLP-1类似物的进一步的实例包括：[Aib8,Arg34]GLP-1(7-37)、Arg34GLP-1(7-37)、[Aib8,Arg34,Lys37]GLP-1(7-37)。
如本文所用术语“GLP-1衍生物”指化学修饰的亲本GLP-1(7-37)或其类似物，其中一个或多个修饰以酰胺、碳水化合物、烷基基团、酰基基团、酯、PEG化，它们的组合等连接的形式。
在本发明的一个方面，所述一个或多个修饰包括侧链对GLP-1(7-37)或其类似物的连接。在一个具体的方面，所述侧链能够与白蛋白形成非共价聚集体，从而促进衍生物与血流的循环，并且还具有延长衍生物的作用时间的效果，由于这样GLP-1衍生物和白蛋白的聚集体仅缓慢崩解以释放活性成分的事实。因此，该取代基或侧链，作为一个整体，优选称为白蛋白结合部分。在具体的方面，该侧链具有至少10个碳原子，或至少12、14、16、18、20、22或至少24个碳原子。在进一步具体的方面，所述侧链可以进一步包括至少5个杂原子，具体是O和N，例如至少7、9、10、12、15、17或至少20个杂原子，例如至少1、2或3个N原子，和/或至少3、6、9、12或15个O原子。
在另一个具体方面，所述白蛋白结合部分包含具体对白蛋白结合和由此的延长相关的部分，该部分可以相应地称为“延长部分”。所述延长部分可以是在白蛋白结合部分相对其对肽的连接点的对侧端或对侧端附近。
在再进一步的具体方面中，所述白蛋白结合部分包含在延长部分和对肽的连接点之间的部分，该部分可被称为“接头”、“接头部分”、“间隔物”等。接头可以是任选的，并且因此在这种情况下，所述白蛋白结合部分可以与延长部分相同。
在具体的方面，所述白蛋白结合部分和/或所述延长部分是亲脂性的，和/或在生理pH(7.4)带负电荷。
所述白蛋白结合部分，延长部分或接头可以通过酰化共价连接到GLP-1肽的赖氨酸残基。附加的或可替代的缀合化学，包括烷基化、酯形成或酰胺形成，或偶联到半胱氨酸残基，如通过马来酰亚胺或卤代乙酰胺(如溴/氟/碘代)偶联。
在一个优选的方面，白蛋白结合部分的活性酯，优选包含延长部分和接头，在酰胺键的形成下(此过程被称为酰化)共价连接到赖氨酸残基的氨基，优选其ε氨基。
除非另有说明，当提及赖氨酸残基的酰化时，它被理解为是其ε-氨基基团。
对于本发明的目的，术语“白蛋白结合部分”、“延长部分”和“接头”可包括这些分子的未反应的，以及反应的形式。是否指一种或其它形式在其中该术语所使用的上下文是清楚的。
对于连接到GLP-1肽，脂肪酸的酸基团，或脂肪二酸的酸基团中的一个，与GLP-1肽中的赖氨酸残基的ε氨基形成酰胺键，优选通过接头。
术语“脂肪二酸”指如上文定义的脂肪酸，但在ω-位具有额外的羧酸基团。因此，脂肪二元酸是二羧酸。
本发明的衍生物的两个接头的每一个可以包括下列第一接头元件：
化学式IV：
其中k是1-5的范围的整数，并且n是1-5范围的整数。
在具体方面，当k=1并且n=1时，此接头元件可以表示为OEG，或8-氨基-3,6-二氧杂辛酸的二价基，和/或其可以通过下式表示：
化学式V：
。
在另一个具体方面，本发明的衍生物的每个接头可以进一步独立地包含，第二接头元件，优选Glu二价基，例如化学式VI和/或化学式VII：
化学式VI：
化学式VII：
，
其中Glu二价基可以被包括p次，其中p是1-3的范围的整数。
化学式VI还可以称为伽马-Glu，或简称γGlu，由于事实是其是氨基酸谷氨酸的γ羧基，其在此用于连接另一个接头元件或连接赖氨酸的ε-氨基。如上文所解释，其它接头元件可以，例如是另一个Glu残基，或OEG分子。Glu的氨基接下来与延长部分的羧基，或与例如OEG分子(如果存在)的羧基，或与例如另一个Glu(如果存在)的γ-羧基形成酰胺键。
化学式VII还可以称为阿尔法-Glu，或简称αGlu，或简单地Glu，由于事实是氨基酸谷氨酸的α羧基在此用于连接另一个接头元件或连接赖氨酸的ε-氨基。
上述化学式VI和化学式VII的结构涵盖Glu的L-形式，以及D-形式。在具体方面，化学式VI和/或化学式VII独立地是a)以L-形式，或b)以D-形式。
在又进一步的具体方面，所述接头具有a)5-41个C原子；和/或b)4-28个杂原子。
本发明的GLP-1衍生物在血浆中的浓度可以使用任何合适的方法确定。例如，可以使用LC-MS (液相层析质谱)，或免疫测定，例如RIA (放射免疫测定)、ELISA (酶联免疫吸附测定)和LOCI (光激化学发光免疫测定(Luminescence Oxygen ChannelingImmunoasssay))。用于合适RIA和ELISA测定的一般方案可参见例如W009/030738第116-118页。
GLP-1类似物和活化的侧链的缀合通过使用任何常规方法进行，例如如下列参考文献中所述(其也描述了用于聚合物分子活化的合适的方法)：R. F. Taylor, (1991), "Protein immobilisation。Fundamental and applications", Marcel Dekker, N.Y.; S.S. Wong, (1992), "Chemistry of Protein Conjugation and Crosslinking", CRCPress, Boca Raton; G. T. Hermanson 等, (1993), "Immobilized Affinity LigandTechniques", Academic Press, N.Y.)。本领域技术人员将认识到，所使用的活化方法和/或缀合化学依赖于多肽的一个或多个连接基团(其实施例在上文进一步给出)，以及该聚合物的官能团(例如，作为胺、羟基、羧基、醛基、巯基、琥珀酰亚胺基、马来酰亚胺、vinysulfone或卤代乙酸酯)。
在本发明的一个方面，所述活性成分是胰岛素肽。
如本文所用的术语“胰岛素肽”指具有胰岛素活性的人胰岛素或其类似物或衍生物的肽。
如本文所用术语“人胰岛素”指人胰岛素激素，其结构和性质是众所周知的。人胰岛素具有两条多肽链，称为A-链和B-链。A链是21个氨基酸的肽并且B链是30个氨基酸的肽，两条链通过二硫键连接：第一个键桥在A链的第7位半胱氨酸和B链的第7位半胱氨酸之间，并且第二个键桥在在A链的第20位半胱氨酸和B链的第19位半胱氨酸之间。第三个键桥存在于A链的第6位和第11位半胱氨酸之间。
在人体内，所述激素合成为单链前体胰岛素原(前胰岛素原)，由24个氨基酸的前肽随后是构象中含86个氨基酸的胰岛素原构成：前肽-B-Arg Arg-C-Lys Arg-A，其中C为31个氨基酸的连接肽。Arg-Arg和Lys-Arg是将连接肽从A和B链切割下来的切割位点。
根据本发明的胰岛素肽具有如下定义的至少2%胰岛素受体亲和力。
如本文所用术语“胰岛素类似物”指修饰的人胰岛素，其中胰岛素的一个或多个氨基酸残基被其它氨基酸残基取代和/或其中一个或多个氨基酸残基已经从胰岛素缺失和/或其中一个或多个氨基酸残基已被添加和/或插入到胰岛素。
在一方面，胰岛素类似物相对于人胰岛素包含10个氨基酸修饰(取代，缺失，添加(包括插入)和它们的任何组合)或者更少，可替代地9、8、7、6、5、4、3或2个修饰或更少，又可替代地相对于人胰岛素包含1个修饰。
胰岛素分子中的修饰通过说明链(A或B)位置和用于取代天然氨基酸残基的氨基酸残基的一个或三个字母代码来表示。
通过“连接肽”或“C-肽”指单链胰岛素原分子的B-C-A多肽序列的连接部分“C”。在人胰岛素链中，所述C-肽连接B链的30位和A链的1位，并且35个氨基酸长。连接肽包括两个末端二元氨基酸序列，例如，Arg-Arg和Lys-Arg，其作为切割位点用于将连接肽从A和B链切除以形成双链胰岛素分子。
通过“desB30”或“B(1-29)”指天然胰岛素B链或其缺少B30氨基酸的类似物，并且“A(1-21)”指天然胰岛素A链。因此，例如A14Glu,B25His,desB30人胰岛素是人胰岛素的类似物，其中A链中第14位氨基酸用谷氨酸取代，B链中第25位氨基酸用组氨酸取代，并且B链中第30位氨基酸被缺失。
本文术语如“A1”、“A2”和“A3”等分别指胰岛素A链(从N-末端计数)中第1、2和3位的氨基酸等。类似地，术语如“B1”、“B2”和“B3”等分别指胰岛素B链(从N-末端计数)中第1、2和3位的氨基酸等。使用一个字母代码用于氨基酸，术语如A21A、A21G和A21Q指在A21位置的氨基酸分别是A、G和Q。使用三个字母代码用于氨基酸，相应的表达分别是A21Ala、A21Gly和A21Gln。
胰岛素类似物的实例是这些，其中位置A14的氨基酸是Asn、Gln、Glu、Arg、Asp、Gly或His，位置B25的氨基酸是His并且其任选地进一步包含一个或多个额外的突变。此外，位置B16的氨基酸可以用Glu或His取代。胰岛素类似物的进一步的实例是缺失类似物，例如其中人胰岛素的B30氨基酸已缺失的类似物(des(B30)人胰岛素)、其中人胰岛素的B1氨基酸已缺失的类似物(des(B1)人胰岛素)、des(B28-B30)人胰岛素和desB27人胰岛素。其中A链和/或B链具有N-末端延伸的胰岛素类似物和其中A链和/或B链具有C-末端延伸(例如具有添加到B-链的C-末端的两个精氨酸残基)的胰岛素类似物也是胰岛素类似物的实例。进一步的实例是包含所提及突变的组合的胰岛素类似物。
胰岛素类似物的进一步的实例包括：DesB30人胰岛素；GluA14,HisB25 人胰岛素；HisA14,HisB25 人胰岛素；GluA14,HisB25,desB30 人胰岛素；HisA14, HisB25,desB30人胰岛素；GluA14,HisB25,desB27,desB28,desB29,desB30人胰岛素；GluA14,HisB25,GluB27,desB30人胰岛素；GluA14,HisB16,HisB25,desB30人胰岛素；HisA14,HisB16,HisB25,desB30 人胰岛素；HisA8,GluA14,HisB25,GluB27,desB30人胰岛素；HisA8,GluA14,GluB1,GluB16,HisB25,GluB27,desB30人胰岛素；HisA8,GluA14,GluB16,HisB25,desB30人胰岛素；GluA14,desB27, desB30人胰岛素；CysA10,GluA14,CysB3,HisB25,desB30人胰岛素；CysA10,GluA14,CysB3,HisB25,desB27,desB30人胰岛素；CysA10,GluA14,CysB4,HisB25,desB30人胰岛素；CysA10,GluA14,CysB4,HisB25,desB27,desB30人胰岛素；CysA10,GluA14,CysB4,desB27,desB30人胰岛素；人胰岛素；和CysA10,GluA14,CysB3,desB27,desB30人胰岛素。
如本文所用术语“胰岛素衍生物”指化学修饰的亲本胰岛素或其类似物，其中一个或多个修饰以酰胺、碳水化合物、烷基基团、酰基基团、酯、PEG化等连接的形式。
在本发明的一个方面，所述一个或多个修饰包括侧链对人胰岛素或其类似物的连接。在一个具体的方面，所述侧链能够与白蛋白形成非共价聚集体，从而促进衍生物与血流的循环，并且还具有延长衍生物的作用时间的效果，由于这样胰岛素衍生物和白蛋白的聚集体仅缓慢崩解以释放活性成分的事实。因此，该取代基或侧链，作为一个整体，优选称为白蛋白结合部分。在具体的方面，该侧链具有至少10个碳原子，或至少12、14、16、18、20、22或至少24个碳原子。在进一步具体的方面，所述侧链可以进一步包括至少5个杂原子，具体是O和N，例如至少7、9、10、12、15、17或至少20个杂原子，例如至少1、2或3个N原子，和/或至少3、6、9、12或15个O原子。
在另一个具体方面，所述白蛋白结合部分包含具体对白蛋白结合和由此的延长相关的部分，该部分可以相应地称为“延长部分”。所述延长部分可以是在白蛋白结合部分相对其对肽的连接点的对侧端或对侧端附近。
在再进一步的具体方面中，所述白蛋白结合部分包含在延长部分和对肽的连接点之间的部分，该部分可被称为“接头”、“接头部分”、“间隔物”等。接头可以是任选的，并且因此在这种情况下，所述白蛋白结合部分可以与延长部分相同。
在具体的方面，所述白蛋白结合部分和/或所述延长部分是亲脂性的，和/或在生理pH(7.4)带负电荷。
所述白蛋白结合部分，延长部分或接头可以通过酰化共价连接到人胰岛素或胰岛素类似物的赖氨酸残基。附加的或可替代的缀合化学，包括烷基化、酯形成或酰胺形成，或偶联到半胱氨酸残基，如通过马来酰亚胺或卤代乙酰胺(如溴/氟/碘代)偶联。
在一个方面，白蛋白结合部分的活性酯，优选包含延长部分和接头，在酰胺键的形成下(此过程被称为酰化)共价连接到赖氨酸残基的氨基，优选其ε氨基。
除非另有说明，当提及赖氨酸残基的酰化时，它被理解为是其ε-氨基基团。
对于本发明的目的，术语“白蛋白结合部分”、“延长部分”和“接头”可包括这些分子的未反应的，以及反应的形式。是否指一种或其它形式在其中该术语所使用的上下文是清楚的。
对于连接到人胰岛素或胰岛素类似物，脂肪酸的酸基团，或脂肪二酸的酸基团中的一个，与人胰岛素或胰岛素类似物中的赖氨酸残基的ε氨基形成酰胺键，优选通过接头。
术语“脂肪二酸”指如上文定义的脂肪酸，但在ω-位具有额外的羧酸基团。因此，脂肪二元酸是二羧酸。
本发明的衍生物的两个接头的每一个可以包括下列第一接头元件：
化学式IV：
其中k是1-5的范围的整数，并且n是1-5范围的整数。
在具体方面，当k=1并且n=1时，此接头元件可以表示为OEG，或8-氨基-3,6-二氧杂辛酸的二价基，和/或其可以通过下式表示：
化学式V：
。
在另一个具体方面，本发明的衍生物的每个接头可以进一步独立地包含，第二接头元件，优选Glu二价基，例如化学式VI和/或化学式VII：
化学式VI：
化学式VII:
，
其中Glu二价基可以被包括p次，其中p是1-3的范围的整数。
化学式VI还可以称为伽马-Glu，或简称γGlu，由于事实是氨基酸谷氨酸的γ羧基在此用于连接另一个接头元件或连接赖氨酸的ε-氨基。如上文所解释，其它接头元件可以，例如是另一个Glu残基，或OEG分子。Glu的氨基接下来与延长部分的羧基，或与例如OEG分子(如果存在)的羧基，或与例如另一个Glu(如果存在)的γ-羧基形成酰胺键。
化学式VII还可以称为阿尔法-Glu，或简称αGlu，或简单地Glu，由于事实是氨基酸谷氨酸的α羧基在此用于连接另一个接头元件或连接赖氨酸的ε-氨基。
上述化学式VI和化学式VII的结构涵盖Glu的L-形式，以及D-形式。在具体方面，化学式VI和/或化学式VII独立地是a)以L-形式，或b)以D-形式。
在又进一步的具体方面，所述接头具有a)5-41个C原子；和/或b)4-28个杂原子。
在包含根据本发明的N-末端修饰的肽或寡肽的药物组合物中使用的人胰岛素的衍生物和胰岛素类似物的衍生物的非限制性实例包括人胰岛素 B30 苏氨酸甲酯、GlyA21,ArgB31,Arg-酰胺B32 人胰岛素、NεB29-十四烷酰基 desB30 人胰岛素、NεB29-十四烷酰基 人胰岛素、NεB29-癸酰基 desB30 人胰岛素、NεB29-十二烷酰基 desB30 人胰岛素、NεB29-3-(2-{2-(2-甲氧基-乙氧基)-乙氧基}-乙氧基)-丙酰基人胰岛素、LysB29(Nε-十六烷二酰基-γGlu) des(B30) 人胰岛素)、NεB29–(Nα-(Sar-OC(CH2)13CO)-γGlu) desB30 人胰岛素、NεB29-ω-羧基-十五烷酰基-γ-L-谷氨酰胺 desB30 人胰岛素、NεB29-十六烷二酰基-γ-氨基-丁酰基desB30 人胰岛素、NεB29-十六烷二酰基-γ-L-Glu-酰胺 desB30 胰岛素、A14E,B25H,B29K(N(eps)十八烷二酰基-γGlu-OEG-OEG),desB30 人胰岛素、A14E,B16H,B25H,B29K((N(eps)二十烷二酰基-γGlu-[2-(2-{2-[2-(2-氨基乙氧基)乙氧基]乙酰氨基}乙氧基)乙氧基]乙酰基)),desB30 人胰岛素和A14E,B25H,desB27,B29K(N-(eps)-(十八烷二酰基-γGlu), desB30 人胰岛素。
术语“PEG化的胰岛素”指具有缀合到一个或多个氨基酸的PEG分子的胰岛素类似物。
术语“聚乙二醇”或“PEG”指聚乙二醇化合物或其衍生物。
为了实现一个或多个聚合物分子共价连接到胰岛素类似物，提供活化形式（即具有反应性官能团）的聚合物分子的羟基端基团。合适的活化的聚合物分子是可商购获得的，例如从Shearwater Corp., Huntsville, Ala., USA，或从PolyMASC Pharmaceuticalsplc, UK。可替代地，所述聚合物分子可以通过本领域已知的常规方法活化，例如，如WO 90/13540中所公开的。用于本发明的活化的线性或分支聚合物分子的具体实例描述于Shearwater Corp.公司的1997和2000目录(Functionalized Biocompatible Polymersfor Research and pharmaceuticals, Polyethylene Glycol and Derivatives, 通过引用并入本文)。活化的PEG聚合物的具体实例包括下列线性PEG：NHS-PEG (例如SPA-PEG、SSPA-PEG、SBA-PEG、SS-PEG、SSA-PEG、SC-PEG、SG-PEG和SCM-PEG)和NOR-PEG)、BTC-PEG、EPOX-PEG、NCO-PEG、NPC-PEG、CDI-PEG、ALD-PEG、TRES-PEG、VS-PEG、IODO-PEG和MAL-PEG，以及分支PEG，例如PEG2-NHS和美国专利号5,932,462和美国专利号5,643,575中公开的那些。
多肽和活化的聚合物分子的缀合通过使用任何常规方法进行，例如如下列参考文献中所述(其也描述了用于聚合物分子活化的合适的方法)：R. F. Taylor, (1991), "Protein immobilisation。Fundamental and applications", Marcel Dekker, N.Y.; S.S. Wong, (1992), "Chemistry of Protein Conjugation and Crosslinking", CRCPress, Boca Raton; G. T. Hermanson 等, (1993), "Immobilized Affinity LigandTechniques", Academic Press, N.Y.)。本领域技术人员将认识到，所使用的活化方法和/或缀合化学依赖于多肽的一个或多个连接基团(其实施例在上文进一步给出)，以及该聚合物的官能团(例如，作为胺、羟基、羧基、醛基、巯基、琥珀酰亚胺、马来酰亚胺、vinysulfone或卤代乙酸酯)。
口服药物组合物
口服药物组合物，可替代地称为口服药物制剂、口服组合物或口服制剂，其包含如本文所述的N-末端脂肪酸修饰的肽或寡肽也在本发明考虑之中。在一方面口服药物组合物是包含活性成分和本发明的N-末端脂肪酸修饰的肽或寡肽的组合物。在一方面口服药物组合物是包含活性成分、本发明的N-末端脂肪酸修饰的肽或寡肽和一种或多种额外的赋形剂的组合物。
在一方面口服药物组合物是包含活性成分、一种或多种脂质和本发明的N-末端脂肪酸修饰的肽或寡肽的组合物。
在一方面，包含活性成分和本发明的N-末端脂肪酸修饰的肽或寡肽的口服药物组合物是以固体剂型的形式。在一方面，包含活性成分和本发明的N-末端脂肪酸修饰的肽或寡肽的口服药物组合物是以片剂的形式。在一方面，包含活性成分和本发明的N-末端脂肪酸修饰的肽或寡肽的口服药物组合物在胶囊中递送。
如本文所用术语“赋形剂”宽泛地指除了活性成分和本发明的N-末端脂肪酸修饰的肽或寡肽之外的任何成分。所述赋形剂可以是惰性的物质，其是惰性的，即其本身基本上不具有任何治疗和/或预防效果。在一方面，包含本发明的N-末端脂肪酸修饰的肽或寡肽的口服药物组合物的额外的一种或多种赋形剂包括一种或多种稀释剂、一种或多种粘合剂、一种或多种颗粒剂、一种或多种助流剂(即流动助剂)、一种或多种润滑剂以确保有效的压片，一种或多种崩解剂以促进片剂在消化道中分解；一种或多种甜味剂、一种或多种调味剂和/或一种或多种颜料。本领域技术人员可以通过常规实验，没有任何不必要的负担关于固体口服剂型的特定所需性质选择一种或多种上述赋形剂。所用的每种赋形剂的量可以在本领域常规范围内变化。可用于配制口服药物组合物的技术和赋形剂描述于Handbook ofPharmaceutical Excipients, 6th edition, Rowe 等, Eds., AmericanPharmaceuticals Association and the Pharmaceutical Press, publicationsdepartment of the Royal Pharmaceutical Society of Great Britain (2009); 和Remington: the Science and Practice of Pharmacy, 21th edition, Gennaro, Ed.,Lippincott Williams & Wilkins (2005)。
在本发明的一个方面，聚合物包衣应用于所述口服药物组合物。
在本发明的一个方面，所述口服药物组合物以片剂形式，并且所述片剂的重量在150 mg-1000 mg的范围，例如300-600 mg或例如300-500 mg的范围。
在本发明的一个方面，所述活性成分以组合物中成分的总量的0.1-30 % (w/w)的浓度存在于药物组合物中。在另一方面，所述活性成分以0.5-20 % (w/w)的浓度存在。在另一方面，所述活性成分以1-10 % (w/w)的浓度存在。
在本发明的一个方面，所述活性成分以0.2 mM-100 mM的浓度存在于药物组合物中。在另一方面，所述活性成分以0.5-70 mM的浓度存在。在另一方面，所述活性成分以0.5-35 mM的浓度存在。在另一方面，所述活性成分以1-30 mM的浓度存在。
本文使用术语“脂质”用于相比与水更容易与油混合的物质、材料或成分。脂质是在水中不可溶的或几乎不可溶的但是容易溶于油或其它非极性溶剂。
用于包含活性成分和本发明的N-末端脂肪酸修饰的肽或寡肽的药物组合物的脂质可以包含一种或多种亲脂性物质，即与油而不是与水形成均匀混合物的物质。多种脂质可以构成非水性液体药物组合物的亲脂相和形成油方面。在室温下，所述脂质可以是固体，半固体或液体。例如，固体脂质可以作为糊状，颗粒状，粉末状或薄片状存在。如果超过一种赋形剂包含脂质，则所述脂质可以是液体，固体或两者的混合物。
固体脂质的实例，即在室温下为固体或半固体的脂类，包括但不限于下列：
1. 甘油单酯、二酯和三酯的混合物，例如氢化椰油甘油酯(约33.5℃-约37℃的熔点(m.p.))，可作为WITEPSOL HI5商购获自Sasol Germany (Witten, Germany)；脂肪酸甘油三酯的实例例如C10-C22脂肪酸甘油三酯包括天然和氢化的油，例如植物油；
2. 酯，例如丙二醇(PG)硬脂酸酯, 可作为MONOSTEOL (约33℃-约36℃的m.p.)商购获自Gattefosse Corp. (Paramus, NJ)；二乙二醇棕榈硬脂酸(diethylene glycolpalmito stearate)可作为HYDRINE (约44.5℃-约48.5℃的m.p.)商购获自GattefosseCorp.；
3. 聚糖基化的饱和甘油酯，如氢化棕榈/棕榈仁油PEG-6酯 (约30.5℃-约38℃的m.p.)，可作为LABRAFIL M2130 CS商购获自Gattefosse Corp.或作为Gelucire 33/01商购获得；
4. 脂肪醇，例如肉豆蔻醇 (约39℃的m.p.)可作为LANETTE 14商购获自CognisCorp. (Cincinnati, OH)；脂肪酸与脂肪醇的酯，例如十六烷基棕榈酸酯 (约50℃的m.p.); 异山梨醇单月桂酸酯，例如可在商品名ARLAMOL ISML下商购获自Uniqema (NewCastle, Delaware)，例如具有约43℃的m.p.；
5. PEG-脂肪醇醚，包括聚氧乙烯(2)十六烷基醚，例如可作为BRlJ 52商购获自Uniqema，具有约33℃的m.p.，或聚氧乙烯(2)硬脂基醚，例如可作为BRIJ 72商购获自Uniqema，具有约43℃的m.p.；
6. 脱水山梨醇酯，例如脱水山梨醇脂肪酸酯，例如脱水山梨醇单棕榈酸酯或脱水山梨醇单硬脂酸酯，例如可作为SPAN 40或SPAN 60商购获自Uniqema，并分别具有约43℃-48℃或约53℃-57℃和约41℃-54℃的m.p.；和
7. 甘油单-C6-C14-脂肪酸酯。这些通过酯化甘油与植物油随后是分子蒸馏而获得。甘油单酯包括，但不限于，对称的(即β-甘油单酯)以及不对称的甘油单酯(α-甘油单酯)。它们还包括均匀的甘油酯类(其中脂肪酸组分主要由单一的脂肪酸构成)和混合的甘油酯(即其中脂肪酸组分由多种脂肪酸构成)。脂肪酸组分可以包括具有例如C8-C14的链长的饱和和不饱和脂肪酸。特别合适的是甘油单月桂酸酯，例如可作为IMWITOR 312商购获自Sasol North America (Houston, TX)，(约56℃-约60℃的m.p.)；甘油单二椰油酸酯，可作为IMWITOR 928商购获自Sasol (约33℃-约37℃的m.p.)；柠檬酸单甘油酯，可作为IMWITOR370商购获得，(约59℃-约63℃的m.p.)；或甘油单硬脂酸酯，例如可作为IMWITOR 900商购获自Sasol (约56℃-约61℃的m.p.)；或自乳化甘油单硬脂酸酯，例如可作为IMWITOR 960商购获自Sasol(约56℃-约61℃的m.p.)。
液体和半固体脂质的实例，即在室温下为液体或半固体的脂质，包括但不限于下列：
1. 甘油单酯、二酯和三酯的混合物，例如中链甘油单酯和甘油二酯，甘油辛酸酯/癸酸酯，可作为CAPMUL MCM商购获自Abitec Corp. (Columbus, OH)；和甘油单辛酸酯，可作为RYLO MG08 Pharma商购获得，以及甘油单癸酸酯，可作为RYLO MG10 Pharma商购获自DANISCO。
2. 甘油单或二脂肪酸酯，例如C6-C18，例如C6-C16，例如C8-C10，例如C8脂肪酸，或其乙酰化的衍生物，例如MYVACET 9-45或9-08来自Eastman Chemicals (Kingsport,TN)或IMWITOR 308或312来自Sasol；
3. 丙二醇单或二脂肪酸酯，例如C8-C20，例如C8-C12脂肪酸，例如LAUROGLYCOL90，SEFSOL 218或CAPRYOL90或CAPMUL PG-8(与丙二醇辛酸酯相同)来自Abitec Corp.或Gattefosse；
4. 油，如红花油、芝麻油、杏仁油、花生油、棕榈油、小麦胚芽油、玉米油、蓖麻油、椰子油、棉籽油、大豆油、橄榄油和矿物油；
5. 脂肪酸或醇，例如C8-C20，饱和的或单- 或二- 不饱和的，如油酸、油醇、亚油酸、癸酸、辛酸、己酸、十四醇、十二醇、癸醇；
6. 中链脂肪酸甘油三酯，例如C8-C12，例如MIGLYOL812，或长链脂肪酸甘油三酯，例如植物油；
7. 酯基转移的乙氧基化植物油，例如可作为LABRAFIL M2125 CS商购获自Gattefosse Corp；
8. 酯化的脂肪酸和伯醇化合物，例如C8-C20脂肪酸和C2-C3醇，例如亚油酸乙酯，例如可作为NIKKOL VF-E商购获自Nikko Chemicals (Tokyo, Japan)、丁酸乙酯、辛酸油酸乙酯、油酸乙酯、肉豆蔻酸异丙酯和辛酸乙酯；
9. 精油，或任何一类给予植物其特征气味的挥发性油，如留兰香油、丁香油、柠檬油和薄荷油；
10. 精油的级分或组分，例如薄荷醇、香芹酚和百里酚；
11. 合成油，如三醋精，三丁酸甘油酯；
12. 柠檬酸三乙酯、乙酰柠檬酸三乙酯、柠檬酸三丁酯、乙酰柠檬酸三丁酯；
13. 聚甘油脂肪酸酯，例如二甘油单油酸酯，如来自Nikko Chemicals的DGMO-C、DGMO-90、DGDO；和
14. 脱水山梨醇酯，例如脱水山梨醇脂肪酸酯，例如脱水山梨醇单月桂酸酯，例如可作为SPAN 20商购获自Uniqema。
15. 磷脂，例如烷基-O-磷脂、二酰基磷脂酸、二酰基磷脂酰胆碱、二酰基磷脂酰乙醇胺、二酰基磷脂酰甘油、二-O-烷基磷脂酸、L-α-溶血磷脂酰胆碱(LPC)、L-α-溶血磷脂酰乙醇胺(LPE)、L-α-溶血磷脂酰甘油(LPG)、L-α-溶血磷脂酰肌醇(LPI)、L-α-磷脂酸(PA)、L-α-磷脂酰胆碱(PC)、L-α-磷脂酰乙醇胺(PE)、L-α-磷脂酰甘油(PG)、心磷脂(CL)、L-α-磷脂酰肌醇(PI)、L-α-磷脂酰丝氨酸(PS)、溶血磷脂酰胆碱、溶血磷脂酰甘油、sn-甘油磷酰胆碱可商购获自LARODAN，或大豆磷脂(类脂S100)可商购获自Lipoid GmbH。
16. 聚甘油脂肪酸酯，如聚甘油油酸酯 (Plurol Oleique来自Gattefosse)。
在本发明的一个方面，所述脂质是选自甘油单酯、甘油二酯和甘油三酯的一种或多种。在进一步的方面，所述脂质是选自甘油单酯和甘油二酯的一种或多种。在又进一步的方面，所述脂质是Capmul MCM或Capmul PG-8。在再进一步的方面，所述脂质是Capmul PG-8。在进一步的方面，所述脂质是甘油单辛酸酯(Rylo MG08 Pharma from Danisco)。
在一方面，用于包含活性成分和本发明的N-末端脂肪酸修饰的肽或寡肽的药物组合物的脂质选自：甘油单辛酸酯(例如，如Rylo MG08 Pharma)和甘油单癸酸酯(例如，如Rylo MG10 Pharma from Danisco)。在另一方面，所述脂质选自： 丙二醇辛酸酯 (例如，如Capmul PG8来自Abitec或Capryol PGMC，或Capryol 90来自Gattefosse)。
在本发明的一个方面，所述脂质以组合物中成分包括活性成分的总量的10%-90 %(w/w)的浓度存在于药物组合物中。在另一方面，所述脂质以10-80 % (w/w)的浓度存在。在另一方面，所述脂质以10-60 % (w/w)的浓度存在。在另一方面，所述脂质以15-50 % (w/w)的浓度存在。在另一方面，所述脂质以15-40 % (w/w)的浓度存在。在另一方面，所述脂质以20-30 % (w/w)的浓度存在。在另一方面，所述脂质以约25 % (w/w)的浓度存在。
在本发明的一个方面，所述脂质以组合物中成分包括活性成分的总量的100 mg/g-900 mg/g的浓度存在于药物组合物中。在另一方面，所述脂质以100-800 mg/g的浓度存在。在另一方面，所述脂质以100-600 mg/g的浓度存在。在另一方面，所述脂质以150-500mg/g的浓度存在。在另一方面，所述脂质以150-400 mg/g的浓度存在。在另一方面，所述脂质以200-300 mg/g的浓度存在。在另一方面，所述脂质以约 250 mg/g的浓度存在。
在本发明的一个方面，所述助溶剂以组合物中成分包括活性成分的总量的0%-30% (w/w)的浓度存在于药物组合物中。在另一方面，所述助溶剂以5-30 % (w/w)的浓度存在。在另一方面，所述助溶剂以10-20 % (w/w)的浓度存在。
在本发明的一个方面，所述助溶剂以组合物中成分包括活性成分的总量的0 mg/g-300 mg/g的浓度存在于药物组合物中。在另一方面，所述助溶剂以50 mg/g-300 mg/g的浓度存在。在另一方面，所述助溶剂以100-200 mg/g的浓度存在。
在本发明的一个方面，所述口服药物组合物不包含具有低于7的HLB的油或任何其它脂质组分或表面活性剂。在进一步的方面，所述组合物不包含具有低于8的HLB的油或任何其它脂质组分或表面活性剂。在又进一步的方面，所述组合物不包含具有低于9的HLB的油或任何其它脂质组分或表面活性剂。在又进一步的方面，所述组合物不包含具有低于10的HLB的油或任何其它脂质组分或表面活性剂。
本发明的液体非水性药物组合物的每种非离子表面活性剂的亲水-亲油平衡(HLB)高于10，由此实现高胰岛素肽(如N-末端修饰的胰岛素)载药量和高口服生物利用度。在一方面，根据本发明的非离子表面活性剂是具有高于11的HLB的非离子表面活性剂。在一方面，根据本发明的非离子表面活性剂是具有高于12的HLB的非离子表面活性剂。
如本文所用术语“约”指在合理的规定数值的附近，例如加或减10％。
用作包含本发明的N-末端脂肪酸修饰的肽或寡肽和活性成分的药物组合物的液体药物组合物的非限制性实例可以例如见于专利申请WO 08/145728、WO 2010/060667和WO2011/086093。
包含本发明的N-末端脂肪酸修饰的肽或寡肽的口服药物组合物的口服生物利用度和吸收动力学可以根据如本文所述的测定(I)来确定。
测定 (I)：对比格犬的口服施用
动物、给药和血液采样：研究中包括在研究期间重6-17 kg的比格犬。所述犬在禁食状态下给药。所述口服药物组合物通过单一口服给药施用于8只狗的组中的狗。在下列时间点取血样：给药前，给药后0.25、0.5、0.75、1、1.5、2、2.5、3、4、6、8、24、48、72、96、120、144、192和240小时。静脉内溶液(20 nmol/mL，在包含0.1 mg/ml聚山梨醇酯20(吐温20)、5.5 mg/ml酚、1.42 mg/ml Na2HPO4和14 mg/ml丙二醇的pH 7.4溶液中)在一个给药组(n=8)的相同狗群体中以0.1 mL/kg的剂量体积给药。在下列时间点取血样：给药前，给药后0.25、0.5、0.75、1、1.5、2、2.5、3、4、6、8、24、48、72、96、120、144、192和240小时。
血浆的制备：所有血样收集到包含用于稳定化的乙二胺四乙酸(EDTA)的试管中，并保持在冰上直至离心。通过离心从全血分离血浆，并且血浆贮存在-20℃或更低直至分析。
血浆样品的分析：使用光激化学发光免疫测定(LOCI)分析血浆的活性成分。所述LOCI测定利用包被链霉亲和素的供体小珠和缀合结合活性成分的中分子区域的单克隆抗体的受体小珠。对于N-末端表位特异性的另一单克隆抗体是生物素化的。在测定中，所述三种反应物与活性成分组合，其形成两位点免疫复合物。复合物的光照从供体小珠释放单线态氧原子，其渠道进入受体小珠并触发化学发光，其在EnVision读板器中测量。光的量与活性成分的浓度成比例并且在血浆中定量的下限(LLOQ)为100pM。
通过下列非限制性实施方案进一步描述本发明：
1.N-末端酰化的肽或寡肽，具有结构
其中Cx是具有6-20个碳原子长度的脂肪酸，并且
其中Aaa1是芳香族氨基酸；Aaa2是除了Lys或Asp之外的任何氨基酸；Aaa3是任何氨基酸；Aaa4-10各自是任何氨基酸或不存在。
2.根据实施方案1的N-末端酰化的肽或寡肽，其中Aaa1是Tyr、Trp或Phe。
3.根据实施方案1或2的N-末端酰化的肽或寡肽，其中Aaa1是Trp。
4.根据实施方案1或2的N-末端酰化的肽或寡肽，其中Aaa1是Phe。
5.根据实施方案1或2的N-末端酰化的肽或寡肽，其中Aaa1是Tyr。
6.根据前述实施方案任一项的N-末端酰化的肽或寡肽，其中Aaa2是除了Lys、Asp、Glu和Asn之外的任何氨基酸。
7.根据前述实施方案任一项的N-末端酰化的肽或寡肽，其中Aaa2是Pro、Leu、OEG([2-(2-氨基乙氧基)乙氧基]乙基羰基)、γGlu或βAsp。
8.根据前述实施方案任一项的N-末端酰化的肽或寡肽，其中Aaa2是Pro或Leu。
9.根据前述实施方案任一项的N-末端酰化的肽或寡肽，其中Aaa2是OEG、γGlu或βAsp。
10.根据前述实施方案任一项的N-末端酰化的肽或寡肽，其中Aaa3是Arg、Lys、His、Trp、Tyr、Phe、OEG、γGlu或βAsp。
11.根据前述实施方案任一项的N-末端酰化的肽或寡肽，其中Aaa3是Arg、Lys、His、Trp、Tyr或Phe。
12.根据前述实施方案任一项的N-末端酰化的肽或寡肽，其中Aaa3是OEG、γGlu或βAsp。
13.根据前述实施方案任一项的N-末端酰化的肽或寡肽，其中Aaa4是任何氨基酸。
14.根据前述实施方案任一项的N-末端酰化的肽或寡肽，其中Aaa4是OEG、γGlu或βAsp。
15.根据前述实施方案任一项的N-末端酰化的肽或寡肽，其中Aaa5是任何氨基酸。
16.根据前述实施方案任一项的N-末端酰化的肽或寡肽，其中Aaa6是任何氨基酸。
17.根据前述实施方案任一项的N-末端酰化的肽或寡肽，其中Aaa7是任何氨基酸。
18.根据前述实施方案任一项的N-末端酰化的肽或寡肽，其中Aaa8是任何氨基酸。
19.根据前述实施方案任一项的N-末端酰化的肽或寡肽，其中Aaa9是任何氨基酸。
20.根据前述实施方案任一项的N-末端酰化的肽或寡肽，其中Aaa4不存在。
21.根据前述实施方案任一项的N-末端酰化的肽或寡肽，其中Aaa5不存在。
22.根据前述实施方案任一项的N-末端酰化的肽或寡肽，其中Aaa6不存在。
23.根据前述实施方案任一项的N-末端酰化的肽或寡肽，其中Aaa7不存在。
24.根据前述实施方案任一项的N-末端酰化的肽或寡肽，其中Aaa8不存在。
25.根据前述实施方案任一项的N-末端酰化的肽或寡肽，其中Aaa9不存在。
26.根据前述实施方案任一项的N-末端酰化的肽或寡肽，其中Aaa10是除了Lys之外的任何氨基酸。
27.根据前述实施方案任一项的N-末端酰化的肽或寡肽，其中Aaa10是Leu、Thr、Lys、Arg、His、OEG、γGlu或βAsp。
28.根据前述实施方案任一项的N-末端酰化的肽或寡肽，其中Aaa10是Leu、Thr、Lys、Arg或His。
29.根据前述实施方案任一项的N-末端酰化的肽或寡肽，其中Aaa10是Leu、Lys、Arg或His。
30.根据前述实施方案任一项的N-末端酰化的肽或寡肽，其中Aaa10是Leu、Thr、Arg或His。
31.根据前述实施方案任一项的N-末端酰化的肽或寡肽，其中Aaa10是Lys、Arg或His。
32.根据前述实施方案任一项的N-末端酰化的肽或寡肽，其中Aaa10是除了碱性氨基酸之外的任何氨基酸。
33.根据前述实施方案任一项的N-末端酰化的肽或寡肽，其中Aaa10是碱性氨基酸。
34.根据前述实施方案任一项的N-末端酰化的肽或寡肽，其中Aaa10是OEG、γGlu或βAsp。
35.根据前述实施方案任一项的N-末端酰化的肽或寡肽，其中Aaa8-9不存在。
36.根据前述实施方案任一项的N-末端酰化的肽或寡肽，其中Aaa7-9不存在。
37.根据前述实施方案任一项的N-末端酰化的肽或寡肽，其中Aaa6-9不存在。
38.根据前述实施方案任一项的N-末端酰化的肽或寡肽，其中Aaa5-9不存在。
39.根据前述实施方案任一项的N-末端酰化的肽或寡肽，其中Aaa4-9不存在。
40.根据前述实施方案任一项的N-末端酰化的肽或寡肽，其中Aaa3-9不存在。
41.根据前述实施方案任一项的N-末端酰化的肽或寡肽，其中所述氨基酸是L或D氨基酸。
42.根据前述实施方案任一项的N-末端酰化的肽或寡肽，其中所述氨基酸是L氨基酸。
43.根据前述实施方案任一项的N-末端酰化的肽或寡肽，其中所述氨基酸是D氨基酸。
44.根据前述实施方案任一项的N-末端酰化的肽或寡肽，其中所述脂肪酸的长度是8-20个碳原子。
45.根据前述实施方案任一项的N-末端酰化的肽或寡肽，其中所述脂肪酸的长度是10-20个碳原子。
46.根据前述实施方案任一项的N-末端酰化的肽或寡肽，其中所述脂肪酸的长度是10-18个碳原子。
47.根据前述实施方案任一项的N-末端酰化的肽或寡肽，其中所述脂肪酸的长度是10-16个碳原子。
48.根据前述实施方案任一项的N-末端酰化的肽或寡肽，其中所述脂肪酸的长度是10-14个碳原子。
49.根据前述实施方案任一项的N-末端酰化的肽或寡肽，其中所述脂肪酸的长度是12-20个碳原子。
50.根据前述实施方案任一项的N-末端酰化的肽或寡肽，其中所述脂肪酸的长度是12-16个碳原子。
51.根据前述实施方案任一项的N-末端酰化的肽或寡肽，其中所述脂肪酸的长度是12-14个碳原子。
52.根据前述实施方案任一项的N-末端酰化的肽或寡肽，其中所述脂肪酸的长度是14-16个碳原子。
53.根据前述实施方案任一项的N-末端酰化的肽或寡肽，其中所述脂肪酸的长度是20个碳原子。
54.根据前述实施方案任一项的N-末端酰化的肽或寡肽，其中所述脂肪酸的长度是18个碳原子。
55.根据前述实施方案任一项的N-末端酰化的肽或寡肽，其中所述脂肪酸的长度是16个碳原子。
56.根据前述实施方案任一项的N-末端酰化的肽或寡肽，其中所述脂肪酸的长度是14个碳原子。
57.根据前述实施方案任一项的N-末端酰化的肽或寡肽，其中所述脂肪酸的长度是12个碳原子。
58.根据前述实施方案任一项的N-末端酰化的肽或寡肽，其中所述脂肪酸的长度是10个碳原子。
59.根据前述实施方案任一项的N-末端酰化的肽或寡肽，其中所述脂肪酸的长度是16个碳原子，并且氨基酸Aaa4-9不存在。
60.根据前述实施方案任一项的N-末端酰化的肽或寡肽，其中所述脂肪酸的长度是16个碳原子，并且氨基酸Aaa5-9不存在。
61.根据前述实施方案任一项的N-末端酰化的肽或寡肽，其中所述脂肪酸的长度是16个碳原子，并且氨基酸Aaa6-9不存在。
62.根据前述实施方案任一项的N-末端酰化的肽或寡肽，其中所述脂肪酸的长度是14个碳原子，并且氨基酸Aaa4-9不存在。
63.根据前述实施方案任一项的N-末端酰化的肽或寡肽，其中所述脂肪酸的长度是14个碳原子，并且氨基酸Aaa5-9不存在。
64.根据前述实施方案任一项的N-末端酰化的肽或寡肽，其中所述脂肪酸的长度是14个碳原子，并且氨基酸Aaa6-9不存在。
65.根据前述实施方案任一项的N-末端酰化的肽或寡肽，其中所述脂肪酸的长度是12个碳原子，并且氨基酸Aaa4-9不存在。
66.根据前述实施方案任一项的N-末端酰化的肽或寡肽，其中所述脂肪酸的长度是12个碳原子，并且氨基酸Aaa5-9不存在。
67.根据前述实施方案任一项的N-末端酰化的肽或寡肽，其中所述脂肪酸的长度是12个碳原子，并且氨基酸Aaa6-9不存在。
68.根据前述实施方案任一项的N-末端酰化肽或寡肽，其是来自胃肠道(GI道)的提取物中蛋白水解活性的抑制剂。
69.根据任一前述实施方案的N-末端酰化的肽或寡肽，其是蛋白水解活性，例如胰蛋白酶、胰凝乳蛋白酶、弹性蛋白酶、羧肽酶和/或氨肽酶的蛋白水解活性的抑制剂。
70.根据前述实施方案任一项的N-末端酰化肽或寡肽，其是胰蛋白酶、胰凝乳蛋白酶、弹性蛋白酶和/或GI道的提取物的蛋白水解活性的抑制剂。
71.根据前述实施方案任一项的N-末端酰化肽或寡肽，其是胰蛋白酶、胰凝乳蛋白酶和/或GI道的提取物的蛋白水解活性的抑制剂。
72.根据前述实施方案任一项的N-末端酰化的肽或寡肽，其是胰凝乳蛋白酶活性的抑制剂。
73.根据前述实施方案任一项的N-末端酰化的肽或寡肽，其是胰蛋白酶活性的抑制剂。
74.根据前述实施方案任一项的N-末端酰化的肽或寡肽，其是吸收增强剂，可用于活性成分的口服递送，所述活性成分是肽或蛋白。
75.根据前述实施方案任一项的N-末端酰化的肽或寡肽，其是吸收增强剂，可用于胰岛素肽或GLP-1肽的口服递送。
76.根据前述实施方案任一项的N-末端酰化的肽或寡肽，其是吸收增强剂，可用于胰岛素肽的口服递送。
77.根据前述实施方案任一项的N-末端酰化的肽或寡肽，其是吸收增强剂，可用于GLP-1肽的口服递送。
78.口服药物组合物，其包含根据前述实施方案任一项的N-末端酰化的肽或寡肽。
79.根据实施方案78的口服药物组合物，其进一步包含药物活性成分，所述药物活性成分是肽或蛋白。
80.根据实施方案78的口服药物组合物，其进一步包含药物活性成分，所述药物活性成分选自：胰岛素肽和GLP-1肽。
81.根据实施方案78的口服药物组合物，其进一步包含药物活性成分，所述药物活性成分是胰岛素肽。
82.根据实施方案78的口服药物组合物，其进一步包含药物活性成分，所述药物活性成分是GLP-1肽。
83.根据实施方案78-82任一项的口服药物组合物，其是液体组合物。
84.根据实施方案78-82任一项的口服药物组合物，其是固体组合物。
实施例
通过举例说明而非限制的方式，提供下列实施例。
本文所用缩略语如下：
γGlu：伽玛L-谷氨酰，
βAsp：贝塔L-天冬氨酰，
HCl：盐酸，
MeCN：乙腈，
OEG：[2-(2-氨基乙氧基)乙氧基]乙基羰基，
RPC：反相层析，
RT：室温，
TFA：三氟乙酸，
GI：胃肠，
Fmoc：芴基，
TRIS：三羟甲基氨基甲烷
CH3CN：乙腈，
HPLC：高效液相层析，
FPLC：快速蛋白液相层析，
RP：反相，
UV：紫外线(光),
LC-MS：液相层析——质谱，
NMR：核磁共振，
TLC：薄层层析，
FRET：福斯特共振能量转移，
MCA基团：7-甲氧基香豆素-4-乙酸，
DNP：2,4-二硝基酚，
GLP-1：胰高血糖素样肽-1，
GI 汁：胃肠汁，
HI：人胰岛素，
OtBu：叔丁基酯，
Pbf：2,2,4,6,7-五甲基-二氢苯并呋喃-5-磺酰基。
下列实施例和一般方法涉及在本说明书和在合成方案中鉴定的中间体化合物和终产物。本发明的化合物的制备使用下面的实施例进行详细描述，但所描述的化学反应就它们对本发明化合物制备的一般适用性进行公开。偶尔，如上所述的反应可能不适用于包括在本发明所公开的范围内的每个化合物。对于发生这种情况的化合物将被本领域技术人员容易地识别。在这些情况下，所述反应可通过本领域技术人员已知的常规修改成功进行，也就是通过干扰基团的适当保护，通过改变为其它常规试剂，或通过反应条件的常规修改。可替代地，本文或以其它方式常规公开的其它反应将适用于本发明的相应化合物的制备。在所有制备方法中，所有的原料都是已知的或可容易地从已知的原料制备。所有的温度都以摄氏度描述，并且除非另有说明，当提及产率时所有的份数和百分数指以重量计，并且当提及溶剂和洗脱液时，所有的份数都是以体积计。
固相肽合成 - 通用步骤1
这是可用于制备本发明的寡肽的合成步骤的一个实例。确切的条件可进行调节，例如，合成的规模可以进行调节，以适应所要求的量和/或树脂，并且中间体肽可以进一步分成几部分随后加入不同氨基酸以获得不同的肽。
树脂的洗涤和第一个氨基酸的偶联。
2-氯三苯甲基树脂100-200目1.7mmol/g(2.31g，3.93mmol)置于干燥的二氯甲烷(12mL)中溶胀20分钟。将Fmoc保护的氨基酸(2.62mmol)和N,N-二异丙基乙胺(1.74mL，9.96mmol)在干燥的二氯甲烷(4mL)中的溶液加入到树脂，并振荡该混合物4小时。过滤树脂并用N,N-二异丙基乙胺(0.91mL，5.24mmol)在甲醇/二氯甲烷混合物(4:1，2×20mL，2×5分钟)中的溶液处理。然后用N,N-二甲基甲酰胺(2×20mL)、二氯甲烷(2×20mL)和N,N-二甲基甲酰胺(3×20 mL)洗涤树脂。使用典型的位点链保护基，例如FMOC-Glu-OtBu、FMOC-Arg-PBF-OH、FMOC-OEG-OH。
树脂的脱保护和另一个氨基酸的偶联(此步骤重复进行，直到所希望的序列组装 在树脂上)。
通过用在二甲基甲酰胺中的20％哌啶处理(2×20mL，1×5分钟，1×30分钟)除去Fmoc基团。然后用N,N-二甲基甲酰胺(3×20mL)、2-丙醇(2×20mL)和二氯甲烷(3×20 mL)洗涤树脂。将Fmoc保护的氨基酸(3.93mmol)、O-(6-氯-苯并三唑-1-基)-N,N,N',N'-四甲基脲四氟硼酸盐(TCTU，1.40g，3.93mmol)和N,N-二异丙基乙胺(1.23mL，7.08mmol)在N,N-二甲基甲酰胺(10mL)中的溶液加入到树脂，并摇动混合物1小时。过滤树脂并用N,N-二甲基甲酰胺(2×20mL)、二氯甲烷(2×20mL)和N,N-二甲基甲酰胺(20 mL)洗涤树脂。
树脂的脱保护和脂肪酸的偶联。
树脂分为2等份。用在二甲基甲酰胺中的20％哌啶处理(2×20mL，1×5分钟，1×30分钟)一半树脂(1.31mmol)。然后用N,N-二甲基甲酰胺(3×20mL)、2-丙醇(2×20mL)和二氯甲烷(3×20 mL)洗涤树脂。将脂肪酸(一元羧酸；3.93mmol)、O-(6-氯-苯并三唑-1-基)-N, N,N',N'-四甲基脲四氟硼酸盐(TCTU，1.40g，3.93mmol)和N,N-二异丙基乙胺(1.23mL，7.08mmol)在二氯甲烷/N,N-二甲基甲酰胺混合物(4：1，10mL)中的溶液加入到树脂(1.31mmol)，并摇动混合物1小时。过滤树脂并用N,N-二甲基甲酰胺(3×20mL)、二氯甲烷(2×20mL)、甲烷(2×20mL)和二氯甲烷(7×20 mL)洗涤树脂。
从树脂切割——方法1。
产物通过用2,2,2-三氟乙醇(20mL)处理18小时从树脂上切割。滤除树脂并用二氯甲烷(2×20mL)、2-丙醇/二氯甲烷混合物(1:1，2×20mL)、2-丙醇(20mL)和二氯甲烷(3×20mL)洗涤。去除溶剂并将己烷(20mL)加入到残余物中。搅拌6小时后，过滤固体，用己烷洗涤并真空干燥，以得到标题产物，为白色粉末。
从树脂上切割 - 方法2。
通过用三氟乙酸(9.25mL)、水(250μL)和三乙基硅烷(500μL)的混合物处理3小时将产物从树脂(0.74mmol)切割。滤除树脂并用三氟乙酸(20mL)洗涤。通过加入己烷/二乙醚混合物(1:2，100mL)将产物从溶液中沉淀，并通过过滤收集。将产物溶解于氯仿(30mL)，并除去溶剂。此步骤重复10次，以除去痕量的三氟乙酸。将己烷/二乙醚(50mL)加入到残余物中，过滤形成的固体，并用己烷洗涤和真空干燥。
肽酸到钠盐的转化。
肽酸(275mg，357μmol)溶解于70％乙腈水溶液(50mL)中，并用氢氧化钠的0.1M水溶液(3.57mL，调整氢氧化钠的量，以适应肽中羧酸的数量)中和。然后将溶液冷冻干燥，以获得肽的钠盐，为白色细粉末。
平行固相肽合成 - 通用步骤2
在1g的三苯甲基树脂(Novabiochem)上偶联10当量的Fmoc-Tyr(tbu)-OH(Novabiochem)，用二氯甲烷(DCM)中1当量的Fmoc-Tyr(3-硝基)-OH和20当量二异丙基胺(DIPEA)进行1小时。树脂用NMP简要地洗涤，并然后分散到96孔微量滴定过滤板(Nunc)中。该过滤器板装置到来自Intavis(德国)的Multipep RS仪器。允许合成步骤如下进行：1)脱保护：用多通道移液器(multipipette)歧管向每个孔中加入200μl的NMP中25％哌啶2+10分钟。然后将各孔用NMP洗涤：首先1000ml然后150 μl三次，用多通道移液器歧管。2)偶联步骤：给定体积的Fmoc-AA-OH作为0.3M的溶液，在NMP中的0.3M Oxyma Pure溶液(Novabiochem)中用三分之一体积的在NMP中的1M二异丙基碳二亚胺(DIC)溶液和三分之一体积的在NMP中的1M可力丁溶液进行预活化2分钟。然后总共125μl的活化的Fmoc-AA-OH被加入到每个孔中，并允许偶联30分钟。此步骤重复两次，但是偶联时间分别增加到60和120分钟。合成中使用的氨基酸如下：Fmoc-Ala-OH、Fmoc-Gly-OH、Fmoc-Asn-OH(Novabiochem)、Fmoc-Gln-OH(Novabiochem)、Fmoc-Arg(Boc)2-OH (IRIS biotech)、Fmoc-Lys(Boc)-OH、Fmoc-Asp(tbu)-OH、Fmoc-Glu(tbu)-OH、Fmoc-His(Boc)-OH、Fmoc-Ser(tbu)-OH、Fmoc-Tyr(tbu)-OH、Fmoc-Tyr(tbu)-OH、Fmoc-Met-OH、Fmoc-Ile-OH、Fmco-Leu-OH、Fmoc-Val-OH、Fmoc-Pro-OH、Fmoc-Phe-OH、Fmoc-Trp(Boc)-OH (除非另有说明，所有均来自ProteinTechnologies)。偶联后每个孔用300μl的NMP洗涤，然后用200μl的NMP洗涤三次。重复进行上述合成步骤，直到获得所期望的长度。如上所述，对于Fmoc-氨基酸使用在NMP中的0.3M十二烷酸溶液偶联十二烷酸，并用三分之一体积DIC和三分之一体积可力丁，并然后向每孔加入125μl。允许十二烷酸偶联30分钟、60分钟和120分钟(三重偶联)。在加入最后的构建单元（building block）后，树脂用乙醇洗涤并干燥。
肽基树脂的切割：在96孔滤板中的干树脂置于2ml的深孔聚丙烯板(Nunc公司)的顶部。以下列时间间隔向每个孔中加入200μl的95％TFA+ 5％H2O(水)：1分钟、1分钟、15分钟、15分钟、30分钟、30分钟。在深孔板中的TFA的肽溶液然后通过氩气流蒸发至干燥。干燥的肽溶解在80％二甲亚砜(DMSO)20％H2O中。
纯化
典型地，通过如通用步骤1中所述的固相肽合成制备的本发明的N-末端酰化的肽或寡肽具有足够的纯度用于测试而无需进一步纯化。
反相HPLC纯化可以如本领域已知的进行。如本领域中通常已知的，梯度条件需要对具体的化合物进行调整。
阴离子交换
典型的纯化步骤：
HPLC系统是Gilson系统，由下列组成：型号215 液体处理器，型号322-H2 泵和型号155 UV 检测器。检测通常在210 nm和280 nm。
系统 (GE)由下列组成：型号 P-900 泵，型号 UV-900 UV 检测器，型号 pH/C-900pH和电导检测器，型号 Frac-950 级分收集器。UV检测通常在214 nm、254 nm和276 nm。
酸性HPLC：
柱： Macherey-Nagel SP 250/21 Nucleusil 300-7 C4
流速： 8 ml/min
缓冲液A： 0.1% TFA的乙腈溶液
缓冲液B： 0.1% TFA的水溶液。
梯度：0.0-5.0分钟： 10%A
5.00–30.0分钟： 10%A-90%A
30.0–35.0分钟： 90%A
35.0–40.0分钟： 100%A
中性HPLC：
柱： Phenomenex, Jupiter, C4 5µm 250 x10.00mm, 300Å
流速： 6ml/min
缓冲液A： 5mM TRIS、7.5 mM (NH4)2SO4、pH = 7.3、20% CH3CN
缓冲液B： 60% CH3CN，40% 水
梯度：0-5分钟： 10% B
5-65分钟： 10-90% B
65-69分钟： 90% B
69-80分钟： 90% B
脱盐：
柱： HiPrep 26/10
流速： 10ml/min，6柱体积
缓冲液： 10mM NH4HCO3。
合成的寡肽的分析
本发明的N-末端修饰的肽或寡肽的特性和纯度通过下列证实：NMR (Bruker AVANCE DPX 200, 磁性 300 UltraShield, 探针:BBI 300 MHz S1)、薄层层析(TLC) 和/或 LC-MS；Micromass Quatro micro API质谱用于从HPLC系统洗脱后鉴定样品的质量，所述HPLC系统由Waters 2525 二元梯度模块、Waters 2767 样品管理器、Waters 2996 光电二极管阵列检测器和Waters 2420 ELS 检测器构成。洗脱液：A:0.1% 三氟乙酸的水溶液；B:0.1% 三氟乙酸的乙腈溶液。柱：Sunfire 4.6 mm x 100 mm。
实施例的N-末端修饰的肽或寡肽描述为酸，但是当制备这些化合物在缓冲液中的储备溶液时，这些酸转化为盐，例如钠盐、钾盐等。
实施例1-197的所有N-末端修饰的肽或寡肽都根据如对于每种化合物所列的通用 步骤1或通用步骤2制备。
实施例1 N-十二烷酰基-DAla-DAla-DPro-DPhe-OH, 通用步骤 1：
替代名称：(R)-2-({(R)-1-[(R)-2-((R)-2-十二烷酰基氨基-丙酰基氨基)丙酰基]-吡咯烷-2-羰基}-氨基)-3-苯基-丙酸。
根据固相肽合成- 通用步骤 1制备N-十二烷酰基-DAla-DAla-DPro-DPhe-OH。
实施例2 N-十四烷酰基-DAla-DAla-DPro-DPhe-OH, 通用步骤 1:
替代名称：(R)-3-苯基-2-({(R)-1-[(R)-2-((R)-2-十四烷酰基氨基-丙酰基氨基)-丙酰基]-吡咯烷-2-羰基}-氨基)-丙酸。
根据固相肽合成- 通用步骤 1制备N-十四烷酰基-DAla-DAla-DPro-DPhe-OH。
实施例3 N-十四烷酰基-Ala-Ala-Pro-Phe-OH, 通用步骤 1:
替代名称：(S)-3-苯基-2-({(S)-1-[(S)-2-((S)-2-十四烷酰基氨基-丙酰基氨基)-丙酰基]-吡咯烷-2-羰基}-氨基)-丙酸。
根据固相肽合成- 通用步骤 1制备N-十四烷酰基-Ala-Ala-Pro-Phe-OH。
实施例4 N-十二烷酰基-Ala-Ala-Pro-DPhe-OH, 通用步骤 1:
替代名称：(R)-2-({(S)-1-[(S)-2-((S)-2-十二烷酰基氨基-丙酰基氨基)-丙酰基]-吡咯烷-2-羰基}-氨基)-3-苯基-丙酸。
根据固相肽合成- 通用步骤 1制备N-十二烷酰基-Ala-Ala-Pro-DPhe-OH。
实施例5 N-十四烷酰基-Ala-Ala-Pro-DPhe-OH, 通用步骤 1:
替代名称：(R)-3-苯基-2-({(S)-1-[(S)-2-((S)-2-十四烷酰基氨基-丙酰基氨基)-丙酰基]-吡咯烷-2-羰基}-氨基)-丙酸。
根据固相肽合成- 通用步骤 1制备N-十四烷酰基-Ala-Ala-Pro-DPhe-OH。
实施例6 N-十二烷酰基-ßAla-ßAla-Pro-Phe-Pro-OH, 通用步骤 1:
替代名称：(S)-1-[(S)-2-({(S)-1-[3-(3-十二烷酰基氨基-丙酰基氨基)-丙酰基]-吡咯烷-2-羰基}-氨基)-3-苯基-丙酰基]-吡咯烷-2-甲酸。
根据固相肽合成- 通用步骤 1制备N-十二烷酰基-ßAla-ßAla-Pro-Phe-Pro-OH。
实施例7 N-十二烷酰基-Aib-Aib-Pro-Phe-OH, 通用步骤 1:
替代名称：(S)-2-({(S)-1-[2-(2-十二烷酰基氨基-2-甲基-丙酰基氨基)-2-甲基-丙酰基]-吡咯烷-2-羰基}-氨基)-3-苯基-丙酸。
根据固相肽合成- 通用步骤 1制备N-十二烷酰基-Aib-Aib-Pro-Phe-OH。
实施例8 N-十二烷酰基-ßAla-Ala-Pro-Phe-OH, 通用步骤 1:
替代名称：(S)-2-({(S)-1-[(S)-2-(3-十二烷酰基氨基-丙酰基氨基)-丙酰基]-吡咯烷-2-羰基}-氨基)-3-苯基-丙酸。
根据固相肽合成- 通用步骤 1制备N-十二烷酰基-ßAla-Ala-Pro-Phe-OH。
实施例9 N-十四烷酰基-ßAla-Ala-Pro-Phe-OH, 通用步骤 1:
替代名称：(S)-3-苯基-2-({(S)-1-[(S)-2-(3-十四烷酰基氨基-丙酰基氨基)-丙酰基]-吡咯烷-2-羰基}-氨基)-丙酸。
根据固相肽合成- 通用步骤 1制备N-十四烷酰基-ßAla-Ala-Pro-Phe-OH。
实施例10 N-十二烷酰基-ßAla-ßAla-Pro-Phe-OH, 通用步骤 1:
替代名称：(S)-2-({(S)-1-[3-(3-十二烷酰基氨基-丙酰基氨基)-丙酰基]-吡咯烷-2-羰基}-氨基)-3-苯基-丙酸。
根据固相肽合成- 通用步骤 1制备N-十二烷酰基-ßAla-ßAla-Pro-Phe-OH。
实施例11 N-十二烷酰基-Ala-Ala-Pro-Leu-OH, 通用步骤 1:
替代名称：(S)-2-({(S)-1-[(S)-2-((S)-2-十二烷酰基氨基-丙酰基氨基)-丙酰基]-吡咯烷-2-羰基}-氨基)-4-甲基-戊酸。
根据固相肽合成- 通用步骤 1制备N-十二烷酰基-Ala-Ala-Pro-Leu-OH。
实施例12 N-十二烷酰基-γGlu-Ala-Ala-Pro-Phe-OH, 通用步骤 1:
替代名称：(S)-4-((S)-1-{(S)-2-[(S)-2-((S)-1-羧基-2-苯基-乙基氨基甲酰基)-吡咯烷-1-基]-1-甲基-2-氧代-乙基氨基甲酰基}-乙基氨基甲酰基)-2-十二烷酰基氨基-丁酸。
根据固相肽合成- 通用步骤 1制备N-十二烷酰基-γGlu-Ala-Ala-Pro-Phe-OH。
实施例13 N-十四烷酰基-Glu-Ala-Ala-Pro-Phe-OH, 通用步骤 1:
替代名称：(S)-4-((S)-1-{(S)-2-[(S)-2-((S)-1-羧基-2-苯基-乙基氨基甲酰基)-吡咯烷-1-基]-1-甲基-2-氧代-乙基氨基甲酰基}-乙基氨基甲酰基)-2-十四烷酰基氨基-丁酸。
根据固相肽合成- 通用步骤 1制备N-十四烷酰基-Glu-Ala-Ala-Pro-Phe-OH。
实施例14 Ala-Ala-Pro-Phe-OH, 通用步骤 1:
替代名称：(S)-2-({(S)-1-[(S)-2-((S)-2-氨基-丙酰基氨基)-丙酰基]-吡咯烷-2-羰基}-氨基)-3-苯基-丙酸。
根据固相肽合成- 通用步骤 1制备Ala-Ala-Pro-Phe-OH。
实施例15 N-十二烷二酰基-Ala-Ala-Pro-Phe-OH, 通用步骤 1:
替代名称：11-((S)-1-{(S)-2-[(S)-2-((S)-1-羧基-2-苯基-乙基氨基甲酰基)-吡咯烷-1-基]-1-甲基-2-氧代-乙基氨基甲酰基}-乙基氨基甲酰基)-十一烷酸。
根据固相肽合成- 通用步骤 1制备N-十二烷二酰基-Ala-Ala-Pro-Phe-OH。
实施例16 N-十四烷二酰基-Ala-Ala-Pro-Phe-OH, 通用步骤 1:
替代名称：13-((S)-1-{(S)-2-[(S)-2-((S)-1-羧基-2-苯基-乙基氨基甲酰基)-吡咯烷-1-基]-1-甲基-2-氧代-乙基氨基甲酰基}-乙基氨基甲酰基)-十三烷酸。
根据固相肽合成- 通用步骤 1制备N-十四烷二酰基-Ala-Ala-Pro-Phe-OH。
实施例17 N-十二烷酰基-Ala-Ala-Pro-Tyr-OH, 通用步骤 1:
根据固相肽合成- 通用步骤 1制备N-十二烷酰基-Ala-Ala-Pro-Tyr-OH。
实施例18 N-十二烷酰基-Ala-Ala-Ala-Pro-Phe-OH, 通用步骤 1:
根据固相肽合成- 通用步骤 1制备N-十二烷酰基-Ala-Ala-Ala-Pro-Phe-OH。
实施例19 N-十二烷酰基-Ala-Ala-Ala-Ala-Pro-Phe-OH, 通用步骤 1:
根据固相肽合成- 通用步骤 1制备N-十二烷酰基-Ala-Ala-Ala-Ala-Pro-Phe-OH。
实施例20 N-癸酰-Ala-Ala-Pro-Arg-OH, 通用步骤 1:
根据固相肽合成- 通用步骤 1制备N-癸酰基-Ala-Ala-Pro-Arg-OH。
实施例21 N-十二烷酰基-γGlu-Ala-Pro-Arg-OH, 通用步骤 1:
根据固相肽合成- 通用步骤 1制备N-十二烷酰基-γGlu-Ala-Pro-Arg-OH。
实施例22 N-十二烷酰基-γGlu-Ala-Pro-Phe-OH, 通用步骤 1:
根据固相肽合成- 通用步骤 1制备N-十二烷酰基-γGlu-Ala-Pro-Phe-OH。
实施例23 N-十四烷酰基-γGlu-Ala-Pro-Phe-OH, 通用步骤 1:
根据固相肽合成- 通用步骤 1制备N-十四烷酰基-γGlu-Ala-Pro-Phe-OH。
实施例24 N-十二烷酰基-Ala-Ala-Pro-Phe-Pro-OH, 通用步骤 1:
根据固相肽合成- 通用步骤 1制备N-十二烷酰基-Ala-Ala-Pro-Phe-Pro-OH。
实施例25 N-十二烷酰基-γGlu-Ala-Ala-Pro-Arg-OH, 通用步骤 1:
根据固相肽合成- 通用步骤 1制备N-十二烷酰基-γGlu-Ala-Ala-Pro-Arg-OH。
实施例26 N-十二烷酰基-Ala-Ala-Pro-Trp-OH, 通用步骤 1:
根据固相肽合成- 通用步骤 1制备N-十二烷酰基-Ala-Ala-Pro-Trp-OH。
实施例27 N-十二烷酰基-γGlu-Ala-Ala-Pro-Arg-Pro-OH, 通用步骤 1:
根据固相肽合成- 通用步骤 1制备N-十二烷酰基-γGlu-Ala-Ala-Pro-Arg-Pro-OH。
实施例28 N-二十烷酰基-Ala-Ala-Pro-Phe-OH, 通用步骤 1:
替代名称：(S)-2-({(S)-1-[(S)-2-((S)-2-二十烷酰基氨基-丙酰基氨基)-丙酰基]-吡咯烷-2-羰基}-氨基)-3-苯基-丙酸。
根据固相肽合成- 通用步骤 1制备N-二十烷酰基-Ala-Ala-Pro-Phe-OH。
实施例29 N-十六烷酰基-Ala-Ala-Pro-Phe-OH, 通用步骤 1:
替代名称：(S)-2-({(S)-1-[(S)-2-((S)-2-十六烷酰基氨基-丙酰基氨基)-丙酰基]-吡咯烷-2-羰基}-氨基)-3-苯基-丙酸。
根据固相肽合成- 通用步骤 1制备N-十六烷酰基-Ala-Ala-Pro-Phe-OH。
实施例30 N-十八烷酰基-Ala-Ala-Pro-Phe-OH, 通用步骤 1:
替代名称：(S)-2-({(S)-1-[(S)-2-((S)-2-十八烷酰基氨基-丙酰基氨基)-丙酰基]-吡咯烷-2-羰基}-氨基)-3-苯基-丙酸。
根据固相肽合成- 通用步骤 1制备N-十八烷酰基-Ala-Ala-Pro-Phe-OH。
实施例31 N-十四烷酰基-Arg-Ala-Ala-Pro-Phe-OH, 通用步骤 1:
替代名称：(S)-2-[((S)-1-{(S)-2-[(S)-2-((S)-5-胍基-2-十四烷酰基氨基-戊酰基氨基)-丙酰基氨基]-丙酰基}-吡咯烷-2-羰基)-氨基]-3-苯基-丙酸。
根据固相肽合成- 通用步骤 1制备N-十四烷酰基-Arg-Ala-Ala-Pro-Phe-OH。
实施例32 N-十六烷酰基-γGlu-Ala-Ala-Pro-Phe-OH, 通用步骤 1:
替代名称：(S)-4-((S)-1-{(S)-2-[(S)-2-((S)-1-羧基-2-苯基-乙基氨基甲酰基)-吡咯烷-1-基]-1-甲基-2-氧代-乙基氨基甲酰基}-乙基氨基甲酰基)-2-十六烷酰基氨基-丁酸。
根据固相肽合成- 通用步骤 1制备N-十六烷酰基-γGlu-Ala-Ala-Pro-Phe-OH。
实施例33 N-癸酰基-Ala-Ala-Pro-Phe-OH, 通用步骤 1:
替代名称：根据固相肽合成- 通用步骤 1制备N-癸酰基-Ala-Ala-Pro-Phe-OH。
实施例34 N-十二烷酰基-Ala-Ala-Pro-Phe-OH, 通用步骤 1:
替代名称：(S)-2-({(S)-1-[(S)-2-((S)-2-十二烷酰基氨基-丙酰基氨基)-丙酰基]-吡咯烷-2-羰基}-氨基)-3-苯基-丙酸。
根据固相肽合成- 通用步骤 1制备N-十二烷酰基-Ala-Ala-Pro-Phe-OH。
实施例35 N-十二烷酰基-Ala-Pro-Phe-OH, 通用步骤 1:
根据固相肽合成- 通用步骤 1制备N-十二烷酰基-Ala-Pro-Phe-OH。
实施例36 N-十二烷酰基-Gly-Ala-Ala-Pro-Tyr-OH, 通用步骤 2:
根据固相肽合成- 通用步骤 2制备N-十二烷酰基-Gly-Ala-Ala-Pro-Tyr-OH。
实施例37 N-十二烷酰基-Gly-Ala-Pro-Tyr-OH, 通用步骤 2:
根据固相肽合成- 通用步骤 2制备N-十二烷酰基-Gly-Ala-Pro-Tyr-OH。
实施例38 N-十二烷酰基-His-Ala-Ala-Pro-Tyr-OH, 通用步骤 2:
根据固相肽合成- 通用步骤 2制备N-十二烷酰基-His-Ala-Ala-Pro-Tyr-OH。
实施例39 N-十二烷酰基-His-Ala-Pro-Tyr-OH, 通用步骤 2:
根据固相肽合成- 通用步骤 2制备N-十二烷酰基-His-Ala-Pro-Tyr-OH。
实施例40 N-十二烷酰基-Ile-Ala-Ala-Pro-Tyr-OH, 通用步骤 2:
根据固相肽合成- 通用步骤 2制备N-十二烷酰基-Ile-Ala-Ala-Pro-Tyr-OH。
实施例41 N-十二烷酰基-Ile-Ala-Pro-Tyr-OH, 通用步骤 2:
根据固相肽合成- 通用步骤 2制备N-十二烷酰基-Ile-Ala-Pro-Tyr-OH。
实施例42 N-十二烷酰基-Leu-Ala-Ala-Pro-Tyr-OH, 通用步骤 2:
根据固相肽合成- 通用步骤 2制备N-十二烷酰基-Leu-Ala-Ala-Pro-Tyr-OH。
实施例43 N-十二烷酰基-Leu-Ala-Pro-Tyr-OH, 通用步骤 2:
根据固相肽合成- 通用步骤 2制备N-十二烷酰基-Leu-Ala-Pro-Tyr-OH。
实施例44 N-十二烷酰基-Lys-Ala-Ala-Pro-Tyr-OH, 通用步骤 2:
根据固相肽合成- 通用步骤 2制备N-十二烷酰基-Lys-Ala-Ala-Pro-Tyr-OH。
实施例45 N-十二烷酰基-Lys-Ala-Pro-Tyr-OH, 通用步骤 2:
根据固相肽合成- 通用步骤 2制备N-十二烷酰基-Lys-Ala-Pro-Tyr-OH。
实施例46 N-十二烷酰基-Met-Ala-Ala-Pro-Tyr-OH, 通用步骤 2:
根据固相肽合成- 通用步骤 2制备N-十二烷酰基-Met-Ala-Ala-Pro-Tyr-OH。
实施例47 N-十二烷酰基-Met-Ala-Pro-Tyr-OH, 通用步骤 2:
根据固相肽合成- 通用步骤 2制备N-十二烷酰基-Met-Ala-Pro-Tyr-OH。
实施例48 N-十二烷酰基-Pro-Ala-Ala-Pro-Tyr-OH, 通用步骤 2:
根据固相肽合成- 通用步骤 2制备N-十二烷酰基-Pro-Ala-Ala-Pro-Tyr-OH。
实施例49 N-十二烷酰基-Pro-Ala-Pro-Tyr-OH, 通用步骤 2:
根据固相肽合成- 通用步骤 2制备N-十二烷酰基-Pro-Ala-Pro-Tyr-OH。
实施例50 N-十二烷酰基-Ser-Ala-Ala-Pro-Tyr-OH, 通用步骤 2:
根据固相肽合成- 通用步骤 2制备N-十二烷酰基-Ser-Ala-Ala-Pro-Tyr-OH。
实施例51 N-十二烷酰基-Ser-Ala-Pro-Tyr-OH, 通用步骤 2:
根据固相肽合成- 通用步骤 2制备N-十二烷酰基-Ser-Ala-Pro-Tyr-OH。
实施例52 N-十二烷酰基-Thr-Ala-Ala-Pro-Tyr-OH, 通用步骤 2:
根据固相肽合成- 通用步骤 2制备N-十二烷酰基-Thr-Ala-Ala-Pro-Tyr-OH。
实施例53 N-十二烷酰基-Thr-Ala-Pro-Tyr-OH, 通用步骤 2:
根据固相肽合成- 通用步骤 2制备N-十二烷酰基-Thr-Ala-Pro-Tyr-OH。
实施例54 N-十二烷酰基-Val-Ala-Ala-Pro-Tyr-OH, 通用步骤 2:
根据固相肽合成- 通用步骤 2制备N-十二烷酰基-Val-Ala-Ala-Pro-Tyr-OH。
实施例55 N-十二烷酰基-Val-Ala-Pro-Tyr-OH, 通用步骤 2:
根据固相肽合成- 通用步骤 2制备N-十二烷酰基-Val-Ala-Pro-Tyr-OH。
实施例56 N-十二烷酰基-Ala-Ala-Ala-Pro-Tyr-OH, 通用步骤 2:
根据固相肽合成- 通用步骤 2制备N-十二烷酰基-Ala-Ala-Ala-Pro-Tyr-OH。
实施例57 N-十二烷酰基-Ala-Ala-Ala-Tyr-OH, 通用步骤 2:
根据固相肽合成- 通用步骤 2制备N-十二烷酰基-Ala-Ala-Ala-Tyr-OH。
实施例58 N-十二烷酰基-Ala-Ala-Arg-Tyr-OH, 通用步骤 2:
根据固相肽合成- 通用步骤 2制备N-十二烷酰基-Ala-Ala-Arg-Tyr-OH。
实施例59 N-十二烷酰基-Ala-Ala-Asn-Tyr-OH, 通用步骤 2:
根据固相肽合成- 通用步骤 2制备N-十二烷酰基-Ala-Ala-Asn-Tyr-OH。
实施例60 N-十二烷酰基-Ala-Ala-Asp-Tyr-OH, 通用步骤 2:
根据固相肽合成- 通用步骤 2制备N-十二烷酰基-Ala-Ala-Asp-Tyr-OH。
实施例61 N-十二烷酰基-Ala-Ala-Gln-Tyr-OH, 通用步骤 2:
根据固相肽合成- 通用步骤 2制备N-十二烷酰基-Ala-Ala-Gln-Tyr-OH。
实施例62 N-十二烷酰基-Ala-Ala-Glu-Tyr-OH, 通用步骤 2:
根据固相肽合成- 通用步骤 2制备N-十二烷酰基-Ala-Ala-Glu-Tyr-OH。
实施例63 N-十二烷酰基-Ala-Ala-Gly-Tyr-OH, 通用步骤 2:
根据固相肽合成- 通用步骤 2制备N-十二烷酰基-Ala-Ala-Gly-Tyr-OH。
实施例64 N-十二烷酰基-Ala-Ala-His-Tyr-OH, 通用步骤 2:
根据固相肽合成- 通用步骤 2制备N-十二烷酰基-Ala-Ala-His-Tyr-OH。
实施例65 N-十二烷酰基-Ala-Ala-Ile-Tyr-OH, 通用步骤 2:
根据固相肽合成- 通用步骤 2制备N-十二烷酰基-Ala-Ala-Ile-Tyr-OH。
实施例66 N-十二烷酰基-Ala-Ala-Leu-Tyr-OH, 通用步骤 2:
根据固相肽合成- 通用步骤 2制备N-十二烷酰基-Ala-Ala-Leu-Tyr-OH。
实施例67 N-十二烷酰基-Ala-Ala-Lys-Tyr-OH, 通用步骤 2:
根据固相肽合成- 通用步骤 2制备N-十二烷酰基-Ala-Ala-Lys-Tyr-OH。
实施例68 N-十二烷酰基-Ala-Ala-Met-Tyr-OH, 通用步骤 2:
根据固相肽合成- 通用步骤 2制备N-十二烷酰基-Ala-Ala-Met-Tyr-OH。
实施例69 N-十二烷酰基-Ala-Ala-Pro-Tyr-OH, 通用步骤 2:
根据固相肽合成- 通用步骤 2制备N-十二烷酰基-Ala-Ala-Pro-Tyr-OH。
实施例70 N-十二烷酰基-Ala-Ala-Ser-Tyr-OH, 通用步骤 2:
根据固相肽合成- 通用步骤 2制备N-十二烷酰基-Ala-Ala-Ser-Tyr-OH。
实施例71 N-十二烷酰基-Ala-Ala-Thr-Tyr-OH, 通用步骤 2:
根据固相肽合成- 通用步骤 2制备N-十二烷酰基-Ala-Ala-Thr-Tyr-OH。
实施例72 N-十二烷酰基-Ala-Ala-Val-Tyr-OH, 通用步骤 2:
根据固相肽合成- 通用步骤 2制备N-十二烷酰基-Ala-Ala-Val-Tyr-OH。
实施例73 N-十二烷酰基-Ala-Arg-Pro-Tyr-OH, 通用步骤 2:
根据固相肽合成- 通用步骤 2制备N-十二烷酰基-Ala-Arg-Pro-Tyr-OH。
实施例74 N-十二烷酰基-Ala-Asn-Pro-Tyr-OH, 通用步骤 2:
根据固相肽合成- 通用步骤 2制备N-十二烷酰基-Ala-Asn-Pro-Tyr-OH。
实施例75 N-十二烷酰基-Ala-Asp-Pro-Tyr-OH, 通用步骤 2:
根据固相肽合成- 通用步骤 2制备N-十二烷酰基-Ala-Asp-Pro-Tyr-OH。
实施例76 N-十二烷酰基-Ala-Gln-Pro-Tyr-OH, 通用步骤 2:
根据固相肽合成- 通用步骤 2制备N-十二烷酰基-Ala-Gln-Pro-Tyr-OH。
实施例77 N-十二烷酰基-Ala-Glu-Pro-Tyr-OH, 通用步骤 2:
根据固相肽合成- 通用步骤 2制备N-十二烷酰基-Ala-Glu-Pro-Tyr-OH。
实施例78 N-十二烷酰基-Ala-Gly-Pro-Tyr-OH, 通用步骤 2:
根据固相肽合成- 通用步骤 2制备N-十二烷酰基-Ala-Gly-Pro-Tyr-OH。
实施例79 N-十二烷酰基-Ala-His-Pro-Tyr-OH, 通用步骤 2:
根据固相肽合成- 通用步骤 2制备N-十二烷酰基-Ala-His-Pro-Tyr-OH。
实施例80 N-十二烷酰基-Ala-Ile-Pro-Tyr-OH, 通用步骤 2:
根据固相肽合成- 通用步骤 2制备N-十二烷酰基-Ala-Ile-Pro-Tyr-OH。
实施例81 N-十二烷酰基-Ala-Leu-Pro-Tyr-OH, 通用步骤 2:
根据固相肽合成- 通用步骤 2制备N-十二烷酰基-Ala-Leu-Pro-Tyr-OH。
实施例82 N-十二烷酰基-Ala-Lys-Pro-Tyr-OH, 通用步骤 2:
根据固相肽合成- 通用步骤 2制备N-十二烷酰基-Ala-Lys-Pro-Tyr-OH。
实施例83 N-十二烷酰基-Ala-Met-Pro-Tyr-OH, 通用步骤 2:
根据固相肽合成- 通用步骤 2制备N-十二烷酰基-Ala-Met-Pro-Tyr-OH。
实施例84 N-十二烷酰基-Ala-Phe-Pro-Tyr-OH, 通用步骤 2:
根据固相肽合成- 通用步骤 2制备N-十二烷酰基-Ala-Phe-Pro-Tyr-OH。
实施例85 N-十二烷酰基-Ala-Pro-Pro-Tyr-OH, 通用步骤 2:
根据固相肽合成- 通用步骤 2制备N-十二烷酰基-Ala-Pro-Pro-Tyr-OH。
实施例86 N-十二烷酰基-Ala-Ser-Pro-Tyr-OH, 通用步骤 2:
根据固相肽合成- 通用步骤 2制备N-十二烷酰基-Ala-Ser-Pro-Tyr-OH。
实施例87 N-十二烷酰基-Ala-Thr-Pro-Tyr-OH, 通用步骤 2:
根据固相肽合成- 通用步骤 2制备N-十二烷酰基-Ala-Thr-Pro-Tyr-OH。
实施例88 N-十二烷酰基-Ala-Trp-Pro-Tyr-OH, 通用步骤 2:
根据固相肽合成- 通用步骤 2制备N-十二烷酰基-Ala-Trp-Pro-Tyr-OH。
实施例89 N-十二烷酰基-Ala-Tyr-Pro-Tyr-OH, 通用步骤 2:
根据固相肽合成- 通用步骤 2制备N-十二烷酰基-Ala-Tyr-Pro-Tyr-OH。
实施例90 N-十二烷酰基-Ala-Val-Pro-Tyr-OH, 通用步骤 2:
根据固相肽合成- 通用步骤 2制备N-十二烷酰基-Ala-Val-Pro-Tyr-OH。
实施例91 N-十二烷酰基-Arg-Ala-Ala-Pro-Tyr-OH, 通用步骤 2:
根据固相肽合成- 通用步骤 2制备N-十二烷酰基-Arg-Ala-Ala-Pro-Tyr-OH。
实施例92 N-十二烷酰基-Arg-Ala-Pro-Tyr-OH, 通用步骤 2:
根据固相肽合成- 通用步骤 2制备N-十二烷酰基-Arg-Ala-Pro-Tyr-OH。
实施例93 N-十二烷酰基-Asn-Ala-Ala-Pro-Tyr-OH, 通用步骤 2:
根据固相肽合成- 通用步骤 2制备N-十二烷酰基-Asn-Ala-Ala-Pro-Tyr-OH。
实施例94 N-十二烷酰基-Asn-Ala-Pro-Tyr-OH, 通用步骤 2:
根据固相肽合成- 通用步骤 2制备N-十二烷酰基-Asn-Ala-Pro-Tyr-OH。
实施例95 N-十二烷酰基-Asp-Ala-Ala-Pro-Tyr-OH, 通用步骤 2:
根据固相肽合成- 通用步骤 2制备N-十二烷酰基-Asp-Ala-Ala-Pro-Tyr-OH。
实施例96 N-十二烷酰基-Asp-Ala-Pro-Tyr-OH, 通用步骤 2:
根据固相肽合成- 通用步骤 2制备N-十二烷酰基-Asp-Ala-Pro-Tyr-OH。
实施例97 N-十二烷酰基-γGlu-Ala-Ala-Pro-Tyr-OH, 通用步骤 2:
根据固相肽合成- 通用步骤 2制备N-十二烷酰基-γGlu-Ala-Ala-Pro-Tyr-OH。
实施例98 N-十二烷酰基-γGlu-Ala-Pro-Tyr-OH, 通用步骤 2:
根据固相肽合成- 通用步骤 2制备N-十二烷酰基-γGlu-Ala-Pro-Tyr-OH。
实施例99 N-十二烷酰基-γGlu-γGlu-Ala-Ala-Pro-Tyr-OH, 通用步骤 2:
根据固相肽合成- 通用步骤 2制备N-十二烷酰基-γGlu-γGlu-Ala-Ala-Pro-Tyr-OH。
实施例100 N-十二烷酰基-γGlu-Pro-Tyr-OH, 通用步骤 2:
根据固相肽合成- 通用步骤 2制备N-十二烷酰基-γGlu-Pro-Tyr-OH。
实施例101 N-十二烷酰基-γGlu-Tyr-OH, 通用步骤 2:
根据固相肽合成- 通用步骤 2制备N-十二烷酰基-γGlu-Tyr-OH。
实施例102 N-十二烷酰基-Gln-Ala-Ala-Pro-Tyr-OH, 通用步骤 2:
根据固相肽合成- 通用步骤 2制备N-十二烷酰基-Gln-Ala-Ala-Pro-Tyr-OH。
实施例103 N-十二烷酰基-Gln-Ala-Pro-Tyr-OH, 通用步骤 2:
根据固相肽合成- 通用步骤 2制备N-十二烷酰基-Gln-Ala-Pro-Tyr-OH。
实施例104 N-十二烷酰基-Glu-Ala-Ala-Pro-Tyr-OH, 通用步骤 2:
根据固相肽合成- 通用步骤 2制备N-十二烷酰基-Glu-Ala-Ala-Pro-Tyr-OH。
实施例105 N-十二烷酰基-Glu-Ala-Pro-Tyr-OH, 通用步骤 2:
根据固相肽合成- 通用步骤 2制备N-十二烷酰基-Glu-Ala-Pro-Tyr-OH。
实施例106 N-十二烷酰基-Pro-Pro-Tyr-OH, 通用步骤 2:
根据固相肽合成- 通用步骤 2制备N-十二烷酰基-Pro-Pro-Tyr-OH。
实施例107 N-十二烷酰基-Ser-Pro-Tyr-OH, 通用步骤 2:
根据固相肽合成- 通用步骤 2制备N-十二烷酰基-Ser-Pro-Tyr-OH。
实施例108 N-十二烷酰基-Thr-Pro-Tyr-OH, 通用步骤 2:
根据固相肽合成- 通用步骤 2制备N-十二烷酰基-Thr-Pro-Tyr-OH。
实施例109 N-十二烷酰基-Trp-Pro-Tyr-OH, 通用步骤 2:
根据固相肽合成- 通用步骤 2制备N-十二烷酰基-Trp-Pro-Tyr-OH。
实施例110 N-十二烷酰基-Tyr-Pro-Tyr-OH, 通用步骤 2:
根据固相肽合成- 通用步骤 2制备N-十二烷酰基-Tyr-Pro-Tyr-OH。
实施例111 N-十二烷酰基-Val-Pro-Tyr-OH, 通用步骤 2:
根据固相肽合成- 通用步骤 2制备N-十二烷酰基-Val-Pro-Tyr-OH。
实施例112 N-十二烷酰基-Ala-Val-Tyr-OH, 通用步骤 2:
根据固相肽合成- 通用步骤 2制备N-十二烷酰基-Ala-Val-Tyr-OH。
实施例113 N-十二烷酰基-Arg-Pro-Tyr-OH, 通用步骤 2:
根据固相肽合成- 通用步骤 2制备N-十二烷酰基-Arg-Pro-Tyr-OH。
实施例114 N-十二烷酰基-Asn-Pro-Tyr-OH, 通用步骤 2:
根据固相肽合成- 通用步骤 2制备N-十二烷酰基-Asn-Pro-Tyr-OH。
实施例115 N-十二烷酰基-Asp-Pro-Tyr-OH, 通用步骤 2:
根据固相肽合成- 通用步骤 2制备N-十二烷酰基-Asp-Pro-Tyr-OH。
实施例116 N-十二烷酰基-Gln-Pro-Tyr-OH, 通用步骤 2:
根据固相肽合成- 通用步骤 2制备N-十二烷酰基-Gln-Pro-Tyr-OH。
实施例117 N-十二烷酰基-Glu-Pro-Tyr-OH, 通用步骤 2:
根据固相肽合成- 通用步骤 2制备N-十二烷酰基-Glu-Pro-Tyr-OH。
实施例118 N-十二烷酰基-Gly-Pro-Tyr-OH, 通用步骤 2:
根据固相肽合成- 通用步骤 2制备N-十二烷酰基-Gly-Pro-Tyr-OH。
实施例119 N-十二烷酰基-His-Pro-Tyr-OH, 通用步骤 2:
根据固相肽合成- 通用步骤 2制备N-十二烷酰基-His-Pro-Tyr-OH。
实施例120 N-十二烷酰基-Ile-Pro-Tyr-OH, 通用步骤 2:
根据固相肽合成- 通用步骤 2制备N-十二烷酰基-Ile-Pro-Tyr-OH。
实施例121 N-十二烷酰基-Leu-Pro-Tyr-OH, 通用步骤 2:
根据固相肽合成- 通用步骤 2制备N-十二烷酰基-Leu-Pro-Tyr-OH。
实施例122 N-十二烷酰基-Lys-Pro-Tyr-OH, 通用步骤 2:
根据固相肽合成- 通用步骤 2制备N-十二烷酰基-Lys-Pro-Tyr-OH。
实施例123 N-十二烷酰基-Met-Pro-Tyr-OH, 通用步骤 2:
根据固相肽合成- 通用步骤 2制备N-十二烷酰基-Met-Pro-Tyr-OH。
实施例124 N-十二烷酰基-Phe-Pro-Tyr-OH, 通用步骤 2:
根据固相肽合成- 通用步骤 2制备N-十二烷酰基-Phe-Pro-Tyr-OH。
实施例125 N-十二烷酰基-γGlu-OEG-Ala-Ala-Pro-Phe-OH, 通用步骤 1:
替代名称：(S)-4-(2-{2-[((S)-1-{(S)-2-[(S)-2-((S)-1-羧基-2-苯基-乙基氨基甲酰基)-吡咯烷-1-基]-1-甲基-2-氧代-乙基氨基甲酰基}-乙基氨基甲酰基)-甲氧基]-乙氧基}-乙基氨基甲酰基)-2-十二烷酰基氨基-丁酸。
根据固相肽合成- 通用步骤 1制备N-十二烷酰基-γGlu-OEG-Ala-Ala-Pro-Phe-OH。
实施例126 N-十四烷酰基-γGlu-OEG-Ala-Ala-Pro-Phe-OH, 通用步骤 1:
替代名称：(S)-4-(2-{2-[((S)-1-{(S)-2-[(S)-2-((S)-1-羧基-2-苯基-乙基氨基甲酰基)-吡咯烷-1-基]-1-甲基-2-氧代-乙基氨基甲酰基}-乙基氨基甲酰基)-甲氧基]-乙氧基}-乙基氨基甲酰基)-2-十四烷酰基氨基-丁酸。
根据固相肽合成- 通用步骤 1制备N-十四烷酰基-γGlu-OEG-Ala-Ala-Pro-Phe-OH。
实施例127 N-十二烷酰基-γGlu-OEG-Pro-Arg-OH, 通用步骤 1:
替代名称：(S)-2-{[(S)-1-(2-{2-[2-((S)-4-羧基-4-十二烷酰基氨基-丁酰基氨基)-乙氧基]-乙氧基}-乙酰基)-吡咯烷-2-羰基]-氨基}-5-胍基-戊酸。
根据固相肽合成- 通用步骤 1制备N-十二烷酰基-γGlu-OEG-Pro-Arg-OH。
实施例128 N-十二烷酰基-OEG-OEG-Phe-OH, 通用步骤 1:
替代名称：(S)-2-{2-[2-(2-{2-[2-(2-十二烷酰基氨基-乙氧基)-乙氧基]-乙酰基氨基}-乙氧基)-乙氧基]-乙酰基氨基}-3-苯基-丙酸。
根据固相肽合成- 通用步骤 1制备N-十二烷酰基-OEG-OEG-Phe-OH。
实施例129 N-十二烷酰基-OEG-OEG-DPhe-OH, 通用步骤 1:
替代名称：(R)-2-{2-[2-(2-{2-[2-(2-十二烷酰基氨基-乙氧基)-乙氧基]-乙酰基氨基}-乙氧基)-乙氧基]-乙酰基氨基}-3-苯基-丙酸。
根据固相肽合成- 通用步骤 1制备N-十二烷酰基-OEG-OEG-DPhe-OH。
实施例130 N-十二烷酰基-OEG-OEG-Phe-OEG-OH, 通用步骤 1:
替代名称：{2-[2-((S)-2-{2-[2-(2-{2-[2-(2-十二烷酰基氨基-乙氧基)-乙氧基]-乙酰基氨基}-乙氧基)-乙氧基]-乙酰基氨基}-3-苯基-丙酰基氨基)-乙氧基]-乙氧基}-乙酸。
根据固相肽合成- 通用步骤 1制备N-十二烷酰基-OEG-OEG-Phe-OEG-OH。
实施例131 N-十二烷酰基-OEG-OEG-DPhe-OEG-OH, 通用步骤 1:
替代名称：{2-[2-((R)-2-{2-[2-(2-{2-[2-(2-十二烷酰基氨基-乙氧基)-乙氧基]-乙酰基氨基}-乙氧基)-乙氧基]-乙酰基氨基}-3-苯基-丙酰基氨基)-乙氧基]-乙氧基}-乙酸。
根据固相肽合成- 通用步骤 1制备N-十二烷酰基-OEG-OEG-DPhe-OEG-OH。
实施例132 N-十二烷酰基-γGlu-OEG-OEG-Arg-OH, 通用步骤 1:
替代名称：(S)-2-(2-{2-[2-(2-{2-[2-((S)-4-羧基-4-十二烷酰基氨基-丁酰基氨基)-乙氧基]-乙氧基}-乙酰基氨基)-乙氧基]-乙氧基}-乙酰基氨基)-5-胍基-戊酸。
根据固相肽合成- 通用步骤 1制备N-十二烷酰基-γGlu-OEG-OEG-Arg-OH。
实施例133 N-十二烷酰基-γGlu-OEG-OEG-DArg-OH, 通用步骤 1:
替代名称：(R)-2-(2-{2-[2-(2-{2-[2-((S)-4-羧基-4-十二烷酰基氨基-丁酰基氨基)-乙氧基]-乙氧基}-乙酰基氨基)-乙氧基]-乙氧基}-乙酰基氨基)-5-胍基-戊酸。
根据固相肽合成- 通用步骤 1制备N-十二烷酰基-γGlu-OEG-OEG-DArg-OH。
实施例134 N-十六烷酰基-γGlu-OEG-Ala-Ala-Pro-Phe-OH, 通用步骤 1:
替代名称：(S)-4-(2-{2-[((S)-1-{(S)-2-[(S)-2-((S)-1-羧基-2-苯基-乙基氨基甲酰基)-吡咯烷-1-基]-1-甲基-2-氧代-乙基氨基甲酰基}-乙基氨基甲酰基)-甲氧基]-乙氧基}-乙基氨基甲酰基)-2-十六烷酰基氨基丁酸。
根据固相肽合成- 通用步骤 1制备N-十六烷酰基-γGlu-OEG-Ala-Ala-Pro-Phe-OH。
实施例135 N-十六烷酰基-γGlu-Ala-Ala-Pro-Phe-OH通用步骤 1:
替代名称：(S)-4-((S)-1-{(S)-2-[(S)-2-((S)-1-羧基-4-苯基-乙基氨基甲酰基)-吡咯烷-1-基]-1-甲基-2-氧代-乙基氨基甲酰基}-乙基氨基甲酰基)-2-十六烷酰基氨基-丁酸。
根据固相肽合成- 通用步骤 1制备N-十六烷酰基-γGlu-Ala-Ala-Pro-Phe-OH。
实施例136 N-十四烷酰基-ßAla-ßAla-Pro-Phe-OH通用步骤 1:
替代名称：(S)-3-苯基-2-({(S)-1-[3-(3-十四烷酰基氨基-丙酰基氨基)-丙酰基]-吡咯烷-2-羰基}-氨基)-丙酸。
根据固相肽合成- 通用步骤 1制备N-十四烷酰基-ßAla-ßAla-Pro-Phe-OH。
实施例137 N-十四烷酰基-ßAla-ßAla-ßAla-ßAla-Pro-Phe-OH通用步骤 1:
替代名称：(S)-3-苯基-2-{[(S)-1-(3-{3-[3-(3-十四烷酰基氨基-丙酰基氨基)-丙酰基氨基]-丙酰基氨基}-丙酰基)-吡咯烷-2-羰基]-氨基}-丙酸。
根据固相肽合成- 通用步骤 1制备N-十四烷酰基-ßAla-ßAla-ßAla-ßAla-Pro-Phe-OH。
实施例138 N-十四烷酰基-ßAla-ßAla-ßAla-Pro-Phe-OH通用步骤 1:
替代名称：(S)-3-苯基-2-[((S)-1-{3-[3-(3-十四烷酰基氨基-丙酰基氨基)-丙酰基氨基]-丙酰基}-吡咯烷-2-羰基)-氨基]-丙酸。
根据固相肽合成- 通用步骤 1制备N-十四烷酰基-ßAla-ßAla-ßAla-Pro-Phe-OH。
实施例139 N-十四烷酰基-γGlu-ßAla-ßAla-Pro-Phe-OH通用步骤 1:
替代名称：(S)-4-[2-(2-{3-[(S)-2-((S)-1-羧基-2-苯基-乙基氨基甲酰基)-吡咯烷-1-基]-3-氧代-丙基氨基甲酰基}-乙基氨基甲酰基)-乙基氨基甲酰基]-2-十四烷酰基氨基-丁酸。
根据固相肽合成- 通用步骤 1制备N-十四烷酰基-γGlu-ßAla-ßAla-Pro-Phe-OH。
实施例140 N-十四烷酰基-Ala-Ala-Ala-Ala-Pro-Phe-OH, 通用步骤 1:
替代名称：(S)-3-苯基-2-{[(S)-1-((S)-2-{(S)-2-[(S)-2-((S)-2-十四烷酰基氨基-丙酰基氨基)-丙酰基氨基]-丙酰基氨基}-丙酰基)-吡咯烷-2-羰基]-氨基}-丙酸
根据固相肽合成- 通用步骤 1制备N-十四烷酰基-Ala-Ala-Ala-Ala-Pro-Phe-OH。
实施例141 N-十二烷酰基-Ala-Ala-Ala-Ala-Ala-Pro-Phe-OH, 通用步骤 1:
替代名称：(S)-2-({(S)-1-[(S)-2-((S)-2-{(S)-2-[(S)-2-((S)-2-十二烷酰基氨基-丙酰基氨基)-丙酰基氨基]-丙酰基氨基}-丙酰基氨基)-丙酰基]-吡咯烷-2-羰基}-氨基)-3-苯基-丙酸
根据固相肽合成- 通用步骤 1制备N-十二烷酰基-Ala-Ala-Ala-Ala-Ala-Pro-Phe-OH。
实施例142 N-十四烷酰基-Leu-Ala-Ala-Pro-Tyr-OH, 通用步骤 1:
替代名称：N{1}-十四烷酰基-Leu-Ala-Ala-Pro-Tyr
根据固相肽合成- 通用步骤 1制备N-十四烷酰基-Leu-Ala-Ala-Pro-Tyr-OH。
实施例143 N-十四烷酰基-Glu-Ala-Ala-Pro-Trp-OH, 通用步骤 1:
替代名称：N{1}-十四烷酰基-Glu-Ala-Ala-Pro-Trp-OH
根据固相肽合成- 通用步骤 1制备N-十四烷酰基-Glu-Ala-Ala-Pro-Trp-OH。
实施例144 N-十六烷酰基-Glu-Ala-Ala-Pro-D-Phe-OH, 通用步骤 1:
替代名称：N{1}-十六烷酰基-Glu-Ala-Ala-Pro-D-Phe-OH
根据固相肽合成- 通用步骤 1制备N-十六烷酰基-Glu-Ala-Ala-Pro-D-Phe-OH。
实施例145 N-十四烷酰基-Leu-betaAla-Ala-Pro-DPhe-OH, 通用步骤 1:
替代名称：N{1}-[(2R)-5-[[(2S)-4-甲基-2-(十四烷酰基氨基)戊酰基]氨基]-3-氧代戊基-2-yl]氨基甲酰基-Pro-D-Phe-OH
根据固相肽合成- 通用步骤 1制备N-十四烷酰基-Leu-betaAla-Ala-Pro-DPhe-OH。
实施例146 N-十四烷酰基-Arg-Pro-Leu-bAla-Ala-Pro-D-Phe-OH, 通用步骤 1:
替代名称：根据固相肽合成- 通用步骤 1制备N{α-1}-十四烷酰基-Arg-Pro-Leu-bAla-Ala-Pro-D-Phe-OHN-十四烷酰基-Arg-Pro-Leu-bAla-Ala-Pro-D-Phe-OH。
实施例147 N-十六烷酰基-Ala-Ala-Pro-D-Phe-OH, 通用步骤 1:
替代名称：N{1}-十六烷酰基-Ala-Ala-Pro-D-Phe-OH
根据固相肽合成- 通用步骤 1制备N-十六烷酰基-Ala-Ala-Pro-D-Phe-OH。
实施例148 N-十四烷酰基-γGlu-DAla-DPro-DPhe-OH, 通用步骤 1:
替代名称：N{1}-[(4S)-4-羧基-4-(十四烷酰基氨基)丁酰基]-D-Ala-D-Pro-D-Phe-OH
根据固相肽合成- 通用步骤 1制备N-十四烷酰基-γGlu-DAla-DPro-DPhe-OH。
实施例149 N-十六烷酰基-γGlu-Ala-Pro-Phe-OH, 通用步骤 1:
替代名称：(S)-4-{(S)-2-[(S)-2-((S)-1-羧基-2-苯基-乙基氨基甲酰基)-吡咯烷-1-基]-1-甲基-2-氧代-乙基氨基甲酰基}-2-十六烷酰基氨基-丁酸
根据固相肽合成- 通用步骤 1制备N-十六烷酰基-γGlu-Ala-Pro-Phe-OH。
实施例150 N-十八烷酰基-γGlu-Ala-Pro-Phe-OH, 通用步骤 1:
替代名称：(S)-4-{(S)-2-[(S)-2-((S)-1-羧基-2-苯基-乙基氨基甲酰基)-吡咯烷-1-基]-1-甲基-2-氧代-乙基氨基甲酰基}-2-十八烷酰基氨基-丁酸
根据固相肽合成- 通用步骤 1制备N-十八烷酰基-γGlu-Ala-Pro-Phe-OH。
实施例151 N-二十烷酰基-γGlu-Ala-Pro-Phe-OH, 通用步骤 1:
替代名称：(S)-4-{(S)-2-[(S)-2-((S)-1-羧基-2-苯基-乙基氨基甲酰基)-吡咯烷-1-基]-1-甲基-2-氧代-乙基氨基甲酰基}-2-二十烷酰基氨基-丁酸
根据固相肽合成- 通用步骤 1制备N-二十烷酰基-γGlu-Ala-Pro-Phe-OH。
实施例152 N-十四烷酰基-Glu-Ala-Pro-Phe-OH, 通用步骤 1:
替代名称：(S)-4-{(S)-2-[(S)-2-((S)-1-羧基-2-苯基-乙基氨基甲酰基)-吡咯烷-1-基]-1-甲基-2-氧代-乙基氨基甲酰基}-4-十四烷酰基氨基-丁酸
根据固相肽合成- 通用步骤 1制备N-十四烷酰基-Glu-Ala-Pro-Phe-OH。
实施例153 N-十四烷酰基-Trp-Pro-Tyr-OH, 通用步骤 1:
替代名称：N{α-1}-十四烷酰基-Trp-Pro-Tyr
根据固相肽合成- 通用步骤 1制备N-十四烷酰基-Trp-Pro-Tyr-OH。
实施例154 N-十二烷酰基-Leu-Thr-Trp-Pro-Tyr-OH, 通用步骤 1:
替代名称：N{1}-十二烷酰基-Leu-Thr-Trp-Pro-Tyr-OH
根据固相肽合成- 通用步骤 1制备N-十二烷酰基-Leu-Thr-Trp-Pro-Tyr-OH。
实施例155 N-十六烷酰基-γGlu-DAla-DPro-DPhe-OH, 通用步骤 1:
替代名称：N{1}-[(4S)-4-羧酸-4-(十六烷酰基氨基)丁酰基]-D-Ala-D-Pro-D-Phe-OH
根据固相肽合成- 通用步骤 1制备N-十六烷酰基-γGlu-DAla-DPro-DPhe-OH。
实施例156 N-十四烷酰基-γGlu-D-Ala-D-Ala-D-Pro-D-Phe-OH, 通用步骤 1:
替代名称：N{1}-[(4S)-4-羧酸-4-(十四烷酰基氨基)丁酰基]-D-Ala-D-Ala-D-Pro-D-Phe-OH
根据固相肽合成- 通用步骤 1制备N-十四烷酰基-γGlu-D-Ala-D-Ala-D-Pro-D-Phe-OH。
实施例157 N-十六烷酰基-γGlu-D-Ala-D-Ala-D-Pro-D-Phe-OH, 通用步骤 1:
替代名称：N{1}-[(4S)-4-羧酸-4-(十六烷酰基氨基)丁酰基]-D-Ala-D-Ala-D-Pro-D-Phe-OH
根据固相肽合成- 通用步骤 1制备N-十六烷酰基-γGlu-D-Ala-D-Ala-D-Pro-D-Phe-OH。
实施例158 N-十四烷酰基-Thr-Ala-Ala-Pro-Tyr-OH, 通用步骤 1:
替代名称：(S)-3-(4-羟基-苯基)-2-[((S)-1-{(S)-2-[(S)-2-((2S,3R)-3-羟基-2-十四烷酰基氨基-丁酰基氨基)-丙酰基氨基]-丙酰基}-吡咯烷-2-羰基)-氨基]-丙酸
根据固相肽合成- 通用步骤 1制备N-十四烷酰基-Thr-Ala-Ala-Pro-Tyr-OH。
实施例159 N-十四烷酰基-Leu-Ala-Ala-Pro-Tyr-OH, 通用步骤 1:
替代名称：(S)-3-(4-羟基-苯基)-2-[((S)-1-{(S)-2-[(S)-2-((S)-4-甲基-2-十四烷酰基氨基-戊酰基氨基)-丙酰基氨基]-丙酰基}-吡咯烷-2-羰基)-氨基]-丙酸
根据固相肽合成- 通用步骤 1制备N-十四烷酰基-Leu-Ala-Ala-Pro-Tyr-OH。
实施例160 N-十八烷酰基-γGlu-Ala-Ala-Pro-Phe-OH, 通用步骤 1:
替代名称：(S)-4-((S)-1-{(S)-2-[(S)-2-((S)-1-羧基-2-苯基-乙基氨基甲酰基)-吡咯烷-1-基]-1-甲基-2-氧代-乙基氨基甲酰基}-乙基氨基甲酰基)-2-十八烷酰基氨基-丁酸
根据固相肽合成- 通用步骤 1制备N-十八烷酰基-γGlu-Ala-Ala-Pro-Phe-OH。
实施例161 N-二十烷酰基-γGlu-Ala-Ala-Pro-Phe-OH, 通用步骤 1:
替代名称：(S)-4-((S)-1-{(S)-2-[(S)-2-((S)-1-羧基-2-苯基-乙基氨基甲酰基)-吡咯烷-1-基]-1-甲基-2-氧代-乙基氨基甲酰基}-乙基氨基甲酰基)-2-二十烷酰基氨基-丁酸
根据固相肽合成- 通用步骤 1制备N-二十烷酰基-γGlu-Ala-Ala-Pro-Phe-OH。
实施例162 N-十四烷酰基-Glu-Ala-Ala-Pro-Phe-OH, 通用步骤 1:
替代名称：(S)-4-((S)-1-{(S)-2-[(S)-2-((S)-1-羧基-2-苯基-乙基氨基甲酰基)-吡咯烷-1-基]-1-甲基-2-氧代-乙基氨基甲酰基}-乙基氨基甲酰基)-4-十四烷酰基氨基-丁酸
根据固相肽合成- 通用步骤 1制备N-十四烷酰基-Glu-Ala-Ala-Pro-Phe-OH。
实施例163 N-十四烷酰基-Glu-Ala-Ala-Pro-Phe-OH, 通用步骤 1:
替代名称：(S)-N-((S)-1-{(S)-2-[(S)-2-((S)-1-羧基-2-苯基-乙基氨基甲酰基)-吡咯烷-1-基]-1-甲基-2-氧代-乙基氨基甲酰基}-乙基)-3-十四烷酰基氨基-琥珀酰胺酸
根据固相肽合成- 通用步骤 1制备N-十四烷酰基-Glu-Ala-Ala-Pro-Phe-OH。
实施例164 N-十四烷酰基-bAsp-Ala-Ala-Pro-Phe-OH, 通用步骤 1:
替代名称：(S)-N-((S)-1-{(S)-2-[(S)-2-((S)-1-羧基-2-苯基-乙基氨基甲酰基)-吡咯烷-1-基]-1-甲基-2-氧代-乙基氨基甲酰基}-乙基)-2-十四烷酰基氨基-琥珀酰胺酸
根据固相肽合成- 通用步骤 1制备N-十四烷酰基-bAsp-Ala-Ala-Pro-Phe-OH。
实施例165 N-十四烷酰基-bAsp-Ala-Pro-Phe-OH, 通用步骤 1:
替代名称：(S)-N-{(S)-2-[(S)-2-((S)-1-羧基-2-苯基乙基氨基甲酰基)-吡咯烷-1-基]-1-甲基-2-氧代-乙基}-2-十四烷酰基氨基-琥珀酰胺酸
根据固相肽合成- 通用步骤 1制备N-十四烷酰基-bAsp-Ala-Pro-Phe-OH。
实施例166 N-十四烷酰基-His-Ala-Ala-Pro-Phe-OH, 通用步骤 1:
替代名称：(S)-2-{[(S)-1-((S)-2-{(S)-2-[(S)-3-(3H-咪唑-4-基)-2-十四烷酰基氨基丙酰基氨基]-丙酰基氨基}-丙酰基)-吡咯烷-2-羰基]-氨基}-3-苯基丙酸
根据固相肽合成- 通用步骤 1制备N-十四烷酰基-His-Ala-Ala-Pro-Phe-OH。
实施例167 PEG12-Ala-Ala-Pro-Phe-OH, 通用步骤 1:
替代名称：N{1}-3-[2-[2-[2-[2-[2-[2-[2-[2-[2-[2-(2-甲氧基乙氧基)乙氧基]乙氧基]乙氧基]乙氧基]乙氧基]乙氧基]乙氧基]乙氧基]乙氧基]乙氧基]丙酰基-Ala-Ala-Pro-Phe-OH
根据固相肽合成- 通用步骤 1制备PEG12-Ala-Ala-Pro-Phe-OH。
实施例168 N-十四烷酰基-γGlu-Ala-Pro-D-Phe-OH, 通用步骤 1:
替代名称：N{1}-[(4S)-4-羧基-4-(十四烷酰基氨基)丁酰基]-Ala-Pro-D-Phe-OH
根据固相肽合成- 通用步骤 1制备N-十四烷酰基-γGlu-Ala-Pro-D-Phe-OH。
实施例169 N-十四烷酰基-γGlu-γGlu-Ala-Pro-Phe-OH, 通用步骤 1:
替代名称：N{1}-[(4S)-4-羧基-4-[[(4S)-4-羧基-4-(十四烷酰基氨基)丁酰基]氨基]丁酰基]-Ala-Pro-Phe-OH
根据固相肽合成- 通用步骤 1制备N-十四烷酰基-γGlu-γGlu-Ala-Pro-Phe-OH。
实施例170 N-十四烷酰基-γGlu-γGlu-Pro-Phe-OH, 通用步骤 1:
替代名称：N{1}-[(4S)-4-羧基-4-[[(4S)-4-羧基-4-(十四烷酰基氨基)丁酰基]氨基]丁酰基]-Pro-Phe-OH
根据固相肽合成- 通用步骤 1制备N-十四烷酰基-γGlu-γGlu-Pro-Phe-OH。
实施例171 N-十四烷酰基-γGlu-γGlu-Phe-Phe-OH, 通用步骤 1:
替代名称：N{1}-[(4S)-4-羧基-4-[[(4S)-4-羧基-4-(十四烷酰基氨基)丁酰基]氨基]丁酰基]-Phe-Phe-OH
根据固相肽合成- 通用步骤 1制备N-十四烷酰基-γGlu-γGlu-Phe-Phe-OH。
实施例172 N-十二烷酰基-Thr-Ala-Ala-Pro-Phe-OH, 通用步骤 1:
替代名称：N{1}-十二烷酰基-Thr-Ala-Ala-Pro-Phe-OH
根据固相肽合成- 通用步骤 1制备N-十二烷酰基-Thr-Ala-Ala-Pro-Phe-OH。
实施例173 N-十四烷酰基-Thr-Ala-Ala-Pro-Phe-OH, 通用步骤 1:
替代名称：N{1}-十四烷酰基-Thr-Ala-Ala-Pro-Phe-OH
根据固相肽合成- 通用步骤 1制备N-十四烷酰基-Thr-Ala-Ala-Pro-Phe-OH。
实施例174 N-十四烷酰基-Glu-Ala-Ala-Pro-D-Phe-OH, 通用步骤 1:
替代名称：N{1}-十四烷酰基-Glu-Ala-Ala-Pro-D-Phe-OH
根据固相肽合成- 通用步骤 1制备N-十四烷酰基-Glu-Ala-Ala-Pro-D-Phe-OH。
实施例175 N-十六烷酰基-Thr-Ala-Ala-Pro-Phe-OH, 通用步骤 1:
替代名称：N{1}-十六烷酰基-Thr-Ala-Ala-Pro-Phe-OH
根据固相肽合成- 通用步骤 1制备N-十六烷酰基-Thr-Ala-Ala-Pro-Phe-OH。
实施例176 N-十四烷酰基-γGlu-Ala-Pro-Trp-OH, 通用步骤 1:
替代名称：N{1}-[(4S)-4-羧基-4-(十四烷酰基氨基)丁酰基]-Ala-Pro-Trp-OH
根据固相肽合成- 通用步骤 1制备N-十四烷酰基-γGlu-Ala-Pro-Trp-OH。
实施例177 N-十四烷酰基-γGlu-Ala-Pro-D-Trp-OH, 通用步骤 1:
替代名称：N{1}-[(4S)-4-羧基-4-(十四烷酰基氨基)丁酰基]-Ala-Pro-D-Trp-OH
根据固相肽合成- 通用步骤 1制备N-十四烷酰基-γGlu-Ala-Pro-D-Trp-OH。
实施例178 N-十四烷酰基-His-Ala-Arg-Pro-Phe-OH, 通用步骤 1:
替代名称：N{α-1}-十四烷酰基-His-Ala-Arg-Pro-Phe-OH
根据固相肽合成- 通用步骤 1制备N-十四烷酰基-His-Ala-Arg-Pro-Phe-OH。
实施例179 N-十四烷酰基-γGlu-Ala-Arg-Pro-Phe-OH, 通用步骤 1:
替代名称：N{1}-[(4S)-4-羧基-4-(十四烷酰基氨基)丁酰基]-Ala-Arg-Pro-Phe-OH
根据固相肽合成- 通用步骤 1制备N-十四烷酰基-γGlu-Ala-Arg-Pro-Phe-OH。
实施例180 N-十二烷酰基-Ala-Ala-Pro-His-OH, 通用步骤 1:
替代名称：N{1}-十二烷酰基-Ala-Ala-Pro-His-OH
根据固相肽合成- 通用步骤 1制备N-十二烷酰基-Ala-Ala-Pro-His-OH。
实施例181 N-十四烷酰基-γGlu-Ala-Pro-Phe-OH, 通用步骤 1:
替代名称：(S)-4-{(S)-2-[(S)-2-((S)-1-羧基-2-苯基-乙基氨基甲酰基)-吡咯烷-1-基]-1-甲基-2-氧代-乙基氨基甲酰基}-2-十四烷酰基氨基-丁酸
根据固相肽合成- 通用步骤 1制备N-十四烷酰基-γGlu-Ala-Pro-Phe-OH。
实施例182 N-十六烷酰基-γGlu-D-Ala-D-Pro-D-Phe-OH, 通用步骤 1:
替代名称：N{1}-[(4S)-4-羧基-4-(十六烷酰基氨基)丁酰基]-D-Ala-D-Pro-D-Phe-OH
根据固相肽合成- 通用步骤 1制备N-十六烷酰基-γGlu-D-Ala-D-Pro-D-Phe-OH。
实施例183 N-十四烷酰基-γGlu-D-Ala-D-Pro-D-Phe-OH, 通用步骤 1:
替代名称：N{1}-[(4S)-4-羧基-4-(十四烷酰基氨基)丁酰基]-D-Ala-D-Pro-D-Phe-OH
根据固相肽合成- 通用步骤 1制备N-十四烷酰基-γGlu-D-Ala-D-Pro-D-Phe-OH。
实施例184 N-十四烷酰基-D-Ala-D-Ala-D-Pro-D-Phe-OH, 通用步骤 1:
替代名称：N{1}-十四烷酰基-D-Ala-D-Ala-D-Pro-D-Phe-OH
根据固相肽合成- 通用步骤 1制备N-十四烷酰基-D-Ala-D-Ala-D-Pro-D-Phe-OH。
实施例185 N-十四烷酰基-Ala-Ala-Pro-D-Phe-OH, 通用步骤 1:
替代名称：(R)-3-苯基-2-({(S)-1-[(S)-2-((S)-2-十四烷酰基氨基-丙酰基氨基)-丙酰基]-吡咯烷-2-羰基}-氨基)-丙酸
根据固相肽合成- 通用步骤 1制备N-十四烷酰基-Ala-Ala-Pro-D-Phe-OH。
实施例186 N-十六烷酰基-Glu-Ala-Ala-Pro-D-Phe-OH, 通用步骤 1:
替代名称：N{1}-十六烷酰基-Glu-Ala-Ala-Pro-D-Phe-OH
根据固相肽合成- 通用步骤 1制备N-十六烷酰基-Glu-Ala-Ala-Pro-D-Phe-OH。
实施例187 N-十四烷酰基-Glu-Ala-Ala-Pro-Trp-OH, 通用步骤 1:
替代名称：N{1}-十四烷酰基-Glu-Ala-Ala-Pro-Trp-OH
根据固相肽合成- 通用步骤 1制备N-十四烷酰基-Glu-Ala-Ala-Pro-Trp-OH。
实施例188 N-十六烷酰基-γGlu-Ala-Ala-Pro-Phe-OH, 通用步骤 1:
替代名称：(S)-4-((S)-1-{(S)-2-[(S)-2-((S)-1-羧基-2-苯基-乙基氨基甲酰基)-吡咯烷-1-基]-1-甲基-2-氧代-乙基氨基甲酰基}-乙基氨基甲酰基)-2-十六烷酰基氨基-丁酸
根据固相肽合成- 通用步骤 1制备N-十六烷酰基-γGlu-Ala-Ala-Pro-Phe-OH。
实施例189 N-二十烷酰基-γGlu-Ala-Pro-Phe-OH, 通用步骤 1:
替代名称：(S)-4-{(S)-2-[(S)-2-((S)-1-羧基-2-苯基-乙基氨基甲酰基)-吡咯烷-1-基]-1-甲基-2-氧代-乙基氨基甲酰基}-2-二十烷酰基氨基-丁酸
根据固相肽合成- 通用步骤 1制备N-二十烷酰基-γGlu-Ala-Pro-Phe-OH。
实施例190 N-十二烷酰基-γGlu-His-Ala-Ala-Pro-Tyr-OH, 通用步骤 1:
替代名称：N{α-1}-[(4S)-4-羧基-4-(十二烷酰基氨基)丁酰基]-His-Ala-Ala-Pro-Tyr-OH
根据固相肽合成- 通用步骤 1制备N-十二烷酰基-γGlu-His-Ala-Ala-Pro-Tyr-OH。
实施例191 N-十四烷酰基-γGlu-His-Ala-Ala-Pro-Tyr-OH, 通用步骤 1:
替代名称：N{α-1}-[(4S)-4-羧基-4-(十四烷酰基氨基)丁酰基]-His-Ala-Ala-Pro-Tyr-OH
根据固相肽合成- 通用步骤 1制备N-十四烷酰基-γGlu-His-Ala-Ala-Pro-Tyr-OH。
实施例192 N-十四烷酰基-His-Ala-Trp-Pro-Phe-OH, 通用步骤 1:
替代名称：N{α-1}-十四烷酰基-His-Ala-Trp-Pro-Phe-OH
根据固相肽合成- 通用步骤 1制备N-十四烷酰基-His-Ala-Trp-Pro-Phe-OH。
实施例193 N-十四烷酰基-Lys-Ala-Arg-Pro-Phe-OH, 通用步骤 1:
替代名称：(S)-2-[((S)-1-{(S)-2-[(S)-2-((S)-6-氨基-2-十四烷酰基氨基-己酰基氨基)-丙酰基氨基]-5-胍基-戊酰基}-吡咯烷-2-羰基)-氨基]-3-苯基-丙酸
根据固相肽合成- 通用步骤 1制备N-十四烷酰基-Lys-Ala-Arg-Pro-Phe-OH。
实施例194 N-十四烷酰基-γGlu-His-Ala-Arg-Pro-Phe-OH, 通用步骤 1:
替代名称：N{α-1}-[(4S)-4-羧基-4-(十四烷酰基氨基)丁酰基]-His-Ala-Arg-Pro-Phe-OH
根据固相肽合成- 通用步骤 1制备N-十四烷酰基-γGlu-His-Ala-Arg-Pro-Phe-OH。
实施例195 N-十四烷酰基-D-His-D-Ala-D-Arg-D-Pro-D-Phe-OH, 通用步骤 1:
替代名称：N{α-1}-十四烷酰基-D-His-D-Ala-D-Arg-D-Pro-D-Phe-OH
根据固相肽合成- 通用步骤 1制备N-十四烷酰基-D-His-D-Ala-D-Arg-D-Pro-D-Phe-OH。
实施例196 N-十四烷酰基-eLys-His-Ala-Arg-Pro-Phe-OH, 通用步骤 1:
替代名称：N{ε}-十四烷酰基Lys-His-Ala-Arg-Pro-Phe-OH
根据固相肽合成- 通用步骤 1制备N-十四烷酰基-eLys-His-Ala-Arg-Pro-Phe-OH。
实施例197 N-十四烷酰基-Arg-His-Ala-Arg-Pro-Phe-OH, 通用步骤 1:
替代名称：N{α-1}-十四烷酰基-Arg-His-Ala-Arg-Pro-Phe-OH
根据固相肽合成- 通用步骤 1制备N-十四烷酰基-Arg-His-Ala-Arg-Pro-Phe-OH。
实施例198，模式GLP-1的酶降解的抑制
福斯特共振能量转移(FRET)（也称为荧光共振能量转移）的底物监测蛋白水解酶活性的用途是本领域已知的(例如Anjuere, F. 等(1993).Biochem J 291 (Pt 3), 869-73)。
模式GLP-1类似物设计为FRET底物，通过掺入7-甲氧基香豆素-4-乙酸(MCA)基团作为供体发色团和二硝基酚基团(DNP)作为受体发色团。
以96孔板形式使用Varioskan Flash Multimode Meter (Thermo Scientific)建立测定，所述测定跟踪作为时间的函数的荧光增加。每个孔包含70 µlDulbecco氏磷酸缓冲盐水(Invitrogen目录＃14190-094)、10 µl 100μM的GLP-1 FRET底物、10 µl 以不同浓度的本发明的N-末端酰化的肽或寡肽和10μl 酶(胰凝乳蛋白酶、胰蛋白酶、弹性蛋白酶等)的储存溶液。在37℃进行孵育。荧光(320nm激发波长和405nm发射波长)在向96孔板中加入酶后立即测量，并至少在接下来的30分钟期间每分钟测量。优化酶的浓度，以允许确定具有和不具有本发明的N-末端酰化肽或寡肽的情况下初始荧光增加的时间进程的斜率。通过荧光曲线的线性部分(例如，反应的前10分钟)的线性回归来确定斜率。一式两份进行每个测定并在计算中包括两次曲线的平均。本发明的N-末端酰化肽或寡肽对GLP-1 FRET底物的酶降解的相对效果通过比较由相同浓度的N-末端酰化的肽或寡肽得到的斜率来获得。抑制效果还表示为本发明的N-末端酰化肽或寡肽的浓度，在该浓度下荧光曲线的斜率等于未抑制反应的50％(EC 50)。这通过用不同浓度的本发明的N-末端酰化的肽或寡肽得到的斜率作为它们浓度的函数绘图，并利用例如，S形逻辑回归(2参数，Sigma Plot v 11)拟合实验结果来完成。本发明的N-末端酰化的肽或寡肽和蛋白水解酶之间相互作用的抑制常数还通过进行上述的测定并分析结果获得，所述测定使用不同浓度的抑制剂和底物，所述分析例如通过本领域技术人员已知的并例如描述于例如Hubalek, F. 等, J. Med. Chem. 47, 1760-1766 (2004)的双倒数转换。
对于下列化合物确定EC50。如果至少有3个独立测量的结果是可用的，则报告EC50±标准误差。
如上述测试下列化合物(1 mM)：
。
如上述用包含8%DMSO的缓冲液测试下列化合物(0.1 mM)
。
实施例199，模式胰岛素的酶降解的抑制
福斯特共振能量转移(FRET)（也称为荧光共振能量转移）的底物监测蛋白水解酶活性的用途是本领域已知的(例如Anjuere, F. 等(1993).Biochem J 291 (Pt 3), 869-73)。
模式胰岛素类似物设计为福斯特共振能量转移的应用(FRET)底物，通过在A-链掺入MCA基团作为供体发色团和经由己酰基接头连接到B29赖氨酸的DNP基团作为受体发色团以获得胰岛素FRET底物，例如A1N-7-甲氧基香豆素-4-乙酰 B29N(eps)-2,4-硝基苯基氨基-己酰 A14E B25H desB30人胰岛素。
以96孔板形式使用Varioskan Flash Multimode Meter (Thermo Scientific)建立测定，所述测定跟踪作为时间的函数的荧光增加。每个孔包含70 µl Dulbecco氏磷酸缓冲盐水(Invitrogen目录＃14190-094)、10 µl 100μM的胰岛素 FRET底物、10 µl 以不同浓度的本发明的N-末端酰化的肽或寡肽和10μl 酶(胰凝乳蛋白酶、胰蛋白酶或弹性蛋白酶)的储存溶液。在37℃进行孵育。荧光(320nm激发波长和405nm发射波长)在向96孔板中加入酶后立即测量，并在接下来的80分钟期间每分钟测量。优化酶的浓度，以允许确定具有和不具有本发明的N-末端酰化肽或寡肽的情况下初始荧光增加的时间进程的斜率。通过荧光曲线的线性部分(例如，反应的前10分钟)的线性回归来确定斜率。典型地一式两份进行每个测定并在计算中包括两次曲线的平均。本发明的N-末端酰化肽或寡肽对胰岛素 FRET底物的酶降解的相对效果通过比较由相同浓度的本发明的N-末端酰化的肽或寡肽得到的斜率来获得。抑制效果还表示为本发明的N-末端酰化肽或寡肽的浓度，在该浓度下荧光曲线的斜率等于未抑制反应的50％(EC 50)。这通过用不同浓度的本发明的N-末端酰化的肽或寡肽得到的斜率作为它们浓度的函数绘图，并利用例如，S形逻辑回归(2参数，Sigma Plot v11)拟合实验结果来完成。本发明的N-末端酰化的肽或寡肽和蛋白水解酶之间相互作用的抑制常数还通过进行上述的测定并分析结果获得，所述测定使用不同浓度的抑制剂和底物，所述分析例如通过本领域技术人员已知的并例如描述于例如Hubalek, F. 等, J.Med. Chem. 47, 1760-1766 (2004)的双倒数转换。
实施例200，模式胰岛素和GLP-1的GI汁降解的抑制
通过用0.4%牛血清白蛋白(BSA)溶液孵育60分钟包被96孔板。向每孔中加入210 µl具有0.005％吐温20和0.001％BSA的缓冲液(Hank平衡盐溶液 -4-(2-羟乙基)-1-哌嗪乙磺酸(HBSS-HEPES)缓冲液)，pH6.5 用3体积的冷的96％乙醇(EtOH) w. 1 % TFA沉淀，30 µl底物(在缓冲液中的100μM胰岛素类似物或GLP-1类似物)和30 µl 本发明的N-末端酰化肽或寡肽(10mM)。板在37℃预孵育(在加入GI汁前)60分钟。加入30 µlGI汁(在缓冲液中稀释10倍)后，板在摇床上孵育60分钟/37℃。在0、5、10、20、30和60分钟取样(40µl)，用3体积冷的96%EtOH w. 1 % TFA停止，并在板中离心(4500rpm，10分钟)。在LC-MS分析前，样品用缓冲液稀释5倍。如样品制备和处理标准样品(0.1、0.5、1.0、5.0、10.0 µM)。在程序的开始和结束时分析标准曲线。每个测试条件包括两次重复。通过在1 mM抑制剂存在下分析以1 µM和10 µM的标准品来评价离子抑制。在每个样品中确定完整的胰岛素或GLP-1。结果相对孵育时间作图。通过使用例如Graph Pad Prism，通过结果的非线性回归确定胰岛素或GLP-1类似物的半衰期。通过将存在抑制剂的情况下获得的半衰期除以不存在抑制剂情况下获得的那些半衰期，半衰期相对不存在抑制剂的情况下胰岛素或GLP-1类似物的半衰期进行表达。通过切下约20cm的一块中间空肠并用2.5 ml 0.9％的氯化钠溶液润洗内侧，从雄性Sprague Dawley大鼠(200-250g)制备GI汁。氯化钠溶液收集于离心管中，从所有大鼠(20)合并，并在4500rpm/10分钟/ 4℃离心。将上清液等分在试管中并储存于-80℃。
A14E, B25H, B29K(N(eps)十八烷二酰基-γGlu-OEG-OEG), desB30 人胰岛素和N-ε26-[2-(2-{2-[2-(2-{2-[(S)-4-羧基-4-(17-羧基十七烷酰氨基)丁酰基氨基]乙氧基}乙氧基)乙酰基氨基]乙氧基}乙氧基)乙酰基][Aib8,Arg34]GLP-1-(7-37)在此测定中用作标准品。
对于重复多于两次的实验，给出标准偏差。
%胰岛素类似物 = A14E, B25H, B29K(N(eps)十八烷二酰基-γGlu-OEG-OEG),desB30 人胰岛素
#GLP-1类似物 = N-ε26-[2-(2-{2-[2-(2-{2-[(S)-4-羧基-4-(17-羧基十七烷酰氨基)丁酰基氨基]乙氧基}乙氧基)乙酰基氨基]乙氧基}乙氧基)乙酰基][Aib8,Arg34]GLP-1-(7-37)
*测定在8% DMSO中进行，所述DMSO在上文所述缓冲液中。
对于重复多于2次的实验，给出标准偏差。
本发明的N-末端脂肪酸修饰的肽或寡肽本身在来自大鼠的空肠提取物(GI汁)中的降解和半衰期的确定，如上文所述测量(实施例200)。结果显示包含所有D-氨基酸的本发明的N-末端脂肪酸修饰的肽或寡肽在GI汁中稳定(半衰期>500分钟)，并且包含所有L-氨基酸的本发明的N-末端脂肪酸修饰的肽或寡肽具有4-6分钟的半衰期。
实施例201 胰岛素被十二指肠腔内酶降解的抑制:
使用来自SPD大鼠的十二指肠腔内酶(通过过滤十二指肠腔内内容物制备)的降解。
每个HPLC小瓶包含Dulbecco氏磷酸缓冲液盐水(DPBS, Invitrogen catalogue #14190-094)、A14E, B25H, B29K(N(eps)十八烷二酰基-γGlu-OEG-OEG), desB30 人胰岛素、本发明的N-末端酰化的肽或寡肽以及酶(胰凝乳蛋白酶、胰蛋白酶、弹性蛋白酶或十二指肠腔内酶类)。总体积是150 µl并且胰岛素和本发明的N-末端酰化的肽或寡肽的浓度进行变化以允许确定EC50和Ki，例如15 µl 150 µM A14E, B25H, B29K(N(eps)十八烷二酰基-γGlu-OEG-OEG), desB30人胰岛素，1 µl 10 mM寡肽，114 µl DPBS和20 µl 0.1 mg/ml胰凝乳蛋白酶。
在37℃平衡的HPLC自动进样器中进行测定，在指定的时间点，等分试样直接注射到HPLC柱，并且确定完整的A14E, B25H, B29K(N(eps)十八烷二酰基-γGlu-OEG-OEG),desB30 人胰岛素的量。在每个测定中，通过数据的指数拟合(例如，单指数衰减，2参数，Sigma Plot version 11, Systat软件)和归一化到对参照胰岛素或人胰岛素确定的一半时间来确定降解半衰期。抑制效果还表示为本发明的N-末端酰化肽或寡肽的浓度，在该浓度下胰岛素的半衰期等于未抑制反应的50％(EC 50)。这通过用不同浓度的本发明的N-末端酰化的肽或寡肽得到的半衰期作为它们浓度的函数绘图，并利用例如，S形逻辑回归(2参数，Sigma Plot v 11)拟合实验结果来完成。本发明的N-末端酰化的肽或寡肽和蛋白水解酶之间相互作用的抑制常数还通过进行上述的测定并分析结果获得，所述测定使用不同浓度的抑制剂和底物，所述分析例如通过本领域技术人员已知的并例如描述于例如Hubalek,F. 等, J. Med. Chem. 47, 1760-1766 (2004)的双倒数转换。本领域技术人员已知的其它算法也可用于从结果确定抑制常数。
实施例202，显色底物的酶降解的抑制
使用显色底物监测蛋白水解酶类的活性是本领域已知的(例如，DelMar, E. G.,等, Anal. Biochem., 99, 316-320, (1979))。例如N-琥珀酰-Ala-Ala-Pro-Phe-对硝基苯胺是用于测量胰凝乳蛋白酶活性的常规使用的底物。4-硝基苯胺底物的酶切割获得。4-硝基苯胺(在碱性条件下黄色)。
以96孔板形式使用Varioskan Flash Multimode Meter (Thermo Scientific)建立测定，所述测定跟踪作为时间的函数在395nm的吸收增加。每孔包含70 µlDulbecco氏磷酸缓冲盐水(Invitrogen目录＃14190-094)、10 µl 在DMSO中的N-琥珀酰-Ala-Ala-Pro-Phe-对硝基苯胺(Sigma cat# S 7388)(使用不同的浓度以获得抑制常数)、10 µl 以不同浓度的本发明的N-末端酰化的肽或寡肽和10μl 酶(胰凝乳蛋白酶、胰蛋白酶、弹性蛋白酶等)的储存溶液。在37℃进行孵育。在向96孔板中加入酶后立即测量在395nm的吸收，并在接下来的80分钟期间每分钟测量。优化酶的浓度，以允许确定有和没有添加抑制剂的情况下初始吸收增加的时间进程的斜率。通过荧光曲线的线性部分(例如，反应的前10分钟)的线性回归来确定斜率。一式两份进行每个检测并在计算中包括两次曲线的平均。本发明的N-末端酰化肽或寡肽对N-琥珀酰-Ala-Ala-Pro-Phe-对硝基苯胺的酶降解的相对效果通过比较由相同浓度的本发明的N-末端酰化的肽或寡肽得到的斜率来获得。抑制效果还表示为本发明的N-末端酰化肽或寡肽的浓度，在该浓度下吸收曲线的斜率等于未抑制反应的50％(EC 50)。这通过用不同浓度的本发明的N-末端酰化的肽或寡肽得到的斜率作为它们浓度的函数绘图，并利用例如，S形逻辑回归(2参数，Sigma Plot v 11)拟合实验结果来完成。本发明的N-末端酰化的肽或寡肽和蛋白水解酶之间相互作用的抑制常数还通过进行上述的测定并分析结果获得，所述测定使用不同浓度的抑制剂和底物，所述分析例如通过本领域技术人员已知的并例如描述于例如Hubalek, F. 等, J. Med. Chem. 47, 1760-1766(2004)的双倒数转换。
实施例203，本发明的N-末端修饰的寡肽的疏水性：
反相HPLC过程中的保留时间(RT)作为本发明的N-末端修饰的肽或寡肽的疏水性的量度，其中所述联系是：RT越长，N-末端修饰的肽或寡肽的疏水性越大。在HPLC分析中应用下列运行条件：
柱： Acquity CSH 1.7 µm C18 1x150 mm
缓冲液A： 0,2M Na2SO4、0,02M Na2HPO4、0,02M NaH2PO4、10%(v/v) CH3CN，pH 7,2
缓冲液B： 70% (v/v) aq.CH3CN
注射体积： 1 µl
检测： UV 在220 nm
温度： 40℃
运行时间： 20分钟
梯度：
。
系统的死体积确定为125 µl，如通过分析10 mM NaNO3溶液所检验，所述溶液以1.25分钟的保留时间被洗脱。
实施例204，肠内注射后大鼠药代动力学，大鼠PK：
用参照化合物和N-末端酰化本发明的肽或寡肽对麻醉大鼠肠内给药(进入空肠)。给药后4小时或更长时间以规定的时间间隔测量所用化合物的血浆浓度以及血糖变化。药代动力学参数随后使用WinNonLin Professional (Pharsight Inc., Mountain View,CA, USA)进行计算。
雄性SD大鼠(Taconic)，体重250-300g，禁食~18小时，用Hypnorm-Dormicum皮下注射(0.079 mg/ml芬太尼柠檬酸盐，2.5 mg/ml 氟阿尼酮和1.25 mg/ml 咪达唑仑)2 ml/kg作为初次剂量(到受试物给药前时间点-60分钟)，20分钟后1 ml/kg，随后每40分钟1 ml/kg来麻醉。
制备用于肠内注射模型的组合物，例如根据下面的组成(重量％)：
600 nmol/g 参照胰岛素化合物
3% 本发明的N-末端酰化的肽或寡肽
15% 丙二醇
51.6% 甘油辛酸二酯
30% 吐温20。
麻醉大鼠放置在稳定在37℃的恒温电热毯上。安装20cm的聚乙烯导管的1-ml注射器中装填胰岛素组合物或媒介物。在腹壁中进行4-5cm的中线切开。通过穿透肠壁将导管轻轻插入离盲肠~50cm的空肠中段。如果肠道存在内容物，则该应用部位移动±10cm。导管尖端置于肠段的腔内约2cm并固定但不使用结扎。将肠小心地重新放回腹腔中并用手术夹封闭每一层中的腹壁和皮肤。在时间0时，大鼠通过导管给药，0.4 ml/kg的测试化合物或媒介物。
通过尾巴尖毛细血管穿刺将用于确定全血葡萄糖浓度的血液样本收集在肝素化的10 μl毛细管中。在稀释于500 μl分析缓冲液后使用Biosen自动分析仪(EKF DiagnosticGmbh，德国)通过葡萄糖氧化酶方法测量血糖浓度。为每种化合物制备平均血糖浓度进程(平均值±SEM)。
收集样品用于确定血浆胰岛素浓度。将100 μl血液样品吸入含有EDTA的冷冻管中。将样品保持在冰上直到离心分离(7000rpm，4℃，5分钟)，将血浆移液到Micronic管中，并然后在20℃下冷冻直至测定。在免疫测定中测量胰岛素类似物的血浆浓度。
在t=-10(仅对于血糖)，在t=-1(恰好在给药前)，并在给药后以指定的时间间隔抽取血样进行4小时或更长时间。
剂量：60 nmol/kg的胰岛素
组合物1：
0.15 mM 参照胰岛素化合物
0.1M 本发明的N-末端酰化的肽或寡肽
5 mM 磷酸盐缓冲液 pH=8
组合物2：
0.15 mM 参照胰岛素化合物
10 mg/ml 本发明的N-末端酰化的肽或寡肽
5 mM 磷酸盐缓冲液 pH=8
组合物3：
600 nmol/g 参照胰岛素化合物
3% 本发明的N-末端酰化的肽或寡肽
15% 丙二醇
51.6% 甘油辛酸二酯
30% 吐温20。
实施例205，在Caco-2细胞单层中的跨上皮运输：
细胞培养
Caco-2细胞从美国典型培养物保藏中心(Manassas, Virginia)获得。细胞接种在培养瓶中并在补充10%胎牛血清、1%青霉素/链霉素(分别为100 U/ml和100 µg/ml)、1% L-谷氨酰胺和1%非必需氨基酸的Dulbecco氏改良Eagle氏培养基中传代。Caco-2细胞以105细胞/孔的密度接种入12孔Transwell板(1.13cm2，0.4 µm孔径)中的组织培养处理的聚碳酸酯滤器上。单层在5% CO2-95% O2的气氛中在37℃生长。每天更换生长培养基。Caco-2细胞接种后第10-14天进行实验。
跨上皮转运
测量从供体室(顶侧)转运到接收室(基底侧)的化合物的量。如下开始转运研究：向供体室加入400 µl在转运缓冲液中的溶液(100µM的A14E, B25H, B29K(N(eps)十八烷二酰基-γGlu-OEG-OEG), desB30 人胰岛素类似物、100µM的A14E, B25H, B29K(N(eps)十八烷二酰基-γGlu-OEG-OEG), desB30人胰岛素类似物和0.5 mM 本发明的N-末端酰化的肽或寡肽)和0.4 µCi/µl [3H]甘露醇，并向接收室加入1000 µl转运缓冲液，可替代地向供体室加入400 µl在转运缓冲液中的溶液(100µM N-ε26-[2-(2-{2-[2-(2-{2-[(S)-4-羧基-4-(17-羧基十七烷酰氨基)丁酰基氨基]乙氧基}乙氧基)乙酰基氨基]乙氧基}乙氧基)乙酰基][Aib8,Arg34]GLP-1-(7-37)、100µM N-ε26-[2-(2-{2-[2-(2-{2-[(S)-4-羧基-4-(17-羧基十七烷酰氨基)丁酰基氨基]乙氧基}乙氧基)乙酰基氨基]乙氧基}乙氧基)乙酰基][Aib8,Arg34]GLP-1-(7-37)和0.5 mM 本发明的N-末端酰化的肽或寡肽)和0.4 µCi/µl[3H]甘露醇，并向接收室加入1000 µl转运缓冲液。所述转运缓冲液由Hank氏平衡盐水溶液组成，包含10 mM HEPES, 0.1%在加入化合物后调节到pH7.4。测量[3H]甘露醇(细胞旁路转运的标志物)的转运以验证上皮的完整性。
在实验前，在上皮两侧将Caco-2细胞用转运缓冲液平衡60分钟。然后去除缓冲液并开始实验。在0分钟和实验结束取供体样品(20 µl)。每15分钟取接收样品(200 µl)。研究在在5% CO2-95% O2的气氛中在37℃在摇板(30rpm)上进行。
在所有具有A14E, B25H, B29K(N(eps)十八烷二酰基-γGlu-OEG-OEG), desB30人胰岛素和甘露醇，或者N-ε26-[2-(2-{2-[2-(2-{2-[(S)-4-羧基-4-(17-羧基十七烷酰氨基)丁酰基氨基]乙氧基}乙氧基)乙酰基氨基]乙氧基}乙氧基)乙酰基][Aib8,Arg34]GLP-1-(7-37)和甘露醇的样品中，分别使用LOCI测定和闪烁计数器确定浓度。
实验之前和期间，监测细胞单层的跨上皮电阻(TEER)。在所选的实验中，在实验结束更换缓冲液为培养基，并在实验后24小时测量TEER。用连接Chopsticks的EVOMTEER。
在存在本发明的N-末端酰化的肽或寡肽的情况下的Caco-2渗透性。
*胰岛素类似物 = A14E, B25H, B29K(N(eps)十八烷二酰基-γGlu-OEG-OEG),desB30 人胰岛素
#GLP-1类似物 = N-ε26-[2-(2-{2-[2-(2-{2-[(S)-4-羧基-4-(17-羧基十七烷酰氨基)丁酰基氨基]乙氧基}乙氧基)乙酰基氨基]乙氧基}乙氧基)乙酰基][Aib8,Arg34]GLP-1-(7-37)。
尽管本文已阐释并描述了本发明的某些特征，但是很多修饰、替换、改变和等价物将对于那些本领域技术人员是会想到的。因此，应当理解，所附的权利要求意在涵盖所有这些修饰和变化，如落入本发明的真实精神内。
序列表
<110> Novo Nordisk A/S
<120> N-末端修饰的寡肽及其用途
<130> 8465.204-WO
<150> EP12157616.9
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<160> 1
<170> PatentIn version 3.5
<210> 1
<211> 11
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工
<220>
<221> 尚未归类的特征
<222> (1)..(1)
<223> X是具有6-20个碳长度的脂肪酸
<220>
<221> 变体
<222> (2)..(2)
<223> Ala可以被任何其它氨基酸替换或不存在
<220>
<221> 变体
<222> (3)..(3)
<223> Ala可以被任何其它氨基酸替换或不存在
<220>
<221> 变体
<222> (4)..(4)
<223> Ala可以被任何其它氨基酸替换或不存在
<220>
<221> 变体
<222> (5)..(5)
<223> Ala可以被任何其它氨基酸替换或不存在
<220>
<221> 变体
<222> (6)..(6)
<223> Ala可以被任何其它氨基酸替换或不存在
<220>
<221> 变体
<222> (7)..(7)
<223> Ala可以被任何其它氨基酸替换或不存在
<220>
<221> 变体
<222> (8)..(8)
<223> Ala可以被任何其它氨基酸替换或不存在
<220>
<221> 变体
<222> (9)..(9)
<223> Ala可以被任何其它氨基酸替换
<220>
<221> 变体
<222> (10)..(10)
<223> Pro可以被除了Lys或Asp之外的任何其它氨基酸替换
<220>
<221> 变体
<222> (11)..(11)
<223> Phe可以被任何其它芳香族氨基酸替换
<400> 1
Xaa Ala Ala Ala Ala Ala Ala Ala Ala Pro Phe
1 5 10

Claims (14)

1.口服药物组合物，包含N-末端酰化的肽或寡肽和选自胰岛素肽和GLP-1肽的药物活性成分，所述N-末端酰化的肽或寡肽具有结构
其中Cx是具有6-20个碳原子长度的脂肪酸，并且
其中Aaa1是Tyr、Trp或Phe；Aaa2是Pro或Leu；Aaa3是任何氨基酸；Aaa4是任何氨基酸或不存在；Aaa5是任何氨基酸或不存在；Aaa6-9不存在；Aaa10是除了Lys之外的任何氨基酸。
2.根据权利要求1的口服药物组合物，其中Aaa3是Arg、Lys、His、Trp、Tyr或Phe。
3.根据权利要求1的口服药物组合物，其中Aaa10是Leu、Thr、Arg或His。
4.根据权利要求1的口服药物组合物，其中Aaa3是OEG或γGlu或βAsp。
5.根据权利要求1的口服药物组合物，其中Aaa4是OEG或γGlu或βAsp。
6.根据权利要求1的口服药物组合物，其中脂肪酸的长度是12-20。
7.根据权利要求1的口服药物组合物，其中所述N-末端酰化的肽或寡肽是来自胃肠道（GI道）的提取物中蛋白水解活性的抑制剂。
8.根据权利要求1的口服药物组合物，其中所述N-末端酰化的肽或寡肽是蛋白水解活性的抑制剂。
9.根据权利要求8的口服药物组合物，其中所述蛋白水解活性是胰蛋白酶、胰凝乳蛋白酶、弹性蛋白酶、羧肽酶和/或氨肽酶的蛋白水解活性。
10.根据权利要求1的口服药物组合物，其中所述药物活性成分是胰岛素肽。
11.根据权利要求1的口服药物组合物，其中所述药物活性成分是GLP-1肽。
12.根据权利要求1的口服药物组合物，其是液体组合物。
13.根据权利要求1的口服药物组合物，其是固体组合物。
14.根据权利要求1的N-末端酰化的肽或寡肽，其选自：
N-十二烷酰基-DAla-DAla-DPro-DPhe-OH;
N-十四烷酰基-DAla-DAla-DPro-DPhe-OH;
N-十四烷酰基-Ala-Ala-Pro-Phe-OH;
N-十四烷酰基-Ala-Ala-Pro-DPhe-OH;
N-十四烷酰基-γGlu-Ala-Pro-Phe-OH;
N-十二烷酰基-Ala-Ala-Pro-Trp-OH;
N-十六烷酰基-Ala-Ala-Pro-Phe-OH;
N-十六烷酰基-γGlu-Ala-Ala-Pro-Phe-OH;
N-十二烷酰基-Ala-Ala-Pro-Phe-OH;
N-十四烷酰基-γGlu-OEG-Ala-Ala-Pro-Phe-OH;
N-十四烷酰基-ßAla-ßAla-Pro-Phe-OH;
N-十四烷酰基-Leu-Ala-Ala-Pro-Tyr-OH;
N-十四烷酰基-Glu-Ala-Ala-Pro-Trp-OH;
N-十六烷酰基-Glu-Ala-Ala-Pro-D-Phe-OH;
N-十四烷酰基-Leu-ßAla-Ala-Pro-DPhe-OH;
N-十六烷酰基-γGlu-Ala-Pro-Phe-OH;
N-十八烷酰基-γGlu-Ala-Pro-Phe-OH;
N-二十烷酰基l-γGlu-Ala-Pro-Phe-OH;
N-十二烷酰基-Leu-Thr-Trp-Pro-Tyr-OH;
N-十六烷酰基-γGlu-DAla-DPro-DPhe-OH;
N-十四烷酰基-Leu-Ala-Ala-Pro-Tyr-OH;
N-十六烷酰基-Thr-Ala-Ala-Pro-Phe-OH;
N-十四烷酰基-His-Ala-Arg-Pro-Phe-OH;
N-十四烷酰基-γGlu-D-Ala-D-Pro-D-Phe-OH; 和
N-十四烷酰基-Glu-Ala-Ala-Pro-Trp-OH。
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