NO803569L - Proeveblanding for peroksydaktive stoffer, proeveinnretning inneholdende blandingen, fremgangsmaate for fremstilling av denne og fremgangsmaate for bestemmelse av peroksydaktive stoffer - Google Patents

Description

Oppfinnelsen vedrører generelt området for diagnos-tiske prøver og mere spesielt til de prøver som er anvend-elige i kvalitativ og kvantitativ bestemmelse av peroksydaktive stoffer.

Påvisning av små mengder peroksydaktive stoffer

som skjulte blødninger, hemoglobin, myoglobin, leukocyter, bakterier eller andre peroksydaktive analyter i legems-væsker og i legemsekskreter har lenge blitt ansett som en uvurderlig hjelp for leger i diagnose av mange unormale tilstander.

Forskjellige fremgangsmåter, blandinger og innretninger er omtalt i litteraturen for påvisning av skjulte peroksydaktive stoffer. Eksempelvis omtales i US patent nr. 2 290 436, 2 799 660, 2 838 377, 3 012 976, 3 092 463

og 3 092 464 flere prøveblandinger som har blitt anvendt for å oppfylle behovet for en enkel pålitelig prøve for skjulte blødninger. Disse prøveblandinger er basert på

en peroksydisk eller katalytisk aktivitet av prostetiske grupper nærværende i blodet. Se også Schwartz, Zeitschrift fiir gerichtlich Medizin (Journal of Forensic Medicine) 12; 1928.

Adams et al., har i US patent nr. 3 2 90 117 angitt at følsomheten av disse skjulte blødningsprøveblandinger markert kan forbedres og potensieres ved tilsetning av kinolin eller visse kinolinderivater som kinin. Ved til-setningen av disse kinolinderivater til tidligere skjulte blødningsblandinger er det mulig å finne 5 -til :50 røde blodceller (RBC)/mikroliter (yl) av prøven som tilsvarer en blodfortynning så lav som 1:1 000 000. Bruk av syre-addisjonssalter eller addukter av kinolin og dets derivater som potensieringsstoffer omtales i US patent nr. 3 986 833. US patent nr. 3 853 472 vedrører bruk av glødede polycykliske derivater av kinolin som benzokinoliner og pyridokinoliner som potensierings- og aktiveringsmidler med tilsvarende følsomheter. I US patent nr. 3 975 161 omtales bruk av isokinoliner som potentsiatorer.

Det er også funnet andre forbindelser enn fra kinolinfamilien er effektive. US patent nr. 3 917 452 angir bruk av vinylpyridinforbindelser som følsomhets-gjørere. US patent nr. 4 063 894 angir bruk av substituerte tiazolforbindelser for dette formål.

Ifølge oppfinnelsen tilveiebringes forbedrede prøve-blandinger, innretninger og fremgangsmåte for påvisning av peroksydaktive stoffer. Prøveblandingene innbefatter en indikator i stand til å oksyderes i nærvær av peroksydaktive stoffer for å danne en farveendring, et oksyderende stoff i stand til å oksydere indikatoren og et følsomhets-middel. Følsomhetsmiddelet omfatter en forbindelse valgt fra klassen av forbindelser med den generelle formel

hvori R.jog R- uavhengig av hverandre er valgt blant hydrogen og C|-C^-alkyl. Foretrukne forbindelser er benzimidazol og 5,6-dimetylbenzimidazol.

Ennskjønt det benyttes spesifikke uttrykk av klar-hetsgrunner, refererer disse uttrykk bare til utførelsene som er valgt for å forklare oppfinnelsen og begrenser ikke oppfinnelsens omfang.

Prøvesammensetningene som forbedres ved å inkorpo-rere de ovennevnte følsomhetsøkere inneholder videre minst en indikator av et oksyderingsmiddel og kan fremstilles i tablettform eller inkorporeres med en bærer som en absorb-ent matriks. Egnede indikatorer er i stand til å oksyderes i nærvær av et peroksydaktivt stoff for å danne en farveforandring og innbefatter velkjente materialer som 3,3",

5,5<1->tetrametylbenzidin, o-tolidin, o-toluidin, p-toluidin, o-fenylendiamin, N,N<1->dimetyl-p-fenylendiamin, N,N'-dietyl-p-fenylendiamin, benzidin, p-anisidin, dianisidin, o-kresol, m-kresol, p-kresol, alfa-naftol, beta-naftol, katekol, guaiakol, pyrogallol eller disse fra de heterocykliske

azinserier, eksempelvis bis-(N-etyl-kinol-2-on)-azin eller (N-metylbenzotiazol-2-on)-(1-etyl-3-fenyl-5-mettriazol-2-on)-azin. Som oksyderende midler kan det benyttes eksempelvis kumenhydroperoksyd, diisopropylbenzen-hydroperoksyd, paramentan-hydroperoksyd, 2,5-dimetylheksan-2,5-dihydroper-oksyd eller andre velkjente oksyderende midler som er i stand til å oksydere indikatorene.

I en foretrukket utførelsesform er den forbedrede prøveblanding ifølge oppfinnelsen inkorporert på eller med en bærer og anvendes som en dypp- og avles-prøveinnretning. Prøveinnretningen kan fremstilles ved hjelp av forskjellige velkjente metoder som innbefatter impregnering av et absorberende bærermaterial med en oppløsning eller oppløs-ninger av prøveblandingen og deretter tørking av den impreg-nerte matriks, således adhesivt inkorporerende innen matriksen en finfordelt god blanding av ingrediensene. Konsentrasjonsområdet av følsomhetsmiddel som kan benyttes for impregneringsoppløsninger ligger generelt fra ca. 0,05 g/ 100 ml til ca. 1,0 g/100 ml og fortrinnsvis fra ca. 0,1 g/ 100 ml til ca. 0,5 g/100 ml. Uttrykket bærer refererer til matrikser som er uoppløselige i og bibeholder deres struk-turelle integritet når de utsettes for fysiologiske eller andre væsker som skal undersøkes. Egnede matrikser som kan benyttes innbefatter papir, cellulose, tre, syntetisk harpiks-ark, glassfibre, ikke-vevde og vevde tekstiler, forskjellige organiske polymerer som polypropylen og andre organiske materialer som er kjent som filmdannere for fagfolk. Alternativt kan bæreren ha form av en presset eller støpt tablett inneholdende vanlig bærermaterial. Av enkelthets-grunner kan bæreren på hensiktsmessig måte festes til en uoppløselig bærer eller en håndtakdel som kan fremstilles av polystyren.

Prøveinnretningen benyttes fortrinnsvis ved øye-blikkelig dypping av denne i en prøve eller på annen måte innføres prøve i bærermatriksen hvorved det fremkommer en synlig farveforandring når den peroksydaktive analyt er til stede. Bærerens volumetriske kapasitet tjener til å begrense mengden av prøve som absorberes derpå og hvortil prøveblandingen som er inkorporert utsettes for. Et hvilket som helst overskudd av prøve kan fjernes ved å vaske eller trekkpapirbehandle bæreren for derved å begrense mengden av prøven som undersøkes til volumet derav som har gått inn i bærermatriksen. Prøveinnretningen kan benyttes på samme måte når prøver av plasma, serum eller andre kroppsvæsker undersøkes.

Prøveinnretninger i form av behandlet bærermatriks lagres ofte i betraktelige tidsperioder før bruk, og det er derfor ønskelig at reagensene som velges ikke lett auto-oksyderes i luft. Fordelaktig bør prøveinnretningene beskyttes for lys og i noen tilfeller er det ønskelig å holde dem forseglet i en fuktighetsavstøtende pakke som bare åpnes for å fjerne en eller flere prøveinnretninger like før bruk.

Refleksjonsavlesninger av farven som frembringes

ved reaksjonen med peroksydaktiv^analyt som er til stede i prøven kan oppnås med kommersielt tilgjengeligespektrofoto-metre som Beckman DK-2 spektrofotometer, Beckman Instruments, Inc., Fullerton, California eller spektrokolorimeter SCF-1, Israel Electrooptical Industry Ltd. (distribuert i USA av Broomer Research Corporation, Plainwell, Long Island, N.Y.).

Oppfinnelsen skal forklares nærmere ved hjelp av noen eksempler.

Eksemp_el_I

Dette eksempel viser prøver gjennomført for å sammenligne de følsomme stoffer ifølge oppfinnelsen med et kjent følsomt stoff, 6-metoksykinolin.

Det ble fremstilt fire impregneringsoppløsninger

som følger:

1. Følgende forbindelser ble satt til 41,67 ml destil-lert vann i følgende rekkefølge. Hvert produkt ble oppløst før det neste ble tilsatt.

Deretter ble det tilsatt 41,67 ml N,N-dimetylformamid i denne oppløsning, og deretter tilsettes følgende forbindelser :

2. Samme/ unntatt 6-metoksykinolin.

3. 0,124 g benzimidazol istedenfor 6-metoksykinolin. 4. 0,153 g 5,6-dimetylbenzimidazol istedenfor 6-metoksykinolin.

Et 25 cm x 10 cm stykke av Eaton&Dikeman No. 237 papir ble impregnert til metning med den første oppløsning og tørket 11 minutter ved 95-97°C. Identiske stykker av papir ble deretter hver impregnert med en av de gjenværende oppløsninger. De kuttes deretter i stykker på 0,125 cm x 0,125 cm og festes på et plasthåndtak.

Oppløsninger av hemoglobin ble fremstilt og inn-retningene preparert ovenfor ble undersøkt både nyfremstilte og etter lagring i 1 uke ved 60°C. Det lavest påvisbare nivå av hemoglobin i urinen angis som mg/dl i tabell I.

Disse resultater viser at forbindelsene benyttet ifølge oppfinnelsen er effektive som følsomhetsgjørere i påvisning av peroksydaktive stoffer som skjulte blødninger.

Det kan foretas modifikasjoner uten å overskride oppfinnelsens ramme slik den fremgår av kravene.

Claims (8)

1. Prøveblanding for "påvisning av peroksydaktive stoffer omfattende en indikator i stand til å oksyderes i nærvær av et peroksydaktivt stoff for å danne en farveforandring og et oksydasjonsmiddel i stand til å oksydere indikatoren, karakterisert ved at den inneholder en forbindelse med formel:

hvori R 1 og R2 er uavhengig av hverandre valgt fra hydrogen og Cj -C^ -alkyl som følsomhetsgjøringsmiddel.

2. Blanding ifølge krav 1, karakterisert ved at følsomhetsgjøringsmiddelet er benzimidazol.

3. Blanding ifølge krav 1, karakterisert ved at følsomhetsgjøringsmiddelet er 5,6-dimetylbenzimidazol.

4. Prøveinnretning for påvisning av peroksydaktive stoffer som omfatter en bærer inkorporert med blandingen ifølge krav 1.

5. Prøveinnretning for påvisning av peroksydaktive stoffer, karakterisert ved at den omfatter en bærer inkorporert med blandingen ifølge krav 2.

6. Prøveinnretning for påvisning av peroksydaktive stoffer, karakterisert ved at det omfatter en bærer inkorporert med blandingen ifølge krav 3.

7. Fremgangsmåte for fremstilling av en innretning for påvisning av peroksydaktive stoffer, karakterisert ved at en bærer inkorporeres med blandingen ifølge et av kravene 1 til 3.

8. Fremgangsmåte for bestemmelse av peroksydaktive stoffer, karakterisert ved at prøven bringes i berøring med blandingen ifølge et av kravene 1 til 3 og en farveforandring iakttas.