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BRPI0518861B1 - compostos, sais ou hidratos farmaceuticamente aceitos, composição farmacêutica e uso de quantidade terapeutica ou profilaticamente eficaz de composto ou de composição farmacêutica - Google Patents

compostos, sais ou hidratos farmaceuticamente aceitos, composição farmacêutica e uso de quantidade terapeutica ou profilaticamente eficaz de composto ou de composição farmacêutica Download PDF

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BRPI0518861B1
BRPI0518861B1 BRPI0518861-0A BRPI0518861A BRPI0518861B1 BR PI0518861 B1 BRPI0518861 B1 BR PI0518861B1 BR PI0518861 A BRPI0518861 A BR PI0518861A BR PI0518861 B1 BRPI0518861 B1 BR PI0518861B1
Authority
BR
Brazil
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mmol
pyrimidine
thiazole
compounds
amino
Prior art date
Application number
BRPI0518861-0A
Other languages
English (en)
Inventor
Gregory J. Haley
Joseph R. Lennox
Alan X. Xiang
Erik J. Rueden
Stephen E. Webber
Original Assignee
Anadys Pharmaceuticals, Inc
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by Anadys Pharmaceuticals, Inc filed Critical Anadys Pharmaceuticals, Inc
Publication of BRPI0518861A2 publication Critical patent/BRPI0518861A2/pt
Publication of BRPI0518861B1 publication Critical patent/BRPI0518861B1/pt
Publication of BRPI0518861B8 publication Critical patent/BRPI0518861B8/pt

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Abstract

COMPOSTOS,SAIS OU HIDRATOS FARMACEUTICAMENTE ACEITOS, COMPOSIÇÃO FARMACÊUTICA E MÉTODOS DE MODULAÇÃO DE ATIVIDADES IMUNO DAS CITOCINAS E DE TRATAMENTO DA INFECÇÃO POR VÍRUS DA HEPATITE C EM PACIENTE. A invenção é direcionada a compostos e pró-fármacos de 3,5-dissubstituído e 3,5,7-trissubstituído- 3H-oxazolo e 3H-tiazolo[4,5-d]pirimidina-2-ona que possuem atividade imunorreguladora. A invenção é direcionada ainda aos usos terapêutico e profilático desses compostos e de composições farmacêuticas que os contenham e aos métodos de tratamento de doenças e desordens aqui descritas através da administração de quantidades eficazes desses compostos e pró- fármacos.

Description

RELATÓRIO DESCRITIVO CAMPO DA INVENÇÃO
[001] A invenção é direcionada a compostos e pró-fármacos de 3,5-dissubstituído e 3,5,7-trissubstituído-3H-oxazolo e 3H-tiazol[4,5- d]pirimidina-2-ona que possuem atividade imunorreguladora. A invenção é direcionada ainda aos usos terapêutico e profilático desses compostos e de composições farmacêuticas que os contem e aos métodos de tratamento de doenças e desordens descritas aqui através da administração de quantidades eficazes desses compostos e pró-fármacos.
HISTÓRICO DA INVENÇÃO
[002] Nas últimas décadas, houve esforços significativos na exploração dos possíveis usos terapêuticos dos análogos de guanina e de nucleosídeos baseados neles. Um grupo de análogos de nucleosídeos está sendo comercializado como drogas antivirais, incluindo inibidores de transcriptase reversa, como AZT, ddI, ddC, d4T, 3TC e o análogo de nucleosídeo, abacavir. Embora não pertençam a uma teoria específica, os análogos de nucleosídeo podem gerar benefícios por meio da inibição direta do patógeno ou tumor, pelo estímulo das funções imuno do hospedeiro ou por alguma combinação desses ou de outros mecanismos.
[003] Um dos análogos de guanosina com atividade imunorreguladora estudados é o 5-ammo-3-(β-D-ribofuranosiltiαzol[4,5- d]pirimidina-2,7(3H, 6H) diona (7-tia-8-oxoguanosina). Por exemplo, certos nucleosídeos pirimido[4,5-d]pirimidina são revelados na Patente US 5.041.542 de Robins e colaboradores como sendo eficazes no tratamento de L1210 camundongos BDFl. Além disso, 3-[β]-D- ribofuranosil-tiazol[4,5-d]pirimidinas que demonstram uma significativa imunoatividade, incluindo proliferação em células de baço de camundongos e atividade in vivo contra o vírus da Floresta de Semliki, são reveladas nas Patentes US 5.041.426 e 4.880.784 de Robins e colaboradores. Várias publicações também descreveram derivados não- glicosílicos do grupo tiazol[4,5-d]pirimidina. Ver, por exemplo, as Patentes US 5.994.321 e 5.446.045; Revankar e colaboradores, J. Het. Chem., 30, 1341-49 (1993); Lewis e colaboradores, J. Het. Chem., 32, 547-56 (1995).
SUMÁRIO DA INVENÇÃO
[004] A presente invenção descreve novos compostos de 3,5-dissubstituída e 3,5,7-trissubstituída-3H-oxazolo e 3H-tiazol[4,5-d]piri- midina-2-ona, pró-fármacos farmaceuticamente ativos, metabólitos farmaceuticamente ativos, sais farmaceuticamente aceitos e solvatos dos mesmos farmaceuticamente aceitos, que são úteis como imunorreguladores.
[005] Em outra modalidade, a presente invenção aborda um método de tratamento ou prevenção da infecção por vírus da hepatite C, num paciente que necessite desse tratamento ou prevenção, que consiste na administração ao paciente de uma quantidade eficaz terapêutica ou profilaticamente de um composto ou pró-fármaco de 3,5-dissubstituída e 3,5,7-trissubstituída-3H-oxazolo e 3H- tiazol[4,5-d]pirimidina-2-ona. De maneira geral, a invenção relaciona-se com pró-fármacos que são compostos de 3,5-dissubstituída e 3,5,7-trissubstituí-da-3H-oxazolo e 3H-tiazol[4,5-d]pirimidina-2-ona da Fórmula I
Figure img0001
em que X é O ou S, Y é O ou S, R1 é H, alquil, aril, cicloalquil ou heterociclil, R2 é NH2, -NHC(O)R4, -NHR5, -N=CHNR6R7, R3 é H, Cl, Br ou OR8, R4 é -Ci-C7-alquil ou -O(Ci-C7-alquil), R5 é -C1-C7-alquil, R6 e R7 são independentemente -C1-C7-alquil ou junto com nitrogênio formam um anel heterocíclico de 5 ou 6 componentes, R8 é -CHR9R10, R9 é H, -C1-C7-alquil, cicloalquil, aril, heterociclil, -NR11R12 ou OR5, R10 é -C1-C7-alquil, cicloalquil, aril, heterociclil, -NR11R12 ou OR5, R11 e R12 são independentemente H, -C1-C7-alquil, ou -C(O)R4, sendo que quando X é O, Y é S, e R3 é H, Cl, Br ou OR8, R1 não é H ou β- D-ribose ou ésteres destes, sendo que os grupos alquil, aril, cicloalquil ou heterociclilacima são opcionalmente substituídos por 1-4 substituintes selecionados entre hidrogênio, alcanoil, alquilmina, amino, aril, cicloalquil, heterociclil azido, C1-C6 alquil, C1-C6 haloalquil, C1-C6 hidroxialquil, C1-C6 alcoxi, C1-C6 alquilmina, C1-C6 dialquilmina, C2-C6 alquenil ou C2-C6 alquinil, sendo que cada um destes pode ser interrompido por um ou mais heteroátomos, carboxila, ciano, halo, hidroxi, mercapto, nitro, tioalquil, -N=N-NH2, -C(O)2-(C1-C6 alquil), -C(O)2-(aril), -C(O)2-(cicloalquil), -C(O)2- (heterociclil), -O-(C1-C6 haloalquil), -O-(C1-C6 alquil)aril, -O-(C1-C6 alquil) cicloalquil, -O-(C1-C6 alquil)heterociclil, -O-(C1-C6 alquil)amino, -O-(C1-C6 alquil)alquilamino, -O-(C1-C6 alquil)dialquilamino, -0-(C1-C6 alquil)-C(O)- amino, -O-(C1-C6 alquil)-C(0)-alquilamino, -O-(C1-C6 alquil)-S(O)2-amino, -0-(C1-C6 alquil)-S(O)2-alquilamino, -O-(C1-C6 alquil)- S(O)2- dialquilamino, -O-(C1-C6 alquil)-C(O)-dialquilamino, -O-aril, -O-hetero-ciclil, -NHC(O)- (C1-C6 alquil), -NHC(O)-(C1-C6 alquenil), -NHC(O)-(aril), -NHC(O)-(ciclo- alquil), -NHC(O)-(heterociclil), -NHC(O)-(C1-C6 alquil)aril, -NHC(O)-(C1-C6 alquil)cicloalquil, -NHC(O)-(C1-C6 alquil)heterociclil, -NHC(O)-(C1-C6 alquil)amino, -NHC(O)-(C1-C6 alquil)alquilmina, -NHC(O)-(C1-C6 alquil) dialquilmina, -NHC(O)-(C1-C6 alquil)C(O)amino, -NHC(O)-(C1-C6 alquil) C(O)alquilmina, -NHC(O)-(C1-C6 alquil)C(O)dialquilmina, -NHC(O)-(C1-C6 alquil)N(H)-(C1-C6 alquil)C(O)2-(C1-C6 alquil), -NH-(C1-C6 alquil)-C(O)- amino, -NH-(C1-C6 alquil)-C(O)-alquilamino, -NH-(C1-C6 alquil)-C(O)- dialquilamino, -NHC(O)-(C1-C6 alquil)S(O)2(C1-C6 alquil), -NHC(O)-(C1- C6 alquil)-S-(heterociclil), -NHS(O)2-(C1-C6 alquil), -NHS(O)2-(aril), -NH- (C1-C6 alquil)-S(O)2- amino, -NH-(C1-C6 alquil)-S(O)2-alquilamino, -NH- (C1-C6 alquil)-S(O)2-dialquilamino, -NHS(O)2-(cicloalquil), -NHS(O)2- (heterociclil), -NHS(O)(C1-C6 alquil), -NHS(O)(aril), -NHS(O)(cicloalquil), - NHS(O)(hete-rociclil), -NHS(C1-C6 alquil), -NHS(aril), -NHS(cicloalquil) e - NH-S-(hetero-ciclil), sendo que cada um dos substituintes acima pode ser ainda opcionalmente substituído por 1-5 substituinte selecionados entre amino, C1-C6 alquilmina, C1-C6 dialquilmina, C1-C6 alquil, C1-C6 alcoxi, C1-C6 alquenil, C1-C6 hidroxil e C1-C6 hidroxialquil, cada um opcionalmente substituído por ciano, halo e nitro, ou um sal, hidrato ou estereoisômero deste famaceuticamente aceito.
[006] Numa modalidade, a invenção relaciona-se com compostos da Fórmula I nos quais R é NH2.
[007] Em outra modalidade, a invenção relaciona-se com compostos da Fórmula I nos quais R3 é H.
[008] Em outra modalidade, a invenção relaciona-se com compostos da Fórmula I nos X é O e Y é S.
[009] Em outra modalidade, a invenção relaciona-se com compostos da Fórmula I em que R1 é selecionado entre
Figure img0002
Figure img0003
Figure img0004
[0010] Noutra modalidade, a invenção relaciona-se com compostos da Fórmula I selecionados dentre
Figure img0005
Figure img0006
Figure img0007
Figure img0008
[0011] Noutro aspecto geral, a invenção relaciona-se com compostos de 3,5-dissubstituída e 3,5,7-trissubstituída-3H-oxazolo e 3H-tiazol[4,5- d]pirimidina-2-ona da Fórmula II
Figure img0009
em que X é O ou S, Y é O ou S, Z é O ou CH2, R2 é NH2, -NHC(O)R4, -NHR5, -N=CHNR6R7, R4 é -Ci-C7-alquil ou -O(Ci-C7-alquil), R5 é -C1-C7-alquil, R6 e R7 são independentemente -C1-C7-alquil ou junto com nitrogênio formam um anel heterocíclico de 5 ou 6 componentes, R13 é OH ou SH, R14 é H, -CH2OH, ou -CH2-O-C(O)C1-18 alquil, R15 é OH, alquenil, -OC(O)C1-18 alquil, -OC(O)aril ou -OC(0)heterociclil, R16, R17, R18, e R19 são independentemente H, halo, N3, alquil, - (CH2)mOR20, -(CH2)mOC(O)C1-18 alquil, -OC(O)aril, -OS(O)2aril ou R16 e R17 são uma alquenil ou R17 e R19 se combinam para formar um anel dioxólico, R20 é H ou alquil, m é 0 ou 1, n é 1 ou 2, sendo que, se R2 for NH2, então um dos seguintes deve estar presente: Z é CH2; ou n é 2 ou m é 1; pelo menos um entre R16, R17, R18 e R19 é halo, N3, alquil ou -(CH2)mOR20 sendo que m é 1 e sendo que, se R17 é N3, então, R18 e R19 não são H e sendo que, se R17 é OH e R16 e R19 são H, então, R18 não é F; ou R16 e R17 são uma alquenil, sendo que os grupos alquil, aril, cicloalquil ou heterociclil acima são opcionalmente substituídos por 1-4 substituintes selecionados entre hidrogênio, alcanoil, alquilmina, amino, aril, cicloalquil, heterociclil azido, C1-C6 alquil, C1-C6 haloalquil, C1-C6 hidroxialquil, C1-C6 alcoxi, C1-C6 alquilmina, C1-C6 dialquilmina, C2-C6 alquenil ou C2-C6 alquinil, sendo que cada um destes pode ser interrompido por um ou mais heteroátomos, carboxila, ciano, halo, hidroxi, mercapto, nitro, tioalquil, -N=N-NH2, -C(O)2-(C1-C6 alquil), -C(O)2-(aril), -C(O)2-(cicloalquil), -C(O)2- (heterociclil), -O-(C1-C6 haloalquil), -O-(C1-C6 alquil)aril, -O-(C1-C6 alquil)cicloalquil, -O-(C1-C6 alquil)heterociclil, -O-(C1-C6 alquil)amino, -O- (C1-C6 alquil)alquilamino, -O-(C1-C6 alquil)dialquilamino, -0-(C1-C6 alquil)-C(O)-amino, -O-(C1-C6 alquil)-C(0)-alquilamino, -O-(C1-C6 alquil)- S(O)2- amino, -0-(C1-C6 alquil)-S(O)2-alquilamino, -O-(C1-C6 alquil)-S(O)2- dialquil-imino, -O-(C1-C6 alquil)-C(O)-dialquilamino, -O-aril, -O- heterocciclil, -NHC (O)-(C1-C6 alquil), -NHC(O)-(C1-C6 alquenil), -NHC(O)- (aril), -NHC(O)-(cicloalquil), -NHC(O)-(heterociclil), alquil)aril, -NHC(O)-(C1-C6 alquil)cicloalquil, alquil)heterociclil, -NHC(O)-(C1-C6 alquil)amino, alquil)alquilmina, -NHC(O)-(C1-C6 alquil) dialquilmina, alquil)C(O)amino, -NHC(O)-(C1-C6 alquil) C(O)alquilmina, -NHC(O)-(C1-C6 alquil)C(O)dialquilmina, -NHC(O)-(C1-C6 alquil)N(H)-(C1-C6 alquil)C(O)2- (C1-C6 alquil), -NH-(C1-C6 alquil)-C(O)-amino, -NH-(C1-C6 alquil)-C(O)- alquilamino, -NH-(C1-C6 alquil)-C(O)-dialquilamino, -NHC(O)-(C1-C6 alquil)S(O)2(C1-C6 alquil), -NHC(O)-(C1-C6 alquil)-S-(heterociclil), -NHS (O)2-(C1-C6 alquil), -NHS(O)2-(aril), -NH-(C1-C6 alquil)-S(O)2-amino, -NH- (C1-C6 alquil)-S(O)2-alquilamino, -NH-(C1-C6 alquil)-S(O)2-dialquil amino, -NHS(O)2-(cicloalquil), -NHS(O)2-(heterociclil), -NHS(O)(C1-C6 alquil), -NH S(O)(aril), -NHS(O)(cicloalquil), -NHS(O)(heterociclil), -NHS (C1-C6 alquil), -NHS(aril), -NHS(cicloalquil) e -NH-S-(heterociclil), sendo que cada um dos substituintes acima pode ser ainda opcionalmente substituído por 1-5 substituinte selecionados entre amino, C1-C6 alquilmina, C1-C6 dialquilmina, C1-C6 alquil, C1-C6 alcoxi, C1-C6 alquenil, C1-C6 hidroxil e C1-C6 hidroxialquil, cada um opcionalmente substituído por ciano, halo e nitro, ou um sal, hidrato ou estereoisômero deste famaceuticamente aceito.
[0012] Em outra modalidade, a invenção relaciona-se com compostos da Fórmula II em que R é NH2.
[0013] Em outra modalidade, a invenção relaciona-se com compostos da Fórmula II em que R13 é OH.
[0014] Em outra modalidade, a invenção relaciona-se com compostos da Fórmula II em que X é O e Y é S.
[0015] Em outra modalidade, a invenção relaciona-se com compostos da Fórmula I selecionados entre
Figure img0010
Figure img0011
[0016] Noutro aspecto geral, a invenção relaciona-se com compostos de 3,5-dissubstituída e 3,5,7-trissubstituída-3H-oxazolo e 3H-tiazol[4,5- d]pirimidina-2-ona selecionados dentre
Figure img0012
[0017] A invenção também está direcionada a metabólitos ativos, sais farmaceuticamente aceitos e solvatos farmaceuticamente aceitos dos compostos ou metabólitos dos pró-fármacos da Fórmula I, dos compostos da Fórmula II e de outros compostos da invenção. Também são descritos métodos vantajosos de para se produzir os compostos da invenção.
[0018] Os pró-fármacos da Fórmula I, os compostos da Fórmula II e os outros compostos da invenção são úteis como acentuadores do sistema imuno e possuem certas propriedades do sistema imuno, incluindo modulação, mitogenicidade, aumento e/ou potencialização ou são intermediários para compostos com essas propriedades. Espera-se que os compostos tenham efeito sobre as células natural killer, macrófagos, células dendríticas ou linfócitos do sistema imuno de um hospedeiro. Devido a essas propriedades, eles são úteis como agentes antivirais e antitumores. Eles podem ser usados para tratar um hospedeiro afetado servindo como ingredientes ativos de composições farmacêuticas apropriadas.
[0019] Num aspecto da invenção, os pró-fármacos da Fórmula I, os compostos da Fórmula II e outros compostos da invenção são utilizados para tratar a gama completa de doenças virais em mamíferos, incluindo humanos, por meio da administração ao mamífero de quantidades eficazes terapêuticamente dos compostos. As doenças virais contempladas para serem tratadas com os compostos da invenção incluem infecções crônicas e agudas causadas tanto por vírus de RNA quanto de DNA. Sem limitar de forma nenhuma a gama de infecções virais que podem ser tratadas, os pró-fármacos da Fórmula I, os compostos da Fórmula II e outros compostos da invenção são particularmente úteis no tratamento de infecções causadas por adenovírus, citomegalovírus, vírus da hepatite (HAV), vírus da hepatite B (HBV), flavivírus (incluindo o vírus da febre amarela e o vírus da hepatite C (HCV)), herpes simplex tipo 1 e 2, herpes zóster, herpesvírus humano 6, vírus da imundeficiência humana (HIV), vírus do papiloma humano (HPV), influenza A, influenza B, sarampo, parainfluenza, poliovírus, poxvírus (incluindo o da varíola e da varíola dos macacos (monkeypox)), rinovírus, vírus sincicial respiratório (RSV), múltiplas famílias de vírus que causam febres hemorrágicas, incluindo o arenavírus (LCM, vírus Junin, vírus Machup, vírus Guanarito e vírus da febre de Lassa), Bunyavirus (hantavírus e da febre do vale Rift) e filovírus (Ebola e Marburg), várias encefalites virais, incluindo vírus do Oeste do Nilo, vírus LaCrosse, vírus da encefalite da Califórnia, vírus da encefalite equina venezuelana, vírus da encefalite equina oriental, vírus da encefalite equina ocidental, vírus da encefalite japonesa, vírus da floresta de Kysanur e vírus transmitidos por artrópodos, como o vírus da febre hemorrágica da Criméia-Congo.
[0020] Noutro aspecto da invenção, os pró-fármacos da Fórmula I, os compostos da Fórmula II e outros compostos da invenção são utilizados para tratar infecções bacterianas, micóticas e protozoárias em mamíferos por meio da administração de quantidades eficazes terapêuticamente dos compostos. Toda a gama de microrganismos patogênicos é contemplada para tratamento com os compostos da presente invenção, incluindo, sem limitação, aqueles microrganismos que são resistentes a antibióticos. A capacidade dos compostos de ativar múltiplos componentes do sistema imuno escapa dos mecanismos de resistência comumente encontrados para reduzir da susceptibilidade a antibióticos, e, assim, o tratamento de infecções em mamíferos por meio do uso dos pró-fármacos da Fórmula I, dos compostos da Fórmula II e doutros compostos da invenção é uma utilidade especial da presente invenção.
[0021] Noutro aspecto da invenção, os pró-fármacos da Fórmula I, os compostos da Fórmula II e outros compostos da invenção são utilizados para tratar tumores em mamíferos por meio da administração de quantidades terapêuticamente eficazes dos compostos. Os tumores ou cânceres contemplados para tratamento incluem, mas, não estão limitados àqueles causados por vírus e o efeito pode envolver a inibição da transformação de uma célula infectada por vírus para um estado neoplásico, a inibição do espalhamento do vírus de células transformadas para células normais e/ou a parada do crescimento das células transformadas com vírus. Espera-se que os compostos da invenção sejam úteis contra um amplo espectro de tumores, incluindo, mas, sem limitação, carcinomas, sarcomas e leucemias. Estão incluídos nessa classe os carcinomas mamário, de cólon, de bexiga, pulmonar, de próstata, de estômago e pancreático, e as leucemias linfoblásticas e mielóide.
[0022] Noutros aspecto da invenção, um método para tratar um mamífero consiste na administração de uma quantidade terapêutica e/ou profilaticamente eficaz de um fármaco contendo um composto da invenção. Neste aspecto, o efeito pode estar relacionado à modulação de alguma parte do sistema imuno do mamífero, especialmente a modulação das atividades citocínicas de Th1 e Th2, incluindo, mas não limitadas à família interleucina, por exemplo, de IL-1 até IL-12, e a outras citocinas, tais como o TNF alfa e os interferons, incluindo o interferon alfa, o interferon beta e o interferon gama, e seus alvos posteriores (downstream effectors). Contempla-se que, onde a modulação das citocinas Th1 e Th2 ocorre, a modulação pode incluir o estímulo de ambas a Th1 e Th2, a supressão de ambas a Th1 e Th2, o estímulo de Th1 ou de Th2 e a supressão da outra ou uma modulação bimodal em que ocorre um efeito sobre os níveis de Th1/Th2 (como a supressão generalizada) quando há uma alta concentração, enquanto outro efeito (como o estímulo de Th1 ou Th2 e a supressão da outra) ocorre, quando há uma baixa concentração.
[0023] Noutro aspecto da invenção, composições farmacêuticas contendo um pró-fármaco da Fórmula I, um composto da Fórmula II ou outro composto da invenção são administradas numa dose terapêuticamente eficaz a um mamífero que está recebendo drogas contra a infecção que não estão incluídas entre os compostos da invenção. Num aspecto desejável da invenção, as composições farmacêuticas contendo um pró-fármaco da Fórmula I, um composto da Fórmula II ou outro composto da invenção são administradas numa dose terapêuticamente eficaz com drogas contra a infecção que agem diretamente no agente infeccioso para inibir seu crescimento ou matá-lo.
[0024] Noutro aspecto, a invenção aborda um método para tratar ou prevenir a infecção de um mamífero necessitado pelo vírus da hepatite C, de preferência, em humano necessitado.
[0025] Noutro aspecto, a invenção aborda um método para tratar ou prevenir a infecção de um paciente necessitado pelo vírus da hepatite C, que consiste em administrar ao paciente uma quantidade terapêutica ou profilaticamente eficaz de um pró-fármaco da Fórmula I, um composto da Fórmula II ou outro composto da invenção e um excipiente, veículo ou veículo farmaceuticamente aceito.
[0026] Noutro aspecto, a invenção aborda um método para tratar ou prevenir a infecção de um paciente necessitado pelo vírus da hepatite C, que consiste em administrar ao paciente uma quantidade terapêutica ou profilaticamente eficaz de um composto de um pró-fármaco da Fórmula I, um composto da Fórmula II ou outro composto da invenção e um agente terapêutico adicional, de preferência, um agente antiviral ou antitumor adicional apropriado para o uso pretendido.
[0027] Num aspecto desejável da invenção, uma composição farmacêutica consistindo numa quantidade terapêuticamente eficaz de um pró-fármaco da Fórmula I permite uma melhor disponibilidade oral e administração como imunomodulador. Noutro aspecto desejável da invenção, uma composição farmacêutica consistindo numa quantidade terapêuticamente eficaz de um pró-fármaco da Fórmula I da invenção permite mascarar a estrutura ativa quando o agente passa pelo tecido linfóide que reveste o estômago, minimizando assim a ativação desse tecido e permitindo uma melhor tolerância oral.
BREVE DESCRIÇÃO DOS DESENHOS
[0028] A FIG. 1 mostra um gráfico de pg/ml de IFN-a induzido em PBMCs humanos pelo composto 134 vs. um de pg/ml de IFN-a induzido por uma concentração idêntica de isatoribina.
[0029] A FIG. 2 mostra um gráfico de pg/ml de IFN-α induzido em PBMCs humanos pelo composto 122 vs. um de pg/ml de IFN-α induzido por uma concentração idêntica de isatoribina.
DESCRIÇÃO DETALHADA DA INVENÇÃO E DAS MODALIDADES PREFERIDAS
[0030] Quando só seguintes termos forem empregados neste Relatório Descritivo, eles o são como definido abaixo:
[0031] Os termos “consistindo” e “incluindo” são empregados aqui no seu sentido aberto e não limitativo.
[0032] O termo “pirimidina” refere-se a heterociclos monocíclicos nitrogenosos.
[0033] O termo “alquil”, como empregado aqui, a menos que seja indicado outro significado, inclui radicais carboidrato monovalentes saturados que possuam grupos retos, ramificados ou cíclicos (incluindo grupos bicíclicos e espirocíclicos fundidos e ligados) ou uma combinação desses grupos. Para que uma alquil possua grupos cíclicos, ela deve ter pelo menos três átomos de carbono.
[0034] O termo “alquenil”, como empregado aqui, a menos que seja indicado outro significado, inclui grupos alquil que possuam pelo menos uma ligação dupla carbono-carbono, sendo que a alquil é como definida acima e incluindo os isômeros E e Z desse grupo alquenil.
[0035] O termo “alquinil”, como empregado aqui, a menos que seja indicado outro significado, inclui grupos alquil que possuam pelo menos uma ligação tripla carbono-carbono, sendo que a alquil é como definida acima.
[0036] O termo “alcoxi”, como empregado aqui, a menos que seja indicado outro significado, inclui grupos O-alquil, sendo que a alquil é como definida acima.
[0037] O termo “Me” significa metil, “Et” signfica etil, “Ac” significa acetil, “Bz” significa benzoil e “Tol” significa toluoil.
[0038] O termo “cicloalquil”, como empregado aqui, a menos que seja indicado outro significado, refere-se a carboidratos não-aromáticos, saturados ou parcialmente saturados, monocíclicos ou fundidos, bicíclicos ou tricíclicos espiralados ou não fundidos, contendo um total de átomos de carbono que varia entre 3 e 10, sendo preferencialmente anéis de 5-8 de átomos de carbono. Exemplos de cicloalquils incluem anéis monocíclicos com 3-7, de preferência, 3-6, átomos de carbono, como ciclopropila, ciclobutila, ciclopentila, ciclohexila, cicloheptila e similares. Exemplos ilustrados de cicloalquil são derivados, mas, sem limitação, seguintes:
Figure img0013
[0039] O termo “aril”, como empregado aqui, a menos que seja indicado outro significado, inclui um radical orgânico derivado de carboidrato aromático pela remoção de um hidrogênio, como fenil ou naftil.
[0040] O termo “heterociclil” ou “heterocíclico”, como empregado aqui, a menos que seja indicado outro significado, inclui grupos heterocíclicos aromáticosc (por exemplo, uma heteroaril) e não- aromáticos contendo um a quatro heteroátomos, cada um selecionado entre O, S e N, sendo que cada grupo heterocíclico tem entre 4-10 átomos no seu sistema anelar, e com a condição de que o anel desse grupo não contenha dois átomos de O ou S adjacentes. Grupos heterocíclicos não- aromáticos incluem grupos que têm apenas 4 átomos no seu sistema anelar, mas grupos heterocíclicos aromáticos têm que ter pelo menos 5 átomos em seus sistemas anelares. Os grupos heterocíclicos incluem sistemas anelares benzofundidos. Um exemplo de um grupo heterocíclico de 4 componentes é a azetidinila (derivada da azetidina). Um exemplo de um grupo heterocíclico de 5 componentes é a tiazolila e um exemplo de um grupo heterocíclico de 10 componentes é quinolinila. Exemplos de grupos heterocíclicos não-aromáticos incluem pirrolidinila, tetrahidrofuranila, dihidrofuranila, tetrahidrotienila, tetrahidropiranila, dihidropiranila, tetrahidrotiopiranila, piperidino, morfolino, tiomorfolino, tioxanila, piperazinila, azetidinila, oxetanila, tietanila, homopiperidinila, oxepanila, tiepanila, oxazepinila, diazepinila, tiazepinila, 1,2,3,6- tetrahidropiridinila, 2-pirrolinila, 3-pirrolinila, indolinila, 2H-piranila, 4H-piranila, dioxanila, 1,3-dioxolanila, pirazolinila, ditianila, ditiolanila, dihidropiranila, dihidrotienila, dihidrofuranila, pirazolidinila,imidazolinila, imidazolidinila, 3-azabiciclo[3.1.0]hexanila, 3-azabiciclo [4.1.0]heptanila, 3H-indolila e quinolizinila. Exemplos de grupos heterocíclicos aromáticos incluem piridinila, imidazolila, pirimidinila, pirazolila, triazolila, pirazinila, tetrazolila, furila, tienila, isoxazolila, tiazolila, oxazolila, isotiazolila, pirrolila, quinolinila, isoquinolinila, indolila, benzimidazolila, benzofuranila, cinolinila, indazolila, indolizinila, ftalazinila, piridazinila, triazinila, isoindolila, pteridinila, purinila, oxadiazolila, tiadiazolila, furazanila, benzofurazanila, benzotiofenila, benzotiazolila, benzoxazolila, quinazolinila, quinoxalinila, naftiridinila e furopiridinila. Os grupos anteriores, como derivados dos grupos listados acima, podem estar ligados ao C ou ao N, onde isso for possível. Por exemplo, um grupo derivado do pirrol pode ser pirrol-1-il (ligado ao N) ou pirrol-3-il(ligado ao C). Além disso, um grupo derivado do imidazol pode ser imidazol-1-il (ligado ao N) ou imidazol-3-il(ligado ao C). O grupo heterocíclico de 4-10 componentes pode ser opcionalmente substituído em qualquer um do(s) átomo(s) de carbono, enxofre ou nitrogênio por um ou dois oxo, por anel. Um exemplo de um grupo heterocíclico onde dois átomos de carbono do anel foram substituídos por grupos oxo é 1,1-dioxo-tiomorfolinila. Outros exemplos ilustrativos de grupos heterocíclicos de 4-10 componentes são derivados, mas, sem limitação, dos seguintes:
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[0041] O termo “imunomodulador” refere-se a produtos naturais ou sintéticos capazes de alterar o sistema imuno normal ou aberrante através de estímulo ou de supressão.
[0042] O termo “prevenindo” refere-se à capacidade de um compost ou composição da invenção de prevenir uma doença identificada aqui em pacientes diagnosticados como tendo a doença ou em risco de desenvolvê-la. O termo também abrange o impedimento de progressão adicional da doença em pacientes que já estejam sofrendo ou tendo os sintomas dessaa doença. Os termos “paciente” ou “sujeito” significam um animal (por exemplo, vaca, cavalo, ovelha, porco, galinha, peru, codorna, gato, cachorro, camundongo, rato, coelho, cobaia etc.) ou um mamífero, incluindo animais e mamíferos quiméricos ou transgênicos. No tratamento ou prevenção de infecção por HCV, os termos “paciente” ou “sujeito” significam preferencialmente um macaco ou um humano, sendo mais desejável um humano. Numa modalidade específica, o paciente ou sujeito é infectado ou exposto ao vírus da hepatite C. Em certas implementações, o paciente é uma bebê (idade 0-2), criança (idade 2-17), adolescente (idade 12-17), adulto (idade 18 ou mais) ou um indivíduo geriátrico (idade 70 ou mais) humanos. Além disso, paciente inclui pacientes imunocomprometidos, como soropositivos para HIV, pacientes de câncer e pacientes se submetendo à imunoterapias ou quimioterapia. Numa modalidade específica, o paciente é um indivíduo saudável, isto é, que não demonstra sintomas de outras infecções virais.
[0043] A expressão “quantidade terapêuticamente eficaz” refere-se a uma quantidade do composto da invenção suficiente para fornecer um benefício no tratamento ou prevenção de uma doença viral, para atrasar ou minimizar os sintomas associados com a infecção viral ou a doença induzida por vírus ou para curar ou melhorar a doença, infecção ou causa desta. Em especial, uma quantidade terapêuticamente eficaz significa uma quantidade suficiente para proporcionar um benefício terapêutico in vivo. Usado em conexão com uma quantidade de um composto da invenção, a expressão abrange preferencialmente uma quantidade não tóxica que melhora a terapia na forma de todo, reduz ou evita os sintomas ou as causas da doença ou acentua a eficácia terapêutica de outro agente terapêutico ou as sinergias com este.
[0044] A expressão “quantidade profilaticamente eficaz” refere-se a uma quantidade do composto da invenção ou a outro ingrediente ativo suficiente para resultar na prevenção da infecção, da recorrência ou do espalhamento da infecção viral. Uma quantidade profilaticamente eficaz pode se referir a uma quantidade suficiente para impedir a infecção inicial ou a recorrência ou o espalhamento da infecção ou de uma doença associada com a infecção. Usada em conexão com uma quantidade de um composto da invenção a expressão abrange preferencialmente uma quantidade não tóxica que melhora a profilaxia na forma de todo ou acentua a eficácia profilática de outro agente profilático ou terapêutico ou as sinergias com este.
[0045] A expressão “em conjunto” refere-se ao uso de mais de um agente profilático e/ou terapêutico simultânea ou sequencialmente e de uma maneira na qual seus respectivos efeitos são aditivos ou sinergísticos.
[0046] O termo “tratar” refere-se a:
[0047] prevenir uma doença, desordem ou condição de acontecer num animal que possa ser pré-disposto à doença, desordem e/ou condição, mas que ainda não tenha sido diagnosticado como as tendo;
[0048] inibir a doença, desordem ou condição, isto é, parar o seu desenvolvimento; e
[0049] atenuar a doença, desordem ou condição isto é, causar a regressão da doença, desordem e/ou condição.
[0050] As letras “α“ e “β“ indicam a configuração estereoquímica específica de um substituinte num átomo de carbono assimétrico numa estrutura química como desenhada.
[0051] Os compostos da invenção podem exibir o fenômeno detautomerismo. Embora os desenhos das fórmulas não possam mostrar expressamente todas as possíveis formas tautoméricas, deve ser entendido que elas representam qualquer forma tautomérica do composto mostrado e não são limitadas meramente a um composto específico mostrado pelo desenho das fórmulas. Por exemplo, entende-se para a Fórmula II que, a despeito dos substituintes serem mostrados ou não em sua forma enol ou ceto, eles representam o mesmo composto (como mostrado no exemplo abaixo).
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[0052] Alguns dos compostos inventivos podem existir como estereoisômeros únicos (isto é, essencialmente livres de outros estereoisômeros), racematos e/ou misturas de enantiômeros e/ou diasterômeros. Todos esses estereoisômeros, racematos e misturas destes estão dentro do escopo da presente invenção. Preferencialmente, os compostos inventivos que são opticamente ativos são usados em formas opticamente puras. Como entendido de maneira geral por aqueles com capacidade na técnica, um composto opticamente puro com um centro quiral (isto é, um átomo de carbono assimétrico) é um que consiste essencialmente num entre dois possíveis enantiômeros (isto é, é enantiomericamente puro), e um composto opticamente puro com um ou mais centros quirais é que é tanto diastereomerica quanto enantiomericamente puro. De preferência, os compostos da presente invenção são usados numa forma que é pelo menos 90% pura opticamente ou seja, uma forma que contenha pelo menos 90% de um único isômero (80% de excesso enantiomérico (“e.e.”) ou diastereomérico (“d.e.”)), sendo desejável pelo menos 95% (90% de e.e. ou d.e.), sendo mais desejável pelo menos 97,5% (95% de e.e. ou d.e.) e sendo mais desejável ainda pelo menos 99% (98% de e.e. ou d.e.). Além disso, os pró- fármacos da Fórmula I, os compostos da Fórmula II e outros compostos da invenção abrangem formas solvatadas bem como não-solvatadas das estruturas identificadas. Por exemplo, a Fórmula I inclui compostos da estrutura indicada em ambas as formas hidratadas e não-hidratadas. Outros exemplos de solvatos incluem estruturas em conjunto com isopropanol, etanol, metanol, DMSO, acetato de etila e ácido acético ou etanolamina.
[0053] Além dos pró-fármacos da Fórmula I, os compostos da Fórmula II e outros compostos da invenção, a invenção inclui metabólitos farmaceuticamente ativos e sais farmaceuticamente aceitos desses compostos e metabólitos.
[0054] “Um pró-fármaco farmaceuticamente ativo” é um compost que pode ser convertido sob condições fisiológicas ou por solvólise no composto especificado ou num sal farmaceuticamente aceito desse composto antes de exibir seu(s) efeito(s) farmacológico(s). Normalmente, o pró-fármaco é formulado com o(s) objetivo(s) de gerar melhor estabilidade química, melhor aceitação e adesão pelo paciente, melhor biodisponibilidade, duração mais prolongada da ação, melhor seletividade de órgão, melhor formulação (por exemplo, maior hidrossolubilidade) e/ou menos efeitos colaterais (por exemplo, toxicidade). O pró-fármaco pode ser prontamente preparado usando os métodos conhecidos na técnica, como aqueles descritos em Burger’s Medicinal Chemistry and Drug Chemistry, 1, 172-178, 949-982 (1995). Ver também Bertolini e colaboradores, J. Med. Chem., 40, 2011-2016 (1997); Shan e colaboradores, J. Pharm. ScL, 86 (7), 765-767; Bagshawe, Drug Dev. Res., 34, 220-230 (1995); Bodor, Advances in Drug Res., 13, 224-331 (1984); Bundgaard, Design of Prodrugs (Elsevier Press 1985); Larsen, Design and Application of Prodrugs, Drug Design and Development (Krogsgaard-Larsen e colaboradores, eds., Harwood Academic Publishers, 1991); Dear e colaboradores, J. Chromatogr. B, 748, 281-293 (2000); Spraul e colaboradores, J. Pharmaceutical & Biomedical Analysis, 10, 601-605 (1992); e Prox e colaboradores, Xenobiol, 3, 103-112 (1992).
[0055] “Um metabólito farmaceuticamente ativo” significa um produto farmaceuticamente ativo produzido por meio do metabolismo do corpo a partir de um composto específico ou sal deste. Após a entrada no corpo, a maioria das drogas se torna substrato para reações químicas que podem mudar suas propriedades físicas e efeitos biológicos. Essas conversões metabólicas, que normalmente afetam a polaridade dos compostos da invenção, alteram a maneira pela qual as drogas são distribuídas e excretadas do corpo. Entretanto, em alguns casos, o metabolismo de uma droga é necessário para o efeito terapêutico. Por exemplo, drogas anticâncer da classe antimetabólito têm que ser convertidas para as suas formas ativas depois de serem transportadas para dentro de uma célula cancerígena.
[0056] Como a maioria das drogas passa por alguma transformação metabólica, as reações bioquímicas que atuam no metabolismo das drogas podem ser numerosas e diversas. O principal local de metabolismo de drogas é o fígado, embora outros tecidos também possam participar.
[0057] Uma característica de muitas dessas transformações é a de que os produtos metabólicos ou “metabólitos”, são mais polares que as drogas-mãe, embora um arrasto polar às vezes resulte num produto menos polar. Substâncias com altos coeficientes de partição lipídeo/água, os quais passam facilmente pela membrana, também se difundem prontamente de volta da urina tubular, através das células tubulares renais e para o plasma. Assim, essas substâncias tendem a ter uma passagem renal baixa e uma longa persistência no corpo. Se uma droga for metabolizada num composto mais polar, um com um coeficiente de partição mais baixo, sua reabsorção tubular será muito reduzida. Além disso, os mecanismos secretórios específicos para ânios e cátions nos túbulos renais proximais e nas células parenquimáticas do fígado atuam sobre substâncias altamente polares.
[0058] Como exemplo específico, a fenacetina (acetofenetidina) e a acetanilida são ambas analgésicos e antipiréticos leves, mas, são transformadas no corpo num metabólito mais polar e mais eficaz, p- hidroxiacetanilida (acetaminofeno), que é amplamente usado hoje. Quando uma dose de acetanilida é dada a uma pessoa, os metabólitos sucessivos têm um pico no plasma e decaem sequencialmente. Durante a primeira hora, a acetanilida é o principal componente no plasma. Na segunda hora, enquanto o nível de acetanilida cai, a concentração do metabólito acetaminofeno atinge um pico. Finalmente, após poucas horas, o principal componente no plasma é um metabólito posterior que é inerte e pode ser excretado do corpo. Assim, as concentrações plasmáticas de um ou mais metabólitos, bem como da própria droga, podem ser importantes farmacologicamente.
[0059] “Um sal farmaceuticamente aceito” significa um sal que retém a eficácia biológica dos ácidos e bases livres do composto especificado e que não é biologicamente ou de outra forma, indesejável. Um composto da invenção pode possuir um grupo suficientemente acídico, básico ou ambos os grupos funcionais, e consequentemente reagir com qualquer um entre várias bases inorgânicas e orgânicas e vários ácidos inorgânicos e orgânicos, para formar um sal farmaceuticamente aceito. Exemplos de sais farmaceuticamente aceitos incluem aqueles sais preparados por meio da reação dos compostos da presente invenção com um mineral, ácido orgânico ou uma base inorgânica, como sais incluindo sulfatos, pirossulfatos, bissulfatos, sulfitos, bissulfitos, fosfatos, monohidrogenfosfatos, dihidrogenfosfatos, metafosfatos, pirofosfatos, cloretos, brometos, iodetos, acetatos, propionatos, decanoatos, caprilatos, acrilatos, formatos, isobutiratos, caproatos, heptanoatos, propiolatos, oxalatos, malonatos, succinatos, suberatos, sebacatos, fumaratos, maleates, butina-1,4-dioatos, hexina-l,6-dioatos, benzoatos, clorobenzoatos, metilbenzoatos, dinitrobenzoatos, hidroxibenzoatos, metoxibenzoatos, ftalatos, sulfonatos, xilenosulfonatos, fenilacetatos, fenilpropionatos, fenilbutiratos, citratos, lactatos, y-hidroxibutiratos, glicolatos, tartratos, metano-sulfonatos, propanosulfonatos, naftaleno-1- sulfonatos, naftaleno-2-sulfonatos e mandelatos. Se o composto inventivo for uma base, o sal farmaceuticamente aceito desejado pode ser preparado por qualquer método apropriado disponível na técnica, por exemplo, o tratamento da base livre com um ácido inorgânico, como ácido hidroclorídrico, ácido hidrobrômico, ácido sulfúrico, ácido nítrico, ácido fosfórico e similares ou com um ácido orgânico, ácido acético, ácido maleico, ácido succíico, ácido mandélico, ácido fumárico, ácido malônico, ácido pirúvico, ácido oxálico, ácido glicólico, ácido salicílico, um ácido piranosidílico, como ácido glucurônico ou galacturônico, um ácido alfa- hidroxi, como ácido cítrico ou tartárico, um aminoácido, como ácido aspártico ou glutâmico, um ácido aromático, como ácido benzóico ou cinâmico, um ácido sulfônico, como ácido p-toluenosulfônico ou etanosulfônico ou similares.
[0060] Se o composto inventivo for um ácido, o sal farmaceuticamente aceito pode ser preparado por qualquer método apropriado, por exemplo, tratamento do ácido livre com uma base inorgânica ou orgânica, como uma amina (primária, secundária ou terciária), um hidróxido metálico álcali ou um hidróxido de metal alcalino terroso ou similares. Exemplos ilustrativos de sais apropriados incluem sais orgânicos derivados de aminoácidos, como glicina e arginina, amônia, aminas primárias, secundárias e terciárias, e aminas cíclicas, como piperidina, morfolina e piperazina, e sais inorgâncios derivados de sódio, cálcio, potássio, magnésio, manganês, ferro, cobre, zinco, alumínio e lítio. No caso de agentes que são sólidos, aqueles com capacidade na técnica entenderão que os compostos e sais inventivos podem existir em diferentes formas cristalinas e polimórficas, todas as quais estão dentro do escopo da presente invenção e das fórmulas especificadas.
MÉTODOS DE TRATAMENTO E PREVENÇÃO DE INFECÇÕES VIRAIS DE HEPATITE C
[0061] A presente invenção proporciona métodos para tratar e prevenir uma infecção por vírus de hepatite C num paciente necessitado. A presente invenção provê, além disso, métodos para introduzir uma quantidade terapêuticamente eficaz de um pró-fármaco da Fórmula I, um composto da Fórmula II ou outro composto da invenção ou combinação desses compostos, na corrente sanguínea do paciente como tratamento e/ou prevenção de infecções virais de hepatite C.
[0062] Entretanto, a magnitude de uma dose profilática ou terapêutica de um pró-fármaco da Fórmula I, um composto da Fórmula II ou outro composto da invenção ou um sal, solvato ou hidrato farmaceuticamente aceito destes no tratamento ou prevenção aguda ou crônica de uma infecção irá variar com a natureza e severidade da infecção, e a rota pela qual o ingrediente ativo foi administrado. A dose e, em alguns casos, a frequência da dose, também variará de acordo com a infecção a ser tratada, a idade, o peso corporal e a resposta do paciente individual. Regimes apropriados de dosagem podem ser prontamente selecionados por aqueles com capacidade na técnica levando em consideração esses fatores.
[0063] Os métodos da presente invenção são particularmente apropriados para pacientes humanos, em particular, os métodos e doses da presente invenção podem ser úteis para pacientes imunocomprometidos, incluindo, mas não limitado a pacientes com câncer, pacientes infectados com HIV e pacientes com uma doença imunodegenerativa. Além disso, os métodos podem ser úteis para pacientes imunocomprometidos atualmente em estado de remissão. Os métodos e doses da presente invenção também são úteis para pacientes sob tratamento antiviral. Os métodos de prevenção da presente invenção são particularmente úteis para pacientes com risco de infecção viral. Esses pacientes incluem, mas, sem limitação, trabalhadores da área de saúde, por exemplo, médicos, enfermeiros e trabalhadores de asilo; pessoal militar; professores; empregados de creche; pacientes que viajam para locais no exterior ou moram lá, particularmente no Terceiro Mundo, incluindo assistentes sociais, missionários e diplomatas. Finalmente, os métodos e composições incluem o tratamento de pacientes refratários ou pacientes resistentes a tratamento, como aqueles resistentes a inibidores de transcriptase reversa, a inibidores de protease etc.
Doses
[0064] A toxicidade e eficácia dos compostos da invenção podem ser determinadas por procedimetos farmacêuticos padrão em culturas de célula ou animais experimentais, por exemplo, para determinar a LD50 (a dose letal para 50% da população) e a ED50 (a dose terapêuticamente eficaz em 50% da população). A razão de dose entre os efeitos tóxicos e terapêuticos é o índice terapêutico e pode ser expresso como a razão LD50/ED50.
[0065] Os dados obtidos nos ensaios com cultura de células e com estudos animais podem ser usados na formulação da faixa de dosagem dos compostos para uso em humanos. A dosagem desses compostos se localiza preferencialmente dentro de uma faixa de concentrações circulantes que incluem a ED50 com pouca ou nenhuma toxicidade. A dosagem pode variar dentro dessa faixa dependendo da forma de dosagem empregada e da rota de administração utilizada. Para qualquer composto usado no método da invenção, a dose terapêuticamente eficaz pode ser estimada inicialmente de ensaios com culturas de células. Uma dose pode ser formulada em modelos animais para se alcançar uma concentração plasmática circulante que inclui a IC50 (isto é, a concentração do composto teste que obtém a metade da inibição máxima dos sintomas) como determinada na cultura de células; alternativamente, a dose dos compostos pode ser formulada em modelos animais para se obter uma faixa de concentração plasmática circulante que corresponde à concentração necessária para se atingir uma magnitude fixa da resposta. Essa informação pode ser usada para se determinar de maneira mais precisa as doses úteis para humanos. Os níveis no plasma podem ser medidos, por exemplo, cormatografia líquida de alto desempenho.
[0066] Os protocolos e composições da invenção são preferencialmente testados in vitro e posteriormente in vivo, para se encontrar a atividade terapêutica ou profilática desejada antes do uso em humanos. Por exemplo, ensaios in vitro que podem ser usados para determinar se a administração de um protocolo terapêutico específico é indicado incluem ensaios in vitro de cultura de células, nos quais células que respondem aos efeitos dos os pró-fármacos da Fórmula I, os compostos da Fórmula II e outros compostos da invenção são expostas ao ligante e a magnitude da resposta é medida por uma técnica apropriada. Os compostos são então avaliados com respeito a sua potência e ao grau de conversão entre o pró-fármaco da Fórmula I e o composto mãe da Fórmula II. Os compostos para uso nos métodos da invenção podem ser testados em sistemas de modelo animal apropriados antes do teste em humanos, incluindo, mas, não limitado a ratos, camundongos, galinhas, vacas, macacos, coelhos, hamsters etc. Os compostos podem, então, ser usados nos testes clínicos apropriados.
[0067] A magnitude de uma dose profilática ou terapêutica de um pró-fármaco da Fórmula I, composto da Fórmula II ou outro composto da invenção ou um sal, solvato ou hidrato destes farmaceuticamente aceito, no tratamento ou prevenção aguda ou crônica de uma infecção ou condição irá variar com a natureza e severidade da infecção, e a rota pela qual o ingrediente ativo é administrado.
[0068] A dose e talvez a frequência da dose também variarão de acordo com a infecção a ser tratada, a idade, o peso corporal e a resposta do paciente individual. Regimes apropriados de dosagem podem ser prontamente selecionados por aqueles com capacidade na técnica levando em consideração esses fatores. Numa modalidade, a dose administrada depende do composto específico a ser usado e do peso e condição do paciente. A dose pode ainda diferir para vários compostos diferentes da invenção; doses apropriadas podem ser previstas com base nas medições in vitro mencionadas acima e com base em estudos animais, de maneira que doses menores serão apropriadas para aqueles compostos que demonstram eficácia em concentrações mais baixas do que outros compostos quando medidos pelos sistemas descreitos ou referenciados aqui. Em geral, a dose diária está na faixa de cerca 0,001 até 100 mg/kg, sendo desejável que esteja entre cerca de 1 e 25 mg/kg e sendo mais desejável que esteja entre cerca de 5 e 15 mg/kg. Para o tratamento de humanos infectados pelo vírus da hepatite, cerca de 0,1 mg até 15 g por dia são administrados em aproximadamente uma a quatro divisões por dia, sendo desejável 100 mg a 12 g por dia e sendo mais desejável 100 mg a 8.000 mg por dia.
[0069] Além disso, a dose diária recomendada pode ser administrada em ciclos como agentes únicos ou em conjunto com outros agentes terapêuticos. Numa modalidade, a dose diária é administrada numa dose única ou em doses igualmente divididas. Numa modalidade relacionada, a dose diária recomendada pode ser administrada uma vez por semana, duas vezes por semana, três vezes por semana, quatro vezes por semana ou cinco vezes por semana. Numa modalidade desejável, os compostos da invenção são administrados para produzir uma distribuição sistêmica do composto dentro do paciente. Numa modalidade relacionada, os compostos da invenção são administrados para produzir um efeito sistêmico no corpo. Em outra modalidade, os compostos da invenção são administrados por via oral, da mucosa (incluindo sublingual, bucal, retal, nasal ou vaginal), parenteral (incluindo subcutânea, intramuscular, injeção em bolus, intrarterial ou intravenosa), transdérmica ou tópica. Numa modalidade específica, os compostos da invenção são administrados por via da mucosa (incluindo sublingual, bucal, retal, nasal ou vaginal), parenteral (incluindo subcutânea, intramuscular, injeção em bolus, intra-arterial ou intravenosa), transdérmica ou tópica. Em outra modalidade específica, os compostos da invenção são administrados por via oral. Em outra modalidade específica, os compostos da invenção não são administrados por via oral.
[0070] Diferentes quantidades terapêuticamente eficazes podem ser apropriadas para diferentes infecções, como será prontamente conhecido daqueles com capacidade média na técnica. Similarmente, as quantidades suficientes para tratar ou prevenir essas infecções, mas insuficientes para causar ou suficientes para reduzir, efeitos adversos associados com terapias convencionais também são abrangidas pelas descrições de quantidade da dose e frequência da dose acima.
Terapia em Conjunto
[0071] Os métodos específicos da invenção ainda encompassam a administração de um agente terapêutico adicional (isto é, um agente terapêutico que não seja um composto da invenção). Em certas implementações da presente invenção, os compostos da invenção podem ser usados em conjunto com pelo menos um outro agente terapêutico. Os agentes terapêuticos incluem, mas, sem limitação, antibióticos, agentes antieméticos, antidepressivos, agentes antimicóticos, agentes antiinflamatórios, agentes antivirais, agentes anticancerígenos, agentes imunomoduladores, β-interferons, agentes alquilntes, hormônios ou citocinas. Numa modalidade desejável, a invenção abrange a administração de um agente terapêutico adicional que é específico para o HCV ou demonstra atividade anti-HCV.
[0072] Os pró-fármacos da Fórmula I, os compostos da Fórmula II e outros compostos da invenção podem ser administrados ou formulados em conjunto com antibióticos. Por exemplo, eles podem ser formulados com um macrolídeo (por exemplo, tobramicina (Tobi®)), uma cefalosporina (por exemplo, cefalexina (Keflex®), cefradina (Velosef®), cefuroxima (Ceftin®), cefprozil (Cefzil®), cefaclor (Ceclor®), cefixima (Suprax®) ou cefadroxil (Duricef®)), uma claritromicina (por exemplo, claritromicina (Biaxin®)), uma eritromicina (por exemplo, eritromicina (Emycin®)), uma penicilina (por exemplo, penicilina V (V-Cillin K® ou Pen Vee K®)) ou uma quinolona (por exemplo, ofloxacina (Floxin®), ciprofloxacina (Cipro®) ou norfloxacina (Noroxin®)), antibióticos aminoglicosídeos (por exemplo, apramicina, arbecacina, bambermicina, butirosina, dibecacina, neomicina, neomicina, undecilenato, netilmicina, paromomicina, ribostamicina, sisomicina e spectinomicina), antibióticos anfenicólicos (por exemplo, azidanfenicol, cloranfenicol, florfenicol e tianfenicol), antibióticos ansamicínicos (por exemplo, rifamida e rifampina), carbacefens (por exemplo, loracarbef), carbapenens (por exemplo, biapenem e imipenem), cefalosporinas (por exemplo, cefaclor, cefadroxil, cefamandola, cefatrizina, cefazedona, cefozopran, cefpimizola, cefpiramida e cefpiroma), cefamicinas (por exemplo, cefbuperazona, cefmetazola e cefminox), monobactans (por exemplo, aztreonam, carumonam e tigemonam), oxacefens (por exemplo, flomoxef, e moxalactam), penicilinas (por exemplo, andinocilina, andinocilina pivoxil, amoxicilina, bacampicilina, acido benzilpenicilínico, benzilpenicilina sódica, epicilina, fembenicilina, floxacilina, penancilina, penetamato hidriodato, penicilina o-benetamina, penicilina 0, penicilina V, penicilina V benzatina, penicilina V hidrabamina, penimepiciclina e fenc1Hicilina potássica), lincosamidas (por exemplo, clindamicina e lincomicina), anfomicina, bacitracina, capreomicina, colistina, enduracidina, enviomicina, tetraciclinas (por exemplo, apiciclina, clortetraciclina, clomociclina e demeclociclina), 2,4-diaminopirimidinas (por exemplo, brodimoprima), nitrofuranos (por exemplo, furaltadona e cloreto de furazólio), quinolona e análogos desta (por exemplo, cinoxacina, clinafloxacina, flumequina e grepagloxacina), sulfonamidas (por exemplo, acetil sulfametoxipirazina, benzilsulfamida, noprilsulfamida,ftalilsulfacetamida, sulfacrisoidina e sulfacitina), sulfonas (por exemplo, diatimosulfona, glucosulfona sódica e solasulfona), cicloserina, mupirocina e tuberina.
[0073] Os pró-fármacos da Fórmula I, os compostos da Fórmula II e outros compostos da invenção também podem ser administrados ou formulados em combinação com um agente antiemético. Os agentes antieméticos apropriados incluem, mas, sem limitação, metoclopromida, domperidona, proclorperazina, prometazina, clorpromazina, trimetobenzamida, ondansetrona, granisetrona, hidroxizina, acetileucina monoetanolamina, alizaprida, azasetrona, benzquinamida, bietanautina, bromoprida, buclizina, cleboprida, ciclizina, dimenhidrinato, difenidol, dolasetrona, meclizina, metalatal, metopimazina, nabilona, oxiperndil, pipamazina, escopolamina, sulpirida, tetrahidrocanabinóis, tietilperazina, tioproperazina, tropisetrona e misturas destes.
[0074] Os pró-fármacos da Fórmula I, os compostos da Fórmula II e outros compostos da invenção também podem ser administrados ou formulados em combinação com um antidepressivo. Antidepressivos apropriados incluem, mas, sem limitação, binedalina, caroxazona, citalopram, dimetazan, fencamina, indalpina, hidrocloreto de indeloxazine, nefopam, nomifensina, oxitriptan, oxipertina, paroxetina, sertralina, tiazesim, trazodona, benmoxina, iproclozida, iproniazida, isocarboxazida, nialamida, octamoxina, fenelzina, cotinina, roliciprina, rolipram, maprotilina, metralindol, mianserina, mirtazepina, adinazolam, amitriptilina, amitriptilinóxido, amoxapina, butriptilina, clomipramina, demexiptilina, desipramina, dibenzepina, dimetacrina, dotiepina, doxepina, fluacizina, imipramina, imipramina N-óxido, iprindol, lofepramina, melitracen, metapramina, nortriptilina, noxiptilina, opipramol, pizotilina, propizepina, protriptilina, quinupramina, tianeptina, trimipramina, adrafinil, benactizina, bupropion, butacetina, dioxadrol, duloxetina, etoperidona, febarbamato, femoxetina, fenpentadiol, fluoxetina, fluvoxamina, hematoporfirina, hipericina, levofacetoperana, medifoxamina, milnacipran, minaprina, moclobemida, nefazodona, oxaflozana, piberalina, prolintana, pirisuccideanol, ritanserina, roxindol, cloreto de rubídio, sulpirida, tandospirona, tozalinona, tofenacina, toloxatona, tranilcipromina, L- triptofano, venlafaxina, viloxazina e zimeldina.
[0075] Os pró-fármacos da Fórmula I, os compostos da Fórmula II e outros compostos da invenção também podem ser administrados ou formulados em combinação com um agente antimicótico. Agentes antimicóticos apropriados incluem, mas, sem limitação, anfotericina B, itraconazol, cetoconazol, fluconazol, intratecal, flucitosina, miconazol, butoconazol, clotrimazol, nistatina, terconazol, tioconazol, ciclopirox, econazol, haloprogrina, naftifina, terbinafina, undecilenato e griseofuldina.
[0076] Os pró-fármacos da Fórmula I, os compostos da Fórmula II e outros compostos da invenção também podem ser administrados ou formulados em combinação com um agente anti-inflamatório. Agentes antiinflamatórios úteis incluem, mas, sem limitação, drogas antiinflamatórias não-esteróidicas, como ácido salicílico, ácido acetilsalicílico, metil salicilato, diflunisal, salsalato, olsalazina, sulfasalazina, acetaminofeno, indometacina, sulindac, etodolac, ácido mefenâmico, meclofenamato sódico, tolmetina, cetorolac, diclofenac, ibuprofen, naproxen, naproxen sódico, fenoprofen, cetoprofen, flurbinprofen, oxaprozina, piroxicam, meloxicam, ampiroxicam, droxicam, pivoxicam, tenoxicam, nabumetoma, fenilbutazona, oxifenbutazona, antipirina, aminopirina, apazona e nimesulide; antagonistas leucotriênicos, incluindo, mas não limitados a zileuton, aurotoglicose, tiomalato de sódio de ouro e auranofina; esteróides, incluindo, mas não limitados a diproprionato de alclometasona, amcinonida, dipropionato de beclometasona, betametasona, benzoato de betametasona, diproprionato de betametasona, fosfato de sódio de betametasona, valerato de betametasona, proprionato de clobetasol, pivalato de clocortolona, hidrocortisona, derivados de hidrocortisona, desonida, desoximatasona, dexametasona, flunisólidoa, flucoxinolida, flurandrenolida, halcinocida, medrisona, metilprednisolona, acetato de metilprednisolona, succinato de sódio de metilprednisolona, furoato de mometasona, acetato de paramethasona, prednisolona, acetato de prednisolona, fosfato de sódio de prednisolona, tebuatato de prednisolona, prednisona, triamcinolona, triamcinolona acetonida, acetato de triamcinolona e triamcinolona hexacetonida; e outros agentes anti-inflamatórios, incluindo mas não limitados a metotrexato, colchicina, alopurinol, probenecida, sulfinpirazona e benzbromarona.
[0077] Os pró-fármacos da Fórmula I, os compostos da Fórmula II e outros compostos da invenção também podem ser administrados ou formulados em combinação com outro agente antiviral. Ahentes antivirais úteis incluem, mas, sem limitação, inibidores de protease, inibidores nuclosídicos de transcriptase reversa, inibidores não- nucleosídicos de transcriptase reversa e análogos de nucleosídeos. Os agentes antivirais incluem, mas, sem limitação, zidovudina, aciclovir, gangciclovir, vidarabina, idoxuridina, trifluridina, levovirina, viramidina e ribavirina, bem como foscarnet, amantadina, rimantadina, saquinavir, indinavir, amprenavir, lopinavir, ritonavir, alfa-interferons; beta-interferons; adefovir, clevadina, entecavir e pleconaril
[0078] Os pró-fármacos da Fórmula I, os compostos da Fórmula II e outros compostos da invenção também podem ser administrados ou formulados em combinação com um agente imunomodulador. Agentes imunomoduladores incluem, mas, sem limitação, metotrexato, leflunomida, ciclofosfamida, ciclosporina A, micofenolato mofetil, rapamicina (sirolimus), mizoribina, deoxispergualina, brequinar, malononitriloamindas (por exemplo, leflunamida), moduladores de receptores de células T e moduladores de receptores de citocinas, mimetizadores de peptídeos e anticorpos (por exemplo, humanos, humanizados, quiméricos, monoclonais, policlonais, fragmentos de Fvs, ScFvs, Fab ou F(ab)2 ou fragmentos de ligação ao epítopo), moléculas de ácidos nucléicos (por exemplo, moléculas anti-senso de ácidos nucléicos e triplas hélices), pequenas moléculas, compostos orgânicos e inorgânicos. Exemplos de moduladores de receptores de células T incluem, mas, sem limitação, anticorpos anti-receptor de célula T (por exemplo, anticorpos anti-CD4 (por exemplo, cM-T412 (Boeringer), IDEC- CE9.1® (IDEC e SKB), mAB 4162W94, Ortoclone e OKTcdr4a (Janssen- Cilag)), anticorpos anti-CD3 (por exemplo, Nuvion (Product Design Labs), OKT3 (Johnson & Johnson), ou Rituxan (IDEC)), anticorpos anti-CD5 (por exemplo, um imunoconjugado ligadoà ricina anti-CD5), anticorpos anti-CD7 (por exemplo, CHH-380 (Novartis)), anticorpos anti-CD8, anticorpos monoclonais ligante anti-CD40 (por exemplo, BDEC-131 (IDEC)), anticorpos anti-CD52 (por exemplo, CAMPATH 1H (Ilex)), anticorpos anti-CD2, anticorpos anti-CD11a (por exemplo, Xanelim (Genentech)), e anticorpos anti-B7 (por exemplo, IDEC-114 (IDEC)) e CTLA4-imunoglobulina. Exemplos de moduladores de receptores de citocinas incluem, mas, sem limitação, receptores de citocina solúveis (por exemplo, o domínio extracelular de um receptor de TNF-a ou um fragmento deste, o domínio extracelular de um receptor de IL-1β ou um fragmento deste e o domínio extracelular de um receptor de IL-6 ou um fragmento deste), citocinas ou fragmentos destas (por exemplo, interleucina (IL)-2, IL-3, IL-4, IL-5, IL-6, IL-7, IL-8, IL-9, IL-10, IL-11, IL- 12, IL-15, TNF-α, interferon (IFN)-a, IFN-β, IFN-y and GM-CSF),anticorpos anti-receptor de citocina (por exemplo, anticorpos antireceptor de EFN, anticorpos anti-receptor de IL-2 (por exemplo, Zenapax (Protein Design Labs)), anticorpos anti-receptor de IL-4, anticorpos antireceptor de IL-6, anticorpos anti-receptor de IL-10 e anticorpos antireceptor de IL-12), anticorpos anticitocina (por exemplo, anticorpos anti- IFN, anticorpos anti- TNF-a,, anticorpos anti- IL-1β, anticorpos anti-IL- 6, anticorpos anti-IL-8 (por exemplo, ABX-IL-8 (Abgenix)) e anticorpos anti-IL-12).
[0079] Os pró-fármacos da Fórmula I, os compostos da Fórmula II e outros compostos da invenção também podem ser administrados ou formulados em combinação com um agente que inibe enzimas virais, incluindo, mas, sem limitação, inibidores de protease de HCV, como BELN 2061 e inibidores de polimerase NS5b, como as NM107 e seu pró- fármaco NM283 (Idenix Pharmaceuticals, Inc., Cambridge, MA).
[0080] Os pró-fármacos da Fórmula I, os compostos da Fórmula II e outros compostos da invenção também podem ser administrados ou formulados em combinação com um agente que inibe a polimerase de HCV, como aqueles descritos em Wu, Curr Drug Targets Infect Disord. 2003; 3(3):207-19 ou em conjunto com compostos que inibem a função de helicase do vírus, como aqueles descritos em Bretner M e colaboradores. Nucleosides Nucleotides Nucleic Acids. 2003: 22(5-8):1531 ou com inibidores de outros alvos específicos de HCV, como aqueles descritos em Zhang X., IDrugs. 2002: 5(2): 154-8.
[0081] Os pró-fármacos da Fórmula I, os compostos da Fórmula II e outros compostos da invenção também podem ser administrados ou formulados em combinação com um agente que inibe a replicação viral.
[0082] Os pró-fármacos da Fórmula I, os compostos da Fórmula II e outros compostos da invenção também podem ser administrados ou formulados em combinação com citocinas. Exemplos de citocinas incluem, mas não estão limitados à interleucina-2 (IL-2), interleucina-3 (IL-3), interleucina-4 (IL-4), interleucina-5 (IL-5), interleucina-6 (IL-6), interleucina-7 (IL-7), interleucina-9 (IL-9), interleucina-10 (IL-10), interleucina-12 (IL-12), interleucina-15 (IL-15), interleucina 18 (IL-18), fator de crescimento derivado de plaquetas (PDGF), eritropoietina (Epo), fator de crescimento epidérmico (EGF), fator de crescimento do fibroblasto (FGF), fator de estímulo do macrófago granulócito (GM-CSF), fator de estímulo de colônia de granulócito (G-CSF), fator de estímulo de colônia de macrófago (M-CSF), prolactina e interferon (IFN) (por exemplo, IFN-alfa e IFN-gama).
[0083] Os pró-fármacos da Fórmula I, os compostos da Fórmula II e outros compostos da invenção também podem ser administrados ou formulados em combinação com hormônios. Exemplos de hormônios incluem, mas, sem limitação, hormônio de liberação de hormônio luteinizante (LHRH), hormônio de crescimento (GH), hormônio de liberação de hormônio de crescimento, ACTH, somatostatina, somatotropina, somatomedina, hormônio paratireóide, fatores de liberação hipotalâmicos, insulina, glucagon, encefalinas, vasopressina, calcitonina, heparina, heparinas de baixo peso molecular, heparinóides, opióides sintéticos e naturais, insulina e hormônio de estímulo à tireóide, e endorfinas.
[0084] Os pró-fármacos da Fórmula I, os compostos da Fórmula II e outros compostos da invenção também podem ser administrados ou formulados em combinação com β-interferons, os quais incluem, mas, sem limitação, interferon beta-1a, interferon beta-1b.
[0085] Os pró-fármacos da Fórmula I, os compostos da Fórmula II e outros compostos da invenção também podem ser administrados ou formulados em combinação com a-interferons os quais incluem, mas, sem limitação, interferon alfa-1, interferon alfa-2a (roferon), interferon alfa-2b, intron, Peg-Intron, Pegasys, interferon consenso (infergen) e albuferon.
[0086] Os pró-fármacos da Fórmula I, os compostos da Fórmula II e outros compostos da invenção também podem ser administrados ou formulados em combinação com um acentuador de absorção, particularmente aqueles que têm como alvo o sistema linfático, incluindo, mas não limitados a glicocolato de sódio, caprato de sódio; N-lauril-y-D- maltopiranosídeo; EDTA; micela misturada; e aqueles descritos em Muranishi, Crit. Rev. Ther. Drug Carrier Syst., 7, 1-33, que é incorporado aqui por referência em sua íntegra. Outros acentuadores de absorção conhecidos também podem ser usados. Dessa maneira, a invenção também abrange uma composição farmacêutica que consiste num ou mais os pró-fármacos da Fórmula I, os compostos da Fórmula II e outros compostos da invenção e um ou mais acentuadores de absorção.
[0087] Os pró-fármacos da Fórmula I, os compostos da Fórmula II e outros compostos da invenção também podem ser administrados ou formulados em combinação com agente alquilnte. Exemplos de agentes alquilntes incluem, mas, sem limitação, mostardas de nitrogênio, etileniminas, metilmelaminas, alquil sulfonatos, nitrosouréias, triazenas, mecloretamina, ciclofosfamida, ifosfamida, melfalan, clorambucila, hexametilmelaina, tiotepa, busulfan, carmustina, estreptozocina, dacarbazina e temozolomida.
[0088] Os pró-fármacos da Fórmula I, os compostos da Fórmula II e outros compostos da invenção e os outros agentes terapêuticos podem atuar de forma aditiva ou, mais desejável, de forma sinergística. Numa modalidade desejável, uma composição consistindo num composto da invenção é administrada simultanemanente a outro agente terapêutico, o qual pode ser parte da mesma composição ou estar numa composição diferente daquela que consiste nos compostos da invenção. Em outra modalidade, um composto da invenção é administrado antes ou após a administração de outro agente terapêutico. Numa modalidade separada, um composto da invenção é administrado a um paciente que não se submeteu previamente ou não está se submetendo a tratamento com outro agente terapêutico another, em particular, um agente antiviral.
[0089] Numa modalidade, os métodos da invenção consistem na administração de um ou mais os pró-fármacos da Fórmula I, os compostos da Fórmula II e outros compostos da invenção sem um agente terapêutico adicional.
COMPOSIÇÕES FARMACÊUTICAS E FORMAS DE DOSAGEM
[0090] As composições farmacêuticas e formas de dosagem únicas que consistem em pró-fármacos da Fórmula I, os compostos da Fórmula II e outros compostos da invenção ou de um sal ou hidrato farmaceuticamente aceito destes, também são abrangidos pela invenção. Formas individuais de dosagem da invenção podem ser apropriadas para administração oral, da mucosa (incluindo sublingual, bucal, retal, nasal ou vaginal), parenteral (incluindo subcutânea, intramuscular, injeção em bolus, intra-arterial ou intravenosa), transdérmica ou tópica. As composições farmacêuticas e formas de dosagem da invenção comumemente incluem um ou mais excipientes farmaceuticamente aceitos. Formas de dosagem estéreis também são contempladas.
[0091] Numa modalidade alternativa, uma composição farmacêutica abrangida por esta modalidade inclui um pró-fármaco da Fórmula I, um composto da Fórmula II composto ou outro composto da invenção ou um sal ou hidrato farmaceuticamente aceito destes, e pelo menos um agente terapêutico adicional. Exemplos de agentes terapêuticos adicionais incluem, mas não estão limitados àqueles listados acima.
[0092] A composição, o formato e o tipo da forma de dosagem da invenção comumente variarão dependendo do seu uso. Por exemplo, uma forma de dosagem usada no tratamento agudo de uma doença ou doença relacionada pode conter maiores quantidades de um ou mais dos ingredientes ativos que a compõem do que uma forma de dosagem usada no tratamento crônico da mesma doença. De maneira similar, a forma de dosagem parenteral pode conter quantidades menores de um ou mais dos ingredientes ativos que a compõem do que uma forma de dosagem oral usada no tratamento da mesma doença ou desordem. Essas e outras maneiras nas quais formas específicas de dosagem abrangidas por esta invenção irão variar uma da outra serão prontamente reconhecíveis por aqueles com capacidade na técnica. Ver, por exemplo, Remington’s Pharmaceutical Sciences, 18a ed., Mack Publishing, Easton PA (1990).Exemplos de formas de dosagem incluem, mas, sem limitação,: tabletes; tabletes ovais à prova de manuseio (caplets); cápsulas, como cápsulas de gelatina elásticas e macias; cápsulas (cachets); trociscos; pastilhas; dispersões; supositórios; unguentos; cataplasmas (poultices); pastas; pós; bandagens; cremes; emplastros; soluções; adesivos; aerossóis (por exemplo, sprays nasais e inaladores); géis; formas de dosagem líquidas apropriadas para administração oral ou por mucosa a um paciente, incluindo suspensões (por exemplo, suspensões líquidas aquosas ou não- aquosas, emulsões óleo-na-água ou emulsões água-no-óleo), soluções e elixires; formas de dosagem líquidas apropriadas para administração parenteral a um paciente; e sólidos estéreis (por exemplo, sólidos cristalinos ou amorfos) que podem ser reconstituídos para fornecer formas de dosagem líquidas apropriadas para administração parenteral a um paciente.
[0093] Composições farmacêuticas e formas de dosagem típicas consistem num ou mais veículos, excipientes ou diluentes. Excipientes apropriados são bem conhecidos daqueles com capacidade na técnica de farmácia e exemplos não-limitantes de excipientes apropriados são fornecidos aqui. A propriedade de um excipiente em particular para incorporação numa composição farmacêutica ou forma de dosagem dependederá de vários fatores bem conhecidos na técnica, incluindo, mas não limitados à maneira pela qual a forma de dosagem será administrada ao paciente. Por exemplo, formas de dosagem orais, como tabletes, podem conter excipientes que não são apropriados para uso em formas de dosagem parenterais. A propriedade de um excipiente em particular também dependerá dos ingredientes ativos na forma de dosagem.
[0094] Esta invenção abrange ainda composições farmacêuticas e formas de dosagem anidro que consistem em ingredientes ativos, já que a água pode facilitar a degradação de alguns compostos. Por exemplo, a adição de água (por exemplo, 5%) é amplamente aceita nas técnicas farmacêuticas na forma de meio de simular o armazenamento de longo prazo de maneira a determinar características como validade ou a estabilidade das formulações com o tempo. Ver, por exemplo, Jens T. Carstensen, Drug Stability: Principles & Practice, 2d. Ed., Marcel Dekker, NY, NY, 1995, pp. 379-80. De fato, a água e o calor aceleram a decom-posição de alguns compostos. Assim, o efeito da água sobre a formulação pode ser de grande significância, já que vapor d’água e/ou umidade estão comumente presentes durante a manufatura, o manuseio, o empacotamento, o armazenamento, o envio e o uso das formulações. Composições farmacêuticas e formas de dosagem anidro da invenção podem ser preparadas usando ingredientes anidro ou que contém pouca umidade ou em condições de baixa umidade.
[0095] Uma composição farmacêutica anidra deve ser preparada e estocada de maneira que sua natureza anidra seja mantida. Consequentemente, as composições anidras são preferencialmente embaladas usando materiais conhecidos por impedir a exposição à água, de maneira que elas possam ser incluídas em kits de formulação apropriados. Exemplos de embalagens apropriadas incluem, mas, sem limitação, laminados, plásticos, recipientes de dose única (por exemplo, frascos pequenos (vials)), ctécnicalas (blister packs) e faixas (strip packs) hermeticamente selados.
[0096] A invenção abrange ainda composições farmacêuticas e formas de dosagem que consistem num ou mais compostos que reduzem a taxa pela qual um ingrediente ativo irá se decompor. Esses compostos, chamados de “estabilizadores”, incluem, mas, sem limitação, antioxidantes, como ácido ascórbico, tampões de pH ou tampões salinos.
[0097] Assim como as quantidades e tipos de excipientes, as quantidades e tipos específicos de ingredientes ativos nas formas de dosagens pode diferir dependendo de fatores como, mas não limitados à rota pela qual elas serão administradas aos pacientes. Entretanto, as formas de dosagem típicas da invenção ou um sal ou hidrato farmaceuticamente aceito destas, consistem em 0,1 mg a 1.500 mg por unidade para fornecer doses de cerca de 0,01 a 200 mg/kg por dia.
Formas de Dosagem Orais
[0098] As composições farmacêuticas da invenção que são apropriadas para a administração oral podem ser apresentadas como formas de dosagem discretas, como, mas não limitadas a tabletes (por exemplo, tabletes mastigáveis), tabletes ovais à prova de manuseio, cápsulas e líquidos (por exemplo, xaropes flavorizados). Essas formas de dosagem contêm quantidades pré-determinadas de ingredientes ativos e podems er preparadas por métodos de farmácia bem conhecidos daquels com capacidade na técnica. Ver, em geral, Remington’s Pharmaceutical Sciences, 18a ed., Mack Publishing, Easton PA (1990).
[0099] Formas de dosagem orais típicas da invenção são preparadas combinando o(s) ingrediente(s) ativo(s) numa admistura íntima com pelo menos um excipiente, de acordo com as técnicas farmacêuticas convencionais de produção de compostos. Os excipientes podem assumir várias formas dependendo da forma de Preparação desejada para a administração. Por exemplo, os excipientes apropriados para uso em formas de dosagem líquidas orais ou aerossólicas incluem, mas não estão limitadas à água, glicóis, óleos, álcoóis, agentes flavorizantes, preservantes e agentes colorizantes. Exemplos de excipientes apropriados para uso em formas de dosagem orais sólidas (por exemplo, pós, tabletes, cápsulas e tabletes ovais à prova de manuseio) incluem, mas, sem limitação, amidos, açúcares, celulose microcristalina, diluentes, agentes granulantes, lubrificantes, ligantes e agentes desintegrantes.
[00100] Devido à facilidade de sua administração, tabletes e cápsulas representam as unidades de formas de dosagem orais mais vantajosas, no caso das quais os excipientes sólidos são empregados. Se desejado, os tabletes podem ser revestidos por técnicas padrão aquosas ou não- aquosas. Essas formas de dosagem podem ser preparadas por qualquer método de farmácia. Em geral, as composições farmacêuticas e formas de dosagem são prepararadas pela admistura uniforme e íntima dos ingredientes ativos com veículos líquidos, veículos sólidos finamente divididos ou ambos, e a posterior formatação do produto na apresentação desejada, se necessária.
[00101] Por exemplo, um tablete pode ser preparado por compressão ou moldagem. Os tabletes comprimidos são preparados por meio da compressão, numa máquina apropriada, dos ingredientes ativos numa forma fluída, como pó ou grânulos, opcionalmente misturada com um excipiente. Os tabletes moldados podem ser feitos por meio da moldagem, numa máquina apropriada, da mistura de composto em pó umidecido com um diluete líquido. Exemplos de excipientes que podem ser usados em formas de dosagem orais da invenção incluem ligantes, cargas (fillers), desintegrantes e lubrificantes. Ligantes apropriados para uso em composições farmacêuticas e formas de dosagem incluem, mas, sem limitação, amido de milho, amido de batata e outros amidos, gelatina, gomas naturais e sintéticas, como acácia, alginato de sódio, ácido algínico outros alginatos, tragacanto em pó, goma guar, celulose e seus derivados (por exemplo, etil celulose, acetato de celulose, carboximetil celulose de cálcio, carboximetil celulose sódica), polivinil pirrolidonai, metil celulose, amido pré-gelatinizado, hidroxipropil metil celulose, (por exemplo, números 2208, 2906, 2910), celulose macrocristalina e misturas destes.
[00102] Exemplos de cargas apropriados para uso nas composições farmacêuticas e formas de dosagem reveladas aqui incluem, mas, sem limitação, talco, carbonato de cálcio (por exemplo, grânulos ou pó), celulose microcristalina, celulose em pó, dextratos, caolina, manitol, ácido silícico, sorbitol, amido, amido pré-gelatinizado e misturas destes. O ligante ou carga em composições farmacêuticas da invenção estão tipicamente presentes em cerca de 50 até aproximadamente 99 percentagens de peso da composição farmacêutica ou forma de dosagem. Formas apropriadas de celulose microcristalina incluem, mas, sem limitação, materiais vendidos como AVICEL-PH-101, AVICEL-PH-103 AVICEL RC-581, AVICEL-PH-105 (disponíveis pela FMC Corporation, American Viscose Division, Avicel Sales, Marcus Hook, PA) e misturas destes. Um ligante específico é uma mistura de celulose microcristalina carboximetil celulose sódica vendida como AVICEL RC-581. Excipientes ou aditivos anidro ou com baixa umidade incluem o AVICEL-PH-103™ e Starch 1500 LM.
[00103] Os desintegrantes são usados em composições da invenção para fornecer tabletes que desintegram quando expostos a um ambiente aquoso. Os tabletes que contêm muito desintegrante podem desintegrar quando estocados, enquanto aqueles que contêm muito pouco podem não se desintegrar à taxa desejada ou sob as condições desejadas. Assim, uma quantidade suficiente de desintegrante, que não seja muito ou pouco para alterar de forma detrimental a liberação dos ingredientes, deve ser usada para formar as formas de dosagem orais da invenção. A quantidade de desintegrante suada varia com base no tipo de formulação e é prontamente reconhecível para queles de capacidade média na técnica. Composições farmacêuticas típicas consistem em cerca de 0,5 até aproximadamente 15 percentagens de peso de desintegrante, mais especificamente, de cerca de 1 até aproximadamente 5 percentagens de peso de desintegrante.
[00104] Os desintegrantes que podem ser usados em composições farmacêuticas e formas de dosagem da invenção incluem, mas, sem limitação, ágar-ágar, ácido algínico, carbonato de cálcio, celulose microcristalina, croscarmelose sódica, crospovidona, polacrilina potássica, glicolato de amido de sódio, amido de batata ou tapioca, amido pré-gelatinizado outros amidos, argilas outras alginas outras celuloses, gomas e misturas deste.
[00105] Os lubrificantes que podem ser usados em composições farmacêuticas e formas de dosagem da invenção incluem, mas, sem limitação, estearato de cálcio, estearato de magnésio, óleo mineral, óleo mineral leve, glicerina, sorbitol, manitol, polietileno glicol outros glicóis, ácido esteárico, sódio lauril sulfato, talco, óleo vegetal hidrogenado (por exemplo, óleo de amendoim, óleo de algodão, óleo de girassol, óleo de sésamo, azeite, óleo de milho e óleo de soja), estearato de zinco, etil oleato, etil laureato, ágar e misturas destes. Lubrificantes adicionais incluem, por exemplo, uma sílica gel silóide (AEROSIL 200, produzida por W.R. Grace Co. of Baltimore, MD), um aerossol coagulado de sílica sintética (comercializada por Degussa Co. de Piano, TX), CAB-O-SIL (um dióxido de silício pirogênico vendido por Cabot Co. de Boston, MA) e misturas destes. Se utilizados, os lubrificantes são tipicamente usados em quantidades menores do que cerca de 1 percentagem de peso das composições farmacêuticas ou formas de dosagem nas quais eles são incorporados.
Formas de Dosagem de Liberação Retardada
[00106] Os ingredientes ativos da invenção podem ser administrados por meio de liberação controlada ou por mecanismos de liberação que são bem conhecidos daqueles com capacidade média na técnica. Exemplos incluem, mas não estão limitados àqueles descritos nas Patentes US: 3.845.770; 3.916.899; 3.536.809; 3.598.123; e 4.008.719, 5.674.533, 5.059.595, 5.591.767, 5.120.548, 5.073.543, 5.639.476, 5.354.556, e 5.733.566, cada um dos quais é aqui incorporado por referência. Essas formas de dosagem podem ser usadas para fornecer uma liberação lenta ou controlada de um ou mais ingredientes ativos usando, por exemplo, hidropropilmetil celulose outras matrizes poliméricas, géis, membranas permeáveis, sistemas osmóticos, revestimentos multicamada, micropartículas, lipossomas, microsferas ou uma combinação destes para fornecer o perfil de liberação desejado em proporções variadas. Formulações de liberação controlada conhecidas daqueles com capacidade média na técnica, incluindo aquelas descritas aqui, podem ser prontamente selecionadas para uso com os ingredientes ativos da invenção. Assim, a invenção abrange formas de dosagem únicas para administração oral como, mas não limitadas a tabletes, cápsulas, cápsulas de gelatina e tabletes ovais à prova de manuseio que são adpatados para liberação controlada.
[00107] Todos os produtos farmacêuticos de liberação controlada têm o objetivo comum de melhorar a terapia com fármacos em relação àquela realizada com as contrapartes não-controladas. Idealmente, o uso de um preparado projetado de maneira ótima para a liberação controlada num tratamento médico é caracterizado pelo uso de uma quantidade mínima do fármaco para curar ou controlar a condição no menor tempo possível. As vantagens das formulações com liberação controlada incluem a atividade prolongada da droga, a redução da frequência de dosagem e a maior adesão do paciente. Além disso, as formulações com liberação controlada podem ser usadas para afetar o tempo de início da ação ou outras caracteríticas, como os níveis sanguíneos da droga, e podem, assim, afetar a ocorrência de efeitos colaterais (por exemplo, adversos).
[00108] A maioria das formulações de liberação controlada são projetadas para liberar inicialmente uma quantidade da droga (ingrediente ativo) que produza prontamente o efeito terapêutico desejado, e gradual e constantemente libere outras quantidades da droga para manter o nível do efeito terapêutico ou profilático por um longo período de tempo. Para manter esse constante nível da droga no corpo, o fármaco precisa ser liberado da forma de dosagem numa taxa que reporá a quantidade da droga que está sendo metabolizada e excretada do corpor. A liberação controlada de um ingrediente pode ser estimulada por várias condições, incluindo, mas não limitadas a pH, temperatura, enzimas, água ou outros compostos e condições fisiológicos.
Formas de Dosagem Parenterais
[00109] Formas de dosagem parenterais podem ser administradas a pacientes por várias rotas, incluindo, mas não limitadas à subcutânea, intravenosa (incluindo injeção em bolus), intramuscular e intra-arterial. Como a sua administração tipicamente ignora as defesas naturais dos pacientes contra contaminantes, as formas de dosagem parenterais são preferivelmente estéreis ou capazes de serem esterilizadas antes da administração a um paciente. Exemplos de formas de dosagem paraenterais incluem, mas não estão limitados à soluções prontas para injeção, produtos secos e/ou liofilizados prontos para serem dissolvidos ou suspendidos num veículo para injeção farmaceuticamente aceito (pós- reconstituíveis), suspensões prontas para injeção e emulsões.
[00110] Os veículos apropriados que podem ser usados para produzir formas de dosagem parenterais são bem conhecidos daqueles com capacidade na técnica. Exemplos incluem, mas não estão limitados à: Água para Injeção USP; veículos aquosos, como, mas não limitados à Injeção de Cloreto de Sódio, Injeção de Ringer, Injeção de Dextrose, Injeção de Dextrose e Clreto de Sódio e Injeção Lactada de Ringer; veículos miscíveis em água, como, mas não limitados a álcool etílico, polietileno glicol e polipropileno glicol; e veículos não-aquosos, como, mas não limitados a óleo de milho, óleo de algodão, óleo de amendoim, óleo de sésamo, etil oleato, miristato de isopropila e benzoato de benzila. Os compostos que aumentam a solubilidade de um ou mais ingredientes ativos revelados aqui também podem ser incorporados em formas de dosagem parenterais da invenção.
Formas de Dosagem Transdérmicas
[00111] Formas de dosagem transdérmicas incluem adesivos do “tipo reservatório” e do “tipo matriz”, que podem ser aplicados sobre a pele e usados por um período específico de tempo para permitir a penetração da quantidade desejada de ingredientes ativos.
[00112] Excipientes apropriados (por exemplo, veículos e diluentes) e outros materiais que podem ser usados para produzir formas de dosagem transdérmicas e tópicas abrangidas nesta invenção são bem conhecidas daqueles com capacidade nas técnicas farmacêuticas, e dependem do tecido específico ao qual uma composição farmacêutica ou forma de dosagem será aplicada. Com esse fato em mente, os excipientes típicos incluem, mas não estão limitados à água, acetona, etanol, etileno glicol, propileno glicol, butano-1,3-diol, isopropil miristato, isopropil palmitato, óleo mineral e misturas deste. Dependendo do tecido específico a ser tratado, componentes adicionais podem ser usados antes de, em conunto com ou depois do tratamento com os ingredientes ativos da invenção. Por exemplo, acentuadores de penetração podem ser usados para auxiliar na entrega dos ingredientes ativos ao tecido. Acentuadores de penetração apropriados incluem, mas não estão limitados à: acetona; vários alcoóis, como o etanol, oleil e tetrahidrofuril; alquil sulfóxidos, como dimetil sulfóxido; dimetil acetamida; dimetil formamida; polietileno glicol; pirrolidonas, como polivinilpirrolidona; graus Kollidon grades (Povidona, Polividona); uréia; e vários estéres de açúcar solúveis ou insolúveis em água, como Tween 80 (polisorbato 80) e Span 60 (sorbitano monostearato).
[00113] O pH de uma composição farmacêutica ou forma de dosagem ou de um tecido ao qual a composição farmacêutica ou forma de dosagem é aplicada, também pode ser ajustado para melhorar a entrega de um ou mais ingredientes ativos. Similarmente, a polaridade de um solvente veículo, sua força iônica ou tonicidade podem ser ajustadas para melhorar a entrega. Compostos como os estearatos também podem ser adicionados às composições farmacêuticas ou formas de dosagem para alterar de maneira vantajosa a hidrofiliciadade ou lipofilicidade de um ou mais ingredientes ativos para melhorar a entrega. Nesse sentido, os estearatos podem servir na forma de veículo lipídico para a formulação, na forma de agente emulsificador ou um tensoativo, e na forma de agente de melhoria da entrega ou acentuação da penetração. Diferentes sais, hidratos ou solvatos dos ingredientes ativos podem ser usados para ajustar ainda mais as propriedades da composição resultante.
Formas de Dosagem Tópicas
[00114] As formas de dosagem tópicas da invenção incluem, mas, sem limitação, cremes, loções, unguentos, géis, soluções, emulsões, suspensões ou outras formas conhecidas para aqueles com capacidade na técnica. Ver, por exemplo, Remington’s Pharmaceutical Sciences, 18a eds., Mack Publishing, Easton PA (1990); e Introduction to Pharmaceutical Dosage Forms, 4a ed., Lea & Febiger, Filadélfia (1985).
[00115] Excipientes apropriados (por exemplo, veículos e diluentes) e outros materiais que podem ser usados para produzir formas de dosagem transdérmicas e tópicas abrangidas nesta invenção são bem conhecidas daqueles com capacidade nas técnicas farmacêuticas, e dependem do tecido específico ao qual uma composição farmacêutica ou forma de dosagem será aplicada. Com esse fato em mente, os excipientes típicos incluem, mas não estão limitados à água, acetona, etanol, etileno glicol, propileno glicol, butano-1,3-diol, miristato de isopropila, palmitato de isopropila, óleo mineral e misturas deste.
[00116] Dependendo do tecido específico a ser tratado, componentes adicionais podem ser usados antes de, em conjunto com ou depois do tratamento com os ingredientes ativos da invenção. Por exemplo, acentuadores de penetração podem ser usados para auxiliar na entrega dos ingredientes ativos ao tecido. Acentuadores de pentração apropriados incluem, mas não estão limitados à: acetona; vários alcoóis, como o etanol, oleil e tetrahidrofuril; alquil sulfóxidos, como dimetil sulfóxido; dimetil acetamida; dimetil formamida; polietileno glicol; pirrolidonas, como polivinilpirrolidona; graus Kollidon grades (Povidona, Polividona); uréia; e vários estéres de açúcar solúveis ou insolúveis em água, como Tween 80 (polisorbato 80) e Span 60 (sorbitano monostearato).
Formas de Dosagem para Mucosa
[00117] Formas de dosagem para mucosa da invenção incluem, mas, sem limitação, soluções oftálmicas, sprays e aerossóis ou outras formas conhecidas para alguém com capacidade na técnica. Ver, por exemplo, Remington’s Pharmaceutical Sciences, 18a eds., Mack Publishing, Easton PA (1990); e Introduction to Pharmaceutical Dosage Forms, 4a ed., Lea & Febiger, Filadélfia (1985). As formas de dosagem apropriadas para tratar os tecidos da mucosa dentro da cavidade oral podem ser formulados como desifentantes bucais ou géis orais. Numa modalidade, o aerossol contém um veículo. Em outra modalidade, o aerossol não tem veículo. Os compostos da invenção também podem ser administrados diretamente ao pulmão por meio de inalação. Para a administração por inalação, o composto da invenção pode ser convenientemente entregue ao pulmão por vários mecanismos diferentes. Por exemplo, um inalador dosimetrado (“MDI”) que utiliza garrafas (canisters) que contêm um propelente de baixa ebulição apropriado, por exemplo, diclorodifluorometano, triclorofluorometano, diclorotetrafluoroetano, carbon dióxido ou outro gás apropriado que pode ser usado para liberar o composto diretamente ao pulmão. Os dispositivos MDI estão disponíveis com diversos fornecedores, como Corporação 3M, Aventis, Boehringer Ingleheim, Forest Laboratories, Glaxo- Wellcome, Schering Plough e Vectura. Alternativamente, um dispositivo inalador em pó (DPI) pode ser usado para administrar o composto da invenção ao pulmão {ver, por exemplo, Raleigh e colaboradores, Proc. Amer. Assoc. Cancer Research Annual Meeting, 1999, 40, 397, o qual está incorporado aqui por referência). Os dispositivos DPI tipicamente usam um mecanismo de pulso de gás para criar uma nuvem de pó seco dentro do receptáculo, a qual pode então ser inalada pelo paciente. Os dispositivos DPI também são bem conhecidos na técnica e podem ser comprados de diversos vendedores, os quais incluem, por exemplo, Fisons, Glaxo-Wellcome, Inhale Therapeutic Systems, ML Laboratories, Qdose e Vectura. Uma variedade popular é o sistema DPI de múltiplas doses (“MDDPI”), que permite a entrega de mais de uma dose terapêutica. Os dispositivos MDDPI estão disponíveis por meio de companhias como AstraZeneca, Glaxo-Wellcome, IVAX, Schering Plough, SkyePharma e Vectura. Por exemplos, cápsulas e cassetes de gelatina para uso num inalador ou insuflador podem ser formulados para conter uma mistura de pó do composto e de um pó-base apropriado, como lactose ou amido, para esses sistemas. Outro tipo de dispositivo que pode ser usado para liberar o composto da invenção ao pulmão é um dispositivo de spray líquido fornecido, por exemplo, pela Corporação Aradigm. Sistemas de spray líquido usam orifícios estremamente pequenos no bico para aerossolizar formulações líquidas de drogas que, então, podem ser inaladas diretamente para os pulmões.
[00118] Numa modalidade desejável, é usado um nebulizador para liberar o composto da invenção ao pulmão. Os nebulizadores criam aerossóis a partir de formulações líquidas de drogas usando, por exemplo, energia ultrasônica para formar partículas finas que podem ser prontamente inaladas (ver por exemplo, Verschoyle e colaboradores, British J. Cancer, 1999, 80, Suppl 2, 96, o qual está incorporado aqui por referência). Exemplos de nebulizadores incluem dispositivos fornecidos por Sheffield/Systemic Pulmonary Delivery Ltd. (ver, Armer e colaboradores, Patente US 5.954.047; van der Linden e colaboradores, Patente US 5.950.619; van der Linden e colaboradores, Patente US 5.970.974, que são aqui incorporados por referência), Aventis e Batelle Pulmonary Therapeutics.
[00119] Numa modalidade especialmente desejável, um dispositivo de aerossol eletrohidrodinâmico (“EHD”) é usado para liberar os compostos da invenção ao pulmão. Os dipositivos de aerossol EHD usam energia elétrica para aerossolizar soluções ou suspensões líquidas de drogas (ver, por exemplo, Noakes e colaboradores, Patente US 4.765.539; Coffee, Patente US 4.962.885; Coffee, Pedido PCT, WO 94/12285; Coffee, Pedido PCT, WO 94/14543; Coffee, Pedido PCT, WO 95/26234; Coffee, Pedido PCT, WO 95/26235; Coffee, Pedido PCT, WO 95/32807; que são aqui incorporados por referência). As propriedades eletroquímicas da formulação podem ser parâmetros importantes para serem otimizados quando se usa um dispositivo de aerossol EHD para liberar a droga ao pulmão e essa otimização é realizada rotineiramente por alguém com capacidade na técnica. Os dispositivos de aerossol EHD podem liberar mais eficientemente as drogas ao pulmão do que outras tecnologias de entrega pulmonar existentes. Outros métodos de entrega intrapulmonar dos compostos da invenção serão do conhecimento do técnico competente e estão dentro do escopo da invenção.
[00120] As formulações líquidas de droga apropriadas para uso em nebulizadores, dispositivos de spray líquido e dispositivos de aerossol EHD tipicamente incluirão um composto da invenção com um veículo farmaceuticamente aceito. Preferivelmente, um veículo farmaceuticamente aceito é um líquido como álcool, água, polietileno glicol ou perfluorocarbono. Opcionalmente outro material pode ser adicionado para alterar as propriedades de aerossol da solução ou suspensão do composto. De preferência, esse material é um líquido como álcool, glicol, poliglicol ou um ácido graxo. Outros métodos de formulação de soluções ou suspensões líquidas de droga para uso em dispositivos de aerossol são conhecidas daqueles com capacidade na técnica (ver, por exemplo, Biesalski, Patentes US 5.112.598; Biesalski, 5.556.611, que são aqui incorporadas por referência). Um composto também pode ser formulado em composições retais ou vaginais, como supositórios ou enemas de retenção, por exemplo, contendo bases convencionais de supositórioas, como manteiga de cacau ou outros glicerídeos.
[00121] Além das formulações descritas anteriormente, um composto da invenção também pode ser formulado como uma preparação depot. Essas formulações de ação de longo prazo podem ser administradas por implantação (por exemplo, subcutaneamente ou intramuscularmente) ou por injeção intramuscular. Assim, por exemplo, os compostos podem ser formulados com materiais poliméricos ou hidrofóbicos (por exemplo, como uma emulsão num óleo aceitável) ou resinas de troca iônica apropriados ou como derivados ligeiramente solúveis, por exemplo, na forma de sal ligeiramente solúvel.
[00122] Alternativamente podem ser empregados outros sistemas farmacêuticos de liberação. Lipossomas e emulsões são exemplos bem conhecidos de veículos de entrega que podem ser usados para liberar os compostos da invenção. Certos solventes orgânicos, como dimetilsulfóxido, também podem ser empregados, embora normalmente ao custo de uma maior toxicidade. Os compostos da invenção também podem ser entregues por um sistema de liberação controlada. Numa modalidade, uma bomba pode ser usada (Sefton, CRC Crit. Ref Biomed Eng., 1987, 14, 201; Buchwald e colaboradores, Surgery, 1980, 88, 507; Saudek e colaboradores, N. Engl. J. Med., 1989, 321, 574). Em outra modalidade, podem ser usados materiais poliméricos (ver Medical Applications of Controlled Release, Langer e Wise (eds.), CRC Pres., Boca Raton, Fla. (1974); Controlled Drug Bioavailability, Drug Product Design and Performance, Smolen e Ball (eds.), Wiley, New York (1984); Ranger e Peppas, J Macromol. ScL Rev. Macromol. Chem., 1983, 23, 61; ver também Levy e colaboradores, Science, 1985, 228, 190; During e colaboradores, Ann. Neurol, 1989, 25, 351; Howard e colaboradores, 1989, J. Neurosurg. 71, 105). Em ainda outra modalidade, um sistema de liberaçãocontrolada pode ser posto próximo ao alvo dos compostos da invenção, por exemplo, o pulmão, necessitando, assim, apenas de uma fração da dose sistêmica (ver, por exemplo, Goodson, em Medical Applications of Controlled Release, supra, vol. 2, pp. 115 (1984)). Outros sistemas de liberação controlada podem ser usados (ver, por exemplo Langer, Science, 1990, 249, 1527).
[00123] Excipientes apropriados (por exemplo, veículos e diluentes) e outros materiais que podem ser usados para produzir formas de dosagem para mucosa abrangidas nesta invenção são bem conhecidas daqueles com capacidade nas técnicas farmacêuticas, e dependem do sítio ou método específico pelo qual uma composição farmacêutica ou forma de dosagem será aplicada. Com esse fato em mente, os excipientes típicos incluem, mas não estão limitados à água, acetona, etanol, etileno glicol, propileno glicol, butano-1,3-diol, isopropil miristato, isopropil palmitato, óleo mineral e misturas deste que não sejam tóxicas e sejam farmaceuticamente aceitas. Exemplos desses ingredientes adicionais são bem conhecidos na técnica. Ver, por exemplo, Remington’s Pharmaceutical Sciences, 18a eds., Mack Publishing, Easton PA (1990).
[00124] O pH de uma composição farmacêutica ou forma de dosagem ou de um tecido ao qual a composição farmacêutica ou forma de dosagem é aplicada, também pode ser ajustado para melhorar a entrega de um ou mais ingredientes ativos. Similarmente, a polaridade de um solvente veículo, sua força iônica ou tonicidade podem ser ajustadas para melhorar a entrega. Compostos como os estearatos também podem ser adicionados às composições farmacêuticas ou formas de dosagem para alterar de maneira vantajosa a hidrofiliciadade ou lipofilicidade de um ou mais ingredientes ativos para melhorar a entrega. Nesse sentido, os estearatos podem servir na forma de veículo lipídico para a formulação, na forma de agente emulsificador ou um tensoativo, e na forma de agente de melhoria da entrega ou acentuação da penetração. Diferentes sais, hidratos ou solvatos dos ingredientes ativos podem ser usados para ajustar ainda mais as propriedades da composição resultante.
KITS
[00125] A invenção fornece um pacote ou kit farmacêutico que consiste num ou mais receptáculos contendo um pró-fármaco da Fórmula I, um composto da Fórmula II ou outro composto da invenção úteis para o tratamento ou prevenção de uma infecção pelo vírus da hepatite C. Em outras implementações, a invenção provê um pacote ou kit farmacêutico que consiste num ou mais receptáculos contendo um composto da invenção útil para o tratamento ou prevenção de uma infecção pelo vírus da hepatite C e um ou mais receptáculos contendo um agente terapêutico adicional, incluindo, mas, sem limitação,àqueles listados acima, em especial, um agente antiviral, um interferon, um agente que inibe enzimas virais ou um agente que inibe a replicação viral; de preferência, o agente terapêutico adiconal é específico para HCV ou demonstra atividade anti-HCV. A invenção também fornece um pacote ou kit farmacêutico que consiste num ou mais receptáculos contendo um ou mais dos ingredientes das composições farmacêuticas da invenção. Opcionalmente, associada a esse(s) receptáculo(s), pode haver um aviso de uma agência governamental que regula a manufaura, o uso e a venda de produtos farmacêuticos ou biológicos, sendo que o aviso reflete a aprovação dessa agência para a manufatura, o uso e a venda para administração em humanos.
[00126] Os agentes inventivos podem ser preparados usando as rotas de reação e os esquemas de síntese descritos abaixo, empregando as técnicas gerais conhecidas na técnica e usando materiais iniciais que estão protamente disponíveis. A síntese de compostos não exemplificados de acordo com a invenção pode ser realizada por meio de modificações reconhecíveis por aqueles com habiliadade na técnica, por exemplo, protegendo apropriadamente os grupos de interferência, mudando para outros reagentes conhecidos na técnica ou fazendo modificações rotineiras de condições de reação. Alternativamente outras reações reveladas aqui ou conhecidas de maneira geral na técnica serão reconhecidas como sendo aplicáveis para preparar outros compostos da invenção.
Preparação dos Compostos
[00127] Nos esquemas sintéticos descritos abaixo, a menos que seja indicado de maneira diferente, todas as temperaturas são descritas em graus Celsius e todas as partes e percentagens são por peso. Os reagentes foram comprados de fornecedores comerciais, como Aldrich Chemical Company ou Lancaster Synthesis Ltd., e foram usados sem purificação adicional, a menos que seja indicado diferentemente. O tetrahidrofurano (THF) e a N,N-dimetilforamida (DMF) foram comprados da Aldrich em garrafas Sure Seal e usados como entregues. A menos que seja indicado de maneira diferente, os seguintes solventes e reagentes foram destilados sob uma cobertura de nitrogênio seco. O THF e Et2O foram destilados de Na-benzofenona cetil; CH2Cl2, diisopropilamina, piridina e Et3N foram destilados de CaH2; MeCN foi destilado primeiro de P2O5, e então de CaH2; MeOH foi destilado de Mg; PhMe, EtOAc e i-PrOAc foram destilados de CaH2; TFAA foi purificado por meio de uma destilação atmosférica simples sob argônio seco.
[00128] As reações descritas abaixo foram geralmente conduzidas sob uma pressão positiva de argônio e à temperatura ambiente (a menos que seja indicado diferentemente) em solventes anidro, e os frascos de reação foram adaptados com um septo de borracha para a introdução de substratos e reagentes por meio de seringa. A vidraria foi secada em forno e/ou secada por calor. As reações foram medidas por TLC e finalizadas de acordo com o consumo dos materiais iniciais. A cromatografia analítica de camada fina (TLC) foi realizada em placas de 0,2 mm 60 F254 de sílica gel com suporte de alumínio (EM Science) e visualizada em luz ultravioleta (254 nm) seguida por aquecimento com ácido fosfomolíbdico etanólico comercial. Cromatografia de camada fina (TLC) preparativa foi realizada em placas de 1,0 mm 60 F254 de sílica gel com suporte de alumínio (EM Science) e visualizada em luz ultravioleta (254 nm).
[00129] Os preparativos (work-ups) foram tipicamente realizados dobrando-se o volume de reação com o solvente de reação ou o solvente de extração e lavando-se com as soluções aquosas indicadas, usando 25% por volume do volume de extração, a menos que fosse indicado diferentemente. As soluções produto foram secadas com Na2SO4 e/ou Mg2SO4 anidro antes da filtração e evaporação dos solventes sob pressão reduzida num evaporador rotatório e anotada como solventes removidos sob vácuo. A cromatografia de coluna foi completada sob pressão positiva usando sílica gel de trama 230-400 ou alumina neutra de trama 50-200. A hidrogenólise foi realizada na pressão indicada nos exemplos ou em pressão ambiente.
[00130] O espectro 1H-NMR foi registrado num instrumento Varian Mercury-VX400 operando a 400 MHz e o espectro 13C-NMR foi registrado operando a 75 MHz. O espectro NMR foi obtido como soluções de CDCl3 (relatadas em ppm), usando clorofórmio como o padrão de referência (7,27 ppm e 77,00 ppm), CD3OD (3,4 e 4,8 ppm e 49,3 ppm), DMSO-d6 ou internamente tetrametilsilana (0,00 ppm) quando apropriado. Outros solventes NMR foram usados como necessário. Quando multiplicidades de picos forem relatadas, as seguintes abreviações são usadas: s (singleto, d (dubleto, t (tripleto, q (quarteto, m (multipleto), br (ampliado), dd (dubleto de dubletos) e dt (doubleto de tripletos). As constantes de acoplamento, quando fornecidas, são relatadas em Hertz (Hz).
[00131] O espectro infravermelho (IR) foi registrado num espectrômetro FT-IR como óleos puros (neat oils), péletes de KBr ou soluções de CDCl3, e quando fornecidas são relatadas em números de onda (cm-1). Os espectros de massa relatados são (+)-ES LC/MS e foram realizados pelo Departamento de Química Analítica da Anadys Pharmaceuticals, Inc. As análises de elementos foram realizadas pela Atlantic Microlab, Inc. em Norcross, GA. Os pontos de fusão (mp) foram determinados num aparato de capilar aberto e não foram ajustados.
[00132] As vias sintéticas e procedimentos experimentais descritos utilizam abreviações químicas comuns, THF (tetrahidrofurano), DMF (N,N-dimetilformamida), EtOAc (acetato de etila), DMSO (di-metil sulfóxido), DMAP (4-dimetilaminopiridina), DBU (l,8-diazaciclo[5.4.0]undec-7-ene), DCM (4-(dicianometileno)-2-metil-6-(4- dimetilamino-estiril)-4H-piran), MCPBA (3-ácido cloroperoxibenzóico), EDC (l-(3-dimetilaminopropil)-3-etilcarbodiimida hidrocloreto), HATU (O- (7-azabenzotriazol-l-yl)-l,l,3,3-tetrametilurônio hexafluorofosfato), HOBT (1-hidroxibenzotriazol hidrato), TFAA (trifluoroacético anidrido), pyBOP (benzotriazol-1- iloxi)tripirrolidinofosfônio hexafluorofosfato), DIEA (diisopropiletilamina), BOC (tert-butoxicarbonil), 2,2-DMP (2,2- dimetoxipropano), IPA (isopropil álcool), TEA (trietilamina), DCE (1,2- dicloroetano), PPTS (piridínio p-toluenosulfonato), DEAD (dietilazodicarboxilato), PS (suporte por polímero), HF (fluoreto de hidrogênio), MeCN (acetonitrila), MeOH (metanol), Val (valina), Phe (fenilalanina), HPLC (cromatografia líquida de alta pressão), TLC (cromatografia de camada fina), Bz (benzoil), Ac (acetil), Tol (toluoil), Me (metil) e similares.Exemplo 1 5-Amino-3-(2’-C-metil-β-D-ribofuranosil)-3H- tiazol[4,5-d]pirimidina-2-ona (4)
Figure img0016
[00134] Etapa 1) Preparação de 5-Amino-3-(2’-C-metil-2’,3’,5’-tri-0-benzoil-β -D-ribofuranosil)-3H-tiazol[4,5-d]pirimidina-2-ona (3)
Figure img0017
[00135] A uma mistura heterogênea de heterociclo 1 (168 mg, 1,00 mmol) e perbenzoil ribose 2 [preparada de acordo com o método de Wolfe e colaboradores, J. Org. Chem. 1997, 62, 1754-1759] (522 mg, 0,90 mmol) em MeCN anidro (10 mL) foi adicionado BSA (742 μL, 3,00 mmol). A mistura resultante foi agitada por 15 min, quando, então, foi adicionado TMSOTf (333 μL, 1,50 mmol). A mistura de reação foi agitada por 4 h a 65°C, e então por 3 h a 90°C. A mistura foi, então, resfriada à temperatura ambiente (rt), diluída com DCM (150 mL) e particionada com tampão pH 7 (100 mL). A fase aquosa foi extraída ainda mais com DCM (3 x 50 mL), e as fases orgânicas combinadas forem secadas em Na2SO4 e filtradas. O filtrado claro foi diluído em EtOAc (200 mL), filtrado através de uma almofada de SiO2, concentrado e submetido à cromatografia flash (EtOAc-DCM 10-40%), produzindo 380 mg (67%) de nucleosídeo 3 na forma de sólido branco: 1H (400 MHz, OMSO-d6) δ 8,43 (s, 1H), 7,85-8,02 (m, 6H), 7,46-7,97 (m, 7H), 7,35 (t, J=8,06, 2H), 6,96 (br s, 2H), 6,77 (br s, 1H), 4,54-4,82 (m, 4H), 1,77 (s, 3H); [MH-H]+ m/z 627.
[00136] Etapa 2) Preparação de 5-Amino-3-(2’-C-metil-β -D-ribofuranosil)-3H-tiazol[4,5-d]pirimidina-2-ona (4)
Figure img0018
[00137] A uma suspensão de nucleosídeo 3 (380 mg, 0,606 mmol) em MeOH (20 mL) foi adicionado K2CO3 (17 mg, 0,12 mmol) à temperatura ambiente. A mistura resultante foi agitada por 18 h à temperatura ambiente, quando, então, foi tratada com HOAc (15 μL, 0,25 mmol), concentrada e submetida à purificação com HPLC (MeCN-H2O), produzindo 20 mg (10%) do composto título 4 na forma de sólido branco após liofilização: 1H (400 MHz, DMSO-d6) δ 8,33 (s, 1H), 6,86 (br s, 2H), 6,09 (br s, 1H), 5,19 (br s, 1H), 4,88 (br s, 1H), 4,55 (t, J=5,87, 1H), 3,97 (br s, 1H), 3,76-3,81 (m, 1H), 3,61 (br s, 2H), 1,04 (s, 3H); [M+H]+ m/z 315. Análise calculada para C11H14N4O5S-H2O: C, 39,75; H, 4,85; N, 16,86; S, 9,65. Encontrado: C, 40,23; H, 4,76; N, 16,64; S, 9,45. Exemplo 2 5-Amino-3-(2’-deoxi-β-D-ribofuranosil)-3H-tiazol[4,5-d]pirimidina-2-ona (10)
Figure img0019
[00138] Etapa 1) Preparação de N’-(7-Cloro-2-oxo-2,3-d1Hidro- tiazol[4,5-d]pirimidina-5-yl)-N,N-dimetil-formamidina (7)
Figure img0020
[00139] A uma suspensão de 5-amino-7-hidroxi-3H-tiazol[4,5- d]pirimidi-na-2-ona (10,0 g, 53,7 mmol) em MeCN (200 mL) a 0°C foi adicionado SOCl2 (20,0 mL, 274 mmol) em forma de gotas por meio de um funil de adição por 20 min. A mistura resultante foi lentamente aquecida até à temperatura ambiente e, então, imersa num banho de óleo a 60°C, em que foi agitada por 48 h. A mistura de reação foi resfriada até à temperatura ambiente e lentamente despejada em 300 g de gelo fragmentado em 300 mL de água contendo NaHCO3 (46 g, 548 mmol). A mistura aquosa foi extraída com IPA-DCM 20% (3 x 500 mL), e as fases orgânicas combinadas foram secadas em Na2SO4 e concentradas num resíduo que foi triturado com EtOAc para produzir 6,33 g (46%) de cloroamidina 7 na forma de sólido marrom-claro: 1H (400 MHz, DMSO- d6) δ 12,60 (s, 1H), 8,69 (s, 1H), 3,25 (s, 3H), 3,11 (s, 3H); [M+H]+ m/z 258.
[00140] Etapa 2) Preparação de N’-(7-Cloro-2-oxo-3-[2’-deoxi-3’,5’-di-O- (p-toluoil)-β-D-ribofuranosil]-2,3-d1Hidro-tiazol[4,5-d]pirimidina-5-il)-N,N- dimetil-formamidina (8)
Figure img0021
[00141] A uma suspensão de heterociclo 7 (1.79 g, 6.94 mmol) em MeCN anidro (90 mL) à temperatura ambiente foi adicionado NaH 95% (183 mg, 7,63 mmol). A mistura resultante foi agitada por 30 min, quando, então, foi adicionado cloroaçúcar 5 (2,70 g, 6,94 mmol) [comprado de Berry & Associates, Inc., Dexter, MI]. A mistura de reação foi aquecida a 55°C, agitada por 1h, resfriada, concentrada, e então submetida à cromatografia flash (SiO2, EtOAc-DCM 5-10%) produzindo 3,8 g (90%) de nucleosídeo 8 na forma de material sólido que pode ser purificado mais ainda através de trituração em MeOH: 1H (400 MHz, DMSO-d6) δ 8,64 (s, 1H), 7,83 (ABq, JAB=8,19, ΔVAB=38,53, 4H), 7,28 (ABq, JAB=8,19, ΔVAB=36,13, 4H), 6,56 (dd, J=8,19, 5,07, 1H), 5,76-5,80 (m, 1H), 4,56- 4,60 (m, 1H), 4,45-4,50 (m, 2H), 3,27-3,34 (m, 1H), 3,15 (s, 3H), 3,03 (s, 3H), 2,57-2,64 (m, 1H), 2,35 (s, 3H), 2,39 (s, 3H).
[00142] Etapa 3) Preparação de 5-Amino-3-(2’,3’-di-O-(p-toluoil)-β-D- ribofuranosil)-3H-tiazol[4,5-d]pirimidina-2-ona (9)
Figure img0022
[00143] A uma solução de cloroaril nucleosídeo 8 (924 mg, 1,47 mmol) em ácido acético (10.4 mL) à temperatura ambiente foi adicionado a dupla Zn-Cu (1,54 g, 11,9 mmol). A suspensão resultante foi agitada vigorosamente à temperatura ambiente por 3,5 h, filtrada através de celite, e então concentrada num material sólido que foi submetido à cromatografia flash (SiO2, EtOAc-CHCl3 0-10%), produzindo 520 mg (67%) de composto 9 na forma de sólido marrom-claro: 1H NMR (400 MHz, d6-DMSO) δ 8,34 (s, 1H), 7,85 (ABq, JAB=8,4, ΔVAB=17,6, 4H), 7,30 (ABq, JAB=8,4, ΔVAB=27,1, 4H), 6,87 (s, 2H), 6,47(m, 1H), 5,78 (m, 1H), 4,62 (m, 1H), 4,47 (m, 2H), 3,35 (m, 2H), 2,38 (s, 3H), 2,35 (s, 3H).
[00144] Etapa 4) Preparaçãon de 5-Ammo-3-(2’-deoxi-β-D-ribofuranosil)- 3H-tiazol[4,5-d]pirimidina-2-ona (10)
Figure img0023
[00145] A uma suspensão de diéster 9 (300 mg, 0,577 mmol) da Etapa 3 (acima) em MeOH (20 mL) à temperatura ambiente foi adicionado K2CO3 (188 mg, 1,36 mmol). A mistura resultante foi agitada por 8 h, quando, então, foi interrompida com HOAc (164 μL, 2,86 mmol), e então concentrada e submetida à HPLC (MeCN-H2O, TFA) para produzir 75 mg (46%) do composto título 10 na forma de sólido branco(sal de TFA) após liofilização: 1H (400 MHz, DMSO-d6) δ 8,34 (s, 1H), 7,15 (br s, 2H), 6,33 (t, J=7,0, 1H), 4,33 (br s, 1H), 3,72- 3,73 (m, 1H), 3,39-3,56 (m, 2H), 2,892,96 (m, 1H), 1,99-2,05 (m, 1H); [M+H]+ m/z 285. Análise calculada para C10H12N4O4S-C2HF3O2: C, 36,18; H, 3,29; N, 14,31; S, 8,05. Encontrado: C, 36,28; H, 3,35; N, 13,96; S, 8,05.Exemplo 3 5-Amino-3-(2’-0-acetil-3’-deoxi-β-D-ribofuranosil)-3H- tiazol[4,5-d]pirimidina- 2-ona (15)
Figure img0024
[00146] Etapa 1) Preparação de 5-Amino-3-(2’,5’-di-O-benzoil-3’-deoxi- β-D-ribofuranosil)-3H-tiazol[4,5-d]pirimidina-2-ona (12)
Figure img0025
[00147] A uma mistura heterogênea de heterociclo 1 (25.0 g, 0,149 mol) e deoxiribofuranose 11a (47,0 g, 0.122 mol) [pode ser preparada a partir do metil ribofuranosídeo correspondente (Walton et. al., J. Med. Chem. 1965, 8, 659- 663) através do método de Valdivia e colaboradores, Tetrahedron Lett. 2005, 46, 6511-6514] em MeCN anidro (640 mL) à temperatura ambiente foi adicionado BSA (113 mL, 0,458 mol) em forma de gotas por meio de um funil de adição por mais de 20 min. A suspensão resultante foi tratada com TMSOTf (41,5 mL, 0.229 mol) gotejado à temperatura ambiente por mais de 20 min, quando, então, se tornou quase homegênea. A mistura foi aquecida até atingir refluxo (T interna 83°C) e agitada por 8 h, então, foi resfriada até à temperatura ambiente e concentrada num resíduo oleoso por meio de evaporação rotativa. O resíduo foi dissolvido em EtOAc (500 mL) e resfriado até 10°C, quando foi tratado lentamente com tampão fosfato 1 M pH 7 (400 mL), mantendo-se a temperatura interna menor que 35°C. Quando o tampão foi completamente adicionado, o pH da mistura foi ajustado a 7,0 com K2HPO4 sólido e uma vigorosa agitação continuou por 1 h. A celite (25 g) foi adicionada e a mistura agitada mais 30 min. A filtração da mistura trifásica por um pequeno filtro de forneceu duas fases claras. A fase aquosa foi saturada com NaCl sólido e então extraída com EtOAc (4 x 250 mL). As fases orgânicas combinadas foram lavadas com salmoura (400 mL), secadas em Na2SO4 e carvão vegetal (1 g), e então filtradas por um pequeno filtro de SiO2. O filtrado âmbar claro foi concentrado até secar, quando então o heterociclo sólido tinha precipitado. O resíduo foi ressuspenso em DCM, tratado com uma pequena quantidade de MgSO4 e então filtrado através de celite. O filtrado claro foi concentrado e secado ainda mais sob alto vácuo a 35°C para gerar uma espuma quebradiça (crispy) marrom-claro (69,5 g). Quando essa espuma sólida foi submetida à cromatografia flash (SiO2, EtOAc-hexanos 5-40%), produziu-se 46,3 g (77%) de nucleosídeo 12 como uma espuma sólida bege claro: 1H (NMR DMSO-d6) δ 8,35 (s, 1H), 7,93-8,01 (m, 4H), 7,61-7,69 (m, 2H), 7,47-7,56 (m, 4H), 6,94 (s, 2H), 6,09 (d, J=1,9, 1H), 6,00 (d, J=7,4, 1H), 4,64-4,69 (m, 1H), 4,57 (dd, J=12,1, 2,7, 1H), 4,36 (dd, J=12,1, 5,8, 1H), 2,92-3,00 (m, 1H), 2,32 (dd, J=14,0, 5,8, 1H); [M+H]+ m/z 493.
[00148] Etapa 2) Preparação de 5-Amino-3-(3’-deoxi-β -D-ribofuranosil)- 3H-tiazol[4,5-d]pirimidina-2-ona (13)
Figure img0026
[00149] A uma mistura heterogênea de dibenzoato 12 (46,3 g, 94,0 mmol) e MeOH anidro (1,0 L) foi adicionado K2CO3 (2,59 g, 18,8 mmol) à temperatura ambiente. A mistura se tornou homogênea dentro de 30 minutos e então heterogênea de novo após 3 h. Mais MeOH (100 mL) foi adicionado para aumentar a fluidez, e a mistura de reação foi agitada por um total de 24 h. A suspensão foi tratada com HOAc (2,26 mL, 39,5 mmol) e, então, concentrada a 45°C, quando, então, foi resfriada, depois triturada com EtOH (200 mL) e eeter (1800 mL) por 1 h. O material sólido foi filtrado, lavado com éter (3 x 250 mL), secado a ar e então lavado com água (2 x 250 mL), produzindo 19,47 g (78%) de diol 13 na forma de sólido branco que foi secado in vaccuo e recristalizado a partir da água: 1H NMR (DMSO-d6) δ 8,31 (s, 1H), 6,82 (s, 2H), 5,82 (d, 1H), 5,41 (d, 1H), 4,79-4,83 (m, 1H), 4,65 (t, J=5,8, 1H), 4,13-4,20 (m, 1H), 3,40- 3,49 (m, 2H), 2,31 (ddd, J=16,0, 9,4, 7,0, 1H), 1,81 (ddd, J=12,5, 5,8, 2,3, 1H); [M+H]+ m/z 285. Análise calculada para C10H12N4O4S: C, 42,25; H, 4,25; N, 19,71; S, 11.28. Encontrado: C, 42,36; H, 4,32; N, 19,72; S, 11,23.
[00150] Etapa 3) Preparação de 5-Amino-3-(2’,5’-di-O-acetil-3’-deoxi-β- D-ribofuranosil)-3H-tiazol[4,5-d]pirimidina-2-ona (14)
Figure img0027
[00151] A uma suspensão de diol 13 (8,00 g, 28,1 mmol), Et3N (11,8 mL, 84,4 mmol), e DMAP (344 mg, 2.81 mmol) em MeCN anidro (190 mL) a 0°C foi adicionado AC2O (5,44 mL, 57,7 mmol) em forma de gotas. A mistura resultante, que se tornou homogênea dentro de 1,5 h, foi lentamente aquecida até à temperatura ambiente e agitada por 18 h, quando, então, foi concentrada num resíduo que foi submetido à cromatografia flash (SiO2, EtOAc-DCM 0-100%) para produzir 8,34 g (80%) de diacetato 14 como uma espuma sólida branca que pode ser purificada ainda mais através de trituração com éter-hexanos: 1H (400 MHz, DMSO-d6) δ 8,34 (s, 1H), 6,91 (s, 2H), 5,90 (d, J=1,9, 1H), 5,65 (d, J=7,4, 1H), 4,33-4,39 (m, 1H), 4,25 (dd, J=12,1, 3,1, 1H), 4,01 (dd,J=11,7, 6,6, 1H), 2,65- 2,73 (m, 1H), 2,06 (dd, J=13,6, 6,2, 1H), 2,05 (s, 3H), 1,98 (s, 3H); [M+H]+ m/z 369. Análise calculada para C14H16N4O6S: C, 45,65; H, 4,38; N, 15,21; S, 8,70. Encontrado: C, 45,69; H, 4,52; N, 15,02; S, 8,64.
[00152] Alternativamente, o diacetato 14 pode ser preparado a partir do heterociclo 1 e deoxiribo-furanose 11b [pode ser preparado pelo método de Valdivia e colaboradores, Tetrahedron Lett. 2005, 46, 659-663] de uma maneira similar à Etapa 1 acima e com uma produção de 63%.
[00153] Etapa 4) Preparação de 5-Amino-3-(2’-O-acetil-3’-deoxi-β-D- ribofuranosil)-3H-tiazol[4,5-d]pirimidina-2-ona (15)
Figure img0028
[00154] A uma suspensão em agitação lenta de diacetato 14 (5,08 g, 13,8 mmol) e resina acrílica de lipase de Candida Arctica (2,50 g) [comprada da Sigma] em acetona (50 mL) foi adicionado tampão fosfato 50 mM pH 7 (250 mL) à temperatura ambiente. A mistura resultante for agitada lentamente por 18 h, quando, então, foi filtrada, concentrada e extraída com EtOAc (4 x 250 mL). As fases orgânicas combinadas foram secadas em Na2SO4, e submetidas à cromatografia flash (SiO2, EPA-DCM 0-15%) para produzir 4,11 g (91%) do composto título 15 na forma de sólido branco que pode ser purificado ainda mais por trituração com éter- hexanos: 1H (400 MHz, DMSO-d6) δ 8,33 (s, 1H), 6,87 (s, 2H), 5,88 (d, J=2,3, 1H), 5,66 (d, J=7,8, 1H), 4,76 (t, J=5,8, 1H), 4,11- 4,18 (m, 1H), 3,43-3,53 (m, 2H), 2,50-2,57 (m, 1H), 2,05 (s, 3H), 1,98 (dd, J=13,6, 5,8, 1H); [M+H]+ m/z 327. An'laise calculada para C12H14N4O5S: C, 44,17; H, 4,32; N, 17,17; S, 9,83. Encontrado: C, 44,12; H, 4,45; N, 16,88; S, 9,69.Exemplo 4 5-Amlno-3-(2’-O-acetll-5 ‘O-berzoi--3’dleox--β-D- ribofuranosil)-3H- tiazol[4,5-d]pirimidina-2-ona (16)
Figure img0029
[00155] A uma mistura heterogênea de heterociclo 1 (106 mg, 0,633 mmol) e deoxiribofuranose 11c [comprada de Berry & Associates, Inc., Dexter, MI] (183 mg, 0,57 mmol) em MeCN anidro (8 mL) foi adicionado BSA (464 μL, 1,89 mmol) à temperatura ambiente. A mistura resultante foi imersa num banho de óleo a 60°C e agitada por 4 h. A mistura foi concentrada por evaporação rotativa e particionada entre EtOAc (100 mL) e NaHCO3 saturado (50 mL). A fase orgânica foi secada em Na2SO4 e então concentrada. O material bruto foi triturado com Et2O-EtOAc para produzir 132 mg (54%) de um sólido quase branco que foi submetido à HPLC (MeCN-H2O) para fornecer uma amostra analítica: 1H (400 MHz, DMSO-d6) δ 8,33 (s, 1H), 7,91-7,94 (m, 2 H), 7,60-7,65 (m, 1H), 7,47-7,50 (m, 2H), 6,94 (s, 2H), 5,93 (d, J=1,8, 1H), 5,72 (dd, J=5,9, 1,5, 1H), 4,504,53 (m, 2H), 4,31 (q, J=7,0, 1H), 2,80- 2,88 (m, 1H), 2,14 (dd, J=13,2, 5,1, 1H), 2,07 (s, 3H); [M+H]+ m/z 431. Exemplo 5 5-Amino-3-benzil-3H-tiazol[4,5-d]pirimidina-2-ona (18)
Figure img0030
[00156] A POCI3 (8,09 mL, 86,8 mmol) a 0°C foi adicionado consecutivamente 3-benzil-tiazolidina-2,4-diona sólida [preparada de acordo com o método de Lo e colaboradores. J. Org. Chem. 1957, 999-1001] e DMF. A mistura de reação foi agitada por 5 minutos e, então, transferida para um banho de óleo a 90°C, onde foi agitada por 3 h. A mistura escura foi despejada em gelo (100 g) e água (100 mL) e, então, extraída com EtOAc (3 x 100 mL). As fases orgânicas combinadas foram secadas em MgSO4 e então filtradas através de celite, concentradas, ressuspensas em DCM, filtradas através de um pequeno filtro de SiO2 e finalmente concentradas num óleo escuro que foi usado sem purificação adicional.
[00157] Foi adicionado cloreto de guanidina (8,87 g, 92,8 mmol) em forma sólida a NaOMe-MeOH 25% (18 mL, 79,6 mmol) em MeOH (48 mL) a -5°C. A mistura resultante foi agitada por 5 minutos e, então, tratada com cloraldeído bruto [do texto acima] em forma de solução em MeOH (20 mL). A mistura de reação foi colocada num banho de óleo a 90°C, concentrada por destilação do MeOH por mais de 2 h, e então aquecida por mais 30 min. O resíduo foi ressuspenso em EtOAc (200 mL) e particionado com HCl 1 N (100 mL). A fase aquosa foi tratada com NaHCO3 sólido e particionada com EtOAc (3 x 100 mL). As fases orgânicas combinadas da extração alcalina foram secadas em Na2SO4 e então concentradas num resíduo que foi submetido à cromatografia (SiO2, EA-DCM 50-70%), produzindo 1,4 g (19%) do composto título 18 na forma de sólido branco: 1H (400 MHz, DMSO-d6) δ 8,32 (s, 1H), 7,24- 7,34 (m, 5H), 6,83 (s, 2H), 5,01 (s, 2H); [M+H]+ m/z 259. Exemplo 6 5-Amino-3-(3,3’-C,O-dimetil-[β-D-riboJuranosil)-3H- tiazol[4,5-d]pirimidina-2- um (23)
Figure img0031
[00158] Etapa 1) Preparação de l,2-O-Isopropilideno-3-metil-3-O-metil-5-0-tritil-a-D-riboJu.ranose (20)
Figure img0032
[00159] A uma mistura de álcool terciário 19 (716 mg, 1,60 mmol) [preparado de acorco com o método de Just e colaboradores, Tetrahedron Lett. 2000, 41, 9223-9227] em dioxana anidra (6 mL) foi adicionado um excesso de KH (30% de dispersão em óleo mineral) à temperatura ambiente. A mistura resultante foi agitada por 1 h e depois tratada com MeI (2 mL, 32 mmol), produzindo muito precipitado. DMF (2 mL) foi adicionado para manter a mistura de reação fluida o suficiente para agitação por mais de 72 h. A mistura foi diluída com EtOAc (100 mL) e particionada com NaHCO3 aquoso saturado (50 mL). A fase orgânica foi secada em Na2SO4, concentrada e sumetida à cromatografia flash (SiO2, EtOAc-hexanos 10-60%), produzindo 640 mg de metil éter 20 na forma de sólido branco: 1H (400 MHz, DMSO-d6) δ 7,22-7,35 (m, 15 H), 5,72 (d, J=2,9, 1H), 4,30 (d, J=2.9, 1H), 4,07 (dd, J=7,7, 2,6, 1H), 3,14 (s, 3H), 2,92-3,05 (m, 2H), 1,51 (s, 3H), 1,28 (s, 3H), 0,82 (s, 3H).
[00160] Etapa 2) Preparação de l,2,5-tetra-O-Acetil-3,3-C,O-dimetil-β-D- ribofuranose (21)
Figure img0033
[00161] A uma solução de HOAc (50,0 mL) e Ac2O (3,83 mL, 40,6 mmol) foi adicionada furanose 20 (3,62 g, 8,11 mmol). A essa solução sem cor foi adicionado H2SO4 1 M em HOAc (0,41 mL, 0,41 mmol),resultando numa soluação de intensa coloração amarela. A solução foi agitada à temperatura ambiente por 16 hr, e então concentrada por meio de evaporação rotativa. O HOAc em excesso foi azeotropado por meio de vários volumes de tolueno. O resíduo foi dissolvido em DCM (100 mL) e lavado com NaHCO3 saturado (30 mL). A camada orgânica foi secada em Na2SO4, decantada e concentrada numa mistura oleosa heterogênea. Essa mistura foi submetida à cromatografia flash (SiO2, EtOAc-hexanos 5-35%) produzindo 0,78 g (33%) de triacetato 21 na forma de óleo amarelo claro: 1H (400 MHz, DMSO-d6) δ 5,91 (d, J=2,0, 1H), 5,07 (d, J=2,4, 1H), 4,29 (dd, J=3,2, 12,0, 1H), 4,15 (dd, J=3,2, 7,2, 1H), 3,96 (dd, J=6,8, 12,0, 1H), 3,17 (s, 3H), 2,10 (s, 3H), 2,04 (s, 6H), 1,33 (s, 3H).
[00162] Etapa 3) Preparação de 5-Amino-3-(2’,5’-di-O-acetil-3’,3’-C,O- dimetil-β-D-ribofuranosil)-3H-tiazol[4,5-d]pirimidina-2-ona (22)
Figure img0034
[00163] A uma mistura de heterociclo 1 em MeCN anidro (5,0 mL) fo adicionado BSA (0,52 mL, 2,11 mmol) em gotas à temperatura ambiente. A mistura resultante foi imersa num banho de óleo a 40°C, e agitado por 90 min, quando então se tornou homogêneo. Furanose 21 (0,20 g, 0.73 mmol) foi adicionada e seguida de TMSOTf (158.4 μL, 0.88 mmol). A mistura de reação foi, então, imersa num banho de óleo a 80°C e aquecida por 2 hr. A reação foi resfriada até à temperatura ambiente e particionada entre tampão fosfato 1 M pH 7 (15 mL) e EtOAc (30 mL). A emulsão resultante foi filtrada por um filtro de celite produzindo duas camadas distintas. A camada orgânica foi separada e secada em Na2SO4, filtrada e concentrada sob vácuo até um resíduo escuro laranja-marrom. Esse resíduo foi submetido à purificação por cromatografia flash (SiO2, EtOAc- hexanos 5-50%) produzindo 0,3Og (59%) de nucleosídeo 22 um sólido amarelo-claro finamente dividido: 1H (400 MHz, DMSO-d6) δ 8,34 (s, 1H), 6,90 (br s, 2H), 6,11 (dd, J=8,0, 27,6, 2H), 4,3-4,17 (m, 3H), 2,75 (s, 3H), 2,02 (s, 3H), 2,01 (s, 3H), 1,35 (s, 3H); [M+H]+ m/z 413.
[00164] Etapa 4) Preparação de 5-Ammo-3-(3’,3’-C,O-dimetil-β-D-ribofuranosil)-3H-tiazol[4, 5-d]pirimidina-2-ona (23)
Figure img0035
[00165] O nucleosídeo 22 (230 mg, 0,56 mmol) foi dissolvido em 5,6 mL de MeOH. K2CO3 sólido (15.4 mg, 0,11 mmol) foi adicionado e a reação agitada à temperatura ambiente por 16 h. HOAc (16.0 μl, 0,28mmol) foi adicionado e a reação agitada por 30 min, e então concentrada até secar sob vácuo. Os sólidos amarelos residuais foram triturados com Et2O (3 x 10 mL), cuidadosamente decantando os filtrados por meio de uma pipeta. O material sólido foi, então, lavado com H2O (3 x 5mL), rinsado com Et2O (2 x 5 mL) e secado com vácuo (house vacuum) por 24 h para obter 76,4 mg (42%) de um sólido branco finamente dividido: 1H (400 MHz, DMSO- d6) δ 8,35 (s, 1H), 6,83 (br s, 2H), 5,93 (d, J=8,58, 1H), 5,24 (d, J=7,02, 1H), 4,95 (t, J=7,4, 1H), 4,57 (t, J=5,46, 1H), 3,95 (t, J=5,07, 1H), 3,46-3,58 (m, 2H), 3,26 (s, 3H), 1,29 (s, 3H); [M+H]+ m/z 329.Exemplo 7 5-Amino-3-(5’-O-Acetil-2’-O-[2”-O-acetilpropil]-3-metil-β-O-riboJuranosil)-3H- tiazol[4,5-d]pirimidina-2-ona (27)
Figure img0036
[00166] Etapa 1) Preparação de l,2-0-Isopropilidma-3-metíl-5-0-tritil-a-D-ribofuranose (25)
Figure img0037
[00167] A uma solução de 24 (2,4Og, 5,60 mmol) [preparada de acordo com Bera e colaboradores, Helvetica Chimica Acta 2000, 83(7), 13981407] dissolvida em EtOAc (50 mL), sob uma cobertura de N2, foi adicionado Pd/C 5% (240 mg). O frasco foi carregado com H2 a 1 atm, e agitado à temperatura ambiente por 72 h. A mistura de reação foi filtrada através de celite, e concentrada sob vácuo até um óleo claro e incolor. Purificação por cromatografia flash (SiO2, EtOAc-hexano s 0-40%) produziu 1,88 g de 25 (78%) como mistura de isômeros 6:1 (α/β): 1H (400 MHz, DMSO-d6) δ 7,22-7,38 (m, 15H), 7,63 (d, J=3,2, 1H), 4,53 (t, J=4,0, 1H), 3,67 (dq, J=2,8, 1,6, 1H), 3,18 (dd, J=3,2, 10,4, 1H), 2,99 (dd, J=5,2, 10,8, 1H), 1,89-1,98 (m, 1H), 1,38 (s, 3H), 1,24 (s, 3H), 0,81 (d, J=6,8, 3H).
[00168] Etapa 2) Preparação de l,5-di-O-Acetil-2-O-(2’-O-acetilpropil)-3- metil-β-D-ribofuranose (26)
Figure img0038
[00169] De uma maneira similar à da Etapa 3 do Exemplo 6, 25 foi convertido em 26 com uma produção de 19%. O resíduo bruto foi sumetido à cromatografia flash (SiO2, EtOAc-hexano s 2-30%), produzindo uma mistura de anômeros 5: 1 (β/α) (contaminada com trifenilmetano) por 1H (400 MHz, DMSO-d6) que foi usada sem purificação adicional na próxima etapa: 1H (400 MHz, DMSO-d6) δ 6,07 (d, J=2,8, 1H), 5,02 (ddd, J=6,8, 6,8, 2,8, 1H), 4,25 (dd, J=12,0, 3,2, 1H), 4,06-4,21 (m, 2H), 2,14- 2,23 (m, 1H), 2,03 (s, 3H), 2,00 (s, 3H), 1,99 (s, 3H), 1,41 (s, 3H), 1,39 (s, 3H), 0,91 (d, J=6,8, 3H).
[00170] Etapa 3) Preparação de 5-Amino-3-(5’-O-Acetil-2’-O-[2”-O- acetilpropil]-3-methl- β-D-ribofuranosil)-3H-tiazol[4,5-d]pirimidina-2-ona (27)
Figure img0039
[00171] A uma mistura de heterociclo 1 em MeCN anidro (5,0 mL) à temperatura ambiente foi adicionado BSA (0,52 mL, 2,11 mmol) em gotas. A mistura resultante foi agitada por 30 min, e então furanose 26 (0,20 g, 0,73 mmol) foi adicionada seguida de TMSOTf (158,4 μL, 0,88 mmol). A mistura de reação foi imersa num banho de óleo a 60°C, quando então se tornou uma solução homogênea. A agitação continuou por 2,5 h. A mistura de reação foi resfriada até à temperatura ambiente e, então, particionada entre tampão fosfato 1 M pH 7 e EtOAc. A mistura foi filtrada através de um filtro de celite e as camadas distintas foram separadas. A fase orgânica foi secada em Na2SO4, filtrada, concentrada e submetida à cromatografia flash (SiO2, EtOAc-hexano s 5-50%), produzindo 30,0 mg do composto título 27 na forma de sólido branco: 1H (400 MHz, DMSO- d6) δ 8,36 (s, 1H), 6,90 (s, 2H), 6,09 (d, J=7,2, 1H), 5,16 (t, J=7,2, 1H), 4,88 (dt, J=6,4, 3,2 1H), 4,20 (dd, J=3,2, 12,0, 1H), 4,08 (dd, J=6,4,12,0, 1H), 2,28 (dq, J=6,8, 14, 1H), 1,97 (s, 3H), 1,87 (s, 3H), 1,54 (s, 3H), 1,41 (s, 3H), 0,86 (d, J=6,8, 3H); [M+H]+ m/z 441. Exemplo 8 5-Amino-3-(3’-metil-]-D-ribofuransil)-3H- tiazol[4, 5-d]pirimidina-2-ona (30)
Figure img0040
[00172] Etapa 1) Preparação de 5-Amino-3-(3’-O-acetil-2’,5’-di-O- benzoil-3’-metil-β-D-riboJuranosil)-3H-tiazol[4,5-d]pirimidina-2-ona (29)
Figure img0041
[00173] 5-Amino-3H-tiazol[4,5-d]pirimidina-2-ona (123 mg, 0,733 mmol), 3’-C-metil-ribofuranose 28 [preparada de acordo com o método de Wang e colaboradores, J. Med. Chem. 2000, 43, 3704-3713] (302 mg, 0,66 mmol), BSA (447 mg, 2,2 mmol) e MeCN (8 mL) foram misturados vigorosamente por 30 minutos até uma solução homogênea ser obtida. A reação foi, então, carregada com TMSOTf (0,186 mL, 1,1 mmol) e colocada num banho de óleo pré-aquecido a 65°C. Após 3 h, foi resfriada até à temperatura ambiente e o solvente removido por evaporação rotativa. O sólido resultante foi removido em EtOAc (200 mL) e extraído por NaHCO3 aquoso saturado (2 x 100 mL). A fase orgânica foi secada com Na2SO4 e concentrada. O produto bruto foi submetido à cromatografia flash (SiO2, EtOAc-CHCl3 0 a 40%), produzindo 365 mg (88%) de um sólido marrom-claro: 1H (400 MHz, DMSO-d6) δ 8,38 (s, 1H), 7,92 (d, J=6,4, 4H), 7,69 (m, 2H), 7,53 (m, 4H), 6,93 (br s, 2H), 6,90 (s, 1H), 6,43 (d, J=7,2, 1H), 6,10 (t, J=9,2, 1H), 4,80 (br s, 1H), 4,59 (br, s, 1H), 2,09 (s, 3H), 1,97 (s, 3H); [M+H]+ m/z 565.
[00174] Etapa 2) Preparação de 5-Ammo-3-(3’-metil-β-D-ribofuransil)- 3H-tiazol[4,5-d]pirimidina-2-ona (30)
Figure img0042
[00175] 5-Amino-3-(2’,5’-di-O-benzoil-3’-O-acetyi-3’-C-metil-β-D-ribofuransil)- 3H-tiazol[4,5-d]pirimidina-2-ona (365 mg, 0,647 mmol) foi dissolvida em MeOH (10 mL). K2CO3 (17,9 mg, 0,129 mmol) foi adicionado e areação agitada por 16 h à temperatura ambiente. Ácido acético (15,5 mg, 0,258 mmol) foi adicionado, e a reação foi concentrada por meio de evaporação rotativa. O produto bruto foi, então, submetido à purificação por HPLC (MeCN-H2O), produzindo 135 mg (66%) de um material sólido: 1H (400 MHz, DMSO-d6) δ 8,35 (s, 1H), 6,82 (br s, 2H), 5,91 (d, J=8,0, 1H), 5,38 (d, J=6,4, 1H), 4,81 (t, J=6,0, 1H), 4,68 (s, 1H), 4,51 (t, J=5,6, 1H), 3,78 (t, J=5,6, 1H), 3.48-3,53 (m, 2H), 1.21 (s, 3H); [M+H]+ m/z 315. Análise calculada para C11H14N4O5S.0,5 H2O: C, 40,86; H, 4,68; N, 17,33; S, 9,92. Encontrado: C, 40,78; H, 4,90; N, 16,94; S, 9,87. Exemplo 9 Preparação de 5-ammo-2,3-dihidro-2-tioxo-3-β-D-ribofuranosil-tiazol[4,5-d]pirimidina-7(6H)-ona (33)
Figure img0043
[00176] Etapa 1) Preparação de 5-amino-2,3-dihidro-2-tioxo-3-(2’,3’,5’-tri-O-acetil-β-D-ribofuranosil)tiazol[4,5-d]pirimidma- 7(6H)-ona (32)
Figure img0044
[00177] O heterociclo 31 [preparado de acordo com o método de Robins e colaboradores, J. Med. Chem. 1990, 33, 407-415] (150 mg, 0,75 mmol), TAR (214 mg, 0,675 mmol), MeCN (10 mL) e BSA (0,55 mL, 2.25 mmol) foram combinados e aquecidos por 1 h a 60°C. A reação foi, então, carregada com TMSOTf (250 mg, 1,13 mmol) e agitada por 16 h a 60°C. A mistura foi concentrada por meio de evaporação rotativa e o sólido bruto foi dissolvido em EtOAc (20 mL). Essa fase orgânica foi, então, extraída com NaHCO3 aquoso saturado (2 x 10 mL), e concentrada até secar por evaporação rotativa. A trituração do resíduo com Et2O (10 mL) produziu 200 mg (80%) de um material sólido que foi mais purificado ainda por meio de HPLC (MeCN-H2O) para gerar uma amostra analiticamente pura: 1H (400 MHz, DMSO-d6) δ 11,54 (s, 1 H), 7,04 (br s, 2H), 6,59 (m, 1H), 6,10 (m, 1H), 5,70 (t, J=12, 1H), 4,42 (dd, J=12,0, 3,2, 1H), 4,27 (m, 1H), 4,18 (m, 1H), 2,08 (s, 3H), 2,05 (s, 3H), 1,99 (s, 3H); [M+H]+ m/z 459. Análise calculada para C16H18N4O8S2: C, 41,92; H, 3,96; N, 12,22; S, 13,99. Encontrado: C, 41,78; H, 3,99; N, 12,02; S, 13,72.
[00178] Etapa 2) Preparação de 5-ammo-2,3-dihidro-2-tioxo-3-β-D- ribofuranosil-tiazol[4,5-d]pirimidina-7(6H)-ona (33)
Figure img0045
[00179] O nucleosídeo triéster 32 (100 mg, 0,21 mmol) e K2CO3 (42,7 mg, 0,31 mmol) foram dissolvidos em MeOH (5 mL) e agitados por 16 h à temperatura ambiente. A essa mistura foi adicionado HOAc (37 mg, 0,62 mmol) e o solvente removido por meio de evaporação rotativa. O resíduo foi, então, submetido à purificação por HPLC (MeCN-H2O) produzindo 47 mg (66%) de um sólido: 1H (400 MHz, DMSO-d6) δ 11,66 (s, 1H), 6,91 (br s, 2H), 6,47 (s, 1H), 5,31 (d, J=5,2, 1H), 4,94 (s, 1H), 4,78 (s, 2H), 4,27 (d, J=8,0, 1H), 3,78 (m, 1H), 3,69 (m, 1H), 3,52 (m, 1H); [M+H]+ m/z 333. Análise calculada para C10H12N4O5S2.0,5 TFA.0,75 H2O.0,25 MeCN: C, 33,43; H, 3,60; N, 14,41. Encontrado: C, 33,11; H, 3.73; N, 14,80.Exemplo 10 5-ammo-2,3-dihidro-2-tioxo-3-(2’,3’,5’-tri-0-Ocetil-β-D-xilofuranosil)tiazol[4,5-d]pirimidina-7-(6H)-ona(34)
Figure img0046
[00180] Preparação de 5-amino-2,3-dihidro-2-tioxo-3-(2’,3’,5’)-tri-O-acetil-β-D- xilofuranosil)tiazol[4,5-d]pirimidina- 7-(6H)-ona (34)
Figure img0047
[00181] O heterociclo 31 (265,3 mg, 1,33 mmol),tetraacetilxilofuranose (380 mg, 1,19 mmol), BSA (1,26 mL, 5,32 mmol) e MeCN (10 ml) são aquecidos a 60°C por 30 minutos. Então, a reação foi carregada com TMSOTf (0,36 mL, 2,0 mmol). Após 4 h, a reação foi preparada removendo-se o solvente por meio de vácuo rotativo e ressuspendendo o sólido bruto em acetato de etila (15 mL). Essa fase orgânica foi, então, extraída com bicarbonato de sódio saturado (2 x 1OmL). A fase orgânica foi concentrada e o sólido bruto foi triturado em EtOAc-hexano s 1:1. O sólido foi coletado e submetido à purificação por HPLC (MeCN-H2O), produzindo 40 mg (15%): 1H (400 MHz, DMSO-d6) δ 11,45 (s, 1H), 6,90 (br s, 2H), 6,49-6,58 (m, 1H), 6,35-6,49 (m, 1H), 5,58 (d, J=5,6, 1H), 4,55 (s, 1H), 4,31 (m, 2H), 2,11 (m, 3H), 1,99 (m, 3H), 1,98 (m, 3H); [M+H]+ m/z 459. Análise calculada para C16H18N4O8S2: C, 41,92; H, 3,96; N, 12,22; S, 13,99. Encontrado: C, 42,14; H, 3,99; N, 12,11; S, 14,01.Exemplo 11 5-Amino-3-β-D-ribofuranosil-3H- tiazol-[4,5-d]pirimidina-2-tiona (39)
Figure img0048
[00182] Etapa 1) Preparação de 5-Amino-3H-tiazol[4,5-d]pirimidina-2- tiona (37)
Figure img0049
[00183] 5-Bromo-pirimidina-2,4-diamina (2,0 g, 10,58 mmol) [preparado de uma maneira similar a English e colaboradores, J. Am. Chem. Soc. 1946, 68, 453-458] e o sal de potássio de ácido O-etilxântico (3,39 g, 21,16 mmol) foram aquecidos em DMF (25 mL) a 140°C. Após 5 h, a reação foi resfriada até a temperatura ambiente e 25 mL de água foram adicionados. O pH foi, então, ajustado para 5.0 usando HCl 1 N. Um precipitado vermelho se formou e foi coletado por filtração, produzindo 900 mg (30%) de um sólido: 1H (400 MHz, DMSO-d6) δ 13,85 (s, 1H), 8,33 (br s, 1H), 6,90 (s 2H).
[00184] Etapa 2) Preparação de 5-Ammo-3-(2’,3’,5’-tri-O-acetil-β-D-ribofuranosil)-3H-tiazol[4,5-d]pirimidina-2-tiona (38)
Figure img0050
[00185] 5-Amino-3H-tiazol[4,5-d]pirimidina-2-tiona (250 mg, 1,36 mmol), TAR (389 mg, 1,22 mmol) e BSA (1,0 mL, 4,08 mmol) foram aquecidos a 60°C em acetontrila (10 mL). Após 30 minutos, a reação foi carregada com TMSOTf (0,37 mL, 2,04 mmol) e se permitiu seu progresso por 16 h. O solvente foi, então, removido por meio de evaporação rotativa, e o produto bruto redissolvido em EtOAc (15 mL). A fase orgânica foi extraída com NaHCO3 aquoso concentrado (2 x 1OmL). A fase orgânica foi, então, concentrada de novo e submetida à cromatografia flash (SiO2, MeOH-EtOAc 5%), produzindo 301 mg (57%) de um sólido branco: 1H (400 MHz, DMSO-d6) δ 8,49 (s, 1H), 7,08 (br s, 2H), 6,65 (s 1H), 6,12 (m, 1H), 5,79 (t, J=8,0, 1H), 4,43 (dd, J=12,0, 3,6, 1H), 4,28-4,34 (m, 1H), 4,17 (dd, J=11,6, 6,8, 1H), 2,09 (s, 3H), 2,05 (s, 3H), 1,97 (s, 3H); [M+H]+ m/z 443.
[00186] Etapa 3) Preparação de 5-Amino-3-β-D-ri.boJuranosil-3H-tiazol- [4,5-d]pirimidima-2-tioma (39)
Figure img0051
[00187] 5-Ammo-3-(2’,3’,5’-tri-O-acetyi-βD-ribofuranosil)-3 H-tiazol[4,5-d]pirimidina-2-tiona (202 mg, 0,46 mmol) foi dissolvida em MeOH (5 mL), e K2CO3 (18,9 mg, 0,14 mmol) foi adicionado. Após 1 h, ácido acético (21 mg, 0,28 mmol) foi adicionado, e a reação foi concentrada por meio de evaporação rotativa. O sólido bruto foi, então, submetido à purificação por HPLC (MeCN-H2O), produzindo 108 mg (74%) de sólido branco: 1H (400 MHz, DMSO-d6) δ 8,45 (s, 1H), 6,96 (br s, 2H), 6,53 (d, J=4,4, 1H), 5,33 (d, J=6,0, 1H), 5,03 (m, 1H), 4,86 (d, J=6,4,1H), 4,67 (t, J=6,0, 1H), 4,33 (m, 1H), 3,79 (m, 1H), 3,70 (m, 1H), 3,53 (m, 1H). Análise calculada para C10H12N4O4S2.0,35 H2O: C, 37,22; H, 3,97; N, 17,36; S, 19,87. Encontrado: C, 37,64; H, 3,87; N, 17,02; S, 19,39.Exemplo 12 5-Amino-3-β-D-Xlofuranosil-3H-tiazol-[4,5-d]pirimidina-2-tiona(41)
Figure img0052
[00188] Etapa l) Preparação de 5-Ammo-3-(2’,3’,5-tn-O-acetilβ-D- xilofuranosil)-3H- tiazol[4, 5-d]pirimidina-2 -tiona (40)
Figure img0053
[00189] 5-Amino-3H-tiazol[4,5-d]pirimidina-2-tiona (237 mg, 1,28 mmol), tetra-acetilxilose (370 mg, 1,16 mmol) e BSA (1,25 mL, 5,12 mmol) foram aquecidos em MeCN (10 mL) a 60°C por 30 min. A essa mistura foi adiconado TMSOTf (347 μL, 1,92 mmol), e a mistura de reação foi agitada a 60°C por 16 h, quando, então, o solvente foi removido por evaporação rotativa e o sólido bruto foi redissolvido em EtOAc (15 mL). Essa fase orgânica foi, então, extraída com NaHCO3 concentrado (2 x 10 mL), e então concentrado num resíduo sólido que foi submetido à cromatografia flash (EtOAc-CHCl3 0-100%), produzindo 67 mg (13%) de um sólido marrom-claro: 1H (400 MHz, DMSO-d6) δ 8,51 (s, 1H), 6,90 (br s, 2H), 6,67 (d, J=4,0, 1H), 6,49 (t, J=2,0, 1H), 5,62 (m, 1H), 5,63 (m, 1H), 4,37 (m, 1H), 4,21 (br m, 1H), 2,18 (s, 3H), 1,97 (s, 3H), 1.94 (s, 3H); [M+H]+ m/z 443.
[00190] Etapa 2) Preparação de 5-Ammo-3-β-D-xilofuranosil-3H- tiazol-[4,5-d]pirimidina-2-tiona (41)
Figure img0054
[00191] 5-Ammo-2,3-dihidro-2-tioxo-3-(2,3,5-tri-O-acetil-β-D-xilofurano-sil)tiazol[4,5-d]pirimidina-7-tiona (65 mg, 0,14 mmol) é dissolvido em MeOH (5 mL). A isso é adicionado KaCO3 (19 mg, 0,137 mmol), e a mistura resultante foi agitada por 3 h, quando, então, foi interrompida com HOAc (140 μL, 2,4 mmol), e o solvente removido por evaporação rotativa. O produto bruto foi submetido à purificação por HPLC (MeCN-H2O), produzindo 30 mg (62%) de sólido branco: 1H (400 MHz, DMSO-d6) δ 8,50 (s, 1H), 6,90 (br s, 2H), 6,45 (d, J=5,2, 1H), 5,67 (d, J=8,0, 1H), 5,49 (d, J=8,4, 1H), 5,03 (m, 1H), 4,49 (t, J=5,2, 1H), 4,02 (m, 2H), 3,72 (m, 2H). Análise calculada para C10H12N4O4S2.0,4 H2O: C, 37,12; H, 3,99; N, 17,32; S, 19,82. Encontrado: C, 37,53; H, 3,80; N, 17,04; S, 19,42.Exemplo 13 5-Amino- 7-etoxi-3-(2’, 5’-di-O-acetil-3 ‘-deox—-β-D-ribofuranosil)-3H,6H-tiazol[4,5-d]pirimidina-2-ona(43)
Figure img0055
[00192] Etapa 1) Preparação de 5-Amino-7-hidroxi-3-(2’,5’-di-O-acetil-3’-deoxi-β-D-ribofuranosil)-3H,6H-tiazol[4,5-d]pirimidina-2-ona (42)
Figure img0056
[00193] A uma mistura de heterociclo 6 (4,60 g, 25,00 mmol) em MeCN anidro (83,0 mL) foi adicionado BSA (15,28 mL, 62,49 mmol) em gotas. A reação foi, então, imersa num banho de ólao a 40°C e agitada por 90 min, e 1,2,5-tri-O-acetil-β-D-ibofuranose (5,42 g, 20,80 mmol) foi adicionada seguida de TMSOTf (5,65 mL, 31,24 mmol). A mistura espessa resultante foi imersa num banho de óleo a 80°C, quando então a mistura se tornou uma solução homogênea após 15 min. A reação foi agitada por 2 h a 80°C, resfriada até à temperatura ambiente, e então particionada entre tampão fosfato 1 M pH 7 (50 mL) e EtOAc (100 mL). A emulsão resultante foi filtrada por um filtro de celite, produzindo duas camadas distintas que foram separadas. A camada orgânica foi secada em Na2SO4, filtrada, e concentrada sob vácuo num resíduo. Esse resíduo foi submetido à cromatografia flash (SiO2, MeOH-DCM 0-6%), produzindo 3,41 g (43%) de nucleosídeo 42 na forma de sólido amarelo claro finamente dividido: 1H (400 MHz, DMSO-d6) δ 11,22 (s, 1H), 6,95 (br s, 2H), 5,79 (d, J=2.0, 1H), 5.59 (d, J=7,2, 1H), 4,20- 4,34 (m, 1H), 4,22 (dd, J=3,2, 12,0, 1H), 3,99 (dd, J=6,4, 11,6, 1H), 2,57-2,67(m, 1H), 2,05 (s, 3H), 1,99 (s, 3H), 1,97-2,03 (m, 1H); [M+H]+ m/z 385. Análise calculada para C14H16N4O7S: C, 43,75; H, 4,20; N, 14,58; S, 8,34. Encontrado: C, 43,64; H, 4,31; N, 14,37; S, 8,19.
[00194] Etapa 1) Preparação de 5-Amino-7-etoxi-3-(2’,5’-di-O-acetil-3’- deoxi-β-D-ribofuranosil)-3H,6H-tiazol[4,5-d]pirimidina-2-ona (43)
Figure img0057
[00195] A uma solução de 42 (99 mg, 0,26 mmol) dissolvida em THF anidro (5,5 mL) foi adicionada a resina S-TPP PPh3 (0,36 g, 0,77 mmol, 2,15 mmol/g). A mistura foi resfriada a 0°C, e EtOH (30,1 μL, 0,52 mmol) foi adicionado seguido de DEAD (176,0 μL, 0,39 mmol). A mistura de reação foi removida do banho de gelo e aquecida à, quando, então, foi agitada por 16 h. A mistura foi concentrada sob vácuo num resíduo que foi submetido a vários ciclos de purificação por cromatografia flash (SiO2, eluição com MeOH 2%/EtOAc in hexano s 0-40%), produzindo 0,22 mg de 43 (20%): 1H (400 MHz, DMSO-d6) δ 6,95 (br s, 2H), 5,87 (d, J=2,4, 1H), 5,64 (d, J=7,2, 1H), 4,39 (q, J=6,8, 2H), 4,32-4,4 (m,lH), 4,25 (dd, J=3,2, 11,6, 1H), 3,96-4,03 (m, 1H), 2,63-2,71 (m, 1H), 2,05 (s, 3H), 2,032,08 (m, 1H), 1,99 (s, 3H), 1,30 (t, J=6,8, 3H); [M+H]+ m/z 413. Exemplo 14 5-Amino-7-etoxi-3-(β-D-riboJuranosil)-2,3-dihidro-2-tioxo-tiazol[4,5-d]pirimidina-7(6H)-ona(45)
Figure img0058
[00196] Etapa 1) Preparação de 5-Amino-7-etoxi-3-(2’,3’,5’-tri-O-acetil-β-D-ribofuranosil)-2,3-dihidro-2-tioxo-tiazol[4,5-d]pirimidina-7(6H)-one (44)
Figure img0059
[00197] 5-Ammo-2,3-dihidro-2-tioxo-3-(2,3,5-tri-(9-acetil-β-D-ribofuranosil)tiazol[4,5-d]pirimidina-7(6H)-ona (250 mg, 0,54 mmol) e resina S-TPP Ph3P (753 mg, 1.62 mmol) foram suspensas em THF (15 mL) e resfriadas até 0°C. Álcool etílico (50 μL, 1,08 mmol) e DEAD (148 μL, 0,82 mmol) foram adicionados sequencialmente. Após 1 h, a mistura de reação foi aquecida até temperatura ambiente e agitada por 16 h. A mistura de reação foi, então, filtrada, concentrada e submetida à cromatografia flash (SiO2, EtOAc-CHCl3 15%), produzindo 200 mg (65%) de uma espuma branca: 1H (400 MHz, DMSO-d6) δ 6,91 (s, 1H), 6,47 (br s, 2H), 6,29 (m, 1H), 6,18 (s, 1H), 4,62-4,31 (m, 5H), 1,42 (t, J=4,2. 3H), 1,38 (s, 3H), 1,35 (s, 3H), 1,32 (s, 3H); [M+H]+ m/z 487.
[00198] Etapa 2) Preparação de 5-Ammo-7-etoxi-3-β-D-ribofuranosil- 2,3-dihidro-2-tioxo-tiazol[4,5-d]pirimidina-7(6H)-ona (45)
Figure img0060
[00199] 5-Amino-2,3-dihidro-2-tioxo-3-(2,3,5-tri-O-acetil-β-D-ribofuranosil)tiazol-[4,5-d]pirimidina-7(6H)-etil éter (180 mg, 0,37 mmol) e K2CO3 (12,8 mg, 0,01 mmol) foram suspensos em MeOH (5 mL). Após 1 h, ácido acético foi adicionado e o solvente removido por evaporação rotativa. O produto bruto foi, então, submetido à purificação por HPLC (MeCN-H2O), produzindo 105 mg (83%) de um sólido: 1H (400 MHz, DMSO-d6) δ 6,98 (s, 2H), 6,50 (d, J=4,8, 1H), 5,32 (d, i=5,2, 1H), 5,01 (s, 1H), 4,85 (d, J=5,6, 1H), 4,68 (t, J=5,6, 1H), 4,43 (dd, J=13,6, 6,8, 2H), 4,30 (m, 1H), 3,80 (m, 1H), 3,71 (m, 1H), 3,66 (m, 1H), 1,31 (t, J=6,8, 3H); [M+H]+ m/z 361.Preparação de 5-Amimo-3H-oxazolo[4,5-d]pirimidima-2-oma (50)
Figure img0061
[00200] 2,4-diamino-pirimidina-5-ol (500 mg, 3,97 mmol) [preparado de acordo com o método de Hull, J. Chem. Soc. 1956, 2033-2035] foi suspenso em DMF (10 mL). A essa mistura foi adicionado consecutivamente NaH (86,7 mg, 3.77 mmol) e CDI (707 mg, 4.36 mmol), e a mistura de reação foi aquecida com agitação vigorosa a 60°C por 3 h. A mistura foi resfriada até temperatura ambiente e, então, interrompida com água (25 mL). O solvente e a água foram removidos por evaporação rotativa, e o resíduo foi, então, triturado em água (5 mL). O sólido foi, então, coletado por filtração e secado, produzindo 230 mg (38%): 1H (400 MHz, DMSO-d6) δ 11,90 (br s, 1H), 7,72 (br s, 1H), 6,72 (s, 2H); Análise calculada para C5H4N4O2.0,2H2O: C, 38,56; H, 2,85; N, 35,98. Encontrado: C, 39,01; H, 2,71; N, 35,58; [M+H]+ m/z 153.
Figure img0062
[00201] A diaminohidroxipirimidina 46 foi reagida com NaH e CDI em DMF para produzir heterociclo 50 ou com NaH e TCDI em DMF para produzir heterociclo 47. Ambas as aminopirimidinas 47 e 50 podem ser independentemente submetidas a reações de ligação mediadas por BSA- TMSOTf com uma β-D-ribofuranose apropriadamente selecionada (na qual R1, R2 e R3 podem ser independentemente acetil ou benzoil) para gerar os nucleosídeos 48 e 51 respectivamente. A metanólise alcalina de 48 e 51 deve produzir os nucleosídeos desprotegidos 49 e 52 respectivamente.Esquema 1
Figure img0063
Exemplo 15 Preparação de 5-Amino-3-piridina-3-ilmetil-3H- tiazol[4,5-d]pirimidina-2-ona (54)
Figure img0064
[00202] Etapa 1: Preparação de 5-Amino-3-piridina-3-ilmetil-3H- tiazol[4,5-d]pirimidina-2-ona (54)
[00203] 5-Amino-3H-tiazol[4,5-d]pirimidina-2-ona (107 mg, 0,64 mmol) foi dissolvida em DMF (4 mL) à temperatura ambiente. Hidreto de sódio (30 mg, 1,32 mmol) foi adicionado e a mistura foi aquecida até 30°C. A agitação continuou por 0,5 h antes que hidrobrometo de 3-bromometil- piridina (179 mg, 0,71 mmol) fosse adicionado. A mistura foi, então, aquecida até 75°C e agitada por 4 h. Quando foi completada, permitiu-se que a reação resfriasse até temperatura ambiente e, então, fosse concentrada. Água (12 mL) foi adicionada. A mistura resultante foi diluída com H2O (12 mL) e extraída com acetato de etila (3 x 5 mL). As camadas orgânicas combinadas foram lavadas com salmoura, secadas em Na2SO4, filtradas e concentradas. O material bruto foi purificado por cromatografia em coluna (SiO2, EtOAc-CH2Cl2 20-50%) para gerar 90 mg (54%) de 54 na forma de sólido branco: 1H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ 8,59 (s, 1H), 8,48 (d, J=3,6, 1H), 8,32 (s, 1H), 7,71 (d, J=8,4, 1H), 7,36 (m, 1H), 6,86 (s, 2H), 5,04 (s, 2H); [M+H]+ 260,1.Exemplo 16 Preparação de 5-Amino-3-(6-cloro-piridina-3-ilmetil)-3H- tiazol[4,5-d]pirimidina-2-ona(55)
Figure img0065
[00204] Etapa 1: Preparação de 5-Amino-3-(6-cloro-piridina-3-ilmetil)- 3H-tiazol[4,5-d]pirimidina-2-ona (55)
[00205] De uma maneira similar ao Exemplo 15, Etapa 1, 111 mg do composto título 55 foram geradas com uma produção de 54% na forma de sólido laranja: 1H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δδ 8,42 (s, 1H), 8,30 (s, 1H), 7,77 (d, J=8,8, 1H), 7,47 (d, J=8,0, 1H), 6,85 (s, 2H), 5,11 (s, 2H); [M+H]+ 294,1.Exemplo 17 Preparação de (Z)-5-Amino-3-(4-cloro-2-buteno-1-il)-3H-tiazol[4,5-d]pirimidina-2-ona (56)
Figure img0066
[00206] Etapa 1: Preparação de (Z)-5-Amino-3-(4-cloro-2-buteno-1 -il)- 3H-tiazol[4,5-d]pirimidina-2-ona (56)
[00207] De uma maneira similar ao Exemplo 15, Etapa 1, 74 mg do composto título 56 foram geradas com uma produção de 46% na forma de sólido amarelo: 1H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ 8,29 (s, 1H), 6,80 (s, 2H), 5,81 (m, 1H), 5,66 (m, 1H), 4,53 (d, J=6,0, 2H), 4,27 (d, J=8,0, 2H); [M+H]+ 257,2.Exemplo 18 Preparação de 5-Amino-3-hexil-3H- tiazol[4,5-d]pirimidina-2-ona (57)
Figure img0067
[00208] Etapa 1: Preparação de 5-Amino-3-hexil-3H-tiazol[4,5-d]pirimidina-2-ona (57)
[00209] De uma maneira similar ao Exemplo 15, Etapa 1, 51 mg do composto título 57 foram geradas com uma produção de 15% na forma de sólido branco: 1H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ 8,28 (s, 1H), 6,78 (s, 1H), 3,82 (t, J=7.2, 2H), 1,64 (m, 2H), 1,27 (m, 6H), 0,85 (t, J=6,8, 3H); [M+H]+ 253,1.Exemplo 19 Preparação de (±)-5-Amino-3-ciclopentil-3H-tiazol[4,5-d]pirimidina-2-ona (58)
Figure img0068
[00210] Etapa 1: Preparação de (±)-5-Amino-3-ciclopentil-3H-tiazol[4,5- d]pirimidina-2- ona (58)
[00211] De uma maneira similar ao Exemplo 15, Etapa 1, 21 mg do composto título 58 foram gerados com produção de 5% na forma de sólido amarelo-claro: 1H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ 8,09 (s, 1H), 5,23 (s, 2H), 2,24 (m, 1H), 2,00 (m, 4H), 1,66 (m, 4H); [M+H]+ 237.0. Exemplo 20 Preparação de 5-Amino-3-(4-nitro-fenil)-3H-tiazol[4,5-d]pirimidina-2-ona (59)
Figure img0069
[00212] Etapa 1: Preparação de 5-Amino-3-(4-nitro-fenil)-3H-tiazol[4,5- d]pirimidina-2-ona (59)
[00213] De uma maneira similar ao Exemplo 15, Etapa 1, 45 mg do título composto 59 foi gerado com produção de 10% na forma de sólido laranja: 1H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ 8,59 (s, 1H), 8,18 (d, J=9,2, 2H), 7,99 (d, J=9,2, 2H), 5,74 (s, 2H); [M+H]+ 290,2.Exemplo 21 5-Amino-3-(2,3,5,6-tetrafluoro-piridina-4-il)-3H-tiazol[4,5-d]pirimidina-2-ona (60)
Figure img0070
[00214] Etapa 1: Preparação de 5-Amino-3-(2,3,5,6-tetrafluoro-piridina- 4-il)-3H-tiazol[4,5-d]pirimidina-2-ona (60)
[00215] De uma maneira similar ao Exemplo 15, Etapa 1, 35 mg do composto título 60 foram geradas com produção de 5% na forma de sólido laranja: 1H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ 8.16(s, 1H), 4,01(s, 2H); [M+H]+ 318,4.
Figure img0071
Exemplo 22 Preparação de (E)-5-Amino-3-(4-cloro-2-buteno-1-il)-3H-tiazol[4,5-d]pirimidina-2-ona (62)
[00216] Etapa 1: Preparação de (E)-5-Amino-3-(4-cloro-2-buteno-l-il)-3H- tiazol[4,5-d]pirimidina-2-ona (61).
[00217] O composto título 61 pode ser sintetizado tratando-se 5- Amino-3H- tiazol[4,5-d]pirimidina-2-ona (1) em DMF com hidreto de sódio e (E)-1,4-dicloro-2-buteno sob várias condições.
[00218] Etapa 2: Preparação de (E)-5-Amino-3-(4-hidroxi-2-buteno-1-il)- 3H-tiazol[4,5-d]pirimidina-2-ona (62)
[00219] O composto título 62 poderia ser sintetizado tratando-se (E)- 5-Amino-3-(4-cloro-2-buteno-1-il)-3H-tiazol[4,5-d]pirimidina-2-ona (61) com HCl 0,1 M sob várias condições. Esquema 3
Figure img0072
Exemplo 23 Preparação de (3’S)-5-Ammo-3-(3’-deoxi-3’-hidroximetil-β-D-ri.bofuranosil)-3H-tiazol[4, 5-d]pirimidina-2 -ona (65)
Figure img0073
[00220] Etapa 1: Preparação de (3’S)-5-Amimo-3-(3’-acetoximetil-2’,5’-di-O-acetil-3’-deoxi-β-D-ribofuranosil)-3H-tiazol[4,5-d]pirimidina-2-ona (64)
Figure img0074
[00221] (3S)-3-O-Acetoximetil-l,2,5-tri-O-acetil-3-deoxi-α,β-D-ribofuranose (63) [preparado de acordo com o método de Cooperwood e colaboradores, Nucleosides, Nucleotides, and Nucleic Acids 2000, 19, 219236, em que foi feito o enantiômero do mesmo composto] (176 mg, 0,53 mmol) foi dissolvido em acetonitrila (7 mL) à temperatura ambiente. 5- Amino-3H-tiazol[4,5-d]pirimidina-2-ona (1) (89 mg, 0,53 mmol) foi adicionada e a mistura foi, então, agitada por 0,5 h antes de ser aquecida até 40°C. Após 5 minutos a 40°C, BSA (0,39 mL, 1,59 mmol) foi adicionado e a mistura foi agitada por mais 0.5 h. A mistura foi, então, aquecida até 80°C. TMSOTf (0,14 mL, 0,80 mmol) foi adicionado e a reação foi agitada por 3-4 horas a 80°C. Quando completada, permitiu-
[00222] se que a reação esfriasse até temperatura ambiente e então ela foi interrompida por um tampão a pH 7.0 (K2HPO4 1,0 M e NaH2PO4 1,0 M, 2 ml). A mistura foi extraída com CH2Cl2 (3 x 10 mL). As camadas orgânicas combinadas foram lavadas com salmoura, secadas com Na2SO4, e concentradas sob vácuo. O produto bruto foi purificado por cromatografia em coluna (SiO2, MeOH-CH2Cl2 0-10%) para produzir 77 mg (33%) de 64 na forma de sólido amarelo-claro em pó: 1H NMR (400 MHz, CDClβ) δ 8,14 (s, 1H), 6,04 (d, J=1,6, 1H), 5,90 (dd, J=6,8, 1,6, 1H), 5,24 (s, 2H), 4,52 (dd, J=12,0, 2,8, 1H), 4,36 (m, 2H), 4,17 (m, 2H), 3,54 (m, 1H), 2,18 (s, 9H); [M+H]+ 441,2; Análise de elementos para C17H20N4O8S.0,6H2O: calculado: C, 45,25; H, 4,74; N, 12,42; S, 7,11; Encontrado: C, 45,24; H, 4,66; N, 12,02; S, 7,24.
[00223] Etapa 2: Preparação de (3’S)-5-Amino-3-(3’-deoxi-3’-hidroximetil-β-D-ribofuranosil)-3H-tiazol[4, 5-d]pirimidina-2-ona (65)
[00224] (3’S) -5-Amino-3- (3’-acetoximetil-2’,5’-di-O-acetil-3’-deoxi-β-D-ribofuranosil)-3H-tiazol[4,5-d]pirimidina-2-ona 64 (114 mg, 0,28 mmol) foi dissolvida em metanol (2 mL) à temperatura ambiente. Foi adicionado carbonato de potássio (2 mg, cat.) e a mistura foi agitada à temperatura ambiente no pernoite. Quando completada, ácido acético foi adicionado (2 μL) e a mistura foi agitada por mais 30 minutos à temperatura ambiente. A mistura foi concentrada, purificada por HPLC, e então triturada por EtOAc para produzir 79 mg (90%) de 65 na forma de sólido branco: 1H NMR (400 MHz, D2O) δ 8,28 (s, 1H), 6,10 (m, 1H), 5,18 (m, 1H), 4,20 (m, 1H), 3,95 (m, 2H), 3,78 (m, 2H), 3,00 (m, 1H); [M+H]+ 315,2; Análise de elementos paraC11H14N4O5S.0,3H2O.0,15iPrOH: calculado: C, 41,83; H, 4,84; N, 17,04; S, 9,75; Encontrado: C, 41,92; H, 4,61; N, 16,89; S, 9,78. Exemplo 24 Preparação de 5-Amino-3-(5’-deoxi-5 -hidroximetil-β-D- ribofuranosil)-3H- tiazol[4, 5-d]pirimidina-2-ona (68)
Figure img0075
[00225] Etapa 1: Preparação de 5-Amino-3-(5’-O-acetoximetil-2’,3’-di-O- acetil-5’-deoxi-β-D-riboJuranosil)-3H-tiazol[4,5-d]pirimidina-2-ona (67)
Figure img0076
[00226] De uma maneira similar ao Exemplo 23, Etapa 1, 113 mg do composto título 67 foram geradas de 5-O-acetoximetil-l, 2, 3-tri-0-acetil- 5-deoxi-α,β-D- ribofuranose (66) [preparado de acordo com o método de Pakulski e colaboradores, Polish J. Chem. 1995, 69, 912-917] com produção de 53% na forma de sólido amarelo adesivo: 1H NMR (400 MHz, CDCh) δ 8,15 (s, 1H), 6,34 (m, 1H), 6,25 (d, J=6,0, 1H), 6,11 (d, J=4,0, 1H), 6,04 (m, 1H), 5,76 (t, J=6,0, 1H), 5,42 (s, 1H), 4,93 (m, 1H), 4,35 (m, 1H), 4,21 (q, J=5,6, 1H), 2,20 (s, 9H); [M+H]+ 441,2.
[00227] Etapa 2: Preparação de 5-Amino-3-(5’-deoxi-5’-hidroximetil-β-D- ribofuranosil)- 3H-tiazol[4,5-d]pirimidina-2-ona (68)
[00228] De maneira similar ao Exemplo 23, Etapa 2, 43 mg do composto título 68 foram gerados com produção de 71% na forma de sólido branco: 1H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ 8,33 (s, 1H), 6,84 (s, 2H), 5,86 (d, J=4,4, 1H), 5,26 (d, J=5.2, 1H), 4,93 (m, 1H), 4,74 (q, /=10,0, 4,4, 2H), 4,40 (m, 1H), 3,82 (m, 2H), 1,76 (m, 3H); [M+H]+ 315,2; Análise de elementos para C11H14N4O5S.0,4H2O.0,2iPrOH: calculado: C, 41,77; H, 4,96; N, 16.80; S, 9.61; Encontrado: C, 41,61; H, 4,85; N, 16,68; S, 9,58.Exemplo 25 Preparação de 5-Amino-3-(3’-deoxi-3 —O-p-toluenosulfonil-β-D- xilofuramosil)- 3H-tiazol-[4,5-d]pirimidimae2-oma(73)
Figure img0077
Esquema 4
Figure img0078
[00229] Etapa 1: Preparação de l,2-0-Isopropilieno-3-O-p- toluenosulfonil-5-0-tritil-β-D-xilofuranose (70)
[00230] l,2-0-Isopropilideno-5-0-tritil-β-D-xilofuranose (69) [preparado de acordo com o método de Johnston e colaboradores, Tetrahedron Lett. 1995, 36, 4341-4344] (4,25 g, 9,83 mmol) foi dlvida em piridina (60 mL) à temperatura ambiente. Cloreto de P-Toluenosulfonil (2,81 g, 14,74 mmol) foi adicionado à solução. Após 24 h, a reação havia se completado, a mistura bruta foi concentrada. O resíduo foi dissolvido em EtOAc (50 mL), lavado com NH4Cl (25 mL) aquoso saturado, NaHCO3 aquoso saturado (25 mL) e salmoura (25 mL). A fase orgânica foi secada em MgSO4, filtrada e então concentrada. A mistura foi, então, purificada por cromatografia ISCO (SiO2, EtOAc-Hexano 2-15%), produzindo 5,20 g (90%) de 70 na forma de sólido branco: 1H NMR (400 MHz, CDCI3) δ 7,61 (m, 2H), 7,32-7,34 (m, 6H), 7,23-7,32 (m, 9H), 5,92 (d, J=4,4, 1H), 4,74 (dd, J=11,2, 3,6, 2H), 4,19-4,22 (m, 1H), 3,45 (dd, J=10,4, 6,4, 1H), 3,05 (q, J=5,2, 1H), 2,40 (s, 3H), 1,49 (s, 3H), 1,31 (s, 3H).
[00231] Etapa 2: Preparação de l,2,5-Tri-O-acetil-3-O-p-toluenosulfonil-a,β-D- xilofuranose (71)
[00232] l,2-O-isopropilieno-3-O-p-toluenosulfonil-5-O-tritil-β-D-xilofura-nose (70) (5.20 g, 8.86 mmol) foi dissolvida em AcOH (60 mL) à temperatura ambiente. Anidrido acético (4,23 mL, 44,71 mmol) foi adicionado à solução em gotas. A mistura resultante foi resfriada até 0°C, seguido de adição lenta de of H2SO4 1M (9,75 mL, 9,75 mmol). Após 24 h, a reação havia se completado, a mistura bruta foi concentrada e então azeotropada com tolueno (2 x 20 mL). O resíduo foi dissolvido em CH2Cl2 (50 mL), lavado com NaHCO3 aquoso saturado (20 mL). A fase orgânica foi secada em MgSO4, filtrada e concentrada. A mistura foi, então, purificada por cromatografia ISCO (SiO2, EtOAc-Hexano 2-40%), produzindo 3,09 g (81%) de 71 na forma de óleo incolor: 1H NMR (400 MHz, CDCI3) δ (uma mistura dos isômeros α e β) 7,80-7.85 (m), 7,37-7,39 (m), 6,36 (d, J=4,4), 6,06 (s), 5,20-5,30 (m), 4,56-4,62 (m), 4,26-4,29 (m), 2,50 (s), 2,06-2,08 (m).
[00233] Etapa 3: Preparação de 5-Amino-3-[2’5’-di-O-acetil-3’-deoxi-3’- O-p-toluenosulfonil-β-D-xilofuranosil]-3H-tiazol-[4,5-d]pirimidina-2-ona (72)
Figure img0079
[00234] De maneira similar ao Exemplo 23, Etapa 1, 161 mg do composto título 72 foram geradas com produção de 54% na forma de sólido amarelo macio: 1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ 8,12 (s, 1H), 7,85 (d, J=8,8, 2H), 7,39 (d, J=8,8, 2H), 6,18 (d, J=2,8, 1H), 5,90 (br s, 2H), 5,77 (d, J=4,4, 1H), 5,01 (dd, J=6,4, 5,2, 1H), 4,34 (m, 1H), 4,27 (m, 2H), 2,48 (s, 3H), 2,04 (s, 6H); [M+H]+ 539,3.
[00235] Etapa 4: Preparação de 5-Amino-3-[3’-deoxi-3’-O-p-toluenosulfonil-β-D-x:ilofUranosil]-3H-tiazol-[4,5-d]pirimidina-2-ona (73)
[00236] De maneira similar ao Exemplo 23, Etapa 2, 68 mg do composto título 73 foram geradas com produção de 61% na forma de sólido branco: 1H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ 8,36 (s, 1H), 7,83 (d, J=8,0, 2H), 7,48 (d, J=8,0, 2H), 6,80 (s, 2H), 5,92 (d, J=6,0, 1H), 5,71 (d, J=6,4, 1H), 5,20 (m, 1H), 4,89 (q, J=5,6, 3,6, 1H), 4,73 (s, 2H), 4,10 (m, 2H), 2,43 (s, 3H); [M+H]+ 455,2; Análise de elementos para (C17H18N4O7S2.0,4H2O): calculado: C, 44,22; H, 4,10; N, 12,14; S, 13,89; Encontrado: C, 44,45;H, 4,15; N, 12,07; S, 13,71. Exemplo 26 Preparação de 5-Ammo-3-(3’-deoxi-3’-metilideno-β-D- ribofuranosil)-3H-tiazol[4,5-d]pirimidina-2-on (76)
Figure img0080
[00237] Etapa l: Preparação de 5-Amino-3-(2’-O-acetil-5’-O-benzoyi-3’- deoxi-3’-metilideno-β-D-ribofuranosil)-3H-tiazol[4,5-d]pirimidina-2-ona (75)
Figure img0081
[00238] De maneira similar ao Exemplo 23, Etapa 1, 107 mg do composto título 75 foram geradas de l,2-di-O-acetil-5-O-benzoil-3-deoxi- 3-metilideno-α,β-D-ribofuranose (74) [preparado de acordo com o método de Girardet e colaboradores, J. Med. Chem. 2000, 43, 3704-3713] com produção de 85% na forma de sólido amarelo: 1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ 8,13 (s, 1H), 8,05 (dd, J=8,4, 1,2, 2H), 7,57 (tt, J=7,2, 1,2, 1H), 7,44 (t, J=7,2, 2H), 6,51 (m, 1H), 6,17 (d, J=4,4, 1H), 5,30 (s, 2H), 5,11 (m, 2H), 4,82 (dd, J=11,6, 4,8, 2H), 4,52 (dd, J=11,6, 6,8, 1H), 2,14 (s, 3H); [M+H]+ 443,2.
[00239] Etapa 2: Preparação de 5-Amino-3-(3’-deoxi-3‘ -metilideno-β-D- ribofuranosil)-3H- tiazol[4,5-d]pirimidina-2-ona (76)
[00240] De maneira similar ao Exemplo 23, Etapa 2, 35 mg do composto título 76 foram geradas com produção de 35% na forma de a sólido cinza-branco: 1H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ 8.37 (s, 1H), 5,83 (d, J=5,6, 1H), 5,74 (d, J=7,6, 1H), 5,51 (m, 2H), 5,19 (d, J=11.2, 2H), 4,72 (t, J=6,0, 1H), 4,54 (br s, 2H), 3,85 (s, 2H); [M+H]+ 297,2; Análise de elementos para (C11H12N4O4S.0,2H2O.0,25 iPrOH): calculado: C, 44,81; H, 4,61; N, 17,79; S, 10,18; Encontrado: C, 44,84; H, 4,33; N, 17,76; S, 10,22. Exemplo 27 Preparação de (3’R)-5-Amino-3-(3’-deoxi-3’-fluoro-β-D- xilofuranosil)-3H-tiazol[4,5-d]pirimidina-2-ona (79)
Figure img0082
[00241] Etapa 1: Preparação de (3’R)-5-Amino-3-(2’-O-acetil-5’-O- benzoil-3’-deoxi-3’fluoro-β-D-Xlofuranosil)-3H-tiazol[4,5-d]pirimidma-2- ona (78)
Figure img0083
[00242] De maneira similar ao Exemplo 23, Etapa 1, 148 mg do composto título 78 foram geradas de 1,2-Di-O-acetil-5-O-benzoil-3- deoxi-3-(R)-fluoro-α,β-D-xilofuranose (77) [preparado de acordo com o método de Gosselin e colaboradores, Carbohydrate Research 1993, 249, 1-17] com produção de 56% sólido amarelo-claro: 1H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ 8,16 (s, 1H), 8,05 (d, J=8,8, 2H), 7,57 (t, J=7,6, 1H), 7,44 (t, J=8,0, 2H), 6,29 (ddd, J=21,2, 4,8, 1,2, 1H), 5,98 (d, J=4,8, 1H), 5,32 (ddd, J=52,0, 4,0, 1,2, 1H), 5,20 (s, 1H), 4,83 (dd, J=11,2, 4,8, 1H), 4,61 (m, 1H), 2,00 (s, 3H); [M+H]+ 449,3.
[00243] Etapa 2: (3’R)-5-amino-3-(3’-deoxi-3 -fluoroβD-xdlofuranosi))-3H-tiazol[4,5-d]pirimidina-2-ona (79)
[00244] De maneira similar ao Exemplo 23, Etapa 2, 43 mg do composto título 79 foram geradas com produção de 56% na forma de sólido amarelo: 1H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ 8,36 (s, 1H), 6,87 (s, 2H), 5,97 (d, J=4,8, 1H), 5,73 (d, J=5,6, 1H), 5,22 (dtd, J=24,4, 5,6, 2,0, 1H), 5,02 (ddd, J=52,8, 4,4, 1,6, 1H), 4,07 (m, 2H), 3,62 (m, 2H); [M+H]+ 303,6.Exemplo 28 Preparação de (3’S)-5-amino-3-(2’,5’-di-O-acetil-3’-azido-3’-deoxi-β-D- ribofuranosil)-3H-tiazol[4,5-d]pirimidina-2-ona (83)
Figure img0084
Esquema 5
Figure img0085
[00245] Etapa 1: Preparação de (3R)-3-Azido-3-deoxi-1,2-O-isopropilieno-5-O-tritil-β-D-ribofu.ranose (81)
[00246] l,2-O-Isopropilideno-5-O-tritil-β-D-xilofuranose (69) [preparado de acordo com o método de Johnston e colaboradores, Tetrahedron Lett. 1995, 36, 4341-4344] (3,28 g, 7,58 mmol) foi dissolvida em CH2Cl2 (75 mL) à temperatura ambiente antes de ser resfriada até - 10°C. Foi adicionada piridina (0,86 mL, 10,61 mmol) à solução, seguida por adição lenta de anidrido trifluorometanosulfônico (1,53 mL, 9,10 mmol). Após agitação a -10°C por 1 h, a reação foi interrompida por adição lenta de NaHSO3 5% (150 mL) antes de ser aquecida até temperatura ambiente. As camadas foram então separadas e a fase aquosa foi extraída ainda mais com CH2Cl2 (2 x 75 mL). As camadas orgânicas foram combinadas, secadas com MgSO4 e, então, filtradas e concentradas. O resíduo foi azeotropado com tolueno (2 x 10 mL) e então secado com alto vácuo para produzir triflato 80.
[00247] O triflato 80 foi dissolvido em DMF (100 mL) à temperatura ambiente. Piridina (0,92 mL, 11,37 mmol) foi adicionada à solução, seguida da adição de azida sódica (1,97 g, 30,32 mmol). Após 5 d, a reação havia se completado, a mistura bruta foi concentrada. O resíduo foi dissolvido em EtOAc (60 mL) e lavado com NH4Cl aquoso saturado(40 mL). A camada orgânica foi secada em MgSO4, filtrada e concentrada. A mistura foi, então, purificada por cromatografia ISCO (SiO2, EtOAc- Hexano 2-15%), produzindo 1,80 g (52% para 2 etapas) de 81 na forma de sólido branco: 1H NMR (400 MHz, CDCI3) δ 7,44-7,47 (m, 6H), 7,26-7,32 (m, 6H), 7,24-7,25 (m, 3H), 5,90 (d, J=3,6, 1H), 4,77 (t, J=4,4, 1H), 4,18-4,22 (m, 1H), 3,66 (q, J=6,0, 1H), 3,52 (dd, J=10,4, 3,2, 1H), 3,20 (dd, J=10,8, 4,0, 1H), 1,59 (s, 3H), 1,40 (s, 3H).
[00248] Etapa 2: Preparação de (3R)-l,2,5-Tri-O-acetil-3-azido-3-deoxi-a,β-D- ribofuranose (82)
[00249] (3R)-3-Azido-3-deoxi-l,2-0-isopropilieno-5-O-tritil-β-D-ribofuranose (81) (1,20 g, 2,62 mmol) foi dissolvida em AcOH (30 mL) à temperatura ambiente. Anidrido acético (1,24 mL, 13,10 mmol) foi adicionado à solução em gotas. A mistura resultante foi resfriada até 0°C, seguido de adição lenta de H2SO4 1M (2,88 mL, 2,88 mmol). Após 24 h, a reação havia se completado, a mistura bruta foi concentrada e então azeotropada com tolueno (2 x 10 mL). O resíduo foi dissolvido em CH2Cl2 (30 mL), lavado com NaHCO3 aquoso saturado (20 mL). A fase orgânica foi secada em MgSO4, filtrada e concentrada. A mistura foi, então, purificada por cromatografia ISCO (SiO2, 2-40% EtOAc-Hexano),produzindo 0,66 g (83%) de 82 na forma de óleo incolor: 1H NMR (400 MHz, CDCh) δ (uma mistura d eisômeros α e β) 6,43 (d, J=4,4), 6,14 (s), 5,34 (d, J=4,8), 5,21 (dd, J=7,6), 4,20-4,37 (m), 4,04-4,10 (m), 2,10-2,20 (m).
[00250] Etapa 3: Preparação de (3’R)-5-amino-3-(2’,5’-di-O-acetil-3’- azido-3’-deoxi-β-D-ribofuranosil)-3H-tiazol[4,5-d]pirimidina-2-ona (83)
[00251] De maneira similar ao Exemplo 23, Etapa 1, 288 mg do composto título 83 foram geradas com produção de 85% na forma de um sólido laranja: 1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ 8,17 (s, 1H), 6,18 (d, J=2,4, 1H), 5,95 (dd, J=6,4, 2,8, 1H), 5,14 (s, 2H), 4,61 (m, 1H), 4,24 (dd, J=12,0, 5,2, 1H), 4,17 (m, 2H), 2,12 (s, 6H); [M+H]+ 410,4.
Figure img0086
Exemplo 29 Preparação de (1’R,2’S,3’R,4’R)-N’-[7-cloro-2-oxo-3-(2’,3’-O-isopropilideno- 4’-vinil-ciclopentano-1’-il)-2,3-dihidro-tiozolo[4,5-d]pirimidina-5-il]-N,N-dimetil-formamidina (88)
Figure img0087
[00252] Etapa 1: Preparação de (l’R,2’S,3’R,4’R)-N’-[7-cloro-2-oxo-3- (2’,3’-0-isopropilideno-4’-vinil-ciclopentano-1’-il)-2,3-dihidro-tiozolo[4,5- d]pirimidina-5-il]-N,N-dimetil-formamidina (85)
[00253] (lR,2S,3R,4R)-2,3-0-isopropilideno-4-vinil-ciclopentano-l-ol (84) [preparado de acordo com o método de Yang e colaboradores, J. Org. Chem. 2004, 69, 3993- 3996] (96 mg, 0,52 mmol) foi dissolvido em CH2Cl2 (2 mL) e piridina (10 mL) à temperatura ambiente. A solução foi resfriada até 0°C, seguido de adição lenta de anidrido trifluorometanosulfônico (115 μL, 0,68 mmol). Após 0,5 h, a reação havia se completado, a reação foi interrompida com H2O (10 mL), e então diluída ainda mais com CH2Cl2 (10 mL). Após as camadas erem separadas, a fase aquosa foi lavada ainda mais com CH2Cl2 (2 x 10 mL). As frações orgânicas foram combinadas, secadas em MgSO4, filtradas e então concentradas. O óleo amarelado resultante foi usado diretamente na etapa seguinte.
[00254] O triflato acima (131 mg, 0,51 mmol) foi suspenso em CH3CN (10 mL) à temperatura ambiente. Hidreto de sódio (15 mg, 0,62 mmol) foi adicionado à solução, seguido da adição de uma solução de N’-[7-cloro- 2-oxo-2,3-dihidro-tiozolo[4,5-d]pirimidina-5-il)-N,N-dimetil-formamidina (base de cloroamidina, 160 mg, 0,62 mmol) em CH3CN (8 mL). A reação foi agitada a 0°C por 12 h antes de ser interrompida pela adição de H2O (5 mL). A mistura resultante foi extraída com EtOAc (3 x 20 mL). As frações orgânicas foram combinadas, secadas em MgSO4, filtradas e então concentradas. A mistura foi, então, purificada por cromatografia em coluna (SiO2, EtOAc-Hexano 2-20%), produzindo 94,8 mg (43%) de 85 na forma de um sólido branco: 1H (400MHz, CDCh) δ 8,63(s, 1H), 5,92 (m, 1H), 5,09-5,29 (m, 4H), 4,55-4,61 (m, 1H), 3,23 (s, 3H), 3,21 (s, 3H), 2,65-2,77 (m, 1H), 2,42-2,51 (m, 1H), 2,18-2,22 (m, 1H), 1,56 (s, 3H), 1,29 (s, 3H); [M+H]+ 424,1.
[00255] Etapa 2: Preparação de(l’R,2’S,3’R,4’R)-5-Amino-7-cloro-3- (2’,3’-O-isopropilideno-4’-hidroximetil-ciclopentano-l’-il)-3H-tiazol[4,5- d]pirimidina-2-ona (86)
[00256] O composto título 86 pode ser sintetizado tratando-se (l’R,2’S,3’R,4’R)-N’-[7-cloro-2-oxo-3-(2’,3’-O-isopropilideno-4’-vinil- ciclopentano-1’-il)-2,3-dihidro-tiozolo[4,5-d]pirimidina-5-il]-N,N-dimetil- formamidina (85) em CH3OH e H2O com periodato sódico e tetróxido de ósmio. O produto bruto pode então ser tratado com borohidreto sódico em CH3OH para produzir 86.
[00257] Etapa 3: Preparação de(l’R,2’S,3’R,4’R)-5-Amino-3-(2’,3’-O- isopropilideno-4’-hidroximetil-ciclopentano-l’-il)-3H-tiazol[4,5-d]pirimidina- 2-ona (87)
[00258] O composto título 87 pode ser sintetizado tratando-se (l’R,2’S,3’R,4’R)-5-Amino-7-cloro-3-(2’,3’-O-isopropylideno-4’-hidroximetil-ciclopentano-l’-il)-3H-tiazol[4,5-d]pirimidina-2-ona (86) em AcOH com a dupla zinco cobre sob várias condições.
[00259] Etapa 4: Preparação de(l’R,2’S,3’R,4’R)-5-Amino-3-(2’,3 ‘-dioxy- 4’-hidroximetil-ciclopentano-l’-il)-3H-tiazol[4,5-d]pirimidina-2-ona (88)
[00260] O composto título 88 pode ser sintetizado tratando-se (l’R,2’S,3’R,4’R)-5-Amino-3-(2’,3’-O-isopropilideno-4’-hidroximetil- ciclopentano-1’-il)-3H-tiazol[4,5-d]pirimidina-2-ona (87) em CH3OH com HCl 2M sob várias condições. Exemplo 30 Preparação de 5-Amino-3-(3’-(R)-metoxi-β-D-Xlofuranosil)-3H- tiazol[4,5-d]pirimidina-2-ona (89)
Figure img0088
[00261] A mistura necessária de açúcar, ácido acético, l,2,5-tri-O- acetil-3)-metoxi-D- xilofuranose α e β (91) foi preparada da seguinte maneira:
Figure img0089
[00262] Álcool tritílico 69 (5 g, 11,57 mmol) foi misturado com iodeto de metila (2,5 ml, 34,7 mmol) em THF (40 ml). Iodeto de tetrabutilamônia (427 mg) foi adicionado e a mistura resfriada num banho de gelo. Sob uma corrente lenta de nitrogênio, uma mistura de hidreto de sódio sólido- óleo (1,33g, NaH 60%, 34,7 mmol) foi adicionada em pequenas porções. A reação foi agitada durante pernoite enquanto aquecia lentamente até a temperatura ambiente. A reação foi cuidadosamente despejada numa mistura de cloreto de amônia saturado e gelo, e extraída três vezes com éter etílico. As partes de éter foram combinadas, lavadas com salmoura, secadas (MgSO4), filtradas e o solvente evaporado para produzir 90 na forma de óleo turvo. 1H NMR (400 MHz, CDCI3) δ 7,42 7,42 (m, 6H), 7,26 (m, 9H), 5,85 (d, J=3,6Hz, 1H), 4,54 (d, J=3,6Hz, 1H), 4,38 (m, 1H), 3.785 (d, J=3,2Hz, 1H), 3,42 (m, 1H), 3,35 (m, 4H), 1,53 (s, 3H), 1,336 (s, 3H)
[00263] Etapa 2: Mistura de l,2,5-tri-O-acetil-3-metoxi-D-xilofuranose a e β (91)
[00264] O composto de tritila 90 (6,1g, 11,57 mmol) foi dissolvido numa mistura de ácido acético (20 ml) e anidrido acético (10 ml) e resfriada num banho de água fria. A mistura de ácido sulfúrico em anidrido acético e ácido acético foi adicionada (0,5 ml de ácido sulfúrico, 2,5 ml de ácido acético e 2,5 ml de anidrido acético, pré-resfriados num banho de gelo antes de serem adicionados) e a mistura foi agitada à temperatura ambiente durante pernoite. A reação foi despejada em 400 g de água gelada e extraída três vezes com acetato de etila. As partes orgânicas foram combinadas, lavadas com bicarbonato de sódio saturado, secada (MgSO4), filtrada e evaporada para produzir um semi- sólido. Este foi purificado por cromatografia flash numa coluna de 120 g de sílica gel eluindo com gradiente de acetato de etila em hexano (10100%) para produzir 91 (1,26 g, 4,34 mmol, 38%) na forma de mistura oleosa de anômeros. 1H NMR (400 MHz, CDCI3) δ 6,39 (d, J=4.4Hz), 6,17 (s), 4,4-4,52 (m), 4,3-4,39 (m), 4,1-4,24 (m), 3,86 (d, J=5,6Hz), 3,45 (s), 3,41 (s), 2,07-2,16 (m).
[00265] Etapa 3: Preparação de 5-Ammo-3-(3’-metoxi-β-D-Xlofuranosil)- 3H-tiazol[4,5-d]pirimidina-2-ona (89)
[00266] De maneira similar ao Exemplo 23, Etapa 1, usando uma mistura de l,2,5-tri-O-acetil-3-metoxi-D-xilofuranose α e β (91), produziu-se 43 mg (6 %) de 89 na forma de sólido branco: 1H NMR (DMSO-d6) δ 2,01 (d, J=9,2 Hz, 6H), 3,36 (s, 3H), 4,17-4,24 (m, 2H), 4,314,37 (m, 2H), 5,86 (d, J=6 Hz, 1H), 6,14 (dd, J=4,4, 1,6 Hz, 1H), 6,85 (br s, 2H), 8,35 (s, 1H); MS (ESI) [M+H]+ 399,96, Análise de elementos para (C15H18N4O7S.0.,5H2O): calculado: C, 44,22; H, 4,70; N, 13,75. Encontrado C, 44,27; H, 4,54; N, 13,60.Exemplo 31 Preparação de 5-Amino-3-(3’-octiloxi-β-D-xilofuranosil)-3H-tiazol[4,5-d]pirimidina-2-ona (92)
Figure img0090
[00267] A mistura necessária de açúcar, ácido acético e l,2,5-tri-O- acetil-3(S)-octiloxi-D-xilofuranose α e β (94) foi preparada da seguinte maneira:
Figure img0091
[00268] Etapa 1: Preparação de 1,2-O-isopropilideno-S-octiloxi-S-O-tritil- D-xilofuranose (5)
[00269] Álcool tritílico 69 (5 g, 11.57 mmol) foi misturado com octilbrometo (3,99 ml, 23,14 mmol) em THF (40 ml). Iodeto de tetrabutilamônia (427mg) foi adicionado e a msitura resfriada num banho de gelo. Sob uma corrente lenta de nitrogênio, uma mistura de hidreto de sódio sólido-óleo (1,33g, NaH 60%, 34,7 mmol) foi adicionada em pequenas porções. A mistura de reação foi agitada durante pernoite enquanto aquecia lentamente até a temperatura ambiente. A reação foi cuidadosamente despejada numa mistura de cloreto de amônia saturado e gelo, e extraída três vezes com éter etílico. As partes de éter foram combinadas, lavadas com salmoura, secadas (MgSO4), filtradas e o solvente evaporado para produzir 90 na forma de óleo turvo. O óleo foi purificado por cromatografia flash numa coluna de 120 g de sílica gel usando um gradiente de acetato de etila em hexano (1-30%) para produzir 93 (2,37 g, 4,72 mmol, 41%) na forma de óleo claro. 1H NMR (400 MHz, CDCI3) δ 7,42 7,42 (m, 6H), 7,26 (m, 9H), 5,85 (d, J=3,6Hz, 1H), 4,50 (d, J=3,6 Hz, 1H), 4,343 (m, 1H), 3,86 (d, J=3,6Hz, 1H), 3,45 (m, 2H), 3,32 (m, 2H), 1,54 (m, 3H), 1,41 (m 2H), 1,33 (s, 3H), 1,22 (m, 10H), 0,889 (t, J=6,8Hz, 3H).
[00270] Etapa 2: Mistura de ácido acético e l,2,5-tri-O-acetil-3-octiloxi-D- xilofuranose a e β (94)
[00271] O composto de tritila 93 (4,12 g, 7,57 mmol) foi dissolvido numa mistura de ácido acético (35 ml) e anidrido acético (15 ml) e resfriado num banho de água fria. A mistura de ácido sulfúrico em anidrido acético e ácido acético foi adicionada (0,5 ml de ácido sulfúrico, 2 ml de ácido acético e 2 ml de anidrido acético, pré-resfriados num banho de gelo antes de serem adicionados) e a mistura foi agitada à temperatura ambiente durante pernoite. A reação foi despejada em 400 g de água gelada e extraída três vezes com acetato de etila. As partes orgânicas foram combinadas, lavadas com bicarbonato de sódio saturado, secadas (MgSO4), filtradas e evaporadas para produzir um semi-sólido. Este foi purificado por cromatografia flash numa coluna de 120 g de sílica gel eluindo com gradiente de acetato de etila em hexano (5-60%) para produzir 94 (1,12 g, 2,88 mmol, 38%) na forma de mistura oleosa de anômeros. 1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ 6,39 (d, J=3,6Hz), 6,1 (s,), 5,19 (m) 4,46-4,52 (m), 4,31-4,43 (m), 4,11-4,25 (m), 3,93 (m), 3,453,68 (m), 3,4-3,46 (m), 2,07-2,1 (m), 1,540 (m), 1,27 (m), 0,882 (t,J=6,8Hz).
[00272] Etapa 3: Preparação de 5-Amino-3-(3’-octiloxi-β-D-xilofuranosil)- 3H-tiazol[4,5-d]pirimidina-2-ona (92)
[00273] De maneira similar ao Exemplo 23, Etapa 1, usando uma mistura de ácido acético e 1,2,5-tri-O-acetil-3-octiloxi-D-xilofuranose α e β (94), produziu-se 80 mg (11 %) de 92 na forma de sólido branco macio: 1H NMR (400 MHz DMSO-d6) δ 0,84-0,88 (m, 3H), 1,23- 1,30 (m, 10H), 1,49-1,52 (m, 2H), 2,00 (s, 3H), 2,02 (s, 3H), 3,41-3,44 (m, 1H), 3,57-3,59 (m, 1H), 4,16-4,21 (m, 1H), 4,30-4,37 (m, 3H), 5,87 (d, J=5,6, 1H), 6,12 (dd, J=4,4, 1,2 Hz, 1H), 6,85 (br s, 2H), 8,35 (s, 1H); MS (ESI) [(M + H)+] Encontrado 497,40. Análise de elementos para (C22H32N4O7S): C, 53,21; H, 6,50; N, 11,28. Encontrado C, 53,52; H, 6,49; N, 11,21.Exemplo 32 Preparação de 5-Amino-3-(3’-(R)-(2-metoxi-etoxi),2’,5’-di-O-acetil-β-D- xylofuranosil)-3H-tiazol[4,5-d]pirimidina-2-ona (95)
Figure img0092
[00274] A mistura necessária de açúcar, ácido acético e l,2,5-tri-O- acetil-3-(2-metoxi-etoxi)-D-xilofuranose α e β (98) foi preparada da seguinte maneira:
Figure img0093
[00275] Etapa 1: l,2-O-isopropilideno-3-(2-metoxi-etoxi)-5-0-tritil-D-xilofuranose (96)
[00276] Foi misturado álcool tritílico 69 (5 g, 11.57 mmol) com éter 2- bromoetilmetil (2,17 ml, 23,14 mmol) em THF (40 ml). Foi adicionado iodeto de tetrabutilamônia (427 mg) e a mistura resfriada num banho de gelo. Sob uma corrente lenta de nitrogênio, uma mistura de hidreto de sódio sólido-óleo (1,33g, NaH 60%, 34,7 mmol) foi adicionada em pequenas porções. A reação foi agitada durante pernoite enquanto aquecia lentamente até a temperatura ambiente. A reação foi cuidadosamente despejada numa mistura de cloreto de amônia saturado e gelo, e extraída três vezes com éter etílico. As partes de éter foram combinadas, lavadas com salmoura, secadas (MgSO4), filtradas e o solvente evaporado para produzir 90 na forma de óleo turvo. O óleo foi purificado por cromatografia flash numa coluna de 120 g de sílica gel usando um gradiente de acetato de etila em hexano (3-30%) para produzir 93 (2,37 g, 4,72 mmol, 41%) na forma de óleo claro. O éter 96 produzido foi isolado na forma de óleo espesso (4,54 g, 9,26 mmol, 80%). 1H NMR (400 MHz, CDCI3) δ 7,42 (m, 6H), 7,26 (m, 9H), 5,86 (d, J=3.6Hz, 1H), 4,54 (d, J=4Hz, 1H), 4,37 (m, 1H), 4,35 (m, 1H), 3,95 (d, J=2,8Hz, 1H), 3,64-3,68 (m, 1H), 3,47-3,52 (m, 2H)3,29-3,33 (m, 2H), 3,24 (s, 3H)1,53 (s, 3H), 1,326 (s, 3H)
[00277] Etapa 2: l,2-O-isopropilideno-3-(2-metoxi-etoxi)-5-0-tritil-D-xilofuranose (97)
[00278] O éter tritílico 96 (5,5 g, 11,22 mmol) foi dissolvido em anidrido acético (30 ml) e brometo de acetila (2,0 ml, 22,4 mmol) foi adicionado. Após uma hora, a reação foi filtrada e o filtrado evaporado até secar. O resíduo foi porificado por cromatografia flash numa coluna de 120 de sílica gel usando um gradiente de acetato de etila em hexano (10-100%) para produzir 1,54 g (5,31 mmol, 47%) de acetato 97. 1H H NMR (400 MHz, CDCl3) δ 5,925 (d, J=3,6Hz, 1H), 4,58(d, J=3,6 Hz, 1H), 4,38 (m, 2H), 4,23 (m, 1H), 3,92 (d, J=3,6Hz, 1H), 3,72 (m, 1H), 3,60 (m, 1H), 3,50 (m, 2H), 3,35 (s, 3H), 2,08 (s, 3H), 1,49 (s, 3H), 1,32 (s, 3H).
[00279] Etapa 3: Mistura de ácido acético e l,2,5-tri-O-acetil-3-(2-metoxi- etoxi)-D-xilofuranose a e β (98)
[00280] O acetato 97 (1,71 grams, 5,89 mmol) foi dissolvido numa mistura de anidrido acético e ácido acético (1:4, 30 ml) e resfriado num banho de gelo. Uma solução de ácido sulfúrico em ácido acético foi adicionada (125 μL de H2SO4 wm 1,0 ml de anidrido acético) e a mistura mantida a -10 graus durante o pernoite. A solução fria foi despejada em 80 g de gelo, permaneceu lá por 20 minutos foi, então, extraída três vezes com acetato de etila. As partes orgânicas foram combinadas, lavadas com salmoura, secadas (MgSO4), filtradas e o solvente removido para se obter 1,94 g de produto bruto. O produto bruto foi purificado por cromatografia flash numa coluna de 120 g de sílica gel eluindo com gradiente de acetato de etila em hexano (10-75%) para produzir 760 mg de 94 (2,27 mmol, 38%) de 98 na forma de mistura de anômeros. 1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ 6,40 (d, J=4,4 Hz), 6,10 (s), 5,21 (m), 4,47-4,54 (m), 4,33-4,45 (m), 4,164,27 (m), 4,03 (m), 3,72-3,85 (m), 3,6-3,7 (m), 3,48-3,54 (m), 3,35-3,48 (m), 2,06-2,11 (m)
[00281] Etapa 4: Preparação de 5-Amino-3-(3’-(2-metoxi-etoxi), 2’,5’-di- O-acetil-β-D-xilofuranosil)-3H-tiazol[4,5-d]pirimidina-2-ona (95)
[00282] De maneira similar ao Exemplo 23, Etapa 1, usando uma mistura de ácido acético e 1,2,5-tri-O-acetil-3--(2-metoxi-etoxi)-D- xilofuranose α e β (98), produziu-se 220 mg (42%) de 95 na forma de sólido branco macio: 1H NMR (400 MHz DMSO-d6) δ 2,04 (d, J=8,4 Hz, 6H), 3,29 (s, 3H), 3,49-3,52 (m, 2H), 3,58-3,63 (m, 1H), 3,76-3,81 (m, 1H), 4,19-4,24 (m, 1H), 4,36-4,43 (m, 3H), 5,88 (d, J=6 Hz, 1H), 6,18 (dd, J=3,6, 2 Hz, 1H), 6,87 (br s, 2H), 8,38 (s, 1H); MS (ESI) [M+H]+ Encontrado 443,31. Análise de elementos para (C17H22N4O8S.O, lH2O.0,2EtOAc): C, 46,29; H, 5,19; N, 12,13. Encontrado: C, 46,09; H, 5,25; N, 11,72. Exemplo 33 Preparação de 5-Amino-3-(3’-Butoxi-a-D-xilofuranosil)-3H- tiazol[4,5-d]pirimidina-2-ona (99)
Figure img0094
[00283] A mistura necessária de açúcar, ácido acético e l,2,5-tri-O- acetil-3-butoxi-D-xilofuranose α e β (101) foi preparada da seguinte maneira:
Figure img0095
[00284] Etapa 1: Preparação de 1,2-O-Isopropilideno-3-Butoxi-5-O- Acetil-D-Xilofuranose (100)
[00285] Foi misturado álcool tritílico 69 (5 g, 11.57 mmol) com n- butiliodeto (2,6 ml, 23,14 mmol) em THF (40 ml). Iodeto de tetrabutilamônia (427 mg) foi adicionado e a mistura resfriada num banho de gelo. Sob uma corrente lenta de nitrogênio, uma mistura de hidreto de sódio sólido-óleo (1,33g, NaH 60%, 34,7 mmol) foi adicionada em pequenas porções. A reação foi agitada durante pernoite enquanto aquecia lentamente até a temperatura ambiente. A reação foi cuidadosamente despejada numa mistura de cloreto de amônia saturado e gelo, e extraída três vezes com éter etílico. As partes de éter foram combinadas, lavadas com salmoura, secadas (MgSO4), filtradas e o solvente evaporado para produzir um óleo turvo. O óleo foi purificado por cromatografia flash numa coluna de 120 g de sílica gel usando um gradiente de acetato de etila em hexano (1-30%) para produzir 100 (2,32 g, 4,75 mmol, 41%) na forma de óleo claro. 1H NMR (400 MHz, CDCI3) δ 7,42 (m, 6H), 7,26 (m, 9H), 5,86 (d, J=3,6Hz, 1H), 4,51 (d, J=3,6Hz, 1H),4,35 (m, 1H), 3,86 (d, J=3,6Hz, 1H), 3,46 (m, 2H), 3,29 (m, 2H), 1,54 (m,3H), 1,38 (m, 2H), 1,33 (s, 3H), 1,23 (m, 2H), 0,83 (t, J=7,6Hz, 3H).
[00286] Etapa 2: Preparação de Mistura de Ácido Acético e l,2,5-tri-O- Acetil-3-Butoxi-D-Xilofuranose a e β (101)
[00287] O composto de tritila 100 (2,32 g, 4,75 mmol) foi dissolvido em anidrido acético 5% em ácido acético (50 ml), resfriado num banho de água fria, recebeu 0,02 ml de ácido sulfúrico e a mistura foi agitada à temperatura ambiente durante pernoite. A mistura de reação foi despejada em 150 g de gelo e extraída três vezes com cloreto de metileno. As partes orgânicas foram secadas (MgSO4), filtradas e levadas à secura com tolueno para produzir 3,19 g de um semi-sólido. Este foi purificado por cromatografia flash numa coluna de 50 g de sílica gel eluindo com gradiente de acetato de etila em hexano (5-75%) para produzir 101 (0,760 g, 2,29 mmol, 48%) na forna de mistura oleosa de anômeros. 1H NMR (400 MHz, CDCl3) 66,38 (d, J=3,6Hz), 6,11 (s), 5,2 (m), 4,50 (m), 4,314,42 (m), 4,13-4,25 (m), 3,93 (d, J=3.6Hz), 3,5-3,7 (m), 3,4-3,47 (m), 2,062,15 (m), 1,51-1,55 (m), 1,3-1,4 (m), 0,89-0,94 (m).
[00288] Etapa 3: Preparação de 5-Amino-3-(3’)-Butoxi-2’,5’-di-O-Acetil- a-D-Xilofuranosil)-3H-Tiazol[4,5-d]Pirimidina-2-ona (102)
[00289] De maneira similar ao Exemplo 23, Etapa 1, usando usando uma mistura de ácido acético e 1,2,5-tri-O-acetil-3-butoxi-D- xilofuranose α e β (101), produziu-se 40 mg (8%) de 102 na forma de sólido branco. Levado bruto para a Etapa 2.
[00290] Etapa 2: Preparação de 5-Amino-3-(3’-Butoxi-a-D-xilofuranosil)- 3H-tiazol[4,5-d]pirimidina-2-ona (99)
[00291] De maneira similar ao Exemplo 23, Etapa 2, 102 produziu 5 mg (15%) de 99 na forma de sólido branco: 1H NMR (400 MHz, (CDCI3) δ 0,84 (t, J=7,2 Hz, 3H), 1,27-1,32 (m, 2H), 1,51-1,54 (m, 2H), 3,20 (t, J=9,2 Hz, 1H), 3,35 (t, J=10,8 Hz, 1H), 3,72- 3,84 (m, 3H), 3,97-4,01 (m, 1H), 4,74 (t, J=9,2 Hz, 1H), 5,17 (br s, 2H), 5,38 (d, J=9,2 Hz, 1H), 7,96 (s, 1H); MS (ESI) [(M + H)+] encontrado 356,80. Exemplo 34 Preparação de 5-Amino-3-(3’-metil,2’,3’,5’-tri-O-acetil-β-D- xilofuranosil)-3H-tiazol[4,5-d]pirimidina-2-ona (103)
Figure img0096
[00292] A mistura necessária de açúcar e l,2,3,5-tetra-O-acetil-3-(S)metil-D-xilofuranose α e β (105) foi preparada da seguinte maneira:
Figure img0097
[00293] O diol 104 [preparado como descrito por Lu e Just; Tetrahedron Letters 41 (2000) 9223-9227] (1,69 g, 8,28 mmol) foi dissolvido em cloreto de metileno (25 ml) e piridina (4.7 ml) foi adicionada. Anidrido acético (3,9 ml, 41 mmol) foi adicionado junto com DMAP (50 mg) e essa mistura foi agitada durante pernoite à temperatura ambiente. A reação foi diluída com cloreto de metileno e lavada com cloreto de amônia saturado. A fase aquosa foi extraída mais duas vezes com cloreto de metileno, as partes orgânicas foram combinadas, secadas (MgSO4), filtradas e evaporadas para produzir um óleo incolor. O óleo foi dissolvido em anidrido acético 5% em ácido acético (68 ml), ácido sulfúrico (0,02 ml) foi adicionado e essa mistura foi agitada durante pernoite à temperatura ambiente. A reação foi despejada em 150 g de gelo, extraída três vezes com cloreto de metileno, as fases orgânicas foram combinadas, lavadas duas vezes com bicarbonato de sódio saturado, secadas (MgSO4), filtradas e evaporadas para produzir 2,84 g de um óleo. O resíduo foi purificado por cromatografia flash numa coluna de 120 g de sílica gel usando um gradiente de acetato de etila em hexano (5-75%) para produzir 1,2 g (3,61 mmol, 44%) de 105 na forma de óleo claro cujos espectros são consistentes com uma mistura de anômeros. 1H NMR (400 MHz, CDCI3) δ 6,41 (d, J=4,8 Hz), 6,03 (d, J=1,2 Hz), 5,75 (d, J=0.8Hz), 5,49 (d, J=5,2 Hz), 4,37-4,45 (m), 4,2-4,29 (m), 2,03-2,135 (m), 1,637 S), 1,624 (s).
[00294] Etapa 2: Preparação de 5-Amino-3-(3’-metil,2’,3’,5’-tri-O-acetil- β-D- xilofuranosil)-3H-tiazol[4, 5-d]pirimidina-2-ona (103)
[00295] De maneira similar ao Exemplo 23, Etapa 1, usando uma mistura de 1,2,3,5 tetra-O-acetil-3- metil D-xilofuranose α e β (105), produziu-se 170 mg (28%) de 103 na forma de sólido branco: 1H NMR (400 MHz DMSO-d6) δ 1,57 (s, 3H), 2,03 (s, 6H), 2,07 (s, 3H), 4,04 (dd, J=8,0, 2,8 Hz, 1H), 4,24 (m, 1H), 4,41 (dd, J=12,0, 2,8 Hz, 1H), 5,73 (d, J=4,8 Hz, 1H), 6,24 (d, J=4.4 Hz, 1H), 6,89 (br s, 2H), 8,36 (s, 1H); MS (ESI) [(M + H)+] encontrado 441,08. Análise de elementos para (C17H20N4O8S.0,3H2O): C, 45,80; H, 4,66; N, 12,57. Encontrado C, 45,84; H, 4,50; N, 12,47. Exemplo 35 Preparação de 5 -Ammo-3-(5’-(1,2-diacetoxi-etl),2’,3’-di-O-acetil-β-D- glucofuranosil)-3H-tiazol[4,5-d]pirimidina-2-ona (106)
Figure img0098
[00296] A mistura necessária de açúcar e penta-O-acetilglucofuranose (108) foi preparada como descrito abaixo:
Figure img0099
[00297] Etapa 1: Pemta-O-acetilglucofuramose (108)
[00298] l,2-0-Isopropilidma-α-D-glucofranose (107) (5 g, 22,7 mmol) foi dissolvida em ácido acético (180 ml) e anidrido acético (21,5 ml), resfriada num banho de água fria, ácido sulfúrico (0,02 ml, 98%) foia dicionado e a mistura agitada por 24 horas à temperatura ambiente. A mistura foi despejada em 500 g de gelo, água foi adicionada e isso foi extraído quatro vezes com cloreto de metileno. As partes orgânicas foram combinadas, lavadas duas vezes com bicarbonato de sódio saturado, secadas (MgSO4), e filtradas para produzir um resíduo oleoso. Este foi purificado numa coluna de 120 g de sílica gel usando um gradiente de acetato de etila em hexano (20-100%) para produzir 5,33g (13,66 mmol, 60%) de 18 na forma de óleo cujos espectros são consistentes com uma mistura de anômeros. 1H NMR (400 MHz, CDCI3) δ 6,41 (d, J=3,6Hz), 6,12 (s), 5,58 (m), 5,41 (d, J=3,6Hz), 5,20-5,37 (m), 4,56-4,62 (m), 4,02-4,18 (m), 2,00-2,13 (m).
[00299] Etapa 2: Preparação de 5-Amino-3-(5’-(1,2-diacetoxi-etil),2’,3’- di-O-acetil-β-D- glucofuranosil)-3H-tiazol[4,5-d]pirimidina-2-ona (106)
[00300] De maneira similar ao Exemplo 23, etapa 1, usando penta-O- acetilglucofuranose (108), produziu-se 80 mg (9%) de 106 na forma de sólido branco: 1H NMR (400 MHz CDCl3) δ 2,07 (s, 6H), 2,09 (s, 3H), 2,14 (s, 3H), 4,03-4,07 (m, 1H), 4,47 (dd, J=6,4, 2 Hz, 1H), 4,67 (dd, J=12,4, 2,0 Hz, 1H), 5,31 (br s, 2H), 5,58-5,6 (m, 1H), 5,68 (m 1H), 5,97 (d, J=5,6 Hz, 1H), 6,10 (dd, J=3,6, 2 Hz, 1H), 8,16 (s, 1H); MS (ESI [(M+H)+] encontrado 499,40. Análise de elementos para (C19H22N4O10S.O,1IPA): C, 45,95; H, 4,56; N, 11,11. Encontrado C, 45,92; H, 4,76; N, 10,80.Exemplo 36 Preparação de 5-A mino-3-(3’-acetoximetil-, 2’,3’,5’-tri-O-acetil-β-D- xilofuranosil)-3H-tiazol[4,5-d]pirimidina-2-ona (109)
Figure img0100
[00301] A mistura necessária de açúcar e tetra-O-acetil-3- acetoximetil-D-xilofuranos α e β (113) foi preparada como descrito abaixo:
Figure img0101
[00302] Etapa 1: l,2-O-isopropilidfeno-3(S)-(hidroxi-hidroximetil)-D-xilofuranose (111)
[00303] O epóxido 110 [preparado como descrito por Lu e Just;Tetrahedron Letters, 41 (2000) 9223-9227] (1,68 g, 8,3 mmol) foi dissolvido em dioxana (9 ml) e foi adicionado NaOH 1,0 M. (16,6 ml, 16,6 mmol) e a reação aquecida a 50 graus por 30 minutos. A reação foi resfriada até temperatura ambiente, 16,6 ml de HCl 1,0 M e foram adicionados 100 ml de etanol absoluto, agitados por 5 minutos a a mistura evaporada sob vácuo para produzir um sólido. O sólido foi ressuspenso em 200 ml de CH2Cl2 e sonicado para produzir uma suspensão muito fina de sólido. Esta foi secada (MgSO4), filtrada por Celite e evaporada para produzir 111 na forma de óleo espesso (1,81 grams, 8,22 mmol, 99%). 1H NMR (400 MHz CDCI3) δ 5,94 (d, J=3,6Hz, 1H), 4.4 (d, J=4Hz, 2H), 4,03 (m, 2H), 3,83 (d, J=11,6, 1H), 3,78 (d,J=12Hz, 1H), 2,66 (bs, 2H, OH), 1,7 (bs, 1H, OH), 1,52 (s, 3H), 1,33 (s, 3H).
[00304] Etapa 2: 1,2-O-isopropilideno-3-(acetoxi-metilacetoxi)-5-O-acetil-D-xilofuranose (112)
[00305] O triol 111 (1,81g, 8,22 mmol) foi dissolvido em piridina (30ml) foi adicionado anidrido acético (7,75 ml, 82 mmol) seguido de DMAP (50 mg) e essa mistura foi agitada por 72 horas. Os voláteis foram evaporados sob vácuo e o resíduo particionado entre cloreto de metileno e cloreto de amônia saturado. A fase aquosa foi extraída mais duas vezes com cloreto de metileno e as partes orgânicas foram combinadas, secadas (MgSO4), filtradas e o solvente evaporado para produzir 2,83 g de óleo. O resíduo foi purificado por cromatografia flash numa coluna de 120 g de sílica gel usando um gradiente de acetato de etila em hexano (10-80%) para produzir 1,82 g (5,26 mmol, 64%) de 112 na forma de óleo claro. 1H NMR (400 MHz CDCl3) δ 5,92 (d, J=3,6Hz, 1H), 5,02 (m, 2H), 4,51-4,58 (m, 2H), 4,35 (dd, J=8,4Hz, J=2,8Hz, 1H), 4,16-4,22 (m, 1H), 2,10 (s, 3H), 2,09 (s, 3H), 2,08 (s, 3H), 1,53 (s, 3H), 1,32 (s, 3H).
[00306] Etapa 3: Mistura de tetra-O-acetil-3-(acetoximetil)-D-xilofuranose, a e β (113)
[00307] O triacetato 112 (1,74 g, 5,01 mmol) foi dissolvido em ácido acético (45 ml), anidrido acético foi adicionado (2.37 ml, 25 mmol) seguido de ácido sulfúrico em ácido acético (0,5 ml de uma solução 1,0 M, 0.5 mmol) e essa mistura foi agitada durante pernoite à temperatura ambiente. A reação foi diluída com cloreto de metileno (70 ml) e lavada com água. A camade água foi extraída duas vezes com cloreto de metileno. As partes orgânicas foramcombinadas, transferidas para um bequer grande e bicarbonato de sódio saturado foi adicionado. A isso foi adicionado bicarbonato de sódio sólido até que nenhum borbulho fosse mais observado. Separe a fase orgânica, extraia a fase aquosa com cloreto de metileno, combine as fases orgânicas e seque (MgSO4), filtre e evapora para produzir um óleo que foi levado ainda mais à secura com tolueno para produzir 113 na forma de óleo claro (1,91 g, 3,89mmol, 97%) cujo NMR é consistente com uma mistura de anômeros. 1H NMR (400 MHz CDCh) δ 6,42 (d, J=4,4Hz), 6,05 (d, J= 1,6Hz), 5,79 (d, J= 1,6Hz), 5,5 (d, J=4,4Hz), 4,89-4,93 (m), 4,12-4,58 (m), 2,04-2,2 (muitos singletos).
[00308] Etapa 4: Preparação de 5-Amino-3-(3’-acetoximetil-, 2’,3’,5’-tri- O-acetil-[β-D- xilofuranosil)-3H-tiazol[4, 5-d]pirimidina-2-ona (109)
[00309] De maneira similar ao Exemplo 23, Etapa 1, usando uma mistura de tetra-O-acetil-3-acetoximetil-D-xilofuranos α e β (113), produziu-se 272 mg (37 %) de 109 na forma de sólido branco: 1H NMR (400 MHz DMSO-d6) δ 2,03 (s, 3H), 2,05 (s, 3H), 2,07 (s, 3H), 2,09 (s, 3H), 4,20 (m, 1H), 4,44-4,57 (m, 3H), 4,79 (d, J=12,4 Hz, 1H), 5,84 (d, J=5,6 Hz, 1H), 6,38 (d, J=6 Hz, 1H), 6,87 (br s, 2H), 8,37 (s, 1H); MS (ESI) [(M+H)+] encontrado 499,12. Análise de elementos para (C19H22N4O10S.0,1H2O): C, 45,61; H, 4,47; N, 11,20. Encontrado C, 45,93; H, 4,44; N, 10,83.Exemplo 37 Preparação de 5-Ammo-3-(2’,3’,5’-tri-O-acetil-β-D -xilofuranosil)-3H-tiazol[4,5-d]pirimidina-2-ona (114)
Figure img0102
[00310] Etapa 1: Preparação de 5-Ammo-3-(2’,3’,5’-tri-O-acetil-β-D-xilofuranosil)-3H-tiazol[4, 5-d]pirimidina-2-ona (114)
[00311] De maneira similar ao Exemplo 23, Etapa 1, usando tetra-O- acetilxilofuranose disponível comercialmente, produziu-se 110 mg (14%) de 114 na forma de sólido branco: 1H NMR (400 MHz CDCI3) δ 2,08 (s, 3H), 2,10 (s, 3H), 2,18 (s, 3H), 4,42-4,45 (m, 2H), 4,52-4,56 (m, 1H), 5,13 (br s, 2H), 5,49 (dd, J=3,6, 2,4 Hz, 1H), 6,00 (d, J=5,2 Hz, 1H), 6,22 (dd, J=4, 1,6 Hz, 1H), 8,15 (s, 1H); MS (ESI) [ (M+H) +] encontrado 426,93. Análise de elementos para (C16H18N4O8S): C, 45,07; H, 4,25; N, 13,14. Encontrado C, 44,86; H, 4,17; N, 13,05.Exemplo 38 5-Ammo-3-(3’-C-metil-β-D-ribofuranosil)tiazol[4,5-d] pirimidima-2,7(3H,6H)-dioma (117)
Figure img0103
[00312] Etapa l) Preparação de 5-Amimo-3-(3’-O-acetil-2’,5’-di-O-bemzoil- 3’-C-metil-β-D-ribofuranosil)tiazol[4,5-d]pirimidina-2,7(3H,6H)-diona (116)
Figure img0104
[00313] Foram misturados vigorosamente 5-amino-3H,6H-tiazol[4,5- d]pi-rimidina (116 mg, 0,631 mmol), 3’-C-metil-ribfuranose 11 (272 mg, 0.598 mmol) [preparado de acordo com o método de Giradet e colaboradores, J. Med. Chem. 2000, 43, 3704-3713], BSA (0,462 ml, 1,89 mmol) e acetonitrila (5 mL) à temperatura ambiente por 40 min. Quando se obteve uma solução homogênea, a reação foi carregada com TMSOTf (0,171 mL, 210 mg). Então, a reação foi aquecida até 60°C. Após 1 h, o solvente foi removido por evaporação rotativa. O sólido resultante foi dissolvido em acetato de etila (10 mL) e extraído com bicarbonato de sódio saturado (2 x 5 mL). A fase aquosa foi, então, extraída de volta com acetato de etila (5 mL) e as camadas orgânicas foram combinadas. Uma impureza sólida prontamente precipitou-se para for a da fase orgânica, isso foi filtrado e descartado. A fase orgânica foi concentrada e o sólido resultante triturado em éter (5 mL) produzindo 167 mg (45%) de um sólido marrom-claro: 1H NMR (400 MHz d6-DMSO) δ 12,2 (br s, 1H), 8,01 (m, 4H), 7,83 (m, 2H), 7,53 (m, 4H), 7,28 (br s, 2H), 6,4 (m, 1H), 6,02 (m, 1H), 4,82-4,67 (m, 2H), 3,38 (s, 1H), 2,01(s, 3H), 1,98 (s, 3H); [M+H]+ m/z 581.
[00314] Etapa 2) Preparação de 5-Amino-3-(3’-C-metil-β-D-ribofuranosil)tiazol[4,5-d]pirimidina-2,7(3H,6H)-diona (117)
Figure img0105
[00315] O triéster de nucleosídeo 116 (100 mg, 0,172 mmol) foi dissolvido em metanol (5 mL) e K2CO3 (28,6 mg, 0,207 mmol) foi adicionado. A reação progrediu por 16 h. A reação foi neutralizada com ácido acético (24,8 mg, 0,412 mmol). Então, o solvente foi removido por vácuo rotatório e o sólido submetido à purificação por HPLC (MeCN-H2O), produzindo 42 mg (74%) de sólido branco: 1H NMR (400 MHz d6-DMSO) δ 11,20 (s, 1H), 6,89 (br s, 2H), 5,80 (d, J=8,0, 1H), 5,36 (d, J=6,0, 1H), 4.77 (t, J=8,0, 1H), 4,62 (s, 1H), 4,48 (m, 1H), 3.75 (m, 1H), 3,58-3,44 (m, 2H), 1,19 (s, 3H); Análise calculada para C14H14N4O6S.0,125 H2O.0,125 HCO2H: C, 39,33; H, 4,34; N, 16,43; S, 9,40. Encontrado: C, 39,77; H, 4,81; N, 15,02; S, 9,69; [M+H]+ m/z 331.Exemplo 39 5-Amino-3-(2’-C-metil-β-D-ribofuranosil)-3H,6H-tiazol[4,5-d]pirimidina-2,7-diona (120)
Figure img0106
[00316] Etapa 1) Preparação de 5-Amino-3-(2’,3’,5’-tri-O-benzoil-2’-C-metil-β-D-ribofuranosil)-3H,6H-tiazol[4,5-]pirimidina-2, 7-diona (119)
Figure img0107
[00317] A uma suspensão de heterociclo 4 (268 mg, 1,44 mmol) em MeCN anidro (8 mL) à temperatura ambiente foi adicionado BSA (971 uL, 3,93 mmol). A mistura resultante fo aquecida até 80°C por 2,5 h, quando, então, foi adicionada 2-C-metil-β-D-ribofuranose 118 [preparada de acordo com Wolfe e colaboradores, J. Org. Chem. 1997, 62, 1754-1759] (760 mg, 1,31 mmol) na forma de solução em MeCN (6 mL). A essa mistura foi adicionado SnCl4 (276 uL, 2,35 mmol), e a agitação a 80°C continuou por mais 1,5 h. A análise por TLC com MeOH-CHCl3 10% indicou que a reação estava completa. A mistura foi resfriada até à temperatura ambiente, diluída com EtOAc (150 mL) e particionada com uma mistura 1:1 (100 mL) de salmoura-NaHCO3. A fase aquosa foi extraída ainda mais com EtOAc (50 mL) e as fases orgânicas combinadas foram secadas em Na2SO4, filtradas e concentradas. O resíduo foi submetido a HPLC (SiO2, MeOH-DCM 0-4%) para produzir 353 mg (42%) de um sólido branco: 1H NMR (400 MHz DMSO-d6) δ 11,3 (br s, 1H), 7,938,08 (br m, 3 H), 7,85-7,87 (m, 2 H), 7,33-7,66 (m, 10 H), 6,97 (br s, 2H), 6,64 (s, 1H), 6,16-6,26 (br m, 1H), 4,56-4,79 (br m, 3H), 1,79 (s, 3H); M+ m/z 642.
[00318] Etapa 2) Preparação de 5-Amino-3-(2’-C-metil-β-D-ribofuranosil)-3H,6H-tiazol[4,5-d]pirimidina-2,7-diona (120)
Figure img0108
[00319] A mistura de triéster de nucleosídeo 119 (209 mg, 0,325 mmol) e MeOH (10 mL) saturado com NH3 (g) a -30°C foi agitada num tubo selado por 48 h. A mistura foi aquecida até à temperatura ambiente, despressurizada, concentrada e, então, submetida à purificação por HPLC (MeCN-H2O), produzindo 36 mg (34%) do composto título na forma de sólido branco após liofilização: 1H NMR (400 MHz DMSO-d6) δ 11,18 (s, 1H), 6,92 (br s, 2H), 5,95 (s, 1H), 5,18-5,28 (br m, 1H), 4,75 (br s, 1H), 4,53 (dd, J=11,3, 5,46, 1H), 3,95 (br s, 1H), 3,73-3,78 (m, 1H), 3,29 (br s, 2H), 1.04 (s, 3H); [M+H]+ m/z 331.Exemplo 40 5-Ammo-3-(3’-deoxi-β-D-ribofuranosil)-3H, 6H-tiazol[4,5-d]pirimidina-2,7-diona (122)
Figure img0109
[00320] Etapa 1) Preparação de 5-Ammo-3-(2’,5’-di-O-acetil-3’-deoxi-β-D-ribofuranosil)- 3H,6H-tiazol[4,5-d]pirimidinae2,7-diona (121)
Figure img0110
[00321] A uma suspensão de heterociclo 6 (4,60 g, 25,0 mmol) e deoxiribofuranose 11B (5,42 g, 20,8 mmol) em MeCN (83 mL) à temperatura ambiente foi adicionado BSA (15,3 mL, 62,5 mmol). A mistura resultante foi imersa num banho de óleo a 40°C por 1,5 h, e TMSOTf (5,65 mL, 31,2 mmol) foi adicionado em gotas. A mistura de reação espessa foi imersa num banho de óleo a 80°C e agitada por 2,5 h, quando então ela foi concentrada por evaporação rotativa num resíduo que foi particionado entre EtOAc (300 mL) e tampão pH 7 (100 mL). A fase orgânica foi secada em Na2SO4 e concentrada num resíduo que foi triturado com EtOAc e então filtrado para produzir 2.31 g (29%) de um sólido branco fino. O filtrado foi concentrado num resíduo que foi submetido à cromatografia flash (SiO2, MeOH-DCM 0-6%) para produzir 1,12 g (14%) de um sólido amarelo-claro muito fino. No todo, houve uma produção combinada de 43% do nucleosídeo 121: 1H NMR (400 MHz DMSO-d6) δ 11,23 (s, 1H), 6,95 (br s, 2H), 5,79 (d, J=2,0, 1H), 5,59 (d, J=7.2, 1H), 4,28-4,34 (m, 1H), 4,22 (dd, J=3,2, 12,0, 1H), 3,99 (dd, J=6,4, 11,6, 1H), 2,56-2,65 (m, 1H), 2,04 (s, 3H), 1,98 (s, 3H), 1,97-2,04 (m, 1H); [M+H]+ m/z 384,8. Análise calculada para: C14H16N4O7S.0,5 H2O: C, 42,74; H, 4,36; N, 14.24; S, 8.15. Encontrado: C, 42,72; H, 4,22; N, 14,15; S, 8,19.
[00322] Etapa 2) Preparação de 5-Ammo-3-(3’-deoxi-β-D-ribofuranosil)- 3H,6H-tiazol[4,5-d]pirimidina-2,7-diona (122)
Figure img0111
[00323] A uma suspensão de diéster de nucleosídeo 121 (1,91 g, 4,97 mmol) em MeOH (50 mL) à temperatura ambiente foi adicionado K2CO3 (820 mg, 5,97 mmol). A mistura de reação foi agitada por 18 h, interrompida com HOAc (0,68 mL, 12 mmol), agitada por 30 min, e finalmente concentrada via evaporação rotativa. O resíduo foi azeotropado com tolueno (3 x 50 mL) e então triturado com água (250 mL). O material sólido foi filtrado, lavado com água (2 x 250 mL), secado no ar, triturado com éter (250 mL), e filtrado para produzir 1,17 g (62%) do nucleosídeo 122 na forma de sólido quase branco: 1H NMR (400 MHz DMSO-d6) δ 6 11,26 (br s, 1H), 6,93 (br s, 1H) 7,14 (d, J=2,4, 1H), 5,39 (d, J=4,4, 1H), 4,74-4,79 (m, 1H), 4,65 (t, J=5,6, 1H), 4,09-4,16 (m, 1H), 3,41-3,43 (m, 2H), 2,23-2,30 (m, 1H), 1,78 (ddd, J=2,4, 6,4, 8,4, 1H) 1,761,81 (m, 1H); [M+H]+ m/z 301.5. Análise calculada para:C10H12N4O5S.1,25 H2O: C, 37,20; H, 4,53; N, 17,36; S, 9,93. Encontrado: C, 37,06; H, 4,27; N, 17,14; S, 9,84. Exemplo 41 5-Amino-3-(2’-deoxi-β-D-ribofuranosil)-3H, 6H- tiazol[4, 5-d]pirimidina-2,7-diona (130)
Figure img0112
[00324] Etapa 1) Preparação de 5-N-Acetil-ammo-3-(β-D-ri.bofuranosil)- 3H,6H- tiazol[4, 5-d]pirimidina-2, 7-diona
Figure img0113
[00325] A uma suspensão de tetracetato de isatoribina 123 [CAS # 533897-42-6, preparada de acordo com Webber e colaboradores, Patente US 6.924.271] (12,3 g, 25,4 mmol) em MeOH (180 mL) foi adiconado NH4OH concentrado (180 mL). A mistura resultante foi agitada por 1 h, quando, então, foi concentrada e submetida à cromatografia flash (SiO2, IPA-CHCl3 15-30%) para produzir 2,50 g (27%) de acetamida 124 na forma de sólido branco: [M+H]+ m/z 359.
[00326] Etapa 2) Preparação de 5-N-Acetil-amino-3-(5’-O-tert-butildimetilsilil-β-D-ribofuranosil)-3H,6H-tiazol[4,5-d]pirimidina-2,7-diona
Figure img0114
[00327] A uma solução de triol 124 (2,48 g, 6,93 mmol) em DMF (15 mL) foram adicionados sequencialmente imidazol (943 mg, 13,9 mmol) e TBSCl (1,04 g, 6,93 mmol) à temperatura ambiente. A mistura resultante foi agitada por 1 h, diluída com EtOAc (300 mL) e extraída com água (2 x 100 mL) e depois salmoura (100 mL). A fase orgânica foi secada em Na2SO4, concentrada e triturada com éter para produzir 2,18 g (67%) de siloxano 125 na forma de sólido quase branco: 1H NMR (400 MHz DMSO- d6) δ 12,16 (br s, 1H), 11,81 (br s, 1H), 5,81 (d, J=4,77, 1H), 5,34 (d, J=5,13, 1H), 5,03 (d, J=5,50, 1H), 4,79 (dd, J=10,3, 5,13, 1H), 4,13 (dd, J=10,6, 5,5, 1H), 3,71-3,78 (m, 2H), 3,40-3,64 (m, 1H), 2,18 (s, 3H), 0,84 (s, 9H), 0.00 (s, 6H); [M+H]+ m/z 473.
[00328] Etapa 3) Preparação de 5-N-Acetil-amino-3-(5’-O-tert- butildimetilsilil-2’,3’-tioxo-β-D-ribofuranosil)-3H,6H-tiazol[4,5-d]pirimidina- 2,7-diona
Figure img0115
[00329] A uma solução de diol 125 (1,00 g, 2,12 mmol) em MeCN (50 mL) foi adicionado TCDI (754 mg, 4,23 mmol). A mistura resultante foi agitada por 18 h, quando foi, então, concentrada, submetida à cromatografia flash (SiO2, EtOAc-CHCl3 40%) e triturada com éter para produzir 730 mg (67%) de um sólido branco: 1H NMR (400 MHz DMSO- d6) δ 12,18 (br s, 1H), 11,75 (br s, 1H), 6,21-6,24 (m, 2H), 5,79 (br s, 1H), 4,35 (br s, 1H), 3,72 (br d, J=6,6, 2H), 2,21 (s, 3H), 0,84 (s, 9H), 0.01 (s, 6H); [M+H]+ m/z 515.
[00330] Etapa 4) Preparação de 5-N-Acetil-amino-3-(5’-O-tert- butildimetilsilil-2’-deoxi-β-D-ribofuranosil)-3H,6H-tiazol[4,5-d]pirimidina- 2,7-diona
Figure img0116
[00331] A uma suspensão de tiocarbonato 126 (712 mg, 1,38 mmol) and Bu3SnH (2,66 mL, 10,0 mmol) em tolueno anidro (140 mL) foi adicionado AIBN (30 mg, 0,18 mmol) à temperatura ambiente. A mistura foi imersa num banho de óleo 130°C por 15 minutos e então removida, resfriada, concentrada e submetida à cromatografia flash (SiO2, EtOAc- CHCl3 80-100%) para produzir 450 mg (71%) de uma mistura (2:1) de 2’- deoxi and 3’-deoxi regioisômeros (principal isômero relatado): 1H NMR (400 MHz DMSO-d6) δ 12,12 (br s, 1H), 11,82 (br s, 1H), 6,26 (t, J=7,0, 1H), 5,22 (d, J=4,0, 1H), 4,31-4,34 (m, 1H), 3,69-3,75 (m, 2H), 3,57-3,62 (m, 1H), 2,93-2,99 (m, 1H), 2,18 (s, 3H), 2,00- 2,18 (m, 1H), 0,84 (s, 9H), 0.00 (s, 6H); [M+H]+ m/z 457.
[00332] Etapa 5) Preparação de 5-N-Acetil-ammo-3-(2’-deoxi-β-D-ribofuranosil)-3H,6H-tiazol[4,5-d]pirimidina-2,7-diona
Figure img0117
[00333] A uma suspensão de regioisômeros (744 mg, 1,60 mmol) da Etapa 4 (acima) em MeCN (30 mL) à temperatura ambiente foi adicionado HF aquoso 48% (1,67 mL). A mistura de reação foi agitada por 1 h, quando, então, foi concentrada num resíduo púrpura que foi submetido à cromatografia flash (SiO2, MeOH-DCM 1,5-15%), produzindo 503 mg (92%) de uma mistura de regioisômeros que foi ainda mais purificada via HPLC (MeCN- H2O) para produzir 169 mg (31%) de nucleosídeo 129 na forma de sólido branco após liofilização: 1H NMR (400 MHz DMSO-d6) δ 12,14 (s, 1H), 11,85 (s, 1H), 6,26 (t, /=7,0, 1H), 4,30-4,32 (m, 1H), 3,69-3,71 (m, 1H), 3,38-3,53 (m, 4H), 2,92-2,98 (m, 1H), 2,19 (s, 3H), 1,97-2,03 (s, 1H); [M+H]+ m/z 343.
[00334] Etapa 6) Preparação de 5-Ammo-3-(2’-deoxi-β-D-ribofuranosil)-3H,6H-tiazol[4,5-d]pirimidina-2,7-diona
Figure img0118
[00335] A uma solução of acetamida 129 (169 mg, 0,494 mmol) em MeOH (10 mL) foi adicionado K2CO3 (158 mg, 1.14 mmol) à temperatura ambiente. A mistura resultante foi agitada por 8 h, quando, então, foi interrompida com HOAc (137 μL, 2,40 mmol), concentrada e submetida a HPLC (MeCN-H2O) para produzir 125 mg (84%) do composto título 130 na forma de sólido branco após liofilização: 1H NMR (400 MHz DMSO-d6) δ 11,16 (s, 1H), 6.90 (br s, 2H), 6,22 (t, J=7,0, 1H), 4,27-4,31 (m, 1H), 3,67-3,71 (m, 1H), 3,52 (dd, J=11,3, 5,5, 1H), 3,40 (dd, J=11,7, 6,2, 1H), 2,86-2,93 (m, 1H), 1,97 (ddd, J=12,9, 7,0, 3,5, 1H); [M+H]+ m/z 301.Análise calculada para C10H12N4O5S.H2O: C, 37,73; H, 4,43; N, 17,60; S, 10,07. Encontrado: C, 38,13; H, 4,27; N, 17,40; S, 9,89. Esquema 7
Figure img0119
Exemplo 42 Preparação de 5-Amino-3-(3’-deoxi-3 -metiiideno-β-D- ribofuranosil)-3H,6H-tiazol[4,5-d]pirimidina-2,7-diona (132)
Figure img0120
[00336] Etapa 1: Preparação de 5-Amino-3-(2’-O-acetii-5’-O-benzoii-3’- deoxi-3 ‘metilideno-β-D-riboUranosi))-3H6H-tiazo[[4,5-d]pirimidina-2,7- diona (131)
Figure img0121
[00337] l,2-di-O-acetil-5-O-benzoil-3-deoxi-3-metilideno-α,β-D-ribofuranose (127) (132 mg, 0,39 mmol) [preparado de acordo com o método de Girardet e colaboradores, J. Med. Chem. 2000, 43, 3704-3713] foi dissolvida em acetonitrila (5 mL) à temperatura ambiente. 5-Amino- 3H,6H-tiazol[4,5-d]pirimidina-2,7-diona (1) (73 mg, 0,39 mmol) foi adicionada, e a mistura was foi, então, agitada por 0,5 h antes de ser aquecida até 40°C. Após 5 minutos a 40°C, BSA (0,29 mL, 1,18 mmol) foi adicionado e a mistura foi agitada por mais 0,5 h. A mistura foi, então, aquecida até 80°C. TMSOTf (0,107 mL, 0,59 mmol) foi adicionado e a reação foi agitada por 3-4 horas a 80°C. Quando completada, permitiu- se que a reação esfriasse até a temperatura ambiente e então fosse interrompida por um tampão pH 7.0 (K2HPO4 1,0 M e NaH2PO4 1,0 M, 2 ml). A mistura foi extraída com CH2Cl2 (3 x 10 mL). As camadas orgânicas combinadas foram lavadas com salmoura, secadas com Na2SO4, e concentradas sob vácuo. O produto bruto foi purificado por cromatografia em coluna (SiO2, MeOH-CH2Cl2 0-10%) para produzir 23 mg (13%) de 131 na forma de sólido amarelo-claro: 1H NMR (400 MHz CDCh) δ 69,85 (s, 1H), 8,03 (d, J=8, 2H), 7,54 (m, 1H), 7,417 (t, J=8, 2H), 6,50 (s, 2H), 6,07 (d, J=4,8, 1H), 5,73 (m, 1H), 5,37 (d, J=32, 2H), 4.83 (m, 2H), 4,46 (m, 1H), 2,00 (s, 3H); [M+H]+ 459,3; Análise de elementos para C20H18N4O7S.0,7EtOAc: calculado: C, 52,65; H, 4,57; N, 10,77; S, 6,16; encontrado: C, 53,59; H, 4,57; N, 10,83; S, 6,17.
[00338] Etapa 2: Preparação de (3’S)-5-Amino-3-(3’-deoxi-3’-metilideno-β-D-ribofuranosil)-3H,6H-tiazol[4,5-d]pirimidina-2,7-diona (132)
[00339] (3’S) -5-Amino-3- (3’-acetoximetil-2’,5’-di-O-acetil-3’-deoxi-β-D- ribofuranosil)-3H-tiazol[4,5-d]pirimidina-2-ona 131 (113 mg, 0,25 mmol) foi dissolvida em metanol (5 mL) à temperatura ambiente. Foi adicionado carbonato de potássio (38 mg, 0,27 mmol) e a mistura foi agitada à temperatura ambiente durante o pernoite. Quando completada, ácido acético foi adicionado (34 μL) e a mistura foi agitada por mais 30 minutos à temperatura ambiente. A mistura foi concentrada, purificada por HPLC, e então triturada por EtOAc para produzir 49 mg (64%) de 132 na forma de sólido branco: 1H NMR (400 MHz DMSO-d6) δ 11,563 (s, 1H), 6,82 (s, 2H), 5,80 (m, 1H), 5,62 (m, 1H), 5,16 (d, J=14,4, 2H), 4,51 (m, 1H), 3,53 (m, 2H), 1,89 (s, 2H); [M+H]+ 313,07. Exemplo 43 Preparação de 5-Amino-3-{2’,3’,5’-tri-hidroxi-β-D-xilofuranosil)-3H,6H-tiazol[4,5-d]pirimidina-2-ona (134)
Figure img0122
[00340] Etapa 1: Preparação de 5-Amino-3 -(2’,3’,5’-tri-O -acetil- β-D- xilofuranosil)-3H,6H-tiazol[4,5-d]pirimidina-2-ona (133)
Figure img0123
[00341] De maneira similar ao Exemplo 42, Etapa 1, usando tetra-O- acetilxilofuranose disponível comercialmente, foram gerados 740 mg do composto título 133 com produção de 20% na forma de sólido branco: 1H NMR (400 MHz DMSO-d6) δ 11,32 (s, 1H), 6,98 (br s, 2H), 6,09 (dd, J=8.6, 2,3 Hz, 1H), 5,76 (d, J=5,5 Hz, 1H), 5,38 (dd, J=8,6, 2,3 Hz, 1H), 4,14 (m, 1H), 4,26 (m, 1H), 4.16 (m, 1H), 2,08 (s, 3H), 2,04 (s, 3H), 2.00 (s, 3H); [M+H]+ 442,8; Análise de elementos para C16H18N4O9S.1,0H2O: calculado: C, 41,74; H, 4,38; N, 12,17; encontrado: C, 41,92; H, 4,23; N, 11,71.
[00342] Etapa 2: Preparação de 5-Amino-3-(2’,3’,5’-tri-hidroxi-β-D-xilofuranosil)-3H,6H-tiazol[4,5-d]pirimidina-2-ona (134)
[00343] De maneira similar ao Exemplo 42, Etapa 2, foram gerados 43 mg do composto título 134 com uma produção de 67% na forma de sólido branco: 1H NMR (400 MHz DMSO-d6) δ 11,24 (br s, 1H), 6,86 (br s, 2H), 5,60 (d, J=4,68 Hz, 1H), 5,57 (d, J=4,68 Hz, 1H), 5,04 (d, J=7,8 Hz, 1H), 4,64 (m, 1H), 4,41 (m, 1H), 3,87 (m, 2H), 3,54 (m, 2H); [MH-H]+ 316,9; Análise de elementos para C11H14N4O5S.1,3H2O: calculado: C, 35,35; H, 4,33; N, 16,49; encontrado: C, 35,73; H, 4,21; N, 16,15.Exemplo 44 Preparação de 5-Amino-3-(3’-(R)-octiloxi-β-D-xiloJuranosil)-3H,6H- tiazol[4, 5-d]pirimidina-2-ona (135)
Figure img0124
[00344] A mistura necessária de açúcar, ácido acético e l,2,5-tri-O- acetil-3(S)-octiloxi-D-xilofuranose α e β (94) foi preparada como descrito no Exemplo 31.
[00345] Etapa 1: Preparação de 5-Ammo-3-(3’-(R)-octiloxi-β-D-xilofuranosil)-3H,6H-tiazol[4,5-d]pirimidina-2-ona (135)
[00346] De maneira similar ao Exemplo 42, Etapa 1, foram geradas 18,8 mg do composto título 135 a partir da mistura de ácido acético e l,2,5-tri-O-acetil-3(S)-octiloxi-D-xilofuranose α e β (94) com uma produção de 2% na forma de sólido branco: 1H NMR (400 MHz DMSO-d6) δ 11,21 (s, 1H), 6,94 (br s, 2H), 6,12 (m, 1H), 5,74 (d, J=6,2 Hz, 1H), 4,30 (m, 3H), 4,16 (m, 1H), 3,57 (m, 1H), 3,41 (m, 1H), 2,02 (d, J=8,6 Hz, 6H), 1,50 (m, 2H), 1,26 (m, 10H), 0,86 (m, 3H); [M+H]+ 512,9; Análise de elementos para C22H32N4O8S: calculado: C, 51,55; H, 6,29; N, 10,93; encontrado: C, 51,47; H, 6,37; N, 10,77. Exemplo 45 Preparação de 5-Amino-3-(3’-(R)-Metoxi-β-D-xilofuranosil)-3H,6H- tiazol[4,5-d]pirimidina-2-ona (137)
Figure img0125
[00347] A mistura necessária de açúcar, ácido acético e l,2,5-tri-O- acetil-3)-metoxi-D-xilofuranose α e β (91) foi preparada como descrito no Exemplo 30.
[00348] Etapa 1: Preparação de 5-Amino-3-(3’-(R)-Metoxi-β-D-xilofuranosil)-3H,6H-tiazol[4,5-d]pirimidina-2-ona (136)
Figure img0126
[00349] De maneira similar ao Exemplo 42, Etapa 1, foram geradas 230 mg do composto título 136 a partir da mistura de ácido acético e l,2,5-tri-O-acetil-3)-metoxi-D-xilofuranose α e β (91) com produção de 31% na forma de sólido branco: 1H NMR (400 MHz DMSO-d6) δ 11,21 (s, 1H), 6,94 (br s, 2H), 6,14 (m, 1H), 5,74 (d, J=6,2 Hz, 1H), 4,33 (m, 2H), 4,18 (m, 2H), 3,35 (s, 3H), 3,30 (s, 3H), 2,04 (s, 3H), 2,01 (s, 3H); [M+H]+ 414,8; Análise de elementos para C15H18N4O8S: calculado: C, 43,48; H, 4,38; N, 13,52; encontrado: C, 43,12; H, 4,36; N, 13,17.
[00350] Etapa 2: Preparação de 5-Amino-3-(3’-(R)-Metoxi-[β-D-xilofuranosil)-3H,6H-tiazol[4,5-d]pirimidina-2-ona (137)
[00351] De maneira similar ao Exemplo 42, Etapa 2, 43 mg do composto título 137 foram geradas com produção de 29% na forma de sólido branco: 1H NMR (400 MHz DMSO-d6) δ 11,50 (br s, 1H), 6,98 (br s, 2H), 5,68 (d, J=5,5 Hz, 1H), 5,60 (d, J=7,8 Hz, 1H), 5,10 (m, 1H), 4,48 (m, 1H), 4,08 (m, 1H), 3,84 (m, 1H), 3,57 (m, 2H), 3,35 (s, 3H); [M+H]+ 330,9; Análise de elementos para C11H14N4O6S.0,7H2O.0,1iPrOH: calculado: C, 38,89; H, 4,68; N, 16,06; encontrado: C, 38,78; H, 4,30; N, 15,84.Exemplo 46 Preparação de 5-Amino-3-(3’-(R)-(2-metoxi-etoxi),2’,5 -di-hidroxi-β-D- xilofuranosil)-3H,6H-tiazol[4,5-d]pirimidina-2-ona(139)
Figure img0127
[00352] A mistura necessária de açúcar, ácido acético e l,2,5-tri-O- acetil-3-(2-metoxi-etoxi)-D-xilofuranose α e β (98) foi preparada como descrito no Exemplo 32.
[00353] Etapa 1: Preparação de 5-Amino-3-(3’-(R)-(2-metoxi-etoxi), 2’,5’- di-O-acetil-β-D-xilofuranosil)-3H,6H-tiazol[4,5-d]pirimidina-2-ona (138)
Figure img0128
[00354] De maneira similar ao Exemplo 42, Etapa 1, 118 mg do composto título 138 foram geradas a partir da mistura de ácido acético e l,2,5-tri-O-acetil-3-(2-metoxi-etoxi)-D-xilofuranose α e β (98) com produção de 21% na forma de sólido branco: 1H NMR (400 MHz DMSO- d6) δ 11,23 (s, 1H), 6,90 (br s, 2H), 6,13 (m, 1H), 5,74 (d, J=6,24 Hz, 1H), 4,33 (m, 3H), 4,17 (m, 1H), 3,73 (m, 1H), 3,57 (m, 1H), 3,46 (m, 2H), 3,25 (s, 3H), 2,03 (s, 3H), 2,01 (s, 3H); [M+H]+ 459,3; Análise de elementos para C17H22N4O9S.0,3H2O.0,5EtOAc: calculado: C, 44,93; H, 5,28; N, 11,03; encontrado: C, 44,93; H, 5,01; N, 11,14.
[00355] Etapa 2: Preparação de 5-Amino-3-(3’-(R)-(2-metoxi-etoxi),2’,5’- di-hidroxi-β-D-xilofuranosil)-3H,6H-tiazol[4,5-d]pirimidma-2-ona (139)
[00356] De maneira similar ao Exemplo 42, Etapa 2, 43 mg do composto título 139 foram geradas com produção de 36% na forma de sólido branco: 1H NMR (400 MHz DMSO-d6) δ 11,44 (br s, 1H), 6,97 (br s, 2H), 5,67 (d, J=5,46 Hz, 1H), 5,60 (d, J=7.8 Hz, 1H), 5,10 (m, 1H), 4,39 (m, 1H), 4,08 (m, 1H), 3,98 (m, 1H), 3,71 (m, 1H), 3,59 (m, 3H), 3,45 (m, 2H), 3,27 (s, 3H); [M+H]+ 374,9; Análise de elementos para C13H18N4O7S.1,0H2O.0,25EtOAc: calculado: C, 40.57; H, 5.35; N, 13.52; encontrado: C, 40.81; H, 4.96; N, 13.40. Exemplo 47 Preparação de 5-Amino-3-(3’-(S)-metil,2’,3’,5’-tri-hidroxi-β-D- xilofuranosil)-3H,6H-tiazol[4,5-d]pirimidina-2-ona (141)
Figure img0129
[00357] A mistura necessária de açúcar e l,2,3,5-tetra-O-acetil-3(S)- metil D-xilofuranose α e β (105) foi preparada como descrito no Exemplo 34.
[00358] Etapa 1: Preparação de 5-Amino-3-(3’-(S)-metil,2’,3’,5’-tri-O- acetil-β-D-xttofuranosil)-3H,6H-tiazol[4,5-d]pirimidina-2-ona (140)
Figure img0130
[00359] De maneira similar ao Exemplo 42, Etapa 1, foram geradas 110 mg do composto título 140 a partir da mistura de 1,2,3,5 tetra-O- acetil-3(S)-metil D-xilofuranose α e β (105) com produção de 15% na forma de sólido branco: 1H NMR (400 MHz DMSO-d6) δ 11.27 (br s, 1H), 6,98 (br s, 2H), 6,25 (d, J=4,68 Hz, 1H), 5,77 (d, J=4,68 Hz, 1H), 4,40 (dd, J=9,4, 3,1 Hz, 1H), 4,22 (m, 1H), 3,68 (dd, J=4,7, 3,1 Hz, 1H), 2,08 (s, 3H), 2,04 (s, 3H), 2,02 (s, 3H), 1,56 (s, 3H); [M+H]+ 456,8; Análise de elementos para C17H20N4O9S.0,5H2O.0,2iPrOH: calculado: C, 44,27; H, 4,77; N, 11,73; encontrado: C, 44,45; H, 4,55; N, 11,62.
[00360] Etapa 2: Preparação de 5-Amino-3-(3’-(S)-metil,2’,3’,5’-tri- hidroxi-β-D-xilofuranosil)-3H,6H-tiazol[4,5-d]pirimidina-2-ona (141)
[00361] De maneira similar ao Exemplo 42, Etapa 2, foram geradas 31 mg do composto título 141 com produção de 54% na forma de sólido branco: 1H NMR (400 MHz DMSO-d6) δ 11,36 (br s, 1H), 6,94 (br s, 2H), 5,70 (d, J=5,46 Hz, 1H), 5,58 (d, J=4,7 Hz, 1H), 5,09 (br s, 1H), 4,48 (m, 2H), 3,59 (m, 3H), 1,17 (s, 3H); [M+H]+ 330,9; Análise de elementos para C11H14N4O6S.1,1H2O: calculado: C, 37,73; H, 4,66; N, 16,00; encontrado: C, 37,66; H, 4,22; N, 15,60.Exemplo 48 Preparação de 5-Amino-3-(5’-(1,2-diacetoxi-etil),2’,3’-di-hidroxi-β-D- glucofuranosil)-3H,6H-tiazol[4,5-d]pirimidina-2-ona (143)
Figure img0131
[00362] A mistura necessária de açúcar e penta-O-acetilglucofuranose (108)foi preparada como descrito no Exemplo 35.
[00363] Etapa 1: Preparação de 5-Amino-3-(5’-(l,2-diacetoxi-etil), 2’,3’- di-O-acetil-β-D-glucofuranosil)-3H,6H-tiazol[4,5-d]pirimidma-2-ona (142)
Figure img0132
[00364] De maneira similar ao Exemplo 42, Etapa 1, 100 mg do composto título 142 foram geradas a partir de penta-O- acetilglucofuranose (108) com produção de 10% na forma de sólido branco: 1H NMR (400 MHz CDCI3) δ 5,91 (m, 1H), 5,81 (br s, 2H), 5,73 (d, J=6,2 Hz, 1H), 5,51 (m, 1H), 5,41 (m, 1H), 4,55 (dd, J=12,5, 2,3 Hz, 1H), 4,29 (t, J=7,02 Hz, 1H), 3,90 (m, 1H), 1,96 (s, 3H), 1,93 (s, 3H), 1,90 (s, 3H), 1,55 (br s, 1H); [M+H]+ 515,3; Análise de elementos para C19H22N4O11S.0,15MeOH: calculado: C, 44,29; H, 4,39; N, 10,79; encontrado: C, 44,69; H, 4,44; N, 10,41.
[00365] Etapa 2: Preparação de 5-Amino-3-(5’-(l,2-diacetoxi-etil), 2’,3’- di-hidroxi-[β-D-glucofuranosil)-3H,6H-tiazol[4,5-d]pirimidina-2-ona (143)
[00366] De maneira similar ao Exemplo 42, Etapa 2, 45 mg do composto título 143 foram geradas com produção de 83% na forma de sólido branco: 1H NMR (400 MHz DMSO-d6) δ 11,34 (br s, 1H), 6,96 (br s, 2H), 5,72 (d, J=4,7 Hz, 1H), 5,63 (d, J=3.12 Hz, 1H), 5,11 (d, J=9,4 Hz, 1H), 4,56 (m, 2H), 4,39 (t, J=5,46 Hz, 1H), 3,96 (m, 1H), 3,74 (m, 2H), 3,51 (m, 1H), 3,36 (m, 1H); [M+H]+ 346,9; Análise de elementos para C11H14N4O7S.1,0H2O: calculado: C, 36,26; H, 4,43; N, 15,38; encontrado: C, 36,20; H, 4,37; N, 15,01. Exemplo 49 Preparação de 5-Amino-3-(3’-(S)-acetoximetil-,2’,3’,5’-tri-O-acetil-β-D- xilofuranosil)-3H,6H-tiazol[4,5-d]pirimidina-2-ona (144)
Figure img0133
[00367] A mistura necessária de açúcar e tetra-O-acetil-3- acetoximetil-D-xilofuranos (113) foi preparada como descrito no Exemplo 36.
[00368] Etapa 1: Preparação de 5-Amino-3-(3’-(S)-acetoximetil-,2’,3’,5’- tri-O-acetil-β-D-xilofuranosil)-3H,6H-ti.azol[4,5-d]pirimidma-2-ona (144)
[00369] De maneira similar ao Exemplo 42, Etapa 1, 80 mg do composto título 144 foram geradas a partir da mistura de tetra-O-acetil- 3-acetoximetil-D-xilofuranos α e β (113) com produção de 13% na forma de sólido branco: 1H NMR (400 MHz DMSO-d6) δ 11,23 (s, 1H), 6,93 (br s, 2H), 6,37 (d, J=5,46 Hz, 1H), 5,69 (d, J=5,46 Hz, 1H), 4,77 (d, J=11,7 Hz, 1H), 4,52 (m, 3H), 4,39 (dd, J=7,8, 1,6 Hz, 1H), 4,17 (dd J=7,8, 3,9 Hz, 1H), 2,08 (s, 3H), 2,06 (s, 3H), 2,05 (s, 3H), 2,03 (s, 3H); [M+H]+ 514,8; Análise de elementos para C19H22N4O11S: calculado: C, 44,36; H, 4,31; N, 10,89; encontrado: C, 44,16; H, 4,37; N, 10,69. Exemplo 50 Preparação de 5-Amino-3-(3’-(R)-Butoxi-β-D-xilofuranosil)- 3H,6H-tiazol[4,5-d]pirimidina-2-ona (146)
Figure img0134
[00370] A mistura necessária de açúcar, ácido acético e l,2,5-tri-O- acetil-3-butoxi-D-xilofuranose α e β (101) foi preparada como descrito no Exemplo 33.
[00371] Etapa 1: Preparação de 5-Amino-3-(3’-(R)-Butox-2’,5’-di-O-acetil-β-D-xilofuranosil)-3H,6H-tiazol[4,5-d]pirimidina-2-ona (145)
Figure img0135
[00372] De maneira similar ao Exemplo 42, Etapa 1, o composto título 145 foi gerado a partir da mistura de ácido acético e l,2,5-tri-O-acetil-3- butoxi-D-xilofuranose α e β (101) levado bruto para a Etapa 2.
[00373] Etapa 2: Preparação de 5-Amino-3-(3’-(R)-Butoxi-β-D-xilofuranosil)-3H, 6H-tiazol[4,5-d]pirimidina-2-ona (146)
[00374] De maneira similar ao Exemplo 42, Etapa 2, 5,3 mg do composto título 146 foram geradas com produção de 16% na forma de sólido branco: 1H NMR (400 MHz DMSO-d6) δ 11,22 (br s, 1H), 6,92 (br s, 2H), 5,64 (d, J=5,46 Hz, 1H), 5,60 (d, J=7.8 Hz, 1H), 5,08 (m, 1H), 4,39 (t, J=6,24 Hz, 1H), 4,07 (m, 1H), 3,92 (t, J=7,02 Hz, 1H), 3,57 (m, 3H), 3,42 (m, 1H), 1,48 (m, 2H), 1,33 (m, 2H), 0,88 (t, J=7,02 Hz, 3H); [M+H]+ 372,9; Análise de elementos para C14H20N4O6S.1,0H2O.0,4MeOH: calculado: C, 42,89; H, 5,90; N, 13,89; encontrado: C, 43,18; H, 5.68; N, 13.65. Exemplo 51 Preparação de (3’S)-5-Amino-3-(3 -deox—-3—hidroximeti--β-D- ribofuranosil)-3H,6H-tiazol[4,5-d]pirimidina-2,7-diona (148)
Figure img0136
[00375] Etapa 1: Preparação de (3’S)-5-Amino-3-(3’-acetoximeti--2’,5’-di- O-aceti--3’-deoxi-β-D-ribofuranosi-)-3H,6H-tiazo-[4,5-d]pirimidina-2,7-diona (147)
Figure img0137
[00376] De maneira similar ao Exemplo 42, Etapa 1, 224 mg do composto título 147 foram geradas a partir de (3’S)-3-O-Acetoximetil- l,2,5-tri-O-acetil-3-deoxi-α,β-D-ribofuranose [preparado de acordo com o método de Cooperwood e co-aboradores, Nuc-eosides, Nuc-eotides, and Nuc-eic Acids 2000, 19, 219-236, em que foi feito o enantiômero do mesmo composto] com produção de 49% na forma de sólido quase branco: 1H NMR (400 MHz DMSO-d6) δ 11,27 (s, 1H), 7,00 (s, 2H), 5,77 (m, 1H), 4,35 (dd, J=11,7, 2,3, 1H), 4,26 (m, 1H), 4,15 (m, 2H), 4,07 (m, 3H), 2,013 (s, 9H); [M+H]+ 457,3.
[00377] Etapa 2: Preparação de (3’S)-5-Amino-3-(3’-deoxi-3’-hidroximetil-β-D-riboJuranosil)-3H,6H-tiazol[4,5-d]pirimidina-2,7-diona (148)
[00378] De maneira similar ao Exemplo 42, Etapa 2, 34 mg do composto título 148 foram geradas com produção de 58% na forma de sólido quase branco: 1H NMR (400 MHz D2O) δ 5,99 (m, 1H), 5,13 (m, 1H), 4,17 (m, 1H), 3,90 (m, 2H), 3,76 (m, 2H), 2,93 (m, 1H); [M+H]+ 331,2; Análise de elementos para C11H14N4O6S: calculado: C, 35,20; H, 5,10; N, 14,93; S, 8,54; encontrado: C, 35,17; H, 4,35; N, 14,73; S, 8,46.Exemplo 52 Preparação de 5-Ammo-3-(5’-deoxi-5’-hidroximetil-β-D-riboJuranosil)- 3H,6H-tiazol[4,5-d]pirimidina-2,7-diona (150)
Figure img0138
[00380] Etapa 1: Preparação de 5-Amino-3-(5’-O-acetoximetil-2’,3’-di-O- acetil-5’-deoxi-β-D-riboJuranosil)-3H, 6H-tiazol[4,5-d]pirimidina-2,7-diona (149)
Figure img0139
[00382] De maneira similar ao Exemplo 42, Etapa 1, 96 mg do composto título 149 foram geradas a partir de 5-O-acetoximetil-l,2,3-tri- O-acetil-5-deoxi-α,β-D- ribofuranose [preparado de acordo com o método de Pakulski e colaboradores, Polish J. Chem. 1995, 69, 912-917] com produção de 34% na forma de sólido branco: 1H NMR (400 MHz CDCI3) δ 11,92 (s, 1H), 6,15 (d, J=6,4, 1H), 5,94 (s, 2H), 5,71 (m, 1H), 4,91 (m, 1H), 4.40 (m 1H), 4,16 (m, 2H), 2,09 (s, 9H), 2,00 (m, 2H); [M+H]+ 457,0; Análise de elementos para (C17H20N4O9S.0,25H2O): calculado: C, 44,30; H, 4,48; N, 12.16; S, 6.96; encontrado: C, 44,79; H, 4,62; N, 11,55; S, 6,59.
[00383] Etapa 2: Preparação de 5-Ammo-3-(5’-deoxi-5’-hidroximetil-β-D- ribofuranosil)-3H,6H-tiazol[4,5-d]pirimidina-2,7-diona (150)
[00384] De maneira similar ao Exemplo 42, Etapa 2, 28 mg do composto título 150 foram geradas com produção de 56% na forma de sólido branco: 1H NMR (400 MHz DMSO-d6) δ 11,23 (s, 1H), 6,94 (s, 2H), 5,74 (m, 1H), 5,22 (m, 1H), 4,87 (m, 1H), 4,40 (m, 1H), 4,00 (m, 2H), 3,44 (s, 3H), 1,72 (m, 2H); [M+H]+ 330,9. Exemplo 53 Preparação de 5-Ammo-3-[3’-deoxi-3’-O-p-toluenosulfoml-β-D- xilofuramosil]-3H,6H-tiazol-[4,5-d]pirimidima-2,7-dioma (151)
Figure img0140
[00385] Etapa 1: Preparação de 5-Amino-3-[2’5’-di-O-acetil-3’-deoxi-3’- O-p-toluenosulfonil-β-D-xilofuranosil]-3H,6H-tiazol-[4,5-d]pirimidina-2,7- diona (151)
[00386] De maneira similar ao Exemplo 42, Etapa 1, foram gerados 24,6 mg do composto título 151 com produção de 12% na forma de sólido quase branco: 1H NMR (400 MHz CDCI3) δ 11,89 (s, 1H), 7,84 (d, J=8,4, 2H), 7,40 (d, J=8,4, 2H), 6,22 (d, J=4,4, 1H), 5,92 (br s, 2H), 5,75 (d, J=4,8, 1H), 4,95 (d, J=4,8, 1H), 4,30 (m, 1H), 4,25 (d, J=6, 2H), 2,48 (s, 3H), 2,05 (s, 6H); [M+H]+ 555,3. Exemplo 54 Preparação de (3’R)-5-Amino-3-(3’-deoxi-3’-fluoro-β-D-xilofuranosil)-3H,6H- tiazol[4,5-d]pirimidina-2,7-diona (153)
Figure img0141
[00387] Etapa 1 : Preparação de (3’R)-5-Amino-3-(2’-O-acetil-5’-O-benzoil-3’-deoxi-3’fluoro-β-D-Xlofuranosil)-3H,6H-tiazol[4,5-d]pirimidma- 2,7-diona (152)
Figure img0142
[00388] De maneira similar ao Exemplo 42, Etapa 1, foram gerados 149 mg of the composto título 152 a partir de 1,2-Di-O-acetil-5-0- benzoil-3-deoxi-3-(R)-fluoro-α,β-D- xilofuranose [preparado de acordo com o método de Gosselin e colaboradores, Carbohydrate Research 1993, 249, 1-17] com produção de 24% na forma de sólido amarelo: 1H NMR (400 MHz CDCI3) δ 11,57 (s, 1H), 8,04 (d, J=6,8, 2H), 7,56 (t, J=7,6, 1H), 7,43 (t, J=7,6, 2H), 6,35 (dd, J=22,4, 4,8, 1H), 5,92 (s, 2H), 5,32 (dd, J=51,6, 4,8, 1H), 5,20 (s, 1H), 4,79 (dd, J=11,2, 4, 1H), 4,59 (m, 2H), 4,5 (m, 1H), 2,06 (s, 3H); [M+H]+ 465,3.
[00389] Etapa 2: (3’R)-5-amino-3-(3’-deoxi-3’-fluoro-β-D-xilofuranosil)- 3H,6H-tiazol[4,5-d]pirimidina-2,7-diona (153)
[00390] De maneira similar ao Exemplo 42, Etapa 2, foram geradas 14,3 mg do composto título 153 com produção de 45% na forma de sólido branco: 1H NMR (400 MHz DMSO-d6) δ 11,41 (s, 1H), 6,97 (s, 2H), 5,77 (m, 1H), 5,19 (m, 1H), 4,98 (m, 1H), 4,01 (m, 1H), 3,60 (m, 2H), 2,09 (s, 2H); [M+H]+ 318,9; Análise de elementos para C10H11FN4O5S.0,4EA.2H2O: calculado: C, 35.76; H, 4.71; N, 14.3; encontrado: C, 35.71; H, 3.68; N, 14.15. Exemplo 55 Preparação de 3-Alil-5-amino-3H,6H- tiazol[4,5-d]pirimidina-2,7-diona (154)
Figure img0143
[00391] Etapa 1: Preparação de3-Alil-5-amino-3H,6H-tiazol[4,5-d]pirimidi-na-2,7-diona (154)
[00392] De maneira similar ao Exemplo 15, Etapa 1, Esquema 1, 178 mg do composto título 154 foram geradas com produção de 35 % na forma de sólido amarelo-claro: 1H NMR (400 MHz DMSO-d6) δ 10,26 (s, 1H), 6,09 (s, 2H), 5,06-5,01 (m, 1H), 4,32 (dd, J=10,3, 1,5, 1H), 4,196 (dd, J=16,9, 1,5, 1H), 3,55 (d, J=4,4, 2H); [M+H]+ 225,1.Exemplo 56 Preparação de 5-Amino-3-piridina-3-ilmetil-3H,6H- tiazol[4,5-d]pirimidina-2,7-diona (155)
Figure img0144
[00393] Etapa 1: Preparação de5-Amino-3-piridina-3-ilmetil-3H,6H- tiazol [4,5-d]pirimidina-2,7-diona (155)
[00394] De maneira similar ao Exemplo 15, Etapa 1, 143 mg do composto título 155 foram gerados com produção de 24% na forma de sólido branco: 1H NMR (400 MHz DMSO-d6) δ 10,33 (s, 1H), 7,76 (d,J=2,2, 1H), 7,68 (dd, J=2,2, 1,5, 1H), 6,88 (m, 1H), 6,55 (s, 2H), 6,15 (s, 2H), 4,17 (s, 2H); [M+H]+ 276,1.Exemplo 57 Preparação de 5-Amino-3-(4-cloro-but-2-enil)-3H,6H- tiazol[4,5-d]pirimidina-2,7-diona(156)
Figure img0145
[00395] Etapa 1: Preparação de 5-Amino-3-(4-cloro-but-2-enil)-3H,6H- tiazol [4,5-d]pirimidina-2,7-diona (156)
[00396] De maneira similar ao Exemplo 15, Etapa 1, 440 mg do composto título 156 foram geradas com uma produção de 63 % na forma de sólido amarelo claro: 1H NMR (400 MHz DMSO-d6) δ 10,33 (s, 1H), 6,90 (s, 2H), 5,82-5,74 (m, 1H), 5,65-5,59 (m, 1H), 4,45 (d, J=7,0, 2H), 4,39 (d, J=7,8, 2H); [M+H]+ 273,1.Exemplo 58 Preparação de 5-Amino-3-hexil-3H,6H-tiazol[4,5-d]pirimidina-2,7-diona (157)
Figure img0146
[00397] Etapa 1: Preparação de 5-Amino-3-hexil-3H,6H-tiazol[4,5- d]pirimi-dina-2,7-diona (157)
[00398] De maneira similar ao Exemplo 15, Etapa 1, 154 mg do composto título 157 foram geradas com produção de 35% na forma de sólido quase branco: 1H NMR (400 MHz DMSO-d6) δ 11,03 (s, 1H), 6,88 (s, 2H), 3,74 (t, J=6,8, 2H), 1,61 (m, 4H), 1,26 (m, 4H), 0,85 (t, J=6,8, 3H); [M+H]+ 269,31. Esquema X
Figure img0147
Exemplo 59 Preparação de (1’R,2’S,3’R,4’R)-5-amino-3-(2’,3’-dioxi-4’-hidroximetil- ciclopentano-1’-il)-3H,6H-tiazol[4,5-d]pirimidina-2,7-diona (158)
[00399] (l’R,2’S,3’R,4’R)-N’-[7-cloro-2-oxo-3-(2’,3’-O-isopropilideno-4’-vinil-ciclopentano-r-il)-2,3-dihidro-tiozolo[4,5-d]pirimidina-5-il]-N,N- dimetil- formamidina (85) (85 mg, 0,20 mmol) foi dissolvida em CH3OH (3,0 mL) e H2O (1,5 mL) à temperatura ambiente. A solução foi resfriada até 0°C. Periodato de sódio (90 mg, 0.42 mmol) e tetróxido de ósmio (2 mg, catalítico) foram, então, adicionados à solução. A reação foi agitada a 0°C por 1 h e à temperatura ambiente por 2 h antes de ser filtrada e concentrada. A mistura resultante foi dissolvida em CH2Cl2 (10 mL) e então lavada com H2O (2 x 10 mL). A camada orgânica foi secada em MgSO4, filtrada e então concentrada.
[00400] O produto acima foi dissolvido em CH3OH (3 mL) à temperatura ambiente. Borohidreto de sódio (12 mg, 0,32 mmol) foi, então, adicionado à solução. A reação foi agitada por 1 h e, depois, concentrada. A mistura resultante foi dissolvida em CH2Cl2 e lavada com H2O (2 x 10 mL). A camada orgânica foi secada em MgSO4, filtrada e então concentrada.
[00401] O produto acima foi dissolvido em CH3OH (1 mL) e HCl 2 M (5 mL) à temperatura ambiente. A reação foi agitada em refluxo por 5 h e então concentrada. A mistura resultante foi purificada por HPLC de fase reversa produzindo 9,1 mg (13%) de 158 na forma de sólido branco: 1H (400 MHz, CD3OD) δ 4,95(m, 1H), 4,69 (dd, J=7,2, 5,6, 1H), 4,03 (t, J=5,2, 1H), 3,71 (dd, J=11,2, 6,4, 1H), 3,60 (dd, J=11,2, 6,4, 1H), 3,35 (s, 1H), 1,93-2,14 (m, 3H).Exemplo 60 5-Ammo-3-(2’-O-acetil-3’-deoxi-fiD-ribofuranosil)-3H,6H- tiazol[4,5-d]pirimidina-2,7-diona(160)
Figure img0148
[00402] Preparação de 5-Ammo-3-(2’-O-acetil-3’-deoxi-β-D-ribofuranosil)-3H,6H-tiazol[4,5-d]pirimidina-2,7-diona (160)
[00403] A uma suspensão de diacetato de nucleosídeo 121 (200,0 mg, 0,52 mmol) em acetona (5,0 mL), tampão fosfato pH 7 (2.5 mL) e H2O (22,5 mL) foi adicionada Camdida Arctica imobilizada em resina acrílica (0,10 g). A mistura perdeu a cor em menos de 5 minutos após a adição da enzima. A reação foi agitada à temperatura ambiente por 16 h. Foi adicionada celite (1,0 g) e, após agitação por 10 minutos, a mistura foi filtrada por um filtro de celite. O bolo do filtro foi rinsado com acetona (3 x 10 mL), e a acetona foi reduzida sob vácuo. A camada aquosa restante foi, então, bastante salgada com NaCl sólido. Foi adicionado acetato de etila e a mistura bifásica foi vigorosamente agitada por 30 minutos antes da separação. A camada orgânica foi secada em Na2SO4, decantada, concentrada e purificada via cromatografia flash (SiO2, EtOAc-hexano s 50-100% + MeOH 2%). Isso produziu 155,0 mg de monoacetato 160 (97%): 1H (400MHz, DMSO-d6) δ 11,20 (s, 1H), 6,94 (br s, 2H), 5,79 (d, J=2,4, 1H), 5,63 (d, J=8,0, 1H), 4,76 (t, J=6,0, 1H), 4,11 (dt, J=5,2, 10,4, 1H), 3,43-3,52 (m, 2H), 2,44-2,5 (m, 1H), 2,05 (s, 3H), 1,95 (dd, J=6,0, 13,6, 1H); [M+H]+ m/z 342. Análise calculada para: C12H14N4O6S.0,5 H2O: C, 42,10; H.4,12; N, 16,37; S, 9,37. Encontrado: C, 42,30; H, 4,26; N, 16,37; S, 9,23.Exemplo 61 5-Amino-3-(2’,3’-dideoxi-β-D-ribofuranosil)-3H,6H- tiazol[4,5-d]pirimidina-2,7-diona (165)
Figure img0149
[00404] Etapa 1) Preparação de 5-N-acetilamino-3-(5’-tert- butildimetilsilil-2’-deoxi-2’-O-ticarbomlimidazol-β-D-ribofuranosil)-3H,6H- tiazol[4,5-d]pirimidinae-2,7-diona (161)
Figure img0150
[00405] A uma mistura de alcoóis 127 e 128 (247 mg, 0,541 mmol) em MeCN (8 mL) à temperatura ambiente foi adicionado TCDI (193 mg, 1,08 mmol). A mistura de reação foi agitada por 18 h, quando, então, foi concentrada e submetida à cromatografia flash (SiO2, EtOAc), produzin-
[00406] do 150 mg (49%) de uma mistura de tiocarbamatos 161 e 162 na forma de material sólido: 1H (400MHz, DMSO-d6) δ 12,18 (br s, 1H), 11,72 (br s, 1H), 8,54 (s, 1H), 7,86 (s, 1H), 7,10 (s, 1H), 6,36 (m, 1H), 6,04 (s, 1H), 4,38-4,43 (m, 1H), 3,68-3,80 (m, 2H), 2,63-2,69 (br m, 1H), 2,362,41 (m, 1H), 2,17 (s, 3H), 0,84 (s, 9H), 0.00 (s, 6H); [M+H]+ m/z 567.
[00407] Etapa 2) Preparação de 5-N-Acetilamino-3-(5’-tert-butildimetilsili-2’,3’-dideoxi-β-D-ribofuranosil)-3H,6H-tiazol[4,5-d]pirimidina-2,7-diona (163)
Figure img0151
[00408] A uma mistura de tiocarbamatos 161 e 162 (57 mg, 0,10 mmol) e Bu3SnH (187 uL, 0,705 mmol) em PhMe (10 mL) à temperatura ambiente foi adicionado AIBN (1.6 mg, 0,010 mmol). A mistura de reação foi imersa num banho de óleo a 130°C, agitada por 20 min, concentrada e submetida à cromatografia flash (SiO2, EtOAc-CHCl3 60-80%), produzindo 28 mg (64%) de composto 163 na forma de sólido branco: 1H (400MHz, DMSO-d6) δ 12,13 (br s, 1H), 11,80 (br s, 1H), 6,11 (dd, J=8,4, 3,7, 1H), 3,95-4,02 (m, 1H), 3,64 (d, J=5,1, 2H), 2,54-2,59 (m, 1H), 2,23-2,33 (m, 1H), 2,19 (s, 3H), 2,04-2,13 (m, 1H), 1,94-1,97 (m, 1H), 0,82 (s, 9H), -0,01 (6H); [M+H]+ m/z 441.
[00409] Etapa 3) Preparação de 5-N-Acetilammo-3-(2’,3’-dideoxi-β-D- ribofuranosil)-3H,6H-tiazol[4,5-d]pirimidina-2,7-diona (164)
Figure img0152
[00410] Uma solução de siloxano 163 (84 mg, 0,19 mmol) Em HF- MeCN 2 M (20 mL) foi agitada por 10 min, concentrada e submetida à cromatografia flash (SiO2, MeOH-CHCl3 5-10%) para produzir 10 mg (16%) of alcohol 164 as a sólido branco: 1H (400MHz, DMSO-d6) δ 12,15 (br s, 1H), 11,78 (br s, 1H), 6,10 (dd, J=8,4, 4,0, 1H), 4,66 (t, J=5,9, 1H), 3,91-3,97 (m, 1H), 3,46 (t, J=5,9, 2H), 2,51-2.58 (m, 1H), 2,21-2,32 (m, 1H), 2,19 (s, 3H), 2,01-2,18 (m, 1H), 1,89-1,97 (m, 1H); [M+H]+ m/z 327.
[00411] Etapa 4) Preparação de 5-Ammo-3-(2’,3-dideoxi-β-D-ribofuranosil)-3H,6H-tiazol[4,5-d]pirimidina-2,7-diona (165)
Figure img0153
[00412] A uma solução of acetamida 164 (19 mg, 0,058 mmol) em MeOH (3 mL) à temperatura ambiente foi adicionado K2CO3 (64 mg, 0,46 mmol). A mistura de reação foi agitada por 18 h, quando, então, foi interrompida com HOAc (53 μL), concentrada e triturada com MeOH-H2O para produzir 6 mg (36%) do composto título 165 na forma de sólido branco: 1H (400MHz, DMSO-d6) δ 11,15 (s, 1H), 6,85 (br s, 2H), 6,07 (dd, J=8,4, 4,4, 1H), 4,63 (t, J=5,9, 1H), 3,89-3,95 (m, 1H), 3,46 (t, J=5,5, 2H), 2,44-2.48 (m, 1H), 2.17-2.27 (m, 1H), 2.01-2.11 (m, 1H), 1,86-1,93 (m, 1H); [M+H]+ m/z 285.
Atividade Antiviral dos Compostos
[00413] Vários ensaios podem ser empregados de acordo com a presente invenção de maneira a determinar o grau de atividade antiviral de um composto da invenção, como cultura de células, modelos animais e administração em sujeitos humanos. Os ensaios aqui descritos podem ser usados para avaliar o crescimento viral ao longo do tempo para determinar as características de crescimento de um vírus na presença de um composto da invenção.
[00414] Em outra modalidade, foram administrados um vírus e um composto da invenção a sujeitos animais suscetíveis à infecção com o vírus. A incidência, severidade, duração, carga viral, mortalidade, taxa de infecção etc. podem ser observadas quando apenas com o vírus é administrado aos sujeitos (na ausência do composto da invenção). A atividade antiviral do composto da invenção é demonstrada pela diminuição da incidência, severidade, duração, carga viral, mortalidade, taxa de infecção etc. na presença do composto da invenção. Numa modalidade específica, o vírus e o composto da invenção são administrados ao sujeito animal ao mesmo tempo. Noutra modalidade específica, o vírus é administrado ao sujeito animal antes do composto da invenção. Numa modalidade específica, o composto da invenção é administrado ao sujeito animal antes do vírus. Em outra modalidade, a taxa de crescimento do vírus pode ser testada pela retirada de fluidos biológicos/amostras clínicas (por exemplo, aspirado nasal, esfregaço de garganta, escarro, lavagem bronco-alveolar, urina, saliva, sangue ou plasma) de sujeitos animais ou humanos retirados em vários momentos após a infecção, tanto na presença quanto na ausência do composto da invenção, e medição dos níveis de vírus. Em implementações específicas, a taxa de crescimento do vírus é avaliada através da quantificação da presença do vírus numa amostra após crescimento numa cultura de células, crescimento num meio de crescimento permissível ou crescimento num sujeito usando qualquer método conhecido na técnica, por exemplo, mas, sem limitação, a imunoensaio (por exemplo, ELISA; para um discussão a respeito de ELISAs ver, por exemplo, Ausubel e colaboradores, eds, 1994, Current Protocols in Molecular Biology, Vol. I, John Wiley & Sons, Inc., Nova York em 11.2.1), tingimento imunofluorescente ou análise por immunoblot usando um anticorpo que reconhece imunoespecificamente o vírus a ser quantificado ou detecção de um ácido nucléico específico do vírus (por exemplo, Southern blot ou análise por RT-PCR etc.). Numa modalidade específica, o título viral pode ser determinado pela obtenção de fluidos biológicos/amostras clínicas das células infectadas ou de um sujeito infectado, Preparação de uma diluição sequencial da amostra e infecção de uma monocamada de células que sejam suscetíveis à infecção com o vírus (por exemplo, células primárias, linhagens de células transformadas, amostras de tecido do paciente etc.) com uma diluição do vírus que permite o surgimento de plaques únicos. As plaques podem, então, ser contadas e o título viral expresso como unidades formadoras de plaques por mililitro de amostra. Numa modalidade específica, a taxa de crescimento de um vírus num sujeito pode ser estimada pelo título de anticorpos contra o vírus no sujeito. O título de anticorpos no plasma pode ser determinado por qualquer método bem conhecido na técnica, por exemplo, mas, sem limitação, a quantidade de anticorpos ou fragmentos de anticorpos em amostras de plasma pode ser quantificada, por exemplo, por ELISA. Além disso, a atividade in vivo de um composto da Fórmula I pode ser determinada através da administração direta do composto em animal teste, coleta de fluidos biológicos (por exemplo, aspirado nasal, esfregaço da garganta, escarro, lavagem bronco-alveolar, urina, saliva, sangue ou plasma) e testagem do fluido para atividade antiviral. Em implementações nas quais as amostras a serem testadas para níveis virais são fluidos biológicos/amostras clínicas (por exemplo, aspirado nasal, esfregaço da garganta, escarro, lavagem bronco-alveolar, urina, saliva, sangue ou plasma), as amostras podem conter células intactas ou não. As amostras de sujeitos contendo células intactas podem ser processadas diretamente, enquanto isolados sem células intactas podem ou não ser primeiramente cultivados numa linhagem celular permissiva (por exemplo células primárias, linhagens de células transformadas, amostras de tecido do paciente etc.) ou meio de crescimento (por exemplo, meio LB/agar, meio YT/agar, sangue agar etc.). As suspensões celulares podem ser limpas por centrifugação a, por exemplo, 300x g por 5 minutos à temperatura ambiente, seguida por uma lavagem com PBS pH 7,4 (sem Ca++ e Mg++) sob as mesmas condições. Os péletes de células podem ser ressuspensos num pequeno volume de para análise. Os isolados clínicos primários contendo células intactas podem ser misturados com PBS e centrifugados a 300x g por 5 minutos à temperatura ambiente. O muco é removido da interface com uma ponteira de pipeta estéril e os péletes de células podem ser lavados uma ou mais vezes com PBS sob as mesmas condições. Os péletes podem então ser ressuspensos num pequeno volume de PBS para análise.
[00415] Em outra modalidade, um composto da invenção é administrado a um sujeito humano infectado com um vírus. A incidência, severidade, duração, carga viral, mortalidade, taxa de infecção etc. podem ser comparadas à incidência, severidade, duração, carga viral, mortalidade, taxa de infecção etc. observadas em sujeitos humanos infectados com um vírus na ausência de um composto da invenção ou na presença de um placebo. A atividade antiviral de um composto da invenção é demonstrada pela redução da incidência, severidade, duração, carga viral, mortalidade, taxa de infecção etc. na presença de um composto da invenção. Qualquer método conhecido na técnica pode ser usado para determinar a atividade antiviral em sujeitos como os descritos anteriormente.
[00416] Além disso, a atividade in vivo de um pró-fármaco da Fórmula I pode ser determinado através da administração direta do composto a um sujeito animal ou humano, coleta de fluidos biológicos/amostras clínicas (por exemplo, aspirado nasal, esfregaço da garganta, escarro, lavagem bronco-alveolar, urina, saliva, sangue ou plasma) e testagem dos fluidos biológicos/amostras clínicas para atividade antiviral (por exemplo, pela adição a células em cultura na presença do pró-fármaco).
Metabolismo dos Pró-Fármacos da Fórmula I
[00417] Os pró-fármacos da Fórmula I da presente invenção têm que ser metabolizados em compostos da Fórmula II e outros compostos da invenção no corpo se forem servir como pró-fármacos eficazes. Hepatócitos são geralmente usados para avaliar o grau pelo qual um composto pode ser transformado no corpo de um animal, e sabe-se que essas transformações podem variar com hepatócitos de diferentes espécies de uma maneira que reflete o metabolismo no animal inteiro. Ver Seddon T. e colaboradores, Biochem Pharmacol., 38(10), 1657-65(1989).
[00418] Conduziu-se um estudo para avaliar a estabilidade metabólica dos compostos da Fórmula I 14, 15, 13, 114, 30, 103, 67, 65 e 76 na presença de hepatócitos frescos de Macaca fascicularis e monitorar a formação de metabólitos 6-oxi, isto é, compostos da Fórmula II e outros compostos da invenção. Para comparação, a establidade metabólica de famciclovir também foi avaliada.
Preparação de Suspensão Fresca de Hepatócitos
[00419] Uma suspensão fresca de hepatópcitos de Macaca fascicularis (Lot no.: Cy141) foi comprada da CellzDirect (Tucson, AZ). Meio de Incubação de Hepatócitos (sem plasma, estéril) foi comprado da In Vitro Technologies (Baltimore, MD). A suspensão de hepatócitos de Macaca fascicularis foi preparada a partir de hepatócitos frescos de Macaca fascicularis em meio de incubação de hepatócitos na concentração de 1,25 milhão de células/mL. A concentração final de incubação (após a adição do artigo teste) foi 1,0 milhão de células/mL.
Preparação de Soluções de Estoque
[00420] Foram usadas soluções de estoque existentes de 100 mM em DMSO. As concetrações dos artigos teste foram checadas usando leitores de microplacas UV-vis. Os coeficientes de correção foram determinados usando a absorbância de estoque recentemente preparado de 122 em DMSO.
Incubações
[00421] As suspensões de reação foram preparadas em tubos removíveis de 96 poços, cada um contendo 320 μL de suspensão fresca de hepatócitos de Macaca fascicularis numa densidade de 1,25 milhão de células por mL e 40 μL de meio de incubação de hepatócitos. As misturas acima foram pré-incubadas abertas a 37°C, 95% de umidade e 5% de CO2 por 30 minutos. As reações foram iniciadas pela addição de 40 μL do artigo teste numa concentração de 1Ox para cada tubo para atingir a concentração final de 50 μM para o(s) artigo(s) teste e a densidade celular de 1 milhão/mL. A suspensão de reação em cada tubo foi misturada invertendo-se o tubo várias vezes. Alíquotas de 50 μL de cada suspensão de reação foram distribuídas em mais seis tubos removíveis de 96 poços (um tubo para cada amostra retirada nos tempos 15, 30, 45, 60, 90 e 120 minutos). Os tubos abertos foram incubados a 37°C sob 95% de umidade e 5% de CO2.
Preparação de Amostras para Análise
[00422] Em tempos pré-determinados, as reações foram terminadas pela adição de 150 μL da solução de parada a cada tubo contendo 50 μL da suspensão de reação. A composição da solução de parada foi a seguinte: 15 mL de acetonitrila (contendo 1 μg/mL de nebularina na forma de padrão interno e ácido fórmico 0,1%) combinado com um 1 mL de água.
[00423] As curvas de calibração foram preparadas da seguinte maneira. A 80 μL de suspensão de células (na densidade celular de 1,25 milhão/mL) foram adicionados 10 μL de meio de incubação de hepatócitos e 10 μL da concentração apropriada do composto em meio de incubação de hepatócitos. Imediatamente após a adição do composto, 300 μL da solução de parada (ver acima) foram adicionados. Todas as amostras interrompidas foram mantidas em gelo úmido até serem processadas para análise. Então, elas eram misturadas usando um vórtex multitubo de bancada (VWR Scientific Products) por aproximadamente 30 segundos e centrifugadas a 4.000 rpm (3,220 rcf) por 10 minutos a 4°C. O sobrenadante limpo (100 μL) foi transferido para uma placa limpa de 96 poços fundos, evaporado até secura sob nitrogênio, reconstítuído em 100 μL de água:acetonitrila 90:10, e analisado para a forma-mãe e para os metabólitos do artigo teste usando um método LC/MS/MS apropriado.
Bioanálise
[00424] Os compostos foram quantificados num instrumento API3000 LC/MS/MS no modo ESI-Positive MRM (monitoramento de múltiplas reações). O resumo dos resultados de degradação de pró-fármaco da Fórmula I e geração de produto são fornecidos na Tabela 1. Tabela 1 Concentração dos Produtos Metabolizados Formados em Hepatócitos de Macaca fascicularis Após 2 Horas de Incubação de 50 μM de um Pró-Fármco da Fórmula I
Figure img0154
[00425] Nos compostos frescos de hepatócitos de Macaca fascicularis 14, 15, 13, 114, 30, 103, 67, 65 e 76, bem como em famciclovir, são metabolizados para produzir os metabólitos 6-oxi correspondentes: 122 dos três primeiros pró-fármacos da Fórmula I e 134, 117, 141, 157, 148 e 132, respectivamente. Famciclovir produz penciclovir.
Indução de IFN-α a Partir de Células Monoculeares do Sangue Periférico (PBMC)
[00426] São preparadas células mononucleares do sangue periférico (PBMCs) por métodos padrão a partir de sangue humano e consistem primariamente em monócitos, células NK, células dendríticas circulantes e tanto células T quanto B. Em resumo, elas são purificadas por centrifugação de gradiente de densidade a partir de uma camada leucoplaquetária (buffy coat), a qual é o componente do sangue completo que contém leucócitos e plaquetas. Por sua vez, as camadas leucoplaquetárias são preparadas centrifugando-se o sangue completo e isolando a fina camada cor de creme entre a camada superior de plasma e a porção inferior de hemáceas da mistura separada.
Purificação de PBMC
[00427] Camadas leucoplaquetárias recentemente coletadas de doadores foram obtidas do banco de sangue de São Diego. As PBMCs foram isoladas das camadas leucoplaquetárias usando gradiente histopaque-1077 (Sigma), essencialmente como descrito no protocolo do fabricante. As camadas leucoplaquetárias foram transferidas para tubos de centrífuga de 50 ml e PBS foi adicionado para se obter um volume total de 35 ml. Depois, 10 ml de histopaque-1077 foram depositados no fundo de cada tubo, os quais foram então centrifugados a 259x g por 30 minutos sem freio, à temperatura ambiente, numa centrífuga 5804 R (Eppendorf). A camada superior de PBS de cada tubo foi removida e descartada, e a camada leucoplaquetária transferida para um tubo novo. O volume total foi levado a 50 ml com PBS e os tubos foram então centrifugados por 10 minutos a 259x g à temperatura ambiente. As células foram lavadas mais 3 vezes com PBS dessa maneira.
[00428] O pélete das células (PBMC) foi, então, ressuspendido em 3040 ml de meio completo (RPMI 1640). As PBMCs foram semeadas em 2,5 ou 7,5 x 106 células/ml de meio completo (semeadura 1x e 3x, respectivamente) e deixadas para descansar durante pernoite antes da exposição ao composto por 24 horas. As células e os meios foram então coletados, centrifugados por 5 minutos a 735x g numa microcentrífuga 5415 C (Eppendorf) à temperatura ambiente e o sobrenadante foi analisado por ELISA de IFN-α. A capacidade de os pró-fármacos da Fórmula I, os compostos da Fórmula II e outros compostos da invenção de demonstrar características favoráveis de entrega oral e de induzir respostas imuno quando administrados por uma rota determinada pode ser comparada com os resultados de experimentos similares com compostos descritos na literatura. Aqui incorporados em sua íntegra por referência estão as Patentes US 5.041.426 e 4.880.784, e o Pedido de Patente US 10/861.430 (publicação de Pedido de Patente US US 2005/0070556), que revelam, inter alia, a indução de IFN-α por isatoribina.
Figure img0155
[00429] Consequentemente, as atividades relativas dos compostos da invenção são expressos como percentagem do nível de indução de IFN-a por isatoribina 32 ou 100 μM.
Protocolo de ELISA
[00430] O ELISA de IFN-a humano (#KHC4012) foi realizado como descrito no protocolo Biosource. Entretanto, para garantir que as leituras estivessem dentro da faixa linear de detecção, as amostras de sobrenadante de PBMC foram tipicamente diluídas 1:3 (semeadura de 2,5 x 106 células/ml) ou 1:15 (semeadura 7,5 x 106 células/ml) e então analisadas junto com amostras de sobrenadante não diluídas. A concentração em cada amostra foi calculada a partir da O.D. por referência a uma curva padrão.
[00431] Os compostos da invenção exibiram indução de IFN-a por PBMCs relativa à por isatoribina nas seguintes faixas:
[00432] 0-10%: Compostos 142, 157, 141, 148 e 33
[00433] 11-50%: Compostos 152 e 165
[00434] 51-100%: Compostos 32, 160, 130 e 137
[00435] >100%: Compostos 133, 34, 147, 121, 122, 134, 117, 132 e 153.
Comparação com Isatoribina
[00436] Os resultados demonstram a notável superioridade do 134 e do 122 em relação à isatoribina no que diz respeito à acentuação da produção de IFN-α por PBMCs humanas in vitro. A Figura 1 e a Figura 2 mostram gráficos de pg/ml de IFN-α induzida em PBMCs humanas pelos compostos 134 e 122 vs gráficos de pg/ml de IFN-α induzida por uma concentração idêntica de isatoribina. Os resultados podem ser resumidos como a seguir.
[00437] Numa semeadura de PBMC de 1X, tanto 134 quanto 122 induziram significa e substancialmente mais produção de IFN-α com um composto teste de 100 μM do que a isatoribina, especialmente para respondedores fracos de isatoribina (painel esquerdo nas Figuras 1 e 2). Quando a semeadura aumento para 3X, a diferença entre a quantidade de IFN-α produzido com um agente teste de 100 μM é menos clara, embora perceptível visualmente e significativa estatiscamente (painel direito, Figuras 1 e 2). Quando a concentração de 134 e 122 é 32 μM na semeadura 3X, entretanto, ambos 134 e 122 drastica e surpreendentemente superam o desempenho da isatoribina (painel direito e inserções das Figuras 1 e 2).
[00438] Deve-se entender que a descrição acima é de natureza exemplar e explicativa e tem a função de ilustrar a invenção e suas modalidades preferidas. Através de experimentação rotineira, o especialista reconhecerá modificações e variações evidentes que podem ser efetuadas sem abandonar o espírito da invenção. Assim, a invenção deve ser entendida não pela descrição acima, mas, pelas seguintes Reivindicações e seus equivalentes.

Claims (9)

1. Composto ou Sal Farmaceuticamente Aceitável do Mesmo, caracterizado por que é selecionado a partir de
Figure img0156
2. Composto ou Sal Farmaceuticamente Aceitável do Mesmo, de acordo com a Reivindicação 1, caracterizado por que é
Figure img0157
3. Composto ou Sal Farmaceuticamente Aceitável do Mesmo, de acordo com a Reivindicação 1, caracterizado por que é
Figure img0158
4. Composto ou Sal Farmaceuticamente Aceitável do Mesmo, caracterizado por que é selecionado a partir de
Figure img0159
5. Composto ou Sal Farmaceuticamente Aceitável do Mesmo, de acordo com a Reivindicação 4, caracterizado por que é selecionado a partir de
Figure img0160
6. Composto ou Sal Farmaceuticamente Aceitável ou Tautômero do Mesmo, caracterizado por que é selecionado a partir de
Figure img0161
7. Composto ou Sal Farmaceuticamente Aceitável ou Tautômero do Mesmo, de acordo com a Reivindicação 6, caracterizado por que é
Figure img0162
8. Composto ou Sal Farmaceuticamente Aceitável ou Tautômero do Mesmo, caracterizado por que é selecionado a partir de
Figure img0163
9. Composição Farmacêutica, caracterizada por que compreende um carreador farmaceuticamente aceitável e um composto, conforme definido em qualquer uma das Reivindicações de 1 a 8;ou um sal farmaceuticamente aceitável ou tautômero do mesmo.
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