NO803568L - Proeveblanding for peroksydaktive stoffer, proeveinnretning inneholdende blandingen, fremgangsmaate for fremstilling av denne og fremgangsmaate for bestemmelse av peroksydaktive stoffer - Google Patents

Description

Oppfinnelsen vedrører generelt område for diagnosti-ske prøver og mer spesielt til de prøver som er anvendlig kvalitative og kvantitativ bestemmelse av peroksydaktive stoffer.

Bestemmelsen av små mengder av peroksydaktive stoffer vs,om skjulte blødninger, hemogroblin myoglobin leukosyter, bakterier eller annen peroksydaktiv anlytt i kroppsvæsker og 1 kroppsekskreta har lenge blitt ansett som uvurderlig hjelp for praktiserende leger i diagnose av mange abnorme tilstander.

Mange fremgangsmåter, blandinger og innretninger er omtalt i litteraturen for påvisning av skjult peroksydaktive stoffer. Eksempelvis se US patent nr. 2 290 436, 2 799 660, 2 838 377 og nr. 3 012 976, 3 092 463 og 3 09 2 464 forskjellige prøveblandinger som er funnet for å møte behov for enkel på-litelig prøve for skjulte blødninger. Disse prøveblandinger er basert på en peroksyd eller katalytisk aktivitet av de protetiske grupper tilstedeværende i blod. Se også Schwartz, Zeitschrift fur gerichtlich Medizin (Journal of Forensic Medicine) 12^: 1928.

Det er funnet av Adams et al. ifølge US patent nr.

3 29 0 117 at følsomheten av disse skjulte blodprøveblandinger kan markert forbedres og potensieres ved tilsetning av kinolin eller visse kinolin derivater som kinin. Med tilsetningen av disse kinolin derivater til de tidligere skjulte blødnings-blandinger er det mulig å påvise 5 til 50 røde blodceller (RBC)/mikroliter (/ul) i prøven som tilsvarer en blodfortynn-ing så lav som 1:1 000 000. Bruk av de sure addisjonssalter eller addukter av kinolin eller dets derivater som ptenserende midler er omtalt i US patent nr. 3 9 86 8 33. I US patent nr. 3 853 472 omtales bruk av smeltet polysykliske derivater av kinolin som benzokinolin og pyridokinoliner som potenserende eller aktiverende stoffer med tilsvarende følelsesøkninger.

I US patent nr. 3 9 75 161 omtales bruk av isokinoliner som potensiator.

Forbindelser utenom kinolinfamilien har også blitt funnet effektive. US patent nr. 3 917 452 vedrører bruk av vinyl pyridin forbindelser som følsomhetsøkere. US patent nr. 4 063 894 vedrører bruk av substituerte thiazol forbindelser for dette formål.

Ifølge oppfinnelsen tilveiebringer forbedrede prøve-blandinger, innretninger og fremgangsmåte for påvisning av peroksydaktive stoffer. Prøveblandingene innbefatter en indikator i stand til å oksyderes i nærvær av peroksydaktive stoffer til å tilveiebringe en fargeforandring, et oksyderende middel effektivt til å oksydere indikatoren og det følsomhets-økende middel. Det følsomhetsøkende middel omfatter 4-azafluoren.

Enskjønt her benyttes spesifikke termer for klar-hetsgrunner, refererer disse uttrykk bare til utførelser regnet for anskueliggjørelse og skal ikke begrense oppfinnelsens ramme.

Prøveblandingene som er forbedret ved å inkorporere følsomhetsøkere omtalt ovenfor inneholder videre i det minste en indikator og et oksyderende stoff og kan fremstilles i

tablettform eller inkorporert med en bærer som en absorberende matriks. Egnede indikatorer er i stand til å oksydere sitt nærvær av et peroksyd aktivt stoff og danne en fargeforandring og inkluderer kjente materialer som 3,3', 5,5'-tetrametyl-benzidin, o-tolidin, o-toluidin, p-toluidin, o-fenylendiamin, N,N'-dimetyl-p-fenylendiamin, N,N'-dietyl-p-fenylendiamin, benzidin, p-anisidin, dianisidin, o-kresol, m-kresol, p-kresol, alfa-naftol, beta-naftol, katekol, guaiakol, pyrogallol eller de av den hetrosykliske azin serie, eksempelvis bis-(N-etyl-kinol-2-on)-azin eller (N-metylbenzothiazol-2-on)- (1-etyl-3-feny1-5-metriazol-2-on)-azin. Som oksyderende stoff kan det benyttes eksempelvis, kumen hydroperoksyd, diisopropylbenzen hydroperoksyd, paramentan hydroperoksyd, 2,5-dimetylheksan-2,5-dihydroperoksyd og andre velkjente oksyderingsmidler som er i stand til å oksydere indikatorene.

I en foretrukken utførelses form er den forbedrede prøveblariding ifølge oppfinnelsen inkorporert på eller med en bærer og utnyttet som dyppe- og avlesningprøveinnretning. Prøveinnretningen kan fremstilles ved forskjellige velkjente metoder som innbefatter impregnering av et absorberende bæremateriale med en oppløsning eller oppløsninger av prøve- blandingen og deretter tørke den impregnerte matrise, og så-ledes adhesivt å inkorporere innen matrisen . en finfordelt god blanding av ingrediensene. Konsentrasjonsområdet for det følsomøkende stoff kan benyttes for impregneringsoppløsninger, er generelt fra ca. 0,05 g/100 ml til ca. 1,0 g/100 ml og fortrinnsvis fra ca. 0,1 g/100 ml til ca. 0,5 g/100 ml.. Uttrykket bærer refererer til matriser som er uoppløslige

og bibeholder deres strukturelle integritet når de utsettes for fysiologiske eller andre væsker som skal undersøkes. Egnede matriser som kan benyttes inkluderer papir, cellulose, tre, syntetiske harpiks ark, glassfibre, ikke-vevet og vevet tekstil, forskjellige organiske polymerer som polypropylen og andre organiske materialer velkjent som filmdannere for fagfolk på området. Alternativt kan bæreren ha form av en presset eller støpti .tablett inneholdende vanlig bæremateriale. Av hensiktsmessighetsgrunner kan bæreren hensiktsmessig forbindes til en uoppløselig bærer eller håndtakdel som kan fremstilles av polystyren.

Prøveinnretningen benyttes fortrinnsvis ved øye-blikkelig dypping i en prøve eller ved annen måte å innføre en prøve i bærematrisen hvorved det fremkommer en synlig fargeforandring når en peroksydaktiv analytt er tilstede.

Den volumetriske kapasitet av bæreren tjener til å begrense mengden av prøven som absorberes på den og hvortil prøve-blandingen inkorporert settes med. Overskudd i prøver kan fjernes ved å vaske eller ryste bæreren for derved å begrense mengden av prøven som er undersøkt til volumet som har aktuelt gått inn i bærematrisen. Prøveinnretningen kan benyttes kan benyttes på samme måte når det undersøkes prøver av plasma, serum eller andre kroppsvæsker.

Prøveinnretninger i form av en behandlet bærematrise er ofte lagret i betraktelige tider før bruk og det er derfor ønskelig at reagensene som velges ikke lett auto-oksyderes i luft. Fordelaktig bør prøveinnretningen være beskyttet for utsettelse av lys og i noen tilfelle er det ønskelig å holde den forseglet i en fuktighetsavstøtende pakke som åpnes bare for å fjerne en eller flere prøveinnretninger kort før bruk.

Reflekterende avlesninger av farge fremstilt ved reaksjonen med det peroksydaktive analytt.'til stede i prøven kan oppnås av kommersielt tilgjengelig spektrofotmetre som' Beckman DK-2 spektrofotometer, Beckman Instruments, Inc., Fullerton, California eller spektrokolorimeter SCF-1, Israel Electrooptical Industry Ltd. (distribuert i USA av Broomer Research Corporation, Plamnv/ell, Long Island/N.Y.).

Følgende eksempel viser en foretrukket utførelse av oppfinnelsen.

Eksempel I

Dette eksempel viser prøver utført for å sammen-ligne det følsomhetsøkende middel ifølge oppfinnelsen med kjent følsomhetsøkende stoff 6-metoksy kinolin.

Tre impregneringsoppløsninger ble fremstilt som følger:

1. Følgende forbindelse ble satt til 41,67 ml destillert vann ifølgende rekkefølge. Hver forbindelse ble oppløst før den neste ble tilsatt.

Deretter ble det tilsatt 41,67 ml N,N-dimetylformamid til denne oppløsning og deretter ble det tilsatt følgende forbindelser:

2. Det samme, untatt 6-metoksy kinolin.

3. 0,175 g 4-azafluoren ble benyttet istedet for 6-metoksy kinolin.

En 25cm x 10cm stykke av Eaton&Dikeman rir. 237 papir ble impregnert i metning med den første op<p>løsning og tørket 11 minutter ved 95-97°C. Identiske papairstykker ble deretter hvert impregnert med en av gjenværende oppløsninger. De ble deretter kuttet i stykker på 0,5 x 0/Scm og fastgjort til plastikkhåndtak.

O<p>pløsninger av hemoglobin ble fremstilt og inn-retningene fremstilt ovenfor ble undersøkt både friske og etter lagring i en uke ved 60°C. Det lavest påvisbare nivå av hemoglobin i urin gjengis som milligram/desiliter i tabell

I.

Disse resultater viser at forbindelsene som benyttes ifølge oppfinnelsen er effektive som følsomhetsøkere i påvisning av peroksydaktive stoffer som skjulte blødninger

Det kan selvsagt foretas modifikasjoner uten å over-skride oppfinnelsens ramme slik den fremgår av kravene.

Claims (4)

1. Prøveblanding for påvisning av peroksydaktive stoffer omfattende en indikator i stand til å oksyderes i nærvær av et peroksydaktivt stoff for å danne en fargeforandring og et oksyderende middel i stand til , oksydere indikatoren, karakterisert ved at det inneholder 4-azafluoren som følsomhetsøkende stoff.

2. Prøveinnretning for påvisning av peroksydaktive stoffer, karakterisert ved at det omfatter en bærer inkorporert med blandingen ifølge krav 1.

3. Fremgangsmåte for fremstilling av en innretning for påvisning av peroksydaktive stoffer, karakterisert ved at en bærer inkorporeres med blandingen ifølge krav 1.

4. Fremgangsmåte for påvisning av peroksydaktive stoffer, karakterisert ved at prøven bringes i kontakt med en blanding ifølge krav 1 og en even-tuell resulterende fargeforandring iakttas.