BRPI0720135A2

BRPI0720135A2 - molécula de ácido nucleico isolada, vetor, cassete de expressão, célula hospedeira, planta transgênica, semente, molécula de ácido nucleico, vetor, poliptìdeo, método para produzir uma planta com resistência a insetos aumentada, polinucleotìdeo isolado, cassete de expressão recombinante, polipeptìdeo isolado, célula hospedeira transformada, planta transformada, semente transformada

Info

Publication number: BRPI0720135A2
Application number: BRPI0720135-4A
Authority: BR
Inventors: Cerf David; Mcbride Kevin; Yamamoto Takashi; Cong Ruth; Freeman Michael
Original assignee: Pioneer Hi-Bred International, Inc.
Priority date: 2006-12-08
Filing date: 2007-12-10
Publication date: 2012-11-06
Also published as: US8575433B2; MX2009005901A; ZA200903784B; US8686233B2; WO2008073877A9; CN102977196B; CA2672036A1; CN101600801A; AR064216A1; CN101600801B; WO2008073877B1; US20110055968A1; EP2087120A2; US20090226998A1; CN102977196A; US8530411B2; US20080172762A1; CA2672036C; WO2008073877A2; EA200970559A1

Abstract

MOLéCULA DE áCIDO NUCLEICO ISOLADA, VETOR, CASSETE DE EXPRESSãO, CéLULA HOSPEDEIRA, PLANTA TRANSGêNICA, SEMENTE, MOLéCULA DE áCIDO NUCLEICO, VETOR, POLIPEPTìDEO, MéTODO PARA PRODUZIR UMA PLANTA COM RESISTêNCIA A INSETOS AUMENTADA, POLINUCLEOTìDEO ISOLADO, CASSETE DE EXPRESSãO RECOMBINANTE, POLIPEPTìDEO ISOLADO, CéLULA HOSPEDEIRA TRANSFORMADA, PLANTA TRANSFORMADA, SEMENTE TRANSFORMADA. A presente invenção proporciona polipeptídeos inseticidas relacionados a polipeptídeos Cryl de Bacillus thuringiensis embaralhados. São também apresentados ácidos nucléicos que codificam os polipeptídeos da invenção. São englobados, ainda, métodos para uso dos polipeptídeos e ácidos nucléicos da invenção para melhorar a resistência de plantas à predação por insetos.

Description

MOLÉCULA DE ÁCIDO NUCLEICO ISOLADA, VETOR, CASSETE DE EXPRESSÃO, CÉLULA HOSPEDEIRA, PLANTA TRANSGENICA, SEMENTE, MOLÉCULA DE ÁCIDO NUCLEICO, VETOR, POLIPEPTÍDEO, MÉTODO PARA PRODUZIR UMA PLANTA COM RESISTÊNCIA A INSETOS AUMENTADA, POLINUCLEOTÍDEO ISOLADO, CASSETE DE EXPRESSÃO RECOMBINANTE, POLIPEPTÍDEO ISOLADO, CÉLULA HOSPEDEIRA TRANSFORMADA, PLANTA TRANSFORMADA, SEMENTE TRANSFORMADA

Este pedido é um pedido não provisório do pedido da #10 patente Ser. No. 60/873.849, depositada em 8 de dezembro de 2006, conteúdos os quais são aqui incorporados por referência em sua totalidade.

CAMPO DA INVENÇÃO

A presente invenção se refere geralmente ao controle de pragas no campo e provê polipeptídeos inseticidas relacionados aos polipeptídios Cryl de Bacillus thuri e os polinucletideos que os codificam. A presente invenção também se refere aos métodos e composições para alterar a resistência de plantas à predação por insetos incluindo, mas não se limitando a, produção de plantas transgênicas.

FUNDAMENTOS DA INVENÇÃO

Numerosas plantas comercialmente valiosas, incluindo plantas de cultivo agrícola comuns, são suscetíveis a ataques por insetos e nematódeos. Estas pragas podem causar uma redução substancial na produtividade e qualidade das plantas de cultivos. Tradicionalmente, fazendeiros tem contado pesadamente com pesticidas químicos para combater os danos por pragas. Entretanto, o uso de pesticidas químicos possui seus próprios problemas, incluindo o custo e a inconveniência da aplicação dos pesticidas. Além do mais, resíduos químicos causam preocupações ambientais e de saúde. Por isso e outros motivos, existe uma demanda por agentes inseticidas alternativos.

Uma outra abordagem ambientalmente viável para o controle de pragas é o uso das proteínas cristalinas pesticidas derivadas da bactéria de solo Bacillus thuringiensis ("Bt"), normalmente chamadas de "proteínas Cry". As proteínas Cry são moléculas globulares de proteínas que se acumulam como protoxinas em formas cristalinas durante o estágio tardio da esporulação de Bacillus thuringiensis. Após a ingestão pela praga, os cristais são solubilizados para liberar protoxinas no ambiente alcalino do intestino médio da larva. Protoxinas (-13 0 kDa) são convertidas em fragmentos maduros tóxicos (região N terminal de -66 kDa) pelas proteases do intestino. Muitas destas proteínas são muito tóxicas para determinados insetos alvos, mas inofensivas para plantas e outros organismos não atingidos. Algumas proteínas Cry têm sido expressas de forma recombinante em plantas cultivadas para criar plantas transgênicas resistente a pragas. Entre estas, plantas de algodão e milho transgênicos para Bt têm sido amplamente cultivadas.

Um grande número de proteínas Cry tem sido isolado caracterizado e classificado baseado na homologia de seqüência de amino ácidos (Crickmore et al. , 1998, Microbiol. Mol. Biol. Rev., 62: 807-813).Este esquema de classificação estabelece um mecanismo sistemático para nomear e categorizar proteínas Cry recentemente descobertas. A classificação de Cryl é a melhor conhecida e contem a o maior número de genes cry com um total atual de mais de 13 0.

Tem sido geralmente verificado que proteínas Cry individuais possuem spectro de atividade estreito. Por # exemplo, CrylAc foi a primeira toxina a ser utilizada em algodão transgênico para o controle das pragas dos insetos H. virescens e H. zea. Esta toxina é conhecida pelo seu alto nível de toxicidade para H. virescens. Entretanto, ela é levemente deficiente em sua habilidade de controlar H. zea e possui praticamente nenhuma atividade em espécies de Spodoptera. Adicionalmente, a toxina CrylAb possui uma atividade levemente menor em H. zea quando comparado a CrylAc, nas possui uma atividade muito superior contra S. exigua.

Plantas de cultivo transgênicas de segunda geração

poderiam ser mais resistentes a insetos se eles fossem capazes de expressar múltiplos e/ou novos genes Bt. Portanto, novas proteínas inseticidas possuindo um amplo spectro de atividade seriam altamente desejáveis.

RESUMO DA INVENÇÃO

A presente invenção se refere aos polipeptídeos Cry derivados de polipeptídeos de Bacillus thuringiensis (ex. CrylAa, CrylAb, CrylAc, CrylAd, CrylAe, CrylAg, e CrylCa) incluindo, mas não limitado a, os polipeptídeos derivados de Cryl com SEQ ID NOS: 2, 4, 6, 8, 10, 12, 14, 16, 18, 20, 22, 24, 26, e 28. Em adição às seqüências polipeptídicas dos polipeptídeos derivados de Cryl, irá ser notado que polipeptídeos da invenção também incluem variantes destes, incluindo, mas não limitado a, qualquer fragmento incluindo o fragmento maduro da toxina ativado no intestino, análogo, homólogo, alelo de ocorrência natural ou mutante deste. Polipeptídeos da invenção também incluí aqueles peptídeos que são codificados por qualquer ácido nucleico derivado de Cryl da invenção. Em uma concretização, polipeptídeos misturados que possuem ao menos uma atividade funcional de Cryl (ex. atividade inseticida) e são ao menos 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99%, ou 99.5% idênticos à seqüência polipeptídica da porção madura da toxina de qualquer das SEQ ID NOS: 2, 4, 6, 8, 10, 12, 14, 16, 18, 20, 22, 24, 26, 28, ou variantes destes. Em outra concretização, polipeptídeos que possuem ao menos uma atividade funcional de Cryl (ex, atividade inseticida) e são ao menos 99% ou 99.5% idênticos a seqüência polipeptídica da porção madura da toxina de qualquer das SEQ ID NOS: 2, 4, 6, 8, 10, 12, 14, 16, 18, 20, 22, 24, 26, 28, ou variantes destes. Métodos de produção dos polipeptídeos da invenção, ex., por meios recombinantes, são também estabelecidos. Composições compondo um ou mais polipeptídeos da invenção são também incluídas.

A presente invenção também se refere às moléculas de ácidos nucleicos derivados de Cryl de SEQ ID NOS: 1, 3, 5, 7, 9, 11, 13, 15, 17, 19, 21, 23, 25, e 27. Também incluído pela presente invenção são fragmentos e análogos os quais codificam polipeptideos que são ao menos em parte funcionalmente ativos ex. eles são capazes de demonstrar uma ou mais funções conhecidas associadas com o polipeptídeo Cryl de tipo selvagem. Em uma concretização, ele inclui uma molécula misturada de ácido nucleico isolada que é ao menos 9 0%, 91%,92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99%, ou 99.5% idêntica a qualquer uma SEQ ID NOS: 1, 3, 5, 7, 9, 11, 13, 15, 17, 19,21, 23, 25, 27, ou um complementar deste. Em outra ^ concretização, ele inclui uma molécula de ácido nucleico que é ao menos 99% ou 95% idêntico à seqüência polipeptídica da porção madura da toxina de qualquer das SEQ ID NOS: 1, 3, 5,7, 9, 11, 13, 15, 17, 19, 21, 23, 25, 27, ou complementar destes. Vetores constituindo ácidos nucleicos da invenção são também incluídos. Células ou plantas constituindo os vetores da invenção são também incluídas.

A invenção presente também se refere às plantas transgênicas expressando um ácido nucleico e/ou polipeptídeo ^ da invenção. As plantas transgênicas podem expressar o transgene de qualquer modo conhecido na arte incluindo, mas não limitado a, expressão constitutiva, expressão regulada pelo desenvolvimento, expressão tecido-específica, etc. Sementes obtidas de uma planta transgênica da invenção é também incluída.

BREVE DESCRIÇÃO DAS FIGURAS

FIG. 1 mostra a atividade inseticida das variantes isoladas de uma mistura gênica única de CrylAb contra Helicorverpa zea. Cada uma das protoxinas purificadas foi introduzida na dieta de um inseto e a EC50 de cada foi determinada. Os valores de EC5O foram então convertidos para os valores inversos relativos. Ao EC50 de CrylCa tipo selvagem contra H. zea foi atribuído o valor de 1,0. Ao EC50 das protoxinas restantes foi atribuído um valor relativo.

FIG. 2 mostra a comparação da atividade relativa da protoxina codificada pela variante AR6 misturada com aquela do tipo selvagem de CrylAb, CrylAc, e CrylCa em Heliothis virescens, Helicoverpa zea, e Spodoptera exigua. Cada uma das protoxinas codificadas foi introduzida na dieta de um inseto e a EC5O de cada foi determinada. Os valores de EC50 foram então convertidos para os valores relativos invertidos. À protoxina mostrando o menor EC50 (maior atividade específica) para cada tipo de inseto foi atribuído o valor de 1,0. Aos EC50 das protoxinas restantes foi atribuído um valor relativo menor.

FIG. 3 mostra a eficácia relativa das variantes misturadas de CrylCa contra Spodoptera exigua. Cada uma das protoxinas purificadas foi introduzida na dieta de um inseto e a EC50 de cada foi determinada. Os valores de EC50 foram então convertidos para os valores relativos inversos. Ao EC50 de CrylCa tipo selvagem contra Spodoptera exigua foi atribuído o valor de 1,0. Ao EC50 das protoxinas restantes foi atribuído um valor relativo.

FIG. 4 mostra a expressão dos genes sintéticos AR6 (SEQ ID NO: 5), MR8 ' (SEQ ID NO: 11), e CR62 (SEQ ID NO: 9) em análise transiente em folhas. Os genes sintéticos foram expressos em folhas de Nicotiana benthamiana usando experimentos de infiltração foliar por Agrobacterium. Um western blot de extratos foliares resultantes demonstra a produção da protoxina apartir dos genes sintéticos de AR6, MR8' , e CR62. As pistas são as seguintes: marcador de peso molecular, 100 ng do padrão da protoxina CrylCa, 200 ng do padrão da protoxina CrylCa, extrato de folha expressando MR8' sintético, extrato de folha expressando AR6 sintético, extrato de folha expressando CR62 sintético. Um antisoro policlonal de coelho feito contra a proteína CrylCa purificada foi utilizada como sonda no western blot (foi predeterminado que o antisoro policlonal contra CrylCa possui uma forte reação cruzada com as proteínas AR6, CR62 e MR8').

FIGS. 5A-5B mostram a atividade inseticida in planta dos genes sintéticos AR6, MR8', e CR62. Cada variante foi expressa em N. benthamiana utilizando infiltração de Agrobacterium. Cada disco foliar foi utilizado como alimento para (A) H. zea ou (B) S. exigua. Seguindo um período de incubação de 24 horas, a atividade de alimentação foi determinada por observação visual. Controles positivos para a atividade de H. zea e a atividade de S. exigua utilizados foram um polipeptídeo Cry2Ab-like (SEQ ID NO: 35) e o gene misturado com CrylCa CR62, respectivamente. A proporção demonstrada para cada painel se refere à quantidade relativa de Agrobacterium teste contendo o gene de interesse para a de Agrobaeterium não contendo o gene teste. Essa diluição reduz e eficazmente o nível da proteína teste produzida. Deve-se notar que as folhas do controle negativo infiltradas com Agrobacterium que não contém um gene teste foram completamente consumidas pela larva do inseto durante o período de análise (não mostrado).

FXG. 6 mostra a atividade in planta das variantes misturadas de MR8' contra H. zea. A variante indicada foi expressa em folhas de N. benthamiana utilizando infiltração de Agrobacterium seguido por um período de quatro dias de co- cultivo. Seguindo um período de 24 horas de incubação, a atividade de alimentação foi determinada pelo registro em vídeo do disco foliar. 0 eixo y corresponde ao número de pixels presente na imagem registrada do disco foliar. Quanto maior o número de pixels, maior a quantidade de folha restante não comido (protegido). 0 eixo χ corresponde à variante testada. A análise foi repetida de duas a quatro vezes como indicado para cada variante.

FIG. 7 mostra a atividade in planta das variantes misturadas de MR8' contra S. exigua. A variedade indicada foi expressa em folhas de N. benthamiana utilizando infiltração de Agrobacterium seguido por um período de quatro dias de co-cultivo. Seguindo um período de 24 horas de incubação, a atividade de alimentação foi determinada pelo registro em vídeo do disco foliar. 0 eixo γ corresponde ao número de pixels presente na imagem registrada do disco foliar. Quanto maior o número de pixels, maior a quantidade de folha restante não comido (protegido). 0 eixo χ corresponde à variante testada. A análise foi repetida três vezes DESCRIÇÃO DETALHADA

A presente invenção provê polipeptídeos inseticidas relacionados dos polipeptídeos Cryl de Bacillus {ex. , CrylAa7 CrylAb, CrylAc, CrylAd, CrylAe, CrylAg, e CrylCa). Moléculas de ácido nucleico codificando os polipeptídeos também são providas. Métodos para utilizar os polipeptídeos e ácidos nucleicos da invenção para aumentar a resistência de plantas à predação por insetos são incluídos.

Polipeptídeos da Invenção

A presente invenção se refere ao polipeptídeos Cry derivados dos polipeptídeos Cryl Bacillus thuringiensis (ex., CrylAa, CrylAb, CrylAc, CrylAd, CrylAe, CrylAg, e CrylCa). Nas concretizações preferidas, os polipeptídeos derivados de Cryl representam a região da δ-endotoxina madura e foram selecionados de um grupo consistindo das SEQ ID NOS: 2, 4, 6, 8, 10, 12, 14, 16, 18, 20, 22, 24, 26, 28. Polipeptídeos da invenção também incluem aqueles que são codificados de qualquer ácido nucleico derivado de Cryl da invenção.

Em adição à seqüência polipeptídica dos polipeptídeos derivados de Cryl, será reconhecido que os polipeptídeos da invenção também incluem variantes destes, incluindo, mas não limitado a, qualquer seqüência substancialmente similar, qualquer fragmento, análogo, homólogo, alelo de ocorrência natural, ou mutante destes. Variantes incluídas pela invenção são polipeptídeos que são ao menos parcialmente ativos funcionalmente, ex. , são capazes de demonstrar atividades funcionais associadas ao polipeptídeo Cryl tipo selvagem. Tais atividades funcionais incluem, mas não são limitadas a, atividades biológicas, como a atividade inseticida; antigenicidade, ex. , uma habilidade de ligar ou competir com um Cryl tipo selvagem pela ligação a um anti-Cryl anticorpo; imunogenicidade, ex. uma habilidade de gerar anticorpos que se ligam a um polipeptídeo Cryl tipo selvagem. Em algumas concretizações, as variantes possuem ao menos uma atividade funcional que substancialmente similar ao seu polipeptídeo # parental (ex., uma variante do polipeptídeo derivado de Cryl possuirá ao menos uma atividade funcional que é substancialmente similar à do polipeptídeo derivado de Cryl a qual é mais similar). Como utilizado aqui, a atividade funcional de uma variante será considerada "substancialmente similar" ao seu polipeptídeo parental se estiver dentro de um desvio padrão de seu parental.

Em uma concretização, polipeptídeos misturados de δ-endotoxina maduros que possuem ao menos uma atividade funcional de Cryl (ex. , atividade inseticida) e são ao menos90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99%, ou 99.5% idênticos à seqüência polipeptídica de qualquer um das SEQ ID NOS: 2, 4, 6, 8, 10, 12, 14, 16, 18, 20, 22, 24, 26, 28 incluídos pela invenção.

Como utilizado aqui, onde uma seqüência é definida como sendo "ao menos X% idêntica" a uma seqüência de referência, ex. , "um polipeptídeo ao menos 95% idêntico à SEQ ID NO: 2," deverá ser entendido que "X% idêntico" se refere à identidade porcentual absoluta, exceto quando indicado de maneira diferente. 0 termo "identidade porcentual absoluta" se refere à porcentagem de identidade de seqüência determinada por contar amino ácidos ou nucleotídeos idênticos como um e qualquer substituição como zero, não importando a similaridade dos aminoácidos ou ácidos nucleicos não pareados. Em um típico alinhamento de seqüência a "identidade porcentual absoluta" de duas seqüências é apresentada como uma porcentagem de "identidades" de amino ácidos ou ácidos nucleicos. Em casos onde um alinhamento ótimo de duas seqüências requer a inserção de um intervalo em uma ou em ambas as seqüências, um resíduo de amino ácido em uma seqüência que se alinhe com um intervalo na outra seqüência é contado como não pareamento para fim de determinação da identidade porcentual. Intervalos podem ser internos ou externos, ex. , uma truncagem. Identidade percentual absoluta pode ser prontamente determinada utilizando, por exemplo, o programa Clustal W, versão 1.8, Junho de 1999, usando os parâmetros padrão (Thompson et al. , 1994, Nucleic Acids Research 22: 4673-4680).

Em uma outra concretização, polipeptídeos de δ- endotoxina maduros que possuem ao menos uma atividade funcional de Cryl (ex., atividade inseticida), são ao menos 99% ou 99,5% idênticos à seqüência polipeptídica de qualquer uma das SEQ ID NOS: 2, 4, 6, 8, 10, 12, 14, 16, 18, 20, 22, 24, 26, 28 e são codificados por um polinucleotídeo que hibridiza sob condições estringentes com ácidos nucleicos que codificam qualquer uma SEQ ID NOS: 2, 4, 6, 8, 10, 12, 14, 16, 18, 20, 22, 24, 26, 28. Em uma concretização específica, um fragmento da invenção corresponde à extensão da pro-toxina processada. A toxina corresponde à porção N-terminal do polipeptídeo Cryl de tamanho total. Em concretizações preferidas, o fragmento N- terminal de ~50kDa-7 5kDa corresponde à toxina. Em concretizações mais preferidas, o fragmento N-terminal de ~66kDa corresponde à toxina. Polipeptídeos que correspondem a este fragmento processado de Cryl podem ser providos diretamente pelos métodos da presente invenção para evitar a necessidade do processamento da pro-toxina.

As seqüências nucleotídicas ou polipeptídicas completas da protoxina são compostas dos domínios I, II, e III das regiões da toxina no contexto das regiões 5' ou N-terminal e 3 ' ou C-terminal da protoxina. Em alguns casos as regiões das protoxina e toxina são derivadas da mesma molécula tipo Cry, como CR62 sendo totalmente derivado de CrylCa. Em outros casos a região 5' ou N-terminal é derivada principalmente de uma molécula enquanto a região C-terminal da protoxina é derivada de outra assim como com AR6, MR81 e derivativos em que a região 5' ou N-terminal é derivada predominantemente de CrylAb enquanto a região 3 ' ou C-terminal correspondente à região da protoxina é de CrylCa. É reconhecido que a região δ-endotoxina ativa das moléculas podem reter a exata atividade no contexto de um grupo diferente de seqüências de protoxina derivadas de outras moléculas Cryl.

Em outra concretização específica, um fragmento da invenção corresponde ao domínio Cryl. Polipeptídeos maduros da toxina Cryl possuem três domínios incluindo i) domínio I que é envolvido na inserção na membrana apical do intestino médio do inseto e afeta a função de canal de íon, ii) domínio II que é envolvido na ligação ao receptor na membrana celular epitelial do intestino médio do inseto, e iii) domínio III que é envolvido na função de canal de íon, ligação ao receptor, e inserção η membrana (Schnepf et al. , 1998, Microbiol. Molec. Biol. Rev. 62:775-806).

Em outra concretização, polipeptídeos análogos são incluídos na invenção. Polipeptídeos análogos possuem resíduos que foram modificados, ex. , por ligação covalente de qualquer tipo de molécula aos polipeptídeos derivados de Cryl. Por exemplo, mas não a modo de limitação, um polipeptídeo análogo da invenção pode ser modificado, ex., por glicosilação, acetilação, peglação, fosforilação, amidação, derivatização por grupos protetores/bloqueadores conhecidos, clivagem proteolítica, ligação a um ligante celular ou outra proteína, etc. Um polipeptídeo análogo da invenção pode ser modificado por modificações químicas utilizando técnicas conhecidas por aqueles com habilidade na arte, incluindo, mas não limitado a clivagem químicas específicas, acetilação, formilação, síntese na presença de tunicamicina (um inibidor da glicosilação N- ligada e formação de ligações proteína-carboidrato N- glicosídicas) , etc. Além do mais, um análogo de um polipeptídeo da invenção pode conter um ou mais amino ácidos não clássicos. Métodos de produção dos polipeptídeos da invenção, ex., por meios recombinantes, são também providos.

Composições constituídas de um ou mais polipeptídeos da invenção são também incluídas. As composições da invenção podem compor posteriormente agentes adicionais incluindo, mas não limitado a, adjuvantes do tipo espalhante-adesivo, agentes estabilizadores, outros aditivos inseticidas, diluentes, agentes que otimizam as propriedades reológicas ou W estabilidade da composição, como por exemplo, surfactantes, emulsificantes, dispersantes, e/ou polímeros.

Ácidos Nucleicos da Invenção

A presente invenção também se refere a moléculas de ácido nucleico derivadas de Cryl. Em concretizações preferidas, as moléculas de ácido nucleico derivadas de Cryl são selecionadas do grupo consistindo das SEQ ID N0S:1, 3, 5,7, 9, 11, 13, 15, 17, 19, 21, 23, 25, e 27. Moléculas de ácido ^ nucleico da invenção também incluem aquelas moléculas de ácido nucleico que codificam polipeptídeos derivados de Cryl da invenção.

Em adição às moléculas de ácido nucleico derivadas de Cryl, irá ser notado que ácidos nucleicos da invenção também incluem variantes destes, incluindo, mas não limitado a qualquer seqüência substancialmente similar, qualquer fragmento incluindo o fragmento tóxico, homólogo, alelo de ocorrência natural, ou mutante destes. Moléculas variantes de ácido nucleico incluídas na presente invenção codificam proteínas que são ao menos parcialmente ativas funcionalmente, ex. , são capazes de demonstrar um ou mais atividades funcionais conhecidas associadas a um polipeptídeo Cryl tipo selvagem. Tais atividades funcionais incluem, mas não são limitadas a, atividades biológicas, como atividade inseticida; antigenicidade, ex. , uma habilidade de ligar ou competir com um polipeptídeo Cryl tipo selvagem pela ligação a um anticorpo anti-Cryl; imunogenicidade, ex., uma habilidade de gerar anticorpo que se liga a um polipeptídeo Cryl tipo selvagem. Em algumas concretizações, as variantes tem ao menos uma atividade funcional que é substancialmente similar à molécula de ácido nucleico parental (ex. , uma variante de uma molécula de ácido nucleico derivada de Cryl que irá codificar um polipeptídeo que possui ao menos uma atividade funcional que é substancialmente similar à do polipeptídeo codificado pela molécula de ácido nucleico derivada de Cryl que é mais similar. Como usado aqui, a atividade funcional de uma variante será considerada "substancialmente similar" ao seu polipeptídeo parental se estar dentro de um desvio padrão do parental.

Em uma concretização, moléculas de ácido nucleico misturadas que são ao menos 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99%, ou 99.5% idênticas a qualquer uma das moléculas de ácido nucleico de SEQ ID NOS: 1, 3, 5, 7, 9, 11, 13, 15, 17, 19, 21, 23, 25, 27 que são incluídas pela invenção. Em outra concretização, moléculas de ácido nucleico que são ao menos 99% ou 99,5% idênticas a qualquer uma das moléculas de ácido nucleico de SEQ ID NOS: 1, 3, 5, 7, 9, 11, 13, 15, 17, 19, 21, 23, 25, 27 incluídas pela invenção.

Para determinar a identidade porcentual de duas moléculas de ácido nucleico, as seqüências são alinhadas a fim de comparação ótima (ex., intervalos podem ser introduzidos na seqüência de um primeira molécula de ácido nucleico para um alinhamento ótimo com uma segunda molécula de ácido nucleico). Os nucleotídeos em posições nucleotídicas correspondentes são comparadas. Quando uma posição na primeira seqüência é ocupada pelo mesmo nucleotídeo como a posição correspondente na segunda seqüência, então as moléculas são idênticas nesta posição. A identidade porcentual entre as duas seqüências é a função do número de posições idênticas partilhadas pelas seqüências (ex., % de identidade = número de posições idênticas sobrepostas/número total de posições χ 100%) . Em uma concretização, as duas seqüências são de igual tamanho.

A determinação do percentual de identidade entre as seqüências podem ser efetuada usando um algoritmo matemático. Um exemplo não limitante utilizado para a comparação de duas seqüências é o algoritmo de Karlin e Altschul (Karlin e Altschul, 1990, Proc. Natl. Acad. Sei. 87:2264-2268, modificado como em Karlin e Altschul, 1993, Proe. Natl. Acad. Sei. 90:5873-5877). Tal algoritmo é incorporado nos programas NBLAST e XBLAST (Altschul et al. , 1990, J. Mol . Biol. 215:403 e Altschul et al. , 1997, Nucleie Aeid Res. 25:3389-3402). Software para realizar analises de BLAST é disponível publicamente, ex. , através do Centro Nacional de Informação Biotecnológica (NCBI). Este algoritmo envolve primeiramente a identificação de pares de seqüência de alta pontuação (HSPs) pela identificação de pequenas palavras de comprimento W na seqüência isca, que tanto se iguala ou satisfaz alguma pontuação T, que tanto atinge ou satisfaz alguma pontuação limite de valor positivo T quando alinhado com uma palavra de mesmo tamanho em uma seqüência da base de dados. T se refere ao limite de pontuação da palavra da vizinhança (Altschul et al., supra). Estes acertos de palavras da vizinhança atuam como ponto de partida para iniciar buscas para encontrar HSPs maiores que os contém. Os acertos de palavras são então extendidos em ambas as direções ao longo cada seqüência até a pontuação cumulativa do alinhamento possa ser aumentada. Pontuações cumulativas são calculadas usando, para seqüências nucleotídicas, os parâmetros M (pontuação de recompensa para um par de resíduos pareados; sempre >0) e N (pontuação de penalidade para resíduos não pareados; sempre < 0). Para seqüências de amino ácidos, uma matriz de pontuação é usada para calcular a pontuação cumulativa. A extensão de acertos de palavra em cada direção é encerrada quando: a pontuação cumulativa do alinhamento cai pela quantidade X de seu valor máximo atingido; a pontuação cumulativa vai a zero ou abaixo, devido ao acúmulo de um ou mais alinhamentos de resíduos com pontuação negativa; ou o fim de qualquer uma das seqüências é alcançado. Os parâmetros W, T, e X do algoritmo BLAST determinam a sensibilidade e velocidade do alinhamento. 0 programa BLASTN (para seqüências nucleotídicas) usa como padrão um comprimento de palavra (W) de 11, uma expectativa (E) de 10, um ponto de corte de 100, M = 5, N = -4, e uma comparação de ambas as fitas. Para seqüências de amino ácidos, o programa BLASTP usa como padrão um comprimento de palavra (W) de 3, uma expectativa (E) de 10, e a matriz e pontuação BLOSUM62 (veja Henikoff & Henikoff, 1989, PNAS, 89:10915).

O método de alinhamento Clustal V pode também ser usado para determinar a identidade porcentual (Higgins e Sharp,1989, CABIOS. 5:151-153) e encontrado no programa Megalign de conjunto de bioinformática computacional da LASERGENE (DNASTAR Inc., Madison, WI). Os "parâmetros padrão" são os parâmetros pré-configurados pelo fabricante do programa e para alinhamentos múltiplos estes correspondem a PENALIDADE DE

intervalo=io e penalidade de comprimento de intervalo=io, enquanto para alinhamentos em par, estes são wktuple" 1, penalidade de interval0=3, janela=5 e diagonais salvas=5. Após alinhar as seqüências, usando o Clustal v program, é possível obter uma "identidade porcentual" através da visualização

A identidade porcentual entre duas seqüências pode ser determinada usando técnicas similares às descritas acima, permitindo ou não intervalos. No cálculo de identidade percentual, tipicamente apenas os pareamentos exatos são contados.

Em outra concretização, moléculas de ácido nucleico incorporando quaisquer das moléculas de ácido nucleico derivadas de Cryl aqui descritas são incluídas pela invenção. Moléculas de ácido nucleico que possuem ao menos uma atividade funcional de Cryl (ex., atividade inseticida) são incluídas. A respeito disto, as seqüências descritas que codificam a toxina podem ser combinadas com domínios de outras proteínas Cry para formar a proteína Cry completa.

Em uma concretização específica, a combinação corresponde a uma molécula de ácido nucleico que codifica a proteína Cry completa. A toxina corresponde à porção N- terminal do polipeptídeo Cryl de comprimento total. Moléculas de ácido nucleico codificando o domínio I e moléculas de ácido nucleico codificando o domínio II podem então ser combinadas com as moléculas de ácido nucleico descritas para formar uma molécula de ácido nucleico codificando a proteína Cryl madura.

Em outra concretização específica, um fragmento da invenção codifica uma proteína que corresponde a qualquer um dos domínios I, II, e III de uma proteína Cryl madura.

Em outra concretização, uma molécula de ácido nucleico que hibridiza sob condições específicas a qualquer uma das SEQ ID NOS: 1, 3, 5, 7, 9, 11, 13, 15, 17, 19, 21, 23, 25, 27 é incluída pela invenção. A expressão "condições estringente" se refere a condições de hibridização nas quais um ácido nucleico hibridizarão com o seu ácido nucleico alvo, tipicamente em uma mistura complexa de ácidos nucleicos, mas essencialmente a nenhuma outra seqüência. Condições estringentes são dependentes de seqüências e serão diferentes em circunstâncias diferentes. Ácidos nucleicos mais longos hibridizam especificamente em temperaturas maiores. Guias extensivos para a hibridização de ácidos nucleicos podem ser encontrado na arte (e.g., Tijssen, Techniques in Biochemistry and Molecular Biology--Hybridization with Nucleie Probes, "Overview of principies of hybridization and the strategy of nucleic acid assays" (1993)). Geralmente, condições altamente estringentes são selecionadas para estarem por volta de 5-10 0C abaixo do ponto termal de derretimento (Tm) para ácidos nucleicos específicos em uma determinada força iônica e pH. Condições de baixa estringência são geralmente selecionadas para serem 15-30 0C abaixo da Tm. A Tm é a temperatura (sob força iônica definida, pH, e concentração de ácidos nucleicos) na qual 50% das sondas complementares ao alvo hibridizam ao ácido nucleico alvo no equilíbrio (como os ácidos nucleicos alvo são encontrados em excesso, na Tm, 50% das sondas estão ocupadas no equilíbrio). Condições de hibridização são tipicamente aquelas em que a concentração de sais é menor do que algo em torno de 1,0 M de íons de sódio, tipicamente uma concentração por volta de 0,01 a 1,0 M de íons de sódio ou outros sais) a um pH de 7,0 a 8,3 e a temperatura é ao menos algo em torno de 30°C para sondas pequenas (ex., 10 a 50 nucleotídeos) e ao menos por volta de 60°C para sondas grandes (ex. , maiores do que 50 nucleotídeos). Condições estringentes também podem ser alcançadas com a adição de agentes desestabilizadores como formamida, Para hibridização seletiva ou específica, um sinal positivo é ao menos duas vezes o fundo, e preferencialmente 10 vezes a hibridização de fundo. Em uma concretização, condições estringentes incluem ao menos uma lavagem (usualmente 2) em 0,2X SSC a uma temperatura de ao menos em torno de 50°C, usualmente em torno de 55°C, e algumas vezes 60°C ou 65°C, por 20 minutos, ou condições substancialmente equivalentes. Em uma concretização específica, a molécula de ácido nucleico da invenção hibridiza especificamente seguindo ao menos uma lavagem em 0,2X SSC a 55 °C por 20 minutos para um polinucleotídeo codificando o polipeptídeo de qualquer das of SEQ ID NOS:2, 4, 6, 8, 10, 12, 14, 16, 18, 20, 22, 24, 26, 28. Em uma outra concretização, condições estringentes incluem hibridização em 6X cloreto de sódio/citrato de sódio (SSC) por volta de 45 0C seguido de uma ou mais lavagens em 0,2X SSC, 0,1% SDS a 50-65 °C.

A expressão "hibridiza especificamente" se refere à ligação, formação de duplex, ou hibridização de uma molécula somente a uma seqüência nucleotídica em particular sob condições estringentes de hibridização quando aquela seqüência é encontrada em uma mistura complexa (ex., ADN ou ARN celular total ou de uma biblioteca).

Vetores contendo ácidos nucleicos da invenção são também incluídos. Células ou plantas contendo os vetores da invenção também são incluídos.

0 termo "ácido nucleico" ou "molécula de ácido nucleico" aqui se refere ao polímero simples ou dupla-fita de bases deoxiribonucleotídicas ou ribonucleotídicas lidas apartir do 5' ao final 3'. Isto inclui ADN cromossômico, plasmídeos auto replicantes e ADN ou ARN que desempenha um papel principalmente estrutural. 0 termo "codificando" se refere a uma seqüência polinucleotídica codificando um ou mais amino ácidos, 0 termo não requer um códon de início ou parada. Uma seqüência de amino ácidos pode ser codificada em qualquer uma das seis fases de leitura diferentes providas pela seqüência do polinucleotídeo e seu complemento.

Tabela 1 revela seqüências derivadas de Cryl e os números da identidade das seqüência correspondentes.

Seqüências derivadas de Cryl

Polipeptídeos e moléculas de ácido nucleic derivadas de Cryl podem ser criados através da introdução de uma ou mais substituições, adições e/ou deleções na seqüência nucleotídica de um Cryl tipo selvagem (ex. , CrylAa, CrylAbi CrylAc, CrylAd, CrylAe, CrylAg, e CrylCa) ou ácidos nucleicos relacionados, de maneira que um ou mais substituições de amino ácidos adições e/ou deleções são introduzidas . na proteína codificada. Geralmente, seqüências derivadas de Cryl são criadas em ordem a acentuar características desejáveis ou reduzir uma característica indesejável de um polipeptídeo Cryl tipo selvagem. Em uma concretização, polipeptídeos derivados de Cryl melhoraram a atividade inseticida sobre os correspondentes Cryl tipo selvagem incluindo, mas não limitado a, maior potência e/ou aumento da amplitude à praga de inseto. Em outra concretização, polipeptídeos derivados de Cryl são melhor expressos que aqueles correspondentes ao Cryl tipo selvagem no hospedeiro microbial ou hospedeiro vegetal incluindo, mas não limitado a, aumento da vida média, menos suscetível a degradação, e/ou transcrição ou tradução mais eficiente. Em xima concretização, moléculas de ácido nucleico de CrylAb (SEQ ID NO: 33) ou CrylCa (SEQ ID NO: 29, região codificando: 47-3 616) derivadas de Bacillus thuringiensis foram usadas como moldes para criar fragmentos nucleotídicos misturados de cryl. Em uma outra concretização, variantes isoladas de um ciclo de alteração podem ser usadas como molde para ciclos de alterações adicionais (ex. , AR6, CR62, ou MR8')- Em uma outra concretização, moldes codificando proteínas Cryl a serem alteradas ou misturadas podem ser re- sintetizados para possuir uma seqüência de ácidos nucleicos diferente para prover expressão melhorada em células para varredura e/ou finalidades de comercialização. Cada uma das moléculas tipo Cryl aqui descritas tanto derivadas apartir do 5' ou região N-terminal de CrylAb ou CrylCa contém a região 3' ou C-terminal da protoxina de CrylCa

Alterações de seqüência podem ser introduzidas por técnicas padrão com técnicas de evolução molecular direcionadas ex., métodos de mistura de ADN (veja ex. , Christians et al., 1999, Nature Biotechnology 17:259-264; Crameri et al., 1998, Naturel 391:288-291; Crameri, et al., 1997, Nature Biotechnology 15:436-438; Crameri et al. , 1996, Nature Biotechnology 14:315-319; Stemmer, 1994, Nature 370:389-391; Stemmer et al. , 1994, Proc. Natl. Aead. Sei., 91:10747-10751; Patente Norte-Americana Nos. 5.605.793; 6 .117.679; 6.132.970; 5.939.250; 5.9 65.408; 6.171.82 0; Publicação Internacional Nos. WO 95/22625; WO 97/0078; WO 97/35966; WO 98/27230; WO.00/42651; e WO 01/75767); mutagênese direcionada posicionai (see ex. , Kunkel, 1985, Proe. Natl. Acad. Sci., 82:488-492; Oliphant et al. , 1986, Gene 44:177-183); mutagênese direcionada por oligonucleotídeo (veja ex. , Reidhaar-Olson et al. , 1988, Science 241:53-57); mutagênese química (veja ex. , Eckert et al., 1987, Mutat. Res. 178:1-10);

PCR sujeito a erro (veja ex. , Caldwell & Joyce, 1992, PCi? Methods Applic. 2:28-33); e mutagênese por cassete (veja ex. , Arkin et al. , Proc. MatI. Acad. Sci., 1992, 89:7871-7815); (veja geralmente, ex., Arnold, 1993, Curr. Opinion Biotechnol.4:450-455; Ling et al. , 1997, Anal. Biochem., 254(2):157 -78;

®L0 Dale et al., 1996, Methods Mol. Biol. 57:369-74; Smith, 1985, Ann. Rev. Genet. 19:423-462; Botstein et al. , 1985, Science,229:1193-1201; Carter, 1986, Biochem. J. 237:1-7; Kramer et al. , 1984, Cell 38:879-887; Wells et al. , 1985, Gene 34:315-323; Minshull et al., 1999, Current Opinion in Chemical Biology 3 :284-290) .

Em uma concretização, mistura de ADN é usada para criar moléculas de ácido nucleico derivadas de Cryl. Mistura de ADN pode ser realizada in vitro, in vivo, in silico, ou uma combinação destes. Métodos de recombinação in silico podem ser realizados de modo que algoritmos genéticos são usados em um computador para recombinar as cadeias das seqüências que correspondem a ácidos nucleicos homólogos (ou até não homólogos). Resultantes cadeia de seqüência recombinadas são opcionalmente convertidas em ácidos nucleicos pela síntese de ácidos nucleicos que correspondem às seqüências recombinadas, ex. , em conjunto com técnicas de montagem gênica por síntese de oligonucleotídeos. Esta abordagem pode gerar alterações aleatórias, parcialmente aleatórias ou projetadas. Muitos detalhes a respeito da recombinação in silico, incluindo o uso de algoritmos genéticos, operadores genéticos e semelhantes em sistemas de computadores, combinados com a geração de ácidos nucleicos correspondentes assim como combinações de ácidos nucleicos projetados (ex. , baseadas em seleção de sítio de "cross-over") assim como métodos de recombinação projetada, pseudo-aleatória ou aleatória são descritos na arte (veja ex. , Publicação Internacional Nos. WO 00/42560 e WO 00/42559).

Em uma outra concretização, mutagênese direcionada é utilizada para criar moléculas de ácido nucleico derivadas de Cryl através da escolha de seqüências nucleotídicas particulares ou posições de Cryl tipo selvagem ou de moléculas de ácido nucleico relacionadas para alteração. Tais mutações direcionadas podem se introduzidas em qualquer posição no ácido nucleico. Por exemplo, podem ser feitas substituições nucleotídicas levando a substituições de amino ácidos em resíduos de amino ácidos "não essenciais" ou "essenciais". Um resíduo de amino ácido "não-essencial" é um resíduo que pode ser alterado apartir da seqüência tipo selvagem sem alterar a atividade biológica do polipeptídeo, enquanto um resíduo de amino ácido "essencial" é requerido para ao menos uma atividade biológica do polipeptídeo. Por exemplo, resíduos de aminoácidos que são não conservados ou somente semi- conservados entre homólogos de várias espécies podem ser não essenciais para a atividade. Alternativamente, resíduos de aminoácidos que são conservados entre os homólogos de várias espécies podem ser essenciais para a atividade. Tais mutações direcionadas podem ser conservativas ou não conservativas. Uma "substituição de amino ácidos não conservativa" é uma em que o resíduo de amino ácido é substituído por um resíduo de amino ácido possuindo uma cadeia lateral dissimilar. Famílias de resíduos de amino ácidos possuindo uma cadeia lateral similar foram definidas na arte. Estas famílias incluem amino ácidos com cadeias laterais básicas (ex., lisina, arginina, histidina), cadeias laterais acídicas (ex., ácido aspártico, ácido glutâmico, asparagina, glutamina) , cadeias laterais polares não carregadas (ex. , glicina, serina, treonina, tirosina, cisteína), cadeias laterais apolares (ex., alanina, valina, leucina, isoleucina, prolina, fenilalanina, metionina, triptofano), cadeias laterais β-ramifiçadas (ex. , treonina, valina, isoleucina) e cadeias laterais aromáticas (ex., tirosina, fenilalanina, triptofano, histidina).

Alternativamente ou em adição às substituições de resíduo não-conservativas, tais mutações direcionadas podem ^ ser conservativas. Uma "substituição de amino ácido conservativa" é uma em que o resíduo de aminoácido é substituído por uma resíduo de aminoácido possuindo uma cadeia lateral similar. Mutagênese seguinte, a proteína codificada pode ser expressa de modo recombinante e a atividade da proteína pode ser determinada.

Em uma outra concretização, mutagênese aleatória é usada para criar nucleotídeos derivados de Cryl. Mutações podem ser introduzidas aleatoriamente ao longo de toda ou parte da seqüência codificante (ex., por mutagênese saturante ou PCR sujeito a erro). Em certas concretizações, seqüências nucleotídicas codificando outros peptídeos relacionados que possuem domínios similares, motivos estruturais, sítios ativos, ou alinham com uma porção da Cryl da invenção com não pareamentos ou pareamentos imperfeitos, podem ser usados no processo de mutagênese para gerar diversidade de seqüências.

Deve ser entendido que para cada passo da mutagênese em alguma das técnicas mencionadas acima, um número de ciclos iterativos de quaisquer ou todos os passos podem ser realizados para otimizar a diversidade de seqüências. Os métodos descritos acima podem ser usados em combinação em qualquer ordem desejada. Em muitos casos, os métodos resultam em um conjunto de seqüências de ácido nucleico alteradas ou um conjunto de células hospedeiras recombinantes contendo seqüências de ácido nucleico alteradas. As seqüências de ácido nucleico alteradas ou células hospedeiras expressando uma seqüência de ácido nucleico alterada com as características desejadas podem ser identificadas por varredura com uma ou mais análises conhecidas na arte. As análises podem ser realizadas sob condições que selecionam por polipeptídeos possuindo as características físicas ou químicas desejadas. As alterações na seqüência de ácido nucleico podem ser determinadas através do seqüênciamento da molécula de ácido nucleico codificando o polipeptídeo alterado em suas variantes. Adicionalmente, moléculas de ácido nucleico derivadas de Cryl podem ser otimizadas por códon, tanto totalmente ou em parte. Porque qualquer um amino ácido (exceto por metionina e triptofano) é codificado por uma número de códons (Tabela 2), a seqüência da molécula de ácido nucleico pode ser modificada sem alterar o amino ácido codificado. Otimização de códon é quando um ou mais códons são alterados ao nível de ácido nucleico, de tal modo que amino ácidos não são alterados mas a expressão em um organismo em particular é aumentada. Aqueles F10 possuindo uma habilidade basica na arte irão reconhecer que tabelas de códons e outras referências provêem informação preferencial para uma vasta amplitude de organismos são disponíveis na arte.

Métodos de Análise da Atividade Inseticida

Como usado aqui, o termo "atividade inseticida" se refere à habilidade de um polipeptídeo de diminuir ou inibir a alimentação do inseto e/ou alimentar a mortalidade do inseto na ingestão do polipeptídeo. Embora qualquer inseto possa ser afetado, preferencialmente insetos da ordem Lepidopteran incluindo Helicoverpa, Heliothis, ou Spodoptera são afetados.

Uma variedade de análises podem ser usadas para determinar quanto um polipeptídeo em particular da invenção tem atividade inseticida e, se tiver, em qual grau. Geralmente, uma praga de inseto é provida com um polipeptídeo da invenção em qualquer forma que possa ser ingerido. A reação da praga de inseto à ingestão do polipeptídeo da invenção é observada (ex., por algo em torno de um a três dias). Uma diminuição ou inibição da alimentação e/ou um aumento da mortalidade da praga de inseto após a ingestão do polipeptídeo da invenção são indicadores da atividade inseticida. Um polipeptídeo da invenção com atividade inseticida desconhecida deve ser comparado a um controle positivo e/ou negativo para acessar mais acuradamente o resultado da análise.

Em uma concretização, um polipeptídeo da invenção é purificado (tanto nas formas solúvel ou cristalina) e adicionado à dieta do inseto.

Em uma outra concretização, um polipeptídeo da invenção é expresso em um micróbio recombinante {ex. , E. Coli) . 0 micróbio recombinante é usado diretamente na alimentação da praga de inseto (veja Moellenbeck et al. , 2001, Nat. Biotechnol. 19:668).

Em uma outra concretização, o polipeptídeo da invenção é expresso em uma planta e a planta é usada na alimentação da praga de inseto. Seguindo o período de incubação, a atividade alimentar da praga de inseto pode ser determinada por observação visual (ex. , da fração aproximada da área foliar restante) ou pelo registro em vídeo (ex., número de pixels na área foliar restante) das partes da planta que deveriam normalmente ter sido comidas pela praga de inseto. Em uma concretização específica, a expressão do polipeptídeo da invenção é transiente. Em tais concretizações, um ácido nucleico codificando um polipeptídeo da invenção é clonado em um vetor de expressão em plantas e transfectado em Agrobacterium tumefaciens. A cultura de bactérias transformadas é co-cultivada com uma folha de N. benthamiana e, usando infiltração forçada, a folha expressa o polipeptídeo da invenção. Entretanto, a expressão do polipeptídeo é variável entre co-culturas de folhas. Em outra concretização específica, a expressão do polipeptídeo da invenção na planta é estável. Em tais concretizações, uma planta transgênica é construída de forma a produzir um polipeptídeo da invenção.

Em uma outra concretização, a atividade inseticida de um polipeptídeo da invenção pode ser analisada através da medição da morte celular e/ou crescimento celular usando células cultivadas. Tais análises tipicamente envolvem o uso de células de inseto cultivadas que são suscetíveis à toxina em particular utilizada na varredura, ou células que expressam um receptor para a toxina em particular, tanto naturalmente quanto como resultado da expressão de um gene heterólogo. Portanto, em adição às células de insetos, células de mamíferos, bactérias, e leveduras estão entre aquelas úteis nos ensaios in vitro. Bioensaios in vitro que medem a toxicidade contra células cultivadas são descritos na arte (ex. , Johnson, 1994, J. Invertebr. Pathol. 63:123-129).

Em um outra concretização, a atividade inseticida de um polipeptídeo da invenção pode ser testada pela medição da formação de poros nas vesículas mebranares do epitélio do intestino médio derivadas de inseto (Juttner e Ebel, 1998, Biochim. Biophys. Acta 1370:51-63.; English et al. , 1991, Insect Biochem. 21:177-184). Tal ensaio pode constituir a liberação condicional da toxina de um substrato ativado por ligante do lúmem das vesículas membranares. Isto requer que o ligante esteja no lado de fora da vesícula. Alternativamente o cenário reverso pode ser utilizado onde o ligante está no lúmem da vesícula e o substrato pronto para ser ativado está localizado no lado de fora da vesícula. Quanto maior a atividade da toxina, maior o número ou tamanho dos poros formados.

Métodos de Aumentar a Resistência a Insetos em Plantas

A presente invenção disponibiliza métodos de aumentar a resistência da planta a pragas de insetos incluindo, mas não limitado a, Helicoverpa ssp. (ex. , Helicoverpa Zea e Heliothis virescens) e/ou Spodoptera ssp. (ex. , Spodoptera exígua, Spodoptera frugiperda) através do uso de polipeptídeos inseticidas derivados de Cryl. Qualquer método conhecido na arte pode ser usado para causar a ingestão pela praga de ^^inseto de um ou mais polipeptídeos da invenção durante o curso da alimentação na planta. Como tal, a praga de inseto irá ingerir quantidades inseticidas de um ou mais polipeptídeos da invenção e pode descontinuar a alimentação na planta. Em algumas concretizações, a praga de inseto é morta pela ingestão de um ou mais polipeptídeos da invenção. Em outras concretizações, as pragas de insetos são inibidas ou desencorajadas a alimentar-se da planta sem serem mortas. Em uma concretização, plantas transgênicas podem ser produzidas para expressar um ou mais polipeptídeos da invenção. A planta transgênica pode expressar um ou mais polipeptídeos da invenção em todos os tecidos (ex., expressão global). Alternativamente, um ou mais polipeptídeos da invenção podem ser expressos em somente um subconjunto de tecidos {ex. , expressão tecido específica), preferencialmente naqueles tecidos consumidos pela praga de inseto. Polipeptídeos da invenção podem ser expressos constitutivamente na planta ou estar sob controle de um promotor induzível. Polipeptídeos da invenção podem ser expressos no citosol da planta ou no cloroplasto da planta, tanto por endereçamento de proteínas ou por transformação do genoma do cloroplasto.

Em uma outra concretização, uma composição constituindo um ou mais polipeptídeos da invenção pode ser aplicada externamente a uma planta suscetível à praga de inseto. Aplicação externa da composição inclui a aplicação direta à planta, tanto em toda ou em parte, e/ou aplicação indireta, ex. , ao ambiente cercando a planta assim como o solo. A composição pode ser aplicada por qualquer método conhecido na arte incluindo, mas não limitado a, borrifamento, pulverização, aspersão, ou semelhantes. Em geral, a composição pode ser aplicada a qualquer tempo durante o crescimento da planta. Alguém versado na arte pode usar métodos conhecidos na arte para determinar empiricamente o tempo ótimo para a administração da composição. Fatores que afetam o tempo ótimo de administração incluem, mas não estão limitados a, o tipo de planta suscetível, o tipo de praga de inseto, quais um ou mais polipeptídeos da invenção são administrados na composição.

A composição constituindo um ou mais polipeptídeos da invenção pode ser polipeptídeos substancialmente purificados, uma suspensão celular, um precipitado celular, um sobrenadande celular, um extrato celular, ou um complexo esporo-cristal de células de Bacillus thuringiensis. A composição constituindo um ou mais polipeptídeos da invenção pode estar na forma de uma solução, uma emulsão, uma suspensão, ou um pó. Formulações líquidas podem ser baseadamente aquosas ou não aquosas e podem ser providas como espumas, géis, suspensões, concentrados emulseáveis, ou semelhantes. As formulações podem incluir agentes na adição de um ou mais polipeptídeos da invenção. Por exemplo, composições podem posteriormente consistir de adjuvantes do tipo espalhante-adesivo, diluentes, agentes que otimizam as propriedades reológicas ou estabilidade da composição, como, por exemplo, surfactantes, emulsificadores, dispersantes, ou polímeros.

Em uma outra concretização, hospedeiros recombinantes que expressam um ou mais polipeptídeos da invenção são aplicados na ou na proximidade da planta suscetível ao ataque por uma praga de inseto. Os hospedeiros recombinantes incluem, mas não são limitados a, hospedeiros microbiais e vírus de insetos que foram transformados com e expressam uma ou mais moléculas de ácido nucleico (e portanto polipeptídeos) da invenção. Em algumas concretizações, o hospedeiro recombinante secreta o polipeptídeo da invenção no ambiente que o circunda de modo a fazer contato com a praga de inseto.

Expressão Recombinante

Moléculas de ácido nucleico e polipeptídeos da invenção podem ser recombinante expressas usando técnicas padrão de ADN recombinante e técnicas de clonagem molecular que são bem conhecidas na arte (ex. , Sambrook, Fritsch, e Maniatis, Molecular Cloning: A Laboratory Manual; Cold Spring Harbor Laboratory Press: Cold Spring Harbor, 1989). Adicionalmente, técnicas de ADN recombinante podem ser usadas para criar construções de ácidos nucleicos apropriadas para o uso na produção de plantas transgênicas.

De acordo, um aspecto da invenção diz respeito aos vetores, preferencialmente vetores de expressão, consistindo de uma molécula de ácido nucleico da invenção, ou uma variante destes. Como usado aqui, o termo "vetor" se refere a um polinucleotídeo capaz de transportar um outro ácido nucleico ao qual este foi ligado. Um tipo de vetor é um "plasmídeo", que se refere a uma volta de ADN dupla fita circular dentro do qual segmentos de ADN adicionais podem ser introduzidos. Um outro tipo de vetor é um vetor viral, onde segmentos de ADN adicionais podem ser introduzidos no genoma viral.

Certos vetores são capazes de se replicarem de forma autônoma em um célula hospedeira na qual estes são introduzidos (ex., vetores bacterianos possuindo um origem de replicação bacteriana e vetores epissomais). Outros vetores (ex., vetores não epissomais) são integrados no genoma da célula hospedeira na introdução na célula hospedeira, e por meio disto são replicados junto com o genoma do hospedeiro. Em geral, vetores de expressão de utilidade em técnicas de ADN recombinante estão freqüentemente na forma de plasmídeos (vetores). Entretanto, a invenção é planejada para incluir tais outras formas de vetores de expressão, como os vetores virais (ex., retrovírus defectivos em replicação) .

Os vetores de expressão recombinantes da invenção compreendem uma molécula de ácido nucleico da invenção na forma apropriada para a expressão da molécula de ácido nucleico na célula hospedeira. Isto significa que os vetores de expressão recombinantes incluem um ou mais seqüências regulatórias, selecionadas na base das células hospedeiras para serem usadas para expressão, que são operacionalmente associadas com o polinucleotídeo a ser expresso. Dentro de um vetor de expressão recombinante "associado operacionalmente" tem o intuito de significar que a seqüência nucleotidica de interesse é ligada à seqüência (s) regulatória em uma maneira que permita a expressão da seqüência nucleotidica (ex., em um sistema de transcrição/tradução in vitro ou em uma célula hospedeira quando o vetor é introduzido na célula hospedeira). 0 termo "seqüência regulatória" tem o intuito de incluir promotores, intensificadores e outros elementos de controle da expressão (ex., sinais de poliadenilação). Tais seqüências regulatórias são descritas na arte (ex., Goeddel, Gene Expression Technology: Methods in Enzymology, 1990, Academic Press, San Diego, CA). Seqüências regulatórias incluem aquelas que dirigem a expressão constitutiva de uma seqüência nucleotídica em muitos tipos de células hospedeiras e aquelas que dirigem a expressão de uma seqüência nucleotídica somente em certas células hospedeiras (ex., seqüências regulatórias tecido-específicas). Será apreciado por aqueles versados na arte que o projeto do vetor de expressão pode depender de fatores tais como a escolha da célula hospedeira a ser transformada, o nível de expressão da proteína desejada, a área do organismo no qual a expressão é desejada, etc. Os vetores de expressão da invenção podem ser introduzidos em células hospedeiras para por meio disto produzir proteínas ou peptídeos, incluindo proteínas de fusão ou peptídeos, codificados por moléculas de ácido nucleico como descrito aqui.

Em algumas concretizações, ácidos nucleicos isolados que servem como promotores ou elementos intensificadores podem ser introduzidos em uma posição apropriada (geralmente à montante) de uma forma não-heteróloga de um polinucleotídeo da presente invenção de modo a induzir ou reprimir a expressão de um polinucleotídeo da presente invenção. Por exemplo, promotores endógenos podem ser alterados in vitro por mutação, deleção e/ou substituição (veja, Patente US No. 5.565.350; Pedido de Patente Internacional No. PCT/US93/03868), ou promotores isolados podem ser introduzidos em uma célula vegetal em apropriadas orientação e distância de um gene cognato de um polinucleotídeo da presente invenção de modo a controlar a expressão do gene. Expressão gênica pode ser modulada sob condições apropriadas para o crescimento da planta de modo a alterar a concentração total e/ou alterar a composição dos polipeptídeos da presente invenção nas células da planta.

Se a expressão do polipeptídeo em um sistema eucariótico é desejada, é geralmente desejável incluir uma região de poliadenilação no extremidade 3' de uma região codificante do polinucleotídeo. A região de poliadenilação para expressão em plantas pode ser derivada de um gene natural, de uma variedade de genes de planta, o do T-DNA de • Agrobacterium. A seqüência da extremidade 3' a ser adicionada pode ser derivada de, por exemplo, os genes nopalina sintase e octopina sintase, ou alternativamente de um outro gene de planta, ou menos preferivelmente de qualquer outro gene eucariótico.

Os vetores de expressão recombinantes da invenção podem ser projetados para a expressão de um polipeptídeo da invenção em células procarióticas (ex., Enterobacteriaceae, como Escherichia; Bacillaceae; Rhizoboceae, como Rhizobium e Rhizobacter; Spirillaeeae, como fotobactéria; Zymomonas; Serratia; Aeromonas; Vibrio; Desulfovibrio; Spirillum; Lactobacillaeeae; Pseudomonadaeeae, como Pseudomonas e Aeetobaeter; Azotobacteraeeae e Nitrobaeteraeeae) ou eucarióticas (ex. , células de insetos usando vetores de expressão de baculovírus, células de levedura, células de planta, ou células de mamíferos) (veja Goeddel, supra. Para uma discussão de células hospedeiras). Alternativamente, o vetor de expressão recombinante pode ser transcrito e traduzido in vitro, por exemplo usando seqüências regulatórias do promotor T7 e polimerase T7.

Expressão de proteínas em procariotos é mais comumente conduzida em E. coli com vetores contendo promotores constitutivos ou induzíveis direcionando a expressão de tanto proteínas de fusão quanto proteínas que não são de fusão. Vetores de fusão adicionam um número de amino ácidos à proteínas codificadas nestes, usualmente ao término amino da φ proteína recombinante. Tais vetores de fusão tipicamente servem ao menos a três propósitos: 1) aumentar a expressão da proteína recombinante 2) aumentar a solubilidade da proteína recombinante; e/ou 3) auxiliar na purificação da proteína recombinante por atuar como um ligante na purificação por afinidade. Freqüentemente, em vetores de expressão de fusão, um sítio de clivagem proteolítica é introduzido na junção da porção de fusão com a proteína recombinante para permitir a separação da proteína recombinante da porção de fusão subseqüente à purificação da proteína de fusão. Tais enzimas, e suas seqüências de reconhecimento cognatas, incluem o Fator Xa, trombina e enteroquinase. Vetores de expressão de fusão típicos incluem pGEX (Pharmacia Biotech Inc; Smith e Johnson,1988, Gene 67:31-40), pMAL (New England Biolabs, Beverly, MA) e pRIT5 (Pharmacia, Piscataway, NJ) e pRIT5 (Pharmacia, Piscataway, NJ) que fusionam glutationa-S-transferase (GST), proteína ligante a maltose E, ou proteína A, respectivamente a proteína alvo recombinante. Em uma outra concretização, o vetor de expressão é um vetor de expressão de levedura. Exemplos de vetores para a expressão em levedura S. cerevisiae incluem pYepSecl (Baldari et al., 1987, EMBO J. 6:229-234), pMFa (Kurjan e Herskowitz, 1982, Cell 30:933-943), pJRY88 (Schultz et al. , 1987, Gene 54:113-123), pYES2 (Invitrogen Corp., San Diego, CA), e pPicZ (Invitrogen Corp., San Diego, CA) .

Alternativamente, o vetor de expressão é um vetor de expressão de baculovírus. Vetores de baculovírus disponíveis para a expressão de proteínas em cultivo de células de insetos (ex. , células Sf 9) incluem as séries pAc (Smith et al., 1983, Mol. Cell Biol. 3:2156-2165) e as séries pVL (Lucklow e Summers, 1989, Virology 170:31-39) .

Ainda em uma outra concretização, um ácido nucleico da invenção é expresso em células de planta usando um vetor de expressão de planta incluindo, mas não limitado a, vetores de expressão de vírus do mosaico do tabaco e vírus da batata.

Outros sistemas de expressão apropriados para ambas as células procarióticas e eucarióticas são conhecidas na arte (veja, ex. , capítulos 16 e 17 de Sambrook et al. 1990, Molecular Cloning, A Laboratory Manual, 2d ed. , Cold Spring Harbor Laboratory, Cold Spring Harbor, NY).

Um número de promotores podem ser usados na prática da invenção. Os promotores podem ser selecionados baseado no resultado desejado. Os ácidos nucleicos podem ser combinados com promotores constitutivos, tecido-específicos, induzíveis ou outros promotores para a expressão no organismo hospedeiro.

Um "promotor tecido-especifico" pode direcionar a expressão de ácidos nucleicos da presente invenção em um tecido especifico, órgão ou tipo celular. Promotores tecido- especif icos podem ser induzíveis. Similarmente, promotores tecido-específicos podem promover a transcrição somente dentro de certa janela de tempo ou estágio de desenvolvimento no ^^ tecido. Outros promotores tecido específicos podem ser ativos ao longo do ciclo de vida de um tecido em particular. Alguém com habilidade básica na arte irá reconhecer que um promotor tecido-específico pode dirigir a expressão de seqüências operacionalmente ligadas em outros tecidos além do tecido alvo. Então, como usado aqui, um promotor tecido-específico é aquele que dirige expressão preferencialmente no tecido alvo ou tipo celular, mas pode também levar a alguma expressão em outros tecidos também. Um número de promotores tecido- específ icos podem ser usados na presente invenção. Com o promotor apropriado, qualquer órgão pode ser atingido, como os órgãos/estruturas vegetativos da parte aérea (ex., folhas, caules e tubérculos) , raízes, flores e órgãos/estruturas florais (ex. , brácteas, sépalas, pétalas, estames, carpelos, anteras e óvulos), semente (incluindo embrião, endosperma, e casca da semente) e fruto. Por exemplo, promotores que direcionam a expressão de ácidos nucleicos em folhas, raízes ou flores são úteis para aumentar a resistência a pragas que infectam aqueles órgãos. Para a expressão de um polinucleotídeo da presente invenção nos órgãos vegetativos aéreos de uma planta, promotores específicos de órgãos fotossinteti zantes, como o promotor RBCS (Kh.ou.di et ai. , Gene 197:343, 1997), podem ser usados. A expressão específica de raiz de polinucleotídeos da presente invenção pode ser realizada sob o controle de um promotor raiz-específico, como, por exemplo, o promotor do gene ANRl (Zhang e Forde, Science, 279:407, 1998). Outros promotores exemplares incluem o gene glutamina sintetase raiz-específico de soja (Hirel et al. , 1992, Plant Molecular Biology 20:207-218) e o elemento controlador raiz-específico do gene GRP 1.8 de feijão (Keller et al., 1991, The Plant Cell 3:1051-1061).

Um "promotor constitutivo" é definido como um promotor que irá direcionar a expressão de um gene em todos os tecidos e é ativo sob a maioria das condições ambientais e estados de desenvolvimento ou diferenciação celular. Exemplos de promotores constitutivos incluem a região de iniciação transcricional 35S do vírus do mosaico de couve-flor (CaMV), o promotor 1' ou 2' derivados do T-DNA de Agrobacterium tumefaciens, e outras regiões de iniciação transcricional de vários genes de planta conhecidos por aqueles com habilidade básica na arte. Tais genes incluem por exemplo, ACTll de Arabidopsis (Huang et al. 1996, Plant Mol. Biol. 33:125-139), Cat3 de Arabidopsis (GenBank Accession No. U43147, Zhong et al., 1996, Mol. Gen. Genet. 251:196-203), o gene codificando a dessaturase de proteínas carreadoras de estearoil-acil de Brassica napus (Genbank Accession No. X74782, Solocombe et al. 1994, Plant Physiol. 104:1167-1176), GPcl de milho (GenBank Accession No. X15596, Martinez et al. , 1989, J. Mol. Biol. 208:551-565), e Gpc2 de milho (GenBank Accession No. U45855, Manjunath et ai., 1997, Plant Mol. Biol. 33:97-112). Qualquer promotor forte e constitutivo, como o promotor CaMV 35S, pode ser usado para a expressão de polinucleotídeos da presente invenção por toda a planta.

0 termo "promotor induzível" se refere a um promotor que está sob preciso controle ambiental e de desenvolvimento. Exemplos de condições ambientais que podem afetar a transcrição por promotores induziveis incluem condições anaeróbicas, temperatura elevada, a presença de luz, ou borrifamento com químicos/hormônios.

Promotores constitutivos apropriados para o uso em uma célula hospedeira de planta incluem, por exemplo, o promotor cerne do promotor Rsyn7 e outros promotores constitutivos relacionados (Publicação Internacional No. WO 99/43838 e Patente U.S. No. 6.072.050); o promotor cerne CaMV 35S (Odell et al., 1985, Nature 313:810-812); actina de arroz (McElroy et al., 1990, Plant Cell 2:163-171); ubiquitina (Christensen et al., 1989, Plant Mol. Biol. 12:619-632 e Christensen et al. , 1992, Plant Mol. Biol. 18:675-689); pEMU (Last et al. , 1991, Theor. Appl. Genet. 81:581-588); MAS (Velten et al. , 1984, EMBO J. 3:2723-2730); promotor ALS (Patente U.S. No. 5.659.026), e semelhantes (e.g. , Patentes U.S. Nos. 5.608.149; 5.608.144; 5.604.121; 5.569.597; 5.466.785; 5.399.680; 5.268.463; 5.608.142; e 6.177.611). Um outro aspecto da invenção se refere às células hospedeiras nas quais um vetor de expressão recombinante foi introduzido. Os termos "célula hospedeira" e "célula hospedeira recombinante" são usados intercambiavelmente aqui. É entendido que tais termos se referem não apenas à célula em particular mas à progênie ou progênie potencial de tal célula. Porque certas modificações podem ocorrer em gerações sucessivas devido a tanto mutações ou influências ambientais, tal progênie pode não ser, de fato, idêntica à célula parental, mas é ainda incluída dentro do escopo do termo usado aqui.

De acordo, a presente invenção prove uma célula hospedeira contendo um vetor de expressão constituindo um ácido nucleico da invenção, ou uma variação deste. Uma célula hospedeira pode ser qualquer procariótica (ex., E. coli, Bacillus thuringiensis or other Bacillus spp.) ou eucariótica (ex. , células de inseto, levedura ou células de planta). A invenção também provê um método para expressar um ácido nucleico da invenção e portanto a fabricação do polipeptídeo codificado constitui as etapas de i) cultivo da célula constituindo a molécula de ácido nucleico da invenção sob condições que permitem a produção da polipeptídeo codificado; e ii) isolamento do polipeptídeo expresso. ADN do vetor pode ser introduzido em células procarióticas ou eucarióticas via técnicas de transformação ou transfecção convencionais. Como usado aqui, os termos "transformação" e "transfecção" são usados com o intuito de se referir a uma variedade de técnicas reconhecidas na arte para introduzir moléculas de ácido nucleico exógenas em uma célula hospedeira, incluindo co-precipitação com fosfato de cálcio ou cloreto de cálcio, transfecção mediada por DEAE-dextran, lipofecção (transfecção de lipossoma), ou eletroporação. Métodos apropriados para transformação e transfecção de células hospedeiras podem ser encontrados na arte (e.g. , Sambrook, et al. supra.).

Adicionalmente, é possível endereçar a expressão de um ADN em particular para uma localização particular da planta. Por exemplo, os genes na planta codificando a subunidade pequena da RUBISCO (SSU) são com freqüência fortemente expressos, regulados por luz e algumas vezes mostram especificidade de tecido. Essas propriedades de expressão se devem em grande parte às seqüências promotoras destes genes. É possível usar os promotores de SSU para expressar genes heterólogos em plantas transformadas. Tipicamente, uma planta ira conter múltiplos genes SSU, e os níveis de expressão e especificidade tecidual de diferentes genes SSU irá ser diferente. As proteínas SSU são codificadas no núcleo e sintetizadas no citoplasma como precursores que contém uma extensão N-terminal conhecida como peptídeo de trânsito cloroplastidial (CTP). O CTP direciona o precursor para o cloroplasto e promove a incorporação da proteína SSU no cloroplasto. Neste processo, o CTP é clivado da proteína SSU. Estas seqüências CTP têm sido usadas para direcionar proteínas heterólogas para cloroplastos de plantas transformadas. Os promotores de SSU poderiam ter diversas vantagens para a expressão de genes heterólogos em plantas. Alguns promotores de SSU são altissimamente expressos e poderiam originar níveis de expressão tão ou mais altos do que aqueles observados com outros promotores. Por causa da distribuição tecidual divergente da expressão obtida apartir dos promotores de SSU, para o controle de algumas pragas de insetos, poderia ser vantajoso direcionar a expressão de proteínas cristalinas para aquelas células nas quais SSU é mais altamente expresso.

Por exemplo, embora relativamente constitutivo, na folha, o promotor CaMV3 5S é mais altamente expresso em tecidos vasculares do que em outras partes da folha, enquanto a maioria dos promotores de SSU são mais altamente expressos nas células do mesófilo da folha. Alguns promotores de SSU são também mais altamente tecido específicos, então seria possível utilizar um promotor de SSU específico para expressar uma proteína da presente invenção em somente um subconjunto de tecidos da planta, se por exemplo a expressão de tal proteína em certas células for deletéria para aquelas células. Por exemplo, para o controle do besouro de batata do Colorado em batata, poderia ser vantajoso usar os promotores SSU para direcionar a expressão de proteínas cristalinas para as folhas mas não para os tubérculos comestíveis.

Utilização das seqüências CTP de SSU para localizar proteínas cristalinas para os cloroplastos também poderia ser vantajoso. A localização das proteínas cristalinas de B. Thuringiensis para o cloroplasto poderia protegê-las de proteases encontradas no citoplasma. Isto poderia estabilizar as proteínas e levar a níveis mais altos de acúmulo da toxina ativa. Genes cry contendo o CTP podem ser usados em combinação com o promotor de SSU ou com outros promotores como o CaMV35S.

Pode ser também vantajoso para alguns propósitos direcionar as proteínas Cry para outros compartimentos da célula da planta, como isto pode resultar em exposição reduzida das proteínas a proteases citoplasmáticas, por vez levando a um maior acúmulo da proteína, o que poderia permitir uma atividade inseticida aumentada. Localização extracelular poderia levar a um exposição aumentada de alguns insetos às proteínas Cry, o que poderia também levar a uma atividade inseticida aumentada. Se uma proteína Cry em particular se mostrar danosa ao funcionamento da célula vegetal, então a localização para compartimentos não citoplasmáticos poderia proteger estas células da proteína.

De modo a exemplificar, em plantas assim como em outros eucariotos, proteínas que devem ser localizadas tanto extracelularmente ou em vários compartimentos específicos são tipicamente sintetizadas com uma extensão N-terminal de amino ácidos conhecida como peptídeo sinal. Este peptídeo sinal direciona a proteína a entrar na via de compartimentalização, e é tipicamente clivado da proteína madura como uma etapa inicial da compartimentalização. Para um proteína extracelular, a via secretória tipicamente envolve a inserção cotraducional no retículo endoplasmático com a clivagem do peptídeo sinal ocorrendo neste estágio. A proteína madura passa então pelo complexo de Golgi em vesículas que se fundem com a membrana plasmática liberando então a proteína no espaço extracelular. Proteínas destinadas para outros compartimentos seguem uma via similar. Por exemplo, proteínas que são destinadas para o retículo endoplasmático ou o complexo de Golgi seguem este esquema, mas estas são retidas especificamente no compartimento apropriado. Em plantas, algumas proteínas são também endereçadas para o vacúolo, uma outro compartimento membranar no citoplasma de muitas células φ de planta. Proteínas endereçadas ao vacúolo divergem da via acima no complexo de Golgi, onde estas entram em vesículas que se fundem ao vacúolo.

Uma característica comum destes endereçamentos de proteína é o peptídeo sinal que inicia o processo de compartimentalização. A fusão de um peptídeo sinal com uma proteína irá em muitos casos levar ao endereçamento da proteína para o reticulo endoplasmático. A eficiência desta etapa pode também depender da seqüência da própria proteína madura. Os sinais que direcionam uma proteína a um compartimento específico ao invés do espaço extracelular não são tão claramente definidos. Parece que muitos dos sinais que direcionam uma proteína para compartimentos específicos estão contidas na seqüência de amino ácidos da proteína madura. Isto tem sido demonstrado para algumas proteínas endereçadas ao vacúolo, mas ainda não é possível definir precisamente estas seqüências. Parece que a secreção para o espaço celular é a via "padrão" para uma proteína que contém uma seqüência sinal mas nenhum outro sinal de compartimentalização. Portanto, uma estratégia para direcionar proteínas Cry para fora do citoplasma é fusionar os genes de proteínas Cry sintéticas a seqüências de ADN codificando peptídeos sinais de planta conhecidos. Estes genes de fusão irão originar proteínas cry que entram na via secretória, o que leva a uma secreção extracelular ou endereçamento para o vacúolo e outros compartimentos.

Seqüências sinais para vários genes de planta tem sido descritos. Uma destas seqüências, a da proteína relacionada a patogênese de tabaco PRlb foi previamente descrita (Cornelissen et al. , 1986). A proteína PRlb é normalmente localizada no espaço extracelular. Um outro tipo de peptídeo sinal é contido nas proteínas de armazenamento de sementes de legumes. Estas proteínas são localizadas no corpo proteico das sementes, que é um compartimento semelhante a vacúolos encontrado em sementes. Uma seqüência de ADN de peptídeo sinal para a subunidade β da proteína de armazenamento 7S do feijão comum (Phaseolus vulgaris) , PvuB foi descrito (Doyle et al. , 1986). Baseado nestas seqüências publicadas, genes podem ser sintetizados quimicamente usando oligonucleotídeos que codificam os peptídeos sinal para PRlb e PvuB. Em alguns casos para conseguir a secreção ou compartimentalização de proteínas heterólogas, pode ser necessário a inclusão de alguma seqüência de amino ácidos além do sítio normal de clivagem do peptídeo sinal. Isto pode ser necessário para garantir a clivagem apropriada do peptídeo sinal. Produção de Plantas Transgênicas

Qualquer método conhecido na arte pode ser usado na transformação de uma planta ou célula de planta com um ácido nucléico da presente invenção. Moléculas de ácido nucleico podem ser incorporadas no ADN da planta (ex., ADN genômico ou ADN cloroplastidial) ou ser mantido ser a inserção no ADN da planta (ex., através do uso de cromossomos artificiais). Métodos apropriados para introduzir moléculas de ácido nucleico em células de planta incluem microinjeção (Crossway et al., 1986, Biotechnigues 4:320-334); eletroporação (Riggs et al., 1986, Proc. Natl. Acad. Sei. 83:5602-5606; D1Halluin et al., 1992, Plant Cell 4:1495-1505); transformação mediada por Agrobacterium (U.S. Patent Nos. 5.563.055 e 5.981.840, Osjoda et al. , 1996, Nature Biotechnology 14:745-750; Horsch et al., 1984, Science 233:496-498, Fraley et al. , 1983, Proc. Natl. Acad. Sei. 80:4803, e Gene Transfer to Plants, Potrykus, ed. , Springer-Verlag, Berlin 1995); transferência direta de genes (Paszkowski et al. , 1984, EMBO J. 3:2111-2722); aceleração de partículas por balística (Patentes U.S. Nos. 4.945.050; 5.879.918; 5.886.244; 5.932.782; Tomes et al., 1995, "Direct DNA Transfer into Intact Plant Cells via ► Microprojectile Bombardment, in Plant Cell, Tissue, and Organ Culture: Fundamental Methods, ed. Gamborg e Phillips, Springer-Verlag, Berlin; e McCabe et al. , 1988, Biotechnology 6:923-926); transformação mediada por vírus (Patentes U.S. Nos. 5.889.191, 5.889.190, 5.866.785, 5.589.367 e 5.316.931); transformação de pólen De Wet et al. , 1985, in The Experimental Manipulation of Ovule Tissues, ed. Chapman et al., Longman, New York, pp. 197-209); transformação de Lec 1 (Peiddo de Patente Ser. No. 09/435.054; Publicação Interncaional No. WO 00/28058); transformação mediada por capilar (Kaeppler et al., 1990, Plant Cell Reports 9:415-418; Kaeppler et al. , 1992, Theor. Appl. Genet. 84:560-566); e tecnologias de transformação de cloroplastos (Bogorad, 2000, Trends in Biotechnology 18: 257-263; Ramesh et al. , 2004, Methods Mol Biol. 274:301-7; Hou et al., 2003, Transgenic Res. 12:111-4; Kindle et al., 1991, Proc. Natl. Acad. Sei. 88:1721- 5; Bateman e Purton, 2000, Mol Gen Genet. 263:404-10; Sidorov et al., 1999, Plant J. 19:209-216).

A escolha dos protocolos de transformação usados para gerar plantas e células de planta transgênicas pode variar dependendo do tipo de planta ou célula, ex. , monocotiledônea ou dicotiledônea, que serão alvos para transformação. Exemplos de protocolos de transformação particularmente apropriados para um tipo particular de planta incluem aqueles para: batata (Tu et al., 1998, Plant Molecular Biology 37:829-838; Chong et al., 2000, Transgenie Research 9:71-78); soja (Christou et al., 1988, Plant Physiol. 87:671-674; McCabe et al. , 1988, BioTechnology 6:923-926; Finer e McMullen, 1991, In Vitro Cell Dev. Biol. 27P:175-182; Singh et al., 1998, Theor. Appl. Genet. 96:319-324); milho (Klein et al. , 1988, Proc. Natl. Acad. Sei. 85:4305-4309; Klein et al. , 1988, Biotechnology 6:559-563; Klein et al. , 1988, Plant Physiol. 91:440-444; Fromm et al. , 1990, Biotechnology 8:833-839; Tomes et al. , 1995, "Direct DNA Transfer into Intact Plant Cells via Microprojectile Bombardment," in Plant Cell, Tissue, and Organ Culture: Fundamental Methods, ed. Gamborg (Springer-Verlag, Berlin)); cereais (Hooykaas-Van Slogteren et al. , 1984, Nature 311:763-764; Patente U.S. No. 5.736.369).

Em algumas concretizações, mais de uma construção é usada para transformação na geração de plantas e células de plantas transgênicas. Construções múltiplas podem ser incluídas em posições eis ou trans. Em concretizações preferidas, cada construção tem um promotor e outras seqüências regulatórias.

Células de planta transformadas que são derivadas de uma das técnicas de transformação mencionadas acima podem ser cultivadas para regenerar uma planta inteira que possui o genótipo transformado e portanto o fenótipo desejado. Tais técnicas de regeneração dependem da manipulação de certos fitohormônios em um meio de crescimento de cultura de tecido, tipicamente, contanto com um biocida e/ou herbicida marcador que foi introduzido junto com as seqüências nucleotídicas desejadas. Regeneração de plantas apartir de protoplastos cultivados é descrita na arte (e.g., Evans et al. , Protoplasts Isolation and Culture, Handbook of Plant Cell Culture, pp.124-176, MacMillilan Publishing Company, New York, 1983; e Binding, Regeneration of Plants, Plant Protoplasts, pp. 21-73, CRC Press, Boca Raton, 1985) . Regeneração também pode ser obtida apartir de calos de plantas, explantes, órgãos, ou partes destes. Tais técnicas de regeneração são também descritas na arte (e.g., Klee et al. 1987, Ann. Rev. of Plant Phys. 38:467-486).

O termo "planta" inclui plantas inteiras, órgãos/estruturas vegetativas aéreas (ex., folhas, caules e tubérculos), raízes, flores e órgãos/estruturas florais, (ex., brácteas, sépalas, pétalas, estamens, carpelos, anteras e óvulos), semente (incluindo embrião, endosperma, e casca da semente) e fruto (o ovário maduro), tecidos da planta (ex., tecido vascular, tecido fundamental, e semelhantes) e células (ex. , células guarda, células ovo, tricomas, e semelhantes), e a progênie dos mesmos. A classe de plantas que podem ser usadas em métodos da presente invenção incluem a classe de plantas superiores e inferiores suscetíveis a técnicas de transformação, incluindo angiospermas (plantas monocotiledôneas e dicotiledôneas), gimnospermas, samambaias, e algas multicelulares. Plantas de uma variedade de níveis de poliploidia, incluindo plantas aneuplóides, poliplóides, haplóides e hemizigotas são incluídas também.

As moléculas de ácido nucleico da invenção podem ser usadas para conferir os traços desejados em essencialmente qualquer planta. Portanto, a invenção usou um amplo espectro de plantas incluindo espécies dos gêneros Agrotis, Alliumt Ananas, Anacardium, Apium, Arachis, Asparagus, Athamanthar Atropa, Avena, Bambusar Beta, Brassica, Bromus, Browaalia, Camellia, Cannabis, Carica, Ceratonia. Cicer, Chenopodium, ^fco Chieorium, Citrus, Citrullus, Capsicum, Carthamus, Cocos, Coffea, Coix, Cucumis, Cueurbita, Cynodonf Daetylis, Datura, Daueusf Dianthus f Digitalis, Dioseoreaf Elaeisf Eliusinef Euphorbiaf Festueaf Fieusf Fragariaf Geraniumf Glyeinef Graminaef Gossypiumf Helianthus, Heteroeallis f Heveaf Hibiseus, Hordeumf Hyoseyamus, Ipomoeaf Laetucaf Lathyrusf Lensf Liliumf Linumf Loliumf Lotusf Lupinusf Lycopersiconf Maeadamiaf Maerophyllaf Malusf Mangiferaf Manihotf Majoranaf Medieagof Musa, Narcissusf Nemesiaf Nieotianaf Onobryehis, Olea, Olyreae, Oryzaf Panieumf Panieumf Panieumf Pannisetumf Penniset um, Petuniar Pelargonium, Persea, Pharoideae, Phaseolus, Phleum, Picea, Poa, Pinus, Pistachiar Pisum, Populus, Pseudotsugar Pyrus, Prunusr Pseutotsuga, Psidiumr Quercus, Ranunculus, Raphanus, Ribes, Rieinus, Rhododendronr Rosa, Saeeharum, Salpiglossis, Seeale, Seneeiol Setaria, Sequoia, Sinapis, Solanum, Sorghum, Stenotaphrumr Theobromus, Trigonella, Trifolium, Trigonella, Tritieum, Tsugar Tulipar Vicia, Vitis, Vigna, e Zea.

Em concretizações específicas, as plantas transgênicas são plantas de milho, batata, arroz, soja, alfafa, girassol, canola, ou algodão.

Plantas transgênicas podem ser crescidas e polinadas tanto com a mesma linhagem transformada quanto linhagens diferentes. Duas ou mais gerações das plantas podem ser crescidas para garantir que a expressão da molécula de ácido nucleico, polipeptídeo e/ou característica fenotípica desejados é mantida de maneira estável e herdada. Alguém com habilidade básica na arte irá reconhecer que a molécula de ácido nucleico da presente invenção após ser incorporada de maneira estável em plantas transgênicas e confirmada estar operacional, esta pode ser introduzida em outras plantas através de cruzamento sexual. Qualquer uma de um número de técnicas padrão de cultivo pode ser usada, dependendo da espécie a ser cruzada.

Em certas concretizações os polinucleotídeos das concretizações podem ser agrupados com qualquer combinação de seqüências de polinucleotídeos de interesse em ordem a criar plantas com o traço desejado. Por exemplo, os polinucleotídeos das construções podem ser agrupados com qualquer outro polinucleotídeo codificando polipeptídeos com atividade pesticida e/ou inseticida, como outras proteínas tóxicas Bt (descritas em, por exemplo, Patentes U.S. Nos. 5.366.892; 5.747.450; 5.737.514; 5.723.756; 5.593.881; e Geiser et al. (1986) Gene 48:109), lectinas (Van Damme et al. (1994) Plant Mol. Biol. 24:825), pentina (descrita em Patente U.S. No. 5.981.722), e semelhantes. As combinações geradas podem incluir também cópias múltiplas de qualquer um dos polinucleotídeos de interesse. Os polinucleotídeos das concretizações podem ser também agrupados com qualquer outro gene ou combinação de genes para produzir plantas com uma variedade de combinações de traços desejados incluindo, mas não limitado a, traços desejáveis para a alimentação animal como genes com alto conteúdo de óleo (ex. , Patente U.S. No. 6.232.529); amino ácidos balanceados (ex., hordotioninas (Patentes U.S. Nos. 5.990.389; 5.885.801; 5.885.802; e 5.703.409); alto nível de lisina em cevada (Williamson et al. (1987) Eur. J. Biochem. 165:99-106; e WO 98/20122) e proteínas com altos níveis de metionina (Pedersen et al. (1986) J. Biol. Chem. 261:6279; Kirihara et al. (1988) Gene 71:359; e Musumura et al. (1989) Plant Mol. Biol. 12:123); digestibilidade aumentada (ex., proteínas de armazenamento modificadas (Pedido de Patente U.S. Ser. No. 10/053,410, depositado em 7 de novembro de 2001)); e tioredoxinas (Pedido de Patente U.S. Ser. No. 10/005.429, depositada em 3 de dezembro de .2 001); as descobertas que estão incorporadas aqui por referência.

Os polinucleotídeos das concretizações podem também ser agrupadas com traços desejáveis para doenças ou resistência a herbicidas (ex., genes de detoxificação de fumonisina (Patente U.S. No. 5.792.931)); genes de avirulência e resistência a doenças (Jones et al. (1994) Science 266:789; Martin et al. (1993) Science 262:1432; Mindrinos et al. (1994) Cell78:1089); mutantes para acetolactato sintase (ALS) que leva à resistência a herbicidas como as mutações S4 e/ou Hra; genes codificando resistência a inibidores de glutamina sintase como fosfinotricina ou basta {ex. , genes bar ou PAT); e resistência a glifosato (genes EPSPS e GAT (glifosato acetil transferase) Castle et al. (2004) Science 304:1151)); e traços desejáveis para o processamento ou os produtos de processamento como alto nível de óleo (ex. , Patente U.S. No. 6.232.529); óleos modificados (e.g., genes de dessaturase de ácidos (Patente U.S. No. 5.952.544; WO 94/11516)); amidos modificados (ex., ADPG pirofosforilases (AGPase), amido sintase (SS), enzimas ramificadoras de amido (SBE), e enzimas deramificadoras de amido (SDBE)); e polímeros e bioplásticos (ex., Patente U.S.

No. 5.602.321; beta-cetotiolase, polihidroxibutirato sintase, e acetoacetil-CoA redutase (Schubert et al. (1988) J. Bacteriol. 170:5837-5847) facilitam a expressão de polihidroxialcanoates (PHAs)); as descobertas que estão aqui incorporadas por referência. Alguém poderia também combinar os polinucleotídeos das concretizações com polinucleotídeos provendo traços agronômicos como esterilidade masculina (cer ex., Patente U.S. No. 5.583.210), resistência do talo, tempo de floração, ou traços tecnológicos de transformação como regulação do ciclo celular ou endereçamento genes (ex., WO 99/61619, WO 00/17364, e WO 99/25821); as descobertas que estão aqui incorporadas por referência.

Estas combinações agrupadas podem ser criadas por qualquer método incluindo, mas não limitado a, cultivo por cruzamento de plantas por qualquer metodologia convencional ou TopCross, ou transformação genética. Se as seqüências são agrupadas por transformação genética das plantas, as seqüências polinucleotídicas de interesse podem ser combinadas a qualquer hora e em qualquer ordem. Por exemplo, uma planta transgênica constituindo um ou mais traços desejados pode ser usada como alvo para introduzir traços adicionais por transformação subseqüente. Os traços podem ser introduzidos simultaneamente em um protocolo de co-transformação com os polinucleotídeos de interesse sendo providos por uma combinação de cassetes de transformação. Por exemplo, se duas seqüências serão introduzidas, as duas seqüências podem estar contidas em cassetes de transformação separados (trans) ou contidos no mesmo cassete de transformação (eis). Expressão das seqüências podem ser dirigidas pelo mesmo promotor ou por promotores diferentes. Em certos casos, pode ser desejável introduzir um cassete de transformação que irá suprimir a expressão do polinucleotídeo de interesse. Isto pode ser combinado com qualquer combinação de outros cassetes de supressão ou superexpressão para gerar a combinação desejada de traços na planta. É adicionalmente reconhecido que as seqüências de polinucleotídeos podem ser agrupadas em uma localidade genômica desejada usando um sistema de recombinação sítio-específico. Veja, ex. , WO 99/25854,

WO 99/25840, WO 99/25855, e WO 99/25853, todos aqui incorporados por referência.

Determinação da Expressão em Plantas Transgênicas

Qualquer método conhecido na arte pode ser usado para determinar o nível de expressão em uma planta de uma molécula de ácido nucleico da invenção ou polipeptídeo codificado destes. Por exemplo, o nível de expressão em uma planta de um polipeptídeo codificado por uma molécula de ácido nucleico da invenção pode ser determinado por imunoensaio, eletroforese quantitativo em gel, etc. Expressão de moléculas de ácido nucleico da invenção pode ser medida diretamente PCR quantitativo por transcrição reversa (qRT-PCR) apartir de ARN isolado da planta. Adicionalmente, o nível de expressão em uma planta de um polipeptídeo codificado por uma molécula de ácido nucleico da invenção pode ser determinado pelo grau em que o fenótipo da planta é alterado. Em uma concretização específica, a resistência a insetos aumentada é o fenótipo a ser analisado.

Como usado aqui, "resistência a insetos aumentada" se refere à resistência aumentado de uma planta transgênica expressando um polipeptídeo da invenção ao consumo e/ou infestação por uma praga de inseto quando comparado a uma planta não expressando um polipeptídeo da invenção. Resistência aumentada pode ser medida em um número de maneiras. Em uma concretização, a resistência aumentada é medida pelo dano reduzido a uma planta expressando o polipeptídeo da invenção comparado com uma planta não expressando o polipeptídeo da invenção após o mesmo período de incubação com o inseto. Dano ao inseto pode ser avaliado visualmente. Por exemplo em plantas de algodão, o dano após a infestação pode ser medido através da visualização direta dos cupulhos de plantas de algodão por sinais de consumo por insetos. Em uma outra concretização, a resistência aumentada é medida pelo aumento da produtividade da planta expressando um polipeptídeo da invenção quando comparada a uma planta não expressando um polipeptídeo da invenção após o mesmo período de incubação com os insetos. Em concretizações em particular, as pragas de inseto são da ordem de insetos Lepidópteros incluindo Heliothine, Agrotis, Pseudoplusia, Chilo, Spodoptera spp e outros.

Determinações podem ser feitas usando plantas inteiras, tecidos destas, ou culturas de células de planta.

O conteúdo de todos os artigos publicados, livros, manuais de referência e resumos citados aqui, estão aqui incorporados por referência na sua íntegra para descrever mais detalhadamente o estado da arte na qual a invenção pertence.

Como várias modificações podem ser feitas a matéria técnica descrita acima sem fugir do escopo e espírito da presente invenção, é intencional que todos as matérias técnicas contidas na descrição acima e/ou definidas nas reivindicações anexadas sejam interpretadas como descritivos e ilustrativos da presente invenção. Modificações e variações da presente invenção são possíveis a luz dos ensinamentos acima.

EXEMPLOS

Exemplo 1: Mistura de Gene Único

A toxina CrylAc é atualmente a mais potente toxina conhecida para o controle de insetos Heliothis em algodão. Porém, CrylAc possui uma atividade muito pequena em pestes secundárias da classe Spodoptera. A toxina CrylAb é uma atividade inicial excelente para o controle de pestes de insetos do algodão uma vez que apresenta uma atividade ligeiramente menor em H. zea do que CrylAc, porém atividade bem superior em S. exígua. Para superar a deficiência desse produto, um gene CrylAb-Iike foi misturado para obter polipeptídeos derivados de Cryl que apresentam atividade aumentada em Heliothine enquanto retém potencialidade essencialmente completa em Spodoptera. Um método usado para gerar polipeptídeos derivados de Cryl foi a mistura de gene único ('single gene shuffling') (mutagênese combinada com mistura). A mistura de CrylAb foi executada como a seguir. Dois fragmentos sobrepostos de um porção 5' do gene CrylAb desde o início de tradução ao sítio kpnl foram amplificados através de duas reações de PCR separadas a partir de uma cepa Bt kurstaki que contém um gene CrylAbl. Esses fragmentos foram adicionalmente fragmentados por endonuclease e montados sob certas condições mutacionais para criar um série ou biblioteca de genes misturados. Essa porção misturada contém a região que codifica a toxina madura. Com o intuito de clonar e expressar a biblioteca de genes misturados, nós construímos um vetor de trânsito E. coli-Bt que contém um gene de resistência à tetraciclina e dois replicons de ambos os hospedeiros. O vetor também contém a porção 3' remanescente (não misturada) do gene crylCa desde o sítio KpnI ao sítio de término de tradução juntamente com o promotor transcricional de crylCa e o terminador de crylAc. Quando a biblioteca de genes misturados foi clonada nesse vetor, as proteínas completas de 135-kDa foram produzidas. A biblioteca de genes misturados foi expressa em hospedeiro Bt que não contém cry chamado de BtG8, que foi derivado da cepa HDl através de cura de plasmídeo. A seleção foi feita para assegurar um alta competência de transformação por eletroporação que é requerida para a obtenção de um biblioteca misturada diversificada. 0 hospedeiro selecionado, BtG8, mostrou um nível de competência acima de IO6 transformantes por 1 ug de ADN. A biblioteca de genes misturados foi obtida através de transformação seqüencial de E. coli XL-I Blue, E. coli GM2163 e BtG8 . XL-I Blue foi usada pela alta eficiência de transformação. O plasmídeo foi preparado a partir de células transformadas de XL-I Blue, e uma pequena porção foi examinada através de eletroforese em gel para assegurar a ausência de quantidades visíveis de moléculas de vetores sem ADN misturado. GM2163 foi usada para preparar ADN não metilado para transformação através de eletroporação de BtGQ. A BtG8 transformada que cresceu em placas de tetraciclina foram colocadas em placas de96 poços por robô. Essas placas foram incubadas até esporulação e culturas foram usadas como inóculo para produção de amostra de ensaio. Nós usamos varredura de duas fileiras de insetos para obter alta produtividade. A primeira fileira foi para eliminar variantes sem qualquer atividade detectável. As amostras de ensaio da primeira fileira foram produzidas em meio líquido CYS como descrito em uma publicação de Yamamoto (Identification of entomocidal toxins of Bacillus thuringiensis by high-performance liquid chromatography. in Analytical chemistry of Bacillus thuringiensis. ed. Hickle, L.A. e Fitch, W.L., American Chemical Society, Washington DC, USA, 46-60, 1990) em placas de 96 poços rasos. Nesse estágio, ^^ meio de cultura contendo cristais e esporos foi testado com larvas recém-nascidas de H. zea em placas de 96 poços contendo uma dieta artificial de insetos. Essas variantes apresentando atividade foram selecionadas para a próxima etapa. Para a varredura da segunda fileira, as proteínas cristalinas foram purificadas a partir de 1 ml de meio de cultura produzido em placas de 96 poços fundos pela solubilização diferencial entre pH 10,5 e pH 4,4. Os cristais foram solubilizados em pH 10,5 com 2% de 2-mercaptoetanol, e as proteínas cristalinas solubilizadas foram precipitadas em pH 4,4. Após concentrações ^de proteínas serem determinadas, diluições seriais foram feitas e amostradas contra larvas de H. zea usando ensaio de incorporação de dieta de insetos. Após a varredura de milhares de variantes, nós encontramos um número substancial de proteínas apresentando atividade aumentada em H. zea em comparação com a CrylAb parental. Essas variantes melhoradas foram então testadas contra Spodoptera exigua.

Polipeptídeos que resultaram de mistura de gene único foram varridos para atividade aumentada em H. zea relativo à CrylAb selvagem. AR2 (SEQ ID NOSrl e 2) e AR6 (SEQ ID NOS:3 e 4) foram identificadas como polipeptídeos derivados de Cryl que apresentam atividade aumentada contra H. zea (Fig. 1) . A atividade de AR6 foi adicionalmente investigada pela comparação relativa inversa de valores EC50 para protoxinas de AR6, CrylAb, CrylAc, e CrylCa em Heliothis virescens, Helicoverpa zea, e Spodoptera exigua (Fig. 2) . Protoxinas purificadas CrylAb, AR6, CrylAc, e CrylCa foram introduzidas na dieta artificial em seis doses e em 24 replicatas para determinar o EC50 de cada protoxina contra três insetos. 0 experimento foi repetido três vezes e valores EC50 foi expresso com uma média das três tentativas. Os valores EC5O são então convertidos para valores relativos inversos. Já que CrylAc apresenta o menor EC50 (maior atividade específica) em Heliothis virescens e Helicoverpa zea foi dado um valor de 1,0 a cada uma das respectivas pestes de insetos. Outras amostras de protoxinas apresentaram valores EC5O mais altos para tanto H. virescens quanto H. zea (menor atividade específica) e foram convertidos a valores relativos ao da CrylAc. De mesmo modo, CrylCa apresenta o menor valor EC50 para Spodoptera exigua e por isso lhe foi dado um valor relativo de '1,0' naquela peste. Valores EC50 de outras protoxinas foram maiores (menor atividade específica) e receberam um valor relativo menor para esse peste. Esses dados mostraram que AR6 apresenta quase o dobro de atividade específica que CrylAb selvagem para tanto H. zea quanto S. exigua (Fig. 2) . Uma descrição das diferenças de amino ácidos entre a toxina CrylAb parental e os clones misturados é apresentada na Tabela 3. Um experimento de mistura de gene único foi conduzido para melhorar a atividade de CrylCa em Spodoptera. Como foi feito na mistura do gene crylAb, um molde de ADN crylCa foi submetido à mutagênese e mistura de ADN. Proteínas produzidas a partir de variantes misturadas foram varridas para melhora da atividade em S. exigua. Uma das variantes, CR62 (SEQ ID NOS: 7 e 8), apresentou um EC50 aumentado em ~3 vezes comparado à proteína CrylCa selvagem (Fig. 3).

Exemplo 2: Construção do Gene CR62 Sintético

As seqüências de ADN de CR62 e o gene parental, CrylCa, foram modificando usando uso de códons aleatório para criar genes completamente sintéticos capazes de serem expressos em plantas (SEQ ID NO: 9 e SEQ ID NO: 31, respectivamente. A Tabela 4 provê uma descrição das diferenças da seqüência de amino ácidos codificados entre esses genes. Seguindo a construção dos genes sintéticos CR62 e CrylCa, a regiões codificantes foram clonadas em vetor binário atrás de um promotor forte constitutivo de vírus vegetal e os plasmídeos subseqüentes foram transformados em Agrobacterium tumefaciens C58. Essas cepas foram testadas para eficácia in planta usando uma infiltração de Agrobacterium em folha baseada no sistema de expressão transiente seguida de bioensaios de discos foliares com Spodoptera exigua. Usando esse ensaio foi mostrado que ambos os genes expressaram atividade inseticida apesar do gene misturado CR62 gene apresentar um melhor desempenho que o parente selvagem não misturado (dados não mostrados). Exemplo 3: Construção dos Genes Sintéticos MR8' e AR6

A seqüência de ADN de AR6 foi alvo de modificação para criar uma versão sintética da região codificante de AR6 (SEQ ID NOS: 5 e 6) como descrito para CR62 na seção 6.2. Porém, nesse exemplo somente a extremidade 5' de AR6 codificando o domínio N-terminal da protoxina e toxina foram alvo para a ressíntese. Essa região codificante N-terminal foi ligada à região codificante sintética C-terminal pré-existente da protoxina do gene sintético CR62 gene para formar um gene completo da protoxina para expressão em plantas. No processo de produção de um gene AR6 sintético, um gene precursor foi construído. Esse gene, chamado de MR8'(SEQ ID N0:11), codifica oito resíduos de amino ácidos diferentes na porção protoxina da proteína (Tabela 3).

Exemplo 4: Teste in planta do Gene AR6 Sintético

Seguindo a construção dos genes MR8' e AR6 sintéticos, as regiões codificantes foram clonados em um vetor binário com um promotor forte constitutivo de vírus vegetal e os plasmídeos subseqüentes foram transformados em Agrobacterium tumefaciens C58. Essas cepas foram testadas para eficácia in planta usando infiltração de Agrobacterium em folha baseado no sistema de expressão transiente seguida de bioensaios de insetos em discos foliares. Tanto AR6 quanto MR8' sintéticos foram expressos em ensaio transiente em folha como mostrado por análise de Western Blot (Fig. 4).

Para testar a atividade in planta, um disco foliar expressando um polipeptídeo de interesse foi provido a uma peste. Após um período de incubação de 24 horas, a atividade de alimentação da peste no disco foliar foi determinada por observação visual. Controles positivos para atividade para H. zea e S. exígua foram genes codificando polipeptídeos Cry2Ab- like (*) e CR62, respectivamente. Esses resultados mostraram que tanto AR6 quanto MR8' sintéticos conferem alto nível de resistência a tanto H. zea (Fig. 5A) quanto S. exigua (Fig. 5B) . Discos foliares infiltrados com Agrobacterium com ausência de um gene Cry foram completamente consumidos por larvas de inseto durante o período de ensaio (não mostrado).

Exemplo 5: Mistura Adicional Usando MR8' como Parental

Para adicionalmente melhorar a atividade de MR8', um segundo ciclo de mistura de ADN foi desempenhado usando MR8' como clone parental. A mistura foi desempenhada no molde de ADN MR8' fragmentado pela adição direta de diversidade de seqüência com oligonucleotídeos. Uma vez que o gene MR8' codifica uma protoxina, a mistura foi limitada à região da toxina ativa que é responsável pelas propriedades inseticidas. Dois tipos de diversidade de seqüência foram usadas para incorporar em reações de misturas: diversidade filogenética e aleatória gerada por computador. Diversidade filogenética originada a partir do alinhamento de acertos do primeiro ciclo AR6, MR8', e polipeptídeos selvagens CrylAa, CrylAb, CrylAci CrylAd, CrylAe, e CrylAg. Diversidade aleatória foi gerada através da escolha de posições aleatórias de amino ácidos e direcionando mudanças de amino ácidos tanto conservativas quanto não-conservativas nestas posições. Ambos os tipos de diversidade foram incorporadas no gene parental MR8' e proteína codificada em um domínio através de base de domínio. Várias bibliotecas foram construídas, cada um focando em um tipo selecionado de diversidade e aplicado a regiões isoladas de domínio da toxina ou na região inteira da toxina. Seguindo a mistura de ADN, cada fragmento de biblioteca amplificado por PCR foi reintroduzido no fragmento remanescente da protoxina MR8' através de "PCR stitching". A biblioteca de protoxinas reconstruídas foi então clonada em um vetor pUC de modo que os polipeptídeos derivados Cryl foram expressos em E. coli a partir do promotor LacZ.

Com o intuito de acessar a atividade de polipeptídeos derivados de Cryl contra H. zea, varredura de alta produtividade usando uma dieta artificial contendo células inteiras de E. coli expressando cada um dos polipeptídeos derivados de Cryl em um formato de arranjo foi desempenhado (dados não mostrados). Essas.variantes apresentando alto nível de atividade foram então testadas para atividade in planta. A diversidade de amino ácidos presente nas variantes testadas é mostrada na Tabela 5. As seqüências de amino ácidos das regiões misturadas da toxina assim como as seqüências nucleotídicas codificando toda a protoxina são providas por SEQ ID NOS: 11-28.

Para iniciar ensaios in planta, todas as variantes altamente ativas derivadas de Cryl foram clonadas em vetor de expressão em plantas baseado em Agrobacterium tumefaciens. Os plasmídeos binários foram então transformados em uma Agrobacterium hospedeira. Os polipeptídeos derivados de Cryl foram então varridos através de co-cultivo cada um em quatro réplicas com folhas de N. benthamiana (usando infiltração forçada de cada cultura respectiva). Discos foliares foram excisados de áreas infiltradas e infestados com larvas individuais de terceiro estágio de H. zea ou quarto estágio de S. exígua. Após 24 horas, a atividade de alimentação foi determinada por captura de vídeo da área remanescente da folha expressa em pixels.

A Figura 6 mostra a atividade dos polipeptídeos

indicados derivados de Cryl em H. zea. A Figura 7 mostra a atividade dos polipeptídeos indicados derivados de Cryl em S. exigua. Todos os polipeptídeos testados derivados de Cryl apresentaram atividade aumentada contra H. zea quando comparada ao polipeptídeo parental MR81 enquanto retendo atividade contra S. exigua que é tão boa quanto a de MR8'. Tabela 1: Seqüências dérivadas de Cryl e Cry 1

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Fontes para todos os genes e proteínas de referência: http://www.Iifesci.sussex.ac.uk/home/Neil_Crickmore/Bt/index.h tml

Revisão da Nomenclatura para as Proteínas Cristalinas Pesticidas Bacillus thuringiensis N. Crickmore, D.R. Zeigler, J. Feitelson, E. Schnepf, J. Van Rie, D. Lereclus, J. Baum1 e D.H. Dean. Microbiology and Molecular Biology Reviews (1998) Vol 62: 807-813 Tabela 2: Tabela de Códon

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Tabela 3: Comparação das diferenças de seqüência de amino ácidos entre CrylAb e o primeiro ciclo de acertos misturados

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Alinhamentos de amino ácidos derivados da tradução de seqüências de ADN listadas. Um intervalo na posição 2 é inserido em seqüências de amino ácidos derivadas não- sinteticamente para acomodar inserção de um resíduo de glicina naquela posição nas seqüências polipeptídicas derivadas sinteticamente. Logo, as posições de amino ácidos correspondentes na SEQ IDNOs: 1, 3, e 33 seria uma a menos do que cada uma das coordenadas dos alinhamentos acima além da posição. Tabela 4: Comparação das diferenças de seqüências de amino ácidos entre CrylCa e clone de acerto misturado CR62

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Alinhamentos de amino ácidos derivados da tradução das seqüências de ADN listadas.

Tabela 5: Comparação das diferenças de seqüências de amino ácidos entre a região da δ-endotoxina para CrylAb e o segundo ciclo de acertos misturados

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Posições de amino ácidos são relativas a +1 sendo o primeiro resíduo da toxina madura. LISTAGEM DE SEQUENCIAS <110> Depositante: PIONEER HI-BRED INTERNATIONAL, INC

<120> Título da Invenção: MOLÉCULA DE ÁCIDO NUCLEICO ISOLADA, VETOR, CASSETE DE EXPRESSÃO, CÉLULA HOSPEDEIRA, PLANTA TRANSGÊNICA, SEMENTE, MOLÉCULA DE ÁCIDO NUCLEICO, VETOR, POLIPEPTÍDEO, MÉTODO PARA PRODUZIR UMA PLANTA COM RESISTÊNCIA A INSETOS AUMENTADA, POLINUCLEOTIDEO ISOLADO, CASSETE DE EXPRESSÃO RECOMBINANTE, POLIPEPTÍDEO ISOLADO, CÉLULA HOSPEDEIRA TRANSFORMADA, PLANTA TRANSFORMADA, SEMENTE TRANSFORMADA

<130> Referência do documento: P08116US01 PHI2059

<140> Niimero do Depósito: PCT/US2007/086947 <141> Data do Depósito: 10/12/2007

<160> Quantidade de SEQ ID NOs.: 36

<17Ò> Software: PatentIn versão 3.5

<210> SEQ ID NO: 1

<211> Comprimento: 3543

<212> Tipo: DNA

<213> Organismo: Bacillus thuringiensis

<220> Características: <221> Nome/Chave: misc_feature <222> Localização: (2033).. (2033)

<223> Outras Informações: η é a, c, g, ou t

<400> Seqüência: 1

atgcataaca atccgaacac caatgaatgc attccttata attgtttaag taaccctgaa 60

gtagaagtat taggtggaga aagaatagaa actggttaca ccccaatcga tatttccttg 120

tcgctaacgc aatttctttt gagtgaattt gttcccggtg ctggatttgt gttaggacta 180

gttgatataa tatggggaat ttttggtccc tctcaatggg acgcatttct tgtacaaatt 240

gaacagttaa ttaaccaaag aataggggaa ttcgctagga accaagccat ttctagatta 300

gaaggactaa gcaatcttta tcaaatttac gcagaatctt ttagagagtg ggaagcagat 360

cctactaatc cagcattaag agaagagatg cgtattcaat tcaatgacat gaacagtgcc 420

cttacaaccg ctattcctct ttttgcagtt caaaattatc aagttcctct tttatcagta 480 tatgttcaag ctgcaaattt acatttatca gttttgagag atgtttcagt gtttggacaa 540

aggtggggat ttgatgccgc gactatcaat agtcgttata atgatttaac taggcttatt 600

ggcaactata cagatcatgc tgtacgctgg tacaatacgg gattagagcg tgtatgggga 660

ccggattcta gagattggat aagatataat caatttagaa gagaattaac actaactgta 720

ttagatatcg tttctctatt tccgaactat gatagtagaa cgtatccaat tcgaacagtt 780

tcccaactaa caagggaagt ttatacggac ccagtattag aaaattttga tggtagtttt 840

cgaggctcgg ctcagggcat agaaggaagt attaggagtc cacatttgat ggatatactt 900

aacagtataa ccatctatac ggatgctcat agaggagaat attattggtc agggcatcaa 960

ataatggctt ctcctgtagg gttttcgggg ccagaattca cttttccgct atatggaact 1020

atgggaaatg cagctccaca acaacgtatt gttgctcaac taggtcaggg cgtgtataga 1080

acattatcgt ccactttata tagaagacct tttaatatag ggataaataa tcaacaacta 1140

3 5 tctgttcttg acgggacaga atttgcttat ggaacctcct caaatttgcc atccgctgta 1200

tacagaaaaa gcggaacggt agattcgctg gatgaaatac cgccacagaa taacaacgtg 1260

ccacctaggc aaggatttag tcatcgatta agccatgttt caatgtttcg ttcaggcttt 1320

agtaatagta gtgtaagtat aataagagct cctatgttct cttggataca tcgtagtgct 1380

gaatttaata atacaattga tccagagaga attaatcaaa tacctttaac aaaatctact 1440

aatcttggct ctggaacttc tgtcgttaaa ggaccaggat ttacaggagg agatattctt 1500

cgaagaactt cacctggcca gatttcaacc ttaagagtaa atattactgc accattatca 1560

caaagatatc gggtaagaat tcgctacgct tctaccacaa atttacaatt ccatacatca 1620

attgacggaa gacctattaa tcaggggaat ttttcagcaa ctatgagtag tgggagtaat 1680 ttacagtccg gaagctttag gactgtaggt tttactactc cgtttaactt ttcaaatgga 1740

tcgagtgtat ttacgttaag tgctcatgtc ttcaattcag gcaatgaatt ttatatagat 1800

cgaattgaat ttgttccggc agaagtaacc tttgaggcag aatatgattt agaaagagca 1860

caaaaggcgg tgagtgagct gcttacttct tccaatcaaa tcgggttaaa aacagatgtg 1920

acggattatc atattgatca agtatccaat ttagttgagt gtttatctga tgaattttgt 1980

ctggatgaaa aaaaagaatt gtccgaggaa gtcaaacatg cgaagcgact tantgatgag 2040

cggaatttac ttcaagatcc aaactttaga gggatcaata gacaactaga ccgtggctgg 2100

aggggaagta cggatattac catccaagga ggcgatgacg tattcaaaga gaattacgtt 2160

acgctattgg gtaccgttga tgagtgctat ccaacgtatt tatatcagaa aatagatgag 2220

tcgaaattaa aagcttatac ccgttatgaa ttaagagggt atatcgaaga tagtcaagac 2280

ttagaaatct atttgatccg ttacaatgca aaacacgaaa tagtaaatgt gccaggcacg 2340

ggttccttat ggccgctttc agcccaaagt ccaatcggaa agtgtggaga accgaatcga 2400

tgcgcgccac accttgaatg gaatcctgat ctagattgtt cctgcagaga cggggaaaaa 2460

tgtgcacatc attcccatca tttcaccttg gatattgatg ttggatgtac agacttaaat 2520

gaggacttag gtgtatgggt gatattcaag attaagacgc aagatggcca tgcaagacta 2580

gggaatctag agtttctcga agagaaacca ttattagggg aagcactagc tcgtgtgaaa 2640

agagcggaga agaagtggag agacaaacga gagaaactgc agttggaaac aaatattgtt 2700

tataaagagg caaaagaatc tgtagatgct ttatttgtaa actctcaata tgatagatta 2760

caagtggata cgaacatcgc gatgattcat gcggcagata aacgcgttca tagaatccgg 2820

gaagcgtatc tgccagagtt gtctgtgatt ccaggtgtca atgcggccat tttcgaagaa 2880

60 ttagagggac gtatttttac agcgtattcc ttatatgatg cgagaaatgt cattaaaaat 2940

ggcgatttca ataatggctt attatgctgg aacgtgaaag gtcatgtaga tgtagaagag 3000

caaaacaacc accgttcggt ccttgttatc ccagaatggg aggcagaagt gtcacaagag 3060

gttcgtgtct gtccaggtcg tggctatatc cttcgtgtca cagcatataa agagggatat 3120

ggagagggct gcgtaacgat ccatgagatc gaagacaata cagacgaact gaaattcagc 3180

aactgtgtag aagaggaagt atatccaaac aacacagtaa cgtgtaataa ttatactggg 3240

actcaagaag aatatgaggg tacgtacact tctcgtaatc aaggatatga cgaagcctat 3300

ggtaataacc cttccgtacc agctgattac gcttcagtct atgaagaaaa atcgtataca 3360

gatggacgaa gagagaatcc ttgtgaatct aacagaggct atggggatta cacaccacta 3420

ccggctggtt atgtaacaaa ggatttagag tacttcccag agaccgataa ggtatggatt 3480

gagatcggag aaacagaagg aacattcatc gtggatagcg tggaattact ccttatggag 3540

gaa 3543

<210> SEQ ID NO: 2 <211> Comprimento: 591 <212> Tipo: PRT

<213> Organismo: Bacillus thuringiensis <400> Seqüência: 2

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Phe Leu Leu Ser Glu Phe Val Pro Gly Ala Gly Phe Val Leu Gly Leu 20 25 30

Val Asp Ile Ile Trp Gly Ile Phe Gly Pro Ser Gln Trp Asp Ala Phe 35 40 45

Leu Val Gln Ile Glu Gln Leu Ile Asn Gln Arg Ile Gly Glu Phe Ala 50 55 60

Arg Asn Gln Ala Ile Ser Arg Leu Glu Gly Leu Ser Asn Leu Tyr Gln 65 70 75 80

Ile Tyr Ala Glu Ser Phe Arg Glu Trp Glu Ala Asp Pro Thr Asn Pro 85 90 95 Ala Leu Arg Glu Glu Met Arg Ile Gln Phe Asn Asp Met Asn Ser Ala

Leu Thr Thr Ala Ile Pro Leu Phe Ala Val Gln Asn Tyr Gln Val Pro

Leu Leu Ser Val Tyr Val Gln Ala Ala Asn Leu His Leu Ser Val Leu Arg Asp Val Ser Val Phe Gly Gln Arg Trp Gly Phe Asp Ala Ala Thr

Ile Asn Ser Arg Tyr Asn Asp Leu Thr Arg Leu Ile Gly Asn Tyr Thr

Asp His Ala Val Arg Trp Tyr Asn Thr Gly Leu Glu Arg Val Trp Gly

Pro Asp Ser Arg Asp Trp Ile Arg Tyr Asn Gln Phe Arg Arg Glu Leu

Thr Leu Thr Val Leu Asp Ile Val Ser Leu Phe Pro Asn Tyr Asp Ser

Arg Thr Tyr Pro Ile Arg Thr Val Ser Gln Leu Thr Arg Glu Val Tyr

Thr Asp Pro Val Leu Glu Asn Phe Asp Gly Ser Phe Arg Gly Ser Ala

Gln Gly Ile Glu Gly Ser Ile Arg Ser Pro His Leu Met Asp Ile Leu

Asn Ser Ile Thr Ile Tyr Thr Asp Ala His Arg Gly Glu Tyr Tyr Trp

Ser Gly His Gln Ile Met Ala Ser Pro Val Gly Phe Ser Gly Pro Glu

Phe Thr Phe Pro Leu Tyr Gly Thr Met Gly Asn Ala Ala Pro Gln Gln

Arg Ile Val Ala Gln Leu Gly Gln Gly Val Tyr Arg Thr Leu Ser Ser

Thr Leu Tyr Arg Arg Pro Phe Asn Ile Gly Ile Asn Asn Gln Gln Leu

Ser Val Leu Asp Gly Thr Glu Phe Ala Tyr Gly Thr Ser Ser Asn Leu

Pro Ser Ala Val Tyr Arg Lys Ser Gly Thr Val Asp Ser Leu Asp Glu

Ile Pro Pro Gln Asn Asn Asn Val Pro Pro Arg Gln Gly Phe Ser His

Arg Leu Ser His Val Ser Met Phe Arg Ser Gly Phe Ser Asn Ser Ser Val Ser Ile Ile Arg Ala Pro Met Phe Ser Trp Ile His Arg Ser Ala 420 425 430

Glu Phe Asn Asn Thr Ile Asp Pro Glu Arg Ile Asn Gln Ile Pro Leu 435 440 445

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Ser Thr Leu Arg Val Asn Ile Thr Ala Pro Leu Ser Gln Arg Tyr Arg 485 490 495

Val Arg Ile Arg Tyr Ala Ser Thr Thr Asn Leu Gln Phe His Thr Ser 500 505 510

Ile Asp Gly Arg Pro Ile Asn Gln Gly Asn Phe Ser Ala Thr Met Ser 515 520 525

Ser Gly Ser Asn Leu Gln Ser Gly Ser Phe Arg Thr Val Gly Phe Thr 530 535 540

Thr Pro Phe Asn Phe Ser Asn Gly Ser Ser Val Phe Thr Leu Ser Ala 545 550 555 560

His Val Phe Asn Ser Gly Asn Glu Phe Tyr Ile Asp Arg Ile Glu Phe

565 570 575

Val Pro Ala Glu Val Thr Phe Glu Ala Glu Tyr Asp Leu Glu Arg

580 585 590

<210> SEQ ID NO: 3 <211> Comprimento: 3543 <212> Tipo: DNA

<213> Organismo: Bacillus thuringiensis <400> Seqüência: 3

atgcataaca atccgaacac caatgaatgc attccttata attgtttaag taaccctgaa

gtagaagtat taggtggaga aagaatagaa actggttaca ccccaatcga tatttccttg 120

tcgctaacgc aatttctttt gagtgaattt gttcccggtg ctggatttgt gttaggacta 180

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gaacagttaa ttaaccaaag aatagaagaa ttcgctagga accaagccat ttctagatta 300

gaaggactaa gcaatcttta tcaaatttac gcagaatctt ttagagagtg ggaagcagat 360

cctactaatc cagcattaag agaagagatg cgtattcaat tcaatgacat gaacagtgcc 420 cttacaaccg ctattcctct ttttgcagtt caaaattatc aagttcctct tttatcagta 480

tatgttcaag ctgcaaattt acatttatca gttttgagag atgtttcagt gtttggacaa 540

aggtggggat ttgatgccgc gactatcaat agtcgttata atgatttaac taggcttatt 600

ggcaactata cagatcatgc tgtacgctgg tacaatacgg gattagagcg tgtatgggga 660

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tctgttcttg acgggacaga atttgcttat ggaacctcct caaatttgcc atccgctgta 1200

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gaatttaata atacaattga tccagagaga attaatcaaa tacctttaac aaaatctact 1440

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cgaagaactt cacctggcca gatttcaacc ttaagagtaa atattactgc accattatca 1560

caaagatatc gggtaagaat tcgctacgct tctaccacaa atttacaatt ccatacatca 1620 attgacggaa gacctattaa tcaggggaat ttttcagcaa ctatgagtag tgggagtaat 1680

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tcgagtgtat ttacgttaag tgctcatgtc ttcaattcag gcaatgaagt ttatatagat 1800

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caaaaggcgg tgagtgagct gtttacttct tccaatcaaa tcgggttaaa aacagatgtg 1920

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ggttccttat ggccgctttc agcccaaagt ccaatcggaa agtgtggaga accgaatcga 2400

tgcgcgccac accttgaatg gaatcctgat ctagattgtt cctgcagaga cggggaaaaa 2460

tgtgcacatc attcccatca tttcaccttg gatattgatg ttggatgtac agacttaaat 2520

gaggacttag gtgtatgggt gatattcaag attaagacgc aagatggcca tgcaagacta 2580

gggaatctag agtttctcga agagaaacca ttattagggg aagcactagc tcgtgtgaaa 2640

agagcggaga agaagtggag agacaaacga gagaaactgc agttggaaac aaatattgtt 2700

tataaagagg caaaagaatc tgtagatgct ttatttgtaa actctcaata tgatagatta 2760

caagtggata cgaacatcgc gatgattcat gcggcagata aacgcgttca tagaatccgg 2820 gaagcgtatc tgccagagtt gtctgtgatt ccaggtgtca atgcggccat tttcgaagaa 2880

ttagagggac gtatttttac agcgtattcc ttatatgatg cgagaaatgt cattaaaaat 2940

ggcgatttca ataatggctt attatgctgg aacgtgaaag gtcatgtaga tgtagaagag 3000

caaaacaacc accgttcggt ccttgttatc ccagaatggg aggcagaagt gtcacaagag 3060

gttcgtgtct gtccaggtcg tggctatatc cttcgtgtca cagcatataa agagggatat 3120

ggagagggct gcgtaacgat ccatgagatc gaagacaata cagacgaact gaaattcagc 3180

aactgtgtag aagaggaagt atatccaaac aacacagtaa cgtgtaataa ttatactggg 3240

actcaagaag aatatgaggg tacgtacact tctcgtaatc aaggatatga cgaagcctat 3300

ggtaataacc cttccgtacc agctgattac gcttcagtct atgaagaaaa atcgtataca 3360

gatggacgaa gagagaatcc ttgtgaatct aacagaggct atggggatta cacaccacta 3420

ccggctggtt atgtaacaaa ggatttagag tacttcccag agaccgataa ggtatggatt 3480

gagatcggag aaacagaagg aacattcatc gtggatagcg tggaattact ccttatggag 3540

gaa 3543

<210> SEQ ID NO: 4 <211> Comprimento: 591 <212> Tipo: PRT

<213> Organismo: Bacillus thuringiensis <400> Seqüência: 4

Ile Glu Thr Gly Tyr Thr Pro Ile Asp Ile Ser Leu Ser Leu Thr Gln 1 5 10 15

50 Phe Leu Leu Ser Glu Phe Val Pro Gly Ala Gly Phe Val Leu Gly Leu 20 25 30

Val Asp Ile Ile Trp Gly Ile Phe Gly Pro Ser Gln Trp Asp Ala Phe 35 40 45

Leu Val Gln Ile Glu Gln Leu Ile Asn Gln Arg Ile Glu Glu Phe Ala 50 55 60

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Arg Thr Tyr Pro Ile Arg Thr Val Ser Gln Leu Thr Arg Glu Val Tyr

225 230 235 240

Thr Asp Pro Val Leu Glu Asn Phe Asp Gly Ser Phe Arg Gly Ser Ala

245 250 255

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Arg Ile Val Ala Gln Leu Gly Gln Gly Val Tyr Arg Thr Leu Ser Ser

325 330 335

Thr Leu Tyr Arg Arg Pro Phe Asn Ile Gly Ile Asn Asn Gln Gln Leu 340 345 350

Ser Val Leu Asp Gly Thr Glu Phe Ala Tyr Gly Thr Ser Ser Asn Leu 355 360 365

Pro Ser Ala Val Tyr Arg Lys Ser Gly Thr Val Asp Ser Leu Asp Glu 370 375 380

Ile Pro Pro Gln Asn Asp Asn Val Pro Pro Arg Gln Gly Phe Ser His 385 390 395 400 Arg Leu Ser His Val Ser Met Phe Arg Ser Gly Phe Ser Asn Ser Ser 405 410 415

Val Ser Ile Ile Arg Ala Pro Met Phe Ser Trp Ile His Arg Ser Ala 420 425 430

Glu Phe Asn Asn Thr Ile Asp Pro Glu Arg Ile Asn Gln Ile Pro Leu 435 440 445

Thr Lys Ser Thr Asn Leu Gly Ser Gly Thr Ser Val Val Lys Gly Pro 450 455 460

Gly Phe Thr Gly Gly Asp Ile Leu Arg Arg Thr Ser Pro Gly Gln Ile 465 470 475 480

Ser Thr Leu Arg Val Asn Ile Thr Ala Pro Leu Ser Gln Arg Tyr Arg 485 490 495

Val Arg Ile Arg Tyr Ala Ser Thr Thr Asn Leu Gln Phe His Thr Ser 500 505 510

Ile Asp Gly Arg Pro Ile Asn Gln Gly Asn Phe Ser Ala Thr Met Ser 515 520 525

Ser Gly Ser Asn Leu Gln Ser Gly Ser Phe Arg Thr Val Gly Phe Thr 530 535 540

Thr Pro Phe Asn Phe Ser Asn Gly Ser Ser Val Phe Thr Leu Ser Ala 545 550 555 560

His Val Phe Asn Ser Gly Asn Glu Val Tyr Ile Asp Arg Ile Glu Phe 565 570 575

Val Pro Ala Glu Val Thr Phe Glu Ala Glu Tyr Asp Leu Glu Arg 580 585 590

<210> SEQ ID NO: 5

<211> Comprimento: 3546

<212> Tipo: DNA

<213> Organismo: Bacillus thuringiensis

<400> Seqüência: 5

atgggacaca acaatccaaa taccaatgaa tgcatcccct ataattgctt gagcaaccct 60

gaagttgaag ttctgggagg tgagaggata gaaactggat atacccctat tgatatctct 120

ctgtctttga ctcagttcct cctgagtgag tttgttccag gtgcaggatt tgtgttgggt 180

ttggtagaca ttatctgggg aatctttgga ccatcccaat gggatgcctt tctggtccaa 240

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cttgagggat tgtcaaactt gtaccagata tatgctgaaa gtttcagaga gtgggaagct 360 gacccaacca accctgcatt gagggaagag atgaggattc agttcaatga tatgaactca 420

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gtaagtcagc tgactcgtga agtctacacg gaccctgtcc tggagaactt tgatggtagc 840

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caaatcatgg catccccagt tggattttct ggtccagagt tcactttccc cttgtatgga 1020

acaatgggta atgctgctcc acagcaacga atagttgctc aattgggaca aggggtatat 1080

cgaaccttat catcaacact gtatcgacgt ccattcaaca ttgggataaa caatcaacag 1140

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gtacctccaa gacaaggatt ctcccaccgt ctctctcatg tgtctatgtt ccgtagtggc 1320

50 tttagtaaca gcagtgtgag catcatacgt gcacctatgt tttcatggat tcaccgtagt 1380

gcagagttca ataacaccat tgaccctgaa cgaatcaatc aaatcccact taccaaaagc 1440

accaaccttg gtagcggaac cagcgttgtg aagggtcctg gtttcactgg tggggatatt 1500

ctgcgacgta ccagccctgg acagattagc acactgcgtg tgaacatcac cgctccactg 60 1560 agtcagcgct atcgagtgag gattcgctat gctagcacta ccaaccttca gttccatacc 1620

agcattgatg gtcgtccaat taaccaaggc aacttcagcg ctaccatgtc cagcggctca 1680

aacctgcaaa gtggatcatt ccgcaccgtt ggctttacca ctccattcaa cttcagcaac 1740

ggcagtagcg tgttcaccct ttccgcacat gtgttcaaca gtggcaacga agtgtacatc 1800

gatagaatcg agtttgtgcc agcggaagtg acttttgaag ctgagtacga ccttgaacgt 1860

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tgtctcgatg agaagcgaga actctctgaa aaggttaagc acgctaagag actcagcgat 2040

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tggcgtggat caacagacat cactatccaa ggtggagacg atgtttttaa ggagaactac 2160

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gatcttgaaa tctacctcat cagatacaac gctaaacacg aaatcgtcaa cgttccaggt 2340

actggatctc tgtggccact ctctgcacag tcacctattg gcaagtgcgg tgagccaaat 2400

agatgtgcac cacacctgga gtggaatccc gatctggact gtagttgtcg tgacggggag 2460

aagtgcgctc atcacagcca tcacttcact cttgatatcg atgttggatg taccgacctt 2520

aatgaagacc tgggcgtttg ggttatcttc aagattaaga cccaggatgg tcatgccaga 2580

cttggtaatc tggagttcct tgaagagaaa cccttgttgg gtgaagctct ggccagagtc 2640

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gtctacaaag aggcaaagga gtctgtggat gccttgttcg tgaactctca gtacgaccga 2760 ctccaagtgg ataccaacat tgctatgatt catgctgctg acaaacgtgt tcaccgtatc 2820

agagaagcct atctccctga actgtcagtg atcccaggag tcaacgctgc aatcttcgag 2880

gagcttgaag gtcgaatctt cactgcctat tcactttacg atgcacgaaa cgtgattaag 2940

aatggggatt ttaataacgg gttgttgtgc tggaatgtga aggggcacgt ggatgttgag 3000

gaacaaaaca accaccgttc cgtgcttgtt attcctgagt gggaagcaga ggtgtctcag 3060

gaggttaggg tgtgtcctgg tagaggatat atcttgagag tgactgccta taaggaaggc 3120

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tctaactgcg ttgaggagga agtctaccca aacaataccg tcacttgtaa caattacaca 3240

ggcacacaag aagagtacga aggaacctac acctcccgaa atcagggtta tgatgaggcc 3300

tatggtaata atccttctgt gcctgccgat tatgcttctg tttacgagga aaagtcttac 3360

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cttccagcag gatacgttac taaggatctt gagtactttc cagagactga taaagtttgg 3480

atcgaaatcg gagagactga aggcacattc atcgtggatt ctgtggagct cttgctcatg 3540

gaggaa 3546

<210> SEQ ID NO: 6

<211> Comprimento: 591

<212> Tipo: PRT

<213> Organismo: Bacillus thuringiensis

<400> Seqüência: 6

Ile Glu Thr Gly Tyr Thr Pro Ile Asp Ile Ser Leu Ser Leu Thr Gln 15 10 15

Phe Leu Leu Ser Glu Phe Val Pro Gly Ala Gly Phe Val Leu Gly Leu 20 25 30

Val Asp Ile Ile Trp Gly Ile Phe Gly Pro Ser Gln Trp Asp Ala Phe 35 40 45

Leu Val Gln Ile Glu Gln Leu Ile Asn Gln Arg Ile Glu Glu Phe Ala 50 55 60 Arg Asn Gln Ala Ile Ser Arg Leu Glu Gly Leu Ser Asn Leu Tyr Gln 65 70 75 80

Ile Tyr Ala Glu Ser Phe Arg Glu Trp Glu Ala Asp Pro Thr Asn Pro

85 90 95

Ala Leu Arg Glu Glu Met Arg Ile Gln Phe Asn Asp Met Asn Ser Ala

100 105 110

Leu Thr Thr Ala Ile Pro Leu Phe Ala Val Gln Asn Tyr Gln Val Pro 115 120 125

Leu Leu Ser Val Tyr Val Gln Ala Ala Asn Leu His Leu Ser Val Leu 130 135 140

Arg Asp Val Ser Val Phe Gly Gln Arg Trp Gly Phe Asp Ala Ala Thr 145 150 155 160

Ile Asn Ser Arg Tyir Asn Asp Leu. Thir Airg Leu Ile Gly Asn Tyr Thx

165 170 175

Asp His Ala Val Arg Trp Tyr Asn Thr Gly Leu Glu Arg Val Trp Gly 180 185 190

Pro Asp Ser Arg Asp Trp Ile Arg Tyr Asn Gln Phe Arg Arg Glu Leu

195 200 205

Thr Leu Thr Val Leu Asp Ile Val Ser Leu Phe Pro Asn Tyr Asp Ser

210 215 220

Arg Thr Tyr Pro Ile Arg Thr Val Ser Gln Leu Thr Arg Glu Val Tyr

225 230 235 240

Thr Asp Pro Val Leu Glu Asn Phe Asp Gly Ser Phe Arg Gly Ser Ala 245 250 255

Gln Gly Ile Glu Gly Ser Ile Arg Ser Pro His Leu Met Asp Ile Leu 260 265 270

40 Asn Ser Ile Thr Ile Tyr Thr Asp Ala His Arg Gly Glu Tyr Tyr Trp 275 280 285

Ser Gly His Gln Ile Met Ala Ser Pro Val Gly Phe Ser Gly Pro Glu 290 295 300

Phe Thr Phe Pro Leu Tyr Gly Thr Met Gly Asn Ala Ala Pro Gln Gln 305 310 315 320

Arg Ile Val Ala Gln Leu Gly Gln Gly Val Tyr Arg Thr Leu Ser Ser 50 325 330 335

Thr Leu Tyr Arg Arg Pro Phe Asn Ile Gly Ile Asn Asn Gln Gln Leu 340 345 350

Ser Val Leu Asp Gly Thr Glu Phe Ala Tyr Gly Thr Ser Ser Asn Leu 355 360 365

Pro Ser Ala Val Tyr Arg Lys Ser Gly Thr Val Asp Ser Leu Asp Glu 370 375 380 Ile Pro Pro Gln Asn Asp Asn Val Pro Pro Arg Gln Gly Phe Ser His 385 390 395 400

Arg Leu Ser His Val Ser Met Phe Arg Ser Gly Phe Ser Asn Ser Ser 405 410 415

Val Ser Ile Ile Arg Ala Pro Met Phe Ser Trp Ile His Arg Ser Ala 420 425 430

Glu Phe Asn Asn Thr Ile Asp Pro Glu Arg Ile Asn Gln Ile Pro Leu 435 440 445

Thr Lys Ser Thr Asn Leu Gly Ser Gly Thr Ser Val Val Lys Gly Pro 450 455 460

Gly Phe Thr Gly Gly Asp Ile Leu Arg Arg Thr Ser Pro Gly Gln Ile 465 470 475 480

Ser Thr Leu Arg Val Asn Ile Thr Ala Pro Leu Ser Gln Arg Tyr Arg 485 490 495

Val Arg Ile Arg Tyr Ala Ser Thr Thr Asn Leu Gln Phe His Thr Ser 500 505 510

Ile Asp Gly Arg Pro Ile Asn Gln Gly Asn Phe Ser Ala Thr Met Ser 515 520 525

Ser Gly Ser Asn Leu Gln Ser Gly Ser Phe Arg Thr Val Gly Phe Thr 530 535 540

Thr Pro Phe Asn Phe Ser Asn Gly Ser Ser Val Phe Thr Leu Ser Ala 545 550 555 560

His Val Phe Asn Ser Gly Asn Glu Val Tyr Ile Asp Arg Ile Glu Phe 565 570 575

Val Pro Ala Glu Val Thr Phe Glu Ala Glu Tyr Asp Leu Glu Arg 580 585 590

<210> SEQ ID NO: 7

<211> Comprimento: 3567

<212> Tipo: DNA

<213> Organismo: Bacillus thuringiensis

<400> Seqüência: 7

atgcaggaaa ataatcaaaa tcaatgcata ccttacaatt gtttaagtaa tcctgaagaa 60

gtacttttgg atggagaacg gatatcaact ggtaattcat caattgatat ttctctgtca 120

cttgttcagt ttctggtatc taactttgta ccagggggag gatttttagt tggattaata 180

gattttgtat ggggaatagt tggcccttct caatgggatg catttctagt gcaaattgaa 240

caattaatta atgaaagaat agctgaattt gctaggaatg ctgctattgc taatttagaa 300 ggattaggaa acaatttcaa tatatatgtg gaagcattta aagaatggga agaagatcct 360

aataatccag caaccaggac cagagtaatt gatcgctttc gtatacttga tgggctgctt 420

gaaagggaca ttccttcgtt tcgaatttct ggatttgaag tacccctttt atccgtttat 480

gcccaagcgg ccaatctgca tctagctata ttaagagatt ctgtaatttt tggagaaaga 540

tggggattga caacgataaa tgtcaatgag aactataata gactaattag gcatattgat 600

gaatatgctg atcactgtgc aaatacgtat aatcggggat taaataattt accgaaatct 660

acgtatcaag attggataac atataaccga ttacggagag acttaacatt gactgtatta 720

gatatcgccg ctttctttcc aaactatgac aataggagat atccaattca gccagttggt 780

caactaacaa gggaagttta tgcggaccca ttaattaatt ttaatccaca gttacagtct 840

gtagctcaat tacctacttt taacgttatg gagagcagcg caattagaaa tcctcattta 900

tttgatatat tgaataatct tacaatcttt acgggttggt ttagtgttgg acgcaatttt 960

tattggggag gacatcgagt aatatctagc cttataggag gtggtaacat aacatctccc 1020

atatatggaa gagaggcgaa ccaggagccc ccaagatcct ttacttttaa tggaccggta 1080

tttaggactt tatcaaatcc tactttacga ttattacagc aaccatggcc agcgccacca 1140

tttaatctac gtggtgttga aggagtagaa ttttctacac ctacaaatag cttaacgtat 1200

cgaggaagag gtacggttga ttctttaact gaattgccgc ctgaggataa tagtgtgcca 1260

cctcgcgaag gatatagtca tcgtttatgt catgcaactt ttgttcaaag atctggaaca 1320

ccttttttaa caactggtgt agtattttct tggacgcatc gtagtgctac tcttacaaat 1380

acaattgatc cagagagaat taatcaaata cctttagtga aaggatttag agtttggggg 1440

ggcacctctg tcgttacagg accaggattt acaggagggg atatccttcg aagaaatacc 1500 tttggtgatt ttgtatctct acaagtcaat attaattcac caattaccca aagataccgt 1560

ttaagatttc gttacgcttc cagtagggat gcacgagtta tagtattaac aggagcggca 1620

tccacaggag tgggaggcca agttagtgta aatatgcctc ttcagaaaac tatggaaata 1680

ggggagaact taacatctag aacatttaga tataccgatt ttagtaatcc tttttcattt 1740

agagccaatc cagatacaat tgggataagt gaacaacctc tatttggtgc aggttctatt 1800

agtagcggtg aactttatat agataaaatt gaaattattc tagcagatgc aacatttgaa 1860

gcggaatctg atttagaaag agcacaaaag gcggtgaatg ccctgtttac ttcttccaat 1920

caaatcgggt taaaaaccga tgtgacggat tatcatattg atcaagtatc caatttagtg 1980

gattgtttat cagatgaatt ttgtctggat gaaaagcgag aattgtccga gaaagtcaaa 2040

catgcgaagc gactcagtga tgagcggaat ttacttcaag atccaaactt cagagggatc 2100

aatagacaac cagaccgtgg ctggagagga agtacagata ttaccatcca aggaggagat 2160

gacgtattca aagagaatta cgtcacacta ccgggtaccg ttgatgagtg ctatccaacg 2220

tatttatatc agaaaataga tgagtcgaaa ttaaaagctt atacccgtta tgaattaaga 2280

gggtatatcg aagatagtca agacttagaa atctatttga tccgttacaa tgcaaaacac 2340

gaaatagtaa atgtgccagg cacgggttcc ttatggccgc tttcagccca aagtccaatc 2400

ggaaagtgtg gagaaccgaa tcgatgcgcg ccacaccttg aatggaatcc tgatctagat 2460

tgttcctgca gagacgggga aaaatgtgca catcattccc atcatttcac cttggatatt 2520

gatgttggat gtacagactt aaatgaggac ttaggtgtat gggtgatatt caagattaag 2580

acgcaagatg gccatgcaag actagggaat ctagagtttc tcgaagagaa accattatta 2640

ggggaagcac tagctcgtgt gaaaagagcg gagaagaagt ggagagacaa acgagagaaa 2700 ctgcagttgg aaacaaatat tgtttataaa gaggcaaaag aatctgtaga tgctttattt 2760

gtaaactctc aatatgatag attacaagtg gatacgaaca tcgcgatgat tcatgcggca 2820

gataaacgcg ttcatagaat ccgggaagcg tatctgccag agttgtctgt gattccaggt 2880

gtcaatgcgg ccattttcga agaattagag ggacgtattt ttacagcgta ttccttatat 2940

gatgcgagaa atgtcattaa aaatggcgat ttcaataatg gcttattatg ctggaacgtg 3000

aaaggtcatg tagatgtaga agagcaaaac aaccaccgtt cggtccttgt tatcccagaa 3060

tgggaggcag aagtgtcaca agaggttcgt gtctgtccag gtcgtggcta tatccttcgt 3120

gtcacagcat ataaagaggg atatggagag ggctgcgtaa cgatccatga gatcgaagac 3180

aatacagacg aactgaaatt cagcaactgt gtagaagagg aagtatatcc aaacaacaca 3240

gtaacgtgta ataattatac tgggactcaa gaagaatatg agggtacgta cacttctcgt 3300

aatcaaggat atgacgaagc ctatggtaat aacccttccg taccagctga ttacgcttca 3360

gtctatgaag aaaaatcgta tacagatgga cgaagagaga atccttgtga atctaacaga 3420

ggctatgggg attacacacc actaccggct ggttatgtaa caaaggattt agagtacttc 3480

ccagagaccg ataaggtatg gattgagatc ggagaaacag aaggaacatt catcgtggat 3540

agcgtggaat tactccttat ggaggaa 3567

<210> SEQ ID NO: 8

<211> Comprimento: 600

<212> Tipo: PRT

<213> Organismo: Bacillus thuringiensis

<400> Seqüência: 8

Ile Ser Thr Gly Asn Ser Ser Ile Asp Ile Ser Leu Ser Leu Val Gln 1 5 10 15

Phe Leu Val Ser Asn Phe Val Pro Gly Gly Gly Phe Leu Val Gly Leu 20 25 30

Ile Asp Phe Val Trp Gly Ile Val Gly Pro Ser Gln Trp Asp Ala Phe 35 40 45 Leu Val Gln Ile Glu Gln Leu Ile Asn Glu Arg Ile Ala Glu Phe Ala 50 55 60

Arg Asn Ala Ala Ile Ala Asn Leu Glu Gly Leu Gly Asn Asn Phe Asn 65 70 75 80

Ile Tyr Val Glu Ala Phe Lys Glu Trp Glu Glu Asp Pro Asn Asn Pro 85 90 95

Ala Thr Arg Thr Arg Val Ile Asp Arg Phe Arg Ile Leu Asp Gly Leu 100 105 110

Leu Glu Arg Asp Ile Pro Ser Phe Arg Ile Ser Gly Phe Glu Val Pro 115 120 125

Leu Leu Ser Val Tyr Ala Gln Ala Ala Asn Leu His Leu Ala Ile Leu 130 135 140

Arg Asp Ser Val Ile Phe Gly Glu Arg Trp Gly Leu Thr Thr Ile Asn 145 150 155 160

Val Asn Glu Asn Tyr Asn Arg Leu Ile Arg His Ile Asp Glu Tyr Ala 165 170 175

Asp His Cys Ala Asn Thr Tyr Asn Arg Gly Leu Asn Asn Leu Pro Lys 180 185 190

Ser Thr Tyr Gln Asp Trp Ile Thr Tyr Asn Arg Leu Arg Arg Asp Leu 195 200 205

Thr Leu Thr Val Leu Asp Ile Ala Ala Phe Phe Pro Asn Tyr Asp Asn 210 215 220

Arg Arg Tyr Pro Ile Gln Pro Val Gly Gln Leu Thr Arg Glu Val Tyr

225 230 235 240

Ala Asp Pro Leu Ile Asn Phe Asn Pro Gln Leu Gln Ser Val Ala Gln

245 250 255

Leu Pro Thr Phe Asn Val Met Glu Ser Ser Ala Ile Arg Asn Pro His

260 265 270

Leu Phe Asp Ile Leu Asn Asn Leu Thr Ile Phe Thr Gly Trp Phe Ser

275 280 285

Val Gly Arg Asn Phe Tyr Trp Gly Gly His Arg Val Ile Ser Ser Leu

290 295 300

Ile Gly Gly Gly Asn Ile Thr Ser Pro Ile Tyr Gly Arg Glu Ala Asn 305 310 315 320

Gln Glu Pro Pro Arg Ser Phe Thr Phe Asn Gly Pro Val Phe Arg Thr 325 330 335

Leu Ser Asn Pro Thr Leu Arg Leu Leu Gln Gln Pro Trp Pro Ala Pro 340 345 350

Pro Phe Asn Leu Arg Gly Val Glu Gly Val Glu Phe Ser Thr Pro Thr 355 360 365

Asn Ser Leu Thr Tyr Arg Gly Arg Gly Thr Val Asp Ser Leu Thr Glu 370 375 380

Leu Pro Pro Glu Asp Asn Ser Val Pro Pro Arg Glu Gly Tyr Ser His 385 390 395 400

Arg Leu Cys His Ala Thr Phe Val Gln Arg Ser Gly Thr Pro Phe Leu 405 410 415

Thr Thr Gly Val Val Phe Ser Trp Thr His Arg Ser Ala Thr Leu Thr 420 425 430

Asn Thr Ile Asp Pro Glu Arg Ile Asn Gln Ile Pro Leu Val Lys Gly 435 440 445

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Gly Gly Asp Ile Leu Arg Arg Asn Thr Phe Gly Asp Phe Val Ser Leu 465 470 475 480

Gln Val Asn Ile Asn Ser Pro Ile Thr Gln Arg Tyr Arg Leu Arg Phe 485 490 495

Arg Tyr Ala Ser Ser Arg Asp Ala Arg Val Ile Val Leu Thr Gly Ala 500 505 510

Ala Ser Thr Gly Val Gly Gly Gln Val Ser Val Asn Met Pro Leu Gln 515 520 525

Lys Thr Met Glu Ile Gly Glu Asn Leu Thr Ser Arg Thr Phe Arg Tyr 530 535 540

Thr Asp Phe Ser Asn Pro Phe Ser Phe Arg Ala Asn Pro Asp Thr Ile 545 550 555 560

Gly Ile Ser Glu Gln Pro Leu Phe Gly Ala Gly Ser Ile Ser Ser Gly 565 570 575

Glu Leu Tyr Ile Asp Lys Ile Glu Ile Ile Leu Ala Asp Ala Thr Phe 580 585 590

Glu Ala Glu Ser Asp Leu Glu Arg 595 600

<210> SEQ ID NO: 9

<211> Comprimento: 3567

<212> Tipo: DNA

<213> Organismo: Bacillus thuringiensis

<400> Seqüência: 9

atggaggaga acaaccaaaa ccaatgcatc ccatataact gcttgagtaa ccctgaggaa 60

gtgctcctcg acggtgagcg tatctctaca ggtaattctt caatcgacat ctccctttcc 120

ttggtgcaat tcctcgtttc aaatttcgtg ccaggaggtg gattccttgt gggattgatc 180 gacttcgttt ggggaatcgt gggcccaagt caatgggatg ctttcctggt gcaaattgaa 240

caacttatca acgagcgtat cgccgagttt gcacgtaacg ctgctattgc aaatctggag 300

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atttatggga gagaggccaa ccaggaacct ccacgtagtt tcactttcaa tggtccagtc 1080

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ccatttctga ctactggcgt ggtcttcagt tggacacatc gtagcgcaac tcttactaac 1380 acaatcgacc ctgaacgtat caatcaaatc ccactcgtca aaggttttcg tgtttgggga 1440

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aatagacaac cagatagagg ttggcgtgga tcaacagaca tcactatcca aggtggagac 2160

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gacaaacgtg ttcaccgtat cagagaagcc tatctccctg aactgtcagt gatcccagga 2880

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<210> SEQ ID NO: 10 <211> Comprimento: 600 <212> Tipo: PRT

<213> Organismo: Bacillus thuringiensis

<400> Seqüência: 10

Ile Ser Thr Gly Asn Ser Ser Ile Asp Ile Ser Leu Ser Leu Val Gln 1 5 10 15 Phe Leu Val Ser Asn Phe Val Pro Gly Gly Gly Phe Leu Val Gly Leu 20 25 30

Ile Asp Phe Val Trp Gly Ile Val Gly Pro Ser Gln Trp Asp Ala Phe 35 40 45

Leu Val Gln Ile Glu Gln Leu Ile Asn Glu Arg Ile Ala Glu Phe Ala 50 55 60

Arg Asn Ala Ala Ile Ala Asn Leu Glu Gly Leu Gly Asn Asn Phe Asn 65 70 75 80

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Gly Ile Ser Glu Gln Pro Leu Phe Gly Ala Gly Ser Ile Ser Ser Gly 565 570 575

Glu Leu Tyr Ile Asp Lys Ile Glu Ile Ile Leu Ala Asp Ala Thr Phe 580 585 590

Glu Ala Glu Ser Asp Leu Glu Arg 595 600

<210> SEQ ID NO: 11 <211> Comprimento: 3546 <212> Tipo: DNA

<213> Organismo: Bacillus thuringiensis

<400> Seqüência: 11 atgggacaca acaatccaaa tatcaatgaa tgcatcccct ataattgctt gagcaaccct 60 gaagttgaag ttctgggagg tgagaggata gaaactggat atacccctat tgatatctct 120

ctgtctttga ctcagttcct cctgagtgag tttgttccag gtgcaggatt tgtgttgggt 180

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ttccgtggat cagcacaagg catagagggt tccatccgga gtcctcatct catggacatc 900

ctgaacagca ttacaatcta cacagatgct catcgaggtg agtattactg gtcaggacac 960

caaatcatgg catccccagt tggattttct ggtccagagt tcactttccc cttgtatgga 1020

acaatgggta atgctgctcc acagcaacga atagttgctc aattgggaca aggggtatat 1080

cgaaccttat catcaacact gtatcgacgt ccattcaaca ttgggataaa caatcaacag 1140

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gtttatcgga agtctgggac tgtagactca ctagatgaga tacctccaca gaataacaat 1260 gtacctccaa gacaaggatt ctcccaccgt ctctctcatg tgtctatgtt ccgtagtggc 1320

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agcattgatg gtcgtccaat taaccaaggc aacttcagcg ctaccatgtc cagcggctca 1680

aacctgcaaa gtggatcatt ccgcaccgtt ggctttacca ctccattcaa cttcagcaac 1740

ggcagtagcg tgttcaccct ttccgcacat gtgttcaaca gtggcaacga agtgtacatc 1800

gatagaatcg agtttgtgcc agcggaagtg acttttgaag ctgagtacga ccttgaacgt 1860

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gagcttgaag gtcgaatctt cactgcctat tcactttacg atgcacgaaa cgtgattaag 2940

aatggggatt ttaataacgg gttgttgtgc tggaatgtga aggggcacgt ggatgttgag 3000

gaacaaaaca accaccgttc cgtgcttgtt attcctgagt gggaagcaga ggtgtctcag 3060

gaggttaggg tgtgtcctgg tagaggatat atcttgagag tgactgccta taaggaaggc 3120

tatggtgaag gttgcgtgac aatccacgag atcgaagaca acacagatga gcttaagttc 3180

tctaactgcg ttgaggagga agtctaccca aacaataccg tcacttgtaa caattacaca 3240

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tatggtaata atccttctgt gcctgccgat tatgcttctg tttacgagga aaagtcttac 3360

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gaggaa 3546

<210> SEQ ID NO: 12 <211> Comprimento: 591 <212> Tipo: PRT <213> Organismo: Bacillus thuringiensis <400> Seqüência: 12

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Leu Leu Ser Val Tyr Val Gln Ala Ala Asn Leu His Leu Ser Val Leu 130 135 140

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Ser Gly His Gln Ile Met Ala Ser Pro Val Gly Phe Ser Gly Pro Glu 290 295 300 Phe Thr Phe Pro Leu Tyr Gly Thr Met Gly Asn Ala Ala Pro Gln Gln 305 310 315 320

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Val Arg Ile Arg Tyr Ala Ser Thr Thr Asn Leu Gln Phe His Thr Ser 500 505 510

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Ser Gly Ser Asn Leu Gln Ser Gly Ser Phe Arg Thr Val Gly Phe Thr 530 535 540

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Val Pro Ala Glu Val Thr Phe Glu Ala Glu Tyr Asp Leu Glu Arg 580 585 590

<210> SEQ ID NO: 13 <211> Comprimento: 3546 <212> Tipo: DNA <213> Organismo: Bacillus thuringiensis <400> Seqüência: 13

atgggacaca acaatccaaa tatcaatgaa tgcatcccct ataattgctt gagcaaccct 60

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aatggggatt ttaataacgg gttgttgtgc tggaatgtga aggggcacgt ggatgttgag 3000

gaacaaaaca accaccgttc cgtgcttgtt attcctgagt gggaagcaga ggtgtctcag 3060

gaggttaggg tgtgtcctgg tagaggatat atcttgagag tgactgccta taaggaaggc 3120

tatggtgaag gttgcgtgac aatccacgag atcgaagaca acacagatga gcttaagttc 3180

tctaactgcg ttgaggagga agtctaccca aacaataccg tcacttgtaa caattacaca 3240

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cttccagcag gatacgttac taaggatctt gagtactttc cagagactga taaagtttgg 3480

atcgaaatcg gagagactga aggcacattc atcgtggatt ctgtggagct cttgctcatg 3540

gaggaa 3546 <210> SEQ ID NO: 14

<211> Comprimento: 591

<212> Tipo: PRT

<213> Organismo: Bacillus thuringiensis

<400> Seqüência: 14

Ile Glu Thr Gly Tyr Thr Pro Ile Asp Ile Ser Leu Ser Leu Thr Gln 1 5 10 15

10 Phe Leu Leu Ser Glu Phe Val Pro Gly Ala Gly Phe Val Leu Gly Leu 20 25 30

Val Asp Ile Ile Trp Gly Ile Phe Gly Pro Ser Gln Trp Asp Ala Phe 35 40 45

Leu Val Gln Ile Glu Gln Leu Ile Ser Gln Arg Ile Glu Glu Phe Ala 50 55 60

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<210> SEQ ID NO: 15 <211> Comprimento: 3546 <212> Tipo: DNA <213> Organismo: Bacillus thuringiensis <400> Seqüência: 15

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1860

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tggcgtggat caacagacat cactatccaa ggtggagacg atgtttttaa ggagaactac 2160

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gaggttaggg tgtgtcctgg tagaggatat atcttgagag tgactgccta taaggaaggc 3120

tatggtgaag gttgcgtgac aatccacgag atcgaagaca acacagatga gcttaagttc 3180

tctaactgcg ttgaggagga agtctaccca aacaataccg tcacttgtaa caattacaca 3240

ggcacacaag aagagtacga aggaacctac acctcccgaa atcagggtta tgatgaggcc 3300

tatggtaata atccttctgt gcctgccgat tatgcttctg tttacgagga aaagtcttac 3360

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atcgaaatcg gagagactga aggcacattc atcgtggatt ctgtggagct cttgctcatg 3540 gaggaa 3546

<210> SEQ ID NO: 16 <211> Comprimento: 591 <212> Tipo: PRT <213> Organismo: Bacillus thuringiensis

<400> Seqüência: 16

Ile Glu Thr Gly Tyr Thr Pro Ile Asp Ile Ser Leu Ser Leu Thr Gln 1 5 10 15

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100 105 110

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Leu Leu Ser Val Tyr Val Gln Ala Ala Asn Leu His Leu Ser Val Leu 130 135 140

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Phe Thr Phe Pro Leu Tyr Gly Thr Met Gly Asn Ala Ala Pro Gln Gln

305 310 315 320

Arg Ile Val Ala Gln Leu Gly Gln Gly Val Tyr Arg Thr Leu Ser Ser

325 330 335

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420 425 430

Glu Phe Asn Asn Thr Ile Asp Pro Glu Arg Ile Asn Gln Ile Pro Leu

435 440 445

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450 455 460

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Thr Pro Phe Asn Phe Ser Asn Gly Ser Ser Val Phe Thr Leu Ser Ala 545 550 555 560

His Val Phe Asn Ser Gly Asn Glu Val Tyr Ile Asp Arg Ile Glu Phe 565 570 575

Val Pro Ala Glu Val Thr Phe Glu Ala Glu Tyr Asp Leu Glu Arg 580 585 590 <210> SEQ ID NO: 17 <211> Comprimento: 3546 <212> Tipo: DNA <213> Organismo: Bacillus thuringiensis

<400> Seqüência: 17

atgggacaca acaatccaaa tatcaatgaa tgcatcccct ataattgctt gagcaaccct 60

gaagttgaag ttctgggagg tgagaggata gaaactggat atacccctat tgatatctct 120

ctgtctttga ctcagttcct cctgagtgag tttgttccag gtgcaggatt tgtgttgggt 180

ttggtagacg ttatctgggg aatctttgga ccatcccaat gggatgcctt tctggtccaa 240

atagagcaac tcataaacca gcgcattgag gaatttgcac gtaaccaggc aatctcccga 300

gttgagggat tgtcaaactt gtaccagata tatgctgaaa gtttcagaga gtgggaagct 360

gacccaacca accctgcatt gaaggaagag atgaggactc agttcaatga tatgaactca 420

gcactgacca ctgccatacc cttgtttgca gtacagaact atcaagtccc attactatca 480

gtctatgtgc aagcagcaaa cctacatttg agtgtcctcc gagatgtatc agtttttggt 540

caacgttggg gatttgatgc tgctaccatc aacagtcgtt acaatgacct cacacgactg 600

attgggaact tcacagatca tgcagtccgt tggcacaata ctggattgga gagaatctgg 660

ggacctgata gtcgtgattg gattcgttac aatcagtttc gtcgggaact taccctgact 720

gtcttggata tagtgtcact gtttcctaac tatgatagtc gtacatatcc aatacgaaca 780

gcaagtcagc tgactcgtga aatctacacg aaccctgtcc tggagaactt tgatggtagc 840

ttccgtggat cagcacaagg catagagggt tccatccgga gtcctcatct catggacatc 900

ctgaacagca ttacaatcta cacagatgct catcgaggtg agtattactg gtcaggacac 960

caaatcatgg catccccagt tggattttct ggtccagagt tcactttccc cttgtatgga 1020

acaatgggta atgctgctcc acagcaacga atagttgctc aattgggaca aggggtatat 1080 cgaaccttat catcaacact gtatcgacgt ccattcaaca ttgggataaa caatcaacag 1140

ttgtctgtac tagatgggac agagtttgct tatggaactt cctccaacct cccttcagca 1200

gtttatcgga agtctgggac tgtagactca ctagatgaga tacctccaca gaataacaat 1260

gtacctccaa gacaaggatt ctcccaccgt ctctctcatg tgtctatgtt ccgtagtggc 1320

tttagtaaca gcagtgtgag catcatacgt gcacctatgt tttcatggat tcaccgtagt 1380

gcagagttca ataacaccat tgaccctgaa cgaatcaatc aaatcccact taccaaaagc 1440

accaaccttg gtagcggaac cagcgttgtg aagggtcctg gtttcactgg tggggatatt 1500

ctgcgacgta ccagccctgg acagattagc acactgcgtg tgaacatcac cgctccactg 1560

agtcagcgct atcgagtgag gattcgctat gctagcacta ccaaccttca gttccatacc 1620

agcattgatg gtcgtccaat taaccaaggc aacttcagcg ctaccatgtc cagcggctca 1680

aacctgcaaa gtggatcatt ccgcaccgtt ggctttacca ctccattcaa cttcagcaac 1740

ggcagtagcg tgttcaccct ttccgcacat gtgttcaaca gtggcaacga agtgtacatc 1800

gatagaatcg agtttgtgcc agcggaagtg acttttgaag ctgagtacga ccttgaacgt 1860

gcccaaaagg tcgttaacgc cctcttcact tcttccaacc agatcggatt gaaaacagat 1920

gttacagact accacattga ccaggtgtcc aatcttgtgg attgcttgtc tgatgagttc 1980

tgtctcgatg agaagcgaga actctctgaa aaggttaagc acgctaagag actcagcgat 2040

gaacgaaacc ttcttcagga cccaaatttc aggggaatta atagacaacc agatagaggt 2100

tggcgtggat caacagacat cactatccaa ggtggagacg atgtttttaa ggagaactac 2160

gtgacccttc ctggtactgt tgacgagtgc tatcctacct acctttacca gaagattgac 2220

gaatcaaagc tcaaagcata cactcgttat gagcttcgtg gttacatcga agattcacaa 2280 gatcttgaaa tctacctcat cagatacaac gctaaacacg aaatcgtcaa cgttccaggt 2340

actggatctc tgtggccact ctctgcacag tcacctattg gcaagtgcgg tgagccaaat 2400

agatgtgcac cacacctgga gtggaatccc gatctggact gtagttgtcg tgacggggag 2460

aagtgcgctc atcacagcca tcacttcact cttgatatcg atgttggatg taccgacctt 2520

aatgaagacc tgggcgtttg ggttatcttc aagattaaga cccaggatgg tcatgccaga 2580

cttggtaatc tggagttcct tgaagagaaa cccttgttgg gtgaagctct ggccagagtc 2640

aagcgtgctg agaagaaatg gcgtgataaa cgtgaaaagt tgcaattgga gactaacatt 2700

gtctacaaag aggcaaagga gtctgtggat gccttgttcg tgaactctca gtacgaccga 2760

ctccaagtgg ataccaacat tgctatgatt catgctgctg acaaacgtgt tcaccgtatc 2820

agagaagcct atctccctga actgtcagtg atcccaggag tcaacgctgc aatcttcgag 2880

gagcttgaag gtcgaatctt cactgcctat tcactttacg atgcacgaaa cgtgattaag 2940

aatggggatt ttaataacgg gttgttgtgc tggaatgtga aggggcacgt ggatgttgag 3000

gaacaaaaca accaccgttc cgtgcttgtt attcctgagt gggaagcaga ggtgtctcag 3060

gaggttaggg tgtgtcctgg tagaggatat atcttgagag tgactgccta taaggaaggc 3120

tatggtgaag gttgcgtgac aatccacgag atcgaagaca acacagatga gcttaagttc 3180

tctaactgcg ttgaggagga agtctaccca aacaataccg tcacttgtaa caattacaca 3240

ggcacacaag aagagtacga aggaacctac acctcccgaa atcagggtta tgatgaggcc 3300

tatggtaata atccttctgt gcctgccgat tatgcttctg tttacgagga aaagtcttac 3360

actgatggcc gtcgtgagaa cccttgcgaa tccaaccgtg gatacggtga ttacactcca 3420

cttccagcag gatacgttac taaggatctt gagtactttc cagagactga taaagtttgg 3480 atcgaaatcg gagagactga aggcacattc atcgtggatt ctgtggagct cttgctcatg 3540

gaggaa 3546

<210> SEQ ID NO: 18

<211> Comprimento: 591

<212> Tipo: PRT

<213> Organismo: Bacillus thuringiensis

<400> Seqüência: 18

Ile Glu Thr Gly Tyr Thr Pro Ile Asp Ile Ser Leu Ser Leu Thr Gln 1 5 10 15

Phe Leu Leu Ser Glu Phe Val Pro Gly Ala Gly Phe Val Leu Gly Leu 20 25 30

Val Asp Val Ile Trp Gly Ile Phe Gly Pro Ser Gln Trp Asp Ala Phe 35 40 45

Leu Val Gln Ile Glu Gln Leu Ile Asn Gln Arg Ile Glu Glu Phe Ala 50 55 60

Arg Asn Gln Ala Ile Ser Arg Val Glu Gly Leu Ser Asn Leu Tyr Gln 65 70 75 80

Ile Tyr Ala Glu Ser Phe Arg Glu Trp Glu Ala Asp Pro Thr Asn Pro 85 90 95

Ala Leu Lys Glu Glu Met Arg Thr Gln Phe Asn Asp Met Asn Ser Ala 100 105 110

Leu Thr Thr Ala Ile Pro Leu Phe Ala Val Gln Asn Tyr Gln Val Pro 115 120 125

Leu Leu Ser Val Tyr Val Gln Ala Ala Asn Leu His Leu Ser Val Leu 130 135 140

Arg Asp Val Ser Val Phe Gly Gln Arg Trp Gly Phe Asp Ala Ala Thr 145 150 155 160

Ile Asn Ser Arg Tyr Asn Asp Leu Thr Arg Leu Ile Gly Asn Phe Thr 45 165 170 175

Asp His Ala Val Arg Trp His Asn Thr Gly Leu Glu Arg Ile Trp Gly 180 185 190

Pro Asp Ser Arg Asp Trp Ile Arg Tyr Asn Gln Phe Arg Arg Glu Leu 195 200 205

Thr Leu Thr Val Leu Asp Ile Val Ser Leu Phe Pro Asn Tyr Asp Ser 210 215 220

Arg Thr Tyr Pro Ile Arg Thr Ala Ser Gln Leu Thr Arg Glu Ile Tyr 225 230 235 240

Thr Asn Pro Val Leu Glu Asn Phe Asp Gly Ser Phe Arg Gly Ser Ala 60 245 250 255 Gln Gly Ile Glu Gly Ser Ile Arg Ser Pro His Leu Met Asp Ile Leu

260 265 270

Asn Ser Ile Thr Ile Tyr Thr Asp Ala His Arg Gly Glu Tyr Tyr Trp 275 280 285

Ser Gly His Gln Ile Met Ala Ser Pro Val Gly Phe Ser Gly Pro Glu

290 295 300

Phe Thr Phe Pro Leu Tyr Gly Thr Met Gly Asn Ala Ala Pro Gln Gln

305 310 315 320

Arg Ile Val Ala Gln Leu Gly Gln Gly Val Tyr Arg Thr Leu Ser Ser 15 325 330 335

Thr Leu Tyr Arg Arg Pro Phe Asn Ile Gly Ile Asn Asn Gln Gln Leu 340 345 350

Ser Val Leu Asp Gly Thr Glu Phe Ala Tyr Gly Thr Ser Ser Asn Leu 355 360 365

Pro Ser Ala Val Tyr Arg Lys Ser Gly Thr Val Asp Ser Leu Asp Glu 370 375 380

Ile Pro Pro Gln Asn Asn Asn Val Pro Pro Arg Gln Gly Phe Ser His 385 390 395 400

Arg Leu Ser His Val Ser Met Phe Arg Ser Gly Phe Ser Asn Ser Ser

405 410 415

Val Ser Ile Ile Arg Ala Pro Met Phe Ser Trp Ile His Arg Ser Ala

420 425 430

Glu Phe Asn Asn Thr Ile Asp Pro Glu Arg Ile Asn Gln Ile Pro Leu

435 440 445

Thr Lys Ser Thr Asn Leu Gly Ser Gly Thr Ser Val Val Lys Gly Pro

450 455 460

Gly Phe Thr Gly Gly Asp Ile Leu Arg Arg Thr Ser Pro Gly Gln Ile

465 470 475 480

Ser Thr Leu Arg Val Asn Ile Thr Ala Pro Leu Ser Gln Arg Tyr Arg 45 485 490 495

Val Arg Ile Arg Tyr Ala Ser Thr Thr Asn Leu Gln Phe His Thr Ser 500 505 510

Ile Asp Gly Arg Pro Ile Asn Gln Gly Asn Phe Ser Ala Thr Met Ser 515 520 525

Ser Gly Ser Asn Leu Gln Ser Gly Ser Phe Arg Thr Val Gly Phe Thr 530 535 540

Thr Pro Phe Asn Phe Ser Asn Gly Ser Ser Val Phe Thr Leu Ser Ala 545 550 555 560

His Val Phe Asn Ser Gly Asn Glu Val Tyr Ile Asp Arg Ile Glu Phe 565 570 575 Val Pro Ala Glu Val Thr Phe Glu Ala Glu Tyr Asp Leu Glu Arg 580 585 590

<210> SEQ ID NO: 19

<211> Comprimento: 3546

<212> Tipo: DNA

<213> Organismo: Bacillus thuringiensis

<400> Seqüência: 19

atgggacaca acaatccaaa tatcaatgaa tgcatcccct ataattgctt gagcaaccct 60

gaagttgaag ttctgggagg tgagaggata gaaactggat atacccctat tgatatctct 120

ctgtctttga ctcagttcct cctgagtgag tttgttccag gtgcaggatt tgtgttgggt 180

ttggtagaca ttatctgggg aatctttgga ccatcccaat gggatgcctt tctggtccaa 240

atagagcaac tcgtgaacca gcgcattgag gaatttgcac gtaaccaggc aatctcccga 300

gttgagggat tgtcaaactt gtaccaggtt tatgctgaaa gtttcagaga gtgggaagct 360

gacccaacca accctgcatt gaaggaagag atgaggactc agttcaatga tatgaactca 420

gcactgacca ctgccatacc cttgtttgca gtacagaact atcaagtccc attactatca 480

gtctatgtgc aagcagcaaa cctacatttg agtgtcctcc gagatgtatc agtttttggt 540

caacgttggg gatttgatgc tgctaccatc aacagtcgtt acaatgacct cacacgactg 600

attgggaact acacagatca tgcagtccgt tggcacaata ctggattgga gagaatctgg 660

ggacctgata gtcgtgattg gattcgttac aatcagtttc gtcgggaact taccctgact 720

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gcaagtcagc tgactcgtga aatctacacg aaccctgtcc tggagaactt tgatggtagc 840

ttccgtggat cagcacaagg catagagggt tccatccgga gtcctcatct catggacatc 900

ctgaacagca ttacaatcta cacagatgct catcgaggtg agtattactg gtcaggacac 960

caaatcatgg catccccagt tggattttct ggtccagagt tcactttccc cttgtatgga 1020 acaatgggta atgctgctcc acagcaacga atagttgctc aattgggaca aggggtatat 1080

cgaaccttat catcaacact gtatcgacgt ccattcaaca ttgggataaa caatcaacag 1140

ttgtctgtac tagatgggac agagtttgct tatggaactt cctccaacct cccttcagca 1200

gtttatcgga agtctgggac tgtagactca ctagatgaga tacctccaca gaataacaat 1260

gtacctccaa gacaaggatt ctcccaccgt ctctctcatg tgtctatgtt ccgtagtggc 1320

tttagtaaca gcagtgtgag catcatacgt gcacctatgt tttcatggat tcaccgtagt 1380

gcagagttca ataacaccat tgaccctgaa cgaatcaatc aaatcccact taccaaaagc 1440

accaaccttg gtagcggaac cagcgttgtg aagggtcctg gtttcactgg tggggatatt 1500

ctgcgacgta ccagccctgg acagattagc acactgcgtg tgaacatcac cgctccactg 1560

agtcagcgct atcgagtgag gattcgctat gctagcacta ccaaccttca gttccatacc 1620

agcattgatg gtcgtccaat taaccaaggc aacttcagcg ctaccatgtc cagcggctca 1680

aacctgcaaa gtggatcatt ccgcaccgtt ggctttacca ctccattcaa cttcagcaac 1740

ggcagtagcg tgttcaccct ttccgcacat gtgttcaaca gtggcaacga agtgtacatc 1800

gatagaatcg agtttgtgcc agcggaagtg acttttgaag ctgagtacga ccttgaacgt 1860

gcccaaaagg tcgttaacgc cctcttcact tcttccaacc agatcggatt gaaaacagat 1920

gttacagact accacattga ccaggtgtcc aatcttgtgg attgcttgtc tgatgagttc 1980

tgtctcgatg agaagcgaga actctctgaa aaggttaagc acgctaagag actcagcgat 2040

gaacgaaacc ttcttcagga cccaaatttc aggggaatta atagacaacc agatagaggt 2100

tggcgtggat caacagacat cactatccaa ggtggagacg atgtttttaa ggagaactac 2160

gtgacccttc ctggtactgt tgacgagtgc tatcctacct acctttacca gaagattgac 2220 gaatcaaagc tcaaagcata cactcgttat gagcttcgtg gttacatcga agattcacaa 2280

gatcttgaaa tctacctcat cagatacaac gctaaacacg aaatcgtcaa cgttccaggt 2340

actggatctc tgtggccact ctctgcacag tcacctattg gcaagtgcgg tgagccaaat 2400

agatgtgcac cacacctgga gtggaatccc gatctggact gtagttgtcg tgacggggag 2460

aagtgcgctc atcacagcca tcacttcact cttgatatcg atgttggatg taccgacctt 2520

aatgaagacc tgggcgtttg ggttatcttc aagattaaga cccaggatgg tcatgccaga 2580

cttggtaatc tggagttcct tgaagagaaa cccttgttgg gtgaagctct ggccagagtc 2640

aagcgtgctg agaagaaatg gcgtgataaa cgtgaaaagt tgcaattgga gactaacatt 2700

gtctacaaag aggcaaagga gtctgtggat gccttgttcg tgaactctca gtacgaccga 2760

ctccaagtgg ataccaacat tgctatgatt catgctgctg acaaacgtgt tcaccgtatc 2820

agagaagcct atctccctga actgtcagtg atcccaggag tcaacgctgc aatcttcgag 2880

gagcttgaag gtcgaatctt cactgcctat tcactttacg atgcacgaaa cgtgattaag 2940

aatggggatt ttaataacgg gttgttgtgc tggaatgtga aggggcacgt ggatgttgag 3000

gaacaaaaca accaccgttc cgtgcttgtt attcctgagt gggaagcaga ggtgtctcag 3060

gaggttaggg tgtgtcctgg tagaggatat atcttgagag tgactgccta taaggaaggc 3120

tatggtgaag gttgcgtgac aatccacgag atcgaagaca acacagatga gcttaagttc 3180

tctaactgcg ttgaggagga agtctaccca aacaataccg tcacttgtaa caattacaca 3240

ggcacacaag aagagtacga aggaacctac acctcccgaa atcagggtta tgatgaggcc 3300

tatggtaata atccttctgt gcctgccgat tatgcttctg tttacgagga aaagtcttac 3360

actgatggcc gtcgtgagaa cccttgcgaa tccaaccgtg gatacggtga ttacactcca 3420 cttccagcag gatacgttac taaggatctt gagtactttc cagagactga taaagtttgg 3480

atcgaaatcg gagagactga aggcacattc atcgtggatt ctgtggagct cttgctcatg 3540

gaggaa 3546

<210> SEQ ID NO: 20 <211> Comprimento: 591 <212> Tipo: PRT <213> Organismo: Bacillus thuringiensis

<400> Seqüência: 20

Ile Glu Thr Gly Tyr Thr Pro Ile Asp Ile Ser Leu Ser Leu Thr Gln 1 5 10 15

Phe Leu Leu Ser Glu Phe Val Pro Gly Ala Gly Phe Val Leu Gly Leu 20 25 30

Val Asp Ile Ile Trp Gly Ile Phe Gly Pro Ser Gln Trp Asp Ala Phe 35 40 45

Leu Val Gln Ile Glu Gln Leu Val Asn Gln Arg Ile Glu Glu Phe Ala 50 55 60

Arg Asn Gln Ala Ile Ser Arg Val Glu Gly Leu Ser Asn Leu Tyr Gln 65 70 75 80

Val Tyr Ala Glu Ser Phe Arg Glu Trp Glu Ala Asp Pro Thr Asn Pro 85 90 95

Ala Leu Lys Glu Glu Met Arg Thr Gln Phe Asn Asp Met Asn Ser Ala 100 105 110

Leu Thr Thr Ala Ile Pro Leu Phe Ala Val Gln Asn Tyr Gln Val Pro 115 120 125

Leu Leu Ser Val Tyr Val Gln Ala Ala Asn Leu His Leu Ser Val Leu 130 135 140

Arg Asp Val Ser Val Phe Gly Gln Arg Trp Gly Phe Asp Ala Ala Thr 145 150 155 160

Ile Asn Ser Arg Tyr Asn Asp Leu Thr Arg Leu Ile Gly Asn Tyr Thr 165 170 175

Asp His Ala Val Arg Trp His Asn Thr Gly Leu Glu Arg Ile Trp Gly 180 185 190

Pro Asp Ser Arg Asp Trp Ile Arg Tyr Asn Gln Phe Arg Arg Glu Leu 195 200 205

Thr Leu Thr Val Leu Asp Ile Val Ser Leu Phe Pro Asn Tyr Asp Ser 210 215 220

Arg Thr Tyr Pro Ile Arg Thr Ala Ser Gln Leu Thr Arg Glu Ile Tyr 225 230 235 240 Thr Asn Pro Val Leu Glu Asn Phe Asp Gly Ser Phe Arg Gly Ser Ala

Gln Gly Ile Glu Gly Ser Ile Arg Ser Pro His Leu Met Asp Ile Leu

Asn Ser Ile Thr Ile Tyr Thr Asp Ala His Arg Gly Glu Tyr Tyr Trp

Ser Gly His Gln Ile Met Ala Ser Pro Val Gly Phe Ser Gly Pro Glu

Phe Thr Phe Pro Leu Tyr Gly Thr Met Gly Asn Ala Ala Pro Gln Gln

Arg Ile Val Ala Gln Leu Gly Gln Gly Val Tyr Arg Thr Leu Ser Ser

Thr Leu Tyr Arg Arg Pro Phe Asn Ile Gly Ile Asn Asn Gln Gln Leu

Ser Val Leu Asp Gly Thr Glu Phe Ala Tyr Gly Thr Ser Ser Asn Leu

Pro Ser Ala Val Tyr Arg Lys Ser Gly Thr Val Asp Ser Leu Asp Glu

Ile Pro Pro Gln Asn Asn Asn Val Pro Pro Arg Gln Gly Phe Ser His

Arg Leu Ser His Val Ser Met Phe Arg Ser Gly Phe Ser Asn Ser Ser

Val Ser Ile Ile Arg Ala Pro Met Phe Ser Trp Ile His Arg Ser Ala

Glu Phe Asn Asn Thr Ile Asp Pro Glu Arg Ile Asn Gln Ile Pro Leu

Thr Lys Ser Thr Asn Leu Gly Ser Gly Thr Ser Val Val Lys Gly Pro

Gly Phe Thr Gly Gly Asp Ile Leu Arg Arg Thr Ser Pro Gly Gln Ile

Ser Thr Leu Arg Val Asn Ile Thr Ala Pro Leu Ser Gln Arg Tyr Arg Val Arg Ile Arg Tyr Ala Ser Thr Thr Asn Leu Gln Phe His Thr Ser

Ile Asp Gly Arg Pro Ile Asn Gln Gly Asn Phe Ser Ala Thr Met Ser

Ser Gly Ser Asn Leu Gln Ser Gly Ser Phe Arg Thr Val Gly Phe Thr

Thr Pro Phe Asn Phe Ser Asn Gly Ser Ser Val Phe Thr Leu Ser Ala His Val Phe Asn Ser Gly Asn Glu Val Tyr Ile Asp Arg Ile Glu Phe 565 570 575

Val Pro Ala Glu Val Thr Phe Glu Ala Glu Tyr Asp Leu Glu Arg 580 585 590

<210> SEQ ID NO: 21

<211> Comprimento: 3 546

<212> Tipo: DNA

<213> Organismo: Bacillus thuringiensis

<400> Seqüência: 21

atgggacaca acaatccaaa tatcaatgaa tgcatcccct ataattgctt gagcaaccct 60

gaagttgaag ttctgggagg tgagaggata gaaactggat atacccctat tgatatctct 120

ctgtctttga ctcagttcct cctgagtgag tttgttccag gtgcaggatt tgtgttgggt 180

ttggtagacg ttatctgggg aatctttgga ccatcccaat gggatgcctt tctggtccaa 240

atagagcaac tcataaacca gcgcattgag gaattcgcac gtaaccaggc aatctcccga 300

gttgagggat tgtcaaactt gtaccagata tatgctgaaa gtttcagaga gtgggaagct 360

gacccaacca accctgcatt gaaggaagag atgaggactc agttcaatga tatgaactca 420

gcactgacca ctgccatacc cttgtttgca gtacagaact atcaagtccc attactatca 480

gtctatgtgc aagcagcaaa cctacatttg agtgtcctcc gagatgtatc agtttttggt 540

caacgttggg gatttgatgc tgctaccatc aacagtcgtt acaatgacct cacacgactg 600

attgggaact acacagatca tgcagtccgt tggcacaata ctggattgga gagaatctgg 660

ggacctgata gtcgtgattg gattcgttac aatcagtttc gtcgggaact taccctgact 720

gttttggata tagtgtcact gtttcctaac tatgatagtc gtacatatcc aatacgaaca 780

gcaagtcagc tgactcgtga aatctacacg aaccctgtcc tggagaactt tgatggtagc 840

ttccgtggat cagcacaagg catagagggt tccatccgga gtcctcatct catggacatc 900

ctgaacagca ttacaatcta cacagatgct catcgaggtg agtattactg gtcaggacac 960 caaatcatgg catccccagt tggattttct ggtccagagt tcactttccc cttgtatgga 1020

acaatgggta atgctgctcc acagcaacga atagttgctc aattgggaca aggggtatat 1080

cgaaccttat catcaacact gtatcgacgt ccattcaaca ttgggataaa caatcaacag 1140

ttgtctgtac tagatgggac agagtttgct tatggaactt cctccaacct cccttcagca 1200

gtttatcgga agtctgggac tgtagactca ctagatgaga tacctccaca gaataacaat 1260

gtacctccaa gacaaggatt ctcccaccgt ctctctcatg tgtctatgtt ccgtágtggc 1320

tttagtaaca gcagtgtgag catcatacgt gcacctatgt tttcatggat tcaccgtagt 1380

gcagagttca ataacaccat tgaccctgaa cgaatcaatc aaatcccact taccaaaagc 1440

accaaccttg gtagcggaac cagcgttgtg aagggtcctg gtttcactgg tggggatatt 1500

ctgcgacgta ccagccctgg acagattagc acactgcgtg tgaacatcac cgctccactg 1560

agtcagcgct atcgagtgag gattcgctat gctagcacta ccaaccttca gttccatacc 1620

agcattgatg gtcgtccaat taaccaaggc aacttcagcg ctaccatgtc cagcggctca 1680

aacctgcaaa gtggatcatt ccgcaccgtt ggctttacca ctccattcaa cttcagcaac 1740

ggcagtagcg tgttcaccct ttccgcacat gtgttcaaca gtggcaacga agtgtacatc 1800

gatagaatcg agtttgtgcc agcggaagtg acttttgaag ctgagtacga ccttgaacgt 1860

gcccaaaagg tcgttaacgc cctcttcact tcttccaacc agatcggatt gaaaacagat 1920

gttacagact accacattga ccaggtgtcc aatcttgtgg attgcttgtc tgatgagttc 1980

tgtctcgatg agaagcgaga actctctgaa aaggttaagc acgctaagag actcagcgat 2040

gaacgaaacc ttcttcagga cccaaatttc aggggaatta atagacaacc agatagaggt 2100

tggcgtggat caacagacat cactatccaa ggtggagacg atgtttttaa ggagaactac 2160 gtgacccttc ctggtactgt tgacgagtgc tatcctacct acctttacca gaagattgac 2220

gaatcaaagc tcaaagcata cactcgttat gagcttcgtg gttacatcga agattcacaa 2280

gatcttgaaa tctacctcat cagatacaac gctaaacacg aaatcgtcaa cgttccaggt 2340

actggatctc tgtggccact ctctgcacag tcacctattg gcaagtgcgg tgagccaaat 2400

agatgtgcac cacacctgga gtggaatccc gatctggact gtagttgtcg tgacggggag 2460

aagtgcgctc atcacagcca tcacttcact cttgatatcg atgttggatg taccgacctt 2520

aatgaagacc tgggcgtttg ggttatcttc aagattaaga cccaggatgg tcatgccaga 2580

cttggtaatc tggagttcct tgaagagaaa cccttgttgg gtgaagctct ggccagagtc 2640

aagcgtgctg agaagaaatg gcgtgataaa cgtgaaaagt tgcaattgga gactaacatt 2700

gtctacaaag aggcaaagga gtctgtggat gccttgttcg tgaactctca gtacgaccga 2760

ctccaagtgg ataccaacat tgctatgatt catgctgctg acaaacgtgt tcaccgtatc 2820

agagaagcct atctccctga actgtcagtg atcccaggag tcaacgctgc aatcttcgag 2880

gagcttgaag gtcgaatctt cactgcctat tcactttacg atgcacgaaa cgtgattaag 2940

aatggggatt ttaataacgg gttgttgtgc tggaatgtga aggggcacgt ggatgttgag 3000

gaacaaaaca accaccgttc cgtgcttgtt attcctgagt gggaagcaga ggtgtctcag 3060

gaggttaggg tgtgtcctgg tagaggatat atcttgagag tgactgccta taaggaaggc 3120

tatggtgaag gttgcgtgac aatccacgag atcgaagaca acacagatga gcttaagttc 3180

tctaactgcg ttgaggagga agtctaccca aacaataccg tcacttgtaa caattacaca 3240

ggcacacaag aagagtacga aggaacctac acctcccgaa atcagggtta tgatgaggcc 3300

tatggtaata atccttctgt gcctgccgat tatgcttctg tttacgagga aaagtcttac 3360 actgatggcc gtcgtgagaa cccttgcgaa tccaaccgtg gatacggtga ttacactcca 3420

cttccagcag gatacgttac taaggatctt gagtactttc cagagactga taaagtttgg 3480

<210> SEQ ID NO: 22 15 <211> Comprimento: 591 <212> Tipo: PRT

<213> Organismo: Bacillus thuringiensis

<400> Seqüência: 22

Ile Glu Thr Gly Tyr Thr Pro Ile Asp Ile Ser Leu Ser Leu Thr Gln 1 5 10 15

Phe Leu Leu Ser Glu Phe Val Pro Gly Ala Gly Phe Val Leu Gly Leu 20 25 30

Val Asp Val Ile Trp Gly Ile Phe Gly Pro Ser Gln Trp Asp Ala Phe 35 40 45

Leu Val Gln Ile Glu Gln Leu Ile Asn Gln Arg Ile Glu Glu Phe Ala 50 55 60

Arg Asn Gln Ala Ile Ser Arg Val Glu Gly Leu Ser Asn Leu Tyr Gln 65 70 75 80

Ile Tyr Ala Glu Ser Phe Arg Glu Trp Glu Ala Asp Pro Thr Asn Pro

85 90 95

Ala Leu Lys Glu Glu Met Arg Thr Gln Phe Asn Asp Met Asn Ser Ala 100 105 110

Leu Thr Thr Ala Ile Pro Leu Phe Ala Val Gln Asn Tyr Gln Val Pro 115 120 125

Leu Leu Ser Val Tyr Val Gln Ala Ala Asn Leu His Leu Ser Val Leu 130 135 140

Arg Asp Val Ser Val Phe Gly Gln Arg Trp Gly Phe Asp Ala Ala Thr 145 150 155 160

Ile Asn Ser Arg Tyr Asn Asp Leu Thr Arg Leu Ile Gly Asn Tyr Thr

165 170 175

Asp His Ala Val Arg Trp His Asn Thr Gly Leu Glu Arg Ile Trp Gly 180 185 190

Pro Asp Ser Arg Asp Trp Ile Arg Tyr Asn Gln Phe Arg Arg Glu Leu 195 200 205

Thr Leu Thr Val Leu Asp Ile Val Ser Leu Phe Pro Asn Tyr Asp Ser 60 210 215 220 Arg Thr Tyr Pro Ile Arg Thr Ala Ser Gln Leu Thr Arg Glu Ile Tyr 225 230 235 240

Thr Asn Pro Val Leu Glu Asn Phe Asp Gly Ser Phe Arg Gly Ser Ala 245 250 255

Gln Gly Ile Glu Gly Ser Ile Arg Ser Pro His Leu Met Asp Ile Leu 260 265 270

Asn Ser Ile Thr Ile Tyr Thr Asp Ala His Arg Gly Glu Tyr Tyr Trp 275 280 285

Ser Gly His Gln Ile Met Ala Ser Pro Val Gly Phe Ser Gly Pro Glu 290 295 300

Phe Thr Phe Pro Leu Tyr Gly Thr Met Gly Asn Ala Ala Pro Gln Gln 305 310 315 320

Arg Ile Val Ala Gln Leu Gly Gln Gly Val Tyr Arg Thr Leu Ser Ser 325 330 335

Thr Leu Tyr Arg Arg Pro Phe Asn Ile Gly Ile Asn Asn Gln Gln Leu 340 345 350

Ser Val Leu Asp Gly Thr Glu Phe Ala Tyr Gly Thr Ser Ser Asn Leu 355 360 365

Pro Ser Ala Val Tyr Arg Lys Ser Gly Thr Val Asp Ser Leu Asp Glu 370 375 380

Ile Pro Pro Gln Asn Asn Asn Val Pro Pro Arg Gln Gly Phe Ser His 385 390 395 400

Arg Leu Ser His Val Ser Met Phe Arg Ser Gly Phe Ser Asn Ser Ser 405 410 415

Val Ser Ile Ile Arg Ala Pro Met Phe Ser Trp Ile His Arg Ser Ala 420 425 430

40 Glu Phe Asn Asn Thr Ile Asp Pro Glu Arg Ile Asn Gln Ile Pro Leu 435 440 445

Thr Lys Ser Thr Asn Leu Gly Ser Gly Thr Ser Val Val Lys Gly Pro 450 455 460

Gly Phe Thr Gly Gly Asp Ile Leu Arg Arg Thr Ser Pro Gly Gln Ile 465 470 475 480

Ser Thr Leu Arg Val Asn Ile Thr Ala Pro Leu Ser Gln Arg Tyr Arg 485 490 495

Val Arg Ile Arg Tyr Ala Ser Thr Thr Asn Leu Gln Phe His Thr Ser 500 505 510

Ile Asp Gly Arg Pro Ile Asn Gln Gly Asn Phe Ser Ala Thr Met Ser 515 520 525

Ser Gly Ser Asn Leu Gln Ser Gly Ser Phe Arg Thr Val Gly Phe Thr 530 535 540 Thr Pro Phe Asn Phe Ser Asn Gly Ser Ser Val Phe Thr Leu Ser Ala 545 550 555 560

His Val Phe Asn Ser Gly Asn Glu Val Tyr Ile Asp Arg Ile Glu Phe 565 570 575

Val Pro Ala Glu Val Thr Phe Glu Ala Glu Tyr Asp Leu Glu Arg 580 585 590

<210> SEQ ID NO: 23 <211> Comprimento: 3546 <212> Tipo: DNA <213> Organismo: Bacillus thuringiensis

<400> Seqüência: 23

atgggacaca acaatccaaa tatcaatgaa tgcatcccct ataattgctt gagcaaccct 60

gaagttgaag ttctgggagg tgagaggata gaaactggat atacccctat tgatatctct 120

ctgtctttga ctcagttcct cctgagtgag tttgttccag gtgcaggatt tgtgttgggt 180

ttggtagaca ttatctgggg aatctttgga ccatcccaat gggatgcctt tctggtccaa 240

atagagcaac tcataaacca gcgcattgag gaatttgcac gtaaccaggc aatctcccga 300

gttgagggat tgtcaaactt gtaccagata tatgctgaaa gtttcagaga gtgggaagct 360

gacccaacca accctgcatt gaaggaagag atgaggactc agttcaatga tatgaactca 420

gcactgacca ctgccatacc cttgtttgca gtacagaact atcaagtccc attactatca 480

gttttcgtgc aagcagcaaa cctacatttg agtgtcctcc gagatgtatc agttttcggt 540

caacgttggg gatttgatgc tgctaccatc aacagtcgtt acaatgacct cacacgactg 600

attgggaact tcacagatca tgcagtccgt tggcacaata ctggattgga gagaatctgg 660

ggacctgata gtcgtgattg gattcgttac aatcagtttc gtcgggaact taccctgact 720

gtcttggata tagtgtcact gtttcctaac tatgatagtc gtacatatcc aatacgaaca 780

gcaagtcagc tgactcgtga aatctacacg aaccctgtcc tggagaactt tgatggtagc 840

ttccgtggat cagcacaagg catagagggt tccatccgga gtcctcatct catggacatc 900 ctgaacagca ttacaatcta cacagatgct catcgaggtg agtattactg gtcaggacac 960 caaatcatgg catccccagt tggattttct ggtccagagt tcactttccc cttgtatgga 1020

acaatgggta atgctgctcc acagcaacga atagttgctc aattgggaca aggggtatat 1080

cgaaccttat catcaacact gtatcgacgt ccattcaaca ttgggataaa caatcaacag 1140

ttgtctgtac tagatgggac agagtttgct tatggaactt cctccaacct cccttcagca 1200

gtttatcgga agtctgggac tgtagactca ctagatgaga tacctccaca gaataacaat 1260

gtacctccaa gacaaggatt ctcccaccgt ctctctcatg tgtctatgtt ccgtagtggc

1320

tttagtaaca gcagtgtgag catcatacgt gcacctatgt tttcatggat tcaccgtagt 1380

gcagagttca ataacaccat tgaccctgaa cgaatcaatc aaatcccact taccaaaagc 1440

accaaccttg gtagcggaac cagcgttgtg aagggtcctg gtttcactgg tggggatatt 1500

ctgcgacgta ccagccctgg acagattagc acactgcgtg tgaacatcac cgctccactg 1560

agtcagcgct atcgagtgag gattcgctat gctagcacta ccaaccttca gttccatacc 1620

agcattgatg gtcgtccaat taaccaaggc aacttcagcg ctaccatgtc cagcggctca 1680

aacctgcaaa gtggatcatt ccgcaccgtt ggctttacca ctccattcaa cttcagcaac 1740

ggcagtagcg tgttcaccct ttccgcacat gtgttcaaca gtggcaacga agtgtacatc 1800

gatagaatcg agtttgtgcc agcggaagtg acttttgaag ctgagtacga ccttgaacgt 1860

gcccaaaagg tcgttaacgc cctcttcact tcttccaacc agatcggatt gaaaacagat 1920

gttacagact accacattga ccaggtgtcc aatcttgtgg attgcttgtc tgatgagttc 1980

tgtctcgatg agaagcgaga actctctgaa aaggttaagc acgctaagag actcagcgat 2040

gaacgaaacc ttcttcagga cccaaatttc aggggaatta atagacaacc agatagaggt 2100 tggcgtggat caacagacat cactatccaa ggtggagacg atgtttttaa ggagaactac 2160

gtgacccttc ctggtactgt tgacgagtgc tatcctacct acctttacca gaagattgac 2220

gaatcaaagc tcaaagcata cactcgttat gagcttcgtg gttacatcga agattcacaa 2280

gatcttgaaa tctacctcat cagatacaac gctaaacacg aaatcgtcaa cgttccaggt 2340

actggatctc tgtggccact ctctgcacag tcacctattg gcaagtgcgg tgagccaaat 2400

agatgtgcac cacacctgga gtggaatccc gatctggact gtagttgtcg tgacggggag 2460

aagtgcgctc atcacagcca tcacttcact cttgatatcg atgttggatg taccgacctt 2520

aatgaagacc tgggcgtttg ggttatcttc aagattaaga cccaggatgg tcatgccaga 2580

cttggtaatc tggagttcct tgaagagaaa cccttgttgg gtgaagctct ggccagagtc 2640

aagcgtgctg agaagaaatg gcgtgataaa cgtgaaaagt tgcaattgga gactaacatt 2700

gtctacaaag aggcaaagga gtctgtggat gccttgttcg tgaactctca gtacgaccga 2760

ctccaagtgg ataccaacat tgctatgatt catgctgctg acaaacgtgt tcaccgtatc 2820

agagaagcct atctccctga actgtcagtg atcccaggag tcaacgctgc aatcttcgag 2880

gagcttgaag gtcgaatctt cactgcctat tcactttacg atgcacgaaa cgtgattaag 2940

aatggggatt ttaataacgg gttgttgtgc tggaatgtga aggggcacgt ggatgttgag 3000

gaacaaaaca accaccgttc cgtgcttgtt attcctgagt gggaagcaga ggtgtctcag 3060

gaggttaggg tgtgtcctgg tagaggatat atcttgagag tgactgccta taaggaaggc 3120

tatggtgaag gttgcgtgac aatccacgag atcgaagaca acacagatga gcttaagttc 3180

tctaactgcg ttgaggagga agtctaccca aacaataccg tcacttgtaa caattacaca 3240

ggcacacaag aagagtacga aggaacctac acctcccgaa atcagggtta tgatgaggcc 3300 tatggtaata atccttctgt gcctgccgat 3360

actgatggcc gtcgtgagaa cccttgcgaa 3420

cttccagcag gatacgttac taaggatctt 3480

atcgaaatcg gagagactga aggcacattc 3540

gaggaa 3546

tatgcttctg tttacgagga aaagtcttac tccaaccgtg gatacggtga ttacactcca gagtactttc cagagactga taaagtttgg atcgtggatt ctgtggagct cttgctcatg

<210> SEQ ID NO: 24 <211> Comprimento: 5 91 <212> Tipo: PRT <213> Organismo: Bacillus thuringiensis

<400> Seqüência: 24

Ile Glu Thr Gly Tyr Thr Pro Ile Asp Ile Ser Leu Ser Leu Thr Gln 1 5 10 15

Phe Leu Leu Ser Glu Phe Val Pro Gly Ala Gly Phe Val Leu Gly Leu 20 25 30

Val Asp Ile Ile Trp Gly Ile Phe Gly Pro Ser Gln Trp Asp Ala Phe 35 40 45

Leu Val Gln Ile Glu Gln Leu Ile Asn Gln Arg Ile Glu Glu Phe Ala 50 55 60

Arg Asn Gln Ala Ile Ser Arg Val Glu Gly Leu Ser Asn Leu Tyr Gln 65 70 75 80

Ile Tyr Ala Glu Ser Phe Arg Glu Trp Glu Ala Asp Pro Thr Asn Pro 40 85 90 95

Ala Leu Lys Glu Glu Met Arg Thr Gln Phe Asn Asp Met Asn Ser Ala 100 105 110

Leu Thr Thr Ala Ile Pro Leu Phe Ala Val Gln Asn Tyr Gln Val Pro 115 120 125

Leu Leu Ser Val Phe Val Gln Ala Ala Asn Leu His Leu Ser Val Leu 130 135 140

Arg Asp Val Ser Val Phe Gly Gln Arg Trp Gly Phe Asp Ala Ala Thr 145 150 155 160

Ile Asn Ser Arg Tyr Asn Asp Leu Thr Arg Leu Ile Gly Asn Phe Thr 165 170 175

Asp His Ala Val Arg Trp His Asn Thr Gly Leu Glu Arg Ile Trp Gly 180 185 190

Pro Asp Ser Arg Asp Trp Ile Arg Tyr Asn Gln Phe Arg Arg Glu Leu 195 200 205 Thr Leu Thr Val Leu Asp Ile Val Ser Leu Phe Pro Asn Tyr Asp Ser 210 215 220

Arg Thr Tyr Pro Ile Arg Thr Ala Ser Gln Leu Thr Arg Glu Ile Tyr 225 230 235 240

Thr Asn Pro Val Leu Glu Asn Phe Asp Gly Ser Phe Arg Gly Ser Ala 245 250 255

Gln Gly Ile Glu Gly Ser Ile Arg Ser Pro His Leu Met Asp Ile Leu 260 265 270

Asn Ser Ile Thr Ile Tyr Thr Asp Ala His Arg Gly Glu Tyr Tyr Trp 275 280 285

Ser Gly His Gln Ile Met Ala Ser Pro Val Gly Phe Ser Gly Pro Glu 290 295 300

Phe Thr Phe Pro Leu Tyr Gly Thr Met Gly Asn Ala Ala Pro Gln Gln 305 310 315 320

Arg Ile Val Ala Gln Leu Gly Gln Gly Val Tyr Arg Thr Leu Ser Ser 325 330 335

Thr Leu Tyr Arg Arg Pro Phe Asn Ile Gly Ile Asn Asn Gln Gln Leu 340 345 350

Ser Val Leu Asp Gly Thr Glu Phe Ala Tyr Gly Thr Ser Ser Asn Leu

355 360 365

Pro Ser Ala Val Tyr Arg Lys Ser Gly Thr Val Asp Ser Leu Asp Glu

370 375 380

Ile Pro Pro Gln Asn Asn Asn Val Pro Pro Arg Gln Gly Phe Ser His 385 390 395 400

Arg Leu Ser His Val Ser Met Phe Arg Ser Gly Phe Ser Asn Ser Ser 405 410 415

Val Ser Ile Ile Arg Ala Pro Met Phe Ser Trp Ile His Arg Ser Ala 420 425 430

Glu Phe Asn Asn Thr Ile Asp Pro Glu Arg Ile Asn Gln Ile Pro Leu 435 440 445

Thr Lys Ser Thr Asn Leu Gly Ser Gly Thr Ser Val Val Lys Gly Pro 450 455 460

Gly Phe Thr Gly Gly Asp Ile Leu Arg Arg Thr Ser Pro Gly Gln Ile 465 470 475 480

Ser Thr Leu Arg Val Asn Ile Thr Ala Pro Leu Ser Gln Arg Tyr Arg 485 490 495

Val Arg Ile Arg Tyr Ala Ser Thr Thr Asn Leu Gln Phe His Thr Ser 500 505 510

Ile Asp Gly Arg Pro Ile Asn Gln Gly Asn Phe Ser Ala Thr Met Ser 515 520 525 Ser Gly Ser Asn Leu Gln Ser Gly Ser Phe Arg Thr Val Gly Phe Thr 530 535 540

Thr Pro Phe Asn Phe Ser Asn Gly Ser Ser Val Phe Thr Leu Ser Ala 545 550 555 560

His Val Phe Asn Ser Gly Asn Glu Val Tyr Ile Asp Arg Ile Glu Phe 565 570 575

Val Pro Ala Glu Val Thr Phe Glu Ala Glu Tyr Asp Leu Glu Arg 580 585 590

<210> SEQ ID NO: 25 <211> Comprimento: 3546 <212> Tipo: DNA

<213> Organismo: Bacillus thuringiensis <400> Seqüência: 25

atgggacaca acaatccaaa tatcaatgaa tgcatcccct ataattgctt gagcaaccct 60 gaagttgaag ttctgggagg tgagaggata gaaactggat atacccctat tgatatctct 120

ctgtctttga ctcagttcct cctgagtgag tttgttccag gtgcaggatt tgtgttgggt 180

ttggtagaca ttatctgggg aatctttgga ccatcccaat gggatgcctt tctggtccaa 240

atagagcaac tcataaacca gcgcattgag gaatttgcac gtaaccaggc aatctcccga 300

gttgagggat tgtcaaactt gtaccagata tatgctgaaa gtttcagaga gtgggaagct 360

gacccaacca accctgcatt gaaggaagag atgaggactc agttcaatga tatgaactca 420

gcactgacca ctgccatacc cttgtttgca gtacagaact atcaagtccc attactatca 480

gtctatgtgc aagcagcaaa cctacatttg agtgtcctcc gagatgtatc agtttttggt 540

caacgttggg gatttgatgc tgctaccatc aacagtcgtt acaatgacct cacacgactg 600

attgggaact acacagatca tgcagtccgt tggcacaata ctggattgga gagagtttgg 660

ggacctgata gtcgtgattg gattcgttac aatcagtttc gtcgggaact taccctgact 720

gtcttggata tagtgtcact gtttcctaac tatgatagtc gtacatatcc aatacgaaca 780

gcaagtcagc tgactcgtga aatctacacg aaccctgtcc tggagaactt tgacggtagc 840 ttccgtggat cagcacaagg tatagagggt tccatccgga gccctcatct catggacgtg 900

ctgaacagca ttacaatcta cacagatgct catcgaggtg agtattactg gtcaggacac 960

caaatcatgg catccccagt tggattttct ggtccagagt tcactttccc cttgtatgga 1020

acaatgggta atgctgctcc acagcaacga atagttgctc aattgggaca aggggtatat 1080

cgaaccttat catcaacact gtatcgacgt ccattcaaca ttgggataaa caatcaacag 1140

ttgtctgtac tagatgggac agagtttgct tatggaactt cctccaacct cccttcagca 1200

gtttatcgga agtctgggac tatcgactca ctagatgaga tacctccaca gaataacaat 1260

gtacctccaa gacaaggatt ctcccaccgt ctctctcatg tgtctatgtt ccgtagtggc 1320

tttagtaaca gcagtgtgag catcatacgt gcacctatgt tttcatgggt tcaccgtagt 1380

gcagagttca ataacaccat tgaccctgaa cgaatcaatc aaatcccact taccaaaagc 1440

accaaccttg gtagcggaac cagcgttgtg aagggtcctg gtttcaccgg tggggatatt 1500

ctgcgacgta ccagccctgg acagattagc acactgcgtg tgaacatcac tgctccactg 1560

agtcagcgct atcgagtgag gattcgctat gctagcacta ccaaccttca gttccatacc 1620

agcattgatg gtcgtccaat taaccaaggc aacttcagcg ctaccatgtc cagcggctca 1680

aacctgcaaa gtggatcatt ccgcaccgtt ggctttacca ctccattcaa cttcagcaac 1740

ggcagtagcg tgttcaccct ttccgcacat gtgttcaaca gtggcaacga agtgtacatc 1800

gatagaatcg agtttgtgcc agcggaagtg acttttgaag ctgagtacga ccttgaacgt 1860

gcccaaaagg tcgttaacgc cctcttcact tcttccaacc agatcggatt gaaaacagat 1920

gttacagact accacattga ccaggtgtcc aatcttgtgg attgcttgtc tgatgagttc 1980

tgtctcgatg agaagcgaga actctctgaa aaggttaagc acgctaagag actcagcgat 2040 gaacgaaacc ttcttcagga cccaaatttc aggggaatta atagacaacc agatagaggt 2100

tggcgtggat caacagacat cactatccaa ggtggagacg atgtttttaa ggagaactac 2160

gtgacccttc ctggtactgt tgacgagtgc tatcctacct acctttacca gaagattgac 2220

gaatcaaagc tcaaagcata cactcgttat gagcttcgtg gttacatcga agattcacaa 2280

gatcttgaaa tctacctcat cagatacaac gctaaacacg aaatcgtcaa cgttccaggt 2340

actggatctc tgtggccact ctctgcacag tcacctattg gcaagtgcgg tgagccaaat 2400

agatgtgcac cacacctgga gtggaatccc gatctggact gtagttgtcg tgacggggag 2460

aagtgcgctc atcacagcca tcacttcact cttgatatcg atgttggatg taccgacctt 2520

aatgaagacc tgggcgtttg ggttatcttc aagattaaga cccaggatgg tcatgccaga 2580

cttggtaatc tggagttcct tgaagagaaa cccttgttgg gtgaagctct ggccagagtc 2640

aagcgtgctg agaagaaatg gcgtgataaa cgtgaaaagt tgcaattgga gactaacatt 2700

gtctacaaag aggcaaagga gtctgtggat gccttgttcg tgaactctca gtacgaccga 2760

ctccaagtgg ataccaacat tgctatgatt catgctgctg acaaacgtgt tcaccgtatc 2820

agagaagcct atctccctga actgtcagtg atcccaggag tcaacgctgc aatcttcgag 2880

gagcttgaag gtcgaatctt cactgcctat tcactttacg atgcacgaaa cgtgattaag 2940

aatggggatt ttaataacgg gttgttgtgc tggaatgtga aggggcacgt ggatgttgag 3000

gaacaaaaca accaccgttc cgtgcttgtt attcctgagt gggaagcaga ggtgtctcag 3060

gaggttaggg tgtgtcctgg tagaggatat atcttgagag tgactgccta taaggaaggc 3120

tatggtgaag gttgcgtgac aatccacgag atcgaagaca acacagatga gcttaagttc 3180

tctaactgcg ttgaggagga agtctaccca aacaataccg tcacttgtaa caattacaca 3240 ggcacacaag aagagtacga aggaacctac acctcccgaa atcagggtta tgatgaggcc 3300

tatggtaata atccttctgt gcctgccgat tatgcttctg tttacgagga aaagtcttac 3360

actgatggcc gtcgtgagaa cccttgcgaa tccaaccgtg gatacggtga ttacactcca 3420

cttccagcag gatacgttac taaggatctt gagtactttc cagagactga taaagtttgg 3480

atcgaaatcg gagagactga aggcacattc atcgtggatt ctgtggagct cttgctcatg 3540

gaggaa 3546

<210> SEQ ID NO: 26

<211> Comprimento: 591

<212> Tipo: PRT

<213> Organismo: Bacillus thuringiensis

<400> Seqüência: 26

Ile Glu Thr Gly Tyr Thr Pro Ile Asp Ile Ser Leu Ser Leu Thr Gln 1 5 10 15

Phe Leu Leu Ser Glu Phe Val Pro Gly Ala Gly Phe Val Leu Gly Leu 30 20 25 30

Val Asp Ile Ile Trp Gly Ile Phe Gly Pro Ser Gln Trp Asp Ala Phe 35 40 45

Leu Val Gln Ile Glu Gln Leu Ile Asn Gln Arg Ile Glu Glu Phe Ala 50 55 60

Arg Asn Gln Ala Ile Ser Arg Val Glu Gly Leu Ser Asn Leu Tyr Gln 65 70 75 80

Ile Tyr Ala Glu Ser Phe Arg Glu Trp Glu Ala Asp Pro Thr Asn Pro 85 90 95

Ala Leu Lys Glu Glu Met Arg Thr Gln Phe Asn Asp Met Asn Ser Ala 100 105 110

Leu Thr Thr Ala Ile Pro Leu Phe Ala Val Gln Asn Tyr Gln Val Pro 115 120 125

Leu Leu Ser Val Tyr Val Gln Ala Ala Asn Leu His Leu Ser Val Leu 130 135 140

Arg Asp Val Ser Val Phe Gly Gln Arg Trp Gly Phe Asp Ala Ala Thr 145 150 155 160

Ile Asn Ser Arg Tyr Asn Asp Leu Thr Arg Leu Ile Gly Asn Tyr Thr 165 170 175

Asp His Ala Val Arg Trp His Asn Thr Gly Leu Glu Arg Val Trp Gly 180 185 190 Pro Asp Ser Arg Asp Trp Ile Arg Tyr Asn Gln Phe Arg Arg Glu Leu 195 200 205

Thr Leu Thr Val Leu Asp Ile Val Ser Leu Phe Pro Asn Tyr Asp Ser 210 215 220

Arg Thr Tyr Pro Ile Arg Thr Ala Ser Gln Leu Thr Arg Glu Ile Tyr

225 230 235 240

Thr Asn Pro Val Leu Glu Asn Phe Asp Gly Ser Phe Arg Gly Ser Ala 245 250 255

Gln Gly Ile Glu Gly Ser Ile Arg Ser Pro His Leu Met Asp Val Leu 260 265 270

Asn Ser Ile Thr Ile Tyr Thr Asp Ala His Arg Gly Glu Tyr Tyr Trp 275 280 285

Ser Gly His Gln Ile Met Ala Ser Pro Val Gly Phe Ser Gly Pro Glu 290 295 300

Phe Thr Phe Pro Leu Tyr Gly Thr Met Gly Asn Ala Ala Pro Gln Gln 305 310 315 320

Arg Ile Val Ala Gln Leu Gly Gln Gly Val Tyr Arg Thr Leu Ser Ser 325 330 335

Thr Leu Tyr Arg Arg Pro Phe Asn Ile Gly Ile Asn Asn Gln Gln Leu 340 345 350

Ser Val Leu Asp Gly Thr Glu Phe Ala Tyr Gly Thr Ser Ser Asn Leu 355 360 365

Pro Ser Ala Val Tyr Arg Lys Ser Gly Thr Ile Asp Ser Leu Asp Glu 370 375 380

Ile Pro Pro Gln Asn Asn Asn Val Pro Pro Arg Gln Gly Phe Ser His 385 390 395 400

Arg Leu Ser His Val Ser Met Phe Arg Ser Gly Phe Ser Asn Ser Ser 405 410 415

Val Ser Ile Ile Arg Ala Pro Met Phe Ser Trp Val His Arg Ser Ala 420 425 430

Glu Phe Asn Asn Thr Ile Asp Pro Glu Arg Ile Asn Gln Ile Pro Leu 435 440 445

Thr Lys Ser Thr Asn Leu Gly Ser Gly Thr Ser Val Val Lys Gly Pro 450 455 460

Gly Phe Thr Gly Gly Asp Ile Leu Arg Arg Thr Ser Pro Gly Gln Ile 465 470 475 480

Ser Thr Leu Arg Val Asn Ile Thr Ala Pro Leu Ser Gln Arg Tyr Arg 485 490 495

Val Arg Ile Arg Tyr Ala Ser Thr Thr Asn Leu Gln Phe His Thr Ser 500 505 510 Ile Asp Gly Arg Pro Ile Asn Gln Gly Asn Phe Ser Ala Thr Met Ser 515 520 525

Ser Gly Ser Asn Leu Gln Ser Gly Ser Phe Arg Thr Val Gly Phe Thr 530 535 540

Thr Pro Phe Asn Phe Ser Asn Gly Ser Ser Val Phe Thr Leu Ser Ala 545 550 555 560

His Val Phe Asn Ser Gly Asn Glu Val Tyr Ile Asp Arg Ile Glu Phe 565 570 575

Val Pro Ala Glu Val Thr Phe Glu Ala Glu Tyr Asp Leu Glu Arg 580 585 590

<210> SEQ ID NO: 27 <211> Comprimento: 3546 <212> Tipo: DNA <213> Organismo: Bacillus thuringiensis

<400> Seqüência: 27

atgggacaca acaatccaaa tatcaatgaa tgcatcccct ataattgctt gagcaaccct 60

gaagttgaag ttctgggagg tgagaggata gaaactggat atacccctat tgatatctct 120

ctgtctttga ctcagttcct cctgagtgag tttgttccag gtgcaggatt tgtgttgggt 180

ttggtagaca ttatctgggg aatctttgga ccatcccaat gggatgcctt tctggtccaa 240

atagagcaac tcataaacca gcgcattgag gaatttgcac gtaaccaggc aatctcccga 300

gttgagggat tgtcaaactt gtaccagata tatgctgaaa gtttcagaga gtgggaagct 360

gacccaacca accctgcatt gaaggaagag atgaggactc agttcaatga tatgaactca 420

gcactgacca ctgccatacc cttgtttgca gtacagaact atcaagtccc attactatca 480

gtctatgtgc aagcagcaaa cctacatttg agtgtcctcc gagatgtatc agtttttggt 540

caacgttggg gatttgatgc tgctaccatc aacagtcgtt acaatgacct cacacgactg 600

attgggaact acacagatca tgcagtccgt tggcacaata ctggattgga gagagtttgg 660

ggacctgata gtcgtgattg gattcgttac aatcagtttc gtcgggaact taccctgact 720

gtcttggata tagtgtcact gtttcctaac tatgatagtc gtacatatcc aatacgaaca 780 gcaagtcagc tgactcgtga aatctacacg aaccctgtcc tggagaactt tgatggtagc 840

ttccgtggat cagcacaagg catagagggt tccatccgga gtcctcatct catggacatc 900

ctgaacagca ttacaatcta cacagatgct catcgaggtg agtattactg gtcaggacac 960

caaatcatgg catccccagt tggattttct ggtccagagt tcactttccc cttgtatgga 1020

acaatgggta atgctgctcc acagcaacga atagttgctc aattgggaca aggggtatat 1080

cgaaccttat catcaacact gtatcgacgt ccattcaaca ttgggataaa caatcaacag 1140

ttgtctgtac tagatgggac agagtttgct tatggaactt cctccaacct cccttcagca 1200

gttttccgga agtctgggac tgtagactca ctagatgaga tacctccaca gaataacaat 1260

gtacctccaa gacaaggatt ctcccaccgt ctctctcatg tgtctatgta ccgtagtggc 1320

ttcagtaaca gcagtgtgag catcatacgt gcacctatgt tttcatgggt tcaccgtagt 1380

gcagagttca ataacaccat tgaccctgaa cgaatcaatc aaatcccact taccaaaagc 1440

accaaccttg gtagcggaac cagcgttgtg aagggtcctg gtttcactgg tggggatatt 1500

ctgcgacgta ccagccctgg acagattagc acactgcgtg tgaacatcac cgctccactg 1560

agtcagcgct atcgagtgag gattcgctat gctagcacta ccaaccttca gttccatacc 1620

agcattgatg gtcgtccaat taaccaaggc aacttcagcg ctaccatgtc cagcggctca 1680

aacctgcaaa gtggatcatt ccgcaccgtt ggctttacca ctccattcaa cttcagcaac 1740

ggcagtagcg tgttcaccct ttccgcacat gtgttcaaca gtggcaacga agtgtacatc 1800

gatagaatcg agtttgtgcc agcggaagtg acttttgaag ctgagtacga ccttgaacgt 1860

gcccaaaagg tcgttaacgc cctcttcact tcttccaacc agatcggatt gaaaacagat 1920

gttacagact accacattga ccaggtgtcc aatcttgtgg attgcttgtc tgatgagttc 1980 tgtctcgatg agaagcgaga actctctgaa aaggttaagc acgctaagag actcagcgat 2040

gaacgaaacc ttcttcagga cccaaatttc aggggaatta atagacaacc agatagaggt 2100

tggcgtggat caacagacat cactatccaa ggtggagacg atgtttttaa ggagaactac 2160

gtgacccttc ctggtactgt tgacgagtgc tatcctacct acctttacca gaagattgac 2220

gaatcaaagc tcaaagcata cactcgttat gagcttcgtg gttacatcga agattcacaa 2280

gatcttgaaa tctacctcat cagatacaac gctaaacacg aaatcgtcaa cgttccaggt 2340

actggatctc tgtggccact ctctgcacag tcacctattg gcaagtgcgg tgagccaaat 2400

agatgtgcac cacacctgga gtggaatccc gatctggact gtagttgtcg tgacggggag 2460

aagtgcgctc atcacagcca tcacttcact cttgatatcg atgttggatg taccgacctt 2520

aatgaagacc tgggcgtttg ggttatcttc aagattaaga cccaggatgg tcatgccaga 2580

cttggtaatc tggagttcct tgaagagaaa cccttgttgg gtgaagctct ggccagagtc 2640

aagcgtgctg agaagaaatg gcgtgataaa cgtgaaaagt tgcaattgga gactaacatt 2700

gtctacaaag aggcaaagga gtctgtggat gccttgttcg tgaactctca gtacgaccga 2760

ctccaagtgg ataccaacat tgctatgatt catgctgctg acaaacgtgt tcaccgtatc 2820

agagaagcct atctccctga actgtcagtg atcccaggag tcaacgctgc aatcttcgag 2880

gagcttgaag gtcgaatctt cactgcctat tcactttacg atgcacgaaa cgtgattaag 2940

aatggggatt ttaataacgg gttgttgtgc tggaatgtga aggggcacgt ggatgttgag 3000

gaacaaaaca accaccgttc cgtgcttgtt attcctgagt gggaagcaga ggtgtctcag 3060

gaggttaggg tgtgtcctgg tagaggatat atcttgagag tgactgccta taaggaaggc 3120

tatggtgaag gttgcgtgac aatccacgag atcgaagaca acacagatga gcttaagttc 3180 tctaactgcg ttgaggagga agtctaccca aacaataccg tcacttgtaa caattacaca 3240

ggcacacaag aagagtacga aggaacctac acctcccgaa atcagggtta tgatgaggcc 3300

tatggtaata atccttctgt gcctgccgat tatgcttctg tttacgagga aaagtcttac 3360

actgatggcc gtcgtgagaa cccttgcgaa tccaaccgtg gatacggtga ttacactcca 3420

cttccagcag gatacgttac taaggatctt gagtactttc cagagactga taaagtttgg 3480

atcgaaatcg gagagactga aggcacattc atcgtggatt ctgtggagct cttgctcatg 3540

gaggaa 3546

<210> SEQ ID NO: 28

<211> Comprimento: 591

<212> Tipo: PRT

<213> Organismo: Bacillus thuringiensis

<400> Seqüência: 28

Ile Glu Thr Gly Tyr Thr Pro Ile Asp Ile Ser Leu Ser Leu Thr Gln 1 5 10 15

Phe Leu Leu Ser Glu Phe Val Pro Gly Ala Gly Phe Val Leu Gly Leu 20 25 30

35 Val Asp Ile Ile Trp Gly Ile Phe Gly Pro Ser Gln Trp Asp Ala Phe 35 40 45

Leu Val Gln Ile Glu Gln Leu Ile Asn Gln Arg Ile Glu Glu Phe Ala 50 55 60

Arg Asn Gln Ala Ile Ser Arg Val Glu Gly Leu Ser Asn Leu Tyr Gln 65 70 75 80

Ile Tyr Ala Glu Ser Phe Arg Glu Trp Glu Ala Asp Pro Thr Asn Pro 45 85 90 95

Ala Leu Lys Glu Glu Met Arg Thr Gln Phe Asn Asp Met Asn Ser Ala 100 105 110

Leu Thr Thr Ala Ile Pro Leu Phe Ala Val Gln Asn Tyr Gln Val Pro 115 120 125

Leu Leu Ser Val Tyr Val Gln Ala Ala Asn Leu His Leu Ser Val Leu 130 135 140

Arg Asp Val Ser Val Phe Gly Gln Arg Trp Gly Phe Asp Ala Ala Thr 145 150 155 160

Ile Asn Ser Arg Tyr Asn Asp Leu Thr Arg Leu Ile Gly Asn Tyr Thr 165 170 175 Asp His Ala Val Arg Trp His Asn Thr Gly Leu Glu Arg Val Trp Gly 180 185 190

Pro Asp Ser Arg Asp Trp Ile Arg Tyr Asn Gln Phe Arg Arg Glu Leu 195 200 205

Thr Leu Thr Val Leu Asp Ile Val Ser Leu Phe Pro Asn Tyr Asp Ser 210 215 220

Arg Thr Tyr Pro Ile Arg Thr Ala Ser Gln Leu Thr Arg Glu Ile Tyr 225 230 235 240

Thr Asn Pro Val Leu Glu Asn 245

Gln Gly Ile Glu Gly Ser Ile 260

Asn Ser Ile Thr Ile Tyr Thr 275

Ser Gly His Gln Ile Met Ala 290 295

Phe Thr Phe Pro Leu Tyr Gly 305 310

Phe Asp Gly Ser Phe Arg Gly Ser Ala 250 255

Arg Ser Pro His Leu Met Asp Ile Leu 265 270

Asp Ala His Arg Gly Glu Tyr Tyr Trp 280 285

Ser Pro Val Gly Phe Ser Gly Pro Glu 300

Thr Met Gly Asn Ala Ala Pro Gln Gln 315 320

Arg Ile Val Ala

Thr Leu Tyr Arg 340

Ser Val Leu Asp 355

Pro Ser Ala Val 370

Ile Pro Pro Gln 385

Gln Leu Gly Gln Gly Val 325 330

Arg Pro Phe Asn Ile Gly 345

Gly Thr Glu Phe Ala Tyr 360

Phe Arg Lys Ser Gly Thr 375

Asn Asn Asn Val Pro Pro 390

Tyr Arg Thr Leu Ser Ser 335

Ile Asn Asn Gln Gln Leu 350

Gly Thr Ser Ser Asn Leu 365

Val Asp Ser Leu Asp Glu 380

Arg Gln Gly Phe Ser His 395 400

Arg Leu Ser His Val Ser Met 405

Val Ser Ile Ile Arg Ala Pro 420

Glu Phe Asn Asn Thr Ile Asp 435

Thr Lys Ser Thr Asn Leu Gly 450 455

Gly Phe Thr Gly Gly Asp Ile 465 470

Ser Thr Leu Arg Val Asn Ile 485

Tyr Arg Ser Gly Phe Ser Asn Ser Ser 410 415

Met Phe Ser Trp Val His Arg Ser Ala 425 430

Pro Glu Arg Ile Asn Gln Ile Pro Leu 440 445

Ser Gly Thr Ser Val Val Lys Gly Pro 460

Leu Arg Arg Thr Ser Pro Gly Gln Ile 475 480

Thr Ala Pro Leu Ser Gln Arg Tyr Arg 490 495 Val Arg Ile Arg Tyr Ala Ser Thr 500

Ile Asp Gly Arg Pro Ile Asn Gln 515 520

Thr Asn Leu Gln Phe His Thr Ser 505 510

Gly Asn Phe Ser Ala Thr Met Ser 525

Ser Gly Ser Asn Leu 530

Thr Pro Phe Asn Phe 545

His Val Phe Asn Ser 565

Val Pro Ala Glu Val 580

Gln Ser Gly Ser Phe 535

Ser Asn Gly Ser Ser 550

Gly Asn Glu Val Tyr 570

Thr Phe Glu Ala Glu 585

Arg Thr Val Gly Phe Thr 540

Val Phe Thr Leu Ser Ala 555 560

Ile Asp Arg Ile Glu Phe 575

Tyr Asp Leu Glu Arg 590

<210> SEQ ID NO: 29 <211> Comprimento: 35 67 <212> Tipo: DNA

<213> Organismo: Bacillus thuringiensis <400> Seqüência: 29

atggaggaaa ataatcaaaa tcaatgcata ccttacaatt gtttaagtaa tcctgaagaa 60

gtacttttgg atggagaacg gatatcaact ggtaattcat caattgatat ttctctgtca 120

cttgttcagt ttctggtatc taactttgta ccagggggag gatttttagt tggattaata 180

gattttgtat ggggaatagt tggcccttct caatgggatg catttctagt acaaattgaa 240

caattaatta atgaaagaat agctgaattt gctaggaatg ctgctattgc taatttagaa 300

ggattaggaa acaatttcaa tatatatgtg gaagcattta aagaatggga agaagatcct 360

aataatccag aaaccaggac cagagtaatt gatcgctttc gtatacttga tgggctactt 420

gaaagggaca ttccttcgtt tcgaatttct ggatttgaag tacccctttt atccgtttat 480

gctcaagcgg ccaatctgca tctagctata ttaagagatt ctgtaatttt tggagaaaga 540

tggggattga caacgataaa tgtcaatgaa aactataata gactaattag gcatattgat 600

gaatatgctg atcactgtgc aaatacgtat aatcggggat taaataattt accgaaatct 660

acgtatcaag attggataac atataatcga ttacggagag acttaacatt gactgtatta 720 gatatcgccg ctttctttcc aaactatgac aataggagat atccaattca gccagttggt 780

caactaacaa gggaagttta tacggaccca ttaattaatt ttaatccaca gttacagtct 840

gtagctcaat tacctacttt taacgttatg gagagcagcc gaattagaaa tcctcattta 900

tttgatatat tgaataatct tacaatcttt acggattggt ttagtgttgg acgcaatttt 960

tattggggag gacatcgagt aatatctagc cttataggag gtggtaacat aacatctcct 1020

atatatggaa gagaggcgaa ccaggagcct ccaagatcct ttacttttaa tggaccggta 1080

tttaggactt tatcaaatcc tactttacga ttattacagc aaccttggcc agcgccacca 1140

tttaatttac gtggtgttga aggagtagaa ttttctacac ctacaaatag ctttacgtat 1200

cgaggaagag gtacggttga ttctttaact gaattaccgc ctgaggataa tagtgtgcca 1260

cctcgcgaag gatatagtca tcgtttatgt catgcaactt ttgttcaaag atctggaaca 1320

ccttttttaa caactggtgt agtattttct tggaccgatc gtagtgcaac tcttacaaat 1380

acaattgatc cagagagaat taatcaaata cctttagtga aaggatttag agtttggggg 1440

ggcacctctg tcattacagg accaggattt acaggagggg atatccttcg aagaaatacc 1500

tttggtgatt ttgtatctct acaagtcaat attaattcac caattaccca aagataccgt 1560

ttaagatttc gttacgcttc cagtagggat gcacgagtta tagtattaac aggagcggca 1620

tccacaggag tgggaggcca agttagtgta aatatgcctc ttcagaaaac tatggaaata 1680

ggggagaact taacatctag aacatttaga tataccgatt ttagtaatcc tttttcattt 1740

agagctaatc cagatataat tgggataagt gaacaacctc tatttggtgc aggttctatt 1800

agtagcggtg aactttatat agataaaatt gaaattattc tagcagatgc aacatttgaa 1860

gcagaatctg atttagaaag agcacaaaag gcggtgaatg ccctgtttac ttcttccaat 1920 caaatcgggt taaaaaccga tgtgacggat tatcatattg atcaagtatc caatttagtg 1980

gattgtttat cagatgaatt ttgtctggat gaaaagcgag aattgtccga gaaagtcaaa 2040

catgcgaagc gactcagtga tgagcggaat ttacttcaag atccaaactt cagagggatc 2100

aatagacaac cagaccgtgg ctggagagga agtacagata ttaccatcca aggaggagat 2160

gacgtattca aagagaatta cgtcacacta ccgggtaccg ttgatgagtg ctatccaacg 2220

tatttatatc agaaaataga tgagtcgaaa ttaaaagctt atacccgtta tgaattaaga 2280

gggtatatcg aagatagtca agacttagaa atctatttga tccgttacaa tgcaaaacac 2340

gaaatagtaa atgtgccagg cacgggttcc ttatggccgc tttcagccca aagtccaatc 2400

ggaaagtgtg gagaaccgaa tcgatgcgcg ccacaccttg aatggaatcc tgatctagat 2460

tgttcctgca gagacgggga aaaatgtgca catcattccc atcatttcac cttggatatt 2520

gatgttggat gtacagactt aaatgaggac ttaggtgtat gggtgatatt caagattaag 2580

acgcaagatg gccatgcaag actagggaat ctagagtttc tcgaagagaa accattatta 2640

ggggaagcac tagctcgtgt gaaaagagcg gagaagaagt ggagagacaa acgagagaaa 2700

ctgcagttgg aaacaaatat tgtttataaa gaggcaaaag aatctgtaga tgctttattt 2760

gtaaactctc aatatgatag attacaagtg gatacgaaca tcgcgatgat tcatgcggca 2820

gataaacgcg ttcatagaat ccgggaagcg tatctgccag agttgtctgt gattccaggt 2880

gtcaatgcgg ccattttcga agaattagag ggacgtattt ttacagcgta ttccttatat 2940

gatgcgagaa atgtcattaa aaatggcgat ttcaataatg gcttattatg ctggaacgtg 3000

aaaggtcatg tagatgtaga agagcaaaac aaccaccgtt cggtccttgt tatcccagaa 3060

tgggaggcag aagtgtcaca agaggttcgt gtctgtccag gtcgtggcta tatccttcgt 3120 gtcacagcat ataaagaggg atatggagag ggctgcgtaa cgatccatga gatcgaagac 3180

aatacagacg aactgaaatt cagcaactgt gtagaagagg aagtatatcc aaacaacaca 3240

gtaacgtgta ataattatac tgggactcaa gaagaatatg agggtacgta cacttctcgt 3300

aatcaaggat atgacgaagc ctatggtaat aacccttccg taccagctga ttacgcttca 3360

gtctatgaag aaaaatcgta tacagatgga cgaagagaga atccttgtga atctaacaga 3420

ggctatgggg attacacacc actaccggct ggttatgtaa caaaggattt agagtacttc 3480

ccagagaccg ataaggtatg gattgagatc ggagaaacag aaggaacatt catcgtggat 3540

agcgtggaat tactccttat ggaggaa 3567

<210> SEQ ID NO: 30 <211> Comprimento: 600 <212> Tipo: PRT

<213> Organismo: Bacillus thuringiensis <400> Seqüência: 30

Ile Ser Thr Gly Asn Ser Ser Ile Asp Ile Ser Leu Ser Leu Val Gln 1 5 10 15

Phe Leu Val Ser Asn Phe Val Pro Gly, Gly Gly Phe Leu Val Gly Leu 20 25 30

Ile Asp Phe Val Trp Gly Ile Val Gly Pro Ser Gln Trp Asp Ala Phe 35 40 45

Leu Val Gln Ile Glu Gln Leu Ile Asn Glu Arg Ile Ala Glu Phe Ala 50 55 60

Arg Asn Ala Ala Ile Ala Asn Leu Glu Gly Leu Gly Asn Asn Phe Asn 45 65 70 75 80

Ile Tyr Val Glu Ala Phe Lys Glu Trp Glu Glu Asp Pro Asn Asn Pro

85 90 95

Glu Thr Arg Thr Arg Val Ile Asp Arg Phe Arg Ile Leu Asp Gly Leu 100 105 110

Leu Glu Arg Asp Ile Pro Ser Phe Arg Ile Ser Gly Phe Glu Val Pro 115 120 125

Leu Leu Ser Val Tyr Ala Gln Ala Ala Asn Leu His Leu Ala Ile Leu 130 135 140

Arg Asp Ser Val Ile Phe Gly Glu Arg Trp Gly Leu Thr Thr Ile Asn 145 150 155 160 Val Asn Glu Asn Tyr Asn Arg Leu lie Arg His He Asp Glu Tyr Ala 165 170 175

Asp His Cys Ala Asn Thr Tyr Asn Arg Gly Leu Asn Asn Leu Pro Lys 180 185 190

Ser Thr Tyr Gin Asp Trp lie Thr Tyr Asn Arg Leu Arg Arg Asp Leu 195 200 205

Thr Leu Thr Val Leu Asp lie Ala Ala Phe Phe Pro Asn Tyr Asp Asn 210 215 220

Arg Arg Tyr Pro lie Gin Pro Val Gly Gin Leu Thr Arg Glu Val Tyr 225 230 235 240

Thr Asp Pro Leu lie Asn Phe Asn Pro Gin Leu Gin Ser Val Ala Gin 245 250 255

Leu Pro Thr Phe Asn Val Met Glu Ser Ser Arg lie Arg Asn Pro His 260 265 270

Leu Phe Asp lie Leu Asn Asn Leu Thr lie Phe Thr Asp 'Trp Phe Ser 275 280 285

Val Gly Arg Asn Phe Tyr Trp Gly Gly His Arg Val lie Ser Ser Leu 290 295 300

Tie Gly Gly Gly Asn lie Thr Ser Pro lie Tyr Gly Arg Glu Ala Asn 305 310 315 320

Gin Glu Pro Pro Arg Ser Phe Thr Phe Asn Gly Pro Val Phe Arg Thr 325 330 335

Leu Ser Asn Pro Thr Leu Arg Leu Leu Gin Gin Pro Trp Pro Ala Pro 340 345 350

Pro Phe Asn Leu Arg Gly Val Glu Gly Val Glu Phe Ser Thr Pro Thr 355 360 365

Asn Ser Phe Thr Tyr Arg Gly Arg Gly Thr Val Asp Ser Leu Thr Glu 370 375 380

Leu Pro Pro Glu Asp Asn Ser Val Pro Pro Arg Glu Gly Tyr Ser His 385 390 395 400

Arg Leu Cys His Ala Thr Phe Val Gin Arg Ser Gly Thr Pro Phe Leu 405 410 415

Thr Thr Gly Val Val Phe Ser Trp Thr Asp Arg Ser Ala Thr Leu Thr 420 425 430

Asn Thr lie Asp Pro Glu Arg lie Asn Gin lie Pro Leu Val Lys Gly 435 440 445

Phe Arg Val Trp Gly Gly Thr Ser Val lie Thr Gly Pro Gly Phe Thr 450 455 460

Gly Gly Asp lie Leu Arg Arg Asn Thr Phe Gly Asp Phe Val Ser Leu 465 470 475 480 Gln Val Asn Ile Asn Ser Pro Ile Thr Gln Arg Tyr Arg Leu Arg Phe 485 490 495

Arg Tyr Ala Ser Ser Arg Asp Ala Arg Val Ile Val Leu Thr Gly Ala 500 505 510

Ala Ser Thr Gly Val Gly Gly Gln 515 520

Lys Thr Met Glu Ile Gly Glu Asn 530 535

Thr Asp Phe Ser Asn Pro Phe Ser 545 550

Gly Ile Ser Glu Gln Pro Leu Phe 565

Glu Leu Tyr Ile Asp Lys Ile Glu 580

Glu Ala Glu Ser Asp Leu Glu Arg 595 600

Val Ser Val Asn Met Pro Leu Gln 525

Leu Thr Ser Arg Thr Phe Arg Tyr 540

Phe Arg Ala Asn Pro Asp Ile Ile 555 560

Gly Ala Gly Ser Ile Ser Ser Gly 570 575

Ile Ile Leu Ala Asp Ala Thr Phe 585 590

<210> SEQ ID NO: 31 <211> Comprimento: 3567 <212> Tipo: DNA

<213> Organismo: Bacillus thuringiensis <400> Seqüência: 31

atggaggaga acaaccaaaa ccaatgcatc ccatataact gcttgagtaa ccctgaggaa

gtgctcctcg acggtgagcg tatctctaca ggtaattctt caatcgacat ctccctttcc 120

ttggtgcaat tcctcgtttc aaatttcgtg ccaggaggtg gattccttgt gggattgatc 180

gacttcgttt ggggaatcgt gggcccaagt caatgggatg ctttcctggt gcaaattgaa 240

caacttatca acgagcgtat cgccgagttt gcacgtaacg ctgctattgc aaatctggag 300

ggtctgggga ataacttcaa tatctacgtt gaggctttta aggaatggga ggaagatcct 360

aacaatccag aaacacgtac ccgtgtgatt gaccgtttta gaattttgga tgggctgctt 420

gaaagggata tcccttcatt ccgaatttct ggttttgagg tgcccctcct ttctgtttat 480

gctcaagcag ctaacctcca tttggctatc cttcgtgata gcgtgatctt tggggagcgt 540

tggggactta ctacaatcaa cgtcaacgag aactataacc gactgatcag acacattgat 600 gagtatgccg atcactgcgc taatacctac aatcgcggac ttaacaatct tccaaagtct 660

acctaccagg actggattac ttacaaccgt ttgcgtaggg atcttacact tacagttctt 720

gacattgcag ctttcttccc aaactatgat aaccgaagat accctatcca gccagtggga 780

caacttacac gagaggttta cacagatcca ttgattaact tcaaccctca acttcaatca 840

gttgctcaat tgccaacctt caacgttatg gaaagctctc gtatcaggaa tccccatctg 900

ttcgacattc ttaacaacct cacaatcttt acagattggt tcagtgtcgg ccgtaatttc 960

tattggggag gacaccgtgt catctctagt cttatcggtg gaggtaatat tacctcccca 1020

atttatggga gagaggccaa ccaggaacct ccacgtagtt tcactttcaa tggtccagtc 1080

tttcgtactt tgagcaaccc aactctgagg cttctccaac aaccttggcc agcacctcca 1140

ttcaatcttc gtggagttga aggtgtggag ttttccactc caaccaacag cttcacttat 1200

cgtggtagag gtactgtcga ctccttgacc gaacttccac ctgaggataa ctctgtgcca 1260

ccacgtgagg gttattcaca tcgtttgtgt cacgcaactt ttgttcagag aagtggcaca 1320

ccatttctga ctactggcgt ggtcttcagt tggacagatc gtagcgcaac tcttactaac 1380

acaatcgacc ctgaacgtat caatcaaatc ccactcgtca aaggttttcg tgtttgggga 1440

ggcacatccg ttatcactgg acctggtttc acaggtggcg atatccttcg aaggaacacc 1500

ttcggtgatt tcgtgagtct gcaagttaac atcaatagtc ccatcacaca aagatatcgt 1560

ctcagattca gatacgcatc atctcgtgat gcacgtgtca ttgtgcttac tggtgcagca 1620

tctactggag ttggtggtca agttagtgtc aatatgccac tgcaaaagac tatggaaatc 1680

ggcgagaact tgacatccag aacctttagg tacactgact tttccaatcc tttttcattc 1740

cgtgccaatc ctgacattat tggtatctcc gaacaaccac tttttggagc tggatcaatt 1800 tcatctggag aattgtacat tgacaagatt gagatcattc ttgctgatgc aacctttgaa 1860

gctgagtctg acctggaaag agcacaaaag gccgttaacg ccctcttcac ttcttccaac 1920

cagatcggat tgaaaacaga tgttacagac taccacattg accaggtgtc caatcttgtg 1980

gattgcttgt ctgatgaatt ctgtctcgat gagaagcgag aactctctga aaaggttaag 2040

cacgctaaga gactcagcga tgaacgaaac cttcttcagg acccaaattt caggggaatt 2100

aatagacaac cagatagagg ttggcgtgga tcaacagaca tcactatcca aggtggagac 2160

gatgttttta aggagaacta cgtgaccctt cctggtactg ttgacgagtg ctatcctacc 2220

tacctttacc agaagattga cgaatcaaag ctcaaagcat acactcgtta tgagcttcgt 2280

ggttacatcg aagattcaca agatcttgaa atctacctca tcagatacaa cgctaaacac 2340

gaaatcgtca acgttccagg tactggatct ctgtggccac tctctgcaca gtcacctatt 2400

ggcaagtgcg gtgagccaaa tagatgtgca ccacacctgg agtggaatcc cgatctggac 2460

tgtagttgtc gtgacgggga gaagtgcgct catcacagcc atcacttcac tcttgatatc 2520

gatgttggat gtaccgacct taatgaagac ctgggcgttt gggttatctt caagattaag 2580

40 acccaggatg gtcatgccag acttggtaat ctggagttcc ttgaagagaa acccttgttg 2640

ggtgaagctc tggccagagt caagcgtgct gagaagaaat ggcgtgataa acgtgaaaag 2700

ttgcaattgg agactaacat tgtctacaaa gaggcaaagg agtctgtgga tgccttgttc 2760

gtgaactctc agtacgaccg actccaagtg gataccaaca ttgctatgat tcatgctgct 2820

gacaaacgtg ttcaccgtat cagagaagcc tatctccctg aactgtcagt gatcccagga 2880

gtcaacgctg caatcttcga ggagcttgaa ggtcgaatct tcactgccta ttcactttac 2940

gatgcacgaa acgtgattaa gaatggggat tttaataacg ggttgttgtg ctggaatgtg 3000 aaggggcacg tggatgttga ggaacaaaac aaccaccgtt ccgtgcttgt tattcctgag 3060

tgggaagcag aggtgtctca ggaggttagg gtgtgtcctg gtagaggata tatcttgaga 3120

gtgactgcct ataaggaagg ctatggtgaa ggttgcgtga caatccacga gatcgaagac 3180

aacacagatg agcttaagtt ctctaactgc gttgaggagg aagtctaccc aaacaatacc 3240

gtcacttgta acaattacac aggcacacaa gaagagtacg aaggaaccta cacctcccga 3300

aatcagggtt atgatgaggc ctatggtaat aatccttctg tgcctgccga ttatgcttct 3360

gtttacgagg aaaagtctta cactgatggc cgtcgtgaga acccttgcga atccaaccgt 3420

ggatacggtg attacactcc acttccagca ggatacgtta ctaaggatct tgagtacttt 3480

ccagagactg ataaagtttg gatcgaaatc ggagagactg aaggcacatt catcgtggat

3540

tctgtggagc tcttgctcat ggaggaa 3567

<210> SEQ ID NO: 32 <211> Comprimento: 600 <212> Tipo: PRT

<213> Organismo: Bacillus thuringiensis

<400> Seqüência: 32

Ile Ser Thr Gly Asn Ser Ser Ile Asp Ile Ser Leu Ser Leu Val Gln 15 10 15

Phe Leu Val Ser Asn Phe Val Pro Gly Gly Gly Phe Leu Val Gly Leu 20 25 30

Ile Asp Phe Val Trp Gly Ile Val Gly Pro Ser Gln Trp Asp Ala Phe 35 40 45

Leu Val Gln Ile Glu Gln Leu Ile Asn Glu Arg Ile Ala Glu Phe Ala 50 55 60

Arcf Asn Ala Ala. Ile Ala Asn Leu Glu Gly Leu Gly Asn Asn Plie Asn 65 70 75 80

Ile Tyr Val Glu Ala Phe Lys Glu Trp Glu Glu Asp Pro Asn Asn Pro 85 90 95

Glu Thr Arg Thr Arg Val Ile Asp Arg Phe Arg Ile Leu Asp Gly Leu 100 105 110

Leu Glu Arg Asp Ile Pro Ser Phe Arg Ile Ser Gly Phe Glu Val Pro 115 120 125 Leu Leu Ser Val Tyr Ala Gln Ala Ala Asn Leu His Leu Ala Ile Leu 130 135 140

Arg Asp Ser Val Ile Phe Gly Glu Arg Trp Gly Leu Thr Thr Ile Asn 145 150 155 160

Val Asn Glu Asn Tyr Asn Arg Leu Ile Arg His Ile Asp Glu Tyr Ala 165 170 175

Asp His Cys Ala Asn Thr Tyr Asn Arg Gly Leu Asn Asn Leu Pro Lys 180 185 190

Ser Thr Tyr Gln Asp Trp Ile Thr Tyr Asn Arg Leu Arg Arg Asp Leu 195 200 205

Thr Leu Thr Val Leu Asp Ile Ala Ala Phe Phe Pro Asn Tyr Asp Asn 210 215 220

Arg Arg Tyr Pro Ile Gln Pro Val Gly Gln Leu Thr Arg Glu Val Tyr 225 230 235 240

Thr Asp Pro Leu Ile Asn Phe Asn Pro Gln Leu Gln Ser Val Ala Gln 245 250 255

Leu Pro Thr Phe Asn Val Met Glu Ser Ser Arg Ile Arg Asn Pro His 260 265 270

Leu Phe Asp Ile Leu Asn Asn Leu Thr Ile Phe Thr Asp Trp Phe Ser 275 280 285

Val Gly Arg Asn Phe Tyr Trp Gly Gly His Arg Val Ile Ser Ser Leu 290 295 300

Ile Gly Gly Gly Asn Ile Thr Ser Pro Ile Tyr Gly Arg Glu Ala Asn 305 310 315 320

Gln Glu Pro Pro Arg Ser Phe Thr Phe Asn Gly Pro Val Phe Arg Thr 325 330 335

Leu Ser Asn Pro Thr Leu Arg Leu Leu Gln Gln Pro Trp Pro Ala Pro 340 345 350

Pro Phe Asn Leu Arg Gly Val Glu Gly Val Glu Phe Ser Thr Pro Thr 355 360 365

Asn Ser Phe Thr Tyr Arg Gly Arg Gly Thr Val Asp Ser Leu Thr Glu 370 375 380

Leu Pro Pro Glu Asp Asn Ser Val Pro Pro Arg Glu Gly Tyr Ser His 385 390 395 400

Arg Leu Cys His Ala Thr Phe Val Gln Arg Ser Gly Thr Pro Phe Leu 405 410 415

Thr Thr Gly Val Val Phe Ser Trp Thr Asp Arg Ser Ala Thr Leu Thr 420 425 430

Asn Thr Ile Asp Pro Glu Arg Ile Asn Gln Ile Pro Leu Val Lys Gly 435 440 445 Phe Arg Val Trp Gly Gly Thr Ser Val Ile Thr Gly Pro Gly Phe Thr 450 455 460

Gly Gly Asp Ile Leu Arg Arg Asn Thr Phe Gly Asp Phe Val Ser Leu 5 465 470 475 480

Gln Val Asn Ile Asn Ser Pro Ile Thr Gln Arg Tyr Arg Leu Arg Phe 485 490 495

Arg Tyr Ala Ser Ser Arg Asp Ala Arg Val Ile Val Leu Thr Gly Ala 500 505 510

Ala Ser Thr Gly Val Gly Gly Gln Val Ser Val Asn Met Pro Leu Gln 515 520 525

Lys Thr Met Glu Ile Gly Glu Asn Leu Thr Ser Arg Thr Phe Arg Tyr 530 535 540

Thr Asp Phe Ser Asn Pro Phe Ser Phe Arg Ala Asn Pro Asp Ile Ile 545 550 555 560

Gly Ile Ser Glu Gln Pro Leu Phe Gly Ala Gly Ser Ile Ser Ser Gly 565 570 575

Glu Leu Tyr Ile Asp Lys Ile Glu Ile Ile Leu Ala Asp Ala Thr Phe 580 585 590

Glu Ala Glu Ser Asp Leu Glu Arg 595 600

<210> SEQ ID NO: 33

<211> Comprimento: 3465

<212> Tipo: DNA

<213> Organismo: Bacillus thuringiensis

<400> Seqüência: 33

atggataaca atccgaacat caatgaatgc attccttata attgtttaag taaccctgaa 60

gtagaagtat taggtggaga aagaatagaa actggttaca ccccaatcga tatttccttg 120

tcgctaacgc aatttctttt gagtgaattt gttcccggtg ctggatttgt gttaggacta 180

gttgatataa tatggggaat ttttggtccc tctcaatggg acgcatttct tgtacaaatt 240

gaacagttaa ttaaccaaag aatagaagaa ttcgctagga accaagccat ttctagatta 300

gaaggactaa gcaatcttta tcaaatttac gcagaatctt ttagagagtg ggaagcagat 360

cctactaatc cagcattaag agaagagatg cgtattcaat tcaatgacat gaacagtgcc 420

aggtggggat ttgatgccgc gactatcaat agtcgttata atgatttaac taggcttatt 600

ggcaactata cagatcatgc tgtacgctgg tacaatacgg gattagagcg tgtatgggga 660

ccggattcta gagattggat aagatataat caatttagaa gagaattaac actaactgta 720

ttagatatcg tttctctatt tccgaactat gatagtagaa cgtatccaat tcgaacagtt 780

tcccaattaa caagagaaat ttatacaaac ccagtattag aaaattttga tggtagtttt 840

cgaggctcgg ctcagggcat agaaggaagt attaggagtc cacatttgat ggatatactt 900

aacagtataa ccatctatac ggatgctcat agaggagaat attattggtc agggcatcaa 960

ataatggctt ctcctgtagg gttttcgggg ccagaattca cttttccgct atatggaact 1020

atgggaaatg cagctccaca acaacgtatt gttgctcaac taggtcaggg cgtgtataga 1080

acattatcgt ccactttata tagaagacct tttaatatag ggataaataa tcaacaacta 1140

tctgttcttg acgggacaga atttgcttat ggaacctcct caaatttgcc atccgctgta 1200

tacagaaaaa gcggaacggt agattcgctg gatgaaatac cgccacagaa taacaacgtg 1260

ccacctaggc aaggatttag tcatcgatta agccatgttt caatgtttcg ttcaggcttt 1320

agtaatagta gtgtaagtat aataagagct cctatgttct cttggataca tcgtagtgct 1380

gaatttaata atataattcc ttcatcacaa attacacaaa tacctttaac aaaatctact 1440

aatcttggct ctggaacttc tgtcgttaaa ggaccaggat ttacaggagg agatattctt 1500

cgaagaactt cacctggcca gatttcaacc ttaagagtaa atattactgc accattatca 1560

caaagatatc gggtaagaat tcgctacgct tctaccacaa atttacaatt ccatacatca 1620

tcaagtgtat ttacgttaag tgctcatgtc ttcaattcag gcaatgaagt ttatatagat 1800

cgaattgaat ttgttccggc agaagtaacc tttgaggcag aatatgattt agaaagagca 1860

caaaaggcgg tgaatgagct gtttacttct tccaatcaaa tcgggttaaa aacagatgtg 1920

acggattatc atattgatca agtatccaat ttagttgagt gtttatctga tgaattttgt 1980

ctggatgaaa aaaaagaatt gtccgagaaa gtcaaacatg cgaagcgact tagtgatgag 2040

cggaatttac ttcaagatcc aaactttaga gggatcaata gacaactaga ccgtggctgg 2100

agaggaagta cggatattac catccaagga ggcgatgacg tattcaaaga gaattacgtt 2160

acgctattgg gtacctttga tgagtgctat ccaacgtatt tatatcaaaa aatagatgag 2220

tcgaaattaa aagcctatac ccgttaccaa ttaagagggt atatcgaaga tagtcaagac 2280

ttagaaatct atttaattcg ctacaatgcc aaacacgaaa cagtaaatgt gccaggtacg 2340

ggttccttat ggccgctttc agccccaagt ccaatcggaa aatgtgccca tcattcccat 2400

catttctcct tggacattga tgttggatgt acagacttaa atgaggactt aggtgtatgg 2460

gtgatattca agattaagac gcaagatggc catgcaagac taggaaatct agaatttctc 2520

gaagagaaac cattagtagg agaagcacta gctcgtgtga aaagagcgga gaaaaaatgg 2580

agagacaaac gtgaaaaatt ggaatgggaa acaaatattg tttataaaga ggcaaaagaa 2640

tctgtagatg ctttatttgt aaactctcaa tatgatagat tacaagcgga taccaacatc 2700

gcgatgattc atgcggcaga taaacgcgtt catagcattc gagaagctta tctgcctgag 2760

ctgtctgtga ttccgggtgt caatgcggct atttttgaag aattagaagg gcgtattttc 2820

actgcattct ccctatatga tgcgagaaat gtcattaaaa atggtgattt taataatggc 2880 ttatcctgct ggaacgtgaa agggcatgta gatgtagaag aacaaaacaa ccaccgttcg 2940

gtccttgttg ttccggaatg ggaagcagaa gtgtcacaag aagttcgtgt ctgtccgggt 3000

cgtggctata tccttcgtgt cacagcgtac aaggagggat atggagaagg ttgcgtaacc 3060

attcatgaga tcgagaacaa tacagacgaa ctgaagttta gcaactgtgt agaagaggaa 3120

gtatatccaa acaacacggt aacgtgtaat gattatactg cgactcaaga agaatatgag 3180

ggtacgtaca cttctcgtaa tcgaggatat gacggagcct atgaaagcaa ttcttctgta 3240

ccagctgatt atgcatcagc ctatgaagaa aaagcatata cagatggacg aagagacaat 3300

ccttgtgaat ctaacagagg atatggggat tacacaccac taccagctgg ctatgtgaca 3360

aaagaattag agtacttccc agaaaccgat aaggtatgga ttgagatcgg agaaacggaa 3420

ggaacattca tcgtggacag cgtggaatta cttcttatgg aggaa 3465

<210> SEQ ID NO: 34 <211> Comprimento: 591 <212> Tipo: PRT <213> Organismo: Bacillus thuringiensis <400> Seqüência: 34

Ile Glu Thr Gly Tyr Thr Pro Ile Asp Ile Ser Leu Ser Leu Thr Gln 1 5 10 15

Phe Leu Leu Ser Glu Phe Val Pro Gly Ala Gly Phe Val Leu Gly Leu 20 25 30

Val Asp Ile Ile Trp Gly Ile Phe Gly Pro Ser Gln Trp Asp Ala Phe 35 40 45

Leu Val Gln Ile Glu Gln Leu Ile Asn Gln Arg Ile Glu Glu Phe Ala 50 55 60

Arg Asn Gln Ala Ile Ser Arg Leu Glu Gly Leu Ser Asn Leu Tyr Gln 65 70 75 80

Ile Tyr Ala Glu Ser Phe Arg Glu Trp Glu Ala Asp Pro Thr Asn Pro 85 90 95

Ala Leu Arg Glu Glu Met Arg Ile Gln Phe Asn Asp Met Asn Ser Ala 100 105 110

Leu Thr Thr Ala Ile Pro Leu Phe Ala Val Gln Asn Tyr Gln Val Pro 115 120 125 Leu Leu Ser Val Tyr Val Gln Ala Ala Asn Leu His Leu Ser Val Leu 130 135 140

Arg Asp Val Ser Val Phe Gly Gln Arg Trp Gly Phe Asp Ala Ala Thr 145 150 155 160

Ile Asn Seir Arg Tyr Asn Asp Leu Thr Arg Leu Jle Gly Asn Tyr Thr 165 170 175

Asp His Ala Val Arg Trp Tyr Asn Thr Gly Leu Glu Arg Val Trp Gly 180 185 190

Pro Asp Ser Arg Asp Trp Ile Arg Tyr Asn Gln Phe Arg Arg Glu Leu 195 200 205

Thr Leu Thr Val Leu Asp Ile Val Ser Leu Phe Pro Asn Tyr Asp Ser 210 215 220

Arg Thr Tyr Pro Ile Arg Thr Val Ser Gln Leu Thr Arg Glu Ile Tyr 225 230 235 240

Thr Asn Pro Val Leu Glu Asn Phe Asp Gly Ser Phe Arg Gly Ser Ala 245 250 255

Gln Gly Ile Glu Gly Ser Ile Arg Ser Pro His Leu Met Asp Ile Leu 260 265 270

Asn Ser Ile Thr Ile Tyr Thr Asp Ala His Arg Gly Glu Tyr Tyr Trp 275 280 285

Ser Gly His Gln Ile Met Ala Ser Pro Val Gly Phe Ser Gly Pro Glu 290 295 300

Phe Thr Phe Pro Leu Tyr Gly Thr Met Gly Asn Ala Ala Pro Gln Gln 305 310 315 320

Arg Ile Val Ala Gln Leu Gly Gln Gly Val Tyr Arg Thr Leu Ser Ser 325 330 335

Thr Leu Tyr Arg Arg Pro Phe Asn Ile Gly Ile Asn Asn Gln Gln Leu 340 345 350

Ser Val Leu Asp Gly Thr Glu Phe Ala Tyr Gly Thr Ser Ser Asn Leu 355 360 365

Pro Ser Ala Val Tyr Arg Lys Ser Gly Thr Val Asp Ser Leu Asp Glu 370 375 380

Ile Pro Pro Gln Asn Asn Asn Val Pro Pro Arg Gln Gly Phe Ser His 385 390 395 400

Arg Leu Ser His Val Ser Met Phe Arg Ser Gly Phe Ser Asn Ser Ser 405 410 415

Val Ser Ile Ile Arg Ala Pro Met Phe Ser Trp Ile His Arg Ser Ala 420 425 430

Glu Phe Asn Asn Ile Ile Pro Ser Ser Gln Ile Thr Gln Ile Pro Leu 435 440 445 Thr Lys Ser Thr Asn Leu Gly Ser Gly Thr Ser Val Val Lys Gly Pro 450 455 460

Gly Phe Thr Gly Gly Asp Ile Leu Arg Arg Thr Ser Pro Gly Gln Ile 465 470 475 480

Ser Thr Leu Arg Val Asn Ile Thr Ala Pro Leu Ser Gln Arg Tyr Arg 485 490 495

Val Arg Ile Arg Tyr Ala Ser Thr Thr Asn Leu Gln Phe His Thr Ser 500 505 510

Ile Asp Gly Arg Pro Ile Asn Gln Gly Asn Phe Ser Ala Thr Met Ser 515 520 525

Ser Gly Ser Asn Leu Gln Ser Gly Ser Phe Arg Thr Val Gly Phe Thr 530 535 540

Thr Pro Phe Asn Phe Ser Asn Gly Ser Ser Val Phe Thr Leu Ser Ala 545 550 555 560

His Val Phe Asn Ser Gly Asn Glu Val Tyr Ile Asp Arg Ile Glu Phe 565 570 575

Val Pro Ala Glu Val Thr Phe Glu Ala Glu Tyr Asp Leu Glu Arg 580 585 590

<210> SEQ ID NO: 35 <211> Comprimento: 633 <212> Tipo: PRT <213> Organismo: Bacillus thuringiensis

<400> Seqüência: 35 Met Gly Asn Ser Val Leu Asn Ser Gly Arg Thr Thr Ile Cys Asp Ala 1 5 10 15

Tyr Asn Val Ala Ala His Asp Pro Phe Ser Phe Gln His Lys Ser Leu 20 25 30

Asp Thr Val Gln Lys Glu Trp Thr Glu Trp Lys Lys Asn Asn His Ser 35 40 45

Leu Tyr Leu Asp Pro Ile Val Gly Thr Val Ala Ser Phe Leu Leu Lys 45 50 55 60

Lys Val Gly Ser Leu Val Gly Lys Arg Ile Leu Ser Glu Leu Arg Asn 65 70 75 80

Leu Ile Phe Pro Ser Gly Ser Thr Asn Leu Met Gln Asp Ile Leu Arg 85 90 95

Glu Thr Glu Lys Phe Leu Asn Gln Arg Leu Asn Thr Asp Thr Leu Ala 100 105 110

Arg Val Asn Ala Glu Leu Thr Gly Leu Gln Ala Asn Val Glu Glu Phe 115 120 125

Asn Arg Gln Val Asp Asn Phe Leu Asn Pro Asn Arg Asn Ala Val Pro 130 135 140 Leu Ser Ile Thr Ser Ser Val Asn Thr Met Gln Gln Leu Phe Leu Asn 145 150 155 160

Arg Leu Pro Gln Phe Gln Met Gln Gly Tyr Gln Leu Leu Leu Leu Pro 165 170 175

Leu Phe Ala Gln Ala Ala Asn Leu His Leu Ser Phe Ile Arg Asp Val 180 185 190

Ile Leu Asn Ala Asp Glu Trp Gly Ile Ser Ala Ala Thr Leu Arg Thr 195 200 205

Tyr Arg Asp Tyr Leu Lys Asn Tyr Thr Arg Asp Tyr Ser Asn Tyr Cys 210 215 220

Ile Asn Thr Tyr Gln Ser Ala Phe Lys Gly Leu Asn Thr Arg Leu His 225 230 235 240

Asp Met Leu Glu Phe Arg Thr Tyr Met Phe Leu Asn Val Phe Glu Tyr

245 250 255

Val Ser Ile Trp Ser Leu Phe Lys Tyr Gln Ser Leu Leu Val Ser Ser 260 265 270

Gly Ala Asn Leu Tyr Ala Ser Gly Ser Gly Pro Gln Gln Thr Gln Ser 275 280 285

Phe Thr Ser Gln Asp Trp Pro Phe Leu Tyr Ser Leu Phe Gln Val Asn 290 295 300

Ser Asn Tyr Val Leu Asn Gly Phe Ser Gly Ala Arg Leu Ser Asn Thr 305 310 315 320

Phe Pro Asn Ile Val Gly Leu Pro Gly Ser Thr Thr Thr His Ala Leu 325 330 335

Leu Ala Ala Arg Val Asn Tyr Ser Gly Gly Ile Ser Ser Gly Asp Ile 340 345 350

Gly Ala Ser Pro Phe Asn Gln Asn Phe Asn Cys Ser Thr Phe Leu Pro 355 360 365 45 Pro Leu Leu Thr Pro Phe Val Arg Ser Trp Leu Asp Ser Gly Ser Asp 370 375 380

Arg Glu Gly Val Ala Thr Val Thr Asn Trp Gln Thr Glu Ser Phe Glu 385 390 395 400

Thr Thr Leu Gly Leu Arg Ser Gly Ala Phe Thr Ala Arg Gly Asn Ser 405 410 415

Asn Tyr Phe Pro Asp Tyr Phe Ile Arg Asn Ile Ser Gly Val Pro Leu 420 425 430

Val Val Arg Asn Glu Asp Leu Arg Arg Pro Leu His Tyr Asn Glu Ile 435 440 445

60 Arg Asn Ile Ala Ser Pro Ser Gly Thr Pro Gly Gly Ala Arg Ala Tyr 450 455 460 Met Val Ser Val His Asn Arg Lys Asn Asn Ile His Ala Val His Glu 465 470 475 480

Asn Gly Ser Met Ile His Leu Ala Pro Asn Asp Tyr Thr Gly Phe Thr 485 490 495

Ile Ser Pro Ile His Ala Thr Gln Val Asn Asn Gln Thr Arg Thr Phe 500 505 510

Ile Ser Glu Lys Phe Gly Asn Gln Gly Asp Ser Leu Arg Phe Glu Gln 515 520 525

Asn Asn Thr Thr Ala Arg Tyr Thr Leu Arg Gly Asn Gly Asn Ser Tyr 530 535 540

Asn Leu Tyr Leu Arg Val Ser Ser Ile Gly Asn Ser Thr Ile Arg Val 545 550 555 560

Thr Ile Asn Gly Arg Val Tyr Thr Ala Thr Asn Val Asn Thr Thr Thr

565 570 575

Asn Asn Asp Gly Val Asn Asp Asn Gly Ala Arg Phe Ser Asp Ile Asn 580 585 590

Ile Gly Asn Val Val Ala Ser Ser Asn Ser Asp Val Pro Leu Asp Ile 595 600 605

Asn Val Thr Leu Asn Ser Gly Thr Gln Phe Asp Leu Met Asn Ile Met 610 615 620

Leu Val Pro Thr Asn Ile Ser Pro Leu 625 630

<210> SEQ ID NO: 36 <211> Comprimento: 592 <212> Tipo: PRT

<213> Organismo: Bacillus thuringiensis <400> Seqüência: 36

Ile Glu Thr Gly Tyr Thr Pro Ile Asp Ile Ser Leu Ser Leu Thr Gln 15 10 15

45 Phe Leu Leu Ser Glu Phe Val Pro Gly Ala Gly Phe Val Leu Gly Leu 20 25 30

Val Asp Ile Ile Trp Gly Ile Phe Gly Pro Ser Gln Trp Asp Ala Phe 35 40 45

Leu Val Gln Ile Glu Gln Leu Ile Asn Gln Arg Ile Glu Glu Phe Ala 50 55 60

Arg Asn Gln Ala Ile Ser Arg Leu Glu Gly Leu Ser Asn Leu Tyr Gln 65 70 75 80

Ile Tyr Ala Glu Ser Phe Arg Glu Trp Glu Ala Asp Pro Thr Asn Pro 85 90 95

60 Ala Leu Arg Glu Glu Met Arg Ile Gln Phe Asn Asp Met Asn Ser Ala 100 105 110 Leu Thr Thr Ala Ile Pro Leu Phe Ala Val Gln Asn Tyr Gln Val Pro 115 120 125

Leu Leu Ser Val Tyr Val Gln Ala Ala Asn Leu His Leu Ser Val Leu 130 135 140

Arg Asp Val Ser Val Phe Gly Gln Arg Trp Gly Phe Asp Ala Ala Thr 145 150 155 160

Ile Asn Ser Arg Tyr Asn Asp Leu Thr Arg Leu Ile Gly Asn Tyr Thr 165 170 175

Asp Tyr Ala Val Arg Trp Tyr Asn Thr Gly Leu Glu Arg Val Trp Gly 180 185 190

Pro Asp Ser Arg Asp Trp Val Arg Tyr Asn Gln Phe Arg Arg Glu Leu 195 200 205

Thr Leu Thr Val Leu Asp Ile Val Ala Leu Phe Pro Asn Tyr Asp Ser 210 215 220

Arg Arg Tyr Pro Ile Arg Thr Val Ser Gln Leu Thr Arg Glu Ile Tyr

225 230 235 240

Thr Asn Pro Val Leu Glu Asn Phe Asp Gly Ser Phe Arg Gly Ser Ala

245 250 255

Gln Gly Ile Glu Arg Ser Ile Arg Ser Pro His Leu Met Asp Ile Leu 260 265 270

Asn Ser Ile Thr Ile Tyr Thr Asp Ala His Arg Gly Tyr Tyr Tyr Trp 275 280 285

Ser Gly His Gln Ile Met Ala Ser Pro Val Gly Phe Ser Gly Pro Glu 290 295 300

Phe Thr Phe Pro Leu Tyr Gly Thr Met Gly Asn Ala Ala Pro Gln Gln

305 310 315 320

Arg Ile Val Ala Gln Leu Gly Gln Gly Val Tyr Arg Thr Leu Ser Ser

325 330 335

Thr Leu Tyr Arg Arg Pro Phe Asn Ile Gly Ile Asn Asn Gln Gln Leu 340 345 350

Ser Val Leu Asp Gly Thr Glu Phe Ala Tyr Gly Thr Ser Ser Asn Leu 355 360 365

Pro Ser Ala Val Tyr Arg Lys Ser Gly Thr Val Asp Ser Leu Asp Glu 370 375 380

Ile Pro Pro Gln Asn Asn Asn Val Pro Pro Arg Gln Gly Phe Ser His 385 390 395 400

Arg Leu Ser His Val Ser Met Phe Arg Ser Gly Phe Ser Asn Ser Ser 405 410 415

Val Ser Ile Ile Arg Ala Pro Met Phe Ser Trp Ile His Arg Ser Ala 420 425 430 Glu Phe Asn Asn Ile Ile Ala Ser Asp Ser Ile Thr Gln Ile Pro Ala 435 440 445

Val Lys Gly Asn Phe Leu Phe Asn Gly Ser Val Ile Ser Gly Pro Gly 450 455 460

Phe Thr Gly Gly Asp Leu Val Arg Leu Asn Ser Ser Gly Asn Asn Ile 465 470 475 480

Gln Asn Arg Gly Tyr Ile Glu Val Pro Ile His Phe Pro Ser Thr Ser 485 490 495

Thr Arg Tyr Arg Val Arg Val Arg Tyr Ala Ser Val Thr Pro Ile His 500 505 510

Leu Asn Val Asn Trp Gly Asn Ser Ser Ile Phe Ser Asn Thr Val Pro 515 520 525 Ala Thr Ala Thr Ser Leu Asp Asn Leu Gln Ser Ser Asp Phe Gly Tyr 530 535 540

Phe Glu Ser Ala Asn Ala Phe Thr Ser Ser Leu Gly Asn Ile Val Gly 545 550 555 560

Val Arg Asn Phe Ser Gly Thr Ala Gly Val Ile Ile Asp Arg Phe Glu 565 570 575

Phe Ile Pro Val Thr Ala Thr Leu Glu Ala Glu Tyr Asn Leu Glu Arg 580 585 590

Claims

1. Molécula de ácido nucleico isolada caracterizada por compreender uma seqüência de nucleotideos que é pelo menos 99% homóloga à seqüência completa de qualquer uma das SEQ ID NOS: 1, 3, 5, 7, 9, 11, 13, 15, 17, 19, 21, -23, 25, 27 ou complementares a estas, onde dita molécula de ácido nucleico codifica um primeiro polipeptideo, dito primeiro polipeptideo apresentando atividade inseticida.

2. Molécula de ácido nucleico de acordo com a reivindicação 1, caracterizada por compreender a seqüência de nucleotideos de qualquer uma das SEQ ID NOS: -1, 3, 5, 7, 9, 11, 13, 15, 17, 19, 21, 23, 25, 27, ou complementares a estas.

3. Molécula de ácido nucleico de acordo com a reivindicação 1, caracterizada por compreender ainda nucleotideos adicionais, ditos nucleotideos adicionais codificando aminoácidos adicionais, ditos aminoácidos adicionais expressos em conjunto com dito primeiro polipeptideo para criar uma pro - toxina.

4. Molécula de ácido nucleico de acordo com a reivindicação 3, caracterizada pelos ditos aminoácidos adicionais serem separados do dito primeiro polipeptideo em um inseto.

5. Vetor caracterizado por compreender pelo menos uma molécula de ácido nucleico de acordo com a reivindicação -1.

6. Cassete de expressão caracterizado por compreender pelo menos um nucleotídeo de acordo com a reivindicação 1 ligado operacionalmente a um promotor, onde o polinucleotídeo está em uma orientação senso.

7. Célula hospedeira caracterizada por ser na qual é inserido pelo menos um cassete de expressão de acordo com a reivindicação 6.

8. Célula hospedeira de acordo com a reivindicação 7 caracterizada por ser uma célula de planta.

9. Planta transgênica caracterizada por compreender pelo menos um cassete de expressão de acordo com a reivindicação 6.

10. Planta transgênica de acordo com a reivindicação 9, caracterizada por ser arroz, trigo, cana-de-açúcar, sorgo, milho, algodão, soja, alfafa, espinafre, tabaco, tomate, batata, girassol, canola, cevada ou milhete.

11. Semente caracterizada por ser da planta transgênica de acordo com a reivindicação 9, onde a semente inclui pelo menos um nucleotídeo de acordo com a reivindicação -1.

12. Semente de acordo com a reivindicação 11, caracterizada por ser arroz, trigo, cana-de-açúcar, sorgo, milho, algodão, soja, alfafa, espinafre, tabaco, tomate, batata, girassol, canola, cevada ou milhete.

13. Molécula de ácido nucleico caracterizada por compreender uma seqüência nucleotídica que sofreu embaralhamento e que é pelo menos 90% homóloga à seqüência completa de nucleotídeos de qualquer uma das SEQ ID NOS: 1, 3, 5, 7, 9, 11, 13, 15, 17, 19, 21, 23, -25, 27 ou complementares a estas, onde dita molécula de ácido nucleico codifica um primeiro polipeptídeo, dito primeiro polipeptídeo apresentando atividade inseticida.

14. Molécula de ácido nucleico de acordo com a reivindicação 13, caracterizada por compreender a seqüência de nucleotídeos de qualquer uma das SEQ ID NOS: -1, 3, 5, 7, 9, 11, 13, 15, 17, 19, 21, 23, 25, 27 ou complementares a estas.

15. Molécula de ácido nucleico de acordo com a reivindicação 13 caracterizada por compreender ainda nucleotídeos adicionais, ditos nucleotídeos adicionais codificando aminoácidos adicionais, ditos aminoácidos adicionais expressos em conjunto com dito primeiro polipeptídeo para criar uma pro - toxina.

16. Molécula de ácido nucleico de acordo com a reivindicação 15, caracterizada por ditos aminoácidos adicionais serem separados do dito primeiro polipeptideo em um inseto.

17. Vetor caracterizado por compreender a molécula de ácido nucleico de acordo com a reivindicação 13.

18. Polipeptideo caracterizado por compreender uma primeira seqüência polipeptídica que é pelo menos 99% homóloga à seqüência polipeptídica completa de qualquer uma das SEQ ID NOS: 2, 4, 6, 8, 10, 12, 14, 16, 18, 20, -22, 24, 26, ou 28.

19. Polipeptideo de acordo com a reivindicação 18 caracterizado por compreender ainda aminoácidos adicionais, ditos aminoácidos adicionais expressos em conjunto com dito primeiro polipeptideo para criar uma pro - toxina.

20. Polipeptideo de acordo com a reivindicação 19, caracterizado por ditos aminoácidos adicionais serem separados do dito primeiro polipeptideo em um inseto.

21. Polipeptideo caracterizado por compreender uma primeira seqüência polipeptídica que é pelo menos 90% homóloga à seqüência polipeptídica de qualquer uma das SEQ ID NOS: 2, 4, 6, 8, 10, 12, 14, 16, 18, 20, 22, 24, -26, ou 28, onde dito polipeptideo apresenta atividade inseticida.

22. Polipeptídeo de acordo com a reivindicação 21 caracterizado por compreender ainda aminoácidos adicionais, ditos aminoácidos adicionais expressos em conjunto com dito primeiro polipeptídeo para criar uma pro - toxina.

23. Polipeptídeo de acordo com a reivindicação 22 caracterizado por ditos aminoácidos adicionais serem separados do dito primeiro polipeptídeo em um inseto.

24. Planta transgênica caracterizada por compreender um transgene que expressa pelo menos uma de a. molécula de ácido nucleico de qualquer uma das SEQ ID NOS: 1, 3, 5, 7, 9, 11, 13, 15, 17, 19, 21, 23, 25, 27 ou complementares a estas, ou b. polipeptídeo de qualquer uma das SEQ ID NOS: 2,4, 6, 8, 10, 12, 14, 16, 18, 20, 22, 24, 26, ou 28, onde a planta transgênica apresenta resistência aumentada a um inseto-praga lepidóptero quando comparada a uma planta que não é transgênica.

25. Planta transgênica de acordo com a reivindicação 24, caracterizada por ser selecionada do grupo consistindo de milho, soja, arroz, canola, batata, algodão, e girassol.

26. Método para produzir uma planta com resistência a insetos aumentada, caracterizado por compreender: a. introduzir em células de planta um construto compreendendo um polinucleotídeo que codifica um polipeptídeo inseticida ligado operacionalmente a um promotor funcional em células de planta para fornecer células de planta transformadas, e onde o polinucleotídeo que codifica o polipeptídeo inseticida é selecionado do grupo consistindo de: i. polinucleotídeo que codifica o polipeptídeo das SEQ ID NOS: 2, 4, 6, 8, 10, -12, 14, 16, 18, 20, 22, 24, 26, ou 28; ii. polinucleotídeo compreendendo SEQ ID NOS: -1, 3, 5, 7, 9, 11, 13, 15, 17, 19, 21, 23, 25, ou 27; iii. polinucleotídeo isolado degenerado de qualquer um de (i) a (iii) como resultado de código genético. iv. polinucleotídeo complementar ao polinucleotídeo de qualquer um de (i) a (iii) ; b. regenerar uma planta transgênica a partir das ditas células de planta transformadas, onde dito polipeptídeo de resistência a inseto quando expresso em níveis suficientes para tal aumenta a resistência a insetos em ditas plantas transgênicas quando comparadas a uma planta controle.

27. Método de acordo com a reivindicação 26, caracterizado por dita atividade inseticida ser aumentada quando comparada com uma planta controle, onde a planta controle não contém o polinucleotídeo que codifica o polipeptídeo de resistência a inseto.

28. Método de acordo com a reivindicação 26, caracterizado por dito polinucleotídeo que codifica o polipeptídeo ser expresso constitutivamente.

29. Método de acordo com a reivindicação 26, caracterizado pela planta ser uma planta dicotiledônea.

30. Método de acordo com a reivindicação 26, caracterizado pela planta ser uma planta monocotiledônea.

31. Polinucleotídeo isolado caracterizado por compreender um membro selecionado do grupo consistindo de: a. polinucleotídeo que codifica qualquer dos polipeptídeos apresentados nas SEQ ID NOS: 2, 4, 6,8, 10, 12, 14, 16, 18, 20, 22, 24, 26, ou 28; b. polinucleotídeo compreendendo qualquer das seqüências das SEQ ID NOS: 1, 3, 5, 7, 9, 11, 13,15, 17, 19, 21, 23, 25, ou 27; c. polinucleotídeo compreendendo pelo menos 3 0 nucleotídeos em comprimento que hibridiza sob condições estringentes a um polinucleotídeo de a. ou b., onde as condições incluem hibridização em 40 a45% de formamida, NaCl 1M, 1% de SDS a 37 2C e lavagem em 0,5x a Ix SSC a 55 a 60eC; d. polinucleotídeo misturado apresentando pelo menos 90% de identidade de seqüência a qualquer das seqüências das SEQ ID NOS: 1, 3, 5, 7, 9, 11, 13,15, 17, 19, 21, 23, 25, ou 27, onde a % de identidade de seqüência é baseada na região codificante completa e é determinada por BLAST 2.0 sob parâmetros padrão; e. polinucleotídeo apresentando pelo menos 99% de identidade de seqüência a qualquer das seqüências das SEQ ID NOS: 1, 3, 5, 7, 9, 11, 13, 15, 17, 19, -21, 23, 25, ou 27, onde a % de identidade de seqüência é baseada na região codificante completa e é determinada por BLAST 2.0 sob parâmetros padrão; f. polinucleotídeo isolado degenerado de qualquer um de a. a e. como resultado do código genético; e g. polinucleotídeo complementar a um polinucleotídeo de qualquer um de (a) a (c).

32. Cassete de expressão recombinante caracterizado por compreender um polinucleotídeo ligado operacionalmente a um promotor, onde o polinucleotídeo codifica o polipeptídeo de acordo com a reivindicação 31.

33. Polipeptídeo isolado selecionado do grupo consistindo de: a. polipeptídeo isolado compreendendo qualquer uma das SEQ ID NOS: 2, 4, 6, 8, 10, 12, 14, 16, 18, 20, -22, 24, 26, ou 28, dito polipeptídeo apresentando atividade de resistência a insetos; b. polipeptídeo que é pelo menos 99% idêntico à seqüência de aminoácidos de qualquer uma das SEQ ID NOS: 2, 4, 6, 8, 10, 12, 14, 16, 18, 20, 22, 24, 26, ou 28, dito polipeptídeo apresentando atividade de resistência a insetos; c. polipeptídeo misturado que é pelo menos 90% idêntico à seqüência de aminoácidos de qualquer uma das SEQ ID NOS: 2, 4, 6, 8, 10, 12, 14, 16, 18, 20, -22, 24, 26, ou 28, dito polipeptídeo misturado apresentando atividade de resistência a insetos; d. polipeptídeo que é codificado por uma molécula de ácido nucleico compreendendo uma seqüência nucleotídica que é pelo menos 99% idêntica a qualquer uma das SEQ ID NOS: 1, 3, 5, 7, 9, 11, 13, -15, 17, 19, 21, 23, 25, ou 27, ou complementar a estas, dito polipeptídeo apresentando atividade de resistência a insetos; e. polipeptídeo misturado que é codificado por uma molécula de ácido nucleico compreendendo uma seqüência nucleotídica misturada que é pelo menos -90% idêntica a qualquer uma das SEQ ID NOS: 1, 3, 5, -7, 9, 11, 13, 15, 17, 19, 21, 23, 25, ou 27, ou complementar a estas, dito polipeptídeo misturado apresentando atividade de resistência a insetos;

34. Célula hospedeira transformada caracterizada por compreender o polipeptídeo isolado de acordo com a reivindicação 33.

35. Célula hospedeira de acordo com a reivindicação 33, caracterizada por ser uma célula de planta transformada.

36. Célula de planta de acordo com a reivindicação 33, caracterizada por ser uma célula de arroz, trigo, cana- de-açúcar, sorgo, milho, algodão, soja, alfafa, espinafre, tabaco, tomate, batata, girassol, canola, cevada ou milhete.

37. Planta transformada caracterizada por ser regenerada a partir da célula de planta de acordo com a reivindicação 35.

38. Planta de acordo com a reivindicação 37, caracterizada pela planta ser arroz, trigo, cana-de- açúcar, sorgo, milho, algodão, soja, alfafa, espinafre, tabaco, tomate, batata, girassol, canola, cevada ou milhete.

39. Semente transformada caracterizada por ser da planta de acordo com a reivindicação 37, onde a semente inclui pelo menos um nucleotideo de acordo com a reivindicação 33 .