BRPI0721516A2

BRPI0721516A2 - derivados de quinolina como ligantes de receptor crth2

Info

Publication number: BRPI0721516A2
Application number: BRPI0721516-9A
Authority: BR
Inventors: Nicholas Charles Ray; Harry Finch; Michael Colin Cramp; Rosa Arienzo; George Hynd; Peter Crackett; Yann Griffon; Trevor Keith Harrison; John Gary Montana
Original assignee: Argenta Discovery Ltd
Priority date: 2007-03-29
Filing date: 2007-03-29
Publication date: 2013-01-15
Also published as: US20100144786A1; NO20093040L; CN101715441A; WO2008119917A1; EA200970894A1; CA2680636A1; EP2129661B1; AU2007350688B2; AU2007350688A1; MX2009010376A; JP2010522731A; EP2129661A1; IL201012A0; ATE544751T1

Abstract

DERIVADOS DE QUINOLINA COMO LIGANTES DE RECEPTOR DE CRTH2. Derivados de quinolina específicos são antagonistas de CRTH2, úteis no tratamento de condições tendo um componente inflamatório.

Description

DERIVADOS DE QUINOLINA COMO LIGANTES DE RECEPTOR DE CRTH2 A presente invenção refere-se a compostos de quinolina específicos que são ligantes do receptor CRTH2 (Molécula homóloga de receptor quimioatraente expressa em células T auxiliares tipo 2), e seu uso no tratamento de doenças responsivas à modulação de atividade de receptor de CRTH2, principalmente doenças com um componente inflamatório significativo.

Antecedentes da invenção

Mastócitos são conhecidos por desempenharem um papel importante em respostas alérgicas e imunes através da liberação de diversos mediadores, como histamina, leucotrienos, citocinas, prostaglandina D2, etc. (Boyce; Allergy Asthma Proc., 2004, 25, 27-30). Prostaglandina D2 (PGD2) é o principal metabólito produzido pela ação de ciclooxigenase em ácido aracadônico por mastócitos em resposta ao desafio de alérgeno (Lewis e outros; J. Immunol., 1982, 129, 1627-1631). Foi mostrado que a produção de PGD2 é aumentada em pacientes com mastocitose sistêmica (Roberts; N. Engl. J.Med., 1980, 303, 1400-1404), rinite alérgica (Naclerio e outros; Am. Ver. Respir. Dis., 1983, 128, 597-602; Brown e outros; Arch. Otolarynol. Head Neck Surg., 1987, 113, 179-183; Lebel e outros; J. Allergy Clin. Immunol., 1988, 82, 869-877), asma bronquial (Murray e outros; N. Engl. J- Med., 1986, 315, 800-804; Liu e outros; Am. Ver. Respir. Dis., 1990, 142, 126-132; Wenzel e outros; J. Allergy Clin. Immunol., 1991, 87, 540-548), e urticária (Heavey e outros; J. Allergy Clin. Immunol., 1986, 78, 458-461). PGD2 media seus efeitos através de dois receptores, o receptor PGD2 (ou DP) (Boie e outros; J. Biol. Chem., 1995, 270, 18910-18916) e a molécula homóloga de receptor quimioatraente expressa em Th2 (ou CRTH2) (Nagata e outros; J. Immunol., 1999, 162, 1278-1289; Powell; Prostaglandins Luekot. Essent. Fatty Acids, 2003, 69, 179-185). Portanto, foi postulado que agentes que antagonizam os efeitos de PGD2 em seus receptores podem ter efeitos benéficos em diversos estados de doença.

0 receptor CRTH2 foi mostrado como sendo expresso em tipos de células associados à inflamação alérgica, como basófilos, eosinófilos, e as células auxiliares imunes tipo Th2 (Hirai e outros; J. Exp. Med., 2001, 193, 255-261). 0 receptor CRTH2 foi mostrado como mediando migração de células mediadas por PGD2 nesses tipos de células (Hirai e outros; J. Exp. Med., 2001, 193, 255-261), e também desempenhando um papel principal em recrutamento de células de neutrófilo e eosinófilo em um modelo de dermatite de contato (Takeshita e outros; Int. Immunol., 2004, 16, 947- 959). Ramatroban {(3R) -3-[(4-fluorofenil)sulfonil-amino]- 1,2,3,4-tetraidro-9H-carbazol-9-ácido propanóico}, um

antagonista receptor A2 tromboxano e CRTH2 dual, foi mostrado como atenuando essas respostas (Sugimoto e outros; J. Pharmacol. Exp. Ther., 2003, 305, 347-352; Takeshita e outros; op. cit.). 0 potencial de PGD2 tanto para aumentar inflamação alérgica como induzir uma resposta inflamatória foi demonstrado em camundongos e ratos. Camundongos transgênicos que superexpressam PGD2 sintase apresentam eosinofilia pulmonar aumentada e niveis aumentados de citocinas Th2 em resposta ao desafio alergênico (Fujitani e outros; J. Immunol., 2002, 168, 443-449). Além disso, agonistas CRTH2 exogenamente administrados intensificam a resposta alérgica em camundongos sensibilizados (Spik e outros; J. Immunol., 2005, 174, 3703-3708). Em ratos agonistas CRTH2 exogenamente aplicados causam eosinofilia pulmonar porém um agonista DP (BW 245C) ou um agonista TP (I-BOP) não mostraram efeito (Shirashi e outros; J. Pharmacol. Exp. Ther., 2005, 312, 954-960). Essas 10

observações sugerem que antagonistas de CRTH2 podem ter propriedades valiosas para o tratamento de doenças mediadas por PGD2.

O pedido de patente internacional copendente dos requerentes, PCT/GB2006/003644 descreve o uso, para a fabricação de um medicamento para uso no tratamento de condições responsivos à modulação de atividade de receptor de CRTR2, de um composto da fórmula [1] ou um sal farmaceuticamente aceitável, N-óxido, hidrato ou solvato dos mesmos:

R1 .ISL 'Ί ^R5 ι B R4 I Y

15

20

25

independentemente Ci-C6 total ou

[1]

onde

R1, R2, R3, R4 e R5 são hidrogênio, alquila Ci-Cg, alquila parcialmente fluorada, ciclopropila, halo, -S(O)nR6, SO2NR7R8, -NR7R8, -NR7C(O)R6, -CO2R7, -C(O)NR7R8, -C(O)R6,

-NO2, -CN ou -OR9;

em que cada R6 é independentemente alquila Ci-C6, alquila C1-C6 total ou parcialmente fluorada, cicloalquila,

arila ou heteroarila;

R7, R8 são independentemente alquila Ci-C6, alquila C1-C6 total ou parcialmente fluorada, cicloalquila, cicloalquila-Ulquila-C1-C6)-, arila, heteroarila ou hidrogênio;

R9 é hidrogênio, alquila C1-C6, alquila C1-C6 total ou parcialmente fluorada, cicloalquila, cicloalquila-

Ulquila-C1-C6)-, ou um grupo -SO2R6; A é -CHR10-, -C(O)-, -S(O)n-, "O", ou -NR10-, em que η é um número inteiro de 0-2 e R10 é hidrogênio, alquila Ci-C3, ou grupo de alquila Ci-C3 total ou

parcialmente fluorado;

B é uma ligação direta, ou um radical divalente selecionado entre -CH2-, -CH2CH2-, -CHR11-, -CR11R12-, CH2CHR11- em qualquer orientação, -CH2CR11R12- em qualquer orientação, -CHRnCHR12- em qualquer orientação, e radicais di valentes da fórmula -(CR11R12)p-Z- em que Z é ligado ao anel que contém R1, R2 e R3, em que

R11 é alquila C1-C3, ciclopropila, ou alquila C1-C3

total ou parcialmente fluorada;

R12 é metila ou metila total ou parcialmente

fluorada;

P é independentemente 1 ou 2; e

Z é -0-, -NH-, ou -S(O)n-, em que η é um número

inteiro de 0-2;

X é um grupo ácido carboxilico, tetrazol, 3-

hidroxiisoxazol, ácido hidroxâmico, fosfinato, fosfonato,

fosfonamida, ou de ácido sulfônico, ou um grupo da fórmula

C ( = 0) NHSO2R6 ou SO2NHC (=0) R5;

Y é grupo arila, heteroarila, arila-fundida- heterocicloalquila, heteroarila-fundida-cicloalquila,

heteroarila-fundida-heterocicloalquila ou arila-fundida- cicloaIquiIa.

Descrição detalhada da invenção

A presente invenção provê um grupo de compostos específicos da mesma classe estrutural que aqueles com os quais o pedido copendente dos requerentes PCT/GB2006/003644 mencionado acima se refere, porém não especificamente

revelado no mesmo.

A invenção provê um composto selecionado do grupo

que consiste em: ácido [3-(4-cianobenzil)-4-difluorometóxi-2-

etila-8-fluoroquinolin-5-ilóxi]acético,

ácido [3-(4-bromobenzil)-4-difluorometóxi-2-

etila-8- fluoroquinolin-5-ilóxi]acético,

ácido [4-etil-8-flúor-3-(4-metanossulfonil

benzil)-2-metilquinolin-5-ilóxi]acético,

ácido [2-etil-8-flúor-3-(4-metanossulfonil

benzil)-4-metilquinolin-5-ilóxi]acético,

ácido [4-difluorometóxi-2-etil-8-flúor-3- (4-

metóxi carbonilaminobenzil) quinolin-5-ilóxi]acético,

ácido [4-difluorometóxi-2-etil-8-flúor-3-(3-

metanossulfonil benzil)quinolin-5-ilóxi] acético,

ácido (S)-2-[3-(4-clorobenzil)-4-difluorometóxi- 2-etil-8-fluoroquinolin-5-ilóxi]propiônico,

ácido {4-difluorometóxi-2-etil-8-flúor-3-[4-(1-

hidróxi-l-metiletil) benzil] quinolin-5-ilóxi}acético,

ácido [8-cloro-3-(4-cianobenzil)-4-

difluorometóxi-2-etilquinolin-5-ilóxi]acético,

ácido [8-cloro-3-(2-cloro-4-cianobenzil)-4-

difluorometóxi-2-etil quinolin-5-ilóxi]acético,

ácido [8-cloro-3-(4-cianobenzil)-2-

difluorometóxi-4-metil quinolin-5-ilóxi]acético,

ácido [3-(4-cianobenzil)-2-difluorometóxi-8-

flúor-4-metil quinolin-5-ilóxi]acético,

E sais, N-óxidos, hidratos e solvatos dos mesmos. Os compostos com os quais a invenção se refere

são antagonistas de receptor CRTH2.

Um segundo aspecto da invenção é um método de tratamento de condições responsivas à modulação de atividade de receptor CRTH2, compreendendo administrar a um paciente que sofre de tal doença, uma quantidade eficaz de um composto da invenção, ou um sal f armaceuticamente aceitável, N-óxido, hidrato ou solvato do mesmo. Os exemplos de tais doenças incluem asma, rinite, alergia respiratória, rinobronquite alérgica, bronquite, doença pulmonar obstrutiva crônica (COPD), polipose nasal, sarcoidose, pulmão do fazendeiro, pulmão fibróide, fibrose cística, tosse crônica, conjuntivite, dermatite atópica, doença de Alzheimer, esclerose lateral amiotrófica, complexo demencial da AIDS, doença de Huntington, demência frontotemporal, demência de corpo de Lewy, demência vascular, sindrome de Guillain-Barre, polirradiculo- neuropatia desmielinizante crônica, neuropatia motora multifocal, plexopatia, esclerose múltipla,

encefalomielite, panencefalite, degeneração cerebelar e encefalomietile, trauma do Sistema Nervoso Central, enxaqueca, derrame, artrite reumatóide, espondilite ancilosante, doença de Behcet, bursite, sindrome do túnel de carpo, doença inflamatória do intestino, doença de Crohn, colite ulcerativa, dermatomiosite, Sindrome Ehlers- Danlos (EDS), fibromialgia, dor miofacial, osteoartrite (OA), oesteonecrose, artrite psoriática, sindrome de Reiter (artrite reativa), sarcoidose, escleroderma, Sindrome de Sjogren, doença de tecido mole, Doença de Still, tendinite, poliarterite nodosa, Granulomatose de Wegener, miosite (dermatomiosite polimiosite), gota, aterosclerose, lupus eritematoso, lupus eritematoso sistêmico (SLE), diabetes tipo I, sindrome nefritica, glomerulonefrite, insuficiência renal aguda e crônica, fascite eosinofilia, sindrome IgE hiper, sepse, choque séptico, lesão de reperfusão isquêmiça no coração, rejeição ao aloenxerto após transplantes, e doença de enxerto versus hospedeiro.

Entretanto, os compostos com os quais a invenção se refere são principalmente de valor para o tratamento de asma, doença pulmonar obstrutiva crônica, rinite, alergia respiratória, ou rinobronquite alérgica. Psoriase, dermatite atópica e não atópica, doença de Crohn, colite ulcerativa e doença do intestino irritável são outras condições especificas onde os presentes compostos podem ter

utilidade especifica.

Como utilizado aqui, o termo "sal" inclui adição de base, adição de ácido e sais quaternários. Os compostos da invenção que são acidicos podem formar sais, incluindo sais farmaceuticamente aceitáveis com bases como hidróxidos de metal alcalino, por exemplo, hidróxidos de sódio e potássio; hidróxidos de metal alcalino terroso, por exemplo, hidróxidos de cálcio, bário e magnésio; com bases orgânicas, por exemplo, N-metil-D-glucamina, coline tris(hidróxi metil) amino-metano, L-arginina, L-lisina, N- etil piperidina, dibenzil amina e similar. Sais específicos com bases incluem os sais de benzatina, cálcio, diolamina, meglumina, olamina, potássio, procaína, sódio, trometamina e zinco. Aqueles compostos da invenção que são básicos podem formar sais, incluindo sais farmaceuticamente aceitáveis com ácidos inorgânicos, por exemplo, com ácidos hidroálicos como ácidos clorídricos ou bromídricos, ácido sulfúrico, ácido nítrico ou ácido fosfórico e similar, e com ácidos orgânicos, por exemplo, com ácidos acético, tartárico, succínico, fumárico, maléico, málico, salicílico, cítrico, metanosulfônico, p-toluenosulfônico, benzóico, benzeno sulfônico, glutâmico, láctico e mandélico e similar. Onde um composto contém um grupo de amônio quaternário contra-íons aceitáveis podem ser, por exemplo, cloretos, brometos, sulfatos, metanosulfonatos,

benzenosulfonatos, toluenosulfonatos (tosilados),

napadisilatos (naftaleno-1,5-disulfonatos ou naftaleno-1- (ácido sulfônico) -5-sulfonatos), edisilatos (etano-1,2- disulfonatos ou etano-1-(ácido sulfônico)-2-sulfonatos), isetionatos (2-hidróxi etil sulfonatos), fosfatos, acetatos, citratos, lactatos, tartratos, mesilatos, maleatos, malatos, fumaratos, succinatos, xinafoatos, ρ- acetamidobenzoatos e similar; em que o número de espécies de amônio quaternário equilibra o sal farmaceuticamente aceitável de tal modo que o composto não tem carga liquida.

0 uso de pró-medicamentos, como ésteres, de compostos com os quais a invenção se refere também faz parte da invenção. "Pró-medicamento" significa um composto que é convertivel in vivo por meio metabólico (por exemplo, por hidrólise, redução ou oxidação) em um composto da

fórmula (I). Por exemplo, um pró-medicamento de éster de um composto da fórmula (I) pode ser convertivel por hidrólise in vivo na molécula de origem. Ésteres apropriados de compostos da fórmula (I) são, por exemplo, acetatos, citratos, lactatos, tartratos, malonatos, oxalatos,

salicilatos, propionatos, succinatos, fumaratos, maleatos, metileno-bis-p-hidróxi naftoatos, gentisatos, isetionatos, di-p-toluoil tartratos, metanosulfonatos, etanosulfonatos, benzenosulfonatos, p-tolueno-sulfonatos, cicloexil

sulfamatos e quinatos. Os exemplos de pró-medicamentos de

éster são aqueles descritos por F.J. Leinweber, Drug Metab. Res., 1987, 18, 379. Como utilizado na presente invenção, referências aos compostos da fórmula (I) pretendem incluir também as formas de pró-medicamento. Composições

Como mencionado acima, os compostos com os quais a invenção diz respeito são antagonistas de receptor CRTH2, e são úteis no tratamento de doenças que se beneficiam dessa modulação. Os exemplos de tais doenças são mencionados acima, e incluem asma, rinite, alergia

respiratória e rinobronquite alérgica.

Será entendido que o nivel de dose especifica para qualquer paciente em particular dependerá de uma variedade de fatores incluindo a atividade do composto especifico empregado, idade, peso corporal, saúde geral, sexo, dieta, horário de administração, via de administração, taxa de excreção, combinação de droga e a gravidade da doença especifica sendo submetida ao tratamento. Niveis ótimos de dose e freqüência de dosagem serão determinados por experimento clinico, como exigido na técnica farmacêutica. Em geral, a faixa de dose diária estará situada na faixa de aproximadamente 0,001 mg a aproximadamente 100 mg por kg de peso corporal de um mamífero, freqüentemente 0,01 mg a aproximadamente 50 mg por kg, por exemplo, 0,1 a 10 mg por kg, em dose única ou doses divididas. Por outro lado, pode ser necessário utilizar dosagens fora desses limites em alguns casos.

Os compostos com os quais a invenção se refere podem ser preparados para administração por qualquer via compatível com suas propriedades farmacocinéticas. Composições administradas por via oral podem estar na forma de tabletes, cápsulas, pós, grânulos, pastilhas, preparados líquido ou gel, como soluções ou suspensões parenterais oral, tópica ou estéril. Tabletes e cápsulas para administração oral podem estar em forma de apresentação de dose unitária, e podem conter excipientes convencionais como agentes aglutinantes, por exemplo, xarope, acácia, gelatina, sorbitol, tragacanto ou polivinil-pirrolidona; materiais de enchimento, por exemplo, lactose, açúcar, amido de milho, fosfato de cálcio, sorbitol ou glicina; lubrificante de formação de tablete, por exemplo, estearato de magnésio, talco, polietileno glicol ou sílica; desintegrantes por exemplo, amido de batata, ou agentes umectantes aceitáveis como lauril sulfato de de sódio. Os tabletes podem ser revestidos de acordo com métodos bem conhecidos na prática farmacêutica normal. Preparações líquidas orais podem estar na forma, por exemplo, de suspensões oleosas ou aquosas, soluções, emulsões, xaropes ou elixires, ou podem ser apresentados como um produto seco para reconstituição com água ou outro veículo apropriado antes do uso. Tais preparações líquidas podem conter aditivos convencionais como agentes de suspensão, por exemplo, sorbitol, xarope, metil celulose, xarope de glicose, gorduras comestíveis hidrogenadas de gelatina; agentes emulsificantes, por exemplo, lecitina, monooleato de sorbitano ou acácia; veículos não aquosos (que podem incluir óleos comestíveis) , por exemplo, óleo de amêndoa, óleo de coco fracionado, ésteres oleosos como glicerina, propileno glicol, ou álcool etílico; preservativos, por exemplo, p-hidróxi benzoato de metila ou propila ou ácido sórbico, e se desejado, agentes corantes ou aromatizantes

convencionais.

Para aplicação tópica na pele, a droga pode ser feita em um creme, loção ou unguento. Formulações de creme ou unguento que podem ser utilizadas para a droga são formulações convencionais bem conhecidas na técninca, por exemplo, como descrito em livros de farmacêutica padrão

como British Pharmacopoeia.

A droga também pode ser formulada para inalação, por exemplo, como um spray nasal, ou inaladores de aerossol ou pó seco. Para distribuição por inalação, o composto ativo tem preferivelmente a forma de micropartículas. Podem ser preparadas por uma variedade de técnicas, incluindo, secagem por pulverização, liofilização e micronização. A geração de aerossol pode ser realizada utilizando, por exemplo, atomizadores a jato acionados por pressão ou atomizadores ultra-sônicos, preferivelmente utilizando aerossóis dosados acionados por propelente ou administração isenta de propelente de compostos ativos micronizados, por exemplo, de cápsulas de inalação ou outros sistemas de distribuição de "pó seco".

0 ingrediente ativo pode ser também administrado por via parenteral em um meio estéril. Dependendo do veiculo e concentração utilizada, a droga pode ser suspensa

ou dissolvida no veiculo. Vantajosamente, adjuvantes como um anestésico local, preservativo e agentes de tamponamento podem ser dissolvidos no veiculo.

Outros componentes podem ser combinados com compostos da presente invenção para a prevenção e

tratamento de doenças mediadas por prostaglandina. Desse modo, a presente invenção também se refere a composições farmacêuticas para evitar e tratar doenças mediadas por PGD2 compreendendo uma quantidade terapêutica eficaz de um composto da invenção e um ou mais outros agentes

terapêuticos. Agentes terapêuticos apropriados para uma terapia de combinação com compostos da invenção incluem, porém não são limitados a: (1) corticosteróides, como fluticasona, budesonida ou ciclesonida; (2) agonistas de adrenoreceptor~P2, como salmeterol, formeterol ou

indacaterol; (3) moduladores de leucotrieno, por exemplo, antagonistas de leucotrieno como montelukast ou pranlukast ou inibidores de biossintese de leucotrieno como Zileuton ou BAY-xl005; (4) agentes anticolinérgicos, por exemplo, antagonistas de receptor muscarinic-3 (M3) como brometo de

tiotrópio; (5) inibidores de fosfodiesterease-IV (PDE-IV), como roflumilast ou cilomilast; (6) anti-histaminas, por exemplo, antagonistas de receptor de histamina-1 (Hl) seletivos, como loratidina ou astemizol; (7) agentes antitussivos, como codeina ou dextrametorfan; (8)

inibidores de COX-I / COX-2 não seletivos, como ibuprofen ou cetoprofen; (9) inibidores de COX-2, como celecoxib e rofecoxib; (10) antagonistas de VLA-4, como aqueles descritos em W097/03094 e W097/02289; (11) inibidores de TNF-α, por exemplo, anticorpos monoclonais anti-TNF, como Remicade e CDP-870 e moléculas de imunoglobulina de receptor de TNF, como Enbrel; (12) inibidores de metaloprotease de matriz (MMP), por exemplo MMP8, 9 e 12; (13) inibidores de elastase de neutrófilo humano, como aqueles descritos em W02005/026124 e W02003/053930; (14) agonistas de Adenosina A2a como aqueles descritos em EP10522 64 e EP1241176 (15) antagonistas de Adenosina A2b como aqueles descritos em W02002/42298; (16) moduladores de função de receptor de quimiocina, por exemplo, antagonistas de CCR3 e CCR8; (17) compostos que modulam a ação de outros receptores prostanóide, por exemplo, um antagonista de receptor de PGD2 (DP) ou um antagonista de tromboxano A2; e (18) compostos que modulam a função Th2, por exemplo,

agonistas de PPAR.

A razão em peso do composto da invenção para o segundo ingrediente ativo pode ser variada e dependerá da dose efetiva de cada ingrediente. Geralmente, uma dose efetiva de cada será utilizada.

Os exemplos a seguir descrevem a preparação de

compostos da invenção:

Exemplos

A invenção será descrita agora com referência aos seguintes exemplos. Será reconhecido que a invenção é descrita como exemplo somente e modificação de detalhe pode ser feita sem se afastar do escopo da invenção.

Espectros de 1H NMR foram registrados em temperatura ambiente utilizando um espectrômetro Varian Unity Inova (400MHz) com um espectrômetro de sonda de 5 mm de ressonância tripla. Deslocamentos químicos são expressos em ppm em relação à tetrametil silano. As seguintes abreviaturas foram utilizadas: br s = singleto amplo, s = singleto, d = par, dd = par duplo, t = tripleto, q = quarteto, m = multipleto.

Experimentos de Espectrometria de massa (LCMS) para determinar tempos de retenção e ions de massa associados foram realizados utilizando os seguintes métodos:

Método A: experimentos foram realizados em um espectrômetro Micromass Platform LCT com eletropulverização de ion positivo e detecção de 254 nm UV de comprimento de onda único utilizando uma coluna de 100 χ 3,0 mm 5 μπι C18 Higgins Clipeus e uma taxa de fluxo de 2 mL/minuto. 0 sistema de solvente inicial foi de 95% de água contendo 0,1% de ácido fórmico (solvente A) e 5% de acetonitrila contendo 0,1% de ácido fórmico (solvente B) para o primeiro minuto seguido por um gradiente até 5% de solvente A e 95% de solvente B durante os próximos 14 minutos. 0 sistema de solvente final foi mantido constante por um período adicional de 2 minutos.

Método B: os experimentos foram realizados em um espectrômetro Micromass Platform LC com eletropulverização de íons positivos e negativos e detecção de conjunto de diodo/ELS utilizando uma coluna 30 χ 4,6 mm Phenomenex Luna C18 (2) e uma taxa de fluxo de 2 mL/minuto. 0 sistema de solvente era de 95% de solvente A e 5% de solvente B para o primeiro 0,50 minuto seguido por um gradiente até 5% de solvente A e 95% de solvente B durante os próximos 4 minutos. 0 sistema de solvente final foi mantido constante por um período adicional de 0,50 minuto.

Purificações de HPLC preparativas de fase reversa foram realizadas utilizando fase estacionária de silica ligada C-18 de 7 microns Genesis em colunas com 10 cm de comprimento e 2 cm de diâmetro interno. A fase móvel utilizada foram misturas de acetonitrila e água (ambas tamponadas com 0,1% peso/peso de ácido fórmico) com uma taxa de fluxo de 10 mL por minuto e gradientes típicos de 40 a 90% de modificador orgânico foram elevadas durante 30 a 4 0 minutos. Frações contendo o produto exigido (identificado por análise LC-MS) foram agrupadas, a fração orgânica removida por evaporação, e a fração aquosa restante liofilizada, para fornecer o produto final.

Exemplo 1: ácido [3-(4-cianobenzil)-4-

difluorometóxi-2-etil-8-fluoroquinolin-5-ilóxi]acético.

10

Preparação la: ácido éster metílico de (3-amino-

4-fluorofenóxi) acético.

3-amino-4-fluorofenol (3,0 g) foi adicionado a uma suspensão agitada de hidreto de sódio (60% em óleo, 0, 94 g) em Ν,Ν-dimetil formamida (30 mL) a 0°C. A mistura

foi aquecida à temperatura ambiente por 15 minutos e então resfriada a 0°C e essa mistura foi tratada com éster metílico de ácido bromoacético (3,3 g) . A mistura resultante foi aquecida à temperatura ambiente e então agitada nessa temperatura por 2 horas. A mistura foi

tratada com solução de cloreto de amônio aquosa diluída e extraída com acetato de etila. Os extratos combinados foram lavados com solução de cloreto de sódio aquosa saturada, secos sobre sulfato de magnésio e o solvente removido sob pressão reduzida. A purificação do resíduo por

cromatografia de coluna em sílica gel, eluindo com uma mistura de tolueno, diclorometano e acetato de etila (2:1:0 a 0:1:0 a 0:20:1 por volume) forneceu o composto titular, 2,7 g.

1H NMR (DMS0-D6) : δ (s, 3H) , 4,65 (s, 2H) , 5,15 (br s, 2H) , 6,00 (dt, J = 3,1, 8,8 Hz, 1H) , 6,30 (dd, J = 3,1, 7,6 Hz, 1H), 6,85 (dd, J = 8,8, 11,2 Hz, 1H).

MS: ESI (+ve) (método B) : 200 (M+H)+, tempo de retenção 2,5 min.

Preparação lb: éster etilico de ácido 2-(4- cianobenzil)-3-oxopentanóico.

Uma suspensão de terc-butóxido de potássio (4,7

g) em tetraidrofurano (150 mL) a 0°C foi tratada com uma mistura de terc-butanol (5,0 mL) e éster etilico de ácido

3-oxobutírico (5,0 mL) e a mistura resultante foi agitada em temperatura ambiente por 45 minutos. Δ mistura foi

tratada com uma solução de 4-bromometil benzonitrila (6,9

g) em tetraidrof urano (50 mL) e a mistura resultante foi aquecida a 70°C por 20 horas. A mistura foi resfriada à temperatura ambiente, diluída com água e o tetraidrofurano removido sob pressão reduzida. O resíduo foi diluído com

água, extraído com acetato de etila e os extratos

combinados lavados com solução de cloreto de sódio aquosa saturada e então secos sobre sulfato de magnésio. O solvente foi removido sob pressão reduzida e o resíduo triturado com éter dietílico para fornecer o composto

titular como um sólido quase branco, 2,9 g.

MS: ESI (+ve) (Método B) : 260 (M+H)+, tempo de

retenção 3,2 min.

Preparação lc: éster metílico de ácido [3-(4- cianobenzil)-2-etil-8-flúor-4-hidróxi quinolin-5-

ilóxi]acético.

Uma mistura de éster metílico de ácido (3-amino-

4-fluorofenóxi) acético (0,90 g) , éter etilico de ácido 2- (4-cianobenzil)-3-oxopentanóico (1,2 g) , ácido polifosfórico (5,0 g) e 1,4-dioxano (30 mL) foi aquecida a IOO0C por 18 horas. A mistura foi resfriada à temperatura ambiente, diluída com água e extraída com acetato de etila. Os extratos combinados foram lavados com água, secos sobre sulfato de magnésio e concentrados sob pressão reduzida. A

purificação do resíduo por cromatografia de coluna em sílica gel, eluindo com uma mistura de cicloexano e acetato de etila forneceu o composto titular, 0,18 g.

MS: ESI (+ve) (Método B) : 395 (M+H)+, tempo de retenção 2,9 min.

Preparação ld: éster metílico de ácido [3 — (4 — cianobenzil)-4-difluorometóxi-2-etila-8-fluoroquinoIin-5- ilóxi]acético.

Uma mistura de éster metílico de ácido [3— (4 — cianobenzil)-2-etila-8-flúor-4-hidróxi quinolin-5-

ilóxi]acético (0,17 g) , Ν,Ν-dimetil formamida (5,0 mL) , carbonato de potássio (0,090 g) e éster clorodifluorometil de ácido acético (0,14 mL) , foi agitada a 80°C por 6 horas. A mistura foi resfriada à temperatura ambiente, diluída com água e extraída com acetato de etila e os extratos

combinados secos sobre sulfato de magnésio. 0 solvente foi removido sob pressão reduzida e o resíduo purificado por cromatografia de coluna em sílica gel, eluindo com uma mistura de cicloexano e acetato de etila. Purificação adicional por cromatografia de coluna em sílica gel,

eluindo com uma mistura de diclorometano e acetato de etila forneceu o composto titular, 0,12 g.

1H NMR (CDCl3): δ 1,30 (t, J = 7,5 Hz, 3H) , 2,85 (q, J = 7,5 Hz, 2H) , 3,85 (s, 3h) , 4,45 (s, 2H) , 4,80 (s, 2H) , 6,70 (dd, J = 3,7, 8,7 Hz, 1H) , 7,00 (t, J = 75 Hz,

1H) , 7,20 (d, J = 8,5 Hz, 2H) , 7,30 (dd, J = 8,7, 9,7 Hz, 1H), 7,55 (d, J = 8,5 Hz, 2H).

MS: ESI (+ve) (método B) : 445 (M+H)tempo de retenção 3,6 min.

Preparação le: ácido [3-(4-cianobenzil)-4- difluorometóxi-2-etil-8-fluoroquinolin-5- ilóxi]acético.

Uma solução de éster metílico de ácido [ 3 — (4 — cianobenzil)-4-difluorometóxi-2-etil-8-fluoroquinolin-5- ilóxi]acético (0,12 g) em tetraidrofurano (5,0 mL) foi tratada com 1,0 M de solução de hidróxido de litio aquosa (0,52 mL) e a mistura resultante foi agitada em temperatura ambiente por 1 hora. 0 solvente orgânico foi removido sob pressão reduzida e o pH do resíduo ajustado a 4-5 pela adição de 1,0 M de ácido clorídrico aquoso. A mistura foi extraída com acetato de etila e os extratos combinados secos sobre sulfato de magnésio. 0 solvente foi removido sob pressão reduzida e o resíduo purificado por cromatografia de coluna em coluna C-18, eluindo com uma mistura de água e metanol para fornecer o composto titular, 0,065 g.

1H NMR (CDCl3): δ 1,25 (t, J = 7,4 Hz, 3H) , 2,90 (q, J = 7,4 Hz, 2H) , 4,45 (s, 2H) , 4,85 (s, 2H), 6,75 (dd, J = 3,6, 8,8 Hz, 1H), 6,90 (t, J = 75 Hz, 1H), 7,20 (d, J = 8,5 Hz, 2H) , 7,35 (dd, J = 8,8, 9,6 Hz, 1H) , 7,55 (d, J = 8,5 Hz, 2H) .

MS: ESI (+ve) (método A); 431 (M+H)+, tempo de retenção 10,9 min.

MS: ESI (+ve) (Método B) : 431 (M+H)+, tempo de retenção 3,3 min.

Exemplo 2: ácido [3-(4-bromobenzil)-4-

difluorometóxi-2-etil-8-fluoroquinolin-5-ilóxi]acético. Preparação 2a: éster de etila de ácido 2-(4- bromobenzil)-3-oxopentanóico.

Os compostos titulares foram preparados pelo método da Preparação Ib utilizando éster etilico de ácido

3-oxobutírico e l-bromo-4-bromometil benzeno.

1H NMR (CDCl3): δ 1,05 (t, J = 7,3 Hz, 3H) , 1,25 (t, J = 7,1 Hz, 3H), 2,35 (m, 1H) , 2,60 (m, 1H) , 3,10 (m, 2H) , 3,75 (t, J = 7,6 Hz, 1H) , 4,15 (m, 2H), 7,05 (d, J = 8,5 Hz, 2H), 7,40 (d, J = 8,5 Hz, 2H).

Preparação 2b: éster metilico de ácido [3 — (4 — bromobenzil)-2-etil-8-flúor-4-hidróxi quinolin-5-

ilóxi]acético.

0 composto titular foi preparado pelo método da preparação Ic utilizando éster metilico de ácido (3-amino-

4-fluorofenóxi)acético e éster etilico de ácido 2-(4- bromobenzil)-3-oxopentanóico.

MS: ESI (+ve) (Método B) : 448 (M+H)+, tempo de retenção 3,2 min.

Preparação 2c: éster metilico de ácido [3— (4 —

bromobenzil)-4-difluorometóxi-2-etila-8-fluoroquinolin-5- ilóxi]acético.

Os compostos titulares foram preparados pelo método da preparação Id utilizando éster metilico de ácido [3- (4-bromobenzil)-2-etil-8-flúor-4-hidróxi quinolin-5-

ilóxi]acético e éster de clorodifluorometil de ácido acético. MS: ESI (+ve) (Método B) : 498 (M+H)+, tempo de retenção 4,1 min.

Preparação 2d: ácido [3-(4-bromobenzil)-4- difluorometóxi-2-etil-8-fluoroquinolin-5-ilóxi]acético.

Uma mistura de éster metilico de ácido [3-(4- bromobenzil)4-difluorometóxi-2-etila-8-fluoroquinolin-5- ilóxi]acético (0,20 g) , metanol (8,0 mL) e água (0,32 mL) foi tratada com 5,0 M de solução de hidróxido de litio aquosa (0,40 mL) e a mistura resultante foi agitada em temperatura ambiente por 30 minutos. A mistura foi acidificada pela adição de ácido acético glacial e concentrada sob pressão reduzida. O resíduo foi diluído com água e o precipitado resultante coletado por filtração, lavado com água e então seco para fornecer o composto titular como um sólido amarelo pálido, 0,13 g.

1H NMR (DMS0-d6) : δ 1,20 (t, J = 7,4 Hz, 3H) ,

2,75 (q, J = 7,4 Hz, 2H) , 4,25 (s, 2H) , 4,50 (s, 2H), 6,80

(dd, J = 3,7, 5,1 Hz, 1H) , 7,00 (d, J = 8,5 Hz, 2H) , 7,40 (m, 3H), 7,80 (t, J = 75 Hz, 1H).

MS: ESI (+ve) (Método A): 484 (M+H)+, tempo de retenção 12,7 min.

MS: ESI (+ve) (Método B) : 484 (M+H)+, tempo de retenção 3,8 min.

Exemplos 3 e 4: ácido [4-etil-8-flúor-3-(4- metanossulfonil benzil)-2-metil quinolin-5-ilóxi]acético e ácido [2-etil-8-flúor-3-(4 -metanossulfonil benzil)-4-metil quinolin-5-ilóxi]acético. Preparação 3a e 4a: 3-(4-metanossulfonil benzila) hexano-2,4-diona.

Uma solução de hexano-2,4-diona (3,5 g) em N,N- dimetil formamida (5,0 mL) foi adicionada em gotas durante

um período de 15 minutos a uma suspensão agitada de hidreto de sódio (60 % em óleo, 1,1 g) em Ν,Ν-dimetil formamida (30 mL) a 0°C. A mistura foi aquecida à temperatura ambiente, resfriada a -IO0C e então tratada com uma solução de 1- bromometil-4-metanossulfonil benzeno (8,9 g) em N,N-dimetil

formamida (15 mL). A mistura resultante foi aquecida à temperatura ambiente e então agitada nessa temperatura durante a noite. A mistura foi diluída com 1,0 M de ácido clorídrico aquoso (100 mL) e água (200 mL) e então extraída com acetato de etila. Os extratos combinados foram lavados

com uma solução de cloreto de sódio aquosa saturada, secos sobre sulfato de magnésio e concentrados sob pressão reduzida. A purificação do resíduo por cromatografia de coluna em sílica gel, eluindo com uma mistura de tolueno e acetato de etila (1:0 a 0:1 por volume) forneceu o composto

titular como um óleo incolor, 3,6 g.

MS: ESI (-ve) (Método B) : 281 (M-H)", tempo de

retenção 2,7 min.

Preparação 3b e 4b: 4-etila-8-flúor-3-(4- metanossulfonil benzila)-2-metil quinolin-5-ol e 2-etila-8-

flúor-3-(4-metanossulfonil benzila)-4- metil quinolin-5-ol.

Uma mistura de 3-amino-4-fluorofenol (0,81 g), 3- (4-metanossulfonil benzila) hexano-2,4-diona (1,8 g) e monoidrato de ácido p-toluenossulfônico (0,1 g) , foi aquecida a 150°C por 1,5 horas e então deixada em repouso em temperatura ambiente durante a noite. A mistura foi tratada com uma porção adicional de 3-amino-4-fluorofenol

(0,81 g), aquecida a 150°C por 2 horas e então resfriada à temperatura ambiente. A purificação por cromatografia de coluna em silica gel, eluindo com uma mistura de tolueno e acetato de etila forneceu 4-etila-8-flúor-3-(4- metanossulfonil benzila) 2-metil quinolin-5-ol como um

vidro/goma de cor de mel, 0,22 g e 2-etil-8-flúor-3-(4- metanossulfonil benzila)-4-metil quinolin-5-ol como um vidro/goma de cor de mel, 0,73 g.

4-etila-8-flúor-3-(4-metanossulfonil benzila)-2- metil quinolin-5-ol.

MS: ESI (+ve) (Método B) : 374 (M+H)+, tempo de retenção 2,3 min.

2-etila-8-flúor-3-(4-metanossulfonil benzila)-4- metil quinolin-5-ol. MS: ESI (+ve) (Método B) : 374 (M+H)+, tempo de

retenção 2,4 min.

Preparação 3c: éster metílico de ácido [4-etila- 8-flúor-3-(4-metanossulfonilbenzila)-2-metil quinolin-5- ilóxi]acético.

Uma solução de 4-etil-8-flúor-3-(4-

metanossulfonilbenzila)-2-metil quinolin-5-ol (0,22 g) em N,N-dimetil formamida (4,0 mL) foi tratada com carbonato de potássio (0,12 g) e éster metílico de ácido bromoacético (0,078 mL) e a mistura resultante foi agitada em temperatura ambiente por 2 horas. A mistura foi diluída com

água, extraída com acetato de etila e os extratos combinados foram lavados com solução de cloreto de sódio aquosa saturada e então seco sobre sulfato de magnésio. 0 solvente foi removido sob pressão reduzida e o resíduo purificado por cromatografia de coluna em sílica gel, eluindo com uma mistura de cicloexano e acetato de etila (1:0 a 0:1 por volume) para fornecer o composto titular como uma goma de cor de mel, 0,083 g.

1H NMR (CDCl3): δ 1,25 (t, J = 7,2 Hz, 3H) , 2,65 (s, 3H) , 3,05 (sr 3H), 3,35 (q, J = 7,2 Hz, 2H) , 3,85 (s, 3H) , 4,40 (s, 2H), 4,75 (s, 2H) , 6,65 (dd, J = 4,0, 8,7 Hz, 1H), 7,20 - 7,25 (m, 3H), 7,85 (d, J = 8,4 Hz, 2H). Preparação 4c: éster metílico de ácido [2-etila-

8-flúor-3-(4-metanossulfonil benzila)-4-metil quinolin-5- ilóxi]acético.

O composto titular foi preparado pelo método da Preparação 3c utilizando 2-etila-8-flúor-3-(4-

metanossulfonil benzila)-4-metil quinolin-5-ol e éster

metílico de ácido bromoacético.

MS: ESI (+ve) (Método B) : 446 (M+H)+, tempo de retenção 3,6 min.

Preparação 3d: ácido [ 4-etila-8-flúor-3-(4- metanossulfonil benzila) -2- metil quinolin-5-

ilóxi]acético.

Uma solução de éster metílico de ácido [4-etila- 8-flúor-3-(4-metanossulfonil benzila)-2-metila- quinolin-5- ilóxi] acético (0, 080 g) em metanol (5,0 mL) e água (0,50 mL), foi tratada com 5,0 M de solução de hidróxido de lítio

aquosa (0,25 mL) e a solução resultante foi agitada em temperatura ambiente por 2 horas. A mistura foi acidifiçada pela adição de ácido acético glacial, concentrada sob pressão reduzida e então dividida entre acetato de etila e água. A fase orgânica foi seca sobre sulfato de magnésio e

concentrada sob pressão reduzida. O resíduo foi purificado por HPLC de fase reversa preparativa para fornecer o composto titular como um pó amarelo, 0,031 g. 1H NMR (DMS0-d6) : δ 1,10 (t, J = 7,3 Hz, 3H) , 2,50 (s, 3H) , 3,15 (s, 3H) , 3,30 (q, 2H) , 4,35 (s, 2H) , 4,80 (s, 2H) , 6,80 (dd, J = 4,0, 8,7 Hz, 1H) , 7,25 (d, J= 8,3 Hz, 2H), 7,35 (dd, J = 8,7, 10,0 Hz, 1H) , 7,80 (d, J = 8,3 Hz, 2H).

MS: ESI (+ve) (Método A): 432 (M+H)+, tempo de retenção 7,3 min.

MS: ESI (+ve) (Método B) : 432 (M+H)+, tempo de

retenção 2,6 min.

Preparação 4d: ácido [2-etila-8-flúor-3-(4-

metanossulfonil benzila)-4-metil quinolin-5-ilóxi]acético.

Uma solução de 2-etila-8-flúor-3- (4-

metanossulfonil benzila)-4-metil quinolin-5-ol (0,41 g) em metanol (15 mL) e água (1,5 mL) foi tratada com 5,0 M de solução de hidróxido de litio aquosa (0,75 mL) e a solução

resultante foi agitada em temperatura ambiente por 2 horas. A mistura foi acidificada pela adição de ácido acético glacial, concentrada sob pressão reduzida e dividida entre acetato de etila e água. A fase orgânica foi seca sobre sulfato de magnésio e concentrada sob pressão reduzida. O

residuo foi purificado por HPLC de fase reversa preparativa para fornecer o composto titular como um pó branco, 0,082

g·

1H NMR (DMS0-d6) : δ 1,15 (t, J = 7,4 Hz, 3H) ,

2,75 (s, 3H), 2,85 (q, J = 7,4 Hz, 2H), 3,15 (s, 3H), 4,40

(s, 2H) , 4,75 (s, 2H), 6,85 (dd, J = 4,0, 8,7 Hz, 1H) , 7,25

(d, J = 8,4 Hz, 2H), 7,35 (dd, J = 8,7, 10,1 Hz, 1H), 7,80 (d, J = 8,4 Hz, 2H), 13,0 (br s, 1H).

MS: ESI (+ve) (Método A): 432 (M+H)+, tempo de

retenção 10,9 min.

MS: ESI (+ve) (Método B) : 432 (M+H)+, tempo de

retenção 3,3 min.

Exemplo 5: ácido [4-difluorometóxi-2-etila-8- flúor-3-(4-metóxi carbonil amino benzila) quinolin-5- ilóxi]acético.

Preparação 5a: éster metílico de ácido [4- difluorometóxi-2-etila-8-flúor-3-(4-metóxi carbonil amino

benzila) quinolin-5-ilóxi]acético.

Uma mistura de éster metilico de ácido [3 — (4 — bromobenzila)-4-difluorometóxi-2-etila-8-fluoroquinolin-5- ilóxi]acético (0,30 g), éster metilico de ácido carbâmico (0,090 g), dipaládio de tris(dibenzilideneacetona) (0)

(0, 028 g) , Xantphos (0, 052 g) , carbonato de césio (0,43 g) e 1,4-dioxano (3,0 mL) foi aquecida a 100°C por 5 horas. A mistura foi resfriada à temperatura ambiente, diluida com acetato de etila e filtrada através de uma camada de Hi- Fio. 0 solvente foi removido sob pressão reduzida para

fornecer o composto titular como uma goma amarela, 0,46 g.

MS: ESI (+ve) (método B) : 493 (M+H)+, tempo de retenção 3,8 min.

Preparação 5b: ácido [ 4-difluorometóxi-2-etila-8- flúor-3-(4-metóxi carbonil amino benzila) quinolin-5-

ilóxijacético.

Uma solução de éster metilico de ácido [4- difluorometóxi-2-etila-8-flúor-3-(4-metóxi carbonil amino benzila) quinolin-5-ilóxi]acético (0,61 g) em metanol (6,4 mL) e água (0,64 mL) foi tratada com 5,0 M de solução de

hidróxido de litio aquosa (1,6 mL) e a solução resultante foi agitada em temperatura ambiente por 2 horas. A mistura foi acidificada pela adição de ácido acético glacial, concentrada sob pressão reduzida e dividida entre acetato de etila e água. A fase orgânica foi seca sobre sulfato de magnésio e concentrada sob pressão reduzida. 0 residuo foi purificado por HPLC de fase reversa preparativa para

fornecer o composto titular como um sólido amarelo, 0,032

g-

1H NMR: (CDCl3): δ 1,10 (t, J = 7,4 Hz, 3H) , 2,80 (q, J = 7,4 Hz, 2H) , 3,60 (s, 3H) , 4,20 (s, 2H) , 4,85 (s, 2H) , 6, 90 - 6, 95 (m, 3H) , 7,20 (t, J = 75 Hz, 1H) , 7,30 (d,

J = 8,9 Hz, 1H) , 7,45 (dd, J = 8,9, 10,1 Hz, 1H) , 9,50 (s, 1H), 13,00 (br s, 1H).

MS: ESI (+ve) (Método A): 479 (M+H)+, tempo de retenção 10,2 min. MS: ESI (+ve) (Método B) : 479 (M+H)+, tempo de

retenção 3,2 min.

Exemplo 6: ácido [4-difluorometóxi-2-etila- 8- flúor-3- (3-metanossulfonil benzila) quinolin-5-

ilóxi]acético.

20

Preparação 6a: ácido éster etilico de 2-(3- metanossulfonil benzila)-3-oxopentanóico.

0 composto titular foi preparado pelo método de Preparação Ib utilizando éster etilico de ácido 3- oxopentanóico e l-bromometil-3-metanossulfonil benzeno.

1H NMR: (CDCl3): δ 1,05 (t, J = 7,3 Hz, 3H) , 1,20 (t, J = 7,1 Hz, 3Η) , 2,40 (m, 1Η) , 2,65 (m, 1Η) , 3,05 (s, 3Η), 3,25 (m, 2Η), 3,80 (t, J = 7,4 Hz, 1Η), 4,15 (m, 2Η), 7, 50 (m, 2Η), 7,80 (m, 2Η) .

Preparação 6b: éster metilico de [2-etila-8- flúor-3- (3-metanossulfonil benzila)-4-oxo-l,4-

diidroquinolin-5-ilóxi] ácido acético.

0 composto titular foi preparado pelo método de Preparação Ic utilizando éster metilico de ácido (3-amino- 5-fluorofenóxi)acético e éster etilico de ácido 2-Ο- ΙΟ metanossulfonil benzila)-3-oxopentanóico.

MS: ESI (+ve) (Método B) : 448 (M+H)+, tempo de retenção 2,6 min.

Preparação 6c: éster metilico de ácido [4- difluorometóxi-2-etila-8-flúor-3-(3-metanossulfonil benzila) quinolin-5-ilóxi]acético.

0 composto titular foi preparado pelo método da Preparação Id utilizando éster metilico de ácido [2-etila- 8-flúor-3-(3-metanossulfonil benzila)-4-oxo-l,4-

diidroquinolin-5-ilóxi] acético e éster clorodifluorometil de ácido acético.

MS: ESI (+ve) (Método B) : 498 (M+H)+, tempo de retenção 3,6 min.

Preparação 6d: ácido [4-difluorometóxi-2-etila-8- flúor-3- (3-metanossulfonil benzila) quinolina-5-

ilóxi]acético.

Uma solução de éster metilico de ácido [4- difluorometóxi-2-etila-8-flúor-3-(3-metanossulfonil benzila) quinolin-5-ilóxi]acético (0,54 g) em metanol (10 mL) foi tratada com 1,0 M de solução de hidróxido de sódio aquosa (6,0 mL) e a solução resultante foi agitada em

temperatura ambiente por 2 horas. A mistura foi concentrada sob pressão reduzida, diluída com água e lavada com diclorometano. A fase aquosa foi acidificada pela adição de 10

15

20

ácido acético glacial, extraída com diclorometano e os extratos combinados secos sobre sulfato de magnésio. O solvente foi removido sob pressão reduzida e o resíduo purificado por HPLC de fase reversa preparativa para fornecer composto titular como um sólido amarelo pálido,

(q, J = 7,4 Hz, 2H) , 3,00 (s, 3H) , 4,45 (s, 2H) , 4,80 (s, 2H) , 6,80 (dd, J = 3,6, 8,7Hz, 1H) , 6,85 (t, J = 75 Hz, 1H), 7,30 (t, J = 9,3 Hz, 1H) , 7,35 (d, J = 7,8 Hz, 1H) , 7,45 (t, J = 7,8 Hz, 1H) , 7,65 (s, IHOf 7,75 (d, J = 7,8 Hz, 1H).

MS: ESI (+ve) (Método A): 484 (M+H)+, tempo de retenção 9,5 min.

Exemplo 7: ácido (S)-2-[3-(4-clorobenzil)-4- difluorometóxi-2-etila-8-fluoroquinolin-5-ilóxi]propiônico.

Preparação 7a éster metílico de ácido (S)-2-(3- amino-4-fluorofenóxi)propiônico.

Uma solução de 3-amino-4-fluorofenol (4,1 g) em Ν,Ν-dimetil formamida (15 mL) foi adicionada em gotas a uma suspensão agitada de hidreto de sódio (60% em óleo, 1,3 g) em N, N-dimetil formamida (35 mL) a 0°C. A mistura foi agitada em temperatura ambiente por 30 minutos, resfriada a 0°C e éster metílico de ácido (R)-2-cloropropiônico (4,0 g) foi adicionada em uma porção. A mistura resultante foi agitada em temperatura ambiente durante a noite, tratada

0,27 g.

1H NMR: (CDCl3): δ 1,25 (t, J = 7,4 Hz, 3H) , 2,85 com solução de cloreto de amônio aquosa saturada e extraída com acetato de etila. Os extratos combinados foram lavados com solução de cloreto de sódio aquosa saturada, secos sobre sulfato de magnésio e concentrados sob pressão reduzida. A purificação do resíduo por cromatografia de

coluna em sílica gel, eluindo com uma mistura de diclorometano e acetato de etila (1:0 a 3:2 por volume) forneceu compostos titulares como óleo dourado, 2,5 g.

1H NMR: (CDCl3): δ 1,55 (d, J = 6,7 Hz, 3H) , 3,75 (s, 3H) , 4,65 (q, J = 6,7 Hz, 1H) , 6,15 (dt, J = 3,0, 8,8

Hz, 1H), 6,35 (dd, J = 3,0, 7,5 Hz, 1H), 6,85 (dd, J = 8,8, 10,6 Hz, 1H) .

Preparação 7b: éster etílico de ácido 2-(4- clorobenzila)-3- oxopentanóico. Uma suspensão de terc-butóxido de potássio (7,8

g) em tetraidrofurano anidro (140 mL) a 0°C foi tratada com uma mistura de terc-butanol (0,3 mL) e éster etílico de ácido 3-oxopentanóico (10 g) . Após agitar em temperatura ambiente por 30 minutos uma solução de l-bromometil-4- clorobenzeno (14 g) em tetraidrofurano (20 mL) foi

adicionada e a mistura resultante agitada em temperatura ambiente por 6 dias. A mistura foi diluída com água, extraída com acetato de etila e os extratos combinados lavados com água e solução de cloreto de sódio aquosa saturada e então secos sobre sulfato de magnésio. O

solvente foi removido sob pressão reduzida e o resíduo purificado por cromatografia de coluna em sílica gel, eluindo com uma mistura de pentano e acetato de etila (1:0 a 10:1 por volume) para fornecer o composto titular como um óleo amarelo, 9,3 g.

Preparação 7c: éster metílico de ácido (S)-2-[3- (4-clorobenzil)-2-etila-8-flúor-4-oxo-l,4-diidroquinolin-5- ilóxi]propiônico. O composto titular foi preparado pelo método da Preparação Ic utilizando éster metilico de ácido (S)-2-(3- amino-4-fluorofenóxi)propiônico e éster etilico de ácido 2- (4-clorobenzila)-3-oxopentanóico.

Preparação 7d: éster metilico de ácido (S)-2-[3- (4-clorobenzila)-4-difluorometóxi-2-etila-8-fluoroquinolin- 5-ilóxi] propiônico.

O composto titular foi preparado pelo método de Preparação Id utilizando éster metilico de ácido (S)-2-[3- (4-clorobenzila)-2-etila-8-flúor-4-oxo-l, 4-diidroquinolin- 5-ilóxi]propiônico e éster clorodifluorometila de ácido acético.

1H NMR: (CDCl3): δ 1,25 (t, J = 7,3 Hz, 3H) , 1,75 (d, J = 6,7 Hz, 3H), 2,85 (m, 2H), 3,75 (s, 3H), 4,20 (d, J = 16 Hz, 1H), 4,50 (d, J = 16 Hz, 1H) , 4,95 (q, J = 6,7 Hz, 1H), 6,60 (dd, J = 3,5, 8,6 Hz, 1H) , 6,80 (dd, J = 69,82 Hz, 1H), 7,00 (d, J = 8,4 Hz, 2H), 7,10 - 7,30 (m, 3H).

Preparação 7e: ácido (S)-2-[3-(4-clorobenzila)-4- difluorometóxi-2-etila-8-fluoroquinolin-5-ilóxi]propiônico.

Uma solução de éster metilico de ácido (S)-2-[3- (4-clorobenzila)-4-difluorometóxi-2-etila-8-fluoroquinolin- 5- ilóxi]propiônico (1,5 g) em solução alcoólica metilada industrial (10 mL) foi tratado com uma solução de hidróxido de sódio (0,32 g) em água (2,0 mL) e a solução resultante foi agitada em temperatura ambiente por 1 hora. A mistura foi dividida entre acetato de etila e 2,0 M de ácido clorídrico aquoso. Δ fase orgânica foi lavada com solução de cloreto de sódio aquosa saturada, seca sobre sulfato de magnésio e concentrada sob pressão reduzida. 0 resíduo foi purificado por cromatografia de coluna em sílica gel, eluindo com uma mistura de tolueno e ácido acético glacial (1:0 a 9:1 por volume) para fornecer o composto titular como um sólido amarelo, 0,89 g. 1H NMR (DMSO-d6) : δ 1,20 (t, J = 7,4 Hz, 3H) , 1,55 (d, J = 6,8 Hz, 3H) , 2,75 (m, 2H) , 4,30 (m, 2H) , 5,10 (q, J = 6,8 Hz, 1H), 6,85 (dd, J = 3,7, 9,0Hz, 1H) , 7,05 (d, J = 8,6 Hz, 2H), 7,25 (dd, J = 72, 79 Hz, 1H), 7,30 (d, J = 8,6 Hz, 2H), 7,50 (dd, J = 9,0, 10,1 Hz, 1H) , 13,30 (br s, 1H).

MS: ESI (+ve) (Método A): 453 (M+H)+, tempo de retenção 12,9 min.

Exemplo 8: ácido {4-difluorometóxi-2-etila-8- flúor-3- [4- (1-hidróxi-l-metiletil) benzila] quinolin-5- ilóxi}acético.

Preparação 8a: éster etilico de ácido 2-(4-acetil benzila)-3-oxopentanóico.

O composto titular foi preparado pelo método de Preparação Ib utilizando éster etilico de ácido 3- oxobutirico e 1-(4-bromometil fenil) etanona.

1H NMR (CDCl3): δ 1,00 (t, J = 7,2 Hz, 3H) , 1,20 (t, J = 7,2 Hz, 3H) , 2,35 (m, 1H) , 2,55 (s, 3H) , 2,60 (m, 1H), 3,20 (m, 2H) , 3,80 (t, J = 7,5 Hz, 1H), 4,15 (m, 2H) , 7,25 (d, J = 8,5 Hz, 2H), 7,85 (d, J = 8,5 Hz, 2H) .

Preparação 8b: éster metilico de ácido [3-(4- acetil benzila)-2-etila-8-flúor-4-oxo-l,4-diidroquinolin-5- ilóxi]acético.

O composto titular foi preparado pelo método da Preparação Ic utilizando éster metilico de ácido (3-amino- 4-fluorofenóxi)acético e éster etilico de ácido 2-(4-acetil benzila)-3-oxopentanóico.

MS: ESI (+ve) (Método B) : 412 (M+H)tempo de retenção 2,9 min.

Preparação 8c: éster metilico de ácido [3-(4- acetil benzila)-4-difluorometóxi-2-etila-8-fluoroquinolin- 5- ilóxi]acético.

O composto titular foi preparado pelo método de Preparação Id utilizando éster metilico de ácido [3-(4- acetil benzila)-2-etila-8-flúor-4-oxo-l,4-diidroquinolin-5- ilóxi]acético e éster clorodifluorometila de ácido acético.

MS: ESI (+ve) (Método B) : 462 (M+H)+, tempo de retenção 4,0 min.

Preparação 8d: ácido [3-(4-acetil benzila)-4- difluorometóxi-2-etila-8-fluoroquinolin-5-ilóxi]acético.

Uma solução de éster metilico de ácido [3-(4- acetil benzila)-4-difluorometóxi-2-etila-8-fluoroquinolin- 5-ilóxi] acético (0,13 q) em metanol (5,0 mL) foi tratada com 1,0 M de solução de hidróxido de litio aquosa (0,54 mL) e a solução resultante foi agitada em temperatura ambiente por 30 minutos. A mistura foi concentrada sob pressão reduzida, diluída com água e acidificada pela adição de 0,1 M de ácido clorídrico aquoso. A mistura foi extraída com acetato de etila e os extratos combinados lavados com solução de cloreto de sódio aquosa saturada e secos sobre sulfato de magnésio. 0 solvente foi removido sob pressão reduzida e o resíduo purificado por cromatografia de coluna em coluna C-18 para fornecer o composto titular, 0,20 g.

1H NMR (CD3OD): δ 1,15 (t, J = 7,5 Hz, 3H) , 2,50 (s, 3H), 2,85 (q, J = 7,5 Hz, 2H) , 4,45 (s, 2H) , 4,85 (s, 2H), 6,90 (dd, J = 3,7, 8,8 Hz, 1H) , 7,15 (t, J = 75 Hz, 1H), 7,20 (d, J = 8,3 Hz, 2H), 7,35 (dd, J = 8,8, 10,0 Hz, 1H), 7,90 (d, J = 8, 3 Hz, 2H) .

MS: ESI (+ve) (Método A): 448 (M+H)+, tempo de retenção 10,4 min.

MS: ESI (+ve) (Método B) : 448 (M+H)+, tempo de retenção 3,7 min.

Preparação 8e: ácido {4-difluorometóxi-2-etila-8- flúor-3-[4-(1-hidróxi-l-metil etila) benzila] quinolin-5- ilóxi}acético.

Uma solução de ácido [3-(4-acetil benzila)-4- difluorometóxi-2-etila-8-fluoroquinolin-5-ilóxi]acético (0, 060 g) em tetraidrofurano (5,0 mL) foi tratada com brometo de metil magnésio (3,0 M em éter dietilico, 0,58 mL) e a mistura resultante foi aquecida em refluxo por 29 horas. A mistura foi resfriada até a temperatura ambiente, diluída com solução de cloreto de amônio aquosa saturada e extraída com acetato de etila. Os extratos combinados foram lavados com solução de cloreto de sódio aquosa saturada, secos sobre sulfato de magnésio e concentrados sob pressão reduzida. O resíduo foi purificado por cromatografia de coluna em coluna C-18 para fornecer o composto titular, 0,011 g.

1H NMR (DMS0-d6) : δ 1,15 (t, J = 7,4 Hz, 3H) , 1,35 (s, 6H) , 2,80 (q, J = 7,4 Hz, 2H) , 4,25 (s, 2H) , 4,45 (s, 2H), 4,85 (s, 1H), 6,80 (dd, J = 3,7, 8,8 Hz, 1H), 6,95 (d, J = 8,3 Hz, 2H) , 7,30 (d, J = 8,3 Hz, 2H) , 7,40 (dd, J = 8,8, 10,1 Hz, 1H), 8,00 (t, J = 75 Hz, 1H).

MS: ESI (+ve) (Método A): 464 (M+H)+, tempo de retenção 10,0 min.

MS: ESI (+ve) (Método B) : 464 (M+H)+, tempo de retenção 3,7 min.

Exemplo 9: ácido [8-cloro-3-(4-cianobenzil)-4- difluorometóxi-2-etil quinolin-5-ilóxi]acético. Preparação 9a: éster metilico de ácido (4-cloro-

3-nitrofenóxi)acético.

Uma mistura de 4-cloro-3-nitrofenol (25 g) , N,N- dimetil formamida (200 mL) , carbonato de potássio (60 g) e

éster metilico de ácido bromoacético (15,5 mL) foi agitada em temperatura ambiente por 2,5 horas. A mistura foi dividida entre acetato de etila e água e a fase aquosa extraída com acetato de etila. Os extratos combinados foram secos sobre sulfato de sódio e o solvente removido sob

pressão reduzida. 0 resíduo foi lavado com éter dietílico para fornecer o composto titular como um sólido branco, 30

g·

1H NMR (CDCl3): δ 3,85 (s, 3H) , 4,70 (s, 2H) , 7,10 (dd, J = 3,0, 8,9 Hz, 1H) , 7,40 (dd, J = 3,0 Hz, 1H), 7,45

(d, J = 8,9 Hz, 1H).

Preparação 9b: éster metilico de ácido (3-amino-

4-clorofenóxi)acético.

Uma solução de éster metilico de ácido (4-cloro- 3-nitrofenóxi)acético (30 g) em metanol (100 mLO foi

adicionada a uma mistura de ferro (26 g) , cloreto de amônio (33 g) e água (400 mL) em temperatura ambiente. A mistura resultante foi aquecida em um banho ultra-sônico a 60°C por 4 horas. A mistura foi basifiçada pela adição de hidróxido de sódio e então extraída com acetato de etila. Os extratos

combinados foram lavados com 1,0 M de ácido clorídrico aquoso e o pH das fases aquosas combinadas foi ajustado para 7-8 pela adição de hidróxido de sódio. 0 precipitado resultante foi coletado por filtração e seco para fornecer o composto titular, 14 g.

1H NMR (DMS0-d6) : δ 3,70 (s, 3h) , 4,60 (s, 2H) , 5,35 (br s, 2H) , 6,10 (dd, J = 3,0, 8,8 Hz, 1H), 6,35 (d, J

= 3,0 Hz, 1H), 7,05 (d, J = 8,8 Hz, 1H).

Preparação 9c: éster metilico de ácido [8-cloro- 3-(4-cianobenzil)-2-etila-4-oxo-l, 4-diidroquinolin-5- ilóxi]acético.

O composto titular foi preparado pelo método da

Preparação Ic utilizando éster metilico de (3-amino-4- clorofenóxi) ácido acético e éster etilico de ácido 2-(4- cianobenzil)-3-oxopentanóico.

MS: ESI (+ve) (método B) : 411 (M+H)+' tempo de retenção 3,3 min.

Preparação 9d: éster metilico de ácido [8-cloro- 3- (4-cianobenzil)-4-difluorometóxi-2etil quinolin-5-

ilóxi]acético.

A uma mistura de éster metilico de ácido [8- cloro-3- (4-cianobenzil) -2-etila-4-oxo-l, 4-diidroquinolin-5-

ilóxi]acético (0,19 g) , N,N-dimetil formamida (5,0 mL) e carbonato de potássio (0,19 g) a -80°C foi adicionado clorodifluorometano (0,4 mL) . 0 frasco foi vedado e a mistura resultante aquecida à temperatura ambiente e então agitada a 40°C por 6 horas. O clorodif luorometano em

excesso foi deixado evaporar e o resíduo dividido entre acetato de etila e solução de cloreto de sódio aquosa saturada. A fase orgânica foi seca sobre sulfato de magnésio e o solvente removido sob pressão reduzida. A purificação do resíduo por cromatografia de coluna em

sílica gel, eluindo com uma mistura de cicloexano e acetato de etila (1:0 a 1:1 por volume) forneceu o composto titular, 0,13 g. MS: ESI (+ve) (Método B) : 461 (M+H)+, tempo de retenção 4,3 min.

Preparação 9e: ácido [8-cloro-3-(4-cianobenzil)- 4-difluorometóxi-2-etil quinolin-5-ilóxi]acético.

Uma solução de éster metílico de ácido [8-cloro- 3-(4-cianobenzil)-4-difluorometóxi-2-etil quinolin-5-

ilóxi]acético (0,13 g) em tetraidrofurano (10 mL) foi tratada com 1,0 M de solução de hidróxido de litio aquosa (0,56 mL) e a mistura resultante foi agitada em temperatura ambiente por 3 horas. A mistura foi concentrada sob pressão reduzida, diluída com água e o pH ajustado para 4-5 pela adição de 0,1 M de ácido clorídrico aquoso. A mistura foi extraída com acetato de etila e os extratos combinados secos sobre sulfato de sódio e então concentrada sob pressão reduzida. O resíduo foi purificado por HPLC de fase reversa preparativa para fornecer o composto titular, 0,087

g·

1H NMR (CDCl3): δ 1,35 (t, J = 7,4 Hz, 3H) , 2,85 (q, J = 7,4 Hz, 2H), 4,35 (s, 2H) , 4,90 (s, 2H), 6,75 (d, J = 8,5 Hz, 1H) , 6,85 (t, J = 76 Hz, 1H) , 7,20 (d, J = 8,2 Hz, 2H) , 7,55 (d, J = 8,2 Hz, 2H) , 7,75 (d, J = 8,5 Hz, 1H) .

MS: ESI (+ve) (Método A): 447 (M+H)+, tempo de retenção 12,0 min.

Exemplo 10: ácido [8-cloro-3-(2-cloro-4- cianobenzil)-4-difluorometóxi-2-etil quinolin-5-

ilóxi]acético. Preparação 10a: éster metílico de ácido 2-(2- cloro-4-cianobenzil)-3-oxopentanóico.

O composto titular foi preparado pelo método de Preparação Ib utilizando éster metilico de ácido 3-

oxopentanóico e 4-bromometil-3-clorobenzonitrila.

MS: ESI (+ve) (Método B) : 280 (M+H)+, tempo de retenção 3,6 min.

Preparação 10b: éster metilico de ácido [8-cloro- 3-(2-cloro-4-cianobenzil)-2-etila-4-hidróxi quinolin-5-

ilóxi]acético.

O composto titular foi preparado pelo método de Preparação Ic utilizando éster metilico de ácido (3-amino- 4-clorofenóxi)acético e éster metilico de ácido 2-(2-cloro- 4-cianobenzil)-3-oxopentanóico.

MS: ESI (+ve) (Método B) : 445 (M+H)+, tempo de retenção 3,6 min.

Preparação 10c: éster metilico de ácido [8-cloro- 3- (2-cloro-4-cianobenzil)-4-difluorometóxi-2-etil quinolin- 5-ilóxi]acético.

O composto titular foi preparado pelo método da Preparação 9d utilizando éster metilico de ácido [8-cloro- 3- (2-cloro-4-cianobenzil)-2-etil-4-hidróxi quinolin-5-

ilóxi]acético e clorodifluorometano. 1H NMR (CDCl3): δ 1,35 (t, J = 7,3 Hz, 3H) , 2,80

(q, J = 7,3 Hz, 2H) , 3,85 (s, 3H) , 4,50 (s, 2H) , 4,85 (s, 2H) , 6,70 (d, J = 8,0 Hz, 1H) , 6,75 (d, J = 8,5 Hz, 1H) , 6,95 (t, J = 75 Hz, 1Η) , 7,35 (dd, J = 1,6, 8,0 Hz, 1Η) , 7,70 (d, J = 1,6 Hz, 1Η), 7,70 (d, J = 8,5 Hz, 1Η).

Preparação 10d: ácido [8-cloro-3-(2-cloro-4- cianobenzil)-4-difluorometóxi-2- etil quinolin-5-

ilóxi]acético.

Uma mistura de éster metilico de ácido [8-cloro- 3-(2-cloro-4-cianobenzil)-4-difluorometóxi-2-etil quinolin- 5-ilóxi]acético (0,22 g), tetraidrofurano (8,0 mL), metanol (1,0 mL) e água (1,0 mL) foi tratada com 1,0 M de solução de hidróxido de litio aquosa (0,90 mL) e a mistura resultante foi agitada em temperatura ambiente por 2 horas. A mistura foi concentrada sob pressão reduzida, diluida com água e o pH ajustado para 4-5 pela adição de 0,1 M de ácido clorídrico aquoso. A mistura foi extraída com acetato de etila e os extratos combinados secos sobre sulfato de magnésio e então concentrados sob pressão reduzida. O resíduo foi purificado por HPLC de fase reversa preparativa para fornecer o composto titular, 0,11 g.

1H NMR (CDCl3): δ 1,35 (t, J = 7,2 Hz, 3H) , 2,80 (q, J = 7,2 Hz, 2H) , 4,45 (s, 2H) , 4,85 (s, 2H), 6,70 (d, J = 8,7 Hz, 1H) , 6,75 (d, J = 8,7 Hz, 1H) , 6,85 (t, J = 75 Hz, 1H) , 7,35 (dd, J = 1,6, 8,0 Hz, 1H) , 7, 70 - 7, 75 (m, 2H) .

MS: ESI (+ve) (Método A): 481 (M+H)+, tempo de retenção 13,0 min.

Exemplo 11: ácido [8-cloro-3-(4-cianobenzil)-2- difluorometóxi-4-metil quinolin-5-ilóxi]acético. Preparação 11a: éster S-terc-butila de ácido 2- (4-cianobenzil)-3-oxotiobutírico.

Uma solução de éster S-terc-butila de 3-ácido oxotiobutirico (5,0 g) em 1,2-dimetóxi etano (20 mL) foi

adicionada a uma suspensão agitada de hidreto de sódio (60% em óleo, 1,2 g) em 1,2-dimetóxi etano (50 mL) a -20°C. A mistura foi aquecida a 0°C por 15 minutos, resfriada a -20°C e então uma solução de 4-bromometil benzonitrila (8,4 g) em 1,2-dimetóxietano (60 mL) foi adicionada em gotas. A

mistura resultante foi aquecida à temperatura ambiente durante 45 minutos e então agitada nessa temperatura por 18 horas. A mistura foi diluída com solução de cloreto de amônio aquosa saturada e as fases separadas. A fase aquosa foi extraída com acetato de etila e as fases orgânicas

combinadas foram secas sobre sulfato de magnésio e concentradas sob pressão reduzida. A purificação do resíduo por cromatografia de coluna em sílica gel, eluindo com uma mistura de cicloexano e acetato de etila (1:0 a 3:2 por volume) forneceu o composto titular, 7,1 g.

1H NMR (CDCl3): δ 1,40 (s, 9H) , 2,25 (s, 3H) , 3,15 (d, J = 8,1 Hz, 1H), 3,20 (d, J = 6,8 Hz, 1H), 3,80 (dd, J = 6,8, 8,1 Hz, 1H), 7,25 (d, J = 8,5 Hz, 2H), 7,55 (d, J = 8,5 Hz, 2H).

Preparação 11b: N-(2-cloro-5-hidróxi fenil) -2- (4-cianobenzil)-3- oxobutiramida.

Trifluoroacetato de prata (1,1 g) foi adicionado a uma solução agitada de 3-amino-4-clorofenol (0,56 g) e éster S-terc-butila de ácido 2-(4-cianobenzil)-3- oxotiobutirico (0,95 g) em 1,2-dimetóxietano (10 mL) em

temperatura ambiente e a mistura resultante foi agitada em temperatura ambiente durante a noite. A mistura foi filtrada através de Hy-Flo, lavando com 1,2-dimetóxietano e então concentrada sob pressão reduzida. 0 residuo foi triturado com diclorometano para fornecer o composto

titular como um sólido marrom, 0,52 g.

MS: ESI (+ve) (Método B) : 343 (M+H)+, tempo de retenção 2,9 min.

Preparação 11c: 4-(8-cloro-2,5-diidroxi-4-metil quinolin-3-il metila) benzonitrila.

Uma mistura de N-(2-cloro-5-hidróxi fenila)-2-(4- ciano benzila)-3-oxobutiramida (0,23 g) , tolueno (20 mL) e monoidrato de ácido tolueno-4-sulfônico (0,26 g) foi aquecida a 120°C por 2 horas. A mistura foi resfriada à temperatura ambiente, diluída com solução de acetato de

sódio aquosa saturada e extraída com acetato de etila. Os extratos combinados foram secos sobre sulfato de magnésio e o solvente removido sob pressão reduzida. 0 resíduo foi triturado com metanol para fornecer o composto como um sólido branco, 0,16 g.

1H NMR (DMS0-d6) : δ 2,60 (s, 3H) , 4,15 (s, 2H) , 6,60 (d, J = 8,7 Hz, 1H) , 7,40 (m,3H), 7,75 (d, J = 8,1 Hz, 2H), 10,4 (br s, 1H).

Preparação lld: éster metílico de ácido [8-cloro- 3-(4-cianobenzil)-2- hidróxi-4- metil quinolin-5-ilóxi]

acético.

0 composto titular foi preparado pelo método da Preparação 3c utilizando 4-(8-cloro-2,5-diidróxi-4-metil quinolin-3-il metila] benzonitrila e éster metílico de ácido bromoacético.

MS: ESI (+ve) (Método B) : 397 (M+H)+, tempo de retenção 3,5 min.

Preparação lie: éster metilico de ácido [8-cloro-

3-(4-cianobenzil)-2-difluorometóxi-4-metil quinolin-5-

ilóxi]acético.

Uma mistura de éster metilico de ácido [8-cloro- 3-(4-ciano benzila)-2-hidróxi-4-metil quinolin-5-

ilóxi]acético (0,079 g), Ν,Ν-dimetil formamida (2,0 mL) e

carbonato de potássio (0,083 g) foi agitada a 40°C por 2,5 horas sob uma atmosfera de clorodifluorometano. A mistura foi diluída com água, extraída com acetato de etila e os extratos combinados secos sobre sulfato de magnésio. 0 solvente foi removido sob pressão reduzida e o resíduo

triturado com metanol para fornecer o composto titular, 0,075 g.

MS: ESI (+ve) (Método B) : 447 (M+H)+, tempo de retenção 4,4 min.

Preparação Ilf: ácido [8-cloro-3-(4-ciano

benzila)-2- difluorometóxi-4- metil quinolin-5-

ilóxi]acético.

Uma solução de éster metílico de ácido [8-cloro- 3-(4-cianobenzil)-2- difluorometóxi-4-metil quinolin-5- ilóxi]acético (0,042 g), em tetraidrofurano (3,0 mL) e água

(0,5 mL) foi tratada com 1,0 M de solução de hidróxido de lítio aquosa (0,34 mL) e a mistura resultante foi agitada em temperatura ambiente por 2 horas. A mistura foi concentrada sob pressão reduzida, diluída com água e o pH ajustado para 4-5 pela adição de 0,1 M de ácido clorídrico

aquoso. A mistura foi extraída com acetato de etila e os extratos combinados secos sobre sulfato de magnésio e então concentrados sob pressão reduzida. 0 resíduo foi purificado por HPLC de fase reversa preparativa para fornecer o composto titular, 0,025 g.

1H NMR (DMSO-d6) : δ 2,80 (s, 3H) , 4,30 (s, 2H) , 4,80 (s, 2H) , 6,95 (d, J = 8,5 Hz, 1H) , 7,30 (d, J = 8,3 Hz, 2H) , 7,70 (d, J = 8,3 Hz, 2H) , 7,75 (d, J = 8,5 Hz,

1H), 7,80 (t, J = 72 Hz, 1H).

MS: ESI (+ve) (Método A): 433 (M+H)+, tempo de retenção 12,0 min.

Exemplo 12: ácido [3-(4-cianobenzil)-2-

difluorometóxi-8-flúor-4-metil quinolin-5-ilóxi]acético.

Preparação 12a: 2-(4-cianobenzil)-N-(2-flúor-5- hidróxi fenil)-3-oxobutiramida.

O composto titular foi preparado pelo método de Preparação Ilb utilizando 3-amino-4-clorofenol e éster de

S-terc-butila de ácido 2-(4-cianobenzil)-3-oxotiobutírico.

MS: ESI (+ve) (Método B) : 327 (M+H)+, tempo de retenção 2,8 min.

Preparação 12b: 4-(8-flúor-2,5-diidróxi-4-metil quinolin-3-il metila) benzonitrila.

O composto titular foi preparado pelo método de Preparação Ilc utilizando 2-(4-cianobenzil)-N-(2-flúor-5- hidróxi fenil)-3-oxobutiramida.

1H NMR (DMS0-d6) : δ 2,60 (s, 3H) , 4,10 (s, 2H) , 6, 50 9dd, J = 4,4, 8,7 Hz, 1H) , 7,15 (m, 1H), 7,40 (d, J = 8,1 Hz, 2Η) , 7,75 (d, J = 8,1 Hz, 2Η) , 10,20 (br s, 1H) , 11,50 (br s, 1H) .

Preparação 12c: éster metílico de ácido [3— (4 — cianobenzil)-8-flúor-2-hidróxi-4-metil quinolin-5-

ilóxi]acético.

O composto titular foi preparado pelo método de Preparação 3c utilizando: 4-(8-flúor-2,5-diidróxi-4-metil quinolin-3-il metila) benzonitrila e éster metilico de ácido bromoacético. MS: ESI (+ve) (Método B) : 381 (M+H)+, tempo de

retenção 3,2 min.

Preparação 12d: éster metilico de ácido [ 3 — (4 — cianobenzil)-2-difluorometóxi-8-flúor-4-metil quinolin-5- ilóxi]acético.

O composto titular foi preparado pelo método de

Preparação lie utilizando: éster metilico de ácido [3 — (4 — cianobenzil)-8-flúor-2-hidróxi-4-metil quinolin-5-ilóxi] acético e clorodifluorometano.

MS: ESI (+ve) (Método B) : 431 (M+H)+, tempo de retenção 4,2 min.

Preparação 12e: ácido [3-(4-cianobenzil)-2- difluorometóxi-8-flúor-4-metil quinolin-5-ilóxi]acético.

Uma solução de éster metilico de ácido [3— (4 — cianobenzil)-2-difluorometóxi-8-flúor-4-metil quinolin-5- ilóxi]acético (0,089 g) em tetraidrofurano (3,0 mL) e água

(1,0 mL) foi tratada com 1,0 M de solução de hidróxido de litio aquosa (0,42 mL) e a mistura resultante foi agitada em temperatura ambiente por 1,5 hora. A mistura foi concentrada sob pressão reduzida, diluída com água e o pH ajustado para 4-5 pela adição de 0,1 M ácido clorídrico

aquoso. A mistura foi extraída com acetato de etila e os extratos combinados secos sobre sulfato de magnésio e então concentrados sob pressão reduzida. 0 resíduo foi purificado por HPLC de fase reversa preparativa para fornecer o composto titular, 0,015 g.

1H NMR (DMSO-d6) : δ 2,85 (s, 3H) , 4,30 (s, 2H) , 4,85 (s, 2H), 6,95 (dd, J = 4,0, 9,0 Hz, 1H), 7,35 (d, J = 8,4 Hz, 2H) , 7,50 (dd, J = 9,0, 9,7 Hz, 1H) , 7,75 (d, J =

8,4 Hz, 2H), 7,85 (t, J = 72 Hz, 1H).

MS: ESI (+ve) (Método A): 417 (M+H)+, tempo de retenção 11,3 min.

Métodos biológicos Os compostos da invenção foram testados

utilizando os seguintes métodos de teste biológico para determinar sua capacidade em deslocar PGD2 a partir do receptor CRTH2 e sua capacidade de antagonizar os efeitos funcionais de PGD2 no receptor CRTH2. Ensaio de ligação do radioligante

O ensaio de ligação de receptor é realizado em um volume final de 200 μΕ de tampão de ligação [10 mM BES (pH 7,4), 1 mM EDTA, 10 mM de cloreto de manganês, 0,01% de BSA] e 1 nM [3HJ-PGD2 (Amersham Biosciences UK Ltd.). Os ligantes são adicionados no tampão de ensaio contendo uma

quantidade constante de DMSO (1% por volume). A ligação total é determinada utilizando 1% por volume de DMSO no tampão de ensaio e a ligação não especifica é determinada utilizando 10 μΜ de PGD2 não rotulado (Sigma) . Membranas de células de rim embriônico humano (HEK) (3,5 μg) expressando

o receptor CRTH2 são incubadas com 1,5 mg de glóbulos de SPA de aglutinina de germe de trigo e 1 nM [3H]-PGD2 (Amersham Biosciences UK Ltd.) e a mistura incubada por 3 horas em temperatura ambiente. [3HJ-PGD2 ligado é detectado utilizando um contador de cintilação liquida TRILUX

Microbeta (Perkin Elmer). 0 valor IC50 do composto é determinado utilizando uma curva de resposta de dose de 6 pontos em duplicata com uma série de diluição de composto semi-log. Cálculos de IC50 são realizados utilizando Excel e XLfit (Microsoft), e esse valor é utilizado para determinar um valor Ki para o composto de teste utilizando a equação Cheng-Prusoff.

Ensaio funcional

Ensaio de GTPyS

O Ensaio de GTPyS é realizado em um volume final de 200 mL de tampão de ensaio (20 mM HEPES pH 7,4, 10 mM MgCl2, 100 mM NaCl, 10 μg/mL de saponina). Concentrações de DMSO são mantidas constantes a 1% por volume. Membranas de células de rim embriônico humano (HEK) (3,5 μς) expressando o receptor CRTH2 são incubadas com os compostos por 15 min. a 30°C antes da adição de PGD2 (concentração final 30 nM) e GTP (concentração final de 10 μΜ) . As soluções de ensaio são então incubadas por 30 minutos a 30°C, seguido pela adição de [35Sj-GTPyS (0,1 nM concentração final). A placa de ensaio é então agitada e incubada por 5 minutos a 30°C. Finalmente, glóbulos de SPA (Amersham Biosciences, UK) são adicionadas a uma concentração final de 1,5 mg/cavidade e a placa agitada e incubada por 30 minutos a 30°C. A placa vedada é centrifugada a 1000 g por 10 min. a 30°C e o [35SJ-GTPyS ligado é detectado no contador de cintilação Microbeta (Perkin Elmer) . 0 valor IC50 do composto é determinado utilizando uma curva de resposta de dose de 6 pontos em duplicata com uma série de diluição de composto semi-log. Cálculos IC50 são executados utilizando Excel e XLfit (Microsoft), e esse valor é utilizado para determinar um valor Ki para o composto de teste utilizando a equação Cheng-Prusoff.

Resultados biológicos:

Os compostos dos Exemplos acima foram testados nos ensaios funcionais de GTPyS e ligação de radioligante CRTH2 descritos acima; os compostos têm todos os valores IC50 menores do gue 1 μΜ nos dois ensaios. Por exemplo, o composto do Exemplo 1 tinha um valor IC50 de 6,1 nM no ensaio de ligação de radioligante CRTH2, e o composto do exemplo 2 tinha um valor IC50 de 7,5 nM nesse ensaio.

Claims

1. Composto caracterizado pelo fato de ser selecionado do grupo que consiste em: ácido [3- (4-cianobenzil)-4-difluorometóxi-2- etila-8-fluoroquinolin-5-ilóxi]acético, ácido [3-(4-bromobenzil)-4-difluorometóxi-2- etila-8- fluoroquinolin-5-ilóxi]acético, ácido [ 4-etil-8-flúor-3-(4-metanossulfonil benzil)-2-metilquinolin-5-ilóxi]acético, ácido [2-etil-8-flúor-3-(4-metanossulfonil benzil)-4-metilquinolin-5-ilóxi]acético, ácido [4-difluorometóxi-2-etil-8-flúor-3-(4- metóxi carbonilaminobenzil) quinolin-5-ilóxi]acético, ácido [4-difluorometóxi-2-etil-8-flúor-3-(3- metanossulfonil benzil)quinolin-5-ilóxi]acético, ácido (S)-2-[3-(4-clorobenzil)-4-difluorometóxi- 2-etil-8-fluoroquinolin-5-ilóxi]propiônico, ácido {4-difluorometóxi-2-etil-8-flúor-3-[4-(1- hidróxi-l-metiletil) benzil] quinolin-5-ilóxi}acético, ácido [8-cloro-3-(4-cianobenzil)-4- difluorometóxi-2-etilquinolin-5-ilóxi]acético, ácido [8-cloro-3-(2-cloro-4-cianobenzil)-4- difluorometóxi-2-etil quinolin-5-ilóxi]acético, ácido [8-cloro-3-(4-cianobenzil)-2- difluorometóxi-4-metil quinolin-5-ilóxi]acético, ácido [3-(4-cianobenzil)-2-difluorometóxi-8- flúor-4-metil quinolin-5-ilóxi]acético, e sais, N-óxidos, hidratos e solvatos dos mesmos.

2. Composto, de acordo com a reivindicação 1, 30 caracterizado pelo fato de ser para uso em terapia.

3. Composição farmacêutica caracterizada pelo fato de compreender um composto conforme a reivindicação 1 e um veiculo farmaceuticamente aceitável.

4. Uso de um composto conforme a reivindicação 1 caracterizado pelo fato de ser para a fabricação de uma composição para o tratamento de asma, doença pulmonar obstrutiva crônica, rinite, alergia respiratória ou rinobronquite alérgica.

5. Uso de um composto conforme a reivindicação 1 caracterizado pelo fato de ser para a fabricação de uma composição para o tratamento de psoriase, dermatite atópica e não atópica, doença de Crohn, colite ulcerativa ou doença de intestino irritável.