Procédé pour séparer, dans une solution, une ptéridine des impuretés qui l'accompagnent. L'acide ptéroylglutamique est un composé chi mique dont le nom exacte est: acide N- [4- 1 [ (2- amino-4-hydroxy-6-pyrimido [4;5-b] pyrazyl)- méthyl] -amino } -benzoy 1] -glutamique. Ce corps est un adjuvant de la croissance de divers organismes et présente donc des propriétés semblables à celles des vitamines et paraît identique à l'acide folique naturel.
Ce produit fait, à l'heure actuelle, l'objet d'une fabrica tion massive et est utilisé pour stimuler la formation de l'hémoglobine, ainsi que dans le traitement de l'agranulocytose; du psilosis et d'autres maladies apparentées.
On a mis au point diverses méthodes de préparation de l'acide ptéroylglutamique. La plupart de ces méthodes sont basées sur la réaction simultanée de la 2,4,5-triamino-6- hydroxy-pyrimidine, de l'acide p-aminoben- zoylglutamique et d'un composé approprié à 3 atomes de carbone renfermant des groupe ments aldéhyde et/ou halogénés réagissants, tel que l'alpha-bêta-dibromopropionaldéhyde. On prépare des produits connexes présentant des propriétés semblables ou contraires à celles des vitamines, par des procédés ana logues,
en partant d'autres amides de l'acide p-aminobenzoïque.
L'acide ptéroylglutamique a une molécule très complexe. Le processus par lequel cet acide se forme est, lui aussi, complexe. De nombreuses réactions secondaires sont suscep tibles de se produire en même temps que la réaction principale ou à la suite de celle-ci. En conséquence, le produit brut de réaction contient en général un nombre et une pro portion relativement considérables de subs tances indésirables parmi lesquelles se trou vent des produits intermédiaires qui ont in complètement réagi, des produits de conden sation et/ou de polymérisation, des isomères de position, des produits d'oxydation et di vers autres produits d'hydrolyse et de dégra dation.
Un grand nombre de ces produits contiennent un noyau pyrimidopyrazinique et présentent des caractéristiques physiques et chimiques voisines de celles de l'acide ptéroyl- glutamique lui-même. L'acide ptéroylglutami- que étant destiné à la thérapeutique, il est désirable de séparer les ptéridines biologique- ment inertes qui se forment dans le mélange réactionnel.
Bien que l'on ait mis au point divers pro cédés pour séparer l'acide ptéroylglutamique des ptéridines connexes qui sont présentes dâns le mélange de réaction brut, la plupart de ces procédés sont coûteux ou très com pliqués, exigeant des manipulations précises si l'on veut aboutir à une récupération moyennement satisfaisante de l'acide ptéroyl- glutamique. La présente invention a pour but de fournir un procédé permettant de séparer, en solution,
l'acide ptéroylglutamique ou autres ptéridines biologiquement actives des ptéridines inactives ou autres impuretés, avec une facilité relative et avec un rendement relativement bon. Ce procédé peut s'adapter aisément à la production industrielle.
Le procédé suivant l'invention pour sépa rer dans une solution contenant une ptéridine correspondant à la formule générale
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où R est le reste d'un aminoacide ou d'un peptide, ladite ptéridine des impuretés qui l'accompagnent et notamment de ptéridines de formule autre que la formule ci-dessus, est caractérisé en ce qu'on ajoute à cette solu tion un sel de zinc soluble et règle le pH du liquide à une valeur comprise entre 10,5 et 11,2, en ce qu'on sépare les matières préci pitées, constituées essentiellement desdites im puretés sous forme de combinaisons de zinc, d'avec la.
solution qui contient la majeure partie de la ptéridine désirée sous forme d'un sel de zinc, soluble, et régénère finalement cette ptéridine.
Le procédé suivant l'invention repose donc essentiellement sur les différences de solubi lité que présentent les sels de zinc des di verses ptéridines présentes dans le mélange de réaction brut. Les sels de zinc de nom breuses ptéridines inactives sont pratique ment insolubles pour un pH compris entre 10,5 et 11,2, tandis que le sel de zinc de l'acide ptéroylglutamique ou autres ptéri- dines actives est moyennement soluble pour ces valeurs du pH.
Par contre, pour les pH d'environ 6,5 à 7,0, les sels de zinc des ptéri- dines actives sont pratiquement insolubles, tandis que ceux des ptéridines inactives sont relativement solubles. _ De préférence, on part d'une solution de ptéridines fortement alcaline et on réalise simultanément l'ajustement du pH de cette solution à une valeur comprise entre 10,5 à 11,2, et la précipitation des impuretés par addition à. ladite solution, chaude ou froide, d'un sel acide de zinc. La solution peut alors être filtrée ou centrifugée, pour en éliminer les impuretés précipitées.
On peut ensuite ramener le pH clé la solu tion jusqu'à une valeur comprise entre 6,5 st 7,0 environ, en y ajoutant de nouvelles quan tités d'un sel acide de zinc ou par une addi tion d'acide. Dans ces conditions, le sel de zinc de l'acide ptéroylglutamique, par exem ple, présente une solubilité minimum et pré cipite.
La solubilité du ptéroy lglutamate de zinc n'augmentant que légèrement lorsque la tem pérature s'élève, tandis que celle des sels de zinc -des impuretés augmente plus fortement, il est donc préférable que la précipitation du ptéroy lglutamate de zinc ait lieu à chaud, de préférence entre 50 et 95 C environ.
Le ptéroylglutamate de zinc ainsi préci pité est déjà d'une pureté relativement élevée; cependant, il est en général utile de répéter le processus jusqu'à ce que la presque tota lité des impuretés ait été éliminée. Pour cela, on dissout ledit sel de zinc dans une solution aqueuse d'une base, telle que la soude caus tique, la chaux, l'hydrate de baryum, etc., à un .pH supérieur à 11,5. On peut alors sépa rer l'hydrate de zinc et autres substances in solubles par filtration et répéter l'opération de précipitation décrite plus haut..
Lorsqu'on juge avoir poussé l'épuration assez loin, on traite la. solution du sel de zinc par un acide pour ramener son pH en dessous de 5, de préférence à 3 environ, ce qui pré cipite l'acide ptéroy lglutamiquc libre. Le pro duit peut être séparé de sa liqueur mère et séché, ou bien incorporé à des produits phar maceutiques divers.
Bien que le présent. procédé soit particu lièrement utile en vue de l'épuration de l'acide ptéroy lglutamique, on a constaté qu'il est également intéressant en vue de la sépara tion d'autres ptéridines biologiquement actives telles que l'acide ptéroylglutamylglutamique, l'acide ptéroyldiglutamique, et autres amides d'aminoacides de l'acide ptéroique, des impu retés qui les accompagnent. On va maintenant décrire de façon géné rale une application du procédé à la purifi cation d'acide ptéroylglutamique.
De l'acide ptéroylglutamique, en mélange avec des ptéridines non identifiées et autres produits de la synthèse, est traité dans l'eau à une température comprise entre 25 et 75 C environ par de l'hydrate de calcium ou de baryum, à raison de deux ou trois parties au moins d'hydrate pour une partie d'acide ptéroylglutamique et de façon à obtenir une solution dont la concentration en acide ptéroylglutamique vrai est de 0,2 à 3,0 g par litre. Le pH de la solution doit être d'au moins 11,5. La solution est ensuite filtrée pour en éliminer les impuretés insolubles.
On ajoute alors au filtrat une solution de chlorure de zinc, de sulfate de zinc, d'acétate de zinc ou autre sel acide soluble de zinc, pour -en ramener le pH à une valeur comprise entre 10,5 et 11,2. La quantité de sel de zinc ajoutée doit être dosée avec précision, car lorsque le pH est inférieur à 10,5, une grande partie de l'acide ptéroylglutamique est per due, tandis que lorsque le pH dépasse 11,2, on n'arrive pas à éliminer les impuretés en quantité suffisante.
On filtre ensuite la solution pour en sépa rer les impuretés qui précipitent à la suite du traitement par le sel de zinc. On obtient une solution jaune limpide qui contient entre 6 5 et 901/o environ de l'acide ptéroy1glutami- que initial.
La solution chauffée est. portée à une tem pérature comprise entre 50 et 95 C et est traitée de nouveau par le sel de zinc ou par un acide pour en ramener le pH à une valeur comprise entre 6,5 et 7,0, le sel de zinc de l'acide ptéroylglutamique -étant alors préci pité de la solution.
Le sel de zinc précipité est soumis à une nouvelle purification, le cas échéant, par re- dissolution dans l'eau avec la soude caustique, le carbonate de sodium, l'hydrate de calcium, l'hydrate de baryum, ou une autre base, puis précipitation sous forme du sel de zinc comme on vient de le décrire. Dans certaines circons tances, il peut falloir jusqu'à cinq précipita- tions du sel de zinc, ou davantage, pour enle ver toutes les impuretés associées à 1-'acide ptéroylglutamique.
On dissout le sel de zinc final dans une solution d'hydrate de calcium ou de baryum et on la clarifie pour en éliminer les composés insolubles de zinc. On ajoute alors de la solu tion de chlorure de zinc pour réduire le pH à une valeur comprise entre 9,5 et 11,5 afin d'éliminer les dernières traces de pigment rouge, après quoi on filtre la solution et on la traite par uni acide pour précipiter l'acide ptéroylglutamique à un degré de pureté qui suffit à la plupart des applications.
Les exemples qui suivent se réfèrent à des exécutions précises du procédé de l'invention. <I>Exemple 1:</I> On dissout dans l'eau de l'acide ptéroyl- glutamique résultant de la réaction de la 2,1,5-triamino-6-hy droxypyrimidine de l'alpha- bêta-dibromopropionaldéhy de et de l'acide p-amino-benzoylglutamique, avec de la chaux à 60 sous une concentration de 1 g d'acide ptéroylglutamique vrai par litre et à un pH de 11,5 à 12,1. On filtre la solution pour en séparer .les sels de calcium insolubles et une partie des impuretés.
On ajoute au filtrat une solution de chlo- rure de zinc à 20 % pour en ramener le pH à 10,6-10,8 et l'on filtre de nouveau la solu tion pour obtenir une solution jaune limpide, contenant la plus grande partie de l'acide ptéroylglutamique initial.
On traite alors la solution du sel de zinc de l'acide ptéroylglutamique par une nouvelle quantité de la solution de chlorure de zinc, à une température de 80 C, pour en ramener le pH à 6,8, valeur pour laquelle le sel de zinc précipite de la solution.
On redissout le sel de zinc précipité avec de la chaux dans l'eau et l'on recommence cinq fois le processus que l'on vient de dé crire. La solution finale de sel de zinc à un pH de 10,6-10,8 est alors traitée par l'acide sulfurique jusqu'à un pH de 3 environ pour précipiter de l'acide ptéroylglutamique ayant un degré de pureté de 85 à 90 0/0.
Exemple <I>2:</I> On met en suspension 3 g d'acide ptéroyl- g 0# lutamique vrai sous la forme de 100 g de matière brute, dans un peu d'eau pour ob tenir une pâte homogène et l'on étend à 2000 cm3. On traite cette pâte par 40 cm' d'une solution normale de soude caustique, on la chauffe à 500 C et on étend encore à 3400 cm3.
On ajoute à cette solution, en agitant énergiquement 14 g de chlorure de calcium sous la forme d'une solution aqueuse à 15 0/0, de manière à ne pas modifier le pH de 11,7. On sépare par filtration le précipité de cou leur foncée et lave sur le filtre avec de l'eau froide.
On traite ce filtrat par une solution aqueuse à 10 0/0 :de chlorure de zinc jusqu'à un pH de 10,8, on ajoute 20 g d'adjuvant de filtrage et l'on sépare par filtration le pré cipité de couleur foncée.
0 traite le filtrat de couleur jaune clair par une solution aqueuse à 10 % de nitrate de plomb, jusqu'à un pH de 6,8. Après addi tion de 40 g d'adjuvant de filtrage, on chauffe la solution à 80\0 C et la filtre à chaud.
On dilue le tourteau de filtrage humide dans un litre d'eau et on le traite par de la saude caustique diluée jusqu'à ce qu'il donne une tache rose à peine sensible sur un papier à la Benzoazurine, puis on l'étend à 3 litres et on le traite par une solution de nitrate de plomb jusqu'à un pH de 7,5. On le chauffe alors à 800 C et l'on sépare l'insoluble par filtration. On soumet le tourteau de filtra tion trois fois à l'opération décrite ci-dessus, jusqu'à ce que sa teneur en ptéridines neutres soit inférieure à 15 gammas par ml.
Après le dernier traitement, on étend le tourteau humide dans 1,5 litre d'une solution de soude caustique 0,1 N et l'on sépare les insolubles par filtration. Après addition de 20 g d'adjuvant de filtrage, on ajuste le pli du filtrat à 3,2 par l'acide chlorhydrique. On recueille le précipité sur le filtre en même temps que l'adjuvant de filtrage. On traite ce tourteau par un excès de chaux dans 1500 cm' d'eau et on le filtre. On chauffe le filtrat à 850 C et on l'acidule jusqu'à un pli de 3 à 4 par l'acide acétique. L'acide ptéroylglutami- que précipite et on le recueille sur filtre après refroidissement, on le lave à l'eau -et à l'alcool et le sèche.
On obtient 1,4 g de ma tière ayant un degré de pureté de 86,5 010.
<I>Exemple 3:</I> On dissout 1884 g d'un produit. de réaction brut contenant 12,9 0/a d'acide ptéroylglutamyl- gluta.mique et obtenu par réaction du sulfate de 2,4,5-triamino-6-hy droxypyrimidine avec la dibromopropionaldéhyde et l'acide p-amino- benzoylglutamy lglutamique, dans 250 litres d'une solution 0,1 normale de soude caustique à. 600 C. Ensuite, on ajoute 500 g d'un adju vant de filtration à. base de terre de diatomées et encore 1350 g de chlorure de chaux dissous dans une petite quantité d'eau. Le mélange ainsi obtenu était ensuite filtré.
Aux 255 litres du filtrat contenant 0,759 mg d'acide ptéroyl- glutamy1glutamique par cm', on ajoute 2 kg d'adjuvant de filtrage et une solution conte- nant 20 % de chlorure de zinc jusqu'à un pH de 10,8-10,9. La température de la solution est maintenue à 400 C.
La suspension est filtrée et le filtrat, consistant en 267 litres contenant 0,570 mg d'acide ptéroy1glutamyl- glutamique par em3, est traité encore une fois avec 2 kg d'adjuvant de filtrage ainsi qu'avec une solution contenant 20 % de chlorure de zinc jusqu'à l'obtention d'un pH de 6,8. La suspension est de nouveau filtrée et le filtrat écarté.
Le tourteau de filtrage est traité dans 35 litres de soude caustique 0,1 N à une tem pérature de 400 C pendant 20 minutes. Après, on ajoute de l'acide chlorhydrique concentré jusqu'au pH 2,4 et refroidit la solution à une température de 100 C à l'aide de glace. La solution est ensuite filtrée et le tourteau con tenant l'adjuvant de filtrage et l'acide ptéroyl- glutamylglutamique est récupéré.
Le tourteau obtenu de cette façon est dis persé dans 2,8 litres d'eau et 280 cm3 de soude caustique 10 N à 500 C et ensuite filtré. Le tourteau est lavé deux fois en le disper- sant dans 4,2 litres d'eau et 100 cm' de soude caustique 10 N et en filtrant. Le filtrat est dilué à 14 litres à une température de 40" C. On ajoute rapidement 960 cm? d'acide chlor- hy drique concentré en agitant. La solution est ensuite refroidie un peu au-dessous de 0" C, pendant 3 heures, après quoi on ajoute 700g d'adjuvant de filtrage, filtre et lave le tourteau avec de l'eau.
Le tourteau de filtrage obtenu de cette taon est traité à 60" C avec 20 litres d'eau et 224 cm' de soude caustique 10 N, après quoi on ajoute 415 cm-" d'une solution de chlorure de calcium à 30 "/o et filtre la solu tion. Au filtrat, on ajoute à une température de 40" C 700 g d'adjuvant de filtrage et assez (le chlorure de zinc pour établir un pH de 10,85 dans la solution. La suspension est. fil trée et le filtrat traité avec assez d'acide chlorhydrique concentré pour dissoudre de nouveau le précipité formé préalablement. La solution est ensuite refroidie à une tempéra ture un peu au-dessous de 0" C pendant 3 heures, après quoi on récupère le précipité formé et le lave deux fois à l'eau en le dis persant chaque fois dans 1 litre d'eau.
Après avoir séché un petit échantillon dans le vide à 100"C, l'analyse chimique montra qu'il contenait 951/o d'acide ptéroylglutamyl- glutamique pur.
<I>Exemple 4:</I> De l'acide ptéroyl-y-glutamyl-y-glïitamyl- glutamique brut contenant 10,6 parties d'acide pur ainsi que les impuretés provenant clé la réaction, est mis en suspension dans 10 000 parties de soude caustique 0,1 N, et la température élevée à. 60" C. A cette solution on ajoute 260 parties d'une solution de chlo rure de calcium à 30 "/o et 100 parties d'adju vant de filtrage, après quoi on clarifie la solution par filtration.
Le filtrat est refroidi à 45" C et on y ajoute assez d'une solution de chlorure de zinc à 10 % pour abaisser le pH à 10,6-10,8. On ajoute encore 100 par ties d'adjuvant de filtrage et filtre.
Le pfr du filtrat obtenu est réglé à une valeur de 6,7 à 6,9 par addition de solution de chlorure de zinc à 10 % et on élève la température à 70" C. On ajoute de nouveau 100 parties d'adjuvant de -filtrage et filtre.
Le tourteau contenant le sel .de zinc de l'acide ptéroyl-y-glutamyl-y-glutamylglutamique dé siré est mis en suspension dans 1000 parties d'eau et assez de chaux pour que la solution donne une tache forte sur le papier à. la benzoazurine. La température est élevée à. 50" C et la solution clarifiée. On acidifie le filtrat à un pH de 2,5 à l'aide d'acide chlor hydrique concentré et on abaisse la tempéra ture à 5" C. On ajoute de nouveau de l'adju vant de filtrage et filtre la solution. Le tour teau de filtrage contient l'acide ptéroyl-y- glutamyl-y-glutamylglutamique débarrassé de la majeure partie des impuretés présentes dans le mélange de réaction brut.
Le produit peut être purifié plus à fond en répétant la précipitation à l'aide du sel de zinc, comme décrit phis haut.
A process for separating, in a solution, a pteridine from the impurities which accompany it. Pteroylglutamic acid is a chemical compound whose exact name is: N- [4- 1 [(2-amino-4-hydroxy-6-pyrimido [4; 5-b] pyrazyl) - methyl] -amino acid} -benzoy 1] -glutamic. This body is an adjuvant in the growth of various organisms and therefore has properties similar to those of vitamins and appears identical to natural folic acid.
This product is currently the subject of mass manufacture and is used to stimulate the formation of hemoglobin, as well as in the treatment of agranulocytosis; psilosis and other related diseases.
Various methods of preparing pteroylglutamic acid have been developed. Most of these methods are based on the simultaneous reaction of 2,4,5-triamino-6-hydroxy-pyrimidine, p-aminobenzoylglutamic acid and a suitable 3-carbon compound containing groups reacting aldehyde and / or halogenated elements, such as alpha-beta-dibromopropionaldehyde. Related products having properties similar or contrary to those of vitamins are prepared by similar processes,
starting from other amides of p-aminobenzoic acid.
Pteroylglutamic acid has a very complex molecule. The process by which this acid is formed is also complex. Many side reactions are likely to occur concurrently with or as a result of the main reaction. As a result, the crude reaction product in general contains a relatively considerable number and proportion of undesirable substances including unreacted intermediates, products of condensation and / or polymerization, isomers. position, oxidation products and other products of hydrolysis and degradation.
Many of these products contain a pyrimidopyrazine nucleus and exhibit physical and chemical characteristics similar to those of pteroyl-glutamic acid itself. Since pteroylglutamic acid is intended for therapy, it is desirable to separate the biologically inert pteridines which form in the reaction mixture.
Although various methods have been developed to separate pteroylglutamic acid from the related pteridines which are present in the crude reaction mixture, most of these methods are expensive or very complicated, requiring precise handling if the the aim is to achieve moderately satisfactory recovery of the pteroyl-glutamic acid. The object of the present invention is to provide a process making it possible to separate, in solution,
pteroylglutamic acid or other biologically active pteridines, inactive pteridines or other impurities, with relative ease and with relatively good yield. This process can easily be adapted to industrial production.
The process according to the invention for separating in a solution containing a pteridine corresponding to the general formula
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where R is the residue of an amino acid or of a peptide, said pteridine of the impurities which accompany it and in particular of pteridines of formula other than the formula above, is characterized in that one adds to this solution a soluble zinc salt and regulates the pH of the liquid to a value between 10.5 and 11.2, by separating the aforementioned materials, consisting essentially of said im purities in the form of combinations of zinc, with the .
solution which contains most of the desired pteridine in the form of a zinc salt, soluble, and ultimately regenerates this pteridine.
The process according to the invention is therefore based essentially on the differences in solubility exhibited by the zinc salts of the various pteridines present in the crude reaction mixture. The zinc salts of many inactive pteridines are practically insoluble at a pH between 10.5 and 11.2, while the zinc salt of pteroylglutamic acid or other active pteridines is moderately soluble at these values of the substance. pH.
In contrast, at pHs of about 6.5 to 7.0, the zinc salts of the active pteridines are practically insoluble, while those of the inactive pteridines are relatively soluble. _ Preferably, one starts with a solution of strongly alkaline pteridines and simultaneously carries out the adjustment of the pH of this solution to a value between 10.5 to 11.2, and the precipitation of the impurities by addition to. said solution, hot or cold, of an acid salt of zinc. The solution can then be filtered or centrifuged to remove the precipitated impurities.
The pH of the solution can then be brought back to a value of between about 6.5 and 7.0, by adding further quantities of an acid salt of zinc or by adding an acid. Under these conditions, the zinc salt of pteroylglutamic acid, for example, exhibits minimum solubility and precipitates.
The solubility of zinc pteroylglutamate increases only slightly with increasing temperature, while that of zinc salts - impurities increases more strongly, so it is preferable that the precipitation of zinc pteroylglutamate takes place when hot. , preferably between 50 and 95 C approximately.
The zinc pteroylglutamate thus precipitated is already of relatively high purity; however, it is generally useful to repeat the process until almost all of the impurities have been removed. For this, said zinc salt is dissolved in an aqueous solution of a base, such as caustic soda, lime, barium hydrate, etc., at a pH greater than 11.5. The zinc hydrate and other insoluble substances can then be separated by filtration and the precipitation operation described above can be repeated.
When we judge to have pushed the purification far enough, we treat it. solution of the zinc salt with an acid to bring its pH below 5, preferably to about 3, which precipitates the free pteroylglutamic acid. The product can be separated from its mother liquor and dried, or else incorporated into various pharmaceutical products.
Although the present. process is particularly useful for the purification of pteroylglutamic acid, it has been found that it is also useful for the separation of other biologically active pteridines such as pteroylglutamylglutamic acid, pteroyldiglutamic acid , and other amino acid amides of pteroic acid, of the impurities which accompany them. An application of the process to the purification of pteroylglutamic acid will now be described in general.
Pteroylglutamic acid, mixed with unidentified pteridines and other products of the synthesis, is treated in water at a temperature between 25 and 75 C approximately with calcium or barium hydrate, at a rate of at least two or three parts of hydrate for one part of pteroylglutamic acid and so as to obtain a solution in which the concentration of true pteroylglutamic acid is 0.2 to 3.0 g per liter. The pH of the solution should be at least 11.5. The solution is then filtered to remove the insoluble impurities therefrom.
A solution of zinc chloride, zinc sulphate, zinc acetate or other soluble acid salt of zinc is then added to the filtrate in order to bring the pH to a value between 10.5 and 11.2. The quantity of added zinc salt must be dosed with precision, because when the pH is less than 10.5, a large part of the pteroylglutamic acid is lost, while when the pH exceeds 11.2, one does not arrive. not to remove impurities in sufficient quantity.
The solution is then filtered in order to separate therefrom the impurities which precipitate following the treatment with the zinc salt. A clear yellow solution is obtained which contains between about 6 and 901% of the initial pteroylglutamic acid.
The heated solution is. brought to a temperature of between 50 and 95 C and is treated again with the zinc salt or with an acid to bring the pH to a value between 6.5 and 7.0, the zinc salt of pteroylglutamic acid then precipitates from the solution.
The precipitated zinc salt is subjected to further purification, if necessary, by re-dissolution in water with caustic soda, sodium carbonate, calcium hydrate, barium hydrate, or other base. , then precipitation in the form of the zinc salt as just described. In some circumstances, it may take up to five precipitations of the zinc salt, or more, to remove all of the impurities associated with pteroylglutamic acid.
The final zinc salt is dissolved in a solution of calcium or barium hydrate and clarified to remove insoluble zinc compounds therefrom. Zinc chloride solution is then added to reduce the pH to a value between 9.5 and 11.5 in order to remove the last traces of red pigment, after which the solution is filtered and treated with uni acid to precipitate pteroylglutamic acid to a degree of purity sufficient for most applications.
The examples which follow refer to precise executions of the process of the invention. <I> Example 1: </I> Pteroyl-glutamic acid resulting from the reaction of 2,1,5-triamino-6-hy droxypyrimidine of alpha-beta-dibromopropionaldehy is dissolved in water. and p-amino-benzoylglutamic acid, with lime 60 at a concentration of 1 g of true pteroylglutamic acid per liter and at a pH of 11.5 to 12.1. The solution is filtered to separate the insoluble calcium salts and some of the impurities.
A 20% solution of zinc chloride is added to the filtrate to bring the pH to 10.6-10.8 and the solution is filtered again to obtain a clear yellow solution, containing most of it. initial pteroylglutamic acid.
The solution of the zinc salt of pteroylglutamic acid is then treated with a new quantity of the zinc chloride solution, at a temperature of 80 ° C., to bring the pH back to 6.8, value for which the zinc salt precipitates from solution.
The precipitated zinc salt is redissolved with lime in water and the process described above is repeated five times. The final solution of zinc salt at a pH of 10.6-10.8 is then treated with sulfuric acid to a pH of approximately 3 to precipitate pteroylglutamic acid having a degree of purity of 85 to 90 0/0.
Example <I> 2: </I> We suspend 3 g of true pteroyl-g 0 # lutamic acid in the form of 100 g of crude material, in a little water to obtain a homogeneous paste and the 'we extend to 2000 cm3. This paste is treated with 40 cm 3 of a normal solution of caustic soda, it is heated to 500 ° C. and it is further extended to 3400 cm 3.
14 g of calcium chloride in the form of a 15% aqueous solution are added to this solution, with vigorous stirring, so as not to modify the pH of 11.7. The dark colored precipitate is filtered off and washed on the filter with cold water.
This filtrate is treated with a 10% aqueous solution of zinc chloride to a pH of 10.8, 20 g of filter aid are added and the dark-colored precipitate is filtered off. .
0 treats the light yellow filtrate with a 10% aqueous solution of lead nitrate, to a pH of 6.8. After addition of 40 g of filter aid, the solution is heated to 80 ° C. and filtered while hot.
The wet filter cake is diluted in a liter of water and treated with diluted caustic salt until it gives a barely noticeable pink stain on a Benzoazurine paper, then it is spread over. 3 liters and treated with a solution of lead nitrate to a pH of 7.5. It is then heated to 800 ° C. and the insoluble material is separated by filtration. The filter cake is subjected three times to the operation described above, until its content of neutral pteridines is less than 15 gammas per ml.
After the last treatment, the wet cake is spread in 1.5 liters of a 0.1 N caustic soda solution and the insolubles are separated by filtration. After addition of 20 g of filter aid, the fold of the filtrate is adjusted to 3.2 with hydrochloric acid. The precipitate is collected on the filter along with the filter aid. This cake is treated with an excess of lime in 1500 cm 3 of water and filtered. The filtrate is heated to 850 ° C. and acidified to a fold of 3 to 4 with acetic acid. The pteroylglutamic acid precipitates and is collected on a filter after cooling, washed with water and alcohol and dried.
1.4 g of material are obtained having a degree of purity of 86.5 010.
<I> Example 3: </I> 1884 g of a product are dissolved. reaction mixture containing 12.9 0 / a of pteroylglutamylglutamic acid and obtained by reacting 2,4,5-triamino-6-hy droxypyrimidine sulfate with dibromopropionaldehyde and p-amino-benzoylglutamy lglutamic acid , in 250 liters of a 0.1 normal solution of caustic soda. 600 C. Next, 500 g of a filter aid is added to. base of diatomaceous earth and another 1350 g of chloride of lime dissolved in a small amount of water. The mixture thus obtained was then filtered.
To 255 liters of the filtrate containing 0.759 mg of pteroyl-glutamylglutamic acid per cm 3, 2 kg of filter aid and a solution containing 20% zinc chloride are added to a pH of 10.8-10. , 9. The temperature of the solution is maintained at 400 C.
The suspension is filtered and the filtrate, consisting of 267 liters containing 0.570 mg of pteroy1glutamylglutamic acid per em3, is treated again with 2 kg of filter aid as well as with a solution containing 20% zinc chloride. until a pH of 6.8 is obtained. The suspension is filtered again and the filtrate discarded.
The filter cake is treated in 35 liters of 0.1N caustic soda at a temperature of 400 ° C. for 20 minutes. Concentrated hydrochloric acid is then added to pH 2.4 and the solution is cooled to a temperature of 100 ° C. using ice. The solution is then filtered and the cake containing the filter aid and pteroyl-glutamylglutamic acid is recovered.
The cake obtained in this way is dispersed in 2.8 liters of water and 280 cm3 of 10 N caustic soda at 500 ° C. and then filtered. The cake is washed twice by dispersing it in 4.2 liters of water and 100 cm 3 of 10 N caustic soda and filtering. The filtrate is diluted to 14 liters at a temperature of 40 ° C. 960 cm 2 of concentrated hydrochloric acid is added rapidly with stirring. The solution is then cooled to a little below 0 ° C. for 3 hours. , after which 700g of filter aid is added, filtered and the cake washed with water.
The filter cake obtained from this horsefly is treated at 60 "C with 20 liters of water and 224 cc of 10 N caustic soda, after which 415 cc of a 30" solution of calcium chloride is added. o and filter the solution. To the filtrate are added at a temperature of 40 ° C 700 g of filter aid and enough (zinc chloride to establish a pH of 10.85 in the solution. The suspension is. and the filtrate treated with enough concentrated hydrochloric acid to dissolve again the precipitate formed beforehand. The solution is then cooled to a temperature a little below 0 ° C for 3 hours, after which the precipitate formed is recovered. and wash it twice with water, dispersing it each time in 1 liter of water.
After drying a small sample in vacuum at 100 ° C, chemical analysis showed that it contained 951% of pure pteroylglutamylglutamic acid.
<I> Example 4: </I> Crude pteroyl-y-glutamyl-y-gliitamylglutamic acid containing 10.6 parts of pure acid as well as the impurities resulting from the reaction, is suspended in 10. 000 parts of 0.1 N caustic soda, and the temperature raised to. 60 ° C. To this solution are added 260 parts of a 30% solution of calcium chloride and 100 parts of filter aid, after which the solution is clarified by filtration.
The filtrate is cooled to 45 ° C and enough of a 10% zinc chloride solution is added to lower the pH to 10.6-10.8. A further 100 parts of filter aid is added and filtered. .
The pfr of the filtrate obtained is adjusted to a value of 6.7 to 6.9 by adding 10% zinc chloride solution and the temperature is raised to 70 ° C. 100 parts of adjuvant are added again. filtering and filtering.
The cake containing the desired zinc salt of pteroyl-y-glutamyl-y-glutamylglutamic acid is suspended in 1000 parts of water and enough lime so that the solution gives a strong stain on the paper. benzoazurine. The temperature is raised to. 50 ° C and the solution clarified. The filtrate is acidified to a pH of 2.5 with concentrated hydrochloric acid and the temperature is lowered to 5 ° C. Further additive is added. filtering and filtering the solution. The filter tower contains pteroyl-y-glutamyl-y-glutamylglutamic acid freed from most of the impurities present in the crude reaction mixture.
The product can be further purified by repeating the precipitation using the zinc salt, as described above.