5 10 15 20 25 30 CA 03029072 2018-12-21 WO 2017/220948 PCT/FR2017/051703 1 CASSETTE ET AUTOMATE DE CULTURE CELLULAIRE La presente invention se rapporte a une cassette de culture cellulaire, ainsi qu’a un automate de culture cellulaire utilisant ladite cassette. L'invention porte ainsi ici sur un dispositif pour la culture cellulaire, notamment, designe sous Ie nom de cassette. Parmi les domaines faisant appel a la culture cellulaire, celui de la therapie cellulaire est Ie moins avance en termes d’industrialisation. II existe done un besoin important de trouver une technologie capable de produire des cellules en quantite suffisante et dans des conditions optimales et securisees en vue de I’utilisation de ces cellules pour des applications therapeutiques. Certains procedes de therapie cellulaire necessitent une culture ou amplification de cellules souches avant leur reinjection chez un patient, car les quantites prelevees sont parfois insuffisantes pour avoir un effet therapeutique. II est indispensable de garantir I’integrite des proprietes therapeutiques des cellules pendant leur culture. Dans la technique actuelle, les solutions proposees pour cultiver les cellules souches ex vivo sont artisanales, tres empiriques et peu efficaces. De plus, la technique actuelle ne permet pas de produire des cellules souches en quantite suffisante pour des applications therapeutiques. II existe done un reel besoin de developper une technologie du type bioreacteur ayant une geometrie compacte et permettant de cultiver des cellules en grande quantite. L’automation des procedes d’expansion de cellules souches pour des applications de production dans un cadre therapeutique ou Clinique necessite des dispositifs de production de cellules capables de fonctionner dans des zones d’activites controlees (salle blanche), en reduisant au maximum I’intervention humaine. Les procedes de culture de cellules souches sont relativement complexes car ils mettent en oeuvre de multiples etapes d’obtention de ces cellules a partir d’un prelevement issu d’un5 10 15 20 25 30 CA 03029072 2018-12-21 WO 2017/220948 PCT/FR2017/051703 2 patient, d’isolement des cellules, de purification avant mise en culture et enfin de collecte, de purification et de conditionnement apres culture avant envoi vers les centres de traitements cliniques. L’ensemble de ces etapes doit se faire dans Ie respect de normes de fabrication imposant des conditions de sterilite et de trapabilite strictes. La multiplication des etapes de fabrication, souvent manuelles necessitent (’utilisation de zones de confinement de classes differentes afin de maintenir la sterilite du procede. La bonne conduite du procede de preparation avant et apres la culture implique souvent Ie transfer! des produits intermediates du procede d’une zone a une autre, augmentant a la fois les risques de perte de sterilite et de melange des flux de production. On connait par exemple un systeme de culture cellulaire tel que celui decrit dans Ie document US2012/0308531. La realisation de cultures en continue destinees a la production de cellules souches s’effectue au moyen d’un systeme complexe de sous-ensembles amenant les differents reactifs, cellules et gaz au reacteur. La demanderesse a egalement propose un automate de culture cellulaire automatise dans Ie document WO/2013/135817. Si la culture cellulaire est effectuee au sein d’une seule et meme poche, la manipulation de celle-ci peut s’averer delicate du fait de sa structure souple. L’invention a notamment pour but d’apporter une solution simple, efficace et economique aux problemes de I’art anterieur decrit precedemment. A cet effet, elle propose une cassette de culture cellulaire comprenant : - un boTtier au moins partiellement rigide et definissant interieurement un espace interieur dans lequel est agencee et fixee une poche de culture cellulaire definissant un volume interieur, - des conduits relies chacun a une extremite au volume interieur de la poche et ayant chacun une seconde extremite situee a I’exterieur du boTtier, et5 10 15 20 25 30 CA 03029072 2018-12-21 WO 2017/220948 PCT/FR2017/051703 3 - des vannes d’ouverture/fermeture de la circulation de fluide au travers des conduits qui sont montees sur Ie boTtier. La manipulation de la poche et des vannes s’effectue au travers du boTtier de la cassette. Seules les secondes extremites des conduits necessitent une manipulation directe. Selon I’invention, la cassette ou dispositif de culture cellulaire integre tous les elements susceptibles de poser une difficulte en termes de sterilite et dont la manipulation directe doit etre limitee. Ces elements sont preassembles dans une cassette de culture cellulaire a usage unique. Apres utilisation, il est possible d’eliminer selon les regies de bonnes pratiques I’ensemble des conduits, vannes et poche de culture utilises. De preference, I’integration d’une poche souple dans un boTtier au moins partiellement rigide facilite grandement la manipulation de la poche qui est ainsi retenue dans Ie boTtier. De meme, I’integration des vannes dans Ie boTtier permet de faciliter Ie reperage des positions des vannes qui peuvent des lors etre plus aisement manipulees par des moyens de commande d’un incubateur comme cela apparaitra dans la suite de la description. La solution d’integration des vannes dans la cassette fluidique comme moyen d’occlusion des conduits de la cassette permet d’ameliorer I’automatisation de I’utilisation de la cassette dans un procede de culture cellulaire en evitant I’utilisation d’une part des « clamps » en plastique, souvent fragilises lors d’une etape de congelation, et manoeuvrables uniquement a la main, ou d’autre part d’electrovannes a pincement necessitant la mise en place manuelle des conduits dans la machoire de I’electrovanne. Cette solution permet done d’eviter la manipulation des conduits, et les erreurs liees a la mauvaise insertion des conduits dans les electrovannes. La cassette au sein de laquelle la poche comprend un milieu de culture cellulaire peut etre congelee aussi longtemps que necessaire. Selon une autre caracteristique de I’invention, les conduits sont formes par des tubulures souples et au moins certaines des vannes5 10 15 20 25 30 CA 03029072 2018-12-21 WO 2017/220948 PCT/FR2017/051703 4 comprennent un organe mobile de pincement de la tubulure sur un element de structure du boTtier. Comme decrit precedemment, I’integration des vannes dans la casette permet de garder de fagon autonome et securisee les voies fermees (temps de stockage ou culture) pendant un temps voulu sans que cela ne necessite d’energie exterieure. Selon encore une autre caracteristique de I’invention, chaque organe mobile comprend un axe de rotation et la Peripherie radialement externe de chaque organe mobile comprend au moins une surface en spirale autour de I’axe de rotation formant une surface de pincement de la tubulure de maniere a faire varier une section de passage de fluide au travers d’une tubulure au fur et a mesure de la rotation de I’organe. Avantageusement, les vannes sont aptes a conserver une position donnee. Plus specifiquement, les vannes sont conformees de maniere a ce que les organes mobiles puissent conserver une position donnee d’ouverture ou de fermeture en I’absence d’apport d’energie. Encore plus particulierement, cela peut etre obtenu en faisant en sorte que la perpendiculaire au point de contact de la surface en spirale avec une tubulure soit orientee vers I’axe de rotation de I’organe mobile, ce qui induit un couple nul autour dudit axe. Dans une realisation particuliere, les organes mobiles sont montes dans des logements d’une platine solidaire du boTtier, chaque logement recevant un organe mobile. Lorsque Ie boitier est realise en deux demicoque inferieure et superieure, il est ainsi possible de monter la poche de culture cellulaire sur la demi-coque inferieure, de monter les organes mobiles de pincement des tubulures sur la demi-coque inferieure puis de monter la platine qui assure un maintien simultane des organes mobiles. La platine peut etre, par exemple, solidarisee par exemple par vissage, a la demi-coque inferieure. La platine permet ainsi de securiser et de faciliter I’assemblage des differentes pieces precitees. Elle permet de garantir Ie maintien des vannes.5 10 15 20 25 30 CA 03029072 2018-12-21 WO 2017/220948 PCT/FR2017/051703 5 Chaque organe mobile comprend une extremite accessible depuis I’exterieur du boTtier et pourvue de premiers moyens d’accouplement en rotation destines a cooperer avec des seconds moyens d’accouplement en rotation d’un actuateur qui peut etre electromecanique. L’acces aux organes mobiles des vannes depuis I’exterieur rend possible Ie montage de la cassette sur un support adequat d’un incubateur comportant des seconds moyens d’accouplement par exemple complementaires pour I’entrainement en rotation des premiers moyens d’accouplement des vannes pour realiser une ouverture/fermeture de la circulation de liquide selon les besoins. Cette accessibilite externe rend possible la manipulation manuelle des vannes en cas de defaillance des moyens d’entrainement des vannes. Preferentiellement, les organes mobiles sont centres et guides a rotation a une extremite dans un orifice du boTtier et a une extremite opposee dans un orifice de la platine. Lorsque Ie boTtier est forme de deux demi-coques, la platine peut etre serree a I’interieur du boTtier entre ces deux demi-coques. Selon une autre caracteristique de I’invention, la poche presente une forme sensiblement parallelepipedique comportant une premiere paroi souple et une seconde paroi souple sensiblement paralleles I’une a I’autre a I’etat vide et a I’etat remplit de liquide. La forme parallelepipedique est sensiblement plane de sorte que I’epaisseur mesuree entre la premiere et la seconde parois, dans une premiere direction sensiblement perpendiculaire aux premieres et secondes parois, est tres faible, c’est-a-dire tres nettement inferieure aux deux autres dimensions de la poche mesurees dans les deux autres directions de I’espace perpendiculaires I’une a I’autre et a ladite premiere direction. On entend par « tres nettement inferieur » au moins 10 fois inferieur comme il est communement admis en mathematique. De preference, Ie rapport de la somme des surfaces de la premiere paroi et de la seconde paroi sur Ie volume interne total de la poche est5 10 15 20 25 30 CA 03029072 2018-12-21 WO 2017/220948 PCT/FR2017/051703 6 compris entre 500 et 690 cm2/L, de preference est de I’ordre de 580 cm2/L. Ce ratio assure un echange de chaleur optimal entre la poche flexible et I’exterieur lorsque la cassette est agencee dans un incubateur a enceinte thermostatee. La distance separant la premiere paroi de la seconde paroi ou epaisseur de la poche a I’etat remplit de liquide, mesuree selon une direction perpendiculaire aux premiere et seconde parois, est avantageusement inferieure a 20 mm, de preference compris entre 10 et 20 mm et encore plus preferentiellement de I’ordre de 14 mm. L’utilisation d’une faible epaisseur permet encore de faciliter la diffusion de chaleur au sein du liquide de la poche. Cela permet egalement une congelation et une decongelation uniforme des differents constituants du milieu de culture, qui plus est rapide a temperature constante. La poche selon I’invention permet de maintenir la stabilite du milieu de culture lors d’une etape de congelation par surgelation. En effet, une vitesse de congelation elevee des produits biologiques derives du sang est une garantie de preservation des constituants, d’homogeneite du milieu apres decongelation, et d’absence d’effet de concentration des seis et des proteines en solution au cceur de la masse congelee. La poche selon I’invention favorise une surgelation rapide du milieu de culture grace a sa geometrie particuliere ayant un rapport surface I volume eleve, et une faible epaisseur. Selon une autre caracteristique de I’invention, les parois de la poche sont permeables aux gaz, en particulier au CO2, et ont de preference des proprietes limitant au maximum I’adherence des cellules avec les parois de la poche. La poche est de preference souple, c’est-a-dire deformable. Elle comprend, de preference, des parois souples permeables aux gaz et aptes a retenir Ie milieu de culture et son expansion cellulaire qui est liquide. En pratique, il s’agit de retenir tout liquide contenu dans la poche. Elle presente de preference une bonne permeabilite a I’oxygene et au dioxyde5 10 15 20 25 30 CA 03029072 2018-12-21 WO 2017/220948 PCT/FR2017/051703 7 de carbone, ce qui permet une bonne aeration du contenu de la poche sans ouverture de celle-ci et done sans risque de contamination de son contenu. Dans une realisation particuliere de I’invention, la poche comprend les caracteristiques suivantes de permeabilite (en cm3 par jour sous une pression d’une atmosphere, e’est-a-dire 1 bar, a 37°C) : pour Ie dioxygene 418 a 508, pour Ie dioxyde de carbone 699 a 1200, pour Ie diazote 157 a 200 et pour I’eau 0,05 a 0,1. La poche est par exemple formee d’un film mince qui peut etre realise en copolymere tel que du fluoropolymere et plus particulierement du fluoro-ethylene-propylene pouvant avoir une epaisseur par exemple de I’ordre 120pm. Dans une realisation preferee, la poche a une forme sensiblement parallelepipedique de faible epaisseur pouvant atteindre une largeur de 230 a 250 mm maximum a plat et une longueur de 230 a 250 mm a plat. L’utilisation d’un materiau appartenant a la famille des fluoropolymeres presente I’avantage d’etre permeable aux gaz et egalement de presenter une faible adherence par rapport aux liquides. Le boTtier presente de preference une forme correspondant sensiblement a celle d’un parallelepipede rectangle et peut comporter une demi-coque inferieure et une demi-coque superieure solidaires I’une de I’autre, la demie-coque inferieure etant rigide et la demi-coque superieure etant rigide ou flexible. Ainsi, le boTtier peut presenter une forme egalement sensiblement plane presentant une tres faible epaisseur en comparaison de sa longueur et de sa largeur. Le boTtier peut etre realise dans tout materiau thermoplastique elastomere tels que du SEBS designant du Styrene-Ethylene-ButadieneStyrene. La demi-coque inferieure peut etre rigide pour assurer un maintien optimal de la poche flexible tandis que la demi-coque superieure peut etre partiellement rigide et comporter une ou plusieurs zones flexibles realisees dans un materiau elastomere de maniere a faciliter la prehension et une5 10 15 20 25 30 CA 03029072 2018-12-21 WO 2017/220948 PCT/FR2017/051703 8 certaine deformabilite pour faciliter Ie montage de la cassette dans les moyens de support et d’agitation qui sera presente ci-apres. Bien evidemment, la demi-coque superieure peut egalement etre totalement rigide comme la demi-coque inferieure. Les deux demi-coques inferieure et superieure peuvent etre assemblies par clipsage, collage ou soudure de leurs rebords peripheriques. Les demi-coques peuvent avoir la meme epaisseur ou des epaisseurs differentes. Dans une realisation preferee de (’invention, la demi-coque superieure peut comprendre une ouverture ou evidement central dont la forme et la dimension sont determinees pour permettre la propagation d’une ondulation du liquide de la poche dans I’ouverture lorsque la cassette contenant un liquide subit une oscillation autour d’un axe horizontal, I’ouverture etant disposee vers Ie haut. La formation d’une ondulation est souhaitable pour realiser une homogeneisation rapide du liquide de la poche. La formation d’un evidement, qui pourrait encore etre qualifie de decoupe ou d’ajour, evite ainsi d’avoir a augmenter I’epaisseur du boTtier. Get evidement assure egalement une meilleure diffusion des gaz au contact de la poche. II peut avoir une dimension d’environ 210 mm de large et de I’ordre de 28 mm de long. Preferentiellement, la demi-coque inferieure comprend une pluralite d’orifices, ayant de preference un diametre par exemple inferieur a 20 mm. L’integration d’orifices permet de faciliter Ie transfer! de gaz de maniere similaire a I’ouverture de la demi-coque superieure mais assure egalement un maintien de la poche sur la demi-coque inferieure. Dans une realisation pratique de (’invention, la demi-coque inferieure peut comprendre environ 50 et 400 orifices ayant chacun un diametre compris entre 5 et 20 mm, par exemple de I’ordre de 10 mm. Les orifices peuvent etre repartis selon un maillage ayant un motif de base qui est celui d’un triangle equilateral de longueur unitaire comprise entre 5 et 40 mm et par exemple de 20 mm.5 10 15 20 25 30 CA 03029072 2018-12-21 WO 2017/220948 PCT/FR2017/051703 9 Dans une realisation de la cassette selon I’invention, les conduits s’etendent au travers de I’un des rebords peripheriques de I’une des demicoques inferieure ou superieure. Les conduits peuvent etre loges dans des encoches de I’un des rebords peripheriques de I’une demi-coques inferieure ou superieure. La cassette comprend, de preference, une barrette de support des conduits, agencee a I’exterieur du boTtier et traversee par au moins certains des conduits. Cette barrette permet Ie support des conduits qui s’etendent a I’exterieur du boftier de la cassette, ce qui limite les mouvements intempestifs des extremites libres des conduits. De plus, Ie support est destine a former un element de passage etanche de la porte d’un incubateur comme cela apparaitra mieux dans la suite de la description. La cassette comprend de preference un milieu de culture cellulaire stocke dans la poche, Ie milieu de culture cellulaire pouvant etre a I’etat congele. Le milieu de culture cellulaire peut etre un milieu de culture cellulaire dont la composition est adaptee a la multiplication de cellules de mammifere, en particulier de cellules humaines, a I’exclusion des cellules souches embryonnaires humaines. Le milieu de culture peut comprendre, ou ne pas comprendre, de cellules en culture. Ces cellules, en particulier ces cellules humaines, a I’exclusion des cellules souches embryonnaires humaines, peuvent avantageusement etre, ou comprendre, des cellules CD34+ (humaines), en particulier des cellules hematopoietiques CD34+ (humaines) ou des cellules CD34+ nonhematopoTetiques (humaines). Ces cellules CD34+ (humaines) peuvent par exemple etre des cellules du sang peripherique (humain) ou du cordon ombilical (humain) ou d’un tissu humain, en particulier du sang peripherique (humain). Ces cellules, en particulier ces cellules humaines, a I’exclusion des cellules souches embryonnaires humaines, peuvent avantageusement etre,5 10 15 20 25 30 CA 03029072 2018-12-21 WO 2017/220948 PCT/FR2017/051703 10 ou comprendre, des cellules souches ou progenitrices, en particulier des cellules multipotentes ou pluripotentes. Ces cellules ne sont pas, ou ne comprennent pas, de cellules embryonnaires humaines. Ce milieu de culture cellulaire peut notamment comprendre des composants qui autorisent la multiplication de ces cellules, plus particulierement qui autorisent leur multiplication tout en les maintenant dans un etat non differencie, ou a tout Ie moins tout en ne leur faisant pas atteindre un etat de differentiation terminale. Ce milieu de culture cellulaire peut comprendre de I’insuline, de la transferrine et du plasma ou serum (humain). Ce milieu de culture cellulaire peut comprendre des cellules support (feeder cells), telles que des fibroblastes, ou en etre depourvu. Ce milieu de culture cellulaire peut par exemple etre, ou comprendre, Ie milieu de Dulbecco modifie par Iscove (milieu Iscove’s Modified Dulbecco’s Medium ou IMDM ; voir, par exemple, Iscove, N.N. and Melchers, F. (1978) J. Exper. Med., 147:923), optionnellement complemente en glutamine ou en peptides contenantde la glutamine. Plus particulierement, ce milieu de culture cellulaire peut etre, ou comprendre, Ie milieu IMDM, optionnellement complemente en glutamine ou en peptides contenant de la glutamine, ce milieu etant depourvu de fibroblastes et comprenant de I’insuline (recombinante) humaine, de la transferrine (humaine) et du plasma ou serum (humain). Par exemple, Ie milieu de culture peut comprendre : - de 1 a 50 pg/mL, en particulier de 8 a 12 pg/mL, d’insuline, -de 100 a 2000 pg/mL, en particulier de 300 a 500 pg/mL, de transferrine, et -de 1 a 30%, en particulier de 4 a 12%, de serum ou plasma (humain). Le milieu de culture peut en outre comprendre de I’heparine, par exemple de 1,5 a 3,5 ILI/mL d’heparine.5 10 15 20 25 Date Re^ue/Date Received 2023-10-12 11 Le milieu de culture peut en outre comprendre de I’erythropoTetine, notamment de I’erythropoTetine (recombinante) humaine. Le milieu de culture peuten outre comprendre un ou plusieursfacteurs de croissance, notamment un ou plusieurs facteurs de croissance choisis parmi I’hydrocortisone, le SCF (Stem Cell Factor), I’interleukine 3 (IL-3), la thrombopoietine (TOP), la FLT3 (Fms-like tyrosine kinase 3), la BMP4 (Bone Morphogenetic Protein 4), la VEGF-A 165 (Vascular endothelial growth factor A 165), et l’IL-6. Le milieu de culture peut notamment comprendre - de I’hydrocortisone, ou - du SCF, ou - du SCF et de l’IL-3, ou - de I’hydrocortisone et du SCF, ou - de I’hydrocortisone, du SCF et de l’IL-3, ou - du SCF, de la TOP, de la FLT3, de la BMP4, de la VEGF-A165, de l’IL-3 et de l’IL-6. Le milieu de culture peut notamment etre un milieu de culture tel que decrit dans WO 2011/101468 (ou dans I’une des demandes de brevets US qui sont issues de, ou basees sur, cette demande internationale PCT, telle que notamment la demande US 2013/0078721 A1). La cassette peut comprendre le milieu de culture et/ou des cellules tels que ci-dessus decrits. Selon un mode de realisation, la cassette comprend le milieu de culture dans la poche, plus particulierement sous forme congelee, mais ne comprend pas de cellules. Selon un autre mode de realisation, la cassette comprend le milieu de culture dans la poche, plus particulierement sous forme non congelee, et comprend en outre des cellules, en particulier des cellules en culture, notamment des cellules CD34+ (humaines) telles que ci-dessus decrites.5 10 15 20 25 Date Re^ue/Date Received 2023-10-12 12 L’invention concerne encore un incubateur de culture cellulaire, comprenant une enceinte thermostatee et un dispositif de support et d’agitation d’une cassette de culture cellulaire selon I’un des modes de realisation precedent et des moyens de positionnement et de blocage de la cassette de culture cellulaire dans une position donnee dans Ie dispositif de support. Dans une realisation, Ie dispositif de support et d’agitation comprend un plateau de support de la cassette de culture cellulaire qui est monte rotatif autour d’un axe horizontal autour duquel Ie plateau est destine a osciller pour I’agitation et I’homogeneisation du contenu de la poche. Le dispositif de support et d’agitation peut comprendre une bielle dont une extremite superieure est reliee par I’intermediaire d’un oscillateur au plateau et dont I’extremite inferieure est reliee a une manivelle entrainee en rotation par I’arbre d’un moteur dont I’axe est sensiblement horizontal. L’incubateur peut comprendre des moyens de controle de la position de la cassette de culture cellulaire dans les moyens de support de maniere a verifier que la cassette est convenablement positionnee sur les moyens de support et que celle-ci peut etre utilisee. Le plateau peut porter des actuateurs electromecaniques d’ouverture/fermeture des vannes dont une sortie porte des seconds moyens d’accouplement destines a cooperer avec des premiers moyens d’accouplement des vannesde la cassette lorsque la cassette est dans ladite position donnee. Selon une autre caracteristique de l’invention, l’incubateur comprend une porte de fermeture etanche d’une ouverture de I’enceinte, cette ouverture comprenant un bord peripherique dans lequel est forme un renfoncement dont la forme est adaptee a recevoir la barrette de support des conduits, la barrette formant un organe d’etancheite entre la porte et le bord peripherique lorsque la porte est en position de fermeture de I’enceinte.5 10 15 20 25 30 CA 03029072 2018-12-21 WO 2017/220948 PCT/FR2017/051703 13 L’integration d’une barrette de support des conduits permet de realiser de maniere simple et rapide I’operation de positionnement des conduits au niveau du passage de porte. En effet, contrairement a la technique connue qui consiste a integrer des gorges de logement des conduits directement dans Ie bord peripherique, et a les disposer une a une dans des gorges, I’invention propose de realiser un montage de tous les conduits en une seule etape. De plus, I’etancheite est realisee sur la barrette et non plus sur les conduits, ce qui permet de simplifier la realisation de la fermeture etanche puisque cette barrette peut presenter une structure rigide sur laquelle la porte peut venir s’appuyer. L’invention concerne egalement un automate de culture cellulaire comprenant au moins un incubateur du type decrit ci-dessus, et un systeme informatique de commande incluant des moyens de saisie et d’enregistrement de donnees et destine a reguler les conditions de culture dans une enceinte dudit au moins un incubateur et a piloter les vannes de la cassette logee dans I’enceinte. L’invention concerne egalement un procede de culture cellulaire au moyen d’un automate decrit ci-dessus, Ie procede comprenant les etapes consistant a : a) placer une cassette de culture cellulaire telle que decrite precedemment a I'interieur de I’enceinte de I'incubateur dans une position de decongelation sur Ie dispositif de support et d'agitation ; b) alimenter la poche en cellules a cultiver ; c) placer la cassette sur Ie dispositif de support et d’agitation dans une position de culture cellulaire ; d) agiter la cassette de culture cellulaire durant une periode de temps donnee pour homogeneiser son contenu ; e) maintenir la cassette de culture cellulaire dans des conditions d’incubation pendant une duree de plusieurs jours ; et f) recuperer Ie contenu de la cassette au moyen de I’une des tubulures de la cassette.5 10 15 20 25 30 CA 03029072 2018-12-21 WO 2017/220948 PCT/FR2017/051703 14 Le procede comprend encore : - pendant I’etape d), une ou plusieurs etapes de prelevement d’echantillon du contenu de la poche, qui sont chacune precedees d’une etape de basculement du plateau de support d’une position horizontale de culture jusqu’a une position inclinee dans laquelle la zone de prelevement de la poche represente le point le plus bas de la poche. L’invention sera mieux comprise et d’autres details, avantages et caracteristiques de l’invention apparaTtront a la lecture de la description suivante faite a titre d’exemple non limitatif, en reference aux dessins annexes dans lesquels : - la figure 1 est une vue schematique en perspective de I’automate de culture cellulaire selon l’invention, cet automate comportant un incubateurs definissant une enceinte thermostatee qui est ouverte ; - la figure 2 est une vue schematique en perspective et isolee de I’incubateur ; - lesfigures3A et 3B sont des vues schematiquesde cotedesmoyens de support et d’agitation et de la cassette ; - la figure 4 est une vue schematique en perspective des moyens de support et d’agitation et de la cassette ; - la figure 5 est une vue schematique du dessus de la cassette reposant sur les moyens de support et d’agitation ; - les figures 6A a 6C representent differentes positions d’utilisation de la cassette dans I’enceinte thermostatee de I’automate ; - la figure 7 une vue schematique en perspective de la cassette selon l’invention, en direction de la demi-coque superieure ; - la figure 8 une vue schematique en perspective de la cassette selon l’invention, en direction de la demi-coque inferieure ; - la figure 9 est une vue schematique a plus grande echelle de la zone delimitee en pointillee sur la figure 8 ;5 10 15 20 25 30 CA 03029072 2018-12-21 WO 2017/220948 PCT/FR2017/051703 15 - la figure10estunevue schematiqueen perspectivedela cassettede la figure 7, la demi-coque superieure etant retiree ; - la figure 11 est une vue schematique en perspective et isolee de la demi-coque inferieure, - la figure 12 est une vue schematique en perspective a plus grande echelle de la zone delimitee pointillee sur la figure 11 ; - les figures 13 et 14 sont des vues schematiques en perspective de la demi-coque superieure ; - la figure 15A est une vue schematique en perspective d’une platine de reception des vannes d’ouverture/fermeture des conduits de la cassette ; - lesfigures 15B et 15C sont des vues schematiques en perspective et a plus grande echelle d’une partie seulement de la platine de la figure 15A; - lesfigures 16A, 16B et 16C representent une premiere variante d’une vanne utilisable avec la platine de la figure 15A ; - lesfigures17A et17Brepresententune seconde varianted’unevanne utilisable avec la platine de la figure 15A ; - la figure 18 est une vue schematique en perspective de moyens d’entrainement en rotation de la vanne des figures 16A, 16B et 16C ; - lesfigures 19A et 19B sont des vues schematiques enperspectived’un organe d’actionnement de la vanne des figures 17A et 17B ; - la figure 20 est une vue schematique en perspective d’un systeme de culture cellulaire forme d’une pluralite d’incubateurs et d’une centrifugeuse - lafigure21estunorganigrammemontrantdesetapesd’unprocedede culture cellulaire selon I’invention. On se refere tout d’abord aux figures 1 et 2 qui representent un exemple de realisation de I’automate 10 de culture cellulaire selon I’invention, cet automate 10 etant par exemple destine a la culture de5 10 15 20 25 30 CA 03029072 2018-12-21 WO 2017/220948 PCT/FR2017/051703 16 cellules souches, a I’exclusion des cellules souches embryonnaires humaines. Comme represents, I’automate 10 comprend essentiellement trois elements : - un incubateur 12 a enceinte thermostatee comprenant un dispositif de support et d’agitation 14 d’une cassette de culture cellulaire 16 selon I’invention (figures 1 et 3) ; - un bati 18 de support de I’incubateur 12 et d’une centrifugeuse 20, et - un systeme informatique relie a I’incubateur 12 et a la centrifugeuse 20 pour la commande de vannes et de pompes et porte par Ie bati 18. De fagon typique, Ie systeme informatique comprend des moyens de saisie et d’enregistrement de donnees, des moyens de traitement des donnees, des moyens d’affichage, et des moyens d’emission de signaux de commande et de pilotage de I’incubateur ainsi que des vannes de la cassette 16 et pompes. De preference, Ie systeme informatique comprend un ecran tactile d’affichage 22 et de saisie de donnees par un operateur ou utilisateur. Le controle et la tragabilite des etapes du protocole biologique peuvent etre assures par le systeme informatique et une interface hommemachine (IHM) appropriee, qui permettent notamment : d’assurer la traqabilite complete du procede de fabrication de chaque greffon de cellules souches, des etapes d’intervention des operateurs sur I’automate, des parametres de culture comme la temperature, le taux de C02, et le temps de deroulement de chaque etape et des actions de validation necessaires a certaines etapes du procede, d’assurer la tragabilite des consommables et reactifs utilises dans le procede, via une interface de saisie, des moyens de lecture et de stockage de donnees de code-barres, et d’etiquettes RFID, et une verification de coherence des informations recueillies vis-a-vis d’une base de donnee interne. Cette traqabilite pouvant s’appliquer a la5 10 15 20 25 30 CA 03029072 2018-12-21 WO 2017/220948 PCT/FR2017/051703 17 totalite de la chaine de fabrication, de stockage et de transport des consommables et reactifs, ainsi que sur les conditions materielles de maintien en temperature de ces composants. d’indiquer de fagon systematique a I’utilisateur Ie detail des etapes du protocole a travers des animations et images illustrant Ie deroulement des etapes du procede, d’enregistrer de fagon securisee des donnees d’identification du patient, les donnees biologiques liees a la caracterisation des greffons de cellules souches, de piloter chacune des fonctions de commande des actionneurs, d’enregistrer et interpreter les donnees des differents capteurs presents sur I’automate ou la cassette fluidique. Comme represente en figure 2, I’incubateur 12 comprend deux portes, une premiere porte 22 interne destinee a venir s’appliquer sur une premiere surface 24 de contact entourant I’ouverture 26 de I’enceinte 28 de I’incubateur 12 et une seconde porte 30 externe destinee a venir s’appliquer sur une seconde surface 31 de contact entourant la premiere surface de contact 24. Les premiere 22 et seconde 30 portes sont par exemple chacune pivotable autour d’un meme axe vertical. L’enceinte 28 loge des moyens de ventilation 33 qui sont agences en partie superieure de l’enceinte 28 (figures 1, 6A, 6B et 6C). Ces moyens de ventilation 33 sont dimensionnes et configures pour permettre une repartition uniforme de la temperature et des gaz dans l’enceinte de I’incubateur necessaires a une culture cellulaire efficace et d’avoir une temperature adaptee (figures 1, 6A, 6B et 6C). Pendant la decongelation du milieu de culture qui est contenu dans la poche, la chaleur dans l’enceinte est ainsi uniformement repartie pour permettre une decongelation rapide du milieu de culture cellulaire. La porte interne 22 peut etre realisee en verre transparent de fagon a permettre une observation du contenu de l’enceinte 28 de I’incubateur 12 tout en conservant I’incubateur 12 en position fermee. L’ouverture 26 de l’enceinte 28 comprend un bord peripherique 24, correspondant a la5 10 15 20 25 30 CA 03029072 2018-12-21 WO 2017/220948 PCT/FR2017/051703 18 premiere surface de contact, dont Ie bord inferieur 24a comporte un renfoncement 32 destine a recevoir une barrette 34 de maintien des tubulures ou conduits 36, 38 de la cassette 16 qui sera decrite plus en details ulterieurement, notamment en reference aux figures 7 et 8. La barrette 34, qui est visible aux figures 4, 5, 7 et 8, forme une coque rigide qui peut presenter une forme sensiblement parallelepipedique. Elle peut egalement comporter deux flancs 40 opposes et relies I’un a I’autre par des faces 42 inferieure et superieure. Les conduits ou tubulures 36, 38 s’etendent a etancheite au travers d’orifices de la barrette 34. Ces orifices sont formes dans des parois 44 sensiblement perpendiculaires aux flancs 40 et aux parois 42 inferieure et superieure. Chaque flanc 40 de la barrette 34 comprend une rainure 46 parallele aux faces 42 inferieure et superieure. Les rainures 46 des flancs 40 sont disposees de maniere dissymetrique I’une par rapport a I’autre par rapport a un plan median de la barrette 34 et parallele aux deux flancs 40. Ces rainures 46 sont destinees a recevoir des nervures (non visibles) des flancs du renfoncement 32 du bord peripherique inferieure 24a de I’incubateur 12 de maniere a assurer un positionnement de la barrette 34 dans Ie renfoncement 32. Le positionnement dissymetrique des rainures 46 permet de realiser un detrompage au montage de la barrette 34 dans le renfoncement 32 de I’incubateur 12. Ainsi, de maniere plus generale, la barrette peut comprendre des moyens de detrompage au montage de celle-ci dans un renfoncement d’un bord peripherique d’une ouverture de I’incubateur. L’ouverture peut alors etre obturee par un organe mobile, telle qu’une porte ou une trappe, qui est deplagable entre une position d’ouverture de I’incubateur et une position de fermeture de l’ouverture de I’incubateur. La barrette ou coque rigide 34 a de preference une forme complementaire a celle du renfoncement 32. Cette forme complementaire peut etre telleque lorsque la barrette 34 est en position dans le renfoncement 32, sa face inferieure 42 vient en contact avec la face de fond du renfoncement 32 et la face superieure 42 affleure le reste du bord peripherique 24 de l’ouverture 26 de I’enceinte 28 de5 10 15 20 25 30 CA 03029072 2018-12-21 WO 2017/220948 PCT/FR2017/051703 19 I’incubateur 12 afin de former une surface sensiblement plane sur laquelle la premiere porte 22 peut venir en appui a etancheite. De cette maniere, I’etancheite de la porte interne 22 sur Ie bord peripherique 24 de I’ouverture 26 de I’enceinte 28 de I’incubateur 12 peut etre realisee de maniere simple. De plus, Ie passage des tubulures 36, 38 ou conduits au travers de la premiere porte 22 peut etre realise de maniere simple sans qu’il soit necessaire de manipuler les conduits 36, 38 un a un. Enfin, lorsque la premiere porte 22 est appliquee sur la barrette 34, I’effort de fermeture s’exerce sur la structure rigide de la barrette 34 et non pas sur les tubulures 36, 38, ce qui evite tout ecrasement des tubulures 36, 38 et permet de garantir leur section de passage de fluide. De preference, Ie renfoncement 32 peut comprendre un capteur de presence 47 de la barrette 34 permettant de confirmer Ie bon positionnement de la barrette dans Ie renfoncement 32 de maniere a autoriser la fermeture de la premiere porte 22 puis de la seconde porte 30. Comme cela est visible sur la figure 2, la fagade de I’enceinte de I’incubateur 12 comprend un autre renfoncement 48 debouchant dans Ie renfoncement 32 du bord peripherique 24 de I’ouverture 26 de I’enceinte 28. Ce renfoncement 48 est destine a permettre Ie passage des conduits 36, 38 ou tubulures au-dela du renfoncement 32 de la premiere porte 22 et de la seconde porte 30 jusqu’a la centrifugeuse. En pratique, ce second renfoncement 48 peut etre obture par une trappe (non representee), par exemple coulissante. Comme represente en figure 3A, I’enceinte thermostatee 28 comprend un dispositif de support et d’agitation 14 d’une cassette 16 de culture cellulaire selon I’invention. Ce dispositif peut se decomposer en un dispositif de support 50 et un dispositif d’agitation 52 relies I’un a I’autre. Le dispositif de support 50 comprend un plateau 54 de support ou berceau de support de la cassette 16 et une embase 60. Le plateau 54 comporte une premiere extremite 56 agencee au fond de I’enceinte 28 thermostatee et une seconde extremite 58 opposee a la premiere extremite qui est relie a5 10 15 20 25 30 CA 03029072 2018-12-21 WO 2017/220948 PCT/FR2017/051703 20 rotation autour d’un axe horizontal 63 a I’embase 60 s’etendant sensiblement verticalement et qui est portee par la paroi 62 formant Ie plancher de I’enceinte thermostatee 28 (figures 3A et 4). Plus precisement et comme cela est represente en figure 3B, la premiere extremite 56 du plateau 54 est portee et articulee a rotation autour de I’axe 63 sur deux bras 65 s’etendant verticalement depuis Ie plancher 62 de I’enceinte 28 et forme de part et d’autre du plateau 54. Le dispositif d’agitation 52 comprend un systeme du type bielle/manivelle comportant une bielle 64 dont une extremite superieure est reliee a une extremite inferieure d’un oscillateur ou tige verticale oscillante 66 supportant a son extremite superieure opposee le plateau 54 par sa face inferieure. L’extremite inferieure de la bielle 64 est reliee a une manivelle 68 entrainee en rotation par un arbre d’un moteur dont I’axe 70 de rotation est sensiblement horizontal. Get axe 70 est perpendiculaire a I’axe 63. L’extremite superieure 66 de I’oscillateur est reliee au plateau de maniere a permettre un deplacement de I’oscillateur dans un plan perpendiculaire a I’axe de rotation 70. Egalement, l’extremite superieure de I’oscillateur 66 est reliee a deplacement relativement au plateau support 54 dans la direction de I’axe 70, cette liaison pouvant etre realisee par le montage a coulissement d’un doigt, de l’extremite superieur de I’oscillateur 66, dans une fente 71 ou rainure du plateau 54. Comme represente sur les figures 3, 4 et 5, I’oscillateur 64 traverse la paroi de plancher 62 de I’enceinte 28 de I’incubateur 12. De preference, des moyens d’etancheite, tels qu’un soufflet, sont prevus autour de I’oscillateur 66, au niveau de la zone de traversee de la paroi de plancher 62 de maniere a eviter les transferts de chaleur et d’humidite en dehors de I’enceinte 28 thermostatee qui pourraient endommager les elements mecanique du dispositif d’agitation 52. Les figures 6A, 6B et 6C representent trois positions prises par le plateau 54 au cours de son deplacement par les moyens d’agitation. En figure 6A est representee la position haute du plateau 54 et la figure 6B5 10 15 20 25 30 CA 03029072 2018-12-21 WO 2017/220948 PCT/FR2017/051703 21 representant la position basse du plateau 54. Dans I’une et l’autre de ces deux positions Ie plateau est incline par rapport a un plan horizontal. La figure 6C represente une position mediane dans laquelle Ie plateau 54 est sensiblement horizontal. En fonctionnement, Ie plateau 54 de support de la cassette est ainsi apte a effectuer une angulation entre ses positions extremes (figures 6A et 6C) autour de I’axe 63 (figure 4). Comme represente en figure 2, Ie plateau 54 de support de la cassette 16 est forme d’un cadre 72 comportant une ouverture 74 ou partie creuse et une partie pleine 76. La partie creuse 74, agencee au voisinage de la premiere extremite 56 du plateau 54, est destinee a venir en vis-a-vis de la demi-coque inferieure de la cassette qui sera decrite ci-apres. La partie pleine 76 est agencee au voisinage de la seconde extremite 58 du plateau 54. Cette partie pleine 76 comprend des moyens de positionnement et de blocage de la cassette de culture cellulaire dans une position donnee sur Ie plateau 54 correspondant a une position dans laquelle la cassette 16 repose sur Ie cadre 72 et permet de realiser une phase d’incubation. Les moyens de positionnement comprennent deux pions 78 en saillie vers Ie haut destines a cooperer avec deux trous borgnes de la cassette 16 (decrit ci-apres). Les moyens de blocage de la cassette 16 comprennent un crochet de clipsage 80 ou d’encliquetage avec un crochet de la cassette qui sera decrit ci-apres de maniere a bloquer la cassette 16 sur Ie plateau 54. Le crochet 80 de la partie pleine 46 du cadre 72 du plateau 54 est agence entre les deux pions 78. Comme cela est visible sur la figure 2, le plateau comprend trois actuateurs electromecaniques 82 d’ouverture/fermeture de vannes, chaque actuateur 82 comprenant une sortie comportant des seconds moyens d’accouplement destines a cooperer avec des premiers moyens d’accouplement des vannes de la cassette lorsque la cassette 16 repose sur le cadre 72 du plateau 54. Le cadre 72 est surmonte d’une structure 84 de support de la cassette 16 a distance du cadre 72. Cette structure 84 de support permet5 10 15 20 25 30 CA 03029072 2018-12-21 WO 2017/220948 PCT/FR2017/051703 22 de supporter la casette 16 dans une seconde position correspondant a une phase de decongelation. Cette structure support 84 comprend deux ailettes 86 laterales reliees I’une a I’autre par une paroi plane 88 et forment ensemble un plan commun de support de la cassette 16 dans la seconde position. On remarque que les plans de support de la cassette 16 dans la premiere position et dans la seconde position sont inclines I’un par rapport a I’autre. La seconde position permet de supporter la cassette 16, emballee hermetiquement sous vide dans une enveloppe, a distance du cadre 72 afin d’eviter toute dechirure de I’enveloppe, generalement realisee en matiere plastique, par les pions 78 lors de la phase de decongelation. On se refere maintenant aux figures 7 et 8 qui representent une cassette 16 de culture cellulaire selon I’invention comprenant un boTtier 90 presentant une forme correspondant sensiblement a celle d’un parallelepipede rectangle comportant une premiere extremite 92 et une seconde extremite 94 en reference au positionnement de la cassette 16 sur Ie plateau 54. Le boTtier 90 comporte une demi-coque inferieure 96 (figures 9 a 12) et une demi-coque superieure 98 (figures 13 et 14) solidaires I’une de I’autre, la demi-coque inferieure 96 etant rigide et la demi-coque superieure 98 etant rigide ou partiellement rigide, c’est-a-dire comprenant des parties flexibles. Les deux demi-coques inferieure 96 et superieure 98 definissent ensemble un logement dans lequel est fixee une poche 100 souple de culture cellulaire definissant un volume interieur destine a etre remplit d’un milieu de culture cellulaire. Les demi-coques inferieure 96 et superieure 98 sont reliees I’une a I’autre par quatre rebords peripheriques 102a, 102b. Les deux demi-coques inferieure 96 et superieure 98 peuvent etre assemblees par clipsage, collage ou soudure de leurs rebords peripheriques 102a, 102b. Dans une realisation preferee, les deux demi-coques inferieure 96 et superieure 98 sont toutes les deux rigides. La demi-coque inferieure 96 comprend une pluralite d’orifices 104 ayant de preference un diametre inferieur a 20 mm. La cassette 16 a par5 10 15 20 25 30 CA 03029072 2018-12-21 WO 2017/220948 PCT/FR2017/051703 23 exemple des dimensions de 405 mm de longueur, 305 mm de largeur et une epaisseur de 25 mm. Elle comprend egalement deux trous borgnes 106 espaces I’un de I’autre et encadrant une ouverture 107 traversante ou debouchante. Les trous borgnes 106 sont formes par un renfoncement 109 de la demi-coque inferieure 96, s’etendant vers la demi-coque superieure 98 (figures 11 et 12). La demi-coque superieure 98 comprend une ouverture ou evidement 108 dont la forme et la dimension sont determinees pour permettre la propagation d’une ondulation du liquide de la poche 100 dans I’ouverture lorsque la cassette 16 contenant un liquide subit une oscillation autour de I’axe horizontal 63, I’ouverture 108 ou ajour (ou decoupe) etant disposee vers Ie haut (figures 7, 13, 14). Comme cela a ete evoque precedemment, la formation d’un evidement 108 permet de former une ondulation de la surface de la poche 100 situee a I’interieur du boTtier lorsque la cassette 16 est montee dans la seconde position sur Ie plateau 54 et que celui-ci est deplace a oscillation comme decrit en reference aux figures 6A, 6B et 6C. La demi-coque superieure 98 comprend une languette elastique 110 portant un crochet de clipsage 112 avec Ie crochet 80 du cadre 72 du plateau 54 comme cela a ete deja evoque precedemment. Le crochet 112 de la demi-coque superieure 98 est ainsi configure pour traverser I’ouverture 107 de la demi-coque inferieure 96. Enfin, la demi-coque superieure 98 comprend egalement un orifice circulaire 114 d’insertion d’un bouchon d’actionnement 116 manuel d’une vanne dont (’utilisation apparaitra plus clairement en reference aux figures 17 et 18. On remarque que le rebord peripherique 102a de la demi-coque inferieure 96, situe au niveau de la premiere extremite 92 du boTtier 90, comporte une nervure rectiligne 116 qui est destinee a cooperer avec une fente 118 de la structure support 84 du plateau 54 lorsque la cassette 16 de culture cellulaire est montee dans sa premiere position sur le plateau 54 dans I’enceinte 28 de I’incubateur 12 (figures 8, 9, 11, 12). Dans cette premiere position, le crochet de clipsage 112 de la demi-coque superieure5 10 15 20 25 30 CA 03029072 2018-12-21 WO 2017/220948 PCT/FR2017/051703 24 98 traverse I’ouverture 107 de la demi-coque inferieure 96 et coopere avec Ie crochet 80 du cadre 72 du plateau 54 pour assurer Ie blocage de la cassette 16 dans cette premiere position (figures 3, 4 et 5). Pour liberer la cassette 16 et la retirer de I’enceinte 28 d’incubation, il suffit d’appuyer sur la languette 110, ce qui conduit a desengager Ie crochet 110 de la demicoque superieure 98 d’avec Ie crochet 80 de la du plateau 54. Une plaquette 120 est fixee par encliquetage dans la demi-coque superieure et est apte a permettre un maintien des tubulures 36, 38 de la 16 cassette en position repliees sur la face externe de la demi-coque superieure 98. La figure 10 represente I’interieur du boTtier 90, la demi-coque superieure 98 n’etant pas representee. Comme cela est visible, la poche 100 de culture de cellulaire presente une forme sensiblement parallelepipedique comportant une premiere paroi 122 et une seconde paroi (non visible) sensiblement paralleles I’une a I’autre a I’etat vide et a I’etat remplit de liquide. La premiere paroi 122 et la seconde paroi sont reliees et rendues solidaires I’une a I’autre par leurs bords peripheriques 123, par tout moyen tel que par exemple par soudure ou collage. Dans une realisation particuliere de I’invention, Ie rapport de la surface de I’une des premiere paroi 122 ou seconde paroi sur Ie volume interne de la poche est compris entre 540 et 600 cm2/L, et est de preference de I’ordre de 580 cm2/L. La distance separant la premiere paroi 122 de la seconde paroi est inferieure a 20 mm, de preference compris entre 10 et 20 mm et encore plus preferentiellement de I’ordre de 14 mm. La poche 100 de culture cellulaire est fixee sur la demi-coque inferieure 96 par I’intermediaire de pion 124 en saillie sur la face interne de la demi-coque inferieure 96. Ces pions 124 traversent des orifices des bords 123 peripheriques de la poche 100 de culture cellulaire. Le volume interieur de la poche 100 est en communication avec I’exterieur par I’intermediaire d’une pluralite de conduits. En particulier, la cassette 16 peut comprendre quatre conduits 36, 38 ou tubulures souples dont trois 36 sont5 10 15 20 25 30 CA 03029072 2018-12-21 WO 2017/220948 PCT/FR2017/051703 25 solidaires de la barrette 34 precedemment decrite et un quatrieme 38 est independant. Plus particulierement, la cassette 16 comprend une premiere 36a et une seconde tubulure 36b dites de prelevement et une tubulure 36c de vidange. La tubulure 38 correspond a une tubulure d’injection des cellules d’interet. Comme cela est visible sur les figures 5, 7, 8, 9 et 10, la cassette comprend egalement une tubulure 39 de remplissage initial de la poche 100 en milieu de culture. Dans une configuration preferee de la cassette 16 selon I’invention, les quatre tubulures 36a, 36b, 36c, 38 sont equipees de connecteurs pouvant etre des connecteurs aseptiques et/ou de soutirage sans aiguille, ces connecteurs pouvant encore comprendre des moyens anti-retour. Dans la suite de la description, lorsque Ie numero de reference 36 est utilise seul, il designera indifferemment I’une au moins des tubulures 36a, 36b ou 36c. Comme represente en figure 10, les tubulures 36, 38 s’etendent au travers d’encoches 126 d’un meme rebord peripherique 102a de la demicoque inferieure 96, a savoir Ie rebord peripherique 102a forme au niveau de la seconde extremite 94 du boTtier 90. La tubulure 39 de remplissage s’etend sur I’un des cotes adjacents au cote traverse par les tubulures 36, 38 et est reliee a son extremite agencee a I’interieur du boTtier 90 dans une portion de la tubulure 36 agencee fluidiquement entre une vanne 128 et la poche 100. Chacune des tubulures 36, 38 traverse des vannes 128, 130a, 130b, 130c d’ouverture/fermeture de la circulation de fluide au travers des conduits 36, 38, ces vannes a pincement 128, 130 etant agencees dans Ie boTtier 90. Dans I’exemple represente, les trois tubulures 36 traversent un premier type de vanne 130, la tubulure 36a traversant la vanne 130a, la tubulure 36b traversant la vanne 130b et la tubulure 36c traversant la vanne 130c, tandis que la quatrieme tubulure 38 traverse un second type de vanne 128 (figures 10 et 15A). Plus precisement, Ie boTtier 90 comprend une platine 132 (figures 15A, 15B et 15C) comportant une pluralite de5 10 15 20 25 30 CA 03029072 2018-12-21 WO 2017/220948 PCT/FR2017/051703 26 logement 134 sensiblement cylindrique recevant chacun un organe mobile 136, 138 de pincement d’une tubulure 36, 38 (figures 16 et 17). Cette platine forme ainsi Ie corps ou partie statorique des vannes 128, 130. Chaque logement 134 de la platine 132 comprend une paroi annulaire de fond 140 delimitant un orifice central 142 aligne avec un orifice 144 de la demi-coque inferieure 96 lorsque la platine 132 est montee dans Ie boTtier 90 (figures 10et 12). Chaque organe mobile 136, 138 comprend une extremite inferieure 136a, 138a et une extremite superieure 136b, 138b en reference aux demicoques inferieure 96 et superieure 98 et en reference a I’agencement de la cassette par rapport a la verticale. Bien entendu, il serait possible de designer de maniere plus generale I’extremite inferieure comme etant une premiere extremite et I’extremite superieure comme etant une seconde extremite opposee a la premiere extremite. Ainsi, I’extremite superieure 136b, 138b de chaque organe mobile 136, 138 comprend un epaulement annulaire 146b destine a venir en appui selon I’axe de rotation 136c, 138c sur Ie pourtour d’un orifice 142 d’un logement 134 de la platine 132 et entourant une paroi cylindrique 148b destinee a s’inserer dans I’orifice 142 du logement. Dans Ie cas present, la surface 146b de I’organe 136 est en appui sur la surface de fond 140 d’un logement 134 d’une vanne 130a, 130b, 130c. II est ainsi possible de realiser un guidage en rotation et un centrage des secondes extremites 136b, 136a des organes mobiles 136, 138 dans les logements 134 de la platine 132. L’extremite inferieure 136a, 138a de chaque organe mobile 136, 138 comprend un epaulement annulaire 146a destine a venir en appui selon I’axe de rotation 136c, 138c sur Ie pourtour d’un orifice 144 de la demi-coque inferieure 96 et une paroi cylindrique 148a destinee a s’inserer dans I’orifice 144 de la demi-coque inferieure 96. Dans Ie cas present, la surface 146b de I’organe 138 est en appui sur la surface de fond 140 d’un logement 134 de la vanne 128. De cette maniere, on assure un guidage en rotation et un centrage de chacun des organes mobiles 136, 138 sur la demi-coque inferieure 96 et la platine5 10 15 20 25 30 CA 03029072 2018-12-21 WO 2017/220948 PCT/FR2017/051703 27 142 qui est elle-meme solidaire de la demi-coque inferieure 96 par I’intermediaire d’oreilles 150 traversees par des plots 152 de la face interne de la demi-coque inferieure 96 et grace a la demi-coque superieure 98 dont les rebords peripheriques 102b sont solidarises aux rebords peripheriques 102a de la demi-coque inferieure 96. Les extremites inferieures 136a, 138a des organes mobiles 136, 138 debouchent ainsi au travers de la demicoque inferieure 96 et sont ainsi accessibles depuis la face externe de la demi-coque inferieure 96 comme cela est visible sur la figure 9. Les organes mobiles 136, tels que representes en figure 16A, 16B, 16C associes aux tubulures 36, comprennent a leur extremite inferieure 136a des premiers moyens d’accouplement accessibles depuis I’exterieur du boTtier de maniere a cooperer avec les seconds moyens d’accouplement des actuateurs 82 des organes mobiles 136, agences dans I’incubateur. Les premiers moyens d’accouplement, formes sur la face inferieure de I’organe 136, comprennent ici une fente 151 radiale dont une extremite radialement interne est traversee par I’axe de rotation 136c et une gorge semi-circulaire 153 centre sur I’axe de rotation 136cLes seconds moyens d’accouplement des actuateurs 82 peuvent par exemple comprendre deux tiges 155a, 155b dont une premiere 155a est centree sur I’axe de rotation de I’actuateur 82 et une seconde 155b est decalee radialement par rapport a la premiere 155a. Lorsque la cassette 16 est montee sur Ie cadre 72, comme en figure 3A, la premiere tige 155a s’engage dans I’extremite radialement interne de la fente 151, la seconde tige 155b s’engageant dans la gorge semi-circulaire 153. On comprend que I’utilisation d’une gorge semi-circulaire 153 permet de garantir une cooperation de la seconde tige 153b avec la gorge 153 quelle que soit la position angulaire de I’organe mobile 136 prealablement au montage de la cassette 16 sur Ie cadre 72. L’integration d’une fente radiale 151 sur les organes mobiles 136 permet d’actionner manuellement au besoin I’organe mobile 136. Dans Ie cas de la vanne 138 des figures 17A et 17B associee a la tubulure 38, les premiers moyens d’accouplement sont formes a I’extremite5 10 15 20 25 30 CA 03029072 2018-12-21 WO 2017/220948 PCT/FR2017/051703 28 superieure 138b de I’organe mobile 138. Contrairement aux trois organes mobiles 136 des vannes 130, I’organe mobile 138 de la vanne 128 n’est pas actionne par un actuateur electromecanique mais manuellement par un organe ou bouton 154 rotatif comme celui represents aux figures 18A et 18B. L’accouplement est ici realise par un evidement en croix 157 a I’extremite superieure 138b de I’organe mobile 138 dans lequel vient s’engager une forme complementaire 156 en croix du bouton d’actionnement 154. Le bouton 154 est rendu solidaire de la demi-coque superieure 98 au moyen d’une pluralite de crochets 158 elastiquement deformables venant s’accrocher sur le pourtour interne de I’orifice 114 circulaire de la demi-coque superieure 98. Pour realiser le pincement des tubulures 36, 38, chaque organe mobile 136, 138 comprend une excroissance en spirale 160 autour de I’axe de rotation 136c, 138c de I’organe mobile 136, 138. La surface radialement exteme de chaque excroissance 160 forme une surface d’appui sur une tubulure 36, 38. Chaque excroissance 160 presente un plan de symetrie selon un plan perpendiculaire a I’axe de rotation 136c, 138c. Chaque tubulure 36, 38 est logee pour partie dans une gorge rectiligne 162 a section semi-circulaire de la demi-coque inferieure 96 et pour une autre partie dans une gorge rectiligne 164 a section semi-circulaire de la platine 132 de maniere a traverser la peripherie d’un logement 134 de la platine 132 dans une direction perpendiculaire a I’axe de rotation 136c, 138c de I’organe mobile (figures 11, 12, 15A, 15B, 15C). Ainsi, au fur et a mesure de la rotation d’un organe mobile 136, 138 d’une vanne 128, 130 I’excroissance 160 assure une ouverture ou une fermeture progressive de la section d’une tubulure 36, 38 selon le sens de rotation de I’organe mobile 136, 138. Chaque paroi 140 annulaire de fond d’un logement de la platine 132 porte deux organes 166a, 166b de butee en saillie a I’interieurdu logement 134 et qui sont espaces angulairement I’un de I’autre. Une decoupe 167 est formee dans chaque paroi 140 annulaire de fond d’un logement 134 de5 10 15 20 25 30 CA 03029072 2018-12-21 WO 2017/220948 PCT/FR2017/051703 29 maniere a delimiter une lamelie elastique 168 comportant one extremite libre portant une excroissance en saillie dans Ie logement 134, cette excroissance comportant une portion convexe 171 destine a cooperer a glissement avec les organes mobiles 136, 138 (figures 15B, 15C). L’excroissance 170 coopere a glissement avec une gorge 172, ayant une forme en arc de cercle et un fond incurve concave, de chacun des organes mobiles 136, 138. Pour ce qui concerne I’organe mobile 136 des figures 16A, 16B et 16C, la gorge 172 est farmee sur une collerette annulaire radiale 174 agencee axialement entre l’excroissance 160 et I’epaulement annulaire superieure 146b et sur la face orientee vers I’extremite superieure 136b de I’organe mobile 136. De meme, pour ce qui concerne I’organe mobile 138 des figures 17A et 17B, la gorge 172 est farmee sur une collerette annulaire radiale 174 agencee axialement entre l’excroissance 160 et I’epaulement annulaire superieure 146b et sur la face orientee vers I’extremite superieure 138b de I’organe mobile 138. Une cavite semi-spherique 176a, 176b est farmee aux extremites angulaires de chaque gorge 170, 172 de maniere a former des positions d’arret de I’organe mobile 136, 138 pour I’une correspondant a la position d’ouverture ou Ie fluide peut circuler et pour I’autre correspondant a une position de fermeture ou Ie fluide ne peut pas circuler. On note egalement que chaque organe mobile 136, 138 comprend un doigt radial 178 prolongeant lateralement I’epaulement superieur 146b et est en contact avec la face de la collerette 174 portant la gorge 172. . Ainsi, dans la position de blocage de I’ecoulement au travers des tubulures 36, 38, I’organe mobile 136, 138 est positionne de sorte que l’excroissance 170 de la lamelle elastique 168 est engagee dans la cavite ou logement 176a de I’organe mobile 136, 138, Ie doigt radial 178 de I’organe mobile 136, 138 etant agence en butee en rotation dans Ie sens anti-horaire, sur la figure 15, contre I’organe 166a de butee. Dans la position de passage de I’ecoulement au travers des tubulures 36, 38, I’organe mobile 136, 138 est positionne de sorte que l’excroissance 170 de la lamelle elastique 168 est5 10 15 20 25 30 CA 03029072 2018-12-21 WO 2017/220948 PCT/FR2017/051703 30 engage dans la cavite ou logement 176b de I’organe mobile 136, 138, Ie doigt radial 178 de I’organe mobile 136, 138 etant agence en butee en rotation dans Ie sens horaire, sur la figure 15, contre I’organe 166b de butee. On comprend que la cooperation de I’excroissance 170 avec les cavites 176a, 176b permet d’assurer un verrouillage par encliquetage elastique des organes mobiles 136, 138 en position de fermeture ou en position d’ouverture. On comprend aisement que les vannes decrites precedemment pourraient tout a fait etre utilisees dans d’autres dispositifs necessitant des organes d’ouverture/fermeture de la circulation d’un fluide au travers d’une tubulure. Par consequent, la presente description vise egalement tout dispositif integrant les vannes decrites, tel que par exemple un dispositif comprenant une platine 132 comportant une pluralite de logements 134 dans lesquels des organes rotatifs sont engages. II serait possible d’equiper la cassette 16 et/ou I’incubateur de moyens de verification automatique du bon positionnement de la cassette 16 dans chacune de ses premiere et seconde positions. A cette fin, un aimant pourrait etre dispose a I’interieur du boTtier 90, sur la face interne de la demi-coque inferieure 96, cet aimant cooperant avec deux capteurs a effet Hall positionnes sur Ie plateau de maniere adequate en relation avec les premiere et seconde positions a detecter. La figure 20 represente un systeme 180 de culture cellulaire comprenant une pluralite d’incubateurs 12 tels que decrits precedemment et une centrifugeuse 20. Les incubateurs 12 et la centrifugeuse 20 sont commandos par Ie systeme informatique. La figure 21 est un organigramme representant des etapes du procede de culture cellulaire selon I’invention. Au prealable du procede decrit ci-apres, la cassette 16 de culture cellulaire est remplit avec un milieu de culture cellulaire en utilisant la tubulure 39 laterale. Cette tubulure 39 est apres remplissage immediatement obturee, par soudure par exemple. La cassette 16 de5 10 15 20 25 30 CA 03029072 2018-12-21 WO 2017/220948 PCT/FR2017/051703 31 culture cellulaire est ensuite congelee a plat, c’est-a-dire en position horizontal, pour stockage et utilisation ulterieure. Une premiere etape 182 du procede consiste a saisir et enregistrer au moyen du systeme informatique des parametres de culture propres au protocole biologique. La saisie est realisee par un operateur, les parametres saisis etant par exemple I’identification du patient, I’identification de la cassette, etc. Pour faciliter la saisie de ces parametres, Ie systeme informatique peut etre equipe d’un lecteur de codes-barres, la cassette pouvant comprendre un code-barres renseignant directement Ie systeme informatique avec Ie numero et la nature de la cassette. II est ensuite effectuer une saisie par lecture de code barre ou par saisie manuelle via I’ecran tactile des donnees d’identifications personnelles indiquees sur une etiquette d’un conteneur, telle qu’une poche, des cellules a cultiver. Dans une seconde etape 184, Ie systeme informatique attribue un incubateur donne a l’operateur apres verification de la disponibilite de I’incubateur en fonction d’un planning de culture cellulaire. L’operateur installe la cassette 16 de culture cellulaire comprenant un liquide de culture cellulaire dans ledit incubateur designe, les autres incubateurs etant alors, de preference, non accessibles, c’est-a-dire les portes 22, 30 des autres incubateurs 12 etant verrouillees. Dans une troisieme etape 186, Ie procede consiste a effectuer la decongelation du milieu de culture loge dans la poche souple d’une cassette de culture telle que decrite precedemment. Pour cela, la cassette 16 de culture cellulaire, emballee hermetiquement sous vide dans une enveloppe de protection sterile, est montee dans la seconde position sur Ie dispositif 52 de support et d’agitation de I’incubateur designe par Ie systeme informatique, c’est-a-dire sur la structure support 84 (figures 3A et 3B). L’operateur referme les deux portes 22 et 30 et Ie systeme informatique initie la procedure de decongelation, les portes 22, 30 etant alors automatiquement verrouillees. Le dispositif de support et d’agitation5 10 15 20 25 30 CA 03029072 2018-12-21 WO 2017/220948 PCT/FR2017/051703 32 est actionne de maniere a positionner la cassette 16 en position horizontale. Dans une quatrieme etape 188, apres decongelation, la cassette 16 de culture cellulaire est extraite de I’incubateur et I’enveloppe externe est retiree dans une zone a activite controlee adequate. Dans une cinquieme etape 190, des cellules d’interet, a I’exclusion des cellules souches embryonnaires humaines, sont injectees dans la cassette. Pour cela, la vanne manuelle 128 est positionnee en position ouverte. II est rappele que les tubulures 36, 38 sont equipees de moyens anti-retour empechant Ie liquide de la poche 100 de s’ecouler vers I’exterieur. Les cellules sont injectees dans la poche 100 au moyen de la tubulure 38 puis la vanne 128 est positionnee en position de fermeture et la tubulure 38 obturee avec un bouchon etanche. Dans une sixieme etape 192, la cassette 16 remplit du milieu de culture et des cellules d’interet est montee dans sa premiere position correspondant a la position d’incubation. La barrette 34 est montee dans I’ouverture 32 de la porte 22, les extremites des tubulures 36 opposees a la poche 100 s’etendant dans I’ouverture 38 et etant reliees au circuit fluidique du systeme represente en figure 20. Le procede selon I’invention comprend ensuite une etape d’incubation 194 qui peut durer plusieurs jours et par exemple une dizaine de jours. Periodiquement, selon les parametres du protocole, le contenu de la poche 100 peut etre homogeneise, en deplapant en oscillation le plateau 54 autour de I’axe 63 comme explique precedemment. Cette homogeneisation (durees, frequence de repetition, amplitude) est determinee par les parametres du protocole choisi. Pendant I’etape d’incubation, I’operateur peut effectuer un ou plusieurs prelevements 196 dans la poche 100 (figures 14 et 22). Certains de ces prelevements peuvent etre imposes par le systeme informatique. Les prelevements sont realises au moyen des tubulures 36a et 36b. Pour effectuer un premier prelevement, le systeme informatique5 10 15 20 25 30 CA 03029072 2018-12-21 WO 2017/220948 PCT/FR2017/051703 33 actionne I’organe mobile 136 associe a la vanne associee 130a de maniere a autoriser la circulation de fluide au travers de la tubulure 36a. Lorsque Ie prelevement est effectue par Ie systeme informatique, une operation d’obturation definitive de la tubulure 36a est effectuee de maniere a garantir I’asepsie et eviter toute utilisation ulterieure de la tubulure de prelevement deja utilisee. Le second prelevement est effectue de la meme fapon mais au moyen de la tubulure 36b. Apres chaque sous-etape de prelevement 196 d’un echantillon dans la poche 100, I’operateur peut proceder a des analyses dudit echantillon, les resultats de ces analyses pouvant etre saisis et enregistres dans le systeme informatique par I’operateur ou bien automatiquement. Dans une derniere etape du procede 198, le systeme informatique procede a une recuperation ou vidange du contenu de la poche 100 de la cassette 16. Enfin, le contenu de la poche subit une etape de purification et de conditionnement dans des seringues steriles en vue d’une utilisation ulterieure. La demande est egalement relative a un procede de culture cellulaire, en particulier de culture de cellules de mammifere, en particulier de cellules humaines, a I’exclusion des cellules souches embryonnaires humaines. Ces cellules, en particulier ces cellules humaines, a I’exclusion des cellules souches embryonnaires humaines, peuvent avantageusement etre, ou comprendre, des cellules CD34+ (humaines), en particulier des cellules hematopoTetiques CD34+ (humaines) ou des cellules CD34+ nonhematopoTetiques (humaines). Ces cellules CD34+ (humaines) peuvent par exemple etre des cellules du sang peripherique (humain), ou du cordon ombilical (humain) ou d’un tissu humain, en particulier du sang peripherique (humain). Ces cellules, en particulier ces cellules humaines, a I’exclusion des cellules souches embryonnaires humaines, peuvent avantageusement etre,5 10 15 20 25 30 CA 03029072 2018-12-21 WO 2017/220948 PCT/FR2017/051703 34 ou comprendre, des cellules souches ou progenitrices, en particulier des cellules multipotentes ou pluripotentes. Ces cellules ne sont pas, ou ne comprennent pas, de cellules embryonnaires humaines. Ces cellules, en particulier ces cellules humaines, a (’exclusion des cellules souches embryonnaires humaines, peuvent avantageusement etre, ou comprendre, des cellules souches ou progenitrices humaines CD34+ (multipotentes ou pluripotentes) du sang peripherique mobilisees par un facteur de croissance tel que Ie G-CSF (Growth Colony Stimulating Factor). Ces cellules, en particulier ces cellules humaines, a (’exclusion des cellules souches embryonnaires humaines, peuvent etre ou avoir ete prelevees d’un sujet ou patient humain (nouveau-ne, enfant, adolescent, adulte ou personne agee). L’invention est en effet specialement adaptee aux cellules CD34+ humaines (multipotentes ou pluripotentes) que I’on peut prelever du sang peripherique d’un sujet ou patient humain. Si Ie patient est destine a recevoir une chimiotherapie, ces cellules peuvent avoir ete collectees avant ou au debut de cette chimiotherapie. Un echantillon biologique contenant les cellules qui sont destinees a etre cultivees (par exemple un echantillon de sang (humain), en particulier un echantillon de sang peripherique (humain), de sang de cordon ombilical (humain) ou de tissu humain, en particulier un echantillon de sang peripherique humain) est ou a ete preleve d’un sujet ou patient humain. Les moyens de la demande presentent I’avantage de ne pas requerir la mise en oeuvre d’une leucapherese : un simple echantillon sanguin, par exemple un echantillon de 200 a 250 mL de sang, en particulier de 220 mL de sang, suffit a obtenir un nombre important de cellules, notamment un nombre de cellules qui soit suffisant pour un traitement therapeutique et/ou preventif, plus particulierement pour une therapie cellulaire autologue ou allogenique d’un sujet ou patient (humain), plus particulierement pour une therapie cellulaire autologue du sujet ou patient (humain).5 10 15 20 25 30 CA 03029072 2018-12-21 WO 2017/220948 PCT/FR2017/051703 35 C’est notamment Ie cas pour les cellules CD34+ humaines destinees a un traitement therapeutique et/ou preventif, plus particulierement a une therapie cellulaire autologue ou allogenique du sujet ou patient, plus particulierement a une therapie cellulaire autologue du sujet ou patient. Les cellules CD34+ humaines peuvent etre des cellules CD34+ humaines non embryonnaires, a (’exclusion des cellules souches embryonnaires humaines. Les cellules CD34+ humaines ne sont pas ou ne comprennent pas de cellules CD34+ embryonnaires. Les moyens de culture cellulaire de la demande permettent d’obtenir, a partir d’un petit volume de sang (par exemple un echantillon de 200 a 250 mL de sang, en particulier de 220 mL de sang), une population d’au moins 107, ou d’au moins 108, cellules comprenant au moins 70% de cellules CD34+ humaines (non embryonnaires). Par comparaison, pour obtenir une telle quantite de cellules CD34+ humaines directement (sans culture cellulaire) a partir du sang d’un seul sujet ou patient, il serait necessaire de traiter un volume de 7 a 10 L de sang par leucapherese. Les cellules qui sont destinees a etre cultivees, en particulier les cellules CD34+ humaines (non embryonnaires), peuvent etre purifiees ou isolees de I’echantillon biologique collecte, notamment d’un echantillon de sang, en particulier d’un echantillon de sang peripherique (par exemple un echantillon de 200 a 250 mL de sang peripherique, en particulier de 220 mL de sang peripherique). Les cellules peuvent etre purifiees de sorte a atteindre un taux minimal en un certain type cellulaire. Par exemple, elles peuvent etre purifiees jusqu’a comprendre au moins 70% ou au moins 80% ou au moins 85% ou au moins 90% en cellules CD34+ humaines (non embryonnaires ), en particulier en cellules hematopoTetiques humaines CD34+ (non embryonnaires). Cet isolement ou purification peut etre fait a I’aide de tout moyen connu de la personne du metier.5 10 15 20 25 30 CA 03029072 2018-12-21 WO 2017/220948 PCT/FR2017/051703 36 Par example, pour les cellules CD34+ humaines, a (’exclusion des cellules souches embryonnaires humaines, cet isolement ou purification peut etre fait a I’aide d’un anticorps monoclonal anti-CD34 humain, par exemple I’anticorps monoclonal murin anti-CD34 humain commercialise sous Ie nom de clone QBEnd-10 (code M7165) par DAKO DANEMARK AS (Produktionsvej 42 ; DK-2600 Glostrup ; Danemark). Des systemes d’isolement ou purification de cellules CD34+ (humaines) sont par ailleurs disponibles dans Ie commerce, par exemple, Ie separateur cellulaire magnetique ISOLEX 300i commercialise par BAXTER (Deerfield, IL, U.S.A.), ou Ie kit de microbilles CD34 commercialise par MILTENYI BIOTECH (2303 Lindbergh Street, Auburn, CA 95602, U.S.A.). Les cellules purifiees ou isolees sont placees sur ou dans un milieu de culture dont la composition est adaptee a la multiplication de ces cellules. Des exemples de tels milieux de culture, notamment de milieux adaptes a la culture de cellules CD34+ humaines, ont ete decrits ci-dessus. II peut par exemple s’agir d’un milieu de culture tel que ci-dessus decrit, notamment un milieu comprenant de I’insuline humaine, de la transferrine humaine et du plasma ou serum humain. Ce milieu de culture peut etre contenu dans la poche de la cassette de la demande. Les cellules sont alors placees en incubation, par exemple en plagant la poche, ou la cassette contenant la poche, dans un incubateur, notamment dans un incubateur de la demande. Le temps d’incubation peut par exemple etre de plusieurs jours, notamment de 8 a 10 jours, en particulier de 9 jours, notamment lorsqu’il s’agit d’une culture de cellules CD34+ humaines, a (’exclusion des cellules souches embryonnaires humaines. La demande est egalement relative a des cellules, a (’exclusion des cellules souches embryonnaires humaines, a une population cellulaire comprenant ces cellules, ainsi qu’a une composition pharmaceutique comprenant ces cellules ou cette population de cellules.5 10 15 20 25 30 CA 03029072 2018-12-21 WO 2017/220948 PCT/FR2017/051703 37 Ces cellules ou populations de cellules peuvent etre obtenues par culture conforme a la demande, telle que decrit ci-dessus. Des cellules de la demande peuvent notamment etre, ou comprendre, des cellules CD34+ (humaines), a I’exclusion des cellules souches embryonnaires humaines, en particulier des cellules CD34+ hematopoTetiques (humaines) ou des cellules CD34+ nonhematopoTetiques (humaines). Ces cellules CD34+ (humaines) peuvent par exemple etre des cellules du sang peripherique (humain), ou du cordon ombilical (humain) ou d’un tissu humain, en particulier du sang peripherique (humain). Ces cellules peuvent avantageusement etre, ou comprendre, des cellules souches ou progenitrices, en particulier des cellules multipotentes ou pluripotentes, a I’exclusion des cellules souches embryonnaires humaines. Ces cellules ne sont pas, ou ne comprennent pas, de cellules embryonnaires humaines. Ces cellules peuvent notamment etre, ou comprendre, des cellules souches ou progenitrices humaines CD34+ (multipotentes ou pluripotentes) du sang peripherique mobilisees par un facteur de croissance tel que Ie GCSF (Growth Colony Stimulating Factor). Les cellules de la demande, notamment les cellules CD34+ (humaines) de la demande, a I’exclusion des cellules souches embryonnaires humaines, peuvent etre sous forme pure ou isolee, ou bien etre comprise dans une population cellulaire. Une population cellulaire de la demande peut ainsi etre une population de cellules humaines non embryonnaires, qui comprend des cellules CD34+ humaines de la demande. Plus particulierement, les cellules de la demande peuvent notamment etre (une population de) des cellules humaines non embryonnaires, qui sont caracterisees en ce que :5 10 15 20 25 30 CA 03029072 2018-12-21 WO 2017/220948 PCT/FR2017/051703 38 - elles sont au nombre d’au moins 107 cellules humaines, plus particulierement au nombre d’au moins 108, ou d’au moins 1,5.108, ou de 107 a 1,7.108 cellules humaines, et - elles comprennent au moins 70% de cellules CD34+ humaines (multipotentes ou pluripotentes, et non embryonnaires), plus particulierement au moins 80%, ou au moins 85% ou au moins 90% de cellules CD34+ humaines (multipotentes ou pluripotentes, et non embryonnaires). Ces cellules humaines peuvent en outre presenter toutes Ie meme typage HLA, plus particulierement Ie meme typage HLA-A, HLA-B, HLA-C et HLA-DR. Par exemple, les cellules de la demande peuvent notamment etre (une population de) des cellules humaines hematopoTetiques non embryonnaires, qui sont caracterisees en ce que : - elles sont au nombre d’au moins 107 cellules hematopoTetiques humaines, plus particulierement au nombre d’au moins 108, ou d’au moins 1,5.108, ou de 107 a 1,7.108 cellules hematopoTetiques humaines, et - elles comprennent au moins 70% de cellules CD34+ humaines (multipotentes ou pluripotentes, et non embryonnaires), plus particulierement au moins 80%, ou au moins 85% ou au moins 90% de cellules CD34+ humaines (multipotentes ou pluripotentes, et non embryonnaires). Ces cellules hematopoTetiques humaines peuvent en outre presenter toutes Ie meme typage HLA, plus particulierement Ie meme typage HLA-A, HLA-B, HLA-C et HLA-DR. Les cellules de la demande peuvent presenter une ou plusieurs caracteristiques, qui les distinguent de cellules naTves. Le terme « naive » signifie dans ce contexte qu’il s’agit de cellules qui ont ete directement obtenues d’un sujet ou patient humain, et qui ont eventuellement pu etre purifiees, mais qui n’ont pas ete cultivees.5 10 15 20 25 30 CA 03029072 2018-12-21 WO 2017/220948 PCT/FR2017/051703 39 En effet, il a ete observe qu’apres culture conforme a la demande (par exemple sur un milieu de culture et/ou dans une poche ou cassette tels que decrits ci-dessus), la population de cellules humaines obtenue differe de la population naTve initialement placee en culture, par un ou plusieurs des aspects suivants : - un plus grand diametre moyen (diametres de 11,2 ± 0,5 pm, en particulier de 11,18 ± 0,49 pm), - une plus forte proportion de cellules CD34- CD14+ (monocytes, lesquels peuvent avoir un impact positif sur I’efficacite d’une greffe cellulaire), - une proportion plus forte (mais qui n’atteint pas 100%) de cellules CD34+ CD33- (CD33 etant Ie marqueur de la lignee myeloTde), - une proportion plus faible (mais restant neanmoins superieure a 10%) de cellules CD34+ CD133+ (marqueur des progeniteurs endotheliaux). Plus particulierement, les cellules de la demande peuvent etre des cellules humaines, a (’exclusion des cellules souches embryonnaires humaines, qui presentent une ou plusieurs des caracteristiques suivantes : 1/ elles sont au nombre d’au moins 107 cellules humaines, plus particulierement au nombre d’au moins 108, ou d’au moins 1.5.108, ou de 107 a 1,7.108 cellules humaines, 2/ elles presentent toutes Ie meme typage HLA, plus particulierement Ie meme typage HLA-A, HLA-B, HLA-C et HLA-DR, 3/ elles comprennent au moins 70% de cellules CD34+ humaines (multipotentes ou pluripotentes, et non embryonnaires), plus particulierement au moins 80%, ou au moins 85% ou au moins 90% de cellules CD34+ humaines (multipotentes ou pluripotentes, et non embryonnaires), 4/ elles presentent un diametre cellulaire 11,2 ± 0,5 pm, en particulier de 11,18 ± 0,49 pm,5 10 15 20 25 30 CA 03029072 2018-12-21 WO 2017/220948 PCT/FR2017/051703 40 5/ elles comprennent des cellules CD34- CD14+ (humaines) dans une proportion de 1 a 12%, en particulier de 2 a 10% ou de 3,8 a 10%, 6/ elles comprennent des cellules CD34+ CD33- (humaines) dans une proportion de plus de 10% ou de plus de 20% ou de plus de 25% (et avantageusement de moins de 100%, en particulier de moins de 60% ou de moins de 50% ou de moins de 40% ou de moins de 35%), 7/ elles comprennent des cellules CD34+ CD133+ (humaines) dans une proportion de moins de 60% ou de moins de 50% (et avantageusement de plus de 20%, en particulier de plus de 25% ou de plus de 30%). Selon un mode de realisation, les cellules de la demande sont des cellules humaines, a (’exclusion des cellules souches embryonnaires humaines, qui presentent au moins deux de ces sept caracteristiques, en particulier au moins trois, ou au moins quatre, ou au moins cinq, ou au moins six de ces sept caracteristiques, ou bien presentent les sept caracteristiques. Par exemple, les cellules de la demande peuvent etre des cellules hematopoietiques humaines, qui presentent une ou plusieurs des caracteristiques suivantes : 1/ elles sont au nombre d’au moins 107 cellules hematopoietiques humaines, plus particulierement au nombre d’au moins 108, ou d’au moins 1,5.108, ou de 107 a 1,7.108 cellules hematopoietiques humaines, 2/ elles presentent toutes Ie meme typage HLA, plus particulierement Ie meme typage HLA-A, HLA-B, HLA-C et HLA-DR, 3/ elles comprennent au moins 70% de cellules CD34+ humaines (multipotentes ou pluripotentes, et non embryonnaires), plus particulierement au moins 80%, ou au moins 85% ou au moins 90% de cellules CD34+ humaines (multipotentes ou pluripotentes, et non embryonnaires), 4/ elles presentent un diametre cellulaire 11,2 ± 0,5 pm, en particulier de 11,18 ± 0,49 pm,5 10 15 20 25 30 CA 03029072 2018-12-21 WO 2017/220948 PCT/FR2017/051703 41 5/ elles comprennent des cellules CD34- CD14+ (humaines) dans une proportion de 1 a 12%, en particulier de 2 a 10% ou de 3,8 a 10%, 6/ elles comprennent des cellules CD34+ CD33- (humaines) dans une proportion de plus de 10% ou de plus de 20% ou de plus de 25% (et avantageusement de moins de 100%, en particulier de moins de 60% ou de moins de 50% ou de moins de 40% ou de moins de 35%), 7/ elles comprennent des cellules CD34+ CD133+ (humaines) dans une proportion de moins de 60% ou de moins de 50% (et avantageusement de plus de 20%, en particulier de plus de 25% ou de plus de 30%). Selon un mode de realisation, les cellules de la demande sont des cellules hematopoTetiques humaines, qui presentent au moins deux de ces sept caracteristiques, en particulier au moins trois, ou au moins quatre, ou au moins cinq, ou au moins six de ces sept caracteristiques, ou bien presentent les sept caracteristiques. Notamment, les cellules de la demande peuvent etre des cellules humaines, a I’exclusion des cellules souches embryonnaires humaines, qui presentent une ou plusieurs des caracteristiques suivantes : 1/ elles sont au nombre d’au moins 107 cellules humaines, plus particulierement au nombre d’au moins 108, ou d’au moins 1,5.108, ou de 107 a 1,7.108 cellules humaines, 2/ elles presentent toutes Ie meme typage HLA, plus particulierement Ie meme typage HLA-A, HLA-B, HLA-C et HLA-DR, 3/ elles comprennent au moins 70% de cellules CD34+ humaines (multipotentes ou pluripotentes, et non embryonnaires), plus particulierement au moins 80%, ou au moins 85% ou au moins 90% de cellules CD34+ humaines (multipotentes ou pluripotentes, et non embryonnaires), 4/ elles presentent un diametre cellulaire 11,2 ± 0,5 pm, en particulier de 11,18 ± 0,49 pm, 5/ elles comprennent des cellules CD34- CD14+ (humaines) dans une proportion de 1 a 12%, en particulier de 2 a 10% ou de 3,8 a 10%.5 10 15 20 25 CA 03029072 2018-12-21 WO 2017/220948 PCT/FR2017/051703 42 Selon un mode de realisation, les cellules de la demande sont des cellules humaines, a (’exclusion des cellules souches embryonnaires humaines, qui presentent au moins deux de ces cinq caracteristiques, en particulier au moins trois, ou au moins quatre de ces cinq caracteristiques, ou bien presentent les cinq caracteristiques. Par exemple, les cellules de la demande peuvent etre des cellules hematopoTetiques humaines, qui presentent une ou plusieurs des caracteristiques suivantes : 1/ elles sont au nombre d’au moins 107 cellules hematopoTetiques humaines, plus particulierement au nombre d’au moins 108, ou d’au moins 1,5.108, ou de 107 a 1,7.108 cellules hematopoTetiques humaines, 2/ elles presentent toutes Ie meme typage HLA, plus particulierement Ie meme typage HLA-A, HLA-B, HLA-C et HLA-DR, 3/ elles comprennent au moins 70% de cellules CD34+ humaines (multipotentes ou pluripotentes, et non embryonnaires), plus particulierement au moins 80%, ou au moins 85% ou au moins 90% de cellules CD34+ humaines (multipotentes ou pluripotentes, et non embryonnaires), 4/ elles presentent un diametre cellulaire 11,2 ± 0,5 pm, en particulier de 11,18 ± 0,49 pm, 5/ elles comprennent des cellules CD34- CD14+ (humaines) dans une proportion de 1 a 12%, en particulier de 2 a 10% ou de 3,8 a 10%. Selon un mode de realisation, les cellules de la demande sont des cellules hematopoTetiques humaines, qui presentent au moins deux de ces cinq caracteristiques, en particulier au moins trois, ou au moins quatre de ces cinq caracteristiques, ou bien presentent les cinq caracteristiques. Plus particulierement, les cellules de la demande peuvent etre des cellules humaines, a (’exclusion des cellules souches embryonnaires humaines, qui presentent les caracteristiques suivantes :5 10 15 20 25 30 CA 03029072 2018-12-21 WO 2017/220948 PCT/FR2017/051703 43 - elles sont au nombre d’au moins 107 cellules humaines, plus particulierement au nombre d’au moins 108, ou d’au moins 1,5.108, ou de 107 a 1,7.108 cellules humaines, et - elles comprennent au moins 70% de cellules CD34+ humaines (multipotentes ou pluripotentes, et non embryonnaires), plus particulierement au moins 80%, ou au moins 85% ou au moins 90% de cellules CD34+ humaines (multipotentes ou pluripotentes, et non embryonnaires), et qui presentent en outre au moins I’une des (ou les deux) caracteristiques suivantes : - elles presentent un diametre cellulaire 11,2 ± 0,5 pm, en particulier de 11,18 ± 0,49 pm, - elles comprennent des cellules CD34- CD14+ (humaines) dans une proportion de 1 a 12%, en particulier de 2 a 10% ou de 3,8 a 10%. Par exemple, les cellules de la demande peuvent etre des cellules hematopoTetiques humaines, qui presentent les caracteristiques suivantes : - elles sont au nombre d’au moins 107 cellules hematopoTetiques humaines, plus particulierement au nombre d’au moins 108, ou d’au moins 1,5.108, ou de 107 a 1,7.108 cellules hematopoTetiques humaines, et - elles comprennent au moins 70% de cellules CD34+ humaines (multipotentes ou pluripotentes, et non embryonnaires), plus particulierement au moins 80%, ou au moins 85% ou au moins 90% de cellules CD34+ humaines (multipotentes ou pluripotentes, et non embryonnaires), et qui presentent en outre au moins I’une des (ou les deux) caracteristiques suivantes : - elles presentent un diametre cellulaire 11,2 ± 0,5 pm, en particulier de 11,18 ± 0,49 pm, - elles comprennent des cellules CD34- CD14+ (humaines) dans une proportion de 1 a 12%, en particulier de 2 a 10% ou de 3,8 a 10%.5 10 15 20 25 CA 03029072 2018-12-21 WO 2017/220948 PCT/FR2017/051703 44 Les cellules de cette population peuvent toutes presenter Ie meme typage HLA-A, HLA-B, HLA-C et HLA-DR. Les cellules de cette population peuvent en outre comprendre : - des cellules CD34+ CD33- (humaines) dans une proportion de plus de 10% ou de plus de 20% ou de plus de 25% (et avantageusement de moins de 100%, en particulier de moins de 60% ou de moins de 50% ou de moins de 40% ou de moins de 35%), - des cellules CD34+ CD133+ (humaines) dans une proportion de moins de 60% ou de moins de 50% (et avantageusement de plus de 20%, en particulier de plus de 25% ou de plus de 30% de cellules CD34+ CD133+). Alternativement ou complementairement, les cellules de la demande peut presenter une ou plusieurs caracteristiques identiques (ou non significativement differentes) de celles de cellules naTves, notamment de cellules humaines naTves, notamment de cellules hematopoTetiques humaines naTves. En effet, il a ete observe qu’apres culture conforme a la demande (par exemple sur un milieu de culture et/ou dans une poche cassette tels que decrits ci-dessus), la population de cellules humaines obtenue (notamment la population de cellules hematopoTetiques humaines obtenue) peut presenter des caracteristiques communes a celles de la population naive de cellules (hematopoTetiques) initialement placee en culture. Plus particulierement, les cellules de la demande peuvent etre des cellules (notamment des cellules hematopoTetiques), qui, par rapport a des cellules naTves (notamment des cellules hematopoTetiques naTves), plus particulierement par rapport aux cellules (naTves) initialement placees en culture, presentent une ou plusieurs des caracteristiques suivantes : 1/ un nombre ou proportion identique (ou non significativement different) d’epitopes CD34,5 10 15 20 25 CA 03029072 2018-12-21 WO 2017/220948 PCT/FR2017/051703 45 2/ une capacite identique (ou non significativement differente) a se diviser, en particulier une longueur relative de telomere identique (ou non significativement differente), 3/ une meme absence d’anomalie chromosomique et de polyploTdie (ou bien les memes anomalies chromosomiques ou polyploidies, dans les memes proportions), 4/ une viabilite identique (ou non significativement differente), en particulier une viabilite des cellules CD34+ identique (ou non significativement differente), par exemple une viabilite d’au moins 90% ou d’au moins 95% des cellules CD34+, 5/ une proportion identique (ou non significativement differente) de cellules CD34- CD2+/CD3+, 6/ une proportion identique (ou non significativement differente) de cellules CD34- CD19+/CD20+, 7/ une proportion identique (ou non significativement differente) de cellules CD34- CD56+, 8/ une proportion identique (ou non significativement differente) de cellules CD34- CD15+. Selon un mode de realisation, les cellules de la demande presentent au moins deux, ou au moins trois, ou au moins quatre, ou au moins cinq, ou au moins six, ou au moins sept de ces huit caracteristiques, ou bien presentent ces huit caracteristiques. Plus particulierement, les cellules de la demande peuvent etre des cellules (notamment des cellules hematopoTetiques), qui, par rapport a des cellules (hematopoTetiques) naTves, plus particulierement par rapport aux cellules (naTves) initialement placees en culture, presentent une ou plusieurs des caracteristiques suivantes : 1/ un nombre ou proportion identique (ou non significativement different) d’epitopes CD34,5 10 15 20 25 30 CA 03029072 2018-12-21 WO 2017/220948 PCT/FR2017/051703 46 2/ une capacite identique (ou non significativement differente) a se diviser, en particulier une longueur relative de telomere identique (ou non significativement differente), 3/ une meme absence d’anomalie chromosomique et de polyploTdie (ou bien les memes anomalies chromosomiques ou polyploidies, dans les memes proportions). Selon un mode de realisation, les cellules de la demande presentent au moins deux de ces trois caracteristiques, ou bien presentent les trois caracteristiques. La demande englobe explicitement toute combinaison de caracteristiques de cellules parmi celles ici decrites, et englobe notamment la combinaison de : - caracteristiques qui different les cellules de la demande de cellules naTves, et de - caracteristiques qui sont identiques a celles de cellules naTves. Les moyens de culture cellulaire de la demande correspondent essentiellement a des moyens d’amplification cellulaire ex vivo. Ils presentent I’avantage d’apporter un nombre important (plus particulierement un nombre therapeutiquement suffisant) de cellules autologues ou allogeniques, en particulier de cellules autologues (notamment de cellules CD34+ autologues ou allogeniques, en particulier de cellules CD34+ autologues) a partir d’un petit echantillon de sang peripherique d’un patient ou sujet, sans introduire de modifications deleteres sur ces cellules. Le Tableau 1 ci-dessous donne une illustration des caracteristiques d’une population de cellules obtenues du sang peripherique d’une cohorte de volontaires sains humains avant et apres mise en oeuvre d’une culture dans une poche de culture conforme a la demande (culture de 9 jours sur le milieu IMDM complemente en glutamine et depourvu de fibroblastes, et contenant 0,01mg/mL d’insuline, 330 pg/ml de transferrine, et 5% (V/V) deCA 03029072 2018-12-21 WO 2017/220948 PCT/FR2017/051703 47 serum humain, de cellules isolees par sedimentation et purifiees par immuno-affinite sur les billes magnetiques anti-CD34): Tableau 1 : Cohorte de 71 volontaires sains humains males ages de 21 a 57 ans Echantillon biologique = 220 mL de sang peripherique par patient Population de cellules CD34+ Population naive (telle qu’obtenue sans culture des cellules) Exemple de population obtenue apres culture conforme a la demande (valeur moyenne par patient, apres culture des cellules) Nombre de cellules CD34+ * De 5,1.106 a 40,9.106 De 1.107 a 1,7.108 Viabilite des cellules CD34+ Superieure a 95% Superieure a 95% Diametre cellulaire des CD34+ 8,8 ± 0,1 pm 11,18 ± 0,49 pm Pourcentage de cellules CD34+ (apres purification) Au moins 70% (ou au moins 80%, ou au moins 85%, ou au moins 90%) Au moins 70% (ou au moins 80%, ou au moins 85%, ou au moins 90%) Cellules CD34- CD14+ De 0,2 a 0,8% De 3,8 a 10% Cellules CD34+ 4,2% 33%CA 03029072 2018-12-21 WO 2017/220948 PCT/FR2017/051703 48 : valeurs issues d’une cohorte de 8 volontaires. CD33- Cellules CD34+ CD133+ 75,8% 44,5% Nombre d’epitopes CD34+ par cellule 14 804 ±2 294 15 36312 730 Longueur relative des telomeres 9,17 ± 1,32 % 8,35 ± 2,07 % Anomalie chromosomique aucune aucune PolyploTdie aucune aucune Cellules CD34- CD2+/CD3+ De 0 a 0,3 % De 0 a 1 % Cellules CD34- CD19+/CD20+ De 0 a 0,6 % De 0,1 a 1 % Cellules CD34- CD56+ 0 % De 0 a 1 % Cellules CD34- CD15+ De 2 a 5,8 % De 2,5 a 5 % Une fois la culture terminee, les cellules obtenues, plus particulierement les cellules CD34+ (humaines) obtenues, peuvent etre collectees. 5 Les cellules collectees peuvent etre purifiees ou isolees, plus particulierement purifiees. Notamment, les cellules CD34+ peuvent etre purifiees, par exemple a I’aide des moyens de purifications disponibles a la personne du metier tels que ci-dessus indiques. Les cellules collectees et eventuellement purifiees peuvent etre 10 placees dans une composition, notamment une composition pharmaceutique, en particulier une composition pharmaceutique liquide, par exemple une solution pharmaceutique non-toxique et isotonique pour5 10 15 20 25 30 CA 03029072 2018-12-21 WO 2017/220948 PCT/FR2017/051703 49 l’etre humain. La composition ou solution qui en resulte est un objet de la demande. La composition peut comprendre un vehicule physiologiquement acceptable pour I’etre humain. La composition peut etre formulee pour etre administrable, plus particulierement injectable, dans un etre humain. Elle peut done etre liquide et comprendre des composes non-toxiques pour I’etre humain, de preference des composes non-toxiques a une concentration isotonique pour I’etre humain. Ainsi, en sus des cellules, la composition peut par exemple comprendre une solution tampon non-toxique pour I’etre humain, telle qu’une solution de tampon phosphate salin (Phosphate Buffer Saline ou PBS), ou une solution tampon de gluconate et/ou acetate. La composition peut en outre comprendre au moins un additif non toxique pour I’etre humain, par exemple une proteine du serum humain ou du plasma humain, notamment de I’albumine de serum humain (Human Serum Albumin ou HSA). La composition ou solution de la demande peut etre conservee jusqu’a utilisation, par exemple par conservation au froid (congelation). Les moyens de la demande peuvent etre utilises pour un traitement cellulaire (a visee therapeutique et/ou preventive), notamment pour un traitement cellulaire autologue ou allogenique, avantageusement un traitement cellulaire autologue. Ce traitement cellulaire peut comprendre I’administration a un patient ou sujet : - de cellules de la demande, notamment de cellules humaines comprenant des cellules CD34+ (humaines), a I’exclusion des cellules souches embryonnaires humaines, telles que ci-dessus decrites, ou - d’une composition ou solution pharmaceutique contenant ces cellules.5 10 15 20 25 30 CA 03029072 2018-12-21 WO 2017/220948 PCT/FR2017/051703 50 Ce patient ou sujet peut etre Ie meme que celui sur lequel les cellules ont ete initialement prelevees pour proceder a la culture cellulaire (traitement ou therapie cellulaire autologue). Alternativement, ce patient ou sujet peut etre different de celui sur lequel les cellules ont ete initialement prelevees pour proceder a la culture cellulaire (traitement ou therapie cellulaire allogenique). Le traitement cellulaire, plus particulierement Ie traitement cellulaire autologue ou allogenique (en particulier autologue), peut notamment etre le traitement ou la prevention d’une insuffisance cardiaque ou d’une pathologie non cardiaque. L’insuffisance cardiaque peut notamment etre : - une insuffisance cardiaque qui comprend une insuffisance ventriculaire, plus particulierement une insuffisance ventriculaire gauche, - plus particulierement une insuffisance cardiaque avec alteration de la fonction systolique, - plus particulierement une insuffisance cardiaque avec alteration de la fonction contractile d’un ventricule, en particulier du ventricule gauche, - plus particulierement une insuffisance cardiaque avec augmentation du volume telesystolique associe a une diminution de la fraction d'ejection du ventricule gauche (Left Ventricular Ejection Fraction ou LVEF). II peut notamment s’agir d’une insuffisance cardiaque de niveau II ou superieur selon la classification de la New York Heart Association (NYHA) [The Criteria Committee of the New York Heart Association. 1994. Nomenclature and Criteria for Diagnosis of Diseases of the Heart and Great Vessels. (9®me edition). Boston : Little, Brown & Co., pages 253-256], plus particulierement d’une insuffisance cardiaque de niveau II ou superieur (selon la classification de la NYHA) qui est induite par regurgitation mitrale. L’insuffisance cardiaque peut notamment etre une insuffisance cardiaque induite par - une hypertension arterielle, - une atteinte valvulaire,5 10 15 20 25 30 CA 03029072 2018-12-21 WO 2017/220948 PCT/FR2017/051703 51 - une maladie congenitale, - une angine de poitrine refractaire (par exemple, une angine de poitrine refractaire au traitement par ContrePulsion ExtraCorporelle Amelioree (CPECA) ou au traitement de neurostimulation (en particulier a la NeuroStimulation Transcutanee (NST) ou a la Stimulation de la Moelle Epiniere (SME), ou au traitement par chelation (en particulier au traitement par administration d’EDTA), - une cardiomyopathie, en particulier - une cardiomyopathie ischemique, en particulier un infarctus du myocarde, plus particulierement un infarctus aigu du myocarde, - une cardiomyopathie dilatee, - une cardiomyopathie hypertrophique, - une cardiomyopathie restrictive, - une Cardiomyopathie Ventriculaire Droite Arythmogene (CVDA). L’insuffisance cardiaque peut notamment etre une insuffisance cardiaque induite par une cardiomyopathie, en particulier par - une cardiomyopathie ischemique, en particulier un infarctus du myocarde, plus particulierement un infarctus aigu du myocarde, - une cardiomyopathie dilatee, - une cardiomyopathie hypertrophique, - une cardiomyopathie restrictive, - une Cardiomyopathie Ventriculaire Droite Arythmogene (CVDA). L’insuffisance cardiaque peut notamment etre une insuffisance cardiaque induite par une cardiomyopathie, en particulier par une cardiomyopathie ischemique, en particulier un infarctus du myocarde, plus particulierement un infarctus aigu du myocarde. L’insuffisance cardiaque peut etre traitee ou prevenue, notamment en diminuant voire supprimant l’insuffisance cardiaque et/ou en limitant Ie developpement de l’insuffisance cardiaque. Une insuffisance cardiaque induite par une cardiomyopathie ischemique, en particulier par un infarctus du myocarde, plus5 10 15 20 25 30 CA 03029072 2018-12-21 WO 2017/220948 PCT/FR2017/051703 52 particulierement par un infarctus aigu du myocarde, peut etre traitee ou prevenue notamment en diminuant voire supprimant cette insuffisance cardiaque et/ou en limitant Ie developpement de cette insuffisance cardiaque. En effet, les cellules (notamment les cellules CD34+) obtenues par culture conforme a la demande et eventuellement par purification, ou une composition ou solution pharmaceutique contenant ces cellules, peuvent etre utilisees pour un ou plusieurs des buts suivants : - diminuer voire faire disparaTtre des dommages myocardiques postischemiques, notamment la necrose post-infarctus et/ou la faille de la cicatrice post-infarctus, - regenerer partiellement ou completement la structure et/ou revasculariser Ie myocarde ou la zone infarcie, - ameliorer voire restaurer la fonction ventriculaire, en particulier la fonction ventriculaire gauche, notamment la contractilite ventriculaire, en particulier la contractilite ventriculaire gauche, par exemple pour diminuer Ie volume telesystolique en association avec une augmentation de la fraction d'ejection du ventricule gauche (Left Ventricular Ejection Fraction ou LVEF) (notamment pour atteindre une LVEF de plus de 45%). Est plus particulierement visee Ie traitement ou la prevention d’une insuffisance cardiaque induite par un infarctus (aigu) du myocarde, plus particulierement un infarctus (aigu) du myocarde du a une maladie coronarienne ou a une crise cardiaque. Cette utilisation est plus particulierement destinee : - aux patients qui presentent une alteration de la fonction ou contractilite ventriculaire gauche, et - aux patients - qui presentent un infarctus aigu du myocarde survenant de novo apres un premier incident ou syndrome cardiaque (ce premier incident ou syndrome cardiaque ayant eventuellement donne lieu a une implantation de stent(s) et a une angioplastie coronarienne transluminale percutanee5 10 15 20 25 30 CA 03029072 2018-12-21 WO 2017/220948 PCT/FR2017/051703 53 (Percutaneous Transluminal Coronary Angioplasty ou PTCA), et/ou eventuellement a un pontage aorto-coronarien (Coronary Artery Bypass Graft Surgery ou CABG) et - qui au moins 10 jours apres ce premier incident cardiaque (par exemple, au moins 3 mois ou au moins 6 mois apres ce premier incident ou syndrome cardiaque) presentent une fraction d'ejection du ventricule gauche (Left Ventricular Ejection Fraction ou LVEF) egale ou inferieure a 45%. L’administration des cellules, de cellules ou d’une composition ou solution pharmaceutique de la demande peut etre par exemple pratiquee quelques semaines, notamment de 3 a 6 semaines apres, un accident ischemique. Le traitement ou la prevention d’une insuffisance cardiaque peut comprendre une cardiomyoplastie cellulaire (par implantation des cellules administrees dans la zone cardiaque infarcie). Ce traitement ou prevention peut comprendre l’administration d’une population de cellules de la demande (notamment d’une population de cellules humaines comprenant des cellules CD34+, a I’exclusion des cellules souches embryonnaires humaines), de cellules (notamment CD34+ humaines, a I’exclusion des cellules souches embryonnaires humaines) de la demande, ou d’une composition ou solution de la demande, en les injectant par chirurgie ou par catheter. L’injection par chirurgie peut etre une injection directement dans la zone infarcie, par exemple a I’occasion d’un pontage aorto-coronarien (Coronary Artery Bypass Graft Surgery ou CABG). L’injection par catheter peut notamment etre une injection par voie percutanee transfemorale. Le catheter peut notamment etre un catheter d’injection ou de perfusion intracoronarienne, epicardique ou transendocardique. Le catheter d’injection ou de perfusion peut par exemple etre muni etre muni d’une aiguille sous forme d’helice tel que le catheter HELIX®5 10 15 20 25 30 CA 03029072 2018-12-21 WO 2017/220948 PCT/FR2017/051703 54 commercialise par BIOCARDIA® (125 Shoreway Road, Suite B, San Carlos, CA 94070, U.S.A.), qui peut etre couple a un systeme de guidage a 2 dimensions (2D) tel que un guidage 2D fluoroscopique. Le catheter d’injection ou de perfusion peut par exemple etre Ie catheter MYOSTAR® commercialise par BIOSENSE WEBSTER, INC. (15715 Arrow Highway; Irwindale ; CA91706 ; U.S.A.). Le catheter d’injection ou de perfusion peut par exemple etre couple a un systeme de guidage a 3 dimensions (3D) tel que le systeme de cartographie cardiaque 3D electromagnetique NOGA® XP commercialise par BIOLOGICS DELIVERY SYSTEMS GROUP (CORDIS Corp., Diamond Bar, CA, U.S.A.). Une ou plusieurs chimiokines, en particulier une ou plusieurs chimiokines de la famille CXC, en particulier la (ou au moins la) chimiokine CXCL12 (Stromal cell-Derived Factor-1 ou SDF-1), peuvent etre administrees, plus particulierement injectees au patient ou sujet. Cette administration ou injection peut etre simultanee, conjointe ou differee dans le temps par rapport a I’administration, plus particulierement a I’injection, d’une population de cellules de la demande (notamment d’une population de cellules humaines comprenant des cellules CD34+, a (’exclusion des cellules souches embryonnaires humaines), de cellules (notamment CD34+ humaines, a (’exclusion des cellules souches embryonnaires humaines) de la demande, ou d’une composition ou solution de la demande. Les utilisations des moyens de la demande ne sont pas limitees au traitement ou a la prevention d’une insuffisance cardiaque induite par une cardiomyopathie ischemique, ou d’une insuffisance cardiaque induite par un traitement chimio-therapeutique. Les moyens de la demande (notamment les moyens CD34+ de la demande) peuvent alternativement etre utilises pour traiter ou prevenir des pathologies non cardiaques. II peut s’agir d’une pathologie non cardiaque, qui n’est pas induite par une intervention cardiaque.5 10 15 20 25 30 CA 03029072 2018-12-21 WO 2017/220948 PCT/FR2017/051703 55 Les moyens de la demande peuvent en effet etre utilises pour traiter une myelosuppression, notamment une myelosuppression induite par Ie traitement d’un lymphome, plus particulierement d’un lymphome non hodgkinien, d’un lymphome hodgkinien, d’une leucemie lymphoTde chronique. Les moyens de la demande peuvent alors etre utilises pour implanter chez Ie patient, notamment dans sa moelle osseuse, par voie intraveineuse des cellules hematopoTetiques (autologues ou provenant d’un autre sujet) de la demande, notamment une population de cellules hematopoTetiques (autologues ou allogeniques) comprenant des cellules CD34+, telle que ci-dessus decrite. Les cellules implantees sont alors destinees a regenerer la moelle osseuse du patient. Les moyens de la demande peuvent alternativement etre utilises pour traiter ou prevenir une pathologie induisant une degenerescence du cartilage, telle que I’arthrose. Les moyens de la demande peuvent alors etre utilises pour implanter chez Ie patient, notamment dans la zone arthrosique, des cellules (autologues ou provenant d’un autre sujet) de la demande, notamment une population de cellules comprenant des cellules CD34+, telle que ci-dessus decrite. Les cellules implantees sont alors destinees a regenerer Ie cartilage du patient. Les moyens de la demande peuvent alternativement etre utilises pour traiter ou prevenir une insuffisance hepatique, notamment une insuffisance hepatique chronique, en particulier une insuffisance hepatique chronique non alcoolique (par exemple pour prevenir Ie developpement d’un carcinome hepatocellulaire). Les moyens de la demande peuvent alors etre utilises pour implanter chez Ie patient, notamment dans la zone hepatique, des cellules (autologues ou provenant d’un autre sujet) de la demande, notamment une population de cellules (autologues) comprenant des cellules CD34+, telle que ci-dessus decrite. Les cellules implantees sont alors destinees a regenerer Ie foie du patient. Le terme "comprenant", avec lequel "incluant" ou "contenant" est synonyme, est un terme ouvert, et n'exclut pas la presence d’un ou5 10 15 20 25 30 Date Re^ue/Date Received 2023-10-12 56 plusieurs element(s), ingredients) ou etape(s) de methode additionnel(s) qui ne serait(seraient) pas explicitement indique(s), tandis que Ie terme "consistant" ou "constitue" est un terme ferme, qui exclut la presence de tout autre element additionnel, etape, ou ingredient qui ne serait pas explicitement expose. Le terme "consistant essentiellement" ou " essentiellement constitue" est un terme partiellement ouvert, qui n'exclut pas la presence d’un ou plusieurs element(s), ingredient(s) ou etape(s) additionnel(s), dans la mesure ou ce(s) element(s), ingredient(s) ou etape(s) additionnel(s) n'affecte(nt) pas materiellement les proprietes de base de I'invention. Par consequent, le terme "comprenant" (ou "comprend(comprennent)") indut les termes "consistant", "constitue", aussi bien que les termes "consistant essentiellement" et " essentiellement constitue". Selon certains aspects, des incarnations de la presente invention telles que decrites incluent les objets suivants : 1. Cassette de culture cellulaire comprenant : - un boltier au moins partiellement rigide et definissant interieurement un espace interieur dans lequel est agencee et fixee une poche de culture cellulaire definissant un volume interieur, - des conduits relies chacun a une extremite au volume interieur de la poche et ayant chacun une seconde extremite situee a I’exterieur du boltier, et - des vannes d’ouverture/fermeture de la circulation de fluide au travers des conduits qui sont montees sur le boltier. 2. Cassette selon I’objet 1, dans laquelle les conduits sont formes par des tubulures souples et au moins certaines des vannes comprennent un organe mobile de pincement d’une des tubulures souples sur un element de structure du boltier.5 10 15 20 25 30 Date Re^ue/Date Received 2023-10-12 57 3. Cassette selon I’objet 2, dans laquelle chaque organe mobile comprend un axe de rotation et la Peripherie radialement externe de chaque organe mobile comprend au moins une surface en spirale autour de I’axe de rotation formant une surface de pincement de I’une des tubulures souples de maniere a faire varier une section de passage de fluide au travers de I’une des tubulures souples au fur et a mesure de la rotation de I’organe. 4. Cassette selon I’objet 3, dans laquelle les organes mobiles sont montes dans des logements d’une platine agencee a I’interieur du bottier et solidaire du boTtier, chaque logement recevant un organe mobile. 5. Cassette selon I’un quelconque des objets 2 a 4, dans laquelle chaque organe mobile comprend une extremite accessible depuis I’exterieur du bottier et pourvue de premiers moyens d’accouplement en rotation destines a cooperer avec des seconds moyens d’accouplement en rotation d’un actuateur. 6. Cassette selon I’objet 4 ou 5, caracterisee en ce que les organes mobiles sont centres et guides a rotation a une extremite dans un orifice du bottier et a une extremite opposee dans un orifice de la platine. 7. Cassette selon I’un quelconque des objets 2 a 6, dans laquelle la poche presente une forme sensiblement parallelepipedique comportant une premiere paroi souple et une seconde paroi souple sensiblement paralleles I’une a I’autre a I’etat vide et a I’etat remplit de liquide. 8. Cassette selon I’un quelconque des objets 1 a 7, dans laquelle Ie bottier presente une forme correspondant sensiblement a celle d’un parallelepipeds rectangle et comporte une demi-coque inferieure et une demi-coque superieure solidaires I’une de I’autre, la demie-coque inferieure etant rigide et la demi-coque superieure etant rigide ou flexible. 9. Cassette selon I’objet 8, dans laquelle la demi-coque superieure comprend une ouverture ou evidement central dont la forme et la dimension sont determinees pour permettre la propagation d’une ondulation du liquide de la poche dans I’ouverture lorsque la cassette contenant un liquide subit5 10 15 20 25 30 Date Re^ue/Date Received 2023-10-12 58 cine oscillation autour d’un axe horizontal, I’ouverture etant disposee vers Ie haut. 10. Cassette selon I’objet 8 ou 9, dans laquelle les conduits s’etendent au travers de I’un des rebords peripheriques de I’une des demi-coques inferieure ou superieure. 11. Cassette selon I’un quelconque des objets 1 a 10, comprenant une barrette de support des conduits, agenceea I’exterieurdu bottierettraversee par au moins certains des conduits. 12. Incubateur de culture cellulaire, comprenant une enceinte thermostatee et un dispositif de support et d’agitation d’une cassette de culture cellulaire selon I’un quelconque des objets 1 a 11 et des moyens de positionnement et de blocage de la cassette de culture cellulaire dans une position donnee dans Ie dispositif de support, Ie dispositif de support et d’agitation comprenant un plateau de support de la cassette de culture cellulaire, Ie plateau portant des actuateurs electromecaniques d’ouverture/fermeture des vannes dont une sortie porte des seconds moyens d’accouplement destines a cooperer avec des premiers moyens d’accouplement des vannesde la cassette lorsque la cassette estdans ladite position donnee. 13. Incubateur selon I’objet 12, dans lequel Ie plateau de support de la cassette de culture cellulaire est monte rotatif autour d’un axe horizontal autour duquel Ie plateau est destine a osciller pour I’agitation et I’homogeneisation du contenu de la poche. 14. Incubateur selon I’objet 13, dans lequel Ie dispositif de support et d’agitation comprend une bielle dont une extremite superieure est reliee par I’intermediaire d’un oscillateur au plateau et dont I’extremite inferieure est reliee a une manivelle entrainee en rotation par I’arbre d’un moteurdont I’axe est sensiblement horizontal. 15. Incubateur selon I’un quelconque desobjets 12 a 14, comprenant une porte de fermeture etanche d’une ouverture de I’enceinte, cette ouverture comprenant un bord peripherique dans lequel est forme un renfoncement5 10 15 20 25 30 Date Re^ue/Date Received 2023-10-12 59 dont la forme est adaptee a recevoir la barrette de support des conduits d’une cassette selon I’objet 11, la barrette formant un organe d’etancheite entre la porte et Ie bord peripherique lorsque la porte est en position de femneture de I’enceinte. 16. Automate de culture cellulaire comprenant au moins un incubateur selon I’un quelconque des objets 12 a 15, et un systeme informatique de commande incluant des moyens de saisie et d’enregistrement de donnees et destine a reguler les conditions de culture dans une enceinte dudit au moins un incubateur et a piloter les vannes de la cassette logee dans I’enceinte. 17. Procede de culture cellulaire au moyen d’un automate selonI’objet 16, caracterise en ce qu’il comprend les etapes suivantes : a) placer une cassette de culture cellulaire selon I’un quelconque des objets 2 a 7 a I’interieurde I’enceinte de I’incubateur dans une position de decongelation sur Ie dispositif de support et d’agitation; b) alimenter la poche en cellules a cultiver ; c) placer la cassette sur Ie dispositif de support et d’agitation dans une position de culture cellulaire ; d) agiter la cassette durant une periode de temps donnee pour homogeneiser son contenu ; e) maintenir la cassette dans des conditions d’incubation pendant une duree de plusieurs jours ; et f) recuperer Ie contenu de la cassette au moyen de I’une des tubulures souples de la cassette. 18. Procede selon I’objet 17, caracterise en ce qu’il comprend: - pendant I’etape d), une ou plusieurs etapes de prelevement d’echantillon du contenu de la poche, qui sont chacune precedees d’une etape de basculement d’un plateau de support d’une position horizontale de culture jusqu’a une position inclinee dans laquelle la zone de prelevement de la poche represente Ie point Ie plus bas de la poche.5 10 15 20 25 30 CA 03029072 2018-12-21 WO 2017/220948 PCT/FR2017/051703 1 CELL CULTURE CASSETTE AND AUTOMATED SYSTEM The present invention relates to a cell culture cassette, as well as to an automated cell culture system using said cassette. The invention thus relates here to a device for cell culture, in particular, designated under the name of cassette. Among the fields using cell culture, cell therapy is the least advanced in terms of industrialization. There is therefore a significant need to find a technology capable of producing cells in sufficient quantity and under optimal and secure conditions for the use of these cells for therapeutic applications. Some cell therapy procedures require culture or amplification of stem cells before reinjection into a patient, because the quantities taken are sometimes insufficient to have a therapeutic effect. It is essential to guarantee the integrity of the therapeutic properties of cells during their culture. In current technology, the solutions proposed for culturing stem cells ex vivo are artisanal, very empirical and not very effective. Furthermore, current techniques do not allow for the production of stem cells in sufficient quantities for therapeutic applications. There is therefore a real need to develop a bioreactor-type technology with a compact geometry that allows for the cultivation of large quantities of cells. Automation of stem cell expansion processes for production applications in a therapeutic or clinical setting requires cell production devices capable of operating in controlled activity areas (cleanroom), minimizing human intervention. Stem cell culture processes are relatively complex because they involve multiple steps of obtaining these cells from a sample taken from a patient, isolating the cells, purifying them before culturing them and finally collecting, purifying and conditioning them after culturing before sending them to clinical treatment centers. All of these steps must be carried out in compliance with manufacturing standards imposing strict conditions of sterility and traceability. The multiplication of manufacturing steps, often manual, requires the use of containment areas of different classes in order to maintain the sterility of the process. Proper conduct of the preparation process before and after culture often involves the transfer of intermediate products of the process from one area to another, increasing both the risks of loss of sterility and mixing of production streams. We know, for example, of a cell culture system such as the one described in document US2012/0308531. The production of continuous cultures intended for the production of stem cells is carried out by means of a complex system of sub-assemblies bringing the different reagents, cells and gases to the reactor. The applicant also proposed an automated cell culture system in document WO/2013/135817. If cell culture is performed within a single pocket, its manipulation can prove delicate due to its flexible structure. The invention aims in particular to provide a simple, effective and economical solution to the problems of the prior art described above. To this end, it proposes a cell culture cassette comprising: - a casing at least partially rigid and internally defining an interior space in which is arranged and fixed a cell culture bag defining an interior volume, - conduits each connected at one end to the interior volume of the bag and each having a second end located outside the casing, and 5 10 15 20 25 30 CA 03029072 2018-12-21 WO 2017/220948 PCT/FR2017/051703 3 - valves for opening/closing the circulation of fluid through the conduits which are mounted on the casing. The handling of the bag and valves is done through the cassette's housing. Only the second ends of the conduits require direct handling. According to the invention, the cell culture cassette or device incorporates all the elements that could pose a difficulty in terms of sterility and whose direct manipulation must be limited. These elements are pre-assembled in a single-use cell culture cassette. After use, it is possible to dispose of all used pipes, valves and culture bags according to good practice guidelines. Preferably, integrating a soft pocket into a boot that is at least partially rigid greatly facilitates the handling of the pocket, which is thus retained in the boot. Similarly, the integration of the valves into the casing makes it easier to locate the positions of the valves which can then be more easily manipulated by the control means of an incubator as will appear in the rest of the description. The solution of integrating the valves into the fluidic cassette as a means of occluding the cassette conduits improves the automation of the use of the cassette in a cell culture process by avoiding the use of plastic clamps, which are often weakened during a freezing step and can only be operated by hand, or pinch solenoid valves which require the manual placement of the conduits in the jaw of the solenoid valve. This solution therefore avoids the handling of the pipes, and the errors related to the incorrect insertion of the pipes into the solenoid valves. The cassette containing the cell culture medium in the pouch can be frozen for as long as necessary. According to another feature of the invention, the conduits are formed by flexible tubing and at least some of the valves5 10 15 20 25 30 CA 03029072 2018-12-21 WO 2017/220948 PCT/FR2017/051703 4 include a movable pinching member of the tubing on a structural element of the casing. As described previously, the integration of the valves into the cassette allows the closed channels (storage or culture time) to be kept closed autonomously and securely for a desired time without requiring external energy. According to yet another feature of the invention, each moving part includes an axis of rotation and the radially external periphery of each moving part includes at least one spiral surface around the axis of rotation forming a pinching surface of the tubing so as to vary a fluid passage cross-section through a tubing as the part rotates. Advantageously, the valves are capable of maintaining a given position. More specifically, the valves are designed so that the moving parts can maintain a given open or closed position in the absence of energy input. More specifically, this can be achieved by ensuring that the perpendicular to the point of contact of the spiral surface with a tube is oriented towards the axis of rotation of the moving organ, which induces a zero torque around said axis. In a particular design, the moving parts are mounted in housings of a plate attached to the casing, each housing receiving a moving part. When the casing is made of two lower and upper half-shells, it is possible to mount the cell culture bag on the lower half-shell, to mount the mobile tubing clamping mechanisms on the lower half-shell, and then to mount the platform which ensures simultaneous support of the mobile mechanisms. The plate can, for example, be secured by screwing to the lower half-shell. The mounting plate thus makes it possible to secure and facilitate the assembly of the various parts mentioned above. It helps to ensure the valves remain in place. 5 10 15 20 25 30 CA 03029072 2018-12-21 WO 2017/220948 PCT/FR2017/051703 5 Each moving part includes an end accessible from outside the casing and provided with first means for rotating coupling intended to cooperate with second means for rotating coupling of an actuator which may be electromechanical. Access to the moving parts of the valves from the outside makes it possible to mount the cassette on a suitable support of an incubator having second means of coupling, for example complementary for driving in rotation the first means of coupling of the valves to achieve an opening/closing of the circulation of liquid as needed. This external accessibility makes it possible to manually manipulate the valves in the event of a failure of the valve drive means. Preferably, the moving parts are centered and guided to rotation at one end in an orifice of the casing and at the opposite end in an orifice of the plate. When the case is formed of two half-shells, the plate can be clamped inside the case between these two half-shells. According to another feature of the invention, the bag has a substantially parallelepiped shape comprising a first flexible wall and a second flexible wall substantially parallel to each other in the empty state and in the state filled with liquid. The parallelepiped shape is substantially planar so that the thickness measured between the first and second walls, in a first direction substantially perpendicular to the first and second walls, is very small, that is to say very clearly less than the other two dimensions of the pocket measured in the other two directions of space perpendicular to each other and to the said first direction. The term "very clearly inferior" means at least 10 times inferior, as is commonly accepted in mathematics. Preferably, the ratio of the sum of the areas of the first wall and the second wall to the total internal volume of the pocket is 5 10 15 20 25 30 CA 03029072 2018-12-21 WO 2017/220948 PCT/FR2017/051703 6 between 500 and 690 cm2/L, preferably is on the order of 580 cm2/L. This ratio ensures optimal heat exchange between the flexible pouch and the outside when the cassette is arranged in a thermostatically controlled incubator. The distance separating the first wall from the second wall or thickness of the bag in the liquid-filled state, measured along a direction perpendicular to the first and second walls, is advantageously less than 20 mm, preferably between 10 and 20 mm and even more preferably in the order of 14 mm. Using a thin layer further facilitates heat diffusion within the liquid in the bag. This also allows for uniform freezing and thawing of the different components of the culture medium, which is also rapid at a constant temperature. The pouch according to the invention makes it possible to maintain the stability of the culture medium during a freezing step. Indeed, a high freezing speed of biological products derived from blood is a guarantee of preservation of constituents, homogeneity of the medium after thawing, and absence of concentration effect of seis and proteins in solution at the heart of the frozen mass. The pouch according to the invention promotes rapid freezing of the culture medium thanks to its particular geometry having a high surface area to volume ratio, and a low thickness. According to another feature of the invention, the walls of the pocket are permeable to gases, in particular to CO2, and preferably have properties limiting to the maximum the adhesion of the cells with the walls of the pocket. The pocket is preferably flexible, that is to say, deformable. It preferably comprises flexible walls permeable to gases and capable of retaining the culture medium and its cellular expansion, which is liquid. In practice, this means retaining all the liquid contained in the pocket. It preferably exhibits good permeability to oxygen and carbon dioxide5 10 15 20 25 30 CA 03029072 2018-12-21 WO 2017/220948 PCT/FR2017/051703 7, which allows good aeration of the bag's contents without opening it and therefore without risk of contamination of its contents. In a particular embodiment of the invention, the bag comprises the following permeability characteristics (in cm3 per day under a pressure of one atmosphere, i.e. 1 bar, at 37°C): for dioxygen 418 to 508, for carbon dioxide 699 to 1200, for dinitrogen 157 to 200 and for water 0.05 to 0.1. The pouch is for example formed from a thin film which can be made of copolymer such as fluoropolymer and more particularly fluoro-ethylene-propylene which can have a thickness for example of the order of 120pm. In a preferred embodiment, the pocket has a substantially parallelepiped shape of low thickness which can reach a maximum width of 230 to 250 mm when flat and a length of 230 to 250 mm when flat. The use of a material belonging to the fluoropolymer family has the advantage of being permeable to gases and also of having low adhesion to liquids. The boot preferably has a shape corresponding substantially to that of a rectangular parallelepiped and may comprise a lower half-shell and an upper half-shell joined to each other, the lower half-shell being rigid and the upper half-shell being rigid or flexible. Thus, the bootmaker can also have a shape that is substantially flat and has a very small thickness in comparison to its length and width. The boot can be made from any thermoplastic elastomer material such as SEBS, which stands for Styrene-Ethylene-Butadiene-Styrene. The lower half-shell can be rigid to ensure optimal support of the flexible bag while the upper half-shell can be partially rigid and include one or more flexible zones made of an elastomeric material so as to facilitate gripping and a certain deformability to facilitate the mounting of the cassette in the support and agitation means which will be presented below. Obviously, the upper half-shell can also be completely rigid like the lower half-shell. The two lower and upper half-shells can be assembled by clipping, gluing or welding their peripheral edges. The half-shells can have the same thickness or different thicknesses. In a preferred embodiment of the invention, the upper half-shell may include a central opening or recess whose shape and dimensions are determined to allow the propagation of a ripple of the liquid from the bag into the opening when the cassette containing a liquid undergoes an oscillation around a horizontal axis, the opening being disposed upwards. The formation of a ripple is desirable to achieve rapid homogenization of the liquid in the bag. The formation of a recess, which could also be described as a cutout or an opening, thus avoids having to increase the thickness of the boot. Get evidement also ensures better gas diffusion upon contact with the pocket. It can have a dimension of approximately 210 mm wide and about 28 mm long. Preferably, the lower half-shell comprises a plurality of orifices, preferably having a diameter, for example, less than 20 mm. The integration of orifices makes it easier to transfer gas in a similar way to opening the upper half-shell, but also ensures that the bag is held in place on the lower half-shell. In a practical embodiment of the invention, the lower half-shell may include approximately 50 and 400 orifices, each having a diameter between 5 and 20 mm, for example of the order of 10 mm. The orifices can be distributed according to a mesh having a basic pattern which is that of an equilateral triangle with a unit length between 5 and 40 mm and for example 20 mm. 5 10 15 20 25 30 CA 03029072 2018-12-21 WO 2017/220948 PCT/FR2017/051703 9 In an embodiment of the cassette according to the invention, the conduits extend through one of the peripheral edges of one of the lower or upper half-shells. The conduits can be housed in notches on one of the peripheral edges of a lower or upper half-shell. The cassette preferably includes a conduit support bar, arranged outside the casing and through which at least some of the conduits pass. This bar allows the support of the conduits which extend outside the casing of the cassette, which limits the untimely movements of the free ends of the conduits. Furthermore, the support is intended to form a sealed passage element for the door of an incubator, as will become clearer later in the description. The cassette preferably includes a cell culture medium stored in the pocket, the cell culture medium being able to be in a frozen state. The cell culture medium can be a cell culture medium whose composition is adapted to the multiplication of mammalian cells, in particular human cells, excluding human embryonic stem cells. The culture medium may or may not contain cultured cells. These cells, in particular these human cells, excluding human embryonic stem cells, may advantageously be, or comprise, CD34+ (human) cells, in particular CD34+ (human) hematopoietic cells or CD34+ non-hematopoietic (human) cells. These CD34+ (human) cells can, for example, be cells from peripheral blood (human) or umbilical cord (human) or from human tissue, in particular peripheral blood (human). These cells, in particular these human cells, excluding human embryonic stem cells, may advantageously be,5 10 15 20 25 30 CA 03029072 2018-12-21 WO 2017/220948 PCT/FR2017/051703 10 or comprise, stem or progenitor cells, in particular multipotent or pluripotent cells. These cells are not, or do not include, human embryonic cells. This cell culture medium may include components that allow the multiplication of these cells, more particularly that allow their multiplication while maintaining them in an undifferentiated state, or at the very least while preventing them from reaching a state of terminal differentiation. This cell culture medium may include insulin, transferrin, and plasma or serum (human). This cell culture medium may include support cells (feeder cells), such as fibroblasts, or be devoid of them. This cell culture medium may, for example, be, or include, Iscove's modified Dulbecco's Medium (IMDM; see, for example, Iscove, N. N. and Melchers, F. (1978) J. Exper. Med. , 147:923), optionally supplemented with glutamine or peptides containing glutamine. More specifically, this cell culture medium may be, or include, IMDM medium, optionally supplemented with glutamine or glutamine-containing peptides, this medium being devoid of fibroblasts and comprising human (recombinant) insulin, (human) transferrin and (human) plasma or serum. For example, the culture medium may include: - 1 to 50 pg/mL, in particular 8 to 12 pg/mL, of insulin, - 100 to 2000 pg/mL, in particular 300 to 500 pg/mL, of transferrin, and - 1 to 30%, in particular 4 to 12%, of serum or plasma (human). The culture medium may also include heparin, for example 1.5 to 3.5 IU/mL of heparin. 5 10 15 20 25 Date Re^ue/Date Received 2023-10-12 11 The culture medium may also include erythropoTetin, in particular human (recombinant) erythropoTetin. The culture medium may also include one or more growth factors, including one or more growth factors selected from hydrocortisone, SCF (Stem Cell Factor), interleukin 3 (IL-3), thrombopoietin (TOP), FLT3 (Fms-like tyrosine kinase 3), BMP4 (Bone Morphogenetic Protein 4), VEGF-A 165 (Vascular endothelial growth factor A 165), and IL-6. The culture medium may include, in particular: - hydrocortisone, or - SCF, or - SCF and IL-3, or - hydrocortisone and SCF, or - hydrocortisone, SCF and IL-3, or - SCF, TOP, FLT3, BMP4, VEGF-A165, IL-3 and IL-6. The culture medium may in particular be a culture medium as described in WO 2011/101468 (or in one of the US patent applications which are derived from, or based on, this international PCT application, such as in particular US application 2013/0078721 A1). The cassette may include the culture medium and/or cells as described above. According to one embodiment, the cassette includes the culture medium in the pocket, more particularly in frozen form, but does not include cells. According to another embodiment, the cassette comprises the culture medium in the pocket, more particularly in unfrozen form, and further comprises cells, in particular cultured cells, notably CD34+ (human) cells as described above. 5 10 15 20 25 Date Re^ue/Date Received 2023-10-12 12 The invention further relates to a cell culture incubator, comprising a thermostatically controlled chamber and a device for supporting and agitating a cell culture cassette according to one of the preceding embodiments and means for positioning and locking the cell culture cassette in a given position in the support device. In one embodiment, the support and agitation device includes a cell culture cassette support tray which is mounted to rotate around a horizontal axis around which the tray is intended to oscillate for agitation and homogenization of the contents of the bag. The support and stirring device may include a connecting rod, the upper end of which is connected via an oscillator to the plate, and the lower end of which is connected to a crank driven in rotation by the shaft of a motor whose axis is substantially horizontal. The incubator may include means for controlling the position of the cell culture cassette in the support means so as to verify that the cassette is properly positioned on the support means and that it can be used. The platform can carry electromechanical valve opening/closing actuators, one output of which carries second coupling means intended to cooperate with first coupling means of the cassette valves when the cassette is in said given position. According to another feature of the invention, the incubator includes a sealing door for an opening in the enclosure, this opening including a peripheral edge in which is formed a recess whose shape is adapted to receive the support bar for the conduits, the bar forming a sealing element between the door and the peripheral edge when the door is in the closed position of the enclosure. 5 10 15 20 25 30 CA 03029072 2018-12-21 WO 2017/220948 PCT/FR2017/051703 13 The integration of a conduit support bar allows the operation of positioning the conduits at the doorway to be carried out in a simple and quick manner. Indeed, unlike the known technique which consists of integrating grooves for housing the conduits directly into the peripheral edge, and placing them one by one in grooves, the invention proposes to achieve an assembly of all the conduits in a single step. Furthermore, the seal is made on the strip and no longer on the conduits, which simplifies the making of the airtight closure since this strip can have a rigid structure on which the door can rest. The invention also relates to a cell culture automaton comprising at least one incubator of the type described above, and a computer control system including means for data entry and recording and intended to regulate the culture conditions in an enclosure of said at least one incubator and to control the valves of the cassette housed in the enclosure. The invention also relates to a cell culture method using an automated system as described above, the method comprising the steps of: a) placing a cell culture cassette as described above inside the incubator enclosure in a thawing position on the support and shaking device; b) feeding the bag with cells to be cultured; c) placing the cassette on the support and shaking device in a cell culture position; d) shaking the cell culture cassette for a given period of time to homogenize its contents; e) maintaining the cell culture cassette under incubation conditions for a period of several days; and f) retrieving the contents of the cassette by means of one of the tubing of the cassette. 5 10 15 20 25 30 CA 03029072 2018-12-21 WO 2017/220948 PCT/FR2017/051703 14 The process further includes: - during step d), one or more sampling steps of the bag contents, each of which is preceded by a tilting step of the support tray from a horizontal culture position to an inclined position in which the sampling area of the bag represents the lowest point of the bag. The invention will be better understood and other details, advantages and features of the invention will become apparent from reading the following description, given by way of non-limiting example, with reference to the accompanying drawings in which: - Figure 1 is a schematic perspective view of the cell culture automaton according to the invention, this automaton comprising an incubator defining a thermostatically controlled chamber which is open; - Figure 2 is a schematic perspective and isolated view of the incubator; - Figures 3A and 3B are schematic side views of the support and stirring means and of the cassette; - Figure 4 is a schematic perspective view of the support and stirring means and of the cassette; - Figure 5 is a schematic top view of the cassette resting on the support and stirring means; - Figures 6A to 6C represent different positions for using the cassette in the thermostatically controlled chamber of the automaton; - Figure 7 is a schematic perspective view of the cassette according to the invention, looking towards the upper half-shell; - Figure 8 is a schematic perspective view of the cassette according to the invention, looking towards the lower half-shell; - Figure 9 is a larger-scale schematic view of the area delimited by dotted lines in Figure 8; 5 10 15 20 25 30 CA 03029072 2018-12-21 WO 2017/220948 PCT/FR2017/051703 15 - Figure 10 is a schematic perspective view of the cassette of Figure 7, with the upper half-shell removed; - Figure 11 is a schematic perspective view of the lower half-shell; - Figure 12 is a schematic perspective view at a larger scale of the area delimited by the dotted line in Figure 11; - Figures 13 and 14 are schematic perspective views of the upper half-shell; - Figure 15A is a schematic perspective view of a receiving plate for the opening/closing valves of the cassette ducts; - Figures 15B and 15C are schematic perspective views at a larger scale of only a portion of the plate in Figure 15A; - Figures 16A, 16B, and 16C represent a first variant of a valve usable with the plate in Figure 15A; - Figures 17A and 17B represent a second variant of a valve usable with the plate in Figure 15A; - Figure 18 is a schematic perspective view of the means for rotating the valve of Figures 16A, 16B and 16C; - Figures 19A and 19B are schematic perspective views of an actuation member of the valve of Figures 17A and 17B; - Figure 20 is a schematic perspective view of a cell culture system consisting of a plurality of incubators and a centrifuge; - Figure 21 is a flowchart showing the steps of a cell culture process according to the invention. We refer first of all to figures 1 and 2 which represent an example of the realization of the cell culture automaton 10 according to the invention, this automaton 10 being for example intended for the culture of 5 10 15 20 25 30 CA 03029072 2018-12-21 WO 2017/220948 PCT/FR2017/051703 16 stem cells, excluding human embryonic stem cells. As represented, the automaton 10 essentially comprises three elements: - a thermostatically controlled incubator 12 comprising a support and stirring device 14 for a cell culture cassette 16 according to the invention (figures 1 and 3); - a support frame 18 for the incubator 12 and a centrifuge 20, and - a computer system connected to the incubator 12 and the centrifuge 20 for the control of valves and pumps and carried by the frame 18. Typically, the computer system includes means for data entry and recording, means for data processing, means for display, and means for emitting control and piloting signals for the incubator as well as the valves of cassette 16 and pumps. Preferably, the computer system includes a 22-inch touchscreen display and data entry by an operator or user. The control and traceability of the steps of the biological protocol can be ensured by the computer system and an appropriate human-machine interface (HMI), which notably allow: to ensure the complete traceability of the manufacturing process of each stem cell graft, the intervention steps of the operators on the automated system, the culture parameters such as temperature, CO2 level, and the time of each step and the validation actions necessary for certain steps of the process, to ensure the traceability of the consumables and reagents used in the process, via an input interface, means of reading and storing barcode data, and RFID tags, and a verification of the consistency of the information collected with an internal database. This traceability can be applied to the entire chain of manufacture, storage and transport of consumables and reagents, as well as to the material conditions for maintaining the temperature of these components. to systematically indicate to the user the details of the protocol steps through animations and images illustrating the progress of the process steps, to securely record patient identification data, biological data related to the characterization of stem cell grafts, to control each of the actuator control functions, to record and interpret the data from the different sensors present on the automaton or the fluidic cassette. As shown in figure 2, the incubator 12 comprises two doors, a first internal door 22 intended to come to be applied to a first contact surface 24 surrounding the opening 26 of the enclosure 28 of the incubator 12 and a second external door 30 intended to come to be applied to a second contact surface 31 surrounding the first contact surface 24. The first 22 and second 30 doors, for example, are each pivotable around the same vertical axis. The enclosure 28 houses ventilation means 33 which are arranged in the upper part of the enclosure 28 (figures 1, 6A, 6B and 6C). These ventilation means 33 are sized and configured to allow a uniform distribution of temperature and gases within the incubator enclosure necessary for effective cell culture and to have an appropriate temperature (figures 1, 6A, 6B and 6C). During the thawing of the culture medium contained in the bag, the heat in the enclosure is thus uniformly distributed to allow rapid thawing of the cell culture medium. The internal door 22 can be made of transparent glass so as to allow observation of the contents of the enclosure 28 of the incubator 12 while keeping the incubator 12 in the closed position. The opening 26 of the enclosure 28 includes a peripheral edge 24, corresponding to the first contact surface, the lower edge of which 24a has a recess 32 intended to receive a retaining bar 34 for the tubes or conduits 36, 38 of the cassette 16 which will be described in more detail later, in particular with reference to figures 7 and 8. The bar 34, which is visible in figures 4, 5, 7 and 8, forms a rigid shell which can have a substantially parallelepiped shape. It can also have two opposite sides 40 connected to each other by lower and upper faces 42. The conduits or tubing 36, 38 extend to the seal through orifices of the strip 34. These openings are formed in walls 44 substantially perpendicular to the sides 40 and to the lower and upper walls 42. Each side 40 of the bar 34 includes a groove 46 parallel to the lower and upper faces 42. The grooves 46 of the flanks 40 are arranged asymmetrically to each other with respect to a median plane of the bar 34 and parallel to the two flanks 40. These grooves 46 are intended to receive ribs (not visible) from the sides of the recess 32 of the lower peripheral edge 24a of the incubator 12 so as to ensure positioning of the strip 34 in the recess 32. The asymmetrical positioning of the grooves 46 allows for error-free assembly of the strip 34 in the recess 32 of the incubator 12. Thus, more generally, the strip may include means of preventing its assembly in a recess on a peripheral edge of an opening of the incubator. The opening can then be closed by a movable part, such as a door or a hatch, which is movable between an open position of the incubator and a closed position of the incubator opening. The rigid bar or shell 34 preferably has a shape complementary to that of the recess 32. This complementary form can be such that when the bar 34 is in position in the recess 32, its lower face 42 comes into contact with the bottom face of the recess 32 and the upper face 42 is flush with the rest of the peripheral edge 24 of the opening 26 of the enclosure 28 of 5 10 15 20 25 30 CA 03029072 2018-12-21 WO 2017/220948 PCT/FR2017/051703 19 the incubator 12 in order to form a substantially flat surface on which the first door 22 can come to rest with a seal. In this way, the sealing of the internal door 22 on the peripheral edge 24 of the opening 26 of the enclosure 28 of the incubator 12 can be achieved in a simple manner. Furthermore, the passage of the tubes 36, 38 or conduits through the first door 22 can be carried out in a simple manner without it being necessary to manipulate the conduits 36, 38 one by one. Finally, when the first door 22 is applied to the bar 34, the closing force is exerted on the rigid structure of the bar 34 and not on the tubes 36, 38, which avoids any crushing of the tubes 36, 38 and ensures their fluid passage cross-section. Preferably, the recess 32 may include a presence sensor 47 of the bar 34 allowing confirmation of the correct positioning of the bar in the recess 32 so as to allow the closure of the first door 22 and then of the second door 30. As can be seen in Figure 2, the front of the incubator enclosure 12 includes another recess 48 opening into the recess 32 of the peripheral edge 24 of the opening 26 of the enclosure 28. This recess 48 is intended to allow the passage of the conduits 36, 38 or tubing beyond the recess 32 of the first door 22 and the second door 30 to the centrifuge. In practice, this second recess 48 can be closed by a hatch (not shown), for example a sliding one. As shown in Figure 3A, the thermostated chamber 28 includes a support and stirring device 14 for a cell culture cassette 16 according to the invention. This device can be broken down into a support device 50 and a stirring device 52 connected to each other. The support device 50 includes a support tray 54 or support cradle for the cassette 16 and a base 60. The platform 54 has a first end 56 arranged at the bottom of the thermostated enclosure 28 and a second end 58 opposite the first end which is connected to rotation around a horizontal axis 63 to the base 60 extending substantially vertically and which is supported by the wall 62 forming the floor of the thermostated enclosure 28 (figures 3A and 4). More precisely and as shown in figure 3B, the first end 56 of the platform 54 is supported and articulated in rotation around the axis 63 on two arms 65 extending vertically from the floor 62 of the enclosure 28 and formed on either side of the platform 54. The stirring device 52 includes a connecting rod/crank type system comprising a connecting rod 64, the upper end of which is connected to a lower end of an oscillator or vertical oscillating rod 66, supporting at its opposite upper end the plate 54 by its lower face. The lower end of the connecting rod 64 is connected to a crank 68 driven in rotation by a shaft of a motor whose axis 70 of rotation is substantially horizontal. Get axis 70 is perpendicular to axis 63. The upper end 66 of the oscillator is connected to the plate in such a way as to allow movement of the oscillator in a plane perpendicular to the axis of rotation 70. Also, the upper end of the oscillator 66 is connected by displacement relative to the support plate 54 in the direction of the axis 70, this connection being able to be made by the sliding mounting of a finger, of the upper end of the oscillator 66, in a slot 71 or groove of the plate 54. As shown in figures 3, 4 and 5, the oscillator 64 passes through the floor wall 62 of the enclosure 28 of the incubator 12. Preferably, sealing means, such as a bellows, are provided around the oscillator 66, at the level of the area of passage through the floor wall 62 in order to avoid heat and moisture transfers outside the thermostated enclosure 28 which could damage the mechanical elements of the stirring device 52. Figures 6A, 6B and 6C represent three positions taken by the plate 54 during its movement by the means of agitation. Figure 6A represents the upper position of plate 54 and Figure 6B5 10 15 20 25 30 CA 03029072 2018-12-21 WO 2017/220948 PCT/FR2017/051703 21 represents the lower position of plate 54. In both of these two positions, the platform is inclined relative to a horizontal plane. Figure 6C represents a median position in which the plateau 54 is substantially horizontal. In operation, the cassette support plate 54 is thus able to perform an angulation between its extreme positions (figures 6A and 6C) around the axis 63 (figure 4). As shown in figure 2, the cassette support plate 54 is formed of a frame 72 having an opening 74 or hollow part and a solid part 76. The hollow part 74, arranged in the vicinity of the first end 56 of the plate 54, is intended to come opposite the lower half-shell of the cassette which will be described below. The solid part 76 is arranged in the vicinity of the second extremity 58 of the plateau 54. This solid part 76 includes means for positioning and locking the cell culture cassette in a given position on the tray 54 corresponding to a position in which the cassette 16 rests on the frame 72 and allows an incubation phase to be carried out. The positioning means include two pins 78 projecting upwards intended to cooperate with two blind holes in the cassette 16 (described below). The means for locking cassette 16 include a clipping hook 80 or a snap-on with a cassette hook which will be described below so as to lock cassette 16 on plate 54. The hook 80 of the solid part 46 of the frame 72 of the board 54 is arranged between the two pawns 78. As can be seen in Figure 2, the platform includes three electromechanical valve opening/closing actuators 82, each actuator 82 comprising an output having second coupling means intended to cooperate with first coupling means of the cassette valves when the cassette 16 rests on the frame 72 of the platform 54. The frame 72 is surmounted by a support structure 84 for the cassette 16, positioned at a distance from the frame 72. This support structure 84 allows 5 10 15 20 25 30 CA 03029072 2018-12-21 WO 2017/220948 PCT/FR2017/051703 22 to support cassette 16 in a second position corresponding to a defrosting phase. This support structure 84 comprises two lateral fins 86 connected to each other by a flat wall 88 and together form a common support plane for the cassette 16 in the second position. We note that the support planes of cassette 16 in the first position and in the second position are inclined relative to each other. The second position allows the cassette 16, hermetically vacuum-sealed in an envelope, to be supported at a distance from the frame 72 in order to avoid any tearing of the envelope, generally made of plastic material, by the pins 78 during the defrosting phase. We now refer to figures 7 and 8 which represent a cell culture cassette 16 according to the invention comprising a casing 90 having a shape corresponding substantially to that of a rectangular parallelepiped having a first end 92 and a second end 94 in reference to the positioning of the cassette 16 on the tray 54. The boot 90 comprises a lower half-shell 96 (figures 9 to 12) and an upper half-shell 98 (figures 13 and 14) joined together, the lower half-shell 96 being rigid and the upper half-shell 98 being rigid or partially rigid, i.e. comprising flexible parts. The two lower half-shells 96 and upper half-shells 98 together define a housing in which a flexible cell culture pouch 100 is fixed, defining an internal volume intended to be filled with a cell culture medium. The lower half-shells 96 and upper half-shells 98 are connected to each other by four peripheral rims 102a, 102b. The two lower half-shells 96 and upper half-shells 98 can be assembled by clipping, gluing or welding their peripheral edges 102a, 102b. In a preferred design, both the lower half-shell 96 and the upper half 98 are rigid. The lower half-shell 96 comprises a plurality of orifices 104 preferably having a diameter less than 20 mm. The cassette 16 has par5 10 15 20 25 30 CA 03029072 2018-12-21 WO 2017/220948 PCT/FR2017/051703 23 example of dimensions of 405 mm in length, 305 mm in width and a thickness of 25 mm. It also includes two blind holes 106 spaced apart from each other and framing a through or through opening 107. The blind holes 106 are formed by a recess 109 of the lower half-shell 96, extending towards the upper half-shell 98 (figures 11 and 12). The upper half-shell 98 includes an opening or cutout 108 whose shape and dimensions are determined to allow the propagation of a wave of the liquid from the bag 100 into the opening when the cassette 16 containing a liquid undergoes an oscillation around the horizontal axis 63, the opening 108 or cutout (or cutout) being disposed towards the top (figures 7, 13, 14). As previously mentioned, the formation of a recess 108 allows for the formation of a wave on the surface of the pocket 100 located inside the casing when the cassette 16 is mounted in the second position on the plate 54 and the latter is moved in an oscillating manner as described with reference to figures 6A, 6B and 6C. The upper half-shell 98 includes an elastic tab 110 carrying a clip hook 112 with the hook 80 of the frame 72 of the plate 54 as has already been mentioned previously. The hook 112 of the upper half-hull 98 is thus configured to pass through the opening 107 of the lower half-hull 96. Finally, the upper half-shell 98 also includes a circular orifice 114 for the insertion of a manual actuation plug 116 for a valve, the use of which will become clearer with reference to figures 17 and 18. It is noted that the peripheral rim 102a of the lower half-shell 96, located at the level of the first end 92 of the casing 90, has a straight rib 116 which is intended to cooperate with a slot 118 of the support structure 84 of the tray 54 when the cell culture cassette 16 is mounted in its first position on the tray 54 in the enclosure 28 of the incubator 12 (figures 8, 9, 11, 12). In this first position, the clipping hook 112 of the upper half-shell5 10 15 20 25 30 CA 03029072 2018-12-21 WO 2017/220948 PCT/FR2017/051703 24 98 passes through the opening 107 of the lower half-shell 96 and cooperates with the hook 80 of the frame 72 of the tray 54 to ensure the locking of the cassette 16 in this first position (figures 3, 4 and 5). To release cassette 16 and remove it from the incubation chamber 28, simply press tab 110, which leads to disengaging hook 110 from the upper half-shell 98 from hook 80 of the tray 54. A plate 120 is fixed by snapping into the upper half-shell and is suitable for maintaining the tubing 36, 38 of the 16 cassette in a folded position on the external face of the upper half-shell 98. Figure 10 represents the interior of the case 90, the upper half-shell 98 not being shown. As can be seen, the cell culture bag 100 has a substantially parallelepiped shape comprising a first wall 122 and a second wall (not visible) substantially parallel to each other in the empty state and in the liquid-filled state. The first wall 122 and the second wall are connected and joined together by their peripheral edges 123, by any means such as, for example, by welding or gluing. In a particular embodiment of the invention, the ratio of the surface area of one of the first wall 122 or second wall to the internal volume of the pocket is between 540 and 600 cm2/L, and is preferably of the order of 580 cm2/L. The distance separating the first wall 122 from the second wall is less than 20 mm, preferably between 10 and 20 mm and even more preferably on the order of 14 mm. The cell culture pocket 100 is fixed to the lower half-shell 96 by means of pin 124 protruding on the inner face of the lower half-shell 96. These pins 124 pass through openings in the peripheral edges 123 of the cell culture pocket 100. The internal volume of pocket 100 is in communication with the exterior through a plurality of conduits. In particular, the cassette 16 may include four conduits 36, 38 or flexible tubing of which three 36 are 5 10 15 20 25 30 CA 03029072 2018-12-21 WO 2017/220948 PCT/FR2017/051703 25 attached to the strip 34 previously described and a fourth 38 is independent. More specifically, cassette 16 includes a first 36a and a second 36b tube called sampling tube and a 36c drain tube. Tubing 38 corresponds to an injection tubing for the cells of interest. As can be seen in figures 5, 7, 8, 9 and 10, the cassette also includes a tubing 39 for initial filling of the bag 100 in culture medium. In a preferred configuration of the cassette 16 according to the invention, the four tubes 36a, 36b, 36c, 38 are equipped with connectors which may be aseptic connectors and/or needle-free withdrawal connectors, these connectors may also include anti-return means. In the following description, when the reference number 36 is used alone, it will designate indifferently one at least of the tubing 36a, 36b or 36c. As shown in figure 10, the tubing 36, 38 extend through notches 126 of the same peripheral rim 102a of the lower half-shell 96, namely the peripheral rim 102a formed at the level of the second end 94 of the casing 90. The filling tube 39 extends on one of the sides adjacent to the side crossed by the tubes 36, 38 and is connected at its end arranged inside the casing 90 in a portion of the tube 36 arranged fluidly between a valve 128 and the bag 100. Each of the tubing 36, 38 passes through valves 128, 130a, 130b, 130c for opening/closing the circulation of fluid through the conduits 36, 38, these pinch valves 128, 130 being arranged in the casing 90. In the example represented, the three pipes 36 pass through a first type of valve 130, pipe 36a passing through valve 130a, pipe 36b passing through valve 130b and pipe 36c passing through valve 130c, while the fourth pipe 38 passes through a second type of valve 128 (figures 10 and 15A). More precisely, the boTtier 90 includes a plate 132 (figures 15A, 15B and 15C) comprising a plurality of 5 10 15 20 25 30 CA 03029072 2018-12-21 WO 2017/220948 PCT/FR2017/051703 26 housing 134 substantially cylindrical each receiving a movable element 136, 138 for pinching a tube 36, 38 (figures 16 and 17). This plate thus forms the body or stator part of valves 128, 130. Each housing 134 of the plate 132 includes an annular bottom wall 140 delimiting a central orifice 142 aligned with an orifice 144 of the lower half-shell 96 when the plate 132 is mounted in the housing 90 (figures 10 and 12). Each movable organ 136, 138 comprises a lower extremity 136a, 138a and an upper extremity 136b, 138b with reference to the lower half-shells 96 and upper half-shells 98 and with reference to the arrangement of the cassette with respect to the vertical. Of course, it would be possible to designate more generally the lower extremity as a first extremity and the upper extremity as a second extremity opposite to the first extremity. Thus, the upper extremity 136b, 138b of each movable organ 136, 138 comprises an annular shoulder 146b intended to bear along the axis of rotation 136c, 138c on the periphery of an orifice 142 of a housing 134 of the plate 132 and surrounding a cylindrical wall 148b intended to be inserted into the orifice 142 of the housing. In the present case, the surface 146b of the organ 136 is in support on the bottom surface 140 of a housing 134 of a valve 130a, 130b, 130c. It is thus possible to achieve rotational guidance and centering of the second ends 136b, 136a of the moving parts 136, 138 in the housings 134 of the plate 132. The lower extremity 136a, 138a of each movable organ 136, 138 comprises an annular shoulder 146a intended to bear along the axis of rotation 136c, 138c on the periphery of an orifice 144 of the lower half-shell 96 and a cylindrical wall 148a intended to be inserted into the orifice 144 of the lower half-shell 96. In the present case, the surface 146b of the organ 138 is in contact with the bottom surface 140 of a housing 134 of the valve 128. In this way, rotational guidance and centering of each of the moving parts 136, 138 on the lower half-shell 96 and the plate5 10 15 20 25 30 CA 03029072 2018-12-21 WO 2017/220948 PCT/FR2017/051703 27 142 which is itself attached to the lower half-shell 96 by means of lugs 150 through studs 152 of the inner face of the lower half-shell 96 and thanks to the upper half-shell 98 whose peripheral edges 102b are attached to the peripheral edges 102a of the lower half-shell 96. The lower extremities 136a, 138a of the movable organs 136, 138 thus open through the lower half-shell 96 and are thus accessible from the external face of the lower half-shell 96 as can be seen in figure 9. The movable organs 136, as represented in Figure 16A, 16B, 16C associated with the tubing 36, include at their lower end 136a first coupling means accessible from outside the casing so as to cooperate with the second coupling means of the actuators 82 of the movable organs 136, arranged in the incubator. The first coupling means, formed on the lower face of the organ 136, include here a radial slot 151, one radially internal end of which is traversed by the axis of rotation 136c and a semi-circular groove 153 centered on the axis of rotation 136c. The second coupling means of the actuators 82 can, for example, include two rods 155a, 155b, the first 155a being centered on the axis of rotation of the actuator 82 and the second 155b being offset radially with respect to the first 155a. When the cassette 16 is mounted on the frame 72, as in figure 3A, the first rod 155a engages in the radially internal end of the slot 151, the second rod 155b engages in the semi-circular groove 153. It is understood that the use of a semi-circular groove 153 makes it possible to guarantee cooperation of the second rod 153b with the groove 153 regardless of the angular position of the moving part 136 prior to the mounting of the cassette 16 on the frame 72. The integration of a radial slot 151 on the moving parts 136 allows the moving part 136 to be operated manually if necessary. In the case of the valve 138 of figures 17A and 17B associated with the tubing 38, the first coupling means are formed at the upper end 5 10 15 20 25 30 CA 03029072 2018-12-21 WO 2017/220948 PCT/FR2017/051703 28 of the moving part 138. Unlike the three moving parts 136 of the valves 130, the moving part 138 of the valve 128 is not operated by an electromechanical actuator but manually by a rotating part or button 154 like the one shown in figures 18A and 18B. The coupling is here achieved by a cross-shaped recess 157 at the upper end 138b of the moving organ 138 into which a complementary cross-shaped form 156 of the actuation button 154 is engaged. The button 154 is made attached to the upper half-shell 98 by means of a plurality of elastically deformable hooks 158 which hook onto the inner perimeter of the circular orifice 114 of the upper half-shell 98. To achieve the pinching of the tubing 36, 38, each moving part 136, 138 includes a spiral outgrowth 160 around the axis of rotation 136c, 138c of the moving part 136, 138. The radially extreme surface of each protrusion 160 forms a bearing surface on a tube 36, 38. Each outgrowth 160 presents a plane of symmetry along a plane perpendicular to the axis of rotation 136c, 138c. Each tube 36, 38 is housed partly in a straight groove 162 with a semi-circular cross-section of the lower half-shell 96 and partly in a straight groove 164 with a semi-circular cross-section of the plate 132 so as to pass through the periphery of a housing 134 of the plate 132 in a direction perpendicular to the axis of rotation 136c, 138c of the moving organ (figures 11, 12, 15A, 15B, 15C). Thus, as a moving part 136, 138 of a valve 128, 130 rotates, the protrusion 160 ensures a progressive opening or closing of the section of a tube 36, 38 according to the direction of rotation of the moving part 136, 138. Each annular wall 140 of the bottom of a housing of the plate 132 carries two stop elements 166a, 166b projecting inside the housing 134 and which are angularly spaced from each other. A cut 167 is formed in each annular wall 140 of the bottom of a housing 134 of 5 10 15 20 25 30 CA 03029072 2018-12-21 WO 2017/220948 PCT/FR2017/051703 29 so as to delimit an elastic lamella 168 having a free end bearing a protruding outgrowth in the housing 134, this protrusion having a convex portion 171 intended to cooperate in sliding with the movable members 136, 138 (figures 15B, 15C). The outgrowth 170 cooperates with a sliding groove 172, having an arc-shaped form and a concave curved bottom, of each of the movable organs 136, 138. As regards the movable organ 136 of figures 16A, 16B and 16C, the groove 172 is closed on a radial annular collar 174 arranged axially between the protrusion 160 and the upper annular shoulder 146b and on the face oriented towards the upper extremity 136b of the movable organ 136. Similarly, with regard to the movable organ 138 of figures 17A and 17B, the groove 172 is closed on a radial annular collar 174 arranged axially between the protrusion 160 and the upper annular shoulder 146b and on the face oriented towards the upper extremity 138b of the movable organ 138. A semi-spherical cavity 176a, 176b is closed at the angular ends of each groove 170, 172 so as to form stopping positions of the moving member 136, 138, one corresponding to the opening position where the fluid can circulate and the other corresponding to a closing position where the fluid cannot circulate. It is also noted that each mobile organ 136, 138 includes a radial finger 178 extending laterally from the upper shoulder 146b and is in contact with the face of the collar 174 bearing the throat 172. . Thus, in the position of blocking the flow through the tubing 36, 38, the movable organ 136, 138 is positioned so that the protrusion 170 of the elastic lamella 168 is engaged in the cavity or housing 176a of the movable organ 136, 138, the radial finger 178 of the movable organ 136, 138 being arranged in rotational stop in the counterclockwise direction, on figure 15, against the stop organ 166a. In the position of the flow passing through the tubing 36, 38, the movable member 136, 138 is positioned so that the protrusion 170 of the elastic lamella 168 is engaged in the cavity or housing 176b of the movable member 136, 138, the radial finger 178 of the movable member 136, 138 being arranged in a stop in rotation in the clockwise direction, on the figure 15, against the stop member 166b. It is understood that the cooperation of the protrusion 170 with the cavities 176a, 176b makes it possible to ensure locking by elastic ratcheting of the moving parts 136, 138 in the closed position or in the open position. It is easy to understand that the valves described above could very well be used in other devices requiring opening/closing mechanisms for the circulation of a fluid through a tube. Consequently, the present description also covers any device integrating the described valves, such as, for example, a device comprising a plate 132 having a plurality of housings 134 in which rotating elements are engaged. It would be possible to equip cassette 16 and/or the incubator with means of automatic verification of the correct positioning of cassette 16 in each of its first and second positions. To this end, a magnet could be placed inside the casing 90, on the inner face of the lower half-shell 96, this magnet cooperating with two Hall effect sensors positioned on the platform in an appropriate manner in relation to the first and second positions to be detected. Figure 20 represents a cell culture system 180 comprising a plurality of incubators 12 as previously described and a centrifuge 20. Incubators 12 and centrifuge 20 are controlled by the computer system. Figure 21 is a flowchart representing steps in the cell culture process according to the invention. Prior to the procedure described below, the cell culture cassette 16 is filled with cell culture medium using the lateral tubing 39. This tube 39 is immediately sealed after filling, for example by welding. The cassette 16 of 5 10 15 20 25 30 CA 03029072 2018-12-21 WO 2017/220948 PCT/FR2017/051703 31 cell culture is then frozen flat, i.e. in a horizontal position, for storage and later use. The first step 182 of the process consists of entering and recording, using the computer system, culture parameters specific to the biological protocol. The data entry is carried out by an operator, the parameters entered being for example the patient identification, the cassette identification, etc. To facilitate the entry of these parameters, the computer system can be equipped with a barcode reader, the cassette being able to include a barcode directly informing the computer system with the number and nature of the cassette. Next, data entry is carried out by reading a barcode or by manually entering personal identification data indicated on a label of a container, such as a pouch, of cells to be cultured. In a second step 184, the computer system assigns a given incubator to the operator after verifying the availability of the incubator according to a cell culture schedule. The operator installs the cell culture cassette 16 containing a cell culture liquid in said designated incubator, the other incubators being then, preferably, inaccessible, i.e. the doors 22, 30 of the other incubators 12 being locked. In a third step 186, the procedure consists of thawing the culture medium housed in the flexible pouch of a culture cassette as described previously. For this purpose, the cell culture cassette 16, hermetically sealed under vacuum in a sterile protective envelope, is mounted in the second position on the support and agitation device 52 of the incubator designated by the computer system, i.e. on the support structure 84 (figures 3A and 3B). The operator closes the two doors 22 and 30 and the computer system initiates the defrosting procedure, with doors 22 and 30 then being automatically locked. The support and agitation device 5 10 15 20 25 30 CA 03029072 2018-12-21 WO 2017/220948 PCT/FR2017/051703 32 is operated so as to position the cassette 16 in a horizontal position. In a fourth step 188, after thawing, the cell culture cassette 16 is extracted from the incubator and the outer casing is removed in an area with adequate controlled activity. In a fifth step 190, cells of interest, excluding human embryonic stem cells, are injected into the cassette. For this, the manual valve 128 is positioned in the open position. It is recalled that the tubing 36, 38 are equipped with anti-return means preventing the liquid from bag 100 from flowing outwards. The cells are injected into bag 100 using tubing 38, then valve 128 is positioned in the closed position and tubing 38 is sealed with a waterproof stopper. In a sixth step 192, cassette 16 filled with culture medium and cells of interest is mounted in its first position corresponding to the incubation position. The bar 34 is mounted in the opening 32 of the door 22, the ends of the tubing 36 opposite the pocket 100 extending into the opening 38 and being connected to the fluidic circuit of the system represented in figure 20. The method according to the invention then includes an incubation step 194 which can last several days and for example about ten days. Periodically, according to the parameters of the protocol, the contents of pocket 100 can be homogenized by moving the plate 54 in oscillation around the axis 63 as explained previously. This homogenization (duration, repetition frequency, amplitude) is determined by the parameters of the chosen protocol. During the incubation stage, the operator can perform one or more samplings 196 in the bag 100 (figures 14 and 22). Some of these deductions may be imposed by the computer system. The samples are taken using tubing 36a and 36b. To perform a first sampling, the computer system 5 10 15 20 25 30 CA 03029072 2018-12-21 WO 2017/220948 PCT/FR2017/051703 33 actuates the moving part 136 associated with the associated valve 130a so as to allow the circulation of fluid through the tubing 36a. When the sample is taken by the computer system, a final sealing operation of the tubing 36a is carried out in order to guarantee asepsis and avoid any further use of the sampling tubing already used. The second sample is taken in the same way but using tubing 36b. After each sub-step of sample collection 196 in bag 100, the operator can proceed to analyses of said sample, the results of these analyses can be entered and recorded in the computer system by the operator or automatically. In a final step of process 198, the computer system proceeds to a recovery or emptying of the contents of pocket 100 of cassette 16. Finally, the contents of the bag undergo a purification and packaging step in sterile syringes for later use. The application also relates to a cell culture process, in particular the culture of mammalian cells, in particular human cells, excluding human embryonic stem cells. These cells, in particular these human cells, excluding human embryonic stem cells, may advantageously be, or comprise, CD34+ (human) cells, in particular CD34+ (human) hematopoietic cells or CD34+ non-hematopoietic (human) cells. These CD34+ (human) cells can, for example, be cells from peripheral blood (human), or from the umbilical cord (human) or from human tissue, in particular peripheral blood (human). These cells, in particular these human cells, excluding human embryonic stem cells, may advantageously be,5 10 15 20 25 30 CA 03029072 2018-12-21 WO 2017/220948 PCT/FR2017/051703 34 or comprise, stem or progenitor cells, in particular multipotent or pluripotent cells. These cells are not, or do not include, human embryonic cells. These cells, in particular these human cells, excluding human embryonic stem cells, may advantageously be, or include, CD34+ human stem or progenitor cells (multipotent or pluripotent) from peripheral blood mobilized by a growth factor such as G-CSF (Growth Colony Stimulating Factor). These cells, in particular these human cells, excluding human embryonic stem cells, may be or have been taken from a human subject or patient (newborn, child, adolescent, adult or elderly person). The invention is in fact specially adapted to human CD34+ cells (multipotent or pluripotent) which can be taken from the peripheral blood of a human subject or patient. If the patient is destined to receive chemotherapy, these cells may have been collected before or at the beginning of this chemotherapy. A biological sample containing cells that are intended to be cultured (for example, a (human) blood sample, in particular a (human) peripheral blood sample, (human) umbilical cord blood, or human tissue, in particular a human peripheral blood sample) is or has been taken from a human subject or patient. The means of application have the advantage of not requiring the implementation of leukapheresis: a simple blood sample, for example a sample of 200 to 250 mL of blood, in particular 220 mL of blood, is sufficient to obtain a significant number of cells, in particular a number of cells which is sufficient for therapeutic and/or preventive treatment, more particularly for autologous or allogeneic cell therapy of a subject or patient (human), more particularly for autologous cell therapy of the subject or patient (human). 5 10 15 20 25 30 CA 03029072 2018-12-21 WO 2017/220948 PCT/FR2017/051703 35 This is particularly the case for human CD34+ cells intended for therapeutic and/or preventive treatment, more particularly for autologous or allogeneic cell therapy of the subject or patient, more particularly for autologous cell therapy of the subject or patient. Human CD34+ cells can be non-embryonic human CD34+ cells, excluding human embryonic stem cells. Human CD34+ cells are not, or do not include, embryonic CD34+ cells. The cell culture methods of the application make it possible to obtain, from a small volume of blood (for example a sample of 200 to 250 mL of blood, in particular 220 mL of blood), a population of at least 107, or at least 108, cells comprising at least 70% human CD34+ cells (non-embryonic). By comparison, to obtain such a quantity of human CD34+ cells directly (without cell culture) from the blood of a single subject or patient, it would be necessary to treat a volume of 7 to 10 L of blood by leukapheresis. Cells intended for culture, particularly human CD34+ (non-embryonic) cells, may be purified or isolated from the collected biological sample, in particular from a blood sample, especially from a peripheral blood sample (e.g. a 200-250 mL peripheral blood sample, especially 220 mL peripheral blood). Cells can be purified to achieve a minimum level of a certain cell type. For example, they can be purified to include at least 70% or at least 80% or at least 85% or at least 90% in human CD34+ (non-embryonic) cells, in particular in human CD34+ (non-embryonic) hematopoietic cells. This isolation or purification can be done using any means known to the person of the trade. 5 10 15 20 25 30 CA 03029072 2018-12-21 WO 2017/220948 PCT/FR2017/051703 36 For example, for human CD34+ cells, excluding human embryonic stem cells, this isolation or purification can be done using a human anti-CD34 monoclonal antibody, for example the murine anti-CD34 human monoclonal antibody marketed under the name clone QBEnd-10 (code M7165) by DAKO DANEMARK AS (Produktionsvej 42; DK-2600 Glostrup; Denmark). Isolation or purification systems for CD34+ (human) cells are also commercially available, for example, the ISOLEX 300i magnetic cell separator marketed by BAXTER (Deerfield, IL, U. S. HAS. ), or the CD34 microbead kit marketed by MILTENYI BIOTECH (2303 Lindbergh Street, Auburn, CA 95602, U. S. HAS. ). The purified or isolated cells are placed on or in a culture medium whose composition is adapted to the multiplication of these cells. Examples of such culture media, including media suitable for the culture of human CD34+ cells, have been described above. For example, it may be a culture medium such as the one described above, in particular a medium comprising human insulin, human transferrin and human plasma or serum. This culture medium can be contained in the pocket of the demand cassette. The cells are then placed in incubation, for example by plagating the bag, or the cassette containing the bag, in an incubator, in particular in an on-demand incubator. The incubation time can, for example, be several days, in particular 8 to 10 days, especially 9 days, particularly when it is a culture of human CD34+ cells, excluding human embryonic stem cells. The application also relates to cells, excluding human embryonic stem cells, to a cell population comprising these cells, and to a pharmaceutical composition comprising these cells or this cell population. 5 10 15 20 25 30 CA 03029072 2018-12-21 WO 2017/220948 PCT/FR2017/051703 37 These cells or cell populations can be obtained by culture in accordance with the application, as described above. Cells in demand may include, or comprise, CD34+ (human) cells, excluding human embryonic stem cells, in particular CD34+ hematopoietic (human) cells or CD34+ non-hematopoietic (human) cells. These CD34+ (human) cells can, for example, be cells from peripheral blood (human), or from the umbilical cord (human) or from human tissue, in particular peripheral blood (human). These cells may advantageously be, or include, stem or progenitor cells, in particular multipotent or pluripotent cells, excluding human embryonic stem cells. These cells are not, or do not include, human embryonic cells. These cells may include, or comprise, CD34+ human stem or progenitor cells (multipotent or pluripotent) from peripheral blood mobilized by a growth factor such as GCSF (Growth Colony Stimulating Factor). Demand cells, including CD34+ (human) demand cells, excluding human embryonic stem cells, may be in pure or isolated form, or may be included in a cell population. A demand cell population can thus be a population of non-embryonic human cells, which includes human CD34+ demand cells. More specifically, the cells of the application may include (a population of) non-embryonic human cells, which are characterized in that: 5 10 15 20 25 30 CA 03029072 2018-12-21 WO 2017/220948 PCT/FR2017/051703 38 - they are at least 107 human cells, more specifically at least 108, or at least 1.5. 108, or from 107 to 1.7. 108 human cells, and - they comprise at least 70% human CD34+ cells (multipotent or pluripotent, and not embryonic), more particularly at least 80%, or at least 85% or at least 90% human CD34+ cells (multipotent or pluripotent, and not embryonic). These human cells can also all present the same HLA typing, more particularly the same HLA-A, HLA-B, HLA-C and HLA-DR typing. For example, the cells in demand may include (a population of) non-embryonic human hematopoietic cells, which are characterized in that: - they are at least 107 human hematopoietic cells in number, more particularly at least 108, or at least 1.5. 108, or from 107 to 1.7. 108 human hematopoietic cells, and - they comprise at least 70% human CD34+ cells (multipotent or pluripotent, and non-embryonic), more particularly at least 80%, or at least 85% or at least 90% human CD34+ cells (multipotent or pluripotent, and non-embryonic). These human hematopoietic cells can also all present the same HLA typing, more particularly the same HLA-A, HLA-B, HLA-C and HLA-DR typing. Demand cells may exhibit one or more characteristics that distinguish them from naTves cells. The term "naive" in this context means that these are cells that have been directly obtained from a human subject or patient, and that may have been purified, but that have not been cultured. 5 10 15 20 25 30 CA 03029072 2018-12-21 WO 2017/220948 PCT/FR2017/051703 39 Indeed, it has been observed that after culture in accordance with the request (for example, on a culture medium and/or in a bag or cassette as described above), the resulting human cell population differs from the naive population initially placed in culture by one or more of the following aspects: - a larger mean diameter (diameters of 11.2 ± 0.5 pm, in particular 11.18 ± 0.49 pm), - a higher proportion of CD34- CD14+ cells (monocytes, which can have a positive impact on the effectiveness of a cell transplant), - a higher proportion (but not reaching 100%) of cells CD34+ CD33- (CD33 being the marker of the myeloTde lineage), - a lower proportion (but still greater than 10%) of CD34+ CD133+ cells (marker of endothelial progenitors). More specifically, the cells in demand may be human cells, excluding human embryonic stem cells, which have one or more of the following characteristics: 1/ they are at least 107 human cells in number, more specifically at least 108, or at least 1. 5. 108, or from 107 to 1.7. 108 human cells, 2/ they all have the same HLA typing, more particularly the same HLA-A, HLA-B, HLA-C and HLA-DR typing, 3/ they comprise at least 70% human CD34+ cells (multipotent or pluripotent, and non-embryonic), more particularly at least 80%, or at least 85% or at least 90% human CD34+ cells (multipotent or pluripotent, and non-embryonic), 4/ they have a cell diameter of 11.2 ± 0.5 pm, in particular 11.18 ± 0.49 pm, 5/ they include CD34- CD14+ (human) cells in a proportion of 1 to 12%, in particular 2 to 10% or 3.8 to 10%, 6/ they include CD34+ CD33- (human) cells in a proportion of more than 10% or more than 20% or more than 25% (and advantageously less than 100%, in particular less than 60% or less than 50% or less than 40% or less than 35%), 7/ they include CD34+ CD133+ (human) cells in a proportion of less than 60% or less than 50% (and advantageously more than 20%, in particular more than 25% or more than 30%). According to one embodiment, the cells of the demand are human cells, excluding human embryonic stem cells, which exhibit at least two of these seven characteristics, in particular at least three, or at least four, or at least five, or at least six of these seven characteristics, or exhibit all seven characteristics. For example, the cells in demand may be human hematopoietic cells, which have one or more of the following characteristics: 1/ they are at least 107 human hematopoietic cells in number, more particularly at least 108, or at least 1.5. 108, or from 107 to 1.7. 108 human hematopoietic cells, 2/ they all have the same HLA typing, more particularly the same HLA-A, HLA-B, HLA-C and HLA-DR typing, 3/ they comprise at least 70% human CD34+ cells (multipotent or pluripotent, and non-embryonic), more particularly at least 80%, or at least 85% or at least 90% human CD34+ cells (multipotent or pluripotent, and non-embryonic), 4/ they have a cell diameter of 11.2 ± 0.5 pm, in particular 11.18 ± 0.49 pm, 5 10 15 20 25 30 CA 03029072 2018-12-21 WO 2017/220948 PCT/FR2017/051703 41 5/ they comprise CD34- CD14+ (human) cells in a proportion of 1 to 12%, in particular 2 to 10% or 3.8 to 10%, 6/ they comprise CD34+ CD33- (human) cells in a proportion of more than 10% or more than 20% or more than 25% (and advantageously less than 100%, in particular less than 60% or less than 50% or less than 40% or less than 35%), 7/ they comprise CD34+ CD133+ (human) cells in a proportion of less than 60% or less than 50% (and advantageously more than 20%, in particular more than 25% or more than 30%). According to one embodiment, the cells of the demand are human hematopoietic cells, which exhibit at least two of these seven characteristics, in particular at least three, or at least four, or at least five, or at least six of these seven characteristics, or exhibit all seven characteristics. In particular, the cells in demand may be human cells, excluding human embryonic stem cells, which have one or more of the following characteristics: 1/ they are at least 107 human cells in number, more particularly at least 108, or at least 1.5. 108, or from 107 to 1.7. 108 human cells, 2/ they all have the same HLA typing, more particularly the same HLA-A, HLA-B, HLA-C and HLA-DR typing, 3/ they comprise at least 70% of human CD34+ cells (multipotent or pluripotent, and not embryonic), more particularly at least 80%, or at least 85% or at least 90% of human CD34+ cells (multipotent or pluripotent, and not embryonic), 4/ they have a cell diameter of 11.2 ± 0.5 pm, in particular 11.18 ± 0.49 pm, 5/ they comprise CD34- CD14+ (human) cells in a proportion of 1 to 12%, in particular 2 to 10% or 3.8 to 10%. 5 10 15 20 25 CA 03029072 2018-12-21 WO 2017/220948 PCT/FR2017/051703 42 According to one embodiment, the cells of the application are human cells, excluding human embryonic stem cells, which exhibit at least two of these five characteristics, in particular at least three, or at least four of these five characteristics, or exhibit all five characteristics. For example, the cells in demand may be human hematopoietic cells, which have one or more of the following characteristics: 1/ they are at least 107 human hematopoietic cells in number, more particularly at least 108, or at least 1.5. 108, or from 107 to 1.7. 108 human hematopoietic cells, 2/ they all have the same HLA typing, more particularly the same HLA-A, HLA-B, HLA-C and HLA-DR typing, 3/ they comprise at least 70% human CD34+ cells (multipotent or pluripotent, and not embryonic), more particularly at least 80%, or at least 85% or at least 90% human CD34+ cells (multipotent or pluripotent, and not embryonic), 4/ they have a cell diameter of 11.2 ± 0.5 pm, in particular 11.18 ± 0.49 pm, 5/ they comprise CD34- CD14+ (human) cells in a proportion of 1 to 12%, in particular 2 to 10% or 3.8 to 10%. According to one embodiment, the cells of the demand are human hematopoietic cells, which exhibit at least two of these five characteristics, in particular at least three, or at least four of these five characteristics, or exhibit all five characteristics. More specifically, the cells in the application may be human cells, excluding human embryonic stem cells, which have the following characteristics: 5 10 15 20 25 30 CA 03029072 2018-12-21 WO 2017/220948 PCT/FR2017/051703 43 - they are at least 107 human cells, more specifically at least 108, or at least 1.5. 108, or from 107 to 1.7. 108 human cells, and - they comprise at least 70% human CD34+ cells (multipotent or pluripotent, and not embryonic), more particularly at least 80%, or at least 85% or at least 90% human CD34+ cells (multipotent or pluripotent, and not embryonic), and which also exhibit at least one (or both) of the following characteristics: - they have a cell diameter of 11.2 ± 0.5 pm, in particular 11.18 ± 0.49 pm, - they comprise CD34- CD14+ (human) cells in a proportion of 1 to 12%, in particular 2 to 10% or 3.8 to 10%. For example, the cells in demand may be human hematopoietic cells, which have the following characteristics: - they are at least 107 human hematopoietic cells in number, more particularly at least 108, or at least 1.5. 108, or from 107 to 1.7. 108 human hematopoietic cells, and - they comprise at least 70% human CD34+ cells (multipotent or pluripotent, and not embryonic), more particularly at least 80%, or at least 85% or at least 90% human CD34+ cells (multipotent or pluripotent, and not embryonic), and which also exhibit at least one (or both) of the following characteristics: - they have a cell diameter of 11.2 ± 0.5 pm, in particular 11.18 ± 0.49 pm, - they comprise CD34- CD14+ (human) cells in a proportion of 1 to 12%, in particular 2 to 10% or 3.8 to 10%. 5 10 15 20 25 CA 03029072 2018-12-21 WO 2017/220948 PCT/FR2017/051703 44 The cells of this population can all present the same HLA-A, HLA-B, HLA-C and HLA-DR typing. The cells of this population may further comprise: - CD34+ CD33- (human) cells in a proportion of more than 10% or more than 20% or more than 25% (and advantageously less than 100%, in particular less than 60% or less than 50% or less than 40% or less than 35%), - CD34+ CD133+ (human) cells in a proportion of less than 60% or less than 50% (and advantageously more than 20%, in particular more than 25% or more than 30% of CD34+ CD133+ cells). Alternatively or complementarily, the cells in demand may have one or more characteristics identical (or not significantly different) to those of naTves cells, in particular naTves human cells, in particular naTves human hematopoietic cells. Indeed, it has been observed that after culture in accordance with the request (for example on a culture medium and/or in a cassette bag as described above), the population of human cells obtained (in particular the population of human hematopoietic cells obtained) may present characteristics common to those of the naive population of (hematopoietic) cells initially placed in culture. More specifically, the cells in question may be cells (particularly hematopoietic stem cells) which, compared to naTve cells (particularly naTve hematopoietic stem cells), and more specifically compared to (naTve) cells initially placed in culture, exhibit one or more of the following characteristics: 1/ an identical (or not significantly different) number or proportion of CD34,5 10 15 20 25 epitopes; 2/ an identical (or not significantly different) capacity to divide, in particular an identical (or not significantly different) relative telomere length; 3/ the same absence of chromosomal abnormalities and polyploidy (or the same chromosomal abnormalities or polyploidy). in the same proportions), 4/ identical (or not significantly different) viability, in particular identical (or not significantly different) CD34+ cell viability, for example, at least 90% or at least 95% CD34+ cell viability, 5/ identical (or not significantly different) proportion of CD34- CD2+/CD3+ cells, 6/ identical (or not significantly different) proportion of CD34- CD19+/CD20+ cells, 7/ identical (or not significantly different) proportion of CD34- CD56+ cells, 8/ identical (or not significantly different) proportion of CD34- CD15+ cells. According to one embodiment, the demand cells exhibit at least two, or at least three, or at least four, or at least five, or at least six, or at least seven of these eight characteristics, or exhibit all eight of these characteristics. More specifically, the cells in question may be cells (particularly hematopoietic cells) which, compared to naive (hematopoietic) cells, and more specifically compared to (naive) cells initially placed in culture, exhibit one or more of the following characteristics: 1/ an identical (or not significantly different) number or proportion of CD34,5 10 15 20 25 30 epitopes; 2/ an identical (or not significantly different) capacity to divide, in particular an identical (or not significantly different) relative telomere length; 3/ the same absence of chromosomal abnormalities and polyploidy (or the same chromosomal abnormalities or polyploidy, in the same proportions). According to one embodiment, the demand cells exhibit at least two of these three characteristics, or exhibit all three characteristics. The demand explicitly encompasses any combination of cell characteristics from those described herein, and specifically includes the combination of: - characteristics that differentiate the cells of the demand from naTves cells, and - characteristics that are identical to those of naTves cells. The cell culture methods required essentially correspond to ex vivo cell amplification methods. They have the advantage of providing a significant number (more particularly a therapeutically sufficient number) of autologous or allogeneic cells, in particular autologous cells (notably autologous or allogeneic CD34+ cells, in particular autologous CD34+ cells) from a small sample of peripheral blood from a patient or subject, without introducing deleterious modifications to these cells. Table 1 below illustrates the characteristics of a cell population obtained from the peripheral blood of a cohort of healthy human volunteers before and after culture in a prescribed culture bag (9-day culture on glutamine-supplemented, fibroblast-free IMDM medium containing 0.01 mg/mL insulin, 330 pg/mL transferrin, and 5% (V/V) CA 03029072 2018-12-21 WO 2017/220948 PCT/FR2017/051703 47 human serum, of cells isolated by sedimentation and purified by immunoaffinity on anti-CD34 magnetic beads): Table 1: Cohort of 71 healthy male human volunteers aged 21 to 57 years. Biological sample = 220 mL of blood Peripheral per patient CD34+ cell population Naive population (as obtained without cell culture) Example of population obtained after culture according to the request (average value per patient, after cell culture) Number of CD34+ cells * From 5.1. 106 has 40.9. 106 of 1. 107 has 1.7. 108 CD34+ Cell Viability Greater than 95% Greater than 95% CD34+ Cell Diameter 8.8 ± 0.1 pm 11.18 ± 0.49 pm Percentage of CD34+ Cells (after purification) At least 70% (or at least 80%, or at least 85%, or at least 90%) At least 70% (or at least 80%, or at least 85%, or at least 90%) CD34- CD14+ Cells From 0.2 to 0.8% From 3.8 to 10% CD34+ Cells 4.2% 33% CA 03029072 2018-12-21 WO 2017/220948 PCT/FR2017/051703 48: values from a cohort of 8 volunteers. CD33- Cells CD34+ CD133+ 75.8% 44.5% Number of CD34+ epitopes per cell 14,804 ±2,294 15,363 12,730 Relative telomere length 9.17 ± 1.32% 8.35 ± 2.07% Chromosomal abnormality none none Polyploidy none none CD34- CD2+/CD3+ Cells 0 to 0.3% 0 to 1% CD34- CD19+/CD20+ Cells 0 to 0.6% 0.1 to 1% CD34- CD56+ Cells 0% 0 to 1% CD34- CD15+ Cells 2 to 5.8% 2.5 to 5% Once the culture is complete, the cells obtained, more particularly the cells CD34+ (human) obtained, can be collected. 5 The collected cells can be purified or isolated, more particularly purified. In particular, CD34+ cells can be purified, for example using the purification methods available to the person in the trade as indicated above. The collected and possibly purified cells can be placed in a composition, in particular a pharmaceutical composition, especially a liquid pharmaceutical composition, for example a non-toxic and isotonic pharmaceutical solution for 5 10 15 20 25 30 CA 03029072 2018-12-21 WO 2017/220948 PCT/FR2017/051703 49 human beings. The resulting composition or solution is the subject of the request. The composition may include a vehicle that is physiologically acceptable to humans. The composition can be formulated to be administrable, more specifically injectable, into a human being. It can therefore be liquid and include compounds that are non-toxic to humans, preferably compounds that are non-toxic at an isotonic concentration for humans. Thus, in addition to cells, the composition may for example include a buffer solution that is non-toxic to humans, such as a phosphate buffer saline solution (Phosphate Buffer Saline or PBS), or a gluconate and/or acetate buffer solution. The composition may also include at least one additive that is not toxic to humans, for example a protein from human serum or human plasma, in particular human serum albumin (HSA). The composition or solution of the application can be preserved until use, for example by cold storage (freezing). The means of the demand can be used for cell treatment (with therapeutic and/or preventive aims), in particular for autologous or allogeneic cell treatment, advantageously autologous cell treatment. This cell therapy may include the administration to a patient or subject of: - cells of the request, including human cells comprising CD34+ (human) cells, excluding human embryonic stem cells, as described above, or - a pharmaceutical composition or solution containing these cells. 5 10 15 20 25 30 CA 03029072 2018-12-21 WO 2017/220948 PCT/FR2017/051703 50 This patient or subject may be the same as the one from whom the cells were initially taken to proceed with cell culture (autologous cell treatment or therapy). Alternatively, this patient or subject may be different from the one from whom the cells were initially taken for cell culture (allogeneic cell therapy or treatment). Cell therapy, more particularly autologous or allogeneic cell therapy (especially autologous), can notably be the treatment or prevention of heart failure or a non-cardiac pathology. Heart failure can include: - heart failure which includes ventricular failure, more particularly left ventricular failure, - more particularly heart failure with impaired systolic function, - more particularly heart failure with impaired contractile function of a ventricle, particularly the left ventricle, - more particularly heart failure with increased end-systolic volume associated with a decrease in left ventricular ejection fraction (LVEF). This may include heart failure of level II or higher according to the classification of the New York Heart Association (NYHA) [The Criteria Committee of the New York Heart Association. 1994. Nomenclature and Criteria for Diagnosis of Diseases of the Heart and Great Vessels. (9th edition). Boston: Little, Brown & Co. , pages 253-256], more specifically of a level II or higher heart failure (according to the NYHA classification) which is induced by mitral regurgitation. Heart failure can be caused by: - arterial hypertension, - valvular disease, 5 10 15 20 25 30 CA 03029072 2018-12-21 WO 2017/220948 PCT/FR2017/051703 51 - congenital disease, - refractory angina pectoris (e.g., angina pectoris refractory to treatment with Enhanced Extracorporeal Contraceptive Palliation (ECCP) or neurostimulation therapy (particularly Transcutaneous Neurostimulation (TN) or Spinal Cord Stimulation (SCS), or chelation therapy (particularly EDTA administration), - cardiomyopathy, particularly - ischemic cardiomyopathy, particularly a myocardial infarction, more particularly a acute myocardial infarction, - dilated cardiomyopathy, - hypertrophic cardiomyopathy, - restrictive cardiomyopathy, - Arrhythmogenic Right Ventricular Cardiomyopathy (ARVC). Heart failure can notably be heart failure induced by cardiomyopathy, in particular by - ischemic cardiomyopathy, in particular a myocardial infarction, more particularly an acute myocardial infarction, - dilated cardiomyopathy, - hypertrophic cardiomyopathy, - restrictive cardiomyopathy, - Arrhythmogenic Right Ventricular Cardiomyopathy (ARVC). Heart failure can notably be heart failure induced by cardiomyopathy, in particular by ischemic cardiomyopathy, in particular a myocardial infarction, more particularly an acute myocardial infarction. Heart failure can be treated or prevented, including by reducing or even eliminating heart failure and/or limiting the development of heart failure. Heart failure induced by ischemic cardiomyopathy, particularly by myocardial infarction, more5 10 15 20 25 30 CA 03029072 2018-12-21 WO 2017/220948 PCT/FR2017/051703 52 particularly by acute myocardial infarction, can be treated or prevented, notably by reducing or even eliminating this heart failure and/or by limiting the development of this heart failure. Indeed, cells (in particular CD34+ cells) obtained by culture according to the request and possibly by purification, or a pharmaceutical composition or solution containing these cells, can be used for one or more of the following purposes: - to reduce or even eliminate post-ischemic myocardial damage, in particular post-infarction necrosis and/or post-infarction scar failure, - to partially or completely regenerate the structure and/or revascularize the myocardium or the infarcted area, - to improve or even restore ventricular function, in particular left ventricular function, in particular ventricular contractility, for example to decrease the end-systolic volume in association with an increase in the left ventricular ejection fraction (LVEF) (in particular to achieve an LVEF of more than 45%). The treatment or prevention of heart failure induced by an (acute) myocardial infarction, more particularly an (acute) myocardial infarction due to coronary artery disease or a heart attack, is particularly targeted. This use is particularly intended for: - patients with impaired left ventricular function or contractility, and - patients - who present with a de novo acute myocardial infarction following a first cardiac event or syndrome (this first cardiac event or syndrome possibly having resulted in stent implantation(s) and percutaneous transluminal coronary angioplasty (PTCA), and/or possibly coronary artery bypass graft surgery (CABG), and - who at least 10 days after this first cardiac event (for example, at least 3 months or at least 6 months after this first incident or cardiac syndrome) present a left ventricular ejection fraction (LVEF) equal to or less than 45%. The administration of cells, cells or a pharmaceutical composition or solution on demand may, for example, be carried out a few weeks, in particular 3 to 6 weeks after, an ischemic accident. The treatment or prevention of heart failure may include cellular cardiomyoplasty (by implanting administered cells into the infarcted cardiac area). This treatment or prevention may include the administration of a demand cell population (including a human cell population comprising CD34+ cells, excluding human embryonic stem cells), demand cells (including human CD34+ cells, excluding human embryonic stem cells), or a demand composition or solution, by surgical or catheter injection. Surgical injection can be an injection directly into the infarcted area, for example during a coronary artery bypass graft surgery (CABG). Catheter injection can notably be a percutaneous transfemoral injection. The catheter may include an intracoronary, epicardial or transendocardial injection or perfusion catheter. The injection or infusion catheter may, for example, be equipped with a helical needle such as the HELIX®5 10 15 20 25 30 CA 03029072 2018-12-21 WO 2017/220948 PCT/FR2017/051703 54 catheter marketed by BIOCARDIA® (125 Shoreway Road, Suite B, San Carlos, CA 94070, U. S. HAS. ), which can be coupled to a 2D (2D) guidance system such as 2D fluoroscopic guidance. The injection or infusion catheter can, for example, be the MYOSTAR® catheter marketed by BIOSENSE WEBSTER, INC. (15715 Arrow Highway; Irwindale; CA91706; U. S. HAS. ). The injection or infusion catheter can, for example, be coupled to a 3D guidance system such as the NOGA® XP electromagnetic 3D cardiac mapping system marketed by BIOLOGICS DELIVERY SYSTEMS GROUP (CORDIS Corp. Diamond Bar, CA, U. S. HAS. ). One or more chemokines, in particular one or more chemokines from the CXC family, in particular the (or at least the) chemokine CXCL12 (Stromal cell-Derived Factor-1 or SDF-1), may be administered, more particularly injected, to the patient or subject. This administration or injection may be simultaneous, joint or deferred in time with the administration, more particularly the injection, of a population of cells of the request (in particular a population of human cells comprising CD34+ cells, excluding human embryonic stem cells), of cells (in particular human CD34+, excluding human embryonic stem cells) of the request, or of a composition or solution of the request. The uses of the means of the request are not limited to the treatment or prevention of heart failure induced by ischemic cardiomyopathy, or of heart failure induced by chemotherapy treatment. Demand means (particularly CD34+ demand means) can alternatively be used to treat or prevent non-cardiac pathologies. It may be a non-cardiac pathology, which is not induced by a cardiac intervention. 5 10 15 20 25 30 CA 03029072 2018-12-21 WO 2017/220948 PCT/FR2017/051703 55 The means of the application can indeed be used to treat myelosuppression, in particular myelosuppression induced by the treatment of a lymphoma, more particularly a non-Hodgkin lymphoma, a Hodgkin lymphoma, a chronic lymphocytic leukemia. The means of the request can then be used to implant in the patient, in particular in his bone marrow, intravenously, hematopoietic cells (autologous or from another subject) of the request, in particular a population of hematopoietic cells (autologous or allogeneic) including CD34+ cells, as described above. The implanted cells are then intended to regenerate the patient's bone marrow. The means of application can alternatively be used to treat or prevent a pathology inducing cartilage degeneration, such as osteoarthritis. The means of the demand can then be used to implant in the patient, particularly in the arthritic area, cells (autologous or from another subject) of the demand, in particular a cell population including CD34+ cells, as described above. The implanted cells are then intended to regenerate the patient's cartilage. The means of application can alternatively be used to treat or prevent liver failure, including chronic liver failure, in particular non-alcoholic chronic liver failure (for example to prevent the development of hepatocellular carcinoma). The means of the request can then be used to implant in the patient, particularly in the hepatic area, cells (autologous or from another subject) of the request, including a population of cells (autologous) comprising CD34+ cells, as described above. The implanted cells are then intended to regenerate the patient's liver. The term "comprising", with which "including" or "containing" is synonymous, is an open term, and does not exclude the presence of one or more additional element(s), ingredient(s) or method step(s) which would not be explicitly indicated, while the term "consisting" or "constitutes" is a closed term, which excludes the presence of any other additional element, step, or ingredient which would not be explicitly exposed. The term "essentially consisting" or "essentially constitutes" is a partially open term, which does not exclude the presence of one or more additional element(s), ingredient(s) or step(s), insofar as this additional element(s), ingredient(s) or step(s) do not materially affect the basic properties of the invention. Consequently, the term "comprising" (or "include(comprehend)") induces the terms "consistent", "constitutes", as well as the terms "essentially consistent" and "essentially constitutes". In certain respects, incarnations of the present invention as described include the following objects: 1. Cell culture cassette comprising: - a bolter at least partially rigid and internally defining an interior space in which is arranged and fixed a cell culture bag defining an interior volume, - conduits each connected at one end to the interior volume of the bag and each having a second end located outside the bolter, and - valves for opening/closing the circulation of fluid through the conduits which are mounted on the bolter. 2. Cassette according to object 1, in which the conduits are formed by flexible tubing and at least some of the valves include a movable pinching device for one of the flexible tubing on a structural element of the bolter. 5 10 15 20 25 30 Date Received/Date Received 2023-10-12 57 3. Cassette according to object 2, in which each moving part includes an axis of rotation and the radially external periphery of each moving part includes at least one spiral surface around the axis of rotation forming a pinching surface of one of the flexible tubes so as to vary a fluid passage cross-section through one of the flexible tubes as the part rotates. 4. Cassette according to object 3, in which the moving parts are mounted in housings of a plate arranged inside the bootmaker and attached to the bootmaker, each housing receiving a moving part. 5. Cassette according to any one of the objects 2 to 4, in which each moving part includes an end accessible from outside the shoemaker and provided with first means of rotational coupling intended to cooperate with second means of rotational coupling of an actuator. 6. Cassette according to object 4 or 5, characterized in that the moving parts are centered and guided to rotation at one end in an orifice of the case and at the opposite end in an orifice of the plate. 7. Cassette according to any one of the objects 2 to 6, in which the pouch has a substantially parallelepiped shape comprising a first flexible wall and a second flexible wall substantially parallel to each other in the empty state and in the state filled with liquid. 8. Cassette according to any one of the objects 1 to 7, in which the shoemaker has a shape corresponding substantially to that of a rectangular parallelepiped and comprises a lower half-shell and an upper half-shell joined to each other, the lower half-shell being rigid and the upper half-shell being rigid or flexible. 9. Cassette according to object 8, in which the upper half-shell includes a central opening or recess whose shape and dimensions are determined to allow the propagation of a wave of the liquid from the bag into the opening when the cassette containing a liquid undergoes 5 10 15 20 25 30 Date Re^ue/Date Received 2023-10-12 58 cine oscillation around a horizontal axis, the opening being disposed upwards. 10. Cassette according to object 8 or 9, in which the conduits extend through one of the peripheral rims of one of the lower or upper half-shells. 11. Cassette according to any one of the objects 1 to 10, comprising a conduit support bar, arranged on the outside of the boot and traversed by at least some of the conduits. 12. Cell culture incubator, comprising a thermostatically controlled chamber and a support and agitation device for a cell culture cassette according to any one of the objects 1 to 11 and means for positioning and locking the cell culture cassette in a given position in the support device, the support and agitation device comprising a support tray for the cell culture cassette, the tray carrying electromechanical actuators for opening/closing the valves, one output of which carries second coupling means intended to cooperate with first coupling means for the valves of the cassette when the cassette is in said given position. 13. Incubator according to object 12, in which the support tray for the cell culture cassette is mounted to rotate around a horizontal axis around which the tray is intended to oscillate for the agitation and homogenization of the contents of the bag. 14. Incubator according to object 13, in which the support and stirring device comprises a connecting rod, the upper end of which is connected via an oscillator to the tray and the lower end of which is connected to a crank driven in rotation by the shaft of a motor whose axis is substantially horizontal. 15. Incubator according to any one of the objects 12 to 14, comprising a sealing door for an opening in the enclosure, this opening comprising a peripheral edge in which is formed a recess5 10 15 20 25 30 Date Re^ue/Date Received 2023-10-12 59 whose shape is adapted to receive the support bar for the conduits of a cassette according to object 11, the bar forming a sealing element between the door and the peripheral edge when the door is in the closed position of the enclosure. 16. Automated cell culture system comprising at least one incubator according to any one of the objects 12 to 15, and a computer control system including means for data entry and recording and intended to regulate the culture conditions in an enclosure of said at least one incubator and to control the valves of the cassette housed in the enclosure. 17. A cell culture method using an automated system according to object 16, characterized in that it comprises the following steps: a) placing a cell culture cassette according to any one of objects 2 to 7 inside the incubator enclosure in a thawing position on the support and shaking device; b) feeding the bag with cells to be cultured; c) placing the cassette on the support and shaking device in a cell culture position; d) shaking the cassette for a given period of time to homogenize its contents; e) maintaining the cassette under incubation conditions for a period of several days; and f) retrieving the contents of the cassette by means of one of the flexible tubing of the cassette. 18. Proceed according to object 17, characterized in that it comprises: - during step d), one or more sampling steps of the contents of the bag, each of which is preceded by a tilting step of a support tray from a horizontal culture position to an inclined position in which the sampling area of the bag represents the lowest point of the bag.