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BRPI0813695B1 - Compostos de heteroaril piridil e fenil benzenossulfonamidas fundidas, composição, método de modular a função de ccr2, usos dos compostos e forma cristalina - Google Patents

Compostos de heteroaril piridil e fenil benzenossulfonamidas fundidas, composição, método de modular a função de ccr2, usos dos compostos e forma cristalina Download PDF

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BRPI0813695B1
BRPI0813695B1 BRPI0813695-5A BRPI0813695A BRPI0813695B1 BR PI0813695 B1 BRPI0813695 B1 BR PI0813695B1 BR PI0813695 A BRPI0813695 A BR PI0813695A BR PI0813695 B1 BRPI0813695 B1 BR PI0813695B1
Authority
BR
Brazil
Prior art keywords
compound
ccr2
fact
compounds
disease
Prior art date
Application number
BRPI0813695-5A
Other languages
English (en)
Inventor
Antoni Krasinski
Sreenivas Punna
Solomon Ungashe
Qiang Wang
Yibin Zeng
Original Assignee
Chemocentryx, Inc.
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by Chemocentryx, Inc. filed Critical Chemocentryx, Inc.
Publication of BRPI0813695A2 publication Critical patent/BRPI0813695A2/pt
Publication of BRPI0813695B1 publication Critical patent/BRPI0813695B1/pt
Publication of BRPI0813695B8 publication Critical patent/BRPI0813695B8/pt

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Abstract

compostos de heteroaril piridil e fenil benzenossulfonamidas fundidas, composição, método de modular a função de ccr2, usos dos referidos compostos e forma cristalina". são fornecidos compostos que agem como potentes antagonistas do receptor ccr2. os compostos são geralmente derivados de aril sulfonamida e são úteis em composições farmacêuticas, métodos para o tratamento de doenças mediadas por ccr2 e como controles em ensaios para a identificação de antagonistas de ccr2. um composto da fórmula (i) ou um sal do mesmo: em que r1 e r2 são cada um independentemente hidrogênio, c1-a alquila, -cn, ou c1-a haloalquila, contanto que pelo menos um de r1 ou r2 é diferente do hidrogênio cada r3 é independentemente, r4 é hidrogênio; r5 é halogênio ou c1-a alquila; r6 é hidrogênio; x1 é cr7 , n ou no; x2 e x4 são 15 n ou no; x3 é cr7 ; x6 e x7 são cada um independentemente selecionado a partir de cr7 , n e no; cada r7 é independentemente selecionado a partir do grupo consistindo em hidrogênio, halogênio, cra alquila substituída ou não-substituída, cra alquenila substituída ou não-substituída, cra alquinila substituída ou não-substituída, -cn, =0, -n02 , -or6, -oc(o)r8, -c02r8, -c(o)r8, -c(o)nr0r8,20 -oc(o)nr9r8, -nr1°c(o)r8, -nr1°c(o)nr9r8, -nr9r8, -nr1°c02r8, -sr8,-s(o)r8, -s(o)zr8, -s(0)2nr9r8, -nr10s(o)zr8, c5-1o arila substituída ou nãosubstituída, heteroarila de 5 a 1 o membros substituída ou não-substituída e heterociclila de 3 a 1 o membros substituída ou não-substituída.

Description

Relatório Descritivo da Patente de Invenção para COMPOSTOS DE HETEROARIL PIRIDIL E FENIL BENZENOSSULFONAMIDAS FUNDIDAS, COMPOSIÇÃO, MÉTODO DE MODULAR A FUNÇÃO DE CCR2, USOS DOS REFERIDOS COMPOSTOS E FORMA CRISTALINA. REFERÊNCIA CRUZADA A PEDIDO RELACIONADO
O presente documento de patente reivindica o benefício da data de depósito sob 35 U.S.C. § 119(e) de Pedido de Patente dos Estados Unidos Provisório número de série 60/949.328, depositado em 12 de julho de 2007, que é pelo presente incorporado por referência.
PESQUISA OU DESENVOLVIMENTO FEDERALMENTE PATROCINADO
A presente invenção descrita aqui foi sustentada pelo menos em parte por NIH (U19-AI056690-01) O governo tem certos direitos sobre a invenção.
ANTECEDENTES
A presente invenção refere-se a compostos, composições farmacêuticas contendo um ou mais daqueles compostos ou seus sais farmaceuticamente aceitáveis, que são eficazes na inibição da ligação ou função de várias quimiocinas a receptores de quimiocina. Como antagonistas ou moduladores de receptores de quimiocina, os compostos e composições têm utilidade no tratamento de várias condições de distúrbio e doenças imunes.
As quimiocinas, também conhecidas como citocinas quimiotáticas, são um grupo de proteínas de peso molecular pequeno que são liberadas por uma ampla variedade de células e têm uma variedade de atividades biológicas. As quimiocinas atraem vários tipos de células do sistema imune, tal como macrófagos, células T, eosinófilos, basófilos e neutrófilos, e fazem com que eles migrem do sangue para vários tecidos linfoides e não linfoides. Elas medeiam a infiltração de células inflamatórias para os sítios de inflamação, e são responsáveis pelo início e perpetuação de muitas doenças de inflamação (revistas em Schall, Citocina, 3:165-183 (1991), Schall e outro, Curr. Opin. Immunol., 6:865-873 (1994)).
Além de estimular a quimiotaxia, as quimiocinas podem induzir outras alterações em células responsivas, incluindo alterações na forma da célula, exocitose granular, super-regulação de integrina, formação de lipídeos bioativos (por exemplo, leucotrienos), explosão respiratória associada com ativação de leucócito, proliferação celular, resistência à indução de apoptose e angiogênese. Desse modo, as quimiocinas são precocemente disparos da resposta inflamatória, causando a liberação de mediador inflamatório, quimiotaxia e extravasamento para os tecidos de infecção ou inflamação. Elas são também estimuladores de uma multidão de processos celulares que sustentam funções fisiológicas importantes, bem como consequências patológicas.
As quimiocinas exercem seus efeitos ativando os receptores de quimiocina expressos por células responsivas. Os receptores de quimiocina são uma classe de receptores acoplados à proteína G, também conhecidos como receptores de sete-transmembranas, encontrados sobre a superfície de uma ampla variedade de tipos celulares tais como os leucócitos, células endoteliais, células da musculatura lisa e células de tumor.
As quimiocinas e receptores de quimiocina são expressos por células renais intrínsecas e células infiltrantes durante a inflamação renal (Segerer e outro, J. Am. Soc. Nephrol., 11:152-76 (2000); Morii e outro, J. Diabetes Complications, 17:11-5 (2003); Lloyd e outro J. Exp. Med., 185:1371-80 (1997); Gonzalez-Cuadrado e outro Clin. Exp. Immunol., 106:518-22 (1996); Eddy & Giachelli, Kidney Int., 47:1546-57 (1995); Diamond e outro, Am. J. Physiol., 266:F926-33 (1994)). Em humanos, CCR2 e ligante MCP-1 estão entre as proteínas expressas em fibrose renal, e estão correlacionadas com a extensão de infiltração de macrófago no interstício (Yang e outro, Zhonghua Yi Xue Za Zhi, 81:73-7 (2001); Stephan e outro, J. Urol., 167:1497-502 (2002); Amann e outro, Diabetes Care, 26:2421-5 (2003); Dai e outro, Chin. Med. J. (Engl), 114:864-8 (2001)). Em modelos animais de fibrose renal, o bloqueio de CCR2 ou MCP-1 induz a uma redução realçada em severidade de inflamação renal (Kitagawa e outro, Am. J. Pathol., 165:237-46 (2004); Wada e outro, Am. J. Pathol., 165:237-46 (2004); Shimizu e outro, J. Am. Soc. Nephrol., 14:1496-505 (2003)).
A artrite reumatóide é uma doença crônica das articulações, caracterizada por inflamação sinovial que induz à destruição de cartilagem e osso. Embora as causas subjacentes da doença sejam desconhecidas, a credita-se que os macrófagos e células tipo T Th-1 desempenhem um papelchave na iniciação e perpetuação do processo inflamatório crônico. (Vervoordeldonk e outro, Curr. Rheumatol. Rep., 4:208-17 (2002)).
MCP-1 está entre as diversas quimiocinas, incluindo MIP-1a e IL-8, identificadas em sinóvio reumatoide (Villiger e outro, J. Immunol., 149:722-7 (1992); Scaife e outro, Rheumatology (Oxford), 43:1346-52 (2004); Shadidi e outro, Scand. J. Immunol., 57:192-8 (2003); Taylor e outro, Arthritis Rheum., 43:38-47 (2000); Tucci e outro, Biomed. Sei. Instrum., 34:169-74 (1997)). Chemokite receptors CCR1, CCR2, CCR3 e CCR5 are up-regulated in the joints from arthritic mice (Plater-Zyberk e outro, Immunol. Lett., 57:117-20 (1997) O bloqueio de atividade de MCP-1 usando um antagonista de CCR2 ou um anticorpo contra MCP-1 tem se mostrado eficaz na redução de inflamação de articulação em modelos experimentais de artrite reumatoide (Gong e outro, J. Exp. Med., 186:131-7 (1997); Ogata e outro, J. Pathol., 182:106-14 (1997)).
A infiltração de macrófagos nos tecidos graxos mediada por receptor de quimiocina pode também contribuir para as complicações que surgem de obesidade, uma condição que resulta de armazenagem excessiva de gordura no corpo. A obesidade predispõe os indivíduos afetados a muitos distúrbios, tais como diabetes não dependente de insulina, hipertensão, acidente vascular cerebral, e doença de artéria coronária. Em obesidade, tecidos de adipose têm alterado funções metabólicas e endócrinas que induzem a uma liberação aumentada de ácidos graxos, hormônios, e moléculas próinflamatórias. Os macrófagos de tecido de adipose são acreditados serem uma fonte chave de citocinas pró-inflamatórias incluindo TNF-alfa, iNOS e IL-6 (Weisberg e outro, J. Clin. Invest., 112:1796-808 (2003)). Recrutamento de macrófagos para o tecido de adipose é provavelmente mediado por MCP1 produzidas por adipócitos (Christiansen T, e outro, Int J Obes (Lond). 2005 Jan;29(1):146-50; Sartipy e outro, Proc. Natl. Acad. Sei. U.S.A., 100:7265-70 (2003)).
O MCP-1 elevado pode induzir a diferenciação de adipócito e resistência à insulina, e contribui para patologias associadas com hiperinsu linemia e obesidade. MCP-1 é superexpresso em plasma em camundongos obesos em comparação aos controles magros e a adipose branca é a maior fonte. MCP-1 foi também mostrada acelerar a cicatrização de ferimento, e tem um efeito angiogênico direto sobre as céluolas epiteliais, e pode desempenhar um papel direto no remodelagem de tecido de adipose em obesidade. (Sartipy P, Loskutoff DJ., Proc. Natl. Acad. Sei. U.S.A.,100:7265 (2003)).
Os níveis de plasma de MCP-1 são substancialmente aumentados em camundongos com Obesidade Induzida por Dieta (DIO), e uma forte correlação entre os níveis de MCP-1 de plasma e o peso corporal tem sido identificada. Além disso, a elevação de MCP-1 induzida por dieta com alto teor de gordura causa alterações na população de monócito positivo de CD11b em camundongos DIO. (Takahashi K, e outro, J. Biol. Chem., 46654 (2003)).
Além disso, a inflamação crônica em gordura é pensada desempenhar um papel crucial no desenvolvimento de resistência à insulina relacionada com a obesidade (Xu H, e outro, J Clin Invest. 2003 Dec; 112(12): 1821-30). Foi proposto que a resistência à insulina relacionada com a obesidade é, pelo menos em parte, uma doença inflamatória crônica iniciada em tecido de adipose. Muitos genes específicos de inflamação e macrófago são dramaticamente super-regulados em tecido de adipose branca em modelos de camundongo de obesidade induzida por dieta com alto teor de gordura e genética (DIO), e esta super-regulação precede um aumento dramático em insulina circulante.
Os níveis aumentados de monócito CRC2 e proteína-1 quimioatraente de monócito em pacientes com diabetes melito (Biochemical and Biophysical Research Communications, 344(3):780-5 (2006)) foram encontrados em um estudo envolvendo pacientes diabéticos. As concentrações de MCP-1 de soro e expressão de CCR2 de superfície em monócitos em pacientes diabéticos foram significantemente maiores do que em diabéticos, e os níveis de MCP-1 de soro correlacionados com HbA1c, tríglicerídeos, BMI, hs-CRP. Os níveis de expressão de superfície de CD36 e CD68 em monócitos foram significantemente aumentados em pacientes diabéticos e mais desregulados por MCP-1 em diabéticos, aumentando a captação de ox-LDL, e portanto, potencialmente a transformação de célula espumosa. A MCP-1 de soro elevada e a expressão de CCR2, CD36, CD68 de monócito aumentada correlacionadas com fraco controle de glicose sanguínea e potencialmente correlacionadas com recrutamento de monócito de parede de vaso aumentado.
A MCP-1 é um fator potencial em interferências negativas entre tecido de adipose e músculo esqueletal (Bianco JJ, e outro, Endocrinology, 2458 (2006)). A MCP-1 pode significantemente reduzir captação de glicose estimulada por insulina, e é um indutor proeminente de resistência à insulina em célula muscular esqueletal humana O tecido de adipose é o maior órgão ativo secretor e endócrino que produz proteínas bioativas regulando o metabolismo de energia e sensibilidade à insulina.
O CCR2 modula os efeitos inflamatórios e metabólicos de alimentação com alto teor de gordura (Weisberg SP, e outro, J. Clin. Invest., 115 (2006)). A deficiência genética em CCR2 reduziu a ingestão de alimento e atenuou o desenvolvimento de obesidade em camundongos alimentados com uma dieta com alto teor de gordura. Em camundongos obesos comparados pela adiposidade, a deficiência de CCR2 reduziu o teor de macrófago e o perfil inflamatório de tecido de adipose, expressão de adiponectina aumentada, e homeostase de glicose aumentada e sensibilidade à insulina. Em animais magros, nenhum efeito de genótipo de CCR2 sobre a característica metabólica foi encontrado. Em camundongos com dieta com alto teor de gordura, a alimentação modulada por genótipo CCR2, o desenvolvimento de obesidade e inflamação de tecido de adipose. Uma vez estabelecido, antagonismo a curto prazo foi mostrado atenuar o acúmulo de macrófago em tecido de adipose e resistência à insulina.
A quimiocina e receptores de quimiocina são os reguladoreschave de tráfico de célula imune. A MCP-1 é um potente quimioatraente de monócitos e células T; sua expressão é induzida sob condições inflamatórias incluindo estimulações de citocina proinflamatória e hipoxia. A interação entre MCP-1 e CCR2 medeia a migração de monócitos, macrófago bem como células T ativadas e desempenham um papel-chave na patogênese de muitas doenças inflamatórias. A inibição de funções de CCR2 usando antagonistas de molécula pequena descrita nesta invenção representa um novo método para o tratamento de distúrbios inflamatórios.
A psoríase é uma doença inflamatória crônica caracterizada por hiperproliferação de ceratinócitos e infiltração de leucócitos pronunciada. É conhecido que os ceratinócitos de lesão de psoríase expressam abundante MCP-1 de ligante de CCR2, particularmente quando estimulados por citocinas proinflamatórias tal como TNF-a (Vestergaard e outro, Acta. Derm. Venereol., 84(5):353-8 (2004); Gillitzer e outro, J. Invest. Dermatol., 101(2):12731 (1993); Deleuran e outro, J. Dermatol. Sei., 13(3):228-36 (1996)). Visto que a MCP-1 pode atrair a migração tanto de macrófagos quanto de células dendríticas expressando CCR2 para a pele. Este receptor e par de ligante são acreditados serem importantes na regulação da interação entre os ceratinócitos proliferantes e macrófago dérmico durante o desenvolvimento de psoríase. Um antagonista de molécula pequena pode desse modo ser útil no tratamento de psoríase.
Além das doenças inflamatórias, as quimiocinas e receptores de quimiocina têm sido também implicadas em cânceres (Broek e outro, Br. J. câncer, 88(6):855-62 (2003)). Células de tumor estimulam a formação de estroma que secreta vários mediadores principais para crescimento de tumor, incluindo fatores de crescimento, citocinas, e proteases. É conhecido que o nível de MCP-1 está associado significantemente com o acúmulo de macrófago associado com tumor, e análise prognostica revela que a expressão elevada de MCP-1 é um indicador significante de reincidência precoce em câncer de mama (Ueno e outro, Clin. câncer Res., 6(8):3282-9 (2001)). Um antagonista de molécula pequena da quimiocina pode desse modo ser capaz de reduzir a liberação de citocinas estimulantes de crescimento, bloqueando o acúmulo de macrófagos em sítios de formação de tumor.
A US 6.939.885 (ChemoCentryx, Inc.) descreve compostos úteis na modulação da atividade de quimiocina CCR9 da fórmula
Pedido Publicado PCT WO 2003/099773 (Millennium produtos farmacêuticos, Inc.) descreve compostos que podem ligar-se a receptores de
CCR9 da fórmula
Pedido Publicado PCT WO 2005/004810 (Merck & Co., Inc.) descreve antagonistas de brandicinina B1 ou agonistas inversos da fórmula
Pedido de Patente Publicado US 2007/0037794 A1 (ChemoCentryx, Inc.) descreve moduladores de CCR2, incluindo o seguinte composto:
Infelizmente, o composto acima sofre rápida eliminação in vivo. Tais fármacos frequentemente requerem múltiplas administrações do fárma10 co para obter níveis sanguíneos terapeuticamente eficazess durante um período de tempo significante. outros métodos são também disponíveis incluindo formulações de liberação sustentada e dispositivos.
BREVE SUMÁRIO
A presente invenção refere-se a compostos e sais farmaceuti15 camente aceitáveis dos mesmos, composições, e métodos úteis na modula ção da atividade de quimiocina. Os compostos e sais dos mesmos, composições, e métodos descritos aqui são úteis no tratamento ou prevenção condições ou doenças mediadas pela quimiocina, incluindo certos distúrbios e doenças inflamatórios e imunorreguladores.
Os compostos da presente invenção têm sido mostrados modularem um ou mais de CCR2, CCR3, CCR4, CCR5, CCR6, CCR7, CCR8, CCR9, CCR10, CXCR3, CXCR4, CXCR5, e CX3CR1. Em particular, vários compostos da presente invenção modulam CCR2 como mostrado nos exemplos.
Em certas modalidades, a presente invenção refere-se a composto da fórmula (I) ou um sal do mesmo:
R1
em que:
R1 e R2 são cada qual independentemente hidrogênio, halogênio, Ove alquila, -CN, ou Ci-s haloalquila, contanto que pelo menos um de R1 ou R2 seja exceto hidrogênio;
cada R3 é independentemente hidrogênio;
R4 é hidrogênio;
R5 é halogênio ou Ci.s alquila;
R6 é hidrogênio;
X1 é CR7, N ou NO;
X2 e X4 são N ou NO;
X3 é CR7;
X6 e X7 são cada qual independentemente selecionado de CR7,
N, e NO;
cada R7 é independentemente selecionado do grupo que consiste em hidrogênio, halogênio, substituída ou C1-8 alquila não-substituída, C2-8 alquenila substituída ou não-substituída, C2-8 alquinila substituída ou nãosubstituída, -CN, =0, -NO2, -OR8, -OC(O)R8, -CO2R8, -C(O)R8, -C(O)NR9R8, -OC(O)NR9R8, -NR10C(O)R8, -NR10C(O)NR9R8, -NR9R8, -NR10CO2R8, -SR8, -S(O)R8, -S(O)2R8, -S(O)2NR9R8, -NR10S(O)2R8, Ce-10 arila substituída ou não-substituída, substituída ou não heteroarila substituída de 5 a 10 membros e heterociclila substituída ou não-substituída de 3 a 10 membros;
cada ocorrência de R8, R9, e R10 é independentemente selecionado do grupo que consiste em hidrogênio, C1.8 alquila, C2-8 alquenila, C2-8 alquinila, arila, ou heteroarila; ou R9 e R8 ou R10 e R8, juntamente com o(s) átomo(s) ao(s) qual(is) eles são ligados, formam um anel substituído ou nãosubstituído de 5, 6, ou 7 membros;
R11 é selecionado do grupo que consiste em hidrogênio, C1-8 alquila, C2-8 alquenila, C2-8 alquinila, C6-10 arila substituída ou não-substituída, heteroarila de 5 a 10 membros substituída ou não-substituída e heterociclo de 3 a 10 membros substituído ou não-substituído.
Em particular embodiments de compostos ou sais de fórmula I, são compostos ou sais dos mesmos de um composto de fórmula (II):
Em certas modalidades, para compostos de fórmula I, cada R3 e R4 e R6 são hidrogênio.
Em certas modalidades, para compostos de fórmula I, X1 é N.
Em certas modalidades, para compostos de fórmula I, X2 e X4 são N, e X6 e X7 são CR7.
Em certas modalidades, para compostos de fórmula I, R1 é Cl.
Em certas modalidades, para compostos de fórmula I, R2 é CF3.
Em certas modalidades, para compostos de fórmula I,R4 é H.
Em certas modalidades, para compostos de fórmula I, R5 é Cl ou metila.
Em certas modalidades, para compostos de fórmula I, R5 é metila.
Em certas modalidades, para compostos de fórmula l,R1 é Cl, R2 é CF3, cada R3 é H, R5 é Cl, e R6 é H.
Em um aspecto particular, a presente invenção refere-se a com15 posto selecionado do grupo que consiste em:
Em outro aspecto particular, a presente invenção refere-se a composto selecionado do grupo que consiste em:
ou um sal farmaceuticamente aceitável dos mesmos.
Em uma modalidade, o presente composto pode ser representado pela fórmula (I) ou (III) ou sais dos mesmos:
R1
em que R1, R2, R3, R4, R5, R6, R11, X1, X2, X3, X4, X6 e X7 são como definidos 5 abaixo.
Em certas modalidades, a presente invenção refere-se a composto da fórmula (III) ou um sal dos mesmo:
em que:
R1 e R2 são cada qual independentemente hidrogênio, halogênio, Ci-8 alquila, -CN, ou Ci-s haloalquila, contanto que pelo menos um de R1 ou R2 seja exceto hidrogênio;
cada R3 é independentemente hidrogênio, halogênio, ou C-m alquila;
R4 é hidrogênio ou C-i.s alquila;
R5 é halogênio ou Ci.8 alquila;
R6 é hidrogênio ou C-m alquila;
X1 é CR7, N ou NO;
X3 é N ou NO;
X2, X4, X6, e X7 são cada qual independentemente CR7, onde cada R7 é independentemente selecionado do grupo que consiste em hidrogênio, halogênio, substituída ou C-i-s alquila não-substituída, C2-8 alquenila substituída ou não-substituída, C2-8 alquinila substituída ou não-substituída, -CN, =0, -NO2, -OR8, -OC(O)R8, -CO2R8, -C(O)R8, -C(O)NR9R8, -OC(O)NR9R8, -NR10C(O)R8, -NR10C(O)NR9R8, -NR9R8, -NR10CO2R8, -SR8, -S(O)R8, -S(O)2R8, -S(O)2NR9R8, -NR10S(O)2R8, C6-io arila substituída ou não-substituída, substituída ou não heteroarila substituída de 5 a 10 membros e heterociclila substituída ou não-substituída de 3 a 10 membros;
cada ocorrência de R8, R9, e R10 é independentemente selecionada do grupo que consiste em hidrogênio, C1-8 alquila, C2-e alquenila, C2-8 alquinila, arila, ou heteroarila; ou R9 e R8 ou R10 e R8, juntamente com o(s) átomo(s) ao(s) qual(is) eles são ligados, formam um anel substituído ou nãosubstituído de 5, 6, ou 7 membros;
X5éO, S, ou NR11, onde R11 é selecionado do grupo que consiste em hidrogênio, Ci-s alquila, C2-8 alquenila, C2-8 alquinila, C6-10 arila substituída ou nãosubstituída, heteroarila de 5 a 10 membros substituída ou não-substituída e heterociclo de 3 a 10 membros substituído ou não-substituído.
Em uma modalidade particular, um composto de fórmula III tem a fórmula (IV):
Em outro aspecto, a presente invenção fornece composições úteis na modulação da atividade de quimiocina. Em uma modalidade, a composição de acordo com a presente invenção compreende um composto de acordo com a invenção e um veículo farmaceuticamente aceitável ou excipiente.
Em ainda outro aspecto, a presente invenção fornece um método de modular a função de quimiocina em uma célula, compreendendo contatar a célula com uma quantidade terapeuticamente eficaz de um composto ou composição de acordo com a invenção.
Em todavia outro aspecto, a presente invenção fornece um método para modular a função de quimiocina, compreendendo contatar um receptor de quimiocina com uma quantidade terapeuticamente eficaz de um composto ou composição de acordo com a invenção.
Em todavia outro aspecto, a presente invenção fornece um método para tratar uma condição ou doença mediada pela quimiocina, compreendendo administrar a um indivíduo uma quantidade segura e eficaz de um composto ou composição de acordo com a invenção.
Em um aspecto particular, a presente invenção refere-se a um método de tratar uma condição ou doença mediada por CCR2 compreendendo administrar a um indivíduo uma quantidade terapeuticamente eficaz de um composto ou sal farmaceuticamente aceitável de um composto de fórmula I. Em certas modalidades, uma condição ou doença mediada por CCR2 é aterosclerose. Em certas modalidades, uma condição ou doença mediada por CCR2 é restenose. Em certas modalidades, uma condição ou doença mediada por CCR2 é esclerose múltipla. Em certas modalidades, uma condição ou doença mediada por CCR2 é selecionada do grupo que consiste em doença do intestino inflamatória, fibrose renal, artrite reumatoide, obesidade e diabetes não dependente de insulina. Em certas modalidades, uma condição ou doença mediada por CCR2 é diabetes tipo 2. Em certas modalidades, uma condição ou doença mediada por CCR2 é selecionada do grupo que consiste em doença pulmonar obstrutiva crônica, fibrose pulmonar idiopática e síndrome de pneumonia idiopática.
Além dos compostos fornecidos aqui, a presente invenção também fornece composições farmacêuticas contendo um ou mais destes compostos, bem como métodos para o uso destes compostos em métodos terapêuticos, primeiramente para tratar doenças associadas com atividade de sinalização de quimiocina.
Em outro aspecto, a presente invenção provê formas cristalinas de sal de sódio de 4-cloro-N-[5-metil-2-(7H-pirrolo[2,3-d]pirimidina-4-carbonil)-piridin-3-il]-3-trifluorometil-benzenossulfonamida. Em certas modalidades, a forma cristalina sal de sódio de 4-cloro-N-[5-metil-2-(7H-pirrolo[2,3-
d]pirimidina-4-carbonil)-piridin-3-il]-3-trifluorometil-benzenossulfonamida tem uma difração de pó de raio X compreendendo os seguintes valores 2-teta ± 0,2 medida usando radiação CuKü 6,9, 7,7, 20,0, 24,3, 24,7, e 25,1. Em outras modalidades, a forma cristalina de acordo com a reivindicação 23, onde a referida forma cristalina tem uma difração de pó de raio X compreendendo os seguintes valores 2-teta ± 0,2 medida usando a radiação CuK„: 6,9, 7,7, 10,6, 11,3, 11.8, 12,5, 13,7, 15,1, 15,3, 16,1, 16,9, 17,3, 18,2, 18,5, 19,5,
20,0, 21,6, 21,8, 22,6, 24,3, 24,7, 25,1, 25,6, 26,3, 27,5, 28,5, 28,8, 29,3, 31,4, e 32,4.
BREVE DESCRIÇÃO DO DESENHO
A FIGURA 1 representa um espectro de XPRD (difração de pó de raio X) de sal de sódio de 4-cloro-N-[5-metil-2-(7H-pirrolo[2,3-d]pirimidina-
4-carbonil)-piridin-3-il]-3-trifluorometil-benzenossulfonamida como descrito no Exemplo 14.
DESCRIÇÃO DETALHADA
Geral
A presente invenção refere-se a compostos e sais dos mesmos, composições e métodos úteis na modulação de função de receptor de quimiocina, particularmente a função de CCR2. A modulação de atividade de receptor de quimiocina, como usada aqui em suas várias formas, destina-se a abranger antagonismo, agonismo, antagonismo parcial, agonismo inverso e/ou agonismo parcial da atividade associada com um receptor de quimiocina particular, preferivelmente o receptor de CCR2. Consequentemente, os compostos da presente invenção são compostos que modulam pelo menos uma função ou caracterísica de CCR2 mamífero, por exemplo, uma proteína de CCR2 humano. A capacidade de um composto para modular a função de CCR2, pode ser demonstrada em um ensaio de ligação (por exemplo, ligação de ligante ou ligação de agonista), um ensaio de migração, um ensaio de sinalização (por exemplo, ativação de uma proteína G mamífera, indução de rápido e transitório aumento na concentração de cálcio livre citosólico), e/ou ensaio de resposta celular (por exemplo, estimulação de quimiotaxia, exocitose ou liberação de mediador inflamatório por leucócitos). Abreviações e Definições
Quando descrevendo os compostos, composições, métodos e processos desta invenção, os seguintes termos têm os seguintes significados, a menos que de outro modo indicado.
Alquila” sozinha ou como parte de outro substituinte refere-se a um grupo hidrocarboneto que pode ser linear, cíclico, ou ramificado ou uma combinação dos mesmos tendo o número de átomos de carbono designado (isto é, Ci_8 significa um a oito átomos de carbono). Exemplos de grupos alquila incluem metila, etila, n-propila, isopropila, n-butila, t-butila, isobutila, sec-butila, cicloexila, ciclopentila, (cicloexil)metila, ciclopropilmetila, biciclo[2,2,1]heptano, biciclo[2,2,2]octano, etc. Os grupos alquila podem ser substituídos ou não-substituídos, a menos que de outro modo indicado. Exemplos de alquila substituída incluem haloalquila, tioalquila, aminoalquila, e similares.
Alcoxi refere-se a -O-alquila. Exemplos de um grupo alcoxi incluem metóxi, etóxi, n-propóxi etc.
Alquenila refere-se a um grupo hidrocarboneto insaturado que pode ser linear, cíclico ou ramificado ou uma combinação dos mesmos. Os grupos alquenila com 2 a 8 átomos de carbono são os preferidos O grupo alquenila pode conter 1, 2 ou 3 ligações duplas carbono-carbono. Exemplos de grupos alquenila incluem etenila, n-propenila, isopropenila, n-but-2-enila, n-hex-3-enila, cicloexenila, ciclopentenila e similares. Os grupos alquenila podem ser substituídos ou não-substituídos, a menos que de outro modo indicado.
Alquinila refere-se a um grupo hidrocarboneto insaturado que pode ser linear, cíclico ou ramificado ou uma combinação dos mesmos. Grupos alquinila com 2 a 8 átomos de carbono são os preferidos O grupo alquinila pode conter 1, 2 ou 3 ligações triplas carbono-carbono. Exemplos de grupos alquinila incluem etinila, n-propinila, n-but-2-inila, n-hex-3-inila e similares. Os grupos alquinila podem ser substituídos ou não-substituídos, a menos que de outro modo indicado.
Arila refere-se a um grupo hidrocarboneto aromático poliinsaturado, tendo um único anel (monocíclico) ou múltiplos aneis (bicíclico), que podem ser fundidos um ao outro ou ligados covalentemente. Os grupos arila com 6-10 átomos de carbono são os preferidos, onde este número de átomos de carbono pode ser designado por C6-io, por exemplo. Exemplos de grupos arila incluem fenila e naftaleno-1-ila, naftaleno-2-ila, bifenila e similares. Os grupos arila podem ser substituídos ou não-substituídos, a menos que de outro modo indicado.
Halo ou halogênio, sozinho ou como parte de um substituinte refere-se a um átomo de cloro, bromo, iodo, ou flúor.
Haloalquila, como um grupo alquila substituída, refere-se a um grupo monohaloalquila ou polihaloalquila, mais tipicamente substituído com de 1 a 3 átomos de halogênio. Exemplos incluem 1-cloroetila, 3-bromopropila, trifluorometila e similares.
Heterociclila refere-se a anel não aromático saturado ou insaurado contendo pelo menos um heteroátomo (tipicamente 1 a 5 heteroátomos) selecionado de nitrogênio, oxigênio ou enxofre O anel heterociclila pode ser monocíclico ou biciclico. Preferivelmente, estes grupos contêm 0 a 5 átomos de nitrogênio, 0 a 2 átomos de enxofre e 0 a 2 átomos de oxigênio. Mais preferivelmente, estes grupos contêm 0 a 3 átomos de nitrogênio, 0 a 1 átomo de enxofre e 0 a 1 átomo de oxigênio. Exemplos de grupos heterociclo incluem pirrolidina, piperidina, imidazolidina, pirazolidina, butirolactama, valerolactama, imidazolidinona, hidantoína, dioxolano, ftalimida, piperidina, 1,4-dioxano, morfolina, tiomorfolina, tiomorfolina-S-óxido, tiomorfolina-S.Sdióxido, piperazina, piran, piridona, 3-pirrolina, tiopirano, pirona, tetraidrofurano, tetraidrotiofeno, quinuclidina e similares. Os grupos heterociclicos preferidos são monocíclicos, embora eles possam ser fundidos ou ligados covalentemente a um sistema de anel arila ou heteroarila.
Em uma modalidade preferida, os grupos heterociclicos podem ser representados pela fórmula (AA) abaixo:
(CRaRb):
/ \ Μ1 / M2 X Y (CRcRd)k
AA em que fórmula (AA) é ligada por meio de uma valência livre sobre M1 ou Μ2; M1 representa O, NRe, ou S(O)r, M2 representa CRfR9, O, S(O)i, ou NRe; I é de 0, 1 ou 2; j é 1, 2 ou 3 e k é 1, 2 ou 3, com a condição de que j + k é 3, 4, ou 5; e Ra, Rb, Rc, Rd, Re, Rf, e R9 sejam independentemente selecionados do grupo que consiste em hidrogênio, halogênio, Ci-s alquila não-substituída ou substituída, C2-8 alquenila não-substituída ou substituída, C2-8 alquinila não-substituída ou substituída, -CORh, -CO2Rh, -CONRhR', -NRhCOR', -SO2Rh, -SO2NRhR', -NSO2RhR' -NRhR', -ORh, -Q1CORh, -Q1CO2Rh, -Q1CONRhR', -Q1NRhCOR', -Q1SO2R28, -Q1SO2NRhRi, -Q1NSO2RhR', -Q1NRhR', -Q1ORh, onde Q1 é um membro selecionado do grupo que consiste em Ci_4 alquileno, C2-4 alquenileno e C2-4 alquinileno, e Rh e R1 são independentemente selecionados do grupo que consiste em hidrogênio e C1-8 alquila, e onde as porções alifáticas de cada dos substituintes Ra, Rb, Rc, Rd, Re, Rf, Rg, Rh e R' são opcionalmente substituídas com de uma três membros selecionados do grupo que consiste em halogênio, -OH, -ORn, -OC(O)NHRn, -OC(O)NRnR°, -SH, -SRn, -S(O)Rn, -S(O)2Rn, -SO2NH2, -S(O)2NHRn, -S(O)2NRnR°, -NHS(O)2Rn, -NRnS(O)2R°, -C(O)NH2, -C(O)NHRn, -C(O)NRnR°, -C(O)Rn, -NHC(O)R°, -NRnC(O)R°, -NHC(O)NH2i -NRnC(O)NH2, -NRnC(O)NHR°, -NHC(O)NHRn, -NRnC(O)NR°Rp, -NHC(O)NRnR°, -CO2H, -CO2Rn, -NHCO2Rn, -NRnCO2R°, -CN, -NO2, -NH2, -NHRn, -NRnR°, -NRnS(O)NH2 e -NRnS(O)2NHR°, onde Rn, R° e Rp são independentemente uma C1-8 alquila não-substituída. Adicionalmente, quaisquer dois de Ra, Rb, Rc, Rd, Re, Rf e Rg podem ser combinados para formar um sistema de anel em ponte ou espirocíclico.
Em uma modalidade preferida, o número de grupos Ra + Rb + Rc + Rd que são exceto hidrogênio é de 0, 1 ou 2. Em uma modalidade mais preferida, Ra, Rb, Rc, Rd, Re, Rf, e R9 são independentemente selecionados do grupo que consiste em hidrogênio, halogênio, Cra alquila não-substituída ou substituída, -CORh, -CO2Rb, -CONRhRh, -NRhCORb, -SO2Rh, -SO2NRbR', -NSO2RhR', -NRhR', e -ORh, onde Rh e R' são independentemente selecionados do grupo que consiste em hidrogênio e C1-8 alquila não-substituída e onde as porções alifáticas de cada dos substituintes Ra, Rb, Rc, Rd, Re, Rf e R9 são opcionalmente substituídas com de uma três membros selecionados do grupo que consiste em halogênio, -OH, -ORn, -OC(O)NHRn, -OC(O)NRnR°, -SH, -SRn, -S(O)R°, -S(O)2Rn, -SO2NH2, -S(O)2NHRn, -S(O)2NRnR°, -NHS(O)2Rn, -NRnS(O)2R°, -C(O)NH2, -C(O)NHRn, -C(O)NRnR°, -C(O)Rn, -NHC(O)Rn, -NRnC(O)R°, -NHC(O)NH2, -NRnC(O)NH2, -NRnC(O)NHR°, -NHC(O)NHRn, -NRnC(O)NR°Rp, -NHC(O)NRnR°, -CO2H, -CO2Rn, -NHCO2Rn, -NRnCO2R°, -CN, -NO2, -NH2, -NHRn, -NRnR°, -NRnS(O)NH2 e -NRnS(O)2NHR°, onde Rn,
R° e Rp são independentemente uma Ci_8 alquila não-substituída.
Em uma modalidade mais preferida, Ra, Rb, Rc, Rd, Re, Rf, e R9 são independentemente hidrogênio ou Ci_4 alquila. Em outra modalidade preferida, pelo menos três de Ra, Rb, Rc, Rd, Re, Rf, e R9 são hidrogênios.
Heteroarila refere-se a um grupo aromático contendo pelo menos um heteroátomo, onde o grupo heteroarila pode ser monocíclico ou bicíclico. Exemplos incluem piridila, piridazinila, pirazinila, pirimidinila, triazinila, quinolinila, quinoxalinila, quinazolinila, cinnolinila, ftalazinila, benzotriazinila, purinila, benzimidazolila, benzopirazolila, benzotriazolila, benzisoxazolila, isobenzofurila, isoindolila, indolizinila, benzotriazinila, tienopiridinila, tienopirimidinila, pirazolopirimidinila, imidazopiridinas, benzotiazolila, benzofuranila, benzotienila, indolila, azaindolila, azaindazolila, quinolila, isoquinolila, isotiazolila, pirazolila, indazolila, pteridinila, imidazolila, triazolila, tetrazolila, oxazolila, isoxazolila, oxadiazolila, tiadiazolila, pirrolila, tiazolila, furila ou tienila. Os grupos heteroarila preferidos são aqueles tendo pelo menos um átomo de nitrogênio de anel arila, tal como quinolinila, quinoxalinila, purinila, benzimidazolila, benzopirazolila, benzotriazolila, benzotiazolila, indolila, quinolila, isoquinolila e similares. Os sistemas heteroarila de 6 anéis preferidos incluem piridila, piridazinila, pirazinila, pirimidinila, triazinila e similares. Os sistemas heteroarila de 5 aneis preferidos incluem isotiazolila, pirazolila, imidazolila, tienila, furila, triazolila, tetrazolila, oxazolila, isoxazolila, oxadiazolila, tiadiazolila, pirrolila, tiazolila e similares.
Heterociclila e heteroarila podem ser ligadas em qualquer carbono de anel ou heteroátomo disponível. Cada heterociclila e heteroarila pode ter um ou mais anéis. Quando múltiplos anéis estão presentes, eles podem ser fundidos um ao outro ou ligados covalentemente. Cada heterociclila e heteroarila deve conter pelo menos um heteroátomo (tipicamente 1 a 5 heteroátomos) selecionado de nitrogênio, oxigênio ou enxofre. Preferivelmente, estes grupos contêm 0 a 5 átomos de nitrogênio, 0 a 2 átomos de enxofre e 0 a 2 átomos de oxigênio. Mais preferivelmente, estes grupos contêm 0 a 3 átomos de nitrogênio, 0 a 1 átomo de enxofre e 0 a 1 átomo de oxigênio. Os grupos heterociclila e heteroarila podem ser substituídos ou não-substi tuídos, a menos que de outro modo indicado. Para grupos substituídos, a substituição pode ser sobre um carbono ou heteroátomo. Por exemplo, quando a substituição é oxo (=0 ou -O ), o grupo resultante pode ter uma carbonila (-C(O)-) ou um N-óxido (-N+-O‘).
Substituintes adequados para alquila substituída, alquenila substituída, e alquinila substituída incluem halogênio, -CN, -CO2R, -C(O)R, -C(O)NR’R”, oxo (=0 ou -O ), -OR, -OC(O)R , -OC(O)NR R” -NO2, -NRC(O)R’’, -NR’”C(O)NR'R”, -NRR, -NRCO2R”, -NR'S(O)R”, -NR'S(O)2R’, -NR”S(O)NR’R”, -NR S(O)2NR’R”, -SR, -S(O)R, -S(O)2R”, -S(O)2NR’r, -NR’-C(NHR”)=NR”’, -SiR’RR’,-N3, C6-io arila substituída ou não-substituída, heteroarila de 5 a 10 membros substituída ou não-substituída, e heterociclila substituída ou não-substituída de 3 a 10 membros O número de substituintes possíveis varia de zero a (2m’+1), onde rri é o número total de átomos de carbono em tal radical.
Substituintes adequados para arila substituída, heteroarila substituída e heterociclila substituída incluem halogênio, -CN, -CO2R, -C(O)R’, -C(O)NR’R”, oxo (=O ou -O ), -OR, -OC(O)R”, -OC(O)NR R”, -NO2i -NRC(O)R”, -NR’C(O)NRR, -NR R, -NRCO2R, -NR'S(O)R’, -NRS(O)2R, -NR S(O)NR’R, -NR S(O)2NR’R”, -SR, -S(O)R’, -S(O)2R’, -S(O)2NR'r, -NR’-C(NHR”)=NR’”, -SiR’RR’, -N3, substituída ou Ci-e alquila não-substituída, C2-8 alquenila substituída ou não-substituída, C2-s alquinila substituída ou não-substituída, C6-io arila substituída ou não-substituída, heteroarila de 5 a 10 membros substituída ou não-substituída, e heterociclila de 3 a 10 membros substituída ou não-substituída O número de substituintes possíveis varia de zero ao número total de valências abertas sobre o sistema de anel aromático.
Como usado acima, R’, R e R’ cada qual, independentemente, refere-se a uma variedade de grupos incluindo hidrogênio, substituída ou C1.8 alquila não-substituída, C2-8 alquenila substituída ou não-substituída, C2-e alquinila substituída ou não-substituída, arila substituída ou não-substituída, heteroarila substituída ou não-substituída, heterociclila substituída ou nãosubstituída, arilalquila substituída ou não-substituída, ariloxialquila substituída ou não-substituída. quando R’ e R são ligados ao mesmo átomo de nitrogênio, eles podem ser combinados com o átomo de nitrogênio para formar um anel de 3, 4, 5, 6 ou 7 membros (por exemplo, -NR’R inclui 1 -pirrolidinila e 4-morfolinila). Além disso, R’ e R”, R” e R’”, ou R’ e R’” pode(m) juntamente com o(s) átomo(s) ao(s) qual(is) eles são ligados, formar um anel de 5, 6 ou 7 membros substituído ou não-substituído.
Dois dos substituintes sobre os átomos adjacentes de um anel arila ou heteroarila podem opcionalmente ser substituídos com um substituinte da fórmula -T-C(O)-(CH2)q-U-, onde T e U são independentemente -NR””-, -O-, -CH2- ou uma ligação simples, e q é um número inteiro de 0 a 2. Alternativamente, dois dos substituintes sobre os átomos adjacentes do anel arila ou heteroarila podem opcionalmente ser substituídos com um substituinte da fórmula -A’-(CH2)r-B’-, onde A’ e B’ são independentemente -CH2-, -O-, -NR””-, -S-, -S(O)-, -S(O)2-, -S(O)2NR””- ou uma ligação simples, e r é um número inteiro de 1 a 3. Uma das ligações simples do novo anel desse modo formado podem opcionalmente ser substituídas com uma ligação dupla. Alternativamente, dois dos substituintes sobre os átomos adjacentes do anel arila ou heteroarila podem opcionalmente ser substituídos com um substituinte da fórmula -(CH2)s-X-(CH2)r, onde s e t são independentemente números inteiros de 0 a 3, e X é -O-, -NR””-, -S-, -S(O)-, -S(O)2-, ou -S(O)2NR’-. R”” é selecionado de hidrogênio ou Cr8 alquila não-substituída.
Heteroátomo é entendido incluir oxigênio (O), nitrogênio (N), enxofre (S) e silício (Si).
Veículo, diluente, ou excipiente farmaceuticamente aceitável é um veículo, diluente, ou excipiente compatível com os outros ingredientes da formulação e não deletério ao recipiente dos mesmos.
Sal farmaceuticamente aceitável refere-se a um sal que é aceitável para administração a um paciente, tal como um mamífero (por exemplo, sais tendo proteção mamífera aceitável para um regime de dosagem mencionado). Tais sais podem ser derivados de bases inorgânicas ou orgânicas farmaceuticamente aceitáveis e de ácidos inorgânicos ou orgânicos farmaceuticamente aceitáveis, dependendo dos substituintes particulares encontrados nos compostos descritos aqui. Quando compostos da presente invenção contêm funcionalidades relativamente acídicas, sais de adição de base podem ser obtidos contatando-se a forma neutra de tais compostos com uma quantidade suficiente da base desejada, pura ou em um solvente inerte adequado. Sais derivados de bases inorgânicas farmaceuticamente aceitáveis incluem alumínio, amônio, cálcio, cobre, férrico, ferroso, lítio, magnésio, mangânico, manganoso, potássio, sódio, zinco e similares. Sais derivados de bases orgânicas farmaceuticamente aceitáveis incluem sais de aminas primárias, secundárias, terciárias e quaternárias, incluindo aminas substituídas, aminas cíclicas, aminas de ocorrência natural e similares, tal como arginina, betaína, cafeína, colina, Ν,Ν’-dibenziletilenodiamina, dietilamina, 2-dietilaminoetanol, 2-dimetilaminoetanol, etanolamina, etilenediamina, N-etilmorfolina, N-etilpiperrdína, glucamina, glucosamina, histidina, hidrabamina, isopropilamina, lisina, metilglucamina, morfolina, piperazina, piperidina, poliamina resinas, procaínas, purinas, teobromo, trietilamina, trimetilamina, tripropilamina, trometamina e similares. Quando compostos da presente invenção contêm funcionalidades relativamente básicas, sais de adição ácidos podem ser obtidos contatando-se a forma neutra de tais compostos com uma quantidade suficiente do ácido desejado, puro ou em um solvente inerte adequado. Sais derivados de ácidos farmaceuticamente aceitáveis incluem acético, ascórbico, benzenossulfônico, benzoico, canfossulfônico, cítrico, etanossulfônico, fumárico, glucônico, glucorônico, glutâmico, hipúrico, bromídrico, clorídrico, isetiônico, lático, lactobiônico, maleico, málico, mandélico, metanossulfônico, múcico, naftalenossulfônico, nicotínico, nitrico, pamoico, pantotênico, fosfórico, succínico, sulfúrico, tartárico, p-toluenossulfônico e similares.
São também incluídos sais de aminoácidos tal como arginato e similares, e sais de ácidos orgânicos como ácidos glucurônicos ou galacturônicos e similares (veja, por exemplo, Berge, S.M. e outro, Sais farmacêuticos, J. Pharmaceutical Science, 1977, 66:1-19). Certos compostos específicos da presente invenção contêm funcionalidades tanto básicas quanto acídicas que permitem os compostos ser convertidos em sais de adição de base ou ácido.
As formas neutras dos compostos podem ser regeneradas contatando-se o sal com a base ou ácido e isolando o composto de origem da maneira convencional. A forma origem do composto difere das várias formas de sal em certas propriedades físicas, tal como solubilidade em solventes polares, porém de outro modo, os sais são equivalentes à forma origem do composto para o propósitos da presente invenção.
Sal dos mesmos refere-se a um composto formado quando o hidrogênio de um ácido é substituído por um cátion, tal como um cátion de metal ou um cátio orgânico e similares. Preferivelmente, o sal é a sal farmaceuticamente aceitável, embora isto não seja requerido para sais de compostos intermediários que não se destinam à administração a um paciente.
Além das formas de sal, a presente invenção fornece compostos que estão em uma forma de profármaco. Os profármacos dos compostos descritos aqui são aqueles compostos que leem sob alterações químicas sob condições fisiológicas para fornecer os compostos da presente invenção. Adicionalmente, os profármacos podem ser convertidos para os compostos da presente invenção por métodos químicos ou bioquímicos em um ambiente ex vivo. Por exemplo, profármacos podem ser lentamente convertidos para os compostos da presente invenção quando colocados em um reservatório de emplastro transdérmico com uma enzima adequada ou reagente químico.
Os profármacos podem ser preparados por modificação de grupos funcionais presentes nos compostos de um tal modo que as modificações sejam clivadas, ou em manipulação de via ou in vivo, paa os compostos de origem. Os profármacos incluem compostos onde grupos hidroxila, amino, sulfidrila, ou carboxila são ligados a qualquer grupo que, quando administrado a um indivíduo mamífero, cliva-se para formar um grupo hidroxila, amino, sulfidrila, ou carboxila livre, respectivamente. Exemplos de profármacos incluem, porém não estão limitados a, derivados de acetato, formiato e benzoato de grupos funcionais de álcool e amina nos compostos da invenção. Preparação, seleção, e uso de profármacos são descritos em T. Higuchi e V. Stella, Pro-drugs as Novel Delivery Systems, Vol. 14 do A.C.S. Sym posium Series; Design of Prodrugs, ed. H. Bundgaard, Elsevier, 1985; e em Bioreversible Carriers in Drug Design, ed. Edward B. Roche, American Pharmaceutical Association and Pergamon Press, 1987, cada dos quais é pelo presente incorporado por referência em sua totalidade.
Os compostos da invenção podem estar presentes na forma de metabólitos farmaceuticamente aceitáveis dos mesmos O termo metabólito significa uma forma farmaceuticamente aceitável de um derivado metabólico de um composto da invenção (ou um sal dos mesmos). Em alguns aspectos, o metabólito podem ser um derivado funcional de um composto que é facilmente convertível in vivo em um composto ativo. Em outros aspects, o metabólito podem ser um composto ativo.
Quantidade terapeuticamente eficaz refere-se a uma quantidade suficiente para realizar o tratamento quando administrada a um paciente em necessidade de tratamento.
Tratar ou tratamento como usado aqui refere-se a tratar ou tratamento da doença ou condição médica (tal como uma infecção viral, bacteriana ou fúngica ou outras doenças infecciosas, bem como condições autoimunes ou inflamatórias) em um paciente, tal como um mamífero (particularmente um ser humano ou um animal de companhia) que inclui melhorar a doença ou condição médica, isto é, eliminando ou causando a regressão da doença ou condição médica em um paciente; suprimindo a doença ou condição médica, isto é, tornando mais lento ou interrompendo o desenvolvimento da doença ou condição médica em um paciente; ou aliviando os sintomas da doença ou condição médica em um paciente.
Certos compostos da presente invenção podem existir em formas não solvatadas bem como formas solvatadas, incluindo formas hidratadas. Em geral, tanto as formas solvatadas quanto as formas não solvatadas devem ser abrangidas dentro do escopo da presente invenção. Certos compostos da presente invenção podem existir em múltiplas formas cristalinas ou amorfas (isto é, como polimorfos). Em geral, todas as formas físicas são equivalentes para os usos contemplados pela presente invenção e devem ser incluídos no escopo da presente invenção.
Será evidente para alguém versado na técnica que certos compostos da presente invenção podem existir em formas tautoméricas, todas as tais formas tautoméricas dos compostos incluindo-se no escopo da invenção. Certos compostos da presente invenção possuem átomos de carbono assimétricos (centros óticos) ou ligações duplas; os racematos, diastereômeros, isômeros geométricos e isômeros individuais (por exemplo, enantiômeros separados) são todos destinados a serem abrangidos dentro do escopo da presente invenção. Os compostos da presente invenção podem também conter proporções antinaturais de isótopos atômicos em um ou mais dos átomos que constituem tais compostos. Por exemplo, os compostos podem ser radiorrotulados com isótopos radioativos, tais como por exemplo, trítio (3H), iodo-125 (125l) ou carbono-14 (14C). Todas as variações isotópicas dos compostos da presente invenção, se radioativas ou não, devem ser abrangidas dentro do escopo da presente invenção.
Os compostos da presente invenção podem incluir um rótulo detectável. Um rótulo detectável é um grupo que é detectável em baixas concentrações, geralmente menores do que micromolar, possivelmente menores do que nanomolares, e que podem ser facilmente distinguidos de outras moléculas, devido à diferenças em uma propriedasde molecular (por exemplo, peso molecular, proporção de massa para carga, radioatividade, potencial redox, luminescência, fluorescência, propriedades eletromagnéticas, propriedades de ligação, e similares). Rótulos detectáveis podem ser detectados métodos espectroscópico, fotoquímico, bioquímico, imunoquímico, elétrico, magnético, eletromagnético, ótico ou químico e similares.
Uma ampla variedade de rótulos detectáveis incluem-se no escopo da presente invenção, incluindo rótulos de hapteno (por exemplo, biotina, ou rótulos usados em conjunto com anticorpos detectáveis tais como anticorpos de rábano silvestre peroxidase); rótulos de etiqueta de massa (por exemplo, rótulos de isótopo estáveis); rótulos radioisotópicos (incluindo Η3, II25, S35, C14, ou P32); rótulos de quelato de metal; rótulos liminescentes incluindo rótulos fluorescentes (tais como fluoresceína, isotiocianato, vermelho Texas, rodamina, proteína fluorescente verde, e similares), rótulos fosforescentes, e rótulos quimioluminescentes, tipicamente tendo produção quântica maior do que 0,1; rótulos de transferência electroactiva e eletrônica; rótulos de modulador de enzima incluindo coenzimas, catalisadores organometálicos rábano picante peroxidase, fosfatase alcalina e outros comumente usados em um ELISA; rótulos fotossensibilizantes; rótulos de conta magnética incluindo Dynabeads; rótulos colorimétricos tais como ouro coloidal, prata, selênio, ou outros metais e rótulos de sol. de metal (veja a Patente dos Estados Unidos n° 5.120.643, que é aqui incorporada por referência em sua totalidade para todos os propósitos), ou vidro ou plástico colorido (por exemplo, poliestireno, polipropileno, látex, etc.) rótulos de conta; e rótulos de negro de fumo. Patentes ensinando o uso de tais rótulos detectáveis incluem as Patentes dos Estados Unidos n°s 3.817.837, 3.850.752, 3.939.350, 3.996.345, 4.277.437, 4.275.149, 4.366.241, 6.312.914, 5.990.479,
6.207.392, 6.423.551, 6.251.303, 6.306.610, 6.322.901, 6.319.426,
6.326.144, e 6.444.143, que são aqui incorporado por referência em sua totalidade para todos os propósitos.
Rótulos detectáveis são comercialmente disponíveis ou podem ser preparados como conhecido por alguém versado na técnica. Rótulos detectáveis podem ser covalentemente ligados aos compostos usando um grupo funcional reativo, que pode ser localizado em qualquer posição apropriada. Métodos para prender um rótulo detectável são conhecidos por alguém versado na técnica. Quando o grupo reativo é ligado a uma alquila, ou cadeia alquila substituída presa a um núcleo arila, o grupo reativo pode ser localizado em uma posição terminal de uma cadeia alquila.
Compostos
Em certas modalidades, os compostos da presente invenção são compostos, ou sais dos mesmos, representados pela fórmula (I)
em que R1 e R2 são cada qual independentemente hidrogênio, halogênio, Ci_s alquila, -CN, ou Ci_s haloalquila, contanto que pelo menos um de R1 ou R2 seja exceto hidrogênio;
cada R3 é independentemente hidrogênio, halogênio, ou alquila;
R4 é hidrogênio ou Cve alquila;
R5 é halogênio ou Ci.8 alquila;
R6 é hidrogênio ou Ci_4 alquila;
R11 é selecionado do grupo que consiste em hidrogênio, Cre alquila, C2-8 alquenila, C2-8 alquinila, C6-10 arila substituída ou não-substituída, heteroarila de 5 a 10 membros substituída ou não-substituída e heterociclo de 3 a 10 membros substituído ou não-substituído;
X1 é CR7, N ou NO;
X2 e X4 são cada qual independentemente N ou NO;
X3 é CR7;
X6, e X7 são cada qual independentemente selecionado de CR7, Ne NO;
cada R7 é independentemente selecionado do grupo que consiste em hidrogênio, halogênio, substituída ou não-substituída Ci.8 alquila, C2-8 alquenila substituída ou não-substituída, C2-8 alquinila substituída ou nãosubstituída, -CN, -NO2, OR8, -OC(O)R8, -CO2R8, -C(O)R8, -C(O)NR9R8, OC(O)NR9R8, -NR10C(O)R8, -NR10C(O)NR9R8, -NR9Rs, -NR10CO2R8, -SR8, 28
S(O)R8, -S(O)2R8, -S(O)2NR9R8, -NR10S(O)2R8, C6.io arila substituída ou nãosubstituída, substituída ou não heteroarila substituída de 5 a 10 membros e heterociclila substituída ou não-substituída de 3 a 10 membros;
cada ocorrência de R8, R9, e R10 é independentemente selecio5 nado do grupo que consiste em hidrogênio, C-|.8 alquila, C2.8 alquenila, C2.8 alquinila, arila, ou heteroarila; ou R8 e R9 ou R8 e R10, juntamente com o(s) átomo(s) ao(s) qual(is) eles são ligados, formam um anel substituído ou nãosubstituído de 5, 6, ou 7 membros.
Preferivelmente, cada R3, R4 e R6 é cada qual hidrogênio.
Em outra modalidade, os compostos da presente invenção são representados pela fórmula (II), ou sais dos mesmos:
R1
em que R1, R2, R4, R5 e R11 são como definidos acima para a fórmula (I).
Em outra modalidade, os compostos da presente invenção são representados pela fórmula (III), ou sais dos mesmos:
em que R1, R2, R3, R4, R5, R6, e R11 são como definidos acima para a fórmu29
Ia (I); e
X1 é CR7, N ou NO;
X3 é N ou NO;
X2, X4, X6, e X7 são cada qual independentemente CR7, onde cada R7 é independentemente selecionado do grupo que consiste em hidrogênio, halogênio, substituída ou C1-8 alquila não-substituída, C2-8 alquenila substituída ou não-substituída, C2-8 alquinila substituída ou não-substituída, -CN, =0, -NO2, -OR8, -OC(O)R8, -CO2R8, -C(O)R8, -C(O)NR9R8, -OC(O)NR9R8, -NR10C(O)R8, -NR10C(O)NR9R8, -NR9R8, -NR10CO2R8, -SR8, -S(O)R8, -S(O)2R8, -S(O)2NR9R8, -NR10S(O)2R8, Ce-10 arila substituída ou não-substituída, substituída ou não heteroarila substituída de 5 a 10 membros e heterociclila substituída ou não-substituída de 3 a 10 membros;
cada ocorrência de R8, R9, e R10 é independentemente selecionado do grupo que consiste em hidrogênio, Ci.8 alquila, C2-8 alquenila, C2-8 alquinila, arila, ou heteroarila; ou R9 e R8 ou R10 e R8, juntamente com o(s) átomo(s) ao(s) qual(is) eles são ligados, formam um anel substituído ou nãosubstituído de 5, 6, ou 7 membros.
Em outra modalidade, os compostos da presente invenção são representados pela fórmula (IV), ou sais dos mesmos:
em que R1, R2, R4, R5, e R11 são como definidos acima para a fórmula (III). Modalidades preferidas
Em qualquer um de fórmula I, II, III, ou IV, R1 é halogênio.
Em qualquer um de fórmula I, II, III, ou IV, R2 é Ci_8 haloalquila.
Em algumas modalidades de fórmula I, II, III, ou IV, R1 é Cl e R2 é CF3.
Em algumas modalidades de fórmula I, II, III, ou IV, R1 é metila e
R2 é CF3.
Em qualquer um de fórmula I ou III, R3 é hidrogênio.
Em qualquer um de fórmula I, II, III, ou IV, R5 é halogênio.
Em qualquer um de fórmula I, II, III, ou IV, R5 é cloro.
Em qualquer um de fórmula I, II, III, ou IV, R5 é Ci-s alquila.
Em qualquer um de fórmula I, II, III, ou IV, R5 é metila.
Em qualquer um de fórmula I ou III, R6 é hidrogênio.
Em qualquer um de fórmula I ou III, X1 é N.
Em qualquer um de fórmula I ou III, X1 é NO.
Em qualquer um de fórmula I ou III, X1 é CR7.
Em algumas modalidades de fórmula I ou III, quando X1 é CR7, R7 é H.
Em algumas modalidades de fórmula I, X2 é N.
Em algumas modalidades de fórmula I, X2 é NO.
Em algumas modalidades de fórmula I, X3 é CR7, onde R7 é H ou Ci_4 alquila.
Em algumas modalidades de fórmula I, X4 é N.
Em algumas modalidades de fórmula I, X4 é NO.
Em algumas modalidades de fórmula III, X2 é CR7, onde R7 é H ou Ci-4 alcóxi.
Em algumas modalidades de fórmula III, X3 é N.
Em algumas modalidades de fórmula III, X3 é NO.
Em algumas modalidades de fórmula I, X4 é CR7, onde R7 é H ou Ci_4 alquila.
Em algumas modalidades de fórmula I, II, III, ou IV, R11 é H ou C1.4 alquila, mais preferivelmente H.
Em algumas modalidades de fórmula I ou III, X6 é CR7.
Em algumas modalidades de fórmula I ou III, X6 é CR7, onde R7 é H ou Ci_4 alquila, mais preferivelmente H.
Em algumas modalidades de fórmula I ou III, X6 é N.
Em algumas modalidades de fórmula I ou III, X6 é NO.
Em algumas modalidades de fórmula I ou III, X7 é CR7.
Em algumas modalidades de fórmula I ou III, X7 é CR7, onde R7 é H ou Ci_4 alquila, mais preferivelmente H.
Em algumas modalidades de fórmula I ou III, X7 é N.
Em algumas modalidades de fórmula I ou III, X7 é NO.
Compostos que modulam a atividade de CCR2
A presente invenção fornece compostos que modulam pelo menos uma atividade de CCR2. Os receptores de quimiocina são proteínas de membrana integral que interagem com um ligante extracelular, tal como uma quimiocina, e medeiam uma resposta celular ao ligante, por exemplo, quimiotaxia, concentração de íon de cálcio intracelular aumentada, etc. Portanto, modulação de uma função de receptor de quimiocina, por exemplo, interferência com uma interação de ligante de receptor de quimiocina, modularão uma resposta mediada por receptor de quimiocina, e tratarão ou prevenirão uma condição ou doença mediada por receptor de quimiocina. A modulação de uma função de receptor de quimiocina inclui tanto a indução quanto a inibição da função O tipo de modulação realizada dependerá das características do composto, isto é, antagonista ou agonista total, parcial ou inverso.
Sem pretender ser ligado por qualquer teoria particular, acreditase que os compostos fornecidos aqui interfiram com a interação entre um receptor de quimiocina e um ou mais ligantes cognatos. Em particular, acredita-se que os compostos interfiram com a interação entre CCR2 e um ligante de CCR2, tal como MCP-1. Os compostos contemplados pela invenção incluem, porém não estão limitados aos compostos exemplares fornecidos aqui e sais dos mesmos.
Por exemplo, os compostos desta invenção agem como potentes antagonistas de CCR2, e esta atividade antagonística foi também confirmada em teste animal quanto à inflamação, uma característica dos estados de doença por CCR2. Consequentemente, os compostos fornecidos aqui são úteis em composições farmacêuticas, métodos para o tratamento de doenças mediadas por CCR2, e como controles em ensaios para a identificação de antagonistas competitivos de CCR2.
Composições que modulam a atividade de quimiocina
Em outro aspecto, a presente invenção fornece composições que modulam atividade de quimiocina, especificamente a atividade de CCR2. Geralmente, as composições para modular a atividade de receptor de quimiocina em humanos e animais compreenderão um excipiente ou diluente farmaceuticamente aceitável e um composto tendo a fórmula fornecida acima como fórmula (I).
O termo composição como usado aqui destina-se a abranger um produto compreendendo os ingredientes especificados nas quantidades especificadas, bem como qualquer produto que resulte, direta ou indiretamente, de combinação dos ingredientes especificados nas quantidades especificadas. Por farmaceuticamente aceitável entende-se que o veículo, diluente ou excipiente deve ser compatível com os outros ingredientes da formulação e não deletério ao recipiente dos mesmos.
As composições farmacêuticas para a administração dos compostos desta invenção podem convenientemente ser apresentadas em forma de dosagem unitária e podem ser preparadas por qualquer dos métodos bem conhecidos na arte de farmácia. Todos os métodos incluem a etapa de trazer o ingrediente ativo em associação com o veículo que constitui um ou mais ingredientes auxiliares. Em geral, as composições farmacêuticas são preparadas uniforme e intimamente trazendo o ingrediente ativo em associação com um veículo líquido ou um veículo sólido finamente dividido ou ambos, e então, se necessário, moldando o produto na formulação desejada. Na composição farmacêutica o composto objeto ativo é incluído em uma quantidade suficiente para produzir o efeito desejado no processo ou condição de doenças.
As composições farmacêuticas contendo o ingrediente ativo podem ser em uma forma adequada para uso oral, por exemplo, como comprimidos, trociscos, losangos, suspensões aquosas ou oleosas, pós dispersíveis ou grânulos, emulsões e auto-emulsificações como descrito na Patente dos Estados Unidos 6.451.339, cápsulas duras ou macias, ou xaropes ou elixires. Composições destinadas ao uso oral podem ser preparadas de a cordo com qualquer método conhecido para a técnica para a fabricação de composições farmacêuticas. Tais composições podem conter um ou mais agentes selecionados de agentes adoçantes, agentes aromatizantes, agentes colorantes e agentes conservantes a fim de fornecer preparações farmaceuticamente elegantes e saborosas. Comprimidos contêm o ingrediente ativo em mistura com outros excipientes farmaceuticamente aceitáveis nãotóxicos que são adequados para a fabricação de comprimidos. Estes excipients podem ser, por exemplo, diluentes inertes tais como celulose, dióxido de silício, óxido de alumínio, carbonato de cálcio, carbonato de sódio, glicose, manitol, sorbitol, lactose, fosfato de cálcio ou fosfato de sódio; agentes de granulação e desintegração, por exemplo, amido de milho, ou ácido algínico; agentes de ligação, por exemplo, PVP, celulose, PEG, amido, gelatina ou acácia, e agentes lubrificantes, por exemplo, estearato de magnésio, ácido esteárico ou talco. Os comprimidos podem ser não revestidos ou eles podem ser revestidos entericamente ou de outro modo por técnicas conhecidas para retardar a desintegração e absorção no trato gastrointestinal e desse modo fornecer uma ação sustentada durante um período maior. Por exemplo, um material de retardo do tempo tal como monoestearato de glicerila ou diestearato de glicerila podem ser empregados. Eles podem também ser revestidos por técnicas descritas nas Patentes dos Estados Unidos N05 4.256.108, 4.166.452, e 4,265,874 para formar comprimidos terapêuticos osmóticos para liberação controlada.
As formulações para uso oral podem também ser apresentadas como cápsulas de gelatina duras onde o ingrediente ativo é misturado com um diluente sólido inerte, por exemplo, carbonato de cálcio, fosfato de cálcio ou caulim, ou como cápsulas de gelatina macia onde o ingrediente ativo é misturado com água ou um meio oleoso, por exemplo, óleo de amendoim, parafina líquida, ou óleo de oliva. Adicionalmente, emulsões podem ser preparadas com um ingrediente não miscível em água tal como óleos e estabilizadas com tensoativos tais como mono-diglicerídeos, ésteres de PEG e similares.
As suspensões aquosas contêm os materiais ativos em mistura com excipientes adequados para a fabricação de suspensões aquosas. Tais excipientes são agentes de suspensão, por exemplo, carboximetilcelulose sódica, metilcelulose, hidroxipropilmetilcelulose, alginato de sódio, polivinilpirrolidona, goma de tragacanto e goma acácia; agentes de dispersão ou umectação podem ser um fosfatídeo de ocorrência natural, por exemplo, lecitina, ou produtos de condensação de um óxido de alquileno com ácidos graxos, por exemplo, estearato de polioxietileno, ou produtos de condensação de óxido de etileno com álcoois alifáticos de cadeia longa, por exemplo, heptadecaetilenooxicetanol, ou produtos de condensação de óxido de etileno com ésteres parciais derivados de ácidos graxos e um hexitol tal como mono-oleato de sorbitol de polioxietileno, ou produtos de condensação de óxido de etileno com derivados de ésteres parciais de ácidos graxos e anidridos de hexitol, por exemplo, mono-oleato de sorbitan de polietileno. As suspensões aquosas podem também conter um ou mais preservativos, por exemplo, etila, ou n-propila, p-hidroxibenzoato, um ou mais agentes colorantes, um ou mais agentes aromatizantes, e um ou mais agentes adoçantes, tal como sacarose ou sacarina.
Suspensões oleosas podem ser formuladas por suspensão do ingrediente ativo em um óleo vegetal, por exemplo, óleo de amendoim, óleo de oliva, óleo de sésamo ou óleo de coco, ou em um óleo mineral tal como parafina líquida. As suspensões oleosas podem conter um agente de espessamento, por exemplo, cera de abelha, parafina dura ou álcool cetílico. Agentes adoçantes tal como aqueles mencionados acima, e agentes aromatizantes podem ser adicionados para fornecer uma preparação oral saborosa. Estes composições podem ser preservadas pela adição de um antioxidante tal como ácido ascórbico.
Pós dispersíveis e grânulos adequados para preparação de uma suspensão aquosa pela adição de água fornecem o ingrediente ativo em mistura com um agente de dispersão ou umectante, agente de suspensão e um ou mais conservantes. Agentes de dispersãso ou umectação adequados e agentes de suspensão são exemplificados por aqueles já mencionados acima. Excipientes adicionais, por exemplo, agentes adoçantes, aromatizan35 tes e colorantes, podem também estar presente.
As composições farmacêuticas da invenção podem também ser na forma de emulsões de óleo em água. A fase oleosa pode ser um óleo vegetal, por exemplo, óleo de oliva ou óleo de amendoim, ou um óleo mineral, por exemplo, parafina líquida ou misturas destes. Agentes emulsificantes adequados podem ser gomas de ocorrência natural, por exemplo, goma acácia ou goma de tragacanto, fosfatídeos de ocorrência natural, por exemplo, soja, lecitina, e ésteres ou ésteres parciais derivados de ácidos graxos e anidridos de hexitol, por exemplo, mono-oleato de sorbitan, e produtos de condensação dos referidos ésteres parciais com etileno óxido, por exemplo, polioxietileno mono-oleato de sorbitan. As emulsões podem também conter agentes adoçantes e aromatizantes.
Xaropes e elixires podem ser formulados com agentes adoçantes, por exemplo, glicerol, propileno glicol, sorbitol ou sacarose. tais formulações podem também conter um demulcente, um conservante, e agentes aromatizantes e colorantes. Soluções orais podem ser preparadas em combinação com, por exemplo, ciclodextrina, PEG e tensoativos.
As composições farmacêuticas podem ser na forma de suspensão aquosa ou oleaginosa injetável estéril. Esta suspensão pode ser formulada de acordo com a técnica conhecida usando aqueles agentes de dispersão ou umectação adequados e agentes de suspensão que foram mencionados acima. A preparação injetável estéril pode também ser uma solução ou suspensão injetável estéril em um diluente ou solvente parenteralmente aceitável não-tóxico, por exemplo, como uma solução em 1,3-butano diol. Entre os veículos e solventes aceitáveis que podem ser empregados estão a água, solução de Ringer e solução de cloreto de sódio isotônica. Além disso, óleos removíveis estéreis são convencionalmente empregados como um solvente ou meio de suspensão. Para este propósito qualquer óleo fixo suave pode ser empregado incluindo mono- e diglicerídeos sintéticos. Além disso, ácidos graxos tal como ácido oleico encontram uso na preparação de injetáveis.
Os compostos da presente invenção podem também ser admi nistrados na forma de supositórios para administração retal do fármaco. Estas composições podem ser preparadas misturando-se o fármaco com um excipiente não irritante adequado que é sólido em temperaturas usuais, porém líquidos na temperatura retal e portanto, derreterão no reto para liberar o fármaco. Tais materiais são manteiga de cacau e polietileno glicóis. Adicionalmente, os compostos podem ser administrados por meio de liberação ocular por meio de soluções ou unguentos. Todavia além disso, a liberação transdérmica dos compostos objeto pode ser realizada por meio de emplastros iontoforéticos e similares.
Para uso tópico, cremes, unguentos, geleias, soluções ou suspensões contendo os compostos da presente invenção são empregados. Como usada aqui, a aplicação tópica é destina-se também a incluir o uso de antissépticos bucais e gargarejos.
As composições farmacêuticas e métodos da presente invenção podem também compreender outros compostos terapeuticamente ativos como mencionados aqui, tal como aqueles aplicados no tratamento das condições patológicas acima mencionadas.
Em uma modalidade, a presente invenção fornece uma composição consistindo em um veículo farmaceuticamente aceitável e um composto da invenção.
Avaliação da Eficácia de Moduladores de Quimiocina
Ensaios In Vitro
Uma variedade de ensaios pode ser usada para avaliar os compostos fornecidos aqui, incluindo ensaios de sinalização, ensaios de migração, ensaios de ligação de ligante, e outros ensaios de resposta celular. Os ensaios de receptor de quimiocina receptor ensaio de sinalização podem ser usados para avaliar a capacidade do composto, tal como um antagonista potencial de CCR2, para bloquear a sinalização induzida pelo ligante de CCR2 (por exemplo, MCP-1). Um ensaio de migração podem ser usado para avaliar a capacidade de um composto de interesse, tal como um antagonista de quimiocina possível, para bloquear a migração de célula mediada por quimiocina in vitro O último é acreditado parecer-se com a migração celular induzida por quimiocina in vivo. Um ensaio de ligação de ligante pode ser usado para avaliar a capacidade do composto, tal como um antagonista de CGR2 potencial, para bloquear a interação de MCP-1 com seu receptor.
Em um ensaio adequado, a proteína de quimiocina (se isolada ou recombinante) é usada, a qual tem pelo menos uma propriedade, atividade, ou caracterísica funcional da proteína de quimiocina mamífera. A propriedade pode ser uma propriedade de ligação (a, por exemplo, um ligante ou inibidor), uma atividade de sinalização (por exemplo, ativação de uma proteína G mamífera, indução de rápido e transitório aumento na concentração de íon de cálcio livre citosólico), função de resposta celular (por exemplo, estimulação de quimiotaxia ou liberação de mediador inflamatório por leucócitos), e similares.
O ensaio pode ser um ensaio com base na célula que utiliza células estavelmente ou transitoriamente transfectadas com um vetor ou cassete de expressão tendo sequência de ácido nucléico que codifica o receptor de quimiocina. As cepas celulares que expressam naturalmente a quimiocina podem também ser usadas. As células são mantidas sob condições apropriadas para expressão do receptor e são contatadas com um agente putativo sob condições apropriadas para a ligação ocorrer. A ligação pode ser detectada usando técnicas padrão. Por exemplo, a extensão da ligação pode ser determinada com relação a um controle adequado (por exemplo, com relação à base na ausência do agente putativo, ou com relação a um ligante conhecido). Opcionalmente, uma fração celular, tal como uma fração de membrana, contendo o receptor pode ser usada em lugar de células totais.
A detecção de ligação ou formação de complexo pode ser detectada direta ou indiretamente. Por exemplo, o agente putativo pode ser rotulado com um rótulo adequado (por exemplo, rótulo fluorescente, rótulo quimioluminescente, rótulo de isótopo, rótulo de enzima, e similares) e a ligação pode ser determinada por detecção do rótulo. A ligação específica e/ou competitiva pode ser avaliada por estudos de competição ou deslocamento, usando agente não rotulado ou um ligante (por exemplo, MCP-1) como um competidor.
Os ensaios de inibição de ligação podem ser usados para avaliar os presentes compostos. Nestes ensaios, os compostos são avaliados como inibidores de ligação de ligante usando, por exemplo, MCP-1. Em uma modalidade, o receptor de CCR2 é contatado com um ligante como MCP-1 e uma medida da ligação de ligante é feita O receptor é então contatado com um agente de teste na presença do ligante (por exemplo, MCP-1) e a segunda medição de ligação é feita. Uma redução na extensão de ligação do ligante é indicativa de inibição de ligação pelo agente de teste. Os ensaios de inibição de ligação podem ser realizados usando células totais que expressam a quimiocina, ou uma fração de membrana de células que expressam a quimiocina.
A ligação do receptor acoplado à proteína G, por exemplo, por um agonista, pode resultar em um evento de sinalização pelo receptor. Consequentemente, ensaios de sinalização podem também ser usados para avaliar os compostos da presente invenção e a indução de função de sinalização por um agente pode ser monitorada usando qualquer método adequado. Por exemplo, a atividade de proteína G, tal como hidrólise de GTP para GDP, ou eventos de sinalização tardios disparados por ligação do receptor podem ser ensaiados por métodos conhecidos (veja, por exemplo, PCT/US97/15915; Neote e outro, Cell, 72:415425 (1993); Van Riper e outro, J. Exp. Med., 177:851-856 (1993) e Dahinden e outro, J. Exp. Med., 179:751-756(1994)).
Ensaios de quimiotaxia podem também ser usados para estimar a função de receptor e evaliar os compostos fornecidos aqui. Estes ensaios são baseados na migração funcional de células in vitro ou in vivo induzida por um agente, e podem ser usados para estimar a ligação e/ou efeito sobre a quimiotaxia de ligantes, inibidores, ou agonistas. Uma variedade de ensaios de quimiotaxia é conhecida na técnica, e qualquer ensaio adequado pode ser usado para avaliar os compostos da presente invenção. Exemplos de ensaios adequados incluem aqueles descritos no PCT/US97/15915; Springer e outro, WO 94/20142; Berman e outro, Immunol. Invest., 17:625-677 (1988); e Kavanaugh e outro, J. Immunol., 146:4149-4156 (1991)).
Ensaios de sinalização de cálcio medem a concentração de cálcio em tempo prolongado, preferivelmente antes e após a ligação de receptor. Estes ensaios podem ser usados para quantificar a geração do mediador de sinalização de receptor, Ca++, seguindo a ligação de receptor (ou ausência dos mesmos). Estes ensaios são úteis na determinação da capacidade do composto, tal como aqueles da presente invenção, para gerar o mediador de sinalização de receptor por ligação a um receptor de interesse. Além disso, estes ensaios são úteis na determinação da capacidade do composto, tal como aqueles da presente invenção, para inibir a geração do mediador de sinalização do receptor por interferência com a ligação entre um receptor de interesse e um ligante.
Em ensaios de sinalização de cálcio usados para determinar a capacidade de um composto interferir com a ligação entre um receptor de quimiocina e um ligante de quimiocina conhecido, células expressando o receptor de quimiocina (células expressando o CCR2 tais como as células THP-1) são primeiro incubadas com um composto de interesse, tal como um antagonista de quimiocina potencial, em concentações crescentes O número de células pode ser de 105 a 5 x 105 células por cavidade em uma placa de microtítulo de 96 cavidades. A concentração do composto sendo testada pode variar de 0 a 100 μΜ. Após um perído de incubação (que pode variar de 5 a 60 minutos), as células tratadas são colocadas em uma Leitora de Placa de Imageamento Fluorométrico (FLIPR®) (disponível de Molecular Devices Corp., Sunnyvale, CA) de acordo com a instrução do fabricante O sistema FLIPR® é bem conhecido por aqueles versados na técnica como um método padrão de realizar ensaios. As células são então estimuladas com uma quantidade apropriada de ligante de quimiocina (MCP-1 for CCR2) em concentração final de 5-100 nM, e o sinal de aumento de cálcio intracelular (também chamado fluxo de cálcio) é registrado. A eficácia de um composto como um inibidor de ligação entre a quimiocina e o ligante pode ser calculada como uma IC50 (a concentração necessária para causar 50% de inibição em sinalização) ou IC90 (a 90% de inibição). Ensaios de migração de célula in vitro podem ser realizados (porém não estão limitados a este formato) u sando a microcâmara de 96 cavidades (chamada ChemoTX®) O sistema ChemoTX® é bem conhecido por aqueles versados na técnica como um tipo de instrumento quimiotático / de migração celular. Neste ensaio, células expressando CCR2 (tal como THP-1) são primeiro incubadas com um composto de interesse, tal como um antagonista de CCR2 possível, respectivamente, em concentrações crescentes. Tipicamente, cinquenta mil células por cavidade são usadas, porém a quantidade pode variar de 103-106 células por cavidade O ligante de quimiocina (por exemplo, ligante MCP-1 de CCR2, tipicamente a 0,1 nM (porém pode variar de 5-100 nM)) é colocado em uma câmara menor e o aparelho de migração é montado. Vinte microlitros de células tratadas com o composto teste são então colocados sobre a membrana. A migração é deixada ocorrer a 37°C durante um período de tempo, tipicamente 1,5 hora para CCR2. Ao término da incubação, o número de células que migraram através da membrana para dentro da câmara menor é então quantificado. A eficácia de um composto como um inibidor de migração celular mediada por quimiocina é calculada como uma IC50 (a concentração necessária para reduzir a migração celular em 50%) ou IC90 (para inibição de 90%).
Ensaio BiRAM
Exemplos de avaliações primárias para identificar antagonistas de quimiocina incluem o ensaio BiRAM (WO 02101350, US2004023286), que detecta hits potenciais por sua capacidade de ativar a migração celular sob concentração de quimiocina inibitória. Para começar um tal ensaio, células expressando quimiocina (tal como células THP-1 para ensaio CCR2) são colhidas por centrifugação de suspensão celular a 1000 RPM sobre um GS6R Beckman centrifuge. A pélete celular é ressuspensa em tampão de quimiotaxia (HBSS/0,1% BSA) a 10 x 106 células/mL para ensaio CCR2. Vinte e cinco microlitros de células são misturados com um volume igual do composto teste diluído para 20 μΜ no mesmo tampão. Vinte microlitros da mistura são transferidos sobre o filtro na câmara de quimiotaxia superior, com 29 μΙde solução de quimiocina contendo ligante de quimiocina (100 nM de proteína MCP-1 e MIP-1a de quimiocina para ensaio CCR2) são colocados na câmara inferior. Seguindo uma incubação a 37°C (90 minutos para CCR2), o ensaio é terminado por remoção das gotas celulares de topo do filtro. Para quantificar as células migradas através da membrane, 5 μΙ_ de 7X solução CyQUANT® são adicionados a cada poço na câmara inferior, e o sinal de fluorescência medido em uma leitora de placa de fluorescência Spectrafluor Plus (TECAN, Durham, NC).
Para seleção de hits potenciais, o nível de ativação de migração é calculado como a relação do índice RAM entre o sinal da cavidade particular e o sinal médio da plata inteira. Compostos com um índice RAM maior do que 1,5 para ensaio CCR2 são considerados como RAM positivo, e são selecionados para determinações de IC5o em ensaios funcionais convencionais.
Ensaio de fluxo de cálcio
Ensaio de fluxo de cálcio mede um aumento em cálcio intracelular seguindo a ativação de receptor induzida por ligante e pode ser empregado como um ensaio secundário seguindo avaliação primária. Um tal ensaio pode ser realizado, por exemplo, em uma máquina FLIPR® (Molecular Devices, Mountain View, CA). Para começar um ensaio, células expressando quimiocina (tal como células THP-1 para ensaio CCR2) são colhidas por centrifugação de suspensão celular, e ressuspensas para 1,5 x 106 células/mL em HBSS (com 1% de soro de bezerro fetal). As células são então rotuladas com um corante indicador de cálcio Fluo-4 AM durante 45 minutos a 37°C com suave agitação. Seguindo a incubação, as células são peletadas, lavadas uma vez com HBSS e ressuspensas no mesmo tampão em uma densidade de 1,6 x 106 células/mL. Em microlitros de células rotuladas são misturados com 10 μΙ_ de composto teste nas concentrações apropriadas na placa de ensaio. A proteína de quimiocina (MCP-1 em uma concentração final de 0,1 nM para ensaio CCR2) é adicionada para ativar o receptor O grau de inibição é determinado comparando-se os sinais de cálcio entre as células tratadas e não tratadas com o composto. Os cálculos de IC50 são também realizados por análise de regressão de quadrados não lineares usando Graphpad Prism (Graphpad Software, San Diego, CA).
Ensaio de ligação de ligante
Ensaio de ligação de ligante pode ser usado para determinar a capacidade de antagonistas potenciais de CCR2 bloquearem a interação entre CCR2 e seu ligante MCP-1. Células THP-1 expressando CCR2 são centrifugadas e ressuspensas em tampão de ensaio (20 mM de HEPES pH 7,1, 140 mM de NaCI, 1 mM de CaCh, 5 mM de MgCI2, e com 0,2% de albumina de soro bovino) em uma concentração de 2,2 x 105 células/mL. Ensaios de ligação são realizados como segue. Primeiro, 0,09 mL de células (1 x 105 células THP-1/cavidade) foi adicionado às placas de ensaio contendo os compostos, fornecendo uma concentração final de -2-10 μΜ de cada composto para análise (ou parte da resposta de dose para as determinações de IC50 do composto). Em seguida 0,09 mL de MCP-1 rotulado com 125l (obtido de Amersham; Piscataway, NJ) diluído em tampão de ensaio para uma concentração final de -50 pM, produzindo -30,000 cpm por cavidade, é adicionado, as placas são seladas e incubadas durante aproximadamente 3 horas a 4°C em uma plataforma agitadora. As reações são aspiradas sobre filtros de vidro GF/B preembebidos em 0,3% de solução de polietilenoimina (PEI), em uma coletora celular a vácuo (Packard Instruments; Meriden, CT). Fluido de cintilação (50 pL; Microscint 20, Packard Instruments) é adicionado a cada cavidade, as placas são seladas e a radioatividade medida em uma registradora de cintilação Top Count (Packard Instruments). As cavidades de controle contendo ou apenas diluente (para contagens totais) ou excesso de MCP-1 (1 pg/mL, para ligação não específica) são usadas para calcular o percentual de inibição total para o composto O programa de computador Prism de GraphPad, Inc. (San Diego, Ca) é usado para calcular os valores IC50. Os valores IC50 são aquelas concentrações requeridas para reduzir a ligação de MCP-1 rotulado ao receptor em 50%.
Métodos de Tratamento
Dependendo da doença a ser tratada e a condição do indivíduo, os compostos e composições da presente invenção podem ser administrados vias de administração oral, parenteral (por exemplo, intramuscular, intraperitoneal, intravenosa, ICV, injeção ou infusão intracisternal, injeção sub cutânea, ou implante), inalação, nasal, vaginal, retal, sublingual, ou tópica e podem ser formulados, sozinhos ou juntos, em formulações unitárias de dosagem adequada contendo veículos, adjuvantes e veículos farmaceuticamente aceitáveis não-tóxicos convencionais apropriados para cada via de administração. A presente invenção também contempla a administração dos compostos e composições da presente invenção em uma formulação de depósito.
No tratamento ou prevenção de condições que requerem a modulação de receptor de quimiocina um nível apropriado de dosagem geralmente será de cerca de 0,001 a 100 mg por kg de peso corporal do paciente por dia que podem ser administrados em doses única ou múltiplas. Preferivelmente, o nível de dosagem será de cerca de 0,01 a cerca de 25 mg/kg por dia; mais preferivelmente de cerca de 0,05 a cerca de 10 mg/kg por dia. Um nível de dosagem adequado podem ser de cerca de 0.,01 a 25 mg/kg por dia, de cerca de 0,05 a 10 mg/kg por dia, ou de cerca de 0,1 a 5 mg/kg por dia. Dentro desta faixa a dosagem pode ser de 0,005 a 0,05, 0,05 a 0,5, 0,5 a 5,0, ou 5,0 a 50 mg/kg por dia. Para administração oral, as composições são preferivelmente fornecidass na forma de comprimidos contendo 1,0 a 1000 miligramas do ingrediente ativo, particularmente 1,0, 5,0, 10,0, 15,0, 20,0, 25,0, 50,0, 75,0, 100,0, 150,0, 200,0, 250,0, 300,0, 400,0, 500,0, 600,0, 750,0, 800,0, 900,0, e 1000,0 miligramas do ingrediente ativo para o ajuste sintomático da dosage ao paciente a ser tratado. Os compostos podem ser administrados em um regime de 1 a 4 vezes por dia, preferivelmente uma vez ou duas vezes por dia.
Será entendido, entretanto, que o nível de dose específica e a frequência de dosage para qualquer paciente particular podem ser variados e dependerão de uma variedade de fatores incluindo a atividade do composto específico empregado, a estabilidade metabólica e a duração da ação daquele composto, a idade, peso corporal, características hereditárias, saúde geral, sexo, dieta, modo e tempo de administração, taxa de excreção, combinação de fármaco, a severidade da condição particular, e o hospedeiro que está passando pela terapia.
Farmacolóqicos a serem usados em conjunto com compostos de CCR2
Os agentes farmacológicos que podem ser usados em conjunto com os antagonistas de CCR2 da presente invenção incluem aqueles usados para o tratamento de aterosclerose, restenose, esclerose múltipla, fibrose pulmonar, doença do intestino inflamatória, artrite reumatoide, doença do enxerto-versus-hospedeiro,fibrose renal, psoríase, rejeição a transplante, obesidade, diabetes, hipercolesterolemia e câncer.
Em ainda outras modalidades, os presentes métodos são direcionados ao tratamento de doenças alérgicas, onde um composto ou composição da invenção é administrado sozinho ou em combinação com um segundo agente terapêutico, onde o referido segundo agente terapêutico é uma anti-histamina. Quando usado em combinação, o médco pode administrar uma combinação do composto ou composição da presente invenção e um segundo agente terapêutico. Além disso, o composto ou composição e o segundo agente terapêutico podem ser administrado sequencialmente, em qualquer ordem.
Os compostos e composições da presente invenção podem ser combinados com outros compostos e composições tendo utilidades relacionadas para prevenir e tratar a condição ou doença de interesse, tal como condições inflamatórias e doenças, incluindo doença do intestino inflamatória, doenças alérgicas, psoríase, dermatite atópica e asma, e aquelas patologias mencionadas acima. A seleção dos agentes apropriados para uso em terapias de combinação pode ser feita por alguém versado na técnica. A combinação de agentes terapêuticos pode agir sinergicamente para realizar o tratamento ou prevenção de vários distúrbios. Usando este método, alguém pode ser capaz de obter eficácia terapêutica com dosagens menores de cada agente, desse modo reduzindo o potencial de efeitos colaterais adversos.
No tratamento, prevenção, melhora, controle ou redução do risco de inflamação, os compostos da presente invenção podem ser usados em conjunto com um agente anti-inflamatório ou agente analgésico tal como um agonista de opiato, um inibidor de lipoxigenase, tal como um inhibitor de 545 lipoxigenase, um inibidor de ciclooxigenase, tal como um inibidor de ciclooxigenase-2, um inibidor de interleucina, tal como um inibidor de interleucina-1, um antagonista de NMDA, um inibidor de óxido nítrico ou um inibidor da síntese de óxido nítrico, um agente anti-inflamatório não esteroidal, ou um agente anti-inflamatório supressor de citocina, por exemplo, com um composto tal como acetaminofeno, aspirina, codeína, sequestrantes de TNF biológicos, fentanila, ibuprofeno, indometacin, cetorolac, morfina, naproxeno, fenacetina, piroxicam, um analgésico esteroidal, sufentanila, sunlindac, tenidap, e similares.
Similarmente, os compostos da presente invenção podem ser administrados com um aliviador da dor; um potenciador tal como cafeína, um antagonista de H2, simeticona, hidróxido de alumínio ou magnésio; um descongestionante tal como pseudofedrina; um antitussivo tal como codeína; um diurético; uma antihistamina sedativa ou não-sedativa; um antagonista de antígeno muito tardio (VLA-4); um imunossupressor tal como ciclosporina, tacrolimus, rapamicina, agonistas de receptor de EDG, ou outros imunossupressores do tipo FK-506; um esteroide; um agente antiasmático não esteroidal tal como um agonista β2, antagonista de leucotrieno, ou inibidor de biossíntese de leucotrieno; um inibidor de fosfodiesterase tipo IV (PDE-IV); um agente redutor de colesterol tal como um inibidor de HMG-CoA redutase, sequestrante, ou inibidor de absorção de colesterol; e um agente antidiabético tal como insulina, inibidores de α-glucosidase ou glitazonas.
A proporção de peso do composto da presente invenção para o segundo ingrediente ativo pode ser variada e dependerá da dose eficaz de cada ingrediente. Geralmente, uma dose eficaz de cada será usada. Desse modo, por exemplo, quando um composto da presente invenção é combinado com um NSAID a proporção de peso do composto da presente invenção para o NSAID geralmente variará de cerca de 1000:1 a cerca de 1:1000, preferivelmente de cerca de 200:1 a cerca de 1:200. As combinações de um composto da presente invenção e outros ingredientes ativos geralmente também será dentro da faixa anteriormente mencionada, porém em cada caso, uma dose eficaz de cada ingrediente ativo deve ser usada.
Métodos de tratar ou prevenir condições ou doenças mediadas por CCR2.
Em ainda outro aspecto, a presente invenção fornece métodos de tratar ou prevenir uma condição ou doença mediada por CCR2 administrando-se a um indivíduo tendo uma tal condição ou doença uma quantidade terapeuticamente eficaz de qualquer composto de fórmula (I) acima. Os compostos para uso nos presentes métodos incluem aqueles compostos de acordo com a fórmula (I), aqueles fornecidos acima como modalidades, aqueles especificamente exemplificados nos exemplos abaixo, e aqueles fornecidos com estruturas específicas aqui O indivíduo é definido aqui incluir animais tais como mamíferos, incluindo, porém não limitados a, primatas (por exemplo, seres humanos), vacas, ovelhas, cabras, cavalos, cães, gatos, coelhos, ratos, camundongos e similares. Em modalidades preferidas, o indivído é um ser humano.
Como aqui usada, a frase condição ou doença mediada por CCR2 e as frases e termos relacionados referem-se a uma condição ou doença caracterizada por atividade de função de CCR2a1 imprópria, isto é, menos do que ou maior do que a normal, função imprópria de atividade de CCR2al pode surgir como o resultado da expressão de CCR2 em células que normalmente não expressam CCR2, expressão de CCR2 aumentada (induzindo a, por exemplo, distúrbios e doenças inflamatórios e imunorreguladores) ou expressão diminuída de CCR2. função imprópria de atividade de CCR2al pode também surgir como o resultado de secreção de MCP-1 por células que normalmente não secretam MCP-1, expressão aumentada de MCP-1 (induzindo a, por exemplo, distúrbios e doenças inflamatórios e imunorreguladores) ou expressão diminuída de MCP-1. Uma condição ou doença mediada por CCR2 pode ser completamente ou parcialmente mediada por função imprópria de atividade de CCR2al. Entretanto, uma condição ou doença mediada por CCR2 é aquela na qual a modulação de CCR2 resulta em algum efeito sobre a condição ou doença subjacente (por exemplo, um antagonista de CCR2 resulta em alguma melhora no bem-estar do paciente em pelo menos alguns pacientes). Além disso, MCP-2, 3 e 4 são também ligantes de CCR2.
Em uma modalidade, a presente invenção fornece um método de tratar uma condição ou doença mediada por CCR2 envolvendo a administração a um indivíduo de uma quantidade segura e eficaz do composto ou composição da invenção.
Em uma modalidade, a presente invenção fornece um método de tratar uma condição ou doença mediada por CCR2 envolvendo administrar a um indivíduo uma quantidade segura e eficaz do composto ou composição da invenção, onde a condição ou doença mediada por CCR2 é aterosclerose.
Em uma modalidade, a presente invenção fornece um método de tratar uma condição ou doença mediada por CCR2 envolvendo administrar a um indivíduo uma quantidade segura e eficaz do composto ou composição da invenção, onde a condição ou doença mediada por CCR2 é restenose.
Em uma modalidade, a presente invenção fornece um método de tratar uma condição ou doença mediada por CCR2 envolvendo administrar a um indivíduo uma quantidade segura e eficaz do composto ou composição da invenção, onde a condição ou doença mediada por CCR2 é esclerose múltipla.
Em uma modalidade, a presente invenção fornece um método de tratar uma condição ou doença mediada por CCR2 envolvendo administrar a um indivíduo uma quantidade segura e eficaz do composto ou composição da invenção, onde a condição ou doença mediada por CCR2 é selecionada do grupo que consiste em doença do intestino inflamatória, fibrose renal, artrite reumatoide, obesidade e diabetes não dependente de insulina.
Em uma modalidade, a presente invenção fornece um método de tratar uma condição ou doença mediada por CCR2 envolvendo administrar a um indivíduo uma quantidade segura e eficaz do composto ou composição da invenção, onde a condição ou doença mediada por CCR2 é diabetes tipo 2.
Em uma modalidade, a presente invenção fornece um método de tratar uma condição ou doença mediada por CCR2 envolvendo adminis trar a um indivíduo uma quantidade segura e eficaz do composto ou composição da invenção, onde a condição ou doença mediada por CCR2 é selecionada do grupo que consiste em doença pulmonar obstrutiva crônica, fibrose pulmonar idiopática e síndrome de pneumonia idiopática.
Em uma modalidade, a presente invenção fornece um método de tratar uma condição ou doença mediada por CCR2 envolvendo administrar a um indivíduo uma quantidade segura e eficaz do composto ou composição da invenção, onde a administração é oral, parenteral, retal, transdérmica, sublingual, nasal ou tópica.
Em uma modalidade, a presente invenção fornece um método de tratar uma condição ou doença mediada por CCR2 envolvendo administrar a um indivíduo uma quantidade segura e eficaz do composto ou composição da invenção, onde o composto é administrado em combinação com um agente anti-inflamatório ou analgésico.
Em uma modalidade, a presente invenção fornece um método de tratar uma condição ou doença mediada por CCR2 envolvendo administrar a um indivíduo uma quantidade segura e eficaz do composto ou composição da invenção, onde um agente anti-inflamatório ou analgésico é também administrado.
Em uma modalidade, a presente invenção fornece um método de modular a função de CCR2 em uma célula, onde a função de CCR2 na célula é modulada contatando-se a célula com uma quantidade moduladora de CCR2 do composto da presente invenção.
Em uma modalidade, a presente invenção fornece um método de tratar uma condição ou doença mediada por CCR2 envolvendo administrar a um indivíduo uma quantidade segura e eficaz do composto ou composição da invenção, onde a doença é selecionada do grupo que consiste em fibrose pulmonar, rejeição a transplante, doença do enxerto-versushospedeiro e câncer.
Todavia em outras modalidades, os presentes métodos são direcionados ao tratamento de psoríase onde um composto ou composição da invenção é usado sozinho ou em combinação com um segundo agente tera49 pêutico tal como um corticosteroidé, um lubrificante, um agente ceratolítico, um derivado de vitamina D3, PUVA e antralina.
Em outras modalidades, os presentes métodos são direcionados ao tratamento de dermatite atópica usando um composto ou composição da invenção sozinho ou em combinação com um segundo agente terapêutico tal como um lubrificante e um corticosteroide.
Em outras modalidades, os presentes métodos são direcionados ao tratamento de asma usando um composto ou composição da invenção sozinho ou em combinação com um segundo agente terapêutico tal como um agonista β2 e um corticosteroide.
Preparação de modulatores
Os seguintes exemplos são oferecidos para ilustrar, porém não limitar, a invenção reivindicada.
Adicionalmente, aqueles versados na técnica reconhecerão que as moléculas reivindicadas nesta patente podem ser sintetizadas usando uma variedade de transformações químicas orgânicas padrão.
Certos tipos de reação gerais empregados amplamente para sintetizar os com postos-a Ivos nesta invenção são sumariados nos exemplos. Especificamente, procedimentos gerais para formação de sulfonamida, formação de N-óxido de piridina e síntese de 2-aminofenil-arilmetanona por meio de métodos do tipo Friedel-Crafts são mencionados, porém numerosas outras químicas padrão são descritas dentro e foram empregadas rotineiramente.
Ao mesmo tempo que não pretendendo ser exaustivo, transformaçõs orgânicas sintéticas representativas que podem ser usadas para preparar os compostos da invenção são incluídas abaixo.
Estas transformações representativas incluem manipulações de grupo funcional padrão; reduções tais como nitro para amino; oxidações de grupos funcionais incluindo álcoois e piridinas; substituições arila por meio de IPSO ou outros mecanismos para a introdução de uma variedade de grupos incluindo nitrila, metila e halogênio; introduções e remoções de grupo de proteção; Formação de Grignard e reação com um eletrófilo; acoplamentos cruzado mediado por metal incluindo, porém não limitado da Buchwald, reações Suzuki e Sonigashira; halogenações e outras reações de substituição aromática eletrofílica; formações de sal de diazônio e reações destas espécies; eterificações; condensações ciclativas, desidratações, oxidações e reduções que induzem a grupos heteroarila; As metalações e transmetalações de arila e e reação das espécies de metal de arila resultantes com um eletrófilo tal como um cloreto de ácido ou amida Weinreb; amidações; esterificações; reações de substituição nucleofílicas; alquilações; acilações; formação de sulfonamida; clorossulfonilações; éster e hidrólises relacionadas, e similares.
Certas moléculas reivindicadas nesta patente podem existir em diferentes formas enantioméricas e diastereoméricas e todas as tais variantes destes compostos incluem-se no escopo da invenção.
Nas descrições da síntese que segue, alguns precursores foram obtidos de fontes comerciais. Estas fontes comerciais incluem Aldrich Chemical Co., Acros Organics, Ryan Scientific Incorporated, Oakwood Products Incorporated, Lancaster Chemicals, Sigma Chemical Co., Lancaster Chemical Co., TCI-America, Alfa Aesar, Davos Chemicals, e GFS Chemicals.
Os compostos da invenção, incluindo aqueles listados na tabela de atividades, podem ser preparados pelos métodos descritos na seguinte seção experimental, e pelo uso de transformações de química orgânica que são bem conhecidas por aqueles versados na técnia.
EXEMPLOS
Os seguintes compostos incluem-se no escopo da invenção: Tabela 1. Compostos de acordo com a fórmula
R1
Compostos 1-10 têm uma IC50 menor do que 1000 nM no ensaio de quimiotaxia de CCR2.
Compostos 11 e 12 têm uma IC50 menor do que 1000 nM no en5 saio de quimiotaxia de CCR2.
Os compostos acima e outros dentro do escopo desta invenção foram preparados e descobertos serem antagonistas ativos de CCR2 usando os seguintes procedimentos.
Reagentes e solventes usados abaixo podem ser obtidos de fon tes comerciais tais como Aldrich Chemical Co. (Milwaukee, Wisconsin, USA). 1H-RMN foi registrada em um espectrômetro de RMN Varian Mercury 400 MHz. Picos significantes são tabulados na ordem: multiplicidade (br, amplo; s, singleto; d, dubleto; t, tripleto; q, quarteto; m, multipleto) e número de prótons. Os resultados da espectrometria de massa são reportados como a proporção de massa sobre carga, seguida pela abundância relativa de cada íon (em parênteses). Em comprimidos, um único valor m/e é reportado para o íon de M+H (ou, como observado, M-H) contendo os isótopos atômicos mais comuns. Os padrões de isótopo correspondem à fórmula esperada em todos os casos. Análise de espectrometria de massa por ionização de eletrovaporização (ESI) foi conduzida sobre um espectrômetro de massa de eletroaspersão Hewlett-Packard MSD usando em um P1100 HPLC para liberação de amostra. Normalmente o analisado foi dissolvido em metanol a 0,1 mg/mL e 1 microlitro foi infundido com o solvente de liberação no espectrômetro de massa, que escaneou de 100 a 1500 daltons. Todos os compostos podem ser analisados no modo ESI positivo, usando acetonitrila / água com ácido fórmico a 1% como o solvente de liberação. Os compostos fornecidos abaixo podem também ser analisados no modo ESI negativo, usando 2 mM de NH4OAC em acetonitrilo / água como sistema de liberação.
Preparação de Intermediários
Intermediário 1: Ácido 4-cloro-2-(4-cloro-3-trifluorometil-benze nossulfonilamino)-benzoico
Cl
A uma solução de Na2CO3 (11,7 g
110,7 mmols) em água (50 mL) e 1,4-dioxano (50 mL) a 60°C foi adicionado ácido 2-amino-4-clorobenzoico (5,0 g, 29,14 mmols) seguido por cloreto de 4-cloro-3-trifluorometilbenzenossulfonila(20,15 g, 72,48 mmols) em 3 porções e aquecida a mistura reacional resultante a 80°C durante 4 horas. 2N de HCI foi adcionado até a mistura reacional tornar-se acídica (pH = ~2) e o sólido branco obtido foi filtrado, lavado com água, secado sob vácuo elevado para obter o composto do título (7,8 g) em 65% de produção. MS (ES) M+Na esperada 436,0, encontrado 435,8.
Intermediário 2: 4-Cloro-2-(4-cloro-3-trifluorometil-benzenossulfonilamino)-N-metoxi-N-metil-benzamida
A uma solução de ácido 4-cloro-2-(4-cloro-3-trifluorometilbenzenossulfonilamino)-benzoico (5,0 g, 12,1 mmols) em THF (20 mL) foi adicionado Ν,Ν’-carbonildiimidazol (CDI, 2,45 g, 15,13 mmols) em porções (cuidado: CO21)· a mistura reacional resultante foi em seguida aquecida ao refluxo. Após 4 horas, a mistura reacional foi resfriada para a temperatura ambiente e carregada com cloridrato de N,O-dimetilhidroxilamina (1,3 g, 13,31 mmols) e aquecida ao refluxo durante 1 hora. Água (100 mL) foi adicionada seguida por EtOAc (100 mL) com agitação. A camada de EtOAc foi separada e a camada aquosa foi também extraída com EtOAc (2 x 50 mL). As camadas de EtOAc combinadas foram lavadas com HCI a 2N aquoso (50 mL), solução de NaHCO3 saturada (50 mL), salmoura (50 mL), secadas (Na2SO4) e evaporadas O produto cru obtido foi purificado por cromatografia de fase normal automatizada (50% EtOAc em hexanos) para produzir o composto do título (4,0 g) em 73% de produção. MS (ES) M+H esperada 457,0, encontrado 456,9.
Intermediário 3: 2-Bromo-5-metil-3-nitropiridina:
POBr3 (222,8 g, 0,78 mol) foi adicionado em porções a 2-hidroxi-
5-metil-3-nitropiridina (100 g, 0,65 mol) em DMF (500 mL) com agitação a 0 a 10°C em seguida a mistura reacional foi agitada a 80 °C sob nitrogênio durante 12 horas. A mistura reacional foi resfriada e vertida em gelo moído (1 Kg), o sólido obido foi filtrado, lavado cuidadosamente com água gelada (2 x 500 mL) secado em um dessecador sob vácuo elevado durante um dia para obter 2-bromo-5-metil-3-nitropiridina como sólido amarelo (121 g) em 86% de produção. (M+H) Esperado: 217; encontrado 216,9.
Intermediário 4: 2-Ciano-5-metil-3-nitropiridina:
Um frasco de base redonda foi carregado com 2-bromo-5-metil3-nitropiridina (60,53 g, 278,9 mmols) e CuCN (27,52 g, 307,3 mmols) o frasco foi evacuado, e novamente carregado com nitrogênio. DMF (150 mL) foi adicionado por meio de cânula. A solução foi aquecida para 70°C durante
1,5 hora. Após resfriar para a temperatura ambiente, a mistura reacional foi vertida em EtOAc (500 mL) e água (250 mL). Ambas as fases foram filtradas através um leito de celita de 1 cm. As camadas foram separadas, e a fase orgânica lavada com água (2 * 100 mL) em seguida com uma solução de 1:1 NH4CI aquoso saturado / NH4OH (2 χ 100 mL). As camadas aquosas combinadas foram extraídas com EtOAc (2 χ 200 mL). As camadas orgânicas combinadas foram secadas sobre MgSO4 e concentradas em vácuo para produzir o composto do título (36,10 g, 79% de produção).
Intermediário 5: 3-Amino-2-ciano-5-metilpiridina:
no2 NH, I * nh2 o
ArCN Fe íAtcn + íi^T NH
AcOH, 70 °C, 4h Λί
90% 10%
Ao ácido acético (300 mL) em um frasco de base redonda de 2 litros com 3 gargalos equipado com agitador mecânico e um termômetro foi adicionado pó de Fe (99,6 g, 1,78 mol) com agitação a 60°C. 2-Ciano-5metil-3-nitropiridina (97 g, 0,59 mol) foi dissolvido em ácido acético (400 mL) com suave aquecimento e adicionado à mistura reacional acima gota a gota com eficiente agitação de modo que a temperatura de reação se mantivesse abaixo de 80°C durante 3,5 horas. A mistura reacional foi também agitada durante mais 30 minutos, resfriasda, diluída com EtOAc (750 mL), filtrada através de celita e lavada com EtOAc (1x 500 mL, 3 x 250 mL). As camadas de EtOAc combinadas foram evaporadas até a secura para obter sólido marrom-escuro que foi neutralizado com solução de NaHCO3 saturada (850 mL), após adição de água (250 mL) para tornar-se homogênea, esta camada aquosa foi extraída com EtOAc (1 x 750 mL, 2 x 500 mL). As camadas de EtOAc combinadas foram filtradas através de pequena almofada de sílica-gel (areia-SiO2-areia em funil sinterizado), secadas (Na2SO4) e evaporadas para obter 3-amino-2-ciano-5-metilpiridina (60 g) como sólido amarelo em 76% de produção incluindo -10% da correspondente amida.
Ao 3-amino-2-ciano-5-metilpiridina cru (contendo -10% carboxamida) (49 g) foi adicionado EtOAc (441 mL, 9: 1 proporção de volume para anilina), a suspensão resultante foi aquecida até o refluxo para formar uma solução clara. Após resfriar para a temperatura ambiente, o cristal resultante foi coletado por filtração, lavado com pequena quantidade de EtOAc frio (44 mL (1/10 do volume inicial) X 2), e secado em vácuo para produzir o 3amino-2-ciano-5-metilpiridina puro (35 g) como agulhas amarelas pálidas O líquido mãe foi concentrado sob pressão reduzida, ao sólido amarelo resultante foi adicionado EtOAc (136 mL) e repetido o processo acima para produzir mais 4 g de 3-amino-2-ciano-5-metilpiridina pura; produção de recuperação total 79,5%. 1H RMN (400 MHz, CDCI3) δ 7,89 (1H, s), 6,90 (1H, s), 4,39 (2H, br), 2,30 (3H, s). MS (ES) M+H esperada 134,0, encontrado 134,0.
Intermediário 6: Ácido 3-(4-cloro-3-trifluorometil-benzenossulfo-
A 3-amino-5-metilpicolinonitrila (9,6g, 72 mmols) em piridina (63 mL) foi adicionado cloreto de 4-cloro-3-trifluorometil-benzenossulfonila (19,6 g, mmols) em uma porção e a mistura reacional resultante foi agitada a 60°C durante a noite. Piridina foi removida em vácuo, adicionado HCI a 2N (100 mL), extraída com EtOAc (3 x 300 mL; Nota: devido à presença de amida, a solubilidade em EtOAc é baixa). As camadas de EtOAc combinadas foram secadas (Na2SC>4), evaporadas para obter 26,3 g de produto cru que continha uma pequena quantidade de bis-sulfonamida que foi submetida à hidrólise em THF (200 mL) com NaOH a 2N (100 mL) em temperatura ambiente durante 2 horas. HCI a 2N (100 mL) foi adicionado, extraído com EtOAc (1 x 700 mL, 1x 250 mL), as camadas de EtOAc combinadas foram lavadas com solução de NaHCO3 saturada (2 x 250 mL), secadas (Na2SO4) e evaporadas para obter 22 g de monosulfonamida. A este dioxano (350 mL), água (450 mL) (Nota: requer alta diluição para rápida reação) foi adicionada, seguida por NaOH (30 g, 0,75 mol) e agitada sob refluxo durante 24 horas. Dioxano foi removido em vácuo e HCI conc. (75 mL) foi adicionado lentamente com resfriamento O sólido resultante foi filtrado, lavado com água e secadas em vácuo para produzir o composto do título (22 g, 88% durante 2 etapas) como sólido amarelo-claro. (M+H) Esperado: 395,0; encontrado 394,9.
Intermediário 7: Ácido 5-Cloro-3-(4-cloro-3-(trifluorometil)fenilsulfonamido)picolínico.
Etapa 1: Um frasco de 250 mL seco foi carregadoa com 2bromo-5-cloro-3-nitropiridina (24 g, 101 mmols), CuCN (19 g, 212 mmols) e DMF (100 mL). A mistura resultante foi agitada a 110°C durante 2 horas. A mistura foi concentrada sob pressão reduzida. Água (100 mL) foi adicionada e extraída com EtOAc (3 X 250 mL). A camada orgânica combinada foi lavada com salmoura, secada (MgSO4) e filtrada O solvente foi evaporado em vácuo para produzir um sólido amarelo claro (15 g) que foi usado diretamente para a etapa seguinte.
Etapa 2: Um frasco de base redonda de 250 mL com uma barra de agitação magnética foi carregado com pó de ferro (15,6 g, 0,3 mol) em ácido acético (80 mL) e aquecido para 80°C (banho de óleo) sob N2. A esta mistura foi adicionado lentamente a nitrocianopiridina acima (10 g, 55 mmols) de Etapa 1 em ácido acético (80 mL) por meio de funil de gotejamento durante 15 minutos. A mistura foi agitada a 80°C durante mais 30 minutos após a adição. Após resfriamento, a mistura reacional foi diluída com EtOAc, filtrada através de celita e o solvente evaporado em vácuo O resíduo foi dissolvido em EtOAc e lavado com NaOH a 3N, salmoura, secado sobre MgSO4, e concentrado em vácuo para produzir uma mistura de 4:1 (7,7 g) de 3amino-2-ciano-5-cloropiridina (major) e a 2-amida. A mistura foi usada diretamente para a etapa seguinte: MS (ES) (M+H)+ esperada 154,0, encontrado 154,0.
Etapa 3: A frasco de base redonda de 100 mL foi carregado com a mistura de 3-amino-2-ciano-5-cloropiridina acima (7,7 g, 50 mmols), cloreto de 4-cloro-3-trifluorometilbenzenossulfonila (28 g, 100 mmols), e piridina (50 mL). A solução resultante foi aquecida para 70°C e agitada durante 5 horas. A piridina foi removida em vácuo e 80% EtOH aquoso (260 mL) foi adicionado, seguido por NaOH (30 g, 0,75 mol). A mistura foi agitada sob reflux durante 12 horas O solvente foi subsequentemente removido em vácuo e gelo (100 g) foi adicionado O pH ajustado para 2-3 com HCI conc. A solução aquosa resultante foi extraída com EtOAc, lavada com salmoura, secada sobre MgSO4, e concentrada em vácuo O sólido amarelo claro resultante foi recristalizado de EtOAc/hexano (1:1) para produzir o ácido desejado como agulhas brancas (10 g, 44% overall Produção): 1H RMN (400 MHz, CDCI3) δ 10,80 (s, 1H), 8,23 (m, 3H), 8,00 (d, 1H), 7,63 (d, 1H); MS (ES) (M+H)+ esperada 415,0, encontrado 415,0.
Intermediário 8: metóxi-metil-amida de ácido 5-cloro-3-(4-cloro-3trifluorometil-benzenossulfonilamino)-piridina-2-carboxílico
Ácido 5-cloro-3-(4-cloro-3-trifluorometil-benzenossulfonilamino)piridina-2-carboxílico (15,8g, 38 mrnols), cloridrato de Λ/,Ο-dimetil hidroxilamina (11,1 g, 114 mmols), DIEA (41 mL, 228 mrnols), e BOP (69 g, 156 mrnols), foram suspensos em 80 mL de DMF e agitados em temperatura ambiente durante a noite. A mistura reacional foi diluída com 1(M) de HCI (100 mL), extraída com EtOAc, e as porções orgânicas foram lavadas com 1(M) HCI aquoso, NaHCO3 e salmoura. Os extratos orgânicos combinados foram secados (Na2SO4), filtrados e concentrados sob pressão reduzida O resíduo resultante foi purificado por cromatografia de coluna rápida para produzir metóxi-metil-amida de ácido 5-cloro-3-(4-cloro-3-trifluorometil-benzenossulfonilamino)-piridina-2-carboxílico: MS m/z: (M+H) 458,0.
Intermediário 9: Metóxi-metil-amida de ácido 5-cloro-3-(4-metil-3trifluorometil-benzenossulfonilamino)-piridina-2-carboxílico
Intermediário 10: Metóxi-metil-amida de ácido 5-cloro-3-(4-metil3-trifluorometil-benzenossulfonilamino)-piridina-2-carboxílico foi preparado de 5-cloro-3-(4-metil-3-trifluorometil-benzenossulfonilamino)-piridina-2-carboxílico ácido seguindo o procedimento descrito no exemplo precedente.
Intermediário 11: Metóxi-metil-amida de ácido 5-cloro-3-[metoximetil-(4-metil-3-trifluorometil-benzenossulfonil)-amino]-piridina-2-carboxílico
A uma mistura de hidreto de sódio (164 mg, 4,10 mmols) em 5 mL de THF foi adicionado uma mistura de metóxi-metil-amida de ácido 5 cloro-3-(4-metil-3-trifluorometil-benzenossulfonilamino)-piridina-2-carboxílico (1,50 g, 3,42 mmols) e clorometil metil éter (0,388 mL, 5,13 mmols) em 5 mL de THF. A mistura foi agitada em temperatura ambiente durante a noite. Após a remoção dos solventes o resíduo foi purificado por coluna rápida (20% acetato de etila em hexano) para produzir 1,50 gramas do composto do título como um sólido branco: (M++H) esperada 482,0, encontrado 482,0.
Intermediário 12: Metóxi-metil-amida de ácido 5-cloro-3-[metoximetil-(4-cloro-3-trifluorometil-benzenossulfonil)-amino]-piridina-2-carboxílico
A uma suspensão de hidreto de sódio (314 mg, 7,86 mmols) em mL de THF foi adicionado uma mistura de metóxi-metil-amida de ácido 5 cloro-3-(4-cloro-3-trifluorometil-benzenossulfonilamino)-piridina-2-carboxílico (3,0 g, 6,55 mmols) e clorometil metil éter (0,741 mL, 9,825 mmols) em 8 mL de THF. A mistura foi agitada em temperatura ambiente durante a noite. Após a remoção dos solventes o resíduo foi purificado por coluna rápida (20% acetato de etila em hexano) para produzir 2,70 gramas do composto do título como um sólido branco. (M+H)+ esperada 502,0, encontrado 502,0.
Intermediário 13: metil éster de ácido 3-amino-piridina-2-carboxílico
400 mg (2,9 mmols) de ácido 3-amino-piridina-2-carboxílico foi dissolvido em 3 mL de metanol. A esta solução 1,6 mL de 2 M de solução de (trimetilsilil)diazometano em dietil éter foi adicionado gota a gota a 0°C, seguido por agitação da mistura durante 2 horas em temperatura ambiente a solução foi diluída com acetato de etila e lavadao com solução de bicarbonato de sódio aquosa. Cromatografia rápida produziu o produto de éster. LCMSD, m/z para C7H8N2O2 [M+H]+ = 153,0; Tempo de retenção por HPLC: 0,2 minutos.
Intermediário 14: Ácido 3-(4-cloro-3-trifluorometil-benzenossulfonilamino)-piridina-2-carboxílico.
OH
Preparado de 0,60 g (2,17 mmols) de cloreto de 4-cloro-3trifluorometil-benzenossulfonila e 0,30 g (1,97 mmol) de metil éster de ácido 3-amino-piridina-2-carboxílico em 3 mL de piridina usando o procedimento usado para preparar 4-cloro-N-(2-ciano-5-metilpiridin-3-il)-3-(trifluorometil) benzenossulfonamida no preparação de Intermediário 6 O solvente foi transferido para THF, seguido pela adição de LiOH aquoso a 1M e a mistura agitada durante 1 hora O pH da mistura foi ajustado para neutro e o produto foi extraído com acetato de etila. LC-MSD, m/z para C13H8CIF3N2O4S [M+H]+ = 380,9, 383,0; Tempo de retenção por HPLC: 1,8 minutos.
Intermediário 15: Metóxi-metil-amida de ácido 3-[(4-cloro-3-trifluorometil-benzenossulfonil)-metoximetil-amino]-piridina-2-carboxílico
Cl F
Preparado de 1,05 g (2,48 mmols) de metóxi-metil-amida de ácido 3-(4-cloro-3-trifluorometil-benzenossulfonilamino)-piridina-2-carboxílico, 1,71 g de carbonato de potássio e 566 μΙ_ de cloreto de metoximetila em 7 mL de THF usando procedimento usado na preparação do intermediário 12. Produção: 420 mg de um sólido branco. LC-MSD, m/z para C17H17CIF3N3O5S [M+Na]+ = 490,0, 491,9; Tempo de retenção por HPLC: 2,5 minutos.
Intermediário 16: 4-Cloro-N-(2-(5-metóxi-1H-pirrolo[2,3-b] piridina-4-carbonil)-5-(metoximetil)piridin-3-il)-3-(trifluorometil) benzenossulfonamida
Etapa 1: A uma solução do bromopiridina (132 mg, 0,28 mmol) em tetracloreto de carbono (4 mL) foi adicionado A/-bromosuccinimida (60 mg, 1,2 equiv.), seguido por 2,2’-azobisisobutironitrila (AIBN, 4,6 mg, 0,1 equiv.). A mistura reacional foi aquecida a 60°C durante a noite. Após resfriar até a temperatura ambiente, o excesso de tetracloreto de carbono foi removido e o resíduo foi purificado por cromatografia rápida em sílica-gel (33% EtOAc/hexanos) O produto desejado foi obtido como um sólido branco (107 mg, 70%). MS: (M + H)/z = 551.
Etapa 2: O produto obtido de Etapa 1 acima (51 mg, 0,093 mmol) foi dissolvido em 3 mL de metanol. À solução resultante foi adicionado metóxido de sódio (10 mg, 2,0 equiv.). A mistura reacional foi aquecida a 50°C durante a noite. Após resfriar até em temperatura ambiente, a reação foi extinta com solução de cloreto de amônio saturada, e a mistura foi extraída com acetato de etila. Os extratos foram lavados com salmoura, secados sobre MgSO4 e concentrados em vácuo O material cru foi purificado por cromatografia rápida em sílica-gel (33% EtOAc/hexanos) O produto desejado foi obtido como um sólido branco (42 mg, 90%). MS: (M + H)/z = 503.
Intermediário 17: Metóxi-metil-amida de ácido 3-(4-cloro-3-trifluorometil-benzenossulfonilamino)-5-metil-piridina-2-carboxílico.
10,49 g (26,6 mmols) de ácido 3-(4-cloro-3-trifluorometilbenzenossulfonilamino)-5-metil-piridina-2-carboxílico foram reagidos com 5,40 g (33,2 mmols) de Λ/,Λ/’-carbonildiimidazol em 40 mL de THF em refluxo durante 3 horas. A temperatura foi reduzida para 50°C, 2,86 g (29,3 mmols) de cloridrato de 0,/V-dimetil-hidroxilamina foi adicionado e a reação foi agitada durante a noite a 50°C. A metade do solvene foi removida sob pressão reduzida e a mistura reacional foi diluída com 200 mL de água fria. Os sólidos foram filtrados, lavados com 100 mL de água e secados para fornecer 9,8 g (84%) do produto como um pó castanho.
Intermediário 18: Metóxi-metil-amida de ácido 3-[(4-cloro-3-trifluorometil-benzenossulfonil)-metoximetil-amino]-5-metil-piridina-2-carboxílico.
Preparado de 223 mg (0,51 mmol) de metóxi-metil-amida de áci63 do 3-(4-cloro-3-trifluorometil-benzenossulfonilamino)-5-metil-piridina-2-carboxílico, 352 mg de carbonato de potássio e 116 pL de cloreto de metoximetila em 1 mL de THF usando o procedimento usado para preparar o intermediário 12. Produção: 200 mg de um sólido branco. LC-MSD, m/z para C18H19CIF3N3O5S [M+HJ+ = 482,0, 484,0; Tempo de retenção por HPLC: 2,5 minutos.
O produto foi preparado seguindo o procedimento de Bioorg.
Med. Chem. Lett. 2004, 3165-3168.
Intermediário 20: 6-lodo-9H-purina
Cl
A' N H
Uma mistura de 6-cloro-9H-purina (684 mg, 4,46 mmols) e 6 mL de 57% ácido hidriódico foram agitados a 0°C durante 1,5 horas. A reação produziu 840 mg do produto como um pó branco O sólido foi filtrado, suspenso em 5 mL de água e trazido para pH=8 com solução de amônia aquosa. A suspensão foi resfriada até 0°C e o sólido foi filtrado, lavado com água fria e secado para fornecer o produto.
Intermediário 21: 4-lodo-7H-pirrolo[2,3-d]pirimidina
Cl I
Uma mistura de 4-cloro-7H-pirrolo[2,3-d]pirimidina (673 mg, 4,41 mmols) e 7 mL de 57% ácido hidriódico foi agitada em temperatura ambiente durante 16 horas O sólido foi filtrado, suspenso em 5 mL de água e trazido para pH=8 com solução de amônia aquosa. A suspensão foi resfriada até
0°C e o sólido foi filtrado, lavado com água fria e secado para fornecer o produto, para produzir 970 mg do produto como um pó branco O produto contém cerca de 10% do material de partida.
Intermediário 22: 7-lodo-3H-imidazo[4,5-b]piridina
I
Uma mistura de 7-cloro-3H-imidazo[4,5-b]piridina (1,47 g, 9,64 mmols) e 15 mL de 57% ácido hidriódico foram reagidos a 80°C durante 4 horas. Após o sólido ser filtrado ele foi novamente submetido à reação com 10 mL de 57% ácido hidriódico fresco. A reação produziu 1,3 g do produto como um pó preto, 90% puro.
Procedimento geral para /V-proteção do iodoeterociclos
1,65 mmol do iodoeterociclo foi dissolvido em 2 mL de DMF e resfriados até 0°C. A esta solução 1,81 mmol de 60% hidreto de sódio foi adicionado seguido por adição gota a gota de 1,81 mmol de cloreto de trimetilsililetoximetila durante o período de 5 minutos. A solução foi agitada a 0°C durante 0,5 hora, seguido por 0,5 hora em temperatura ambiente a esta solução 10 mL de água foram adicionados e a mistura foi extraída duas vezes com 10 mL de éter dietílico. As camadas orgânicas foram lavadas com 10 mL de água, em seguida secadas sobre sulfato de magnésio anidroso, evaporadas sob pressão reduzida e purificadas on sílica usando acetato de etila em hexanos.
Intermediário 23: 6-lodo-9-(2-trimetilsilanil-etoximetil)-9H-purina
N '>
405 mg (1,65 mmol) de 6-iodo-9H-purina foram dissolvidos em 2 mL DMF. 72 mg (1,81 mmol) de 60% hidreto de sódio foram adicionados seguido por 320 μί (1,81 mmol) de cloreto de trimetilsililetoximetila. Produção: 343 mg de um produto oleoso.
Intermediário 24: 4-lodo-7-(2-trimetilsilanil-etoximetil)-7H-pirrolo [2,3-d]pirimidina
610 mg (2,49 mmols) de 4-iodo-7H-pirrolo[2,3-d]pirimidina foram dissolvidos em 2,5 mL de DMF. 110 mg (2,74 mmols) de 60% hidreto de só5 dio foram adicionados seguido por 480 μί (2,74 mmols) de cloreto de trimetilsililetoximetila. Produção: 750 mg de um produto oleoso, 90% puro.
Intermediário 25: 4-lodo-7-metil-7H-pirrolo[2,3-d]pirimidina
206 mg (0,84 mmol) de 4-iodo-7H-pirrolo[2,3-d]pirimidina foram dissolvidos em 1 mL de DMF. 37 mg (0,92 mmol) de 60% hidreto de sódio 10 foram adicionados, seguido por 58 μί (0,92 mmol) de iodometano. A reação foi saciada adicionando-se 10 mL de água, o sólido filtrado, lavado com 10 mL de água, em seguida 10 mL de hexanos e secados. Produção: 142 mg do pó castanho, 90% puro.
Intermediário 26: 7-lodo-3-(2-trimetilsilanil-etoximetil)-3H-imidazo [4,5-b]piridina
850 mg (3,47 mmols) de 7-iodo-3H-imidazo[4,5-b]piridina foram dissolvidos em 3,5 mL de DMF. 153 mg (3,82 mmols) de 60% hidreto de sódio foram adicionados seguido por 670 μί (3,82 mmols) de cloreto de trimetilsililetoximetila. Produção: 424 mg de um produto oleoso, 90% puro.
Procedimento Geral A: Preparação de cetonas de amidas Weinreb
Etapa 1: Adição do reagente Grignard mmol do iodoeterociclo foi dissolvido sob atmosfera de nitrogênio em 4 mL de THF e resfriados até -30°C. 0,50 mL de 2 M de solução de cloreto de isopropilmagnésio em THF foi adicionado gota a gota. A mistura foi aquecida para -10°C e agitada durante 10 minutos, que resultou em uma completa permuta de iodo-magnésio. A solução foi em seguida resfriada até -20°C e 1,0 mmol de amida Weinreb sólida foi adicionado. Após 5 minutos a mistura foi deixada aquecer para a temperatura ambiente e foi agitada em temperatura ambiente durante 1 hora. Solução de cloreto de amônio aquosa foi adicionada e a mistura foi extraída com DCM. A camada orgânica foi evaporada sob pressão reduzida. Cromatografia rápida em sílica usando acetato de etila em hexanos produziu os produtos.
Etapa 2: Desproteção mmol do intermediário de cetona protegido foi dissolvido em uma mistura de 20 mL de metanol e 20 mL de ácido clorídrico a 6N. A solu ção foi aquecida em um tubo selado a 95°C durante 8 horas, em seguida resfriada e evaporada O resíduo foi dissolvido em amônia metanólica e evaporado em sílica-gel sob pressão reduzida. Cromatografia rápida em sílica usando acetato de etila em hexanos produziu os produtos como um sólido amarelo. Em alguns casos etapa de purificação por HPLC de fase reversa adicional foi necessária Para obter produtos puros.
Procedimento Geral B: Procedimentos gerais para a preparação de cetonas de nitrilas
mmol de 4-iodo-7H-pirrolo[2,3-d]pirimidina foi dissolvido sob atmosfera de nitrogênio em 2,8 mL de THF e resfriados até -10°C. 0,50 mL de solução de cloreto de fenil magnésio a 2M em THF foi adicionado gota a gota seguido por 0,50 mL de solução de cloreto de isopropilmagnésio a 2M em THF. A mistura foi aquecida para a temperatura ambiente e agitada durante 1 hora, que resultou em uma completa permuta de iodo-magnésio. Uma solução separada de 0,77 mmol da correspondente nitrila em 1 mL de THF foi preparada e 0,96 mmol de 60% hidreto de sódio foi adicionado a ela. As soluções foram combinadas e a mistura foi agitada a 45°C durante 8 horas. A mistura reacional foi resfriada até a temperatura ambiente, 0,52 mL de ácido clorídrico concentrado foi adicionado e a mistura foi agitada a 50°C durante 0,5 hora. Os sólidos foram filtrados e lavados com três porções de 10 mL de THF, seguido por 10 mL de éter dietílico e quatro porções de ácido clorídrico a 1N. Os sólidos foram apreendidos na mistura de bicarbonato de sódio aquoso e acetato de etila. A camada orgânica foi passada através de uma almofada de sílica-gel e evaporads sob pressão reduzida para fornecer os produtos.
Exemplo 1: 4-Cloro-N-[5-cloro-2-(7H-pirrolo[2,3-d]pirimidina-4-carbonil)-fenil]3-trifluorometil-benzenossulfonamida
/PrMgCI (3,84 mL, 7,56 mmols; solução em THF a 1,97 M) foi adicionado a iodo-pirrolopirimidina (0,882 g, 3,6 mmols) em THF (5 mL) a 78°C. Após 15 minutos, ele foi aquecido para a temperatura ambiente e adicionado brometo de 2,6-dimetilfenilmagnésio (2,4 mL, 2,4 mmols; solução a 1,0 M em éter dietílico). A esta mistura reacional em temperatura ambiente foi adicionado uma solução de THF de sal de sódio de 4-cloro-2-(4-cloro-3trifluorometil-benzenossulfonilamino)-N-metoxi-N-metil-benzamida [preparada separadamente adicionando-se 60% de NaH (0,144 g, 3,6 mmols) em
THF (5 mL)] e agitada durante a noite. Solução de NH4CI saturada (5 mL) foi adicionada e extraída com EtOAc (2 x 50 mL). A camada de EtOAc foi lavada com salmoura (25 mL), secada (Na2SO4) e evaporada O produto cru foi purificado por purificação de coluna (sílica-gel, 60% EtOAc em hexanos) se guido por recristalização de CH3CN para obter o composto do título (1 g) como um sólido amarelo cristalino em 67% de produção. MS (ES) M+H esperada 515,0, encontrado 514,9. 1H RMN (CDCI3, 400 MHz): δ 10. 75 (s, 1H), 9,92 (brs., 1H), 8,92 (d, 1H), 8,05 (s, 1H), 7,92 (dd, 1H), 7,81 (m, 2H), 7,58 (m, 1H), 7,45 (dd, 1H), 7,3 (d, 1H), 6,9 (m, 1H).
Exemplo 2: 4-Cloro-N-[2-(7H-pirrolo[2,3-d]pirimidina-4-carbonil)piridin-3-il]-3-trifluorometil-benzenossulfonamida
Preparado de 248 mg (0,53 mmol) de metóxi-metil-amida de ácido 3-[(4-cloro-3-trifluorometil-benzenossulfonil)-metoximetil-amino]-piridina-2carboxílico, 239 mg (0,58 mmol) de 90% 4-iodo-7-(2-trimetilsilanil-etoximetil)7H-pirrolo[2,3-d]pirimidina dissolvido em 2 mL de THF com 0,32 mL de solução de cloreto de isopropilmagnésio a 2 M em THF adicionado. Toda cetona intermediária resultante foi usada na segunda etapa com 4 mL metanol e 4 mL mistura de ácido clorídrico a 6N para fornecer após purification 29 mg do produto final como um sólido amarelo.
Exemplo 3: 4-Cloro-N-[5-cloro-2-(7-metil-7H-pirrolo[2,3-d] pirimidina-4-carbonil)-piridin-3-il]-3-trifluorometil-benzenossulfonamida
1,2
Preparado de 227 mg (0,45 mmol) de metóxi-metil-amida de ácido 5-cloro-3-[(4-cloro-3-trifluorometil-benzenossulfonil)-metoximetil-amino]piridina-2-carboxílico, 129 mg (0,45 mmol) de 90% 4-iodo-7-metil-7H-pirrolo [2,3-d]pirimidina dissolvido em 2 mL de THF com 0,23 mL de solução de clo5 reto de isopropilmagnésio a 2 M em THF adicionado. Toda cetona intermediária resultante (80 mg) foi usada na segunda etapa com 2 mL de etanol e 2 mL de mistura de ácido clorídrico a 6N para fornecer, após purificação 45 mg do produto final como um sólido amarelo.
Exemplo 4: Preparação de 4-Cloro-N-(5-(metoximetil)-2-(7H10 pirrolo[2,3-d]pirimidina-4-carbonil)piridin-3-il)-3-(trifluorometil) benzenossulfo-
Cl
Etapa 1: A uma solução da bromopiridina obtida de Exemplo 13 (Etapa 2) (74 mg, 0,15 mmol) em THF (1 mL) a 0°C foi adicionado cloreto de isopropilmagnésio (147 pL, 2,0 M em THF) gota a gota. Após 45 minutos, 15 uma solução de 7-(triisopropilsilil)-7H-pirrolo[2,3-d]pirimidina-4-carbaldeído (67 mg, 0,22 mmol) em THF foi adicionado. A mistura reacional foi aquecida para a temperatura ambiente e agitada durante a noite. A reação foi saciada com solução de cloreto de amônio saturada, e a mistura foi extraída com acetato de etila. Os extratos foram lavados com salmoura, secados sobre MgSO4 e concentrados em vácuo O material cru foi purificado por cromatografia rápida em silica-gel (33% EtOAc/hexanos) O produto desejado foi obtido como um sólido amarelo espumante (45 mg, 42%). MS: (M + H)/z = 728.
Etapa 2: o produto obtido de Etapa 1 acima (45 mg, 0,062 mmol) foi dissolvido em 3 mL de diclorometano. À solução resultante foi adicionado periodinano Dess-Martin (42 mg, 1,6 equiv.) e agitada durante a noite em temperatura ambiente. A reação foi saciada com 10% Na2S2O3, e a mistura foi extraída com acetato de etila O extratos foram lavados com NaHCO3 saturado, salmoura, secados sobre MgSC>4 e concentrados em vácuo O material cru foi purificado por cromatografia rápida em sílica-gel (33% EtOAc/hexanos) O produto desejado foi obtido como um sólido amarelo espumante (35 mg, 78%). MS: (M + H)/z = 726.
Etapa 3: o produto obtido de Etapa 2 acima (35 mg, 0,048 mmol) foi dissolvido em 4 mL de HCI-dioxano (4,0 M) e 1 mL de água. A mistura foi aquecida a 85°C durante 30 minutos e saciada com NaHCO3 saturado. A mistura foi extraída com acetato de etila. Os extratos foram lavados com salmoura, secados sobre MgSO4 e concentrados em vácuo O material cru foi purificado por cromatografia rápida em sílica-gel (10% metanol/DCM) O produto desejado foi obtido como um sólido amarelo (15 mg, 60%). MS: (M + H)/z = 526.
Exemplo 5: 4-Cloro-N-[5-metil-2-(7H-pirrolo[2,3-d]pirimidina-4carbonil)-piridin-3-il]-3-trifluorometil-benzenossulfonamida
Preparado de 200 mg (0,42 mmol) de metóxi-metil-amida de ácido 3-[(4-cloro-3-trifluorometil-benzenossulfonil)-metoximetil-amino]-5-metilpiridina-2-carboxílico, 202 mg (0,50 mmol) de 90% 4-iodo-7-(2-trimetilsilanil etoximetil)-7H-pirrolo[2,3-d]pirimidina dissolvido em 2 mL de THF com 0,25 mL de solução de cloreto de isopropilmagnésio a 2 M em THF adicionado. Toda cetona intermediária resultante foi usada na segunda etapa com 2 mL de metanol e 2 mL de mistura de ácido clorídrico a 6N para fornecer, após purificação 29 mg do produto final como um sólido amarelo.
Exemplo 6: 4-Metil-N-[5-metil-2-(7H-pirrolo[2,3-d]pirimidina-4-carbonil)-piridin-3-il]-3-trifluorometil-benzenossulfonamida
Preparado de 496 mg (1,40 mmol) de A/-(2-ciano-5-metil-piridin-
3- il)-4-metil-3-trifluorometil-benzenossulfonamida e 70 mg (1,75 mmol) de 60% hidreto de sódio em 2 mL de THF. A solução Grignard foi preparada de 467 mg (1,82 mmol) de 95% 4-iodo-7H-pirrolo[2,3-d]pirimidina dissolvido em 5 mL de THF com 0,98 mL de solução de cloreto de fenilmagnésio a 2M em THF e 0,98 mL de solução de cloreto de isopropilmagnésio a 2 M em THF adicionado. A reação produziu 340 mg do produto final como um sólido amarelo.
Exemplo 7: 3,4-Dicloro-N-[5-metil-2-(7H-pirrolo[2,3-d]pirimidina-
4- carbonil)-piridin-3-il]-benzenossulfonamida
Preparado de 563 mg (1,55 mmol) de sal de sódio de 3,4-dicloroA/-(2-ciano-5-metil-piridin-3-il)-benzenossulfonamida, 506 mg (2,01 mmols) de 97% 4-iodo-7H-pirrolo[2,3-d]pirimidina dissolvido em 6 mL de THF com 1,16 mL de solução de cloreto de fenilmagnésio a 1,8 M em THF e 1,06 mL de solução de cloreto de isopropilmagnésio a 2 M em THF adicionado. A reação produziu 471 mg do produto final como um sólido amarelo.
Exemplo 8: Preparação de 4-cloro-N-(5-metil-2-(2-metil-7H-pirrolo [2,3-d]pirimidina-4-carbonil)piridin-3-il)-3 -(trifluorometil) benzenossulfonamida jCO2Et
CN
Step 4
Etapa 1: A uma suspensão de NaH (60% de dispersão em óleo mineral, 1,62 g, 40,5 mmols) em DMF (35 mL) e benzeno (12 mL) foi adicionado cianoacetato de etila (4,7 mL, 44,2 mmols) gota a gota a -10°C. Após agitação durante 1 hora em temperatura ambiente, 2-bromo-1,1-dietoxietano (5,6 mL, 0,82 equiv.) foi adicionado e a mistura reacional foi aquecida a 100°C durante 2 horas. A mistura reacional foi em seguida resfriada para a temperatura ambiente e filtrada O filtrado foi condensado, e água foi adicionada. A mistura foi extraída com éter. Os extratos foram lavados com salmoura, secados sobre MgSO4 e concentrados em vácuo O material cru foi purificado por cromatografia rápida em sílica-gel (20% EtOAc/hexanos) O produto desejado foi obtido como óleo incolor (5 g, 60%). MS: (M + Na)/z = 252.
Etapa 2: Cloridrato de acetamidina (413 mg, 4,4 mmols) foi adicionado a uma solução de etóxido de sódio (594 mg, 2,0 equiv.) em etanol (8 mL). Após agitação durante meia hora em temperatura ambiente, o cloreto de sodio resultante foi removido por filtração O filtrado foi adicionado a 2ciano-4,4-dietoxibutanoato de etila (1,0 g, 4,4 mmols) e a mistura foi refluxada durante 5 horas. A maior parte do solvente foi removida e a suspensão restante dissolvido em água gelada, e extraída com acetato de etila. Os extratos foram lavados com salmoura, secados sobre MgSO4 e concentrados em vácuo O material cru foi purificado por cromatografia rápida em sílica-gel (100% metanol) O produto desejado foi obtido como um sólido vermelho (421 mg, 40%). MS: (M + H)/z = 242.
Etapa 3: a pirimidina acima (2,0 g, 8,30 mrnols) foi adicionada a uma solução de ácido sulfúrico (0,9 mL) em 50 mL de etanol e refluxada durante 2 horas. Após resfriar até temperatura ambiente, a mistura foi concentrada em vácuo O material cru (solúvel em água) foi usado diretamente para a etapa seguinte. MS: (M + H)/z = 150.
Etapa 4: Uma suspension de 90 mg (0,60 mmol) da hidroxipirrolopirimidina acima em 2 mL de oxicloreto de fósforo foi refluxada durante 2 horas O excesso de oxicloreto de fósforo foi removido e o resíduo foi saciado cuidadosamente com gelo. A mistura foi extraída com acetato de etila. Os extratos foram lavados com salmoura, secados sobre MgSO4 e concentrados em vácuo O material cru foi purificado por cromatografia rápida em sílica-gel (10% metanol/DCM) O produto desejado foi obtido como um sólido incolor (86 mg, 85%). MS: (M + H)/z = 168.
Etapa 5: a cloropirrolopirimidina acima (40 mg, 0,24 mmol) foi adicionada a uma solução aquosa de ácido hidroiódico (57 peso% em água,
1,5 mL) e a mistura foi aquecida a 35°C durante a noite. Após resfriar até a temperatura ambiente, uma solução de hidroxilamina foi adicionada e a mistura foi extraída com acetato de etila. Os extratos foram lavados com salmoura, secados sobre MgSO4 e concentrados em vácuo O produto desejado foi obtido como um sólido marrom (50 mg, 80%). MS: (M + H)/z = 260.
Etapa 6: A uma solução de 3-(4-cloro-3-(trifluorometil) fenilsulfonamido)-/V-metóxi-/V,5-dimetilpicolinamida (56 mg, 0,13 mmol) em THF (1 mL) a 0°C foi adicionado NaH (60% de dispersão em óleo mineral, 6 mg, 1,2 equiv.). A reação foi em seguida aquecida para a temperatura ambiente e agitada durante 0,5 hora.
Em um frasco separado foi carregada o iodopirrolopirimidina acima (40 mg, 1,2 equiv.) em 0,5 mL de THF. A solução foi resfriada para 78°C, e uma solução de cloreto de isopropilmagnésio em THF (2,0 M, 167 pL) foi adicionado gota a gota. A mistura reacional foi em seguida aquecida para a temperatura ambiente e uma solução de brometo de 2,6-dimetilfenil magnésio (1,0 M, 167 μΙ_, 1,3 equiv.) em THF foi adicionada. Após agitação durante meia hora, a mistura foi adicionada à solução de amida Weinreb acima e a reação foi agitada durante mais uma hora antes de saciar com solução de cloreto de amônio saturada. A mistura foi extraída com acetato de etila. Os extratos foram lavados com salmoura, secados sobre MgSO4 e concentrados em vácuo O material cru foi purificado por cromatografia rápida em sílica-gel (33% EtOAc/hexanos) O produto desejado foi obtido como um sólido amarelo (31 mg, 40%). MS: (M + H)/z = 510.
Exemplo 9: 4-Cloro-N-[5-cloro-2-(9H-purina-6-carbonil)-piridin-3il]-3-trifluorometil-benzenossulfonamida.
Preparado de 256 mg (0,51 mmol) de metóxi-metil-amida de ácido 5-cloro-3-[(4-cloro-3-trifluorometil-benzenossulfonil)-metoximetil-amino]piridina-2-carboxílico, 191 mg (0,51 mmol) de 6-iodo-9-(2-trimetilsilanil-etoximetil)-9H-purina dissolvido em 2 mL de THF com 0,25 mL de solução de cloreto de isopropilmagnésio a 2 M em THF adicionado. Toda cetona intermediária resultante foi usada na segunda etapa com 1 mL metanol e 1 mL de mistura de ácido clorídrico a 6N para fornecer, após purificação 2,05 mg do produto final como um sólido amarelo.
Exemplo 10: 4-Cloro-N-[5-cloro-2-(7H-pirrolo[2,3-d]pirimidina-4carbonil)-piridin-3-il]-3-trifluorometil-benzenossulfonamida
Preparado de 259 mg (0,52 mmol) de metóxi-metil-amida de áci75 do 5-cloro-3-[(4-cloro-3-trifluorometil-benzenossulfonil)-metoximetil-amino]piridina-2-carboxílico, 213 mg (0,52 mmol) de 90% 4-iodo-7-(2-trimetilsilaniletoximetil)-7H-pirrolo[2,3-d]pirimidina dissolvido em 2 mL de THF com 0,26 mL de solução de cloreto de isopropilmagnésio a 2 M em THF adicionado. Toda cetona intermediária resultante foi usada na segunda etapa com 2mL metanol e 2 mL mistura de ácido clorídrico a 6N para fornecer, após purificação 40 mg do produto final como um sólido amarelo.
Exemplo 11: 4-Cloro-N-[5-cloro-2-(1 H-pirrolo[2,3-c]piridina-4-carbonil)-piridin-3-il]-3-trifluorometil-benzenossulfonamida
Preparado de 494 mg (1,00 mmol) de /V-(2-bromo-5-cloro-piridin3-il)-4-cloro-A/-metoximetil-3-trifluorometil-benzenossulfonamida dissolvido em mL THF, 1,05 mL de solução de cloreto de isopropilmagnésio a 2 M em THF. 146 mg (1,00 mmol) de 1/-/-pirrolo[2,3-c]piridina-4-carbaldeído foram dissolvidos em 1 mL de THF e tratados sequencialmente em temperatura ambiente com 44 mg (1,1 mmol) de 60% hidreto de sódio e 177 uL (1 mmol) de cloreto de trimetilsililetoximetila antes da adição à solução de reagente Grignard. Produção: 40 mg do álcool intermediário. Todo ele foi usado na segunda etapa com 74 mg de periodinano Dess-Martin dissolvido em 1 mL de DCM. Os 31 mg da cetona protegida resultante foram submetidos à etapa em 2 mL metanol e 2 mL mistura de ácido clorídrico a 6N a 100°C para fornecer, após purificação 17 mg do produto final como um sólido amarelo. LC-MSD, m/z para C20H11CI2F3N4O3S [M+H]+ = 514,9, 516,9; Tempo de retenção por HPLC: 2,3 minutos.
Exemplo 12: 3,4-Dicloro-N-[5-metil-2-(1 H-pirrolo[2,3-c]piridina-4carbonil)-piridin-3-il]-benzenossulfonamida
Preparado de 204 mg (0,464 mmol) de /V-(2-bromo-5-metilpiridin-3-il)-3,4-dicloro-/V-metoximetil-benzenossulfonamida dissolvido em 1 mL THF, 0,49 mL de solução de cloreto de isopropilmagnésio a 2 M em THF. 75 mg (0,510 mmol) de 1/-/-pirrolo[2,3-c]piridina-4-carbaldeído foram dissolvidos em 1 mL de THF e tratados em temperatura ambiente com 22 mg (0,557 mmol) de 60% hidreto de sódio antes da adição à soluçãode reagente Grignard. Todo o álcool intermediário foi usado na segunda etapa com 300 mg de periodinano Dess-Martin dissolvido em 2 mL de DCM. A cetona protegida resultante foi submetida à Etapa 3 em 6 mL de metanol e 6 mL de mistura de ácido clorídrico a 6N a 90°C para fornecer, após purificação, 22 mg do produto final como um sólido amarelo. LC-MSD, m/z para C20H14CI2N4O3S [M+H]+ = 460,9, 462,9; Tempo de retenção por HPLC: 2,3 minutos.
Exemplo 13: sal de sódio de 4-cloro-N-[5-metil-2-(7H-pirrolo[2,3-
d] pirimidina-4-carbonil)-piridin-3-il]-3-trifluorometil-benzenossulfonamida.
(a) Síntese de sal de sódio de 3-(4-cloro-3-trifluorometilbenzenossulfonilamino)-5-metil-piridina-2-carbonitrila:
2. NaOH, THF, H2O
A uma solução de 3-amino-2-ciano-5-metilpiridina (83 g, 0,619 mol) em piridina (625 mL) foi adicionado cloreto de 4-cloro-3-trifluorometilbenzenossulfonila (207 g, 0,742 mol) em uma porção e a mistura rea cional resultante agitada a 60°C durante a noite (13 horas). Piridina foi removida em vácuo, THF (350 mL) foi adicionado e removido em vácuo. Ao sólido marrom escuro obtido foi adicionado THF (650 mL), H2O (550 mL), seguido por NaOH (75 g, 1,88 mol) lentamente a 0°C (em cinco porções) durante 20 minutos. A solução resultante foi agitada a 0 °C durante mais 30 minutos. Após remover THF em vácuo (~ 650 mL), H2O (50 mL) foi adicionado e a suspensão foi aquecida para dissolver todos os sólidos. Após resfriar em um banho de gelo durante 2 horas, o sólido resultante foi coletado por filtração, lavado com gelo água (100 mL X 3) e secado em um forno a vácuo a 110°C durante 24 horas para produzir o composto do título (190 g, 77%) como agulhas brancas: p.f. 287,0 - 288,5° 1H RMN (400 MHz, d6-DMSO) δ 8,05 (1H, s), 7,96 (d, 1H), 7,76 (dd, 1H), 7,63 (s, 1H), 7,40 (s, 1H), 2,12 (s, 3H). MS (ES) M+H esperada 375,9, encontrado 375,9. Licor-mãe foi concentrado (~ 2/3 volume) em vácuo para produzir mais 30 g do composto do título após lavagem e secagem, produção total 89%.
(b) 4-Cloro-N-[5-metil-2-(7H-pirrolo[2,3-d]pirimidina-4-carbonil)piridin-3-il]-3-trifluorometil-benzenossulfonamida
4-lodopirrolo[2,3-d]pirimidina(2b, 50,3 g, 95,5% pureza, 196 mmols) foi dissolvido/suspenso em 0,64 L de THF anidroso em um frasco de base reconda de 2 L de três gargalos sob atmosfera de nitrogênio, equipado com um agitador mecânico e um termômetro. A solução foi resfriada até -15°C em um banho de gelo seco-acetona e 206 mL da solução de THF de cloreto de o-tolilmagnésio a 1,0 M (1,05 equiv.) foram adicionados lentamente, desse modo a temperatura interna não excedeu a -10°C. Durante a adição todos os sólidos dissolveram-se O banho de resfriamento foi removido e 104 mL da solução de THF de cloreto de isopropilmagnésio a 1,95 M (1,03 e quiv.) foram adicionados durante um período de 3 minutos. Durante a adição sólidos castanhos precipitaram-se; a agitação devem ser vigorosa para evitar a formação de grumos. A solução resultante foi aquecida rapidamente para a temperatura ambiente usando banho de água quente. A esta suspensão, 59,9 g do sal de sódio de nitrila (19, 0,77 equiv.) em 120 mL de THF seco foram adicionados e a mistura resultante foi agitada a 45°C durante 16 horas. A mistura foi resfriada em um banho de gelo e 101 mL de HCI aquoso a 36% foram adicionados gota a gota, desse modo a temperatura interna não excedeu a 30°C, enquanto que agitando vigorosamente. Sólidos amarelo precipitaram-se e toda a suspensão espessa foi mecanicamente agitada durante 30 minutos a 50°C (os sólidos amarelo tornaram-se laranjas), resfriados até temperatura ambiente e em seguida filtrados. Os sólidos foram lavados com 700 mL de THF, seguidos por 700 mL de éter dietílico, seguido por duas porções de 1 L de HCI aquoso a 1 Μ O sólido laranja úmido resultante foi apreendido em uma mistura de 0,9 L de acetato de etila, 0,5 L de água e 50 g de bicarbonato de sódio e agitado até ficar completamente dissolvido. A solução foi filtradas através uma almofada de CELITE® e as camadas foram separadas. A camada aquosa foi extraída com 50 mL de acetato de etila. As camadas orgânicas combinadas foram filtradas através uma almofada de 200 g de sílica-gel, seguido por lavagem com sílica com adicional de 0,8 L de acetato de etila. A solução foi concentrada em vácuo para produzir 56,5 g do produto como um sólido amarelo (contém 2 %peso de acetato de etila, Produção 74 %).
(c) sal de sódio de 4-cloro-N-[5-metil-2-(7H-pirrolo[2,3-d] pirimidina-4-carbonil)-piridin-3-il]-3-trifluorometil-benzenossulfonamida
4-Cloro-N-[5-metil-2-(7H-pirrolo[2,3-d]pirimidina-4-carbonil)-piridin-3-il]-3-trifluorometil-benzenossulfonamida (6,85 g, 13,8 mmols) foi suspenso em 103 mL de álcool isopropílico e trazido para o refluxo sob a atmosfera de nitrogênio. A suspensão foi tratada com 1,30 mL de hidróxido de sódio aquoso a 10,6 N (1 equiv.) gota a gota com agitação, depois do que todos os sólidos dissolveram-se. A mistura foi deixada resfriar até a temperatu ra ambiente e semeada, em seguida também resfriada em um banho de gelo O sólido é filtrado e lavado com 35 mL de álcool isopropílico, seguido por secagem durante a noite em vácuo a 80°C. Produção: 6,12 g (86%) O teor de IPA é de 800 ppm (determinados por 1H RMN).
Exemplo 14 - XPRD do composto de Exemplo 13.
O material de Exemplo 13 foi submetido à análise de difração de pó de raio X (XRPD). A análise foi realizada usando um difractômetro de pó de raio X Shimadzu XRD-6000 usando radiação Cu Kü O instrumento é equipado com um tubo de raio X de foco fino longo. A voltagem do tubo e amperagem foram fixados a 40 kV e 40 mA, respectivamente. A divergência e fendas de dispersão foram fixados em 1o e a fenda de recebimento foi fixada a 0,15 mm. A radiação difractada foi detectada por detector de cintilação de Nal. Uma varredura contínua Θ-2Θ a 3°/min (0,4 seg/0,02° etapa) de valor 2,5 a 40° 20 · foi usada. Um padrão de silício foi analisado para checar o alinhamento do instrumento. Os dados foram coletados e analisados usando XRD-6100/7000 v,5,0. A varredura de XPRD é representada na Figura 1. Os valores 2-teta são reportados na Tabela 3. A forma cristalina do composto de Exemplo 13 é designada como a Forma A.
Lista de pico (2ü°) e intensidades (CPS) observadas XRPD do composto cristalino de exemplo 13. A densidade de pico pode variar dependendo do tamanho e morfologia da partícula.
Tabela 3.
Ângulo 2Θ0 Intensidade (CPS)
6,9 635
7,7 1555
10,6 340
11,3 250
11,8 125
12,5 165
13,7 255
15,1 300
15,3 305
16,1 490
16,9 290
17,3 485
18,2 195
18,5 190
19,5 250
20,0 1485
21,6 510
21,8 340
22,6 680
24,3 635
24,7 615
25,1 630
25,6 255
26,3 255
27,5 490
28,5 605
28,8 345
29,3 240
31,4 315
32,4 465
Exemplo Comparativo 1: 4-cloro-N-(5-metil-2-(1H-pirazolo[3,4-b] piridina-4-carbonil)piridin-3-il)-3-(trifluorometil)benzenossulfonamida
Este composto podem ser preparados como descrito em Publi5 cação dos Estados Unidos n° 2007-0037794A1.
Os compostos de Exemplos 1-12 cada qual tem uma IC50 menor do que 1000 nM no seguinte ensaio de quimiotaxia de CCR2 O composto 5 tem uma IC50 média de aproximadamente 5 nM neste ensaio.
Exemplo de ensaio in vitro
Reagentes
Células THP-1 foram obtidas da American Type Culture Collection (Manassas, VA) e cultivadas em meio de cultura de tecido RPMI suplementado com 10% soro de bezerro fetal (FCS) em uma incubadora de CO2 a 5% umidificada a 37°C. Proteínas de quimiocina humanas recombinantes 15 MCP-1 foram obtidas de Sistemas R&D (Minneapolis, MN). Proteína MCP-1 rotulada por 125l foi obtida de Amersham (Piscataway, NJ). Microcâmaras de quimiotaxia ChemoTX® foram adquiridas de Neuro Probe (Gaithersburg,
MD). Kits de proliferação celular CyQUANT® foram adquiridos de Molecular Probes (Eugene, Oregon). Corante Fluo-4 AM indicador de cálcio foi adquirido de Molecular Devices (Mountain View, CA).
Ensaio de migração convencional
O ensaio de migração convencional foi usado para determinar a eficácia de antagonistas de receptor potenciais em bloqueio da migração mediada por meio das quimiocinas (tal como CCR2). Este ensaio foi rotineiramente realizado usando o sistema de microcâmara ChemoTX® com uma membrana de policarbonato de tamanho de poro de 5 pm. Para iniciar um tal ensaio, células expressando quimiocina (tal como células THP-1 para ensaio CCR2) foram colhidas por centrifugação de suspensão celular a 1000 RPM em uma centrifuga GS-6R Beckman. O pélete celular foi ressuspenso em tampão de quimiotaxia (HBSS com 0,1% BSA) a 10x106 células/mL para ensaio CCR2. Os compostos teste em concentrações desejadas foram preparados de 10 mM de soluções de estoque por diluições seriais em tampão de quimiotaxia. Um volume igual de células e compostos foi misturado e incubado em temperatura ambiente durante 15 minutos. Posteriormente, 20 μΙda mistura foram transferidos sobre a membrana porosa da microcâmara de migração, com 29 μΐ_ de ligante de quimiocina (0,1 nM de proteína MCP-1 de quimiocina para ensaio CCR2) colocados na câmara inferior. Seguindo uma incubação a 37 °C (90 minutos para CCR2), durante o que as células migraram contra o gradiente de quimiocina, o ensaio foi terminado removendo as gotas celulares do topo do filtro. Para quantificar as células migradas através da membrana, 5 μΙ_ de solução de 7X CyQUANT® foram adicionados a cada cavidade na câmara inferior, e o sinal de fluorescência medido em uma leitora de placa de fluorescência Spectrafluor Plus (TECAN, Durham, NC) O grau de inibição foi determinado comparando-se os sinais de migração entre as células tratadas com o composto e as não tratadas. O cálculo de IC50 foi também realizado por análise de regreção de quadrados não lineares usando Graphpad Prism (Graphpad Software, San Diego, CA).
Farmacocinéticos
Os farmacocinéticos (PK) e biodisponibilidade oral do composto de Exemplo 5 foram determinados no cão beagle.
Seguindo uma administração em bolo i.v. de 1 mg/kg de composto 5 (base livre) em 31,6% de Ν,Ν-dimetilacetamida / 36,8% água/ 31,6% de propileno glicol paa cães beagle machos (n=2), as amostras de sangue foram coletadas nos seguintes momentos: Predose, 2, 5, 15, 30 minutos, 1, 2, 4, 8, 12, e 24 horas após a dosagem. Seguindo uma administração de 5 mg/kg do composto de Exemplo 5 em 1% de metocel para cães beagle machos (n=2), as amostras foram coletadas nos seguintes momentos: Predose, 5, 15, 30 minutos, e 1,2, 4, 8, 12, e 24 horas após a dosagem.
O composto intacto de Exemplo 5 foi extraído das amostras de plasma usando 3% de ácido fórmico/acetonitrila e medido usando um método LC-MS/MS. Os parâmetros de PK foram determinados por análise nãocompartimental. Os animais foram observados quanto aos sinais de saúde insatisfatória e mortalidade O composto de exemplo 5 foi bem tolerado pelos cães beagle sem nenhum sinal de um modo geral de saúde insatisfatória ou mortalidade.
Seguindo a administração i.v. do composto de exemplo 5, as concentrações de plasma de composto 5 intacto declinaram monoexponencialmente com uma meia-vida de eliminação terminal média t-i/2 de 4,7 horas O composto de exemplo 5 foi removido do plasma muito lentamente a 0,2 mL/min/kg (<1% de fluxo de sangue do fígado do cão) e mostrou um volume muito baixo de distribuição (Vss) de 0,1 L/kg O tempo de residência médio (MRTjV) foi estimado ser de 7,2 horas. Seguindo a administração oral, o composto de Exemplo 5 foi rapidamente absorvido com uma concentração de plasma de pico médio (Cmax) de 44,4 pg/mL (cerca 59,5 μΜ) obtida após
1,5 hora (Tmax) O composto foi bem absorvido, com uma biodisponibilidade oral de cerca de 100%.
O composto de exemplo 5 mostrou um excelente perfil PK i.v. é oral. Seguindo a dosagem i.v., ele mostrou uma depuração muito baixa no cão beagle (menor do que 1% de fluxo de sangue no fígado) e um tempo de residência médio longo (cerca de 7 horas) O composto 5 foi também rapidamente e bem absorvido oralmente, com uma biodisponibilidade de cerca de 100%.
Ensaios de Inibição de CYP2C9 e CYP3A4
Os compostos teste foram incubados com microssomas de fígado humano em lago a 37° C na presença de NADPH e concentrações apropriadas de substratos específicos para CYP2C9 e 3A4. As concentrações de ensaio finais de microssomas e substratos de fígado humano, as concentrações em DMSO de solução de estoque de substrato iniciais, e os tempos usados para as várias incubações de isozima são resumidos na Tabela 4. As concentrações de ensaio finais dos controles de inibidor positivos em cada ensaio de isozima são listadas na Tabela 5.
Tabela 4. Concentrações de Incubação
CYP450 Cone, de Proteína [mg/mL] Substrato Cone, de Substrato [μΜ] Tempo de Incubação [min]
2C9 0,05 Diclofenaco 10 10
3A4 0,05 Midazolam 3 10
0,05 Testosterono 100 30
Tabela 5. Controles para condições
CYP450 Substrate Control Final Incubation Control Concentration [μΜΙ
2C9 Diclofenac Sutfaphenazol 50 17 5,6 1,9 0,62 0,2 0,069
3A4 Midazolam Ketoconazol 1 0,33 0,11 0,037 0,012 0,0041 0,0014
Testosterone Ketoconazol 1 0,33 0,11 0,037 0,012 0,0041 0,0014
Incubação
120 pL de uma mistura de microssomas de fígado humano (HLM) em 50 mM de tampão de fosfato de potássio/5 mM MgCI2 foram adicionados em todas as cavidades da série A em uma placa de 96. A concentração de proteína microssômica foi de 2 vezes a concentração de proteína pretendida para o ensaio de isozima particular registrado na Tabela 4. Além disso, 80 pL desta preparação de microssoma de fígado humano atingiram o máximo com 1% de DMSO que foram distribuídos em todas as cavidades da série B até a H.
1,2 pL de cada composto teste individual em DMSO (10 mM) foi adicionado para as primeiras 10 cavidades da série A (5 diferentes compostos teste cada qual em duplicata). Adicionalmente, 1,2 pL do estoque de DMSO do inibidor de controle para a isozima sob o estudo foi adicionado nas duas finais cavidades de série A para fornecer uma concentração de duas vezes acima da mais alta concentração final. (Veja a Tabela 5 para as concentrações de inibidor de controle final)
Diluições seriais de três vezes foram realizadas tirando 40 μι. de cada solução nos poços da série A (os poços 1-12, ambos os compostos e controles) e diluindo nos poços da série B. Após mistura cuidadosa, 40 μΙ_ de cada solução nos poços da série B foram distribuídos com uma pipeta de múltiplos canais (12 canais) nos poços da série C e os compostos de controle teste portanto, também diluídos. Este processo foi repetido para as séries D até G. Após mistura, 40 μΙ_ foram removidos e descartados dos poços da série G.
Este procedimento resultou em 80 uL de solução estando presente em todas os poços de todas as séries A até H, com concentrações de proteína sendo de duas vezes as concentrações pretendidass finais em todos os poços das séries, e a concentração do composto de teste e controle sendo duas vezes as concentrações pretendidas finais nas séries A a G. A série H não atingiu o máximo com um composto de teste ou controle positivo.
A placa foi coberta e pré-incubada durante 10 minutos em uma incubadora a 37°C. A reação foi iniciada adicionando-se 80 pl_ da solução do substrate para a isozima sob investição em 50 mM solução de tampão de fosfato de potássio/5 mM de MgCh com 4 mM de NADPH presentes, em uma concentração de substrato de duas vezes as concentrações de substrato finais pretendidas usando uma pipeta de múltiplos canais. A solução de substrato foi adicionada a todos os poços das séries A a H excluindo os poços 95 e 96 (vazios microssômicos). As soluções de substrato foram preparadas de várias soluções de estoque de substrato de DMSO preparadas em concentrações também mencionadas na Tabela 4.
Este procedimento produziu as concentrações de proteína final e substrato listadas na Tabela 4, as concentrações de controle finais listadas na Tabela 5, e concentrações de composto teste de 50 μΜ, 16,7 μΜ, 5,6 μΜ, 1,9 μΜ, 618 ηΜ, 206 ηΜ e 69 ηΜ para cada composto teste individual.
A placa foi coberta e incubada a 37°C para o tempo listado na Tabela 4 para a isoforma sob investigação. A reação foi interrompida distribuindo-se 120 μΙ_ de padrão interno (200 ng/mL CCX915-6A) em acetonitrila a todos os poços. 80 μΙ_ da solução de substrato específico/NADPH descritos acima foram adicionados nos poços 95 e 96 após interromper a reação para fornecer o vazio. A placa foi vortexada durante 10 minutos e girada em uma centrífuga a 4.450 rpm e 4°C durante 10 minutos com uma pipeta de múltiplos canais, 80 μΙ_ do supernadante foram transferidos para dentro das cavidades da placa amostra contendo 80 μΙ_ de 0,1% ácido fórmico/água e misurados bem para análise em LC-MS/MS como descrito nas seções E e F. MÉTODO ANALÍTICO
As amostras foram analisadas pelo método LC-MS/MS. Cada metabólito (Tabela 6) derivado do substrato particular para cada diferente isoforma CYP450 foi monitorado.
CONDIÇÕES DE HPLC PARA OS SUBSTRATOS
Instrumento: Shimadzu, equipado com o sistema de cromatografia líquida LC-10AD VP.
Inibição de CYP2C9 e CYP3A4 (Midazolam)
Coluna: Waters, Sunfire C18, 3 u, 2,1x50 mm
Fases Móveis: A: 0,1% de ácido fórmico em água
B: 0,1% de ácido fórmico em acetonitrila
Programa Gradiente: para CYP2C9 e CYP3A4 (Midazolam)
Tempo [min] Solvente A Solvente B
0 0 — 02 95 5
0,3-1,0 5 95
1,0-3,0 95 5
Taxa de fluxo: 300 μί /min
Inj. Vol: 10 pL
Tempo de realização: 3 minutos para CYP2C9, 3A4 (Midazolam). Tempo de retenção para o analisado é de 1,03 min para 2C9 (4Hidróxi-diclofenaco) e 0,87 minuto para 3A4 (Γ-hidroxil midazolam) Inibição de CYP3A4 (Testosterona)
Coluna: Waters, Sunfire C18, 3 u, 2,1x50 mm
Fases Móveis: A: 0,1% de ácido fórmico em água
B: 0,1% de ácido fórmico em acetonitrila
Programa Gradiente: para CYP3A4 (Testosterona)
Tempo [min] Solvente A Solvente B
0 0 — 15 95 5
1,5-3,0 5 95
3,0-4,0 95 5
Taxa de fluxo: 300 pL/min
Vol. de Inj.: 20 pL
Tempo de realização: 4,0 min para CYP3A4 (Testosterona).
Tempo de retenção para o analisado (6-B-hidróxi testosterona) é de 1,35 min para 3A4 (Testosterona).
CONDIÇÕES DE ESPECTRÔMETRO DE MASSA
Instrumento: Applied Biosystems (Foster City, CA) espectrômetro de massa
API 3000 e 4000 Q-TRAP
Interface: Electrospray (Turbo lon Spray), ionização positiva
Modo: Monitoração de Reação Múltipla (MRM)
Tabela 6. Transições de massa para metabólitos e Tempo de retenção por HPLCs
Isoforma CYP450 Substrato Metabólito Transição Tempo de RT [min] Substrato
2C9 Diclofenaco 4’-Hidroxi-diclofenaco 312,10/230,97 2,2
3A4 Midazolam 1 ’-hidroxiil midazolam 341,98/323,92 2,23
Testosterone 6-B-hidróxi testosterona 305,13/269,28 2,1
*analisado em espectrômetro de massa API 4000 QTRAP Cálculo de IC50
As áreas de pico dos metabólitos foram obtidas por integração automática dos cromatogramas usando o software Analyst® 1,4,1 (Applied Biosystems, Foster City, CA).
Inhibition = 100- ((A UClesI - A UCblank)/(A UCcontrol - A UCblank) X 1 00) £q ή
AUCteste, AUCcontroí e AUCvazio são as contagens da área de pito para o metabólito do controle na presença de artigo de teste ou inibidor positivo, a contagem da área de pico de metabólito do controle sem artigo de teste, e contagem da área de pico observada no vazio do microssoma, respectivamente. A inibição percentual foi plotada contra a concentração de artigo teste usando Excel (Microsoft). Os valores IC5o foram calculados usando ajuste de parâmetro 4 em XLFit® (IDBS Lid, Guildford, UK). Os valores de IC50 dos compostos selecionados são mostrados abaixo.
AVALIAÇÃO FARMACOCINÉTICA DE COMPOSTOS SELECIONADOS EM RATOS SPRAGUE-DAWLEY
Um estudo farmacocinético intravenoso/oral com os compostos selecionados foi conduzido em ratos Sprague-Dawley machos pesando entre 0,24 e 0,36 kg. As amostras de sangue foram coletadas em pontos do tempo predeterminados e as amostras de plasma correspondentes dos animais foram analisadas quanto às concentrações do composto de teste usando um método LC-MS/MS. Os parâmetros farmacocinéticos foram derivados da curva de concentração de plasma versus um tempo.
Para análise de LC-MS/MS, uma solução de estoque de 1 mg/mL de composto teste em acetonitrila foi preparada, e as soluções de estoque de trabalho preparadas em 50% metanol/água foram usadas para preparar os padrões analíticos e amostras QC.
O plasma de rato Sprague-Dawley macho pobre em plaquetas com EDTA de sódio como anticoagulante foi obtido de Bioreclamation, Inc. (East Meadow, NY) e usado para a preparação dos padrões analíticos, bem como para diluições seriais das amostras selecionadas.
ANIMAIS
Oito animais pesando entre 0,24 e 0,36 kg foram usados para este estudo. Dois animais animais foram usados para a dosagem i.v., ao passo que os últimos seis foram para a dosagem oral.
DOSAGEM E TIRADAS DE SANGUE
Para a dosagem i.v., uma formulação de solução de composto teste foi preparada em propileno glicol//\/,/V-dimetil acetamida/EtOH (31,6/31, 6/36,8) a 1 mg/mL e cada animal recebeu 1 mL/kg. Para dosagem oral, os compostos de teste foram suspensos em 1% de HPMC a 0,5 mg/mL e cada animal recebeu 10 mL/kg.
Os animais foram jejuados durante a noite e examinados antes da dosagem e na conclusão do estudo. Para dosagem intravenosa, o san gue (0,2 mL) foi tirado em pré-dose e em 2, 5, 10, 15, e 30 minutos, 1, 2, 4, 6, e 8 horas após a dose. Para dosagem oral, o sangue (0,2 mL) foi tirado em pré-dose e a 5, 15, e 30 minutos, 1, 1,5, 2, 4, 6, 8, e 24 horas após a dose O sangue foi amostrado de animais canulados e em seguida colocado em tubos de polipropileno gelados contendo EDTA de sódio como o anticoagulante e mantido em gelo até a centrifugação O plasma foi coletado através de centrifugação (Centrifuga Eppendorf 5417R) a 12000 rpm e 4°C durante 6 minutos e armazenado a -20°C até a análise.
MÉTODO ANALÍTICO
As ammostras de plasma (50 pL) foram extraídas com 150 pL acetonitrila contendo o padrão interno em uma agitadora linear durante 10 minutos. As amostras foram centrifugadas a 4450 RPM durante 10 min a 4°C (Centrífuga Allegra X-15R, Beckman Coulter, Inc., Fullerton, CA). 80 pL do sobrenadante resultante foram transferidos para dentro de novas cavidades da placa contendo 80 pL de ácido fórmico a 0,1% em água e cuidadosamente misturados.
As amostras extraídas preparadas usando o procedimento acima foram separadas por cromatografia de alto desempenho usando um sistema Shimadzu (Kyoto, Japan) equipado com duas bombas LC-10 AD e uma coluna C-18 (Waters Sunfire, 2 x 30 mm, 3,5 pm; 10 pl injection) usando uma fase móvel consistindo em (A) ácido fórmico a 0,1% em água e (B) ácido fórmico a 0,1% em acetonitrila, em uma taxa de fluxo de 0,35 mL/min O gradiente foi 0-1,5 min 5% B, 1,5- 2,5 min 5 - 95% B, 2,5 - 2,7 min 95% ao 5% B, e 2,7 - 4,0 min 5% B O eluído de HPLC foi indicado uma rota em um Applied Biosystems (Foster City, CA) espectrômetro de massa quádruplo triplo Sciex API 3000, operando no modo de MS/MS de ionização positiva de Turbo spray de íon para análise. Aquisição e integração foram realizadas com software Applied Biosystems-Sciex Analyst (versão 1,4,1). A curva de calibração foi obtida por meio de um regressão quadrática (i.v.) ou linear (p.o.) e a faixa de calibração foi de 4 - 5000 ng/mL e 2 - 5000 ng/mL para os estudos i.v. e p.o., respectivamente.
PREPARAÇÃO DE PADRÕES DE CALIBRAÇÃO LC-MS/MS
Para determinar a concentração de composto teste em amostras de plasma de rato, os padrões contendo 5000, 1000, 500, 100, 50, 20, 10, 4, 2 e 1 ng/ml_ do composto foram preparados com plasma de rato obtido de Bioreclaimation Inc. (Lot #RATBREC,47491M). Os padrões de plasma foram preparados em paralelo com as amostras de plasma de uma maneira idêntica. Três níveis das soluções de estoque padrões (1000, 100 e 10 ng/ml_) atingiram o máximo separadamente em plasma de rato Sprague-Dawley macho e usado como amostras de QC.
ANÁLISE FARMACOCINÉTICA
Um total de onze pontos do tempo foi obtido para cada via de dosagem durante o período de coleção de sangue. Parâmetros farmacocinéticos descritivos foram determinados da curva de concentração de plasmatempo por uma análise não compartimental padrão (Wagner, 1993) de cada animal e via de dose.
• Meia-vida (T1/2): Meia-vida terminal.
• Cmax· Concentração de plasma máxima • AUCo-~: Área sob a curva de concentração de plasma-tempo de tempo de dosagem extrapolada até a infinidade.
• CL: Depuração total do corpo.
• MRT0.«>: Meio de residência do tempo de dosagem extrapolada até a infinidade • Vdss: Volume de distribuição em estado estável.
• F: Biodisponibilidade.
Análise farmacocinética foi realizada usando XLFit® v,4,1 (ID Business Soluções Inc., Alameda, CA).
Rato PK MRT 35 min 135 min
1X50 de inibição de CYP 3A4 3 μΜ 20 μΜ
Rato PK MRT 22 min 135 min
Rato PK T1/2 19 min 161 min
IX50 de inibição de CYP 3A4 3 μΜ 20 μΜ
Rato PK MRT 21 min 68 min
Rato PK T1/2 42 min 127 min
IC50 de inibição de CYP 2C9 3 μΜ 15 μΜ
É portanto pretendido que a descrição detalhada anterior seja considerada como ilustrativa em vez de limitante, e que seja entendido que 5 ela é as seguintes reivindicações, incluindo todos os equivalenes, que se destinam a definir o espírito e escopo desta invenção.

Claims (10)

1,
Petição 870180140214, de 11/10/2018, pág. 9/17
1,
1. Composto ou sal do mesmo, caracterizado pelo fato de que é de fórmula (II):
em que:
R1 e R2 são, cada qual independentemente, hidrogênio, halogênio, C1-8 alquila, -CN, ou C1-8 haloalquila, contanto que pelo menos um de R1 ou R2 seja diferente de hidrogênio;
R4 é hidrogênio;
R5 é halogênio ou C1-8 alquila;
R11 é selecionado do grupo consistindo em hidrogênio, C1-8 alquila, C2-8 alquenila, C2-8 alquinila, C6-10 arila substituída ou não-substituída, heteroarila de 5 a 10 membros substituída ou não-substituída ou heterociclo de 3 a 10 membros substituído ou não-substituído.
2,
2. Composto ou sal de caracterizado pelo fato de que R1 é Cl.
3,
3. Composto ou sal de caracterizado pelo fato de que R2 é -CF3.
4,
4. Composto ou sal de acordo acordo acordo caracterizado pelo fato de que R5 é Cl ou metila.
5 caracterizada pelo fato de que a referida forma cristalina tem uma difração de pó de raio X compreendendo os seguintes valores 2-teta ± 0,2 medida usando a radiação CuKa: 6,9, 7,7, 20,0, 24,3, 24,7, e 25,1.
26. Forma cristalina de acordo com a reivindicação 25, caracterizada pelo fato de que a referida forma cristalina tem uma difração
5 grupo que consiste em:
o. ,o s
um sal farmaceuticamente aceitável dos mesmos.
Petição 870180140214, de 11/10/2018, pág. 10/17
5. Composto ou sal de acordo caracterizado pelo fato de que R5 é metila.
6. Composto ou sal de acordo com com com com com a
caracterizado pelo fato de que R1 é Cl, R2 é CF3, e R5 é Cl.
reivindicação reivindicação reivindicação reivindicação reivindicação
7. Composto, caracterizado pelo fato de que é selecionado do grupo que consiste em:
pelo fato de que é selecionado do
8. Composto, caracterizado
9. Composto, caracterizado pelo fato de que apresenta a seguinte fórmula:
10. Composto, caracterizado pelo fato de que apresenta a seguinte fórmula:
ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo.
11. Composto, caracterizado pelo fato de que é o sal de sódio de 4-cloro-N-[5-metil-2-(7H-pirrol[2,3-d]pirimidina-4-carbonil)-piridin-3-il]-3trifluorometil-benzenossulfonamida.
12. Composição, caracterizada pelo fato de que compreende um veículo farmaceuticamente aceitável e um composto ou sal como definido em qualquer uma das reivindicações 1 a 11.
13. Composição, caracterizada pelo fato de que compreende um veículo farmaceuticamente aceitável e um composto como definido na reivindicação 9.
14. Composição, caracterizada pelo fato de que compreende um veículo farmaceuticamente aceitável e um composto da seguinte fórmula:
ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo.
15. Composição, caracterizada pelo fato de que compreende um veículo farmaceuticamente aceitável e o sal de sódio de 4-cloro-N-[5-metil-2(7H-pirrol[2,3-d]pirimidina-4-carbonil)-piridin-3-il]-3-trifluorometilbenzenossulfonamida.
Petição 870180140214, de 11/10/2018, pág. 11/17
16. Método de modular a função de CCR2 em uma célula, caracterizado pelo fato de que compreende contatar a célula com uma quantidade moduladora de CCR2 do composto ou sal como definido em qualquer uma das reivindicações 1 a 11.
17. Uso de uma quantidade terapeuticamente eficaz de um composto ou sal farmaceuticamente aceitável como definido na reivindicação 1, caracterizado pelo fato de que é para a preparação de uma composição para tratar uma condição ou doença mediada por CCR2 em um indivíduo, em que a condição ou doença mediada por CCR2 é aterosclerose, restenose, esclerose múltipla, doença do intestino inflamatória, fibrose renal, artrite reumatoide, obesidade, diabetes não dependente de insulina, diabetes tipo 2, doença pulmonar obstrutiva crônica, fibrose pulmonar idiopática ou síndrome de pneumonia idiopática.
18. Uso de acordo com a reivindicação 17, caracterizado pelo fato de que a referida condição ou doença mediada por CCR2 é aterosclerose.
19. Uso de acordo com a reivindicação 17, caracterizado pelo fato de que a referida condição ou doença mediada por CCR2 é restenose.
20. Uso de acordo com a reivindicação 17, caracterizado pelo fato de que a referida condição ou doença mediada por CCR2 é esclerose múltipla.
21. Uso de acordo com a reivindicação 17, caracterizado pelo fato de que a referida condição ou doença mediada por CCR2 é selecionada do grupo que consiste em doença do intestino inflamatória, fibrose renal, artrite reumatoide, obesidade e diabetes não dependente de insulina.
22. Uso de acordo com a reivindicação 17, caracterizado pelo fato de que a referida condição ou doença mediada por CCR2 é diabetes tipo 2.
23. Uso de acordo com a reivindicação 17, caracterizado pelo fato de que a referida condição ou doença mediada por CCR2 é selecionada do grupo que consiste em doença pulmonar obstrutiva crônica, fibrose pulmonar idiopática e síndrome de pneumonia idiopática.
Petição 870180140214, de 11/10/2018, pág. 12/17
24. Forma cristalina, caracterizada pelo fato de que é do sal de sódio de 4-cloro-N-[5-metil-2-(7H-pirrol[2,3-d]pirimidina-4-carbonil)-piridin-3il]-3-trifluorometil-benzenossulfonamida.
25. Forma cristalina de acordo com a reivindicação 24,
10 de pó de raio X compreendendo os seguintes valores 2-teta ± 0,2 medida usando radiação CuKa: 6,9, 7,7, 10,6, 11,3, 11,8, 12,5, 13,7, 15,1, 15,3, 16,1, 16,9, 17,3, 18,2, 18,5, 19,5, 20,0, 21,6, 21,8, 22,6, 24,3, 24,7, 25,1, 25,6, 26,3, 27,5, 28,5, 28,8, 29,3, 31,4, e 32,4.
BRPI0813695A 2007-07-12 2008-07-11 compostos de heteroaril piridil e fenil benzenossulfonamidas fundidas, composição, método de modular a função de ccr2, usos dos compostos e forma cristalina BRPI0813695B8 (pt)

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