BRPI0618050A2

BRPI0618050A2 - uso de peptìdeo egfrviii e vacina antitumor em combinação com outros componentes para o tratamento de tumor

Info

Publication number: BRPI0618050A2
Application number: BRPI0618050-7A
Authority: BR
Inventors: John H Sampson; Darell D Bigner; Duane Mitchell; Amy Heimberger
Original assignee: Univ Duke; Univ Texas M D Anderson Cancer Ct
Priority date: 2005-11-02
Filing date: 2006-11-02
Publication date: 2011-08-16
Also published as: ES2454990T3; RU2008120665A; MX2008005640A; KR20080091427A; AU2006312013B2; CA2628282A1; JP2009518287A; NZ567837A; US9399662B2; KR101399591B1; WO2007056061A2; EP1940461B1; CN101594877A; JP2013126994A; EP1940461A4; ZA200803759B; WO2007056061A3; CA2628282C; JP5746721B2; US20090220551A1

Abstract

<B>USO DE PEPTìDEO EGFRvIII E VACINA ANTITUMOR EM COMBINAçAO COM OUTROS COMPONENTES PARA O TRATAMENTO DE TUMOR<D> A administração simultânea de quimioterapia e imunoterapia foi considerada uma contra-indicação devido à preocupação de que a linfopenia induzida removeria a eficácia terapêutica de imunoterapia. Temozolomida foi mostrado como sendo um quimioterapêutico eficaz para pacientes com gliomas malignos e privar pacientes com glioblastoma (CEM) desse a gente para tratar com imunoterapia é controverso. Apesar do dogma convencional, foi demonstrado que tanto quimioterapia como imunoterapia podem ser fornecidas simuitaneamente sem negar os efeitos de imunoterapia, na realidade, a linfopenia induzida por temozolomida pode ser sinergista com uma vacina de peptídeo.

Description

"USO DE PEPTÍDEO EGFRvIII E VACINA ANTITUMOR EM COM-BINAÇÃO COM OUTROS COMPONENTES PARA O TRATAMENTO DE TUMOR"

A presente invenção foi feita com apoio do governodos Estados Unidos de acordo com a Concessão no. ROlCA097222 do National Institutes of health. O governo norte-americano retém, portanto, certos direitos em relação a essainvenção.

Esse pedido reivindica o beneficio do pedido provisi-onal US 60/732.741 depositado em 2 de novembro de 2005, cujoteor integral é incorporado expressamente pela presente.

CAMPO TÉCNICO DA INVENÇÃO

A presente invenção é relacionada à área de imunote-rapia de câncer. Em particular, refere-se ao aumento da res-postas a vacinas contra tumor.

ANTECEDENTES DA INVENÇÃO

Apesar da ressecção cirúrgica agressiva, terapia deradiação focada de dose elevada, e quimioterapia, pacientesdiagnosticados com GBM têm uma sobrevivência média inferiora 15 meses após o diagnóstico (Stupp e outros, Optimal roleof temozolomide in the treament of malignant gliomas. CurrNeurol Neurosci Rep. 2005 maio; 5(3): 198-206). A falha daterapia pode ser atribuída, pelo menos em parte, a um índiceterapêutico relativamente estreito de modo que tentativas emaumento de dose resulta em toxicidade neurológica ou sistê-mica limitadora de dose. O uso de imunoterapia mantém a pro-messa para o tratamento potencial desses tumores porém atérecentemente, poucos demonstraram eficácia clínica. Váriosexperimentos clínicos, com pacientes selecionados, envolven-do vacinação de pacientes com glioma com células dendríticas(DCs) e peptídeos eluidos em ácido (Ashkenazi e outros, Aselective impairment of the IL-2 system in lymphocytes ofpatients with glioblastomas: increased levei of soluble IL-2R and reduced protein tyrosine phosphorylation. Neuroimmu-nomodulation. 1997; Kolenko e outros, Tumor induced suppres-sion of T lymphocyte proliferation coincides with inhibitionof Jak3 expression and IL-2 receptor signaling: role ofsoluble products from human renal cell carcinomas. J Immu-nol. 15 de setembro de 1997; 159(6): 3057-67; Liau e outros,Dendritic cell vaccination in glioblastoma patients inducessystemic and intracranial T-cell responses modulated by thelocal central nervous system tumor microenvironment. Clin

Câncer Res. Io de agosto de 2005; 11(15); 5515-25) or an an-tigen-specific peptide (Heimberger AB, Archer GE, e outros,Dendritic cells pulsed with a tumor-specific). peptide in-duce long-lasting immunity and are effective against murineintracerebral melanoma. Neurosurgery. Janeiro de 2002:50(1): 158-64; discussão 164-6)) demonstraram promessa peloaumento do tempo de sobrevivência mediana para uma faixa de20-31 meses. Além disso, em um experimento clinico de faseII recentemente concluído utilizando uma abordagem imunote-rapêutica específica de antígeno, tempo para progressão(TTP) em pacientes GBM foi retardado para 15 meses, que estáem contraste acentuado com o padrão de cuidado consistindoem radioterapia e temozolomide que tinha um TTP de 7 meses(Stupp e outros, 2005, supra), e a sobrevivência mediana foide 29 meses (Heimberger e outros, J Transi Méd. 19 de outu-bro de 2005; 3:38 The natural history of EGFR and EGFRvIIIin glioblastoma patients.)· Cumulativamente, esses experi-mentos de imunoterapia sugerem que apesar da imunossupressãoinerente de pacientes com glioma maligno, respostas imuneseficazes podem ser geradas. Entretanto, há relutância em nãotratar pacientes GBM com alguma forma de quimioterapia dadoo padrão recentemente estabelecido de cuidado e o prognósti-co ruim geral.

Há necessidade continua na técnica de se desenvolvermétodos melhores para tratar tumores em geral e glioblasto-mas em particular.

SUMÁRIO DA INVENÇÃO

É fornecido um método para tratar um tumor em um su-jeito. Uma quantidade eficaz de tratamento de um peptideoEGFRvIII e uma quantidade eficaz de tratamento de um agentequimioterapêutico que induz linfopenia são administradas aosuj eito.

De acordo com outra modalidade é fornecido um métodopara tratar um tumor em um sujeito. Uma quantidade eficaz detratamento de um peptideo EGFRvIII conjugado com KLH é admi-nistrada ao sujeito com o tumor. Fator de estimulação de co-lônia de macrófago/granulócito (GM-CSF) também é administra-do como um adjuvante em uma quantidade eficaz simultaneamen-te com o peptideo EGFRvIII. Uma quantidade eficaz de trata-mento de um agente de alquilação também é administrada aosujeito.

De acordo ainda com outra modalidade, é fornecido ummétodo para tratar um tumor em um sujeito. Uma quantidadeeficaz de tratamento de uma vacina antitumor e uma quantida-de eficaz de tratamento de temozolomide ou um sal farmaceu-ticamente aceitável da mesma são administrados ao sujeito.

De acordo ainda com outra modalidade, é fornecido ummétodo para tratar um tumor em um sujeito. Uma quantidadeeficaz de tratamento de uma vacina antitumor e uma quantida-de eficaz de tratamento de um agente quimioterapêutico queinduz linfopenia são administrados ao sujeito.

Essas e outras modalidades que serão evidentes paraaqueles versados na técnica após leitura do relatório des-critivo fornecem à técnica métodos adicionais para tratartumores refratários a tratamento.

DESCRIÇÃO DETALHADA DA INVENÇÃO

A administração simultânea de quimioterapia e imuno-terápia tem sido considerada uma contra-indicação devido àpreocupação de que a linfopenia induzida por quimioterapiawouldablate eficácia terapêutica de imunoterapia. temozolo-mide mostrou ser um quimioterapêutico eficaz para pacientescom gliomas malignos e priva pacientes com glioblastoma(GBM) desse agente para tratar com imunoterapia é controver-so. Apesar do dogma convencional, os inventores demonstramque tanto quimioterapia como imunoterapia pode ser fornecidosimultaneamente sem negar os efeitos de imunoterapia. Na re-alidade, linfopenia induzida por temozolomide pode ser si-nergista com uma vacina de peptideo. Embora os requerentesnão desejem ser limitados por uma teoria especifica referen-te ao mecanismo de ação, a sinergia observada pode ser se-cundária à inibição de Tregs ou a falha em recuperar deTregs, que permite aumento das células CD8+ T citotóxicasefetoras. Outros mecanismos também podem estar envolvidos.

"EGFRvIII" ou "mutação do Receptor de Fator de cres-cimento epidérmico III" é uma forma de mutante conhecida doReceptor de Fator de crescimento epidérmico. Vide, por exem-plo, a patente US no. 6.503.503; vide, também as patentes USnos. 6.900.221; 6.673.602; 6.479.286; e 6.129.915. A mutaçãoque causa a produção da proteína vIII é tipicamente caracte-rizada por uma deleção em quadro específica de tumor e con-sistente de 801 pares base a partir do domínio extracelularque divide um códon e produz uma glicina nova na junção defusão.

"Peptídeo de EGFRvIII", como utilizado aqui se referea um peptídeo de comprimento apropriado, por exemplo, pelomenos 10 ou 12 aminoácidos, e até 16, 20 ou 30 aminoácidosou mais, que cobre a junção de emenda mudada da proteína EG-FRvIII correspondente. Os exemplos incluem porém não são li-mitados a: H-LEEKKGNYVVTDHS-OH, ou "PEP-3." O peptídeo EGFR-vIII pode ser a partir de (ou corresponde em seqüência a)EGFRvIII de qualquer espécie mamífera, porém é preferivel-mente humano. Seqüências do tipo selvagem específicas deEGFR são mostradas na SEQ ID NO: 6 a 9.

"Proteína portadora", como utilizado aqui, se referea uma proteína que não possui elevada homologia a uma prote-ína encontrada na espécie que está recebendo uma composiçãoda invenção e elicia uma resposta imune. Uma proteína possuielevada homologia se for pelo menos 75% idêntica, mais pre-ferivelmente pelo menos 85% idêntica ou pelo menos 90% idên-tica a uma proteína, como determinado por qualquer algoritmomatemático conhecido utilizado para a comparação de duas se-qüências de aminoácido (vide, por exemplo, Karlin e Alts-chul, 1990, Proc. Natl. Acad. Sei. USA 87: 2264-2268; Karline Altschul, 1993, Proc. Natl. Acad. Sei. USA 90; 5873-5877;Torellis e Robotti, 1994, Comput. Appl. Biosci. 10:3-5; ePearson e Lipman, 1988, Proc. Natl. Acad. Sei. 85: 2444-8).Preferivelmente, a percentagem de identidade de duas seqüên-cias de aminoácidos é determinada por buscas de proteínaBLAST com o programa XBLAST, marcação=50, comprimento de pa-lavra=3. Os exemplos de proteínas portadoras heterólogas in-cluem, porém não são limitadas a, KLH, PhoE, mLT, TraT, ougD a partir de vírus BhV-I. Vide, por exemplo, a patente USno. 6.887.472. Tais proteínas portadoras podem ser conjuga-das ou ligadas ao antígeno de tumor diretamente ou por umsegmento ligador intermediário como uma cadeia de um ou mais(por exemplo, 2, 4, 6) aminoácidos intermediários (por exem-plo, um resíduo CYS intermediário) de acordo com técnicasconhecidas.

"KLH" ou "hemocianina de molusco de buraco de fecha-dura" é uma proteína portadora conhecida com a qual outraproteína pode ser conjugada, de acordo com técnicas conheci-das. Vide, por exemplo, a patente US no. 6.911.204.

"Adjuvante" como utilizado aqui, se refere a qualquerde uma classe diversa de compostos que aumentam a eficáciaterapêutica de uma vacina que é administrada simultaneamentecom o adjuvante. Em algumas modalidades o adjuvante é um fa-tor de crescimento hematopoiético como GM-CSF. Exemplos co-muns de adjuvantes incluem, porém não são limitados a, fos-fato, óxido, hidróxido de alumínio, emulsão de óleo em águaou água em óleo baseado em, por exemplo, um óleo mineral,como Bayol Fo ou Marcol 52TM ou um óleo vegetal como acetatode vitamina E, saponinas, BCG, M. vaccae, toxóide de téta-no, toxóide de difteria, Bordetella pertussis, interleucina2, interleucina 12, interleucina 4, interleucina 7, Adjuvan-te de Freund completo, Adjuvante de Freund incompleto, e umadjuvante não específico. Vide,por exemplo, a patente US no.6.699.483.

"Fatores de crescimento hematopoiéticos" ou "HGFs"são conhecidos. Vide, por exemplo, a patente US no.6.863.885. Em geral, HGFs são citocinas de glicoproteína queregulam a proliferação e diferenciação de células progenito-ras hematopoiéticas. Os fatores de crescimento hematopoiéti-co destinados a serem utilizados na presente invenção podemser selecionados do grupo G-CSF (fator de estimulação de co-lônia de granulócito), SCF (fator de célula-tronco), GM-CSF(fator de estimulação de colônia de macrófago de granulóci-to), IL-I (interleucina-1) , IL-3, IL-6, IL-8, IL-Ilf IL-12,LIF (fator inibidor de leucemia), FGF-beta (fator de cresci-mento de fibroblasto beta), FLT3, ou uma combinação dos mes-mos. Esses fatores de crescimento podem ser adquiridos (porexemplo, R&D Systems, Minneapolis, MN) ou feitos seguindoprocedimentos expostos na técnica genericamente e em publi-cações descrevendo os fatores. Adicionalmente, o fator decrescimento hematopoiético pode ser uma forma modificada dofator ou uma proteína de fusão de fatores de crescimento he-matopoiético selecionados do grupo GCSF, SCF, GM-CSF, IL-1,IL-3, IL-6, IL-8, IL-Il, IL-12, LIF, FGF-beta, e FLTS. HGFsincluem fatores de crescimento modificados (por exemplo, mu-teinas) e proteínas de fusão, que podem ser feitas de acordocom métodos conhecidos na técnica. Vide, por exemplo, (Sam-brook e outros, Molecular Cloning: A laboratory Manual, 2aed., Cold Spring Harbor Laboratory, Cold Spring Harbor,N.Y., 1989). Fatores de crescimento heamotopoiético que es-timulam função de macrófago como GM-CSF são particularmentepreferidos. Esses podem ser utilizados como adjuvantes.

"Radioterapia de feixe externo" pode ser realizadapor fornecimento de um feixe de raios-x de energia elevadaao local do tumor do paciente. O feixe é gerado fora do pa-ciente e é alvejado no sítio do tumor. Nenhuma fonte radioa-tiva é colocada dentro do corpo do paciente. Isso pode serutilizado em combinação com qualquer outra etapa de trata-mento, de acordo com a invenção.

"Tratar" como utilizado aqui, se refere a qualquertipo de tratamento ou prevenção que transmite um benefício aum sujeito afligido com uma doença ou em risco de desenvol-ver a doença, incluindo melhora na condição do sujeito (porexemplo, em um ou mais sintomas), retardo no avanço da doen-ça, retardo no início de sintomas ou diminuição do avançodos sintomas, etc. Como tal, o termo "tratamento" também in-clui tratamento profilático do sujeito para evitar o iníciode sintomas.

Como utilizado aqui, "tratamento" e "prevenção" nãopretendem envolver cura ou total remoção de sintomas. Em vezdisso, esses se referem a qualquer tipo de tratamento quetransmite beneficio para um paciente afligido com uma doen-ça, incluindo melhora na condição do paciente (Por exemplo,em um ou mais sintomas), retardo no avanço da doença, etc.

"Quantidade eficaz de tratamento", como utilizado a-qui, significa uma quantidade do anticorpo suficiente paraproduzir um efeito desejável sobre um paciente infligido comcâncer como glioblastoma, incluindo melhora na condição dopaciente (por exemplo, em um ou mais sintomas), retardo noavanço da doença, etc.

Sujeitos necessitando de tratamento pelos métodosdescritos aqui incluem sujeitos afligidos com glioblastomaou astrocitoma, bem como sujeitos afligidos com outros tumo-res sólidos ou cânceres como de pulmão, cólon, mama, cére-bro, fígado, próstata, baço, músculo, ovário, pâncreas, ca-beça e pescoço, pele (incluindo melanoma) , etc. Sujeitos ne-cessitando de tratamento particularmente incluem sujeitosafligidos com um tumor, como um tumor de cérebro, que ex-pressa EGFRvIII. 0 tumor pode ser um tumor primário, um tu-mor metastático, ou um tumor recorrente. Sujeitos a seremtratados pelos métodos da invenção incluem, particularmente,sujeitos afligidos com um tumor expressando EGFRvIII, inclu-indo gliomas, fibrosarcomas, osteosarcomas, melanoma, tumorWilms, carcinoma de cólon, carcinomas mamário e de pulmão, ecarcinomas escamosos. Sujeitos a serem tratados pela presen-te invenção incluem, mais particularmente, sujeitos afligi-dos com tumores ou cânceres de cérebro, como glioblastoma,cálcio, monolaurato de sorbitano, oleato de trietanol amina,etc.

As composições e métodos da invenção podem incluir aadministração de um ou mais coadjuvantes. Coadjuvantes apro-priados incluem, porém não são limitados a: 1) sais de alu-mínio (alum), como hidróxido de alumínio, fosfato de alumí-nio, sulfato de alumínio, etc.; (2) formulações de emulsãode óleo em água (com ou sem outros agentes imunoestimulado-res específicos como peptídeos de muramila (vide abaixo) oucomponentes de parede de célula bacteriana) , como por exem-plo (a) MF59 (PCT publicação no. WO 90/14837), contendo 5%de Squalene, 0,5% Tween 80 e 0,5% Span 85 formulado em par-tículas de sub-micron, (b) SAF, contendo 10% de Squalene,0,4% Tween 80, 5% polímero bloqueado plurônico L121, e thr-MDP (vide abaixo) microfluidizado em uma emulsão de sub-micron ou submetido a vórtice para gerar uma emulsão de ta-manho de partícula maior, e (c) sistema adjuvante RibiTM(RAS), (Ribi Immunochem, Hamilton, MT) contendo 2% Squalene,0,2% Tween 80, e um ou mais componentes de parede de célulabacteriana a partir do grupo que consiste em monofosforili-pídeo A (MPL), dimicolato de trealose (TDM), e esqueleto deparede de célula (CWS), preferivelmente MPL+CWS (DetoxTM)(para uma discussão adicional de emulsões de óleo em água desub-micron apropriadas para uso na presente invenção, vide apublicação PCT número WO 99/30739, publicada em 24 de junhode 1999); (3) adjuvantes de saponina, como StimulonTM (Cam-bridge Bioscience, Worcester, MA) pode ser utilizado ou par-tícula gerada a partir dos mesmos como ISCOMs (complexos i-particularmente glioblastoma multiforme, e astrocitoma cístico.

A presente invenção diz respeito principalmente aotratamento de sujeitos humanos, incluindo sujeitos do sexomasculino e feminino e sujeitos neonatais, crianças peque-nas, juvenis, adolescentes, adultos e geriátricos, porém ainvenção pode ser também realizada em sujeitos animais, par-ticularmente sujeitos mamíferos como camundongos, ratos,cães, gatos, animais domésticos e cavalos para fins veteri-nários, e para fins de desenvolvimento de droga e classifi-cação de droga.

As composições farmacêuticas da invenção podem serpreparadas de acordo com técnicas conhecidas. Tipicamente,os agentes ativos são incluídos em um veículo farmaceutica-mente aceitável. Uma variedade de veículos aquosos pode serutilizada, por exemplo, água, água tamponada, solução salinaa 0,9%, glicina a 0,3%, ácido hialurônico e similares. Essascomposições podem ser esterilizadas por técnicas de esteri-lização bem conhecidas, convencionais, ou podem ser filtra-das estéreis. As soluções aquosas resultantes podem ser em-baladas para uso como se encontram, ou liofilizadas, o pre-parado liofilizado sendo combinação com uma solução estérilantes da administração. As composições podem conter substân-cias auxiliares farmaceuticamente aceitáveis como necessáriopara se aproximar a condições fisiológicas, como agentes detamponamento, agentes de ajuste de tonicidade, agentes umec-tantes e similares, por exemplo, acetato de sódio, lactatode sódio, cloreto de sódio, cloreto de potássio, cloreto demunoestimuladores); (4) Adjuvante de Freund completo (CF A)e Adjuvante de Freund Incompleta (IF A); (5) citocinas, comointerleucinas (IL-1, IL-2, etc.), fator estimulador de colô-nia de macrófago (M-CSF), fator de necrose de tumor (TNF),etc.; (6) mutantes detoxifiçados de uma toxina de ribosila-ção ADP bacteriana como toxina de cólera (CT), toxina depertussis (PT), ou uma toxina instável a calor E. coli (LT)fparticularmente LT-K63 (onde lisina é substituída para o a-minoácido do tipo selvagem na posição 63) LT-R72 (onde argi-nina é substituída para o aminoácido do tipo selvagem na po-sição 72), CT-SI09 (onde serina é substituída para o aminoá-cido do tipo selvagem na posição 109), adjuvantes derivadasa partir da família CpG de moléculas, dinucleotídeos de CpGe oligonucleotídeos sintéticos que compreendem motivos CpG(vide, por exemplo, Krieg e outros, Nature, 374:546 (1995) eDavis e outros, J. Immunol., 160:870-876 (1998)) e PT-K9/GI29 (onde lisina é substituída para o aminoácido do tiposelvagem na posição 9 e glicina substituída na posição 129)(vide, por exemplo, PCT publicação nos. W093/13202 eW092/19265); (7) outras substâncias que atuam como agentesimunoestimuladores para aumentar a eficácia da composição.Vide, por exemplo, patente US no. 6.534.064; e (8) outrosligandos para receptores semelhantes a Toll além de adjuvan-tes RIBI e CpG, como flagellin bacteriana (um adjuvante efi-caz para células CD4+ T; vide J. Immunol. 169: 3914-9 (outu-bro de 2002) .

Os agentes ativos podem ser administrados por qual-quer procedimento medicamente apropriado, por exemplo, admi-nistração intravenosa ou intra-arterial normal, injeção nofluido cerebroespinhal). Em certos casos, administração in-tradérmica, intracavidade, intratecal ou direta no tumor ouem uma artéria que abastece o tumor é vantajosa. Onde o tu-mor ou uma porção do mesmo foi anteriormente removida cirur-gicamente os agentes de tratamento podem ser administradospodem ser administrados no sitio do tumor (e particularmenteem uma cavidade encerrada ou "cavidade de ressecção" no si-tio do tumor) por injeção direta ou através de um reservató-rio pré-implantado.

A dosagem dos agentes ativos dependerá, entre outrascoisas, a condição do sujeito, a categoria especifica ou ti-po de câncer sendo tratado, a via de administração, a natu-reza do agente terapêutico empregado, e a sensibilidade dotumor ao agente terapêutico especifico.

Em geral, a dose do antigeno ou vacina do tumor, comoEGFRvIII, incluindo qualquer proteína portadora ou peptídeoconjugado com a mesma, será de 10, 100, ou 500 μg até 2 ou 3mg por sujeito, para cada dose. Doses podem ser ministradasem uma ocasião única, opcionalmente incluindo doses de acom-panhamento ou "reforço" (por exemplo, uma, duas ou três do-sagens de acompanhamento ou "reforço" ministradas em inter-valos a partir de uma a três semanas) .. Observe que doses po-dem ser divididas como administração em sítios de injeçãodiferentes, para reduzir efeitos colaterais como respostaslocais, se desejado. Onde as formulações contêm tanto anti-geno de tumor ligado (ou "conjugado") com a proteína porta-dora e antigeno de tumor livre da proteína portadora, a do-sagem calculada pode incluir tanto a quantidade de antigenode tumor tanto ligado como livre e proteína portadora.

Em geral, a dose do adjuvante como GM-CSF será tambémde 10 ou 20 μg até 500 μg, ou 1 a 2 mg por sujeito, adminis-trado no mesmo programa ou programa diferente a partir dadose do antigeno de tumor. Quando administrado no mesmo pro-grama o adjuvante pode ser administrado no mesmo veículo queo antigeno de tumor. Quando não combinado no mesmo veículo,a dose de adjuvante necessita somente ser administrada sufi-cientemente próxima em tempo à dose do antigeno de tumor pa-ra aumentar a eficácia do mesmo (por exemplo, em uma ou duashoras; no mesmo dia, etc.).

Agentes de alquilação úteis para realizar a presenteinvenção incluem, (porém não são limitados a), 1,3-bis (2-cloroetil)-1-nitrosouréia (BCNU) e derivados de tetrazina,particularmente derivados de [3H]imidazo[5,1-d] 1,2,3,5-tetrazina-4ona, como temozolomide e análogos dos mesmos (in-cluindo sais farmaceuticamente aceitáveis e pró-medicamentosdos mesmos). Tais compostos são conhecidos. Vide, por exem-pio, as patentes US nos. 6.096.724; 6.844.434; e 5.260.291.Os exemplos de agentes de alquilação úteis para realizar apresente invenção incluem agentes de alquilação de[3H]imidazo[5,1-d] -1,2,3,5-tetrazina-4-ona, particularmenteaqueles da fórmula geral:<formula>formula see original document page 16</formula>

Onde R1 representa um átomo de hidrogênio, ou um grupo dealquila, alquenila ou alquinila de cadeia reta ou ramificadacontendo até 6 átomos de carbono, cada tal grupo sendo nãosubstituído ou substituído por de um a três substituintesselecionados entre átomos de halogênio (isto é, bromo, iodoou, preferivelmente, cloro ou flúor), grupos alcóxi, (porexemplo metóxi), alquiltio, alquil suliinila e alquil sulfo-nila de cadeia reta ou ramificada contendo até 4 átomos decarbono, e grupos fenila opcionalmente substituídos, ou R1representa um grupo de cicloalquila, e R2 representa um gru-po de carbamoíla que pode carregar o átomo de nitrogênio umou dois grupos selecionados entre grupos de alquila e alque-nila de cadeia reta e ramificada, cada um contendo até 4 á-tomos de carbono, e grupos de cicloalquila, por exemplo,grupo de metil carbamoíla ou dimetil carbamoíla. Quando osímbolo R1 representa um grupo de alquila, alquenila ou al-quinila substituído por dois ou três átomos de halogênio, osátomos de halogênio acima mencionados podem ser iguais oudiferentes. Quando o símbolo R1representa um grupo de alqui-la, alquenila ou alquinila substituído por um, dois ou trêsgrupos de fenila opcionalmente substituídos os substituintesopcionais no(s) radical(is) de fenila podem ser seleciona-dos, por exemplo, entre grupos alcóxi e alquila contendo até4 átomos de carbono (por exemplo, grupo(s) metóxi e/ou meti-la) ) e o grupo nitro; o símbolo R1 pode representar, por e-xemplo, um grupo benzila ou p-metóxi benzila. Grupos de ci-cloalquila compreendidos nas definições de símbolos R1 e R2contêm 3 a 8, preferivelmente 6, átomos de carbono. Os com-postos podem ser fornecidos como sais ou pró-medicamentos,particularmente sais de metal alcalino quando R1 é H. Vide,por exemplo, a patente US no. 5.260.291.

Temozolomide, em forma de dosagem oral como cápsulasde 5 mg, 20 mg, 100 mg e 250 mg, é comercialmente disponívelcomo TEMODAR™ a partir da Schering Corporation, KenilworthNJ 07033, EUA.

Agentes de alquilação podem ser preparados em formu-lações farmaceuticamente aceitáveis no modo similar comodescrito acima, na formulação igual ou diferente que contéma vacina de tumor, por exemplo, peptídeo EGFRvIII.

Em uma modalidade preferida, o agente de alquilação éadministrado em um ciclo de doses diárias por 3, 4, 5, 6 ou7 dias consecutivos. Uma dose diária apropriada pode ser de50, 100 ou 150 mg/m2/dose, até 200, 250 ou 300 mg/m2/dose.Esse ciclo pode ser repetido, por exemplo, a cada duas,três, quatro ou cinco semanas, por até um total de 6, 8 ou10 ciclos. A primeira dose no primeiro ciclo de agente dealquilação pode ser administrada em qualquer ponto apropria-do em tempo. Em algumas modalidades a primeira dose do agen-te de alquilação é administrada até duas ou quatro semanasantes da administração do anticorpo terapêutico; em algumasmodalidades a primeira dose de agente de alquilação é admi-nistrada pelo menos duas, quatro ou seis semanas após a ad-ministração do anticorpo terapêutico. Programas adicionaisde administração podem ser incluídos onde tratamentos tera-pêuticos adicionais como radioterapia de feixe externo tam-bém são aplicados ao sujeito.

Opcionalmente, o sujeito também pode receber radiote-rapia de feixe externo. Por exemplo, radioterapia de feixeexterno pode ser utilizada para tumores de cérebro como gli-oblastoma. Radioterapia de feixe externo é conhecida e podeser realizada de acordo com técnicas conhecidas. O feixe po-de ser gerado por qualquer meio apropriado, incluindo acele-radores lineares médicos e unidades de feixe externo Cobalt60. A fonte de radiação pode ser montada em uma ponte quegira em torno do paciente de modo que uma área alvo dentrodo paciente seja irradiada a partir de direções diferentes.Antes da irradiação o tratamento é tipicamente planejado emum computador utilizando algoritmos que simulam os feixes deradiação e permitem que o pessoal médico projete a terapiade feixe. Inúmeras variações de terapia de feixe externo quepodem ser utilizadas para realizar a presente invenção serãoprontamente evidentes para aqueles versados na técnica. Vi-de, por exemplo, patentes US nos. 6.882.702; 6.879.659;

6.865.253; 6.863.704; 6.826.254; 6.792.074; 6.714.620; e5.528.650.

A terapia de feixe externo é preferivelmente adminis-trada em uma série de sessões de acordo com técnicas conhe-cidas, com as sessões iniciando preferivelmente duas a qua-tro semanas após administração do anticorpo terapêutico. Porexemplo, a radioterapia de feixe externo pode ser adminis-trada 3, 4, 5, 6 ou 7 dias por semana, durante um período dequatro, cinco, seis ou sete semanas, em uma dose diária de0,5 ou 1 Gy, até 2 ou 3 Gy, até a dose desejada total (porexemplo, 30 ou 40 Gy, até 50 ou 60 Gy) ser administrada.

A dose fornecida pode ser em uma área incluindo umamargem de tecido normal (por exemplo, ~1, 2 ou 3 cm de mar-gem em todas as direções) em torno do tumor, ou onde o tumorou uma porção do mesmo foi previamente cirurgicamente remo-vido, em torno do sítio do tumor.

Onde a radioterapia de feixe externo é empregada, opaciente pode receber um programa adicional de administraçãode agente quimioterapêutico, diferente daquele descrito aci-ma, em uma dose de um certo modo mais baixa, durante o cursoda radioterapia. Por exemplo, o paciente pode receber dosesdiárias de agente quimioterapêutico, por exemplo, agente dealquilação em uma quantidade de 25 ou 50 mg/m2/dose até 100ou 125 mg/m2/dose diariamente durante o curso da terapia defeixe externo.

Os exemplos de antigenos de tumor que podem ser uti-lizados como vacinas antitumor incluem, porém não são Iimi- tados a, cinase 4 dependente de ciclina; β-catenina; Caspa-se-8; MAGE-I; MAGE-3; Tirosinase; Idiotipo Ig de superfície;Receptor Her-2/neu; MUC-I; HPV E6 e E7; Idiotipo CD5CAMPATH-1, CD20; glicoproteína de superfície de célula CEA,mucin-1; carboidrato de superfície de célula Lewisx; CA-125; receptor de fator de crescimento epidérmico; pl85HER2; IL-2R; FAP-a; Tenascina; e metaloproteinases. EGFRvIII é exem-plar de antigenos específicos de tumor. Células que expres-sam esses antigenos podem ser utilizadas como vacinas. Pre-ferivelmente, as células são mortas antes da administração. As células podem ser fracionadas de modo que uma fração en-riquecida para o antígeno de tumor seja utilizada como umavacina. Esses antigenos são simplesmente exemplares e nãopretendem ser abrangentes dos muitos antigenos úteis conhe-cidos na técnica ou que podem ser utilizados.

Múltiplos sistemas de modelo pré-clínico demonstraramque o esgotamento de subconjuntos de células imunes pode ab-rogar a eficácia de vários tipos de abordagens imunoterapêu-ticas (Heimberger e outros, 2003) indicando que quimiotera-pia administrada durante os estágios efetores de imunotera-pia pode ser prejudicial à eficácia. Entretanto, isso nãoimpede a utilização desses agentes juntos quando apropriada-mente regulados para minimizar os efeitos cima mencionados.Além disso, embora os requerentes não desejem ser limitadospor nenhuma teoria especifica referente ao mecanismo de a-ção, a depleção de certas células efetoras, como Tregs, podeser um resultado altamente desejável de quimioterapia forne-cendo maior eficácia imunoterapêutica ou pode promover umperfil de citocina desejável para controle adequado do tumor.

A revelação acima descreve genericamente a presenteinvenção. Todas as referências reveladas aqui são expressa-mente incorporadas a titulo de referência. Uma compreensãomais completa pode ser obtida por referência aos seguintesexemplos específicos que são fornecidos aqui para fins deilustração somente, e não pretendem limitar o escopo da in-venção.

EXEMPLO 1

Para testar a hipótese de que quimioterapia e imuno-terapia podem ser administradas simultaneamente, tratou-seum paciente com um GBM recentemente diagnosticado utilizandoo padrão de cuidado, temozolomide, enquanto também adminis-tra uma vacina de peptídeo alvejando a variante de fator decrescimento epidérmico III (EGFRvIII) (Heimberger e outros,2006). A amplificação do gene de receptor de fator de cres-cimento epidérmico (EGFR), que resulta em superexpressão doEGFR, um receptor de cinase tirosina de transmembrana (Eks-trand e outros, 1991) é associada ao gene EGFR mutante, EG-FRvIII (Wikstrand e outros, 1997). Trabalho anterior mostrouque a amplificação de EGFRvIII é evidente em todos os GBMsexpressando EGFRvIII (Heimberger e outros, 2005) e GBMs semο EGFR amplificado não são positivos para proteína EGFRvIII(Aldape e outros, 2004).

Em maio de 2005, um homem caucasiano com 51 anos deidade foi avaliado após queixas de um histórico de três se-manas de dores de cabeça matutinas persistentes sem náuseaassociada. Uma imagem de ressonância magnética (MR) revelouuma lesão de aumento irregular, multi-lobular medindo 6,6 χ5,3 χ 4,3 no aspecto anterior do lobo temporal direito. Afissura de Sylvius foi arqueada para cima e havia 6 mm dedeslocamento de linha média. O paciente foi submetido a umaressecção total grossa, com histologia demonstrando um glio-blastoma bifásico e sarcoma maligno. Esses componentes foramconfirmados por imunoistoquímica positiva no componente deglioblastoma com proteína astrocítica glial-fibrilar (GFAP)e produção abundante de reticulina no componente de sarcoma.Uma mancha de tricromo confirmou a natureza bifásica do tu-mor. Coloração de imunoistoquímica de anticorpo EGFRvIII eEGFR-528 foi positiva (Heimberger e outros, 2005) com a co-loração EGFRvIII demonstrando forte reatividade difusa, en-quanto a coloração EGFR-528 era mais focai. PTEN foi forte-mente positivo e reatividade p53 estava presente em mais de30% de núcleos de tumor. O gene de reparo de DNA metiltrans-ferase (MGMT) de metilguanina-DNA foi metilado (Hegi e ou-tros, 2005).

Pós-operatoriamente o paciente foi submetido à radio-terapia de feixe externo convencional de 6000 cGy em 30 fra-ções. Temozolomide simultâneo a 75 mg/m2 foi administradodurante radioterapia (Stupp e outros, 2005). Uma imagem MRfeita ao término da radioterapia estava inalterada e não de-monstrou evidência de avanço. 0 paciente foi submetido entãoa uma leucaferese para obter células suficientes para finsde monitoração imunológica. 0 paciente recebeu três injeçõesintradérmicas (i.d.) de PEPvIII-3 (LEEKKGNYVVTDHC), conjuga-do com hemocianina de molusco de buraco de fechadura (KLH)em uma razão de 1:1 (peso/peso) (PEPvIII-KLH) (500μg/imunização) com fator de estimulação de colônia de macró-fago-granulócito (GM-CSF) (142 μg/imunização) a cada duassemanas durante um intervalo de 6 semanas (a fase de indu-ção) . Posteriormente, foi submetido a uma segunda leucafere-se para fins de monitoração imunológica. Nesse ponto, o pa-ciente começou ciclos de manutenção de temozolomide de 150mg/m2 no dia 1-5. Iniciando no dia 19 de cada ciclo, conta-gens completas de sangue foram monitoradas em dias alterna-dos até que houve evidência de recuperação do nadir de con-tagem de Leucócito. Na recuperação nadir, o paciente recebeua vacina i.d., normalmente no 23° dia (faixa = 19 - 25) deseu ciclo de 28 dias.

EXEMPLO 2

Teste de hipersensibilidade do tipo retardado (DTH) aantigenos de recall comuns e os componentes da vacina foramavaliados antes do inicio das vacinas, após a 3a vacina emensalmente dura seu ciclo de manutenção no 26° dia. Antesdo inicio da vacina e após o término de radiação e temozolo-mide simultâneo o paciente era somente reativo a Cândida enão teve reação DTH aos componentes da vacina, PEPvIII ouKLH. Entretanto, após a 3a vacinação, o paciente se tornouresponsivo ao componente KLH da vacina. Após a 10a vacina-ção, e enquanto recebe temozolomide simultânea, ele se tor-nou reativo ao componente PEPvIII da vacina. Para compara-ção, dos pacientes que receberam a vacina sem temozolomideciclado (n=22), menos de 15% se tornou reativo ao componentePEPvIII. Após o acompanhamento mais recente e administraçãoda 14a vacinação, o paciente foi acentuadamente endurecido(16 χ 15 mm) no sitio DTH PEPvIII. Isso indicaria que temo-zolomide não influenciou negativamente o desenvolvimento derespostas de DTH nesse paciente especifico.

EXEMPLO 3

Para determinar se respostas humorais especificas dePEPvIII foram induzidas, soro foi obtido a partir do pacien-te mensalmente e foi armazenado a -20°C antes da análise emum ensaio PEPvIII-Dynabead®. PEPvIII ou o domínio extracelu-Iar de EGFRvIII (EGFRvIII-ECD) foi covalentemente ligado amicroesferas magnéticas que foram utilizadas para capturaranticorpos específicos a partir do soro do paciente (Invi-trogen, Carlsbad, CA) de acordo com as instruções do fabri-cante. Todas as amostras de soro são inicialmente diluídas1:10 com solução salina tamponada com fosfato (PBS) + 0,5%albumina de soro bovino (BSA) e ensaiadas em triplicata. Pa-ra determinar especificidade, um conjunto adicional de amos-tras foi pré-incubado por 15 minutos com 500 ng do peptídeoPEPvIII para bloquear qualquer anti-PEPvIII que seria captu-rado pelas Dynabeads conjugadas com PEPvIII. Padrões de an-ticorpo anti-PEPvIII quimérico de humano-camundongo (81-0,llng/ml) são feito com cada ensaio juntamente com contro-Ies positivo (amostra de paciente ACT4) e negativos (soro dedoador normal). 0 citômetro de fluxo foi padronizado com mi-crocontas PE-FACS e Dynabeads PEPvIII não reagido. Antes daadministração da vacina, não houve resposta humoral detectá-vel ao EGFRvIII. Após a vacinação, houve um aumento signifi-cativo em respostas IgG a EGFRvIII a uma intensidade fluo-rescente média (MFI) de 13 e as respostas humorais forammantidas apesar de administração de temozolomide.

EXEMPLO 4

Para determinar se respostas citotóxicas CD8+ foraminduzidas a PEPvIII, as células mononucleares de sangue pe-riférico do paciente (PBMCs) de cada leucaferese e PBMCsmensais foram estimuladas com toxóide de tétano(QYIKANSKFIGITE) (SEQ ID NO: 5) (10 μg/ml) (controle positi-vo), PEP-I (HDTVYCVKGNKELE) (SEQ ID NO: 4) (10 μg/mL), (con-trole negativo), PEPvIII (10 μg/mL) (componente de vacina),ou KLH (10 μg/ml) (componente de vacina). Um controle nega-tivo incluiu células não estimuladas. Os controles de isoti-po correspondentes foram utilizados para cada condição, in-cluindo secreção γ-interferon (IFN). Todas as cavidades fo-ram incubadas por 6 h a 37°C com Golgiplug/TM (Pharmingem,San Diego, CA), um inibidor de transporte de proteína quebloqueia o processo de transporte intracelular. Após incuba-ção, as células foram lavadas e bloqueadas para ligação nãoespecífica utilizando anticorpo anti-CD16 purificado (Phar-mingem) e soro de coelho (Pharmingem). As células foram co-loridas para marcadores de superfície (CD3, CD4, CD8) porincubação com o isotiocianato de fluoresceína apropriado eanticorpo primário rotulado de fluorescência rotulado comaloficocianina ou controle de isotipo (Pharmingen). As célu-las foram então fixadas com Cytofix/Cytoperm (BD Bioscien-ces, San Jose, CA) e então incubadas com anticorpo rotuladocom fiocoeritrina contra γ-IFN ou o controle de isotipo. A-pós coloração, as células foram lavadas e um mínimo de 1 χ10"5 eventos gated, vivos foram avaliados por citometria defluxo em um citômetro de fluxo FACSCalibur utilizando soft-ware Cellquest (BD Immunocytometry systems, San Jose, CA).Antes de receber a vacina o paciente teve resposta mínimanos controles não estimulados e com o controle negativo PEP-1. Após receber a vacina, e durante administração do temozo-lomide, houve um aumento em células CD8+ T que produzem γ-IFN específico de PEPvIII.

Exemplo 5

Para caracterizar a resposta das várias populações decélulas T durante um ciclo de temozolomide (5/21 programa) evacina simultaneamente administrada (19° dia nesse exemplo),os requerentes obtiveram sangue periférico nos dias 0, 3, 5,12, 19, 23, 25 e 26. Por citometria de análise de fluxo, in-vestigaram a percentagem dos subconjuntos de célula CD8+ T ecélulas T reguladoras CD4+CD25+DoxP3+ durante um ciclo deiomunoquimioterapia. Todos os anticorpos monoclonais conju-gados com fluorescência (mAb) (PerCP-Cy5.5-CD3, FITC-CD8,APC-CD4 e PE-CD25) foram adquiridos da BD Biosciences excetoo mAb rotulado FITC de FoxP3 foi feito por eBioscience. Acoloração intracelular e superficial de células de sangueperiférico foi executada de acordo com os procedimentos pa-drão fornecidos pelo fabricante. Os resultados foram anali-sados por citômetro de fluxo FACSCalibur utilizando softwareCellquest Pro (BD Biosciences). Em contraste com o declíniodo subconjunto de células CD8+ T, a população Treg começou aaumentar após a administração de temozolomide por 3 dias eatingiu seu pico (0,9% de células CD4+ T total) no 12° dia.0 Tregs começou então a cair até o 23° dia enquanto os núme-ros de célula CD8§ T começaram a se recuperar. Ao término docurso, as populações tanto de célula CD8§ T como Treg se re-cuperaram a níveis de pré-tratamento. A vacinação resultouem um reforço de células T citotóxicas CD8+ durante um perí-odo de Tregs relativamente diminuídos.

Exemplo 6

Durante os últimos 15 meses, o paciente foi submetidoa exame físico completo e imageamento de MR do cérebro emintervalos de dois meses. Seu exame permaneceu estável e i-mageamento de MR falhou em demonstrar qualquer evidência derecorrência. Ele trabalha tempo integral sem impairment etem um status de desempenho Karnofsky (KPS) de 100% e marca-ção de exame de estado mini-mental de 30/30. Seu exame neu-rológico é totalmente normal.

Esse relatório sugere que a administração simultâneade quimioterapia com imunoterapia pode ser possível se acronometragem dos tratamentos for cuidadosamente monitorada.

No caso relatado, há várias descobertas que indicam que aco-administração do temozolomide não afetou a eficácia davacina PEPvIII-KLH. Primeiramente, o paciente não tem avançoem 15 meses de acompanhamento. Esse foi o TTP mediano parapacientes (n=22) que receberam somente terapia de vacinação.Desse modo, a eficácia clinica não parece ter sido afetadaem comparação com pacientes que não receberam a temozolomidesimultaneamente administrada. 0 paciente desenvolveu respos-tas de DTH ao componente de PEPvIII da vacina, mesmo enquan-to recebe temozolomide, ao passo que somente 15% dos pacien-tes que recebem a vacina somente desenvolveram esses tiposde respostas. Além disso, a área de reatividade de DTH dePEPvIII continuou a aumentar com vacinações subseqüentes. Emterceiro lugar, as respostas especificas de IgG a PEPvIIIforam induzidas após a 3a vacinação e foram mantidas enquan-to recebe a temozolomide simultânea. Em quarto lugar, as cé-lulas T que produzem CD3+CD8+y-IFN não parecem ser diminuí-das durante os ciclos de temozolomide simultaneamente admi-nistrada porém parecem aumentadas durante a temozolomide si-multaneamente administrada. Finalmente, seguimos as popula-ções de célula CD8+ T e Treg durante um único ciclo de tra-tamento e verificamos que parece haver uma janela de capaci-dade de resposta de efetor T (célula T CD8§) com uma diminu-ição relativa de Tregs. Desse modo, a administração simultâ-nea de temozolomide e vacina não parece diminuir as respos-tas imunes induzidas, no modo no qual descrevemos.

O uso de Iinfodepleção para aumentar as respostas i-munológicas foi descrito em sistemas de modelo murino (Be-renson e outros, 1975; Cheever e outros, 1980; North, 1982)como em pacientes humanos com câncer (Dudley e outros, 2002;Dudley e outros, 2005). Múltiplos mecanismos foram propostoscomo sendo responsáveis por essas respostas antitumor aumen-tadas. Linfodepleção pode remover competição na superfíciede células que apresentam antígeno (Kedl e outros, 2000),aumentar a disponibilidade de citocinas como IL-7 e IL-15,que aumentam a atividade de células T (Gattinoni e outros,2005) e esgotar Tregs inibidor imune (Anthony e outros,2005). A quimioterapia poderia também aumentar potencialmen-te a capacidade de resposta imunológica pelo aumento de ini-ciação imune e apresentação (Nowak e outros, 2002), aumentode expressão de antígeno (Aquino e outros, 1998), e aumentode alvos para erradicação imune (Ciusani e outros, 2002).Quando uma vacinação é administrada durante o nadir de temo-zolomide, os requerentes levantaram a hipótese de que podehaver uma resposta efetora aumentada. Aquelas respostas efe-toras podem ser secundárias a um retardo na recuperação deTregs desse modo permitindo maior expansão clonotípica doque teria sido de outro modo vista sem temozolomide. Issofoi certamente observado durante um ciclo de quimioimunote-rapia monitorado nesse paciente específico. O retardo de re-cuperação de Tregs em relação às células T efetoras não ésurpreendente dados os papéis fisiológicos normais de res-postas de células imunes. Para montar uma resposta imune,efetores T necessitariam se tornar ativados, proliferar emediar sua resposta. Se isso permaneceu não verificado pormecanismos homeostáticos como Tregs, então a proliferação decélula T incrementaria sem diminuição. Portanto, o retardode resposta Treg permitiria respostas imunes eficazes porémregulação/modulação descendente eventual dessa resposta.Em conclusão, o relatório desse caso sugere que a co-administração de quimioterapia e imunoterapia não pode serprejudicial.

Referências

A revelação de cada referência citada é expressamenteincorporada aqui.

Hatano, M., J. Eguchi e outros (2005). "EphA2 as aglioma-associated antigen: a novel target for glioma vac-cines." Neoplasia 7(8): 717-22.

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Xie, D., Y.X. Zeng, e outros (2006). "Expression ofcytoplasmic and nuclear survivin in primary and secondaryhuman glioblastoma." Br J Câncer 94(1): 108-114.LISTAGEM DE SEQÜÊNCIA

<110> Sampson, JohnBigner, DarellHeimberger, ArnyMitchell, Duane

<120> IMUNOTERAPIA E QUIMIOTERAPIA SIMULTÂNEAS

<130> 000250.00039

<150> 60/732741<151> 2005-11-02

<160> 9

<170> FastSEQ for Windows Version 4.0

<210> 1<211> 14<212> PRT

<213> Homo sapiens<400> 1

Leu Glu Glu Lys Lys Gly Asn Tyr Val Val Thr Asp His Ser1 5 10

<210> 2<211> 13<212> PRT

<213> Honio sapiens.<400> 2

Leu Glu Glu Lys Lys Gly Asn Tyr Val Val Thr Asp His15 10

<210> 3

<211> 14

<212> PRT

<213> Homo sapiens

<400> 3

Leu Glu Glu Lys Lys Gly Asn Tyr Val Val Thr Asp His Cys1 5 10

<210> 4

<211> 14

<212> PRT

<213> Homo sapiens

<400> 4

His Asp Thr Val Tyr Cys Val Lys Gly Asn Lys Glu Leu Glu1 5 10

<210> 5<211> 14<212> PRT<213> Homo sapiens<400> 5

Gln Tyr Ile Lys Ala Asn Ser Lys Phe Ile Gly Ile Thr Glu1 5 10

<210> 6<211> 1210<212> PRT<213> Homo sapiens

<400> 6

Met Arg Pro Ser Gly Thr Ala Gly Ala Ala Leu Leu Ala Leu Leu Ala

1 5 10 15

Ala Leu Cys Pro Ala Ser Arg Ala Leu Glu Glu Lys Lys Val Cys Gln

20 25 30

Gly Thr Ser Asn Lys Leu Thr Gln Leu Gly Thr Phe Glu Asp His Phe

35 .40 45

Leu Ser Leu Gln Arg Met Phe Asn Asn Cys Glu Val Val Leu Gly Asn

50 55 60

Leu Glu Ile Thr Tyr Val Gln Arg Asn Tyr Asp Leu Ser Phe Leu Lys65 70 75 80

Thr Ile Gln Glu Val Ala Gly Tyr Val Leu Ile Ala Leu Asn Thr Val

85 90 95

Glu Arg Ile Pro Leu Glu Asn Leu Gln Ile Ile Arg Gly Asn Met Tyr

100 105 110

Tyr Glu Asn Ser Tyr Ala Leu Ala Val Leu Ser Asn Tyr Asp Ala Asn

115 120 125

Lys Thr Gly Leu Lys Glu Leu Pro Met Arg Asn Leu Gln Glu Ile Leu

130 135 140

His Gly Ala Val Arg Phe Ser Asn Asn Pro Ala Leu Cys Asn Val Glu145 150 155 160

Ser Ile Gln Trp Arg Asp Ile Val Ser Ser Asp Phe Leu Ser Asn Met

165 170 175

Ser Met Asp Phe Gln Asn His Leu Gly Ser Cys Gln Lys Cys Asp Pro

180 185 190

Ser Cys Pro Asn Gly Ser Cys Trp Gly Ala Gly Glu Glu Asn Cys Gln

195 200 205

Lys Leu Thr Lys Ila Ile Cys Ala Gln Gln Cys Ser Gly Arg Cys Arg

210 215 220

Gly Lys Ser Pro Ser Asp Cys Cys His Asn Gln Cys Ala Ala Gly Cys225 230 235 240

Thr Gly Pro Arg Glu Ser Asp Cys Leu Val Cys Arg Lys Phe Arg Asp

245 250 255

Glu Ala Thr Cys Lys Asp Thr Cys Pro Pro Leu Met Leu Tyr Asn Pro

260 265 270

Thr Thr Tyr Gln Met Asp Val Asn Pro Glu Gly Lys Tyr Ser Phe Gly

. 275 280 285

Ala Thr Cys Val Lys Lys Cys Pro Arg Asn Tyr Val Val Thr Asp His

290 295 300

Gly Ser Cys Val Arg Ala Cys Gly Ala Asp Ser Tyr Glu Met Glu Glu305 310 315 320

Asp Gly Val Arg Lys Cys Lys Lys Cys Glu Gly Pro Cys Arg Lys Val

325 330 335

Cys Asn Gly Ile Gly Ile Gly Glu Phe Lys Asp Ser Leu Ser Ile Asn

340 .345 350

Ala Thr Asn Ile Lys His Phe Lys Asn Cys Thr Ser Ile Ser Gly Asp

.355 360 365

Leu His Ile Leu Pro Val Ala Phe Arg Gly Asp Ser Phe Thr His Thr

370 375 380

Pro Pro Leu Asp Pro Gln Glu Leu Asp Ile Leu Lys Thr Val Lys Glu385 390 395 400

Ile Thr Gly Phe Leu Leu Ile Gln Ala Trp Pro Glu Asn Arg Thr Asp405 410 415Leu His Ala Phe Glu Asn Leu Glu Ile Ile Arg Gly Arg Thr Lys Gln 420 425 430 His Gly Gln Phe Ser Leu Ala Val Val Ser Leu Asn Ile Thr Ser Leu435 440 445 Gly Leu Arg Ser Leu Lys Glu Ile Ser Asp Gly Asp Val Ile Ile Ser450 455 4 60 Gly Asn Lys Asn Leu Cys Tyr Ala Asn Thr Ile Asn Trp Lys Lys Leu465 470 475 480Phe Gly Thr Ser Gly Gln Lys Thr Lys Ile Ile Ser Asn Arg Gly Glu 485 490 495Asn Ser Gys Lys Ala Thr Gly Gln Val Cys His Ala Leu Cys Ser Pro 500 505 510 Glu Gly Cys Trp Gly Pro Glu Pro Arg Asp Cys Val Ser Cys Arg Asn515 520 525 Val Ser Arg Gly Arg Glu Cys Val Asp Lys Cys Asn Leu Leu Glu Gly530 535 540 Glu Pro Arg Glu Phe Val Glu Asn Ser Glu Cys Ile Gln Cys His Pro545 550 555 560Glu Cys Leu Pro Gln Ala Met Asn Ile Thr Cys Thr Gly Arg Gly Pro 565 570 575Asp Asn Cys Ile Gln Cys Ala His Tyr Ile Asp Gly Pro His Cys Val 580 585 590 Lys Thr CyS Pro Ala Gly Val Met Gly Glu Asn Asn Thr Leu Val Trp595 600 605 Lys Tyr Ala Asp Ala Gly His Val Cys His Leu Cys His Pro Asn Cys610 615 620 Thr Tyr Gly Cys Thr Gly Pro Gly Leu Glu Gly Cys Pro Thr Asn Gly 625 630 635 640Pro Lys Ile Pro Ser Ile Ala Thr Gly Met Val Gly Ala Leu Leu Leu 645 650 655Leu Leu Val Val Ala Leu Gly Ile Gly Leu Phe Met Arg Arg Arg His 660 665 670 Ile Val Arg Lys Arg Thr Leu Arg Arg Leu Leu Gln Glu Arg Glu Leu675 680 685 Val Glu Pro Leu Thr Pro Ser Gly Glu Ala Pro Asn Gln Ala Leu Leu690 695 700 Arg Ile Leu Lys Glu Thr Glu Phe Lys Lys Ile Lys Val Leu Gly Ser705 710 715 720Gly Ala Phe Gly Thr Val Tyr Lys Gly Leu Trp Ile Pro Glu Gly Glu 725 730 735Lys Val Lys Ile Pro Val Ala Ile Lys Glu Leu Arg Glu Ala Thr Ser 740 745 750 Pro Lys Ala Asn Lys Glu Ile Leu Asp Glu Ala Tyr Val Met Ala Ser755 760 765 Val Asp Asn Pro His Val Cys Arg Leu Leu Gly Ile Cys Leu Thr Ser770 775 780 Thr Val Gln Leu Ile Thr Gln Leu Met Pro Phe Gly Cys Leu Leu Asp785 790 795 800Tyr Val Arg Glu His Lys Asp Asn Ile Gly Ser Gln Tyr Leu Leu Asn 805 810 815Trp Cys Val Gln Ile Ala Lys Gly Met Asn Tyr Leü Glu Asp Arg Arg 820 825 830 Leu Val His Arg Asp Leü Ala Ala Arg Asn Val Leu Val Lys Thr Pro835 840 845 Gln His Val Lys Ile Thr Asp Phe Gly Leu Ala Lys Leu Leu Gly Ala 850 855 860 Glu Glu Lys Glu Tyr His Ala Glu Gly Gly Lys Val Pro Ile Lys Trp865 870 875 880Met Ala Leu Glu Ser Ile Leu His Arg Ile Tyr Thr His Gln Ser Asp 885 8 90 895Val Trp Ser Tyr Gly Val Thr Val Trp Glu Leu Met Thr Phe Gly Ser 900 905 910 Lys Pro Tyr Asp Gly Ile Pro Ala Ser Glu Ile Ser Ser Ile Leu Glu915 920 925

Lys Gly Glu Arg Leu Pro Gln Pro Pro Ile Cys Thr Ile Asp Val Tyr

930 935 940

Met Ile Met Val Lys Cys Trp Met Ile Asp Ala Asp Ser Arg Pro Lys945 950 955 960

Phe Arg Glu Leu Ile Ile Glu Phe Ser Lys Met Ala Arg Asp Pro Gln

965 970 .975

Arg Tyr Leu Val lie Gln Gly Asp Glu Arg Met His Leu Pro Ser Pro

980 985 990

Thr Asp Ser Asn Phe Tyr Arg Ala Leu Met Asp Glu Glu Asp Met Asp

995 1000 1005

Asp Val Val Asp Ala Asp Glu Tyr Leu Ile Pro Gln Gln Gly Phe Phe

1010 1015 1020

Ser Ser Pro Ser Thr Ser Arg Thr Pro Leu Leu Ser Ser Leu Ser Ala1025 1030 1035 1040

Thr Ser Asn Asn Ser Thr Val Ala Cys Ile Asp Arg Asn Gly Leu Gln

1045 1050 1055

Ser Cys Pro Ile Lys Glu Asp Ser Phe Leu Gln Arg Tyr Ser Ser Asp

1060 1065 1070

Pro Thr Gly Ala Leu Thr Glu Asp Ser Ile Asp Asp Thr Phe Leu Pro

1075 1080 1085

Val Pro Glu Tyr Ile Asn Gln Ser Val Pro Lys Arg Pro Ala Gly Ser

1090 1095 1100

Val Gln Asn Pro Val Tyr His Asn Gln Pro Leu Asn' Pro Ala Pro Ser1105 1110 1115 1120

Arg Asp Pro His Tyr Gln Asp Pro His Ser Thr Ala Val Gly Asn Pro

1125 1130 1135

Glu Tyr Leu Asn Thr Val Gln Pro Thr Cys Val Asn Ser Thr Phe Asp

1140 1145 1150

Ser Pro Ala His Trp Ala Gln Lys Gly Ser His Gln Ile Ser Leu Asp

1155 1160 1165

Asn Pro Asp Tyr Gln Gln Asp Phe Phe Pro Lys Glu Ala Lys Pro Asn

1170 1175 1180

Gly Ile Phe Lys Gly Ser Thr Ala Glu Asn Ala Glu Tyr Leu Arg Val1185 1190 1195 1200

Ala Pro Gln Ser Ser Glu Phe Ile Gly Ala1205 1210

<210> 7<211> 628<212> PRT

<213> Horao sapiens<400> 1

Met Arg Pro Ser Gly Thr Ala Gly Ala Ala Leu Leu Ala Leu Leu Ala

1 5 10 15

Ala Leu Cys Pro Ala Ser Arg Ala Leu Glu Glu Lys Lys Val Cys Gln

20 25 30

Gly Thr Ser Asn Lys Leu ThrGln Leu Gly Thr Phe Glu Asp His Phe

35 40 45

Leu Ser Leu Gln Arg Met Phe Asn Asn. Cys Glu Val Val Leu-Gly Asn

50 55 60

Leu Glu Ile Thr Tyr Val Gln Arg Asn Tyr Asp Leu Ser Phe Leu Lys65 70 75 80

Thr Ile Gln Glu Val Ala Gly Tyr Val Leu Ile Ala Leu Asn Thr Val

85 90 95

Glu Arg Ile Pro Leu Glu Asn Leu Gln Ile Ile Arg Gly Asn Met Tyr

100 105 110

Tyr Glu Asn Ser Tyr Ala Leu Ala Val Leu Ser Asn Tyr Asp Ala Asn

115 120 125

Lys Thr Gly Leu Lys Glu Leu Pro Met Arg Asn Leu Gln Glu Ile Leu

130 135 140

His Gly Ala Val Arg Phe Ser Asn Asn Pro Ala Leu Cys Asn Val Glu145 150 155 160Ser Ile Gln Trp Arg Asp Ile Val Ser Ser Asp Phe Leu Ser Asn Met 165 170 175Ser Met Asp Phe Gln Asn His Leu Gly Ser Cys Gln Lys Cys Asp Pro 180 185 190Ser Cys Pro Asn Gly Ser Cys Trp Gly Ala Gly Glu Glu Asn Cys Gln195 200 205Lys Leu Thr Lys Ile Ile Cys Ala Gln Gln Cys Ser Gly Arg Cys Arg210 215 220 Gly Lys Ser Pro Ser Asp Cys Cys His Asn Glri Cys Ala Ala Gly Cys225 230 235 240Thr Gly Pro Arg Glu Ser Asp Cys Leu Val Cys Arg Lys Phe Arg Asp 245 250 255Glu Ala Thr Cys Lys Asp Thr Cys Pro Pro Leu Met Leu Tyr Asn Pro 260 265 270Thr Thr Tyr Gln Met. Asp Val Asn Pro Glu Gly Lys Tyr Ser Phe Gly275 280 285Ala Thr Cys Val Lys Lys Cys Pro Arg Asn Tyr Val Val Thr Asp His290 295 300 Gly Ser Cys Val Arg Ala Cys Gly Ala Asp Ser Tyr Glu Met Glu Glu305 310 315 320Asp Gly Val Arg Lys Cys Lys Lys Cys Glu Gly Pro Cys Arg Lys Val 325 330 335Cys Asn Gly Ile Gly Ile Gly Glu Phe Lys Asp Ser Leu Ser íle Asn 340 345 350Ala Thr Asn Ile Lys His Phe Lys Asn Cys Thr Ser Ile Ser Gly Asp,355 360 365Leu His Ile Leu Pro Val Ma Phe Arg Gly Asp Ser Phe Thr His Thr370 375 380 Pro Pro Leu Asp Pro Gln Glu Leu Asp Ile Leu Lys Thr Val Lys Glu385 390 395 400Ile Thr Gly Phe Leu Leu Ile Gln Ala Trp Pro Glu Asn Arg Thr Asp 405 410 415Leu His Ala Phe Glu Asn Leu Glu Ile Ile Arg Gly Arg Thr Lys Gln 420 425 430 .His Gly Gln Phe Ser Leu Ala Val Val Ser Leu Asn Ile Thr Ser Leu435 440 445Gly Leu Arg Ser Leu Lys Glu Ile Ser Asp Gly Asp Val Ile Ile Ser450 455 460 Gly Asn Lys Asn Leu Cys Tyr Ala Asn Thr Ile Asn Trp Lys Lys Leu4 65 470 475 480Phe Gly Thr Ser Gly Gln Lys Thr Lys Ile Ile Ser Asn Arg Gly Glu 485 490 495Asn Ser Cys Lys Ala Thr Gly Gln Val Cys His Ala Leu Cys Ser Pro 500 505 510Glu Gly Cys Trp Gly Pro Glu Pro Arg Asp Cys Val Ser Cys Arg Asn515 520 525Vai. Ser Arg Gly Arg Glu Cys Val Asp Lys Cys Asn Leu Leu Glu Gly530 535 540 Glu Pro Arg. Glu Phe Val Glu Asn Ser Glu Cys Ile Gln Cys His Pro545 550 555 560Glu Cys Leu Pro Gln Ala Met Asn Ile Thr Cys Thr Gly Axg Gly Pro 565 570 575Asp Asn Cys Ile Gln Cys Ala His Tyr Ile Asp Gly Pro His Cys Val 580 585 590Lys Thr. Cys Pro Ala Gly Val Met Gly Glu Asn Asn Thr Leu Val Trp595 600 605Lys Tyr Ala Asp Ala Gly His Val Cys His Leu Cys His Pro Asn Cys

610 615 620

Thr Tyr Gly Ser

625<210> 8<211> 405<212> PRT

<213> Ηοιαο sapiens<400> 8

Met Arg Pro Ser Gly Thr Ala Gly Ala Ala Leu Leu Ala Leu Leu Ala

1 5 10 15

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20 25 30

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35 40 45

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50 55 60

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85 90 95

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100 105 110

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165 170 175

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180 185 190

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195 200 205

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325 330 335

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340 345 350

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355 360 365

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370 375 380

Pro Pro Leu Asp Pro Gln Glu Leu Asp Ile Leu Lys Thr Val Lys Glu385 390 395 400

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<210> 9<211> 405<212> PRT

<213> Homo sapiens<400> 9 Met Arg Pro Ser Gly Thr Ala Gly1 5 Ala Leu Cys Pro Ala Ser Arg Ala 20 Gly Thr Ser Asn Lys Leu Thr Gln 35 40Leu Ser Leu Gln Arg Met Phe Asn 50 55 Leu Glu Ile Thr Tyr Val Gln Arg65 70 Thr Ile Gln Glu Val Ala Gly Tyr 85 Glu Arg Ile Pro Leu Glu Asn Leu 100 Tyr Glu Asn Ser Tyr Ala Leu Ala 115 120Lys Thr Gly Leu Lys Glu Leu Pro 130 135 His Gly Ala Val Arg Phe Ser Asn145 150 Ser Ile Gln Trp Arg Asp Ile Val 165 Ser Met Asp Phe Gln Asn His Leu 180 Ser Cys Pro Asn Gly Ser Cys Trp 195 200Lys Leu Thr Lys Ile Ile Cys Ala 210 215 Gly Lys Ser Pro Ser Asp Cys Cys225 230 Thr Gly Pro Arg Glu Ser Asp Cys 245 Glu Ala Thr Cys Lys Asp Thr Cys 260 Thr Thr Tyr Gln Met Asp Val Asn 275 280Ala Thr Cys Val Lys Lys Cys Pro 290 295 Gly Ser Cys Val Arg Ala Cys Gly305 310 Asp Gly Val Arg Lys Cys Lys Lys 325 Cys Asn Gly Ile Gly Ile Gly Glu 340 Ala Thr Asn Ile Lys His Phe Lys 355 360Leu HiS Ile Leu Pro Val Ala Phe 370 375 Pro Pro Leu Asp Pro Gln Glu Leu385 390 Ile Thr Gly Leu Ser

405

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Claims

1. Uso de um peptideo EGFRvIII e um agente quimiote-rapêutico que induz linfopenia, CARACTERIZADO pelo fato deser na preparação de um medicamento para o tratamento de umtumor em um indivíduo.

2. Uso, de acordo com a reivindicação 1,CARACTERIZADO pelo fato de que o agente quimioterapêutico éum agente de alquilação.

3. Uso, de acordo com a reivindicação 1,CARACTERIZADO pelo fato de que o peptideo EGFRvIII é conju-gado com hemocianina de molusco Keyhole Limpet (KLH).

4. Uso, de acordo com a reivindicação 1,CARACTERIZADO por compreender ainda GM-CSF como um adjuvantesimultaneamente com o peptideo EGFRvIII.

5. Uso, de acordo com a reivindicação 1,CARACTERIZADO pelo fato de que o peptideo EGFRvIII tem a se-qüência H-LEEKKGNYVVTDHS-OH (SEQ ID NO: 1).

6. Uso, de acordo com a reivindicação 1,CARACTERIZADO pelo fato de que o peptideo EGFRvIII tem a se-qüência LEU-GLU-GLU-LYS-LYS-GLY-ASN-TYR-VAL-VAL-THR-ASP-HIS(SEQ ID NO: 2).

7. Uso, de acordo com a reivindicação 1,CARACTERIZADO pelo fato de que o peptideo EGFRvIII tem a se-qüência LEU-GLU-GLU-LYS-LYS-GLY-ASN-TYR-VAL-VAL-THR-ASP-HIS-CYS (SEQ ID NO: 3) e em que KLH é conjugado com o resíduoCYS.

8. Uso, de acordo com a reivindicação 7,CARACTERIZADO pelo fato de que o peptideo EGFRvIII é conju-gado com o KLH com um reticulador heterobifuncional.

9. Uso, de acordo com a reivindicação 8,CARACTERIZADO pelo fato de que o reticulador heterobifuncio-nal é sulfosuccinimidil 6- [3' (2-piridilditio)-propionamido]hexanoato.

10. Uso, de acordo com a reivindicação 2,CARACTERIZADO pelo fato de que o agente de alquilação é te-mozolomida ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo.

11. Uso, de acordo com a reivindicação 1,CARACTERIZADO pelo fato de que o tumor é um glioma maligno.

12. Uso, de acordo com a reivindicação 1,CARACTERIZADO pelo fato de que o tumor é um astrocitoma.

13. Uso, de acordo com a reivindicação 1,CARACTERIZADO pelo fato de que o agente quimioterapêutico éum análogo de purina.

14. Uso, de acordo com a reivindicação 1,CARACTERIZADO pelo fato de que o agente quimioterapêutico éfludarabina e/ou 2-clorodeoxi adenosina.

15. Uso, de acordo com a reivindicação 1,CARACTERIZADO pelo fato de que o tumor é um tumor de pulmão.

16. Uso, de acordo com a reivindicação 1,CARACTERIZADO pelo fato de que o tumor é um tumor de mama.

17. Uso, de acordo com a reivindicação 1,CARACTERIZADO pelo fato de que o tumor é um câncer de cabeçae pescoço.

18. Uso de um peptídeo EGFRvIII, o peptideo EGFRvIIIconjugado com KLH; GM-CSF como adjuvante simultaneamente como peptideo EGFRvIII; e um agente de alquilação,CARACTERIZADO pelo fato de ser na preparação de um medica-mento para o tratamento de um tumor em um indivíduo.

19. Uso, de acordo com a reivindicação 18,CARACTERIZADO pelo fato de que o tumor é um glioma maligno.

20. Uso, de acordo com a reivindicação 18,CARACTERIZADO pelo fato de que o tumor é um astrocitoma.

21. Uso, de acordo com a reivindicação 18,CARACTERIZADO pelo fato de que o tumor é um tumor de pulmão.

22. Uso, de acordo com a reivindicação 18,CARACTERIZADO pelo fato de que o tumor é um tumor de mama.

23. Uso, de acordo com a reivindicação 18,CARACTERIZADO pelo fato de que o agente de alquilação é te-mozolomida ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo.

24. Uso, de acordo com a reivindicação 18,CARACTERIZADO pelo fato de que o tumor é um câncer de cabeçae pescoço.

25. Uso de uma vacina antitumor e temozolomida ou umsal farmaceuticamente aceitável do mesmo, CARACTERIZADO pelofato de ser na preparação de um medicamento para o tratamen-to de um tumor em um indivíduo.

26. Uso, de acordo com a reivindicação 25,CARACTERIZADO pelo fato de que a vacina antitumor compreendeum antígeno isolado.

27. Uso, de acordo com a reivindicação 25,CARACTERIZADO pelo fato de que a vacina antitumor compreendecélulas de tumor exterminadas.

28. Uso, de acordo com a reivindicação 25,CARACTERIZADO pelo fato de que a vacina antitumor compreendeuma fração de células de tumor.

29. Uso, de acordo com a reivindicação 25,CARACTERIZADO pelo fato de que a vacina antitumor compreendeum antigeno selecionado do grupo que consiste em quinase 4dependente de ciclina; β-catenina; Caspase-8; MAGE-I; MAGE--3; Tirosinase; Idiótipo Ig de superfície; Receptor Her--2/neu; MUC-1; HPV E6 e E7; Idiótipo CD5 CAMPATH-1, CD20;glicoproteína de superfície de célula CEA, mucina-1; carboi-drato de superfície de célula Lewisx; CA-125; receptor defator de crescimento epidérmico; pl85HER2; IL-2R; FAP-α; Te-nascina; EphA2, FoxMlB, AIM-2, survivina, e uma metalopro-teinase.

30. Uso, de acordo com a reivindicação 25,CARACTERIZADO pelo fato de que GM-CSF é administrado comoadjuvante simultaneamente com peptídeo EGFRvIII.

31. Uso, de acordo com a reivindicação 25,CARACTERIZADO pelo fato de que o tumor é um glioma maligno.

32. Uso, de acordo com a reivindicação 25,CARACTERIZADO pelo fato de que o tumor é um astrocitoma.

33. Uso, de acordo com a reivindicação 25,CARACTERIZADO pelo fato de que o tumor é um tumor de pulmão.

34. Uso, de acordo com a reivindicação 25,CARACTERIZADO pelo fato de que o tumor é um tumor de mama.

35. Uso, de acordo com a reivindicação 25,CARACTERIZADO pelo fato de que o tumor é um tumor de cabeçae pescoço.

36. Uso de uma vacina antitumor e um agente quimiote-rapêutico que induz linfopenia, CARACTERIZADO pelo fato deser na preparação de um medicamento para o tratamento de umtumor em um indivíduo.

37. Uso, de acordo com a reivindicação 36,CARACTERIZADO pelo fato de que o agente quimioterapêutico éum agente de alquilação.

38. Uso, de acordo com a reivindicação 37,CARACTERIZADO pelo fato de que o agente de alquilação é te-mozolomida ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo.

39. Uso, de acordo com a reivindicação 36,CARACTERIZADO pelo fato de que o tumor é um glioma maligno.

40. Uso, de acordo com a reivindicação 36,CARACTERIZADO pelo fato de que o tumor é um astrocitoma.

41. Uso, de acordo com a reivindicação 36,CARACTERIZADO pelo fato de que o tumor é um tumor de pulmão.

42. Uso, de acordo com a reivindicação 36,CARACTERIZADO pelo fato de que o tumor é um tumor de mama.

43. Uso, de acordo com a reivindicação 36,CARACTERIZADO pelo fato de que a vacina antitumor compreendeum antígeno selecionado do grupo que consiste em quinase 4dependente de ciclina; β-catenina; Caspase-8; MAGE-1; MAGE--3; Tirosinase; Idiótipo Ig de superfície; Receptor Her--2/neu; MUC-1; HPV E6 e E7; Idiótipo CD5 CAMPATH-1, CD20;glicoproteína de superfície de célula CEA, mucina-1; carboi-drato de superfície de célula Lewisx; CA-125; receptor defator de crescimento epidérmico; pl85HER2; IL-2R; FAP-α; Te-nascina; EphA2, FoxMlB, AIM-2, survivina, e uma metalopro-teinase.