BRPI0617311A2 - sal diidrogeno fosfato de um antagonista de receptor de protaglandina d2 - Google Patents

Abstract

SAL DIIDROGENO FOSFATO DE UM ANTAGONISTA DE RECEPTOR DE PROSTAGLANDINA D2. A presente invenção refere-se ao sal diidrogeno fosfato de ácido 2-(3-{6-[2-(2,4-dicloro fenil) etil amino]-2-metóxi pirimidin-4-iI} fenil)-2-metil propiónico de Fórmula (III), uma composição farmacêutica compreendendo uma quantidade farmaceuticamente efetiva do composto de Fórmula (III), e um veículo farmaceuticamente aceitável; e um processo de tratamento de um paciente sofrendo de uma distúrbio mediada por PGD2 incluindo, mas não limitado a, doença alérgica (tal como rinite alérgica, conjuntivite alérgica, dermatite atópica, asma bronquial e alergia a alimento), mastocitose sistêmica, distúrbios acompanhados por ativação de mastócitos sistêmica, choque anafilático, broncoconstrição, bronquite, urticária, eczema, doenças acompanhadas por coceira (como dermatite atópica e urticária), doenças (tais como catarata, descolamento de retina, inflamação, infecção e distúrbios de sono) que são geradas secundariamente como um resultado de comportamento acompanhado por coceira (tal como arranhando e batendo), inflamação, doenças pulmonares obstrutivas crónicas, dano de reperfusão isquêmico, acidente cérebro vascular, artrite reumatóide crónica, pleurisia, colite ulcerativa e similares, através de administração ao dito paciente de uma quantidade farmaceuticamente efetiva do composto de Fórmula (III).

Description

Relatório Descritivo da Patente de Invenção para "sal dll-drogeno fosfato de um antagonista de receptor de pros-taglandina d2".

CAMPO DA INVENÇÃO

Fabricação em grande escala de uma composição farmacêuticapode possuir muitos desafios para o químico e engenheiro químico. Emboramuitos destes desafios relacionem-se ao manuseio de grandes quantidadesde reagentes e controle de reações em larga escala, o manuseio do produtofinal possui especiais desafios ligados à natureza do próprio produto ativofinal. Não somente o produto tem de ser preparado em alto rendimento, serestável, e capaz de fácil isolamento, o produto tem de possuir propriedadesque sejam apropriadas para os tipos de preparações farmacêuticas nasquais eles são prováveis de serem usados por último. A estabilidade do in-grediente ativo da preparação farmacêutica tem de ser considerada durantecada etapa do processo de fabricação, incluindo a síntese, isolamento, esto-cagem de volume, formulação farmacêutica e formulação a longo prazo. Ca-da uma destas etapas pode ser impactada através de várias condições am-bientais de temperatura e umidade.

A substância farmaceuticamente ativa usada para preparar ascomposições farmacêuticas deve ser tão pura quanto possível e sua estabi-lidade química em estocagem a longo prazo tem de ser garantida sob váriascondições ambientais. Isto é absolutamente essencial para prevenir apare-cimento de indesejáveis produtos de degradação em composições farma-cêuticas. Estes produtos de degradação podem ser potencialmente tóxicos,ou resultarem simplesmente em redução de potência da composição.

Um conceito primário para a fabricação em larga escala decompostos farmacêuticos é que a substância ativa deve manter uma estabi-lidade polimórfica durante seu manuseio para assegurar consistentes parâ-metros de processamento e qualidade farmacêutica. Dependendo das carac-terísticas de estabilidade de um composto farmacêutico ele pode ser subme-tido a alterações sendo durante a fabricação e/ou estocagem resultando po-tencialmente em problemas de controle de qualidade, e questões de formu-lação. Tal mudança pode afetar a reproduzibilidade do processo de fabrica-ção e assim conduzir a formulações finais que podem não satisfazer os re-quisitos rigorosos e de alta qualidade impostos por agências reguladorassobre formulações de composições farmacêuticas. Com o dito antes em mente, deve ser posto em mente que pelo menos a seleção de um compostofarmacêutico que tem aperfeiçoadas características de estabilidade físicapossa prover significantès vantagens sobre formas menos estáveis do mes-mo composto.

A presente invenção é direcionada ao sal diidrogeno fosfato de um antagonista de receptor de prostaglandina D2 tendo propriedades físicasaltamente preferidas. O composto é útil como um antagonista de DP paratratamento de um paciente sofrendo de, ou sujeito a, condições (doenças)patológicas mediadas por PGD2, incluindo, mas não limitado a, doença alér-gica (tal como rinite alérgica, conjuntivite alérgica, dermatite atópica, asma bronquial, e alergia a alimento) mastocitose sistêmica, distúrbios acompa-nhados por ativação sistêmica de mastócito, choque anafilático, broncocons-trição, bronquite, urticária, eczema, doenças acompanhadas por coceira(como dermatite atópica e urticária), doenças (como catarata, descolamentode retina, inflamação, infecção e distúrbios de sono) que são geradas se-cundariamente como um resultado de comportamento acompanhado porcoceira (como arranhando e batendo), inflamação, doenças pulmonares obs-trutivas crônicas, dano de reperfusão isquêmica, acidente cérebro vascular,artrite reumatóide crônica, pleurisia, colite ulcerativa e similares.

ANTECEDENTES DA INVENÇÃO

Desafio dé alérgeno local em pacientes com rinite alérgica, as-ma bronquial, conjuntivite alérgica, e dermatite atópica foi mostrado resultarem rápida elevação de níveis de prostaglandina D2 "(PGD2)" em fluidos delavagem nasal e bronquial, lágrimas e fluidos de câmara de pele. PGD2 temmuitas ações inflamatórias, como crescente permeabilidade vascular na con- juntiva e pele, crescente resistência das vias aéreas nasais, do estreitamen-to de vias aéreas e infiltração de eosinófilos na conjuntiva e traquéia.

PGD2 é o principal produto ciclooxigenase de ácido araquidôni-3co produzido a partir de mastócitos em desafio imunológico [Lewis, RA1 So-ter NA, Diamond PT1 Austen KF1 Oates JA1 Roberts LJ Il1 Prostaglandin D2generation after activation of rat and human mast cells with anti-IgE, J. Im-munol. 129, 1627-1631, 1982]. Mastócitos ativados, uma principal fonte dePGD2, são um dos protagonistas-chaves no direcionamento de respostaalérgica em condições tais como asma, rinite alérgica, conjuntivite alérgica,dermatite alérgica e outras doenças [Brightling CE, Rradding P, Pavord ID1Wardlaw AJ, New Insights into the role of the mast cell in asthma, Clin. Exp.Allergy 33, 550-556, 2003].

Muitas das ações de PGD2 são mediadas através de sua açãosobre o receptor de prostaglandina tipo-D ("DP"), um receptor acoplado aproteína G expresso sobre o epitélio e o músculo liso. Em asma, o epitéliorespiratório é reconhecido há muito como uma fonte-chave de citocinas equimiocinas inflamatórias que dirigem a progressão da doença [Holgate S,Lackie P, Wilson S, Roche W, Davies D, Bronchial Epithelium as a Key Re-gulator of Ainway Allergen Sensisitzation and Remodelling in Asthma, Am JRespir Crit Care Med. 162, 113-117, 2000]. Em um modelo camundongoexperimental de asma, o receptor de DP é dramaticamente regulado ascen-dentemente sobre o epitélio das vias aéreas em desafio com antígeno [Mat-suoka T, Hirata M1 Tanaka H, Takahashi Y, Murata T, Kabashima K1 Sugimo-to Y, Kobayashi T, Ushikubi F, Aze Y, Eguchi N, Urade Y, Yoshida N, KimuraK1 Mizoguchi A, Honda Y, Nagai H, Narumiya S, prostaglandin D2 as a me-diator of allergic asthma, Science 287, 2013-2017, 2000]. Em camundongosnocaute, carecendo de receptor de DP, há uma acentuada redução em hi-per-reatividade de vias aéreas e inflamação crônica, duas das característicasfundamentais de asma humana [Matsuoka T, Hirata M1 Tanaka H1 TakahashiY1 Murata T, Kabashima K1 Sugimoto Y1 Kobayashi T1 Ushikubi F1 Aze Y1Eguchi N1 Urade Y, Yoshida N, Kimura K, Mizoguchi A, Honda Y, Nagai H1Narumiya S, Prostaglandin D2 as a mediator of allergic asthma, Science 287,2013-2017,2000].

O receptor de DP é também pensado estar envolvido em rinitealérgica humana, uma doença alérgica freqüente que é caracterizada pelossintomas de espirros, coceira, rinorréia, e congestão nasal. Administraçãolocal de PGD2 ao nariz causa um aumento dependente de dose em conges-tão nasal [Doyle WJ, Boehm S, Skoner DP, Physiologic responses to intra-nasal dose-response challenges with histamine, methacholine, bradykinin,and prostaglandin in adult volunteers with and without nasal allergy, J AllergyClin Immunol. 86(6 Pt 1), 924-35, 1990].

Antagonistais de receptor de DPO foram mostrados reduzirem ainflamação de vjas aéreas em modelo de asma experimental de porquinho-da-índia [Arimura A, Yasui K, Kishino J, Asanuma F, Hasegawa H, KakudoS1 Ohtani M1 Arita H, Prevention of allergic inflammation by a novel prosta-glandin receptor antagonist, S-5751, J Pharmacol Exp Ther. 298(2), 411-9,2001]. PGD2, por isso parece atuar sobre o receptor de DP e desempenharum importante papel em elicitação de certas características-chaves de asmaalérgica.

Antagonistas de DP foram mostrados serem eficazes no alíviode sintomas de rinite alérgica em múltiplas espécies, e mais especificamenteforam mostrados inibirem a congestão nasal induzida por antígenõ, o maismanifesto sintoma de rinite alérgica [Jones, T. R., Savoie, C., Robichaud, A.,Sturino, C., Scheigetz, J., Lachance1 N., Roy, B., Boyd, M., Abraham1 W.,Studies with a DP receptor antagonist in sheep and guinea pig models ofallergic rhinitis, Am. J. Resp. Crit. Care Med. 167, A218, 2003; and ArimuraA, Yasui K1 Kishino J, Asanuma F, Hasegawa H1 Kakudo S, Ohtani M, AritaH, Prevention of allergic inflammation by a novel prostaglandin receptor an-tagonist, S-5751. J. PharmacoL Exp. Ther. 298(2), 411-9, 2001].

Antagonistas de DP também são eficazes em modelos experi-mentais de conjuntivite alérgica e dermatite alérgica [Arimura A1 Yasui K1Kishino J, Asanuma F, Hasegawa H, Kakudo S, Ohtani M, Arita H, Preventi-on of allergic inflammation by a novel prostaglandin receptor antagonist, S-5751. J. PharmacoL Exp. Ther. 298(2), 411-9, 2001; and Torisu K1 Kobaya-shi K, Iwahashi M1 Nakai Y1 Onoda T1 Nagase T1 Sugimoto I, Okada Y, Mat-sumoto R1 Nanbu F1 Ohuchida S1 Nakai H1 Toda M1 Discovery of a new classof potent, selective, and orally active prostaglandin D2 receptor antagonists,Bioorg.. & Med. Chem. 12, 5361-5378, 2004].

O pedido de patente WO 2006044732 (daqui por diante a publi-cação '732), aqui incorporado por referência, mostra pirimidinas que têm va-liosas propriedades farmacêuticas incluindo, em particular, a habilidade parase associarem com e regularem o receptor de DP. A publicação '732 des-creve pirimidinas de Fórmula (I)

<formula>formula see original document page 6</formula>

sua preparacao, composicoes farmaceuticas contendo estescompostos, e seu uso farmacêutico no tratamento de estados de doençacapazes de serem modulados através de inibição do receptor de prostaglan-dina D2. Além disso, a publicação '732 especificamente descreve e reivindi-ca ácido 2-(3—{6-[2-(2,4-dicloro fenil) etil amino]-2-metóxi pirimidin-4-il} fe-nil)-2-metil propiônico (daqui por diante "a forma livre"]. A publicação '732também provê uma descrição geral de uma ampla variedade de sais de adi-ção ácida e sais de adição de base de compostos de acordo com a inven-ção, e exemplos de trabalho sortidos limitados à preparação de sais cloridra-to e sais de sódio. Mais especificamente o sal cloridrato e o sal de sódio deácido 2-(3-{6-[2-(2,4-dicloro fenil) etil amino]-2-metóxi pirimidin-4-il} fenil)-2-metil propiônico. A publicação '732, entretanto, não mostra especificamenteum sal diidrogeno fosfato de ácido 2-(3-{6-[2-(2,4-dicloro fenil) etil amino]-2-metóxi pirimidin-4-il} fenil)-2-metil propiônico.

SUMÁRIO DA INVENÇÃO

A presente invenção é direcionada ao sal diidrogeno fosfato deácido 2-(3-{6-[2-(2,4-dicloro fenil) etil amino]-2-metóxi pirimidin-4-il} fenil)-2-metil propiônico de fórmula (III) (daqui por diante "o sal diidrogeno fosfato").(III)

Um outro aspecto da presente invenção é uma composição far-macêutica, compreendendo uma quantidade farmaceuticamente efetiva dosal diidrogeno fosfato.

Um outro aspecto da presente invenção é um processo paratratamento de um paciente sofrendo de uma distúrbio mediada por PGD2incluindo, mas não limitado a, doença alérgica (tal como rinite alérgica, con-juntivite alérgica, dermatite atópica, asma bronquial, e alergia a alimento),mastocitose sistêmica, distúrbios acompanhados por ativação sistêmica demastócitos, choque anafilático, broncoconstrição, bronquite, urticária, ecze-ma, doenças acompanhadas por coceira (tal como dermatite atópica e urti-cária), doenças (como catarata, descolamento de retina, inflamação, infec-ção e distúrbios de sono) que são geradas secundariamente como um resul-tado de comportamento acompanhado por coceira (tal como arranhão e ba-tida), inflamação, doenças pulmonares obstrutivas crônicas, dano de reper-fusão isquêmico, acidente cérebro - vascular, artrite reumatóide crônica,pleurisia, colite ulcerativa e similares, através de administração ao pacientede uma quantidade farmaceuticamente efetiva do sal diidrogeno fosfato de ácido 2-(3-{6-[2-(2,4-dicloro fenil) etil amino]-2-metóxi pirimidin-4-il} fenil)-2-metilpropiônico.

A presente invenção é mais inteiramente discutida com o auxíliodas seguintes figuras e descrição detalhada abaixo.

BREVE DESCRIÇÃO DOS DESENHOS

A Figura 1 é um padrão de difração pulverizada de raio χ

(XRPD) do sal diidrogeno fosfato.

A Figura 2 é a correspondente Tabela de espaçamentos-dXRPD e Intensidades Relativas para o difratograma de raio χ pó na Figura 1do sal diidrogeno fosfato.

A Figura 3 é um tarmograma de analisador gravimétrico de calo-rímetro - térmico de exploração diferencial (DSC-TGA) do sal diidrogenofosfato. Os dados de TGA mostram uma perda de peso total de aproxima- damente 0,4% a partir de temperatura ambiente para 175°C. O DSC contémsomente a fusão da fase cristalina. Decomposição da molécula inicia-se natemperatura de fusão.

A Figura 4 é um termograma DSC do sal diidrogeno fosfato. Afusão é o único evento térmico observado no termograma no início a 219°C.

A Figura 5 mostra um gráfico de higroscopicidade de analisadorde sorção de vapor dinâmica (DVS) do sal diidrogeno fosfato e a correspon-dente tabela de perfil de sorção de água. Os dados mostram ganho de pesodurante a sorção de -0,9% em 94% de umidade relativa (RH) com pequenahisterese sugerindo sorção de água de superfície ligada frouxamente.

A Figura 6 mostra os padrões de XRPD do sal diidrogeno fosfa-to antes e após DVS. O espécime é preparado, e a análise inicia dentro de 2minutos de remoção do DVS onde ele foi deixado em repouso em 0% de RHpor -12 horas. Os dados mostram pequena mudança em intensidade e es-paçamento-d como um resultado de experimento DVS, indicando que ne- nhuma mudança detectável na estrutura cristalina ocorreu.

A Figura 7 mostra a fotomicrografia do sal diidrogeno fosfato. Olote consiste primariamente em partículas em forma de agulhas e bastão deaté cerca de 30 micra em comprimento.

A Figura 8 mostra fotomicrografias pré- e pós-moagem do sal diidrogeno fosfato e a distribuição de tamanho de partícula quantitativa, mos-trando uma boa redução em tamanho de partícula sem alteração em propri-edades físico - químicas. A fotomicrografia pós-moagem do sal diidrogenofosfato mostra um material cristalino, bem-micronizado sem partículas maio-res que 10 micra em comprimento durante uma busca de -30 campos em aumento de 100x. A distribuição de tamanho de partícula do sal diidrogenofosfato micronizado é determinada ser uma curva de modo simples. A medi-ana [x(50)] é 2,0 micra e 90% das partículas são de 4,7 micra ou menos. Oprocesso de micronização reduz ambas a mediana (5,8 micra antes) e o ta-manho x(90) (-16 micra antes). A XRPD, isto é, intensidades de pico, locali-zação (espaçamento-d) e resolução, do sal de diidrogeno fosfato, antes eapós micronização, são idênticos.

A Figura 9 é uma isoterma de higroscopicidade DVS do sal dii-drogeno fosfato após micronização não mostrando amorfização.

A Figura 10 mostra um espectro infravermelho - transformaçãode Fourier (FT-IR) para o sal diidrogeno fosfato e a correspondente tabela depicos de FT-IR.

A Figura 11 mostra uma sobreposição dos padrões de XRPDpara duas preparações separadas, Batelada 1 e Batelada 2, do sal de sódio.Batelada 1 do sal de sódio é recristalizada a partir de etanol; acetato de eti-la. A Batelada 2 do sal de sódio é recristalizada a partir de metanol: acetatode etila.

A Figura 12 mostra uma sobreposição dos padrões de XRPDpara duas preparações separadas, Batelada 1 e Batelada 2, do sal cloridratorecristalizado a partir de acetona.

DESCRIÇÃO DETALHADA DA INVENÇÃODEFINIÇÕES E ABREVIATURAS

Como usadas acima, e por toda a descrição da invenção, asseguintes abreviaturas, a menos que de outro modo indicado, devem serentendidas terem os seguintes significados:

cíclico

cintilação

americana

DMSOcAMP

IBMXSPA

ATTC

MEMFBS

sulfóxido de dimetila

mono fosfato de adenosina

3-isobutil-1 -metil xantina

ensaio de proximidade de

coleção de tipo de cultura

meio essencial mínimosoro fetal bovinoCPM contagens por minuto

Como usados acima, e por toda a descrição da invenção, osseguintes termos, a menos de outro modo indicado, devem ser entendidosterem os seguintes significados.

"Tratando" ou "tratamento" significa prevenção, alívio parcial, oucura da doença. O composto e composição desta invenção são úteis no tra-tamento de um distúrbio mediado por PGD2, incluindo, mas não limitado a,doença alérgica (tal como rinite alérgica, conjuntivite alérgica, dermatite ató-pica, asma bronquial, e alergia a alimento), mastocitose sistêmica, distúrbiosacompanhados por ativação sistêmica de mastócito, choque anafilático,broncoconstrição, bronquite, urticária, eczema, doenças acompanhadas porcoceira (como dermatite atópica e urticária), doenças (como catarata, desco-lamento de retina, inflamação, infecção e distúrbios de sono) que são gera-das secundariamente como um resultado acompanhado por coceira (tal co-mo arranhão e batida), inflamação, doenças pulmonares obstrutivas crôni-cas, dano de reperfusão isquêmica, acidente cérebrovascular, artrite reuma-tóide crônica, pleurisia, colite ulcerativa, e similares, através de administra-ção ao dito paciente de uma quantidade farmacologicamente efetiva docomposto de acordo com a Fórmula (III).

"Paciente" inclui ambos seres humanos e outros mamíferos.

"Quantidade farmaceuticamente efetiva" é pretendido descreveruma quantidade de um composto, composição, medicamento ou outro in-grediente ativo eficaz na produção de desejado efeito terapêutico.MODALIDADES PARTICULARES DA INVENÇÃO

Uma particular modalidade da invenção é um composto de fór-mula (III) em uma forma cristalina.

O composto da invenção exibe atividade de antagonista de re-ceptor de D2 e é um agente de atuação farmacológica útil. Da mesma ma-neira, ele é incorporado em composições farmacêuticas e usado no trata-mento de pacientes sofrendo de certos distúrbios médicos.

O composto da invenção é um antagonista do receptor de pros-taglandina D2, de acordo com testes descritos na literatura e descritos naseção de testes farmacológicos a seguir, e cujos resultados de testes sãoacreditados correlacionarem-se à atividade farmacológica em seres huma-nos e outros mamíferos. Assim, ainda em uma modalidade, a presente in-venção provê o composto da invenção e composições contendo o compostoda invenção para uso no tratamento de um paciente sofrendo de, ou sujeitoa, condições, que podem ser melhoradas através da administração de umantagonista de PGD2. Por exemplo, o composto da presente invenção porisso podem ser úteis no tratamento de uma variedade de distúrbios media-dos por PGD2 incluindo, mas não limitado a, doença alérgica (tal como rinitealérgica, conjuntivite alérgica, dermatite atópica, asma bronquial, e alergia aalimento), mastocitose sistêmica, distúrbios acompanhados por ativação sis-têmica de mastócito, choque anafilático, broncoconstrição, bronquite, urticá-ria, eczema, doenças acompanhadas por coceira (como dermatite atópica eurticária), doenças (como catarata, descolamento de retina, inflamação, in-fecção e distúrbios de sono) que são geradas secundariamente como umresultado acompanhado por coceira (tal como arranhão e batida), inflama-ção, doenças pulmonares obstrutivas crônicas, dano de reperfusão isquêmi-ca, acidente cérebrovascular, artrite reumatóide crônica, pleurisia, colite ul-cerativa, e similares.

Uma modalidade particular dos processos terapêuticos da pre-sente invenção é o tratamento de rinite alérgica.

Uma outra modalidade particular dos processos terapêuticos dapresente invenção é o tratamento de asma bronquial.

Uma outra particular modalidade dos processos terapêuticos dapresente invenção é o tratamento de COPD.

Uma outra modalidade particular dos processos terapêuticos dapresente invenção é o tratamento de conjuntivite alérgica.

Uma outra modalidade particular dos processos terapêuticos dapresente invenção é o tratamento de dermatite alérgica.

Referências aqui a tratamento devem ser entendidas incluíremterapia profilática assim como tratamento de condições estabelecidas.

O composto da presente invenção é ainda útil em tratamentosenvolvendo uma terapia de combinação com pelo menos um de a:

(i) anti-histaminas, como fexofenadina, desloratadina, Ioratadinae citirizina, para o tratamento de rinite alérgica;

(ii) antagonistas de leucotrieno, como montelukast e zafirulast,para o tratamento de rinite alérgica, COPD1 dermatite alérgica, conjuntivitealérgica etc., por favor referir-se especificamente às reivindicações em WO01/78697 A2; ,

(iii) beta agonistas, como albuterol, salbuterol, e terbutalina, parao tratamento de asma, COPD, dermatite alérgica, conjuntivite alérgica, etc;

(iv) anti-histaminas, tais como fexofenadina, Ioratadina e citirizi-na, para o tratamento de asma, COPD, dermatite alérgica, conjuntivite alér-gica, etc;

(v) inibidores de PDE4 (fosfodiesterase 4), como roflumilast ecilomilast, para o tratamento de asma, COPD, dermatite alérgica, conjuntivitealérgica etc; ou

(vi) com antagonistas de TP (receptor de Tromboxano A2) ou deCrTh2 (molécula homóloga de receptor quimioatrator expressa sobre célulasTh2), tais como Ramatrobran (BAY-u3405), para o tratamento de COPD,dermatite alérgica, conjuntivite alérgica etc.

A presente invenção também inclui em seu escopo uma compo-sição farmacêutica compreendendo uma quantidade farmaceuticamente efe-tiva do composto da invenção em mistura com um veículo farmaceuticamen-te aceitável.

Em prática, o composto da presente invenção pode ser adminis-trado em forma de dosagem farmaceuticamente aceitável ,a seres humanose outros mamíferos através de administração tópica ou sistêmica, incluindooral, inalacional, retal, nasal, bucal, sublingual, vaginal, parenteral (incluindosubcutânea, intramuscular, intravenosa, intradérmica, intratecal, e epidural),intracisterna e intraperitoneal. Será apreciado que a particular rota pode va-riar com, por exemplo, a condição fisiológica do receptor.

"Formas de dosagem farmaceuticamente aceitáveis" referem-sea formas de dosagem do composto da invenção, e inclui, por exemplo, com-primidos, drágeas, pós, elixires, xaropes, preparações líquidas, incluindosuspensões, sprays, inalantes comprimidos, lozangos, emulsões, soluções,grânulos, cápsulas e supositórios, assim como preparações líquidas parainjeções, incluindo preparações de lipossomas. Técnicas e formulações ge-ralmente podem ser encontrada em Remington's Pharmaceutical Sciences,Mack Publishing Co., Easton, PA, última edição.

Um particular aspecto da invenção provê o composto da inven-ção para ser administrado na forma de uma composição farmacêutica.

Veículos farmaceuticamente aceitáveis incluem pelo menos umcomponente selecionado do grupo compreendendo veículos, diluentes, re-vestimentos, adjuvantes, excipientes, ou veículos farmaceuticamente aceitá-veis tais como agentes conservantes, materiais de enchimento, agentes de-sintegrantes, agentes umectantes, agentes emulsificantes, agentes de esta-bilização de emulsão, agentes de suspensão, agentes isotônicos, agentesadoçantes, agentes flavorizantes, agentes perfumantes, agentes corantes,agentes antibacterianos, agentes antifungos, outros agentes terapêuticos,agentes lubrificantes, agentes de promoção ou retardo de adsorção, e agen-tes de dispensamento, dependendo da natureza do modo de administraçãoe formas de dosagem.

Agentes de suspensão exemplares incluem álcoois isoestearíli-cos etoxilados, polioxietileno sorbitol e sorbitano ésteres, celulose microcris-talina, meta hidróxido de alumínio, bentonita, ágar-ágar e tragacanto, ou mis-turas destas substâncias.

Agentes antifungos e antibacterianos exemplares para a pre-venção da ação de microorganismo incluem parabenos, cloróbutanol, fenol,ácido sórbico e similares.

Agentes isotônicos exemplares incluem açúcares, cloreto desódio, e similares. Agentes de retardo de adsorção exemplares paraprolongamento de absorção incluem monoestearato de alumínio e gelatina.

Agentes de promoção de adsorção exemplares para aperfeiço-amento de absorção incluem sulfóxido de dimetila e análogos relacionados.

Diluentes, solventes, veículos, agentes solubilizantes, emulsifi-cantes, e estabilizadores de emulsão, incluem água, clorofórmio, sacarose,etanol, álcool isopropílico, carbonato de etila, acetato de etila, álcool benzíli-co, álcool tetraidro furfurílico, benzoato de benzila, polióis, propileno glicol,1,3-butileno glicol, glicerol, polietileno glicóis, dimetil formamida, Tween 60,Span 60, álcool cetoestearílico, álcool miristílico, mono estearato de glicerilae Iauril sulfato de sódio, ésteres de ácido graxo de sorbitano, óleos vegetais(como óleo de semente de algodão, óleo de amendoim, óleo de oliva, óleode mamona e óleo de sésamo) e ésteres orgânicos injetáveis como oleatode etila, e similares, ou apropriadas misturas destas substâncias.

Excipientes exemplares incluem lactose, açúcar de leite, citratode sódio, carbonato de cálcio e fosfato de dicálcio.

Agentes de desintegração exemplares incluem amido, ácidosalgínicos, e certos silicatos complexos.

Lubrificantes exemplares incluem estearato de magnésio, Iaurilsulfato de sódio, talco, assim como polietileno glicóis de alto peso molecular.

A escolha de veículo farmaceuticamente aceitável é geralmentedeterminada de acordo com as propriedades químicas do composto ativo talcomo solubilidade, o particular modo de administração e as condições a se-rem observadas em prática farmacêutica.

Composições farmacêuticas da presente invenção apropriadaspara administração oral podem ser apresentadas como unidades discretastal como uma forma de dosagem sólida, tal como cápsulas, "cachets" oucomprimidos cada um contendo uma predeterminada quantidade do ingredi-ente ativo, ou como um pó ou grânulos; como uma forma de dosagem líqui-da tal como uma solução ou uma suspensão em um líquido aquoso ou umlíquido não-aquoso, ou como uma emulsão líquida óleo-em-água ou umaemulsão líquida água-em-óleo. O ingrediente ativo também pode ser apre-sentado como uma pílula grande, eletuário ou pasta.

"Forma de dosagem sólida" significa a forma de dosagem docomposto da invenção em forma sólida, por exemplo, cápsulas, comprimi-dos, pílulas, pós, drágeas ou grânulos. Em tais formas de dosagem sólida, ocomposto da invenção é misturado com pelo menos um excipiente (ou veí-culo) usual inerte tal como citrato de sódio ou fosfato de dicálcio ou : (a) ma-teriais de enchimento ou diluidores, tais como, por exemplo, amidos, lactose,sacarose, glicose, manitol e ácido silícico, (b) ligantes, como, por exemplo,carbóxi metil celulose, alginatos, gelatina, polivinil pirrolidona, sacarose eacácia, (c) umectantes, como, por exmeplo, glicerol, (d) agentes desinte-grantes, como, por exemplo, ágar-ágar, carbonato de cálcio, amido de batatae tapioca, ácido algínicò, certos silicatos complexos e carbonato de sódio,(e) retardadores de solução, como, por exemplo, parafina, (f) aceleradoresde absorção, por exemplo, compostos de amônio quaternários, (g) agentesumectantes, como por exemplo, álcool cetílico e monoestearato de glicero,(h) adsorventes, como por exemplo, caolin e bentonita, (i) lubrificantes, comopor exmeplo, talco, estearato de cálcio, estearato de magnésio, polietilenoglicóis sólidos, Iauril sulfato de sódio, (j) agentes opacificantes, (k) agentestamponantes e agentes que liberam o composto da invenção em uma certaparte do trato intestinal em uma maneira retardada.

Um comprimido pode ser fabricado por compressão ou molda-gem, opcionalmente com um ou mais ingredientes acessórios. Comprimidospodem ser preparados através de compressão em uma máquina apropriadado ingrediente ativo em uma forma de escoamento livre tal como um pó ougrânulos, opcionalmente misturado com um ligante, lubrificante, diluente i-nerte, conservante, tensoativo ou agente dispersante. Excipientes tais comolactose, citrato de sódio, carbonato de cálcio, fosfato de dicálcio e agentesdesintegrantes como amido, ácidos algínicos e certos silicatos complexoscombinados com lubrificantes tais como estearato de magnésio, Iauril sulfatode sódio, e talco podem ser usados. Uma mistura dos compostos pós umè-decida com um diluente líquido inerte pode ser moldada em uma máquinaapropriada para fabricação de comprimidos moldados. Os comprimidos po-dem ser opcionalmente revestidos ou marcados e podem ser formulados demodo a proverem liberação lenta ou controlada do ingrediente ativo ali.

Composições sólidas também podem ser empregadas comomateriais de enchimento em cápsulas de gelatina enchidas macias e durasusando excipientes tais como lactose ou açúcar de leite assim como polieti-lenoglicóis de alto peso molecular, e similares.

Se desejado, e para distribuição mais efetiva, o composto podeser microencapsulado em, ou ligado a, sistemas de liberação lenta ou alve-jada tais como matrizes de polímero biodegradável, biocompatível (por e-xemplo, poli(d,l-lactídeo-co-glicolídeo)), lipossomas, e microesferas e injeta-do subcutaneamente ou intramuscularmente através de uma técnica chama-da depósito subcutâneo ou intramuscular para prover liberação lenta contí-nua do composto(s) por um período de 2 semanas ou mais. Os compostospodem ser esterilizados, por exemplo, por filtração através de um filtro deretenção de bactérias, ou através de incorporação de agentes esterilizantesna forma de composições sólidas estéreis que podem ser dissolvidas emágua estéril, ou algum outro meio injetável estéril antes de uso.

"Forma de dosagem líquida" significa que a dose do compostoativo a ser administrada ao paciente está em forma líquida, por exemplo,emulsões, soluções, suspensões, xaropes e elixires farmaceuticamente acei-táveis. Em adição ao composto ativo, as formas de dosagem líquida podemconter diluentes inertes cõmumente usados na técnica, tais como solventes,agentes de solubilização e emulsificantes.

Quando suspensões aquosas são usadas elas podem conteragentes emulsificantes ou agentes que facilitam suspensão.

Composições farmacêuticas apropriadas para administraçãotópica significam formulações que estão em uma forma apropriada para seradministrada topicamente a um paciente. A formulação pode ser apresenta-da como uma pomada tópica, salvas, pós, sprays e inalantes, géis (basea-dos em água ou álcool), cremes, como é geralmente conhecido na técnica,ou incorporada em uma base matriz para aplicação em um emplastro, quepode permitir uma liberação controlada de composto através de barreiratransdérmica. Quando formulados em uma pomada, os ingredientes ativospodem ser empregados com uma base de pomada miscível em água ou pa-rafínica. Alternativamente, os ingredientes ativos podem ser formulados emum creme com uma base de creme de óleo-em-água. Formulações apropri-adas para administração tópica no olho incluem gotas oculares onde o in-grediente ativo está dissolvido ou suspenso em um apropriado veículo, es-pecialmente um solvente aquoso para o ingrediente ativo. Formulações a-propriadas para administração tópica na boca incluem losangos compreen-dendo o ingrediente ativo em uma base flavorizada, usualmente sacarose eacácia ou tragacanto; pastilhas compreendendo o ingrediente ativo em umabase inerte tal como gelatina e glicerina, ou sacarose e acácia; e lavagensbucais compreendendo ò ingrediente ativo em um apropriado veículo líquido.

A fase oleosa da composição farmacêutica de emulsão pode serconstituída a partir de ingredientes conhecidos, em uma maneira conhecida.Embora a fase possa compreender meramente um emulsificante (de outromodo conhecido como um emulgente), ela desejavelmente compreende umamistura de pelo menos um emulsificante com uma gordura ou um óleo oucom ambos uma gordura e um óleo. Em uma modalidade particular, um e-mulsificante hidrofílico é incluído junto com um emulsificante Iipofílico queatua como um estabilizador. Juntos, o emulsificante(s) com, ou sem, estabi-lizador(s) constituem a cera emulsificante, e junto com o óleo e gorduraconstituem a base de pomada emulsificante que forma a fase dispersa oleo-sa das formulações de creme.

Se desejado, a fase aquosa da base de creme pode incluir, porexemplo, pelo menos 30% peso / peso de um álcool poliídrico, isto é, umálcool tendo dois ou mais grupos hidroxila tais como, propileno glicol, butano1,3-diol, manitol, sorbitol, glicerol e polietileno glicol (incluindo PEG 400) esuas misturas. As formulações tópicas desejavelmente podem incluir umcomposto que aperfeiçoa absorção, ou penetração do ingrediente ativo atra-vés da pele, ou outras áreas afetadas.

A escolha de apropriados óleos ou gorduras para uma composi-ção é baseada na obtenção de desejadas propriedades. Assim, um cremepode ser particularmente um produto não-gorduroso, não-manchador e lavá-vel com apropriada consistência para evitar vazamento de tubos ou outrosrecipientes. Alquil ésteres mono- ou dibásicos, de cadeia reta ou ramificada,tais como miristato de diisopropila, oleato de decila, palmitato de isopropila,estearato de butila, palmitato de 2-etil hexila ou uma combinação de ésteresde cadeia ramificada conhecida como Crodamol CAP pode ser usada. Estespodem ser usados sozinhos ou em combinação dependendo das proprieda-des requeridas. Alternativamente, lipídeos de alto ponto de fusão como para-fina macia branca e/ou parafina líquida ou outros óleos minerais podem serusados.

Composições farmacêuticas apropriadas para administraçõesretal ou vaginal que estão em uma forma apropriada para serem administra-das retal ou vaginalmente a um paciente e contendo pelo menos um com-posto da invenção. Supositórios são uma forma particular para tais formula-ções que pode ser preparada através de mistura de compostos desta inven-ção com apropriados excipientes ou veículos não-irritantes como manteigade cacau, polietileno glicol, ou uma cera de supositório, que são sólidos emtemperaturas comuns mas líquidos em temperatura do corpo e por isso, fun-dem no reto ou cavidade vaginal e liberam o componente ativo.

Composição farmacêutica administrada por injeção pode seratravés de injeção transmuscular, intravenosa, intraperitoneal, e/ou subcutâ-nea. As composições da presente invenção são formuladas em soluçõeslíquidas, em particular em tampões fisiologicamente compatíveis como solu-ção de Hank ou solução de Ringer. Em adição, as composições podem serformuladas em forma sólida e redissolvidas ou suspensas imediatamenteantes de uso. Formas Iiofilizadas também são incluídas. As formulações sãoestéreis e incluem emulsões, suspensões, soluções de injeção aquosa enão-aquosa, que podem conter agentes de suspensão e agentes espessan-tes e antioxidantes, tampões, bacteriostatos e solutos que tornam a formula-ção isotônica, e têm um pH apropriadamente ajustado, com o sangue doreceptor pretendido.

Composição farmacêutica da presente invenção apropriada paraadministração nasal ou de inalação significa composições que estão em umaforma apropriada para ser administrada nasalmente ou através de inalaçãopara um paciente. A composição pode conter um veículo, em uma formapulverizada, tendo um tamanho de partícula por exemplo na faixa de 1 a 500micra (incluindo tamanhos de partícula entre 20 e 500 micra em incrementosde 5 micra tal como 30 micra, 35 micra etc.)· Apropriadas composições ondeo veículo é um líquido, para administração como, por exemplo, um espargi-mento nasal ou gotas nasais, incluem soluções aquosas ou oleosas do in-grediente ativo. Composições apropriadas para administração em aerossolpodem ser preparadas de acordo com processos convencionais e podem serliberadas com outros agentes terapêuticos. Terapia de inalação é facilmenteadministrada através de inaladores de dose medida og qualquer inalador depó seco apropriado, tal como Eclipse, Spinhaler, ou Ultrahaler como descritono pedido de patente W02004/026380, e patente US 5 176 132.

Reais níveis de dosagem de ingrediente(s) ativo nas composi-ções da invenção podem ser variados de modo a obter uma quantidade deingrediente(s) ativo(s) que é (são) efetiva para obtenção de uma desejadaresposta terapêutica para uma particular composição e processo de adminis-tração para um paciente. Um selecionado nível de dosagem para qualquerpaciente por isso depende de uma variedade de fatores incluindo o desejadoefeito terapêutico, da rota de administração, da desejada duração de trata-mento, a etiologia e severidade da doença, a condição de paciente, peso,sexo, dieta e idade, o tipo e potência de cada ingrediente ativo, taxas de ab-sorção, metabolismo e/ou excreção e outros fatores.

A dose diária total do composto desta invenção administrada aum paciente em doses simples ou divididas pode estar em quantidades, porexemplo, de cerca de 0,001 a cerca de 100 mg/kg de peso de corpo diaria-mente e particularmente 0,01 a 10 mg/kg/dia. Por exemplo, em um adulto, asdoses são geralmente de cerca de 0,01 a cerca de 100, particularmente cer-ca de 0,01 a cerca de 10, mg/kg/peso de corpo por dia por inalação,' a partirde cerca de 0,01 a cerca de 100, particularmente 0,1 a 70, mais especial-mente 0,5 a 10, mg/kg peso de corpo por dia através de administração oral,e de cerca de 0,01 a cerca de 50, particularmente 0,01 a 10, mg/kg de pesode corpo por dia através de administração intravenosa. A porcentagem deingrediente ativo em uma composição pode ser variada, embora deva consti-tuir uma proporção de modo que uma apropriada dosagem seja obtida.Composições de dosagem unitária podem conter quantidades tais de seustais submúltiplos como podem ser usadas para constituição de dose diária.Obviamente, várias formas de dosagem unitária podem ser administradasem cerca de mesmo tempo. Uma dosagem pode ser administrada tão fre-qüentemente quanto necessário de modo a obter o desejado efeito terapêu-tico. Alguns pacientes podem responder rapidamente a uma dose maior oumenor e podem encontrar adequadas doses de manutenção muito menores.Para outros pacientes, pode ser necessário ter-se tratamentos a longo prazona taxa de 1 a 4 doses por dia, de acordo com os requisitos fisiológicos decada paciente particular. Segue-se que para outros pacientes, será necessá-rio prescrever não mais que uma ou duas doses por dia.

As formulações podem ser preparadas em uma forma de dosa-gem unitária através de qualquer um dos processos bem-conhecidos na téc-nica de farmácia. Tais processos incluem a etapa de colocar em associaçãoo ingrediente farmaceuticamente ativo com o veículo que constitui um oumais ingredientes acessórios. Em geral as formulações são preparadas atra-vés de colocação em associação uniforme e íntima do ingrediente ativo comveículos líquidos ou veículos sólidos finamente divididos ou ambos, e então,se necessário, conformando o produto.

As formulações podem ser apresentadas como dose unitária ourecipientes multidoses, por exemplo, ampolas seladas e frascos com rolhaselastoméricas, e podem ser estocadas em uma condição secada por conge-lamento (liofilização) requerendo somente a adição do veículo líquido estéril,por exemplo, água para injeções, imediatamente antes de uso. Soluções esuspensões de injeção ex-temporânea podem ser preparadas a partir depós, grânulos e comprimidos estéreis do tipo previamente descrito.

O composto da invenção é analisado através dos seguintes pro-cessos analíticos.

Cromatografia Líquida de Alta Pressão - Espectrometria deMassa (LCMS)

Experimentos de LCMS para determinação de tempos de reten-ção (Rt) e íons de massa associados são realizados usando o seguinte pro-cesso. Espectros de massa (MS) são anotados usando um espectrômetro demassa Micromass LCT. O processo é ionização de eletrospray positiva, ex-ploração de massa m/z de 100 a 1000. Cromatografia líquida é realizada emum Hewlett Packard 1100 Series Binary Pump & Degasser; fase estacioná-ria: coluna phenomenex Synergi 2 μ Hydro-RP 20 X 4,0 mm, fase móvel: A =ácido fórmico 0,1% (FA) em água, B = FA 0,1% em acetonitrila. Volume deinjeção de 5 μΙ_ por CTC Analytical PAL System. Fluxo é de í mL / minuto.- Gradiente é de 10% B para 90% B em 3 minutos e 90% B para 100% B em 2minutos. Detetores auxiliares são: detetor de UV Hewlett Packard 1100 Seri-es, comprimento de nm e temperatura de detetor de dispersãode luz evaporativa (ELS) Sedere SEDEX 75 = 46°C, pressão de nitrogênio =400 Kpa (4 bar).

ESPECTROS DE RESSONÂNCIA NUCLEAR MAGNÉTICA 1H (NMR)

1H NMR 300 MHz é anotada em temperatura ambiente usandoum espectrômetro Varian Mercury (300 MHz) com uma sonda ASW de 5mm. Nos desvios químicos de NMR (δ) são expressas ppm em relação atetrametilsilano. Valores de desvios químicos são indicados em partes pormilhão (ppm) com referência a tetrametilsilano (TMS) como o padrão interno.

DIFRATOMETRIA PULVERIZADA DE RAIOS X (XRPD)

XRPD é realizada em um difratômetro Siemens-Bruker D5000,usando a geometria tipo para-focalização Bragg-Brentano (teta-dois teta). Osal diidrogeno fosfato é depositado sobre um wafer de silício de cristal sim-ples, corte de acordo com a orientação cristalográfica (510). Radiação cobreK-alfa (1,54056 angstrons) que é emitida de um tubo anticatodo de cobre (45kV/40 mÀ) é usada como a fonte de raios x, com radiação Cu K-beta sendofiltrada usando um monocromador de feixe refletido. Um contador de cintila-ção é usado para deteção. Uma fenda de divergência de 0,6 mm, uma fendaantidispersão de 0,6 mm, uma fenda de monocromador de 0,1 mm, e fendade detetor de 0,6 mm são usadas. O padrão de difração é obtido usando asseguintes condições: 2 a 40 graus de exploração em ângulo 2-teta, 1 segun-do tempo de contagem por etapa, 0,02 grau tamanho de etapa, sob condi-ções ambientes de pressão, temperatura, e umidade relativa.

ESTADO DE SOLVATACÀO / HIDRATACÂO ATRAVÉS DE ANÁLISETERMOG RAVIMÉTRICA

Análises térmicas são realizadas usando um calorímetro de ex-ploração diferencial simultânea TA Instruments Model Q-600 / analisadorgravimétrico térmico (DSG/TGA) sob uma atmosfera de nitrogênio seco. Atemperatura TGA é calibrada usando um padrão de índio. O sal diidrogenofosfato é transferido para uma caçarola de alumínio (TA Instruments partnumber 900793.901). O termograma é obtido em uma taxa de aquecimentolinear de IO0C por minuto.

CALORIMETRIA DE EXPLORAÇÃO DIFERENCIAL (DSC)

DSC é realizada usando um TA Instruments Model Q-1000 DSCequipado com um sistema de resfriamento refrigerado sob uma atmosfera denitrogênio seco. O DSC é calibrado usando um padrão índio. O sal diidroge-no fosfato é transferido para uma caçarola de alumínio, e uma tampa comfuro de pino perfurado com laser (TA Instruments part numbers 900793.901e 900860.901, respectivamente) é soldada fria à caçarola. O termogramaDSC é obtido em uma taxa de aquecimento linear de 10°C por minuto.FOTOMICROG RAFIA

Fotomicrografias são obtidas usando um microscópio OlympusBX-41 equipado com pólos cruzados. A amostra é preparada através de dis-persão da mesma em óleo mineral.

DISTRIBUIÇÃO DE TAMANHO DE PARTÍCULA

A distribuição de tamanho de partícula é medida usando um a -nalisador de tamanho de partícula de difração de laser Sympatec HELOS-BFcom a lente de medição R3, dispersador seco RODOS, e laser sintonizadoem 632,8 nm. O sistema á calibrado usando padrões de carbeto de silício. Opó é disperso usando a ligação de dispersão seca de RODOS com umapressão primária de 3,0 bar e a depressão é maximizada. A distribuição detamanho de partícula baseada em volume é calculada usando o processo deFraunhofer através do software Sympatec Windox (Version 4.0).

SORÇÃO DE VAPOR DE ÁGUA DINÂMICA (DVS)

O perfil de sorção de água é determinado usando um SMS Ins-truments Dynamic Vapor Sorption Analyzer Model DVS-1 ou VTI InstrumentsModel SGA-100 Dynamic Vapor Sorption Analyzer. UR e peso são calibra-dos usando-se padrões. O sal diidrogeno fosfato é carregado e secado a <1% UR por 2,5 horas antes de início de experimento. A UR é colocada emetapas a partir de cerca de O para 95% de UR. O peso de espécime é consi-derado constante em cada etapa quando mudança de porcentagem de mas-sa é menos que 0,005% em um intervalo de 5 minutos com um tempo deequilíbrio absoluto mínimo de 15 minutos. ^

ESPECTROSCOPIA DE INFRAVERMELHO - TRANSFORMAÇÃO DEFOURIER (FT-IR)

O espectro de FT-IR é obtido usando um Nicolet Magna-IRSpectrometer 55 ligado a Nicolet Nic-Plan FT-IR Microscope. Uma amostrasólida é analisada sobre um disco de KBr. O espectro é obtido após 32 ex-plorações a partir de 4000-400 cm"1 com resolução de 4 cm"1.

A preparação e propriedade do composto da invenção são des-critas na seguinte seção experimental.

EXEMPLO

Sal diidrogeno fosfato de ácido 2-(-3-{6-[2-(2,4-dicloro fenil) etilamino]-2-metóxi pirimidin-4-il} fenil)-2-metil propiônico

Etapa 1: Uma solução de 4,6-dicloro-2-metóxi pirimidina (0,7 g),2,4-dicloro fenetil amina (0,82 g) e bicarbonato de sódio (0,88 g) em etanol(25 mL) é aquecida a 80°C por três horas e vertida em água (400 mL). Osólido resultante é filtrado e secado ao ar para render (6-cloro-2-metóxi piri-midin-4-il)-[2-(2,4-dicloro fenil) etil] amina.

Etapa 2: A uma solução de lítio diisopropil amida em tetraidrofu-rano / n-heptano / etil benzeno (1,8 M, 17 mL) a O0C é adicionada uma solu- -ção de ácido 2-(3-bromo fenil) propiônico (3 g, 13,9 mmoles) em tetraidrofu-rano (5 mL) em gotas durante 15 minutos. A mistura é agitada por 1 hora,seguido pela adição de iodeto de metila (4,93 g, 34,8 mmoles) em tetraidro-furano (5 mL) em gotas durante 10 minutos. A mistura de reação é agitadapor 15 horas, rapidamente resfriada com HCI 2 N, concentrada a vácuo, ediluída com éter (150 mL). A camada de éter é lavada com HCI 2N, extraídatrês vezes com NaOH 2N (50 mL). As camadas de NaOH combinadas sãoaciduladas com HCI 6N para pH = 1 e extraídas três vezes com éter (75 mL).As camadas orgânicas combinadas são lavadas com salmoura, secadassobre sulfato de sódio e concentradas para obtenção de ácido 2-(3-bromofenil)-2-metil propiônico como um sólido (3,08 g, 91%), que é usado sem pu-rificação adicional. LC/MS: 243 (M+H).

Etapa 3: Uma solução de ácido 2-(3-bromo fenil)-2-metil propiô-nico (2,18 mmoles) em éter anidro (20 ml_) é adicionada a Iftio t-butila (1,7 Mem pentano, 5,4 mL, 9,16 mmoles) em gotas a -78°C e esta mistura é agita-da por 30 minutos, tratadacom borato de tributila (2,34 mL, 8,72 mmoles). Amistura de reação é deixada para aquecer à temperatura ambiente, agitadapor 15 horas, diluída com éter, e rapidamente resfriada com H3PO4 a 1 M.Após agitação por 30 minutos a camada de éter é separada e extraída trêsvezes com NaOH a 2N (20 mL). Os extratos de NaOH combinados são aci-dulados com HCI a 6Ν para pH = 1 e extraídos três vezes com éter (50 mL).Os extratos orgânicos combinados são lavados com salmoura, secados so-bre sulfato de sódio, e concentrados para renderem ácido 3-(1-carbóxi-1-metil etil) fenil borônico, que é usado sem ainda purificação. MS: 209(M+H).

Etapa 4: Uma solução de (6-cloro-2-metóxi pirimidin-4-il)-[2-(2,4-dicloro fenil)etil] amina (0,51 mmol) e ácido 3-(1-carbóxi-1-metil etil) fenil bo-rônico (0,61 mmol) em acetonitrila (2,5 mL) e solução aquosa de carbonatode sódio (2,5 mL a 0,4 M) é desgaseificada com nitrogênio por 5 minutosantes da adição de paládio tetrakistrifenilfosfina (0) (29,5 mg, 5 mol %). Ovaso de reação é selado e aquecido sob microondas para 130°C por 30 mi-nutos. À mistura de reação são adicionados 2 mL de água, o pH é ajustadopara cerca de 7 usando HCI aquoso a 2N e esta mistura é extraída três, ve-zes com acetato de etila (30 mL). Os extratos combinados são lavados comsalmoura, secados sobre sulfato de sódio, e concentrados. O resíduo ésubmetido à cromatografia de sílica gel para render ácido 2-(3-{6-[2-(2,4-dicloro fenil) etil amino]-2-metóxi pirimidin-4-il} fenil)-2-metil propiônico comoum sólido (205 mg, 75%). LC/MS: Rt = 2,39 minutos, MS: 460 (M+H); 1HNMR [300 MHz, (CD3)2SO]: δ 12.38 (1H, s), 7.36 - 8.00 (7H, m), 6.58 (1H,s), 3.84 (3H, s), 3.58 (2H, m), 2.98 (2H, m), 1.54 (6H, s).Etapa 5: Ácido fosfórico (3,21 mL, solução aquosa a 1,49 N) sãoadicionados a uma solução de ácido 2-(3-{6-[2-(2,4-dicloro fenil) etil amino]-2-metóxi pirimidin-4-il}fenil)-2-metil propiônico (2,1 g, 4,56 mmoles) em te-traidrofurano (45 mL) e a mistura é agitada por 10 minutos. Água é adiciona-da em gotas em intervalos até a mistura tornar-se uma solução clara, e agi-tação é continuada por 1,5 horas em temperatura ambiente. A mistura éconcentrada a vácuo, é o resíduo é recristalizado a partir de acetona pararender o sal diidrogeno fosfato de ácido 2-(3-{6-[2-(2,4-dicloro fenil) etil ami-no]-2-metóxi pirimidin-4-il} fenil)-2-metil propiônico como um pó (2,4 g, 94%).LCMS: Rt = 2.41 minutes; MS: 462 (M+H); 1H NMR [300 MHz,(CD3SO)2SO]: δ 7.95 (1H, b), 7.8 (1H, b), 7.6 (2H, b), 7.45 (2H, d, J=2Hz),7.35 (2H, s), 6.55 (1H, s), 3.85 (3H, s), 3.55 (2H, b), 2.95 (2H, t, J=2Hz), 1.5(6H, s).

TESTES FARMACOLÓGICOS

Os efeitos inibidores do composto de acordo com a invençãosão avaliados em um ensaio funcional de DP humana. Um ensaio cAMP éempregado usando a linha de células humanas LS174T, que expressa o re-ceptor de DP endógena. O protocolo é similar àquele descrito anteriormente(Wright DH, Ford-Hutchinson AW, Chadee K, Metters KM, The human pros-tanoid DP receptor Stimulates mucin secretion in LS174T cells, Br J Phar-macol. 131 (8): 1537-45 (2000)).

PROTOCOLO PARA ENSAIO SPA CAMP EM CÉLULAS LS174T HUMANAS

MATERIAIS

. PGD2 (Cayman Chemical CatneI2010) ...

. IBMX (Sigma Catne5879)

. cAMP SPA sistema de ensaio de seleção direta (Amershamcode RPA 559)

. placas de células de 96 cavidades (Wallac Catne 1450-516)

. contador de cintilação Wallac 1450 Microplate Trilux (PerkinElmer)

. selos de placa. tubos Eppendorf

. solução salina tamponada com fosfato de Dulbecco (PBS) (In-vitrogen Catn214040-133)

. água destilada. vórtice

. agitador magnético e barras de agitação

PREPARAÇÃO DE REAGENTE:

Todos os reagentes devem ser deixados equilibrarem para tem-peratura ambiente antes de reconstituição.

TAMPÃO DE ENSAIO 1X

Transferir os conteúdos da garrafa para um cilindro graduado de500 mL através de repetida lavagem com água destilada. Ajustar o volumefinal para 500 mL com água destilada e misturar inteiramente.

REAGENTE DE LISE 1 & 2

Dissolver cada um dos reagentes de Iise 1 e 2 em 200 mL detampão de ensaio respectivamente. Deixar em temperatura ambiente por 20minutos para dissolver.

PÉROLAS ANTICOELHO SPA

Adicionar 30 mL de tampão de Iise 2 à garrafa. Agitar suave-mente a garrafa por 5 minutos.

ANTI-SORO

Adicionar 15 mL de tampão de Iise 2 a cada frasco, e misturarsuavemente até os conteúdos serem completamente dissolvidos.

TRACADOR (I125-CAMP)

Adicionar 14 mL de tampão de Iise 2 a cada frasco e misturarsuavemente até os conteúdos serem completamente dissolvidos.

PREPARAÇÃO DE REAGENTE IMUNO

1) Adicionar volumes iguais de traçador, anti-soro e reagenteanticoelho SPA a uma garrafa, assegurando que um volume suficiente destamistura é preparado para o desejado número de cavidades (150μL/cavidade).

2) Misturar inteiramente.3) Esta solução de reagente imuno deve ser preparada recen-temente antes de cada ensaio e não reutilizada.PADRÃO

1) Adicionar 1 mL de tampão de Iise 1 e misturar suavementeaté os conteúdos serem completamente dissolvidos.

2) A solução final contém cAMP em uma concentração de 512pmoles/mL. -i

3) Rotular 7 tubos de polipropileno ou poliestireno, 0,2 pmol, 0,4pmol, 0,8 pmol, 1,6 pmoles, 3,2 pmoles, 6,4 pmoles, e 12,8 pmoles.

4) Pipetar 500 μΙ_ de tampão de Iise 1 em todos os tubos.

5) No tubo com 12,8 pmoles pipetar 500 μΙ_ de padrão estoque(512 pmoles/mL) e misturar inteiramente. Transferir 500 μ!_ de tubo de 12,8pmoles para o tubo de 6,4 pmoles e misturar inteiramente. Repetir esta dilui-ção de duplicação sucessivamente com os tubos restantes.

6) Alíquotas de 50 μΙ_ em duplicata de cada diluição serial e opadrão estoque originarão 8 níveis padrões de cAMP variando de 0,2-25,6pmoles de padrão.

TAMPÃO DE DILUIÇÃO DE COMPOSTO

Adicionar 50 μί de IBMX 1 mM em 100 mL de PBS para obteruma concentração final de 100 μΜ e sonificar a 30°C por 20 minutos.PREPARAÇÃO DE PGD2

Dissolver 1 mg de PGD2 (FW, 352,5) em 284 μί de DMSO paraobter solução estoque 10 mM e estocar a 20°C. Antes de cada ensaio, ela épreparada recentemente. Adicionar 3 μΙ_ de solução estoque 10 mM e 20 mLde DMSO, misturar inteiramente e transferir 10 mL para 40 mL de PBS.

DILUIÇÃO DE COMPOSTO

Várias bateladas do composto da invenção são testadas emuma placa de 96 cavidades. Cada batelada do composto ocupa uma fileirada placa de 96 cavidades.

Diluição de composto é realizada em Biomex 2000 (Beckman)usando Processo 1_cAMP DP 11 pontos.

5 μl de cada composto das placas de composto estoque 10 mMsão transferidos para as cavidades de uma placa de 96 cavidades respecti-vamente como abaixo.

<table>table see original document page 28</column></row><table> Encher a placa com 45 μL de DMSO exceto coluna 7 que é en-chida com 28 μL de DMSO. Pipetar a coluna 1 inteiramente, e transferir 12μL em coluna 7 paralela. Realizar diluição em série 1:10a partir da coluna 1para a coluna 6 e da coluna 7 para a coluna 11 através de transferência de 5

<table>table see original document page 28</column></row><table>

Encher uma nova placa de 96 cavidades com 247,5 μί de tam-pão de diluição de composto. Transferir 2,5 μΙ_ de compostos diluídos emsérie da placa acima para a nova placa (diluição 1:100) como se segue:

<table>table see original document page 28</column></row><table><table>table see original document page 29</column></row><table>

CRESCIMENTO DE CÉLULA

1. LS174 T são sempre crescidas em MEM (ATCC CatnQ30-2003), FBS 10% (ATCC Catn930-2020) e adicional L-glutamina 2 mM, a37°C e 5% de CO2.

2. Aquecer tripsina 0,05% e Versina (Invitrogen Catns25300-054) a 37°C em banho de água.

3. Remover meio de crescimento das células. Células em frascoT165 são lavadas duas vezes com 4 mL de Tripsina seguido por incubaçãoa 37°C e 5% de CO2 por 3 minutos.

4. Adicionar 10 mL de meio e pipetar inteiramente para separaras células e contar as mesmas.

5. Levar a densidade de célula para 2,25x105 células/mL e se-mear 200 μί de células/cavidade (45000 células / cavidade) em placas de96 cavidades 1 dia antes de ensaio.

PROCEDIMENTO DE ENSAIO

DIA 1

Semear 45 000 células / cavidade em 200 μί de meio em pla-cas de 96 cavidades. Incubar a placa de células a 37°C, 5% de CO2 e 95%de umidade por toda noite.

DIA 2

1. Realizar diluição de composto.

2. Preparar tampão de ensaio, tampões de Iise 1 & 2, PGD2 epadrão.

3. Aspirar meios das células e adicionar 100 μ\- de solução decomposto usando protocolo Zymark Sciclone-ALH/FD cAMP DP.4. Incubar as células a 37°C, 5% de CO2 e 95% de umidade porminutos.

5. Adicionar 5 μΐ de PGD2 300 nM (20X concentração final denM) em cada cavidade usando protocolo Zymark cAMP DP PGD2, e in-cubar as células a 37°C, 5% de CO2 e 95% de umidade por 15 minutos adi-cionais.

6. Aspirar meios das células e adicionar 50 μΙ_ de tampão de Iise1 usando protocolo Zymark cAMP DP lise, e incubar em temperatura ambi-ente com agitação por 30 minutos.

7. Adicionar 150 μΙ_ de reagente imuno a todas as cavidades(um volume total de 200 μL/cavidade).

8. Selar as placas e agitar por 2 minutos, colocar na câmara docontador de cintilação Wallac microtitre plate μ por 16 horas.

DIA 3

Contar a quantidade de [125I] cAMP por 2 minutos em um conta-dor de cintilação 1450 Trilux.PROCESSAMENTO DE DADOS

Estabelecer curva padrão de cAMP versus CPM.TABELA 1. DADOS DE ENSAIO TÍPICO PARA PADRÃO

<table>table see original document page 30</column></row><table>

As concentrações de cAMP (pmol/mL) de amostras desconheci-das são calculadas a partir de uma curva padrão de cAMP versus CPM % deinibição é calculada usando a seguinte fórmula:

% de inibição = (pmol de controle - pmol de amostra) χ 100pmol de controle(células + somente PGD2)RESULTADOS

O sal diidrogeno fosfato produz 50% de inibição no ensaio SPAcAMP em células LS174 T humanas em uma concentração de 0,3 nanomo-lar.

O sal diidrogeno fosfato tem aumentada a solubilidade aquosasobre a forma livre e o sal cloridrato. A seguinte tabela lista as solubilidadesda forma livre, o sal cloridrato e o sal diidrogeno fosfato a 25°C em tampãofosfato (PBS, pH 7,4, uma mistura 19% de uma solução de fosfato de sódiomonobásico a 0,1 Me 81% de uma solução de fosfato de sódio dibásico 0,1M) e as solubilidades da forma livre e o sal diidrogeno fosfato a 37°C em umfluido intestinal simulado sob condições jejuadas ("FaSSIF", preparado deacordo com Dressman J.B., Amidon G.L., Reppas C. e Shah V.P., Dissoluti-on testing as a prognostic tool for oral drug absortion: immediate release do-sage forms, Pharmaceutical Research: 1998, Vol. 5, No. 1, 11-22).

<table>table see original document page 31</column></row><table>

O sal diidrogeno fosfato também tem inesperadas propriedadesque são úteis parajabricação em larga escala e formulação farmacêutica.Primeiro, o sal diidrogeno fosfato tem cristalinidade muito boa. A XRPD dosal diidrogeno fosfato mostrada na Figura 1 contém picos com intensidadese resolução moderadas. A ausência de um halo na região 2-teta média suge-re pequena, se qualquer, fase amorfa. Em adição, fotomicrografias pré- epós-moagem do sal diidrogeno fosfato mostradas na Figura 8 evidenciamuma boa redução em tamanho de partícula em mudança em propriedadesfísico-químicas.

O sal de sódio, entretanto, tem baixa cristalinidade. Como mos-trado na Figura 11, a XRPD de Batelada 2 do sal de sódio contém picos am-plos com baixas intensidades, indicando baixa cristalinidade. A XRPD deBatelada 1 do sal de sódio mostra que o material é na maior parte amorfo.Em adição, a presença de um halo na região 2-teta média na XRPD de am-bas bateladas sugere cristalinidade muito pobre do material.

Além disso, o sal diidrogeno fosfato presentemente foi mostradoexistir somente em uma forma polimórfica. O sal cloridrato, entretanto, pre-sentemente foi mostrado existir em três formas polimórficas, que podem sersujeitas à interconversão sob certas condições. Uma das formas polimórficasdo sal cloridrato, Batelada 2 na Figura 12, tem baixa cristalinidade na medidaem que a XRPD contém amplos picos com baixas intensidades. Uma outradas formas polimórficas do sal cloridrato, Batelada 1 na Figura 12, tem boacristalinidade.

Claims (14)

1. Composto de fórmula (III)<formula>formula see original document page 33</formula>

2. Composto de acordo com a reivindicação 1 em uma formacristalina.

3. Composição farmacêutica compreendendo uma quantidadefarmaceuticamente efetiva do composto de acordo com a reivindicação 1 emmistura com um veículo farmaceuticamente aceitável.

4. Processo para tratamento de uma doença alérgica, mastoci-tose sistêmica, um distúrbio acompanhado por ativação sistêmica de mastó-citos, choque anafilático, broncoconstrição, bronquite, urticária, eczema, do-enças acompanhadas por coceira, uma doença que é gerada secundaria-mente como um resultado de comportamento acompanhado por coceira,inflamação, doenças pulmonares obstrutivas crônicas, dano de reperfusãoisquêmica, acidente cérebro - vascular, artrite reumatóide crônica, pleurisia,ou colite ulcerativa, em um paciente com necessidade do mesmo, compre-endendo administração ao paciente de uma quantidade farmaceuticamenteefetiva do composto como definido na reivindicação 1.

5. Processo de acordo com a reivindicação 4, em que a doençaque é gerada secundariamente como um resultado de comportamento a-companhado por coceira é catarata, descolamento de rétina, inflamação,infecção ou distúrbio de sono.

6. Processo para tratamento de rinite alérgica, conjuntivite alér-gica, dermatite atópica, asma bronquial, alergia a alimento, mastocitose sis-têmica, um distúrbio acompanhado por ativação sistêmica de mastócitos,choque anafilático, broncoconstrição, bronquite, urticária, eczema, dermatiteatópica, urticária, inflamação, doenças pulmonares obstrutivas crônicas, da-no de reperfusão isquêmica, acidente cérebro - vascular, artrite reumatóidecrônica, pleurisia ou colite ulcerativa, em um paciente em sua necessidadedo mesmo, compreendendo administração ao paciente de uma quantidadefarmaceuticamente efetiva do composto como definido na reivindicação 1.

7. Processo para tratamento de um paciente sofrendo de umadoença alérgica, em um paciente com necessidade do mesmo, compreen-dendo administração ao paciente de uma quantidade farmaceuticamenteefetiva do composto como definido na reivindicação 1.

8. Processo para tratamento de um paciente sofrendo de asmabronquial compreendendo administração ao paciente de uma quantidadefarmaceuticamente efetiva do composto como definido na reivindicação 1.

9. Processo para tratamento de um paciente sofrendo de rinitealérgica compreendendo administração ao paciente de uma quantidade far-maceuticamente efetiva do composto como definido na reivindicação 1.

10. Processo para tratamento de um paciente sofrendo de der-matite alérgica compreendendo administração ao paciente de uma quantida-de farmaceuticamente efetiva do composto como definido na reivindicação 1.

11. Processo para tratamento de um paciente sofrendo de con-juntivite alérgica compreendendo administração ao paciente de uma quanti-dade farmaceuticamente efetiva do composto como definido na reivindicação 1.

12. Processo para tratamento de um paciente sofrendo de do-ença pulmonar obstrutiva crônica compreendendo administração ao pacientede uma quantidade farmaceuticamente efetiva do composto como definidona reivindicação 1.

13. Composição farmacêutica cómpreendendo uma quantidadefarmaceuticamente efetiva do composto como definido na reivindicação 1, eum composto selecionado do grupo consistindo em uma anti-histamina, umantagonista de leucotrieno, um beta agonista, um inibidor de PDE4, um an-tagonista de TP e um antagonista de CrTh2, em mistura com um veículofarmaceuticamente aceitável.

14. Composição farmacêutica de acordo com a reivindicação 13,em que a anti-histamina é dexofenadina, desloratadina, loratadina ou citirizi-na, o antagonista de Ieucotrieno é montelukast ou zafirulast, o beta agonistaé albuterol, salbuterol ou terbutalina, o inibidor de PDE4 é roflumilast ou ci-lomilast, o antagonista de TP é Ramatrobran1 e o antagonista de CrTh2 éRamatrobran.