BG112471A

BG112471A - Immunomodulating synbiotic composition

Info

Publication number: BG112471A
Application number: BG112471A
Authority: BG
Inventors: Георгиева Караиванова Елена; Недкова Георгиева Ралица; Емилова Дангулева-Чолакова Антония; Венциславова Стефанова-Тодорова Нина
Original assignee: "Лактина" Оод
Priority date: 2017-03-09
Filing date: 2017-03-09
Publication date: 2018-09-28
Also published as: BG67244B1

Abstract

The invention relates to an immunomodulating synbiotic composition, in particular a probiotic bacterial composition, further enriched with a prebiotic and biologically active substances that have a beneficial effect on human health in the prevention and/or therapy of inflammatory and immune diseases in gastrointestinal tract, including symptoms of intestinal dysbiosis and inflammatory bowel syndrome. In particular, the composition comprises the probiotic component of living cells of a biologically pure culture of a bacterial strain selected from the group of Lactobacillus delbrueckii subsp. bulgaricus LBB-06-НБПМК 8918, Lactobacillus helveticus LLH-108-НБПМК 8760, Lactobacillus acidophilus LLA-10-НБПМК 8242, Lactobacillus rhamnosus LLR-L1-НБПМК 8769 и Lactobacillus fermentum LLF-01-НБПМК 8781 or combinations thereof, prebiotic-arabinogalactan and colostrum. The used lactic acid bacteria strains are selected so that in combination with each other and in combination with the other components - the prebiotic and the colostrum, they give high survival, achieve the specific probiotic effect and the guaranteed antimicrobial activity against human pathogens, as adhesive and immunomodulating properties of the composition. The indigestible dietary fiber of arabinogalactan, thanks to its immunomodulating (antivirus and antitumor) activity, combined in the synbiotic formula, form a protective layer around probiotics and control their release into the intestinal tract. The enriched multifunctional formula of the synbiotic composition according to the invention, including proline polypeptides rich (4.5%) and IgG (minimum 20%) colostrum content, supplies the necessary immune, growth factors and a balanced combination of vitamins and minerals. The orally administered synbiotic composition demonstrates an immunomodulating effect, shown in an increase in % of activated NK (natural killer) cells in the peripheral blood and a decrease in the levels of anti-inflammatory cytokines in fecal samples, and in patients with irritable bowel syndrome (IBS) in reduction of faecal calprotectin to a reduction or even disappearance of clinical symptomatology.

Description

ИМУНОМОДУЛИРАЩ СИНБИОТИЧЕН СЪСТАВIMMUNOMODULATING SYNBIOTIC COMPOSITION

ОБЛАСТ НА ТЕХНИКАТАFIELD OF THE INVENTION

Изобретението се отнася до имуномодулиращ синбиотичен състав, по-специално пробиотичен бактериален състав, допълнително обогатен с пребиотик и биологичноактивни вещества, повлияващи благотворно здравето на човека при профилактика и/или терапия на възпалителни и имунни заболявания на гастроинтестиналния тракт в т.ч при симптоми на чревна дисбиоза и синдром на възпаленото черво.The invention relates to an immunomodulatory synbiotic composition, in particular a probiotic bacterial composition, further enriched with prebiotic and biologically active substances, beneficial to human health in the prevention and / or treatment of inflammatory and immune diseases of the gastrointestinal tract, including symptoms of gastrointestinal tract. dysbiosis and inflammatory bowel syndrome.

ПРЕДШЕСТВАЩО СЪСТОЯНИЕ НА ТЕХНИКАТАBACKGROUND OF THE INVENTION

Имунната система се явява сложна многокомпонентна система, състояща се от няколко подсистеми, които защитават организма на гостоприемника от инфекциозни агенти и туморни клетки. Имунната система осъществява контрола и е отговорна по подходящ начин да атакува патогенните агенти, да ги разпознава и отстранява от организма. Поддържайки придобития имунинтет, имунната система непрекъснато повишава и имуния си отговор по отношение възможната бързина за унищожаване на чуждия антиген в организма.The immune system is a complex multicomponent system consisting of several subsystems that protect the host's body from infectious agents and tumor cells. The immune system controls and is responsible for attacking pathogens, recognizing them and removing them from the body. By maintaining the acquired immunity, the immune system constantly increases its immune response in terms of the possible rate of destruction of the foreign antigen in the body.

От друга страна стомашно-чревния тракт съдържа богата флора от над 500 различини видове бактерии, важни за неговото здраве. При изменение на обичайното състояние на здравето, някои бактерии, могат да се увеличат прекомерно и да предизвикат инфекции и отслабване на имунитета. Отслабването и дисбаланса на естествената защитна система може да позволи на потенциално патогенните микроорганизми да предизвикат клинични инфекции. Поддържането баланса на стомашно-чревния тракт е от особено значение за човека и той е отговорен за правилното функциониране и хранене на всяка клетка от организма. Мечнокиселите бактерии се явяват един инструмент за обогатяване на стомашно-чревния тракт с ползотворни бактерии.On the other hand, the gastrointestinal tract contains a rich flora of over 500 different types of bacteria important for its health. When the normal state of health changes, some bacteria can overgrow and cause infections and weaken the immune system. Weakening and imbalance of the natural defense system can allow potentially pathogenic microorganisms to cause clinical infections. Maintaining the balance of the gastrointestinal tract is of particular importance to man and he is responsible for the proper functioning and nutrition of every cell in the body. Soft acid bacteria are a tool for enriching the gastrointestinal tract with beneficial bacteria.

Млечнокиселите бактерии, през последните години, се използват за превенция или съпътстващи лечението средства на имунни заболявания. Известно е от WO 2015/046407 профилактично средство под формата хранителен състав, и като медикамент, съдържащо млечнокисели бактерии, по-специално щамове Lactobacillus helveticus, предназначено за профилактика на имунни заболявания посредством инхибиране пролиферацията на имунните растежни клетки IL-10 / IL-12. ( свързани с ентерит, ревматоиден артрит, имунни заболявания, като хепатит).Lactic acid bacteria, in recent years, have been used to prevent or accompany the treatment of immune diseases. It is known from WO 2015/046407 a prophylactic agent in the form of a nutritional composition, and as a medicament containing lactic acid bacteria, in particular strains of Lactobacillus helveticus, intended for the prevention of immune diseases by inhibiting the proliferation of IL-10 / IL-12 immune growth cells. (associated with enteritis, rheumatoid arthritis, immune diseases such as hepatitis).

Известен е също така от ЕР2482826 състав, съдържащ арабиногалактан предназначен за подпомагане на адаптивния имунен отговор срещу чужди антигени вследствие ваксиниране и прилаган под формата на функционални състави или диетични добавки.Also known from EP2482826 is a composition comprising arabinogalactan intended to support the adaptive immune response against foreign antigens following vaccination and administered in the form of functional compositions or dietary supplements.

Известен е още от RU 2 599 544 и сух таблетен състав на млечна основа за орално и/или перорално приложение, съдържащ сухо обезмаслено мляко и/или суха суроватка и/или суха лактоза от 20-50%; подслаждащи агенти от 10-30%; пълнители-сухи плодове от 520%; лифилизирани пробиотични култури избрани от Propionibacterium freudenreichii subsp. shermanii и/или Bifidobacterium adolesescentis и/или Lactobacillus acidophilus и/или Lactobacillus casei, и/или Lactobacillus rhamnosus общо от 0-20%; биологично активни вещества (БАВ) в т.ч арабиногалактан и витаминен комплекс от 0-5%; олигозахариди от 020% и структурообразуващи вещества 0-5% .It is also known from RU 2 599 544 and a dry milk-based tablet composition for oral and / or oral administration, containing skimmed milk powder and / or whey and / or dry lactose of 20-50%; sweetening agents of 10-30%; dried fruit fillers of 520%; lyphilized probiotic cultures selected from Propionibacterium freudenreichii subsp. shermanii and / or Bifidobacterium adolesescentis and / or Lactobacillus acidophilus and / or Lactobacillus casei, and / or Lactobacillus rhamnosus a total of 0-20%; biologically active substances (BAB) including arabinogalactan and vitamin complex of 0-5%; 020% oligosaccharides and 0-5% structurants.

От BG 65 614 е известен синбиотик, представляващ смес от монокултури Lactobacillus acidophilus , Lactobacillus helveticus, Lactobacillus delbrueckii subsp. bulgaricus, Streptococcus thermophilus, Bifidobacterium bifidum, Bifidobacterium longum и инулин и в даден случай пчелен прашец или пчелно млечице в описани количества.From BG 65 614 a synbiotic is known, which is a mixture of monocultures of Lactobacillus acidophilus, Lactobacillus helveticus, Lactobacillus delbrueckii subsp. bulgaricus, Streptococcus thermophilus, Bifidobacterium bifidum, Bifidobacterium longum and inulin and optionally bee pollen or royal jelly in the amounts described.

Известен е също от CZ 28707 и млечен пробиотичен ферментирал продукт с положително въздействие върху реологията на продукта, съдържащ 1-10 % коластра, 1-2 % пробиотична култура от Bifidobacterium animalis subsp. lactis, Enterococcus faecium и L. acidophilus, 0, 01-4% киселомлечна или сметаново-кефирна култура, 1-7% пребиотик избран от фруктоолигозахарид или инулин и до 100% козе/краве мляко.It is also known from CZ 28707 and a dairy probiotic fermented product with a positive effect on the rheology of the product, containing 1-10% colostrum, 1-2% probiotic culture of Bifidobacterium animalis subsp. lactis, Enterococcus faecium and L. acidophilus, 0, 01-4% yogurt or cream-kefir culture, 1-7% prebiotic selected from fructooligosaccharide or inulin and up to 100% goat / cow milk.

Недостатък на описания млечен пробиотичен продукт е неговата недостатъчна биологична ценност на избраните пробиотични култури, както и недостатъчната им преживяемост при попадане в стомашно-чревния тракт.A disadvantage of the described dairy probiotic product is its insufficient biological value of the selected probiotic cultures, as well as their insufficient survival when entering the gastrointestinal tract.

Проблемът, който трябва да се реши е разширяване на асортиментите на функционалните млечни продукти, но и създаване на принципно нова форма на продукт с имуномодулиращо действие, който да обогатява и балансира стомашно-чревния тракт с млечнокисели бактерии със специфично пробиотично действие и с техните продукти от жизнената им дейност, както и същевременно да осигурява условия за развитие, намножаване и повишаване ефекта на пробиотика.The problem to be solved is to expand the range of functional dairy products, but also to create a fundamentally new form of product with immunomodulatory action, which will enrich and balance the gastrointestinal tract with lactic acid bacteria with specific probiotic action and their products from their vital activity, as well as to provide conditions for development, multiplication and increase the effect of the probiotic.

• :: ’· · ; ·/ ·· · ···♦ ·• :: ’· ·; · / ·· · ··· ♦ ·

ТЕХНИЧЕСКА СЪЩНОСТ НА ИЗОБРЕТЕНИЕТОSUMMARY OF THE INVENTION

Тези проблеми се решават съгласно изобретението с имуномодулиращ синбиотичен състав-активна формула на основата на пробиотик, съдържащ живи клетки на биологически чиста култура от бактериален щам, избран от групата на: Lactobacillus delbrueckii subsp. bulgaricus LLB -06-NBIMCC 8918, Lactobacillus helveticus LLH-108- НБПМК 8760, Lactobacillus acidophilus LLA-10- НБПМК 8242, Lactobacillus rhamnosus LLR-L1- НБПМК 8769 иThese problems are solved according to the invention with an immunomodulatory synbiotic composition-active formula based on a probiotic containing live cells of a biologically pure culture of a bacterial strain selected from the group of: Lactobacillus delbrueckii subsp. bulgaricus LLB -06-NBIMCC 8918, Lactobacillus helveticus LLH-108- NBPMK 8760, Lactobacillus acidophilus LLA-10- NBPMK 8242, Lactobacillus rhamnosus LLR-L1- NBPMK 8769 and

Lactobacillus fermentum LLF-01- НБПМК 8781 или техни комбинации, както и пребиотик под формата на несмилаеми диетични фибри, изолирани от кора на сибирска лиственица полизахаридът арабиногалактан (Arabinogalactans от Larix gmelinii) и първично мляко, оттделяно от женските бозайници по време на лактация - коластра, богата на пролинсъдържащи пептиди с имуномодулиращ ефект (мин. 4.5 % PRPs) и IgG (мин. 20 %), където количеството в mg на компонентите, е съответно:Lactobacillus fermentum LLF-01- NBPMK 8781 or their combinations, as well as a prebiotic in the form of indigestible dietary fiber isolated from the bark of Siberian larch polysaccharide arabinogalactan (Arabinogalactans from Larix gmelinii) and primary milk from lactating women. , rich in proline-containing peptides with immunomodulatory effect (min. 4.5% PRPs) and IgG (min. 20%), where the amount in mg of the components is respectively:

Lactobacillus delbrueckii subsp. bulgaricus LLB -06-NBIMCC 8918 от 30 до 120 mg;Lactobacillus delbrueckii subsp. bulgaricus LLB -06-NBIMCC 8918 from 30 to 120 mg;

Lactobacillus helveticus LLH-108- НБПМК 8760- от 55 до 220, Lactobacillus acidophilus LLA-10- НБПМК 8242- от 55 до 220, Lactobacillus rhamnosus LLR-L1- НБПМК 8769- от 55 до 220, Lactobacillus fermentum LLF-01- НБПМК 8781- от 55 до 220, Арабиногалактан - от 100 до 400 иLactobacillus helveticus LLH-108- NBPMK 8760- from 55 to 220, Lactobacillus acidophilus LLA-10- NBPMK 8242- from 55 to 220, Lactobacillus rhamnosus LLR-L1- NBPMK 8769- from 55 to 220, Lactobacillus fermentum LF1LF1LF - from 55 to 220, Arabinogalactan - from 100 to 400 and

Коластра - от 50 до 200.Colostrum - from 50 to 200.

Всеки бактериален щам на пробиотика от състава притежава активност в границите от 10 ⁸до 10¹⁰ CFU бактрии/гр .Each bacterial strain of the probiotic of the composition has activity in the range from 10 ⁸ to 10 ¹⁰ CFU bacteria / g.

Новоизолираният Lactobacillus delbrueckii subsp. bulgaricus LLB-06- NBIMCC 8918 представлява млечен изолат, под формата на Грам /+/, каталазоотрицателни средно дълги до дълги пръчки, аеротолерантни, с интензивен растеж при 45°С, но не и при 15°С, не продуцира СОг от глюкоза, образува метахронатинови гранули в зависимост от възрастта на културата, с интензивен растеж на млечна среда с образуване изключително на D (-) млечна киселина при 24-часова ферментация. Културата не поддържа добър растеж на MRS arap. Другият новоизолиран щам Lactobacillus fermentum LLF-01, изолиран от слюнка на здрав човек, представлява Грам /+/, каталазоотрицателни пръчки с ясно изразен полиморфизъм, аеротолерантни, с интензивен растеж на 37°С, и по-слаб на 15°С, продуцира СО₂ от глюкоза, c интензивен растеж на млечна среда с образуване на 40 % D (-) и 60 % L (+) млечна киселина при 24-часова ферментация. Културата поддържа добър растеж на MRS arap.The newly isolated Lactobacillus delbrueckii subsp. bulgaricus LLB-06- NBIMCC 8918 is a milk isolate, in the form of Gram / + /, catalase-negative medium to long rods, aerotolerant, with intensive growth at 45 ° C but not at 15 ° C, does not produce CO 2 from glucose, forms metachronatin granules depending on the age of the culture, with intensive growth of lactic medium with the formation of exclusively D (-) lactic acid during 24-hour fermentation. The culture does not support good growth of MRS arap. The other newly isolated strain of Lactobacillus fermentum LLF-01, isolated from the saliva of a healthy person, is Gram / + /, catalase-negative rods with pronounced polymorphism, aerotolerant, with intense growth at 37 ° C, and weaker at 15 ° C, produces CO ₂ of glucose, with intensive growth of lactic medium with formation of 40% D (-) and 60% L (+) lactic acid during 24-hour fermentation. The culture supports good growth of MRS arap.

въглехидратен метаболизъм на щамовете:carbohydrate metabolism of strains:

Наименование монокултурата Name monoculture на on Ферментира Ferments Не ферментира Does not ferment Lactobacillus delbrueckii subsp. bulgaricus LLB-06 Lactobacillus delbrueckii subsp. bulgaricus LLB-06 глюкоза, фруктоза, маноза, лактоза glucose, fructose, mannose, lactose глицерол, еритрол, арабиноза, рибоза, ксилоза, адонитол, β метил-ксилозид, галактоза, сорбоза, рамноза, дулцитол, инозитол, манитол, сорбитол, а метил-Dманозид, а метил-О-глюкозид, Ν ацетил глюкозамин, амигдалин, арбутин, ескулин, салицин, целобиоза, малтоза, мелибиоза, захароза, трехалоза, инулин, мелизитоза, рафиноза, амидон, гликоген, ксилитол, β гентобиоза, тураноза, ликсоза, тагатоза, фукоза, арабитол, глюконат, кето глюконат glycerol, erythrol, arabinose, ribose, xylose, adonitol, β methyl-xyloside, galactose, sorbose, rhamnose, dulcitol, inositol, mannitol, sorbitol, and methyl-D-mannoside, and methyl-O-glucosine , esculin, salicin, cellobiose, maltose, melibiose, sucrose, trehalose, inulin, melisitose, raffinose, amidone, glycogen, xylitol, β gentibiose, turanose, lyxose, tagatose, fucose, arabitol, gluconate Lactobacillus fermentum LLF-01 Lactobacillus fermentum LLF-01 рибоза, галактоза, глюкоза, фруктоза, маноза, лактоза, мелибиоза, захароза, рафиноза, глюконат ribose, galactose, glucose, fructose, mannose, lactose, melibiose, sucrose, raffinose, gluconate глицерол, еритрол, арабиноза, ксилоза, адонитол, β метил-ксилозид, сорбоза, рамноза, дулцитол, инозитол, манитол, сорбитол, а метил-О-манозид, а метил-Dглюкозид, Ν ацетил глюкозамин, амигдалин, арбутин, ескулин, салицин, целобиоза, малтоза, трехалоза, инулин, мелизитоза, амидон, гликоген, ксилитол, β гентобиоза, тураноза, ликсоза, тагатоза, фукоза, арабитол, кето глюконат_________ glycerol, erythrol, arabinose, xylose, adonitol, β methyl-xyloside, sorbose, rhamnose, dulcitol, inositol, mannitol, sorbitol, and methyl-O-mannoside, and methyl-D-glucoside, за arcinylbutyline, acetylglycin , cellobiose, maltose, trehalose, inulin, melisitose, amidone, glycogen, xylitol, β gentobiose, turanose, lyxose, tagatose, fucose, arabitol, keto gluconate _________

Останалите монокултури съответно на щам Lactobacillus helveticus LLH-108- NBIMCC 8760, Lactobacillus acidophilus LLA-10- NBIMCC 8242 и Lactobacillus rhamnosus LLR-L1- NBIMCC 8769 са известни и участвуват в други разработени състави.The remaining monocultures of Lactobacillus helveticus strain LLH-108-NBIMCC 8760, Lactobacillus acidophilus strain LLA-10-NBIMCC 8242 and Lactobacillus rhamnosus LLR-L1-NBIMCC 8769, respectively, are known and participate in other formulations developed.

Щамовете притежават технологична стабилност с доказана добра преживяемост по време на лиофилизация, както и запазена висока жизненоспособност по време на 0 съхранение, което от своя страна гарантира правилното протичане на процесите храносмилане и поддържане баланса на чревната перисталтика.The strains have technological stability with proven good survival during lyophilization, as well as high viability during 0 storage, which in turn ensures the proper course of the digestive processes and maintaining the balance of intestinal peristalsis.

С оглед постигане на продукт с целящите свойства, щамовете са селекционирани по критерия: - антимикробна активност, - преживяемост в симулиран чревен сок, - ин-витро адхезия към човешка клетъчна линия и - имуномодулираща активност. Щамовете не са 5 генно модифицирани и са без доказана преносима антибиотична резистентност.In order to achieve a product with the target properties, the strains were selected by the criterion: - antimicrobial activity, - survival in simulated intestinal juice, - in-vitro adhesion to a human cell line and - immunomodulatory activity. The strains are not 5 genetically modified and have no proven transmissible antibiotic resistance.

Методът за получаване на синбиотичния състав съгласно настоящото изобретение се състои в следното. Всяка една от петте вида бактерии се култивира поотделно в подходящата : ^:: :5 : · *. · · ·* ·· * ···· * ♦ · за вида хранителна среда на основата на мляко или бульонна среда, последвано от лиофилизиране и смилане. Предпочитаните инградиенти за такава среда са обезмаслено мляко, дрождев екстракт, пептон от казеин, месен екстракт, D-глюкоза. Към средата се добавят соли като сулфатни (магнезиев и манганов) и буфери, като натриев ацетат, натриев фосфат, калиев фосфат. Оптималното съдържание на обезмаслено мляко варира между 1218% (w/v). Количеството на дрождевия екстракт варира от 0,06 % (w/v) до 0,5 %. В даден случай, добавянето на суха (MRS) среда в количества 0,1-1.0% (w/v) оказва също благоприятен ефект върху биологичната активност на лактобацилите.The process for preparing the synbiotic composition of the present invention consists of the following. Each of the five types of bacteria is cultured separately in the appropriate: ^::: 5: · *. · · · * ·· * ···· * ♦ · for the type of nutrient medium based on milk or broth medium, followed by lyophilization and digestion. Preferred ingredients for such an environment are skim milk, yeast extract, casein peptone, meat extract, D-glucose. To the medium are added salts such as sulfate (magnesium and manganese) and buffers such as sodium acetate, sodium phosphate, potassium phosphate. The optimal skimmed milk content varies between 1218% (w / v). The amount of yeast extract varies from 0.06% (w / v) to 0.5%. Optionally, the addition of dry (MRS) medium in amounts of 0.1-1.0% (w / v) also has a beneficial effect on the biological activity of lactobacilli.

Предпочитаните инградиенти на средата с добавен сух MRS вклюват D-глюкоза, пептон от казеин, месен екстракт и дрождев екстракт, както и Tween-80, ди-амониев хидроген цитрат, СНзСООИа, MgSO₄ и MnS0₄. Към основната среда се добавя и буферно-активираща смес, представляваща воден разтвор на СНзС001Ма, КНгРО₄, Na2HPO₄, MgSO₄, MnSO₄ и дрождевият екстаркт е в количество от 0,2 % (v/v) до 2.0 %, по-специално 0.5 % (v/v). Така описаните и подбрани компоненти на средата се смесват и разтварят във вода.Preferred medium ingredients with added dry MRS include D-glucose, casein peptone, meat extract and yeast extract, as well as Tween-80, diammonium hydrogen citrate, CH3COOA, MgSO ₄ and MnSO ₄ . To the basic medium is added a buffer-activating mixture, representing an aqueous solution of CH3C001Ma, KN2PO ₄ , Na2HPO ₄ , MgSO ₄ , MnSO ₄ and the yeast extract is in an amount of 0.2% (v / v) to 2.0%, more especially 0.5% (v / v). The components of the medium thus described and selected are mixed and dissolved in water.

След пълното разтваряне и хомогенизиране на използваните инградиенти, средата се довежда до pH 6.6-6.8 и се стерилизира на температурен режим 107°С за 3 мин. Преди инокулиране културалната среда се охлажда до температура 38°С. Количеството на инокулиращата култура варира от 1 до 5 % (v/v) от общото количество на културалната среда. Ферментацията се извършва при температура 37°С в продължение на 16-24 ч. Получената активна култура в края на ферментационния процес се смесва с протектираща среда, съдържаща 10 % сухо обезмаслено мляко и 10 % захароза и се лиофилизира. Получената суха култура се смила и съхранява на -20 °C до момента на смесване. Получената смес се хомогенизира и подлага съответно на капсулиране, дозиране в сешетни форми или таблетиране. За изготвяне на таблети, получената бактериална смес се оситнява, пресява и последователно се прибавят пресети останалите инградиенти и помощни вещества. Прилага се по 2 капсули/ таблети или 1 саше за доза от един до два пъти дневно. Употребата може да бъде неограничено време. Съхранява се на хладно и сухо място.After complete dissolution and homogenization of the ingredients used, the medium is adjusted to pH 6.6-6.8 and sterilized at 107 ° C for 3 minutes. Before inoculation, the culture medium is cooled to 38 ° C. The amount of inoculating culture varies from 1 to 5% (v / v) of the total amount of culture medium. The fermentation is carried out at a temperature of 37 ° C for 16-24 hours. The resulting active culture at the end of the fermentation process is mixed with a protecting medium containing 10% skimmed milk powder and 10% sucrose and lyophilized. The resulting dry culture was ground and stored at -20 ° C until mixing. The resulting mixture is homogenized and subjected to encapsulation, dosing or tabletting, respectively. To prepare the tablets, the resulting bacterial mixture is sieved, sieved and the other ingredients and excipients are successively added. Take 2 capsules / tablets or 1 sachet per dose once or twice a day. The use can be unlimited. Store in a cool, dry place.

Съгласно друг аспект, настоящото изобретение се отнася до пробиотичен бактериален състав с имуномодулиращо действие, съдържащ ефективно количество от живи клетки на биологически чиста култура от бактериален щам, избран от групата на; Lactobacillus delbrueckii subsp. bulgaricus LLB -06- НБПМК 8918, Lactobacillus helveticus LLH-108- НБПМК 8760, Lactobacillus acidophilus LLA-10- N НБПМК 8242, : : *··;6· : :, : ·According to another aspect, the present invention relates to a probiotic bacterial composition with immunomodulatory action, comprising an effective amount of live cells of a biologically pure culture of a bacterial strain selected from the group of; Lactobacillus delbrueckii subsp. bulgaricus LLB -06- NBPMK 8918, Lactobacillus helveticus LLH-108- NBPMK 8760, Lactobacillus acidophilus LLA-10- N NBPMK 8242,:: * ··; 6 ·::,: ·

Lactobacillus rhamnosus LLR-L1- НБПМК 8769,Lactobacillus rhamnosus LLR-L1- NBPMK 8769,

Lactobacillus fermentum LLF-01- НБПМК 8781, или техни комбинации, при описаните количества в mg съгласно настоящото изобретение.Lactobacillus fermentum LLF-01-NBPMK 8781, or combinations thereof, at the amounts described in mg according to the present invention.

Съгласно друг следващ аспект, настоящото изобретение се отнася до бактериален щам Lactobacillus fermentum LLF-01, регистреран в НБПМК под № 8781 от 21.05.2013 и щам Lactobacillus delbrueckii subsp. bulgaricus LLB -06, регистриран в НБПМК под № 8918 от 01.02.2016 продуценти на бактериален състав с имуномодулиращо действие.According to another further aspect, the present invention relates to a bacterial strain of Lactobacillus fermentum LLF-01 registered in the NBPMK under № 8781 of 21.05.2013 and a strain of Lactobacillus delbrueckii subsp. bulgaricus LLB -06, registered in NBPMK under № 8918 from 01.02.2016 producers of bacterial composition with immunomodulatory action.

Съгласно още един следващ аспект, настоящото изобретение се отнася до използването на имуномодулиращ синбиотичен бактериален състав, пробиотичен бактериален състав, щам Lactobacillus fermentum LLF-01 НБПМК № 8781 и щам Lactobacillus delbrueckii subsp.bulgaricus LLB -06/НБПМК № 8918, за получаване на продукт под формата на хранителна добавка и/или фармацевтичен продукт, предназначен за профилактика и/или съпътстващ терапията на възпалителни и имунни заболявания на гастроинтестиналния тракт (имуномодулатор на ниво мукозна имунна система и вродена имунна система), както и за нормализиране и балансиране функцията на стомашночревния тракт в т.ч след продължителен прием на антибиотици, при симтоми на чревна дисбиоза и синдром на възпаленото черво.According to another further aspect, the present invention relates to the use of an immunomodulatory synbiotic bacterial composition, a probiotic bacterial composition, a strain of Lactobacillus fermentum LLF-01 NBPMK № 8781 and a strain of Lactobacillus delbrueckii subsp.bulgaricus LLB, yielding -06 / 89B in the form of a food supplement and / or a pharmaceutical product intended for the prevention and / or concomitant therapy of inflammatory and immune diseases of the gastrointestinal tract (immunomodulator at the level of mucosal immune system and innate immune system), as well as for normalizing and balancing gastrointestinal function including after prolonged use of antibiotics, in symptoms of intestinal dysbiosis and inflammatory bowel syndrome.

Предимствата на изобретението се основават на свойствата на използваните щамове лактобацили, ( в т.ч самостоятелно на новоизолираните), подбрани така, че в комбинация помежду си и в комбинация с останалите компоненти- пребиотика и коластрата, да дават висока преживяемост, да постигат специфичния пробиотичен ефект и гарантирана антимикробна активност срещу човешки патогени, адхезионни и имуномодулиращи свойства. Мултибактериалната формула комбинира по уникален начин щамове с: -широк спектър на антимикробна активност, като ги прави естествени антагонисти на потенциални патогенни бактерии; - добра транзитна толерантност, като позволява на щамовете да преживеят пасажа през различните отдели на гастроинтестиналния тракт и да достигнат жизнени и активни до тяхното прицелно място на действие в долните отдели на тънките черва; и - висока адхезионна способност, като гарантира трайно колонизация на чревния тракт и взаимодействие на микроорганизмите с мукозната повърхност, както и осигурява имуномодулиращата им активност.The advantages of the invention are based on the properties of the used strains of lactobacilli (including independently of the newly isolated), selected so that in combination with each other and in combination with the other components - prebiotics and colostrum, to give high survival, to achieve specific probiotic effect and guaranteed antimicrobial activity against human pathogens, adhesive and immunomodulatory properties. The multibacterial formula combines strains in a unique way with: - a wide range of antimicrobial activity, making them natural antagonists of potential pathogenic bacteria; - good transit tolerance, allowing the strains to survive the passage through the different sections of the gastrointestinal tract and to reach vital and active to their target site of action in the lower parts of the small intestine; and - high adhesion ability, ensuring permanent colonization of the intestinal tract and interaction of microorganisms with the mucous surface, as well as providing their immunomodulatory activity.

Несмилаемите диетични растителни фибри от арабиногалактан, благодарение на своята имуномодулираща (антивирусна и антитуморна) активност съчетано в синбиотичната формула формират защитен слой около пробиотиците и контролират тяхното : :’⁷·:·: : * освобождаване в чревния тракт. Обогатената мултифункционална формула на синбиотичния състав съгласно изобретението, включваща богата на пролин полипептиди (4.5%) и съдържание на IgG (минимум 20%) коластра, доставя необходимите имунни, растежни фактори и балансирана комбинация от витамини и минерали.The indigestible dietary plant fibers from arabinogalactan, due to their immunomodulatory (antiviral and antitumor) activity combined in the synbiotic formula form a protective layer around the probiotics and control their:: ' ⁷ ·: ·:: * release in the intestinal tract. The enriched multifunctional formula of the synbiotic composition according to the invention, comprising proline-rich polypeptides (4.5%) and an content of IgG (minimum 20%) colostrum, provides the necessary immune, growth factors and a balanced combination of vitamins and minerals.

Полученият състав съгласно настоящото изобретение е с висока активност в границите от 10 ⁸ до Ю¹⁰ CFU бактрии/гр от състава и трайност на готовия продукт до 24 месеца.The resulting composition according to the present invention has a high activity in the range of 10 ⁸ to 10 ¹⁰ CFU bacteria / g of the composition and a shelf life of the finished product up to 24 months.

Прилаганият орално синбиотичен състав при здрави хора, демонстрира имуномодулиращ ефект като повишава % на активираните (natural killer) NK клетки в периферната кръв и понижава нивата на противовъзпалителни цитокини (IL-6 и IFN-y) във фекални проби, а при 10 пациенти със синдром на раздразненото черво (IBS), намалява възпалителната активност, изразена в намяляване на фекалния калпротектин и предизвиква редукция или дори изчезване на клиничната симптоматика.The orally synbiotic composition administered to healthy people demonstrated an immunomodulatory effect by increasing the% of activated (natural killer) NK cells in the peripheral blood and lowering the levels of anti-inflammatory cytokines (IL-6 and IFN-γ) in faecal samples, and in 10 patients with the syndrome. of irritable bowel syndrome (IBS), reduces the inflammatory activity, expressed in a decrease in fecal calprotectin and causes a reduction or even disappearance of clinical symptoms.

КРАТКО ОПИСАНИЕ НА ФИГУРИТЕBRIEF DESCRIPTION OF THE FIGURES

15 15 ФИГ. 1: FIG. 1: Преживяемост на щамове лактобацили в симулиран чревен сок; Survival of lactobacilli strains in simulated intestinal juice; ФИГ. 2: FIG. 2: Адхезионна способност на щамове лактобацили спрямо човешка колоректална аденокарциномна клетъчна линия НТ-29 (ААСС НТВ 38); Adhesion ability of lactobacilli strains to human colorectal adenocarcinoma cell line HT-29 (AASS NTV 38); ФИГ. 3: FIG. 3: Иимуномодулираща активност на монокултурите по отношение на TNF-a получена от Balb/c мишки; Immunomodulatory activity of monocultures on TNF-α derived from Balb / c mice; 20 20 ФИГ. 4: FIG. 4: Иимуномодулираща активност на монокултурите по отношение на 1L-6 получена от Balb/c мишки; Immunomodulatory activity of monocultures on 1L-6 derived from Balb / c mice; c c ФИГ.5: FIGURE 5: Иимуномодулираща активност на монокултурите по отношение на IL-10 получена от Balb/c мишки; Immunomodulatory activity of monocultures on IL-10 derived from Balb / c mice; ФИГ. 6: FIG. 6: Имуномодулираща активност по отношение секрецията на TNF-α, IL-6 и IL-10, Immunomodulatory activity with respect to the secretion of TNF-α, IL-6 and IL-10, 25 25 получени от Balb/c мишки на пробиотичния състав и синбиотичния състав; Balb / c mice of probiotic composition and synbiotic composition; ФИГ.7: FIGURE 7: Фекален калпотротектин (ФКП) на синбиотичния състав при пациенти със синдром на раздразненото черво (IBS). Faecal calpotrotectin (PCP) of the synbiotic composition in patients with irritable bowel syndrome (IBS).

ПРИМЕРНИ ИЗПЪЛНЕНИЯ НА ИЗОБРЕТЕНИЕТОEXAMPLES OF THE INVENTION

ПРИМЕР 1.EXAMPLE 1.

А/ Състав на активната формула на основата на пробиотик, съдържаща активната монокултура на щама лактобацил Lactobacillus delbrueckii subsp. bulgaricus в mg.A / Composition of the active probiotic-based formula containing the active monoculture of the lactobacillus strain Lactobacillus delbrueckii subsp. bulgaricus in mg.

·· · ···· · ··· · ···· · ·

Компонент/пример 1. A.l. 1.А.2 1.А.ЗComponent / Example 1. A.l. 1.A.2 1.A.Z

Активна бактериална смес Lactobacillus delbrueckii subsp. bulgaricus LLB-06 30 60 120Active bacterial mixture Lactobacillus delbrueckii subsp. bulgaricus LLB-06 30 60 120

В/Състав на активната формула на основата на пробиотик, съдържаща активната монокултур на щама лактобацил Lactobacillus fermentum в mg.B / Composition of the active formula based on a probiotic containing the active monoculture of the lactobacillus strain Lactobacillus fermentum in mg.

Компонент/ пример 1. В.1. 1.В.2 1.В.ЗComponent / example 1. B.1. 1.В.2 1.В.З

Активна бактериална смес Lactobacillus fermentum LLF-01 55 110 220Active bacterial mixture Lactobacillus fermentum LLF-01 55 110 220

С/ Състав на активната формула на основата на пробиотик, съдържаща петте активни монокултури.C / Composition of the probiotic-based active formula containing the five active monocultures.

Активната бактериална смес в една доза съдържа следните компоненти : сух лиофилизат активни монокултури на пет щама лактобацили в mg както следва:The active bacterial mixture in one dose contains the following components: dry lyophilisate active monocultures of five strains of lactobacilli in mg as follows:

Компонент/ пример Активна бактериална смес Component / example Active bacterial mixture l.C.l. l.C.l. 1.C.2 1.C.2 1.C.3 1.C.3 1.C.4 1.C.4 Lactobacillus delbrueckii subsp. Lactobacillus delbrueckii subsp. 30 30 60 60 75 75 120 120 bulgaricus LLB -06- НБПМК 8918 bulgaricus LLB -06- NBPMK 8918 Lactobacillus helveticus LLH-108- НБПМК 8760 Lactobacillus helveticus LLH-108- NBPMK 8760 55 55 110 110 137.5 137.5 220 220 Lactobacillus acidophilus LLA-10- НБПМК 8242 Lactobacillus acidophilus LLA-10- NBPMK 8242 55 55 110 110 137.5 137.5 220 220 Lactobacillus rhamnosus LLR-L1- НБПМК 8769 Lactobacillus rhamnosus LLR-L1- NBPMK 8769 55 55 110 110 137.5 137.5 220 220 Lactobacillus fermentum LLF-01- НБПМК 8781 Lactobacillus fermentum LLF-01- NBPMK 8781 55 55 110 110 137.5 137.5 220 220 Общо/mg Total / mg 250 250 500 500 625 625 1000 1000

Всяка една от петте монокултури отлактобацилите се култивира поотделно, като за целта се приготвят необходимите хранителни среди, характерни за дадения щам и вид, след което същите се лиофилизират и смилат.Each of the five monocultures of lactobacilli is cultured separately, for which purpose the necessary nutrient media specific to the given strain and species are prepared, after which they are lyophilized and digested.

Култивирането на всяка монокултура протича в предварително приготвена течна хранителна среда (културална среда), към която са разтворени и ресуспендирани основните компоненти, стимулиращи ферментационния процес на съответната монокултура.The cultivation of each monoculture takes place in a pre-prepared liquid nutrient medium (culture medium), to which the main components stimulating the fermentation process of the respective monoculture are dissolved and resuspended.

Получаване на чиста култура от Lactobacillus delbrueckii subsp. bulgaricus LLB -06- НБПМК 8918 и Lactobacillus helveticus LLH-108- НБПМК 8760.Obtaining a pure culture of Lactobacillus delbrueckii subsp. bulgaricus LLB -06- NBPMK 8918 and Lactobacillus helveticus LLH-108- NBPMK 8760.

100 л възстановено сухо обезмаслено мляко /14 % сухо вещество/ с добавка на 0.1 % дрождев екстракт и 2.0 л буферно активираща смес представляваща воден разтвор на СНзСООИа, КН2РО4, Na₂HPO₄, MgSO₄, MnSO₄ и дрождевия екстракт се стерилизират при 107°С за 3 мин. Средата се охлажда до 37°С и се инокулира с 4 л опреснена лабораторна ·· · · · · · · култура. Инкубира се във ферментор при 37°С в продължение на 16 часа при pH 5,6 - 5,7 при автоматичен режим. Получената култура се охлажда до 4°С, смесва се с 10 л протектираща среда, съдържаща 10 % сухо обезмаслено мляко, 10 % захароза и се лиофилизира. Получената суха култура се смила и се съхранява на -20 °C до момента на смесване.100 l of reconstituted skimmed milk powder (14% dry matter) with the addition of 0.1% yeast extract and 2.0 l of buffer activating mixture representing an aqueous solution of CH3COOA, KN2PO4, Na ₂ HPO ₄ , MgSO ₄ , MnSO ₄ and the yeast extract were sterilized at 107 ° C for 3 minutes. The medium is cooled to 37 ° C and inoculated with 4 l of refreshed laboratory culture. Incubate in a fermenter at 37 ° C for 16 hours at pH 5.6 - 5.7 in automatic mode. The resulting culture was cooled to 4 ° C, mixed with 10 L of protecting medium containing 10% skimmed milk powder, 10% sucrose and lyophilized. The resulting dry culture was ground and stored at -20 ° C until mixing.

Получаване на чиста култура от Lactobacillus rhamnosus LLR -L1- НБПМК 8769, Lactobacillus acidophilus LLA-10- НБПМК 8242 и Lactobacillus fermentum LLF-01- NBIMCC 8781.Preparation of pure culture from Lactobacillus rhamnosus LLR -L1-NBPMK 8769, Lactobacillus acidophilus LLA-10-NBPMK 8242 and Lactobacillus fermentum LLF-01-NBIMCC 8781.

100 л възстановено сухо обезмаслено мляко /14 % сухо вещество/ с добавка на 0.1 % дрождев екстракт, 0.1 % (w/v) MRS бульон и 2.0 л буферно активираща смес представляваща воден разтвор на CH₃COONa, КН₂РО₄, Na₂HPO₄, MgSO₄, MnSO₄ и дрождев екстракт се стерилизират при 107°С за 3 мин. Средата се охлажда до 37°С и се инокулира с 4 л опреснена лабораторна култура. Инкубира се във ферментор при 37°С в продължение на 16 часа при pH 5.6 - 5.7 при автоматичен режим. Получената култура се охлажда до 4°С, смесва се с 10 л протектираща среда, съдържаща 10 % сухо обезмаслено мляко, 10 % захароза и се лиофилизира. Получената суха култура се смила и се съхранява на -20 °C до момента на смесване.100 l of reconstituted skimmed milk powder (14% dry matter) with the addition of 0.1% yeast extract, 0.1% (w / v) MRS broth and 2.0 l of buffer activating mixture representing an aqueous solution of CH ₃ COONa, CN ₂ PO ₄ , Na ₂ HPO ₄ , MgSO ₄ , MnSO ₄ and yeast extract were sterilized at 107 ° C for 3 minutes. The medium was cooled to 37 ° C and inoculated with 4 L of refreshed laboratory culture. Incubate in a fermenter at 37 ° C for 16 hours at pH 5.6 - 5.7 in automatic mode. The resulting culture was cooled to 4 ° C, mixed with 10 L of protecting medium containing 10% skimmed milk powder, 10% sucrose and lyophilized. The resulting dry culture was ground and stored at -20 ° C until mixing.

ПРИМЕР 2EXAMPLE 2

Примерен синбиотичен състав в една доза на капсули, съдържащ активната формула на основата на про, -пребиотик и коластра в mg както следва:Exemplary synbiotic composition in a single capsule dose containing the active formula based on pro, -prebiotic and colostrum in mg as follows:

Компонент/ пример Синбиотичен състав Component / example Synbiotic composition 2.1. 2.1. 2.2 2.2 2.3 2.3 2.4 2.4 Lactobacillus delbrueckii subsp. bulgaricus LLB -06- НБПМК8918 Lactobacillus delbrueckii subsp. bulgaricus LLB -06- NBPMK8918 30 30 60 60 75 75 120 120 Lactobacillus helveticus LLH-108- НБПМК8760 Lactobacillus helveticus LLH-108- NBPMK8760 55 55 110 110 137.5 137.5 220 220 Lactobacillus acidophilus LLA-10- НБПМК8242 Lactobacillus acidophilus LLA-10- NBPMK8242 55 55 110 110 137.5 137.5 220 220 Lactobacillus rhamnosus LLR-L1- НБПМК 8769 Lactobacillus rhamnosus LLR-L1- NBPMK 8769 55 55 110 110 137.5 137.5 220 220 Lactobacillus fermentum LLF-01- НБПМК 8781 Lactobacillus fermentum LLF-01- NBPMK 8781 55 55 110 110 137.5 137.5 220 220 Arabinogalactans ( от Larix gmelinii) Arabinogalactans (from Larix gmelinii) 100 100 200 200 250 250 400 400 Коластра ASP60-201- (от крава, съдържаща мин. 20 % IgG и мин. 4.5 % PRPs)___________________ Colostrum ASP60-201- (from a cow containing at least 20% IgG and min. 4.5% PRPs) ___________________ 50 50 100 100 125 125 200 200

Общо/ mgTotal / mg

400 800 1000 1600 • W · '--- _e. _φ : : ίλ: .:: *· · · ·/ ·· · ···· · J400 800 1000 1600 • W · '--- _e . _φ :: ίλ:. :: * · · · · / ·· · ···· · J

Получената многокомпонентна смес от лиофилизираните монокултури се смесва с останалите компоненти от пребиотика арабиногалактан и коластрата в съотношения съгласно настоящото изобретение, хомогенизира се и е подходяща за дозиране на необходимата орална форма. Полученият състав се разпределя в стомашно-устойчиви веган капсули, избрани от DR caps ТМ, Capsugel, предназначени за орален прием.The resulting multicomponent mixture of lyophilized monocultures is mixed with the other components of the prebiotic arabinogalactan and colostrum in the proportions according to the present invention, homogenized and is suitable for dosing the required oral form. The resulting composition is distributed in gastro-resistant vegan capsules selected from DR caps TM, Capsugel, intended for oral administration.

Всяка капсула съдържа 250 млн. живи бактерии към момента на производство, полученият състав е стабилен със срок на годност 24 месеца.Each capsule contains 250 million live bacteria at the time of production, the resulting composition is stable with a shelf life of 24 months.

ПРИМЕР 3EXAMPLE 3

Синбиотичен състав на готов продукт, лиофилизирана култура за 1000 гр готов продукт в гр, както следва:Synbiotic composition of finished product, lyophilized culture per 1000 g of finished product in g, as follows:

Компонент/ примерComponent / example

Синбиотичен състав 3.1.Synbiotic composition 3.1.

Lactobacillus delbrueckii subsp.75 bulgaricus LLB -06-NBIMCC 8918Lactobacillus delbrueckii subsp.75 bulgaricus LLB -06-NBIMCC 8918

Lactobacillus helveticus LLH-108- НБПМК 8760137.5Lactobacillus helveticus LLH-108- NBPMK 8760137.5

Lactobacillus acidophilus LLA-10- НБПМК 8242137.5Lactobacillus acidophilus LLA-10- NBPMK 8242137.5

Lactobacillus rhamnosus LLR-L1- НБПМК 8769137.5Lactobacillus rhamnosus LLR-L1- NBPMK 8769137.5

Lactobacillus fermentum LLF-01- НБПМК 8781137.5Lactobacillus fermentum LLF-01- NBPMK 8781137.5

Arabinogalactans (Ametis JSC, от Larix gmelinii)250Arabinogalactans (Ametis JSC, from Larix gmelinii) 250

Коластра ASP60-201-125 (от крава, съдържаща мин. 20 % IgG и мин. 4.5 % PRPsColostrum ASP60-201-125 (from a cow containing min. 20% IgG and min. 4.5% PRPs

ПРИМЕР 4EXAMPLE 4

4.а. Резултати от проведените изпитвания върху активните монокултури лактобацили.4.a. Results of tests performed on active lactobacilli monocultures.

Щамове лактобацили са изпитани за: - антимикробна активност, - преживяемост в симулиран чревен сок, - In vitro адхезия към човешка клетъчна линия и - имуностимулираща активност, като изявилите се рекордьори от всички изпитвани щамове са представени съответно на Фиг 1- 5 и са селектирани за синбиотичния състав съгласно настоящото изобретение.Lactobacilli strains were tested for: - antimicrobial activity, - survival in simulated intestinal juice, - In vitro adhesion to human cell line, and - immunostimulatory activity, with the record holders of all tested strains presented in Figures 1-5 and respectively. the synbiotic composition according to the present invention.

Преживяемостта на отделните щамове е доказана в симулиран чревен сок, като активност с брой клетки в началото на изпитването и след 2 часа в 0.3% жлъчни соли pH 7, резултатите са представени на фиг.1.The survival of the individual strains was demonstrated in simulated intestinal juice, as activity with the number of cells at the beginning of the test and after 2 hours in 0.3% bile salts pH 7, the results are presented in Fig.1.

Антимикробната активност е представена на табл. 1 и изпитвана срещу човешки патогени Staphylococcus aureus, Escherichia coli и Candida albicans по метода на ямките c две моделни • ♦ · * · * ··· · · a · : :11.: .:: ·. · _{: :}·· * ···· · · * системи бульон и мляко с кисели (А) и неутрализирани (N ) безклетъчни супернатанти от експоненциални култури лактобацили, като индикираните резултати с (++)- проявяват силна инхибиция, а (+)- значима и (-) — липса на инхибиция.The antimicrobial activity is presented in table. 1 and tested against human pathogens Staphylococcus aureus, Escherichia coli and Candida albicans by the method of wells with two model • ♦ · * · * ··· · · a ·:: 11 .:. :: ·. · _:: ·· * ···· · · * broth and milk systems with acidic (A) and neutralized (N) cell-free supernatants from exponential cultures of lactobacilli, the indicated results with (++) - showing strong inhibition, and (+ ) - significant and (-) - no inhibition.

Адхезионната способност на монокултурите е тествана спрямо човешка колоректална аденокарциномна клетъчна линия НТ-29 (ААСС НТВ 38), като е направено количествено определяне на броя адхезирали клетки cfu/ml на рекордьорите Lactobacillus helveticus LLH108 и Lactobacillus fermentum LLF-01, чиято висока адхезия ги определя като потенциални колонизатори на чревния тракт. Резултатите са представени на Фиг. 2.The adhesion ability of the monocultures was tested against human colorectal adenocarcinoma cell line HT-29 (AACC HTB 38) by quantifying the number of adhered cells cfu / ml of the recorders Lactobacillus helveticus LLH108 and Lactobacillus fermentum and LLF as potential colonizers of the intestinal tract. The results are presented in Figs. 2.

Имуномодулиращите свойства на монокултурите са подложени на тест за сравнителна имуномодулираща активност по отношение секрецията на цитотоксични сигнални пептиди от спленоцити по отношение на TNF-α, IL-6 и IL-10, получени от Balb/c мишки, съгласно съответно фиг. 3-5. Намаляването на секрецията на противовъзпалителните цитокини TNF-a и IL-6, и стимулиране секрецията на антивъзпалителния цитокин IL-10 влияе в посока на локалния имунен толеранс и благоприятства чревната микросреда, която е непрекъснато под атака на различни хранителни антигени и микроорганизми. За определянето са използвани топлинно инактивирани клетки, получени от експоненциална култура на съответните лактобацили. Убити клетки с определена концентрация (1х10⁸cfu/ml) се инкубират съвместно със спленоцити, изолирани от далаци на Balb/с мишки (на възраст 6-8-седмици) за 20 ч /37°С. Супернатантите, получени при третиране на спленоцитите са използвани за определяне концентрацията на произведените цитокини TNF-a, IL-6 и IL-10, посредством ензимен имуноанализ ( ELISA kits).The immunomodulatory properties of the monocultures were tested for comparative immunomodulatory activity with respect to the secretion of cytotoxic signal peptides by splenocytes with respect to TNF-α, IL-6 and IL-10 obtained from Balb / c mice according to FIG. 3-5. Reducing the secretion of the anti-inflammatory cytokines TNF-α and IL-6, and stimulating the secretion of the anti-inflammatory cytokine IL-10 affects the local immune tolerance and favors the intestinal microenvironment, which is constantly under attack by various food antigens and microorganisms. Thermally inactivated cells obtained from an exponential culture of the respective lactobacilli were used for the determination. Killed cells at a given concentration (1x10 ⁸ cfu / ml) were incubated with splenocytes isolated from the spleens of Balb / mice (6-8 weeks old) for 20 h / 37 ° C. Supernatants obtained from splenocyte treatment were used to determine the concentration of cytokines TNF-α, IL-6 and IL-10 produced by enzyme-linked immunosorbent assay (ELISA kits).

4.6. Резултати от тестовете на активната пробиотична компонента и активната пробиотична компонента с добавен арабиногалактан и коластра.4.6. Test results of the active probiotic component and the active probiotic component with added arabinogalactan and colostrum.

Получената пробиотична компонента, съдържаща смес от петте щама лактобацили, както и пробиотичната компонента с добавен арабиногалактан и коластра, получени съответно съгласно изобретението ( пример 1.С и примери 2) са подложени на тест за сравнителна имуномодулираща активност по отношение секрецията на цитотоксични сигнални пептиди от спленоцити по отношение на TNF-a, IL-6 и IL-10, получени от Balb/с мишки, съгласно фиг. 6. Добавянето на арабиногалактан и коластра съществено понижава синтезата на противовъзпалителния цитокин IL-6 в сравнение с чистия пробиотик.The obtained probiotic component containing a mixture of the five strains of lactobacilli, as well as the probiotic component with added arabinogalactan and colostrum obtained according to the invention (Example 1.C and Examples 2) were tested for comparative immunomodulatory activity with respect to the secretion of cytotoxic signal peptides from splenocytes with respect to TNF-α, IL-6 and IL-10 derived from Balb / s mice according to FIG. 6. The addition of arabinogalactan and colostrum significantly reduces the synthesis of the anti-inflammatory cytokine IL-6 compared to the pure probiotic.

: Hz.:.: ·,*:· :: Hz.:.: ·, *: ·:

Определянето на имуномодулиращите свойства на пробиотичната компонента и синбиотичната смес е проведено както по-горе при оценката на отделните монокултури. Лактобацилите в пробиотичната компонента са представени в еднакво съотношение.The determination of the immunomodulatory properties of the probiotic component and the synbiotic mixture was performed as above in the evaluation of the individual monocultures. The lactobacilli in the probiotic component are represented in equal proportions.

4.в Резултати от тестовете на синбиотичния състав съгласно изобретението върху здрави хора, доказващи имуномодулиращ ефект.4.c Results of tests of the synbiotic composition according to the invention on healthy people, demonstrating an immunomodulatory effect.

Полученият синбиотичен продукт, дозиран в капсули съгласно изобретението , съдържащ 5 -те щама лактобацили, арабиногалактан и коластра е тестван по отношение следните компоненти на имунната система- естествени клетки убийци (NK) в периферното кръвообращение, тест върху противовъзпалителни цитокини IL-6 и IFN-y във фекални проби при 20 здрави доброволци (7 мъже и 13 жени) на средна възраст 35±2 (19-66) години след 21-дневен прием на синбиотичния състав при режим на приемане 2 капсули /400mg сутрин и 2 капсули /400mg вечер. Кръвните проби са тествани за тотални и активирани NK клетки посредством цитометрия (FACS Calibur, BD, USA) c моноклонални антитела (anti CD3 FITC, anti -CD16/56 PE, anti-HLA-DR PE Cy5, BD, USA). Един грам от фекалните проби се хомогенизират в 1000 ml фосфатен буфер. Получените супернатанти от фекалните екстракти след центрофугиране са тествани за наличие на цитокините IL-6 и IFN-y посредством ензимен имуноанализ (Human ELISA kits, Gen Probe Diaclone SAS, FR). Резултатите преди и след прием на синбиотичния състав по отношение NK клетки са представени в табл. 2, а цитокините IL-6 и IFN-y, като концентрация в pg/ml са представени съответно на табл. 3. Прилагането на синбиотичния продукт отчита имуномодулиращ ефект след орален прием на синбиотика съгласно настоящото описание, изразен в статистически достоверното повишаване % на NK клетки в периферната кръв и понижаване на нивата на противовъзпалителните цитокини IL6 и IFN-y във фекалните проби.The resulting synbiotic product, dosed in capsules according to the invention, containing the 5 strains of lactobacilli, arabinogalactan and colostrum was tested for the following components of the immune system - natural killer cells (NK) in the peripheral circulation, test for anti-inflammatory cytokines IL-6 and IFN- y in faecal samples in 20 healthy volunteers (7 men and 13 women) with a mean age of 35 ± 2 (19-66) years after 21 days of synbiotic composition with 2 capsules / 400mg in the morning and 2 capsules / 400mg in the evening . Blood samples were tested for total and activated NK cells by cytometry (FACS Calibur, BD, USA) with monoclonal antibodies (anti CD3 FITC, anti-CD16 / 56 PE, anti-HLA-DR PE Cy5, BD, USA). One gram of the faecal samples is homogenized in 1000 ml of phosphate buffer. The supernatants obtained from the faecal extracts after centrifugation were tested for the presence of the cytokines IL-6 and IFN-γ by enzyme-linked immunosorbent assay (Human ELISA kits, Gen Probe Diaclone SAS, FR). The results before and after administration of the synbiotic composition with respect to NK cells are presented in table. 2, and the cytokines IL-6 and IFN-γ, as a concentration in pg / ml are presented in Table 2, respectively. 3. Administration of the synbiotic product reported an immunomodulatory effect after oral administration of the synbiotic according to the present description, expressed in a statistically significant increase in% of NK cells in peripheral blood and a decrease in levels of anti-inflammatory cytokines IL6 and IFN-γ in faecal samples.

4.с. Резултати от тестовете на синбиотичния състав съгласно изобретението върху пациенти със синдром на раздразненото черво (IBS).4.s. Test results of the synbiotic composition according to the invention on patients with irritable bowel syndrome (IBS).

Полученият синбиотичен продукт, дозиран в капсули съгласно изобретението, съдържащ 5 -те щама лактобацили, арабиногалактани и коластра е тестван по отношение компонентите на имунната система- маркера за оценка на чревното възпаление- фекален калпотротектин (ФКП) от фекални проби при 20 пациенти с IBS (6 мъже и 14 жени) на средна възраст 37±2 (24-52) години след 21-дневен прием на синбиотичния състав при режим на приемане 2 капсули /400mg сутрин и 2 капсули /400mg вечер.The obtained synbiotic product, dosed in capsules according to the invention, containing the 5 strains of lactobacilli, arabinogalactans and colostrum was tested for the components of the immune system - the marker for the assessment of intestinal inflammation - fecal calpotrotectin (PCP) from faecal samples in 20 patients with IB 6 men and 14 women) with a mean age of 37 ± 2 (24-52) years after 21 days of synbiotic composition with 2 capsules / 400mg in the morning and 2 capsules / 400mg in the evening.

: из.:.: : ·.. · f ·· · ···· · ·: из.:.:: · .. · f ·· · ···· · ·

ФКП е изследван чрез имунохроматографски тест за количествено определяне на калпротектин в човешки фекални проби (Quantum Blue, Buehlmann Laboratories AG, Switzerland). Крайният резултат се представя в микрограма на грам фецес (pg/g). Чувствителността на теста е в границите 30 pg/g - 300pg/g. Нормалните нива на ФКП при това 5 изследване са под 50 pg/g с посочване на „сива зона до 60 pg/g·PCP was assayed by immunochromatographic assay for the quantification of calprotectin in human fecal samples (Quantum Blue, Buehlmann Laboratories AG, Switzerland). The final result is presented in micrograms per gram of faeces (pg / g). The sensitivity of the test is in the range of 30 pg / g - 300pg / g. Normal PCP levels in this study were below 50 pg / g, indicating a “gray area up to 60 pg / g ·

Резултатите преди и след прием на синбиотичния състав съгласно описанието по отношение ФКП са представени съответно на фиг. 7, като е отчетено статистически достоверно намаляване на възпалителната активност след приема на синбиотика, изразено в намаляване на ФКП и редукция, дори изчезване на клиничната симптоматика.The results before and after administration of the synbiotic composition as described for PCP are presented in FIG. 7, with a statistically significant decrease in the inflammatory activity after the intake of the synbiotic, expressed in a decrease in PCP and reduction, even disappearance of the clinical symptoms.

Таблица № 1 - Антимикробна активност на активните монокултуриTable № 1 - Antimicrobial activity of active monocultures

Тест микроорганизъмTest microorganism

Staphylococcus aureus ; I _ NBIMCC 3703_______i Staphylococcus aureus; I _ NBIMCC 3703_______i Escherichia coE ___NBIMCC 3702 Escherichia coE ___NBIMCC 3702 Candida albicans NBIMCC 74 Candida albicans NBIMCC 74 Lb.bulgaricus LLB-06 Lb.bulgaricus LLB-06 \ A~: N⁺⁺ i\ A ~: N ⁺⁺ i Α~Λ N⁺------------------------------b-Α ~ Λ N ⁺ ------------------------------ b- . _ ................... - . _ ................... - Lb. hebedcus LLH-108 Lb. hebedcus LLH-108 | A^N** ' ‘ ' l· | A ^ N ** '‘’ l · A++ ' . i A ++ '. i Lb. acidophilus LLA-10 Lb. acidophilus LLA-10 ! A; N++ !! A; N ++ A** A ** _______________ _______________ Lb. rhamnosus ULR-L1 Lb. rhamnosus ULR-L1 I A**; N** ; I A **; N **; A** A ** A⁺ A ⁺ --------- —.......-.....---- ί Lb.fermentum LLF-01 --------- —.......-.....---- and Lb.fermentum LLF-01 1 A-; 1 A-; A” A ” - -

Таблица № 2- Имуномодулиращ ефект на синбиотичния състав съгласно изобретението върху здрави хора по отношение NK клеткиTable № 2- Immunomodulatory effect of the synbiotic composition according to the invention on healthy people against NK cells

Здрави индивид»Healthy individual »

Преди прием на синбиотик Before taking a synbiotic След прием на синбиотик__________ After taking a synbiotic __________ Статистическа 1 _ разлика, р___________1 Statistical 1 _ difference, p ___________ 1 Общ процент на Total percentage of Ϊ6.1±Ϊ.2 Ϊ6.1 ± Ϊ.2 14.6±1.2 14.6 ± 1.2 0.073 1 0.073 1 Жилетки Vests (8.1-25.5) i (8.1-25.5) i (5.1-25.7) (5.1-25.7) _ ____________________________J _ ______________________________ Активирани Activated 4.9±0.6 ; 4.9 ± 0.6; 7.1±0.7 7.1 ± 0.7 NK клетки носещи NK carrier cells (1.3-9.9) | (1.3-9.9) | (2.6-13.5) (2.6-13.5) 1 1 (HLA-DR+) (HLA-DR +) .........................................— ........................................— ____________-..........................—......—---------- ____________-.......................... — ......—----------

Таблица №3- Имуномодулиращ ефект на синбиотичния състав съгласно изобретението върху здрави хора по отношение IL-6 и IFN-yTable №3- Immunomodulatory effect of the synbiotic composition according to the invention on healthy people with respect to IL-6 and IFN-γ

Здрави индивидиHealthy individuals

Преди прием на синбиотик Before taking a synbiotic След прием на синбиотик After taking a synbiotic Статистическа разлика, р Statistical difference, p IL-6, pg/ml IL-6, pg / ml 5.6±0.2 (3.9-6.75) 5.6 ± 0.2 (3.9-6.75) 3.1±0.1 (2.3-5.5) 3.1 ± 0.1 (2.3-5.5) 0.000 0.000 IFNg, pg/ml IFNg, pg / ml 73.2±2.6 (55.5-92.5)_________ 73.2 ± 2.6 (55.5-92.5) _________ 43.6±3.9 ¢28.3-99)__________ 43.6 ± 3.9 ¢ 28.3-99) __________ 0.000 0.000

Преживяемост в симулиран чревен сокSurvival in simulated intestinal juice

Lb. bulgaricus LLB-ОбLb. bulgaricus LLB-Ob

Lb. helveticusLLH-108Lb. helveticusLLH-108

Lb. acidophilusLLA-10Lb. acidophilusLLA-10

Lb. rhamnosus LLR-L1Lb. rhamnosus LLR-L1

Lb fermentum LLF-01Lb fermentum LLF-01

2 4 6 8 10 122 4 6 8 10 12

Log cfu. gr начален брой клетки и Log cfu/gr след 2ч в 0.3% жлъчни соли, рН7Log cfu. gr initial cell number and Log cfu / gr after 2h in 0.3% bile salts, pH7

Фиг 1Figure 1

Адхезия към НТ-29 клетъчна линия (%)Adhesion to HT-29 cell line (%)

Lb. bulgaricus LLB-06Lb. bulgaricus LLB-06

Lb. helveticus LLH-108Lb. helveticus LLH-108

Lb. acidophilus LLA-10Lb. acidophilus LLA-10

Lb. rhamnosus LLR-L1Lb. rhamnosus LLR-L1

Lb.fermentunt LLF-01Lb.fermentunt LLF-01

I—I )-2%I — I) -2%

3.4%3.4%

0.:0 .:

16,8%16.8%

123456789123456789

Log сГи/пйначало ^u Log cfu ml адхезиралн клеткиLog cGi / pinachal ^u Log cfu ml adhesion cells

Фиг 2Figure 2

TNF-apg/mlTNF-apg / ml

22,322.3

0,6 (-) контрола0.6 (-) control

контролаcontrol

Lb. Lb. Lb. Lb. Lb.Lb. Lb. Lb. Lb. Lb.

bulgaricus helveticus acidophilus rhamnosus fermentui чbulgaricus helveticus acidophilus rhamnosus fermentui h

LLB-06 LLH-108 LLA-10 LLR-L1 LLF-01LLB-06 LLH-108 LLA-10 LLR-L1 LLF-01

Фиг.ЗFig.Z

56.956.9

i I1.-6 pg/mland I1.-6 pg / ml

123,5123.5

rhatftnasus LL.R-L1 LLF-O1rhatftnasus LL.R-L1 LLF-O1

Фиг.4Figure 4

Фиг.5Figure 5

Фиг.6Fig.6

OKJI(mg/kg)OKJI (mg / kg)

Claims

PATENT CLAIMS

An immunomodulatory synbiotic composition comprising προ-, prebiotic and colostrum, characterized in that it comprises a probiotic component consisting of live cells of a biologically pure culture of a bacterial strain selected from the group of: Lactobacillus delbrueckii subsp. bulgaricus LLB -06- NBPMK 8918, Lactobacillus helveticus LLH-108- NBPMK 8760, Lactobacillus acidophilus LLA-10- -NBPMK 8242, Lactobacillus rhamnosus LLR-L1- -NBPMK 8769 and

Lactobacillus fermentum LLF-01-NBPMK 8781 or combinations thereof and prebioticcarbinogalactan.

Immunomodulatory synbiotic composition according to claim 1, characterized in that the amount in mg of the components is respectively: Lactobacillus delbrueckii subsp. bulgaricus LLB -06- NBPMK 8918 - from 30 to 120, Lactobacillus helveticus LLH-108- NBPMK 8760 - from 55 to 220, Lactobacillus acidophilus LLA-10- NBPMK 8242 - from 55 to 220, Lactobacillus rhamnosus LLR-L1- L1- H1- N1 from 55 to 220, Lactobacillus fermentum LLF-01- NBPMK 8781 - from 55 to 220, Arabinogalactan - from 100 to 400 and colostrum - from 50 to 200.

Immunomodulatory synbiotic composition according to claim 1, characterized in that the arabinogalactan is derived from the bark of Siberian larch (Larix gmelinii).

Immunomodulatory synbiotic bacterial composition according to claim 1, characterized in that the colostrum contains at least 4.5% proline-containing peptides and at least 20% IgG.

5. Immunomodulatory probiotic composition, characterized in that it contains live cells of a biologically pure culture of a bacterial strain selected from the group of:

Lactobacillus delbrueckii subsp. bulgaricus LLB -06- NBPMK 8918,

Lactobacillus helveticus LLH-108- NBPMK 8760,

Lactobacillus acidophilus LLA-10- NBPMK 8242,

Lactobacillus rhamnosus LLR-L1- NBPMK 8769,

Lactobacillus fermentum LLF-01- NBPMK 8781 or combinations thereof.

Immunomodulatory probiotic composition according to claim 5, characterized in that it contains an effective amount of a bacterial mixture of:

Lactobacillus delbrueckii subsp. bulgaricus LLB -06- NBPMK 8918,

Lactobacillus helveticus LLH-108- NBPMK 8760,

Lactobacillus acidophilus LLA-10- NBPMK 8242,

Lactobacillus rhamnosus LLR-L1- NBPMK 8769 and

Lactobacillus fermentum LLF-01- NBPMK 8781.

Immunomodulatory probiotic bacterial composition according to claims 5 and 6, characterized in that the amount in mg of the components of the bacterial mixture is respectively:

Lactobacillus delbrueckii subsp. bulgaricus LLB -06- NBPMK 8918 - from 30 to 120,

Lactobacillus helveticus LLH-108- NBPMK - from 55 to 220,

Lactobacillus acidophilus LLA-10- NBPMK 8242 - from 55 to 220,

Lactobacillus rhamnosus LLR-L1- NBPMK 8769 - from 55 to 220,

Lactobacillus fermentum LLF-01- NBPMK 8781 - from 55 to 220.

Immunomodulatory probiotic bacterial composition according to claims 1 to 7, characterized in that it has an activity in the range from 10 ⁸ to ¹⁰ CFU bacteria / g of the composition.

9. Lactobacillus fermentum strain LLF-01, registered with the NBPMK under № 8781 dated 21.05.2013.

10. Strain of Lactobacillus delbrueckii subsp. bulgaricus LLB -06, registered with the NBPMK under № 8918 dated 01.02.2016.

Use of an immunomodulatory synbiotic composition according to claims 1-4 for the preparation of a product in the form of a food supplement and / or a pharmaceutical product intended for the prevention and / or concomitant therapy of inflammatory and immune diseases of the gastrointestinal tract, as well as for normalization and balancing the function of the gastrointestinal tract, including after prolonged use of antibiotics, in symptoms of intestinal dysbiosis and inflammatory bowel syndrome.

Use of an immunomodulatory probiotic bacterial composition according to claims 5-8 for the preparation of a product in the form of a food supplement and / or a pharmaceutical product intended for the prophylaxis and / or concomitant therapy of inflammatory and immune diseases of the gastrointestinal tract, as well as for normalization and balancing of the function of the gastrointestinal tract, including after long-term use of antibiotics, symptoms of intestinal dysbiosis and inflammatory bowel syndrome.

Use of a strain of Lactobacillus fermentum LLF-01 NBPMK № 8781 according to claim 9, for the preparation of a product in the form of a food supplement and / or a pharmaceutical product intended for the prophylaxis and / or concomitant therapy of inflammatory and immune diseases of the gastrointestinal tract, as well as to normalize and balance the function of the gastrointestinal tract, including after prolonged use of antibiotics, in symptoms of intestinal dysbiosis and inflammatory bowel syndrome.

14. Use of a strain of Lactobacillus delbrueckii subsp. bulgaricus LLB -06, registered in the NBMPM under № 8918, according to claim 10, for the preparation of a product in the form of a food supplement and / or a pharmaceutical product intended for the prophylaxis and / or concomitant therapy of inflammatory and immune diseases of the gastrointestinal tract, and to normalize and balance the function of the gastrointestinal tract, including after prolonged use of antibiotics, in symptoms of intestinal dysbiosis and inflammatory bowel syndrome.