BRPI0619126A2 - derivados espirocìclicos, composição farmacêutica e usos dos mesmos - Google Patents

Abstract

DERIVADOS ESPIROCìCLICOS, COMPOSIçãO FARMACêUTICA E USOS DOS MESMOS. A invenção fornece compostos de fórmula (I): onde: m é 0,1 ou 2; X é O,S ou N-CN; R é F, CI ou CN; A é um grupo 03-6 cicloalquileno opcionalmente substituído com um grupo C~ 1-4~ alquil, e B é uma ligação simples ou um grupo C~ 1-2~ alquileno; ou um sal farmaceuticamente aceitável, solvato, polimorfo ou pró-droga do mesmo. Os compostos são inibidores de PDE7 e têm inúmeras aplicações terapêuticas, particularmente no tratamento da dor, especialmente dor neuropática.

Description

Relatório Descritivo da Patente de Invenção para "DERIVADOS ESPIROCÍCLICOS".

Campo da Invenção

Esta invenção refere-se a derivados espirocíclicos, e a proces- sos para a preparação de intermediários usados na preparação de composi- ções contendo tais derivados e aos usos de tais derivados.

Os derivados espirocíclicos da presente invenção são inibidores de PDE7 e têm inúmeras aplicações terapêuticas, particularmente no trata- mento de dor, especialmente dor neuropática.

Fundamentos da Invenção

Fosfodiesterases (PDEs) são uma família de enzimas que afe- tam vários processos de sinalização celular pelo processo de hidrólise das segundas moléculas mensageiras cAMP e cGMP para dar os 5-monofosfato nucleotídeos inativos correspondentes e dessa forma regular seu nível fisio- lógico. Os mensageiros secundários cAMP e cGMP são responsáveis pela regulação de numerosos processos intracelulares. Existem pelo menos 11 famílias de PDEs, algumas delas (PDE3, 4, 7, 8) sendo específicas para cAMP, e outras para cGMP (PDE5, 6, e 9).

PDE7 é um membro da família de PDE e compreende 2 mem- bros da subclasse PDE7 AeB O mRNA de PDE7 é expresso em vários tecidos e tipos de células que são importantes na patogênese de várias do- enças tais como distúrbios relacionados a células T. Em particular PDE7A e suas variantes de remoção ("splice variants") são supra-regulados em célu- las T ativadas (L. Li. C. Yee & J.A. Beavo. Science (1999). 283. 848-851). e em linfócitos B (R. Lee, S. Wolda, E. Moon, J. Esselstyn, C. Hertel & A. Ler- ner, CeH Signal (2002), 14, 277-284), doença autoimune (L. Li et al.. aci- ma), e doença das vias aéreas (S.J. Smith et al., Am. J. Physiol. Lung. Cell. Mol. Physiol. (2003), 284, L279-L289). Consequentemente espera-se que inibidores seletivos de PDE7 tenham ampla aplicação como imunossupres- 30 sores e como tratamento para doenças respiratórias, por exemplo doença pulmonar obstrutiva crônica e asma (N.A. Glavas, C. Ostenson, J.B. Schae- fer, V. Vasta & J.A. Beavo. PAMS (2001), 98, 6319-6324). Estudos em rato mostraram que mRNA de PDE7A mostrou-se amplamente distribuído no cérebro de rato em populações de células neuro- nais e não-neuronais. Os níveis mais altos são observados no bulbo olfató- rio, tubérculo olfatório, hipocampo, cerebelo, núcleo habenular mediai, glân- dula pineal, área postrema, e plexo coróideo. mRNA de PDE7A também é amplamente detectado em outros tecidos não cerebrais. Estes resultados são consistentes com o fato de PDE7A estar envolvido na regulação da si- nalização de cAMP em muitas funções cerebrais e sugere que o PDE7A poderia ter um efeito sobre a memória, depressão, e êmese (X. Miró, S. Pé- rez-Torres, J.M. Palacios, P. Puigdomènech, G. Mengod, Synapse (2001), 40, 201-214). Também foi sugerida uma ligação com o mal de Alzheimer (S. Pérez Torres et al., Experimental Neurology, (2003) 182, 322-334). Adicio- nalmente o PDE7 também está envolvido em distúrbios de fertilidade (WO 01/83772) e leucemia (R. Lee etal., Cell Signalling (2002) 14, 277-284).

PDE7A foi isolado de levedura (T. Michaeli et al., J. Biol. Chem. (1993) 268, 12925=12932), do homem (P. Han, Z. Xiaoyan & M. Tamar, J. Biol. Chem. (1997) 272, 16152-16157), de camundongo (T. Bloom e J.A. Beavo, Proc. Natl. Acad. Sei. USA (1996), 93, 14188-14192) e a sgpra- regulação dos níveis de PDE7A é observada em linfócitos T humanos (M. Ichimura e H. Kase. Biochem. Biophys. Res. Commun. (1993), 193, 985- 990).

PDE7B, o segundo membro da família de PDE7, tem 70% de homologia de aminoácidos com o PDE7A no domínio catalítico c-terminal (o domínio N-terminal é o domínio regulador contendo o sítio de fosforilação que é conservado em toda a família de PDE). PDE7B é específico para cAMP e foi clonado fontes de camundongo (número de acesso - AJ251858) e fontes humanas (número de acesso - AJ251860) (C. Gardner, N. Robas, D. Cawkill & M. Fidock, Biochem. Biophys. Res. Commun. (2000), 272, 186- 192). Foi mostrado que ele é expresso em uma ampla variedade de tecidos: no núcleo caudado, no putâmen e no lobo occipital do cérebro e periferica- mente no coração, no ovário e na glândula pituitária, no rim e no fígado, no intestino delgado e no timo, adicionalmente no músculo esquelético, no có- lon, na bexiga, no útero, na próstata, no estômago, na glândula adrenal e na glândula tireóide. O PDE7B também mostrou discriminar entre vários inibido- res gerais de PDE (J.M. Hetman, S.H. Soderling, N.A. Glavas & J.A. Beavo, PNAS (2000), 97, 472-476). No entanto, muitos inibidores tradicionais de PDE, tais como zaprinast, rolipram e milrinona, não inibem especificamente o PDE7B.

Inibidores de PDE7 já são conhecidos e também seu uso no tratamento de várias doenças relacionadas ao PDE7. Por exemplo, o docu- mento WO 02/074754 descreve compostos de fórmulas:

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e seu uso no tratamento de distúrbios relacionados ao PDE7, tais como do- enças relacionadas a células T, doenças autoimunes, osteoartrite, esclerose múltipla, osteoporose, doença pulmonar obstrutiva crônica, asma, câncer, síndrome da imunodeficiência adquirida, alergia, ou doença do intestino in- flamado. la:

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O documento WO 2004/026818 descreve compostos de fórmu-

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e seu uso no tratamento de distúrbios relacionados ao PDE7.

O documento WO 2006/092691 descreve o uso de inibidores de PDE7 no tratamento de dor neuropática.

Descobrimos surpreendentemente que uma classe de compos- tos que enquadram na descrição geral do documento WO 02/074754, mas não se encontram especificamente descritos nem exemplificados naquele documento, apresentam propriedades farmacocinéticas inesperadamente superiores quando comparados com o composto mais parecido exemplifica- do no documento WO 02/074754. Espera-se que estes compostos apresen- tem depuração reduzida do corpo e tenham potencial para obter um efeito terapêutico quando administrados uma vez ao dia.

Sumário da Invenção

A invenção fornece um composto de fórmula (I):

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onde:

m é O1 1 ou 2;

X é O, S ou N-CN;

Ré F1CI ou CN;

A é um grupo C3-6 cicloalquileno opcionalmente substituído um grupo C1-4 alquil; e

B é uma ligação simples ou um grupo C1-2 alquileno; ou um sal farmaceuticamente aceitável, solvato, polimorfo ou pró-droga do mesmo.

Breve Descrição dos Desenhos

A figura 1 é um gráfico da concentração / tempo ilustrando os perfis farmacocinéticos médios, normalizados para a dose, dos compostos dos exemplos 1 e 2 da presente invenção, assim como aquele do composto do exemplo 75 do documento WO 02/074754 (Composto A), subsequente à administração venosa de 1 mg/kg;

A figura 2 mostra gráficos de difração de raios X de pó (PXRD) para padrões medidos (A) e simulados (B) para o solvato com ácido acético do composto do exemplo 2;

A figura 3 é um gráfico da perda de massa mediante aqueci- mento usando análise termogravimétrica (YGA) no solvato com ácido acéti- co do composto do exemplo 2 (a perda de massa de 15,05% mostrada sen- do igual 1 equivalente molar de ácido acético);

A figura 4 mostra padrões de PXRD para a forma assolvatada dopada com silício (forma A) do composto do exemplo 2 (A)1 e o solvato com ácido acético deste composto antes da análise por TGA (B) e depois da análise por TGA (C);

A figura 5 mostra o padrão de PXRD da forma cristalina não sol- vatada (forma A) do composto do exemplo 2, corrigido em relação ao pa- drão de silício;

A figura 6 é um traçado de calorimetria de varredura diferencial (DSC) para a forma cristalina não solvatada (forma A) do composto do e- xemplo 2;

A figura 7 mostra gráficos de PXRD para a forma cristalina não solvatada (forma A) e para os solvatos com dimetilacetamida (DMAC) (B), piridina (C), tetrahidrofurano (THF) (D), dimetil sulfóxido (DMSO) (E) e ácido acético (F) do composto do exemplo 2;

A figura 8 é um traçado de TGA do solvato com piridina do com- posto do exemplo 2, a perda de massa de 17,3% mostrada sendo equiva- lente a uma proporção de 1:1 de solvente para composto;

A figura 9 é um traçado de TGA do solvato com tetrahidrofurano do composto do exemplo 2, a perda de massa total de 14,7% correspon- dendo a uma proporção de 1:1 de composto para o solvente THF (a nature- za gradativa da perda de solvente mediante aquecimento possivelmente indicando a presença de uma forma intermediária de hemi-solvato com TH F);

A figura 10 é um traçado de TGA do solvato com dimetilaceta- mida do composto do exemplo 2, a perda de massa total de 33,0% sendo equivalente a uma proporção de 2:1 de solvente para composto;

A figura 11 mostra padrões de PXRD para o solvato com piridina (A), o solvato com piridina depois de TGA (B) e a forma A (C) do composto do exemplo 2;

A figura 12 mostra padrões de PXRD para o solvato com tetra- hidrofurano (Α), ο solvato com THF depois de TGA (B) e a forma A (C) do composto do exemplo 2;

A figura 13 mostra padrões de PXRD para o solvato com dimeti- Iacetamida (A), o solvato com dimetilacetamida depois de TGA (B) e a forma A (C) do composto do exemplo 2; e

A figura 14 mostra padrões de PXRD para o solvato com dimetil sulfóxido (A), o solvato com DMSO depois de secagem a vácuo (B) e a for- ma A (C) do composto do exemplo 2.

Descrição Detalhada das Modalidades Preferidas

No contexto da presente invenção, o termo "alquileno" significa uma cadeia hidrocarboneto saturado divalente com 1 ou 2 átomos de carbo- no. Exemplos de grupos alquileno incluem metileno, etileno e metilmetileno, dos quais metileno é preferido.

O termo "cicloalquileno" significa um anel carbocíclico saturado divalente com 3 a 6 átomos de carbono. Exemplos de grupos cicloalquileno incluem ciclopropileno (por exemplo 1,1-ciclopropileno e eis- e trans-1,2- ciclopropileno), ciclobutileno (por exemplo 1,1-ciclobutileno, cis-e trans-1,2- ciclobutileno, e eis- e trans-1 ,3-ciclobutileno), ciclopentileno (por exemplo

1.1-ciclopentileno, eis- e trans-1,2-ciclopentileno, e eis- e trans-1,3- ciclopentileno) e ciclohexileno (por exemplo 1,1-ciclohexileno, eis- e trans- 1.2-ciclohexileno, eis- e trans-1,3-ciclohexileno) e eis- e trans-1,4- ciclohexileno). Exemplos preferidos incluem ciclobutileno e ciclohexileno, mais preferivelmente ciclobutileno, ainda mais preferivelmente 1,3- ciclobutileno, e mais preferivelmente ainda trans-1,3-ciclobutileno.

O termo "alquil" significa uma cadeia hidrocarboneto saturado, monovalente, reto ou ramificado, contendo 1 a 4 átomos de carbono. Exem- plos de grupos alquil incluem metil, etil, n-propil, isopropil, n-butil, isobutil, sec-butil e ter-butil. Exemplos preferidos incluem metil e etil, especialmente metil.

O grupo cicloalquileno é opcionalmente substituído com um gru- po C1-4 alquil. De preferência, o substituinte alquil, se presente, é um grupo metil ou etil, mais preferivelmente um grupo metil. O substituinte alquil, se presente, pode estar presente em qualquer posição no anel, mas de prefe- rência está presente na posição 1 (i.e., a mesma posição que o grupo ácido carboxílico).

De preferência, m é 1 ou 2, mais preferivelmente 1.

De preferência, X é O ou N-CN, mais preferivelmente O. De preferência, R é F ou Cl, mais preferivelmente Cl. De preferência, A é um grupo ciclobutileno ou ciclohexileno op- cionalmente substituído com um grupo metil. Mais preferivelmente, A é um grupo ciclobutileno. Ainda mais preferivelmente, A é um grupo 1,3- ciclobutileno, especialmente um grupo trans-1,3-ciclobutileno.

De preferência, B é uma ligação simples ou um grupo metileno. Mais preferivelmente, B é uma ligação simples.

Compostos particularmente preferidos da invenção incluem a - queles nos quais cada variável na fórmula (I) é selecionada dos grupos ade- quados e/ou preferidos de cada variável. Compostos ainda mais preferidos da invenção incluem aqueles nos quais cada variável na fórmula (i) é sele- cionada dos grupos mais preferidos ou ainda mais preferidos para cada va- riável.

Os compostos a seguir são especialmente preferidos: ácido cis-3-[(8'-Cloro-2'-oxo-2,,3,-dihidro-1'H-espiro[ciclohexano-1,4'- quinazolin]-5'-il)óxi]ciclobutanocarboxílico;

ácido frans-S-t^-Cloro^-oxo^^-dihidro-l 'H-espiro[ciclohexano-1,4'- quinazolin]-5'-il)óxi]ciclobutanocarboxílico;

ácido 3-[(8,-flúor-2,-oxo-2,,3'-dihidro-1 'H-espiro[ciclohexano-1,4'-quinazolin]- 5'-il)oximetil]ciclobutanocarboxílico;

ácido frans-3-[(8'-ciano-2,-oxo-2,,3'-dihidro-1 'H-espiro[ciclohexano-1,4'- quinazolin]-5'-il)óxi]ciclobutanocarboxílico;

ácido 1 -[(e^flúor^-oxo^^-dihidro-l 'H-espiro[ciclohexano-1,4'-quinazolin]- 5'-il)oximetil]ciclobutanocarboxílico; ácido frans-3-[(8'-cloro-2'-oxo-2',3'-dihidro-1 'H-espiro[cicloheptil-1,4'- quinazolin]-5'-il)óxi]ciclobutanocarboxílico; ácido frans-3-[(8'-cloro-2'-oxo-2',3'-dihidro-1 'H-espiro[ciclopentil-1,4'- quinazolin]-5'-il)óxi]ciclobutanocarboxílico; e sais farmaceuticamente aceitáveis, solvatos e pró-drogas dos mesmos.

Os compostos a seguir são especialmente preferidos: ácido cis-3-[(8'-Cloro-2'-oxo-2',3'-dihidro-1'H-espiro[ciclohexano-1,4'- quinazolin]-5'-il)óxi]ciclobutanocarboxílico;

ácido trans-3-[(8,-Cloro-2,-oxo-2',3'-dihidro-1'H-espiro[ciclohexano-1,4'- quinazolin]-5'-il)óxi]ciclobutanocarboxílico; e sais farmaceuticamente aceitáveis, solvatos, polimorfos e pró-drogas dos mesmos.

O composto ácido frans-3-[(8,-cloro-2,-oxo-2,,3'-dihidro-1,H- espiro[ciclohexano-1,4'-quinazolin]-5'-il)óxi]ciclobutanocarboxílico, e sais farmaceuticamente aceitáveis, solvatos, polimorfos e pró-drogas do mesmo, particularmente como a forma cristalina não solvatada (forma A), descrita mais adiante, e o solvato com ácido acético, descrito mais adiante, são mais preferidos.

Em uma modalidade, a invenção compreende o composto ácido írans-3-[(8,-cloro-2,-oxo-2,,3'-dihidro-1'H-espiro[ciclohexano-1,4'-quinazolin]- 5'-il)óxi]-ciclobutanocarboxílico, em uma forma cristalina não solvatada (for- ma A) caracterizada pelos seguintes picos de difração de raios X de pó (2Θ, em graus ±0,1°) quando medido usando radiação Kα de Cu (comprimento de Á): 6,3, 17,8, 21,5, 22,1, 22,4, 26,3.

Em uma outra modalidade, a invenção compreende o composto ácido frans-3-[(8'-cloro-2'-oxo-2'3'-dihidro-1'H-espiro[ciclohexano-1,4'- quinazolin]-5'-il)óxi]-ciclobutanocarboxílico, como um solvato com ácido acé- tico, caracterizado pelos seguintes picos de difração de raios X de pó (2θ, em graus ±0,1°) quando medido usando radiação Kα de Cu (comprimento de Á): 8,3, 10,8, 16,6, 17,1, 19,5, 20,5, 23,7.

A invenção compreende ainda uma composição farmacêutica compreendendo um composto de fórmula (I), seja em seu aspecto mais amplo ou em um aspecto preferido, ou um sal farmaceuticamente aceitável, solvato, polimorfo ou pró-droga do mesmo, e um carreador ou diluente far- maceuticamente aceitável. A invenção compreende ainda um composto de fórmula (I), seja em seu aspecto mais amplo ou em um aspecto preferido, ou um sal farma- ceuticamente aceitável, solvato, polimorfo ou pró-droga do mesmo, para uso como medicamento.

A invenção compreende ainda o uso de um composto de fórmu- la (I), seja em seu aspecto mais amplo ou em um aspecto preferido, ou um sal farmaceuticamente aceitável, solvato, polimorfo ou pró-droga do mesmo, na produção de um medicamento para o tratamento de doenças ou condi- ções para as quais terapia por um inibidor de PDE7 é relevante.

A invenção compreende ainda um método para tratar uma do- ença ou condição para a qual terapia por um inibidor de PDE7 é relevante, compreendendo administrar uma quantidade eficaz de um composto de fórmula (I), seja em seu aspecto mais amplo ou em um aspecto preferido, ou um sal farmaceuticamente aceitável, solvato, polimorfo ou pró-droga do mesmo.

Os compostos de fórmula (I), sendo inibidores de PDE7, são potencialmente úteis no tratamento de uma gama de distúrbios. O tratamen- to da dor, particularmente dor neuropática, é um uso preferido.

Dor fisiológica é um mecanismo protetor importante destinado a avisar do perigo de estímulos potencialmente prejudiciais provenientes do ambiente externo. O sistema opera através de um conjunto específico de neurônios sensoriais primários e é ativado por estímulos nocivos via meca- nismos transdutores periféricos (vide Millan, Prog. Neurobiol., (1999), 57, 1- 164 para recapitulação). Estas fibras sensoriais são conhecidas como noci- ceptores e são axônios de diâmetro caracteristicamente pequeno com bai- xas velocidades de condução. Os nociceptores codificam a intensidade, a duração e a qualidade do estímulo nocivo e em virtude sua projeção topo- graficamente organizada em relação ao cordão espinha, a localização do estímulo. Os nociceptores são encontrados nas fibras nervosas nociceptivas das quais existem dois tipo principais, fibras Α-delta (mielinizadas) e fibras C (não-mielinizadas). A atividade gerada pela entrada de nociceptores é trans- ferida, depois de complexo processamento no corno dorsal, seja diretamen- te ou via núcleos de relê do tronco cerebral, para o tálamo ventrobasal e em seguida para o córtex, onde é gerada a sensação de dor.

A dor geralmente pode ser classificada como aguda ou crônica. A dor aguda começa de repente e dura pouco (normalmente doze semanas ou menos). Geralmente ela é associada a uma causa específica tal como uma lesão específica e geralmente é aguda e severa. É o tipo de dor que pode ocorrer depois de lesões específicas resultantes de cirurgia, tratamen- to dentário, um esforço ou uma distensão. A dor aguda geralmente não re- sulta em qualquer resposta psicológica persistente. Ao contrário, a dor crô- nica é uma dor de longo prazo, tipicamente persistente por mais de três ve- zes e que leva a problemas psicológicos e emocionais significativos. Exem- plos comuns de dor crônica são dor neuropática (por exemplo neuropatia diabética dolorosa, neuralgia pós-herpética), síndrome do túnel do carpo, dor lombar, dor de cabeça, dor de câncer, dor artrítica e dor pós-cirúrgica crônica.

Quando ocorre uma lesão significativa ao tecido do corpo, via uma doença ou trauma, as características da ativação nociceptora são alte- radas e há uma sensibilização na periferia, no local em torno da lesão e no centro onde terminam os nociceptores. Estes efeitos levam a uma sensação de dor ampliada. Na dor aguda esses mecanismos podem ser úteis para promover comportamentos protetores que podem melhorar a ocorrência de processos de restauração. A expectativa normal é que a sensibilidade volte ao normal depois de cicatrizada a lesão. No entanto, em muitas situações de dor crônica, a hipersensibilidade dura muito mais que o processo de cica- trização freqüentemente deve-se à lesão do sistema nervoso. Esta lesão freqüentemente leva a anormalidades nas fibras dos nervosos sensoriais associadas à má adaptação e atividade aberrante (Woolf & Salter, Science, (2000), 288, 1765-1768).

A dor clínica está presente quando desconforto e sensibilidade anormal figuram entre os sintomas do paciente. Os pacientes tendem a ser bastante heterogêneos e podem apresentar vários sintomas de dor. Tais sintomas incluem: 1) dor espontânea que pode ser vaga, de queimação, ou de punhalada; 2) respostas de dor exageradas a estímulos nocivos (hiperal- gesia); e 3) dor produzida por estímulos normalmente inócuos (alodinia - Meyer et a!., 1994, Textbook of Pain1 13-44). Embora os pacientes sofrendo de várias formas de dor aguda e crônica possam ter sintomas semelhantes, os mecanismos básicos podem ser diferentes e podem, por conseguinte, requerer estratégias de tratamento diferentes. A dor também pode ser por- tanto dividida em inúmeros subtipos diferentes segundo a patofisiologia dife- rencial, incluindo dor nociceptiva, inflamatória e neuropática.

A dor nociceptiva é induzida por lesão tecidual ou por estímulos intensos com potencial para causar lesões. Os aferentes de dor são ativa- dos por transdução de estímulos por nociceptores no local da lesão e ativam neurônios no cordão espinhal no nível de sua terminação. Isto é então re- transmitido para os tratos espinhas até o cérebro onde a dor é percebida (Meyer et al., 1994, Textbook of Pain, 13-44). A ativação de nociceptores ativa dois tipos de fibras dos nervos aferentes. As fibras Α-delta mielinizadas transmitem rapidamente e são responsáveis pelas sensações de dor aguda e de dor de punhalada, ao passo que as fibras C não-mielinizadas transmi- tem a uma velocidade mais baixa e transportam uma dor vaga ou contínua. Dor nociceptiva aguda moderada a severa é um aspecto proeminente de dor proveniente de trauma no sistema nervoso central, esforços/distensões, queimaduras, infarto do miocárdio e pancreatite aguda, dor pós-operatória (dor subsequente a qualquer tipo de procedimento cirúrgico), dor pós- traumática, colina renal, dor de câncer e dor lombar. A dor de câncer pode ser uma dor crônica tal como dor relacionada ao tumor (dor óssea, dor de cabeça, dor facial ou dor visceral) ou uma dor associada à terapia de câncer (por exemplo síndrome pós-quimioterápica, síndrome de dor pós-cirúrgica crônica síndrome pós-radiação). A dor de câncer também pode ocorrer em resposta à quimioterapia, imunoterapia, terapia hormonal ou radioterapia. A dor lombar pode ser devida a discos intervertebrais herniados ou com rotura ou anormalidades das articulações das facetas lombares, articulações sa- croilíacas, músculos paraspinhas ou do Iigamento longitudinal posterior. A dor lombar pode se resolver naturalmente mas em alguns pacientes, onde ela dura mais de 12 semanas, ela pode se transformar em uma condição crônica que pode ser particularmente debilitante.

Dor neuropática é atualmente definida como uma dor iniciada ou causada por uma lesão primária ou disfunção no sistema nervoso. Uma le- são nervoso pode ser causada por trauma e doença e portanto o termo 'dor neuropática' abrange muitos distúrbios com etiologias diversas. Estes inclu- em, porém sem limitação, neuropatia periférica, neuropatia diabética, neuro- patia pós-herpética, neuropatia do trigêmeo, dor lombar, neuropatia associ- ada a câncer, neuropatia associada a HIV, dor do membro-fantasma, sín- drome do túnel do carpo, dor pós-derrame central e dor associada a alcoo- lismo crônico, hipotireoidismo, uremia, esclerose múltipla, lesão do cordão espinhal, mal de Parkinson, epilepsia e deficiência vitamínica. A dor neuro- pática é patológica e não tem função protetora. Ela normalmente está pre- sente logo depois de a causa original ter desaparecido, normalmente duran- do anos, diminuindo significativamente a qualidade de vida do paciente (Woolf & Mannioni Lancei, (1999) 353, 1959-1964). Os sintomas da dor neuropática são difíceis de tratar, uma vez que normalmente eles são hete- rogêneos até entre pacientes com a mesma doença (Woolf & Decosterd, Pain Supp., (1999), 6, S141-S147; Woolf & Mannion, acima). Eles incluem dor espontânea, que pode ser contínua, e dor evocada paroxismal ou anor- mal, tal como hiperalgesia (sensibilidade aumentada a um estímulo nocivo) e alodinia (sensibilidade a um estímulo normalmente inócuo).

O processo inflamatório é uma série complexa de eventos bio- químicos e celulares, ativados em resposta a uma lesão tecidual ou à pre- sença de substâncias estranhas, que resulta em tumefação e dor (Levine & Taiwo, 1994, Textbook of Pain, 45-56). Dor artrítica é a dor inflamatória mais comum. Doença reumatóide é uma das condições inflamatórias crônicas mais comuns nos países desenvolvidos e artrite reumatóide é uma causa comum de incapacidade. A etiologia exata da artrite reumatóide é desco- nhecida, mas as hipóteses atuais sugerem que fatores tanto genéticos quanto microbiológicos podem ser importantes (Grennan & Jayson, 1994, Textbook of Pain, 397-407). Estima-se que quase 16 milhões de americanos têm osteoartrite sintomática (OA) ou doença articular degenerativa, a maio- ria deles tendo mais de 60 anos de idade, e acredita-se que este número vai chegar a 40 milhões com o aumento da idade da população, fazendo desta um problema de saúde pública de enorme dimensão (Houge & Mersfelder, Ann Pharmacother., (2002), 36, 679-686; McCarthy et al., 1994, Textbook of Pain, 387-395). A maioria dos pacientes com osteoartrite procuram ajuda médica por causa da dor associada. A artrite tem um impacto significativo na função psicossocial e física e sabe-se que ela é a principal causa de incapa- cidade nos últimos anos de vida. Espondilite alquilosante também é uma doença reumática que causa artrite da espinha e das articulações sacroilía- cas. Ela varia de episódios intermitentes de dor lombar que ocorrem a vida toda a uma doença crônica severa que ataca a espinha, as articulações pe- riféricas e outros órgãos do corpo.

Um outro tipo de dor inflamatória é a dor visceral que inclui dor associada à doença do intestino inflamado (IBD). A dor visceral é uma dor associada à víscera, que abrange os órgãos da cavidade abdominal. Estes órgãos incluem os órgãos sexuais, o baço e parte do sistema digestivo. A dor associada à víscera pode ser dividida em dor visceral digestiva e dor visceral não-digestiva. Distúrbios gastrointestinais (GI) comumente enfrenta- dos que causam dor incluem distúrbio do intestino funcional (FBD) e doença do intestino inflamado (IBD). Estes distúrbios Gl incluem uma ampla gama de doenças que atualmente são apenas moderadamente controladas, que incluem, no que diz respeito ao FBD, refluxo gastroesofágico, dispepsia, síndrome do intestino irritado (IBS) e síndrome da dor abdominal funcional (FAPS), e, no que diz respeito ao IBD, doença de Crohn, ileíte e colite ulce- rativa, todas elas regularmente produzindo dor visceral. Outros tipos de dor visceral incluem a dor associada à dismenorréia, cistite e pancreatite e dor pélvica.

Deve-se observar que alguns tipos de dor têm várias etiologias e portanto podem ser classificadas em mais de uma área, por exemplo dor lombar e dor de câncer possuem componentes tanto nociceptivos quanto neuropáticos. Outros tipos de dor incluem:

• dor resultante de distúrbios musculoesqueléticos que incluem mialgia, fibromialgia, espondilite, artropatias soro-negativas (não-reumatóides), reumatismo não-articular, distrofinopatia, glicogenólise, polimiosite e piomiosite;

• dor cardíaca e vascular, incluindo dor causada por angina, infarto do miocárdio, estenose mitral, pericardite, fenômeno de Raynaud, escle- redoma e isquemia musculoesquelética;

• dor de cabeça, tal como enxaqueca com aura e enxaqueca sem aura), cefaléia em cacho, cefaléia de tensão, cefaléia mista e cefaléia associ- ada a distúrbios vasculares; e

• dor orofacial, incluindo dor de dente, dor ótica, síndrome da boca queimando e dor miofascial temporomandibular.

Os compostos de fórmula (I) da presente invenção também são úteis no tratamento de condições diferentes de dor. Em particular, os com- postos de fórmula (!) da presente invenção são úteis no tratamento de do= enças relacionadas a células T1 doenças autoimunes, esclerose múltipla, osteoporose, doença pulmonar obstrutiva crônica, asma, câncer, síndrome da imunodeficiência adquirida (AIDS), alergia e doença do intestino inflama- do.

A invenção compreende ainda o uso de um composto de fórmu- la (I), seja em seu aspecto mais amplo ou em um aspecto preferido, ou um sal farmaceuticamente aceitável, solvato ou pró-droga do mesmo, na produ- ção de um medicamento para o tratamento de uma doença ou distúrbio se- lecionado de dor (especialmente dor neuropática), doenças relacionadas a células T, doenças autoimunes, esclerose múltipla, osteoporose, doença pulmonar obstrutiva crônica, asma, câncer, síndrome da imunodeficiência adquirida (AIDS), alergia e doença do intestino inflamado.

A invenção compreende ainda um método para tratar uma do- ença ou condição selecionada de dor (especialmente dor neuropática), do- enças relacionadas a células T, doenças autoimunes, esclerose múltipla, osteoporose, doença pulmonar obstrutiva crônica, asma, câncer, síndrome da imunodeficiência adquirida (AIDS), alergia ou doença do intestino infla- mado, compreendendo administrar uma quantidade eficaz de um composto de fórmula (I), seja em seu aspecto mais amplo ou em um aspecto preferi- do, ou um sal farmaceuticamente aceitável, solvato ou pró-droga do mesmo.

Sais farmaceuticamente aceitáveis dos compostos de fórmula (I) incluem os sais de adição de ácido e os sais de base dos mesmos.

Sais de adição de ácido adequados são formados a partir de ácidos que formam sais atóxicos. Exemplos incluem os sais de acetato, adi- pato, aspartato, benzoato, besilato, bicarbonato/carbonato, bissulfa- to/sulfato, borato, cansilato, citrato, ciclamato, edisilato, esilato, formiato, fumarato, gluceptato, gliconato, glicuronato, hexafluorfosfato, hibenzato, clo- ridrato/cloreto, bromidrato, brometo, iodidrato/iodeto, isetionato, lactato, ma- lato, maleato, malonato, mesilato, metilsulfato, naftilato, 2-napsilato, nicoti- nato, nitrato, orotato, oxalato, palmitato, pamoato, fosfato/fosfato áci- do/fosfato diácido, piroglutamato, sacarato, estearato, succinato, tanato, tar- tarato, tosüato, trifluoracetato e xinofoato.

Sais de base adequados são formados a partir de bases que formam sais atóxicos. Exemplos incluem os sais de alumínio, arginina, ben- zatina, cálcio, colina, dietilamina, diolamina, glicina, lisina, magnésio, me· glumina, olamina, potássio, sódio, trometamina e zinco.

Hemi-sais de ácidos e bases também podem ser formados, por exemplo, sais de hemi-sulfato e hemicálcio.

Para uma recapitulação de sais adequados, vide Handbook of Pharmaceutical Salts: Properties, Selection. and Use de Stahl & Wermuth (Wiley-VCH, 2002).

Sais farmaceuticamente aceitáveis dos compostos de fórmula (I) podem ser preparados por um ou mais de três métodos:

(i) por reação do composto de fórmula (I) com o ácido ou a base desejada;

(ii) por remoção do grupo protetor lábil de ácido ou base de um precursor adequado do composto de fórmula (I) ou por abertura de anel de um precursor cíclico adequado, por exemplo, uma Iactona ou lactama, u- sando o ácido ou base desejada; ou

(iii) por conversão de um sal do composto de fórmula (I) em um outro sal por reação com um ácido ou base apropriada ou por meio de uma coluna trocadora de íons adequada.

Todas as três reações são tipicamente realizadas em solução. O sal resultante pode precipitar e ser recolhido por filtração ou pode ser recu- perado por evaporação do solvente. O grau de ionização no sal resultante pode variar de completamente ionizado a quase não ionizado.

Os compostos da invenção podem existir em uma sére de esta- dos sólidos variando de totalmente amorfo a totalmente cristalino. O termo 'amorfo' refere-se a um estado no qual o material não tem uma disposição de longo alcance no nível molecular e, dependendo da temperatura, pode apresentar as propriedades físicas de um sólido ou de um líquido. Tipica- mente tais materiais não dão padrões de difração de raios X distintos e, em- bora apresentem as propriedades de um sólido, são mais formalmente des- critos como um líquido. Com aquecimento, ocorre uma mudança de proprie- dades de sólido para líquido que se caracteriza por uma mudança de esta- do, tipo de segunda ordem ('transição de vidro'). O termo 'cristalino' refere- se a uma fase sólida na qual o material tem uma estrutura interna ordenada regular no nível molecular e dá um padrão de difração de raios X distinto com picos definidos. Tais materiais quando aquecidos suficientemente tam- bém vão apresentar as propriedades de um líquido, mas a mudança de sóli- do para líquido é caracterizada por uma mudança de fase, tipicamente de primeira ordem ('ponto de fusão').

Os compostos da invenção também podem existir nas formas não-solvatada e solvatada. O termo 'solvato' é usado neste relatório para descrever um complexo molecular compreendendo o composto da invenção e uma ou mais moléculas de solvente farmaceuticamente aceitáveis, por exemplo, etanol. O termo 'hidrato' é empregado quando o referido solvente é água. A presente invenção abrange tanto as formas não solvatadas como todas as formas solvatadas.

Um sistema de classificação atualmente aceito para hidratos orgânicos é um sistema que define hidratos de sítio isolado, hidratos de ca- nal, ou hidratos coordenados com íon metálico - vide Polvmorphism in Pharmaceutical Solids de K. R. Morris (Ed. H. G. Brittain, Mareei Dekker, 1995). Hidratos de sítio isolado são hidratos nos quais as moléculas de água são isoladas do contato direto umas com as outras por moléculas orgânicas intervenientes. Nos hidratos de canal, as moléculas de água ficam em ca- nais de treliça onde elas não ficam perto de outras moléculas de água. Nos coordenados com íon metálico, as moléculas de água são ligadas ao íon metálico.

- Quando o solvente ou a água estiver ligado firmemente, o com- plexo vai ter uma estequiometria bem definida independente da umidade. Quando, no entanto, o solvente ou a água estiver ligado debilmente, como em solvatos de canal e compostos higroscópicos, o teor de água/solvente vai depender da umidade e das condições de secagem. Nestes casos, não- estequiometria será a norma.

Doravante todas as referências a compostos de fórmula (!) in- cluem referências a sais e solvatos dos mesmos e solvatos de sais dos mesmos.

Os compostos da invenção incluem compostos de fórmula (I) como definidos acima, incluindo todos os polimorfos e habitats de cristal dos mesmos, pró-drogas e isômeros dos mesmos (incluindo isômeros óticos, geométricos e tautoméricos) definidos mais adiante e compostos de fórmula (I) isotopicamente marcados.

Como indicado, as chamadas 'pró-drogas' dos compostos de fórmula (I) também estão dentro do escopo da invenção. Portanto certos derivados de compostos de fórmula (I) que possam ter pouca ou nenhuma atividade farmacológica podem, quando administrados no ou ao corpo, ser convertidos em compostos de fórmula (I) tendo a atividade desejada, por exemplo, por clivagem hidrolítica. Estes derivados são denominados "pró- drogas". Outras informações sobre o uso de pró-drogas podem ser encon- tradas em Pro-druqs as Novel Deliverv Systems, Vol. 14, ACS Symposium Series (T. Higuchi & W. Stella) e Bioreversible Carriers in Drua Desian. Per- gamon Press, 1987 (Ed. Ε. Β. Roche1 American Pharmaceutical Associati- on).

As pró-drogas de acordo com a invenção podem, por exemplo, ser produzidos por substituição das funcionalidades apropriadas presentes nos compostos de fórmula (I) por certas porções conhecidas pelos especia- listas na técnica como 'pró-porções' como descrito, por exemplo, em Desiqn of Prodrugs de H. Bundgaard (Elsevier, 1985).

Os compostos de fórmula (I) da presente invenção contêm uma funcionalidade ácido carboxílico (-COOH). Portanto, pró-drogas adequadas compreendem esteres dos mesmos, onde o hidrogênio da funcionalidade ácido carboxílico do composto de fórmula (I) é substituído por um resíduo éster. O termo "resíduo éster" significa um grupo éster que pode ser clivado in vivo por um método biológico tal como hidrólise e forma um composto de fórmula (I) tendo o grupo ácido carboxílico livre ou um sal do mesmo.

É possível determinar se o composto é uma pró-droga ou não, por exemplo, administrando-se o mesmo por injeção intravenosa a um ani- mal experimental, tal como um rato ou camundongo, e em seguida estudan- do-se os líquidos corporais do animal para determinar se é possível ou de- tectar não o composto de fórmula (I) ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo.

Exemplos preferidos do resíduo éster incluem:

grupos C1-C20 alquil, que podem ser grupos alquil de cadeia reta ou ramificada, tais como metil, etil, n-propil, isopropil, n-butil, isobutil, sec-butil, ter-butil, n-pentil, isopentil, neopentil, hexil, heptil, octil, nonil, decil, undecil, dodecil, tridecil, tetradecil, pentadecil, hexadecil, heptadecil, octade- cil, nonadecil e icosanil, especialmente grupos C1 - C12 alquil, de preferência grupos C1 - C8 alquil, mais preferivelmente grupos C1 - C6 alquil, e ainda mais preferivelmente grupos C1 - C4 alquil tais como aqueles definidos e e- xemplificados acima;

grupos C1 - C10 haloalquil (definidos como um grupo alquil subs- tituído com um ou mais átomos de halogênio, de preferência átomos de flúor ou cloro, mais preferivelmente átomos de flúor), haloalquil, mais preferível- mente grupos C1-C6 haloalquil, e ainda mais preferivelmente grupos C1-C4 haloalquil tais como mono-, di- ou trifluormetil, mono-, di- ou triclorometil, bromometil, 2-fluoretil, 2,2-difluoretil, 2,2,2-trifluoretil, 2-cloroetil, 2,2- dicloroetil, 2,2,2-tricloroetil, perfluoretil, perfluorpropil e perfluorbutil; grupos C1- C10 hidroxialquil (definidos como um grupo alquil substituído com um grupo hidróxi (-OH)), de preferência grupos C1-C8 hi- droxialquil, mais preferivelmente grupos C1-C6 hidroxialquil, e ainda mais preferivelmente grupos C1-C4 hidroxialquil tais como hidroximetil, 1- ou 2- hidroxietil, 1-, 2- ou 3-hidroxipropil, e 1-, 2-, 3- ou 4-hidroxibutil; grupos (C-mo alcóxi)Ci-io alquil (definidos como um grupo alquil substituído com um grupo alcóxi), de preferência grupos (C1-6 alcóxi)C1-6 al- quil, mais preferivelmente grupos (C1-4 alcóxi)C1-4 alquil, e mais preferivel- mente ainda grupos (C1-4 alcóxi)metil, tais como os grupos metoximetil, 1,1- dimetil-1-metoximetil, etoximetil, propoximetil, isopropoximetil, butoximetil e t-butoximetil;

grupos (C1-6 alcóxi)metií C1-6 alcoxilados, tais como o grupo 2- metoxietoximetil;

grupos halo(C1-6 alcóxi)metil, tais como os grupos 2,2,2- tricloroetoximetil e bis(2-cloroetóxi)metil;

grupos C3-e cicloalquil, tais como os grupos ciclopropil, ciclobutil, ciclopentil, ciclohexil, cicloheptil e ciclooctil;

grupos aralquil, por exemplo: grupos C1-C6 alquil substituídos com 1 a 3 grupos 3 C6-14 aril (onde a parte aril é selecionada de fenil, naftil, antril e fenantril), tais como os grupos benzil, a-naftilmetil, β-naftilmetil, dife- nilmetil, trifenilmetil, α-naftildifenilmetil e 9-antrilmetil; e grupos C1-6 alquil substituídos com 1 a 3 grupos C6-14 aril substituído, onde um ou mais dos grupos aril é substituído com um ou mais (de preferência 1 a 3, e mais pre- ferivelmente somente 1) substituintes C1-C6 alquil, C1-C6 alcóxi, nitro, ha- logênio ou ciano; tais como os grupos 4-metilbenzil, 2,4,6-trimetilbenzil, 3,4,5-trimetilbenzil, 4-metoxibenzil, 4-metoxifenildifenilmetil, 2-nitrobenzil, 4- nitrobenzil, 4-clorobenzil, 4-bromobenzil e 4-cianobenzil; especialmente o grupo benzil; grupos tetrahidropiranil ou tetrahidrotiopiranil, onde o grupo te- trahidropiranil ou tetrahidrotiopiranil pode ser opcionalmente substituído com um substituinte selecionado de halo e C1-6 alcóxi, tal como: grupos tetrahi- dropiran-2-il, 3-bromotetrahidropiran-2-il, 4-metóxi-tetrahidropiran-4-il, tetra- hidrotiopiran-2-il, e 4-metóxi-tetrahidrotiopiran-4-il;

grupos tetrahidrofuranil ou tetrahidrotiofuranil groups, onde o grupo tetrahidrofuranil ou tetrahidrotiofuranil pode ser opcionalmente substi- tuído com um substituinte selecionado de halo e C1-6 alcóxi, tal como: grupos tetrahidrofuran-2-il e tetrahidrothiofuran- 2-il;

grupos C2 -10 alquenil, tais c-omo os grupos vinil, propenil, butenil, pentenil, hexenil, heptenil, octenil, nonenil e decenil; e

grupos C2-10 alquinil, tais como os grupos etinil, propinil, butinil, pentinil, hexinil, heptinil, octinil, noninil e decinil.

Outros exemplos de grupos de substituição de acordo com os exemplos precedentes e exemplos de outros tipos de pró-drogas podem ser encontrados nas referências mencionadas acima.

Além disso, certos compostos de fórmula (I) podem agir como pró-drogas de outros compostos de fórmula (I).

Os compostos de fórmula (I) contendo um ou mais átomos de carbono assimétricos podem existir como dois ou mais estereoisômeros. Quando os compostos de fórmula (I) contêm um grupo cicloalquileno, isô- meros cis/trans são possíveis quando os grupos CO2H e B não estão no mesmo carbono. Quando os isômeros estruturais são interconversíveis via uma barreira de baixa energia, pode ocorrer isomeria tautomérica ('tautome- rismo'). Este pode adquirir a forma de tautomerismo protônico em compos- tos de fórmula (I) contendo uma um grupo uréia cíclica, tiouréia ou ciano- guanidina, ou do chamado tautomerismo de valência em compostos que contêm uma porção aromática. Acontece que um único composto pode a- presentar mais de um tipo de isomeria.

Estão incluídos no escopo da presente invenção todos os este- reoisômeros, diastereoisômeros (especialmente isômeros cis/trans) e for- mas tautoméricas dos compostos de fórmula (I), incluindo compostos apre- sentando mais de um tipo de isomeria, e misturas de um ou mais dos mes- mos. Também estão incluídos sais de adição de ácido ou sais de base onde o contraíon é oticamente ativo, por exemplo, d-lactato ou /-lisina, ou racêmi- co, por exemplo, dAtartarato ou dl-arginina.

Os isômeros cis/trans podem ser separados por técnicas con- vencionais bastante conhecidas pelos especialistas na técnica, por exemplo, cromatografia e cristalização fracionada.

Técnicas convencionais para a preparação/isolamento de enan- tiômeros individuais incluem síntese quiral a partir de um precursor otica- mente puro adequado ou resolução do racemato (ou o racemato de um sal ou derivado) usando, por exemplo, cromatografia líquida de alta pressão quiral (HPLC).

Alternativamente, o racemato (ou um precursor racêmico) pode ser reagido com um composto oticamente ativo adequado, , por exemplo, um álcool, ou, no caso em que o composto de fórmula (I) contém uma por- ção ácida ou básica, uma base ou ácido tal como 1-feniletilamina ou ácido tartárico. A mistura diastereomérica resultante pode ser separada por cro- matografia e/ou cristalização fracionada e um dos diastereisômeros ou am- bos convertidos nos enantiômeros puros correspondentes por meios bastan- te conhecidos pelo especialista na técnica.

Os compostos quirais da invenção (e precursores quirais dos mesmos) podem ser obtidos em forma enantiomericamente enriquecida u- sando cromatografia, tipicamente HPLC, em uma resina assimétrica com uma fase móvel consistindo em um hidrocarboneto, tipicamente heptano ou hexano, contendo de O a 50% em volume de isopropanol, tipicamente de 2% a 20%, e de O a 5% em volume de uma alquilamina, tipicamente 0,1% de dietilamina. Concentração do material eluído dá a mistura enriquecida.

Quando qualquer racemato cristaliza, cristais de dois tipos dife- rentes são possíveis. O primeiro tipo é o composto racêmico (racemato ver- dadeiro) mencionado acima onde é produzida uma forma homogênea de cristal contendo ambos os enantiômeros em quaisquer equimolares. O se- gundo tipo é a mistura ou conglomerado racêmica onde são produzidas du- as formas de cristal em quaisquer equimolares compreendendo cada uma um único enantiômero.

Embora ambas as formas de cristal presentes em uma mistura racêmica tenham propriedades físicas idênticas, elas podem ter proprieda- des físicas diferentes comparadas com o racemato verdadeiro. As misturas racêmicas podem ser separadas por técnicas convencionais conhecidas pelos especialistas na técnica - vide, por exemplo, Stereochemistry of Orga- nic Compounds de E. L. Eliel & S. H. Wilen (Wiley, 1994).

A presente invenção inclui todos os compostos de fórmula (I) marcados isotopicamente farmaceuticamente aceitáveis onde um ou mais átomos são substituídos por átomos com o mesmo número atômico, mas uma massa atômica ou número de massa diferente da massa atômica ou número atômico que predomina na natureza.

Exemplos de isótopos para inclusão nos compostos da invenção incluem isótopos de hidrogênio, tais como 2H e 3H, carbono, tais como 11C, 13C e 14C, cloro, tais como 36Cl, fluor,tais como 18F, iodo, tais como 123I e 125I, nitrogênio, tais como 13N e 15N, oxigênio, tais como 15O1 17O e 18O, fós- foro, tais como 32P, e enxofre, tais como 35S.

Certos compostos de fórmula (I) isotopicamente marcados, por exemplo, aqueles incorporando um isótopo radioativo, são úteis em estudos de distribuição tecidual de drogas e/ou substratos. Os isótopos radioativos trítio, i.e., i.e. 3H, e carbono-14, i.e., 14C, são particularmente úteis para tanto tendo em vista sua facilidade de incorporação e fácil meio de detecção.

A substituição com isótopos mais pesados tais como deutério, i.e., 2H, pode oferecer certas vantagens terapêuticas resultantes da maior estabilidade metabólica, por exemplo, meia aumentada in vivo ou exigências de dosagem reduzida, e por conseguinte pode ser preferida em algumas circunstâncias.

Substituição com isótopos emissores de pósitron, tais como 11C, 18F, 15O e 13N, pode ser útil em estudos de topografia por emissão de pósi- trons (PET) para examinar a ocupação de receptores de substrato.

Compostos de fórmula (I) isotopicamente marcados geralmente podem ser preparados por técnicas convencionais conhecidas pelos especi- alistas na técnica ou por processos análogos àqueles descritos nos exem- plos e preparações que se seguem usando um reagente isotopicamente marcado apropriado no lugar do reagente não marcado anteriormente em- pregado.

Solvatos farmaceuticamente aceitáveis de acordo com a inven- ção incluem aqueles onde o solvente de cristalização pode ser isotopica- mente substituído, por exemplo D2O1 d6-acetona, de-DMSO.

Também estão dentro do escopo da invenção compostos de fórmula (I) intermediários como definidos mais acima, todos os saisrsolvatos e complexos dos mesmos e todos os solvatos e complexos dos sais dos mesmos definidos mais acima para os compostos de fórmula (I). A invenção inclui todos os polimorfos das espécies e acima mencionadas e habitats de cristal das mesmas.

Quando se prepara compostos de fórmula (I) de acordo com a invenção, e habitualmente permitido que o especialista na técnica selecione a forma do composto de fórmula (I) que ofereça a melhor combinação de aspectos para esta finalidade. Tais aspectos incluem o ponto de fusão, a solubilidade, a processabilidade e o rendimento da forma intermediária e a facilidade resultante com que o produto pode ser purificado mediante isola- mento.

Os compostos de fórmula (I) devem ser avaliados quanto as su- as propriedades biofarmacêuticas, tais como solubilidade e estabilidade da solução (através do pH), permeabilidade etc., para selecionar a forma de dosagem e a via de administração mais apropriadas para tratamento da in- dicação proposta.

Os compostos da invenção destinados a uso farmacêutico po- dem ser administrados como produtos cristalinos ou amorfos. Eles podem ser obtidos, por exemplo, como tampões sólidos, pós, ou filmes por métodos tais como precipitação, cristalização, liofilização, secagem por aspersão, ou secagem evaporativa. Secagem por microondas ou radiofreqüência pode ser usada com esta finalidade. Eles podem ser administrados isolados ou em combinação com um ou mais outros compostos da invenção ou em combinação com uma ou mais outras drogas (ou como qualquer combinação das mesmas). Em geral, eles serão administrados como uma formulação em associação com um ou mais excipientes farmaceuticamente aceitáveis. O termo 'excipiente' é usa- do neste relatório para descrever qualquer ingrediente que não os compos- tos da invenção. A escolha do excipiente vai depender bastante de fatores tais como o modo de administração particular, o efeito do excipiente sobre a solubilidade e a estabilidade, e a natureza da forma de dosagem.

Composições farmacêuticas adequadas para a distribuição dos compostos da presente invenção e métodos para sua preparação serão fa- cilmente evidentes para os especialistas na técnica. Tais composições e métodos para sua preparação podem ser encontrados, por exemplo, em Reminqton's Pharmaceutical Sciences, 19th Edition (Mack Publishing Com- pany, 1995).

ADMINISTRAÇÃO ORAL

Os compostos da invenção podem ser administrados por via oral. A administração oral pode envolver deglutição, para que o composto penetre no trato gastrointestinal, e/ou administração bucal, lingual, ou sub- lingual por meio da qual o composto penetra na corrente sangüínea direta- mente da boca.

Formulações adequadas para administração oral incluem siste- mas sólidos, semi-sólidos e líquidos tais como comprimidos; cápsulas maci- as ou duras contendo multi- ou nano-particulados, líquidos, ou pós; pastilhas (inclusive cheias de líquidos); comprimidos mastigáveis, géis; formas de do- sagem de dispersão rápida; filmes; óvulos; sprays; e compressas bu- cais/mucoadesivas.

Formulações líquidas incluem suspensões, soluções, xaropes e elixires. Tais formulações podem ser empregadas como cargas em cápsulas macias ou duras (feitas, por exemplo, de gelatina ou hidroxipropilmetilcelulo- se) e tipicamente compreendem um carreador, por exemplo, água, etanol, polietileno glicol, propileno glicol, metilcelulose, ou um óleo adequado, e um ou mais agentes emulsificantes e/ou agentes suspensores. As formulações líquidas também podem ser preparadas pela reconstituição de um sólido, por exemplo, de um sachê.

Os compostos da invenção também podem ser usados em for- mas de dosagem de dissolução rápida e desintegração rápida tais como aquelas descritas em Expert Opinion in Therapeutic Patents, H (6), 981- 986, por Liang & Chen (2001).

Para formas de dosagem em comprimido, dependendo da dose, a droga pode constituir de 1% em peso a 80% em peso da forma de dosa- gem, mais tipicamente de 5%-em peso a 60% em peso da forma de dosa- gem. Além da droga, os comprimidos geralmente contêm um desintegrante. Exemplos de desintegrantes incluem glicolato de amido sódico, carboximetil celulose sódica, carboximetil celulose cálcica, croscarmelose sódica, cros- povidona, polivinilpirrolidona, metil celulose, celulose microcristalina, hidroxi- propil celulose substituída com alquil inferior, amido, amido pré-gelatinizado e alginato de sódio. Em geral, o desintegrante compreende de 1% em peso a 25% em peso, de preferência de 5% em peso a 20% em peso da forma de dosagem.

Aglutinantes geralmente são usados para conferir qualidades coesivas a uma formulação de comprimido. Aglutinantes adequados incluem celulose microcristalina, gelatina, açúcares, polietileno glicol, gomas naturais e sintéticas, polivinilpirrolidona, amido pré-gelatinizado, hidroxipropil celulose e hidroxipropil metilcelulose. Os comprimidos também podem conter diluen- tes, tais como Iactose (monohidratada, monohidratada secada por aspersão, anidra e outras formas), manitol, xilitol, dextrose, sacarose, sorbitol, celulose microcristalina, amido, fosfato de cálcio dibásico dihidratado.

Comprimidos também podem compreender opcionalmente a- gentes tensoativos, tais como Iauril sulfato de sódio e polissorbato 80, e des- lizantes tais como dióxido de silício e talco. Quando presentes, os agentes tensoativos podem compreender de 0,2 % em peso a 5% em peso do com- primido, e os deslizantes podem compreender 0,2% em peso a 1% em peso do comprimido. Comprimidos geralmente também contêm lubrificantes tais como estearato de màgnésio, estearato de cálcio, estearato de zinco, estearil fu- marato de sódio, e misturas de estearato de magnésio com Iauril sulfato de sódio. Lubrificantes geralmente compreendem de 0,25% em peso a 10% em peso, de preferência de 0,5% em peso a 3 % em peso do comprimido.

Outros componentes possíveis incluem antioxidantes, corantes, agentes flavorizantes, preservativos e agentes mascaradores de sabor.

Comprimidos exemplificativos contêm até cerca de 80% de dro- ga, de cerca de 10 % em peso a cerca de 90 % em peso de aglutinante, de cerca de 0 %-em peso a cerca de 85 % em peso de diluente, de cerca de 2 % em peso a cerca de 10 % em peso de desintegrante, e de cerca de 0,25 % em peso a cerca de 10 % em peso lubrificante.

Misturas de comprimido podem ser prensadas diretamente ou por rolo para formar comprimidos. As misturas de comprimido ou porções de misturas podem ser alternativamente granulados por via úmida, a seco, ou por sopro, congeladas por sopro, ou extrusadas antes da tabletagem. A for- mulação final pode compreender uma ou mais camadas e pode ser revesti- da ou não revestida; ela pode até mesmo ser encapsulada.

A formulação de comprimidos está discutida em Pharmaceutical Dosaae Forms: Tablets. Vol. 1, por H. Lieberman & L. Lachman (Mareei Dekker, New York, 1980).

Filmes orais consumíveis para uso humano ou veterinário são tipicamente formas de dosagem em filme fino maleável solúvel em água ou intumescível em água que podem ser de dissolução rápida ou mucoadesi- vas e tipicamente compreendem um composto de fórmula (I)1 um polímero formador de filme, um aglutinante, um solvente, um umectante, um plastifi- cante, um estabilizantes ou emulsificante, um agente modificador de visco- sidade e um solvente. Alguns componentes da formulação podem desem- penhar mais de uma função.

O composto de fórmula (I) pode ser solúvel ou insolúvel em á- gua. Um composto solúvel em água tipicamente compreende de 1 % em peso a 80 % em peso, mais tipicamente de 20 % em peso a 50 % em peso, dos solutos. Compostos menos solúveis podem compreender uma maior proporção da composição, tipicamente até 88 % em peso dos solutos. Alter- nativamente, o composto de fórmula (I) pode estar na forma de glóbulos multiparticulados.

O polímero formador de filme pode ser selecionado de polissa- carídeos naturais, proteínas, ou hidrocolóides sintéticos e está tipicamente presente na faixa de 0,01 a 99 % em peso, mais tipicamente na faixa de 30 a 80 % em peso.

Outros componentes possíveis incluem antioxidantes, corantes, flavorizantes, realçadores de sabor, preservativos agentes estimuladores de - salivação, agentes refrigerantes, co-solventes (inclusive óleos), emolientes, agentes de encorpamento, agentes antiespumantes, tensoativos e agentes mascaradores de sabor.

Os filmes de acordo com a invenção são tipicamente preparados por secagem evaporativa de filmes aquosos finos aplicados sobre um supor- te ou papel de apoio destacável. Isto pode ser feito em um forno ou túnel de secagem, tipicamente uma secadora e aparelho de revestimento combina- dos, ou por liofilização ou secagem a vácuo.

Formulações sólidas para administração oral podem ser formu- ladas para liberação imediata e/ou modificada. Formulações de liberação modificada incluem formulações de liberação retardada, sistemática, pulsa- da, controlada, vetorizada e programada.

Formulações de liberação modificada adequadas para os propó- sitos da invenção estão descritas na Patente US N0 6.106.864. detalhes de outras tecnologias de liberação adequadas tais como dispersões de alta e- nergia e partículas osmóticas e revestidas podem ser encontrados em Pharmaceutical Technology On-line. 25(2), 1-14, de Verma et al. (2001). O uso de goma de mascar para obter liberação controlada está descrito no documento WO 00/35298. ADMINISTRAÇÃO PARENTERAL

Os compostos da invenção também podem ser administrados diretamente na corrente sangüínea, no músculo, ou em um órgão interno. Meios adequados para administração parenteral incluem a administração intravenosa, intra-arterial, intraperitoneal, intratecal, intraventricular, intra- uretral, intrasternal, intracraniana, intramuscular, intrasinovial e subcutânea. Dispositivos adequados para administração parenteral incluem injetores de agulha (inclusive microagulha), injetores sem agulha e técnicas de infusão.

Formulações parenterais são tipicamente soluções aquosas que podem conter excipientes tais como sais, carboidratos e agentes tamponan- tes (de preferência até um pH de 3 a 9), mas, para algumas aplicações, elas podem ser formuladas de maneira mais adequada como uma solução não aquosa estéril ou como uma forma seca para ser usada junto com um veícu- lo adequado tal como água livre de pirogênio e estéril.

A preparação de formulações parenterais em condições esté- reis, por exemplo, por liofilização, pode ser facilmente efetuada usando téc- nicas farmacêuticas tradicionais bastante conhecidas pelos especialistas na técnica.

A solubilidade dos compostos de fórmula (!) usados na prepara- ção de soluções parenterais pode ser aumentada pelo uso de técnicas de formulação apropriadas, tais como a incorporação de agentes melhoradores de solubilidade.

Formulações para administração parenteral podem ser formula- das para liberação imediata e/ou modificada. Formulações de liberação mo- dificada incluem formulações de liberação retardada, sistemática, pulsada, controlada, vetorizada e programada. Por conseguinte, os compostos da invenção podem ser formulados como uma suspensão ou como um sólido, um semi-sólido, ou um líquido tixotrópico para administração como um de- pósito implantado proporcionando liberação modificada do composto ativo. Exemplos de tais formulações incluem stents revestidos com droga e semi- sólidos e suspensões compreendendo microesferas de ácido poli(d/-láctico- coglicólico) (PGLA) revestidas com droga.

ADMINISTRAÇÃO TÓPICA

Os compostos da invenção também podem ser administrados por via tópica, (intra)dérmica, ou transdérmica à pele ou mucosa. Formula- ções típicas para tanto incluem géis, hidrogéis, loções, soluções, cremes, pomadas, polvilhos, curativos, espumas, filmes, emplastros, pastilhas far- macêuticas, implantes, esponjas, fibras, bandagens e microemulsões. Li- possomas também podem ser usados. Carreadores típicos incluem álcool, água, óleo mineral, petrolato líquido, petrolato branco, glicerina, polietileno glicol e propileno glicol. Aumentadores de penetração podem ser incorpora- dos - vide, por exemplo, J. Pharm. Sci., 88 (10), 955-958, de Finnin & Mor- gan (Outubro 1999).

Outros meios de administração tópica incluem distribuição por eletroporação, iontoforese, fonoforese, sonoforese e injeção com microagu- Iha ou sem agulha (por exemplo Powderject™, Bioject™, etc.).

As formulações para administração tópica podem ser formula- das para liberação imediata e/ou modificada. Formulações de liberação mo- dificada incluem formulações de liberação retardada, sistemática, pulsada, controlada, vetorizada e programada.

ADMINISTRAÇÃO INALADA /INTRANASAL

Os compostos da invenção também podem ser administrados por via intranasal ou por inalação, tipicamente na forma de um pó seco (seja isolado, como uma mistura, por exemplo, em uma mistura seca com lactose, ou como um partícula de componentes mistos, por exemplo, mistos com fosfolipídios, tais como fosfatidilcolina) a partir de um inalador de pó seco, como um spray aerosol a partir de um recipiente pressurizado, uma bomba, um spray, um atomizador (de preferência um atomizador usando eletro- hidrodinâmica para produzir uma névoa fina), ou um nebulizador, com ou sem o uso de um propelente adequado, tal como 1,1,1,2-tetrafluoretano ou 1,1,1,2,3,3,3-heptafluorpropano, ou como gotas nasais. Para uso intranasal, o pó pode compreender um agente bioadesivo, por exemplo, quitosano ou ciclodextrina.

O recipiente pressurizado, a bomba, o spray, o atomizador, ou o nebulizador contém uma solução ou suspensão do(s) composto(s) da inven- ção compreendendo, por exemplo, etanol, etanol aquoso, ou um agente al- ternativo adequado para dispersão, solubilização, ou liberação prolongada do ativo, um propelente ou propelentes como solvente e um tensoativo op- cional, tal como trioleato de sorbitan, ácido oléico, ou um ácido oligoláctico.

Antes de ser usado em uma formulação de pó seco ou suspen- são, o produto medicamentoso é micronizado até um tamanho adequado para distribuição por inalação (tipicamente menor que 5 microns). Isto pode ser obtido por qualquer método de cominuição apropriado, tal como tritura- ção por jato em espiral, trituração por jato em leito fluido, processamento em fluido supercrítico para formar nanopartículas, homogeneização de alta pressão, ou secagem por aspersão.

Cápsulas (feitas, por exemplo, de gelatina ou hidroxipropilmetil- celulose), flaconetes e cartuchos para uso em um inalador ou insuflador po- dem ser formuladas de modo a conter uma mistura em pó do composto da invenção, uma base em pó adequada tal como Iactose ou amido e um modi- ficador de desempenho tal como /-leucina, manitol, ou estearato de magné- sio. A Iactose pode ser anidra ou pode estar na forma do monohidrato, de preferência esta última. Outros excipientes adequados incluem dextrana, glicose, maltose, sorbitol, xilitol, frutose, sacarose e trealose.

Uma formulação de solução adequada para uso em um atomi- zador usando eletro-hidrodinâmica para produzir uma névoa fina pode con- ter de 1 μg a 20 mg do composto da invenção por acionamento e o volume de acionamento pode variar de 1 μΙ a 100 μΙ. Uma formulação típica pode compreender um composto de fórmula (I), propileno glicol, água estéril, eta- nol e cloreto de sódio. Solventes alternativos que podem ser usados no lu- gar de propileno glicol incluem glicerol e polietileno glicol.

Flavorizantes adequados, tais como mentol e levomentol, ou adoçantes, tais como sacarina ou sacarina sódica, podem ser adicionados às formulações da invenção destinadas à administração inalada/intranasal.

As formulações para administração inalada/intranasal podem ser formulados para liberação imediata e/ou modificada, usando, por exemplo, PGLA. Formulações de liberação modificada incluem formulações de libera- ção retardada, sistemática, pulsada, controlada, vetorizada e programada. ADMINISTRAÇÃO RETAL/INTRAVAGINAL Os compostos da invenção podem ser administrados por vial retal ou vaginal, por exemplo, na forma de um supositório, pessário, ou e- nema. Manteiga de cacau é uma base para supositório tradicional, mas vá- rias alternativas podem ser usadas segundo apropriado.

As formulações para administração retal/vaginal podem ser for- muladas para liberação imediata e/ou modificada. Formulações de liberação modificada incluem formulações de liberação retardada, sistemática, pulsa- da, controlada, vetorizada e programada.

ADMINISTRAÇÃO OCULAR/AURAL

Os compostos da invenção também podem ser administrados diretamente ou olho ou ao ouvido, tipicamente na forma de gotas de uma suspensão ou solução micronizada em solução salina estéril, isotônica, de pH ajustado. Outras formulações adequadas para administração ocular e aural incluem pomadas, géis, implantes biodegradáveis (esponjas de gel absorvíveis, colágeno) e não biodegradáveis (por exemplo silicone), implan- tes, pastilhas farmacêuticas, !entes e sistemas particulados ou vesiculares, tais como niossomas ou lipossomas. Um polímero tal como ácido poliacrílico reticulado, álcool polivinílico, ácido hialurônico, um polímero celulósico, por exemplo, hidroxipropilmetilcelulose, hidroxietilcelulose, ou metil celulose, ou um polímero heteropolissacarídico, por exemplo, goma gelana, pode ser incorporado junto com um preservativo, tal como cloreto de benzalcônio. Tais formulações também podem ser distribuídas por iontoforose.

As formulações para administração ocular/aural podem ser for- muladas para liberação imediata e/ou modificada. Formulações de liberação modificada incluem formulações de liberação retardada, sistemática, pulsa- da, controlada, vetorizada e programada.

OUTRAS TECNOLOGIAS

Os compostos da invenção podem ser combinados com entida- des macromoleculares solúveis, tais como ciclodextrina e derivados ade- quados da mesma ou com polímeros contendo polietileno glicol, para melho- rar sua solubilidade, taxa de dissolução, mascaramento de sabor, biodispo- nibilidade e/ou estabilidade para uso em qualquer dos modos de administra- ção acima mencionados.

Complexos de droga-ciclodextrina, por exemplo, geralmente mostram-se úteis para a maioria das formas de dosagem e vias de adminis- tração. Podem ser usados tanto complexos de inclusão como complexos de não-inclusão. Como uma alternativa para a complexação direta com a dro- ga, a ciclodextrina pode ser usada como um aditivo auxiliar, i.e., como um carreador, diluente, ou solubilizante. As mais comumente usadas para estes fins são alfa-, beta- e gama-ciclodextrinas, exemplos das quais podem ser encontrados nos documentos WO 91/11172, WO 94/02518 e WO 98/55148.

KIT DE PARTES

Como pode ser desejável administrar uma combinação de com- postos ativos, por exemplo, com a finalidade de tratar uma doença ou condi- ção particular, faz parte do escopo da presente invenção que duas ou mais composições farmacêuticas, sendo que pelo menos uma delas contém um composto de acordo com a invenção, podem ser convenientemente combi- nadas na forma de um kit adequado para co-administração das composi- ções.

Portanto o kit da invenção compreende duas ou mais composi- ções farmacêuticas separadas, sendo que pelo menos uma delas contém um composto de fórmula (I) de acordo com a invenção, e meios para guar- dar separadamente as referidas composições, tais como um recipiente, uma garrafa dividida, ou uma embalagem metálica dividida. Um exemplo de tal kit é a conhecida embalagem bolha para acondicionar comprimidos, cápsulas e outros.

O kit da invenção é particularmente adequado para administrar diferentes formas de dosagem, por exemplo, oral e parenteral, para adminis- trar as composições separadas em diferentes intervalos de dosagem, ou para titular as composições separadas uma contra a outra. Para auxiliar a aceitação, o kit tipicamente compreende instruções para administração e pode ser apresentado com o chamado lembrete ("memory aid").

DOSAGEM

Para administração a pacientes humanos, a dose diária total dos compostos da invenção varia tipicamente na faixa de 10 mg a 1000 mg de- pendendo, naturalmente, do modo de administração. Por exemplo, a admi- nistração oral pode requerer uma dose diária total de 10 mg a 1000 mg, ao passo que uma dose intravenosa pode requerer de 10 mg a 1000 mg. A do- se diária total pode ser administrada em dose única ou em doses fraciona- das e pode, a critério médico, estar fora da faixa típica dada nesta invenção.

Estas dosagens têm por base um indivíduo humano médio pe- sando de cerca de 60 kg a 70 kg. O médico poderá facilmente determinar as doses para indivíduos com peso fora desta faixa, tais como bebês e idosos.

Para evitar dúvidas, as referências feitas a "tratamento" neste relatório incluem tratamento curativo, paliativo e profilático.

Todos os compostos de fórmula (I) podem ser preparados pelos procedimentos descritos nos Métodos Gerais descritos abaixo e pelos mé- todos específicos descritos na seção Exemplos e na seção Preparações, ou modificações de rotina dos mesmos. A presente invenção também abrange qualquer um ou mais destes processos para preparar os compostos de fór- mula (I), além de quaisquer intermediários novos usados nos mesmos.

Métodos Gerais

As seguintes abreviações são usadas:

DMF = dimetilformamida

DMSO = dimetil sulfóxido

TEMPO = 2,2,6,6-tetrametilpiperidina-N-óxido

THF = tetrahidrofurano

DCM = diclorometano

Os compostos de fórmula (I) podem ser preparados da maneira mostrada no esquema 1 abaixo. <formula>formula see original document page 35</formula>

Esquema 1

No esquema 1, P representa um grupo protetor de hidróxi, e- xemplos adequados dos mesmos estando descritos em "Protective Groups in Organic Synthesis" de T. W. Greene e P. Wuts, Wiley e Sons, 1991, e LG representa um grupo deslocável adequado, tal como halogênio, (C1-6 al- quil)sulfonilóxi (por exemplo metano-sulfonilóxi), (Ci-6 haloalquil)sulfonilóxi (por exemplo trifluormetanossulfonilóxi) ou benzeno- ou toluenossulfonilóxi (por exemplo p-toluenossulfonilóxi). De preferência P é benzil e LG é p- toluenossulfonilóxi.

Etapa (a): O composto de fórmula (III) pode ser preparado a par- tir do composto (II) e um agente apropriado capaz de converter um grupo hidróxi em um grupo deslocávél, tipicamente um reagente sulfonilante (por exemplo cloreto de metanossulfonil ou cloreto de p-toluenossulfonil) na pre- sença de uma base (por exemplo trietilamina ou piridina) em um solvente adequado (por exemplo piridina ou diclorometano) a uma temperatura de 0°C à temperatura ambiente por 15 minutos a 24 horas.

As condições preferidas são: 1 eq. de composto (II) em dicloro- metano, 1,2 eq. de cloreto de p-toluenossulfonil, 2 eq. de piridina à tempera- tura ambiente por 18 horas.

Etapa (b): O composto de fórmula (IV) pode ser preparado a partir do composto (III) e do hidróxi composto de fórmula (VI) em um solven- te adequado (por exemplo DMF, DMSO) na presença de uma base adequa- da (por exemplo CS2CO3, K2CO3), opcionalmente na presença de um crown éter (por exemplo 18-crown-6) a 50 - 120°C por uma noite.

As condições preferidas são: 1 eq. de composto (VI), 1,1 eq. de composto (III), 1,2 eq. de Cs2CO3, in DMF a 80°C por 24 horas.

Os compostos de fórmula (VI) estão descritos de modo geral no documento WO 02/074754. Compostos de fórmula (VI) específicos onde X é O, m é 1 e R é Cl podem ser preparados da maneira descrita em Bioorg. Med. Chem. Lett., (2004), 14(18), 4627-32, ou da maneira representada no esquema 5 abaixo.

Etapa (c): O composto de fórmula (IV) pode ser desprotegido por reação com um agente desprotetor em um solvente adequado para dar o composto de fórmula (V). Reagentes e métodos adequados estão descri- tos em "Protective Groups in Organic Synthesis" (mencionado acima). Quando P é benzil, exemplos de reagentes adequados incluem tricloreto de boro ou cloreto de ferro (III).

As condições preferidas são: 1 eq. de composto (IV) em diclo- rometano, 4 eq. de BCI3 à temperatura ambiente por 18 horas.

Etapa (d): O composto de fórmula (I) pode ser preparado por oxidação do composto de fórmula (V) usando um agente oxidante em um solvente adequado. Reagentes e condições típicos incluem trióxido de cro- mo catalítico e ácido periódico (H5IO6) em um solvente tal como acetonitrila a uma temperatura entre a temperatura ambiente e 50°C por 18 a 36 horas, ou alternativamente NaOCI mais NaCIO2 na presença de TEMPO catalítico em um solvente tal como acetonitrila a uma temperatura entre 0°C e a tem- peratura ambiente por 18 a 36 horas.

As condições preferidas são: 1 eq. de composto (V), 2,5 eq. de ácido periódico, 0,02 eq. de CrO3, em acetonitrila aquosa a 0,75%, 24 horas a 40°C.

Os compostos de fórmula (I) podem ser alternativamente prepa- rados por oxidação de compostos de fórmula (V) em um procedimento de duas etapas via os aldeídos de fórmula (VII) da maneira mostrada no es- <formula>formula see original document page 37</formula>

Esquema 2

Etapa (a): A oxidação do álcool (V) para o aldeído (VII) é tipica- mente realizada usando NaOCI com TEMPO catalítico em um solvente ade- - quado, por exemplo acetonitrila, acetona a uma temperatura entre O0C e a temperatura ambiente por 2 - 18 horas, ou alternativamente usando o com- plexo trióxido de enxofre-piridina com DMSO em um solvente tal como THF a uma temperatura entre O0C e a temperatura ambiente por 2-18 horas.

Etapa (b): Nova oxidação do aldeído (VII) para o ácido (I) é tipi- camente realizada usando NaCI02 na presença de fosfato de potássio em um solvente tal como t-butanol aquoso a uma temperatura entre 0ºC e a temperatura ambiente por 2-18 horas, ou alternativamente usando ácido tricloroisocianúrico com TEMPO catalítico em um solvente adequado, por exemplo acetona ou acetonitrila, a uma temperatura entre 0ºC e a tempera- tura ambiente por 2-18 horas.

Os compostos de fórmula (II) são conhecidos na literatura. Por exemplo, compostos de fórmula (II) onde A é um grupo c/s-1,3-ciclobutileno e B é uma ligação simples podem ser preparados da maneira descrita em J. Chem. Soc., Perkin Trans. 1, (1995), 18, 2281-7.

Alternativamente os compostos de fórmula (Ib), que são com- postos de fórmula (I) onde A é um grupo eis- ou trans-l ,3-ciclobutileno e B é uma ligação simples podem ser preparados a partir do composto (VIII) ou do composto (IX) por métodos tradicionais, tal como mostrado no esquema 3. Os compostos (II) e (X) trans podem ser obtidos a partir dos compostos (II) e (X) eis respectivamente por inversão usando a química de Mitsunobu análo- ga àquela descrita em Synthesis, (1981), 1. <formula>formula see original document page 38</formula>

No esquema 3, Ra é um resíduo éster, exemplos adequados do mesmo estando descritos acima para pró-drogas e em "Protective Groups in Organic Synthesis" (mencionado acima) (por exemplo (C1-6)alquil, benzil ou (+) ou (-)-mentil), e LG é um grupo deslocável tal como halogênio, (C1-6 al- quil)sulfonilóxi (por exemplo metanossulfonilóxi), (C1-6 haloalquil)sulfonilóxi (por exemplo trifluormetanossulfonilóxi) ou benzeno- ou toluenossulfonilóxi (por exemplo p-toluenossulfonilóxi).

Etapa (a): O composto de fórmula (IX) pode ser preparado por reação do composto (VIII) com um álcool adequado de fórmula RaOH (por exemplo metanol, t-butanol, álcool benzílico ou (-) mentol) em diversas con- dições, exemplos adequados das mesmas estando descritos em "Protective Groups in Organic Synthesis" (mencionado acima).

As condições preferidas são: 1 eq. de composto (VIII), 1,1 eq. 1,1'-carbonil diimidazol, em etil acetato ao refluxo por 1 hora seguido de 1 eq. de RaOH à temperatura ambiente por 4 horas.

Etapa (b): A redução do composto (IX) para o álcool (X) pode ser realizada usando um agente redutor adequado, por exemplo borohidreto de sódio ou L-Selectride®, em um solvente adequado tal como THF.

As condições preferidas são: 1 eq. de composto (IX), 0,5 eq. de NaBH4 em 20:1 THF:metanol a 0°C por 20 minutos.

Etapa (c): O composto de fórmula (XI) pode ser preparado a par- tir do composto (X) usando reagentes e condições semelhantes àquelas descritas no esquema 1, etapa (a).

As condições preferidas são: 1 eq. de composto (X), 1,05 eq. de cloreto de p-toluenossulfonil em piridina a uma temperatura entre 0°C e a temperatura ambiente.

Etapa (d): O composto de fórmula (Ia) pode ser preparado a par- tir do composto (XI) e do hidróxi composto de fórmula (VI) usando reagentes e condições semelhantes àquelas descritas no esquema 1, etapa (b).

As condições preferidas são: 1,2 eq. de composto (XI), 1,0 eq. de composto (VI), 1,5 eq. de Cs2CO3 em DMF a 80°C por 18 horas.

Etapa (e): O composto de fórmula (Ia) pode ser hidrolisado para dar o composto de fórmula (Ib). Esta reação pode realizada em diversas condições, exemplos adequados das mesmas estando descritos em "Pro- tective Groups in Organic Synthesis" (mencionado acima). As condições pre- feridas são: composto (Ia), 2 eq. de NaOH em 1:1 etanol:água a 60°C por 2 horas.

O composto (VIII) está descrito em J. Org. Chem., (1981), 53, 3841-43 e o composto (IX), onde Ra é um grupo metil, está descrito em J. Org. Chem., (1994), 59, 2132-34.

<formula>formula see original document page 39</formula>

Compostos de fórmula (Id), que são compostos de fórmula (I) onde B é um grupo metileno, podem ser preparados da maneira mostrada no esquema 4. <formula>formula see original document page 40</formula>

Esquema 4

No esquema 4, Ra é um resíduo éster, exemplos adequados do mesmo estando descritos acima para pró-drogas e em "Protective Groups in Organic Synthesis" (mencionado acima) (por exemplo (C ^6) alquil ou ben- zil), e LG é um grupo deslocável tal como halogênio ou (C1-6 alquil)sulfonilóxi (por exemplo metanossulfonilóxi), (Ci-6 haloalquil)sulfonilóxi (por exemplo trifluormetanossulfonilóxi) ou benzeno- ou toluenossulfonilóxi (por exemplo p-toluenossulfonilóxi). De preferência Ra é benzil e LG é p- toluenossulfonilóxi. Os compostos de fórmula (XII) podem ser obtidos co- mercialmente.

Etapa (a): O composto de fórmula (XIII) pode ser preparado por hidrólise do composto de fórmula (XII) em condições ácidas ou básicas, por exemplo hidróxido de sódio aquoso com um co-solvente adequado tal como metanol, etanol ou 1,4-dioxano, ou ácido clorídrico aquoso ou ácido sulfúrico opcionalmente com um co-solvente adequado tal como etanol ou 1,4- dioxano.

As condições preferidas são: 1 eq. de composto (XII), 4 eq. de NaOH1 em 1:1 etanol: água ao refluxo por 2,5 horas.

Etapa (b): O composto de fórmula (XIV) pode ser preparado por reação composto de fórmula (XIII) com um álcool adequado de fórmula Ra- OH (por exemplo metanol, ter-butanol, álcool benzílico) em diversas condi- ções, exemplos adequados das mesmas estando descritos em "Protective Groups in Organic Synthesis" (mencionado acima). As condições preferidas são: 1 eq. de composto (XIII), 1,1 eq. de 1,1'-carbonyldiimidazol em etil ace- tato por cerca de 1 hora seguido de 1,2 eq. de álcool benzílico à temperatu- ra ambiente por 18 horas.

Etapa (c): O composto de fórmula (XV) pode ser preparado por tratamento do composto de fórmula (XIV) com um agente hidroborante tal como borano-dimetil sulfeto, catecolborano ou 9-borabiciclo[3,3,1]nonano (9- BBN) em um solvente adequado tal como THF a uma temperatura entre O°C e a temperatura ambiente seguido de oxidação in situ com um oxidante tal como peróxido de hidrogênio, perborato de sódio ou trimetilamina-N-óxido a uma temperatura entre a temperatura ambiente e 60°C.

As condições preferidas são: 1 eq. de composto (XIV), 0,5 eq. de borano-dimetil sulfeto, em THF à temperatura ambiente por 1 hora segui- do de 1,2 eq. de perborato de sódio e aquecimento a 60°C por 1 hora.

Etapa (d): O composto de fórmula (XVI) pode ser preparado a partir do composto de fórmula (XV) usando reagentes e condições seme- lhantes àqueles descritos no esquema 1, etapa (a).

As condições preferidas são: 1 eq. de composto (XV), 1,3 eq. de cloreto de p-toluenossulfonil, 2,6 eq. de piridina em DCM a uma temperatura entre 0°C e a temperatura ambiente.

Etapa (e): O composto de fórmula (Ic) pode ser preparado a par- tir do composto de fórmula (XVI) e do hidróxi composto de fórmula (VI) u- sando reagentes e condições semelhantes àqueles descritos no esquema 1, etapa (b).

As condições preferidas são: 1,2 eq. de composto (XVI), 1,0 eq. de composto (VI), 1,5 eq. de Cs2CO3 em DMF a 80°C por 18 horas.

Etapa (f): O composto de fórmula (Ic) pode ser hidrolisado para dar o composto de fórmula (Id). Esta reação pode ser realizada em diversas condições, exemplos adequados das mesmas estando descritos em "Pro- tective Groups in Organic Synthesis" (mencionado acima).

As condições preferidas são: composto (Ic)1 excesso de NaOH em 1:1 etanokágua a 60°C por 2 horas.

Os compostos de fórmula (VI) estão descritos de modo geral no documento WO 02/074754. Compostos de fórmula (VIa) específicos, que são compostos de fórmula (VI) onde X é O ou S1 podem ser preparados da maneira descrita em Bioorg. Med. Chem. Lett., (2004), 14 (18), 4627-32, ou da maneira representada no esquema 5 abaixo.

<formula>formula see original document page 42</formula>

Esquema 5

No esquema 5, Rb é (C1-6)alquil ou benzil.

Etapa (a): Compostos de fórmula (XVIII) podem ser preparados pela reação de uma anilina (XVII) com cianato ou tiocianato de sódio ou po- tássio em um solvente adequado ou mistura de solventes por exemplo diclo- rometano ou ácido acético.água na presença de um ácido tal como ácido maléico ou acético. Alternativamente os compostos de fórmula (XVIII) po- dem ser preparados por reação de uma anilina (XVII) com trimetilsilil isocia- nato ou tiocianato em um solvente tal como diclorometano seguido de hidró- lise in situ com água.

As condições preferidas quando X é O são: 1 eq. de composto (XVII) em ácido acético:água (9:1) seguido de 1,2 eq. de cianato de potássio em água em gotas e mantido a 40°C por 1 hora.

Etapa (b): Os compostos de fórmula (XIX) podem ser prepara- dos pela reação de uma uréia de fórmula (XVIII) e da cetona apropriada na presença de um agente desidratante tal como ácido polifosfórico ou reagen- te de Eaton (7,5% de P2O5 em ácido metanossulônico) a uma temperatura entre 50 e 100°C.

As condições preferidas são: 1 eq. de composto (XVIII), reagen- te de Eaton (30g/g) a 60°C, seguido de 2 eq. de cetona e aquecimento a 80°C por 1 hora.

Etapa (c): O composto de fórmula (VIa) pode ser preparado por reação de um composto de fórmula (XIX) com um ácido de Lewis tal como tribrometo de boro em um solvente adequado tal como diclorometano à temperatura ambiente ou por reação com um ácido forte à alta temperatura, por exemplo ácido bromídrico a 110°C.

As condições preferidas são: 1 eq. de composto (XIX), 20 eq. de brometo de hidrogênio aquoso a 48%, em ácido acético a 110°C por 4 dias.

Os inibidores de PDE7 de fórmula (I) podem ser vantajosamente combinados com um outro composto farmacologicamente ativo, ou com dois ou mais outros compostos farmacologicamente ativos, particularmente no tratamento da dor. Por exemplo, um inibidor de PDE7 de fórmula (I), ou um sal farmaceuticamente aceitável, solvato ou pró-droga do mesmo, definidos acima, pode ser administrado simultaneamente, seqüencialmente ou sepa- radamente em combinação com um ou mais agentes selecionados de:

• um analgésico opióide, por exemplo morfina, heroína, hidromorfona, o- ximorfona, levorfanol, levalorfano, metadona, meperidina, fentanil, cocaí- na, codeína, dihidrocodeína, oxicodona, hidrocodona, propoxifeno, nal- mefeno, nalorfina, naloxona, naltrexona, buprenorfina, butorfanol, nalbu- fina ou pentazocina;

• uma droga antiinflamatória não-esteróide (NSAID), por exemplo aspirina, diclofenac, diflusinal, etodolac, fenbufeno, fenoprofeno, flufenisal, flurbi- profeno, ibuprofeno, indometacina, cetoprofeno, ketorolac, ácido meclo- fenâmico, ácido mefenâmico, meloxicam, nabumetona, naproxeno, ni- mesulida, nitroflurbiprofeno, olsalazina, oxaprozina, fenilbutazona, piroxi- cam, sulfasalazina, sulindac, tolmetina ou zomepirac; um sedativo barbitúrico, por exemplo amobarbital, aprobarbital, butabar- bital, butabital, mephobarbital, meharbital, metohexital, pentobarbital, fe- nobartital, secobarbital, talbutal, theamylal ou tiopental; uma benzodiazepina com ação sedativa, por exemplo clordiazepóxido, clorazepato, diazepam, flurazepam, lorazepam, oxazepam, temazepam ou triazolam;

um antagonista de Hi com ação-sedativa, por exemplo difenidramina, pirilamina, prometazina, clorfeniramina ou clorciclizina; um sedativo tal como glutetimida, meprobamato, metaqualona ou diclo- ralfenazona;

um relaxante do músculo esquelético, por exemplo baclofeno, carisopro- dol, clorzoxazona, ciclobenzaprina, metocarbamol ou orfrenadina; um antagonista do receptor de NMDA, por exemplo dextrorneiorfano ((+)-3-hidróxi-N-metilmorfinano) ou seu metabólito dextrorfano ((+)-3- hidróxi-N-metilmorfinano), cetamina, memantina, pirrolquinolina quinino, ácido cis-4-(fosfonometil)-2-piperidinecarboxílico, budipina, EN-3231 (MorphiDex®, uma formulação combinada de morfina e dextrometorfa- no), topiramato, neramexano ou perzinfotel incluindo um antagonista de NR2B, por exemplo ifenprodil, traxoprodil ou (-)-(R)-6-{2-[4-(3-fluorfenil)- 4-hidróxi-1 -piperidinil]-1 -hidroxietil-3,4-dihidro-2(1H)-quinolinona; um alfa-adrenérgico, por exemplo doxazosina, tamsulosina, clonidina, guanfacina, dexmetatomidina, modafinil, ou 4-amino-6,7-dimetóxi-2-(5- metano-sulfonamido-1,2,3,4-tetrahidroisoquinol-2-il)-5-(2-piridil) quinazo- lina;

um antidepressivo tricíclico, por exemplo desipramina, imipramina, ami- triptilina ou nortriptilina;

um anticonvulsante, por exemplo carbamazepina, lamotrigina, topiratma- to ou valproato;

um antagonista de taquiquinina (NK), particularmente um antagonista de ΝΚ-3, ΝΚ-2 ou ΝΚ-1, por exemplo (αR,9R)-7-[3,5-bis(trifluormetil)benzil]- 8,9,10,11-tetrahidro-9-metil-5-(4-metilfenil)-7H-[1,4]diazocino[2,1-g][1,7]- naftiridina-6-13-diona (TAK-637), 5-[[(2R,3S)-2-[(1R)-1-[3,5- bis(trifluormetil)fenil]etóxi-3-(4-fluorfenil)-4-morfonilil]-metil]-1,2-dihidro- 3H-1,2,4-triazol-3-ona (MK-869), aprepitant, lanepitant, dapitant ou 3-[[2- metóxi-5-(trifluormetóxi)fenil]-metilamino]-2-fenilpiperidina (2S,3S);

• um antagonista muscarínico, por exemplo oxibutinina, tolterodina, propi- verina, cloreto de trópsio, darifenacina, solifenacina, temiverina e ipratró- pio;

•um inibidor seletivo de COX-2, por exemplo celecoxib, rofecoxib, pareco- xib, valdecoxib, deracoxib, etoricoxib, ou lumiracoxib;

• um analgésico à base alcatrão, em particular paracetamol;

• um neuroléptico tal como droperidol, clorpromazina, haloperidol, perfe- nazina, tioridazina, mesoridazina, trifluoperazina, flufenazina, clozapina, olanzapina, risperidona, ziprasidona, quetiapina, sertindol, aripiprazol, sonepiprazol, blonanserina, ilopsridona, perospirona, racloprida, zotepi- na, bifeprunox, asenapina, lurasidona, amisulprida, balaperidona, palin- dore, eplivanserin, osanetant, rimonabant, meclinertant, Miraxion® ou sa- rizotan;

um agonista (por exemplo resinferatoxina) ou antagonista (por exemplo capsazepina) de receptor de vanilóide;

• um beta-adrenérgico tal como propranolol;

• um anestésico local tal como mexiletina;

• um corticosteróide tal como dexametasona;

•um agonista ou antagonista do receptor de 5-HT, particularmente um agonista de 5-HT1b/id tal como eletriptano, sumatriptano, naratriptano, zolmitriptano ou rizatriptano;

• um antagonista do receptor de 5-HT2a tal como R(+)-alfa-(2,3-dimetóxl· fenil)-1 -[2-(4-fluorfeniletil)]-4-piperidinametanol (MDL-100907);

• um analgésico colinérgico (nicotínico), tal como isproniclina (TC-1734), (E)-N-metil-4-(3-piridinil)-3-buten-1 -amina (RJR-2403), (R)-5-(2- azetidinilmetóxi)-2-cloropiridina (ABT-594) ou nicotina; • Tramadol®;

• um inibidor de PDEV1 tal como 5-[2-etóxi-5-(4-metil-1-piperazinil- sulfonil)fenil]-1-metil-3-n-propil-1,6-dihidro-7H-pirazol[4,3-d]pirimidin-7- ona (sildenafil), (6R, 12aR)-2,3,6,7,12,12a-hexahidro-2-metil-6-(3,4- metilenodioxifenil)-pirazino[2',1 ':6,1 ]-pirido[3,4-b]indol-1,4-diona (IC-351 ou tadalafil), 2-[2-etóxi-5-(4-etil-piperazin-1 -il-1 -sulfonil)-fenil]-5-metil-7- propil-3H-imidazo[5,1-f][1,2,4]triazin-4-ona (vardenafil), 5-(5-acetil-2- butóxi-3-piridinil)-3-etil-2-(1-etil-3-azetidinil)-2,6-dihidro-7H-pirazol[4,3- c(]pirimidin-7-ona, 5-(5-acetil-2-propóxi-3-piridinil)-3-etil-2-(1 -isopropil-3- azetidinil)-2,6-dihidro-7H-pirazol[4,3-c/lpirimidin-7-ona, 5-[2-etóxi-5-(4- etilpiperazin-1 -ilsulfonil)piridin-3-il]-3-etil-2-[2-metoxietil]-2,6-dihidro-7H- pirazol[4,3-d]pirimidin-7-ona, 4-[(3-cloro-4-metoxibenzil)amino]-2-[(2S)-2- (hidroximetil)pirrolidin-1-il]-N-(pirimidin-2-ilmetil)pirimidina-5-carboxami 3-(1-metil-7-oxo-3-propil-6,7-dihidro-1H-pirazol[4,3-d]pirimidin-5-il)-N-[2- (1-metilpirrolidin-2-il)etil]-4-propoxibenzenossulfonamida;

• um ligando alfa-2-delta ta! como gabapeníi.na, pregabaüna, 3- metilgabapentina, ácido (1 a,3a,5a)(3-amino-metil-biciclo[3,2,0]hept-3-il)- acético, ácido (3S,5R)-3-aminometil-5-metil-heptanóico, ácido (3S,5R)- 3-amino-5-metil-heptanóico, ácido (3S,5R)-3-amino-5-metil-octanóico, (2S,4S)-4-(3-clorofenóxi)prolina, (2S,4S)-4-(3-fluorbenzil)-prolina, ácido [(1 R,5R,6S)-6-(aminometil)biciclo[3,2,0]hept-6-il]acético, 3-(1 -aminometil- ciclohexilmetil)-4H-[1,2,4]oxadiazol-5-ona, C-[1 -(1 H-tetrazol-5-ilmetil)- cicloheptilj-metilamina, ácido (3S,4S)-(1 -aminometil-3,4-dimetil- ciclopentil)-acético, ácido (3S,5R)-3-aminometil-5-metil-octanóico, ácido (3S,5R)-3-amino-5-metil-nonanóico, ácido (3S,5R)-3-amino-5-metil- octanóico, ácido (3R,4R,5R)-3-amino-4,5-dimetil-heptanóico e ácido (3R,4R,5R)-3-amino-4,5-dimetil-octanóico;

• um canabinóide;

• antagonista do receptor de glutamato metabotrópico subtipo 1 (mGluRI);

• um inibidor da reabsorção de serotonina tal como sertralina, sertralina metabólito demetilsertralina, fluoxetina, norfluoxetina (fluoxetina desmetil metabólito), fluvoxamina, paroxetina, citalopram, citalopram metabólito desmetilcitalopram, escitalopram, d.l-fenfluramina, femoxetina, ifoxetina, cianodotiepina, litoxetina, dapoxetina, nefazodona, cericlamina e trazo- dona;

um inibidor da reabsorção de noradrenalina (norepinefrina), tal como maprotilina, Iofepramina1 mirtazepina, oxaprotilina, fezolamina, tomoxeti- na, mianserina, buproprion, buproprion metabólito hidroxibuproprion, nomifensina e viloxazina (Vivalan®), especialmente um inibidor seletivo da reabsorção de noradrenalina tal como reboxetina, em particular (S1S)- reboxetina;

um inibidor duplo da reabsorção de serotonina-noradrenalinar tal como venlafaxina, venlafaxina metabólito O-desmetilvenlafaxina, clomipramina, clomipramina metabólito desmetilclomipramina, duloxetina, milnacipran e imipramina;

um inibidor induzível de óxido nítrico sintase (iNOS) tal como S-[2-[(1- iminoetil)amino]etil]-L-homocisteína, S-[2-[(1-iminoetil)-amino]etil]-4,4- dioxo-L-cisteína, S-[2-[(1 -iminoeíii)amino]eíii]-2-meiii-L-cisteína, ácido (2S,5Z)-2-amino-2-metil-7-[(1 -iminoetil)amino]-5-heptenóico, 2-[[(1 R,3S)- 3-amino-4- hidróxi-1 -(5-tiazolil)-butil]tio]-5-cloro-3-piridinacarbonitrila; 2- [(1R,3S)-3-amino-4-hidróxi-1-(5-tiazolil)butil]tio]-4-çlorobenzonitrila, (2S,4R)-2-amino-4-[[2-cloro-5-(trifluormetil)fenil]tio]-5-tiazolebutanol, 2-[[(1 R,3S)-3-amino-4-hidróxi-1-(5-tiazolil) butil]tio]-6-(trifIuormetil)-3 piri- dinacarbonitrila, 2-[[(1 R,3S)-3- amino-4-hidróxi- 1 -(5-tiazolil)butil]tio]-5- clorobenzonitrila, N-[4-[2-(3-clorobenzilamino)etil]fenil]tiofeno-2- carboxamidina, ou guanidinoetildisulfeto;

um inibidor de acetilcolinesterase tal como donepezil;

um antagonista de prostaglandina E2 subtipo 4 (EP4) tal como N-[({2-[4- (2-etil-4,6-dimetil-1HH'midazo[4,5-c]piridin-1-il)fenil]etil}amino)-carbonil]-4- metilbenzenossulfonamida ou ácido 4-[(1 S)-1-({[5-cloro-2-(3- fluorfenóxi)piridin-3-il]carbonil}amino)etil]benzóico;

um antagonista de Ieucotrieno B4; tal como ácido 1-(3-bifenil-4-ilmetil-4- hidróxi-croman-7-il)-ciclopentanecarboxílico (CP-105696), ácido 5-[2-(2- Carboxietil)-3-[6-(4-metoxifenil)-5E-hexenil]oxifenóxi]-valérico (ΟΝΟ- 4057) OU DPC-11870,

• um inibidor de 5-lipoxigenase, tal como zileuton, 6-[(3-flúor-5-[4-metóxi- 3,4,5,6-tetrahidro-2H-piran-4-il])fenóxi-metil]-1-metil-2-quinolona (ZD- 2138), ou 2,3,5-trimetil-6-(3-piridilmetil),1,4-benzoquinona (CV-6504);

• um bloqueador do canal de sódio, tal como lidocaína;

• um antagonista de 5-HT3, tal como ondansetron; e os sais farmaceuticamente aceitáveis e solvatos dos mesmos.

A capacidade dos compostos de fórmula (I) para inibir o PDE7 pode ser medida usando o seguinte protocolo de ensaio.

As enzimas PDE7A e PDE7B catalisam a hidrólise do 3',5'- cíclico adenosina monofosfato (cAMP) para o 5'adenosina monofosfato, 5ΆΜΡ. Em uma placa multicompartimentos, a enzima PDE, [3H]-cAMP e os compostos testados são incubados à temperatura ambiente. A incubação é interrompida pela adição de glóbulos de ensaio de proximidade de cintilação (SPA) de silicato de ítrio comercialmente disponíveis contendo sulfato de zinco. Os glóbulos de silicato de ítrio ligam-se preferencialmente a nucieotí- deos lineares, e dessa forma o produto da reação enzimática, [3H]-5'AMP se liga ao glóbulo para produzir um sinal leve, que é detectado por um contador de cintilação. A quantidade de sinal produzida está diretamente relacionada à quantidade de produto formada, e portanto à atividade da enzima. O sinal máximo é obtido quando enzima e substrato são incubados sozinhos. O si- nal de referência é medido a partir dos compartimentos não contendo enzi- ma, ou dos compartimentos concentra uma concentração supra-máxima de um inibidor de PDE7A/B conhecido. Cada batelada purificada de enzima tem a qualidade controle e seu Km, Vmax e atividade específica são determi- nados a partir de estudos cinéticos antes do uso em estudos de inibição pe- lo composto. A inibição da enzima, por um composto de teste, é calculada em relação às respostas máxima e de referência. Usando estes dados cal- cula-se um valor de inibição % em relação aos valores máximo e mínimo obtidos.

Preparação de soluções de trabalho

Um estoque de 1000 ml de tampão foi preparado a partir dos componentes mostrados na Tabela 1 abaixo:

<table>table see original document page 49</column></row><table>

Tabela 1

O tampão de estoque teve o pH ajustado em 7,4 à temperatura ambiente e então foi filtrado através de um filtro de 0,2 μm. O tampão de estoque é estável a 4°C por 1 mês a contar da data de preparação.

No dia da experiência, albumina sérica bovina (BSA, disponível na Sigma) foi adicionada ao volume necessário de tampão para criar uma solução final a 0;00625 % de BSA. Isto foi obtido pela preparação de uma solução de estoque a 10% de BSA da seguinte maneira:

Preparação da solução de estoque a 10% de BSA

1g de BSA foi dissolvido em 10 ml de água purificada, mistura- do por inversão para garantir homogeneidade e divido em alíquotas em vo- lumes de 100 μl em tubos marcados de forma apropriada. A solução a 10% de BSA é estável a -20°C por até 6 meses.

Uma alíquota da solução de estoque a 10% de BSA foi retirada do armazenamento e deixada descongelar à temperatura ambiente antes de ser usada para criar a solução de trabalho à base de BSA mostrada na Ta- bela 2 abaixo:

Preparação de 10 ml de tampão de ensaio de trabalho à base de BSA

<table>table see original document page 49</column></row><table>

Tabela 2 Preparação do composto tradicional e de controles

O composto do exemplo 75 do documento WO 02/074754, 5'- carboxipropóxi-8'-cloro-espiro[ciclohexano-1-4'-(3',4'-dihidro)quinazolin]- 2'(1'H)-ona (doravante "Composto A") foi usado como referência. Solução de estoque 4 mM preparada em 100% de DMSO podem ser arma- zenados a 4°C. O volume de DMSO pode ser calculado da seguinte manei- ra:

<formula>formula see original document page 50</formula>

O controle 30x Max é uma solução de 100% de DMSO. O con- trole 30x Min é obtido usando o composto A 30 mM em 100% de DMSO pa- ra não produzir qualquer atividade enzimática. 5 ml de uma solução 30 mM do Composto A podem ser preparados pela adição de 4,962 ml de 100% de DMSO a 37,5 ml de Composto A 4 mM.

Método

No dia do ensaio, o tampão ds ensaio fina! Ix foi preparado da maneira detalhada anteriormente e mantido em gelo até ser necessário.

Estudos cinéticos

Para cada nova batelada de enzima, o Km foi determinado, e a quantidade de enzima necessária para obter um sinal de -1000 cpm em 45 minutos, enquanto permanecendo na porção linear da curva de progresso da reação, foi avaliada. Idealmente <10% do [3H]-cAMP disponível serão hidrolisados durante o andamento do ensaio.

Solução de enzima

A otimização deste ensaio foi efetuada usando um Iisado celular contendo as enzimas PDE7A e PDE7B de comprimento integral. A concen- tração da enzima nesta amostra de Iisado celular é desconhecida, de modo que a atividade específica do Iisado celular é usada como uma medida para garantir que será usada a mesma atividade por compartimento apesar de qualquer variação de concentração/atividade de batelada para batelada.

Preparação da enzima PDE7A/B

A enzima de estoque PDE7 foi preparada e mantida a -20°C em alíquotas de tamanho apropriado para reduzir o número de ciclos de conge- lamento/descongelamento. A Tabela 3 abaixo mostra os volumes necessá- rios para fazer 9 ml de uma solução da enzima PDE7A/B. PDE7A é diluído 1/8000 e PDE7B é diluído 1/10000.

<table>table see original document page 51</column></row><table>

Tabela 3

Depois de a solução de enzima ter sido preparada ela é mantida em gelo antes de ser usada.

Preparação da solução de substrato de Adenosina 3',5' Cílico Fosfato (cAMP) 50 nM

O substrato é composto de uma mistura de cAMP não marcado e cAMP radiomarcado com trítio ([3H]-cAMP). As especificações do estoque de [3H]-cAMP vão determinar os volumes usados.

A preparação de 9 ml de solução de substrato usando um esto- que de [3Hj-CAMP que é 1mCi/ml e 24Ci/mmols (portanto 41,66mM) está descrita abaixo:

Km para as bateladas de enzima até hoje é o seguinte:

PDE7A - 20nM PDE7B-100nM O ensaio requer que 15 ml de solução de substrato sejam dis- pensados em volume de ensaio total de 30 ml, i.e., diluição x2 ocorre na placa de ensaio.

É necessário o [cAMP] de ensaio final de ~25nM, assim foi pre- parado [3H]-cAMP ~50nM.

9 ml de solução de substrato foram preparados por misturação de 10,8 ml de [3H]-CAMP (disponível na Amersham) com 8975 ml de tampão de ensaio.

A concentração exata de cAMP foi determinada colocando-se 3 amostras de 15 ml s em frascos de cintilação= 4 ml de StarscinttB) (um coque- tel de cintilação, disponível na Perkin Elmer) foi então adicionado e os tubos contados em um contador β em um programa dpm.

A concentração de radioligando é determinada pela seguinte equação:

[Radioligando] (M) =DPM

(2,22x1012) χ (atividade específica) χ (volume de amostra) (dpm/Ci) do radioligando contado (Ci/Mol) (L)

A concentração é então dividida por 2 para permitir que a dilui- ção x2 ocorra na placa de ensaio.

Preparação de 6.6 mg/ml de glóbulos de silicato de ítrio PDE SPA

Glóbulos de fosfodiesterase SPA (silicato de ítrio) encontram-se disponíveis na Amersham.

Seguindo as recomendações do fabricante o frasco de glóbulos foi reconstituído usando 28 ml de água destilada ou desionizada (-20 mg/ml). Os glóbulos reconstituídos são estáveis por 1 mês quando armaze- nados a 2 - 8°C. Para preparar os glóbulos para o ensaio, os glóbulos re- constituídos foram diluídos 1 para 3 em água duplamente destilada estéril (-6,6 mg/ml). Os glóbulos podem sedimentar, por isso foram constantemen- te agitados enquanto iam sendo dispensados.

30 ml dos glóbulos a -6,6 mg/ml são adicionados a 30 ml de ensaio, dando uma concentração final de glóbulos de -0,2 mg/compartimento.

Diluições do composto e compartimentos de "referência" foram feitos 30 vezes mais forte que o necessário na placa de ensaio para permitir que seja diluído 1 ml de composto por-29 ml dos outros componentes do ensaio (14 ml de enzima e 15 ml de radioligando). Assim para uma concen- tração de ensaio final de 10 mM, o composto deve estar a 300 mM na placa de adição de composto. Estoques 4 mM de composto são fornecidos em 100% de DMSO (ou são completados até 4 mM a partir das apresentações de pó). Isto requer que seja feita uma diluição 1/13,33 em DMSO. Protocolo de ensaio

1 μl de composto de teste foi transferido para uma placa de en- saio multicompartimentos adequada imediatamente antes adição do reagen- te de ensaio, 14 μl da solução de enzima foram então adicionados à placa de ensaio, seguidos de 15 μl da solução de substrato (i.e., volume final do ensaio 30 μl, com uma concentração final do composto de rastreamento de 1 μΜ). A placa foi então vedada usando uma seladora de placa e incubada à temperatura ambiente por 45 minutos no agitador de placas.

30 μl de glóbulos de silicato de ítrio PDE4 SPA foram então adi- cionados, garantindo agitação constante dos glóbulos para dar uma distribu- ição uniforme na placa de ensaio. A placa foi então vedada usando uma se- ladora de placa e incubada à temperatura ambiente por 30 minutos no agi- tador de placas. Os glóbulos foram então deixados sedimentar por 30 minu- tos, antes da centrifugação das placas por 1 minuto a 200g.

As placas foram então lidas em um contador radioativo adequa- do, por exemplo NXT-TopCount ™ (disponível na Perkin Elmer) usando o protocolo pertinente (tempo de leitura de 30 segundos por compartimento). Os dados foram ajustados a uma curva sigmoidal usando um algoritmo de mínimos quadráticos.

O valor IC50 foi convertido para um valor K"i usando a equação de Cheng-Prussof:

<table>table see original document page 54</column></row><table>

A atividade inibitória de PDE7 dos compostos dos exemplos 1-7 foi testado de acordo com o protocolo acima. Os valores Kj obtidos estão mostrados na Tabela 4 abaixo:

<table>table see original document page 54</column></row><table>

Tabela 4

NT = não testado

Resumo dos dados de hepatócitos humanos

A estabilidade metabólica hepática humana dos compostos dos compostos dos exemplos 1-7 do presente pedido foi avaliada no modelo descrito abaixo. O composto do exemplo 75 do documento WO 02/074754, 5'-carboxipropóxi-8'-cloro-espiro[ciclohexano-1-4'-(3',4'-dihidro)quinazolin]- 2'(1'H)-ona (doravante "Composto A"), que se acredita representar o estado da técnica mais parecido, foi usado como comparação. Método

Hepatócitos são usados como um sistema in vitro para monitorar o metabolismo hepático uma vez que estas células intatas contêm todas as enzimas hepáticas encontradas in vivo, inclusive enzimas de fase I, tais co- mo citocromo P450 oxidases (CYPs)1 aldeído oxidases e monoamina oxida- ses (MAOs), e enzimas de fase Il1 tais como UDP-glucuroniltransferases e sulfotransferases. Hepatócitos humanos criopreservados são preparados a partir de 5 doadores e suspendidos em meio de Williams E. Ácido 4-(2- hidroxietil)-1-piperazinaetanossulfônico (HEPES) é preparado para uma concentração final de 50 mM e o pH é ajustado em 7,4. Os substratos de teste são dissolvidos em DMSO são adicionados aos hepatócitos para dar uma concentração de substrato de 1 μΜ, com uma concentração final de DMSO na incubação abaixo de 0,1%. As experiências são realizadas em placas de 96 ou 384 compartimentos a 37°C, com uma densidade de hepa- tócitos de 0,5 milhão de células viáveis/ml. Tempos de amostragem de 10, 20, 30, 60, 90, e 120 minutos são usados e a quantificação analítica é feita por LC-MS/MS. A depuração intrínseca (aparente) é calculada usando a fórmula:

CLint, app = [-inclinação / 0,5 M células/ml] · 1000 μl/ml = μl/mi n/M células.

A estabilidade metabólica hepática humana dos compostos da presente invenção foi testada de acordo com o protocolo acima. Os valores da depuração intrínseca obtidos estão mostrados na Tabela 5 abaixo:_

<table>table see original document page 55</column></row><table>

Tabela 5

Os dados apresentados na Tabela 5 mostram uma nítida dife- renciação, em relação à estabilidade metabólica hepática intrínseca, entre os compostos dos exemplos 1-7 do presente pedido e do estado da técnica mais parecido, o Composto A. É portanto provável, com base nos dados acima, que a depuração hepática reduzida dos compostos dos exemplos 1-7 do presente pedido resulte nos compostos apresentam meia-vida melhorada em seres humanos, em comparação com o Composto A.

Resumo farmacocinético IV em rato

As propriedades farmacocinéticas dos compostos dos exemplos 1 e 2 foram testados no modelo de rato descrito abaixo. O composto do e- xemplo 75 do documento WO 02/074754, 5'-carboxipropóxi-8'-cloro- espiro[ciclohexano-1 -4'-(3'4'-dihidro)quinazolin]-2'(1'H)-ona (doravante "Composto A"), que se acredita representar o estado da técnica mais pare- cido, foi usado como comparação. Método

Os compostos de teste foram administrados a ratos machos (cada rato recebendo um composto), via a veia terminal, a uma dose de 1 mg/kg (0,08mg/kg para o composto do exemplo 1). Amostras de sangue foram coletadas dos ratos por uma cânula cirurgicamente implantada na veia jugular em tempos predeterminados após a administração, e centrifu- gadas para produzir plasma. As amostras de plasma foram analisadas via um ensaio por LC-MS/MS específico para a quantificação de droga no plasma. As curvas concentração de plasma-tempo resultantes foram exami- nadas usando uma análise farmacocinética não-compartimental para enten- der a disposição de cada composto. O resultado obtido foi subseqüentemen- te usado para estimar o provável perfil farmacocinético humano, como des- crito abaixo.

Os perfis farmacocinéticos médios, de dose normalizada, dos compostos dos exemplos 1 e 2, assim como do Composto A, subsequente à administração intravenosa de 1 mg/kg estão mostrados na Tabela 6 e na figura 1.

<table>table see original document page 56</column></row><table> <table>table see original document page 57</column></row><table>

Tabela 6

Na Tabela 6, são usadas as seguintes abreviações:

Cl é a depuração em rato;

T1/2 é a meia-vida;

Vd é o volume de distribuição em rato;

fup é a fração não ligada em plasma de rato; e

Clu é a depuração plasmática de rato não ligada, onde Clu = Cl /fup. Estimativa da farmacocinética humana

Com base nos dados farmacocinéticos acima no rato, a provável farmacocinética humana dos compostos dos exemplos 1 e 2, e do Compos- to A, pode ser estimada da seguinte maneira.

* Ampliar a depuração plasmática de rato não ligada (Clu rat) observada subsequente à administração intravenosa para estimar uma depuração

plasmática humana não ligada (CIuman) usando a seguinte relação:

<formula>formula see original document page 57</formula>

onde BWman & BWrat os pesos corporais médios do homem (70 kg) e do rato (0,25 kg) respectivamente, e as unidades de depuração estão em ml/min.

Converter o Clu man para estimar a depuração sangüínea total no ho- mem (CIman):

<formula>formula see original document page 57</formula>

onde fup é a fração livre de droga não ligada no plasma e B:P é a proporção de sangue para plasma em sangue humano.

Uma estimativa da meia-vida humana é apresentada para cada com- posto, derivada da relação:

<formula>formula see original document page 57</formula>

onde T1/2 é a meia-vida humana estimada em horas, Vd é o volume de dis- tribuição no homem (suposto igual a 0,2 l/kg, devido à físico-química desta série) e Cl é a depuração humana.

Um resumo da farmacocinética humana estimada está dado na

Tabela 7 abaixo. <table>table see original document page 58</column></row><table>

Tabela 7

Os dados apresentados nas Tabelas 6 e 7 acima mostram uma nítida diferenciação, em relação à farmacocinética observada no rato e a farmacocinética humana prevista, entre o composto do exemplo 2 do pre- sente pedido quando comparado com o estado da técnica mais parecido, o Composto A. Isto se manifesta na meia-vida humana projetada que é esti- maaa em iu horas para o composto do exempio 2, comparado com o Com- posto A que possivelmente oferece uma meia-vida no homem de aproxima- damente 1 hora.

É portanto provável, com base nos dados acima, que a farma- cocinética do composto do exemplo 2 do presente pedido seja condizente com uma dosagem de uma ou duas vezes ao dia na clínica. A farmacociné- tica do composto do exemplo 1 do presente pedido pode ser condizente com uma dosagem de duas ou três vezes ao dia. Isto representa um aper- feiçoamento significativo em relação ao Composto A mais parecido da técni- ca anterior, que devido a sua meia-vida curta é improvável que seja ade- quado para administração de maneira semelhante.

A atividade de um composto de fórmula (I) de acordo com a presente invenção no tratamento de dor neuropática pode ser medida de acordo com o seguinte protocolo de teste.

Animais: Ratos machos Sprague Dawley (peso médio 500 g) são alojados em grupos de 12. Todos os animais são mantidos em um ciclo de luz/escuridão de 12 horas (luzes acesas às 7 h 00 min) com comida e água ad libitum. Todas as experiências são realizadas por um observador cego quanto aos tratamentos e de acordo com a 'Home Office Animais (Sci- entific Procedures) Act 1986'.

Modelo de rato de lesão de constricão crônica (CCI) de dor neuropática

A CCI do nervo ciático é efetuada da maneira anteriormente descrita (G.J. Bennett & Y.K. Xie, Pain (1988) 33, 87-107). Os animais foram anestesiados com uma mistura de 2% de isofluorano/O2. A coxa traseira direta é raspada e esfregada com iodo a 1%. Os animais são então transfe- ridos para uma manta ("blanket") homeotérmica pela duração do procedi- mento e a anestesia é mantida durante a cirurgia por meio de um cone na- sal. A pele é cortada ao longo da linha do osso da coxa. O nervo ciático co- mum é exposto no meio da coxa por dissecação cega através do fêmur do bíceps. Cerca de 7 mm de nervo são liberados próximo da trifurcação ciáti- ca, inserindo-se um fórceps sob o nervo e o nervo é delicadamente Ievanta- do e retirado da coxa. Uma sutura é feita sob o nervo usando fórceps e a- marrada em um nó simples até ser sentida uma leve resistência e então ou- tro nó é feito. O procedimento é repetido até que tenham sido feitas 4 liga- duras (seda 4-0) frouxas em torno do nervo com aproximadamente 1 mm de distância. A incisão é fechada em camadas e o corte é tratado com antibióti- co tópico.

Neuropatia diabética induzida com estreptozocina (STZ) no rato

Diabetes é induzido por uma única injeção intraperitoneal de estreptozotocina (50 mg/kg) recém-dissolvida em solução salina estéril a 0,9%. A injeção de estreptozotocina induz uma alodinia mecânica reprodutí- vel em 3 semanas, durando pelo menos 7 semanas (S.R. Chen & H.L. Pan. J. Neurophysiol. (2002), 87, 2726-2733). Avaliação da alodinia estática e dinâmica Alodinia estática

Os animais são aclimatizados em gaiolas de teste com fundo de arama antes da avaliação da alodinia. A alodinia estática é avaliada pela aplicação de pelos de von Frey (Stoelting, Wood Dale, Illinois, EUA) em or- dem crescente de força (0,6, 1, 1,4, 2, 4, 6, 8, 10, 15 e 26 gramas) à super- fície plantar das patas traseiras. Cada pelo de von Frey é aplicado à pata por um máximo de 6 segundos, ou até que ocorra uma resposta de retrai- mento. Uma vez estabelecida uma resposta de retraimento a um pelo de von Frey, a pata é novamente testada, começando com o filamento abaixo daquele que produziu o retraimento, e subseqüentemente com os filamentos restantes em seqüência de força decrescente até não ocorrer qualquer tipo de retraimento. A força mais alta de 26 g levanta a pata e também cria uma resposta, representando assim o ponto de corte. Cada animal tem ambas as patas traseiras testadas desta maneira. A quantidade de força mais baixa necessária para criar uma resposta é anotada como limiar de retraimento da pata (PWT) em gramas. A alodinia estática é considerada presente se os animais responderem a um estímulo de 4 g, ou menos, que é inócuo em ratos naíve (M.J. Field et al. Pain (1999), 83, 303-11).

Alodinia dinâmica

A alodinia dinâmica é avaliada passando-se levemente um chu- maço de algodão na superfície plantar da pata traseira. Para evitar o registro de atividade motora geral, deve-se tomar cuidado para efetuar este proce- dimento em ratos totalmente aclimatizados que não estejam ativos. Pelo menos duas medidas são feitas em cada tempo, cuja média representa a latência de retraimento da pata (PWL). Se não houvesse qualquer reação em 15 segundos o procedimento era interrompido e este tempo de retrai- mento era atribuído aos animais. Uma resposta de retraimento por dor fre- qüentemente é acompanhada de recuo repetido ou lambida da pata. A alo- dinia dinâmica é considerada presente se os animais respondem ao estímu- lo com algodão em 8 segundos depois do toque inicial (Field et al., 1999, acima).

Exemplos

Os espectros de ressonância magnética nuclear (RMN) de 1H foram em todos os casos consistentes com as estruturas propostas. Os desvios químicos (δ) característicos estão dados em partes por milhão (ppm) no sentido descendente a partir de tetrametilsilano usando as abreviações convencionais para designação dos picos principais: por exemplo s, singleto; d, dubleto; t, tripleto; q, quarteto; m, multipleto; br, amplo. Os espectros de massa (m/z) foram registrados usando ionização por electrospray (ES ou ESI) ou ionização química à pressão atmosférica (APCI). As abreviações a seguir foram usados para solventes comuns: CDCI3, deuteroclorofórmio; D6- DMSO, hexadeuterodimetil sulfóxido.

Experimental de difração de raios X de cristal simples

A estrutura de cristal do solvato com ácido acético do composto do exemplo 2 foi determinada por difração de raios X de cristal simples à temperatura ambiente usando um difratômetro de raios X de cristal simples Bruker SMART APEX e radiação com Mo Κα. As intensidades foram inte- gradas usando os softwares SMART v5.622 (controle) e SAINT v6.02 (inte- gração) (Bruker AXS Inc., Madison, Wisconsin, EUA, 1994) de várias séries de exposições onde cada exposição cobria 0,3° em ω, com um tempo de exposição de 60 s e o conjunto de dados totais era mais de um hemisfério.

Os dados foram corrigidos para absorção usando o método de múltiplas re- presentações ("multiscans") (SADABS, Program for scaling and correction of area detector data, G. M. Sheldrick, University of Gõttingen, 1997, baseado no método de R. H. Blessing, Acta Cryst. 1995, A51, 33-38).

A estrutura de cristal foi resolvida com sucesso por métodos di- retos usando o SHELXS-97, (Program for crystal structure solution. G. M. Sheldrick, University of Gõttingen, Alemanha, 1997, distribuição 97-2) em Space Group C2/c e refinada pelo método dos mínimos quadráticos usando o SHELXL-97 (Program for crystal structure refinement. G. M. Sheldrick, U- niversity of Gõttingen, Alemanha, 1997, distribuição 97-2). O procedimento de refinamento da estrutura de cristal revelou a presença de uma molécula do composto do exemplo 2 e de uma molécula de ácido acético na unidade assimétrica. Portanto esta estrutura pode ser chamada de solvato com ácido acético 1:1 do composto do exemplo 2.

Cálculo do padrão de difração de raios X de pó da estrutura de cristal do exemplo 2, etapa (b) (solvato com ácido acético)

Os ângulos 2Θ e as intensidades relativas (vide Tabela 8 abaixo) foram calculados a partir da estrutura de cristal simples do solvato com áci- do acético do composto do exemplo 2 usando o móudlo "Reflex Powder Dif- fraction" da Accelrys MS Modelling™ [versão 3.0]. Os parâmetros de simula- ção pertinentes foram:

Comprimento de A (Cu Κα) Fator de polarização = 0,5

Perfil pseudo-Voigt (U = 0,01, V = -0,001, W = 0,002)

O padrão calculado representa aquele de uma fase pura do sol- vato com ácido acético do composto do exemplo 2 visto que ele é derivado de uma estrutura de cristal simples. Uma comparação dos padrões medido e calculado está mostrada na figura 2 e demonstra que a textura ("bulk") é representada pela estrutura de cristal simples. Ligeiras discrepâncias entre as intensidades máximas podem ser atribuídas a efeitos de orientação pre- ferida é o padrão medido. Difração de raios X de pó

O padrão de difração de raios X de pó para a forma cristalina não solvatada do composto do exemplo 2 (forma A) foi determinado usando um difratômero de raios X de pó Bruker-AXS Ltd. D4 equipado com um tro- cador de amostra automático, um goniômetro teta-teta, uma abertura de di- vergência de feixes automática, e um detector PSD Vantec-1. A amostra foi preparada para análise sendo inicialmente dopada com silício, para medir as posições de pico exatas, e foi subseqüentemente instalada em uma arma- ção de espécime de pastilha de silício de plano de fundo baixo ("low back- ground silicon wafer specimen mount"). O espécime era girado enquanto era irradiado com raios X de cobre K-alfai (comprimento de Ángstroms) com o tubo de raios X operando a 40kV/30mA. As análises fo- ram realizadas com o goniômetro operando em modo contínuo ajustado pa- ra uma contagem de 0,2 segundo por etapa de 0,018° por uma faixa de dois teta de 2° a 55°. Os padrões de PXRD para as amostras de solvato secadas a vácuo também foram coletados usando os mesmos parâmetros neste di- fratômetro, mas estas amostras não foram dopadas com silício.

Todos os outros padrões de difração de raios X de pó foram re- gistrados para amostras instaladas em uma pastilha de silício planta, usan- do o difratômetro de raios X de pó Bruker AXS Ltd. D8 Advance equipado com ótica do espelho de-GobeI, um estrado de amostra simples e um detec- tor sensível à posição (PSD). Cada espécime foi irradiado com raios X de cobre K-alfai (comprimento de Á) com o tubo de raios X ope- rando a 40kV/40mA. As análises foram realizadas com o goniômetro ope- rando em modo de varredura contínua ajustado para uma contagem de 0,2 segundo por etapa de 0,014° por uma faixa de 3o ao 35° 2Θ. Calorimetria de varredura diferencial (DSC)

As medidas de DSC foram feitas usando um calorímetro de var- redura diferencial Elmer Diamond. A amostra foi aquecida a 20°C/minuto, da temperatura ambiente até 300°C, em um recipiente de alumínio com abertu- ra de 50 μl. O gás de fluxo foi nitrogênio a 40 ml/min. Análise Temogravimétrica (TGA)

As medidas de TGA dos solvatos foram feitas usando um Anali- sador Termogravimétrico TGA2950 Hi-Res da TA Instruments usando nitro- gênio como gás de purga a uma taxa de 75 cm3/min a uma temperatura en- tre a temperatura ambiente e a temperatura de dessolvatação (150°C - 180°C) a uma taxa de aquecimento de 20°C/min. A amostra foi então resfri- ada para a temperatura ambiente para subsequente análise por PXRD.

Exemplo 1

Ácido Cis-3-[(8'-cloro-2'-oxo-2',3'-dihidro-1'H-espirorciclohexano-1,4'- auinazolin1-5'-il)óxi1ciclobutanocarboxílico

<formula>formula see original document page 63</formula>

A uma solução do álcool da preparação 8 (50mg, 0,14mmol) em 99,25: 0,75 de acetonitrila: água (2ml) foi adicionada uma solução de ácido periódico (82mg, 0,359mmol) e óxido de cromo (VI) (1,6mg, 0,016mmol) em 99,25: 0,75 acetonitrila: água (2ml), mantendo a temperatura da reação a- baixo de 5°C. A mistura reacional foi agitada à temperatura ambiente por 18 horas. A mistura reacional foi filtrada e o resíduo foi lavado com 99,25: 0,75 acetonitrila: água, ácido clorídrico 2 N: metanol (5:1), água e metanol. O re- síduo foi secado a vácuo para dar o composto título como um sólido branco (28mg, 0,077mmol, 55%).

1H-RMN (400MHz, D6-DMSO): δ 1,17 (m, 1H), 1,40-1,65 (m, 5H), 1,79 (m, 2H), 2,16 (m, 2H), 2,48 (m, 2H), 2,72 (m, 3H), 4,64 (m, 1H), 6,43 (d, 1H), 7,0 (s, 1H), 7,21 (d, 1H), 7,90 (s, 1H), 12,26 (bs, 1H).

LRMS m/z (APCI): 365[M+H]\ 406[M+CH3CN+H]+

Exemplo 2

Ácido 7rans-3-f(8'-cloro-2'-oxo-2',3'-dihidro-1 'H-espiroíciclohexano-1.4'- quinazolin]-5'-il)oxi]ciclobutanocarboxilico

<formula>formula see original document page 64</formula>

Método A

A uma solução do álcool da preparação 11 (2,05g, 5,84 mmols) em acetonitrila contendo 0,75% de água (50ml) foi adicionada uma solução de oxido de cromo (VI) (12mg, 0,11mmol) e ácido periódico (3,33g, 14,6 mmols) e a mistura reacional foi agitada a 40°C por 96 horas. Água (100ml) foi adicionada e a suspensão foi agitada por 2 horas. O precipitado resultan- te foi recolhido por filtração, lavado com água e secado a vácuo para dar o composto título (1,90g, 5,2 mmols, 89%).

1H-RMN (400MHz, D6-DMSO): δ 1,2 (m, 1H), 1,2 (m, 2H), 1,6 (m, 2H), 1,8 (m, 2H), 2,3 (m, 2H), 2,6 (m, 2H), 3,1 (m, 1H), 3,2 (s, 1H), 4,0 (bs, 1H), 4,8 (m, 1H), 6,4 (d, 1H), 7,0 (s, 1H), 7,2 (d, 1H), 7,9 (s, 1H). LRMS m/z (APCI) 365 [MH]+

Método B

Etapa (a)

Éster ter-butílico do ácido Trans-3-[(8'-cloro-2'-oxo-2'.3'-dihidro-1'H- espiroíciclohexano-1.4'-αuinazolin]-5'-il)óxi] ciclobutanocarboxílico <formula>formula see original document page 65</formula>

O composto da preparação 27, etapa (b) (34,1 g, 130 mmols) foi suspendido em DMF (300ml) e a suspensão foi aquecida até 35°C. Carbo- nato de césio (63g, 190 mmols) foi adicionado de uma só vez. O composto da preparação 22 foi dissolvido em DMF (90 ml) e adicionado à reação. A reação foi aquecida até 90°C por 1 hora e mantida por 8 horas. A reação foi resfriada para 73°C e água (16 ml) foi adicionada enquanto a temperatura era mantida acima de 65°C. A suspensão resultante foi resfriada para 35°C, depois do que etil acetato (260 ml) foi adicionado de uma só vez. Depois de esfriar para a temperatura ambiente, a suspensão foi filtrada e o produto foi lavado com etil acetato (2 χ 100 ml). O sólido branco resultante foi secado a vácuo a 60°C por 16 horas para dar o composto título como um sólido bran- co (44,4g, 105 mmois, 82%).

1H-RMN (300MHz, CDCI3): δ 1,3 (m, 1H), 1,4 (m, 1H), 1,5 (s, 9H), 1,6 (m, 1H), 1,7 (bm, 1H), 1,8 (bm, 2H), 1,8 (bm, 1H), 2,4 (m, 2H), 2,6 (t, 2H), 2,7 (m, 2H) 3,1 (m, 1H), 3,2 (m, 1H), 4,8 (m, 1H), 5,5 (s, 1H), 6,2 (d, 1H), 6,9 (s, 1H), 7,1 (d, 1H).

LC-MS (ESI): 22,6 minutos 11,8 (%) { isômero eis } m/z 422 [MH+]; 23,1 minutos 88,2 (%) {isômero trans} m/z 422 [MH+].

Etapa (b)

Solvato com ácido acético de 7rans-3-r(8'-cloro-2'-oxo-2'.3'-dihidro-1'H-

<formula>formula see original document page 65</formula>

O produto da etapa (a) (207g, 0,492 mol) foi suspendido em áci- do acético (3100ml) e aquecido até 60°C. Ácido bromídrico a 48% (4,93 mol) foi adicionado em gotas mantendo a temperatura a 60°C. A solução foi agi- tada a 60°C por 30 minutos. Água (700 ml) foi adicionada em gotas manten- do a temperatura acima de 55°C. A suspensão foi resinada para 20°C e agi- tada por mais 30 minutos, depois do que ela foi filtrada, lavada com ácido acético:água (2000 ml) e água (1000 ml) antes de ser secada em um forno a vácuo por uma noite a 60°C para dar um sólido branco do composto título como um solvato com ácido acético (153,6g, 73,5%).

1H-RMN (400MHz, D6-DMSO): δ 1,2 (m, 1H), 1,2 (m, 2H), 1,6 (m, 2H), 1,8 (m, 2H), 1,9 (s, 3H, CH3COOH), 2,3 (m, 2H), 2,6 (m, 2H), 3,1 (m, 1H), 3,2 (s, 1H), 4,0 (bs, 1H), 4,8 (m, 1H), 6,4 (d, 1H), 7,0 (s, 1H), 7,2 (d, 1H), 7,9 (s, 1H), 9,9 (s, 1H, CH3COOH).

LC-MS (ESI): 18,0 minutos 1,65 (%) {isômero eis} m/z 365 [MH+]; 18,3 minutos 98,4 (%) {isômero trans] m/z 365 [MH+].

Verificou-se que o solvato com ácido acético cristalizava com uma estequiometria 1:1, como mostrado a partir de sua estrutura cristalina determinada pelo método de difração de raios X de cristal simples. A figura 2 mostra o padrão de difração de raios X de pó (PXRD) medido (A) para uma batelada do solvato com ácido acético acima junto o padrão de PXRD simulado (B) calculado a partir de uma estrutura de cristal simples. É possí- vel observar que as posições de pico para os dois padrões são coincidentes. Qualquer diferença na intensidade relativa e na largura dos picos de difra- ção pode ser atribuída à orientação preferida e a efeitos do tamanho de par- tícula, respectivamente. Os picos de difração de raios X 2Θ característicos e suas intensidades relativas para o solvato com ácido acético acima estão listados na Tabela 8 abaixo.

<table>table see original document page 66</column></row><table>

Tabela 8 Verificou-se que o solvato com ácido acético dessolvatava ter- micamente em torno de 115°C, como mostrado por análise termogravimétri- ca (TGA) onde é observada uma pronunciada perda de peso de -15% a esta temperatura, que é igual a um euivalente molar de ácido acético. O grá- fico de TGA está mostrado na figura 3. Com a dessolvatação, o solvato aci- ma recristaliza para a forma dessolvatada A (descrita na etapa (c) abaixo), conforme demonstrado pelos gráficos de PXRD mostrados na figura 4. Etapa (c)

Ácido trans-3-f(8'-cloro-2'-oxo-2',3'-dihidro-1'H-espirofciclohexano-1.4'- guinazolin1-5'-il)óxi1ciclobutanocarboxílico

O solvato com ácido acético da etapa (b), (157g, 369 mmols) foi suspendido em água (5200 ml) à temperatura ambiente por uma noite. A suspensão foi então filtrada e lavada com água (4 x 500 ml) antes de ser secada em um forno a vácuo por uma noite a 60°C para dar o composto título não solvatado como um sólido branco (130g, 357 mmols, 96%). 1H-RMN (400MHz, D6-DMSO): δ 1,2 (m, 1H), 1,2 (m, 2H), 1,6 (rn, 2H), 1,8 (m, 2H), 2,3 (m, 2H), 2,6 (m, 2H), 3,1 (m, 1H), 3,2 (s, 1H), 4,0 (bs, 1H), 4,8 (m, 1H), 6,4 (d, 1H), 7,0 (s, 1H), 7,2 (d, 1H), 7,9 (s, 1H). LRMS m/z (APCI) 365 [MH]+

Verificou-se também que este composto cristalizava em uma forma não solvatada (forma A) com um padrão de difração de raios X de pó (PXRD) característico mostrado na figura 5. Os picos de difração de raios X 2Θ característicos e suas intensidades relativas estão listados na Tabela 9 abaixo. Esta forma cristalina tem um ponto de fusão de 250°C determinado por calorimetria de varredura diferencial (DSC) ilustrado na figure 6.

<table>table see original document page 67</column></row><table> <table>table see original document page 68</column></row><table>

Tabela 9

Verificou-se também que o composto do exemplo 2 cristalizava como solvatos com dimetilacetamida (DMAC), piridina, tetrahidrofurano (THF) e dimetil sulfóxido (DMSO). Cada um destes solvatos tem um padrão de PXRD característico, como mostrado na figura 7.

As medidas de TGA desses solvatos revelaram que os solvatos com piridina e THF têm uma estequiometria de 1:1 (figuras 8 & 9), ao passo que o solvato com DMAC mostrou ter uma estequiometria de 2:1 de solven- te para composto (figura 10). A natureza frágil do solvato com DMSO signifi- cava que sua estequiometria não podia ser determinada.

Com a dessolvatação cada um dos solvatos com piridina, THF, DMAC e DMSO recristaliza para a forma A anidra, conforme demonstrado pela análise de PXRD mostrada nas figuras 11, 12, 13 e 14 respectivamen- te.

Exemplo 3

Ácido 3-r(8'-flúor-2'-oxo-2'.3'-dihidro-1'H-espirorciclohexano-1.4'-auinazolin1- 5'-iDoximetinciclobutanocarboxílico

<table>table see original document page 68</column></row><table>

(a) éster benzílico do ácido 3-r(8'-cloro-2'-oxo-2'.3'-dihidro-1'H- espirorciclohexano-1.4'-quinazolin1-5'-il)oximetinciclobutanocarboxílico <formula>formula see original document page 69</formula>

8'-fluor-5'-1H-espiro[ciclohexano-1 )4'-quinazolin]-2,(3'H)- ona (140mg, 0,56mmol) (preparada da maneira descrita no documento WO 2004/026818, intermediário c) e carbonato de césio (301 mg, 0,925mmol) foram combinados em DMF (2ml), uma solução do composto da preparação 15 (220mg, 0,588mmol) em DMF (2ml) foi adicionada e mistura foi agitada a 80°C por 18 horas. Água (35 ml) foi então adicionada e o produto foi extraí- do com etil acetato (2x25ml). Os extratos orgânicos combinados foram lava- dos com salmoura saturada e secados em sulfato de magnésio. Evaporação do solvente deu o composto título, uma goma castanha, como uma mistura -5:4 de isômeros eis e trans (204mg, 80%).

1H-RMN (400MHz, CDCI3): δ 1,29 (m, 1H), 1,66 (m, 7H), 2,21 (m, 2H), 2,41 (m, 2H), 2,59 (m, 2H), 2,8 & 2,90 (2x m, 1H), 3,2 (m, 1H), 3,96 & 4,00 (2x d, 2H), 5,13 (2xs,2H), 6,6 (m, 1H), 6,95 (m, 1H), 7,33 (m, 5H). LRMS m/z (ES) 453 [MH]+

(b) ácido 3-R8'-flúor-2'-oxo-2'.3'-dihidro-1 'H-espirorciclohexano-1.4'- auinazolin1-5'-il)oximetil1ciclobutanocarboxílico

Ό produto da etapa (a) (200mg, 0,442mmol) foi dissolvido em metanol (2ml), NaOH 2 M (2ml, 4,0 mmols) foi adicionado e a emulsão castanha foi agitada a 60°C por 1,5 hora, antes de esfriar. HCI 2 N (2ml, 4,0 mmols) foi adiciona- do e a suspensão resultante foi agitada por 1,5 hora. O sólido creme foi re- colhido por filtração, sendo bem lavado com água para dar o composto título (136mg, 85%) depois de secar a vácuo.

HPLC quiral em Chiralpak AD-H, 15% de isopropanol: 85% de hexano + 0,1% de ácido trifluoracético mostra uma proporção de 43:57 de isômeros (tempos de retenção 13,69 e 15,27 minutos).

1H-RMN (400MHz, CDCI3): δ 1,16 (m, 1H), 1,43 (m, 2H), 1,57(m, 3H), 1,76 (m, 2H), 2,05 (m, 2H), 2,28 (m, 2H), 2,43 (m, 2H), 2,68 (2x m, 1H), 3,03 (2x m, 1H), 3,88 & 3,97 (2x d, 2H), 6,48 (m, 1H), 6,76 (m, 1H), 6,98 (m, 1H), 8,79 (s, 1 Η), 12,06 (br, 1Η). LRMS m/z (ES) 363 [MH]+

Exemplo 4

Ácido trans-3-[(8'-ciano-2'-oxo-2',3'-dihidro-1'H-espiro[ciclohexano-1,4'- auinazolinl-5'-il)óxi1ciclobutanocarboxílico

<formula>formula see original document page 70</formula>

Pelo método do Exemplo 1, partindo do composto da preparação 16 (101 mg, 0,296mmol) e usando óxido de cromo (VI) (0,5mg, 0,005mmol) e ácido periódico (167mg, 0,733mmol) foi obtido o composto título (76mg, 72%).

1H-RMN (400MHz, D6-DMSO) δ: 1,1-1,85 (m, 8H), 2,3-2,7 (m, 6H), 3,10 (m, 1H), 4,92 (m, 1H), 6,47 (α, 1H), 7,14 (s, 1H), 7,51 (d, 1H), 8,51 (s, 1H). LC-MS: tempo de retenção = 2,49minutos (100%), LRMS (ESI) m/z 356 [MH+]

Exemplo 5

Ácido trans-3-[(8'ciano-2'-oxo-2',3'-dihidro-1'H-espiro[ciclohexano-1,4'-quinazolin]- 5'-il)oximetinciclobutanocarboxílico

<formula>formula see original document page 70</formula>

(a) éster metílico do ácido 1-[(8'-flúor-2'-oxo-2',3'-dihidro-1'H- espiro[cicÍohexano-1,4'-quinazolin1-5'-il)oximetil1ciclobutanocarboxílico

<formula>formula see original document page 70</formula>

A uma solução de 8'-flúor-5'-hidróxi-1'H-espiro[ciclohexano-1,4'- quinazolin]-2'(3'H)-ona (120mg, 0,48mmol) (descrita no documento WO 2004/026818) em DMF (ImI) à temperatura ambiente foi adicionado carbo- nato de césio (234mg, 0,72mmol) e a mistura foi agitada por 10 minutos an- tes da adição de uma solução do composto da preparação 18 (172mg, 0,58mmol) em DMF (1ml). A mistura reacional foi aquecida até 80°C por 18 horas e então resfriada para a temperatura ambiente. A mistura foi diluída com etil acetato (20 ml) e água (20 ml), a camada orgânica foi separada e a camada aquosa foi extraída com etil acetato (20 ml). As camadas orgânicas combinadas foram lavadas com água (2 χ 20 ml) e salmoura (2 χ 20 ml), secadas em sulfato de magnésio, filtradas e evaporadas a vácuo. O óleo castanho pálido foi triturado a partir de éter dietílico (10 ml) para dar o com- posto título como um sólido castanho pálido (140 mg de um solvente con- tendo 0,3 mol de DMF, 0,35mmol, 73%).

1H-RMN (400MHz, D6-DMSO): δ 1,16 (m, 1H), 1,35 (m, 2H), 1,49 (m, 3H), 1,72 (m, 2H), 1,90 (m, 1H), 2,03 (m, 3H), 2,26 (m, 2H), 2,42 (m, 2H), 3,60 (s, 3H), 4,22 (s, 2H), 6,52 (dd. 1H), 6,79 (s, 1H), 7,01 (t, 1H), 8,85 (s, 1H).

(b) ácido 1-[(8'-flúor-2'-oxo-2',3'-dihidro-1'H-espirorciclohexano-1,4'- quinazolin]-5'-il)oximetil]ciclobutanocarboxílico

A uma solução parcial do produto da etapa (a) (140mg, 0,35mmol) em metanol/água (1:1, 2ml) foi adicionado hidróxido de sódio (28mg, 0,70mmol) e a reação foi agitada a 50°C por 24 horas. A mistura foi resfriada para a temperatura ambiente e agitada por mais 6 dias antes de tratamento com uma solução aquosa 2 N de ácido clorídrico (2 ml). O sólido creme resultante foi recolhido por filtração, lavado com água e secado a vá- cuo para dar o composto título (83mg, 0,23mmol, 65%).

1H-RMN (400 MHz1 D6-DMSO): δ 1,25 (m, 1H), 1,37 (m, 2H), 1,49 (m, 3H), 1,71 (m, 2H), 1,90 (m, 1H), 2,01 (m, 3H), 2,38 (m, 4H), 4,18 (s, 2H), 6,52 (dd, 1H), 6,71 (s, 1H), 7,00 (dd, 1H), 8,78 (S, 1H), 12,43 (s, 1H). LRMS m/z (ESI) 377 [M+H]+

Exemplo 6

Ácido Trans-3-[(8'-cloro-2'-oxo-2',3'-dihidro-1'H-espiro[cicloheptil-1,4'- quinazolin]-5'-il)óxi]ciclobutanocarboxílico <formula>formula see original document page 72</formula>

(a) éster etílico do ácido Trans-3-[(8'-cloro-2'-oxo-2',3'-dihidro-1'H- espiro[cicloheptil-1,4'-quinazolin]-5'-il)óxi]ciclobutanocarboxílico

<formula>formula see original document page 72</formula>

A uma suspensão do composto da preparação 20 (100mg, 0,36mmol), carbonato de potássio (57mg, 0,41 mmol) e 18-crown-6 (110mg, 0,41 mmol) em dimetilformamida (3ml) a 80°C, foi adicionada uma solução de éster etíüco do ácido 3-(tolueno-4-Sulfonilóxi)-cis-ciciobutanocarboxíiico (preparado por um método análogo ao composto da preparação 22) (123mg, 0,41 mmol) em dimetilformamida (1ml) e a mistura reacional foi agi- tada a 80°C por 18 horas. A mistura foi resfriada para a temperatura ambi- ente e extraída duas vezes de água (30 ml) em etil acetato (2 χ 20 ml). As camadas orgânicas combinadas foram lavadas com salmoura (2 χ 20 ml), secadas em sulfato de magnésio, filtradas, e evaporadas a vácuo. O resíduo oleoso foi novamente evaporado de metanol e triturado com éter dietílico para dar o composto título como um sólido creme (75mg, 0,18mmol, 51%). 1H-RMN (400MHz, D6-DMSO): δ 1,19 (t, 3H), 1,43-1,77 (m, 10H), 2,24 (m, 2H), 2,38 (m, 2H), 2,63 (m, 2H), 3,14 (m, 1H), 4,09 (q, 2H), 4,82 (m, 1H), 6,36 (d, 1H), 7,17 (d, 1H), 7,29 (s, 1H), 8,05 (s, 1H). LRMS m/z (ESI) 407 [MH]+

(b) ácido Trans- 3-r(8'-cloro-2'-oxo-2',3'-dihidro-1 'H-espirorcicloheptil-1,4'- auinazolin1-5'-il)óxi1ciclobutanocarboxílico

A uma suspensão do composto da etapa (a) (70mg, 0,17mmol) em metanol (1ml) foi adicionada uma solução de hidróxido de sódio (14mg, 0,35mmol) em água (1 ml) e a suspensão resultante foi agitada a 40°C por 2 horas. O metanol foi removido a vácuo e o pH da solução resultante foi ajus- tado em ~1 pela adição em gotas de HCI aquoso 2 N (5ml). O sólido resul- tante foi filtrado e lavado com isopropanol (1,5ml) para dar o composto título como um sólido branco (25mg, 0,066mmol, 40%).

1H-RMN (400MHz, D6-DMSO): δ 1,43-1,77 (m, 10H), 2,23 (m, 2H), 2,34 (m, 2H), 2,61 (m, 2H), 3,06 (m, 1H), 4,81 (q, 1H), 6,36 (d, 1H), 7,17 (d, 1H), 7,29 (s, 1H), 8,05 (s, 1H), 12,35 (s, 1H). LRMS m/z (ESI) 755 [2M-H]-

Exemplo 7

Ácido_rrans-3-r(8'-cloro-2'-oxo-2'.3'-dihidro-1'H-espirorciclopentil-1,4'- auinazolinl-5'-il)óxnciclobutanocarboxílico

<formula>formula see original document page 73</formula>

(a) éster ter-butílico do ácido TraA7s-3-r(8'-cloro-2'-oxo-2'.3'-dihidro-1'H- espiroíciclopentil-1.4'-Quinazolin1-5'-il)óxi1ciclobutanocarboxílico

<formula>formula see original document page 73</formula>

(a) A uma solução parcial do composto da preparação 24 (300mg, 1,14mmol) em DMF (3ml) foi adicionado carbonato de césio (559mg, 1,72mmol) e a mistura reacional foi aquecida até 40°C por 10 minutos antes da adição de uma solução do produto bruto da preparação 22 (523mg, 1,60mmol) em DMF (3ml) de um só vez. A mistura reacional foi aquecida até 80°C por mais 9 horas e deixada esfriar para a temperatura ambiente. Água (3 ml) foi então adicionada à mistura reacional seguida de etil acetato (5 ml) e foi tentada a coleta do precipitado resultante porém sem sucesso. Dissolu- ção completa seguiu-se rapidamente e a mistura reacional foi concentrada até 2 ml a vácuo, água (5 ml) foi adicionada para induzir a cristalização e o produto resultante foi removido por filtração e secado a vácuo para dar o composto título (310mg, 0,76mmol, 67%). LC-MS indicou 10% remanescen- tes do fenol inicial. Este material foi usado na etapa (b) sem purificação pos- terior.

LRMS m/z (ESI) 407 [M+H]+

(b) ácido Trans- 3-r(8'-cloro-2'-oxo-2'.3'-dihidro-1 'H-espiroíciclopentil-l .4'- quinazolin]-5'-il)oxi]ciclobutanocarboxilico

A uma solução do produto da etapa (a) (31 Omg1 0,76mmol) em ácido acético (3ml) a 60°C foi adicionado ácido bromídrico aquoso a 48% (0,5ml) e a reação foi agitada à temperatura ambiente por 30 minutos. A mistura foi resfriada bruscamente pela adição em gotas de água (0,1 ml) até ser observada uma leve turvação. A reação foi deixada esfriar para a tempe- ratura ambiente antes de filtrar o precipitado resultante para dar um sólido castanho pálido (130 mg). Purificação foi realizada por recristaüzação em ácido acético (1,5 ml) / água (0,1 ml) para dar o composto título como um sólido esbranquiçado (35mg, 0,09mmol, 9%).

1H-RMN (400MHz, D6-DMSO): d 1,70 (m, 4H), 1,82 (m, 2H), 2,27 (m, 2H), 2,60 (m, 2H), 3,04 (m, 2H), 4,81 (m,1H), 6,35 (d, 1H), 7,18 (d, 1H), 7,30 (s, 1H), 7,98 (s, 1H), 12,14 (s, 1H). LRMS (ESI) m/z 351 [M+H]+ Preparações Preparação 1 3-[(Benziloxi)metil]2,2-diclorociclobutanona

<formula>formula see original document page 74</formula>

Pó de zinco (6,54g, 0,1 mol) foi suspendido em água (30ml) e argônio foi borbulhado pela suspensão por 15 minutos antes da adição de sulfato de cobre (II) (780mg, 3,1 mmols). A mistura reacional foi agitada à temperatura ambiente, em uma atmosfera de argônio por 30 minutos. A mis- tura foi filtrada em uma corrente de argônio e o sólido foi lavado com água (100ml), acetona (100ml) e secado a vácuo por 4 horas. O par zinco/cobre resultante foi suspendido em éter dietílico: 1,2-dimetoxietano (70ml: 10ml) em uma atmosfera de argônio e éter alil benzílico (4,6ml, 30 mmols) foi adi- cionado. Uma solução de cloreto de tricloroacetil (9ml, 81 mmols) em éter dietílico: 1,2-dimetoxietano (58ml: 7ml) foi adicionada em gotas durante 45 minutos e a mistura reacional foi aquecida até o refluxo por 48 horas. A mis- tura reacional foi filtrada através de Celite®e os sais foram lavados com éter dietílico (3x70ml). O filtrado foi evaporado a vácuo e o resíduo redissolvido em hexano (150ml). Os sólidos remanescentes foram removidos por filtra- ção e o filtrado foi lavado com uma solução aquosa saturada de carbonato ácido de sódio (2x100ml), salmoura (80ml), secado em sulfato de magnésio, filtrado e evaporado a vácuo. O material bruto foi purificado por cromatogra- fia em coluna sobre sílica gel eluindo com 10-25% hexano: éter dietílico. O composto título foi obtido como um óleo amarelo (7,03g, 27,3 mmols, 91%).

1H-RMN (CDCI3, 400MHz): δ 3,11-3,21 (m, 2H), 3,48 (m, 1H), 3,70 (m, 1H), 3,85(m, 1H), 7,35(m, 5H), 4,58(s, 2H).

Preparação 2

3-r(Benzilóxi)metinciclobutanona

<formula>formula see original document page 75</formula>

A uma solução da diclorociclobutanona da Preparação 1 (5,98g, 23,08 mmols) em metanol saturado com cloreto de amônio (90ml) foi adicio- nado pó de zinco (9,25g, 142 mmols) e a mistura reacional foi agitada à tem- peratura ambiente por 2 horas. Cloreto de amônio foi adicionado e a mistura reacional foi agitada à temperatura ambiente por mais 6 horas. A mistura foi filtrada através de Celite® e os sais foram lavados com éter dietílico (50ml). O filtrado foi concentrado a vácuo e o resíduo foi distribuído entre éter dietí- lico (200ml) e água (100ml). A mistura foi filtrada e a fase orgânica foi lavada com água, secada em sulfato de magnésio, filtrada e evaporada a vácuo. O composto título foi obtido como um óleo amarelo (3,7g, 19,5 mmols, 84%).

1H-RMN (CDCI3, 400MHz): δ 2,69 (m, 1H), 2,90 (m, 2H), 3,11 (m, 2H), 3,60 (d, 2H), 4,56 (s, 2H), 7,34 (m, 5H).

Preparação 3 Cis-3-[(benzilóxi)metil]ciclobutanol

<formula>formula see original document page 76</formula>

A uma solução da ciclobutanona da Preparação 2 (1,166g, 6,13 mmols) em tetrahidrofurano com agitação a -70°C foi adicionada em gotas uma solução 1 M de tri-sec-butilborohidreto de lítio em tetrahidrofurano (40ml), mantendo a temperatura da reação abaixo de -65°C. A reação foi deixada esquentar até a temperatura ambiente por 18 horas. A mistura rea- cional foi resfriada bruscamente com uma solução aquosa saturada de car- bonato ácido de sódio (25 ml) e em seguida resfriada para 5°C. Peróxido de hidrogênio aquoso a 30% (4 ml) foi adicionado em gotas, mantendo a tem- peratura da reação abaixo de 10°C. A mistura foi extraída de água em etil acetato (50 ml) e as fases orgânicas combinadas foram lavadas com sal- moura (30ml), secadas em sulfato de magnésio, filtradas e evaporadas a vácuo. O material bruto foi purificado por cromatografia em coluna de sílica gel eluindo com 25-50% etil acetato: pentano para dar um óleo incolor (1,05g, 5,5 mmols, 89%). 1H-RMN indicou que foi obtida uma proporção de 15:1 de isômeros eis: trans.

1H-RMN (CDCI3, 400MHz): δ 1,70 (m, 2H), 2,10 (m, 1H), 2,46 (m, 2H), 3,45 (d, 2H), 4,15 (q, 1H), 4,52 (s, 2H), 7,33 (m, 5H).

Preparação 4

Trans-3-f(benzilóxi)metinciclobutil 4-nitrobenzoato

<formula>formula see original document page 76</formula>

uma solucao de dietil azodicarboxilato (2g, 11,5 mmols) em te- trahidrofurano (5 ml) foi adicionada em gotas a uma solução agitada do ál- cool ciclobutílico da Preparação 3 (1,05g, 5,47 mmols), ácido 4- nitrobenzóico (1,82g, 10,9 mmols) e trifenilfosfina (3,016g, 11,5 mmols) em tetrahidrofurano (20 ml) a 0°C. A mistura reacional foi agitada à temperatura ambiente por 18 horas. O solvente foi evaporado a vácuo e o resíduo foi re- dissolvido em éter dietílico (30ml). O sólido remanescente foi removido por filtração e o filtrado foi evaporado a vácuo. O material bruto foi purificado por cromatografia em coluna de sílica gel eluindo com 1:10 a 1:3 de etil acetato: pentano para dar um óleo incolor (1,64g, 4,8 mmols, 88%). 1H-RMN indicou que foi obtida uma proporção de 15:1 de isômeros trans: eis. 1H-RMN (CDCI3, 400MHz): δ 2,40 (m, 4H), 2,67 (m, 1H), 3,53 (d, 2H), 4,57 (s, 2H), 5,36 (q, 1H), 7,37 (m, 5H), 8,20 (d, 2H), 8,29 (d, 2H).

Preparação 5

Trans-3-r(benzilóxi)metiHciclobutanol

<formula>formula see original document page 77</formula>

A uma solução do p-nitroéster da Preparação 4 (1,64g, 4,8 mmols) em 1,4-dioxano (35ml) foi adicionada uma solução de hidróxido de sódio (385mg, 9,6 mmols) em água (25ml) e a mistura reacional foi agitada à temperatura ambiente por 30 minutos. Ácido acético (0,4ml, 7 mmols) foi adicionado e a mistura foi concentrada a vácuo. O resíduo foi extraído de uma solução aquosa saturada de carbonato ácido de sódio em etil acetato (20ml), secado em sulfato de magnésio, filtrado e evaporado a vácuo. O composto título foi obtido como um óleo amarelo (850mg, 4,4 mmols, 92%). 1H-RMN (CDCI3, 400MHz): δ 2,08 (m, 2H), 2,20 (m, 2H), 2,47 (m, 1H), 3,47 (d, 2H), 4,39 (q, 1H), 4,52 (s, 2H), 7,34 (m, 5H).

Preparação 6

Trans-3-í(benzilóxi)metil1ciclobutil p-toluenossulfonato

<formula>formula see original document page 77</formula>

Cloreto de p-toluenossulfonil (1,18g, 6,2 mmols) foi adicionado aos poucos a uma solução agitada do ciclobutanol da Preparação 5 (850mg, 4,42 mmols) em piridina (5ml) a O0C e a mistura reacional foi agitada à tem- peratura ambiente por 18 horas. O solvente foi concentrado a vácuo e o re- síduo foi redissolvido em etil acetato (30ml), lavado com ácido clorídrico 2 N (30ml), uma solução aquosa saturada de carbonato ácido de sódio (30ml), salmoura (30ml), secado em sulfato de magnésio, filtrado e evaporado a vácuo. O material bruto foi purificado por cromatografia em coluna de sílica gel eluindo com diclorometano. O composto título foi obtido como um óleo incolor (1,53g, 4,4 mmols).

1H-RMN (CDCI3, 400MHz): δ 2,15 (m, 2H), 2,31 (m, 2H), 2,44 (s, 3H), 2,49 (m, 1H), 3,4 (d, 2H), 4,49 (s, 2H), 4,93 (q, 1H), 7,32 (m, 7H), 7,75 (d, 2H).

Preparação 7

5'-(( Cis-3-[(benzilóxi)metil]ciclobutil}óxi}-8'-cloro-1 'H-espirorciclohexano-1.4'- quinazolin1-2'(3'H)-ona

<formula>formula see original document page 78</formula>

8'-Cloro-5'-hidróxi-1 'H-espiro[ciclohexano-1 ^'-ςυίηβζοΙίη^'βΉ)- ona (preparada da maneira descrita em Bioorg. Med. Chem. Lett, (2004), 14 (18), 4627-4632) (640mg, 2,4 mmols), carbonato de potássio (400mg, 2,9 mmols) e 18-crown-6 (767mg, 2,9 mmols) foram combinados em dimetilfor- mamida (8ml) e a mistura reacional foi aquecida até 80°C. Uma solução do tosilato da Preparação 6 (1g, 2,9 mmols) em dimetilformamida foi adicionada em 3 porções e a mistura foi aquecida a 80°C por mais 18 horas. A mistura reacional foi distribuída entre etil acetato (100ml) e água (150ml) e o sólido foi recolhido por filtração. As fases foram separadas e a fase aquosa foi no- vamente extraída com etil acetato, diluída com salmoura e novamente extra- ída em etil acetato. As fases orgânicas combinadas foram concentradas a vácuo e o resíduo foi triturado com água e metanol. Os produtos brutos combinados foram purificados por cromatografia em coluna de sílica gel elu- indo com diclorometano a diclorometano: etil acetato (1:1) para obter o composto título como um sólido esbranquiçado (685mg, 1,156mmol, 64%). 1H-RMN (D6-DMSO, 400MHz): δ 1,1 (m, 1H), 1,4 (m, 2H), 1,6 (m, 3H), 1,7 (m, 2H), 1,8 (m, 2H), 2,3 (m, 1H), 2,5 (m, 4H), 3,4 (s, 2H), 4,4 (s, 2H), 4,6 (m, 1H), 6,4 (d, 1H), 7,0 (s, 1H), 7,2 (d, 1H), 7,3 (m, 5H), 7,8 (s, 1H). Preparação 8

8'-Cloro-5'-{[cis-3-(hidroximetil)ciclobutil]oxi}-1'H-espiro[ciclohexano-1.4'- quinazolin]-2'(3'H)-ona <formula>formula see original document page 79</formula>

Uma solução 2 M de complexo de tricloreto de boro-dimetil sul- feto em diclorometano (1,8ml, 3,6 mmols) foi adicionada a uma suspensão do álcool benzílico da Preparação 7 (400mg, 0,9mmol) em diclorometano (10ml) e a mistura reacional foi agitada à temperatura ambiente por uma noite. Uma solução aquosa saturada de carbonato ácido de sódio (10ml) foi adicionada e a mistura foi agitada por 5 minutos. Diclorometano e água fo- ram adicionados e o sólido resultante foi recolhido por filtração. O composto título foi obtido como um sólido branco (230mg, 0,657mmol, 73%). 1H-RMN (D6-DMSO1 400MHz): δ 1,17 (m, 1H), 1,42 (m, 2H), 1,57 (m, 3H), 1,82 (m, 4H), 2,05 (m, 1H), 2,45 (m, 4H), 3,38 (t, 2H), 4,58 (m, 2H), 6,41 (d, 1H), 6,99 (s, 1H), 7,20 (d, 1H), 7,86 (s, 1H). LRMS m/z (APCI) 351 [MH]+

Preparação 9

Cis-3-Kbenzilóxi)metinciclobutil p-toluenossulfonato

<formula>formula see original document page 79</formula>

Piridina (14,3ml, 176 mmols) e cloreto de p-toluenossulfonil (20,2g, 105,9 mmols) foram adicionados a uma solução do álcool da prepa- ração 3 (17g, 88,4 mmols) em diclorometano (90ml) com agitação a 5°C e a mistura reacional foi agitada à temperatura ambiente por 18 horas. A mistura reacional foi diluída com diclorometano (50 ml), lavada com ácido clorídrico 2 N (50ml), uma solução aquosa saturada de carbonato ácido de sódio (50ml), secada em sulfato de magnésio, filtrada e evaporada a vácuo. O ma- terial bruto foi purificado por cromatografia em coluna de sílica gel eluindo com pentano: etil acetato (19:1, 9:1, 4:1). O composto título foi obtido como um óleo incolor (24,8g, 71,6 mmols, 81%). 1H-RMN (CDCI3, 400MHz): δ 1,95 (m, 2H), 2,1 (m, 1H), 2,35 (m, 2H), 2,45 (s, 3H), 3,4 (m, 2H), 4,5 (s, 2H), 4,7 (m, 1H), 7,3 (m, 7H), 7,8 (m, 2H). LRMS m/z (ESI) 347 [MH]+ Preparação 10

5'-({Trans-3-r(benzilóxi)metinciclobuti[)óxi)-8'-cloro-1'l-l-espirorciclohexano- 1.4'-quinazolin]2'(3'H)-ona-2ϊ3Ή)-οna

<formula>formula see original document page 80</formula>

Método A

Carbonato de césio (730mg, 2,24 mmols) foi adicionado a uma suspensão agitada de e^cloro-õ^hidróxi-VH-espirotciclohexano-l,^- quinazolin]-2'(3'H)-ona (500mg, 1,87mmol) em dimetilformamida (2ml) e a mistura reacional foi aquecida até 80°C. Depois de 5 minutos foi adicionada uma solução do tosilato da Preparação 9 (71 Omg1 2,05 mmols) em dimetil- formamida (1ml) e a mistura reacional foi aquecida a 80°C por 18 horas. A mistura foi extraída de salmoura (60ml) em etil acetato (1x80ml, 2x30ml), lavada com salmoura (3x1O0ml), secada em sulfato de magnésio, filtrada e evaporada a vácuo. O composto título foi obtido como um sólido creme ligei- ramente impuro (800mg, 0,96mmol, 96%).

Método B

A uma solução de S^cloro^-hidróxi-l ^espirofcicIohexano-1,4'- quinazolin]-2'(3íH)-ona (950mg, 3,56 mmols) em dimetilformamida (12ml) com agitação a 80°C foram adicionados carbonato de potássio (590mg, 4,27 mmols) e 18-crown-6 (1,1g, 4,27 mmols). A mistura reacional foi agitada por 10 minutos antes da adição de uma solução do tosilato da Preparação 9 (1,48g, 4,27 mmols) em dimetilformamida (3ml). A mistura reacional foi a- quecida a 80°C por 24 horas. A mistura foi despejada em água: metanol (75ml: 25ml), agitada por 10 minutos e o precipitado resultante foi recolhido por filtração e lavado com metanol. O sólido foi dissolvido em diclorometano, filtrado através de Celite® e o filtrado resultante foi evaporado a vácuo pára dar o composto título como uma mistura 9:1 de isômeros trans: as{887mg, 2,0 mmols, 56%).

1H-RMN (CDCI3, 400MHz): δ 1,3 (m, 1H), 1,5-1,9 (m, 9H), 2,4 <m, 3H), 2,6 (m, 2Η), 3,5 (d, 2H), 4,6 (s, 2H), 4,75 (m, 1H), 5,85 (bs, 1H), 6,25 (d, 1H), 7,05 (bs, 1H), 7,1 (d, 1H), 7,3-7,4 (m, 5H). LRMS m/z (ESI) 441 [MH]+ Preparação 11

8'-Cloro-5'-(ífrans-3-(hidroximetil)ciclobutinóxi)-1'H-espirofciclohexano-1.4'- auinazolin1-2'(3'H)-ona

<formula>formula see original document page 81</formula>

Uma solução 2 M de complexo de tricloreto de boro-dimetil sul- feto em diclorometano (15 ml) foi adicionada em gotas a uma solução do éter benzílico da Preparação 10 (3,5g, 7,9 mmols) em diclorometano (80ml) e a mistura reacional foi agitada à temperatura ambiente por 18 horas. A mistura foi despejada em uma solução aquosa saturada de carbonato ácido de sódio (200ml) e agitada até a efervescência parar; A mistura foi extraída em diclorometano (1x200ml, 2x100ml), lavada com salmoura (50ml), secada em sulfato de magnésio, filtrada e evaporada a vácuo. O material bruto foi recristalizado a partir de acetonitrila para dar o composto título como uma proporção de 91:9 de produtos trans: eis (2,33g, 6,65 mmols, 84%).

1H-RMN (CDCI3, 400MHz): δ 1,3 (m, 1H), 1,5 (m, 2H), 1,8 (m, 5H), 2,4 (m, 4H), 2,6 (m, 3H), 3,8 (d, 2H), 4,8 (m, 1H), 5,7 (bs, 1H), 6,25 (d, 1H), 7,0 (bs, 1H), 7,1 (d, 1H). LRMS m/z (ESI) 351 [MH]+

Preparação 12

Ácido 3-metilenociclobutanocarboxílico

<formula>formula see original document page 81</formula>

Hidróxido de potássio (17,37g, 214,7 mmols) foi dissolvido em água (20ml) e etanol (20ml) foi adicionado. Quando fria esta solução foi adi- cionada à 3-metileno-ciclobutanocarbonitrila (5,0g, 53,7 mmols) e a solução resultante foi aquecida até o refluxo por 2,5 horas, deixada esfriar e evapo- rada a vácuo para deixar um sólido creme. O sólido foi dissolvido em água (15ml) e resfriado em um banho de gelo, HCI concentrado foi adicionado até atingir pH 1 e extraído com éter dietílico (3 χ 20ml). Os extratos etéreos fo- ram secados em sulfato de magnésio e evaporados a vácuo para dar o composto título como um líquido amarelo pálido (5,6g, 93%).

1H-RMN (CDCI3, 400 MHz): δ 2,95 (m, 2H), 3,02 (m, 2H), 3,17 (m, 1H), 4,82 (m, 2H) (1 próton permutável não visto).

Preparação 13

Éster benzílico do ácido 3-metilenociclobutanocarboxílico

<formula>formula see original document page 82</formula>

Uma suspensão de 1,1'-carbonildiimidazol (1,59g, 9,81 mmols) em etil acetato (5ml) foi adicionada aos poucos a uma solução do produto da Preparação 12 (1g, 8,9 mmois) em etii acetato (5mi). Foi observada uma efervescência suave. A mistura foi agitada à temperatura ambiente por cer- ca de 1,5 hora, álcool benzílico (1,11 ml, 10,7 mmols) foi adicionado e a agi- tação continuou por uma noite. A solução foi diluída com éter dietílico (20ml), lavada com água (2 χ 10ml), secada em sulfato de magnésio e eva- porada a vácuo para deixar um líquido incolor que foi purificado por filtração através de 10 g de SiO2, eluindo com diclorometano, para dar o composto título como um óleo incolor (1,246g, 69%).

1H-RMN (CDCI3, 400MHz): δ 2,92 (m, 2H), 3,02 (m, 2H), 3,16 (m, 2H), 4,80 (m, 2H), 5,15 (s, 2H), 7,36 (m, 5H). LRMS m/z (ESI) 203 [MH]+

Preparação 14

Éster benzílico do ácido 3-(hidroximetiDciclobutano carboxílico

<formula>formula see original document page 82</formula> Borano-dimetil sulfeto (0,07ml, 0,72mmol) foi diluído com THF (1 ml) e adi- cionado em gotas à temperatura ambiente a uma solução agitada do com- posto da preparação 13 (300mg, 1,48mmol) em THF (1ml). A solução inco- Ior foi agitada à temperatura ambiente por 1 hora e em seguida uma solução de perborato de sódio (145mg, 1,78mmol) em água (1ml) foi adicionada em gotas a uma taxa que controlava a efervescência. Uma vez completada a adição, a mistura foi diluída com 1,4-dioxano (1 ml) e a solução resultante foi aquecida a 60°C por 1 hora, resfriada bruscamente pela adição de água (5ml) e extraída com etil acetato (10ml). O extrato de etil acetato foi secado em sulfato de magnésio e evaporado a vácuo para dar um óleo incolor (226mg, 69%) que foi usado como tal na etapa seguinte. 1H-RMN (CDCI3, 400MHz): δ 2,05 (m, 2H), 2,33 (m, 2H), 2,45 (m, 1H), 3,11 (m, 1H), 3,62 (dd, 2H), 5,13 (d, 2H), 7,35 (m, 5H).

Preparação 15

Éster benzílico do ácido 3-(p-toluenossulfoniloximeti0ciclobutano-1- carboxilico

<formula>formula see original document page 83</formula>

Uma solução de cloreto de p-toluenossulfonil (309mg, 1,62mmol) em diclorometano (2ml) foi adicionada em gotas a uma solução agitada do composto da preparação 14 (275mg, 1,25mmol) e piridina (0,26ml, 3,25 mmols) à temperatura ambiente, e a agitação continuou por 3 dias. A mistura foi distribuída entre diclorometano (20ml) e água (2x20ml), o extrato de diclorometano foi secado em sulfato de magnésio e evaporado a vácuo para deixar um óleo incolor que foi purificado por cromatografia em coluna de sílica gel eluindo com diclorometano a 1:1 éter dietílico: diclorome- tano para obter o composto título (226mg, 48%) como um óleo incolor. 1H-RMN (CDCI3, 400MHz): δ 2,02 (m, 2H), 2,25-2,41 (m,2H), 2,44 (s, 3H), 2,55-2,75 (m, 1H), 3,07(m, 1H), 4,00 (2xd, 2H), 5,10 (d, 2H), 7,34 (m, 7H), 7,78 (m, 2H). Preparação 16 5'-{[trans-3-(hidroximetil)ciclobutil]óxi)-2'-oxo-2',3'-dihidro-1'H- espirorciclohexano-1,4'-Quinazoline]-8'-carbonitrila

<formula>formula see original document page 84</formula>

Cianeto de sódio (27,9mg, 0,57mmol) seguido de brometo de níquel (62,3mg, 0,285mmol) foram adicionados a uma suspensão do com- posto da preparação 11 (100mg, 0,285mmol) em N-metilpirrolidinona (1,5ml) e a mistura reacional foi aquecida em um reator de microondas por 10 minu- tos a 200°C. A mistura foi distribuída entre éter dietílico (2x20ml) e água (10ml), os extratos orgânicos combinados foram secados em sulfato de magnésio e concentrados a vácuo para dar o composto título como sólido iaranja páiido/vermeiho (27,8mg).

1H-RMN (400MHz, CDCI3): δ 1,4-1,85 (m, 9H), 2,3-2,7 (m, 6H), 3,73 (d, 2H), 4,83 (m, 1H), 5,60 (s, 1H), 6,33 (d, 1H), 6,98 (S, 1H), 7,36 (d, 1H). LC-MS: Tempo de retenção = 2,54 minutos (100%), LRMS m/z 342 [MH-fI

Preparação 17

Éster metílico do ácido 1-(hidroximetil)-ciclobutanocarboxílico

<formula>formula see original document page 84</formula>

A uma solução de éster dimetílico do ácido 1,1- ciclobutanodicarboxílico (disponível na Lancaster Synthesis Ltd, UK) (2,Og, 11,6 mmols) em tetrahidrofurano (20 ml) à temperatura ambiente foi adicio- nado hidreto misto de lítio e tri-fer-butoxialumínio (25,5 ml de uma solução 1 M em tetrahidrofurano, 25,5 mmols) em gotas durante 10 minutos. A mistura reacional foi aquecida até um refluxo suave por 3 horas, resfriada para a temperatura ambiente e agitada por 18 horas. A suspensão resultante foi diluída com cloreto de amônio aquoso saturado (30 ml) e agitada vigorosa- mente por 15 minutos antes de ser filtrada. O sólido foi lavado com éter die- tílico (50ml), a camada orgânica foi separada e a camada aquosa foi extraí- da com éter dietílico 50ml). Os extratos orgânicos combinados foram seca- dos em sulfato de magnésio, filtrados e evaporados a vácuo para dar o composto título como um óleo incolor (1,8g).

Preparação 18

Éster metílico do ácido 1-(p-toluenossulfoniloximetil)-ciclobutanocarboxílico

<formula>formula see original document page 85</formula>

A uma solução do composto bruto da Preparação 17 (1,6g, 11,0 mmols) em diclorometano (5ml) foi adicionado cloreto de p-toluenossulfonil (4,2g, 22,0 mmols) seguido de piridina (2,7ml, 33,0 mmols) e a solução foi agitada à temperatura ambiente por 18 horas. A mistura reacionai foi enião diluída com diclorometano (30 ml) e lavada com HCI aquoso 2 N (2 χ 25ml), bicarbonato de sódio aquoso saturado (50ml), secada em sulfato de magné- sio e evaporada a vácuo. O óleo laranja bruto (5 g) foi purificado por croma- tografia por flash sobre sílica gel eluindo com etil acetato: pentano (1:5) para dar o composto título como um óleo incolor (1,7g, 5,7 mmols, 49%). 1H-RMN (CDCI3, 400MHz): δ 1,96 (m, 4H), 2,40 (m, 2H), 2,45 (s, 3H), 3,62 (s, 3H), 4,24 (s, 2H), 7,35 (d, 2H), 7,79 (d, 2H).

Preparação 19

8'Cloro-5'-metóxi-1'H-espiroícicloheptil-1,4'-quinazolina1-2'(3'H)-ona

<formula>formula see original document page 85</formula>

Uma solução de 2-cloro-5-metoxifeniluréia (WO 02/074754, in- termediário 5) (17,9g, 89,5 mmols) em cicloheptanona (60ml, 0,51mol) foi adicionada em gotas a ácido polifosfórico (213 g) a 100°C durante 20 minu- tos (foi observada uma exoterma a 127°C) e aquecida por 1 hora. A mistura foi despejada em água (3 litros) e etil acetato (1 litro) com agitação. O sólido resultante foi recolhido por filtração, bem lavado com etil acetato e secado. O sólido seco foi dissolvido em clorofórmio, lavado com bicarbonato de só- dio aquoso, secado em sulfato de sódio e concentrado a vácuo para dar o composto título como um sólido branco (10,2g, 34 mmols, 39%).

O filtrado bifásico foi separado e a fase etil acetato foi lavada com água e salmoura, secada em sulfato de sódio e concentrada. O resíduo foi triturado com éter t-butil metílico e o sólido branco resultante foi recolhido por filtração, lavado com mais éter t-butil metílico e secado para dar uma segunda porção do composto título (9,0g, 30,6 mmols, 34%). 1H-RMN (400MHz, CDCI3): δ 1,53-1,84 (complexo, 10H), 2,46 (m, 2H), 3,81 (s, 3H), 5,33 (br, 1H), 6,46 (d, 1H), 7,03 (br, 1H), 7,18 (d, 1H). LRMS m/z 295 [M+H]+

Preparacao 20

8'-cloro-5'-hidróxi-1'H-espirorcicloheptane-1,4'-quinazolin1-2'{3'H)-ona

<formula>formula see original document page 86</formula>

A uma solução, em diclorometano (500ml), do composto da pre- paração 19 (19,Og, 64,6 mmols) foi adicionada uma solução 1 M de tribro- meto de boro em diclorometano (129ml, 129 mmols) e a mistura foi agitada à temperatura ambiente por 3 dias. A mistura reacional foi despejada em água (1,5 litros) e etil acetato (1 litro). O sólido branco foi recolhido por filtra- ção, as fases foram separadas e a fase orgânica foi secada em sulfato de sódio e concentrada a vácuo para dar um sólido castanho. O sólido branco filtrado foi recristalizado a partir de etanol para dar o composto título (7,4g, 26,4 mmols, 41%). Os licores-mães da recristalização foram combinados com o sólido castanho e a mistura foi agitada em etanol, filtrada e secada para dar uma segunda batelada do produto (7,Og, 25 mmols, 39%). 1H-RMN (400MHz, D6-DMSO): δ 1,38-1,78 (complexo, 10H), 2,26 (m, 2H), 6,40 (d, 1H), 7,02 (d, 1H), 7,20 (br, 1H), 7,80 (br, 1H), 9,84 (br, 1H). Preparação 21

Éster ter-butílico do ácido C/s-3-hidroxiciclobutilcarboxílico

<formula>formula see original document page 87</formula>

Método A

Ácido ter-butil 3-oxociclobutanocarboxílico (J. Org. Chem. (1993) 58, 110), (3,10g, 18,2 mmols) foi dissolvido em tetrahidrofurano:metanol (20:1, 30ml) e resfriado para 5°C em uma atmosfera de nitrogênio. Borohi- dreto de sódio (345mg) foi adicionado aos poucos e a solução límpida resul- tante foi agitada a 5°C por 15 minutos antes de ser diluída pela adição em gotas de água (135ml) e em seguida de etil acetato (135ml). A fase aquosa foi separada e lavada com etil acetato (2x25ml). As fases orgânicas combi- nadas foram lavadas com salmoura (20ml), secadas em sulfato de magné- sio e concentradas a vácuo para dar o composto título como um óleo leve- mente amarelo (3,05g, 17,7 mmols, 97%).

1H-RMN (CDCI3, 400MHz): δ 1,46 (s, 9H), 2,12 (m, 2H), 2,55 (m, 3H), 4,17 (m, 1H).

Análise por GC (amostra em acetonitrila): tempo de retenção 4,57 minutos (91,5% de área).

Método B

Ácido 3-oxociclobutanocarboxílico (J. Org. Chem. (1993) 58, 110), (10,Og, 88 mmols) foi dissolvido em diclorometano (20ml) e resfriado para 5°C. 4-Dimetilaminopiridina (8,6g, 70 mmols) foi adicionada aos poucos seguida de íer-butanol (13,Og, 176 mmols) de uma só vez. Uma solução 1 M de Ν,Ν'-diciclohexilcarbodiimida em diclorometano (96ml, 96 mmols) foi adi- cionada em gotas mantendo a temperatura entre 0o e 5°C. A suspensão re- sultante foi aquecida até a temperatura ambiente e agitada por uma noite. Depois da filtração, o filtrado foi adicionado em gotas a ácido clorídrico 2 M (50 ml) a 5°C. As fases resultantes foram separadas e a camada orgânica inferior foi deixada esquentar até a temperatura ambiente e lavada com á- gua (50 ml) e solução saturada de bicarbonato de sódio (50 ml). A fase or- gânica inferior foi concentrada por destilação e teve o solvente trocado por tetrahidrofurano. O volume reacional final foi de 30 ml. Metanol (6 ml) foi adicionado. Nesse ínterim borohidreto de sódio (1,65g, 44 mmols) foi sus- pendido em tetrahidrofurano (39 ml) e resfriado para 5°C. A solução de te- trahidrofurano intermediária foi adicionada em gotas à suspensão de borohi- dreto de sódio mantendo-se a temperatura entre 0o e 5°C. A reação foi en- tão agitada por 2 horas a 0-5°C. Água foi adicionada em gotas mantendo-se a temperatura entre 0°C e 5°C. Etil acetato (75ml) foi adicionado e as fases foram separadas. A camada aquosa inferior foi deixada esquentar até a temperatura ambiente e foi lavada com etil acetato (37 ml). As camadas or- gânicas combinadas foram concentradas e ainda lavadas com salmoura (37 ml) seguida de água (37 ml). A camada orgânica superior foi extraída a vá- cuo para dar o composto título como um óleo amarelo (10,1g, 58,6 mmols, 67%).

1H-RMN (CDCI3, 400MHz): d 1,46 (s, 9H), 2,12 (m, 2H), 2,55 (m, 3H), 4,17 (m, 1H).

Análise por GC: tempo de retenção 9,02 minutos (isômero eis) (87,5% de área), tempo de retenção 9,07 minutos (isômero trans) (10,0% de área).

Preparação 22

Éster ter-butílico do ácido 3-(p-toluenossulfonilóxi)-ciclobutanocarboxNico

<formula>formula see original document page 88</formula>

Método A

O composto da preparação 21 (3,02g, 17,35 mmols) foi dissolvi- do em piridina (15ml) e resfriado para 0°C em uma atmosfera de nitrogênio. Cloreto de p-toluenossulfonil (3,5g, 18,4 mmols) foi adicionado de uma só vez e a solução foi agitada à temperatura ambiente por 72 horas. A solução rosa resultante contendo material suspendido branco foi concentrada a vá- cuo, distribuída entre HCI aquoso 2 N (30ml) e etil acetato (30ml), e a cama- da aquosa foi novamente lavada com etil acetato (15ml). As camadas orgâ- nicas combinadas foram lavadas com HCI aquoso 2 N (15ml), bicarbonato de sódio aquoso saturado (15ml) e salmoura (30ml), secadas em concen- tradas a vácuo para dar o composto título como um óleo laranja (5,15g, 15,7 mmols, 90%) que solidificou com o repouso.

1H-RMN (400MHz, CDCI3): δ 1,43 (s, 9H), 2,32-2,57 (complexo, 5H), 2,46 (s, 3H), 4,73 (m, 1H), 7,35 (d, 2H), 7,79 (d, 2H). LC-MS: isômero eis tempo de retenção 21,78 minutos (81%), LRMS (ESI) m/z 327 [MH+], isômero trans tempo de retenção 22,08 minutos (7,3%), LRMS (ESI) m/z 327 [MH+].

Método B

O composto da preparação 21 (10,0, 58 mmols) foi dissolvido em piridina (25ml) e resfriado para 0°C em uma atmosfera de nitrogênio. Cloreto de p-toluenossulfonil (16,6g, 87 rnrnois) foi dissolvido em piridina (25ml) e adicionado em gotas mantendo-se a temperatura entre O0 e 5°C. A reação foi então deixada esquentar até a temperatura ambiente e agitada por uma noite.

A reação foi concentrada para deixar um sólido e suspendida em etil acetato (50 ml). A suspensão foi resfriada para 0 - 5°C, lavada com ácido clorídrico 2 M (75 ml) e as fases foram separadas. A fase aquosa infe- rior foi retro-extraída com etil acetato (50ml). As fases orgânicas combinadas foram lavadas com água (50ml) e solução de carbonato ácido de sódio (50ml). A fase orgânica foi concentrada e resfriada para 0°-5°C. N,N- Dimetiletilenodiamina (3,5g, 40 mmols) foi adicionada em gotas. A mistura reacional foi lavada com ácido clorídrico 2 M (75 ml). A fase orgânica supe- rior foi lavada com água (75ml) e salmoura (75ml). A fase orgânica foi con- centrada para deixar um óleo amarelo pálido que cristalizou com o repouso (15,5g, 47 mmols, 82%).

1H-RMN (400MHz, CDCI3): δ 1,43 (s, 9H), 2,32-2,57 (complexo, 5H), 2,46 (s, 3H), 4,73 (m, 1H), 7,35 <d, 2H), 7,79 (d, 2H). Análise por GC: tempo de retenção 15,98 minutos (isômero eis) (94,1% de área), tempo de retenção 15,82 minutos (isômero trans) (5,9% de área).

Preparação 23

8'Cloro-5'-metoxi-1H-espiro[ciclopentil-1,4'-quinazoline]-2'(3'H)-ona

<formula>formula see original document page 90</formula>

A 2-cloro-5-metoxifeniluréia (WO 02/074754, intermediário 5) (22,04g, 0,11mol) foi adicionado o reagente de Eaton (uma solução a 7,7 % em peso de oxido de fósforo (V) em ácido metanossulfônico) (440,8ml) se- guido de ciclopentanona (19,5ml, 0,22mol) e a solução resultante foi aqueci- da a 85°C por 4 horas. A reação foi resfriada para ~5°C e água foi adiciona- da com cautela mantendo-se a temperatura entre 20 e 30°C. Diclorometano (400ml in total) e salmoura (200ml) foram então adicionados e as fases fo- ram separadas. A fase aquosa foi lavada com diclorometano (2x100ml), os extratos orgânicos foram combinados e evaporados a vácuo para dar um óleo escuro que foi purificado em uma coluna de cromatografia em sílica eluindo com diclorometano:metanol (95:5 to 90:10) para dar o produto como um sólido castanho escuro. O sólido foi triturado com éter dietílico e penta- no, recolhido por filtração e secado para dar o composto título como um só- lido castanho (27,17g, 0,1 mol, 92%).

1H-RMN (400MHz, CDCI3): δ 1,7-1,8 (m, 6H), 2,4-2,5 (m, 2H), 3,7 (s, 3H), 5,75 (br s, 1H), 6,4 (d, 1H), 7,05 (s, 1H), 7,15 (d, 1H).

LRMS m/z (APCI) 267 [M+H]+

Preparação 24

8'-cloro-5'-hidróxi-1'H-espirorciclopentano-1.4'-auinazolin1-2'(3'H)-ona

<formula>formula see original document page 90</formula> Ao composto da preparação 23 (25g, 0,093mol) foi adicionado ácido acético (250ml) seguido de ácido bromídrico aquoso a 48% (207ml, 1,86mol) de uma só vez e a solução resultante foi agitada a 115°C por 7 dias. A mistura reacional foi resfriada para 100°C e água (207 ml) foi adicio- nada em gotas. A mistura foi concentrada a vácuo para precipitar um sólido castanho que foi recolhido por filtração e lavado com água (2 χ 100ml). Uma segunda porção de produto foi obtida a partir do filtrado com o repouso. As porções de produto combinadas foram secadas por suspensão com tolueno (150 ml) e remoção do solvente a vácuo três vezes para dar um sólido cinza que foi pré-absorvJdo em sílica e purificado por cromatografia em coluna elu- indo com diclorometano:metanol (98:2 a 95:5 a 80:20). As frações de produ- to foram concentradas a vácuo e o sólido resultante foi triturado com penta- no e filtrado para dar o composto título como um sólido castanho (10g, 0,0395mol, 42%).

15 1H-RMN (400MHz, D6-DMSO) δ 1,6-1,8 (m, 6H), 2,3-2,4 (m, 2H), 6,4 (d, 1H), 7,11 (d, 1H), 7,2 (s, 1H), 7,8 (s, 1H), 9,9 (s, 1H). LRMS m/z (ESI) 253 [M+H]+

Preparação 25

(2-Cloro-5-metoxifenil)uréia

<formula>formula see original document page 91</formula>

Cloridrato de 2-Cloro-5-metoxianilina (26g, 134 mmols) foi adi- cionado a ácido acético (117ml) e água (13ml). A suspensão foi aquecida até 30°C. Uma solução de cianato de potássio (13g, 161 mmols) em água (104 ml) foi adicionada em gotas. Depois de 1 hora a 40°C, a reação foi res- friada para 20°C, filtrada e lavada com água (78 ml). O produto foi secado por uma noite a vácuo a 60°C para dar o composto título como um sólido branco (21,8g, 81%).

1H-RMN (300MHz, D6-DMSO): δ 3,71 (s, 3H), 6,41 (s, 2H), 6,53 (d, 1H), 7,26 (d, 1H), 7,85 (s,1H), 7,98 (s, 1H). LC-MS (ESI): 10,9 minutos 99,4 (%), m/z 201 [MH+] Preparação 26

8'-Cloro-5'-metoxispirorciclohexano-1.4'-quinazolin1-2'(1'l-l)-ona

<formula>formula see original document page 92</formula>

O composto da preparação 25 (5,Og1 25 mmols) foi adicionado ao reagente de Eaton (solução a 7% p/p de P2O5 em ácido metanossulfôni- co) (150g) para formar uma solução que foi então aquecida até 60°C. Ciclo- hexanona (4,9g, 50 mmols) foi adicionada durante 10 minutos e a reação foi então aquecida até 80°C e mantida a essa temperatura por 1 hora. A mistu- ra reacional foi então resfriada para 5°C e água foi adicionada (150 ml). A mistura reacional foi então extraída com diclorometano (100 ml) e a fase aquosa superior foi lavada com diclorometano (2x1 Oml). As fases orgânicas combinadas foram concentradas antes da adição de 2-propanol (11 Oml). A mistura reacional foi ainda concentrada à pressão atmosférica para remover o diclorometano residual. A reação foi resfriada para cristalizar o produto que foi agitado a 5°C por uma hora. O produto foi recolhido por filtração e lavado com 2-propanol (15ml) antes de ser secado por 18 horas a 50°C para dar o composto título como um sólido branco (5,2g, 19 mmols, 76%). 1H-RMN (300MHz, D6-DMSO): δ 1,2 (m, 1H), 1,4 (m, 2H), 1,5 (m, 1H), 1,6 (m, 2H), 1,7 (m, 1H), 1,8 (m,1H), 2,4 (t, 2H), 3,79 (s, 3H), 6,64 (d, 1H), 6,97 (s, 1H), 7,26 (d,1H), 7,91 (s, 1H). LC-MS (ESI): 18,5 minutos 97,4 (%), m/z 281 [MH+] Preparação 27

8'-Cloro-5'-hidroxispirorciclohexano-1.4'-quinazolin]-2'( 1 'H)-ona

<formula>formula see original document page 92</formula> Etapa (a)

Solvato com ácido acético de 8'-Cloro-5'-hidroxispirofciclohexano-1,4'- auinazolin1-2'(1'H)-ona

O composto da preparação 26 (350g, 1,24mol) foi suspendido em ácido acético (3500ml). Ácido bromídrico (48% p/p em água) (2800ml, 24,8mol) foi adicionado à suspensão à temperatura ambiente. A suspensão foi então aquecida até o refluxo e agitada por 4 dias. A reação foi resfriada para 100°C e água (2800ml) foi adicionada em gotas por 1 hora. A suspen- são foi resfriada para 10°C, agitada por uma hora antes de ser filtrada, Iava- da com água (1100ml) e secada no forno a vácuo por uma noite para dar o composto título como um sólido branco (344g, 1,28mol, 103%).

1H-RMN (D6-DMSO, 300MHz): δ 1,2 (m, 1H), 1,4 (m, 2H), 1,5 (m, 1H), 1,6 (m, 2H), 1,7(m, 1H), 1,8(m,1 H), 1,9(s, 3H, CH3COOH), 2,4 (t, 2H), 6,45(d, 1H), 6,95(s, 1H), 7,1(d, 1H), 7,75(s, 1H), 9,9 (s, 1H, CH3COOH). LC-MS (ESI): 14,2, minutos 99,1 (%), m/z 267 [MH+].

Etapa (b)

8'-Cloro-5'-hidroxispirorciclohexano-1.4'-auinazolin1-2'(1'H)-ona

O solvato com ácido acético da etapa (a) (330g, 1,24mol) foi suspendido em acetona (730ml) à temperatura ambiente por 6 horas. O produto foi então recolhido por filtração, lavado com acetona (330 ml) antes de ser secado por 18 horas a 60°C para dar o composto título não-solvatado como um sólido branco (238g, 0,89mol, 72%).

1H-RMN (D6-DMSO, 300MHz): δ 1,2 (m, 1H), 1,4(m, 2H), 1,5(m, 1H), 1,6 (m, 2H), 1,7 (m, 1H), 1,8 (m,1H), 2,4(t, 2H), 6,45(d, 1H), 6,95(s, 1H), 7,1 25 (d,1H), 7,75 (s, 1H).

Claims (19)

1. Composto de fórmula (I): <formula>formula see original document page 94</formula> onde: m é 0,1 ou 2; X é O, S ou N-CN; R é F, Cl ou CN; A é um grupo C3-6 cicloalquileno opcionalmente substituído com um grupo C1-4 alquil; e B é uma ligação simples ou um grupo C1-2 alquileno; ou um sal farmaceuticamente aceitável, solvato, polimorfo ou pró-droga do mesmo.

2. Composto de acordo com a reivindicação 1, onde m é 1.

3. Composto de acordo com a reivindicação 1 ou com a reivindi- cação 2, onde X é O.

4. Composto de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 3, onde R é Cl.

5. Composto de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 4, onde A é um grupo ciclobutileno.

6. Composto de acordo com a reivindicação 5, onde A é um grupo 1,3-ciclobutileno.

7. Composto de acordo com a reivindicação 6, onde A é um grupo trans-Λ ,3-ciclobutileno.

8. Composto de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 7, onde B é uma ligação simples.

9. Composto selecionado de: ácido cis-3-[(8l-Cloro-2,-oxo-2',3,-dihidro-1'H-espiro[ciclohexano-1,4'- quinazolin]-5'-il)óxi]ciclobutanocarboxílico; ácido frans-3-[(8'-Cloro-2'-oxo-2',3'-dihidro-1'H-espiro[ciclohexano-1,4'- quinazolin]-5'-il)óxi]ciclobutanocarboxílico; ácido 3-[(8'-flúor-2,-oxo-2,,3,-dihidro-1 'H-espiro[ciclohexano-1,4'-quinazolin]- -5'-il)oximetil]ciclobutanocarboxílico; ácido trans-3-[(8'-ciano-2'-oxo-2',3',-dihidro-1'H-espiro[ciclohexano-1,4'- quinazolin3-5'-il)óxi]ciclobutanocarboxílico; ácido 1 -[(8'-flúor-2,-oxo-2,,3'-dihidro-1'H-espiro[ciclohexano-1 ,4'-quinazolin]- -5'-il)oximetil]ciclobutanocarboxílico; ácido trans-3-[(8'-cloro-2'-oxo-2',3'-dihidro-1'H-espiro[cicloheptil-l,4'- quinazolin]-5'-il)óxi]ciclobutanocarboxílico; ácido frans-3-[(8'-cloro-2'-oxo-2',3'-dihidro-1'H-espiro[ciclopentil-1,4'- quinazolin]-5'-il)óxi]ciclobutanocarboxílico; ou um sal farmaceuticamente aceitável, solvato, polimorfo ou pró-droga do mesmo.

10. Composicao farmaceutica compreendendo um composto de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 9, ou um sal farmaceuti- camente aceitável, solvato, polimorfo ou pró-droga do mesmo, e um carrea- dor ou diluente farmaceuticamente aceitável.

11. Composto de acordo com qualquer uma das reivindicações -1 a 9, ou um sal farmaceuticamente aceitável, solvato, polimorfo ou pró- droga do mesmo, para uso como medicamento.

12. Uso de um composto de acordo com qualquer uma das rei- vindicações 1 a 9, ou um sal farmaceuticamente aceitável, solvato, polimorfo ou pró-droga do mesmo na produção de um medicamento para o tratamento de doenças ou condições para as quais terapia por um inibidor de PDE7 é relevante.

13. Uso de acordo com a reivindicação 12, onde a doença ou condição é selecionada de dor, doenças relacionadas a células T, doenças autoimunes, esclerose múltipla, osteoporose, doença pulmonar obstrutiva crônica, asma, câncer, síndrome da imunodeficiência adquirida (AIDS), aler- gia ou doença do intestino inflamado.

14. Uso de acordo com a reivindicação 13, onde a doença ou condição é dor.

15. Uso de acordo com a reivindicação 14, onde a dor é dor neuropática.

16. Método para tratar uma doença ou condição para a qual te- rapia por um inibidor de PDE7 é relevante, compreendendo administrar uma quantidade eficaz de um composto de acordo com qualquer uma das reivin- dicações 1 a 9, ou um sal farmaceuticamente aceitável, solvato, polimorfo ou pró-droga do mesmo.

17. Método de acordo com a reivindicação 16, onde a doença ou condição é selecionada de dor, doenças relacionadas a células T, doen- ças autoimunes, esclerose múltipla, osteoporose, doença pulmonar obstruti- va crônica, asma, câncer, síndrome da imunodeficiência adquirida (AIDS), alergia ou doença do intestino inflamado.

18. Método de acordo com a reivindicação 17, onde a doença ou condicao e dor.

19. Método dé acordo com a reivindicação 18, onde a dor é dor neuropática.