NO791699L - Benzylpyrimidinforbindelser og fremgangsmaate til deres fremstilling - Google Patents

Description

Benzylpyrimidinforbindelser og fremgangsmåter for deres fremstilling..

Foreliggende oppfinnelse angår 2,4-diamino~5-benzyl-pyrimidiner, farmasøytiske preparater inneholdende disse forbindelser samt fremgangsmåter for fremstilling av forbindelsene og preparatene, samt preparatenes anvendelse ved behandling av bakterieinfeks j oner.

Man har kunnet vise at visse 2,4-diamino-5-benzylpyri-midiner har fordelaktige farmasøytiske egenskaper, og kan være sulfonamidforsterkende forbindelser.

Således beskriver U.K. patent nr. 875»562 blant annet forbindelser med formel (i):

12 T

hvor R , R og R-' er de samme eller forskjellige, og Cq„4alkoksy-grupper. Trimetoprim, 2, 4-diamino~5-(3f 4, 5-trimetoksybenzyl)pyrimidin, er spesielt beskrevet i U.K. patent nr. 875»562 og er generelt det mest virksomme antibakterielle middel blant de 2,4-diamino-5~benzylpyrimidiner som er kjent til dags dato. Trimetoprim har vært meget anvendt i det siste ti-år i mennesketerapi i kombinasjon med forskjellige sulfonamider, og da spesielt med sulfametoazol for behandling av bakterieinfeksjoner, og er blant annet anbefalt for behandling av Neisseria gonoré (Rodin & Seth, Brit. J. Vener. Dis. 1972, 48»517).

2,4-diamino-5-benzylpyrimidiner med en hydroksygruppe i 4-stillingen på fenylringen og med antibakteriell aktivitet, er beskrevet i U.K. patent nr. 1,128,234 og belgisk patent nr. 846,397.

U.K. Patent nr. 1,128,234 beskriver blant annet forbindelser med formelen (il):

hvor R 4 og «5, som kan være de samme eller forskjellige er hydrogen, halogen, C-|_^ alkyl eller C-j_^alkoksy. Man har imidlertid bare eksemplifisert de forbindelser med formelen (il) hvorR^ og R^ er metoksy, og det er ingen eksemplifisering av

U K

de forbindelser hvor R^ og R-^ er C-j_^alkylgrupper.

Belgisk Patent nr. 846,937 beskriver forbindelser med formelen (ill):

hvor R^ er en alkylgruppe eller et halogenatom. Det er ikke nevnt at noen av disse forbindelser er aktive mot Neisseria.

En annen gruppe 2,4-diamino-5-benzylpyrimidiner med antibakteriell aktivitet er beskrevet i U.K. patent nr. 1,374,162, og de har formelen (iv):

hvor R7 ' og R^ 9 er de samme eller forskjellige £>2.- h alkylgrupper osg enR e Q hver or en R^ Ceqr _12 en aalklkyl okseylglreur ppCe -i_kia2 n aflkroekmssytigrlulpeps e. (U.KFo. rbpaintdenetle-ne nr. 1375162 og 1413471) ved at man alkylerer en forbindelse med formelen (v):

hvorr<7>og R^ er som beskrevet tidligere. Skjønt forbindelser med formelen (v) er beskrevet i U.K. patent nr. I,4l3j471 som brukbare mellomprodukter ved fremstillingen av farmakologiske aktive forbindelser, så er de ikke i seg selv beskrevet med noen som helst farmakologisk aktivitet.

Man har nå funnet at en gruppe forbindelser med formel (v) hvor b<7>og R^ er de samme eller forskjellige 0£-4alkylgrupper, er ekstremt aktive in vitro og in vivo mot bakteriene Neisseria gonorrhoeae og Neisseria meningitidis. Mange av forbindelsene i denne gruppe er mer enn to ganger så aktive in vivo som trimetoprim mot disse Neisseria-organismer, og i visse tilfelle er de"?:; opptil 15 ganger mer aktive enn trimetoprim in vitro. Denne oppdagelse er av meget stor betydning i forbindelse med mennesketerapi sett på bakgrunn av de siste oppdagelser (New Scientis, 28. april 1977)pp« 202, 205, a"V penicillin-resistente raser av Neisseria. Penicilliner har tidligere vært meget anvendt ved behandlingen av Neisseria-infeksjoner.

Foreliggende forbindelser kan også brukes og er effek-tive ved behandling av infeksjoner og i pattedyr som er forårsaket av anaerobe mikro-organismer så som arter av Bacteroides, Fusobacterium, Peptococcus, Peptostreptococcus og Clostridium, for eksempel Bacteroides fragilis, B. thetaiotaomicron,

B. vulgatus, Clostridium perfringens, C. tetani, C. sphenoides, og Fusobacterium necrophorum. Patologiske tilstander som er forårsaket av disse mikro-organismer innbefatter sårbetennelser i dype sår, f.eks. av den type som skyldes traume, f.eks. dype stikksår, og postoperative infeksjoner.

Foreliggende oppfinnelse tilveiebringer følgelige farmasøytiske preparater som innbefatter en forbindelse med formelen (Vi):

hvor R"^ og R"*""*", som kan være de samme eller forskjellige, er ^2-4alkylgrupper, eller farmasøytiske akseptable salter av disse forbindelser, sammen med et farmasøytisk akseptabelt for-tynningsmiddel eller bærestoff.

Alkylgruppene R"^ og R"*""*" kan enten være rette eller grenete alkylgrupper. R"^ og R"*""*" kan følgelig være etyl, n-propyl, i-propyl, n-butyl, s-butyl, i-butyl eller t-butyl.

Man har videre funnet at de forbindelser med formelen (Vi) hvor R^- ® og R-<*->"<*>"er grenete & 2- k alkylgrupper, er mindre lett metabolisert in vivo enn de forbindelser hvor R^ og rH-er rettkjedete alkylgrupper. Følgelig er R"^ og R fortrinnsvis den samme eller forskjellige grenete C£_4alkylgrupper,

det vil si i-propylj? s-butyl, i-butyl eller t-butyl. Fortrinnsvis er R-^ og R"<*>""<*>" samme alkylgruppe.

Foretrukne forbindelser for anvendelse i farmasøytiske preparater i følgelige foreliggende oppfinnelse, innbefatter derfor følgende forbindelser: (i) 2,4-Diamino-5-(3,5-di-t-butyl-4-hydroksybenayl) pyrimidinj (ii) 2,4-Diamino-5-(3» 5-di-s-butyl-4-hydroksybenzyl) pyrimidinj (iii) 2,4-Diamino-5-(3,5-di-i-butyl-4-hydroksybenzyl) pyrimidinj (iv) 2,4-Diamino-(4-hydroksy-3,5-di-i-propylbenzyl)

pyrimidinj og farmasøytiske akseptable salter av disse forbindelser.

Foreliggende oppfinnelse tilveiebringer også forbindelser med formelen (Vi), eller farmasøytiske akseptable salter av disse, som kan brukes ved behandlingen av mikrobielle infek sjoner. I foretrukne tilfeller vil de mikrobielle infeksjoner være bakterieinfeksjoner, da spesielt de som er forårsaket av Neisseria gonorrhoeae og Neisseria meningitidis. I en videre foretrukken sammenheng vil de mikrobielle infeksjonene være anaerobe infeksjoner.

Forbindelsene ifølge foreliggende oppfinnelse, da spesielt 2,4-diamino-5-(315-diisopropyl-4-hydroksybenzyl) pyrimi-diner, viser synergistisk aktivitet i kombinasjon med sulfonamider mot bakterieorganismer. Sulfonamidet og benzylpyrimi-dinet kombineres i forhold fra 10:1 til 1:10, fortrinnsvis 7:1 til 1:1.

Visse forbindelser med formelen (Vi) er nye, og foreliggende oppfinnelse innbefatter således disse forbindelser. Foreliggende oppfinnelse tilveiebringer således forbindelser med formelen (Vil):

hvor R 12 og R 1 J T , som kan være de samme eller forskjellige, er

12

propyl eller butyl, bortsett fra at R ikke kan være i-propyl når R"*"-^ er i-propyl, samt farmasøytiske akseptable salter av disse forbindelser.

Foretrukne forbindelser med formelen (Vil) er de hvor 12 i o

R og R -* som kan være de samme eller forskjellig, er i-propyl* i-butyl, s-butyl eller t-butyl, bortsett fra når R 12 og R<13>begge er i-propyl, og farmasøytiske akseptable salter av disse forbindels er.

Mest egnet er R og R de samme. Foretrukne nye forbindelser ifølge foreliggende oppfinnelse er således de følgende: (i) 2,4-Diamino-5-(3,5-di-t-butyl-4-hydroksybenzyl) pyrimidinj(ii) 2,4-Diamino-5-(3,5-di-s-butyl-4-hydroksybenzyl) pyrimidinj(iii) 2,4-Diamino-5-(3,5-di-i-butyl-4-hydroksybenzyl)

pyrimidinj og farmasøytiske akseptable salter av disse.

Egnede syre-addisjonssalter av forbindelsene med formelen (Vi) innbefatter de som kan dannes med både organiske og uorganiske syrer. Slike syre-adddsjons sal ter vil normalt være farmasøytisk akseptable. Foretrukne salter innbefatter således de som er dannet fra saltsyre, svovelsyre, sitronsyre, tartarsyre, fosforsyre, melkesyre, pyrodruesyre, eddiksyre, ravsyre, fumarsyre, maleinsyre og oksaleddiksyre. Det tør være innlys-ende at de forbindelser med formelen (Vi) som har to frie aminogrupper kan danne både mono- og di-syreaddisjonssalter. Mono-syreaddisjonssalter er foretrukket. Forbindelsene med formelen (Vi) vil være tilstede i preparater ifølge foreliggende oppfinnelse i en effektiv doseringsform, det vil si i en mengde som er tilstrekkelig til å være effektiv mot bakterieorganismen in vivo.

Farmasøytiske akseptable bærestoffer eller fortynningsmidler i preparater ifølge foreliggende oppfinnelse, er de forbindelser og stoffer som er anbefalt for dette formål i den far-masøytiske industri. Således kan bærestoffene eller fortynnings-midlene være flytende, faste eller gassformete, og må ellers være inert eller medisinsk akseptable og er forenlige med de aktive ingredienser. For det foreliggende formål ifølge foreliggende oppfinnelse, er ikke-sterilt vann og dimetylsulfoksyd ikke ansett å være farmasøytisk akseptable bærestoffer.

De farmasøytiske preparatene kan gis oralt, kan brukes som suppositorie, kan påføres som oppløsninger eller anvendes topikalt i form av salver, kremer eller pulvere. Det er imidlertid foretrukket at preparatene tilføres oralt eller parenteralt.

For oral tilførsel kan fine pulvere eller granulater inneholdende fortynnende, dispergerende og/eller overflateaktive midler, og kan være tilstede i en oppløsning, i vann eller i en sirup, i kapsler eller små poser i tørr tilstand eller i en ikke-vandig suspensjon hvor suspenderingsmiddelet kan være tilsatt, eller i en suspensjon i vann eller sirup. I de tilfelle hvor det er ønskelig eller nødvendig kan man tilsette smaksstoffer, konserveringsmidler, suspenderingsmidler, fortykningsmidler eller emulgeringsmidler. Når man fremstiller en suspensjon i vann ifølge foreliggende oppfinnelse vil minst et slikt middel være tilstede.

For parenteral tilførsel kan forbindelsene være tilstede i sterile vandige injeksjonsoppløsninger som kan inneholde anti-oksydasjonsmidler eller buffere.

Som nevnt ovenfor kan den frie base eller et salt av denne tilføres i sin ene form uten forbindelse med andre addi-tiver, og i slike tilfelle er det foretrukket med en kapsel eller en liten pulverpose.

Alternativt kan den aktive forbindelsen være tilstede i ren form som en effektiv renhetsdose, f.eks. presset til en tab-lett eller lignende.

Det kan være fordelaktig å tilsette forbindelsene med formelen (Vi) til farmasøytiske preparater som innbefatter andre aktive ingredienser, f.eks. p-amino benzo-syre konkurerende forbindelser så som sulfonamider. Av de kjente p-amino benzo-syre konkurerende forbindelser, kan man bruke de følgende sul-fonamidforbindelser (eller farmasøytiske akseptable salter av disse):- Sulfanilamid, Sulfadiazin, Sulfametisazol, Sulfapyridin, Sulfatiazol, Sulfamerazin, Sulfametazin, Sulfisoksazol, Sulfor-metoksin, 2-(p-Aminobenzen)sulfonamido-3-metoksypyrazin (Kelfi-zina), p,p^-Diaminodifenylsulfon, au-Amino-p-toluenesulfonamid, 5- Sulfanilamido-2,4-dimetylpyrimidin, 4-(N^-Acetyl sulfanilamido) -5)6-dimetoksypyrimidin, 3-Sulfanilamida-4,5-dimetyl isoksazol, 4-Sulfanilamido-5-metoksy-6-decyloksy pyrimidin, sulfamonometok-sin, 4-p-(8-Hydroksy-kvinilinyl-4-azo)-fenyl sulfanilamido-5, 6- Demetoksy pyrimidin, Sulfadimetoksin, Sulfadimidin, Sulfamoksol, Sulfadoksin, Sulfaguanidin, Sulfatiodimetoksin, Sulfametoksazol, Siilf akvinoksalin, og p-(2-Metyl-8-hydroksy-kvinolinyl-(5)-azo)-fenyl sulfanilamido-5>6-dimetoksy pyrimidin.

De mest foretrukne kombinasjoner er imidlertid de som inneholder Sulfadiazin, Sulfametoksazol, Sulfadoksin, Sulfakvin-oksalin, Sulfadimidin, Sulfamazol eller Sulfaguanidin.

Andre forbindelser og stoffer som kan tilsettes kan f.eks. være medisinske inerte ingredienser, så som faste eller flytende fortynningsmidler, så som lactose, glukose, stivelse eller kalsiumfosfat for tabletter eller kapsler, olivenolje eller etyloleat for myke kapsler, og vann eller vegetabilske oljer for suspensjoner eller emulsjoner, smørende midler så som talkum eller magnesium-stearat, gel-dannende midler så som kollodiale leirer, fortykningsmidler• så som gummi tragakant eller natrium-alginat, og andre terapeutiske akseptable ingredienser så som fuktemidler, konserveringsmidler, buffere og antioksydasjons-midler. Alle disse kan brukes som bærestoffer i foreliggende preparater.

Tabletter eller andre former som tilveiebringer dis-krete doseringsenheter, kan hensiktsmessig inneholde en mengde av en forbindelse med formelen (Vi) som er effektiv i en slik dose eller som et multippel av denne, for eksempel i enheter som inneholder 2,5 mg. til 150 mg., vanligvis fra 30 til 100 mg.

Ved behandlingen av infeksjoner som skyldes anaerobe mikro-organismer, kan forbindelser med formelen (Vi) eller deres farmasøytiske akseptable salter tilføres oralt, parenteralt eller som et suppositorium i passende farmasøytisk preparatform, og i de doser.ingsområder som er beskrevet ovenfor. Forbindelsene ved formelen (Vi) og deres farmasøytiske akseptable salter kan tilføres alene eller i kombinasjon med sulfonamider slik det er nevnt ovenfor.

Farmasøytiske preparater ifølge foreliggende oppfinnelse kan fremstilles ved å blande en.forbindelse med formelen (Vi) med et farmasøytisk akseptabelt bærestoff eller fortynningsmid-del. Andre aktive ingredienser så som et sulfonamid eller van-lige farmasøytiske tilsetningsstoffer, kan så tilsettes etter behov.

Foreliggende oppfinnelse tilveiebringer videre en fremgangsmåte for behandling av bakterieinfeksjoner i pattedyr ved at man tilfører en effektiv, ikke-toksisk antibakteriell mengde av en forbindelse med formelen (Vi) eller et farmasøytisk akseptabelt salt av denne, eller et preparat slik dette er refun-dert ovenfor.

Som nevnt ovenfor kan forbindelser med formelen (Vi) brukes ved behandling av infeksjoner ved en topikal anvendelse eller ved en oral tilførsel eller injeksjon. Forbindelsene ved formelen (Vi) vil normalt tilføres i doser fra 1 mg/kg. kroppsvekt til 30 mg/kg. kroppsvekt per døgn. Doseringsområdet for voksne pasienter ligger vanligvis i området fra 25 til 1000 mg/ døgn, fortrinnsvis 50 til 300 mg/døgn.

Forbindelsene med formelen (Vil) og deres farmasøytiske akseptable salter kan fremstilles på flere måter. Forbindelsene kan således fremstilles ved følgende: (i) den fremgangsmåte som er beskrevet i U.K. patent nr. 1,413,471, som innbefatter at man reagerer en forbindelse med formelen (Vill): hvor L er en avspaltende gruppe, med en passende substituert fenol med formelen (IX):

12 13

hvor R og R er som definert tidligere.

Egnede' avspaltende grupper L innbefatter hydroksyy grupper, halogenatomer så som brom og klor, samt anioniske residua av en karboksylisk eller sulfonisk syre, for eksempel metan sulfonsyre eller toluen-p-sulfonsyre, Andre egnede avspaltende grupper som ikke er eksemplifisert i U.K. patent nr. 1413471 innbefatter aminogrupper, fortrinnsvis di-C-j_g alkyl-aminogrupper. Denne reaksjon utføres normalt i nærvær av én sterk syrekatalysator, så som en sterk mineralsyre, f.eks. saltsyre, eller en karboksylisk eller sulfonisk syre, (ii) en fremgangsmåte som er lik den som er beskrevet i U.K. patentene nr. 1,128,234 og l,401,6l2, som innbefatter at man reagerer en forbindelse med formelen (x): hvor Z er en hydroksy eller di-substituert aminogruppe eller et halogenatom, og R<1>^ og R1-^ er som definert tidligere, med en forbindelse med formelen (Xl):

hvor Y er et hydrogenatom eller et halogenatom eller en alkyltio, aralkyltio eller mercaptogruppe, og i det tilfelle hvor Y er en alkyltio eller aralkyltiogruppe, så fjerner man denne gruppe ved hydrogenolyse.

Egnet er Z en dialkylamino- eller syklisk aminogruppe inneholdende opptil 10 karbonatomer, og spesielt hensiktsmessig er en dimetylaminogruppe, Reaksjonen utføres vanligvis i nærvær av en base under betingelser av samme type som brukes i forbindelse med Mannich-reaksjoner. Man har funnet at reaksjonen egnet kan utføres i nærvær av et alkoksydion, så som et metok-sydion ved en for høy temperatur, fortrinnsvis mellom 100 og 200°C i ét oppløsningsmiddel med et høyt kokepunkt, for eksempel en glycol så som etylenglycol. Dieteringen utføres egnet ved en hydrogenolyse av nærvær av en overgangsmetallkatalysator, og Raney nikkel er spesielt godt egnet for dette formål. Normalt vil reaksjonen utføres i et polart oppløsningsmiddel, for eksempel en C-j_^alkanol så som metanol eller etanol. (iii) Man avspalter en gruppe R~*~^ hvor R"*"^" er en beskyttende gruppe, fra en forbindelse med formelen (XIl):

hvor R-*-^, R-*-3 og R"*"^ er som definert tidligere»Ved begrepet

"beskyttende gruppe" forståes beskyttende gruppe som hensiktsmessig brukes i den organiske kjemi for å blokkere frie hydroksygrupper, så som C-|_^ akylgrupper, for eksempel acetyl og ben-zoyl, acetal og ketalgrupper, så som tetrahydropyranyl, 2-me-toksyetoksymetyl og metoksymetyl, og aralkylgrupper, for eksempel benzyl, fenyl-etyl og naftylmetyl, og uhensiktsmessige

beskyttende grupper, så som Cq_^alkylgrupper som kan avspal-.tes fra forbindelser med formelen (XIl), Reaksjonsbetingel-sene vil normalt være de som vanligvis brukes ved fjerning av beskyttende grupper fra hydroksygrupper, f.eks. en svak syrehydrolyse eller hydrogenolyse kan brukes for fjerning av aralkylgrupper, basisk hydrolyse kan brukes for fjerning av akylgrupper og syrehydrolyse kan brukes for fjerning av alkylgrupper. Således beskriver U.K. patent nr. 1,261,455 avspalting av benzylgruppen fra 2,4-diamino-5-(p-benzyloksybenzyl)pyrimidin ved hydrogenolyse., og U.S. patent nr. 3» 684,810 beskriver avspalting av en metylgruppe fra 4-stillingen på benzylringen i 2 , 4-diamino-5-(''3> 4, 5-trimetoksybenzyl )pyrimidin ved syréhydro-lyse; (iv) ved at man reagerer en forbindelse med formelen (XIIl):

hvor R -'■■5 er en avspaltende gruppe eller en aminogruppe og R-^ 13 og R J er som definert tidligere, bortsett fra at begge grup-pene R-*-^ ikke kan være aminogrupper, og R"^ er hydrogen eller halogenatom, med et amineringsmiddel så som ammoniakk, og deretter når R"*"^ er et halogenatom, fjerner dette ved katalytisk hydrogenolyse. Egnet er R"<*>"-^, et halogenatom så som et klor-eller bromatom, og R"*"^ er også et klor- eller bromatom. Amine-ringsmiddelet er fortrinnsvis ammoniakk, og reaksjonen kan ut-føres ved de samme reaksjonsbetingelser som beskrevet i U.K. - patentene nr. 957797 og 1,132,082. Reduksjonen av R"^ når denne er et halogenatom, kan egnet utføres ved hydrogenolyse under de betingelser som er beskrevet i belgisk patent nr. 798724; (v) ved at man reagerer guanidin som et guanidinsalt med en forbindelse med formelen (XIV) eller (XV):

eller dets tilsvarende benzalisomerj og hvor R 17 er en lavere

18

alkylgruppe, R er en amino eller mono-eller disubstituert aminogruppe eller en alkoksygruppe, R^ er en formyl eller al-12 n

koksykarbonylgruppe og R og R er som definert tidligere.

17 1Pi

Egnet er R ' en C. , alkylgruppe og R er en C-]_^alkoksygruppe eller en aminogruppe, Cq_^alkylamino, benzylamino, di alkylamino, naftylamino, eventuelt substituert anilino piperidino eller en morfolinogruppe. Egnet og foretrukket er R 1 8 en metoksy, etoksy, anilino- eller morf olinogruppe. Når R-^-9 er hydrogen, vil guanidinet være i form av et guanidinsalt, mens når R"^9 er formyl eller en alkoksykarbonylgruppe så er forbindelsen usaltet.

Mellomproduktene med formlene (x), (XIl), (XIV) og

(XV) og visse mellomprodukter med formelen (XIIl), er nye og inngår således i foreliggende oppfinnelse. Mellomproduktene med formelen (XIIl) er nye, bortsett fra de hvor R"*"^ og R1-* begge er etyl, n-propyl, iso-propyl eller t-butyl.

Forbindelsene med formelen (XIl) kan fremstilles ved enhver av de fremgangsmåter, som er beskrevet i U.K. - patent nr. 1,375,162 og forbindelsene med formelen (XIV) og (XV) kan hensiktsmessig fremstilles ved at man fjerner en beskyttende gruppe R^^ fra de tilsvarende forbindelser med formlene (XVl)

og (XVII):

hvor R 10 ,R XX , R X7 , R X8 og R XQ" er som definert tidligere, og R er en beskyttende gruppe. Egnede grupper R^<O>er de som

er beskrevet i Protective Groups in Organic Ghemistry Ed. J.F.W. McOmine, Plenum Press, London, 1973»og som er stabile overfor

alkaliske betingelser, så som de som lar seg fjerne ved syrehydrolyse, så som acetal og ketalgrupper, og de som lar seg fjerne ved hydrogenolyse, så som aralkylgrupper. Den mest egnede R^<0_>gruppe er således en benzyl, naftylmetyl eller fenyletylgruppe eller en tetrahydropyranyl, metoksymetyl eller 2-metoksyetoksymetylgruppe og fortrinnsvis er R 20 en benzyl eller en metoksymetyl eller 2-metoksyetoksymetylgruppe. Hydrogenolysen kan egnet utføres i et oppløsningsmiddel så som en alkanol, for eksempel metanol eller etanol, i nærvær av en overgangsmetallkatalysator, og. palladium er spesielt godt egnet, da spesielt palladium på trekull, ved en temperatur mellom 0 og 80°C, og hensiktsmessig ved romtemperatur.

Forbindelsene med formelen (XVl) og (XVII) kan lien-siktsmessig fremstilles fra et substituert benzaldehyd med formelen (XVIII):

hvor R^, R-L-1- og R^ er som definert tidligere, under reaksjcns-betingelser som er beskrevet for fremstillingen av strukturelle analoger av forbindelsene med formelen (XVl) og (XVIl), f.eks. slik det er beskrevet i U.K. patentene nr. 957,797 1,142,654, 1,133,766, 1,261,455 og 1,375,162.

De kjente forbindelser som inngår i formelen (Vi) kan fremstilles på en analog måte til det som er beskrevet for de

nye forbindelser med formelen (Vil).

De følgende eksempler illustrerer fremstillingen av forbindelser ifølge foreliggende oppfinnelse, samt deres far-masøytiske egenskaper.

Antigonococcal aktivitet av 2, 4- diamino-( 315- di- alkyl- 4- hydroksybenzyl) pyrimidiner

Den antigonococcale aktivitet av 2, 4-diamino-(3i 5-d.i-etyl-4-hydroksybenzyl)pyrimidin (forbindelse 1), 2,4-diamino-(4-hydroksy-3, 5-d.i-n-propylbenzyl )pyrimidin (forbindelse 2), 2,4-diamino-(3-etyl-4-hydroksy-5-n-propylvenzyl)pyrimidin (forbindelse 3), 24-diamino-(4-hydroksy-3, 5-d.i-i-propylbenzyl) pyrimidin (forbindelse 4) og 2,4-diamino-(3,5-di-t-butyl-4-hydroksybenzyl)pyrimidin (forbindelse 5) og den antimeningococcale aktivitet av forbindelsene 2,3 og 4 ble bestemt på mus ved de følgende fremgangsmåter. Aktivitetene ble målt mot 17 raser av Neisseria gonorrhoeae og 5 raser av Neisseria meningitidis i Wellcotest følsomhetsprøve Agar supplementert med 5$ oppvarmet hesteblod og 5$ uoppvarmet lysert hesteblod. I praksis ble 5$ blod tilsatt 500 ml. mengder av mediet ved 56°C, og deretter plassert i et 80°C vannbad i 15 minutter og så avkjølt til 56°C, hvoretter det lyserte blod og prøveforbindelsene ble tilsatt. Mediet ble så umiddelbart helt over på plater. Prøveforbindel-sene ble oppløst som isotionater.

Ved en såkalt Screening-undersøkelse som bestod av 6 separate prøver, ble den minimumshemmede konsentrasjon (MIC's) bestemt i en tredjedels interval fortynninger, og så igjen under-søkt i halv-intervalfortynning.

Inoculumet i disse Screenings undersøkelser var fra en 18-timers Mueller-Hinton oppvarmet-blodmediumskultur, og påsatt i en 1 mm. sløyfe som ble streket 1 cm. På grunn av at veksten av de forskjellige raser varierte, var inoculumet ikke konstant i disse prøver, og i den gjentatte undersøkelsen ble inoculumet standardisert slik at man fikk "akkurat flytende" vekst. Nevnte minimumshemmede konsentrasjon ble avlest som den konsentrasjon som gav 90$ eller mer hemming av veksten sammenlignet makroskopisk med veksten på kontrollkulturen. Inkuberingsperio-den for Screening undersøkelsen var 24 timer og for den gjentatte undersøkelsen 48 timer.

Som standard brukte man Escherichia coli (CN 314) og trimetoprim (TMP) i hver prøve. Resultatene er vist i tabell 1.

Ved hjelp av den ovennevnte fremgangsmåten målte man aktivitetene av forbindelse 5 mot de samme 17 raser av Neisseria gonnorrhoeae og 5 raser av Neisseria meningitidis i Difco G.C. Agar.

Tabell 1 viser også konsentrasjonen av hver av forbindelsene i blodurinen og i vev av mus etter oral tilførsel. Disse konsentrasjoner ble bestemt som beskrevet i det etterfølgende. Forbindelsene suspendert i 0,1$ metylcellulose ble tilført ved hjelp av et maverør til grupper av 3 mus, og dosene var 2,0 mg. pr. 20 g. kroppsvekt og blodet ble oppsamlet fra den orbitale sinus 1, 2 og 4 timer etter dosering. Urinen ble oppsamlet di-rekte fra hvert dyr i den 4. time, hvoretter dyrene ble obdusert. Lever, lunger, hjerne og muskler ble tatt fra hvert enkelt dyr og homogenisert i et likt volum (vekt/volum) åv vann i en Poly-tron homogenisator. Suspensjonene ble så tatt som 1:2 ekstrak-ter av vevet.

Konsentrasjonene av de aktive forbindelser ble bestemt mikrobiologisk ved at man brukte Bacillus pumilus, og de i urinen ble bestemt både før og etter 18 timers inkubering ved Glusalase (glucuronidase og sulfatase).

EKSEMPEL 1 2 , 4- Diamino- 5- ( 3« 5- di- t- butyl- 4- hvdroksybenzyl ) pyrimidin 2,4-Diamino-5-hydroksymetylpyrimidin (7,0 g. , 0,05mol) 2,6-di-t-butylfenol (10,3 g., 0,05 mol), 225 ml. is-eddik og 6,7 ml. konsentrert saltsyre ble oppvarmet med koking under til-bakeløp i 11 timer. Oppløsningsmiddelet ble fjernet, og den gule oljen oppløst i 0,5M natrium bikarbonatoppløsning og kloroform. Det vandige lag ble justert til pH 8,5 og ekstrahert flere ganger med kloroform. De samlede kloroformekstrakter ble tørket (magnesiumsulfat) og så fordampet til tørret. Det re-sulterende residium ble tilsatt en siliciumdioksyd gel-kolonne (elueringsmiddel: kloroform/metanol i et 30:1 -forhold i begyn-nelsen og så i et 18:1 og et 9 sl -forhold) hvorved man fikk to produkter. Det annet produkt som kom ut av kolonnen ble iden-tifisert ved.n.m.r, som den forønskede forbindelse, smeltepunkt 208,5-210,5° (ex metanol) (10,3$ utbytte).

EKSEMPEL,.. 2

2 t 4-Diamino-5-( 3, 5- di- t- butyl- 4- hydroksybenzyl) pyrimidin

7,1 g. (0,05 mol) 5-hydroksymetyluracil (R.E. Cline, et al. J. Am. Chem. Soc. 81, 2521 (1959)) 10,3 g. (0,05 mol) 2,6-di-t-butylfenol, 200 ml. is-eddik, og 7 ml. konsentrert saltsyre ble kokt under tilbakeløp i 6 timer. Oppløsningsmid-delet ble fjernet og man fikk et hvitt, fast stoff. Dette ble tilsatt ett hundre ml. vann, og pH ble justert til 6,8. Bunnfallet ble frafiltrert, så oppvarmet til 250 ml. absolutt etanol, og 3,7 g. hvitt bunnfall (utbytte A) ble frafiltrert. Filtratet ble fortynnet med 250 ml. vann, og så avkjølt. Man frafiltrerte 2,63 g. av et lyst gult bunnfall (utbytte B) begge bunnfallene var det forønskede produkt, nemlig 54>( 3, 5-di-t-butyl-4-hydroksybenzyl)uracil, slik dette kunne vises ved tynnsjiktkromatografi og NMR. Utbyttet var 38,4$.

3,3 g»av utbyttet A ble oppvarmet i 40 ml. fosforoksyklorid. Iløpet av \ time oppløste forbindelsen seg og opp-løsningen ble oppvarmet i 2 timer. Oppløsningsmiddelet ble fjernet og man fikk en gul olje som ble utrørt i 100 ml. isvann. pH ble så justert til 6,8 med natriumkarbonat. Det dannete bunnfall ble frafiltrert og man fikk 2,60 g. hvitt bunnfall.

Utbyttet var 70,9$ råprodukt. Kjernemagnetisk resonans-spektrum og tynnsjiktkromatografi viste spor av urenheter,

men hovedmengden var 2,4-diklor-5-(3»5-di-t-butyl-4-hydroksy- . benzyl)pyrimidin.

6,6 g. av utbyttet B (fra to fremstillinger) ble oppvarmet i 60 ml. fosforoksyklorid og opparbeidet som beskrevet ovenfor'. Bunnfallet ble frafiltrert og var oljeaktig og ble så oppløst i kloroform og ekstrahert til to ganger med 50 ml.. porsjoner av.vann (pH 5)«Kloroformen ble fordampet, og residumet omkrystallisert fra absolutt etanol, hvorved man fikk 2,21 g. av diklorforbindelsen i to utbytte, 30,2$ utbytte, smeltepunkt 145»5-146,5°• Moderlutten inneholdt 2,63 g. og-viste to flekker på tynnsjiktkromatografi.

1,0 g. (2,7 mmol) 2,4-diklor-5-(3,5-di-t-butyl-4-hydroksybenzyl)pyrimidin fra ovennevnte reaksjon ble aminert ved hjelp av 35 ml. mettet ammoniakk i absolutt etanol i en bombe ved l40°C i 7 timer. Oppløsningsmiddelet ble fordampet, og residumet oppløst i kloroform/metanol (3 sl) og 50 ml. 0,5M NaHCO^-oppløsning (justert til pH 8,5). Kloroform/metanol-laget ble fordampet og påsatt en siliciumdioksyd gel-kolonne, idet man brukte kloroform/metanol (30:1, senere 18:l) som elueringsmiddel. Man fikk 0,15 g. av den forønskede forbindelsen, 2,4-diamino-5-(3,5-di-t-butyl-4-hydroksybenzyl)pyrimidin (17$)»Andre produkter ble også isolert. NMR og MS bekreftet struk-turene på det fremstilte produkt.

EKSEMPEL 3

2, 4- Diamino- 5-( 3< 5- di- 1- butyl- 4- hydroksvbenzyl) pyrimidin

103;g. (0,5 mol) 2,6-di-t-butylfenol ble oppløst i 500 ml. etanol, 310 g. 20$ dimetylamin i absolutt etanol ble tilsatt under røring ved romtemperatur. Oppløsningen ble så avkjølt til 5° og man tilsatte 75 g. 37$ formaldehyd (0,93 mol). Oppløsningen ble så langsomt oppvarmet til romtemperatur og rørt over natten. Den ble så kokt under tilbakeløp i 3 timer, av-kjølt og helt over 12 1. isvann. Ved henstand fikk man dannet et bunnfall som ble frafiltrert og omkrystallisert fra heksan, og dette gav et 90$ utbytte av 2,6-di-t-butyl-4-N,N-dimetylami-nometylfenol.

5,6 g. (0,05 mol) uracil og 13,15 g. (0,05 mol) 2,6-di-

t-butyl-4-N,N-dimetylaminometylfenol ble oppløst i 65 ml. etylenglycol. Man tilsatte så 2,7 g. (0,05 mol) natrium-metylat. Blandingen ble oppvarmet i 6 timer med gjennomblåsning av ni-trogen, og det frigjorte dimetylamin ble oppsamlet og nøytra-lisert i en ekvivalent mengde vandig H^SO^-oppløsning. Etter avkjøling ble 250 ml. vann tilsatt fulgt av 5»7ml. is-eddik til pH 4,5»Bunnfallet ble frafiltrert og vasket med vann og eter, og man fikk 12,98 g. 5-(3,5-di-t-butyl-4-hydroksybenzyl) uracil (78,7$)»Tynnsjiktkromatografi og NMR viste at forbindelsen var korrekt.

11,6 g. (0,03 mol) av ovennevnte forbindelse ble klo-rinert ved hjelp av 130 ml. fosforoksyklorid. Blandingen ble oppvarmet i 3"2"time og så avkjølt. Oppløsningsmiddelet ble fjernet og 300 ml. isvann tilsatt. Natriumkarbonat ble tilsatt inntil pH var 7»2, og bunnfallet ble frafiltrert og gav 8,04 g., d.v.s. 62,5$ utbytte av 2,4-diklor-5-(3,5-di-t-butyl-4-hydroksybenzyl )pyrimidin. NMR bekreftet strukturen, og tynnsjiktkromatografi viste bare svake urenheter.

Aminering av ovennevnte forbindelse ble utført i to separate bombereaksjoner. I den første brukte man 4,0 g. (0,011 mol) og 50 ml. mettet ammoniakk/etanol i en bombe ved l40°C i 4 timer. Oppløsningsmiddelet ble fjernet, og 100 ml. 0,05M NaHGO^ble tilsatt, og pH justert til 8,5. Det vandige lag ble ekstrahert med fire porsjoner 100 ml. kloroform, hvoretter klo-roformlaget ble fordampet.

I den andre amineringen brukte man 3,77 g.(0,010 mol) av diklorpyrimidin, absolutt etanol, og 30 ml. av en mettet ammoniakk/etanoloppløsning. Ekstra-etanolen ble tilsatt for å opp-løse forbindelsen før reaksjonen startet, men forbindelsen var bare svakt oppløslig i dette oppløsningsmiddel. Bomben ble holdt på l65°C i 8 timer. Reaksjonsblandingen ble opparbeidet som beskrevet ovenfor, og de to kloroformoppløslige fraksjonene ble renset på en siliciumdioksyd gel-kolonne, idet man brukte kloro-formeluering, fulgt av kloroform/metanol, i et forhold på 50il og så på 25 sl. Fraksjonene som tilsvarte 2,4-diamino-5-(3»5-di-t-butyl-4-hydroksybenzyl)pyrimidin ble slått sammen, og man fikk 1,72 g. 24,7$ råutbytte, og dette ble omkrystallisert fra metanol og gav 1,25 g. produkt. Elementæranalyse, tynnsjiktkromatografi og kjernemagnetisk resonånsspektroskopi bekreftet produktet.

Elementæranalyse: Beregnet: C-69.48,H-8.59, N-17.06;

Funnet: C-69.39, H-8.69, N-17.06. Smeltepunkt: 208-210°C. Andre produkter ble også isolert fra kolonnen. Hvis man øker temperaturen på bombereaksjonen så vil man også øke mengden av det forønskede diaminerte produktet.

EKSEMPEL 8

Pyrimidinet, lactosen og potetstivelsen ble blandet og granulert med vann. Granulatene ble tørket, blandet med magne-siumstearat og presset på normal måte til tabletter med til-fredsstillende egenskaper og utseende,

EKSEMPEL 2,4-Diamino-5-(3,5-di-tert-butyl-4-hydroksybenzyl)

pyrimidin...

En blanding av 3,5-d.i-tert- butyl-4-hydroksybenzal-dehyd (23,4 g), trimetylortoformat (82,7 g), ammoniumklorid

(l,0 g. ) og metanol (60 ml.) ble kokt under tilbakeløp i 4 timer. Den avkjølte reaksjonsblandingén ble tilsatt 3N NH^OH (200 ml.) og så konsentrert i vakuum. Metylenkloridekstraktet av den re-sulterende vandige blanding ble tørket over natriumkarbonat. Fordampning av oppløsningsmiddelet gir 3,5-di-tert-butyl-4-hy-droksybenzaldehyd dimetylacetal i et utbytte på ca. 95$«

2,64 g. natriumhydrid ble tilsatt under avkjøling til en blanding av 25,2 g. 2,5-di-tert- butyl-4-hydroksybenzalde-hyd dimetylacetal og 230 ml. N,N-dimetylformamid. Man tilsatte deretter 16,2 g. benzylbromid, og blandingen ble rørt i atten timer ved romtemperatur. Reaksjonsblandingén ble så tilsatt en liter 1-normal HCL, og blandingen ekstrahert med metylenklorid. Ekstraktet blé vasket med vann, tørket over magnesiumsulfat og filtrert, og oppløsningsmiddelet fjernet, noe som gav 4-benzyl-oksy-3,5-di-tert-butyl-benzaldehyd i et utbytte på ca. 90$.

En oppløsning av 24,8 g. 4-benzyloksy-3,5-di-tert-bu-tylbenzaldehyd i 50 ml. dimetylsulfoksyd ble tilsatt en blanding av 14,0 g. 3-morfolinopropionitril og 4, 32 g. natrium-metok-syd i dimetylsulfoksyd (15 ml.) ved 75°C. Etter et kvarter ble blandingen avkjølt og man tilsatte 200 ml. vann. Den vandige blandingen ble ekstrahert med metylenklorid. Metylen-kloridoppløsningen ble vasket med vann og tørket over magnesiumsulfat. Fjerning av oppløsningsmiddelet gir .2-(4-benzyl-oksy-3,5-di-tert-butylbenzyl)-3-morfolinoakrylonitril i et utbytte på 70$.

En blanding av 25,0 g. 2-(4-benzyloksy-3,5-di-tert-butyl-benzyl)-3-morfolinoakrylonitril, 5,6 g. anilin, 5,0 ml.

konsentrert saltsyre og 200 ml. etanol ble kokt under tilbake-løp i en time. 12,8 g. guanidinhydroklorid og 8,6 g. natrium-metoksyd ble tilsatt og kokingen under tilbakeløp ble fortsatt i 1,5 t. En del av oppløsningsmiddelet ble fjernet og blandingen igjen kokt under tilbakeløp i 1,5 t. Reaksjonsblandingén ble avkjølt ved 0-5°C over natten. Bunnfallet ble frafiltrert og vasket med 2x30 ml. kald alkohol. Filterkaken ble utrørt i 2$ NaOH. De faste stoffer ble frafiltrert, vasket med kaldt vann og vakuum-tørket ved 50°C, hvorved man fikk 2,4-diamino-5-(4-benzyloksy-3»5-di-tert-butylbenzyl)-pyrimidin i et utbytte på ca. 50$.

En blanding av 11,3 S» 2,4-diamino-5-(4-benzyloksy-3,5-di-tert-butylbenzyl)-pyrimidin, 1,1 g. 5$ palladium på trekull og 80 ml. is-eddik ble hydrogenert i et Parr-apparat ved 40°C inntil den teoretiske mengde.hydrogen var absorbert. Ka-talysatoren ble frafiltrert og eddiksyreoppløsningen konsentrert og avkjølt. Pyrimidinacetatsaltet ble nøytralisert med vandig ammoniumhydroksyd. Det faste stoff ble frafiltrert, vasket med vann og vakuum-tørket ved 50°C, hvorved man fikk 2,4-diamino-5-(3,5-di-tert-butyl-4-hydroksybenzyl)pyrimidin i etutbytte på ca. 50$, smeltepunkt 208,5-210,5°C.

Claims (4)

1. Fremgangsmåte for fremstilling av farmasøytisk preparat, karakterisert ved at man blander en forbindelse med formelen (Vi):

hvor RIO og R-'--'- som kan være den samme eller forskjellig, er C2 _4 alkylgrupper, eller et farmasøytisk, akseptabelt salt av. slike forbindelser, med et farmasøytisk akseptabelt bærestoff.

2. Fremgangsmåte for fremstilling av farmasøytisk preparat ifølge krav 1, karakterisert ved at forbindelsen med formelen (Vi) er 2,4-diamino-5-(4-hydroksy-3,5-d.isopropylbenzyl)pyrimidin,

3» Fremgangsmåte for fremstilling av farmasøytisk pre^" parat ifølge krav 1 eller 2, karakterisert ved at forbindelsen med formelen (Vi) er i form av et salt, avledet fra saltsyre, svovelsyre, sitronsyre, tartarsyre, fosforsyre, melkesyre, pyrudruesyre, eddiksyre, ravsyre, fumarsyre, maleinsyre eller oksaleddiksyre.

4. Fremgangsmåte for fremstilling av forbindelse med formelen (Vil) karakterisert ved at man:(i) reagerer en forbindelse med formelen (vill):

hvor L er en avspaltende gruppe, med et passende substituert fenol med formelen (IX):

hvorR "^ og R-^-3 er som definert tidligere, (ii) reagerer en forbindelse med formelen (X):

hvor Z er en hydroksygruppe eller en disubstituert aminogruppe eller et halogenatom, og R 12 og R 1J T er som definert tidligere, med en forbindelse med formelen (Xl):

hvor Y er et hydrogen eller halogenatom eller en alkyltio, aralkyltio eller merip.ap to gruppe, og i det tilfellet hvor Y' er en alkyltio eller aralkyltiogruppe, fjerner denne ved hydrogenolyse,(iii) avspalter en gruppe R <1> ^, hvor R <1> ^ er en beskyttende gruppe som' definert tidligere, fra en forbindelse med formelen (XIl):

hvor R -lp og R i J Q er som definert tidligere,(iv) reagerer en forbindelse med formelen (XIIl):

hvor R^-5 er en avspaltende gruppe eller en aminogruppe, og R <12> og R1-5 er som definert tidligere, bortsett fra at begge grup-peneR 1^ ikke kan være.aminogrupper, og R <1> ^ er et hydrogen eller et halogenatom, med et amineringsmiddel og deretter, når R-*-0" er et halogenatom, fjerner dette ved katalytisk hydrogenolyse, (-vs) reagerer guanidin som et guanidinsalt med en forbindelse med formelen (XIV) eller (XV):

eller dens tilsvarende banzal-isomer} 17 18 hvor R er en lavere alkylgruppe, R er en amino eller mono eller disubstituert aminogruppe eller en alkoksygruppe, R <1> Q er et hydrogenatom eller en formyl eller alkoksykarbonylgruppe, og R <12> og R?~ 3 er som definert tidligere.