CN104093406A

CN104093406A - 包含丁香脂素的sirt1活化剂

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Publication number: CN104093406A
Application number: CN201280062749.8A
Authority: CN
Inventors: 金炳奎; 郑炫禹; 金秀耿; 曺始永; 朴赞雄; 徐大方; 金完起; 李尚骏
Original assignee: Amorepacific Corp
Current assignee: Amorepacific Corp
Priority date: 2011-10-18
Filing date: 2012-10-18
Publication date: 2014-10-08
Anticipated expiration: 2032-10-18
Also published as: US9913823B2; CN105708834A; JP2017061490A; JP2014534966A; CN105796546A; US9999611B2; US10022351B2; US11096921B2; US20160263079A1; CN105796546B; CN104093406B; JP2017048221A; JP6310991B2; CN105708833A; HK1226305A1; JP6463320B2; US20160263078A1; JP6126107B2; US20140371307A1; HK1226304A1

Abstract

本发明涉及一种包含化学式1的化合物，其衍生物或者其药学上可接受的盐作为活性成分的SIRT1活化剂。本发明还涉及一种包含上述SIRT1活化剂的用于解毒、改善代谢紊乱、预防或改善眼部疾病或者预防或改善免疫性疾病的组合物。

Description

包含丁香脂素的SIRT1活化剂

技术领域

本发明涉及一种包含化学式1的化合物，其衍生物或者其药学上可接受的盐作为活性成分的SIRT1活化剂。本发明还涉及一种包含上述去乙酰化酶1(SIRT1)活化剂的，用于解毒、改善代谢紊乱(metabolic disorder)、预防或改善眼部疾病或者预防或改善免疫性疾病的组合物。

背景技术

吸烟被认为是人死亡主要原因的许多疾病的重要风险因素。吸烟引起的主要疾病包括肺癌、慢性阻塞性肺疾病(COPD)、冠状动脉疾病、脑血管疾病比如中风、心力衰竭、循环系统疾病、咽喉癌、口腔癌等。

香烟的烟气中包含有超过4000种的毒性物质，包括致癌物质。其中，为数种毒性物质混合物的焦油和尼古丁被认为是重要的有害成分。由于包含于烟草中的有害成分可抑制被称为人类长寿基因的SIRT1，从而使吸香烟者对炎症或严重疾病比如慢性阻塞性肺疾病(COPD)易感。并且，还已知吸烟可引起线粒体功能异常。

由于工业发展导致的生活方式的改变以及过多的高卡洛里食物，人类正遭受以肥胖、2型糖尿病、高脂血症、脂肪肝等为代表的代谢性疾病的风险。其中，考虑到肥胖是代谢性疾病比如2型糖尿病、高脂血症、脂肪肝的主要原因，因此可通过预防或者改善肥胖来预防其它代谢性疾病。

肥胖最常由摄入的能量超过身体消耗的能量而引起。更具体地说，多余的能量以甘油三酯的形式储存于脂肪组织中。尽管所述脂肪组织就像橡皮气囊一样可储存大量的多余能量，但与此同时脂肪细胞的尺寸增加。此外，如果要被储存的多余能量的量超过脂肪组织的容量，那么可发生脂代谢失调(lipiddysregulation)，脂毒性(lipotoxicity)，其中能量被储存在其它组织比如肌肉、肝脏等中的。储存于各个组织中的脂肪通过脂肪分解变成游离脂肪酸。已知这些游离脂肪酸可通过涉及JNK、PKC等的信号传导机制抑制胰岛素信号传导。胰岛素信号传导的抑制必然会导致胰岛素抗性，并由此引起各种代谢性疾病比如高血糖症、高脂血症、高胆固醇症、2型糖尿病、脂肪肝等。同样地，肥胖不仅仅为外观问题，其还会伴随各种成人疾病，因此是一个非常严重的问题。

视网膜是属于中枢神经系统的器官。发育完全的视网膜细胞与存在于脑中的大多数神经元一样通常不会发生分裂。因此，相比于其它系统，如果视网膜细胞的功能退化，那么病症可容易地在组织或器官水平发生，并因此使老化进行得更快。由于构成眼睛的视网膜、视神经、感光细胞和晶状体总是暴露于氧化损伤比如光和紫外线的起因下，因此氧化应激是视网膜细胞功能退化的主要原因。一旦发生氧化损伤，眼球细胞内的线粒体DNA即被损伤。由于线粒体内缺乏可修复损伤DNA的酶，因此损伤的线粒体随时间在细胞内蓄积。如果线粒体DNA变得不稳定，那么由其合成的线粒体蛋白质会发生改变。作为结果，线粒体膜电位降低，继而线粒体能量(ATP)产生减少以及活性氧的生成相对增加。因此，构成细胞的DNA、蛋白质和脂质发生改变并发生眼睛老化或眼部疾病比如黄斑变性、葡萄膜炎、青光眼、糖尿病性视网膜疾病和白内障。因此，眼部疾病可通过抑制线粒体DNA的不稳定性来预防或改善。但是，目前最广为人知的延迟眼睛老化的方法是使用抗氧化剂以减少氧化应激的间接方法。

当机体遭受病毒、细菌等侵袭时，受感染的细胞产生组胺、激肽等，其可使损伤部位的毛细血管扩张并因此使包括巨噬细胞和杀伤细胞的多种免疫细胞更容易地到达受伤部位。在所述免疫细胞比如巨噬细胞吞噬侵袭的病毒、细菌等后，溶酶体内的多种酶可将其分解并结束免疫反应。

免疫反应对于维持机体稳态与能量代谢是必需的。先天性免疫是针对来自外部的非特异性感染源的初级(primary)防御机制并通过炎症反应保护我们的身体免受外部的不断侵袭。所述炎症反应由于其对于细胞以及组织具有很大的影响而被严格的调节。如果无法正常调控炎症反应，那么可发生各种免疫性疾病比如枯草热、风湿性关节炎、过敏症或者过敏性皮肤炎。而且，由于即使在没有外部病原体时也表现出炎症相关基因表达增加的慢性炎症可通过影响胰岛素抗性而引起代谢性疾病比如2型糖尿病，因此调节免疫反应是调节个体内稳态的先决条件。

发明内容

技术问题

本发明的目的在于提供一种活化SIRT1的SIRT1活化剂。

本发明的目的在于提供一种具有优异的解毒效应的组合物。

本发明的目的在于提供一种具有优异的预防或者改善代谢紊乱的效应，具体地通过调节脂肪代谢，从而具有预防或者改善代谢紊乱效应的组合物。

本发明的目的在于提供一种具有优异的预防或者改善眼部疾病的效应，具体地通过增加视网膜细胞中的去乙酰化酶1(SIRT1)表达以及线粒体合成，从而具有预防或者改善老化相关的眼部疾病的效应的组合物。

本发明的目的在于，提供一种具有优异的预防或者改善免疫性疾病的效应，具体地通过促进SIRT1在免疫细胞中的表达以及向2型免疫细胞的分化，从而具有预防或者改善免疫性疾病的效应的组合物。

技术方案

一方面，本发明提供一种包含下述化学式1的化合物、其衍生物或者其药学上可接受的盐作为活性成分的SIRT1活化剂。

[化学式1]

其中，

R₁、R₂、R₃或者R₄独立地为未分支或分支的C1至C18烷基、C1至C18烷氧基、C1至C18烯基、C1至C18炔基或者C3至C6环烷基；

R₅、R₆、R₇、R₈、R₉、R₁₀或者R₁₁独立地为氢或者未分支或分支的C1至C18烷基、C1至C18烷氧基、C1至C18烯基、C1至C18炔基或者C3至C6环烷基。

另一方面，本发明提供一种包含所述SIRT1活化剂的用于解毒的组合物。

另一方面，本发明提供一种包含所述SIRT1活化剂的用于预防或者改善代谢紊乱的组合物。

另一方面，本发明提供一种包含所述SIRT1活化剂的用于预防或者改善眼部疾病的组合物。

另一方面，本发明提供一种包含所述SIRT1活化剂的用于预防或者改善免疫性疾病的组合物。

有益效果

根据本发明的SIRT1活化剂可增加SIRT1的表达，并增强SIRT1的活性。

根据本发明的组合物具有优越的解读效应，特别是通过促进由于吸烟而降低的SIRT1活性以及细胞活性，从而具有优越的解毒吸烟引起的毒性的效应。

根据本发明的组合物通过增加SIRT1的表达，抑制脂肪酸的合成以及同时促进脂肪酸氧化，并增加PGC1的表达而具有优异的预防或改善代谢紊乱的效应，具体地说，具有优异的预防或者改善肥胖、2型糖尿病、高脂血症或者脂肪肝的效应。

同样，根据本发明的组合物通过促进视网膜细胞中的SIRT1的表达，增强线粒体生物合成和恢复线粒体功能，从而具有优异的预防或者改善眼部疾病，具体地为老化相关的眼部疾病的效应。

根据本发明的组合物可通过促进免疫细胞中的SIRT1表达和抑制炎症反应并使免疫细胞转变成2型免疫细胞，从而增强免疫力，特别是具有优异的预防或者改善免疫性疾病比如过敏、过敏性皮炎、枯草热或者风湿性关节炎的效应。

附图说明

图1图示说明从人参浆果提取物中分离以及纯化丁香脂素的方法。

图2显示丁香脂素对SIRT1表达的促进效应。

图3显示丁香脂素对细胞活性的促进效应。

图4显示用20μM、50μM和100μM的丁香脂素处理的人脂肪细胞、肝细胞以及肌细胞中的SIRT1基因的表达变化。

图5显示用50μM丁香脂素处理的人脂肪细胞中，与脂肪酸合成相关的基因的表达下降。

图6显示用50μM丁香脂素处理的人肝细胞中，与脂肪酸合成相关的基因的表达下降。

图7显示用50μM丁香脂素处理的人肌细胞中，合成相关的基因的表达下降。

图8显示用50μM丁香脂素处理的人脂肪细胞中，与脂肪酸氧化相关的基因的表达增加。

图9显示用50μM丁香脂素处理的人肝细胞中，与脂肪酸氧化相关的基因的表达增加。

图10显示用50μM丁香脂素处理的人肌细胞中，与脂肪酸氧化相关的基因的表达增加。

图11显示用50μM丁香脂素处理的人脂肪细胞、肝细胞以及肌细胞中脂肪酸氧化的增加。

图12显示用50μM丁香脂素处理的人脂肪细胞、肝细胞以及肌细胞中能量代谢调节基因PGC-1α的表达增加。

图13显示用50μM丁香脂素处理的人脂肪细胞、肝细胞以及肌细胞中能量代谢调节基因PGC-1β的表达增加。

图14显示用丁香脂素处理的老化的视网膜上皮细胞中，SIRT1基因的表达增加。

图15显示用丁香脂素处理的老化的视网膜上皮细胞中的线粒体生物合成水平。

图16显示用丁香脂素处理的老化的视网膜上皮细胞中的能量(ATP)和活性氧产生。

图17显示用丁香脂素处理的人外周血单核细胞中，SIRT1基因的表达增加。

图18显示用丁香脂素处理的人外周血单核细胞中的受抑制的活性氧产生。

图19显示用丁香脂素处理的人外周血单核细胞中，与炎症反应相关的基因的表达下降。

图20显示用丁香脂素处理的人外周血单核细胞的受抑制的迁移以及组织沉积。

图21显示用丁香脂素处理的人外周血单核细胞中，与转变为2型免疫细胞相关的基因表达增加。

最佳实施方式

本发明中，术语“提取物”作为广义的概念，指的是从天然产品提取出的任何物质，不管采用何种提取方法、提取溶剂、提取出的成分或者提取的类型。

如本文使用的，术语“衍生物”是指在相应化合物的可取代的位置具有取代基的任何物质。对于取代基的种类没有特别的限定。例如，所述取代基可独立地为可被羟基、苯氧基、噻吩基、呋喃基、吡啶基、环己基、烷基醇、烷基二醇或者取代的苯基所取代的C_1-10非环烃基；可被羟基、羟甲基、甲基或者氨基所取代的C5-C6环烃基；或者糖残基，但并不仅限于此。如本文使用的，术语“糖残基”是指碳水化合物分子中去除1个氢原子时的基团。因此，例如，它可指源于单糖类或者寡糖的残基。

如本文使用的，术语“药学上可接受的”是指当以通常的药用剂量使用时不具有实质性的毒性效应，从而可被或者已被政府管理机构批准，或者被列入美国药典或其它普遍公认的用于动物，特别是人类的药典中。

如本文使用的，术语“药学上可接受的盐”是指本发明化合物的盐，它是药学上可接受的并具有期望的母体化合物的药理学活性。所述盐可包括：(1)由无机酸比如盐酸、氢溴酸、硫酸、硝酸、磷酸等形成的或者由有机酸比如乙酸、丙酸、己酸、环戊基丙酸、乙醇酸、丙酮酸、乳酸、丙二酸、琥珀酸、苹果酸、马来酸、富马酸、酒石酸、柠檬酸、苯甲酸、3-(4-羟基苯甲酰)苯甲酸、肉桂酸、扁桃酸、甲磺酸、乙磺酸、1,2-乙烷二磺酸、2-羟乙基磺酸、苯磺酸、4-氯苯磺酸、2-萘磺酸、4-甲苯磺酸、樟脑磺酸、4-甲基双环[2,2,2]-辛-烯-羧酸、葡庚糖酸、3-苯基丙酸、三甲基乙酸、叔丁基乙酸、月桂基硫酸、葡萄糖酸、谷氨酸、羟萘甲酸、水杨酸、硬脂酸、粘康酸等形成的酸加成盐；或者(2)存在于母体化合物的酸性质子被取代时形成的盐。除了所述药学上可接受的盐之外，根据本发明的化合物还可包括可根据常规方法制备的任何盐、水合物或溶剂化物。

以下，将详细说明本发明。

一方面，本发明提供一种包含化学式1的化合物、其衍生物或者其药学上可接受的盐作为活性成分的SIRT1活化剂，

[化学式1]

其中，

在本发明的示例性的实施方案中，上述化合物可为丁香脂素。

如本文使用的，术语“丁香脂素”是指具有化学式2所表示的化学结构的基于木酚素(lignan)的化合物。其可被化学合成或者从选自亚麻籽、黄柏、五加皮、芝麻籽以及人参浆果的一种或者多种中进行提取。所述亚麻籽、黄柏、五加皮以及芝麻籽分别包括所述植物的所有部位，例如叶子、茎部、根部、果实或者种子，并且人参浆果包括人参浆果的果皮或者果肉。

[化学式2]

在本发明中，所述“丁香脂素”可通过用水、有机溶剂或水和有机溶剂的混合物提取亚麻籽、黄柏、五加皮、芝麻籽以及人参浆果中的一种或多种而获得。所述有机溶剂包括选自由醇、丙酮、醚、乙酸乙酯、二乙醚、甲乙酮以及氯仿组成的组的一种或多种，但并不仅限于此。所述醇包括C1-C5的低级醇且所述C1-C5低级醇包括选自由甲醇、乙醇、异丙醇、正丙醇、正丁醇以及异丁醇组成的组的一种或多种，但并不仅限于此。

根据本发明的SIRT1活化剂以活化剂的总重量为基准，可包括0.0001至10重量％的活性成分。但，所述活性成分的含量可大于或小于上述范围，只要可取得SIRT1活化效应，且不发生毒性。上述范围不仅适于获得本发明所期望的效应和满足组合物的稳定性以及安全性，而且在成本效益方面也是适合的。具体地说，如果化学式1的化合物，具体的说是丁香脂素，的含量小于0.0001重量％时，那么不能活化SIRT1。并且，当它超过10重量％时，SIRT1活化剂的安全性以及稳定性可能不令人满意。更具体地说，可包含0.0005至8重量％，0.001至6重量％或者0.01至4重量％的量的本发明活性成分。

在亚麻籽、黄柏、五加皮、芝麻籽或人参浆果的提取物中可包含所述丁香脂素。

在本发明的示例性的实施方案中，可通过包括以下的程序从人参浆果中分离以及纯化丁香脂素：制备人参浆果果肉的醇提取物；用包括水和醇的一种或多种的溶剂洗脱所制备的醇提取物并获得其流份(fraction)；使用有机溶剂作为洗脱剂，对获得的流份进行色谱分析，更具体地说是进行薄层色谱分析(TLC)。所述有机溶剂可包括选自由醇、丙酮、醚、乙酸乙酯、二乙醚、甲乙酮以及氯仿组成的组的一种或多种，并且所述醇可包括C1-C5醇。在本发明示例性的实施方案中，所述组合物可包含如上述纯化的丁香脂素作为活性成分。

另一方面，本发明提供包含所述SIRT1活化剂的用于解毒的组合物。

如本文使用的，术语“解毒”是指去除体内所包含的毒性物质的作用。

所述SIRT1活化剂可解读体内所包含的毒性物质，以及具体地说可解读由吸烟引起的毒性。

去乙酰化酶1(SIRT1)，其是脱乙酰酶中的一种，通过在多个赖氨酸位点与PGC-1α发生物理性相互作用而使PGC-1α发生脱乙酰化，从而使PGC-1α活化。活化的PGC-1α通过与转录因子相互作用而促进线粒体生物合成并去除细胞毒性物质比如活性氧。因此，人们预期可通过恢复由吸烟引起的降低的SIRT1活性对由吸烟引起的毒性进行解毒。化学式1的化合物，具体地为丁香脂素，可通过促进由吸烟引起的降低的SIRT1活性以及细胞活性而对由吸烟引起的毒性进行解毒。因此，含有化学式1的化合物，具体地为丁香脂素，的组合物可具有解毒效应。

在本发明的示例性实施方案中，丁香脂素可作为亚麻籽、黄柏、五加皮、芝麻籽以及人参浆果的提取物包含于组合物中。尤其是，其可包含在对解毒特别有效的流份中。

根据本发明的用于解毒的组合物，以组合物的总重量为基准，可包含0.001重量％至20重量％，具体地0.01重量％至10重量％，更具体地0.1重量％至5重量％的SIRT1活化剂。该范围不仅适于获得本发明所期望的效应和满足组合物的稳定性以及安全性，而且在成本效益方面也是适合的。具体地说，如果SIRT1活化剂的含量小于0.01重量％，那么可能无法获得充分的皮肤解毒效应。并且，如果它超过20重量％，那么组合物的安全性以及稳定性可能不令人满意。

另一方面，本发明提供一种包含SIRT1活化剂的用于预防或者改善代谢紊乱的组合物。

如果脂肪代谢能被很好的调节，那么由于可防止过多的脂肪蓄积，从而可预防以及改善肥胖。防止过多的脂肪蓄积的方法之一为控制饮食，即限制摄取卡路里。通过限制卡路里，可减轻体重并可通过降低血脂浓度而改善代谢性疾病。已知卡路里限制导致SIRT1表达增加，并且当诱导SIRT1活化时可出现与卡路里限制中相类似的现象。SIRT1是调节能量代谢比如葡萄糖合成、脂肪酸氧化等的NAD⁺-依赖性组蛋白脱乙酰酶。因此，促进SIRT1表达的物质预期可调节脂肪代谢，并且可预防或者改善代谢紊乱比如肥胖、2型糖尿病、高脂血症和脂肪肝。

为了维持生命，生命体摄取营养成分并将其消化、吸收和储存为能源。并且，它们使用从其释放的能量进行多种生物活动。将这种现象称为“代谢”。

如本文使用的，术语“代谢紊乱”是指其中生命体包括人或者动物不能正常进行代谢活动的病况，且包括碳水化合物代谢紊乱或者脂代谢紊乱。所述碳水化合物代谢紊乱或者脂代谢紊乱包括由碳水化合物或者脂代谢紊乱引起的症状或者疾病，具体地说，包括由脂肪酸代谢紊乱引起的过量的脂肪蓄积导致的症状或者疾病。实例可包括肥胖、2型糖尿病、高脂血症或者脂肪肝。

丁香脂素可通过增加SIRT1表达，抑制脂肪酸合成和促进脂肪酸的氧化而抑制体内的脂肪蓄积。这可通过丁香脂素抑制脂肪酸合成相关基因比如ADD1/SREBP1c、ACC和FAS的表达，促进脂肪酸氧化相关基因比如ACO、CPT1和mCAD的表达并增强脂肪酸氧化的事实进行确认。并且，丁香脂素可通过促进能量代谢，更具体地说是促进脂肪代谢，从而增强机体的脂肪消耗，并抑制多余脂肪的蓄积。因此，这可通过丁香脂素增加调节能量代谢相关基因表达的过氧化物酶体增殖激活受体辅助活化因子1(PGC1)的表达的事实进行确认。因此，包含丁香脂素的组合物可预防或者改善由碳水化合物或者脂代谢紊乱引起的代谢紊乱比如肥胖、2型糖尿病、高脂血症或者脂肪肝。

在本发明的示例性实施方案中，丁香脂素可作为亚麻籽、黄柏、五加皮、芝麻籽以及人参浆果的提取物包含于组合物中。具体地，其可包含在对改善代谢紊乱特别有效的流份中。

根据本发明的组合物，以组合物的总重量为基准，可包含0.001重量％至20重量％，具体地0.01重量％至10重量％，更具体地0.1重量％至5重量％的SIRT1活化剂。该范围不仅适于获得本发明所期望的效应，和满足组合物的稳定性以及安全性，且在成本效益方面也是适合的。具体地说，如果SIRT1活化剂含量小于0.01重量％，那么可能无法获得充分的改善代谢紊乱的效应。并且，如果它超过20重量％，那么组合物的安全性以及稳定性可能不令人满意。

SIRT1，其为NAD⁺-依赖性组蛋白脱乙酰酶，已知其可通过增加肌肉等中的线粒体的生物合成，从而增加细胞内的具有稳定的DNA的线粒体比例，从而可恢复线粒体功能并因此防止细胞老化。特别是，已知，视网膜退化的转基因小鼠模型表现出视网膜细胞比如视网膜神经节细胞、视网膜内细胞、感光细胞和视网膜色素上皮细胞中的异常位置的SIRT1表达，并且其还表现出细胞死亡加速。因此，增加SIRT1表达的物质将通过促进线粒体的生物合成和恢复视网膜细胞中的线粒体功能，并且减少线粒体DNA的不稳定性，从而减少细胞损伤以及死亡，从而能预防或者改善眼部疾病，特别是老化相关的眼部疾病。

化学式1的化合物，具体地说是丁香脂素，可通过将老化的视网膜细胞中的SIRT1表达增加至堪比年轻的视网膜细胞的SIRT1的表达水平，促进视网膜细胞中的线粒体合成和恢复线粒体功能，从而引起能量的生成增加以及活性氧的减少。因此，包括化学式1的化合物，具体地说包含丁香脂素作为活性成分的组合物可通过预防或者改善视网膜细胞的老化，从而预防或者改善眼部疾病。

如本文使用的，术语“眼部疾病”是指与眼睛相关的疾病且包括眼球疾病。并且，如本文使用的，术语“老化相关的眼部疾病”不仅包括由于随年龄的增加引起的生物功能的降低而导致的眼部疾病，还包括表现为与年轻人相比生物功能退化的老年人中出现的那些症状类似的症状的眼部疾病。在本发明的一个示例性的实施方案中，所述眼部疾病包括由视网膜细胞中的线粒体功能紊乱或者氧化应激引起的眼部疾病。在本发明的另一个示例性的实施方案中，所述眼部疾病包括老化相关的眼部疾病，并且包括黄斑变性，包括老化相关的黄斑变性、葡萄膜炎、青光眼、糖尿病性视网膜疾病或者白内障，但并不仅限于此。

在本发明的另一个示例性实施方案中，所述丁香脂素可作为亚麻籽、黄柏、五加皮、芝麻籽或者人参浆果的提取物包含于组合物中。具体地，其可包含于对预防或者改善眼部疾病特别有效的流份中。

根据本发明的组合物，以组合物总重量为基准，可包含0.001重量％至20重量％，具体地0.01重量％至10重量％，更具体地0.1重量％至5重量％的SIRT1活化剂。该范围不仅适于获得本发明所期望的效应，和满足组合物的稳定性以及安全性，且在成本效益方面也是适合的。具体地说，如果SIRT1活化剂含量小于0.01重量％，那么可能无法获得充分的改善眼部疾病的效应。并且，如果它超过20重量％，那么组合物的安全性以及稳定性可能不令人满意。

另一方面，本发明提供一种包含SIRT1活化剂的用于预防或者改善免疫性疾病的组合物。

免疫细胞大体可分为通过诱发炎症前反应防御病原体的1型免疫细胞以及抑制抗炎症反应并帮助组织重建的2型免疫细胞。已知，1型免疫细胞的数量在慢性炎症中大大增加，并且所述慢性炎症状态可通过诱导1型免疫细胞分化成2型免疫细胞而缓解。这表明，免疫疾病比如过敏、过敏性皮炎、枯草热或者风湿性关节炎可通过调控细胞的类型而进行预防以及治疗。

已知，作为可调节多种细胞反应包括能量代谢、细胞周期、DNA修复等的NAD⁺-依赖性组蛋白脱乙酰酶的SIRT1的活化导致慢性炎症的抑制。因此，促进SIRT1表达的物质可通过抑制炎症反应改善免疫性疾病。

化学式1的化合物，更具体地说是丁香脂素，可在包括免疫细胞比如B细胞、T细胞、巨噬细胞、树突状细胞、NK细胞等的外周血单核细胞中促进SIRT1的表达，抑制炎症反应(其为先天性免疫反应中的一种)，并抑制活性氧的产生(其为炎症反应的信号传导介质，也是炎症反应的产物)。并且，由于化学式1的化合物，更具体地说是丁香脂素，可促进对于诱导分化为2型免疫细胞所必须的转录调节子比如PGC1α和PGC1β的表达，并增加主要在2型免疫细胞中表达的基因比如IL-10和精氨酸酶I的表达，因此化学式1的化合物，更具体地说是丁香脂素可促进免疫细胞向2型免疫细胞的转变。因此，包括化学式1的化合物，更具体地说是包括丁香脂素作为活性成分的组合物可增强免疫力，并且可预防或者改善免疫性疾病，尤其是慢性免疫性疾病。

在本发明的一个示例性实施方案中，所述免疫性疾病是指与针对可能给机体带来危害的外来病原体的防御机制相关的疾病，并且是指表现出多种免疫反应比如抗原抗体反应、血管扩张、发热和炎症反应的疾病。在本发明的另一个示例性实施方案中，所述免疫性疾病包括过敏、过敏性皮炎、枯草热以及风湿性关节炎中的一种或多种，但并不仅限于此。

在本发明的另一个示例性实施方案中，所述丁香脂素可作为亚麻籽、黄柏、五加皮、芝麻籽或人参浆果的提取物包含于组合物中。具体地，其可包含于对预防或者改善免疫性疾病特别有效的流份中。

根据本发明的组合物，以组合物总重量为基准，可包含0.001重量％至20重量％，具体地0.01重量％至10重量％，更具体地0.1重量％至5重量％的SIRT1活化剂。该范围不仅适于获得本发明所期望的效应，和满足组合物的稳定性以及安全性，且在成本效益方面也是适合的。具体地说，如果SIRT1活化剂含量小于0.01重量％，那么可能无法获得充分的预防或者改善免疫性疾病的效应。并且，如果超过20重量％，那么组合物的安全性以及稳定性可能不令人满意。

在本发明的一个示例性实施方案中，所述用于解毒、预防或者改善代谢紊乱、预防或者改善眼部疾病或者预防或者改善免疫性疾病的组合物可为口服施用的组合物。

在本发明的另一个示例性实施方案中，所述用于解毒、预防或者改善代谢紊乱、预防或者改善眼部疾病或者预防或者改善免疫性疾病的组合物可为食品组合物。所述食品组合物包括嗜好性食品组合物或者保健食品组合物。

所述组合物可预防或者改善代谢紊乱，比如肥胖、2型糖尿病、高脂血症或者脂肪肝。

所述食品组合物可预防或者改善眼部疾病，比如黄斑变性、葡萄膜炎、青光眼、糖尿性视网膜疾病或者白内障。

所述食品组合物可预防或者改善免疫性疾病，比如过敏、过敏性皮炎、枯草热或者风湿性关节炎。

对所述食品组合物的剂型没有特别的限制。例如，其可被制成片剂、颗粒剂、粉剂、液体比如饮料、焦糖、凝胶、棒(bar)等。本领域技术人员可轻易的选择本领域通常使用的成分并加入到各个剂型的食品组合物中。这种情况下，可获得协同效应。

所述活性成分的剂量可由本领域技术人员确定。每日剂量例如可为0.1mg/kg/天至5000mg/kg/天，更具体的可为50mg/kg/天至500mg/kg/天。然而，所述剂量可根据多种因素而变化，所述因素包括受试者的年龄、健康状况，合并症的存在或不存在等，但并不仅限于此。

在本发明的另一个示例性实施方案中，所述用于解毒、预防或者改善代谢紊乱、预防或者改善眼部疾病或者预防或者改善免疫性疾病的组合物可为药物组合物。

所述药物组合物可表现出解毒效应，具体地可对由吸烟引起的毒性进行解毒。

所述药物组合物可预防或者改善代谢紊乱，具体地说，可预防或者改善肥胖、2型糖尿病、高脂血症或者脂肪肝。

所述药物组合物可预防或者治疗眼部疾病，具体地说可预防或者治疗黄斑变性、葡萄膜炎、青光眼、糖尿病性视网膜疾病或者白内障。

所述药物组合物可增强免疫力，并且可预防或者治疗免疫性疾病，具体地说可预防或者治疗过敏、过敏性皮炎、枯草热或者风湿性关节炎。

在本发明的一个示例性实施方案中，所述药物组合物可以口服或者肠胃外给药，例如直肠给药、局部给药、经皮给药、静脉给药、肌肉给药、腹腔给药、皮下给药等。

用于口服给药的剂型可为片剂、丸剂、软胶囊或者硬胶囊、颗粒剂、粉剂、细粒剂、液体、乳剂或者丹剂，但并不仅限于此。这些剂型除了活性成分外还可包括稀释剂(例如：乳糖、右旋糖、蔗糖、甘露醇、山梨醇、纤维素或者甘氨酸)、润滑剂(例如：二氧化硅、滑石、硬脂酸或者聚乙二醇)、或者粘合剂(例如：硅酸镁铝、淀粉糊、明胶、黄芪胶、甲基纤维素、羧甲基纤维素钠或者聚乙烯比咯烷酮)。在某些情况下，它们还可包括药物添加剂，比如崩解剂、吸收剂、着色剂、芳香剂或者增甜剂等。所述片剂可按照通常的混合、制粒或者包衣的方法制备。

用于肠胃外给药的剂型可为注射剂、滴剂、洗剂、软膏剂、凝胶、乳膏剂、悬浮剂、乳剂、栓剂、贴剂或者喷雾剂，但并不仅限于此。

根据本发明的药物组合物的活性成分的剂量可根据受试者的年龄、性别和体重、特别是其病理状态以及其严重程度、给药途径或者医生的判断而不同。基于这些因素确定剂量可由本领域技术人员实现。其每日剂量例如可为0.1mg/kg/天至100mg/kg/天，更具体地为5mg/kg/天至50mg/kg/天，但并不仅限于此。

在本发明的另一个示例性实施方案中，所述用于解毒、预防或者改善代谢紊乱、预防或者改善眼部疾病或者预防或者改善免疫性疾病的组合物可为化妆品组合物。

所述化妆品组合物可表现出解毒效应，具体地说可对由吸烟引起的毒性进行解毒。

所述化妆品组合物可预防或者改善代谢紊乱，具体地说，可预防或者改善肥胖、2型糖尿病、高脂血症或者脂肪肝。

所述化妆品组合物可增强免疫力并可预防或者治疗免疫性疾病。具体地说，它可预防或者治疗过敏、过敏性皮炎、枯草热或者风湿性关节炎。

根据本发明的化妆品组合物可以以适合于局部应用的任何剂型的形式提供。例如，它可以以溶液、水包油乳剂、油包水乳剂、悬浮液、固体、凝胶、粉末、糊状物、泡沫或者气雾剂的形式提供。这些剂型可根据本领域常规的方法而制备。

根据本发明的化妆品组合物还可包括保湿剂、润肤剂、表面活性剂、紫外线吸收剂、防腐剂、灭菌剂、抗氧化剂、pH调节剂、有机以及无机颜料、香料、冷却剂或除臭剂。本领域技术人员可在不影响本发明的目的以及效果的范围内，容易地确定这些成分的量。以组合物总重量为基准，它们可以0.01至5重量％，具体地0.01至3重量％的量添加。

具体实施方式

以下，将通过实施例以及试验例更加具体地说明本发明。然而，下述实施例以及试验例仅为说明本发明而提供，并且本领域技术人员将清楚，本发明的范围并不仅限于上述实施例以及试验例。

[实施例]丁香脂素的分离以及分析

1.人参浆果的预处理

收获活的人参浆果。去除人参浆果的种子和果皮后，仅对果肉进行日光干燥或者热风干燥，从而获得干燥的人参浆果果肉。

2.从人参浆果果肉提取物中分离丁香脂素以及对其进行分析

向1kg的所述干燥的人参浆果果肉中加入3L水或者醇。常温提取或者回流提取后，进行过滤，并在40-45℃在减压下进行浓缩，获得300g人参浆果果肉提取物。为去除脂溶性成分，用乙醚处理提取物，然后用丁醇提取粗制皂苷并进行浓缩。之后，可根据下述方法从其中分离和纯化丁香脂素。首先，将194g样品通过反相柱层析法进行纯化。作为洗脱液先是使用100％的水，后变为甲醇溶液，甲醇以10％的速率逐渐增加，最终使用100％的甲醇溶液作为洗脱液。作为结果，获得了GB-1至GB-10的流份。在所述流份中，浓缩显示SIRT1表达活性的流份GB-3，并使用50％甲醇水溶液对其进行葡聚糖LH-20柱层析。在产生的流份中，浓缩显示SIRT1表达活性的GB-3-6流份，并用氯仿：甲醇(10:1)作为洗脱液对其进行准备的(preparative)硅胶薄层层析。作为结果，纯化得到了Rf值为0.67的活性流份。图1中图示说明了该程序。

通过NMR光谱分析和数据库检索，可将分离以及纯化的活性化合物鉴定为丁香脂素。进行质谱分析以确认其。作为在正离子模式(positive mode)下的ESI-质谱分析的结果，可观察到[M+Na]⁺(m/z＝440.9)峰以及[2M+Na]⁺(m/z＝858.9)峰，并计算其分子量为418。并且，NMR光谱分析的结果如化学式3。因此，上述分离以及纯化的活性化合物被确认为是丁香脂素。

[化学式3]

如上所述，从人参浆果果肉中分离出了丁香脂素。

[试验例1]齿龈成纤维细胞(gingival fibroblast)中，SIRT1表达恢复效应的评价

为评价丁香脂素是否对齿龈成纤维细胞中的由吸烟引起的SIRT1表达的降低有恢复作用，从而进行下述实验。

1.齿龈成纤维细胞的培养

齿龈成纤维细胞从具有健康齿龈的患者的组织活检而获得。将获得的活检组织放入到装有Dulbecco’s Modified Eagle’s Medium(DMEM，Gibco Co.,USA)15ml试管中，清洗三次，从而去除血液和杂质。然后将活检组织转至装有含10％胎牛血清(Gibco Co.,USA)和1％抗生素(10000单位/mL的青霉素G，25μg/mL两性霉素B，Gibco Co.,USA)的DMEM的100mm组织培养皿中，并将活检组织用15号刀片精细地切成1mm²。然后，在60mm培养皿中均匀分布5-6小块。在37℃、100％湿度、5％的CO₂条件的培养箱中培养约30分钟，使得所述组织块均匀贴附于培养皿底部后，加入3mL的包含10％胎牛血清和1％抗生素的DMEM。培养液每2-3天更换一次，直至形成单层细胞。然后去除培养液并清洗2次后，用0.25％胰蛋白酶/EDTA(1×，Gibco Co.,USA)分离贴附至细胞培养皿的细胞并将其转移至100-mm组织培养皿。培养液每2-3天进行更换，直至细胞充分增值，而传代培养以1:3-4的比例进行了5-6次。

2.准备香烟烟气浓缩物(CSC)

利用自动吸烟装置(Heinr Borgwaldt RM20，Germany)，在ISO吸烟条件(吸烟体积：35mL，吸烟时间：2秒，吸烟频率：1分钟，烟蒂长度：烟嘴纸+3mm)下，燃烧40个3R4F香烟，后用Cambridge玻璃纤维过滤器收集香烟烟气浓缩物。将收集的香烟烟气浓缩物在二氯甲烷中通过30分钟的超声波处理进行提取，并进行浓缩。将浓缩的香烟烟气浓缩物在二甲基亚砜(DMSO)中重新溶解至最终浓度为100mg/ml，用0.22-μm注射器式过滤器进行过滤，储存于-70℃条件下直到使用。

3.PCR

将传代培养5-6次的齿龈成纤维细胞接种至24孔板，使每孔含有1×10⁴个细胞。培养一天后，以100μg/ml的浓度添加所述香烟烟气浓缩物，并且实施例中获得的丁香脂素在用DMSO溶解后被加入，至浓度为50μg/ml或100μg/ml。对照组则用相当于培养基体积1/1000的DMSO进行处理。并且，还准备既不用香烟烟气浓缩物也不用受试物处理的组别。培养2天后，所述细胞用冷PBS清洗2次，并用Trizol试剂(Invitrogen)从其提取RNA。然后，使用逆转录系统(Promega)从上述提取的RNA(1μg/mL)合成cDNA。利用合成的cDNA和预先设计好的引物以及探针(Applied biosystems；SIRT1，Hs01009006_m1；GAPDH,Hs99999905_m1)检测SIRT1和GAPDH基因的表达模式。PCR反应和分析是采用Rotor-Gene3000系统(Corbett Research，Sydney，Australia)进行的。其结果如图2所示。

正如图2所示，丁香脂素可以浓度依赖的方式增加齿龈成纤维细胞中的SIRT1表达，其由于吸烟已被降低。

[试验例2]齿龈成纤维细胞中，细胞活性促进效应的评价(MTT分析)

将以基本上与试验例1相同的方式传代培养5-6次的齿龈成纤维细胞接种至24孔板，使每孔含有1×10⁴个细胞。培养一天后，以基本上与试验例1相同的方式以100μg/ml的浓度添加香烟烟气浓缩物，并且在实施例中获得的丁香脂素在用DMSO溶解后被添加，至浓度为50μg/ml或100μg/ml。对照组则用相当于培养基体积1/1000的DMSO进行处理。并且，还准备既不用香烟烟气浓缩物处理，也不用受试物处理的组别。培养2天并且每孔添加300μl的溶解于生理盐水的3-(4,5-二甲基噻唑-2-基)-2,5-二苯基四氮唑溴盐(MTT；Sigma，USA)后，继续培养4小时。去除培养基以及通过添加200μl的二甲基亚砜(DMSO；Junsei，Japan)溶解甲瓒结晶后，利用ELISA分析仪(Spectra MAX250，MolecularDevices.,USA)在540nm处测量吸光度。每个实验均重复三次。其结果如图3所示。

正如图3所示，丁香脂素可使已由吸烟降低的细胞活性恢复至与正常水平几乎相当的水平。因此，可以看出，丁香脂素可通过恢复已由吸烟降低的细胞活性而对由吸烟引起的毒性进行解毒。

[试验例3]在脂肪细胞、肝细胞以及肌细胞中，SIRT1表达促进效应的评价

按下述实验评价在人脂肪细胞、肝细胞以及肌细胞中，丁香脂素对SIRT1基因表达的促进效应。

人脂肪细胞、肝细胞以及肌细胞从ZEN-BIO(Research Triangle Park，NC，USA)购买，分别用脂肪细胞培养基(OM-AM，ZEN-BIO)、肝细胞培养基(HM-2，ZEN-BIO)以及肌细胞培养基(SKM-D，SKM-M，ZEN-BIO)，在5％的CO₂培养箱中进行培养。所述细胞用溶解于DMSO的丁香脂素，以20μM、50μM或100μM的浓度处理24小时。阴性对照组则用相当于培养基体积1/1000的DMSO进行处理。

使用冷PBS对用各个样品处理过的细胞进行2次清洗，并用TRIzol试剂(Invitrogen)从其中提取RNA。然后，使用逆转录系统(Fermentas，Glen Burnie，MD，USA)从上述提取的RNA(5mg)合成cDNA。利用合成的cDNA和预先设计好的引物和探针，通过qRT-PCR检测SIRT1基因和GAPDH基因的表达模式。PCR反应和分析是采用Rotor-Gene3000系统(Corbett Research，Sydney，Australia)进行的。其结果如图4所示。

正如图4所示，在人脂肪细胞、肝细胞以及肌肉细胞中，丁香脂素可以浓度依赖的方式增加SIRT1的表达。因此，可知丁香脂素可改善代谢紊乱，更具体地说可改善脂代谢紊乱。

[试验例4]在脂肪细胞以及肝细胞中，调节脂肪代谢相关基因表达的能力的评价

采用基本上与试验例3相同的方式，用50μM丁香脂素处理并用PBS清洗人脂肪细胞、肝细胞以及肌细胞。从所述细胞提取RNA，并从其合成cDNA。通过qRT-PCR测量脂肪酸合成相关基因比如ADD1/SREBP1c、ACC、FAS等以及脂肪酸氧化相关基因比如ACO、CPT1、mCAD等的表达模式。其与仅用DMSO处理的对照组比较的结果示于图5-10。

正如图5至图7所示，丁香脂素抑制了脂肪酸合成诱导基因的表达。并且，正如图8至图10所示，丁香脂素增加了脂肪酸氧化促进基因的表达。因此，可知丁香脂素可通过抑制脂肪合成以及同时增加脂肪消耗，从而阻止脂肪蓄积。

[试验例5]脂肪酸氧化促进能力的评价

采用基本上与试验例3相同的方式，用50μM丁香脂素处理人脂肪细胞、肝细胞以及肌细胞。所述细胞用PBS清洗并在培养基中培养1天以进行脂肪酸氧化分析。回收培养基，并测量³H₂O的量。图11示出了与未处理组进行比较的结果。

正如图11所示，丁香脂素可在人脂肪细胞、肝细胞以及肌细胞中，增加脂肪酸氧化。因此，可知丁香脂素可抑制体内脂肪的蓄积。

[试验例6]丁香脂素的PGC1表达促进效应的评价

采用基本上与试验例3相同的方式，用50μM丁香脂素处理人脂肪细胞、肝细胞以及肌细胞并用PBS清洗。然后，相继从其提取RNA以及cDNA。通过qRT-PCR分析能量代谢相关基因PGC-1α以及PGC-1β的mRNA表达。与仅用DMSO处理的对照组比较PGC-1α以及PGC-1β的表达的结果分别示于图12和图13。

正如图12以及图13所示，在人脂肪细胞、肝细胞以及肌细胞中，丁香脂素可增加PGC-1α以及PGC-1β的表达。因此，可知丁香脂素可通过促进能量代谢，从而抑制体内脂肪蓄积。

[试验例7]在老化的人视网膜上皮细胞中，SIRT1表达促进效应的评价

按下述实验评价在老化的人视网膜上皮细胞中，丁香脂素对SIRT1基因表达的促进效应。

人视网膜上皮细胞系ARPE-19从ATCC(Manassa，VA，USA)购买并使用含有10％胎牛血清、1％青霉素/链霉素、两性霉素B和抗真菌剂的DMEM(GibcoBRL，Grand Island，NY，USA)培养基，在5％的CO₂培养箱中进行培养，直至70％融合。视网膜细胞的老化是通过传代培养至不再生长的程度而实现。按照以下公式计算各代的群体倍增水平(PDL)，直至细胞生长停止。老化的细胞中PDL值较高。

PDL＝(Log₁₀Y-Log₁₀X)/Log₁₀2

Y是各代培养结束时的细胞数。

X是各代培养开始时的细胞数。

每隔一天用溶解于DMSO的丁香脂素以50μM或100μM的浓度处理PDL为5的细胞，直至诱导老化至PDL为15的细胞。阴性对照组则用相当于培养基体积1/1000的DMSO进行处理。

用冷PBS清洗用各个样品处理过的细胞两次，以及用RIPA缓冲液(Santa CruzBiotechnology，Santa Cruz，CA，USA)分离蛋白质。用BCA测定试剂盒(Pierce，Rockford，USA)定量所分离的蛋白质，利用iBlot干印迹系统(Invitrogen，Carlsbad，CA，USA)对30μg的蛋白质进行蛋白免疫印迹(western blotting)。SIRT1蛋白质表达水平使用抗-SIRT1抗体(Santa Cruz Biotechnology，Santa Cruz，CA，USA)进行测量。其结果如图14所示。

正如图14所示，丁香脂素以浓度依赖的方式增加在老化的视网膜细胞中已被降低的SIRT1的表达。尤其是，100μM的丁香脂素将SIRT1表达增加至可与年轻视网膜上皮细胞的SIRT1表达相比的水平。因此，可知丁香脂素可通过增加视网膜细胞中的SIRT1的表达，从而预防或者改善眼部疾病，特别是老化相关的眼部疾病。

[实施例8]老化的视网膜细胞中的线粒体生物合成促进效应的评价

采用基本上与试验例7相同的方式，诱导视网膜细胞的老化，同时用50μM或100μM的丁香脂素进行处理或者用DMSO处理作为阴性对照。用冷PBS清洗用各个样品处理过的细胞2次，以及用FastPure DNA试剂盒(Tokyo，Japan)从其提取基因组DNA(gDNA)。为了评价线粒体生物合成，使用所提取的gDNA通过实时定量PCR定量线粒体DNA标志物细胞色素氧化酶亚基II和核DNA标志物亲环素A，并通过计算相对于核DNA的线粒体DNA的量，从而测量线粒体的数目。PCR反应和分析是采用Rotor-Gene3000系统(Corbett Research，Sydney，Australia)进行的。其结果如图15所示。

正如图15所示，相比于仅用DMSO处理的细胞，用50μM以及100μM丁香脂素处理的细胞中的线粒体生物合成增加了约40％以及60％。因此，可知丁香脂素可通过浓度依赖性地增加老化的视网膜细胞中的线粒体生物合成，从而预防或者改善眼部疾病。

[试验例9]老化的视网膜细胞中线粒体功能恢复效应的评价

采用基本上与试验例7相同的方式，诱导视网膜细胞的老化，同时用50μM或100μM的丁香脂素进行处理或者用DMSO处理作为阴性对照。为评价线粒体功能恢复效应，调查了视网膜细胞中的能量(ATP)和活性氧产生水平。将老化的细胞用PBS清洗然后用热水清洗后收集，并使用ATP测定试剂盒(MolecularProbes，Eugene，OR，USA)和Tecan系统(Infinite M200，Tecan，Austria)测量发光，从而测定所述能量产生。并且，将老化的细胞用PBS清洗后，用活性氧检测试剂(H₂DCFDA，Invitrogen，Carlsbad，CA，USA)染色，后用流式细胞分析仪(BD Biosciences，San Jose，CA，USA)测量活性氧产生。其结果如图16所示。

正如图16所示，相比于仅用DMSO处理的细胞，用50μM以及100μM丁香脂素处理的细胞中的能量(ATP)产生增加了约21％以及33％，而活性氧产生水平则分别降低了约7％以及11％(显著的)。因此，可知丁香脂素可通过浓度依赖性地增加能量产生，并同时降低活性氧的产生，从而可预防或者改善眼部疾病。

[试验例10]人PBMC中，SIRT1表达促进效应的评价

按下述实验评价丁香脂素在人PBMC中的促进SIRT1基因表达的效应。

人PBMC购自Zen-Bio(Research Triangle Park，NC，USA)，并用PBMC培养基(Zen-Bio)在5％的CO₂培养箱中培养直至80％融合。然后，所述细胞用DMSO溶解的丁香脂素以20μM、50μM或100μM的浓度处理24小时。阴性对照组则用相当于培养基体积1/1000的DMSO进行处理。用PBS清洗用各个样品处理过的细胞，并用TRIzol试剂(Invitrogen)从其中提取RNA。然后，使用逆转录系统(Fermentas，Glen Burnie，MD，USA)从上述提取的RNA(5μg)合成cDNA。利用合成的cDNA和预先设计好的引物和探针通过qRT-PCR检测SIRT1基因和GAPDH基因的表达模式。PCR反应和分析是采用Rotor-Gene3000系统(Corbett Research，Sydney，Australia)进行的。其结果如图17所示。

正如图17所示，丁香脂素浓度依赖性地增加人PBMC中的SIRT1的表达。因此，可知丁香脂素可通过浓度依赖性地增加外周血单核细胞中的SIRT1的表达，从而增强免疫力，预防以及改善免疫性疾病。

[试验例11]人PBMC中，活性氧产生抑制效应的评价

采用与试验例10基本上相同的方式，用20μM、50μM或100μM的丁香脂素对人PBMC进行预处理后，用PBS清洗，通过用10ng/ml的脂多糖(LPS)处理诱导炎症反应。用能检测活性氧的荧光物质H₂-DCFDA(Invitrogen)处理细胞后，用多功能酶标仪(Infinite M200；TECAN，Mannedorf，Switzerland)测量荧光物质的量。其结果如图18所示。

正如图18所示，相比于仅用LPS处理的细胞，用丁香脂素处理过的细胞的活性氧产生降低了约60％。因此，可知丁香脂素可通过降低活性氧并因此抑制炎症反应，从而增强免疫力，预防以及改善免疫性疾病。

[试验例12]人PBMC中，抑制炎症相关基因表达的效应的评价

采用与试验例11基本上相同的方式，在用50μM的丁香脂素对人PBMC进行预处理后，通过用10ng/ml的LPS进行处理，从而诱导炎症反应。用PBS清洗用各个样品处理过的细胞，从其提取RNA和合成cDNA。然后，利用合成的cDNA和预先设计好的引物检测炎症反应相关基因IL-1b、IL-6、iNOS、COX2、MMP9和CCR2的表达模式。其结果如图19所示。

正如图19所示，相比于仅用LPS处理的细胞，用丁香脂素处理过的细胞表现出所述炎症反应相关基因表达的约90％的下降。因此，可知丁香脂素可通过降低炎症反应而增强免疫力并预防或改善免疫性疾病。

[试验例13]人PBMC迁移以及沉积抑制效应的评价

采用与试验例11基本上相同的方式，用20μM、50μM以及100μM的丁香脂素或者DMSO对人PBMCs进行处理后，通过用10nm/ml的TNF进行处理，从而诱导炎症反应。用PBMC处理分化的3T3-L1脂肪细胞(Zen-Bio)后，调查PBMC是否迁移至脂肪细胞，并发生沉积。48小时后，去除没有迁移的剩余的PBMC后，使用胰蛋白酶/EDTA将细胞从培养皿分离下来，并用细胞计数仪进行计数。其结果如图20所示。

正如图20所示，丁香脂素对于PBMC向脂肪细胞的迁移以及沉积抑制了约50％。这说明丁香脂素可抑制响应炎症信号的外周血单核细胞的迁移以及沉积，因此可知丁香脂素可通过抑制炎症反应，从而增强免疫力并预防或者改善免疫性疾病。

[实施例14]诱导人PBMC类型变化的效应的评价

采用与试验例11基本上相同的方式，用20μM、50μM或100μM的丁香脂素或者DMSO对人PBMCs进行处理后，为了测量2型免疫细胞相关基因的表达，从PBMC中提取RNA，并从其合成cDNA。使用合成的cDNA测量对于诱导向2型免疫细胞分化所必须的转录调节子，比如PGC1α和PGC1β，以及主要在2型免疫细胞中表达的基因，比如IL-10和精氨酸酶I的表达模式。其结果如图21所示。

正如图21所示，用丁香脂素处理的细胞表现出2型免疫细胞特异性标记基因表达的显著增加。因此，可知丁香脂素可通过促进外周血单核细胞向2型免疫细胞的分化，从而增强免疫力并预防或者改善免疫性疾病。

以下，将通过制剂实施例详细说明本发明。然而，下述制剂实施例仅为详细说明本发明的目的，并且本领域技术人员将清楚，本发明的范围不受所述制剂实施例的限制。

[制剂实施例1]保健食品

矿物质混合物

尽管提供了作为适合于保健食品的具体实例的上述维生素混合物以及矿物质混合物的混合比例，但所述混合比例可根据需要而改变。

[制剂实施例2]保健饮料

根据通常使用的方法，将上述成分混合并在约85℃加热同时搅拌约1小时。所得溶液进行过滤以及灭菌。

[制剂实施例3]片剂

通过混合丁香脂素100mg、大豆提取物50mg、葡萄糖100mg、红参提取物50mg、淀粉96mg以及硬脂酸镁4mg并添加40mg的30％乙醇所形成的颗粒，在60℃条件下进行干燥并制成片剂。

[制剂实施例4]颗粒剂

通过混合丁香脂素100mg、大豆提取物50mg、葡萄糖100mg以及淀粉600mg并添加100mg的30％乙醇所形成的颗粒，在60℃条件下进行干燥，并装至袋中。

[制剂实施例5]软膏

根据下述表1所记载的组成，采用通常使用的方法制备软膏。

表1

成分	含量(重量％)
		丁香脂素	3.0
甘油	8.0
		丁二醇	4.0
液体石蜡	15.0
		β-葡聚糖	7.0

卡波姆	0.1
		辛酸/癸酸三酸甘油酯	3.0
角鲨烷	1.0
		鲸蜡硬脂基葡糖苷(Cetearyl glucoside)	1.5
山梨醇硬脂酸酯	0.4
		鲸蜡硬脂醇	1.0
蜜蜡	4.0
		防腐剂、色素和香料	适量
纯水	余量

[实用性]

包含SIRT1活化剂的根据本发明的组合物具有优异的解毒效应，特别是对由吸烟引起的毒性具有优异的解毒效应。

包含SIRT1活化剂的根据本发明的组合物具有优异的预防以及改善代谢紊乱，具体为肥胖、2型糖尿病、高脂血症或者脂肪肝的效应。

包含SIRT1活化剂的根据本发明的组合物具有预防或者改善眼部疾病，特别是老化相关的眼部疾病的效应。

包含SIRT1活化剂的根据本发明的组合物具有优异的预防或者改善免疫性疾病比如过敏、过敏性皮炎、枯草热或者风湿性关节炎的效应。

Claims

1.一种去乙酰化酶1(SIRT1)活化剂，其包含化学式1的化合物，其衍生物或者其药学上可接受的盐作为活性成分：

化学式1

其中

R₁、R₂、R₃或者R₄独立地为未分支或分支的C1至C18烷基、C1至C18烷氧基、C1至C18烯基、C1至C18炔基或者C3至C6环烷基，以及

2.根据权利要求1所述的SIRT1活化剂，其中所述化合物为丁香脂素。

3.根据权利要求1或者2所述的SIRT1活化剂，其中基于活化剂的总重量，所述活化剂包括0.0001至10重量％的量的活性成分。

4.根据权利要求2或者3所述的SIRT1活化剂，其中所述丁香脂素包含于选自亚麻籽、黄柏、五加皮、芝麻籽以及人参浆果的一种或多种的提取物中。

5.一种包括根据权利要求1至4任意一项所述SIRT1活化剂的用于解毒的组合物。

6.根据权利要求5所述的组合物，其中所述SIRT1活化剂解读由吸烟引起的毒性。

7.一种包括根据权利要求1至4任意一项所述SIRT1活化剂的用于预防或者改善代谢紊乱的组合物。

8.根据权利要求7所述的组合物，其中所述代谢紊乱包括碳水化合物代谢紊乱或者脂代谢紊乱。

9.根据权利要求8所述的组合物，其中所述碳水化合物代谢紊乱或者脂代谢紊乱包括选自由肥胖、2型糖尿病、高脂血症和脂肪肝组成的组的一种或多种。

10.根据权利要求7所述的组合物，其中所述SIRT1活化剂抑制脂肪酸合成，并促进脂肪酸氧化。

11.一种包括根据权利要求1至4任意一项所述SIRT1活化剂的用于预防或者改善眼部疾病的组合物。

12.根据权利要求11所述的组合物，其中所述眼部疾病包括老化相关的眼部疾病。

13.根据权利要求11所述的组合物，其中所述眼部疾病包括选自由黄斑变性、葡萄膜炎、青光眼、糖尿病性视网膜疾病以及白内障组成的组的一种或多种。

14.根据权利要求11所述的组合物，其中所述SIRT1活化剂在视网膜细胞中增加SIRT1表达以及线粒体的合成。

15.一种包括根据权利要求1至4任意一项所述SIRT1活化剂的用于预防或者改善免疫性疾病的组合物。

16.根据权利要求15所述的组合物，其中所述免疫性疾病包括过敏、过敏性皮炎、枯草热以及风湿性关节炎中的一种或多种。

17.根据权利要求15所述的组合物，其中所述SIRT1活化剂在外周血单核细胞中促进SIRT1的表达以及向2型免疫细胞的转变。

18.根据权利要求5至17任意一项所述的组合物，其中基于所述组合物的总重量，所述组合物包括0.001-20重量％的SIRT1活化剂。

19.根据权利要求5至18任意一项所述的组合物，其中所述组合物为食品组合物。

20.根据权利要求5至18任意一项所述的组合物，其中所述组合物为药物组合物。