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PATENTANSPRÜCHE 1. N-Oleyl-Derivate von natürlichen und synthetischen Phosphatidyläthanolaminen der Formel
EMI1.1
worin R' und R2 die Reste von gesättigten bzw. ungesättigten geradkettigen bzw. verzweigten Fettsäuren bedeuten.
2. Verbindungen nach Anspruch 1, dadurch gekennzeichnet, dass R' und R2 Reste von vorwiegend natürlich vorkommenden Fettsäuren mit 12 bis 22 Kohlenstoffatomen und einer bzw. mehreren Doppelbindungen im Molekül bedeuten.
3. Verfahren zur Herstellung der unter Anspruch 1 aufgeführten N-Oleyl-Derivate der Phosphatidyläthanolamine, dadurch gekennzeichnet, dass man synthetische oder natürlich vorkommende Phosphatidyläthanolamine mit dem Säurechlorid oder Anhydrid der Ölsäure in Anwesenheit einer schwachen Base umsetzt.
4. Verfahren nach Anspruch 3, dadurch gekennzeichnet, dass man die Phosphatidyläthynolamine in Gegenwart anderer synthetischer oder natürlich vorkommender Phospholipide umsetzt.
5. Arzneimittel mit antilipämischer und antiarteriosklerotischer Wirkung, gekennzeichnet durch einen Gehalt an der Verbindung nach Anspruch 1.
6. Arzneimittel nach Anspruch 5, dadurch gekennzeichnet, dass es weitere synthetische bzw. natürlich vorkommende tierische und pflanzliche Phospholipide enthält.
Natürlich vorkommende Phospholipide, die entweder aus Eidotter, Sojabohnen, Raps, Erdnüssen oder Sonnenblumen hergestellt werden können, bestehen immer aus einem Gemisch von chemisch unterschiedlichen Phospholipiden.
Dabei sind Phosphatidylcholin, Phosphatidyläthanolamin und Phosphatidylinositid die mengenmässig vorherrschenden Komponenten. Es ist seit langem bekannt, dass Phosphatidylcholin bzw. phosphatidylcholinangereicherte Phospholipid-Fraktionen mit vorwiegend mehrfach ungesättigten Fettsäuren bei vielen Krankheitsbildern, wie Arteriosklerose, Hyperlipidämien oder Diabetes eine wertvolle Stoffwechselwirksamkeit haben. Eine solche Wirkung ist jedoch bislang nur bei cholinhaltigen Glycerinphospholipiden bekannt. Das Phosphatidyläthanolamin dagegen zeigte keine antiarteriosklerotische bzw. antilipämische Wirkung.
Es stellt vielmehr eine Komponente der Phosphatide dar, die unangenehme Nebenwirkungen bei der Anwendung der Phospholipide hervorrufen kann. Es ist bekannt, dass die primäre Aminogruppe dieses Phosphatids durch Polycarbonsäureanhydride acyliert werden kann (vgl. DE-PS 721 002), um bessere Löslichkeitseigenschaften zu erreichen. Auch aus der US-PS 2791 594 ist die Acylierung von lecithinhaltigen Gemischen und aus den GB-PS 766394 und 974432 sowie der DE-AS 1 543 937 ist die Acylierung der Phosphatide mit Essigsäureanhydriden bekannt. Höhere N-Fettsäureacyl Verbindungen des Phosphatidyläthanolamins sind in kleinen Mengen in natürlich vorkommenden Glycerinphospholipiden und vor allem im Phospholipidgemisch der Sojabohnen nachgewiesen worden.
Es handelt sich hier um N-Acyl-Phosphatidyläthanolamin-Gemische mit unterschiedlichen Fettsäuren, wobei die Palmitinsäure mit ca. 65% mengenmässig vorherrscht.
Es wurde nun überraschenderweise gefunden, dass man Phosphatidyläthanolamine natürlicher und synthetischer Herkunft durch Acylierung mit Ölsäure in neue N-Oleyl Phosphatidyläthanolamine überführen kann, welche schon in geringer Dosierung eine deutliche antiarteriosklerotische bzw. antilipämische Wirkung im Tierversuch zeigen. Es muss als überraschend angesehen werden, dass diese Wirkungen nur bei den Ölsäure-Derivaten der Phosphatidyläthanolamine deutlich erkennbar ist und bei den entsprechenden Verbindungen, die sich entweder von den mehrfach ungesättigten Fettsäuren oder von den gesättigten Fettsäuren unterschiedlichster Kettenlänge ableiten, nicht vorhanden sind.
Sogar das N-Linolat des Phosphatidyläthanolamins zeigt nur eine mässige antilipämische Wirkung, obwohl gerade N-Linolyl-Verbindungen von cyclischen Aminen, wie z.B.
das Cyclohexyllinolamid, seit langem als lipidsenkende Substanzen bekannt sind. .Es war daher für den Fachmann nicht vorauszusehen und es hat in keiner Weise nahegelegen, die N-Oleyl-Phosphatidyläthanolamine herzustellen und auf antilipämische bzw. antiarteriosklerotische Wirkung hin zu prüfen.
Zur Herstellung der erfindungsgemässen N-Oleyl-Derivate können reines Phosphatidyläthanolamin oder Phosphatidyl äthanolamin-haltige Phospholipidfraktionen, wie z.B. Rohphosphatide oder alkohollösliche bzw. alkoholunlösliche Phospholipidfraktionen, in einem aliphatischen, cyclischen oder chlorierten Kohlenwasserstoff bzw. Tetrahydrofuran oder Dioxan gelöst und nach Zusatz von basischen Verbindungen, wie Triäthylamin, Pyridin u. dgl. Säureakzeptoren mit Ölsäurechlorid oder nach der Anhydridmethode mit Ölsäure und Chlorameisensäure umgesetzt werden.
Von besonderer wirtschaftlicher Bedeutung ist vor allem die Tatsache, dass man kephalinhaltige Phosphatidfraktionen für die N-Oleyl-Herstellung des Phosphatidyläthanolamins verwenden kann. Hierbei lassen sich auf einfache Weise Phospholipidgemische herstellen, die neben dem biologisch wertvollen Phosphatidylcholin die N-Oleyl-Phospha- tidyläthanolamine der vorliegenden Anmeldung enthalten und die bei oraler Applikation gute antilipämische und antiarteriosklerotische Wirkung zeigen.
Zum Zwecke der Herstellung einer geeigneten oralen therapeutischen Darreichungsform können die erfindungsgemässen N-Oleyl-Phosphatidyläthanolamine nach Zusatz von z.B. Vitamin E als Antioxidans, gegebenenfalls, wenn eine Mischung mit anderen Phospholipiden vorliegt, erst nach Zusatz von Mono-, Di- oder Triglyceriden aus natürlichen Fettsäuren in Weichgelatine-Kapseln abgefüllt werden. Für eine orale Anwendung in fester Form eignen sich die Adsorbtion an z.B. Aerosil oder verschiedene Celite. Als weitere Hilfsstoffe für die Herstellung von festen Applikationsformen können neben Antioxidantien wie Tocopherol der
Ascorbinsäure auch Milchzucker, Calciumcarbonat und Magnesiumstearat verwendet werden. Daneben können die erfindungsgemässen pharmazeutischen Zubereitungen noch Farbstoffe, Aromastoffe und Konservierungsmittel enthalten.
Die täglich zu verabreichende Menge an N-Oleyl-Phosphatidyläthanolamin in einer oral anzuwendenden pharmazeutischen Zubereitung soll zwischen 100 und 2000 mg betragen, wobei diese Menge in der Regel in mehreren kleinen Dosen von 50 bis 500 mg z.B. 2-4mal täglich, verabreicht werden kann.
Die nachfolgenden Beispiele dienen zur näheren Erläute rung der Erfindung.
Beispiels
100 g chemisch reines Phosphatidyläthanolamin, herge stellt durch säulenchromatographische Trennung einer Phos phatidyläthanolamin-reichen alkoholunlöslichen Sojalecithin-Fraktion auf Kieselgel mit Chloroform-Methanol als
Elutionsmittel, werden in 500 ml Toluol gelöst und nach Zugabe von 38 ml Triäthylamin unter Rühren mit einer
Lösung von 41,2 g Ölsäurechlorid in 60 ml Toluol versetzt.
Nach einstündigem Rühren bei Raumtemperatur wird das ausgefallene Triäthylaminhydrochlorid abfiltriert und das
Lösungsmittel im Vakuum bei 60"C Badtemperatur in einer
Stickstoffatmosphäre entfernt. N-Oleyl-Phosphatidylätha nolamin bleibt als viskoses gelb-braunes Öl zurück. Ausbeute
115 g = 96% der Theorie.
Rf-Wert des N-Oleyl-Phosphatidyläthanolamins = 0,72 auf Kieselgel G-Fertigplatten 60 F254 (Fa. Merck), Laufmittel Chloroform-Methanol-12,5% NH40H 70:25:5 (v/v/v).
Beispiel 2
19,3 g Ölsäure werden in 300 ml Tetrahydrofuran gelöst und nach Zugabe von 9,5 ml Triäthylamin unter Rühren auf 0 C abgekühlt. Die Lösung wird mit 6,5 ml Chlorameisen säureäthylester versetzt und nach 5 Minuten mit einer Lösung von 50 g Phosphatidyläthanolamin, das wie unter Beispiel 1 beschrieben hergestellt wurde, in 120 ml Tetrahydrofuran.
Nach Zusatz von 9,5 ml Triäthylamin wird das Reaktionsge misch 1 Stunde bei Raumtemperatur gerührt, anschliessend das ausgefallene Triäthylaminhydrochlorid abfiltriert und die Lösung im Vakuum bei 60 Badtemperatur eingedampft.
N-Oleyl-Phosphatidyläthanolamin bleibt als viskoses gelb braunes Öl zurück. Ausbeute 58 g = 97% der Theorie.
Beispiel3
200 g einer alkohollöslichen Sojaphosphatidfraktion, her gestellt durch wiederholte Extraktion von entöltem Sojaboh nenrohphosphatid mit Äthanol bei 40-60"C, werden in
800 ml Chloroform gelöst und nach Zugabe von 25 ml
Pyridin unter Rühren mit einer Lösung von 16,4 g Ölsäure chlorid in 50 ml Chloroform versetzt. Nach einstündigem
Rühren bei Raumtemperatur wird die Reaktionslösung mit
800 ml Wasser ausgeschüttelt. Die Chloroformphase wird nach dem Trocknen mit Natriumsulfat im Vakuum bei 60"C
Badtemperatur unter Inertgasschutz eingedampft. Das resul tierende plastische Phosphatidgemisch besteht zu ca. 30% aus
N-Oleyl-Phosphatidyläthanolamin neben ca. 60% Phosphati dylcholin.
Beispiel 4
500 g einer alkoholunlöslichen Sojaphosphatidfraktion mit einem Phosphatidyläthanolamingehalt von ca. 33%, wie sie bei der Herstellung der unter Beispiel 3 beschriebenen alkohollöslichen Fraktion als Rückstand anfällt, werden in 2500 ml n-Hexan gelöst und nach Zugabe von 47 ml Triäthylamin unter Rühren mit einer Lösung von 52 g Ölsäurechlorid in 75 ml n-Hexan versetzt. Nach einstündigem Rühren bei Raumtemperatur wird das ausgefallene Triäthylaminhydrochlorid abfiltriert und die Lösung im Vakuum bei 60"C Badtemperatur eingedampft. Der verbleibende Rückstand wird nacheinander unter Rühren bei Raumtemperatur einmal mit 500 ml und zweimal mit 250 ml Aceton extrahiert.
Aus den vereinigten Acetonextrakten wird nach Entfernung des Lösungsmittels im Vakuum bei 60"C Badtemperatur N-Oleyl-Phosphatidyläthanolamin in 70%iger Konzentration als viskoses gelb-braunes Öl mit einem Phosphatidylcholingehalt von ca. 25% erhalten. Ausbeute 240 g = 90% der Theorie.
Beispiel 5 a) Flüssig gefüllte Kapseln
Zur oralen Verabreichung geeignete Kapseln können durch Abfüllung der erfindungsgemäss hergestellten N-Oleyl-Phosphatidyläthanolamine in Weichgelatine-Kapseln, gegebenenfalls unter Zusatz von Vitamin E, in an sich bekannter Weise hergestellt werden (z.B. 500 mg N-Oleyl Phosphatidyläthanolamin pro Kapsel).
b) Trocken gefüllte Kapseln
Durch Verreibung von N-Oleyl-Phosphatidyläthanolamin mit Aerosil kann ein schüttfähiges, pulverförmiges Material hergestellt werden, das sich für eine Abfüllung in Hartgelatine-Kapseln eignet: N-Oleyl-Phosphatidyläthanolamin 250 mg Aerosil 250 mg
Die so hergestellten Kapseln können zur Behandlung der Hyperlipämie und Atherosklerose verwendet werden, wobei jeweils 1-2 Kapseln 2-4mal täglich verabreicht werden sollen.
Die pharmakologische Prüfung der erfindungsgemässen Phospholipid-Derivate auf antilipämische Wirkung im Tierexperiment erfolgte nach folgenden Screening-Testen:
1. Akuter Triton-Test nach Schön und Schurr an Ratten (einmalige prophylaktische Applikation) Schön H. und Berg, G.: Arzneimittelforschung 7, 307 (1957).
Schurr, P.E. et al.: Lipids 7, 68-74(1972).
Orale Applikation der Testsubstanz; 24 h danach intraperitoneale Applikation von Triton-WR 1339 (Erzeugung einer Hyperlipämie); 48 h nach Triton-Applikation Bestimmung der Lipide im Serum. Auswertung gegen Kontrollkollektiv.
2. Akuter Triton-Test nach Schön und Schurr an Ratten (einmalige therapeutische Applikation) Literatur wie unter 1.
Intraperitoneale Applikation von Triton-WR 1339; I h danach orale Applikation der Testsubstanz; 48 h nach Triton Applikation Bestimmung der Lipide im Serum. Auswertung gegen Kontrollkollektiv.
3. Biochemisches Screening (unbelastete Ratten) Fletcher, M.J.: Clin. Chim. Acta 393(1968) Orale Applikation der Testsubstanz; 4 h danach Bestimmung der Lipide im Serum. Auswertung gegen Kontrollkollektiv.
Die Testergebnisse der erfindungsgemässen Verbindungen im Vergleich zum Clofibrat sind in der nachfolgenden Tabelle zusammengefasst.
Tabelle
EMI3.1
<tb> Versuch <SEP> erfindungsgemässe <SEP> Verbindung <SEP> Clofibrat
<tb> <SEP> (N-Oleylkephalin)
<tb> <SEP> 1. <SEP> Akuter <SEP> Triton-Test <SEP> Gesamtlipide <SEP> EDso <SEP> ¯¯¯¯ <SEP> 0,29 <SEP> mg/kg <SEP> KGW <SEP> Dosierungen <SEP> bis <SEP> 250 <SEP> mg/kg <SEP> KGW <SEP>
<tb> <SEP> (1 <SEP> x <SEP> prophylakt.
<SEP> Phospholipide <SEP> ED5o <SEP> 0,62 <SEP> mg/kg <SEP> KGW <SEP> wirkungslos
<tb> <SEP> Applikation) <SEP> Triglyceride <SEP> EDso <SEP> 0,18 <SEP> mg/kg <SEP> KGW <SEP> Dosierung <SEP> 500 <SEP> mg/kg <SEP> KGW <SEP> gut
<tb> <SEP> an <SEP> Ratten <SEP> Gesamtcholesterin <SEP> Wirkung <SEP> ab <SEP> 0,01 <SEP> mg/kg <SEP> KGW <SEP> wirksam
<tb> <SEP> freies <SEP> Cholesterin <SEP> Wirkung <SEP> ab <SEP> 0,10 <SEP> mg/kg <SEP> KGW
<tb> 2. <SEP> Akuter <SEP> Triton-Test <SEP> Gesamtlipide <SEP> EDIs <SEP> 8,49 <SEP> mg/kg <SEP> KGW <SEP> Senkung <SEP> ab <SEP> 250 <SEP> mg/kg <SEP> KGW
<tb> <SEP> (1 <SEP> x <SEP> therapeut.
<SEP> Triglyceride <SEP> EDso <SEP> 5,63 <SEP> mg/kg <SEP> KGW <SEP> Senkung <SEP> ab <SEP> 250 <SEP> mg/kg <SEP> KGW
<tb> <SEP> Applikation) <SEP> Gesamtcholesterin <SEP> ED5o <SEP> 278,86 <SEP> mg/kg <SEP> KGW <SEP> kein <SEP> Effekt <SEP> bis <SEP> 500 <SEP> mg/kg <SEP> KGW
<tb> <SEP> an <SEP> Ratten <SEP> Phospholipide <SEP> Senkung <SEP> ab <SEP> 0,10 <SEP> mg/kg <SEP> KGW <SEP> Senkung <SEP> ab <SEP> 500 <SEP> mg/kg <SEP> KGW
<tb> <SEP> freies <SEP> Cholesterin <SEP> Senkung <SEP> ab <SEP> 0,10 <SEP> mg/kg <SEP> KGW <SEP> kein <SEP> Effekt <SEP> bis <SEP> 500 <SEP> mg/kg <SEP> KGW
<tb> 3.
<SEP> Biochemisches <SEP> Gesamtlipide <SEP> 50 <SEP> mg/kg <SEP> KGW <SEP> Senkung <SEP> ab <SEP> 100 <SEP> mg/kg <SEP> KGW
<tb> <SEP> Screening <SEP> Phospholipide <SEP> 50 <SEP> mg/kg <SEP> KGW <SEP> nicht <SEP> bestimmt
<tb> <SEP> (unbelastete <SEP> Ratte) <SEP> Triglyceride <SEP> Senkung <SEP> ab <SEP> 50 <SEP> mg/kg <SEP> KGW <SEP> Senkung <SEP> ab <SEP> 50 <SEP> mg/kg <SEP> KGW
<tb> <SEP> Gesamtcholesterin <SEP> 50 <SEP> mg/kg <SEP> KGW <SEP> Senkung <SEP> ab <SEP> 50 <SEP> mg/kg <SEP> KGW
<tb> <SEP> freies <SEP> Cholesterin <SEP> s <SEP> <SEP> 50 <SEP> mg/kg <SEP> KGW <SEP> nicht <SEP> bestimmt
<tb> 4.
<SEP> akute <SEP> Toxizität <SEP> LDso <SEP> Maus <SEP> > 4640 <SEP> mg/kg <SEP> KGW <SEP> 2960 <SEP> mg/kg <SEP> KGW
<tb> <SEP> LDo <SEP> Maus <SEP> > 4640 <SEP> mg/kg <SEP> KGW <SEP> 1470 <SEP> mg/kg <SEP> KGW
<tb> <SEP> LDso <SEP> Ratte <SEP> > <SEP> 5000 <SEP> mg/kg <SEP> KGW <SEP> 1100 <SEP> mg/kg <SEP> KGW
<tb> <SEP> LDo <SEP> Ratte <SEP> > 5000 <SEP> mg/kg <SEP> KGW <SEP> - <SEP> <SEP> 681mg/kgKGW <SEP>
<tb> 5.
<SEP> subchronische <SEP> Ratte <SEP> 4 <SEP> Wochen: <SEP> Ratte <SEP> 13 <SEP> Wochen:
<tb> <SEP> Toxizität <SEP> niedrigste <SEP> toxische <SEP> Dosis <SEP> zwischen <SEP> niedrigste <SEP> toxische <SEP> Dosis <SEP> zwischen <SEP> 88
<tb> <SEP> 250 <SEP> und <SEP> 1250 <SEP> mg/kg <SEP> KGW <SEP> und <SEP> 265 <SEP> mg/kg <SEP> KGW
<tb>
Wie die Tabelle zeigt, haben die erfindungsgemässen Verbindungen in allen Tiermodellen eine markante hypolipämische bzw. antihyperlipämische Wirkung, zum Teil in sehr niedrigem Dosisbereich.
Demgegenüber ist für Clofibrat meistens eine wesentlich höhere Dosis (teilweise 100- bis 500fach) nötig, um vergleichbare Effekte zu erzielen.
Darüber hinaus ergibt sich für die erfindungsgemässen Verbindungen eine wesentlich geringere akute und subakute Toxizität, was eine bedeutsame Verbesserung der therapeutischen Breite zur Folge hat (s. vorangegangene Tabelle).
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PATENT CLAIMS 1. N-oleyl derivatives of natural and synthetic phosphatidylethanol amines of the formula
EMI1.1
wherein R 'and R2 are the residues of saturated or unsaturated straight-chain or branched fatty acids.
2. Compounds according to claim 1, characterized in that R 'and R2 are residues of predominantly naturally occurring fatty acids having 12 to 22 carbon atoms and one or more double bonds in the molecule.
3. A process for the preparation of the N-oleyl derivatives of phosphatidylethanolamines listed in claim 1, characterized in that synthetic or naturally occurring phosphatidylethanolamines are reacted with the acid chloride or anhydride of oleic acid in the presence of a weak base.
4. The method according to claim 3, characterized in that the phosphatidylethynolamines are reacted in the presence of other synthetic or naturally occurring phospholipids.
5. Medicament with antilipemic and antiarteriosclerotic activity, characterized by a content of the compound according to claim 1.
6. Medicament according to claim 5, characterized in that it contains further synthetic or naturally occurring animal and vegetable phospholipids.
Naturally occurring phospholipids, which can either be produced from egg yolk, soybeans, rapeseed, peanuts or sunflowers, always consist of a mixture of chemically different phospholipids.
Phosphatidylcholine, phosphatidylethanolamine and phosphatidylinositide are the predominant components in terms of quantity. It has long been known that phosphatidylcholine or phosphatidylcholine-enriched phospholipid fractions with predominantly polyunsaturated fatty acids have a valuable metabolic activity in many clinical pictures, such as arteriosclerosis, hyperlipidemia or diabetes. Such an effect has so far only been known for choline-containing glycerol phospholipids. In contrast, the phosphatidylethanolamine showed no antiarteriosclerotic or antilipemic effect.
Rather, it is a component of the phosphatide, which can cause unpleasant side effects when using the phospholipids. It is known that the primary amino group of this phosphatide can be acylated by polycarboxylic anhydrides (cf. DE-PS 721 002) in order to achieve better solubility properties. The acylation of lecithin-containing mixtures is also known from US Pat. No. 2,791,594 and the acylation of the phosphatides with acetic anhydrides is known from GB Pat. Nos. 766394 and 974432 and DE-AS 1,543,937. Higher N-fatty acid acyl compounds of phosphatidylethanolamine have been detected in small amounts in naturally occurring glycerol phospholipids and especially in the phospholipid mixture of soybeans.
These are N-acyl-phosphatidylethanolamine mixtures with different fatty acids, with the palmitic acid predominating in quantities of approx. 65%.
It has now surprisingly been found that phosphatidylethanolamines of natural and synthetic origin can be converted into new N-oleylphosphatidylethanolamines by acylation with oleic acid, which show a clear antiarteriosclerotic or antilipemic effect in animal experiments even in low doses. It must be regarded as surprising that these effects can only be clearly recognized in the oleic acid derivatives of phosphatidylethanolamines and are not present in the corresponding compounds which are derived either from the polyunsaturated fatty acids or from the saturated fatty acids of various chain lengths.
Even the N-linolate of the phosphatidylethanolamine shows only a moderate anti-lipemic effect, although it is precisely the N-linolyl compounds of cyclic amines, e.g.
cyclohexyllinolamide, which has long been known as lipid-lowering substances. It was therefore not foreseeable for the person skilled in the art and it was in no way obvious to produce the N-oleylphosphatidylethanolamines and to test them for anti-lipemic or anti-arteriosclerotic effects.
To prepare the N-oleyl derivatives according to the invention, pure phosphatidylethanolamine or phosphatidylethanolamine-containing phospholipid fractions, such as e.g. Crude phosphatides or alcohol-soluble or alcohol-insoluble phospholipid fractions, dissolved in an aliphatic, cyclic or chlorinated hydrocarbon or tetrahydrofuran or dioxane and after adding basic compounds such as triethylamine, pyridine and the like. Like. Acid acceptors are reacted with oleic acid chloride or according to the anhydride method with oleic acid and chloroformic acid.
The fact that cephalin-containing phosphatide fractions can be used for the N-oleyl production of the phosphatidylethanolamine is of particular economic importance. In this way, phospholipid mixtures can be prepared in a simple manner which, in addition to the biologically valuable phosphatidylcholine, contain the N-oleylphosphatidylethanolamines of the present application and which have good antilipemic and antiarteriosclerotic effects when administered orally.
For the purpose of producing a suitable oral therapeutic dosage form, the N-oleylphosphatidylethanolamines according to the invention can be added after the addition of e.g. Vitamin E as an antioxidant, if necessary when a mixture with other phospholipids is present, can only be filled into soft gelatin capsules after the addition of mono-, di- or triglycerides from natural fatty acids. For oral use in solid form, the adsorption on e.g. Aerosil or various Celite. In addition to antioxidants such as tocopherol, the following can be used as further auxiliaries for the production of solid application forms
Ascorbic acid can also be used milk sugar, calcium carbonate and magnesium stearate. In addition, the pharmaceutical preparations according to the invention can also contain colorants, flavorings and preservatives.
The daily amount of N-oleylphosphatidylethanolamine to be administered in an oral pharmaceutical preparation should be between 100 and 2000 mg, this amount usually being in several small doses of 50 to 500 mg e.g. 2-4 times a day, can be administered.
The following examples serve to explain the invention in more detail.
Example
100 g of chemically pure phosphatidylethanolamine, prepared by column chromatography separation of a phosphatidylethanolamine-rich alcohol-insoluble soy lecithin fraction on silica gel with chloroform-methanol as
Eluents are dissolved in 500 ml of toluene and, after adding 38 ml of triethylamine, with stirring
Solution of 41.2 g of oleic acid chloride in 60 ml of toluene.
After stirring for one hour at room temperature, the precipitated triethylamine hydrochloride is filtered off and the
Solvent in vacuum at 60 "C bath temperature in one
Removed nitrogen atmosphere. N-Oleyl-Phosphatidylätha nolamin remains as a viscous yellow-brown oil. yield
115 g = 96% of theory.
Rf value of the N-oleylphosphatidylethanolamine = 0.72 on silica gel G prefabricated plates 60 F254 (from Merck), eluent chloroform-methanol-12.5% NH40H 70: 25: 5 (v / v / v).
Example 2
19.3 g of oleic acid are dissolved in 300 ml of tetrahydrofuran and, after adding 9.5 ml of triethylamine, cooled to 0 ° C. with stirring. The solution is mixed with 6.5 ml of ethyl chloroformate and after 5 minutes with a solution of 50 g of phosphatidylethanolamine, which was prepared as described in Example 1, in 120 ml of tetrahydrofuran.
After adding 9.5 ml of triethylamine, the reaction mixture is stirred for 1 hour at room temperature, then the precipitated triethylamine hydrochloride is filtered off and the solution is evaporated in vacuo at a bath temperature of 60.
N-oleyl-phosphatidylethanolamine remains as a viscous yellow-brown oil. Yield 58 g = 97% of theory.
Example3
200 g of an alcohol-soluble soy phosphatide fraction, prepared by repeated extraction of deoiled crude soybean phosphatide with ethanol at 40-60 "C, are in
800 ml of chloroform dissolved and after adding 25 ml
A solution of 16.4 g of oleic acid chloride in 50 ml of chloroform was added to the pyridine with stirring. After one hour
The reaction solution is stirred with at room temperature
Shaken out 800 ml of water. The chloroform phase is dried with sodium sulfate in vacuo at 60 ° C.
Bath temperature evaporated under inert gas protection. The resulting plastic phosphatide mixture consists of approximately 30%
N-oleyl-phosphatidylethanolamine in addition to about 60% phosphate dylcholine.
Example 4
500 g of an alcohol-insoluble soy phosphatide fraction with a phosphatidylethanolamine content of approximately 33%, such as is obtained as a residue in the preparation of the alcohol-soluble fraction described in Example 3, are dissolved in 2500 ml of n-hexane and, after adding 47 ml of triethylamine, with stirring with a solution of 52 g of oleic acid chloride in 75 ml of n-hexane. After stirring for one hour at room temperature, the precipitated triethylamine hydrochloride is filtered off and the solution is evaporated in vacuo at a bath temperature of 60 ° C. The remaining residue is extracted successively with stirring at room temperature once with 500 ml and twice with 250 ml acetone.
After removal of the solvent in vacuo at a bath temperature of 60 ° C., 70% concentration of N-oleyl-phosphatidylethanolamine is obtained from the combined acetone extracts as a viscous yellow-brown oil with a phosphatidylcholine content of about 25%. Yield 240 g = 90% of theory .
Example 5 a) Liquid filled capsules
Capsules suitable for oral administration can be prepared in a manner known per se by filling the N-oleylphosphatidylethanolamines produced according to the invention into soft gelatin capsules, optionally with the addition of vitamin E (e.g. 500 mg of N-oleylphosphatidylethanolamine per capsule).
b) Dry filled capsules
By rubbing N-oleyl-phosphatidylethanolamine with Aerosil, a pourable, powdery material can be produced that is suitable for filling into hard gelatin capsules: N-oleylphosphatidylethanolamine 250 mg Aerosil 250 mg
The capsules thus produced can be used for the treatment of hyperlipemia and atherosclerosis, 1-2 capsules each being to be administered 2-4 times a day.
The pharmacological testing of the phospholipid derivatives according to the invention for antilipemic activity in animal experiments was carried out according to the following screening tests:
1. Acute Triton test according to Schön and Schurr on rats (one-time prophylactic application) Schön H. and Berg, G .: Arzneimittelforschung 7, 307 (1957).
Schurr, P.E. et al .: Lipids 7, 68-74 (1972).
Oral application of the test substance; 24 hours later intraperitoneal application of Triton WR 1339 (generation of hyperlipemia); 48 h after Triton application, determination of lipids in serum. Evaluation against control collective.
2. Acute Triton test according to Schön and Schurr on rats (single therapeutic application) Literature as under 1.
Intraperitoneal application of Triton-WR 1339; I h then oral application of the test substance; 48 h after Triton application determination of lipids in serum. Evaluation against control collective.
3. Biochemical screening (unloaded rats) Fletcher, M.J .: Clin. Chim. Acta 393 (1968) Oral application of the test substance; 4 h afterwards determination of the lipids in the serum. Evaluation against control collective.
The test results of the compounds according to the invention in comparison to clofibrate are summarized in the table below.
table
EMI3.1
<tb> Experiment <SEP> <SEP> compound <SEP> clofibrate according to the invention
<tb> <SEP> (N-oleylkephalin)
<tb> <SEP> 1. <SEP> Acute <SEP> Triton test <SEP> Total lipids <SEP> EDso <SEP> ¯¯¯¯ <SEP> 0.29 <SEP> mg / kg <SEP> KGW < SEP> dosages <SEP> to <SEP> 250 <SEP> mg / kg <SEP> KGW <SEP>
<tb> <SEP> (1 <SEP> x <SEP> prophylactic.
<SEP> Phospholipids <SEP> ED5o <SEP> 0.62 <SEP> mg / kg <SEP> KGW <SEP> ineffective
<tb> <SEP> application) <SEP> triglycerides <SEP> EDso <SEP> 0.18 <SEP> mg / kg <SEP> KGW <SEP> dosage <SEP> 500 <SEP> mg / kg <SEP> KGW <SEP> good
<tb> <SEP> on <SEP> rats <SEP> total cholesterol <SEP> effect <SEP> effective from <SEP> 0.01 <SEP> mg / kg <SEP> KGW <SEP>
<tb> <SEP> free <SEP> cholesterol <SEP> effect <SEP> from <SEP> 0.10 <SEP> mg / kg <SEP> KGW
<tb> 2. <SEP> Acute <SEP> Triton test <SEP> Total lipids <SEP> EDIs <SEP> 8.49 <SEP> mg / kg <SEP> KGW <SEP> Lowering <SEP> from <SEP> 250 <SEP> mg / kg <SEP> KGW
<tb> <SEP> (1 <SEP> x <SEP> therapeutic.
<SEP> Triglycerides <SEP> EDso <SEP> 5.63 <SEP> mg / kg <SEP> KGW <SEP> Lowering <SEP> from <SEP> 250 <SEP> mg / kg <SEP> KGW
<tb> <SEP> application) <SEP> total cholesterol <SEP> ED5o <SEP> 278.86 <SEP> mg / kg <SEP> KGW <SEP> no <SEP> effect <SEP> to <SEP> 500 <SEP > mg / kg <SEP> KGW
<tb> <SEP> on <SEP> rats <SEP> phospholipids <SEP> reduction <SEP> from <SEP> 0.10 <SEP> mg / kg <SEP> KGW <SEP> reduction <SEP> from <SEP> 500 <SEP> mg / kg <SEP> KGW
<tb> <SEP> free <SEP> cholesterol <SEP> reduction <SEP> from <SEP> 0.10 <SEP> mg / kg <SEP> KGW <SEP> no <SEP> effect <SEP> to <SEP> 500 <SEP> mg / kg <SEP> KGW
<tb> 3.
<SEP> Biochemical <SEP> total lipids <SEP> 50 <SEP> mg / kg <SEP> KGW <SEP> reduction <SEP> from <SEP> 100 <SEP> mg / kg <SEP> KGW
<tb> <SEP> Screening <SEP> Phospholipids <SEP> 50 <SEP> mg / kg <SEP> KGW <SEP> not determined <SEP>
<tb> <SEP> (unstressed <SEP> rat) <SEP> triglycerides <SEP> reduction <SEP> from <SEP> 50 <SEP> mg / kg <SEP> KGW <SEP> reduction <SEP> from <SEP> 50 <SEP> mg / kg <SEP> KGW
<tb> <SEP> total cholesterol <SEP> 50 <SEP> mg / kg <SEP> KGW <SEP> reduction <SEP> from <SEP> 50 <SEP> mg / kg <SEP> KGW
<tb> <SEP> free <SEP> cholesterol <SEP> s <SEP> <SEP> 50 <SEP> mg / kg <SEP> KGW <SEP> not determined <SEP>
<tb> 4.
<SEP> acute <SEP> toxicity <SEP> LDso <SEP> mouse <SEP>> 4640 <SEP> mg / kg <SEP> KGW <SEP> 2960 <SEP> mg / kg <SEP> KGW
<tb> <SEP> LDo <SEP> mouse <SEP>> 4640 <SEP> mg / kg <SEP> KGW <SEP> 1470 <SEP> mg / kg <SEP> KGW
<tb> <SEP> LDso <SEP> rat <SEP>> <SEP> 5000 <SEP> mg / kg <SEP> KGW <SEP> 1100 <SEP> mg / kg <SEP> KGW
<tb> <SEP> LDo <SEP> Rat <SEP>> 5000 <SEP> mg / kg <SEP> KGW <SEP> - <SEP> <SEP> 681mg / kgKGW <SEP>
<tb> 5.
<SEP> subchronic <SEP> rat <SEP> 4 <SEP> weeks: <SEP> rat <SEP> 13 <SEP> weeks:
<tb> <SEP> toxicity <SEP> lowest <SEP> toxic <SEP> dose <SEP> between <SEP> lowest <SEP> toxic <SEP> dose <SEP> between <SEP> 88
<tb> <SEP> 250 <SEP> and <SEP> 1250 <SEP> mg / kg <SEP> KGW <SEP> and <SEP> 265 <SEP> mg / kg <SEP> KGW
<tb>
As the table shows, the compounds according to the invention have a marked hypolipemic or antihyperlipemic effect in all animal models, in some cases in a very low dose range.
In contrast, a much higher dose (sometimes 100 to 500 times) is usually required for clofibrate in order to achieve comparable effects.
In addition, the compounds according to the invention have a significantly lower acute and subacute toxicity, which results in a significant improvement in the therapeutic range (see previous table).