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CN104136439B - 取代的苯并噻吩基‑吡咯并三嗪及其用途 - Google Patents

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Abstract

本发明涉及新的具有蛋白质酪氨酸激酶抑制活性的取代的5‑(1‑苯并噻吩‑2‑基)吡咯并[2,1‑f][1,2,4]三嗪‑4‑胺衍生物，涉及制备这类化合物的方法，涉及含有这类化合物的药物组合物，并且涉及这类化合物或组合物用于治疗增殖性紊乱，特别是癌症和肿瘤疾病的用途。

Description

取代的苯并噻吩基-吡咯并三嗪及其用途
本发明涉及具有蛋白质酪氨酸激酶抑制活性的新的取代的5-(1-苯并噻吩-2-基)吡咯并[2,1-f][1,2,4]三嗪-4-胺衍生物，涉及制备这类化合物的方法，涉及含有这类化合物的药物组合物，并且涉及这类化合物或组合物用于治疗增殖性紊乱的用途，特别是用于治疗癌症和肿瘤疾病的用途。
癌症是世界范围内死亡的主要原因，并且在2008年导致760万人死亡(死亡总人数的约13％)。世界范围内因癌症而死亡的人数预计在继续提高，预计在2030年超过1100万(WHO来源，Fact Sheet No.297,2011年2月)。
引发癌症的途径有很多种，这正是治疗困难的原因之一。发生细胞转化的一种方式是遵循遗传改变。人类基因组计划的完成表明基因组的不稳定性和人类癌基因的异质性。最近对这些遗传改变的鉴定策略加速了发现癌基因的进程。基因异常例如可以导致蛋白质的过表达，并且因此导致这些蛋白质的非生理激活。一个衍生出大量癌基因蛋白的蛋白质家族为酪氨酸激酶，特别是受体酪氨酸激酶(RTK)。在过去的二十年中，大量的研究途径已经证实，RTK介导的信号对细胞不利地生长从而导致癌症的方面具有重要作用。近些年来，使用酪氨酸激酶的选择性小分子抑制剂作为新种类的抗肿瘤发生剂，在临床上已经获得有希望的结果[Swinney and Anthony,Nature Rev.Drug Disc.10(7),507-519(2011)]。
成纤维细胞生长因子(FGF)及其受体(FGFR)形成独特且不同的信号系统的一部分，所述信号系统在涵盖了胚胎发育和成人病理生理学多个方面的多种生物过程中具有重要的作用[Itoh and Ornitz,J.Biochem.149(2),121-130(2011)]。以时空的方式，FGF通过FGFR的结合而刺激包括迁移、增殖、分化和存活的多种细胞功能。
FGF家族包括18种分泌型多肽生长因子，所述分泌性多肽生长因子与4种在细胞表面表达的高度保守的受体酪氨酸激酶(FGFR-1至-4)结合。此外，FGFR-5可以与FGF结合但是不具有激酶结构域，因此不能传导细胞内信号。配体/受体相互作用的特异性通过大量转录和翻译过程而增强，所述转录和翻译过程通过任选的转录起始、任选的剪接和C-端截短而产生大量亚型。各种硫酸乙酰肝素蛋白聚糖(例如多配体聚糖)可以是FGF/FGFR复合体的一部分并且强烈地影响FGF诱导信号应答的能力[Polanska et al.,DevelopmentalDynamics 238(2),277-293(2009)]。FGFR是由细胞外免疫球蛋白样结构域、单次通过跨膜结构域和细胞内二聚酪氨酸激酶结构域这三个结构域组成的细胞表面受体。FGF的结合使细胞内激酶紧密靠近，使其可以彼此之间进行转磷酸作用。已经鉴定了七个磷酸化位点(例如，在FGFR-1中，为Tyr463、Tyr583、Tyr585、Tyr653、Tyr654、Tyr730和Tyr766)。
这些磷酸酪氨酸基团中的一些作为下游信号分子的停泊位点，所述下游信号分子本身还可以被FGFR直接磷酸化，从而导致多种信号转导通路的激活。因此，MAPK信号级联放大涉及细胞生长和分化，PI3K/Akt信号级联放大涉及细胞存活和细胞死亡决定，而PI3K和PKC信号级联放大具有控制细胞极性的功能。目前已经鉴定了FGF信号的一些反馈抑制剂，所述反馈抑制剂包括Spry(Sprouty)和Sef(其表达与FGF类似)家族。此外，在某些条件下，FGFR从前高尔基体膜释放至胞质溶胶中。受体及其配体——FGF-2，通过涉及核转运蛋白的机制被共同转运到细胞核中，并且所述受体及其配体参与形成CREB-结合蛋白(CBP)复合体，所述CREB-结合蛋白(CBP)复合体是一种常见且重要的转录辅激活因子，作为基因激活阀门因子(gene activation gating factor)。已观察到FGF-2、FGFR-1和FGFR-2的免疫组织化学表达及它们在肿瘤细胞的细胞质和细胞核中的定位之间的多重相关性。例如，在肺腺癌中，也在细胞核水平上发现了该关联性，强调了所述复合体在细胞核中的活性作用[Korc和Friesel,Curr.Cancer Drugs Targets 5,639-651(2009)]。
FGF在发育和成人组织中广泛表达并且在多种正常和病理过程中具有重要的作用，所述正常和病理过程包括组织发育、组织再生、血管发生、致瘤性转化、细胞迁移、细胞分化和细胞存活。此外，FGF作为促血管生成因子还参与对血管内皮生长因子受体-2(VEGFR-2)的抑制的抗性出现现象[Bergers和Hanahan,Nat.Rev.Cancer 8,592-603(2008)]。
近来，信号网络的肿瘤基因组学图谱证实了异常的FGF信号在一些常见的人类癌症的发生方面具有重要作用[Wesche et al.,Biochem.J.437(2),199-213(2011)]。不依赖于配体的FGFR组成性信号已被记载于许多人类癌症中，所述癌症例如脑癌、头颈癌、胃癌和卵巢癌。已经在许多恶性肿瘤如骨髓增生性疾病中鉴定了FGFR的突变形式以及FGFR的基因内易位形式。有趣的是，已经发现与许多发育障碍的原因相同的变异也见于肿瘤细胞中(例如，在软骨发育不全和致死性发育不全中发现的突变还常见于膀胱癌，其引起二聚化从而引起FGFR-3的组成性激活)。促进二聚化的突变只是一个能够增加来自FGFR的不依赖于配体的信号的机制。位于FGFR激酶结构域内或FGFR激酶结构域外的其他突变可以改变结构域的构象，从而产生具有永久活性的激酶。
染色体区域8p11-12(FGFR-1在基因组上的位置)的扩增，是乳腺癌中常见的局部(focal)扩增并且存在于约10％的乳房癌中，主要存在于雌激素受体阳性的癌症中。FGFR-1扩增已经在非小细胞肺鳞状癌中报道，并且以低发病率见于卵巢癌、膀胱癌和横纹肌肉瘤中。类似地，约10％的胃癌表现出FGFR-2扩增，其与预后不良、弥漫型癌症相关。此外，发现位于FGFR-1至-4内的多个单核苷酸多态性(SNP)与患选择性癌症的风险增加相关，或已经报道所述位于FGFR-1至-4内的多个单核苷酸多态性与预后不良相关(例如乳腺癌、结肠癌和肺腺癌中的FGFR-4G388R等位基因)。这些SNP促进癌症的直接作用仍是有争议的。
总的说来，已经进行了大量的体内和体外研究，所述研究证实FGFR-1至-4作为重要的癌症靶标，并且综述已经总结了这些发现[参见，例如，Heinzle et al.,ExpertOpin.Ther.Targets 15(7),829-846(2011)；Wesche et al.,Biochem.J.437(2),199-213(2011)；Greulich and Pollock,Trends in Molecular Medicine 17(5),283-292(2011)；Haugsten et al.,Mol.Cancer Res.8(11),1439-1452(2010)]。已经按照一些策略来减弱人肿瘤中的异常FGFR-1至-4的信号，所述策略包括阻断抗体和小分子抑制剂。目前正在临床开发大量的选择性小分子FGFR抑制剂，例如AZD-4547(AstraZeneca)和BJG-398(Novartis)。
尽管在近年来已经在癌症治疗中普遍取得了显著的进步，但是仍需要鉴定具有改善特性的新的抗癌化合物，所述改善特性例如更高潜能、更大选择性、降低的毒性和/或更好的耐受性。因此，本发明待解决的技术问题可以为提供对FGFR激酶具有抑制活性的替代的化合物，从而提供用于治疗FGFR介导的疾病，特别是癌症和其他增殖性紊乱的新的治疗选择。
具有9元或10元双环杂芳基取代基的稠合杂-5,6-双环激酶抑制剂已被分别公开于WO 2007/061737-A2和WO 2005/097800-A1中。这些化合物据说可用于治疗癌症和其他疾病，因为其对mTOR(哺乳动物雷帕霉素靶向基因(mammalian target of Rapamycin))和/或IGF-1R(1型胰岛素样生长因子受体)激酶具有抑制作用。与激酶的抑制作用相关的其他杂-5,6-双环模板(template)结构已经被记载于特别是WO 01/19828-A2、WO 2007/079164-A2和WO 2010/051043-A1中。
对大量蛋白质激酶具有不同的抑制谱的4-氨基吡咯并[2,1-f][1,2,4]三嗪衍生物已经被记载于特别是WO 00/71129-A1、WO 2007/056170-A2、WO 2007/061882-A2、WO2007/064932-A2、WO 2009/136966-A1和WO 2010/126960-A1中。
在WO 2005/121147-A1、WO 2007/064883-A2和WO 2007/064931-A2中，记载了在5位中含有取代的二芳基脲基的4-氨基吡咯并[2,1-f][1,2,4]三嗪衍生物具有抑制FGFR-1的活性。然而，其他受体酪氨酸激酶，尤其是VEGFR、PDGFR和Tie-2激酶，也显著地被该类特定的化合物所抑制。因为假设这类多重激酶活性在治疗过程中可能导致潜在副作用增加，所以本发明的目的在于鉴定对FGFR激酶具有改善的选择性的新试剂，从而提供更加可耐受的癌症疗法的新选择。
出人意料地，目前已经发现在5-位带有特定的取代的苯并噻吩-2-基的4-氨基吡咯并[2,1-f][1,2,4]三嗪衍生物对FGFR激酶具有有效的和选择性的抑制作用，特别是对FGFR-1和FGFR-3激酶具有有效的和选择性的抑制作用，这使这些化合物特别适用于治疗增殖性紊乱，例如癌症和肿瘤疾病。
因此，在一方面，本发明涉及通式(I)的7-取代的5-(1-苯并噻吩-2-基)吡咯并[2,1-f][1,2,4]三嗪-4-胺衍生物
其中
R1为氢、氯、甲基或甲氧基，
R2为氢或甲氧基，
条件是R1和R2中至少一个不为氢，
并且
G代表基团-CH2-OR3、-CH2-NR4R5或-C(＝O)-NR6R7、其中
R3为被选自如下的基团取代的(C1-C6)-烷基：氨基、单-(C1-C4)-烷基氨基、二-(C1-C4)-烷基氨基、氨基羰基、单-(C1-C4)-烷基氨基羰基、二-(C1-C4)-烷基氨基羰基和4元至6元杂环烷基，
或
为4元至6元杂环烷基，
其中所述4元至6元杂环烷基任选地被一个或两个独立地选自(C1-C4)-烷基、氧基、羟基、氨基和氨基羰基的基团取代，
R4为氢或(C1-C4)-烷基，
R5为被一个或两个基团取代的(C1-C6)-烷基，所述基团独立地选自羟基、(C1-C4)-烷氧基、氨基、单-(C1-C4)-烷基氨基、二-(C1-C4)-烷基氨基、羟基羰基、氨基羰基、单-(C1-C4)-烷基氨基羰基、二-(C1-C4)-烷基氨基羰基、(C1-C4)-烷基羰基氨基、氨基羰基氨基和4元至6元杂环烷基，
其中所述4元至6元杂环烷基任选地被一个或两个独立地选自(C1-C4)-烷基、氧基、羟基、氨基和氨基羰基的基团取代，
或
为任选地被基团取代的(C1-C4)-烷基羰基，所述基团选自羟基、(C1-C4)-烷氧基、氨基、单-(C1-C4)-烷基氨基和二-(C1-C4)-烷基氨基，
或
为任选地被一个或两个基团取代的(C3-C6)-环烷基，所述基团独立地选自(C1-C4)-烷基、羟基、(C1-C4)-烷氧基、氨基、单-(C1-C4)-烷基氨基和二-(C1-C4)-烷基氨基，
或
为任选地被一个或两个基团取代的4元至6元杂环烷基，所述基团选自(C1-C4)-烷基、氧基、羟基、氨基和氨基羰基，
或
R4和R5彼此连接并且与其所连接的氮原子一起形成单或双环的饱和的4元至10元杂环烷基环，其可以含有选自N和O的第二环杂原子，并且其可以被最高达三个基团所取代，所述基团彼此独立地选自(C1-C4)-烷基、氧基、羟基、(C1-C4)-烷氧基、氨基、单-(C1-C4)-烷基氨基、二-(C1-C4)-烷基氨基、氮杂环丁烷基、吡咯烷基、哌啶子基、(C1-C4)-烷基羰基、(C3-C6)-环烷基羰基、羟基羰基、氨基羰基、单-(C1-C4)-烷基氨基羰基、二-(C1-C4)-烷基氨基羰基、噻吩基和苯基，
其中所述(C1-C4)-烷基、(C1-C4)-烷氧基、单-(C1-C4)-烷基氨基、二-(C1-C4)-烷基氨基和(C1-C4)-烷基羰基基团的烷基部分任选地被选自羟基、氨基和氨基羰基的基团所取代，
并且
其中所述噻吩基和苯基任选地被一个或两个独立地选自氟、氯、氰基、甲基和三氟甲基的基团所取代，
或者
R4和R5彼此连接并且与其所连接的氮原子一起形成咪唑-1-基或1,2,4-三唑-1-基环，每个环可以被一个或两个独立地选自(C1-C4)-烷基和氰基的基团所取代，
R6为氢，
R7为4元至6元杂环烷基，其任选地被一个或两个独立地选自(C1-C4)-烷基、氧基、羟基、氨基和氨基羰基的基团所取代，
或者
R6和R7彼此连接并且与其所连接的氮原子一起形成单环的饱和的4元至7元杂环烷基环，其可以含有选自N和O的第二环杂原子，并且其可以被一个或两个独立地选自(C1-C4)-烷基、氧基、羟基、氨基、单-(C1-C4)-烷基氨基、二-(C1-C4)-烷基氨基和氨基羰基的基团所取代。
本发明的化合物还可以以其盐、溶剂化物和/或所述盐的溶剂化物的形式存在。
本发明的化合物为式(I)的化合物及其盐、溶剂化物和所述盐的溶剂化物、下文提及的式(I)中包括的式(I-A)至(I-E)的化合物及其盐、溶剂化物和所述盐的溶剂化物，以及式(I)中包括的并在下文作为过程产物和/或实施方案的实例所提及的化合物及其盐、溶剂化物和所述盐的溶剂化物，其中式(I)中包括的并且在下文所提及的化合物并非已经是盐、溶剂化物和所述盐的溶剂化物。
为本发明目的的盐优选为本发明化合物的可药用的盐(例如，见S.M.Berge etal.,"Pharmaceutical Salts",J.Pharm.Sci.1977,66,1-19)。还包括本身不适合药物应用但是可以例如用于分离或纯化本发明化合物的盐。
可药用的盐包括无机酸、羧酸和磺酸的酸加成盐，例如以下酸的盐：盐酸、氢溴酸、硫酸、磷酸、甲磺酸、乙磺酸、苯磺酸、甲苯磺酸、萘二磺酸、甲酸、乙酸、三氟乙酸、丙酸、乳酸、酒石酸、苹果酸、柠檬酸、富马酸、马来酸和苯甲酸。
可药用的盐还包括常规碱的盐，例如且优选碱金属盐(例如钠盐和钾盐)、碱土金属盐(例如钙盐和镁盐)和衍生自氨或有机胺的铵盐，例如作为说明且优选的乙胺、二乙胺、三乙胺、N,N-二异丙基乙胺、单乙醇胺、二乙醇胺、三乙醇胺、二甲基氨基乙醇、二乙基氨基乙醇、普鲁卡因、二环己基胺、二苯甲基胺、N-甲基吗啉、N-甲基哌啶、精氨酸、赖氨酸和1,2-乙二胺。
本发明上下文中的溶剂化物是指本发明化合物的那些形式，其通过与溶剂分子的化学计量学配位而形成固体状态或液体状态的络合物。水合物为特定形式的溶剂化物，其中与水进行配位。水合物为本发明上下文中的优选的溶剂化物。
本发明的化合物可以根据不对称中心的性质或受限的旋转而以异构体(对映异构体、非对映异构体)的形式存在。可以存在不对称中心为(R)-、(S)-，或(R,S)-构形的任何异构体。
还应理解，当两个或多个不对称中心存在于本发明化合物中时，示例性结构的一些非对映异构体和对映异构体通常也是可以的，并且纯非对映异构体和纯对映异构体为优选的实施方案。旨在将纯立体异构体、纯非对映异构体，纯对映异构体及其混合物纳入本发明的范围内。
根据双键或环上的取代基的性质，几何异构体以顺式(＝Z-)或反式(＝E-)形式存在，并且两种异构形式均包括在本发明的范围内。
本发明化合物所有的异构体——无论是分离的、纯的、部分纯的或者外消旋的混合物——均包括在本发明的范围内。所述异构体的纯化和所述异构体混合物的分离可以通过本领域已知的常规技术完成。例如，非对映异构体的混合物可以通过色谱方法或结晶法而分离为单独的异构体，并且外消旋体可以在手性阶段通过色谱方法或者通过拆分而分离为各对映异构体。
此外，上述化合物的所有可能的互变异构形式均包括在本发明内。
本发明还包括所有合适的本发明化合物的同位素变体。本发明化合物的同位素变体应理解为是指本发明化合物内至少一个原子被替换为原子序数相同但是具有与通常或主要在自然界中存在的原子质量不同的原子质量的另一原子。可以纳入至本发明化合物的同位素的实例为氢、碳、氮、氧、氟、氯、溴和碘的同位素，如2H(氘)、3H(氚)、13C、14C、15N、17O、18O、18F、36Cl、82Br、123I、124I、129I和131I。本发明化合物的特定的同位素变体，特别是其中已经纳入一个或多个放射性同位素的那些可以有利于例如检验作用机理或检验活性化合物在人体中的分布。由于可以相对容易地制备和检测，用3H或14C同位素标记的化合物尤其适于该目的。此外，纳入同位素例如氘，由于化合物具有更高的代谢稳定性，例如在人体中半衰期延长或所需的有效剂量降低，从而产生特别的治疗益处。因此本发明化合物的该改性在某些情况下还可以构成本发明优选的实施方案。本发明化合物的同位素变体可以通过本领域技术人员已知的方法，例如通过以下记载的方法和加工实施例中记载的方法，通过使用其中的特定试剂和/或起始化合物的相应的同位素改性来制备。
在本发明上下文中，除非另作说明，取代基和基团具有以下含义：
本发明上下文中(C 1 -C 6 )-烷基、 (C 1 -C 4 )-烷基和 (C 2 -C 4 )-烷基分别代表分别具有1至6，1至4或2至4个碳原子的直链或支化烷基。可以以实例的方式提及并且优选：甲基、乙基、正丙基、异丙基、正丁基、异丁基、仲丁基、叔丁基、正戊基、异戊基、新戊基、正己基和异己基。
本发明上下文中(C 1 -C 4 )-烷氧基代表具有1至4个碳原子的直链或支化烷氧基。可以以实例的方式提及并且优选：甲氧基、乙氧基、正丙氧基、异丙氧基、正丁氧基、异丁氧基、仲丁氧基和叔丁氧基。
本发明上下文中单-(C 1 -C 4 )-烷基氨基代表具有含有1至4个碳原子的直链或支化烷基取代基的氨基。可以以实例的方式提及并且优选：甲基氨基、乙基氨基、正丙基氨基、异丙基氨基、正丁基氨基和叔丁基氨基。
本发明上下文中二-(C 1 -C 4 )-烷基氨基代表具有两个相同的或不同的直链或支化烷基取代基的氨基，所述烷基取代基各自含有1至4个碳原子。可以以实例的方式提及并且优选：N,N-二甲基氨基、N,N-二乙基氨基、N-乙基-N-甲基氨基、N-甲基-N-正丙基氨基、N-异丙基-N-甲基氨基、N-异丙基-N-正丙基氨基、N,N-二异丙基氨基、N-正丁基-N-甲基氨基和N-叔丁基-N-甲基氨基。
本发明上下文中单-(C 1 -C 4 )-烷基氨基羰基代表通过羰基[-C(＝O)-]连接至分子剩余部分并且具有具有1至4个碳原子的直链或支化烷基取代基的氨基。可以以实例的方式提及并且优选：甲基氨基羰基、乙基氨基羰基、正丙基氨基羰基、异丙基氨基羰基、正丁基氨基羰基和叔丁基氨基羰基。
本发明上下文中二-(C 1 -C 4 )-烷基氨基羰基代表通过羰基[-C(＝O)-]连接至分子剩余部分并且具有两个相同或不同的各自具有1至4个碳原子的直链或支化烷基取代基的氨基。可以以实例的方式提及并且优选：N,N-二甲基氨基羰基、N,N-二乙基氨基羰基、N-乙基-N-甲基氨基羰基、N-甲基-N-正丙基氨基羰基、N-异丙基-N-甲基氨基羰基、N,N-二异丙基氨基羰基、N-正丁基-N-甲基氨基羰基和N-叔丁基-N-甲基氨基羰基。
本发明上下文中(C 1 -C 4 )-烷基羰基代表通过羰基[-C(＝O)-]连接至分子剩余部分的具有1至4个碳原子的直链或支化烷基。可以以实例的方式提及并且优选：乙酰基、丙酰基、正丁酰基、异丁酰基、正戊酰基和特戊酰基。
本发明上下文中(C 1 -C 4 )-烷基羰基氨基代表具有直链或支化烷基羰基取代基的氨基，所述取代基在烷基中含有1至4个碳原子并且通过羰基连接至N原子。可以以实例的方式提及并且优选：乙酰基氨基、丙酰基氨基、正丁酰基氨基、异丁酰基氨基、正戊酰基氨基和特戊酰基氨基。
本发明上下文中(C 3 -C 6 )-环烷基代表具有3至6个环碳原子的单环饱和碳环。可以以实例的方式提及：环丙基、环丁基、环戊基和环己基。
本发明上下文中(C 3 -C 6 )-环烷基羰基代表通过羰基[-C(＝O)-]连接至分子的剩余部分的具有3至6个碳原子的单环饱和碳环。可以以实例的方式提及：环丙基羰基、环丁基羰基、环戊基羰基和环己基羰基。
本发明上下文中4元至10元杂环烷基代表总计具有4至10个环原子的单环或二环饱和杂环，其含有一个环氮原子和任选地一个另外的选自N或O的环杂原子，并且其通过环氮原子连接。优选4元至7元杂环烷基，其代表总计具有4至7个环原子的单环饱和杂环，包括一个环氮原子和任选地一个另外的选自N或O的环杂原子。特别优选单环饱和5元至7元杂环 烷基，其含有一个环氮原子和任选地一个另外的选自N或O的环杂原子。可以以实例的方式提及：氮杂环丁烷基、吡咯烷基、吡唑烷基、咪唑烷基、1,2-噁唑烷基、1,3-噁唑烷基、哌啶基、哌嗪基、1,2-氧氮杂环己基、吗啉基、氮杂环庚烷基、1,4-二氮杂环庚烷基、1,4-氧氮杂环庚基、氮杂环辛基、1,5-二氮杂环辛基、1,5-氧氮杂环辛基、八氢吡咯并[3,4-b]吡咯基、八氢吡咯并[3,4-c]吡咯基、八氢吲哚基、八氢异吲哚基、八氢吡咯并[3,4-b]吡啶基、八氢吡咯并[1,2-a]吡嗪基、十氢喹啉基、十氢异喹啉基、3-氮杂双环[3.1.0]己基、7-氮杂双环[2.2.1]庚基、3-氮杂双环[3.2.0]庚基、7-氮杂双环[4.1.0]庚基、2,5-二氮杂双环[2.2.1]庚基、2-氧杂-5-氮杂双环[2.2.1]庚基、2-氮杂双环[2.2.2]辛基、3-氮杂双环[3.2.1]辛基、8-氮杂双环[3.2.1]辛基、8-氧杂-3-氮杂双环[3.2.1]辛基和3-氧杂-9-氮杂双环[3.3.1]壬基。优选为氮杂环丁烷基、吡咯烷基、吡唑烷基、咪唑烷基、1,2-噁唑烷基、1,3-噁唑烷基、哌啶基、哌嗪基、1,2-氧氮杂环己基、吗啉基、氮杂环庚基、1,4-二氮杂环庚基和1,4-氧氮杂环庚基。特别优选为吡咯烷基、吡唑烷基、咪唑烷基、1,2-噁唑烷基、1,3-噁唑烷基、哌啶基、哌嗪基、1,2-氧氮杂环己基、吗啉基、氮杂环庚基、1,4-二氮杂环庚基，和1,4-氧氮杂环庚基。
本发明上下文中4元至6元杂环烷基代表总计具有4至6个环原子的单环饱和杂环，其含有一个或两个相同或不同的选自N、O和S的环杂原子，并且其可以通过环碳原子或通过环氮原子(如果存在)连接。优选4元至6元杂环烷基，其含有一个环氮原子和任选地一个另外的选自N、O或S的环杂原子。特别优选5元或6元杂环烷基，其含有一个环氮原子和任选地一个另外的选自N或O的环杂原子。可以以实例的方式提及：氮杂环丁烷基、氧杂环丁烷基、噻丁烷基、吡咯烷基、吡唑烷基、咪唑烷基、四氢呋喃基、硫杂环戊烷基、1,2-噁唑烷基、1,3-噁唑烷基、1,3-噻唑烷基、哌啶基、哌嗪基、四氢吡喃基、四氢硫吡喃基、1,3-二噁烷基、1,4-二噁烷基、1,2-氧氮杂环己基、吗啉基、和硫代吗啉基。优选为氮杂环丁烷基、吡咯烷基、吡唑烷基、咪唑烷基、1,2-噁唑烷基、1,3-噁唑烷基、1,3-噻唑烷基、哌啶基、哌嗪基、1,2-氧氮杂环己基、吗啉基，和硫代吗啉基。特别优选为吡咯烷基、哌啶基、哌嗪基和吗啉基。
本发明上下文中氮杂环丁烷基、吡咯烷基和哌啶子基具体分别是指N-连接的氮杂环丁烷-1-基、吡咯烷-1-基和哌啶-1-基环。
本发明上下文中氧基取代基代表氧原子，其通过双键连接至碳原子或硫原子。
在本发明上下文中，对于出现数次的所有基团而言，其含义是彼此独立的。如果本发明化合物中的基团被取代，则除非另作说明，否则所述基团可以被单取代或多取代。优选被一个或被两个或被三个相同或不同的取代基所取代。特别优选被一个或被两个相同或不同的取代基所取代。
在优选的实施方案中，本发明涉及通式(I)的化合物，其中
R1为氯或甲基，
R2为甲氧基，
并且
G代表基团-CH2-OR3、-CH2-NR4R5或-C(＝O)-NR6R7，其中
R3为被选自氨基、单-(C1-C4)-烷基氨基和吡咯烷-1-基的基团所取代的(C2-C4)-烷基，
或
为吡咯烷-3-基，
R4为氢或甲基，
R5为被选自羟基、氨基、单-(C1-C4)-烷基氨基、二-(C1-C4)-烷基氨基、氨基羰基和单-(C1-C4)-烷基氨基羰基的基团所取代的(C1-C4)-烷基，
或
为任选地被氨基所取代的(C1-C4)-烷基羰基，
或
为任选地被选自羟基、氨基、单-(C1-C4)-烷基氨基和二-(C1-C4)-烷基氨基的基团所取代的(C3-C6)-环烷基，
或
为任选地被一个或两个独立地选自(C1-C4)-烷基、氧基和氨基的基团所取代的5元或6元杂环烷基，
或
R4和R5彼此连接，并且与其所连接的氮原子一起形成单环饱和4元至7元杂环烷基环，所述环可以含有选自N和O的第二环杂原子，并且其可以被最高达三个独立地选自(C1-C4)-烷基、氧基、羟基、氨基、单-(C1-C4)-烷基氨基、二-(C1-C4)-烷基氨基、(C1-C4)-烷基羰基、(C3-C6)-环烷基羰基、氨基羰基和单-(C1-C4)-烷基氨基羰基的基团所取代，
其中所述(C1-C4)-烷基、单-(C1-C4)-烷基氨基、二-(C1-C4)-烷基氨基和(C1-C4)-烷基羰基的烷基部分任选地被羟基取代，
R6为氢，
R7为任选地被一个或两个独立地选自(C1-C4)-烷基、氧基和氨基的基团所取代的5元或6元杂环烷基，
或者
R6和R7彼此连接并且，与其所连接的氮原子一起形成单环饱和的5元至7元杂环烷基环，所述环可以含有选自N和O的第二环杂原子，并且其可以被一个或两个独立地选自(C1-C4)-烷基、氧基、羟基、氨基、单-(C1-C4)-烷基氨基、二-(C1-C4)-烷基氨基和氨基羰基的基团所取代。
在一个不同的实施方案中，本发明涉及通式(I)的化合物，其中
R1为甲基，
并且
R2为甲氧基。
在另一个不同的实施方案中，本发明涉及通式(I)的化合物，其中
G代表基团-CH2-NR4R5，其中
R4为氢，
并且
R5为任选地被一个或两个独立地选自(C1-C4)-烷基和氧基的基团所取代的5元或6元杂环烷基。
在另一不同的实施方案中，本发明涉及通式(I)的化合物，其中
G代表基团-CH2-NR4R5，其中
R4和R5彼此连接并且，与其所连接的氮原子一起形成单环饱和的5元至7元杂环烷基环，所述环可以含有选自N和O的第二环杂原子，并且其可以被最高达三个独立地选自(C1-C4)-烷基、氧基、羟基、氨基、单-(C1-C4)-烷基氨基、二-(C1-C4)-烷基氨基和氨基羰基的基团所取代。
在本发明另一不同的实施方案中，本发明涉及通式(I)的化合物，其中
G代表基团-C(＝O)-NR6R7，其中
R6为氢，
并且
R7为任选地被一个或两个独立地选自(C1-C4)-烷基和氧基的基团所取代的5元或6元杂环烷基。
在另一不同的实施方案中，本发明涉及通式(I)的化合物，其中
G代表基团-C(＝O)-NR6R7，其中
R6和R7彼此连接并且，与其所连接的氮原子一起形成单环饱和的5元至7元杂环烷基环，所述环可以含有第二环氮原子，并且其可以被一个或两个独立地选自(C1-C4)-烷基、氧基、羟基、氨基、单-(C1-C4)-烷基氨基、二-(C1-C4)-烷基氨基和氨基羰基的基团所取代。
在一个特别优选的实施方案中，本发明涉及通式(I)的化合物，其中
R1为甲基，
R2为甲氧基，
并且
G代表基团-CH2-NR4R5或-C(＝O)-NR6R7，其中
R4为氢，
R5为被氨基、甲基氨基或氨基羰基所取代的(C1-C4)-烷基，
或者
为被氨基所取代的(C1-C4)-烷基羰基，
或者
为2-氧基吡咯烷-3-基或2-氧基哌啶-3-基，
或者
R4和R5彼此连接并且，其与所连接的氮原子一起形成吡咯烷-1-基、哌啶-1-基或哌嗪-1-基环，所述环各自可以地被一个或两个独立地选自甲基、氧基、羟基、氨基、甲基氨基、二甲基氨基和氨基羰基的基团所取代，
R6为氢，
R7为2-氧基吡咯烷-3-基或2-氧基哌啶-3-基，
或者
R6和R7彼此连接并且，其与所连接的氮原子一起形成吡咯烷-1-基、哌啶-1-基或哌嗪-1-基环，所述环各自可以被一个或两个独立地选自甲基、氧基、羟基、氨基、甲基氨基、二甲基氨基和氨基羰基的基团取代。
在基团的各个组合或优选组合中所具体说明的基团的定义还视需要被其他组合的基团的定义所替代，无论说明的基团特定组合为何。上述优选范围的两个或多个的结合是特别优选的。
通式(I)的化合物可以通过主要由所选择的特定G基团(见上文的定义)的性质所控制的多种合成路线来制备。
因此，在另一实施方案中，本发明涉及制备通式(I)化合物的方法，其特征在于式(II)4-氨基吡咯并[2,1-f][1,2,4]三嗪进行以下任一反应：
[A]与甲醛和式(III)的胺反应，
其中R4和R5具有上文所述的含义，
所述反应在酸存在下进行，得到式(IV)的化合物
其中R4和R5具有上文所述的含义，
然后溴化为式(V)的化合物
其中R4和R5具有上文所述的含义，
并且随后与式(VI)的苯并噻吩-2-基硼酸盐偶合，
其中R1和R2具有上文所述的含义，
并且
R8代表氢或(C1-C4)-烷基，或两个R8基团连接在一起形成-(CH2)2-、-C(CH3)2-C(CH3)2-、-(CH2)3-、-CH2-C(CH3)2-CH2-或-C(＝O)-CH2-N(CH3)-CH2-C(＝O)-桥连，
所述反应在钯催化剂和碱存在下进行，得到式(I-A)的目标化合物
其中R1、R2、R4和R5具有上文所述的含义，
或者
[B]在磷酰氯存在下用N,N-二甲基甲酰胺处理，得到式(VII)甲酰基化合物
然后溴化为式(VIII)的化合物
并且随后与式(VI)的苯并噻吩-2-基硼酸盐偶合
其中R1、R2和R8具有上文所述的含义，
所述反应在钯催化剂和碱存在下进行，得到式(IX)的化合物
其中R1和R2具有上文所述的含义，
然后进行以下反应之一
[B-1]与式(III)胺反应
其中R4和R5具有上文所述的含义，
所述反应在酸和还原剂存在下进行，得到式(I-A)的目标化合物
其中R1、R2、R4和R5具有上文所述的含义，
或者
[B-2]氧化为式(X)的羧酸
其中R1和R2具有上文所述的含义，
并且最终与式(XI)的胺偶合
其中R6和R7具有上文所述的含义，
所述反应在缩合剂的存在下进行，得到式(I-B)的目标化合物
其中R1、R2、R6和R7具有上文所述的含义，
或者
[B-3]还原为式(XII)的醇
其中R1和R2具有上文所述的含义，
转化为式(XIII)的相应的卤代甲基衍生物
其中R1和R2具有上文所述的含义，
并且
X为氯、溴或碘,
并且最终用式(XIV)的醇处理
R3-OH (XIV),
其中R3具有上文所述的含义，
所述反应任选地在碱的存在下进行，得到式(I-C)的目标化合物
其中R1、R2和R3具有上文所述的含义，
任选地随后(如果合适)(i)将由此获得的式(I)的化合物分离为其各自的对映异构体和/或非对映异构体，优选使用色谱法，和/或(ii)将式(I)的化合物通过用相应的溶剂和/或酸或碱处理而转化为其各自的水合物、溶剂化物、盐和/或所述盐的水合物或溶剂化物。
具有式(I-D)的本发明化合物
其中R1和R2具有上文所述的含义，
并且
R9为任选地取代的(C1-C4)-烷基[即，R9-C(＝O)-代表任选地取代的(C1-C4)-烷基羰基],
其可以通过将上述式(IX)的醛中间体转化为式(XV)的相应的肟而制备
其中R1和R2具有上文所述的含义，
其中R1和R2具有上文所述的含义，
其然后还原为式(XVI)的氨基甲基化合物
其中R1和R2具有上文所述的含义，
并且随后在缩合剂存在下与式(XVII)的羧酸偶合
其中R9具有上文所述的含义。
具有式(I-E)的本发明化合物
其中R1和R2具有上文所述的含义，
且
R4A和R5A彼此连接并且，与其所连接的氮原子形成任选地取代的咪唑-1-基或1,2,4-三唑-1-基环，
其可以通过将上述式(XIII)的卤代甲基中间体与合适的通式(XVIII)的1H-咪唑或1H-1,2,4-三唑衍生物反应而制备
其中R1和R2具有上文所述的含义，
并且
X为氯、溴或碘，
其中R4A和R5A具有上文所述的含义。
可以通过上述方法制备的式(I-A)、(I-B)、(I-C)、(I-D)和(I-E)的化合物各自代表通式(I)的化合物的特定子集。
代表Mannich型氨基甲基化反应的方法步骤[A](II)→(IV)以通常的方式通过用甲醛和胺(III)的水溶液的混合物在酸性催化剂如甲酸或乙酸存在下处理吡咯并三嗪(II)而进行。优选地，乙酸用作催化剂和溶剂。反应通常在温度范围为+20℃至+80℃下进行[还参见国际专利申请WO 2007/064931-A2中所述的制备方法]。
作为用于方法步骤[A](IV)→(V)和[B](VII)→(VIII)的溴化剂，优选使用N-溴琥珀酰亚胺(NBS)、1,3-二溴-5,5-二甲基乙内酰脲(DBDMH)或单质溴。反应通常在惰性溶剂例如二溴甲烷、氯仿、四氢呋喃、乙腈或N,N-二甲基甲酰胺(DMF)中，在温度范围为-78℃至+25℃下进行。
偶合反应[A](V)+(VI)→(I-A)和[B](VIII)+(VI)→(IX)["Suzuki-Miyaura偶合"]通常在惰性溶剂中借助于钯催化剂和水性碱而进行。适于此目的的钯催化剂包括例如乙酸钯(II)、氯化钯(II)、双(三苯基膦)氯化钯(II)、双(乙腈)氯化钯(II)、[1,1'-双(二苯基膦)二茂铁]氯化钯(II)、四(三苯基膦)钯(0)、双(二亚苄基丙酮)钯(0)，和三(二亚苄基丙酮)二钯(0)，任选地与其他膦配体结合，所述膦配体例如2-二环己基膦基-2',4',6'-三异丙基联苯(X-Phos)、2-二环己基膦基-2',6'-二甲氧基联苯(S-Phos)、4,5-双(二苯基膦基)-9,9-二甲基口占吨，或4-(二-叔丁基膦基)-N,N-二甲基苯胺。而且，可以使用在反应条件下产生催化活性物质的钯预催化剂，例如(2'-氨基联苯-2-基)(氯)钯-二环己基(2',4',6'-三异丙基联苯-2-基)膦[参见，例如S.Kotha et al.,Tetrahedron 58,9633-9695(2002)；T.E.Barder et al.,J.Am.Chem.Soc.127(13),4685-4696(2005)；S.L.Buchwaldet al.,J.Am.Chem.Soc.132(40),14073-14075(2010)，和其中所引用的其他参考文献]。
特别适用于这些偶联反应的碱是碱金属的碳酸氢盐如碳酸氢钠或碳酸氢钾、碱金属的碳酸盐如碳酸钠、碳酸钾或碳酸铯、碱金属的磷酸盐例如磷酸钠或磷酸钾，或碱金属的氟化物如氟化钾或氟化铯。通常，这些碱用作水溶液。反应在在反应条件下为惰性的有机溶剂中进行。优选使用水混溶性有机溶剂，例如1,2-二甲氧基乙烷、四氢呋喃、1,4-二噁烷、乙腈、N,N-二甲基甲酰胺(DMF)或二甲基亚砜(DMSO)，但是还可以使用其他惰性溶剂，例如二氯甲烷或甲苯。偶联反应通常在温度范围为+40℃至+120℃下进行。
方法步骤[B](II)→(VII)["Vilsmeier-Haack甲酰化"]以通常的方式通过在N,N-二甲基甲酰胺(DMF)溶剂中用磷酰氯处理吡咯三嗪(II)而进行。反应通常在温度范围为0℃至+80℃下进行。
适于还原胺化反应[B-1](IX)+(III)→(I-A)的还原剂为常规的碱金属的硼氢化物，例如硼氢化锂、硼氢化钠、硼氢化钾、氰基硼氢化钠或三乙酰氧基硼氢化钠。这些变形通常在酸优选乙酸的存在下，在醇或醚溶剂如甲醇、乙醇、异丙醇、四氢呋喃或1,4-二噁烷中，在温度范围为0℃至+80℃下进行，这取决于使用的胺组分(III)和/或特定的硼氢化物的活性。
对于方法步骤[B-2](IX)→(X)中的氧化反应，用亚氯酸钠在次氯酸盐清除剂如2-甲基-2-丁烯存在下进行的氧化代表所选择的方法[参见，H.W.Pinnick et al.,Tetrahedron 37,2091-2096(1981)；A.Raach and O.Reiser,J.Prakt.Chem.342(6),605-608(2000)，以及其中所引用的参考文献]。反应通常在四氢呋喃/水混合物中在温度为0℃至室温下进行。
适用于方法步骤[B-2](X)+(XI)→(I-B)[形成酰胺]的缩合剂包括例如碳二亚胺如N,N'-二乙基-、N,N'-二丙基-、N,N'-二异丙基-、N,N'-二环己基碳二亚胺(DCC)或N-(3-二甲基氨基丙基)-N'-乙基碳二亚胺(EDC)、碳酰氯衍生物如N,N'-羰基二咪唑(CDI)或氯甲酸异丁酯、α-氯烯胺如1-氯-2-甲基-1-二甲基氨基-1-丙烯、磷化合物如丙烷膦酸酐、二乙基氰基膦酸盐、双(2-氧基-3-噁唑烷基)磷酰氯、苯并三唑-1-基氧基-三(二甲基氨基)鏻六氟磷酸盐(BOP)或苯并三唑-1-基氧基-三(吡咯烷并)鏻六氟磷酸盐(PyBOP)，和脲阳离子(uronium)化合物如O-(苯并三唑-1-基)-N,N,N',N'-四甲基脲阳离子四氟硼酸盐(TBTU)、O-(苯并三唑-1-基)-N,N,N',N'-四甲基脲阳离子六氟磷酸盐(HBTU)、2-(2-氧基-1-(2H)-吡啶基)-1,1,3,3-四甲基脲阳离子四氟硼酸盐(TPTU)、O-(7-氮杂苯并三唑-1-基)-N,N,N',N'-四甲基脲阳离子六氟磷酸盐(HATU)或O-(1H-6-氯苯并三唑-1-基)-1,1,3,3-四甲基脲阳离子四氟硼酸盐(TCTU)，如果合适与另外的助剂结合，所述助剂如1-羟基苯并三唑(HOBt)或N-羟基琥珀酰亚胺(HOSu)，和/或碱如碱金属碳酸盐，例如碳酸钠或碳酸钾，或有机胺碱，例如三乙胺、N-甲基哌啶、N-甲基吗啉(NMM)、N,N-二异丙基乙胺(DIPEA)、吡啶或4-N,N-二甲基氨基吡啶(DMAP)。优选使用O-(7-氮杂苯并三唑-1-基)-N,N,N',N'-四甲基脲阳离子六氟磷酸盐(HATU)或O-(苯并三唑-1-基)-N,N,N',N'-四甲基脲阳离子四氟硼酸盐(TBTU)结合N,N-二异丙基乙胺(DIPEA)和任选地1-羟基苯并三唑(HOBt)。
用于方法步骤[B-2](X)+(XI)→(I-B)的惰性溶剂为例如醚如二乙醚、叔丁基甲基醚、四氢呋喃、1,4-二噁烷或1,2-二甲氧基乙烷、烃如苯、甲苯、二甲苯、己烷或环己烷、卤代烃如二氯甲烷、三氯甲烷、四氯化碳、1,2-二氯乙烷、三氯乙烯或氯苯，或其他溶剂如丙酮、乙腈、乙酸乙酯、吡啶、二甲基亚砜(DMSO)、N,N-二甲基甲酰胺(DMF)、N,N'-二甲基丙烯脲(DMPU)或N-甲基吡咯烷酮(NMP)。还可以使用这些溶剂的混合物。优选使用二氯甲烷、四氢呋喃、N,N-二甲基甲酰胺或其混合物。反应通常在温度范围为0℃至+60℃，优选+10℃至+40℃下进行。
方法步骤[B-3](IX)→(XII)中醛至醇的转化可以通过一些常规的还原方法完成。优选使用在醇溶剂如甲醇或乙醇中的硼氢化钠。
对于方法步骤[B-3](XII)→(XIII)中羟基至卤素转变，可以使用本领域公知的多种常规方法和试剂。所选择的试剂为亚硫酰氯[对于[对于X＝Cl]、四溴甲烷/三苯基膦[对于X＝Br]和碘/三苯基膦[对于X＝I]。由于便于后处理和化合物稳定，因此优选制备7-(氯甲基)衍生物(XIII)[X＝Cl]。
特别适用于方法步骤[B-3](XIII)+(XIV)→(I-C)[形成醚]的碱是碱金属碳酸盐如碳酸锂、碳酸钠、碳酸钾或碳酸铯、碱金属乙酸盐如乙酸钠或乙酸钾，或常规叔胺碱如三乙胺、N-甲基吗啉、N-甲基哌啶、N,N-二异丙基乙胺或吡啶。优选N,N-二异丙基乙胺(DIPEA)。
反应(XIII)+(XIV)→(I-C)在惰性溶剂如二氯甲烷、1,2-二氯乙烷、四氢呋喃或N,N-二甲基甲酰胺(DMF)中，或不含溶剂，使用过量醇(XIV)，在温度范围为+20℃至+150℃下进行。有利地，转化通过微波反应装置进行。加入作为烷基化催化剂的溴化季铵盐如四正丁基溴化铵、N-苯甲基三乙基溴化铵或N,N,N-三甲基十六烷-1-溴化铵也是有益的。
反应顺序(XII)→(XIII)→(I-C)可以在两个独立的步骤中进行，即中间化合物(XIII)的分离和纯化，或者可以使用一锅法进行，即使用制备反应中获得的粗中间体(XIII)。
醛肟(XV)易于在醇/水混合物中通过与羟基胺缩合而从醛中间体(IX)得到。随后还原为伯胺(XVI)通过在甲醇盐酸中用锌粉末处理而实现，并且形成酰胺的(XVI)+(XVII)→(I-D)在如上文所述的方法步骤[B-2](X)+(XI)→(I-B)类似的条件下进行。
反应(XIII)+(XVIII)→(I-E)通常在惰性溶剂如二氯甲烷、1,2-二氯乙烷、四氢呋喃或N,N-二甲基甲酰胺(DMF)中，在温度范围为+20℃至+100℃下进行。转化可以在辅助性碱存在下完成[参见反应(XIII)+(XIV)→(I-C)]，或者可以在无独立的碱的条件下使用过量氮杂茂(azole)组分(XVIII)进行。
在伯胺或仲胺部分形成式(I)的目标化合物的G基团的一部分的情况下，在上述制备反应中有时适于代替游离胺而使用该胺的保护性衍生物作为反应组分。为此，可以使用常规临时的氨基保护基团，如酰基(例如，乙酰基或三氟乙酰基)或氨基甲酸酯型保护基团(例如Boc-、Cbz-或Fmoc-基团)。优选使用Boc(叔丁氧羰基)基团。类似地，作为G基团的一部分的羟基官能可以在前体衍生物中临时封闭和过程中间体，例如四氢吡喃基(THP)醚或作为甲硅烷基醚衍生物，如三甲基甲硅烷基或叔丁基二甲基甲硅烷基醚。
然后可以将这些保护基团在水性后处理和纯化步骤中同时清除，或者可以在随后的，独立的反应步骤中使用本领域公知的常规方法将其移除。同样，按照文献中所述的常规步骤可以很容易地实现从相应的游离胺或醇制备这类受保护的中间体[参见，例如，T.W.Greene and P.Wuts,Protective Groups in Organic Synthesis,Wiley,New York,1999]。
受保护(即，酰化)的胺衍生物的某些类型其本身具有显著的FGFR抑制活性。因此，这类化合物也包括在上文所限定的通式(I)中。
通过以下合成方案举例说明本发明化合物的制备：
方案1
方案2
方案3
[R＝氢，(C1-C4)-烷基或氰基]。
方案4
起始化合物式(II)的4-氨基吡咯并[2,1-f][1,2,4]三嗪可以很容易地通过之前所述的四步反应顺序而得到[方案5；参见国际专利申请WO 2007/064931-A2(中间体A)]：
方案5
式(VI)的苯并噻吩-2-基硼酸盐可以便利地从式(XIX)的取代的苯硫酚衍生物开始而制备(参见以下方案6)。使用溴乙缩醛(XX)的烷基化和随后的聚磷酸介导的环化提供式(XXII)的苯并噻吩中间体，然后所述苯并噻吩中间体在2位金属化并且与三烷基硼酸酯反应。碱性后处理得到式(VIa)的游离(苯并噻吩-2-基)硼酸，其可以视需要通过本领域已知的常规步骤转化为环状硼酸酯，例如所谓的式(VIb)的MIDA硼酸酯[参见例如D.M.Knappet al.,J.Am.Chem.Soc.131(20),6961-6963(2009)]。
方案6
[参见P.A.Plé和L.J.Marnett,J.Heterocyclic Chem.25(4),1271-1272(1988)；A.Venturelli et al.,J.Med.Chem.50(23),5644-5654(2007)]。
式(III)、(XI)、(XIV)、(XVII)、(XVIII)、(XIX)、(XX)和(XXIII)的化合物是从文献得知而市售可得的，或者能够容易地由原料通过采用文献中所述的常规方法而制备。用于制备原料的详细步骤和文献参考还可见于关于制备原料和中间体的部分的实验部分。
本发明化合物具有有价值的药学特性并且可以用于防治和治疗人和其他哺乳动物的病症。
本发明化合物是受体酪氨酸激酶，特别是FGFR激酶，并且最特别是FGFR-1和FGFR-3激酶的活性或表达的有效的抑制剂。因此，在另一实施方案中，本发明提供治疗对这类治疗有所需求的患者中的与FGFR激酶的活性相关或者由FGFR激酶介导的病症的方法，所述方法包括给予所述患者有效量的上文所定义的式(I)的化合物。在某些实施方案中，与FGFR激酶的活性相关的病症是增殖性紊乱，特别是癌症或肿瘤疾病。
在本发明的上下文中，术语“治疗”包括抑制、延迟、缓解、减轻、阻止、降低或引起消退疾病、紊乱、病症或状态，其发病和/或发展，和/或其症状。术语“防治”包括降低患有、染上或经历疾病、紊乱、病症或状态，其发病和/或发展，和/或其症状的风险。术语防治包括预防。紊乱、疾病、病症或状态的治疗或防治可以是部分或完全。
术语“增殖性紊乱”包括涉及细胞不想要的或不可控制的增殖的病症。本发明化合物可以用于防治、抑制、阻断、降低、减少、控制细胞增殖和/或细胞分裂等，和/或产生凋亡。该方法包括给予有所需求的受试者(包括哺乳动物，包括人)一定量的本发明的化合物，或其能够有效治疗或防治所述病症的可药用的盐、异构体、多晶型物、代谢物、水合物或溶剂化物。
在本文件中，为简化，与复数相比优选使用单数，但是通常意指如果未另有说明，则包括多个。例如，词句“一种治疗患者中疾病的方法，包括给予患者有效量的式(I)的化合物”意指包括同时治疗多于一种疾病以及给予多于一种式(I)的化合物。
可以用本发明化合物治疗和/或防治的增殖性紊乱包括但不限于癌症和肿瘤疾病类。具体地，这些应理解为意指以下疾病，但不限于以下这些疾病：乳房癌和乳房肿瘤(导管和小叶形式，以及原位)、呼吸道肿瘤(小细胞和非小细胞肺癌、小细胞性的和非小细胞性癌症、支气管癌症、支气管腺瘤、胸膜肺母细胞瘤)、脑瘤(例如，脑干瘤和下丘脑瘤、星形细胞瘤、胶质母细胞瘤、髓母细胞瘤、室管膜瘤、神经外皮层和松果体瘤)、消化器官肿瘤(食道肿瘤、胃肿瘤、胆囊肿瘤、小肠肿瘤、大肠肿瘤、直肠肿瘤、肛门肿瘤)、肝肿瘤(特别是肝细胞癌、肝管细胞癌和混合性肝细胞和胆管细胞癌)、头颈区(喉、下咽部、鼻咽、口咽、唇和口腔)肿瘤、皮肤肿瘤(鳞状上皮细胞癌、卡波西肉瘤、恶性黑色素瘤、梅克尔细胞皮肤癌和非黑色素瘤皮肤癌)、软组织肿瘤(特别是软组织肉瘤、骨肉瘤、恶性纤维组织细胞瘤、淋巴肉瘤和横纹肌肉瘤)、眼肿瘤(特别是眼内黑色素瘤、眼色素层黑色素瘤和视网膜母细胞瘤)、内分泌腺和外分泌腺(例如甲状腺和甲状旁腺、胰和唾液腺)肿瘤、尿道肿瘤(膀胱、阴茎、肾、肾盂和输尿管肿瘤)、生殖器官肿瘤(女性的子宫内膜癌、宫颈癌、卵巢癌、阴道癌、外阴癌和子宫癌，和男性的前列腺癌和睾丸癌)，及其远端转移。这些病症还包括实体形式和循环血细胞形式的增殖性血液疾病，例如淋巴瘤、白血病和骨髓增生性疾病(例如急性骨髓、急性成淋巴细胞、慢性淋巴细胞、慢性骨髓性和毛细胞性白血病，和AIDS相关的淋巴瘤、霍奇金淋巴瘤、非霍奇金淋巴瘤、皮肤T细胞淋巴瘤、伯基特淋巴瘤，和中枢神经系统中的淋巴瘤。
由于其活性和选择性特性，本发明化合物被认为特别适于治疗乳房、肺、胃、膀胱和卵巢癌和肿瘤疾病。此外，本发明化合物可以特别适于防治和抑制一般的肿瘤转移。
可以用本发明的化合物和方法治疗和/或防治的其他增殖性病症包括银屑病、瘢痕疙瘩和其他影响皮肤的增生、与表皮下水泡形成相关的包括大泡性类天疱疮的大泡病症、多形性红斑和皮炎样皮炎、纤维化病症如肺纤维化、动脉粥样硬化、再狭窄和肝硬化、肾脏疾病包括肾小球膜细胞增生性病症、肾小球病、肾小球肾炎、糖尿病肾病、恶性肾硬化和多囊性肾病、良性前列腺增生(BPH)、血管原或血管增生性病症，和血栓性微血管病综合征。
本发明化合物还用于治疗和/或防治眼科疾病如老年性黄斑退化症(AMD)、干性黄斑变性、缺血性视网膜静脉闭塞、糖尿病黄斑水肿、糖尿病视网膜病变、早产儿视网膜病，和其他视网膜病变。
可以通过给予本发明化合物而治疗和/或防治的其他病症包括妇科疾病如子宫内膜异位症、肌瘤和卵巢囊肿、与脂肪形成相关的代谢性病症、胆汁代谢、磷酸盐代谢、钙新陈代谢和/或骨矿物化、骨骼病症如侏儒症、软骨发育不良和斐弗综合征，软骨疾病如骨性关节炎和多关节炎、风湿性关节炎、脱发和移植排斥。
上述疾病已在人体中被良好地表征，但是在其他哺乳动物中也存在类似的病因，并且在这些哺乳动物中可以用本发明化合物和方法治疗。
因此，本发明还涉及本发明化合物用于治疗和/或防治病症，特别是上述病症的用途。
本发明还涉及本发明的化合物用于制备用于治疗和/或防治病症，特别是上述病症的药物组合物的用途。
本发明还涉及本发明的化合物在用于治疗和/或防治病症，特别是上述病症的方法中的用途。
本发明还涉及通过使用有效量的至少一种本发明的化合物来治疗和/或防治病症，特别是上述病症的方法。
本发明化合物可以作为单独的药剂给药或者与一种或多种另外的治疗剂结合给药，只要该结合不导致不想要的和/或不可接受的副作用。该结合疗法包括给予单个药物剂量制剂，所述制剂含有上文定义的式(I)的化合物的和一种或多种另外的治疗剂，以及给予各自单独的药物剂量制剂形式的式(I)的化合物和各另外的药物治疗剂。例如，可以将式(I)的化合物和治疗剂在单个(固定的)口服剂量组合物如片剂或胶囊剂中一起给予患者，或各种药剂可以以单独的剂量制剂给药。
当使用单独的剂量制剂时，式(I)的化合物和一种或多种另外的治疗剂可以基本同时给药(即，同时地)或在分别错开的时间给药(即，连续地)。
特别地，本发明化合物可以固定的或单独的与其他抗癌剂的结合物使用，所述抗癌剂例如烷基化剂、抗代谢药、来自植物的抗肿瘤剂、激素治疗剂、拓扑异构酶抑制剂、微管蛋白抑制剂、激酶抑制剂、靶向药物、抗体、抗体-药物缀合物(ADC)、免疫物、生物应答调节剂、抗血管生成化合物，和其他抗增殖、抑制细胞生长的和/或细胞毒性的物质。关于此，以下为可以与本发明化合物结合使用的第二药剂的非限制性的实例列表：
阿巴瑞克、阿比特龙、阿柔比星、阿法替尼、阿柏西普、阿地白介素、阿仑珠单抗、阿利维A酸、alpharadin、六甲蜜胺、氨鲁米特、氨萘非特、氨柔比星、安吖啶、阿那曲唑、andromustine、arglabin、门冬酰胺酶、阿昔替尼、5-azocitidine、巴利昔单抗、贝洛替康、苯达莫司汀、贝伐单抗、贝沙罗汀、比卡鲁胺、比生群、博莱霉素、硼替佐米、博舒替尼、丙氨酸布立尼布、布舍瑞林、白消安、卡巴他赛、CAL-101、亚叶酸钙、左亚叶酸钙、喜树碱、卡培他滨、卡铂、卡莫氟、卡莫司汀、卡妥索单抗、西地尼布、西莫白介素、西妥昔单抗、苯丁酸氮芥、氯地孕酮、氮芥、西多福韦、顺铂、克拉曲滨、氯膦酸、氯法拉宾、考布他汀、crisantaspase、克里唑蒂尼、环磷酰胺、环丙孕酮、阿糖胞苷、达卡巴嗪、放线菌素D、达依泊汀α、达雷那新、达沙替尼、柔红霉素、地西他滨、地加瑞克、地尼白介素2、地舒单抗、地洛瑞林、二溴螺氯铵、多西他赛、多韦替尼、去氧氟尿苷、阿霉素(doxorubicin)、度他雄胺、依库珠单抗、edrecolomab、依氟鸟氨酸、依利醋铵、艾曲泊帕、内皮抑素、依诺他滨、阿露素(Epimbicin)、表柔比星、环硫雄醇、促红素、倍他依泊汀、埃博霉素、艾铂、
艾立布林、厄洛替尼、雌二醇、雌莫司汀、依托泊甙、依维莫司、伊沙替康、依西美坦、依昔舒林、法罗唑、芬维A胺、非格司亭、非那雄胺、flavopiridol、氟达拉滨、5-氟脲嘧啶、氟甲睾酮、氟他胺、丁香通(foretinib)、福美坦、福莫司汀、氟维司群、加尼瑞克、吉非替尼、多西他赛、吉妥珠单抗、吉妥珠单抗、吉美拉西、葡磷酰胺、谷胱甘肽、戈舍瑞林、组氨瑞林、羟基脲、伊班膦酸、替伊莫单抗、伊达比星、异环磷酰胺、伊马替尼、咪喹莫特、英丙舒凡、勃林格(intedanib)、α-干扰素、α-干扰素-2a、α-干扰素-2b、β干扰素、γ干扰素、白细胞介素2、伊匹木单抗、依立替康、伊沙匹隆、兰瑞肽、拉帕替尼、拉索昔芬、来那度胺、来格司亭、香菇多糖、lenvatinib、来妥替尼、来曲唑、亮丙瑞林、左旋咪唑、linifanib、linsitinib、利舒脲、洛铂、洛莫司汀、氯尼达明、勒托替康、马磷酰胺、马帕木单抗、马赛替尼、马索罗酚、甲羟孕酮、甲地孕酮、美拉胂醇、美法仑、美雄烷、巯嘌呤、甲氨蝶呤、甲氨基酮戊酸盐、甲睾酮、米伐木肽、米非司酮、米替福新、米立铂、二溴甘露醇、米托胍腙、二溴卫矛醇、丝裂霉素、米托坦、米托蒽醌、莫拉司亭、莫替沙尼、诺龙、奈达铂、奈拉滨、奈拉替尼、尼罗替尼、尼鲁米特、尼妥珠单抗、尼莫司汀、尼曲吖啶、诺拉曲塞、奥法木单抗、奥普瑞白介素、奥沙利铂、紫杉醇、帕利夫明、帕米磷酸、帕木单抗、帕唑帕尼、培门冬酶、β-peg-红细胞生成素、pegfilgastrim、α-聚乙烯乙二醇a-2b、吡利曲索、培美曲塞、pemtumomab、喷司他丁、培洛霉素、培磷酰胺、哌立福新、帕妥珠单抗、毕西巴尼、吡喃阿霉素(Pirambicin)、吡柔比星、普乐沙福、普卡霉素、聚氨葡糖、聚磷酸雌二醇、普纳替尼(Ponatinib)、卟吩姆钠、普拉曲沙、泼尼莫司汀、丙卡巴肼、丙考达唑、PX-866、喹高莱、雷洛昔芬、雷替曲噻、雷珠单抗、雷莫司汀、雷佐生、瑞戈非尼、利塞膦酸、利妥昔单抗、罗米地新、罗米司亭、芦比替康、沙拉替尼、沙格司亭、沙铂、司美替尼、sipuleucel-T、西罗莫司、西佐喃、索布佐生、索拉非尼、链佐星、舒尼替尼、他拉泊芬、他米巴罗汀、他莫昔芬、坦度替尼、他索纳明、替西白介素、替加氟、替拉替尼、替莫泊芬、替莫唑胺、坦罗莫司、替尼泊苷、睾内酯、睾酮、替曲膦、沙利度胺、塞替派、胸腺法新、硫鸟嘌呤、替匹法尼、tivozanib、托西尼布、托珠单抗、托泊替康、法乐通(Toremifene)、托西莫单抗、曲贝替定、曲妥珠单抗、曲奥舒凡、维A酸、triapine、曲洛司坦、三甲曲沙、曲普瑞林、曲磷胺、乌本美司、戊柔比星、凡德他尼、伐普肽、varlitinib、伐他拉尼、vemurafenib、阿糖腺苷、长春碱、长春新碱、长春地辛、长春氟宁、长春瑞滨、伏洛昔单抗、伏林司他、净司他丁、唑来膦酸和佐柔比星。
一般地，将本发明化合物和其他抗癌剂结合可以达到以下目标：
·与用单一活性化合物处理相比，在减慢肿瘤生长、降低肿瘤尺寸或者甚至完全消除肿瘤的方面具有提高的活性；
·与单一疗法相比可以更低的剂量使用化学疗法；
·与单独的给药相比可为具有较少副作用的更加可耐受的疗法；
·可治疗范围更宽的癌症和肿瘤疾病；
·实现更高速率的治疗响应；
·与常规疗法相比患者的存活时间更长。
因此，在另一实施方案中，本发明涉及用于治疗和/或防治病症，特别是上述病症的包含至少一种本发明化合物和一种或多种另外的治疗剂的药物组合物。
在癌症治疗中，本发明化合物还可以与放射性疗法和/或外科手术介入相结合使用。
此外，式(I)的化合物可以以其本身使用或用于组合物中，用于研究和诊断，或者作为分析参考标准品等，这是本领域中已知的。
当本发明化合物作为药品给药至人体和其他哺乳动物时，其可以作为本身给予或者作为药物组合物给予，所述药物组合物含有例如0.1％至99.5％(更优选，0.5％至90％)的活性成分和一种或多种可药用的赋形剂。
因此，在另一方面，本发明涉及包含与一种或多种惰性无毒药学合适的赋形剂常规结合的至少一种本发明化合物的药物组合物，并且涉及所述药物组合物用于治疗和/或防治病症，特别是上述病症的用途。
本发明化合物可以全身作用和/或局部作用。为此，其可以以合适的方式给药，例如通过口服、胃肠外、经肺、经鼻、经舌、经舌下、经面颊、经直肠、经真皮、经皮、经结膜、经耳或局部途径给药，或作为植入物或支架给药。
对于这些施用途径，本发明化合物可以以合适的施用形式给药。
适于口服给药的是根据现有技术起作用并且快速和/或以改进方式传送本发明化合物，并且含有结晶、无定形和/或溶解形式的本发明化合物的施用形式，所述形式例如片剂(无包衣或包衣片剂，所述包衣片剂例如具有肠包衣或不溶的包衣或延迟溶解并控制本发明化合物的释放的包衣)，在嘴中快速崩解的片剂，或薄膜/糯米纸、薄膜/冻干剂、胶囊剂(例如硬凝胶胶囊或软凝胶胶囊)、糖衣片剂、颗粒剂、丸剂、粉末剂、乳液、悬剂、气溶胶剂或溶液剂。
可以避免吸收步骤(静脉内、动脉内、心脏内、脊柱内或腰内)或包含吸收步骤(肌肉内、皮下、真皮内、脊柱内或腰内)而进行胃肠外施用。有用的胃肠外施用形式包括注射和注入溶液、悬液、乳液、冻干和无菌粉末形式的制剂。
适于其他施用途径的形式包括例如吸入药物形式(例如粉末吸入器、喷雾器)、滴鼻剂、溶液或喷雾剂、口服、舌下或含服给药的片剂或胶囊剂(例如药片、锭剂)、栓剂、耳用制剂和眼用制剂(例如滴剂、软膏剂)、阴道胶囊剂、水悬液(洗液、摇动混合物)、亲脂性悬浮液、油膏、乳膏、铋乳、糊剂、泡沫、粉剂、经皮吸收的治疗系统(例如贴片)、植入物和支架。
在一个优选的实施方案中，含有上述式(I)的化合物的药物组合物以适于口服给药的形式提供。在另一优选的实施方案中，包含上述式(I)的化合物的药物组合物以适于静脉内给药的形式提供。
本发明化合物可以以本身已知的方式通过与惰性无毒适于药用的赋形剂混合而转化为所述的施用形式。这些赋形剂特别包括载体(例如微晶纤维素、乳糖、甘露醇)、溶剂(例如液体聚乙二醇)、乳化剂(例如十二烷基硫酸钠)、表面活性剂(例如聚氧基山梨聚糖油酸酯)、分散剂(例如聚乙烯基吡咯烷酮)、合成聚合物和天然聚合物(例如白蛋白)、稳定剂(例如抗氧化剂例如抗坏血酸)、着色剂(例如无机颜料例如氧化铁)，和味道和/或气味遮盖剂
本发明化合物的优选剂量为患者可耐受并且不发生严重副作用的最大量。说明性地，本发明化合物可以以约0.001mg/kg体重至约1mg/kg体重，优选约0.01mg/kg体重至约0.5mg/kg体重的剂量胃肠外给药。关于口服给药，示例性剂量范围为约0.01至100mg/kg体重，优选约0.01至20mg/kg体重，并且更优选约0.1至10mg/kg体重。介于上文所述数值之间的范围也意欲为本发明的一部分。
然而，可以改变本发明药物组合物的活性成分的实际剂量水平和给药时间方案，以获得能够有效实现特定患者、组合物和给药方式所需的治疗响应而不会对患者产生毒性的活性成分的量。因此，如果合适需要特别是作为以下因素的函数而偏离所述用量，所述因素为患者的年龄、性别、体重、饮食和通常健康状况，特定药物的生物利用度和药效特性及其给药方式和途径，进行给药的时间或间隔，所选择的剂量方案，各个患者对活性成分的反应，所涉及的具体的疾病，疾病的程度或涉及情况或严重性，同时治疗的种类(即，本发明化合物与其他同时给予的治疗之间的相互作用)，和其他相关的条件。
因此，在一些情况下以小于上述最小量的用量进行就可以取得令人满意的效果，而在其他情况下，必须超所述上限。可以从小于所述化合物的最优剂量的较小剂量开始进行治疗。此后，可以以小的增量增加剂量直至达到该条件下的最优效果。为便利，可以将总每日剂量分开并在一天内以单独的部分给药。
以下示例性的实施方案说明本发明。本发明不限于所述实施例。
除非另作说明，以下测试和实例中的百分比为重量百分比；份数为重量份。所述液体/液体溶液的溶剂比、稀释比和浓度各自以体积计。
A.实施例
缩写和首字母缩写：
Ac 乙酰基
Ac2O 乙酸酐
AcOH 乙酸
aq. 水性(溶液)
Boc 叔丁氧基羰基
br. 宽(1H-NMR信号)
cat. 催化
conc. 浓缩
d 双峰(1H-NMR信号)
DCI 直接化学电离(MS)
DCM 二氯甲烷
DIPEA N,N-二异丙基乙胺
DMF N,N-二甲基甲酰胺
DMSO 二甲基亚砜
EI 电子碰撞电离(MS)
eq. 当量
ESI 电喷雾电离(MS)
Et 乙基
EtOAc 乙酸乙酯
EtOH 乙醇
GC-MS 气相色谱偶合质谱
h 小时
Hal 卤素
HATU O-(7-氮杂苯并三唑-1-基)-N,N,N',N'-四甲
基脲阳离子六氟磷酸盐
1H-NMR 质子核磁共振谱
HPLC 高效液相色谱
iPr 异丙基
LC-MS 液相色谱偶合质谱
Me 甲基
MeOH 甲醇
min 分钟
MS 质谱
m/z 质荷比(MS)
n-Bu 正丁基
of th. 理论的(化学收率)
Pd/C 披钯木炭
PdCl2(dppf) [1,1'-双(二苯基膦基)二茂铁]二氯钯(II)
Ph 苯基
PPA 聚磷酸
q 四重峰(1H-NMR信号)
quant. 定量(收率)
rac 外消旋
Rf TLC保留因子
RP 反相(HPLC)
rt 室温
Rt 保留时间(HPLC)
s 单峰(1H-NMR信号)
sat. 饱和(溶液)
t 三重峰(1H-NMR信号)
TBME 叔丁基甲基醚
TBTU N-[(1H-苯并三唑-1-基氧基)(二甲基氨基)
亚甲基]-N-甲基甲烷四氟硼酸铵
tBu 叔丁基
tert 叔
TFA 三氟乙酸
THF 四氢呋喃
TLC 薄层色谱
LC-MS和GC-MS方法：
方法1(LC-MS):
仪器：具有Waters UPLC Acquity的Micromass Quattro Premier；柱：ThermoHypersil GOLD 1.9μ,50mm x 1mm；洗脱液A：1L水+0.5mL 50％aq.甲酸,洗脱液B：1L乙腈+0.5ml 50％aq.甲酸；梯度：0.0min 90％A→0.1min 90％A→1.5min 10％A→2.2min 10％A；温度：50℃；流速：0.33mL/min；UV检测：210nm.
方法2(LC-MS):
仪器：Waters Acquity SQD UPLC System；柱：Waters Acquity UPLC HSS T3 1.8μ,50mm x 1mm；洗脱液A：1L水+0.25mL 99％甲酸,洗脱液B：1L乙腈+0.25mL 99％甲酸；梯度：0.0min 90％A→1.2min 5％A→2.0min 5％A；烘箱：50℃；流速：0.40mL/min；UV检测：210-400nm.
方法3(LC-MS):
仪器：具有HPLC Agilent 1100 Series的Micromass Quattro Micro；柱：YMC-Triart C18 3μ,50mm x 3mm；洗脱液A：1L水+0.01mol碳酸铵,洗脱液B：1L乙腈；梯度：0.0min 100％A→2.75min 5％A→4.5min 5％A；烘箱：40℃；流速：1.25mL/min；UV检测：210nm.
方法4(LC-MS):
仪器：Waters Acquity SQD UPLC System；柱：Waters Acquity UPLC HSS T3 1.8μ,30mm x 2mm；洗脱液A：1L水+0.25mL 99％甲酸,洗脱液B：1L乙腈+0.25mL 99％甲酸；梯度：0.0min 90％A→1.2min 5％A→2.0min 5％A；烘箱：50℃；流速：0.60mL/min；UV检测：208-400nm.
方法5(LC-MS):
仪器：具有Waters UPLC Acquity的Micromass Quattro Premier；柱：ThermoHypersil GOLD 1.9μ,50mm x 1mm；洗脱液A：1L水+0.5mL 50％aq.甲酸,洗脱液B：1L乙腈+0.5ml 50％aq.甲酸；梯度：0.0min 97％A→0.5min 97％A→3.2min 5％A→4.0min 5％A；温度：50℃；流速：0.3mL/min；UV检测：210nm.
方法6(LC-MS):
仪器MS：Waters ZQ 2000；仪器HPLC：Agilent 1100,2柱切换,自动取样器HTCPAL；柱：YMC-ODS-AQ 3.0μm,50mm x 4.6mm；洗脱液A：水+0.1％甲酸,洗脱液B：乙腈+0.1％甲酸；梯度：0.0min 100％A→0.2min 95％A→1.8min 25％A→1.9min 10％A→2.0min 5％A→3.2min 5％A→3.21min 100％A→3.35min 100％A；烘箱：40℃；流速：3.0mL/min；UV检测：210nm.
方法7(LC-MS):
仪器MS：Waters SQD；仪器HPLC：Waters UPLC；柱：Zorbax SB-Aq(Agilent)1.8μm,50mm x 2.1mm；洗脱液A：水+0.025％甲酸,洗脱液B：乙腈+0.025％甲酸；梯度：0.0min 98％A→0.9min 25％A→1.0min 5％A→1.4min 5％A→1.41min 98％A→1.5min 98％A；烘箱：40℃；流速：0.60mL/min；UV检测：DAD,210nm.
方法8(GC-MS):
仪器：Micromass GCT,GC6890；柱：Restek RTX-35,15m x 200μm x 0.33μm；具有氦的恒定流量：0.88mL/min；烘箱：70℃；入口：250℃；梯度：70℃,30℃/min→310℃(保持3min).
通常的后处理和纯化方法(见以下表I-V):
方法P1:
将沉淀的固体滤除，用甲醇/水混合物洗涤并真空干燥。
方法P2:
制备RP-HPLC(Reprosil C18,梯度乙腈/0.2％aq.三氟乙酸).
方法P3:
制备RP-HPLC(Reprosil C18,梯度乙腈/0.1％aq.甲酸).
方法P4:
将1M盐酸加入至收集的HPLC级分中，并且将所得的溶液蒸发至干燥。
方法P5:
将沉淀的固体滤除，并通过RP-HPLC对滤液进行纯化。
方法P6:
制备RP-HPLC(XBridge C18,梯度乙腈/水+0.05％aq.氨水)。
方法P7:
制备RP-HPLC-MS：仪器MS：Waters；仪器HPLC：Waters；柱：Waters X-Bridge C18,18mm x 50mm,5μm；洗脱液A：水+0.05％三乙胺,洗脱液B：乙腈或甲醇+0.05％三乙胺,梯度洗脱；流速：40ml/min；UV检测：DAD,210-400nm.
方法P8:
制备RP-HPLC-MS：仪器MS：Waters；仪器HPLC：Waters；柱：Phenomenex Luna 5μC18(2)100A,AXIA Tech.,50mm x 21.2mm；洗脱液A：水+0.05％甲酸,洗脱液B：乙腈或甲醇+0.05％甲酸,梯度洗脱；流速：40ml/min；UV检测：DAD,210-400nm.
原料和中间体：
中间体1A
2-甲氧基-4-甲基苯胺
将5-甲基-2-硝基苯甲醚(265g,1.58mol)和10％Pd/C(39.75g)的混合物的THF(1.32L)溶液在室温下在1atm氢气下搅拌过夜。用硅藻土过滤并且蒸发以得到216g的粗产物，其不需要进一步纯化即用于下一步骤。
LC-MS(方法3)：Rt＝2.39min；MS(ESIpos)：m/z＝138(M+H)+
1H-NMR(400MHz,DMSO-d6)：δ＝6.45-6.63(m,3H),4.46(s,2H),3.72(s,3H),2.16(s,3H)ppm.
中间体2A
2-甲氧基-4-甲基苯硫醇
方法1:
将亚硝酸钠(7g,101.4mmol)的水溶液(25ml)逐滴加入至冷却(0°-5℃)的中间体1A(13.7g,100mmol)的浓盐酸(30ml)和水(85ml)的溶液中。在0℃下搅拌10分钟后，加入乙酸钠(15g,182.8mmol)。将所得的混合物逐滴加入至热的(70°-80℃)O-乙基二硫代碳酸钾(30g,187.1mmol)的水(140ml)溶液中，在70℃至80℃之间搅拌1小时然后冷却至室温。将混合物用乙酸乙酯萃取两次，并且将合并的有机萃取物用硫酸钠干燥并且蒸发。将残留物溶解于1.3M的氢氧化钾的乙醇(300ml)溶液中。加入葡萄糖(8g)，并且将所得的混合物回流3小时。然后，将乙醇溶剂蒸发，并且将残留物用水稀释并且用6N硫酸水溶液酸化。小心加入锌粉末(15g)，并且所得的混合物加热至50℃保持30分钟。然后将混合物冷却至室温，用二氯甲烷稀释并过滤。将滤液用二氯甲烷萃取两次，并且将合并的有机萃取物用硫酸钠干燥并且蒸发以得到14.3g粗产物，其不经过进一步的纯化即用于下一步骤。
方法2：
将溶于1.1L水中的355ml(6.67mol)浓硫酸温溶液加入至2.9L的THF中。在50℃下，在搅拌下加入293g(1.33mol)2-甲氧基-4-甲基苯磺酰氯。然后，仔细地分批加入521g(7.97mol)锌粉末(起泡)，并且将略微放热的反应物在水浴中冷却以保持温度为50°-55℃。随后将混合物在55℃下搅拌3小时。反应过程通过TLC(硅胶，石油醚/乙酸乙酯95:5)监测。将反应混合物倒至13.6L水中，加入6.8L二氯甲烷，并且将混合物搅拌5分钟。将剩余的锌倒出并且相分离后，再将水相用6.8L二氯甲烷萃取一次。将合并的有机相用10％盐水洗涤，干燥并且在40℃下在减压下蒸发，得到237g的粗产物。该物质不经过进一步纯化即可用于下一步骤。通过石油醚/乙酸乙酯(97:3)作为洗脱液的硅胶色谱而获得分析样品。
LC-MS(方法1)：Rt＝1.21min；MS(ESIneg)：m/z＝153(M-H)-
1H-NMR(400MHz,DMSO-d6)：δ＝7.17(d,1H),6.81(s,1H),6.66(d,1H),4.63(br.s,1H),3.80(s,3H),2.26(s,3H)ppm.
中间体3A
1-[(2,2-二乙氧基乙基)硫烷基]-2-甲氧基-4-甲基苯
将237g来自中间体2A的粗原料，287g(1.46mol)溴代乙醛-二乙缩醛和862g(2.65mol)碳酸铯悬浮于2L的DMF中。将反应温度首先升高至40℃，然后在室温下继续搅拌过夜。将反应混合物分配在10L的水和2.7L的乙酸乙酯中。将水相用另一部分2.7L乙酸乙酯萃取。将合并的有机相用10％盐水洗涤，干燥并且蒸发。将所得的油状残留物用石油醚/乙酸乙酯(95:5)作为洗脱液的硅胶色谱纯化。
收率：236g油(66％理论收率)
GC-MS(方法8)：Rt＝6.03min；MS(EIpos)：m/z＝270(M)+
1H-NMR(400MHz,DMSO-d6)：δ＝7.16(d,1H),6.82(s,1H),6.73(d,1H),4.55(t,1H),3.80(s,3H),3.52-3.64(m,2H),3.39-3.51(m,2H),2.96(d,2H),2.33(s,3H),1.09(t,6H)ppm.
中间体4A
7-甲氧基-5-甲基-1-苯并噻吩
将5.2g(19.2mmol)的中间体3A的溶液逐滴加入至13g聚磷酸和150ml氯苯的回流混合物中，并且继续回流过夜。冷却后，将有机层倒出，将残留物和烧瓶用DCM冲洗两次。将合并的有机相在减压下蒸发。将残留物(3.76g)用异己烷/0-10％乙酸乙酯作为洗脱液的硅胶色谱处理。
收率：1.69g的油(49％理论收率)
GC-MS(方法8)：Rt＝5.20min；MS(EIpos)：m/z＝178(M)+
1H-NMR(400MHz,DMSO-d6)：δ＝7.68(d,1H),7.34(d,1H),7.28(s,1H),6.78(s,1H),3.93(s,3H),2.43(s,3H)ppm.
中间体5A
(7-甲氧基-5-甲基-1-苯并噻吩-2-基)硼酸
在氩气气氛下，将26.7g(150mmol)的中间体4A溶解于270ml的THF中并且冷却至-70℃。在-70℃至-65℃之间，在20分钟内逐滴加入将66ml(165mmol)的2.5N的正丁基锂的己烷溶液，形成白色沉淀。在-70℃下搅拌1小时后，在该温度下在10分钟内加入41.5ml(180mmol)三异丙基硼酸酯(得到粘稠的悬浮液)。在-70℃下继续搅拌1小时，然后将反应混合物温热至室温过夜。然后，加入400ml的饱和氯化铵水溶液，层分离，将水层再用THF萃取一次。将合并的有机相在减压下蒸发。将200ml的水和86ml的2N氢氧化钠水溶液加入至由此获得的残留物中。将溶液用DCM洗两次，然后用35ml的3M硫酸酸化，并且将所得的悬浮液强烈搅拌1小时。通过抽吸而滤除沉淀并且在45℃下真空过夜干燥。
收率：28.25g的无色固体(通过LC-MS测定纯度为94％，80％理论收率)
LC-MS(方法2)：Rt＝0.87min；MS(ESIpos)：m/z＝223(M+H)+
1H-NMR(400MHz,DMSO-d6)：δ＝7.17(d,1H),6.81(s,1H),6.66(d,1H),4.63(br.s,1H),3.80(s,3H),2.26(s,3H)ppm.
中间体6A
2-(7-甲氧基-5-甲基-1-苯并噻吩-2-基)-6-甲基-1,3,6,2-二氧氮杂硼烷-4,8-二酮
将6.3g(28.4mmol)的中间体5A和4.2g(28.4mmol)2,2'-(甲基亚氨基)二乙酸溶解于45ml DMSO和400ml甲苯的混合物中并且使用Dean-Stark分水器(trap)回流16小时。蒸发后，将残留物溶解于乙酸乙酯中并且用水洗三次，用盐水洗一次。将有机相用硫酸镁干燥并且蒸发至体积为约200ml。将沉淀的白色固体过滤、用乙酸乙酯洗并且真空干燥以得到题述化合物的第一批料(5.52g)。在将母液蒸发并且以环己烷/0-100％乙酸乙酯作为洗脱液使用硅胶层进行快速色谱后，获得第二批料(3.32g)。
收率：8.84g(通过LC-MS测定的总体纯度92.5％，87％理论收率)
LC-MS(方法2)：Rt＝0.93min；MS(ESIpos)：m/z＝334(M+H)+
1H-NMR(400MHz,DMSO-d6)：δ＝7.42(s,1H),7.26(s,1H),6.76(s,1H),4.40(d,2H),4.17(d,2H),3.92(s,3H),2.63(s,3H),2.42(s,3H)ppm.
中间体7A
2-(5-氯-7-甲氧基-1-苯并噻吩-2-基)-6-甲基-1,3,6,2-二氧氮杂硼烷-4,8-二酮
按照记载的用于中间体3A、4A、5A和6A的步骤，从4-氯-2-甲氧基苯硫醇制备题述化合物[J.O.Jilek et al.,Collection of Czechoslovak Chemical Communications,Vol.43,1978,第1747-1759页]。
LC-MS(方法2)：Rt＝0.96min；MS(ESIpos)：m/z＝354(M+H)+
1H-NMR(400MHz,DMSO-d6)：δ＝7.58(d,1H),7.51(s,1H),6.98(d,1H),4.42(d,2H),4.19(d,2H),3.97(s,3H),2.65(s,3H)ppm.
中间体8A
4-氨基吡咯并[2,1-f][1,2,4]三嗪-7-甲醛
在0℃下将磷酰氯(104ml)逐滴加入至吡咯并[2,1-f][1,2,4]三嗪-4-胺(30g,24.5mmol；制备记载于国际专利申请WO 2007/064931,中间体A)的DMF(500ml)溶液。所得的混合物在60℃下搅拌25小时，然后倒至冰水混合物并且再在室温下搅拌16小时。通过加入3.5M氢氧化钠水溶液而将混合物的pH调节至8-10。将沉淀的固体滤除并且用水洗，得到28.8g(73％理论收率)的题述化合物。
LC-MS(方法2)：Rt＝0.32min；MS(ESIpos)：m/z＝163(M+H)+
1H-NMR(400MHz,DMSO-d6)：δ＝10.26(s,1H),8.26(br.s,1H),8.21(br.s,1H),8.09(s,1H),7.27(d,1H),7.02(d,1H)ppm.
中间体9A
4-氨基-5-溴代吡咯并[2,1-f][1,2,4]三嗪-7-甲醛
将中间体8A(28.16g,174mmol)的THF(800ml)悬浮液用1,3-二溴-5,5-二甲基乙内酰脲(29.8g,104mmol)处理并且在室温下搅拌7小时。将所得的固体滤除并且用甲醇洗，得到32.61g(74％理论收率)的题述化合物。
LC-MS(方法5)：Rt＝1.40min；MS(ESIpos)：m/z＝240/242(M+H)+
1H-NMR(400MHz,DMSO-d6)：δ＝10.22(s,1H),8.59(br.s,1H),8.12(s,1H),7.42(s,1H),7.17(br.s,1H)ppm.
中间体10A
4-氨基-5-(7-甲氧基-5-甲基-1-苯并噻吩-2-基)吡咯并[2,1-f][1,2,4]三嗪-7-甲醛
在氩气下，将中间体9A(5.00g,20.7mmol)、中间体5A(8.29g,24.9mmol)和氟化铯(15.7g,103.7mmol)的THF/水(10:1,250ml)悬浮液排除气体，并且加入4-(二-叔丁基膦基)-N,N-二甲基苯胺-二氯钯(2:1；441mg,0.622mmol)。将混合物再次排除气体并且在50℃下搅拌16小时。将所得的固体滤除并且用水/甲醇(1:1)洗，得到5.00g(71％理论收率)的题述化合物。
LC-MS(方法2)：Rt＝1.07min；MS(ESIpos)：m/z＝339(M+H)+
1H-NMR(400MHz,DMSO-d6)：δ＝10.35(s,1H),8.46(br.s,1H),8.21(s,1H),7.43(s,1H),7.38(s,1H),7.30(s,1H),6.85(s,1H),6.53(br.s,1H),3.96(s,3H),2.45(s,3H)ppm.
中间体11A
[4-氨基-5-(7-甲氧基-5-甲基-1-苯并噻吩-2-基)吡咯并[2,1-f][1,2,4]三嗪-7-基]甲醇
将中间体10A(500mg,1.48mmol)的乙醇(20ml)悬浮液用硼氢化钠(391mg,10.34mmol)处理。将混合物在室温下搅拌20小时，然后用水终止反应并且用1M盐酸酸化。搅拌20分钟后，过滤混合物，加入水和乙酸乙酯，并且相分离。将水相用氯化钠饱和并且用乙酸乙酯萃取三次。将合并的有机相用硫酸镁干燥，过滤并且蒸发，得到316mg(63％理论收率)的题述化合物。
LC-MS(方法2)：Rt＝0.91min；MS(ESIpos)：m/z＝341(M+H)+
1H-NMR(400MHz,DMSO-d6)：δ＝7.97(s,1H),7.33(s,1H),7.29(s,1H),6.82(s,1H),6.78(s,1H),5.26(t,1H),4.76(d,2H),3.95(s,3H),2.44(s,3H)ppm.
中间体12A
7-(氯甲基)-5-(7-甲氧基-5-甲基-1-苯并噻吩-2-基)吡咯并[2,1-f][1,2,4]三嗪-4-胺盐酸盐
将中间体11A(3.77g,11.07mmol)的甲苯(150ml)溶液用亚硫酰氯(8.1ml,110.7mmol)处理。将混合物在室温下搅拌然后蒸发。将残留物与甲苯一起重复(三次)蒸发，得到4.30g粗产物，其不经过进一步的纯化即用于下一步骤。
1H-NMR(400MHz,DMSO-d6)：δ＝8.19(s,1H),7.40(s,1H),7.30(s,1H),7.06(s,1H),6.84(s,1H),5.10(s,2H),3.96(s,3H),2.45(s,3H)ppm.
中间体13A
7-[(E/Z)-(羟基亚氨基)甲基]-5-(7-甲氧基-5-甲基-1-苯并噻吩-2-基)吡咯并[2,1-f][1,2,4]三嗪-4-胺
将中间体10A(250mg,0.74mmol)、羟基胺盐酸盐(78mg,1.12mmol)和乙酸钠(182mg,2.22mmol)的乙醇/水混合物(3:1,3ml)溶液在室温下搅拌过夜。加入另一部分的羟基胺盐酸盐(50mg,0.72mmol)和乙酸钠(90mg,1.10mmol)，并且继续搅拌再过一夜。然后，在减压下将大部分量的乙醇溶剂蒸发，加入水，并且滤除沉淀物。将固体在45℃下真空干燥，得到237mg(89％理论收率)的题述化合物。
LC-MS(方法4)：Rt＝0.97min；MS(ESIpos)：m/z＝354(M+H)+
1H-NMR(400MHz,DMSO-d6)：δ＝11.93(s,0.3H),11.49(s,0.7H),8.50(s,0.8H),7.91-8.17(m,1.4H),7.59(s,0.4H),7.39(s,1H),7.30(s,1H),7.06(s,0.8H),6.83(s,1H),3.96(s,3H),2.44(s,3H)ppm[E/Z-异构体的混合物].
中间体14A
7-(氨基甲基)-5-(7-甲氧基-5-甲基-1-苯并噻吩-2-基)吡咯并[2,1-f][1,2,4]三嗪-4-胺
将锌粉末(390mg,6mmol)加入至中间体13A(78mg,0.22mmol)的甲醇(30ml)溶液中。然后，在室温下在搅拌下逐滴加入0.3ml浓盐酸和2ml甲醇的混合物，然后加入另一部分的0.5ml浓盐酸和2ml甲醇的混合物，直至达到pH为0-1。随后将混合物在室温下搅拌1小时，此后，将沉淀物滤除并且弃置。将滤液在真空下浓缩至小的体积并且通过制备RP-HPLC(Reprosil C18,梯度5-95％乙腈/0.1％aq.甲酸)进行纯化，得到20.5mg(23％理论收率)的题述化合物。
LC-MS(方法2)：Rt＝0.72min；MS(ESIneg)：m/z＝338(M-H)-
1H-NMR(400MHz,DMSO-d6)：δ＝8.26(br.s,1H),8.00(s,1H),7.32(s,1H),7.29(s,1H),6.84(s,1H),6.82(s,1H),4.11(br.s,2H),3.95(s,3H),2.44(s,3H)ppm.
中间体15A
4-氨基-5-(7-甲氧基-5-甲基-1-苯并噻吩-2-基)吡咯并[2,1-f][1,2,4]三嗪-7-羧酸
将中间体10A(4.1g,7.27mmol)的THF/水(10:1,216.5ml)溶液用2M 2-甲基-2-丁烯的THF(18.2ml,36.3mmol)溶液处理并且用磷酸二氢钠(4.01g,29.08mmol)处理。在室温下搅拌5分钟后，加入亚氯酸钠(2.63g,29.08mmol)，将所得的混合物在室温下搅拌过夜。用水稀释后，将水相用乙酸乙酯萃取三次。将合并的有机相用1M的氢氧化钠水溶液萃取并且然后弃置。将水相用1M盐酸将pH调至3并且用乙酸乙酯萃取数次。将合并的有机层用饱和硫酸亚铁(II)水溶液洗，用硫酸镁干燥并且蒸发。残留物通过制备RP-HPLC(Sunfire C18,70％甲醇/30％0.2％aq.TFA)纯化，得到1.58g(58％理论收率)的题述化合物。
LC-MS(方法5)：Rt＝2.11min；MS(ESIpos)：m/z＝355(M+H)+
1H-NMR(400MHz,DMSO-d6)：δ＝12.94(br.s,1H),8.58-7.88(m,3H),7.41(s,1H),7.33(s,1H),7.30(s,1H),6.84(s,1H),3.96(s,3H),2.44(s,3H)ppm.
中间体16A
4-{[4-氨基-5-(7-甲氧基-5-甲基-1-苯并噻吩-2-基)吡咯并[2,1-f][1,2,4]三嗪-7-基]甲基}哌嗪-1-羧酸叔丁基酯
将4-[(4-氨基-5-溴代吡咯并[2,1-f][1,2,4]三嗪-7-基)甲基]哌嗪-1-羧酸叔丁基酯(8g,19.45mmol；制备记载于国际专利申请WO 2007/064931,中间体I/步骤2)的THF(250ml)溶液在氩气下排除气体。加入中间体6A(8.42g,25.29mmol)和氟化铯(14.77g,97.2mmol)的水(25ml)溶液，并且将混合物再次排除气体。然后，加入4-(二-叔丁基膦基)-N,N-二甲基苯胺-二氯钯(2:1；0.41g,0.58mmol)，并且将混合物在氩气下在50℃下搅拌16小时。将所得的溶液用盐水洗，用硫酸镁干燥，过滤并且浓缩至体积为约50ml。加入TBME(100ml)，并且将所得的沉淀物滤除，用TBME洗并且真空干燥，得到8.2g(80％理论收率)的题述化合物。
LC-MS(方法2)：Rt＝0.91min；MS(ESIpos)：m/z＝509(M+H)+
1H-NMR(400MHz,DMSO-d6)：δ＝7.97(s,1H),7.22(m,2H),6.76(s,1H),6.65(s,1H),5.75(br.s,2H),3.93-4.06(m,5H),3.38-3.55(m,4H),2.57-2.52(m,4H),2.49(s,3H),1.45(s,9H)ppm.
中间体17A
4-{[4-氨基-5-(7-甲氧基-1-苯并噻吩-2-基)吡咯并[2,1-f][1,2,4]三嗪-7-基]甲基}哌嗪-1-羧酸叔丁基酯
将4-[(4-氨基-5-溴代吡咯并[2,1-f][1,2,4]三嗪-7-基)甲基]哌嗪-1-羧酸叔丁基酯(500mg,0.97mmol；制备记载于国际专利申请WO 2007/064931,中间体I/步骤2)、(7-甲氧基-1-苯并噻吩-2-基)硼酸(202mg,0.97mmol；制备记载于美国专利6,025,382)、碳酸氢钠(327mg,3.89mmol)和[1,1'-双(二苯基膦基)二茂铁]二氯钯(II)-二氯甲烷络合物[PdCl2(dppf)x DCM](40mg,0.05mmol)在排除了气体的1,2-二甲氧基乙烷/水(3:1,4ml)中的混合物在氩气下在80℃下搅拌过夜。此后，加入乙酸乙酯，并且将混合物用饱和碳酸钠水溶液洗。将有机相干燥并且在减压下蒸发。将残留物通过硅胶色谱(乙酸乙酯/环己烷1:2)，然后通过制备RP-HPLC(Reprosil C18,梯度甲醇/0.2％aq.甲酸)进行纯化，得到68mg(14％理论收率)的题述化合物。
LC-MS(方法2)：Rt＝0.89min；MS(ESIpos)：m/z＝495(M+H)+
1H-NMR(400MHz,DMSO-d6)：δ＝7.98(s,1H),7.48(d,1H),7.43(s,1H),7.37(t,1H),6.97(d,1H),6.79(s,1H),3.97(s,3H),3.87(s,2H),3.30(s,4H),2.42(br.t,4H),1.38(s,9H)ppm.
中间体18A
[(3S)-1-{[4-氨基-5-(7-甲氧基-5-甲基-1-苯并噻吩-2-基)吡咯并[2,1-f][1,2,4]三嗪-7-基]甲基}-3-甲基吡咯烷-3-基]氨基甲酸叔丁基酯
将中间体10A(250mg,0.68mmol)的8ml甲醇溶液用78μl(1.36mmol)乙酸、204mg(1.02mmol)[(3S)-3-甲基吡咯烷-3-基]氨基甲酸叔丁基酯[Yoshida et al.,Chem.Pharm.Bull.1996,44(7),1376-1386]和214mg(3.40mmol)氰基硼氢化钠处理。将所得的混合物在60℃下搅拌26小时。此后，将混合物过滤，并且将滤液通过制备RP-HPLC(Reprosil C18,梯度乙腈/0.2％aq.甲酸)进行纯化，得到140mg(36％理论收率)的题述化合物。
LC-MS(方法2)：Rt＝0.90min；MS(ESIpos)：m/z＝523(M+H)+.
中间体19A
[(3S)-1-{[4-氨基-5-(7-甲氧基-5-甲基-1-苯并噻吩-2-基)吡咯并[2,1-f][1,2,4]三嗪-7-基]羰基}-3-甲基吡咯烷-3-基]氨基甲酸叔丁基酯
将中间体15A(100mg,纯度为89％,0.25mmol)的1.8ml DMF溶液用89mg(0.28mmol)TBTU和81mg(129mmol)DIPEA处理。在室温下搅拌15分钟后，加入55mg(0.28mmol)[(3S)-3-甲基吡咯烷-3-基]氨基甲酸叔丁基酯[Yoshida et al.,Chem.Pharm.Bull.1996,44(7),1376-1386]，并且在室温下继续搅拌16小时。此后，将反应混合物通过制备RP-HPLC(Reprosil C18,梯度乙腈/0.2％aq.甲酸)直接进行纯化。将含有产物的级分用碳酸氢钠调节至pH为8并且用乙酸乙酯萃取。有机层用盐水洗，用硫酸镁干燥，过滤并且蒸发，得到109mg(81％理论收率)的题述化合物。
LC-MS(方法2)：Rt＝1.10min；MS(ESIpos)：m/z＝537(M+H)+.
中间体20A
[2-({[4-氨基-5-(7-甲氧基-5-甲基-1-苯并噻吩-2-基)吡咯并[2,1-f][1,2,4]三嗪-7-基]甲基}氨基)-2-氧基乙基]氨基甲酸叔丁基酯
将中间体14A(15mg,36μmol)的甲醇(0.5ml)溶液用N-(叔丁氧基羰基)甘氨酸(8mg,44μmol)、HATU(18mg,47μmol)和DIPEA(13μl,73μmol)处理。将所得的混合物在室温下搅拌过夜。在减压下浓缩后，将残留物通过制备RP-HPLC(Reprosil C18,梯度10-95％乙腈/0.1％aq.甲酸)进行纯化，得到7.1mg(39％理论收率)的题述化合物。
LC-MS(方法5)：Rt＝2.19min；MS(ESIpos)：m/z＝497(M+H)+
1H-NMR(400MHz,DMSO-d6)：δ＝8.29(t,1H),7.99(s,1H),7.31(s,1H),7.28(s,1H),7.00(t,1H),6.81(s,1H),6.74(s,1H),4.48-4.67(m,2H),3.95(s,3H),3.57(d,2H),2.44(s,3H),1.37(s,9H)ppm.
制备实施例：
实施例1
5-(7-甲氧基-5-甲基-1-苯并噻吩-2-基)-7-(哌嗪-1-基甲基)吡咯并[2,1-f][1,2,4]三嗪-4-胺三盐酸盐水合物
在室温下，将中间体16A(2g,3.93mmol)搅拌至4M的盐酸的1,4-二噁烷(60ml)溶液中，搅拌3天。滤除沉淀物，用TBME洗三次并且在真空下干燥。将该材料(2.0g)悬浮于TBME(80ml)并且在回流下搅拌15分钟。再次滤除固体，用TBME洗三次并且在45℃下在真空下干燥，得到1.95g(92％理论收率)的题述化合物。
LC-MS(方法2)：Rt＝0.69min；MS(ESIpos)：m/z＝409(M+H)+
1H-NMR(400MHz,DMSO-d6)：其中δ＝9.84(br.s,2H),8.71-9.04(m,1H),8.26(s,1H),7.40(s,1H),7.33(s,1H),7.27(s,1H),6.85(s,1H),4.75(br.s,2H),3.96(s,3H),3.43(br.m,8H),2.45(s,3H)ppm.
C21H24N6OS x 3 HCl x H2O的元素分析：
计算：C 47.1；H 5.5；N 15.7；Cl 19.9
实际：C 46.9；H 5.4；N 15.6；Cl 20.1
实施例2
5-(7-甲氧基-5-甲基-1-苯并噻吩-2-基)-7-(哌嗪-1-基甲基)吡咯并[2,1-f][1,2,4]三嗪-4-胺
将实施例1(200mg,0.373mmol)的10ml水和5ml乙醇的溶液用碳酸氢钠(104mg,1.24mmol)处理。在搅拌三天后，将所形成的沉淀滤除，用水/乙醇(2:1)洗两次并且在45℃下在真空下干燥，得到63mg(41％理论收率)的题述化合物。
LC-MS(方法2)：Rt＝0.69min；MS(ESIpos)：m/z＝409(M+H)+
1H-NMR(400MHz,DMSO-d6)：δ＝7.97(s,1H),7.34(s,1H),7.28(s,1H),6.81(s,1H),6.74(s,1H),3.95(s,3H),3.80(s,2H),2.66(br.s,4H),2.44(s,3H),2.29-2.41(m,4H)ppm.
实施例3
5-(7-甲氧基-1-苯并噻吩-2-基)-7-(哌嗪-1-基甲基)吡咯并[2,1-f][1,2,4]三嗪-4-胺
在室温下将中间体17A(56mg,0.11mmol)搅拌至4M的盐酸的1,4-二噁烷(2ml)溶液中，并搅拌过夜。然后将混合物蒸发至干燥，并且将残留物悬浮于乙酸乙酯并且用1M氢氧化钠水溶液洗。将有机层干燥并且蒸发。将残留物用DCM/TBME重结晶，得到42mg(94％理论收率)的题述化合物。
LC-MS(方法2)：Rt＝0.69min；MS(ESIpos)：m/z＝395(M+H)+
1H-NMR(400MHz,DMSO-d6)：δ＝7.97(s,1H),7.48(d,1H),7.43(s,1H),7.37(t,1H),6.97(d,1H),6.76(s,1H),3.97(s,3H),3.82(s,2H),2.65-2.75(m,4H),2.38-2.45(m,4H)ppm.
实施例4
5-(5-氯-7-甲氧基-1-苯并噻吩-2-基)-7-(哌嗪-1-基甲基)吡咯并[2,1-f][1,2,4]三嗪-4-胺三盐酸盐
将4-[(4-氨基-5-溴代吡咯并[2,1-f][1,2,4]三嗪-7-基)甲基]哌嗪-1-羧酸叔丁基酯(48.5mg,118μmol；制备记载于国际专利申请WO 2007/064931,中间体I/步骤2)、中间体7A(50mg,141μmol)和氟化铯(90mg,589μmol)的THF/水(10:1,2.2ml)溶液在氩气下排除气体，并且加入4-(二-叔丁基膦基)-N,N-二甲基苯胺-二氯钯(2:1；2.5mg,4μmol)。将混合物再次排除气体并且在50℃下在氩气下搅拌过夜。此后，分离有机层，用乙腈稀释并且通过制备RP-HPLC(Reprosil C18,梯度乙腈/0.2％aq.甲酸)进行纯化。合并含有Boc保护的中间体化合物4-{[4-氨基-5-(5-氯-7-甲氧基-1-苯并噻吩-2-基)吡咯并[2,1-f][1,2,4]三嗪-7-基]甲基}哌嗪-1-羧酸叔丁基酯的级分，用1M盐酸(1ml)处理，然后蒸发至干燥，得到39mg(61％理论收率)的题述化合物。
LC-MS(方法4)：Rt＝0.68min；MS(ESIpos)：m/z＝429(M+H)+
1H-NMR(400MHz,DMSO-d6)：δ＝9.41(br.s,2H),8.15(s,1H),7.61(s,1H),7.43(s,1H),7.19(s,1H),7.06(s,1H),4.69(br.s,2H),4.01(s,3H),3.39(br.s,8H)ppm.
实施例5
7-{[(3S)-3-氨基-3-甲基吡咯烷-1-基]甲基}-5-(7-甲氧基-5-甲基-1-苯并噻吩-2-基)吡咯并[2,1-f][1,2,4]三嗪-4-胺三盐酸盐
在室温下，将中间体18A(140mg,0.25mmol)的1,4-二噁烷(2.5ml)溶液用4M盐酸的1,4-二噁烷(60ml)溶液处理三天。此后，将反应混合物蒸发至干燥，并且将残留物通过制备RP-HPLC(Reprosil C18,梯度乙腈/0.2％aq.甲酸)进行纯化。合并产物级分，用1M盐酸稀释，然后蒸发，获得107mg(82％理论收率)的题述化合物。
LC-MS(方法2)：Rt＝0.67min；MS(ESIpos)：m/z＝423(M+H)+
1H-NMR(400MHz,甲醇-d4)：δ＝8.23(s,1H),7.47(s,1H),7.36(s,1H),7.32(s,1H),6.82(s,1H),4.99(s,2H),4.00(s,3H),3.54-3.96(m,5H),2.31-2.58(m,5H),1.65(s,3H)ppm.
实施例6
(3R)-3-({[4-氨基-5-(7-甲氧基-5-甲基-1-苯并噻吩-2-基)吡咯并[2,1-f][1,2,4]三嗪-7-基]甲基}氨基)吡咯烷-2-酮二盐酸盐
将乙酸(68μl,1.18mmol)、(R)-3-氨基吡咯烷-2-酮(89mg,887μmol)和氰基硼氢化钠(185mg,2.96mmol)加入至中间体10A(200mg,591μmol)的甲醇(5ml)悬浮液中。将混合物在60℃下搅拌20小时，然后通过制备RP-HPLC(Reprosil C18,梯度乙腈/0.2％aq.TFA)而进行直接纯化。合并产物级分，用1M盐酸稀释，然后蒸发，得到228mg(78％理论收率)的题述化合物。
LC-MS(方法2)：Rt＝0.73min；MS(ESIpos)：m/z＝423(M+H)+
1H-NMR(400MHz,DMSO-d6)：其中δ＝9.93-10.06(br.s,1H),9.70-9.83(br.s,1H),8.40-8.80(br.s,1H),8.43(s,1H),8.20(s,1H),7.39(s,1H),7.32(s,1H),7.17(s,1H),6.85(s,1H),6.56-7.24(br.s,1H),4.79(d,1H),4.60(d,1H),4.00-4.10(m,1H),3.96(s,3H),3.17-3.34(m,2H),2.45(s,3H),2.09-2.22(m,1H)ppm.
实施例7
外消旋-4-{[4-氨基-5-(7-甲氧基-5-甲基-1-苯并噻吩-2-基)吡咯并[2,1-f][1,2,4]三嗪-7-基]甲基}哌嗪-2-甲酰胺三盐酸盐
将乙酸(34μl,591μmol)、外消旋-哌嗪-2-甲酰胺(57mg,443μmol)和氰基硼氢化钠(93mg,1.48mmol)加入至中间体10A(100mg,296μmol)的甲醇(4ml)悬浮液中。将混合物在60℃下搅拌20小时，然后过滤并且蒸发。将残留物通过制备RP-HPLC(Reprosil C18,梯度乙腈/0.2％aq.TFA)进行纯化。合并产物级分，用1M盐酸稀释，然后蒸发，获得55mg(32％理论收率)的题述化合物。
LC-MS(方法2)：Rt＝0.75min；MS(ESIpos)：m/z＝452(M+H)+
1H-NMR(400MHz,DMSO-d6)：其中δ＝9.49(br.s,1H),8.89(br.s,1H),8.05-8.19(m,2H),7.75(br.s,1H),7.38(s,1H),7.31(s,1H),7.02(br.s,1H),6.84(s,1H),4.12-4.36(m,2H),3.88-4.09(m,5H),3.30(m,1H),3.17(br.s,2H),2.45(s,3H)ppm.
实施例8
4-{[4-氨基-5-(7-甲氧基-5-甲基-1-苯并噻吩-2-基)吡咯并[2,1-f][1,2,4]三嗪-7-基]甲基}哌嗪-2-酮二盐酸化物
将乙酸(34μl,591μmol)、哌嗪-2-酮(44mg,443μmol)和氰基硼氢化钠(93mg,1.48mmol)加入至中间体10A(100mg,296μmol)的甲醇(4ml)悬浮液中。将混合物在60℃下搅拌20小时，然后过滤并且蒸发。将残留物通过制备RP-HPLC(Reprosil C18,梯度乙腈/0.2％aq.TFA)进行纯化。合并产物级分，用1M盐酸稀释，然后蒸发，获得41mg(26％理论收率)的题述化合物。
LC-MS(方法2)：Rt＝0.81min；MS(ESIpos)：m/z＝422(M+H)+
1H-NMR(400MHz,DMSO-d6)：其中δ＝11.08-11.66(m,1H),8.38(br.s,1H),8.15(s,1H),7.38(s,1H),7.31(s,1H),7.18(s,1H),6.84(s,1H),4.76(br.s,2H),3.96(s,3H),3.79(br.s,2H),3.42(br.s,2H),2.45(s,3H)ppm.
实施例9
7-{[(3S)-3-氨基吡咯烷-1-基]甲基}-5-(7-甲氧基-5-甲基-1-苯并噻吩-2-基)吡咯并[2,1-f][1,2,4]三嗪-4-胺
将乙酸(47μl,816μmol)、(3S)-吡咯烷-3-基氨基甲酸叔丁基酯(114mg,612μmol)和氰基硼氢化钠(128mg,2.04mmol)加入至中间体10A(150mg,纯度为92％,408μmol)的甲醇(4ml)悬浮液中。将混合物在60℃下搅拌20小时，然后通过制备RP-HPLC(Reprosil C18,梯度乙腈/0.2％aq.甲酸)进行直接纯化。蒸发后，获得73mg(44％理论收率)的题述化合物(Boc保护性基团在蒸发过程中断开)。
LC-MS(方法2)：Rt＝0.63min；MS(ESIpos)：m/z＝409(M+H)+
1H-NMR(400MHz,甲醇-d4)：δ＝8.22(s,1H),7.47(s,1H),7.34(s,1H),7.32(s,1H),6.82(s,1H),4.98(s,2H),4.14-4.25(m,1H),4.00(s,3H),3.52-3.88(m,4H),2.70(s,1H),2.49(s,3H),2.23-2.34(m,1H)ppm.
实施例10
5-(7-甲氧基-5-甲基-1-苯并噻吩-2-基)-7-(吗啉-4-基甲基)吡咯并[2,1-f][1,2,4]三嗪-4-胺
将中间体10A(50mg,148μmol)的THF(2ml)溶液用吗啉(64mg,0.739mmol)、三乙酰氧基硼氢化钠(156mg,739μmol)和乙酸(17μl,296μmol)处理。将所得的混合物在60℃下搅拌16小时，然后通过RP-HPLC(Reprosil C18,梯度乙腈/0.2％aq.TFA)进行直接纯化。合并产物级分并且蒸发至干燥。将残留物溶解于甲醇并且通过阴离子交换柱(StratospheresSPE,PL-HCO3MP-树脂)过滤。将所述柱用甲醇洗脱，并且将滤液蒸发，得到47mg(77％理论收率)的题述化合物。
LC-MS(方法4)：Rt＝0.71min；MS(ESIpos)：m/z＝410(M+H)+
1H-NMR(400MHz,DMSO-d6)：δ＝7.98(s,1H),7.35(s,1H),7.28(s,1H),6.82(s,1H),6.77(s,1H),3.95(s,3H),3.84(s,2H),3.56(t,4H),2.48-2.42(m,7H)ppm.
实施例11
4-{[4-氨基-5-(7-甲氧基-5-甲基-1-苯并噻吩-2-基)吡咯并[2,1-f][1,2,4]三嗪-7-基]甲基}-3,3-二甲基哌嗪-2-酮
将中间体10A(100mg,0.296mmol)的THF(4.3ml)溶液用3,3-二甲基哌嗪-2-酮(75mg,0.591mmol)、三乙酰氧基硼氢化钠(197mg,0.885mmol)和乙酸(33.8μl,0.591mmol)处理。将所得的混合物在60℃下搅拌16小时。然后，加入另一部分的三乙酰氧基硼氢化钠(63mg,0.296mmol)，并且将混合物再次在60℃下搅拌1小时。此后，将混合物用乙酸乙酯稀释并且用饱和氯化钠溶液洗。将有机相蒸发，并且将残留物通过RP-HPLC(Reprosil C18,梯度乙腈/0.2％aq.TFA)进行纯化，然后用硅胶(二氯甲烷/甲醇梯度)通过快速色谱进行纯化，得到9.8mg(7％理论收率)的题述化合物。
LC-MS(方法4)：Rt＝0.82min；MS(ESIpos)：m/z＝451(M+H)+
1H-NMR(400MHz,甲醇-d4)：δ＝7.88(s,1H),7.26(s,1H),7.25(s,1H),6.82(s,1H),6.75(s,1H),4.04(s,2H),3.98(s,3H),3.21(t,2H),2.92-2.84(m,2H),2.47(s,3H),1.47(s,6H)ppm.
实施例12
5-(7-甲氧基-5-甲基-1-苯并噻吩-2-基)-7-[(4-甲基哌嗪-1-基)甲基]吡咯[2,1-f][1,2,4]三嗪-4-胺双(甲酸盐)
将实施例1(70mg,0.131mmol)的甲醇(1.5ml)溶液用多聚甲醛(19mg,0.653mmol)处理，并且在室温下搅拌。30分钟后，加入氰基硼氢化钠(15mg,0.235mmol)，然后加入乙酸(49μl,0.653mmol)，并且将所得的混合物在室温下搅拌过夜。然后，加入三乙酰氧基硼氢化钠(50mg,0.235mmol)，并且在室温下继续搅拌。3小时后，加入37％的甲醛水溶液(49μl,0.653mmol)，并且将所得的混合物加热至60℃过夜。然后用水终止反应。将水相用二氯甲烷萃取，并且将合并的有机层用水洗，用硫酸钠干燥并且蒸发。将残留物通过制备RP-HPLC(Reprosil C18,梯度10-95％乙腈/0.1％aq.甲酸)进行纯化，获得39mg(57％理论收率)的题述化合物。
LC-MS(方法1)：Rt＝0.89min；MS(ESIpos)：m/z＝423(M+H)+
1H-NMR(400MHz,DMSO-d6)：其中δ＝8.18(s,2H),7.98(s,1H),7.34(s,1H),7.28(s,1H),6.82(s,1H),6.75(s,1H),3.95(s,3H),3.85(s,2H),2.44(s,3H),2.21(s,3H)ppm.
实施例13
7-[(4-乙基哌嗪-1-基)甲基]-5-(7-甲氧基-5-甲基-1-苯并噻吩-2-基)吡咯[2,1-f][1,2,4]三嗪-4-胺甲酸盐
将实施例1(70mg,0.131mmol)的甲醇(1.5ml)溶液用乙醛(36.5μl,0.653mmol)处理并且在室温下搅拌30分钟。将氰基硼氢化钠(14.8mg,0.235mmol)与一滴乙酸一起加入，并且所得的混合物在室温下搅拌过夜。然后，加入三乙酰氧基硼氢化钠(49mg,0.235mmol)，并且在室温下继续搅拌。3小时后，加入更多的三乙酰氧基硼氢化钠(69mg,0.327mmol)，并且反应混合物在60℃下搅拌过夜。此后，将混合物蒸发，并且将残留物溶解于THF(1.5ml)并且再次用乙醛(36.5μl,0.653mmol)和三乙酰氧基硼氢化钠(138mg,0.653mmol)处理。将所得的混合物在60℃下搅拌3小时，然后用水稀释并且用二氯甲烷萃取。将合并的有机相用水洗，用硫酸钠干燥并且蒸发。将残留物通过制备RP-HPLC(Reprosil C18,梯度10-95％乙腈/0.1％aq.甲酸)进行纯化，得到28mg(44％理论收率)的题述化合物。
LC-MS(方法1)：Rt＝0.93min；MS(ESIpos)：m/z＝437(M+H)+
1H-NMR(400MHz,DMSO-d6)：其中δ＝8.18(s,1H),7.98(s,1H),7.34(s,1H),7.28(s,1H),6.82(s,1H),6.75(s,1H),3.95(s,3H),3.85(s,2H),2.44(s,3H),2.37(q,2H),0.98(t,3H)ppm.
制备表I中实施例14-56的一般步骤：
将0.1M的中间体10A的甲醇悬浮液用1.5当量的合适的胺、5当量的氰基硼氢化钠和2当量的乙酸处理。将所得的混合物在60℃下搅拌3-20小时，然后根据所示方法进行纯化。
对于实施例53-56的合成，合适的胺组分在伯氨基处用叔丁氧羰基(Boc)保护，所述叔丁氧羰基在纯化后通过用4M盐酸的1,4-二噁烷溶液处理(在室温下搅拌2小时)而断裂。蒸发易挥发物、并且真空干燥，以得到最终产物。
表I
制备表II中实施例57-92的一般步骤：
将0.17M的中间体10A的乙醇溶液用1.5当量的合适的胺、5当量的氰基硼氢化钠和2当量的乙酸处理。将所得的混合物在60℃下振荡过夜，然后蒸发。将由此获得的粗产物溶解于DMSO并且根据所述方法进行纯化。
表II
实施例93
(4-{[4-氨基-5-(7-甲氧基-5-甲基-1-苯并噻吩-2-基)吡咯并[2,1-f][1,2,4]三嗪-7-基]甲基}哌嗪-1-基)(环丙基)甲酮
将实施例1(100mg,0.187mmol)的THF(1ml)和二氯甲烷(2ml)溶液用环丙基甲酰氯(33μl,0.373mmol)和碳酸钠(158mg,1.49mmol)处理。将所得的混合物在室温下搅拌48小时。然后，将反应混合物过滤并且将固体用THF洗。将滤液通过制备RP-HPLC(Reprosil C18,梯度10-95％乙腈/0.1％aq.甲酸)进行纯化，得到9mg(9％理论收率)的题述化合物。
LC-MS(方法2)：Rt＝0.83min；MS(ESIpos)：m/z＝477(M+H)+.
实施例94
(4-{[4-氨基-5-(7-甲氧基-5-甲基-1-苯并噻吩-2-基)吡咯并[2,1-f][1,2,4]三嗪-7-基]甲基}哌嗪-1-基)(环丁基)甲酮
将实施例1(100mg,187mmol)的THF(1ml)和二氯甲烷(2ml)溶液用环丁基甲酰氯(44mg,0.373mmol)和碳酸钠(158mg,1.49mmol)处理。所得的混合物在室温下搅拌48小时。然后，将反应混合物过滤并且将固体用THF冲洗。将滤液通过制备RP-HPLC(Reprosil C18,梯度10-95％乙腈/0.1％aq.甲酸)纯化，得到52mg(57％理论收率)的题述化合物。
LC-MS(方法2)：Rt＝0.79min；MS(ESIpos)：m/z＝491(M+H)+
1H-NMR(400MHz,DMSO-d6)：其中δ＝8.20(s,1H),7.39(s,1H),7.32(s,1H),7.25(s,1H),6.85(s,1H),4.70(s,2H),3.96(s,3H),2.45(s,3H)ppm.
实施例95
4-(4-{[4-氨基-5-(7-甲氧基-5-甲基-1-苯并噻吩-2-基)吡咯并[2,1-f][1,2,4]三嗪-7-基]甲基}哌嗪-1-基)-4-氧基丁酰胺二盐酸化物
将4-氨基-4-氧基丁酸(33mg,280μmol)的THF(2ml)溶液用TBTU(90mg,0.28mmol)和N,N-二异丙基乙胺(0.154ml,0.933mmol)处理。将溶液在室温下搅拌30分钟。加入实施例1(100mg,0.187mmol)的化合物，并且将所得的混合物在室温下再搅拌2.5小时。此后，将混合物通过制备RP-HPLC(Reprosil C18,梯度乙腈/0.2％aq.TFA)进行直接纯化。将产物级分用1M盐酸稀释，然后蒸发，得到71mg(64％理论收率)的题述化合物。
LC-MS(方法2)：Rt＝0.74min；MS(ESIpos)：m/z＝508(M+H)+
1H-NMR(400MHz,DMSO-d6)：其中δ＝8.13(s,1H),7.37(s,1H),7.31(br.s,2H),7.14(s,1H),6.84(s,1H),6.75(br.s,1H),4.72(br.s,2H),3.96(s,5H),2.45(s,4H)ppm.
实施例96
1-(4-{[4-氨基-5-(7-甲氧基-5-甲基-1-苯并噻吩-2-基)吡咯并[2,1-f][1,2,4]三嗪-7-基]甲基}哌嗪-1-基)-2-羟基乙酮
步骤1：
将实施例1(200mg,0.373mmol)的THF(1ml)溶液用乙酰氧基乙酰氯(40μl,0.373mmol)和碳酸钠(99mg,0.933mmol)处理。将所得的混合物在室温下搅拌16小时。加入另一部分的乙酰氧基乙酰氯(10μl,0.093mmol)，并且继续搅拌1小时。然后通过加入甲醇和水终止反应。搅拌1分钟后，将混合物用饱和氯化钠水溶液稀释并且用乙酸乙酯萃取。将合并的有机层用硫酸镁干燥并且蒸发，得到182mg(纯度90％)的中间体化合物2-(4-{[4-氨基-5-(7-甲氧基-5-甲基-1-苯并噻吩-2-基)吡咯并[2,1-f][1,2,4]三嗪-7-基]甲基}哌嗪-1-基)-2-氧基乙酸乙酯，其不经过进一步的纯化即用于下一步骤。
步骤2：
将上述获得的粗中间体化合物(149mg,0.263mmol,纯度为90％)的THF(2ml)溶液用1M的氢氧化锂水溶液(1.46ml,1.46mmol)处理。将所得的混合物在室温下搅拌1.5小时，然后用1M盐酸酸化至pH为5-6并且用乙酸乙酯萃取。将合并的有机层用饱和氯化钠水溶液洗，此后进行固体沉淀。滤除固体并且用二氯甲烷/甲醇(10:1)洗，获得48mg(34％理论收率)的题述化合物。
LC-MS(方法4)：Rt＝0.67min；MS(ESIpos)：m/z＝467(M+H)+
1H-NMR(400MHz,DMSO-d6)：δ＝7.98(s,1H),7.35(s,1H),7.28(s,1H),6.82(s,1H),6.78(s,1H),4.52(t,1H),4.05(d,2H),3.95(s,3H),3.89(s,2H),3.46(br.s,2H),3.31(br.s,2H),2.48-2.41(m,7H)ppm.
实施例97
[4-氨基-5-(7-甲氧基-5-甲基-1-苯并噻吩-2-基)吡咯并[2,1-f][1,2,4]三嗪-7-基][(3S)-3-氨基-3-甲基吡咯烷-1-基]甲酮二盐酸化物
将中间体19A(214mg,399μmol)溶解于1,4-二噁烷(3ml)，并且加入4M的盐酸的1,4-二噁烷(5ml)溶液。将混合物在室温下搅拌5小时。蒸发后，将残留物通过制备RP-HPLC(Reprosil C18,梯度乙腈/0.2％aq.甲酸)进行纯化。将由此获得的产物溶解于1M盐酸/1,4-二噁烷(1:1)并且冻干，得到160mg(75％理论收率)的题述化合物。
LC-MS(方法2)：Rt＝0.67min；MS(ESIpos)：m/z＝437(M+H)+
1H-NMR(400MHz,甲醇-d4)：δ＝8.16(s,1H),7.47(s,1H),7.32(s,1H),7.25(s,0.5H),7.22(s,0.5H),6.83(s,1H),4.00(s,3H),3.67-3.94(m,4H),2.49(s,3H),2.22-2.32(m,2H),1.60(br.s,1.5H),1.52(br.s,1.5H)ppm.
实施例98
外消旋-4-氨基-5-(7-甲氧基-5-甲基-1-苯并噻吩-2-基)-N-(2-氧基吡咯烷-3-基)吡咯并[2,1-f][1,2,4]三嗪-7-甲酰胺盐酸化物
将中间体15A(50mg,141μmol)的DMF(2ml)溶液用TBTU(50mg,155μmol)和DIPEA(61μl,353μmol)处理并且在室温下搅拌15分钟。加入(3R)-3-氨基吡咯烷-2-酮(28mg,282μmol)，并且将所得的混合物在室温下搅拌16小时。此后，将混合物通过制备RP-HPLC(Reprosil C18,梯度乙腈/0.2％aq.TFA)进行直接纯化。将产物级分合并，用1M盐酸稀释并且蒸发，得到34mg(50％理论收率)的题述化合物。
LC-MS(方法2)：Rt＝0.85min；MS(ESIpos)：m/z＝437(M+H)+
1H-NMR(400MHz,DMSO-d6)：其中δ＝9.21-9.28(m,1H),8.58(br.s,1H),8.24(s,1H),8.02(s,1H),7.42(s,1H),7.28-7.35(m,2H),6.84(s,1H),3.96(s,3H),3.23-3.31(m,2H),2.45(s,3H),1.90-2.05(m,1H)ppm.
实施例99
[4-氨基-5-(7-甲氧基-5-甲基-1-苯并噻吩-2-基)吡咯并[2,1-f][1,2,4]三嗪-7-基](哌嗪-1-基)甲酮二盐酸化物
将中间体15A(100mg,纯度为89％,251μmol)的DMF(2ml)溶液用TBTU(87mg,276μmol)和DIPEA(109μl,628μmol)处理并且在室温下搅拌15分钟。加入哌嗪-1-羧酸叔丁基酯(94mg,502μmol)，并且将所得的混合物在室温下搅拌16小时。此后，将混合物通过制备RP-HPLC(Reprosil C18,梯度乙腈/0.2％aq.TFA)进行直接纯化。将产物级分合并，用1M盐酸稀释并且蒸发，得到90mg(73％理论收率)的题述化合物。
LC-MS(方法2)：Rt＝0.67min；MS(ESIpos)：m/z＝422(M+H)+
1H-NMR(400MHz,甲醇-d4)：其中δ＝8.18(s,1H),7.47(s,1H),7.32(s,1H),7.22(s,1H),6.83(s,1H),4.00(s,3H),3.60-3.84(m,2H),3.35(m,4H)ppm.
制备表III中实施例100-105的常规步骤：
将0.19M的中间体15A的DMF溶液用1.1当量的TBTU和2.5当量的DIPEA处理并且在室温下搅拌15分钟。加入合适的胺(1.1-2.0当量)，将所得的混合物在室温下搅拌过夜。蒸发后，将粗产物溶解于DMSO中并且根据所述方法进行纯化。
对于实施例104和105的合成，合适的胺组分在伯氨基处用叔丁氧羰基(Boc)保护，所述叔丁氧羰基在纯化后通过用4M的盐酸的1,4-二噁烷溶液处理而断裂(在室温下搅拌2小时)。蒸发易挥发物、并且真空干燥，以得到最终产物。
表III
实施例106
N-{[4-氨基-5-(7-甲氧基-5-甲基-1-苯并噻吩-2-基)吡咯并[2,1-f][1,2,4]三嗪-7-基]甲基}甘氨酰胺二盐酸盐
在室温下，将中间体20A(4.8mg,10μmol)搅拌至4M的盐酸的1,4-二噁烷(0.5ml)溶液中，并且搅拌1小时。然后将混合物蒸发并且将残留物用丙酮研磨。将所得的固体滤除并且在真空下干燥，得到4.2mg(93％理论收率)的题述化合物。
LC-MS(方法5)：Rt＝1.66min；MS(ESIpos)：m/z＝397(M+H)+
1H-NMR(400MHz,DMSO-d6)：δ＝9.02(br.s,1H),8.16(m,4H),7.38(s,1H),7.30(s,1H),6.91(s,1H),6.84(s,1H),4.65(br.s,2H),3.96(s,3H),3.63(br.s,2H),2.44(s,3H)ppm.
实施例107
5-(7-甲氧基-5-甲基-1-苯并噻吩-2-基)-7-{[2-(吡咯烷-1-基)乙氧基]甲基}吡咯并[2,1-f][1,2,4]三嗪-4-胺盐酸盐
将中间体12A(30mg,0.08mmol)、2-(吡咯烷-1-基)乙醇(193mg,1.67mmol)和N,N,N-三甲基十六烷-1-溴化铵(6mg,0.02mmol)的二氯甲烷(3ml)悬浮液在室温下搅拌1小时45分钟。加入DMF(2ml)，并且将溶液在减压下浓缩以使二氯甲烷溶剂蒸发。残留混合物通过制备RP-HPLC(Reprosil C18,梯度乙腈/0.2％aq.TFA)进行纯化。合并产物级分，用1M盐酸稀释并且蒸发至干燥，得到5.3mg(13％理论收率)的题述化合物。
LC-MS(方法4)：Rt＝0.69min；MS(ESIpos)：m/z＝438(M+H)+
1H-NMR(400MHz,DMSO-d6)：δ＝8.13(s,1H),7.40(s,1H),7.32(s,1H),7.24(s,1H),6.85(s,1H),4.98(s,2H),3.90-4.06(m,5H),3.34-3.47(m,2H),2.44(t,3H),2.01-2.22(m,4H)ppm.
实施例108
7-{[2-(二甲基氨基)乙氧基]甲基}-5-(7-甲氧基-5-甲基-1-苯并噻吩-2-基)吡咯并[2,1-f][1,2,4]三嗪-4-胺二盐酸盐
将中间体12A(53mg,147μmol)、2-(二甲基氨基)乙醇(26mg,294μmol)和DIPEA(97μl,588μmol)的THF(3ml)悬浮液在室温下搅拌20小时。加入甲醇(2ml)，并且将溶液通过制备RP-HPLC(Reprosil C18,梯度乙腈/0.2％aq.TFA)进行纯化。合并产物级分，用1M盐酸稀释并且蒸发至干燥，得到30mg(41％理论收率)的题述化合物。
LC-MS(方法4)：Rt＝0.65min；MS(ESIpos)：m/z＝412(M+H)+
1H-NMR(400MHz,DMSO-d6)：δ＝8.16(s,1H),7.41(s,1H),7.32(s,1H),7.22(s,1H),6.83(s,1H),4.97(s,2H),3.96(s,5H),3.40-3.53(m,2H),2.45(s,3H)ppm.
制备表IV中实施例109-120的一般步骤：
将中间体12A(0.1mmol)的1,2-二氯乙烷(0.6ml)溶液用10当量合适的醇处理并且在微波炉中在120℃下照射1小时。蒸发后，将粗产物溶解于DMSO并且根据所述方法进行纯化。
在醇组分带有叔丁氧羰基保护的氨基的情况下，将在反应混合物蒸发后(见上文)获得的被保护的粗中间体用1:3的二氯甲烷和三氟乙酸的混合物处理并且在室温下振荡过夜。然后将混合物再次蒸发，并且将粗产物溶解于DMSO中并且根据所述方法进行纯化。
表IV
制备表V中实施例121-123的一般步骤：
将中间体12A(0.1mmol)的1,2-二氯乙烷(0.6ml)溶液用10当量的合适的咪唑衍生物处理并且在室温下振荡过夜。蒸发后，将粗产物溶解于DMSO并且根据所述方法进行纯化。
表V
B.生物活性评估
缩写和首字母缩写：
Ahx 6-氨基己酸
ATP 三磷酸腺苷
BSA 牛血清白蛋白
CREB cAMP应答元件结合蛋白
DMSO 二甲基亚砜
EDTA 乙二胺四乙酸
EGTA 乙二醇-双(2-氨基乙基醚)-N,N,N',N'-四乙酸
FBS 胎牛血清
FGF 成纤维细胞生长因子
FGFR 成纤维细胞生长因子受体
GFP 绿色荧光蛋白
GST 谷胱甘肽S-转移酶
HEPES 4-(2-羟基乙基)哌嗪-1-乙磺酸
HRTF 均相时间分辨荧光
MOPS 3-(N-吗啉基)丙磺酸
mTOR 雷帕霉素的哺乳动物靶点
PBS 磷酸盐缓冲液
PI3K 磷脂酰肌醇3-激酶
RTK 受体酪氨酸激酶
SNP 单核苷酸多态性
TR-FRET 时间分辨荧光共振能量转移
VEGF 血管内皮细胞生长因子
VEGFR 血管内皮细胞生长因子受体
本发明化合物活性的证实可以通过本领域中公知的离体测定、体外测定和体内测定而完成。例如，为证实本发明化合物的活性，可以使用以下测定。
B-1.FGFR-1高ATP激酶测定
使用如以下段落所述的基于TR-FRET的FGFR-1高ATP测定，将本发明的化合物与FGFR-1预培养后，对本发明化合物在高ATP浓度下的FGFR-1的抑制活性进行定量：
使用杆状病毒表达系统在SF9昆虫细胞中表达并且通过谷胱甘肽-琼脂糖亲和色谱法纯化的标记为FGFR-1稠合蛋白质的重组体[谷胱甘肽-S-转移酶(GST)(N-封端的)、His6-标签、凝血酶分裂点，和如GenBank entry NM_015850中的从氨基酸G400至R800的人体FGFR-1的细胞内部分的稠合]购自Proqinase(产品编号0101-0000-1)并且用作酶。使用可以购自例如Biosyntan(Berlin-Buch,Germany)的生物素化肽——生物素-Ahx-AAEEEYFFLFAKKK(C端为酰胺形式)作为激酶反应的底物。
通常，将试验化合物在相同的微量滴定板上，以20μM至0.1nM的范围内的11个不同浓度(例如20μM、5.9μM、1.7μM、0.51μM、0.15μM、44nM、13nM、3.8nM、1.1nM、0.33nM和0.1nM)进行测试，每个浓度测试两次。在测定之前作为100倍浓缩的溶于DMSO的贮存液制备系列稀释物；可以根据使用的移液器而改变实际的浓度。对于测定，将50nl测试化合物的各个DMSO贮存液吸取至黑色低容积的384孔微量滴定板(Greiner Bio-one,Frickenhausen,Germany)中。加入2μl的上述FGFR-1融合蛋白的水性测定缓冲液[8mM MOPS pH 7.0,10mM乙酸镁,1.0mM二硫苏糖醇,0.05％(w/v)牛血清白蛋白(BSA),0.07％(v/v)Tween-20,0.2mMEDTA]溶液，并且将混合物在22℃下孵育15分钟以使测试化合物与酶进行预结合。然后，通过加入3μl的三磷酸腺苷溶液(ATP,3.3mM；在5μl测定体积中的最终浓度＝2mM)和测定缓冲液中的底物(0.16μM；在5μl测定体积中的最终浓度＝0.1μM)而起始激酶反应，并且将所得的混合物在22℃下孵育15分钟的反应时间。FGFR-1融合蛋白的浓度根据酶份额的活性而调节并且适当地选择以使测定在线性范围内(通常浓度范围为0.05μg/ml)。通过加入5μl的HTRF检测试剂[25nM链亲和素-XL665(Cis Biointernational)和1nM PT66-Eu-螯合剂(即铕-螯合剂标记的抗磷酸酪氨酸抗体(Perkin-Elmer；可以用来自Cis Biointernational的PT66-Tb-cryptate代替))的EDTA水溶液(溶于50mM HEPES/NaOH pH 7.5中的50mM EDTA，0.1％(w/v)BSA)]而终止反应。
将所得的混合物在22℃下孵育1小时，以在磷酸化生物素化肽和检测试剂之间形成复合物。随后，通过测量从Eu-螯合剂至链亲和素-XL665的共振能量转移来评估磷酸化底物的量。为此，在TR-FRET读数器[例如Rubystar(BMG Labtechnologies,Offenburg,Germany)或Viewlux(Perkin-Elmer)]中测量在350nm下激发后在620nm和665nm下的荧光发射。620nm和665nm下的发射的比率用于度量磷酸化底物的量。对数据进行标准化(不含抑制剂的酶反应＝0％抑制，所有其他测定组分但不含酶＝100％抑制)，并且使用内部(in-house)软件通过4参数拟合来计算IC50值。
来自该测定的各个本发明化合物的IC50值列于以下表1A中：
表1A
所选择的8-氨基-1-(苯并噻吩-2-基)咪唑[1,5-a]吡嗪衍生物以及被认为是最接近现有技术代表物的相关的化合物(见Int.Pat.Appl.WO 2007/061737-A2及其所述的实施例化合物)按照公开的步骤合成并且还在FGFR-1高ATP试验中测试以用于对比目的。这些化合物所获得的
所选择的8-氨基-1-(苯并噻吩-2-基)咪唑并[1,5-a]吡嗪衍生物以及被认为是最接近现有技术代表物的相关的化合物(见国际专利申请WO 2007/061737-A2及其中所述的实施例化合物)按照公开的步骤合成并且还对其进行了FGFR-1高ATP测定的测试用于对比目的。所获得的这些化合物的IC50值还列于以下表1B中：
表1B
表1A和1B中所述的IC50值说明本发明化合物在抑制FGFR-1激酶活性的效力方面为所选择的现有技术化合物的约五倍至五百倍。
B-2.FGFR-3激酶测定
使用如以下段落所述的基于TR-FRET的FGFR-3测定，对将本发明的化合物与FGFR-3预培养后，本发明化合物的FGFR-3抑制活性进行定量：
使用杆状病毒表达系统在SF9昆虫细胞中表达并且通过谷胱甘肽-S-转移酶亲和色谱法进行纯化的重组标记的FGFR-3融合蛋白[谷胱甘肽-S-转移酶(GST)(N末端)、His6-标签、凝血酶分裂点，与来自如NCBI/Protein entry NP_000133.1的氨基酸R397至T806的人FGFR-3的细胞内部分融合]购自Proqinase(产品编号1068-0000-1)并且用作酶。使用可以购自例如Biosyntan(Berlin-Buch,Germany)的生物素化的肽——生物素-Ahx-AAEEEYFFLFAKKK(C端为酰胺形式)作为激酶反应的底物。
通常，将试验化合物在相同的微量滴定板上，以20μM至0.1nM的范围内的11个不同浓度(例如20μM、5.9μM、1.7μM、0.51μM、0.15μM、44nM、13nM、3.8nM、1.1nM、0.33nM和0.1nM)进行测试，每个浓度测试两次。在测定之前作为100倍浓缩的溶于DMSO的贮存液分别制备系列稀释物；可以根据使用的移液器而改变实际的浓度。对于测定，将50nl各个测试化合物的DMSO贮存液吸取至黑色低容积的384孔微量滴定板(Greiner Bio-one,Frickenhausen,Germany)中。加入2μl的上述FGFR-3融合蛋白的水性测定缓冲液[8mM MOPSpH 7.0,10mM乙酸镁,1.0mM二硫苏糖醇,0.05％(w/v)牛血清白蛋白(BSA),0.07％(v/v)Tween-20,0.2mMEDTA]溶液，并且将混合物在22℃下孵育15分钟以使测试化合物与酶进行预结合。然后，通过加入3μl的三磷酸腺苷(ATP,16.7μM；在5μl测定体积中的最终浓度＝10μΜ)和底物(0.8μΜ；在5μl测定体积中的最终浓度＝0.5μM)的测定缓冲液中的溶液而起始激酶反应，并且将所得的混合物在22℃下孵育60分钟的反应时间。FGFR-3融合蛋白的浓度根据酶份额的活性而调节并且适当地选择以使测定在线性范围内(通常浓度范围为0.03μg/ml)。通过加入5μl的HTRF检测试剂[100nM链亲和素-XL665(Cis Biointernational)和1nM PT66-Eu-螯合剂(即铕-螯合剂标记的抗磷酸酪氨酸抗体(Cis Biointernational；可以用来自Perkin-Elmer的PT66-Eu-chelate代替))的EDTA水溶液(溶于50mM HEPES/NaOH pH 7.5中的50mMEDTA,0.1％(w/v)BSA)]而终止反应。
将所得的混合物在22℃下孵育1小时，以在磷酸化生物素化肽和检测试剂之间形成复合物。随后，通过测量从Tb-螯合剂至链亲和素-XL665的共振能量转移来评估磷酸化底物的量。为此，在TR-FRET读数器[例如Rubystar(BMG Labtechnologies,Offenburg,Germany)或Viewlux(Perkin-Elmer)]中测量在350nm下激发后在620nm和665nm下的荧光发射。620nm和665nm下的发射的比率用于度量磷酸化底物的量。对数据进行标准化(不含抑制剂的酶反应＝0％抑制，所有其他测定组分但不含酶＝100％抑制)，并且使用内部(in-house)软件通过4参数拟合来计算IC50值。
来自该测定的各个本发明化合物的IC50值列于以下表2A中：
表2A
所选择的8-氨基-1-(苯并噻吩-2-基)咪唑并[1,5-a]吡嗪衍生物以及被认为是最接近现有技术代表物的相关的化合物(见国际专利申请WO 2007/061737-A2及其中所述的实施例化合物)按照公开的步骤合成并且还对其进行了FGFR-3测定的测试用于对比目的。所获得的这些化合物的IC50值还列于以下表2B中：
表2B
表2A和2B中所述的IC50值说明本发明化合物在抑制FGFR-3激酶活性的效力方面为所选择的现有技术化合物的最高达三十倍。
B-3.FGFR-4高ATP激酶测定
使用如以下段落所述的基于TR-FRET的FGFR-4高ATP测定，对将本发明的化合物与FGFR-4预培养后，在高ATP浓度下的本发明化合物的FGFR-4的抑制活性进行定量：
使用杆状病毒表达系统在SF9昆虫细胞中表达并且通过谷胱甘肽-琼脂糖亲和色谱法进行纯化的重组标记的FGFR-4融合蛋白[谷胱甘肽-S-转移酶(GST)(N末端)、His6-标签、凝血酶分裂点，与来自如GenBank entry NM_002011的氨基酸R391至T802的人FGFR-4的细胞内部分融合]购自Proqinase(产品编号0127-0000-3)并且用作酶。使用可以购自例如Biosyntan(Berlin-Buch,Germany)的生物素化的肽——生物素-Ahx-AAEEEYFFLFAKKK(C端为酰胺形式)作为激酶反应的底物。
通常，将试验化合物在相同的微量滴定板上，以20μM至0.1nM的范围内的11个不同浓度(例如20μM、5.9μM、1.7μM、0.51μM、0.15μM、44nM、13nM、3.8nM、1.1nM、0.33nM和0.1nM)进行测试，每个浓度测试两次。在测定之前作为100倍浓缩的溶于DMSO的贮存液制备系列稀释物；可以根据使用的移液器而改变实际的浓度。对于测定，将50nl测试化合物的各个DMSO贮存液吸取至黑色低容积的384孔微量滴定板(Greiner Bio-one,Frickenhausen,Germany)中。加入2μl的上述FGFR-4融合蛋白的水性测定缓冲液[8mM MOPS pH 7.0,10mM乙酸镁,1.0mM二硫苏糖醇,0.05％(w/v)牛血清白蛋白(BSA),0.07％(v/v)Tween-20,0.2mMEDTA]溶液，并且将混合物在22℃下孵育15分钟以使测试化合物与酶进行预结合。然后，通过加入3μl的三磷酸腺苷(ATP,3.3mM；在5μl测定体积中的最终浓度＝2mM)和底物(0.8μM；在5μl测定体积中的最终浓度＝0.5μM)的测定缓冲液溶液而起始激酶反应，并且将所得的混合物在22℃下孵育60分钟的反应时间。FGFR-4融合蛋白的浓度根据酶份额的活性而调节并且适当地选择以使测定在线性范围内(通常浓度范围为0.03μg/ml)。通过加入5μl的HTRF检测试剂[100nM链亲和素-XL665(Cis Biointernational)和1nM PT66-Eu-螯合剂(即铕-螯合剂标记的磷酸酪氨酸抗体(Cis Biointernational；可以用来自Perkin-Elmer的PT66-Eu-chelate代替))的EDTA水溶液(溶于50mM HEPES/NaOH pH 7.5中的50mM EDTA，0.1％(w/v)BSA)]而终止反应。
将所得的混合物在22℃下孵育1小时，以在磷酸化生物素化肽和检测试剂之间形成复合物。随后，通过测量从Tb-螯合剂至链亲和素-XL665的共振能量转移来评估磷酸化底物的量。为此，在TR-FRET读数器[例如Rubystar(BMG Labtechnologies,Offenburg,Germany)或Viewlux(Perkin-Elmer)]中测量在350nm下激发后在620nm和665nm下的荧光发射。620nm和665nm下的发射的比率用于度量磷酸化底物的量。对数据进行标准化(不含抑制剂的酶反应＝0％抑制，所有其他测定组分但不含酶＝100％抑制)，并且使用内部(in-house)软件通过4参数拟合来计算IC50值。
B-4.mTOR激酶测定(用于对比目的)
使用如以下段落所述的基于TR-FRET的mTOR测定，对本发明的化合物的mTOR抑制活性进行定量：
在昆虫细胞中表达并且通过谷胱甘肽-琼脂糖亲和色谱法进行纯化的重组融合标记的mTOR蛋白[谷胱甘肽-S-转移酶(GST)融合至1360-2549的人mTOR氨基酸]购自Invitrogen(Cat.-No.4753)，并且用作酶。使用GFP和4E–BP1的重组融合蛋白(购自Invitrogen,Cat.-No.PV4759)作为激酶反应的底物。
将测试化合物溶解于DMSO，以得到10mM贮存液。首先将这些溶液用100％DMSO稀释十倍，以得到1mM的100％DMSO溶液，然后用50％DMSO稀释100倍，以得到10μM的50％DMSO溶液。
对于测定，将0.5μl的10μM的测试化合物的50％DMSO溶液吸取至黑色的小容积的384孔微量滴定板(Greiner Bio-one,Frickenhausen,Germany)中。加入2μl的上述mTOR融合蛋白的水性测定缓冲液[50mM HEPES/NaOH pH 7.5,5mM氯化镁,1.0mM二硫基苏糖醇,1mMEGTA,0.01％(v/v)Triton-X100,0.01％(w/v)牛血清白蛋白(BSA)]溶液，并且将混合物在22℃下孵育15分钟以使测试化合物与酶预结合。然后，通过加入2.5μl的三磷酸腺苷(ATP,80μM；在5μl测定体积中的最终浓度＝40mM)和底物(0.6μM；在5μl测定体积中的最终浓度＝0.3μM)的测定缓冲液溶液而起始激酶反应，并且将所得的混合物在22℃下孵育60分钟的反应时间。适当地选择mTOR融合蛋白的浓度以使测定在线性的范围内(通常在5μl测定体积中的最终浓度为1.25ng/μl)。通过加入5μl的30mM EDTA(在10μl测定体积中的最终浓度＝15mM)和2nM Tb-螯合物标记的抗-4E-BP1[pT46]磷酸特异性抗体[Invitrogen Cat.-No.PV4755](在10μl测定体积中的最终浓度＝1nM)的FRET缓冲液溶液而终止反应。
将所得的混合物在22℃下孵育1小时以在磷酸化底物和Tb-螯合剂标记的抗体之间形成复合物。随后，通过测量从Tb-螯合剂至GFP的共振能量转移而评估磷酸化的底物的量。为此，在Envision 2104多标签读数器(Perkin-Elmer)中测量在340nm下激发后在495nm和520nm的荧光发射。在520nm和495nm的荧光发射的比例被作为磷酸化底物的量的量度。对数据进行标准化(不含抑制剂的酶反应＝0％抑制，所有其他测定组分但是不含酶＝100％抑制)，并且计算平均值(如果在单个浓度下重复测试)或IC50值(通过使用内部软件的4参数拟合)。
各个本发明化合物在1μM下的平均抑制值列于以下表3中：
(无抑制效应检测＝在1μM下没有检测到抑制效果)。
表3中数据示出本发明化合物仅对mTOR激酶具有弱的抑制效果，并不认为这种弱的抑制效果显著地归因于用这些化合物观察到的药物活性。
B-5.生长因子介导的细胞增殖的抑制
从Cellsystems(FC-0003)获得人脐带静脉内皮细胞(HUVEC)并且将其培养在在37℃和5％CO2下的含有2％胎牛血清(FBS)的Vasculife VEGF完全培养基(Cellsystems,LL-1020)。细胞用于增殖测定最高达第7代。
使用accutase(PAA,L11-007)收获HUVEC细胞，并且将所述细胞以2500个细胞/孔的细胞密度接种于96-孔板(Falcon MICROTEST组织96-孔平底培养板,BD 353075，或μCLEAR-PLATE,黑色,96-孔,Greiner Bio-one,编号655090)的第2至12列的100μlVasculife VEGF完全培养基中，第一列留空作为空白。细胞在37℃和5％CO2下孵育至少6小时。然后，将细胞用PBS洗涤一次并且在含有肝素、抗坏血酸盐和L-谷氨酰胺(VasculifeLife Factors Kit的组分、Cellsystems、LL-1020)以及0.2％FBS的Vasculife基础培养基(Cellsystems,LM-0002)中饥饿过夜。
约18小时后，将饥饿性培养基弃置，并且在100μl饥饿性培养基中将细胞暴露至9个连续对数或半对数浓度的测试化合物中72小时，所述测试化合物的浓度的范围为10pM至30μM，以及将所述细胞暴露至5、10或20ng/ml hFGF-2(重组人FGF basic，R&D系统，233-FB)。用DMSO将10mM测试化合物的DMSO贮存液稀释至200x最终浓度，在所有孔中得到最终的0.5％的DMSO浓度。对照仅由饥饿性培养基中生长的细胞组成以及由在含有饥饿性培养基和0.5％DMSO的hFGF-2中生长的细胞组成。为测定细胞增殖，将5μl的Alamar Blue溶液(Biosource,DAL1100)加入至每个孔(1:20稀释)，并且使细胞在37℃和5％CO2下再孵育4小时，然后用Spectrafluor Plus Tecan板读数器(XFLUOR4version 4.20)测量荧光(激发535nm,释放595nm)。在一些实验中，根据制造商的说明使用ATP Determination Kit(BIAFFIN GmbH,LBR-T100)。在每个实验中，对样品进行三次测定，并且测定标准偏差。使用GraphPad Prism 5软件来分析数据并且获得IC50值。所有独立实验中对所有测试化合物进行了2次至10次测定，并且获得了相似的结果。
以下表4所列的数据代表由相应的平均pIC50值得到的本发明代表性化合物的IC50值：
表4：
当血管内皮细胞生长因子或(VEGF-A165异构形式)用作调节生长因子(代替FGF-2)时，在该增殖测定中本发明大部分化合物表现出抑制活性降低约5倍至50倍，表明与VEGFR激酶相比这些化合物对于FGFR具有显著的选择性。
B-6.人体异种移植和同源肿瘤模型
制作不同的肿瘤模型以概括在体内的本发明化合物。体外培养人、大鼠或小鼠肿瘤细胞并且将其移植至免疫缺陷的或免疫活性的小鼠，或免疫缺陷的大鼠中。肿瘤定植后开始进行治疗，用物质通过不同的途径对荷瘤动物进行(经口、静脉、腹膜内或皮下)治疗。将物质作为单疗法进行测试或作为与其他药物物质的结合疗法进行测试。对荷瘤动物进行治疗直至肿瘤达到平均尺寸为120mm2。使用测径器在两个维度测量肿瘤，并且根据式(长度x宽度2)/2计算肿瘤体积。在实验结束时使用T/C比率[T＝治疗组的最终肿瘤重量；C＝对照组的最终肿瘤重量]来评估物质效能。使用ANOVA方差测试确定对照组与治疗组之间的效能的统计学上的显著性。所有的动物研究根据德国管理准则进行。
尽管本发明已经参考具体的实施方案而公开，但是显而易见的是本发明的其他实施方案和变化方案可以由本领域技术人员在不偏离本发明真实的精神和范围下修订得出。权利要求意欲被理解为包括所有这类实施方案和等价的变化方案。
C.与药物组合物有关的实施例
本发明药物组合物可以如下说明：
无菌静脉溶液：
可以使用无菌、可注射的水制备5mg/mL的所需本发明化合物的溶液，视需要调节pH。为了给药而将溶液用无菌5％葡萄糖水稀释至1-2mg/mL并且作为静脉注入剂进行给药约60分钟。
用于静脉给药的冻干粉末：
无菌制剂可以用(i)100-1000mg的作为冻干粉末的所需本发明化合物，(ii)32-327mg/mL柠檬酸钠，和(iii)300-3000mg Dextran 40制备。制剂用无菌可注射的盐水或5％葡萄糖水复原至浓度为10至20mg/mL，将所得溶液再用盐水或5％葡萄糖水稀释至0.2至0.4mg/mL，并且作为静脉推注或通过静脉注入给药15-60分钟。
肌肉内悬液：
可以制备以下溶液或悬液用于肌肉内注射：
50mg/mL的所需非水溶性的本发明化合物；5mg/mL羧甲基纤维素钠；4mg/mL Tween80；9mg/mL氯化钠；9mg/mL苄醇。
硬壳胶囊：
大量单位胶囊通过用100mg的所需粉末状的本发明化合物、150mg乳糖、50mg纤维素和6mg硬脂酸镁填充标准的两片式硬明胶胶囊每个而制备。
软明胶胶囊：
制备所需本发明化合物在可消化性油如大豆油、棉籽油或橄榄油中的混合物，并且通过正位移泵注入至熔融明胶以形成含有100mg活性组分的软明胶胶囊。将胶囊洗涤并且干燥。所需本发明化合物可以溶解于聚乙二醇、甘油和山梨糖醇的混合物以制备水溶性药物混合物。
片剂：
大量片剂通过常规的步骤制备，以使剂量单位为100mg的所需的本发明化合物，0.2mg的胶体二氧化硅，5mg的硬脂酸镁，275mg微晶纤维素，11mg淀粉，和98.8mg乳糖。合适的水性和非水性包衣可以用于以提高适口性，改进简洁性和稳定性，或延迟吸收。
用于局部施用至眼的溶液或悬液(滴眼剂)：
无菌制剂可以用100mg的所需本发明化合物作为冻干粉末复原于5mL的无菌盐水而制备。作为防腐剂，苯扎氯铵、硫汞撒、苯基硝酸汞等可以以约0.001重量％至1重量％的范围使用。

Claims (9)

1.式(I)的化合物，或其可药用的盐，
其中
R1为氢、氯或甲基，
R2为甲氧基，
并且
G代表基团-CH2-OR3、-CH2-NR4R5或-C(＝O)-NR6R7，其中
R3为被基团取代的(C1-C6)-烷基，所述基团选自氨基、单-(C1-C4)-烷基氨基、二-(C1-C4)-烷基氨基、单-(C1-C4)-烷基氨基羰基和4元至6元杂环烷基，
或
为4元至6元杂环烷基，
其中所述4元至6元杂环烷基任选地被一个选自氧基的基团所取代，
R4为氢或(C1-C4)-烷基，
R5为被一个或两个基团所取代的(C1-C6)-烷基，所述基团独立地选自羟基、(C1-C4)-烷氧基、氨基、单-(C1-C4)-烷基氨基、二-(C1-C4)-烷基氨基、羟基羰基、氨基羰基、单-(C1-C4)-烷基氨基羰基、(C1-C4)-烷基羰基氨基、氨基羰基氨基和4元至6元杂环烷基，
其中所述4元至6元杂环烷基任选地被一个或两个独立地选自(C1-C4)-烷基、氧基和羟基的基团所取代，
或者
为任选地被基团所取代的(C1-C4)-烷基羰基，所述基团选自氨基，
或者
为任选地被一个或两个基团所取代的(C3-C6)-环烷基，所述基团独立地选自羟基、氨基和二-(C1-C4)-烷基氨基，或者
为任选地被一个或两个基团所取代的4元至6元杂环烷基，所述基团独立地选自(C1-C4)-烷基和氧基，
或者
R4和R5彼此连接并且与其所连接的氮原子一起形成单环或双环饱和的4元至10元杂环烷基环，所述环可以含有选自N和O的第二环杂原子，并且可以被最高达三个基团所取代，所述基团独立地选自(C1-C4)-烷基、氧基、羟基、(C1-C4)-烷氧基、氨基、单-(C1-C4)-烷基氨基、二-(C1-C4)-烷基氨基、吡咯烷基、(C1-C4)-烷基羰基、(C3-C6)-环烷基羰基、羟基羰基、氨基羰基、二-(C1-C4)-烷基氨基羰基、噻吩基和苯基，
其中所述(C1-C4)-烷基、(C1-C4)-烷氧基、单-(C1-C4)-烷基氨基、二-(C1-C4)-烷基氨基和(C1-C4)-烷基羰基的烷基部分任选地被选自羟基和氨基羰基的基团所取代，
并且
其中所述苯基任选地被一个独立地选甲基的基团所取代，
或者
R4和R5彼此连接并且与其所连接的氮原子一起形成咪唑-1-基，所述环各自可以被一个或两个独立地选自(C1-C4)-烷基和氰基的基团所取代，
R6为氢，
R7为任选地被一个或两个基团取代的4元至6元杂环烷基，所述基团独立地选自氧基，
或者
R6和R7彼此连接并且与其所连接的氮原子一起形成单环饱和的4元至7元杂环烷基环，所述环可以含有选自N的第二环杂原子，并且可以被一个或两个独立地选自(C1-C4)-烷基、羟基、氨基、二-(C1-C4)-烷基氨基和氨基羰基的基团所取代。
2.权利要求1的式(I)的化合物，或其可药用的盐，其中
R1为氯或甲基，
R2为甲氧基，
并且
G代表基团-CH2-OR3、-CH2-NR4R5或-C(＝O)-NR6R7，其中
R3为被选自氨基和单-(C1-C4)-烷基氨基的基团所取代的(C2-C4)-烷基，
或
为吡咯烷-3-基，
R4为氢或甲基，
R5为被基团所取代的(C1-C4)-烷基，所述基团选自羟基、氨基、单-(C1-C4)-烷基氨基、二-(C1-C4)-烷基氨基、氨基羰基和单-(C1-C4)-烷基氨基羰基，
或
为任选地被氨基所取代的(C1-C4)-烷基羰基，
或
为任选地被基团所取代的(C3-C6)-环烷基，所述基团选自羟基、氨基和二-(C1-C4)-烷基氨基，
或
为任选地被一个或两个独立地选自(C1-C4)-烷基和氧基的基团所取代的5元或6元杂环烷基，
或
R4和R5彼此连接，并且与其所连接的氮原子一起形成单环饱和的4元至7元杂环烷基环，所述环可以含有选自N和O的第二环杂原子，并且可以被最高达三个独立地选自(C1-C4)-烷基、氧基、羟基、氨基、单-(C1-C4)-烷基氨基、二-(C1-C4)-烷基氨基、(C1-C4)-烷基羰基、(C3-C6)-环烷基羰基和氨基羰基的基团所取代，
其中所述(C1-C4)-烷基、单-(C1-C4)-烷基氨基、二-(C1-C4)-烷基氨基和(C1-C4)-烷基羰基的烷基部分任选地被羟基取代，
R6为氢，
R7为任选地被一个或两个基团所取代的5或6元杂环烷基，所述基团独立地选自氧基，
或者
R6和R7彼此连接并且与其所连接的氮原子一起形成单环饱和的5元至7元杂环烷基环，所述环可以含有选自N的第二环杂原子，并且可以被一个或两个独立地选自(C1-C4)-烷基、羟基、氨基、二-(C1-C4)-烷基氨基和氨基羰基的基团所取代。
3.权利要求1或2的式(I)的化合物，或其可药用的盐，其中
R1为甲基，
R2为甲氧基，
并且
G代表基团-CH2-NR4R5或-C(＝O)-NR6R7，其中
R4为氢，
R5为被氨基、甲基氨基或氨基羰基所取代的(C1-C4)-烷基，
或者
为被氨基所取代的(C1-C4)-烷基羰基，
或者
为2-氧基吡咯烷-3-基或2-氧基哌啶-3-基，
或者
R4和R5彼此连接并且与其所连接的氮原子一起形成吡咯烷-1-基、哌啶-1-基或哌嗪-1-基环，所述环各自可以被一个或两个独立地选自甲基、氧基、羟基、氨基、甲基氨基、二甲基氨基和氨基羰基的基团所取代，
R6为氢，
R7为2-氧基吡咯烷-3-基，
或者
R6和R7彼此连接并且与其所连接的氮原子一起形成吡咯烷-1-基、哌啶-1-基或哌嗪-1-基环，所述环各自可以被一个或两个独立地选自甲基、羟基、氨基、二甲基氨基和氨基羰基的基团取代。
4.制备权利要求1至3中任一项所定义的式(I)的化合物的方法，其特征在于式(II)的4-氨基吡咯并[2,1-f][1,2,4]三嗪进行以下任一反应：
[A]与甲醛和式(III)的胺反应，
其中R4和R5具有权利要求1至3中任一项所示的含义，
所述反应在酸的存在下，得到式(IV)的化合物
其中R4和R5具有权利要求1至3中任一项所示的含义，
然后溴化为式(V)的化合物
其中R4和R5具有权利要求1至3中任一项所示的含义，
并且随后与式(VI)的苯并噻吩-2-基硼酸酯偶合，
其中R1和R2具有权利要求1至3中任一项所示的含义，
并且
R8代表氢或(C1-C4)-烷基，或两个R8基团连接在一起以形成-(CH2)2-、-C(CH3)2-C(CH3)2-、-(CH2)3-、-CH2-C(CH3)2-CH2-或-C(＝O)-CH2-N(CH3)-CH2-C(＝O)-桥连，
所述反应在钯催化剂和碱的存在下进行，得到式(I-A)的目标化合物
其中R1、R2、R4和R5具有权利要求1至3中任一项所示的含义，
或者
[B]在磷酰氯的存在下用N,N-二甲基甲酰胺处理，得到式(VII)的甲酰基化合物
然后溴化为式(VIII)的化合物
并且随后与式(VI)的苯并噻吩-2-基硼酸酯偶合
其中R1、R2和R8具有上述含义，
所述反应在钯催化剂和碱的存在下进行，得到式(IX)的化合物
其中R1和R2具有权利要求1至3中任一项所示的含义，
然后所述式(IX)的化合物进行以下反应之一
[B-1]与式(III)胺反应
其中R4和R5具有权利要求1至3中任一项所示的含义，所述反应在酸和还原剂的存在下进行，得到式(I-A)目标化合物
其中R1、R2、R4和R5具有权利要求1至3中任一项所示的含义，
或者
[B-2]氧化为式(X)的羧酸
其中R1和R2具有权利要求1至3中任一项所示的含义，并且最终与式(XI)的胺偶合
其中R6和R7具有权利要求1至3中任一项所示的含义，所述反应在缩合剂的存在下进行，得到式(I-B)的目标化合物
其中R1、R2、R6和R7具有权利要求1至3中任一项所示的含义，
或者
[B-3]还原为式(XII)的醇
其中R1和R2具有权利要求1至3中任一项所示的含义，转化为式(XIII)相应的卤代甲基衍生物
其中R1和R2具有权利要求1至3中任一项所示的含义，并且
X为氯、溴或碘，
并且最终用式(XIV)的醇处理
R3-OH (XIV)，
其中R3具有权利要求1至3中任一项所示的含义，
所述反应任选地在碱的存在下进行，得到式(I-C)的目标化合物
其中R1、R2和R3具有权利要求1至3中任一项所示的含义，
任选地随后——如果合适——(i)将由此获得的式(I)的化合物分离为其各自的对映异构体和/或非对映异构体，和/或(ii)将式(I)的化合物通过用相应的酸或碱处理而转化为其各自的盐。
5.5-(7-甲氧基-5-甲基-1-苯并噻吩-2-基)-7-(哌嗪-1-基甲基)吡咯并[2,1-f][1,2,4]三嗪-4-胺三盐酸盐水合物，结构式如下：
6.权利要求1至3以及5中任一项所定义的化合物用于制造治疗和/或防治癌症和肿瘤疾病的药物组合物的用途。
7.药物组合物，其包含权利要求1至3以及5中任一项所定义的化合物和一种或多种可药用的赋形剂。
8.权利要求7的药物组合物，其还包含一种或多种另外的治疗剂。
9.权利要求6的用途，其中所述癌症和肿瘤疾病为哺乳动物中的癌症和肿瘤疾病。
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