[go: up one dir, main page]

NO20111199A1 - Indolderivater som antikreftmidler - Google Patents

Indolderivater som antikreftmidler Download PDF

Info

Publication number
NO20111199A1
NO20111199A1 NO20111199A NO20111199A NO20111199A1 NO 20111199 A1 NO20111199 A1 NO 20111199A1 NO 20111199 A NO20111199 A NO 20111199A NO 20111199 A NO20111199 A NO 20111199A NO 20111199 A1 NO20111199 A1 NO 20111199A1
Authority
NO
Norway
Prior art keywords
formula
compound
compounds
solvent
treatment
Prior art date
Application number
NO20111199A
Other languages
English (en)
Inventor
Bruno Schoentjes
Sophie Descamps
Nathalie Claudie Isabelle Amblard
Original Assignee
Janssen Pharmaceutica Nv
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by Janssen Pharmaceutica Nv filed Critical Janssen Pharmaceutica Nv
Publication of NO20111199A1 publication Critical patent/NO20111199A1/no

Links

Classifications

    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07D—HETEROCYCLIC COMPOUNDS
    • C07D401/00—Heterocyclic compounds containing two or more hetero rings, having nitrogen atoms as the only ring hetero atoms, at least one ring being a six-membered ring with only one nitrogen atom
    • C07D401/02—Heterocyclic compounds containing two or more hetero rings, having nitrogen atoms as the only ring hetero atoms, at least one ring being a six-membered ring with only one nitrogen atom containing two hetero rings
    • C07D401/12—Heterocyclic compounds containing two or more hetero rings, having nitrogen atoms as the only ring hetero atoms, at least one ring being a six-membered ring with only one nitrogen atom containing two hetero rings linked by a chain containing hetero atoms as chain links
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K31/00—Medicinal preparations containing organic active ingredients
    • A61K31/33—Heterocyclic compounds
    • A61K31/395—Heterocyclic compounds having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. guanethidine or rifamycins
    • A61K31/435—Heterocyclic compounds having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. guanethidine or rifamycins having six-membered rings with one nitrogen as the only ring hetero atom
    • A61K31/44—Non condensed pyridines; Hydrogenated derivatives thereof
    • A61K31/4427—Non condensed pyridines; Hydrogenated derivatives thereof containing further heterocyclic ring systems
    • A61K31/4439—Non condensed pyridines; Hydrogenated derivatives thereof containing further heterocyclic ring systems containing a five-membered ring with nitrogen as a ring hetero atom, e.g. omeprazole
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P1/00—Drugs for disorders of the alimentary tract or the digestive system
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P13/00—Drugs for disorders of the urinary system
    • A61P13/12—Drugs for disorders of the urinary system of the kidneys
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P17/00—Drugs for dermatological disorders
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P19/00—Drugs for skeletal disorders
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P19/00—Drugs for skeletal disorders
    • A61P19/02—Drugs for skeletal disorders for joint disorders, e.g. arthritis, arthrosis
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P21/00—Drugs for disorders of the muscular or neuromuscular system
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P21/00—Drugs for disorders of the muscular or neuromuscular system
    • A61P21/04—Drugs for disorders of the muscular or neuromuscular system for myasthenia gravis
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P25/00—Drugs for disorders of the nervous system
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P25/00—Drugs for disorders of the nervous system
    • A61P25/28—Drugs for disorders of the nervous system for treating neurodegenerative disorders of the central nervous system, e.g. nootropic agents, cognition enhancers, drugs for treating Alzheimer's disease or other forms of dementia
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P27/00—Drugs for disorders of the senses
    • A61P27/02—Ophthalmic agents
    • A61P27/12—Ophthalmic agents for cataracts
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P29/00—Non-central analgesic, antipyretic or antiinflammatory agents, e.g. antirheumatic agents; Non-steroidal antiinflammatory drugs [NSAID]
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P3/00—Drugs for disorders of the metabolism
    • A61P3/06—Antihyperlipidemics
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P3/00—Drugs for disorders of the metabolism
    • A61P3/08—Drugs for disorders of the metabolism for glucose homeostasis
    • A61P3/10—Drugs for disorders of the metabolism for glucose homeostasis for hyperglycaemia, e.g. antidiabetics
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P35/00—Antineoplastic agents
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P35/00—Antineoplastic agents
    • A61P35/02—Antineoplastic agents specific for leukemia
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P37/00—Drugs for immunological or allergic disorders
    • A61P37/02—Immunomodulators
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P37/00—Drugs for immunological or allergic disorders
    • A61P37/02—Immunomodulators
    • A61P37/06—Immunosuppressants, e.g. drugs for graft rejection
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P43/00—Drugs for specific purposes, not provided for in groups A61P1/00-A61P41/00
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P5/00—Drugs for disorders of the endocrine system
    • A61P5/14—Drugs for disorders of the endocrine system of the thyroid hormones, e.g. T3, T4
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P7/00—Drugs for disorders of the blood or the extracellular fluid
    • A61P7/06—Antianaemics
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07D—HETEROCYCLIC COMPOUNDS
    • C07D401/00—Heterocyclic compounds containing two or more hetero rings, having nitrogen atoms as the only ring hetero atoms, at least one ring being a six-membered ring with only one nitrogen atom
    • C07D401/02—Heterocyclic compounds containing two or more hetero rings, having nitrogen atoms as the only ring hetero atoms, at least one ring being a six-membered ring with only one nitrogen atom containing two hetero rings
    • C07D401/10—Heterocyclic compounds containing two or more hetero rings, having nitrogen atoms as the only ring hetero atoms, at least one ring being a six-membered ring with only one nitrogen atom containing two hetero rings linked by a carbon chain containing aromatic rings

Landscapes

  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Organic Chemistry (AREA)
  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Veterinary Medicine (AREA)
  • Public Health (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • Medicinal Chemistry (AREA)
  • Animal Behavior & Ethology (AREA)
  • Pharmacology & Pharmacy (AREA)
  • General Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
  • Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
  • Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
  • Engineering & Computer Science (AREA)
  • Diabetes (AREA)
  • Immunology (AREA)
  • Neurology (AREA)
  • Physical Education & Sports Medicine (AREA)
  • Hematology (AREA)
  • Biomedical Technology (AREA)
  • Orthopedic Medicine & Surgery (AREA)
  • Neurosurgery (AREA)
  • Obesity (AREA)
  • Rheumatology (AREA)
  • Ophthalmology & Optometry (AREA)
  • Endocrinology (AREA)
  • Psychiatry (AREA)
  • Oncology (AREA)
  • Transplantation (AREA)
  • Hospice & Palliative Care (AREA)
  • Emergency Medicine (AREA)
  • Pain & Pain Management (AREA)
  • Dermatology (AREA)
  • Urology & Nephrology (AREA)
  • Epidemiology (AREA)
  • Pharmaceuticals Containing Other Organic And Inorganic Compounds (AREA)
  • Plural Heterocyclic Compounds (AREA)
  • Medicines That Contain Protein Lipid Enzymes And Other Medicines (AREA)

Abstract

Den foreliggende oppfinnelsen tilveiebringer forbindelser med formel (I), deres anvendelse for behandlingen av kreft såvel som farmasøytiske sammensetninger omfattende nevnte forbindelser med formel (I).

Description

INDOL-DERIVATER SOM ANTIKREFT-MIDLER
Oppfinnelsens område
Den foreliggende oppfinnelsen angår indol-forbindelser og sammensetninger inneholdende nevnte forbindelser som virker som antikreft-midler. Videre tilveiebringer den foreliggende oppfinnelsen fremgangsmåter for fremstillingen av de beskrevne forbindelsene, sammensetninger omfattende dem og fremgangsmåter for å bruke dem, for eksempel som en medisin, spesielt for behandlingen av kreft.
Den foreliggende søknaden krever prioritet fra europeisk patentsøknad nr. 09152089.0, som er inkorporert heri ved referanse. Uten å være bundet til noen teori, er det nåværende trodd at selvom MDM2 og p53 representerer nøkkelelementer i tumor-cellebiologi og har nøkkelroller i den cellulære responsen på celleskader eller stress og selvom de foreliggende forbindelsene øker uttrykkingen av p53, synes det som de ikke kan representere de primære molekylære mål ved hvilke de foreliggende forbindelsene frembringer deres demonstrerte potente prekliniske anti-tumor aktivitet. Innledende observasjoner peker mot en direkte eller indirekte effekt på DNA-syntesen og/eller den replikative-stress responsen som støtte for den observerte prekliniske anti-tumor aktiviteten til forbindelsene. De foreliggende forbindelsene fremviser også antiproliferative virkninger i tumorceller som er frie for p53, frie for funksjonell p53, eller som har mutant p53, og de kan videre sensibilisere tumorigene celler for kjemoterapi og radioterapi.
p53 er et tumorsuppressor-protein som spiller en sentral rolle i reguleringen av balansen mellom celle-proliferasjon og cellevekst-stans/apoptose. Under normale betingelser er halveringstiden til p53 veldig kort og følgelig er nivået av p53 i celler lav. Imidlertid, som svar på cellulær DNA skade eller cellulært stress (f.eks. onkogenaktivering, telomer-erosjon, hypoksi), øker nivåene av p53. Denne økningen i p53 nivåer medfører aktiveringen av transkripsjonen av et antall av gener som enten driver cellen til vekststans eller apoptoseprosessen. Følgelig er en viktig funksjon av p53 å forhindre den ukontrollerte proliferasjonen av skadede celler og således beskytte organismen fra utviklingen av kreft. Uttrykket "MDM2"
(Murine Double Minute2) blir anvendt heri om et protein oppnådd som et resultat av uttrykking av mdm2-genet. Innen betydningen av dette uttrykket omfatter MDM2 alle proteiner kodet for av mdm2, mutanter derav, "alternative slice"-proteiner derav, og fosforylerte proteiner derav. I tillegg, som anvendt heri,
inkluderer uttrykket "MDM2", MDM2 analoger, f.eks. MDMX, også kjent som MDM4, og MDM2 homologer og analoger av andre dyr, f.eks. den humane homologen HDM2 eller den humane analogen HDMX. MDM2 er en sentral negativ regulator av p53-funksjon. Den danner en negativ autoregulatorisk sløyfe ved å binde til det aminoterminal transaktiverende domenet til p53 og således inhiberer MDM2 både evnen til p53 for å aktivere transkripsjon og målretter p53 for proteolytisk nedbrytning. Under normale betingelser er denne regulatoriske sløyfen ansvarlig for å opprettholde de lave nivåer av p53.
Bakgrunn for oppfinnelsen
JP 11130750 beskriver blant annet, substituerte fenylaminokarbonylindolyl-derivater som 5-HT-reseptorantagonister.
EP1129074 beskriver antranilsyreamider som inhibitorer av vaskulær endotel vekstfaktor reseptorer (VEGFR) og nyttige i behandlingen av angiogene forstyrrelser. WO01/42224 tilveiebringer karboksyamido-derivater for behandlingen av Alzheimers sykdom. EP1317443 viser trisykliske tert-amin-derivater, nyttige som kjemokinreseptor CXCR4 eller CCR5 modulatorer for å behandle humant immunsviktvirus og felint immunsviktvirus.
EP1379239 viser N-(2-aryletyl)benzylaminer som antagonister av 5-HT6-reseptoren. WO00/15357 tilveiebringer piperazin-4-fenyl-derivater som inhibitorer av interaksjonen mellom MDM2 og p53. EP1137418 tilveiebringer trisykliske forbindelser for å gjenopprette konformell stabilitet til et protein av p53-familien. WO03/040402 tilveiebringer forbindelser som inhiberer interaksjonene mellom proteiner, sånn som interaksjonen mellom MDM2 og p53. EP1443937 beskriver substituerte 1,4-benzodiazepiner og anvendelsene derav som inhibitorer av MDM2-p53 interaksjonene. EP1458380 tilveiebringer cis-2,4,5-trifenyl-imidazoloner som inhiberer interaksjonen av MDM2-protein med p53-lignende peptider og har antiproliferativ aktivitet.
EP1519932 viser bisarylsulfonamidforbindelser som binder til MDM2 og kan bli anvendt i kreftterapi.
WO2006/032631, WO2007/107543 , WO2007/107545 , WO2009/019274, WO2009/037308 og WO2009/037343 viser inhibitorer av interaksjonen mellom MDM2 og p53.
Det er et behov for effektive små molekyler som har potent inhiberende effekt mot tumorcellevekst, har en bred sikkerhetsprofil, og mindre uønskede bivirkninger.
Forbindelsene ifølge den foreliggende oppfinnelsen viser utmerket in- vitro aktivitet og utmerkede in vivo anti-tumor virkninger. De har lav affinitet for P450 enzymene noe som reduserer risikoen for ugunstig legemiddel-legemiddel interaksjon noe som gir en større sikkerhetsmargin. Videre har forbindelsene ifølge den foreliggende oppfinnelsen lave legemiddelinduserte nevrologiske virkninger og har en forbedret kardiovaskulær profil som kan fordelaktig påvirke den dosebegrensende toksisiteten til forbindelsene.
Beskrivelse av oppfinnelsen
Den foreliggende oppfinnelsen tilveiebringer forbindelser, sammensetninger for, og fremgangsmåter for, å behandle kreft. Videre er forbindelsene, og sammensetningene ifølge den foreliggende oppfinnelsen, nyttige for å forsterke effektiviteten til kjemoterapi og radioterapi.
Denne oppfinnelsen angår forbindelser med formel (I)
inkludert enhver stereokjemisk isomer form derav, hvori
R<1>er hydroksyCi-6alkyl eller C2-6alkenyl; med forbehold om at R<1->substituenten er plassert i posisjon 6 eller 7 på indol-enheten;
R<2>er hydrogen eller Ci-4alkyl;
Z er et radikal valgt fra
R<3>er hydrogen eller hydroksyCi-4alkyl;
R<4>er hydroksy eller d-4alkyloksy;
R<5>er hydrogen eller d-4alkyl; eller
R<4>og R<5>er tatt sammen for å danne okso;
et farmasøytisk akseptabelt salt derav eller et solvat derav.
Forbindelsene med formel (I) kan også eksistere i deres tautomere former. Slike former, selvom de ikke er eksplisitt indikert i formelen over, er ment å være inkludert innenfor omfanget av den foreliggende oppfinnelsen.
Den foreliggende oppfinnelsen angår også anvendelsen av en forbindelse med formel (I) for fremstillingen av et medikament for å behandle kreft og en forbindelse med formel (I) for anvendelse i behandlingen av kreft.
Et antall uttrykk, anvendt i de forutgående definisjoner og heri etter, er forklart heri under. Disse uttrykkene er noen ganger anvendt som sådan eller i sammensatte uttrykk.
Ci-4alkyl som en gruppe eller del av en gruppe definerer rettlinjede eller forgrenede mettede hydrokarbonkjede-radikaler som har fra 1 til 4 karbonatomer sånn som metyl, etyl, propyl, 1-metyletyl, butyl; Ci-6alkyl som en gruppe eller del av en gruppe definerer rettlinjede eller forgrenede mettede hydrokarbonkjede-radikaler som har fra 1 til 6 karbonatomer sånn som gruppen definert for Ci-4alkyl og pentyl, heksyl, 2-metylbutyl og lignende. C2-6alkenyl definerer rettlinjede eller forgrenede hydrokarbonkjede-radikaler inneholdende en dobbeltbinding og som har fra 2 til 6 karbonatomer sånn som, for eksempel, etenyl, 2-propenyl, 3-butenyl,
2-pentenyl, 3-pentenyl, 3-metyl-2-butenyl, og lignende.
Linjer tegnet fra substituenter inn i ringsystemer, indikerer at bindingen kan være knyttet til ethvert av de egnede ringatomer.
For terapeutisk anvendelse er salter av forbindelsene med formel (I) de hvori motionet er farmasøytisk akseptabelt. Imidlertid kan salter av syrer og baser som ikke er farmasøytisk akseptable også finne anvendelse, for eksempel, i fremstillingen eller rensingen av en farmasøytisk akseptabel forbindelse. Alle salter, enten farmasøytisk akseptabel eller ikke er inkludert innen omfanget av den foreliggende oppfinnelsen.
De farmasøytisk akseptable salter som nevnt heri før eller heri etter er ment å omfatte de terapeutisk aktive ikke-toksiske syreaddisjonssaUformene som forbindelsene med formel (I) er i stand til å danne. De siste kan passende bli oppnådd ved å behandle baseformen med slike passende syrer som uorganiske syrer, foreksempel, hydrogenhalidsyrer, f.eks. saltsyre, hydrogenbromid og lignende; svovelsyre; salpetersyre; fosforsyre og lignende; eller organiske syrer, for eksempel, eddik, propan, hydroksyeddik, 2-hydroksypropan, 2-oksopropan, oksal, malon, rav, malein, fumar, malin, vin, 2-hydroksy-l,2,3-propantrikarboksyl, metansulfon, etansulfon, benzensulfon, 4-metylbenzensulfon, sykloheksansulfon, 2-hydroksybenzo, 4-amino-2-hydroksybenzo og lignende syrer. Omvendt kan saltformen bli konvertert ved behandling med alkali til den frie baseformen.
Forbindelsene med formel (I), inneholdende sure protoner, kan bli konvertert til deres terapeutisk aktive ikke-toksiske metall- eller aminaddisjonssaltformer ved behandling med passende organiske og uorganiske baser. De farmasøytisk akseptable salter som nevnt heri før eller heri etter er ment å også omfatte de terapeutisk aktive ikke-toksiske metall- eller aminaddisjonssaltformer (baseaddisjonssaltformer) som forbindelsene med formel (I) er i stand til å danne. Passende baseaddisjonssaltformer omfatter, for eksempel, ammoniumsaltene, alkalie- og jordaIkaliemetaUsaltene, f.eks. litium, natrium, kalium, magnesium, kalsium saltene og lignende, salter med organiske baser, f.eks. primære, sekundære og tertiære alifatiske og aromatiske aminer sånn som metylamin, etylamin, propylamin, isopropylamin, de fire butylamin isomerene, dimetylamin, dietylamin, dietanolamin, dipropylamin, diisopropylamin, di-n-butylamin, pyrrolidin, piperidin, morfolin, trimetylamin, trietylamin, tripropylamin, kvinuklidin, pyridin, kinolin og isokinolin, benzatin, /V-metyl-D-glukamin, 2-amino-2-(hydroksymetyl)-1,3-propandiol, hydrabamin saltene, og salter med aminosyrer sånn som, for eksempel, arginin, lysin og lignende.
Omvendt kan saltformene bli konvertert ved behandling med syre til den frie sy reformen.
Uttrykket salt omfatter også de kvaternære ammoniumsaltene (kvaternære aminer) som forbindelsene med formel (I) er i stand til å danne ved reaksjon mellom et basisk nitrogen til en forbindelse med formel (I) og et passende kvaternæriserende middel, sånn som, for eksempel, et valgfritt substituert Ci.6alkylhalid, arylhalid, Ci-6alkylkarbonylhalid, arylkarbonylhalid, eller arylCi-6alkylhalid, f.eks. metyljodid eller benzyljodid, hvori aryl representerer usubstituert eller substituert fenyl. Andre reaktanter med gode utgående grupper kan også bli anvendt, sånn som for eksempel d-6alkyl trifluormetanesulfonater, Ci-6alkyl metansulfonater, og Ci-6alkyl p-toluensulfonater. Et kvaternært amin har et positivt ladet nitrogen. Farmasøytisk akseptable motioner inkluderer klor, brom, jod, trifluoracetat, acetat, triflat, sulfat, sulfonat. Det valgte motionet kan bli introdusert ved å bruke ionebyttematerialer.
Fortrinnsvis betyr uttrykket salt, de farmasøytisk akseptable syreaddisjons-saltformene og de farmasøytisk akseptable metall- eller aminaddisjonssaltformene.
Uttrykket solvat omfatter hydrat- og løsemiddeladdisjonsformene som forbindelsene med formel (I) er i stand til å danne, såvel som saltene derav. Eksempler på slike former er f.eks. hydrater, alkoholater og lignende.
Det vil forstås at noen av forbindelsene med formel (I), og deres salter og solvater, kan inneholde en eller flere kirale sentre og eksistere som stereokjemisk isomere former.
Uttrykket "stereokjemisk isomere former av forbindelser med formel (I)", som anvendt heri før, definerer alle mulige forbindelser lagd av de samme atomer bundet med den samme bindingsrekkefølgen, men som har forskjellige tre-dimensjonale strukturer som ikke er utbyttbare, som forbindelsene med formel (I) og deres farmasøytisk akseptable salter eller fysiologisk funksjonelle derivater kan inneha.
Med mindre annet er nevnt eller indikert, betyr den kjemiske betegnelsen av forbindelser, blandingen av alle mulige stereokjemiske isomere former, såvel som hver av de individuelle isomere formene med formel (I) og deres salter eller solvater, betydelig fri, dvs. forbundet med mindre enn 50 %, fortrinnsvis mindre enn 20 %, mer fortrinnsvis mindre enn 10 %, enda mer fortrinnsvis mindre enn 5 %, videre fortrinnsvis mindre enn 2 % og mest fortrinnsvis mindre enn 1 % av de(n) andre isomeren(e). Således, når en forbindelse med formel (I) er, for eksempel, spesifisert som R, betyr dette at forbindelsen er betydelig fri for S-isomeren. Eller hvis en forbindelse med formel (I) er, for eksempel, spesifisert som E, betyr dette at forbindelsen er betydelig fri for Z-isomeren.
Spesielt kan stereogene sentre ha R- eller S-konfigurasjonen; substituenter på bivalente sykliske (delvis) mettede radikaler kan ha enten c/s- eller trans-konfigurasjonen. Forbindelser som omfatter dobbeltbindinger kan ha en E (entgegen) eller Z (zusammen) -stereokjemi ved nevnte dobbeltbinding. Uttrykkene cis, trans, R, S, E og Z er velkjente for en fagmann.
Stereokjemisk isomere former av forbindelsene med formel (I) er åpenbart ment å være omfattet av omfanget til denne oppfinnelsen.
Av spesiell interesse er de forbindelser med formel (I) som er stereokjemisk rene.
Etter CAS-nomenklatur, når to stereogene sentre med kjent absolutt konfigurasjon er til stede i et molekyl, blir en R eller S betegnelse tilordnet (basert på Cahn-Ingold-Prelog sekvensregel) til det lavest-nummererte kirale sentret, referansesentret. Konfigurasjonen til det andre stereogene sentret er indikert ved å bruke relative betegnelser [ R*, R* ] eller [Æ<*>,S<*>], hvor R<*>alltid er spesifisert som referansesenret og [/?*,/?*] indikerer sentre med den samme kiralitet og [R<*>,S<*>] indikerer sentre med forskjellig kiralitet. For eksempel, hvis det lavest-nummererte kirale sentret i molekylet har en S-konfigurasjon og det andre sentret er R, vil stereo-beskrivelsen være spesifisert som S-[/?<*>,S<*>]. Hvis "a" og "P" blir anvendt: posisjonen til substituenten med den høyeste prioriteten, på det asymmetriske karbonatomet i ringsystemet som har det laveste ringnummeret, er vilkårlig alltid i "a"-posisjonen til gjennomsnittsplanet bestemt ved ringsystemet. Posisjonen til den høyest prioriterte substituenten på det andre asymmetriske karbonatomet i ringsystemet relativt til posisjonen til den høyest prioriterte substituenten på referanseatomet blir betegnet "a", hvis den er på den samme siden av gjennomsnittsplanet bestemt ved ringsystemet, eller "p", hvis den er på den andre siden av gjennomsnittsplanet bestemt ved ringsystemet.
Uttrykkene c/s og trans, når anvendt heri, er i henhold til Chemical Abstracts nomenclature (J. Org. Chem. 1970, 35 (9), 2849-2867), og refererer til posisjonen til substituentene på en ringenhet.
Forbindelsene ifølge (I) kan bli syntetisert i form av rasemiske blandinger av enantiomere som kan bli separert fra hverandre etter kjente oppløsningsprosedyrer. De rasemiske forbindelsene med formel (I) kan bli konvertert til de tilsvarende diastereomere saltformene ved reaksjon med en egnet kiral syre. Nevnte diastereomere saltformer er etterfølgende separert, for eksempel, ved selektiv eller fraksjonen krystallisering og enantiomerene blir frigjort derfra med base. En alternativ måte å separere de enantiomere formene av forbindelsene med formel (I) involverer væskekromatografi ved å bruke en kiral stasjonærfase. Nevnte rene stereokjemisk isomere former kan også bli derivert fra de tilsvarende rene stereokjemisk isomere former av de passende utgangsstoffene, med forbehold om at reaksjonen foregår stereospesifikt. Fortrinnsvis, hvis en spesifikk stereoisomer er ønsket, vil nevnte forbindelse bli syntetisert ved stereospesiflkke fremgangsmåter for fremstilling. Disse fremgangsmåtene vil fordelaktig anvende enantiomert rene utgangsstoffer.
Den foreliggende oppfinnelsen er også ment å inkludere hvilke som helst isotoper av atomer tilstede i forbindelsene ifølge oppfinnelsen. For eksempel, isotoper av hydrogen inkluderer tritium og deuterium, og isotoper av karbon inkluderer C-13 og C-14.
Når anvendt heri etter, er uttrykket "forbindelser med formel (I)" eller "forbindelser ifølge den foreliggende oppfinnelsen" ment og også inkludere de farmasøytisk akseptable salter, spesielt syre eller base (metall eller amine) addisjonssaltene, alle stereoisomere former, solvatene, og alle polymorfe krystallinske former eller amorfe former.
Når anvendt heri før, eller heri etter, at substituenter kan bli valgt hver uavhengig ut fra en liste med mangfoldige definisjoner, er alle mulige kombinasjoner som er kjemisk mulig inkludert.
En interessant utførelsesform av den foreliggende oppfinnelsen er de forbindelser med formel (I) hvori R<1>substituenten er plassert i posisjon 7 på indol-enheten. Følgelig, forbindelser som har den følgende formelen
En interessant utførelsesform av den foreliggende oppfinnelsen er de forbindelser med formel (I) hvori R<1>substituenten er plassert i posisjon 6 på indol-enheten.
Følgelig, forbindelser som har den følgende formelen
En interessant utførelsesform av den foreliggende oppfinnelsen er de forbindelser med formel (I), (I-a) eller (I-b) hvori R<1>er hydroksyCi.6alkyl, spesielt -CH2-OH, - C(CH3)2-OH, -CH(CH3)-OH, -CH2-CH2-OH, -CH(CH(CH3)2)-OH, -CH2-CH2-CHOH-CH3, mer spesielt -C(CH3)2-OH.
En interessant utførelsesform av den foreliggende oppfinnelsen er de forbindelser med formel (I), (I-a) eller (I-b) hvori R<1>is C2.6alkenyl, spesielt -CH=CH2, - C(CH3)<=>CH2.
En interessant utførelsesform av den foreliggende oppfinnelsen er de forbindelser med formel (I), (I-a) eller (I-b) eller en interessant utførelsesform derav som indikert over, hvori R2 er hydrogen.
En interessant utførelsesform av den foreliggende oppfinnelsen er de forbindelser med formel (I), (I-a) eller (I-b) eller, når mulig, en interessant utførelsesform derav som indikert over, hvori R<2>er Ci-4alkyl, spesielt metyl.
En interessant utførelsesform av den foreliggende oppfinnelsen er de forbindelser med formel (I), (I-a) eller (I-b) eller, når mulig, en interessant utførelsesform derav som indikert over, hvori R<3>representerer hydrogen.
En interessant utførelsesform av den foreliggende oppfinnelsen er de forbindelser med formel (I), (I-a) eller (I-b) eller, når mulig, en interessant utførelsesform derav som indikert over, hvori R<3>representerer hydroksyCi-4alkyl, spesielt -CH2-OH. Fortrinnsvis er denne R<3>substituenten plassert i posisjon 2 på pyridi nen heten.
En interessant utførelsesform av den foreliggende oppfinnelsen er de forbindelser med formel (I), (I-a) eller (I-b) eller, når mulig, en interessant utførelsesform derav som indikert over, hvori R<4>representerer hydroksy.
En interessant utførelsesform av den foreliggende oppfinnelsen er de forbindelser med formel (I), (I-a) eller (I-b) eller, når mulig, en interessant utførelsesform derav som indikert over, hvori R<4>representerer Ci-4alkyloksy, spesielt metoksy.
En interessant utførelsesform av den foreliggende oppfinnelsen er de forbindelser med formel (I), (I-a) eller (I-b) eller, når mulig, en interessant utførelsesform derav som indikert over, hvori R<5>representerer hydrogen.
En interessant utførelsesform av den foreliggende oppfinnelsen er de forbindelser med formel (I), (I-a) eller (I-b) eller, når mulig, en interessant utførelsesform derav som indikert over, hvori R<5>representerer Ci-4alkyl, spesielt metyl.
En interessant utførelsesform av den foreliggende oppfinnelsen er de forbindelser med formel (I), (I-a) eller (I-b) eller, når mulig, en interessant utførelsesform derav som indikert over, hvori R<4>og R<5>er tatt sammen for å danne okso.
En interessant utførelsesform av den foreliggende oppfinnelsen er de forbindelser med formel (I), (I-a) eller (I-b) eller, når mulig, en interessant utførelsesform derav som indikert over, hvori R<4>er hydroksyl og R<5>er hydrogen.
En interessant utførelsesform av den foreliggende oppfinnelsen er de forbindelser med formel (I), (I-a) eller (I-b) eller, når mulig, en interessant utførelsesform derav som indikert over, hvori R<4>er hydroksyl og R<5>er Ci-4alkyl, spesielt metyl.
En interessant utførelsesform av den foreliggende oppfinnelsen er de forbindelser med formel (I), (I-a) eller (I-b) eller, når mulig, en interessant utførelsesform derav som indikert over, hvori R<4>er Ci-4alkyloksy og R<5>er hydrogen.
En interessant utførelsesform av den foreliggende oppfinnelsen er de forbindelser med formel (I), (I-a) eller (I-b) eller, når mulig, en interessant utførelsesform derav som indikert over, hvori Z er et radikal med formel (z-1).
En interessant utførelsesform av den foreliggende oppfinnelsen er de forbindelser med formel (I), (I-a) eller (I-b) eller, når mulig, en interessant utførelsesform derav som indikert over, hvori Z er et radikal med formel (z-2).
Alle mulige kombinasjoner av de over-indikerte interessante utførelsesformene er ansett å være omfattet innen omfanget av denne oppfinnelsen.
En interessant utførelsesform av den foreliggende oppfinnelsen er de forbindelser med formel (I), (I-a) eller (I-b) hvori R<1>er -CH2-OH, -C(CH3)2-OH, -CH(CH3)-OH, - CH2-CH2-OH, -CH(CH(CH3)2)-OH, -CH2-CH2-CHOH-CH3, -CH=CH2eller C(CH3)=CH2; R<2>er hydrogen eller metyl; R3 er hydrogen eller -CH2-OH; R<4>er hydroksy eller metyloksy; R<5>er hydrogen eller metyl, eller R<4>og R<5>er tatt sammen for å danne okso.
Fortrinnsvis er forbindelsene, i de interessante utførelsesformene indikert over, stereokjemisk rene.
Foretrukne forbindelser ifølge den foreliggende oppfinnelsen er valgt fra gruppen bestående av inkludert enhver stereokjemisk isomer form derav;
et farmasøytisk akseptabelt salt derav eller et solvat derav.
(<*>betyr relativ stereokjemi)
Foretrukne forbindelser ifølge den foreliggende oppfinnelsen er valgt fra gruppen bestående av inkludert enhver stereokjemisk isomer form derav;
et farmasøytisk akseptabelt salt derav eller et solvat derav.
En foretrukket forbindelse ifølge den foreliggende oppfinnelsen er forbindelsen som har den følgende formel
et farmasøytisk akseptabelt salt derav eller et solvat derav.
En foretrukket forbindelse ifølge den foreliggende oppfinnelsen er forbindelsen som har den følgende formel
inkludert enhver stereokjemisk isomer form derav;
et farmasøytisk akseptabelt salt derav eller et solvat derav.
En foretrukket forbindelse ifølge den foreliggende oppfinnelsen er enantiomeren som har den følgende formelen
og som har en levorotorisk optisk dreining målt med lys ved bølgelengden til D-linjen til natrium (589 nm) ved en temperatur på 20 °C og cellelengde på 1 dm i kloroform ved en konsentrasjon på 8.59 mg/ml; eller
et farmasøytisk akseptabelt salt derav eller et solvat derav.
En foretrukket forbindelse ifølge den foreliggende oppfinnelsen er enantiomeren som har den følgende formelen
og som har en dekstrorotorisk optisk dreining målt med lys ved bølgelengden til D-linjen til natrium (589 nm) ved en temperatur på 20 °C og en cellelengde på 1 dm i metanol ved en konsentrasjon på 10.33 mg/ml; eller
et farmasøytisk akseptabelt salt derav eller et solvat derav.
En foretrukket forbindelse ifølge den foreliggende oppfinnelsen er enantiomeren som har den følgende formelen og som har en levorotorisk optisk dreining målt med lys ved bølgelengden til D-linjen til natrium (589 nm) ved en temperatur på 20 °C og en cellelengde på 1 dm i metanol ved en konsentrasjon på 10.74 mg/ml; eller
et farmasøytisk akseptabelt salt derav eller et solvat derav.
Forbindelsene med formel (I), deres farmasøytisk akseptable salter og stereokjemisk isomere former derav kan bli fremstilt på vanlig måte. Utgangsstoffene og noen av intermediatene er kjente forbindelser og er kommersielt tilgjengelige, eller kan bli fremstilt ifølge vanlige reaksjonsprosedyrer som generelt kjent i teknikken. Referanse i denne sammenheng er også gjort til syntesefremgangsmåter beskrevet i WO2006/032631.
Et antall av slike fremstillingsfremgangsmåter vil bli beskrevet heri etter i mer detalj. Andre fremgangsmåter for å få sluttforbindelser med formel (I) er beskrevet i eksemplene.
Generelt kan forbindelser med formel (I) bli fremstilt ved å reagere et intermediat med formel (II) med et intermediat med formel (III) hvori Wi er en egnet utgående gruppe sånn som, for eksempel, halo, f.eks. fluor, klor, brom eller jod, eller et sulfonyloksy radikal sånn som metylsulfonyloksy, 4-metylfenylsulfonyloksy og lignende. Reaksjonen kan bli utført i et reaksjon-inert løsemiddel sånn som, for eksempel, en alkohol, f.eks. metanol, etanol, 2-metoksy-etanol, propanol, butanol og lignende; en eter, f.eks. 1,4-dioksan fortrinnsvis i nærvær av en egnet syre, sånn som foreksempel HCI, l,l'-oksybispropan og lignende; et keton, f.eks. 4-metyl-2-pentanon; eller N,N-dimetylformamid, nitrobenzen, acetonitril og lignende. Tilsetningen av en passende base sånn som, for eksempel, et alkalie- eller jordalkaliekarbonat eller hydrogenkarbonat eller en organisk base, f.eks. N,N-diisopropyletylamin, trietylamin, natriumkarbonat eller kaliumkarbonat, kan bli benyttet for å plukke opp syren som blir frigjort i løpet av reaksjonsgangen. En liten mengde av et passende metalljodid, f.eks., natrium- eller kaliumjodid kan bli tilsatt for å fremme reaksjonen. Røring kan øke reaksjonshastigheten. Reaksjonen kan passende bli utført ved en temperatur i området mellom romtemperatur og reflukstemperaturen til reaksjonsblandingen og, hvis ønsket kan reaksjonen bli utført ved et økt trykk.
I reaksjonen over kan intermediater med formel (II) hvori R<1>er -C(OH)(CH3)2resultere i den tilsvarende sluttforbindelsen med formel (I) hvori R<1>er - C(CH3)<=>CH2.
Reaksjonen over av et intermediat med formel (III) med et intermediat med formel (II) kan også bli utført i nærvær av en egnet katalysator, sånn som for eksempel Pd(dba)2 (bis[(l,2,4,5-n)-l,5-difenyl-l,4-pentadien-3-en]-palladium) en egnet ligand, sånn som for eksempel BINAP (2,2'-bis(difenylfosfino)-l,l'-binaftyl), en egnet base, sånn som for eksempel natrium t-butoksid, og et egnet løsemiddel, sånn som for eksempel toluen.
Forbindelser med formel (I) hvori R<1>representerer hydroksyCi-4alkyl, nevnte forbindelser representert ved formel (I-l), kan også bli fremstilt ved å redusere det tilsvarende karbonylderivatet med formel (IV) i nærvær av et egnet reduksjonsmiddel, sånn som for eksempel NaBH4, og et egnet løsemiddel, sånn som for eksempel en alkohol, f.eks. metanol og lignende.
Forbindelser med formel (I-l) kan også bli fremstilt ved å redusere det tilsvarende esterderivatet med formel (V) hvori Rx representerer -Ci-3alkylC(=0)OCi-4alkyl, i nærvær av et egnet reduksjonsmiddel, sånn som for eksempel LiAIH4, og et egnet løsemiddel, sånn som for eksempel tetrahydrofuran.
Forbindelser med formel (I-l) hvori R<1>representerer hydroksyCi-4alkyl og nevnte hydroksyCi-4alkyl er plassert i posisjon 7 på indol-enheten, nevnte forbindelser representert ved formel (I-l-a), kan også bli fremstilt ved hydrolyse av et intermediat med formel (VI) med en egnet base, sånn som for eksempel natriumhydroksid, og et egnet løsemiddel, sånn som for eksempel tetrahydrofuran, eller en alkohol, f.eks. etanol og lignende.
Forbindelsene med formel (I) kan også bli konvertert til hverandre via kjente reaksjoner eller transformasjoner av funksjonelle grupper.
Forbindelsene med formel (I) kan også bli konvertert til et farmasøytisk akseptabelt syreaddisjonssalt ved reaksjon med en passende syre, sånn som for eksempel saltsyre, i et egnet løsemiddel, sånn som for eksempel en alkohol, f.eks. 2-propanol, dietyleter, diisopropyl eter.
Noen av intermediatene og utgangsstoffer er kjente forbindelser og kan være kommersielt tilgjengelige eller kan bli fremstilt ifølge kjente prosedyrer.
Generelt kan intermediater med formel (II) bli fremstilt ved å hydrogenere et intermediat med formel (VII) i nærvær av en egnet metallkatalysator, sånn som for eksempel Raney-nikkel, i nærvær av et egnet løsemiddel, sånn som for eksempel en alkohol, f.eks. metanol eller etanol og lignende; eller platina på kull, i nærvær av en egnet katalysatorgift, sånn som en tiofen-løsning og vanadiumpentoksid, i nærvær av et egnet løsemiddel, sånn som for eksempel tetrahydrofuran.
Intermediater med formel (VII) kan bli fremstilt ved å reagere et intermediat med formel (VIII) med et intermediat med formel (IX) hvori W2representerer en egnet utgående gruppe, sånn som for eksempel et halogenatom, f.eks. klor, brom, fluor og lignende, i nærvær av et egnet løsemiddel, sånn som for eksempel N,N-dimetylsulfoksid. Tilsetningen av en passende base sånn som, for eksempel, et alkalie- eller jordalkaliekarbonat eller hydrogenkarbonat eller en organisk base, f.eks. N,N-diisopropyletylamin, trietylamin, natriumkarbonat, natriumhydrogenkarbonat, eller kaliumkarbonat, kan bli benyttet for å plukke opp syren som blir frigjort i løpet av reaksjonsgangen.
Intermediater med formel (VIII) kan bli fremstilt fra det tilsvarende intermediatet med formel (X) i nærvær av Raney-nikkel og NH3i nærvær av et egnet løsemiddel, sånn som for eksempel en alkohol, f.eks. metanol og lignende.
Intermediater med formel (X) hvori R<1>representerer hydroksyCi-4alkyl, f.eks. - CH(OH)(CH3), nevnte intermediater representert ved formel (X-a), kan bli fremstilt fra et intermediat med formel (XI) ved reaksjon med CH3MgCI i nærvær av et egnet løsemiddel, sånn som for eksempel tetrahydrofuran.
Den samme reaksjonen kan bli anvendt for å fremstille andre alternativer av hydroksyCi-4alkyl. For eksempel kan intermediater hvori R<1>representerer - C(OH)(CH3)2, bli fremstilt fra det tilsvarende intermediatet med -C(=0)-CH3.
Intermediater med formel (XI) kan bli fremstilt ved å reagere et intermediat med formel (XII) med natriumcyanid i nærvær av et egnet løsemiddel, sånn som for eksempel N,N-dimetylformamid.
Alternativt kan intermediater med formel (XI) også bli fremstilt ved oksidering fra den tilsvarende hydroksylanalogen i nærvær av Dess-Martin perjodinan og et egnet løsemiddel, sånn som for eksempel diklormetan.
Intermediater med formel (XII) kan bli fremstilt ved å reagere et intermediat med formel (XIII) med CH3I i nærvær av et egnet løsemiddel, sånn som en alkohol, f.eks. etanol.
Intermediater med formel (XIII) kan bli fremstilt ved å reagere et intermediat med formel (XIV) med Eschenmosser's salt i nærvær av eddiksyre.
Intermediater med formel (XIV) kan bli fremstilt ved å oksidere den tilsvarende hydroksylanalogen i nærvær av et egnet oksiderende middel, sånn som for eksempel Mn02, i nærvær av et egnet løsemiddel, sånn som for eksempel diklormetan.
Intermediater med formel (III), hvori Z er et radikal med formel (z-2) og R4 er hydroksyl, nevnte intermediater representert ved formel (III-a), kan bli fremstilt ved å redusere et intermediat med formel (III-b) med et egnet reduksjonsmiddel, sånn som for eksempel NaBH4, i nærvær av et egnet løsemiddel, sånn som for eksempel en alkohol, f.eks. metanol.
Intermediater med formel (III-a) kan bli konvertert til et intermediat med formel (III-c) ved reaksjon med Ci-4alkyljodid, i nærvær av en egnet base, sånn som natriumhydrid, og et egnet løsemiddel, sånn som for eksempel tetra hyd rof uran. Intermediater med formel (III-b) kan bli fremstilt ved oksidering av et intermediat med formel (III-a) ved reaksjon med et egnet oksiderende middel, sånn som for eksempel Mn02, i nærvær av et egnet løsemiddel, sånn som for eksempel diklormetan. Intermediater med formel (III-b) kan bli konvertert til et intermediat med formel (III-d) ved reaksjon med Ci-4alkylMgCI i nærvær av et egnet løsemiddel, sånn som for eksempel tetra hyd rof uran.
Intermediatene med formel (III-a) kan også bli fremstilt ved å røre intermediatet med formel (XV) i en blanding av metanol/NH3. Hvis ønsket kan intermediatet med formel (III-a) bli konvertert til intermediatet med formel (XV) ved røring i en blanding av eddiksyreanhydrid og pyridin.
S-enantiomeren til intermediat (III-a), heri referert til som intermediatet med formel (III-a-1), og R-enantiomeren av intermediatet med formel (XV), heri
referert til som intermediatet med formel (XV-b), kan bli fremstilt ved å tilsette Lipase Candida Antartica B til en rasemisk blanding av intermediatet med formel (III-a) i et egnet løsemiddel sånn som eddiksyre etenylester (se Skjema 1). Når ønsket kan intermediatet med formel (XV-b) bli konvertert til R-enantiomeren til intermediat (III-a), heri referert til som intermediat med formel (III-a-2), ved reaksjon i MeOH/NH3.
Med utgangspunkt fra den rasemiske blandingen gir denne fremgangsmåten omdannelsen av en av enantiomerene i dens acetat med ee>99 % og 58 % utbytte og den andre enantiomer blir isolert med ee>99 % i 42 % utbytte.
Uttrykket enantiomert overskudd (ee) er velkjent for fagmannen innen stereokjemi. For en blanding av (+) og (-) enantiomere, med sammensetning gitt som mol- eller vektfraksjoner av F(+) og F(-) (hvor F(+) + F(-) = 1), enantiomert overskudd for F(<*>) er definert som F(+) -F(-), og prosenter enantiomert overskudd som 100<*>[F(+) -F(-)].
Alternativt, R-enantiomeren av intermediat (III-a), heri referert til som intermediatet med formel (III-a-2), og S- enantiomeren av intermediatet med formel (XV), heri referert til som intermediatet med formel (XV-a), kan bli fremstilt ved å tilsette Lipase Candida Antartica B til en rasemisk blanding av intermediatet med formel (XV) i vann (se Skjema 2). Når ønsket kan intermediatet (XV-a) bli konvertert til intermediat (III-a-1) ved reaksjon i MeOH/NH3.
Alternativt kan intermediatet med formel (III-a) også bli separert til dets enantiomere ved kiral kolonnekromatografi.
Intermediatene med formel (XV) kan bli fremstilt ved å røre intermediatet med formel (XVI) i eddiksyreanhydrid.
Intermediatene med formel (XVI) hvori Wi er klor, heri referert til som intermediatet med formel (XVI-a), kan bli fremstilt ved å tilsette benzyltrietylammoniumklorid og natriumklorid til en løsning av intermediatet med formel (XVII) i acetonitril, etterfulgt av tilsetningen av konsentrert saltsyre.
Intermediatene med formel (XVII) kan bli fremstilt ved å tilsette rykende salpetersyre til svovelsyren etterfulgt av porsjonsvis tilsetning av 6,7-dihydro-5H-syklopenta[b]pyridin, 1-oksid.
Intermediater med formel (IV) kan bli fremstilt ifølge reaksjonSPROTOKOLLENE BESKREVET OVER for intermediater med formel (II).
Intermediater med formel (V) kan bli fremstilt ved å avbeskytte et intermediat med formel (XVIII) hvori P representerer en egnet beskyttelsesgruppe, sånn som for eksempel -C(=0)-0-C(CH3)3, i nærvær av en egnet syre, sånn som for eksempel saltsyre, og et egnet løsemiddel, sånn som for eksempel acetonitril.
Intermediater med formel (XVIII) kan bli fremstilt ved å reagere et intermediat med formel (XIX) med et intermediat med formel (III) i nærvær av et reaksjonsinert løsemiddel sånn som, for eksempel, en alkohol, f.eks. metanol, etanol, 2-metoksy-etanol, propanol, isopropanolbutanol og lignende; an eter, f.eks. 1, 4-dioksan fortrinnsvis i nærvær av en egnet syre sånn som for eksempel HCI, 1,1'-oksybispropan og lignende; et keton, f.eks. 4-metyl-2-pentanon; eller N,ri-di metylformamid, nitrobenzen, acetonitril og lignende. Tilsetningen av en passende base sånn som, for eksempel, et alkalie- eller jordalkaliekarbonat eller hydrogenkarbonat eller en organisk base, f.eks. N,N-diisopropyletylamin, trietylamin, natriumkarbonat eller kaliumkarbonat, kan bli benyttet for å plukke opp syren som blir frigjort i løpet av reaksjonsgangen. En liten mengde av et passende metalljodid, f.eks. natrium- eller kaliumjodid, kan bli tilsatt for å fremme reaksjonen. Røring kan øke reaksjonshastigheten. Reaksjonen kan passende bli utført ved en temperatur i området mellom romtemperatur og reflukstemperaturen til reaksjonsblandingen og, hvis ønsket kan reaksjonen bli utført ved et økt trykk. Intermediater med formel (XIX) kan bli fremstilt ifølge reaksjonsprotokollene beskrevet over for intermediater med formel (II).
Intermediater med formel (VI) kan bli fremstilt ved å reagere et intermediat med formel (XX) hvori P representerer en egnet beskyttelsesgruppe som definert over og Ry representerer -Ci-4alkyl-0-Si(CH3)2C(CH3)3, i nærvær av en egnet syre, sånn som for eksempel trifluoreddiksyre, og et egnet løsemiddel, sånn som for eksempel diklormetan.
Intermediater med formel (XX) kan bli fremstilt ved å reagere et intermediat med formel (XXI) med et intermediat med formel (III) i nærvær av en reaksjon-inert løsemiddel sånn som, for eksempel, en alkohol, f.eks. metanol, etanol, 2-metoksy-etanol, propanol, isopropanolbutanol og lignende; an eter, f.eks. 1, 4-dioksan fortrinnsvis i nærvær av en egnet syre sånn som for eksempel HCI, 1,1'-oksybispropan og lignende; et keton, f.eks. 4-metyl-2-pentanon; eller N,ri-di metylformamid, nitrobenzen, acetonitril og lignende. Tilsetningen av en passende base sånn som, for eksempel, et alkalie- eller jordalkaliekarbonat eller hydrogenkarbonat eller en organisk base, f.eks. N,N-diisopropyletylamin, trietylamin, natriumkarbonat eller kaliumkarbonat, kan bli benyttet for å plukke opp syren som blir frigjort i løpet av reaksjonsgangen. En liten mengde av et passende metalljodid, f.eks. natrium- eller kaliumjodid, kan bli tilsatt for å fremme reaksjonen. Røring kan øke reaksjonshastigheten. Reaksjonen kan passende bli utført ved en temperatur i området mellom romtemperatur og reflukstemperaturen til reaksjonsblandingen og, hvis ønsket kan reaksjonen bli utført ved et økt trykk. Intermediater med formel (XXI) kan bli fremstilt fra det tilsvarende nitro-intermediatet med formel (XXII) ved hydrogenering i nærvær av en egnet katalysator, sånn som for eksempel Raney-nikkel, og et egnet løsemiddel, sånn som for eksempel en alkohol, f.eks. metanol og lignende.
Intermediater med formel (XXII), hvori P representerer -C(=0)-0-Ci-4alkyl, nevnte intermediat representert ved formel (XXII-a), kan bli fremstilt ved å reagere et intermediat med formel (XXIII) med di-tert-butyl dikarbonat i nærvær av en egnet base, sånn som for eksempel trietylamin, og et egnet løsemiddel, sånn som for eksempel 4-(dimetyl)aminopyridin.
Intermediater med formel (XXIII) kan bli fremstilt ved å reagere et intermediat med formel (XXIV) med et intermediat med formel (IX) i nærvær av en egnet base, sånn som for eksempel natriumbikarbonat, og et egnet løsemiddel, sånn som for eksempel N,N-dimetylsulfoksid.
Intermediater med formel (XXIV) kan bli fremstilt ved å reagere et intermediat med formel (XXV) med NH3i nærvær av en egnet katalysator, sånn som for eksempel Raney-nikkel, i nærvær av et egnet løsemiddel, sånn som for eksempel en alkohol, f.eks. metanol og lignende.
Intermediater med formel (XXV) kan bli fremstilt ved å reagere et intermediat med formel (XXVI) med tert-butyldimetylsilylklorid i nærvær av en egnet base, sånn som for eksempel imidazol, og et egnet løsemiddel, sånn som for eksempel tetra hyd rof uran.
Intermediater med formel (XXVI) kan bli fremstilt som beskrevet over for intermediater med formel (XI).
Forbindelsene med formel (I), og noen av intermediatene i den foreliggende oppfinnelsen, kan inneholde et asymmetrisk karbonatom. Rene stereokjemisk
isomere former av nevnte forbindelser og nevnte intermediater kan bli oppnådd ved anvendelsen av kjente prosedyrer. For eksempel kan diastereoisomere bli separert ved fysiske fremgangsmåter sånn som selektiv krystallisering eller kromatografiske teknikker, f.eks. motion-distribuering, væskekromatografi og lignende
fremgangsmåter. Enantiomere kan bli oppnådd fra rasemiske blandinger ved først å konvertere nevnte rasemiske blandinger med egnede oppløsningsmidler sånn som, for eksempel, kirale syrer, til blandinger av diastereomere salter eller forbindelser; deretter fysisk separere nevnte blandinger av diastereomere salter eller forbindelser ved, for eksempel, selektiv krystallisering, superkritisk fluid
kromatografi eller kromatografiske teknikker, f.eks. væskekromatografi og lignende fremgangsmåter; og til slutt konvertere nevnte separerte diastereomere salter eller forbindelser til de tilsvarende enantiomerer. Rene stereokjemisk isomere former kan også bli oppnådd fra de rene stereokjemisk isomere formene av de passende intermediatene og utgangsstoffene, med forbehold om at de mellomliggende reaksjoner foregår stereospesiflkt.
Forbindelsene med formel (I), inkludert enhver stereokjemisk isomer form derav, de farmasøytisk akseptable salter derav eller solvatene derav har verdifulle farmakologiske egenskaper ved at de øker uttrykkingen av p53, viser potent antiproliferativ aktivitet, og viser potent anti-tumor aktivitet.
Som indikert før øker forbindelsene ifølge oppfinnelsen uttrykkingen av p53 i analysen beskrevet i Cl. Denne økningen kan være forårsaket av, men er ikke begrenset til, en eller flere av de følgende virkningsmekanismer: interaksjoner med oppstrøms eller nedstrømsmål, f.eks. kinaser, eller enzym-aktiviteter involvert i ubiquitinering eller SUMO-modifisering, direkte eller indirekte stabilisering av p53-proteinet, f.eks. ved å oppbevare det i dets funksjonelle strukturelle form, eller ved å forhindre misfolding, - øke p53 uttrykking eller uttrykking av p53 familiemedlemmer, f.eks. p63 og p73,
øke p53 aktivitet, for eksempel ved (men ikke begrenset til), å øke dets transkripsjonsaktivitet og/eller
økende uttrykking av gener og proteiner i p53-signalveien, for eksempel (men ikke begrenset til) p21wafl, cipl, MIC-1 (GDF-15), PIG-3, Bax, Puma, Nokså, og ATF-3.
Følgelig viser den foreliggende oppfinnelsen forbindelsene med formel (I) for anvendelse som en medisin, spesielt for behandlingen av kreft eller beslektede sykdommer, for å inhibere tumorvekst, for å øke uttrykkingen av p53.
Videre angår oppfinnelsen også anvendelsen av en forbindelse for fremstillingen av et medikament for behandlingen av en forstyrrelse formidlet gjennom senket uttrykking av p53, spesielt for behandlingen av kreft hvori nevnte forbindelse er en forbindelse med formel (I).
Uttrykket "behandle" eller "behandling" som anvendt heri dekker enhver behandling av en sykdom og/eller tilstand i et dyr, spesielt et menneske, og inkluderer: (i) å forhindre en sykdom og/eller tilstand fra å oppstå i en pasient som kan være predisponert for sykdommen og/eller tilstanden, men som ennå ikke har blitt diagnosert å ha den; (ii) inhibere sykdommen og/eller tilstanden, dvs., stanse dens utvikling; (iii) bedre sykdommen og/eller tilstanden, dvs., å forårsake tilbakegang av sykdommen og/eller tilstanden.
Med uttrykket "en forstyrrelse formidlet gjennom senket uttrykking av p53" er det ment enhver uønsket eller skadelig tilstand som kan bli inhibert ved, hvis utvikling kan bli stanset ved, hvilken kan bli bedret ved eller hvis tilbakegang kan bli forårsaket av apoptose, indusering av cellulær død, eller regulering av cellesyklusen.
Denne oppfinnelsen tilveiebringer også en fremgangsmåte for å behandle en forstyrrelse formidlet gjennom en redusert uttrykking av p53, spesielt for å behandle kreft, ved å administrere en effektiv mengde av en forbindelse ifølge den foreliggende oppfinnelsen, til et subjekt, f.eks. et pattedyr (og mer spesielt et menneske) med behov av slik behandling.
Forbindelsene ifølge oppfinnelsen kan ha antiproliferative virkninger i tumorceller, selvom slike celler er tomme for funksjonell p53. Mer spesielt kan forbindelsene ifølge oppfinnelsen ha antiproliferative virkninger i tumorer med vill-type eller mutant p53 og/eller i tumorer overuttrykkende MDM2. Forbindelsene kan påvirke angiogenese, tumorcelle-migrering, invasjon eller metastase.
Således tilveiebringer denne oppfinnelsen også en fremgangsmåte for å inhibere tumorvekst ved å administrere en effektiv mengde av en forbindelse ifølge den foreliggende oppfinnelsen, til et subjekt, f.eks. et pattedyr (og mer spesielt et menneske) med behov for slik behandling.
Eksempler på tumorer, inkludert voksne og pediatriske kreftformer, som kan bli inhibert av forbindelsene ifølge den foreliggende oppfinnelsen inkluderer, men er ikke begrenset til, lungekreft inkludert småcellet lungekreft og ikke-småcellet lungekreft (f.eks. adenokarsinoma), pankreatiske kreftformer, tykktarmskreftformer (f.eks. kolorektale karsinomer, sånn som, for eksempel, tykktarm adenokarsinoma og tykktarm adenoma), øsofageal kreft, oralt skvamøs karsinom, tunge karsinom, gastrisk karsinom, leverkreft, nasopharyngeal kreft, hematopoietiske tumorer av lymfoid avstamming (f.eks. akutt lymfosytisk leukemi, B-celle lymfom, Burkitfs lymfom), non-Hodgkin's lymfom (f.eks. mantelcelle lymfom), Hodgkin's sykdom, myeloide leukemier (for eksempel, akutt myelogen leukemi (AML) eller kronisk myelogen leukemi (CML)), akutt lymfoblastisk leukemi, kronisk lymfocytisk leukemi (CLL), tyroid follikulær kreft, myelodysplastisk syndrom (MDS), tumorer av mesenchymalt opphav, mykvev sarkomer, liposarkomer, gastrointestinale stromalsarkomer, ondartede periferale nervesliretumorer (MPNST), Ewing sarkomer, leiomyosarkomer, mesenchymale kondrosarkomer, lymfosarkomer, fibrosarkomer, rhabdomyosarkomer, melanomer, teratokarsinomer, nevroblastomer, hjernetumorer, medulloblastoma, gliomer, godartede hudtumorer (f.eks. keratoacanthomer), brystkarsinom (f.eks. fremskredet brystkreft), nyrekarsinom, nefroblastom, eggstokk karsinom, livmorhals karsinom, endometrielt karsinom, blærekarsinom, prostatakreft inkludert fremskredet sykdom og hormonrefraktær prostatakreft, testikulære kreftformer, osteosarkom, hode- og nakkekreft, epidermalt karsinom, multippel myelom (f.eks. refraktær multippel myelom), mesoteliom. Spesielle kreftformer som kan bli behandlet med forbindelsene ifølge den foreliggende oppfinnelsen er brystkreft, kolorektal kreft, ikke-småcellet lungekreft, akutt myelogen leukemi (AML).
Forbindelsene ifølge den foreliggende oppfinnelsen kan også bli anvendt for behandlingen og forhindringen av inflammatoriske tilstander.
Således tilveiebringer denne oppfinnelsen også en fremgangsmåte for behandlingen og forhindringen av inflammatoriske betingelser ved å administrere en effektiv mengde av en forbindelse ifølge den foreliggende oppfinnelsen, til et subjekt, f.eks. et pattedyr (og mer spesielt et menneske) med behov for slik behandling.
Forbindelsene ifølge den foreliggende oppfinnelsen kan også bli anvendt for behandlingen av autoimmune sykdommer og betingelser. Med uttrykket "autoimmune sykdommer" er det ment enhver sykdom hvori et dyrs immunsystem reagerer ugunstig ovenfor et eget antigen. Med uttrykket" eget antigen" er det ment ethvert antigen som vanligvis er funnet i dyrets kropp. Representative autoimmune sykdommer inkluderer, men er ikke begrenset til: 1-lashimoto's tyroiditt, Grave's sykdom, multippel sklerose, pernisiøs anemi, Addison's sykdom, insulin-avhengig diabetes mellitus, revmatoid artritt, systemisk lupus erytematose
(SLE eller lupus), dermatomyositt, Crohn's sykdom, Wegener's granulomatose, Anti-Glomerulær Basement Membran Sykdom, Antifosfolipid Syndrom, Dermatitt Herpetiformis, Allergisk Encefalomyelitt, Glomerulonefritt, Membranøs Glomerulonefritt, Goodpasture Syndrom, Lam bert-Eaton, Myasthenis Syndrom, Myasthenia Gravis, Bulløs Pemfigoid, Polyendokrinopatier, Reiter's Sykdom, og Stiff-Man Syndrom.
Således tilveiebringer denne oppfinnelsen også en fremgangsmåte for behandlingen av autoimmune sykdommer og betingelser ved å administrere en effektiv mengde av en forbindelse ifølge den foreliggende oppfinnelsen, til et subjekt, f.eks. et pattedyr (og mer spesielt et menneske) med behov for slik behandling.
Forbindelsene ifølge den foreliggende oppfinnelsen kan også være nyttige for behandlingen av sykdommer forbundet med konformelt ustabile eller feilbrettede proteiner.
Eksempler på sykdommer forbundet med konformelt ustabile eller feilbrettede proteiner inkluderer men er ikke begrenset til: cystisk fibrose (CFTR), Marfan syndrom (fibrillin), Amyotrofisk lateral sklerose (superoksid dismutase), skjørbuk (kollagen), lønnesirup-urin sykdom (alfa-ketosyre dehydrogenase kompleks), osteogenese imperfekta (type 1 prokollagen pro-alfa), Creutzfeldt-Jakob sykdom (prion), Alzheimer's sykdom (beta-amyloid), familiær amyloidose (lysozym), katarakter (krystalliner), familiær hyperkolesterolemi (LDL reseptor), □ I - antitrypsin mangel, Tay-Sachs sykdom (beta-heksosaminidase), retinitt pigmentosa (rhodopsin), og leprechaunism (insulinreseptor).
Således tilveiebringer denne oppfinnelsen også en fremgangsmåte for behandlingen av sykdommer forbundet med konformelt ustabile eller feilbrettede proteiner ved å administrere en effektiv mengde av en forbindelse ifølge den foreliggende oppfinnelsen, til et subjekt, f.eks. et pattedyr (og mer spesielt et menneske) med behov for slik behandling.
I lys av deres nyttige farmakologiske egenskaper kan de gjeldende forbindelser bli formulert i forskjellige farmasøytiske former for administrasjonsformål.
For å fremstille de farmasøytiske sammensetningene ifølge denne oppfinnelsen blir en effektiv mengde av en forbindelse ifølge den foreliggende oppfinnelsen, som den aktive ingrediensen, kombinert i intim sammenblanding med en farmasøytisk akseptabel bærer, hvilken bærer kan ha en rekke forskjellige former avhengig av typen av preparat ønsket for administrasjon. Disse farmasøytiske sammensetningene er fortrinnsvis i enhetsdoseform egnet, fortrinnsvis, for administrasjon oralt, rektalt, perkutant, eller ved parenteral injisering. For eksempel, ved fremstilling av sammensetningene i oral doseform, kan hvilken som helst av de vanlige farmasøytiske media bli brukt, sånn som, for eksempel, vann, glykoler, oljer, alkoholer og lignende i tilfellet av orale flytende preparater, sånn som suspensjoner, siruper, eliksirer og løsninger; eller faste bærere sånn som stivelser, sukkere, kaolin, smøremidler, bindemidler, disintegrerende midler og lignende i tilfellet av pulvere, piller, kapsler og tabletter.
På grunn av deres enkle administrasjon representerer tabletter og kapsler de mest fordelaktige orale doseenhetsformene, i hvilket tilfelle faste farmasøytiske bærere åpenbart blir anvendt. For parenterale sammensetninger vil bæreren vanligvis omfatte sterilt vann, minst for en stor del, selv om andre ingredienser, for å hjelpe løselighet for eksempel, kan bli inkludert. Injiserbare løsninger, for eksempel, kan bli fremstilt hvori bæreren omfatter NaCI(aq)-løsning, glukose-løsning eller en blanding av NaCI(aq)-løsning og glukose-løsning. Injiserbare suspensjoner kan også bli fremstilt i hvilket tilfelle passende flytende bærere, suspensjonsmidler og lignende kan bli brukt. I sammensetningene egnet for perkutan administrasjon, omfatter bæreren valgfritt et penetreringsøkende middel og/eller et egnet fuktgjøringsmiddel, valgfritt kombinert med egnede tilsetningsstoffer av enhver type i mindre proporsjoner, hvilke tilsetningsstoffer ikke forårsaker en betydelig skadelig effekt på huden. Nevnte tilsetningsstoffer kan forenkle administrasjonen til huden og/eller være hjelpsomme for fremstillingen av de ønskede sammensetningene. Disse sammensetningene kan bli administrert på forskjellige måter, f.eks., som et transdermalt plaster, som en "spot-on", som en salve. Det er spesielt fordelaktig å formulere de førnevnte farmasøytiske sammensetningene i doseenhetsform for lett administrasjon og doseenhetlighet. Doseenhetsform som anvendt i beskrivelsen og krav heri refererer til fysisk diskrete enheter egnet som enhetsdoser, hver enhet inneholdende en forutbestemt mengde med aktiv ingrediens beregnet for å fremstille den ønskede terapeutiske effekten i assosiasjon med den nødvendige farmasøytiske bæreren. Eksempler på slike doseenhetsformer er tabletter (inkludert skårete eller belagte tabletter), kapsler, piller, pulverpakker, wafere, injiserbare løsninger eller suspensjoner, teskjemål, spiseskjemål og lignende, og avdelte multipler derav.
Det er spesielt fordelaktig å formulere de førnevnte farmasøytiske sammensetningene i doseenhetsform for enkel administrasjon og doseenhetlighet. Doseenhetsform som anvendt i beskrivelsen og krav heri refererer til fysisk diskrete enheter egnet som enhetsdoser, hver enhet inneholdende en forutbestemt mengde med aktiv ingrediens, beregnet for å fremstille den ønskede terapeutiske effekt, i assosiasjon med den nødvendige farmasøytiske bærer. Eksempler på slike doseenhetsforms er tabletter (inkludert skårete eller belagte tabletter), kapsler, piller, pulverpakker, wafere, injiserbare løsninger eller suspensjoner, teskjemål, spiseskjemål og lignende, og avdelte multipler derav.
Forbindelsene ifølge oppfinnelsen blir administrert i en mengde tilstrekkelig for å indusere apoptose, indusere cellulær død, eller regulere cellesyklusen.
Følgelig blir forbindelsen ifølge oppfinnelsen administrert i en mengde tilstrekkelig for å øke uttrykking av p53, eller for å utvise dens anti-tumoraktivitet.
En fagmann kunne lett bestemme den effektive mengden fra testresultatene presentert heri etter. Generelt er det tenkt at en terapeutisk effektiv mengde vil være fra 0.005 mg/kg til 100 mg/kg kroppsvekt, og spesielt fra 0.005 mg/kg til 10 mg/kg kroppsvekt. Det kan være passende å administrere den nødvendige dosen som enkel, to, tre, fire eller flere underdoser ved passende intervaller i løpet av dagen. Nevnte underdoser kan bli formulert som enhetsdoseformer, for eksempel, inneholdende 0.5 til 500 mg, spesielt 1 mg til 500 mg, mer spesielt 10 mg til 500 mg med aktiv ingrediens per enhetsdoseform.
Avhengig av administrasjonsformen vil den farmasøytiske sammensetningen fortrinnsvis omfatte fra 0.05 til 99 vekt%, mer fortrinnsvis fra 0.1 til 70 vekt%, enda mer fortrinnsvis fra 0.1 til 50 vekt% med forbindelsen ifølge den foreliggende oppfinnelsen, og, fra 1 til 99.95 vekt%, mer fortrinnsvis fra 30 til 99.9 vekt%, enda mer fortrinnsvis fra 50 til 99.9 vekt% med en farmasøytisk akseptabel bærer, alle prosentandeler er basert på den totale vekten til sammensetningen.
Som et annet aspekt av den foreliggende oppfinnelsen sees det for seg en kombinasjon av en forbindelse ifølge den foreliggende oppfinnelsen med et annet antikreft-middel, spesielt for anvendelse som en medisin, mer spesifikt i behandlingen av kreft eller beslektede sykdommer.
For behandlingen av tilstandene over kan forbindelsene ifølge oppfinnelsen bli fordelaktig anvendt i kombinasjon med en eller flere andre medisinske midler, mer spesielt, med andre antikreft-midler eller adjuvanter i kreftterapi. Eksempler på antikreft-midler eller adjuvanter (støttemidler i terapien) inkluderer, men er ikke begrenset til: platinakoordineringsforbindelser for eksempel cisplatin valgfritt kombinert med amifostin, karboplatin eller oksaliplatin;
taxan-forbindelser for eksempel paclitaxel, paclitaxel-proteinbundet partikler (Abraxane™) eller docetaxel;
topoisomerase-I-inhibitorer sånn som camptothecin forbindelser for eksempel irinotecan, SN-38, topotecan, topotecan HCI;
topoisomerase-II-inhibitorer sånn som anti-tumor epipodophyllotoksiner eller podophyllotoksin-derivater for eksempel etoposid, etoposid fosfat eller teniposid;
anti-tumor vinca alkaloider for eksempel vinblastin, vincristin eller vinorelbin;
anti-tumor nukleosid-derivater for eksempel 5-fluoruracil, leucovorin, gemcitabin, gemcitabin HCI, capecitabin, cladribin, fludarabin, nelarabin;
alkylerende midler sånn som nitrogen senneper eller nitrosourea for eksempel syklofosfamid, klorambucil, karmustin, tiotepa, mefalan (melfalan), lomustin, altretamin, busulfan, dakarbazin, estramustin, ifosfamid valgfritt i kombinasjon med mesna, pipobroman, prokarbazin, streptozocin, telozolomid, uracil;
anti-tumor antrasyklin-derivater for eksempel daunorubicin, doksorubicin valgfritt i kombinasjon med dexrazoksan, doksil, idarubicin, mitoksantron, epirubicin, epirubicin HCI, valrubicin;
molekyler som målretter IGF-l-reseptoren for eksempel picropodofilin;
tetrakarsin-derivater for eksempel tetrokarsin A;
glukokortikoider for eksempel prednison;
antistoffer for eksempel trastuzumab (HER2 antistoff), rituximab (CD20 antistoff), gemtuzumab, gemtuzumab ozogamicin, cetuximab, pertuzumab, bevacizumab, alemtuzumab, eculizumab, ibritumomab tiuxetan, nofetumomab, panitumumab, tositumomab, CNTO 328;
østrogenreseptor-antagonister eller selektive østrogenreseptor-modulatorer eller inhibitorer av østrogen-syntese for eksempel tamoksifen, fulvestrant, toremifen, droloksifen, faslodex, raloksifen eller letrozol;
aromatase-inhibitorer sånn som exemestan, anastrozol, letrazol, testolakton og vorozol;
differensierende midler sånn som retinoider, vitamin D eller retinsyre og retinsyre-metabolismeblokkerende midler (RAMBA) for eksempel accutan;
DNA-metyltransferase inhibitorer for eksempel azacytidin eller decitabin;
antifolater for eksempel premetrex dinatrium;
antibiotika for eksempel antinomycin D, bleomycin, mitomycin C, dactinomycin, carminomycin, daunomycin, levamisole, plicamycin, mithramycin;
antimetabolitter for eksempel clofarabin, aminopterin, cytosin arabinosid eller metotrexat, azacitidin, cytarabin, floksuridin, pentostatin, tioguanin;
apoptose-induserende midler og antiangiogene midler sånn som Bcl-2 inhibitorer for eksempel YC 137, BH 312, ABT 737, gossypol, HA 14-1, TW 37 eller dekansyre;
tubulin-bindingsmidler for eksempel combrestatin, colchiciner eller nocodazol;
kinase-inhibitorer (f.eks. EGFR (epitelvekstfaktor-reseptor) inhibitorer, MTKI (multi-mål kinaseinhibitorer), mTOR inhibitorer) for eksempel flavoperidol, imatinib mesylat, erlotinib, gefitinib, dasatinib, lapatinib, lapatinib ditosylat, sorafenib, sunitinib, sunitinib maleat, temsirolimus;
farnesyltransferase-inhibitorer for eksempel tipifarnib;
histon-deacetylase (HDAC) inhibitorer for eksempel natriumbutyrat, suberoylanilid hydroksamidsyre (SAHA), depsipeptid (FR 901228), NVP-LAQ824, R306465, JNJ-26481585, trichostatin A, vorinostat;
Inhibitorer av ubiquitin-proteasom signalveien for eksempel PS-341, MLN.41 eller bortezomib;
Yondelis;
Telomerase-inhibitorer for eksempel telomestatin;
Matriksmetalloproteinase-inhibitorer for eksempel batimastat, marimastat,
prinostat eller metastat.
Rekombinante interleukiner for eksempel aldesleukin, denileukin diftitoks,
interferon alfa 2a, interferon alfa 2b, peginterferon alfa 2b
- MAPK-inhibitorer
Retinoider for eksempel alitretinoin, bexaroten, tretinoin Arsentrioksid
Asparaginas
Steroider, for eksempel dromostanolon propionat, megestrol acetat, nandrolon
(dekanoat, fenpropionat), dexametason
Gonadotropin-frigjørende hormon agonister eller antagonister for eksempel
abarelix, goserelin acetat, histrelin acetat, leuprolid acetat
- Thalidomid, lenalidomid
Merkaptopurin, mitotan, pamidronat, pegademas, pegaspargas, rasburicase BH3-hermere for eksempel ABT-737
- MEK-inhibitorer for eksempel PD98059, AZD6244, CI-1040
koloni-stimulerende faktor analoger, for eksempel filgrastim, pegfilgrastim,
sargramostim; erythropoietin eller analoger derav (f.eks. darbepoetin alfa);
interleukin 11; oprelvekin; zoledronat, zoledronsyre; fentanyl; bisfosfonat;
palifermin.
en steroid cytokrom P450 17alfa-hydroksylase-17,20-lyase inhibitor (CYP17),
f.eks. abirateron, abirateron acetat.
Som sagt over har forbindelsene ifølge den foreliggende oppfinnelsen også terapeutisk anvendelse for å gjøre tumorceller mer følsomme ovenfor radioterapi og kjemoterapi.
Følgelig kan forbindelsene ifølge den foreliggende oppfinnelsen bli anvendt som "radiosensibilisatorer" og/eller "kjemosensibilisatorer" eller kan bli gitt i kombinasjon med en annen "radiosensibilisator" og/eller "kjemosensibilisator".
Uttrykket "radiosensibilisator", som anvendt heri, er definert som et molekyl, fortrinnsvis et molekyl med lav molekylvekt, administrert til dyr i terapeutisk effektive mengder for å øke følsomheten til cellene for ioniserende bestråling og/eller for å fremme behandlingen av sykdommer som er mulige å behandle med ioniserende bestråling.
Uttrykket "kjemosensibilisator", som anvendt heri, er definert som et molekyl, fortrinnsvis et molekyl med lav molekylvekt, administrert til dyr i terapeutisk effektive mengder for å øke følsomheten av celler ovenfor kjemoterapi og/eller promotere behandlingen av sykdommer som er mulige å behandle med kjemoterapeutika.
Flere mekanismer for virkningsmåten til radiosensibilisatorer har blitt foreslått i litteraturen inkludert: hypoksisk celle radiosensibilisatorer (f.eks., 2-nitroimidazol-forbindelser, og benzotriazindioksid-forbindelser) som etteraper oksygen eller alternativt oppfører seg som bioreduktive midler under hypoksi; ikke-hypoksisk celle radiosensibilisatorer (f.eks., halogenerte pyrimidiner) kan være analoger av DNA-baser og fortrinnsvis inkorporerer inn i DNA'et til kreftceller og promoterer derved den strålingsinduserte ødeleggelsen av DNA-molekyler og/eller forhindrer de normale DNA-reparasjonsmekanismene; og forskjellige andre potensielle virkningsmekanismer har blitt foreslått for radiosensibilisatorer i behandlingen av sykdom.
Mange kreftbehandlingsprotokoller anvender for tiden radiosensibilisatorer i forbindelse med bestråling med røntgenstråler. Eksempler på røntgenstråle-aktiverte radiosensibilisatorer inkluderer, men er ikke begrenset til, de følgende: metronidazol, misonidazol, desmetylmisonidazol, pimonidazol, etanidazol, nimorazol, mitomycin C, RSU 1069, SR 4233, E09,
RB 6145, nikotinamid, 5-bromdeoksyuridin (BUdR), 5- joddeoksyuridin (IUdR), bromdeoksycytidine, fluordeoksyuridin (FudR), hydroksyurea, cisplatin, og terapeutisk effektive analoger og derivater av de samme.
Fotodynamisk terapi (PDT) av kreftformer, anvender synlig lys som bestrålingsaktivator av det sensibiliserende middel. Eksempler på fotodynamiske radiosensibilisatorer inkluderer de følgende, men er ikke begrenset til: hematoporfyrin-derivater, Fotofrin, benzoporfyrin-derivater, tinn etioporfyrin, feoborbide-a, bakterioklorofyll-a, naftalocyaniner, ftalocyaniner, sink ftalocyanin, og terapeutisk effektive analoger og derivater av de samme.
Radiosensibilisatorer kan bli administrert i forbindelse med en terapeutisk effektiv mengde av en eller flere andre forbindelser, inkludert men ikke begrenset til: forbindelser som promoterer inkorporeringen av radiosensibilisatorer i målcellene; forbindelser som kontrollerer strømmen av terapeutika, næringsstoffer, og/eller oksygen til målcellene; kjemoterapeutiske midler som virker på tumoren med eller uten ytterligere bestråling; eller andre terapeutisk effektive forbindelser for å behandle kreft eller andre sykdommer.
Kjemosensibilisatorer kan bli administrert i forbindelse med en terapeutisk effektiv mengde av en eller flere andre forbindelser, inkludert men ikke begrenset til: forbindelser som promoterer inkorporeringen av kjemosensibilisatorer til målcellene; forbindelser som kontrollerer strømmen av terapeutika, næringsstoffer, og/eller oksygen til målcellene; kjemoterapeutiske midler som virker på tumoren eller andre terapeutisk effektive forbindelser for å behandle kreft eller andre sykdommer. Kalsium-antagonister, for eksempel verapamil, er funnet nyttige i kombinasjon med antineoplastiske midler for å etablere kjemosensibilitet i tumorceller resistente ovenfor aksepterte kjemoterapeutiske midler og for å forsterke effektiviteten til slike forbindelser i legemiddel-sensitive kreftformer.
I lys av deres nyttige farmakologiske egenskaper, komponentene til kombinasjonene ifølge oppfinnelsen, dvs. det ene eller flere andre medisinske middel og forbindelsen ifølge den foreliggende oppfinnelsen kan bli formulert inn i forskjellige farmasøytiske former for administrasjonsformål. Komponentene kan bli formulert hver for seg i individuelle farmasøytiske sammensetninger eller i en enhetlig farmasøytisk sammensetning inneholdende alle komponenter.
Den foreliggende oppfinnelsen angår derfor også en farmasøytisk sammensetning omfattende det ene eller flere andre medisinske middel og forbindelsen ifølge den foreliggende oppfinnelsen sammen med en farmasøytisk bærer.
Den foreliggende oppfinnelsen angår videre anvendelsen av en kombinasjon ifølge oppfinnelsen i fremstillingen av en farmasøytisk sammensetning for å inhibere veksten av tumorceller.
Den foreliggende oppfinnelsen angår videre et produkt inneholdende, som første aktive ingrediens, en forbindelse ifølge oppfinnelsen, og som ytterligere aktiv ingrediens, en eller flere antikreftmidler, som en kombinert fremstilling for samtidig, separat eller sekvensiell anvendelse i behandlingen av pasienter som lider av kreft.
De ene eller flere andre medisinske midler og forbindelsen ifølge den foreliggende oppfinnelsen kan bli administrert samtidig (f.eks. i separate eller enhetlige sammensetninger) eller sekvensielt i hvilken som helst rekkefølge. I det siste tilfellet, de to eller flere forbindelsene vil bli administrert innen en tidsperiode og i en mengde og måte som er tilstrekkelig for å sørge for at en fordelaktig eller synergistisk effekt blir oppnådd. Det vil forstås at den foretrukne fremgangsmåten og administrasjonsrekkefølgen og de respektive dosemengder og regimer for hver komponent av kombinasjonen vil avhenge av det spesifikke andre medisinske middelet, og forbindelse ifølge den foreliggende oppfinnelsen, som blir administrert, deres administrasjonsform, den spesifikke tumoren som blir behandlet og den spesifikke verten som blir behandlet. Den optimale fremgangsmåten og administrasjonsrekkefølgen og dosemengdene og regimet kan lett bli bestemt av fagmannen ved å bruke vanlige fremgangsmåter og i lys av informasjonen lagt frem heri.
Vektforholdet mellom forbindelsen ifølge den foreliggende oppfinnelsen og det ene eller flere andre antikreftmiddel(midler), når gitt som en kombinasjon, kan bli bestemt av fagmannen. Nevnte vektforhold, den eksakte dosen og administrasjonsfrekvens avhenger av den spesifikke forbindelsen ifølge oppfinnelsen og de andre antikreftmiddel(midler) som blir anvendt, den spesifikke tilstanden som blir behandlet, alvorlighetsgraden av tilstanden som blir behandlet, alderen, vekt, kjønn, diett, administrasjonstidspunkt og generell fysisk tilstand til den spesifikke pasienten, administrasjonsformen, såvel som andre medikamenter som individet kan ta, noe som er velkjent for fagmannen. Videre er det åpenbart at den effektive daglige mengde kan bli senket eller økt avhengig av responsen til det behandlede subjekt og/eller avhengig av evalueringen til legen som foreskriver forbindelsene ifølge den foreliggende oppfinnelsen. Et spesifikt vektforhold for den foreliggende forbindelsen med formel (I) og et annet antikreft-middel kan variere fra 1/10 til 10/1, mer spesielt fra 1/5 til 5/1, enda mer spesielt fra 1/3 til 3/1.
Platina-koordineringsforbindelsen er fordelaktig administrert i en dose på 1 til 500mg per kvadratmeter (mg/m<2>) med kroppsoverflateareal, for eksempel 50 til 400 mg/m<2>, spesielt for cisplatin i en dose på omtrent 75 mg/m<2>og for karboplatin i omtrent 300mg/m<2>per behandlingsomgang.
Taxan-forbindelsen er fordelaktig administrert i en dose på 50 til 400 mg per kvadratmeter (mg/m<2>) med kroppsoverflateareal, for eksempel 75 til 250 mg/m<2>, spesielt for paclitaxel i en dose på omtrent 175 til 250 mg/m<2>og for docetaxel i omtrent 75 til 150 mg/m<2>per behandlingsomgang.
Camptothecin-forbindelsen er fordelaktig administrert i en dose på 01 til
400 mg per kvadratmeter (mg/m<2>) med kroppsoverflateareal, for eksempel 1 til 300 mg/m<2>, spesielt for irinotecan i en dose på omtrent 100 til 350 mg/m<2>og for topotecan i omtrent 1 til 2 mg/m<2>per behandlingsomgang.
Anti-tumor podophyllotoksin-derivatet er fordelaktig administrert i en dose på 30 til 300 mg per kvadratmeter (mg/m<2>) med kroppsoverflateareal, for eksempel 50 til 250mg/m<2>, spesielt for etoposid i en dose på omtrent 35 til 100 mg/m<2>og for teniposid i omtrent 50 til 250 mg/m<2>per behandlingsomgang.
Anti-tumor vincaalkaloidet er fordelaktig administrert i en dose på 2 til
30 mg per kvadratmeter (mg/m<2>) med kroppsoverflateareal, spesielt for vinblastin i en dose på omtrent 3 til 12 mg/m<2>, for vincristin i en dose på omtrent 1 til 2 mg/m<2>, og for vinorelbin i en dose på omtrent 10 til 30 mg/m<2>per behandlingsomgang.
Anti-tumor nukleosid-derivatet er fordelaktig administrert i en dose på 200 til 2500 mg per kvadratmeter (mg/m<2>) med kroppsoverflateareal, for eksempel 700 til 1500 mg/m<2>, spesielt for 5-FU i en dose på 200 til 500mg/m<2>, for gemcitabin i en dose på omtrent 800 til 1200 mg/m<2>og for capecitabin i omtrent 1000 til 2500 mg/m<2>per behandlingsomgang.
De alkylerende midlene, sånn som nitrogensenneper eller nitrosourea er fordelaktig administrert i en dose på 100 til 500 mg per kvadratmeter (mg/m<2>) med kroppsoverflateareal, for eksempel 120 til 200 mg/m<2>, spesielt for syklofosfamid i en dose på omtrent 100 til 500 mg/m<2>, for kloroambucil i en dose på omtrent 0.1 til 0.2 mg/kg, for carmustin i en dose på omtrent 150 til 200 mg/m<2>, og for lomustin i en dose på omtrent 100 til 150 mg/m<2>per behandlingsomgang.
Anti-tumor antrasyklin-derivatet er fordelaktig administrert i en dose på 10 til 75 mg per kvadratmeter (mg/m<2>) med kroppsoverflateareal, for eksempel 15 til 60 mg/m<2>, spesielt for doksorubicin i en dose på omtrent 40 til 75 mg/m<2>, for daunorubicin i en dose på omtrent 25 til 45mg/m<2>, og for idarubicin i en dose på omtrent 10 til 15 mg/m<2>per behandlingsomgang.
Anti-østrogenmiddelet er fordelaktig administrert i en dose på omtrent 1 til 100 mg daglig avhengig av det spesifikke middelet og betingelsen som blir behandlet. Tamoksifen er fordelaktig administrert oralt i en dose på 5 til 50 mg, fortrinnsvis 10 til 20 mg to ganger om dagen, under opprettholdelse av terapien i tilstrekkelig tid for å oppnå og opprettholde en terapeutisk effekt. Toremifen er fordelaktig administrert oralt i en dose på omtrent 60mg en gang om dagen, under opprettholdelse av terapien i tilstrekkelig tid for å oppnå og opprettholde en terapeutisk effekt. Anastrozol er fordelaktig administrert oralt i en dose på omtrent lmg en gang om dagen. Droloksifen er fordelaktig administrert oralt i en dose på omtrent 20-100mg en gang om dagen. Raloksifen er fordelaktig administrert oralt i en dose på omtrent 60mg en gang om dagen. Exemestan er fordelaktig administrert oralt i en dose på omtrent 25mg en gang om dagen.
Antistoffer er fordelaktig administrert i en dose på omtrent 1 til 5 mg per kvadratmeter (mg/m<2>) med kroppsoverflateareal, eller som kjent i teknikken, hvis forskjellig. Trastuzumab er fordelaktig administrert i en dose på 1 til 5 mg per kvadratmeter (mg/m<2>) med kroppsoverflateareal, spesielt 2 til 4 mg/m<2>per behandlingsomgang.
Disse dosene kan bli administrert for eksempel en gang, to ganger eller mer per behandlingsomgang, som kan bli gjentatt for eksempel hver 7, 14, 21 eller 28 dag.
Forbindelsene med formel (I), de farmasøytisk akseptable addisjonssaltene, spesielt farmasøytisk akseptable syre-addisjonssalter, og stereoisomere former derav kan ha verdifulle diagnostiske egenskaper ved at de kan bli anvendt for å detektere eller identifisere dannelsen av et kompleks mellom en merket forbindelse og andre molekyler, peptider, proteiner, enzymer eller reseptorer.
Fremgangsmåtene for å detektere eller identifisere kan anvende forbindelser som er merket med merkestoffer sånn som radioisotoper, enzymer, fluorescerende forbindelser, selvlysende forbindelser, osv. Eksempler på radioisotopene inkluderer125I,1<31>1,<3>H og<14>C. Enzymer er vanligvis gjort detekterbare ved konjugering med et passende substrat som, i sin tur katalyserer en detekterbar reaksjon. Eksempler derav inkluderer, for eksempel, beta-galaktosidase, beta-glukosidase, basisk fosfatase, peroksidase og malat-dehydrogenase, fortrinnsvis pepperrot-peroksidase. De selvlysende forbindelsene inkluderer, for eksempel, luminol, luminol-derivater, luciferin, aequorin og luciferase.
Biologiske prøver kan bli definert som kroppsvev eller kroppsvæsker. Eksempler på kroppsvæsker er cerebrospinal væske, blod, plasma, serum, urin, sputum, spytt og lignende.
De følgende eksempler illustrerer den foreliggende oppfinnelsen.
Eksperimentell del
Heri etter er "DMF" definert som /V,/V-dimetylformamid, "DCM" er definert som diklormetan, "DIPE" er definert som diisopropyleter, 'DMSO' er definert som dimetylsulfoksid, "EtOAc" er definert som etylacetat, "EtOH" er definert som etanol, "MeOH" er definert som metanol og "THF" er definert som tetra hyd rof uran.
A . Fremstilling av intermediat - forbindelsene
Eksempel Al
a.l.FremstjNjnS.ayJnterm^
Manganoksid (33.31g, 13Ekv, 0.3832 mol) ble tilsatt porsjonsvis til en løsning av 4-klor-6,7-dihydro- 5H-Syklopenta[b]pyridin-7-ol (intermediat 3) [CAS 126053-15-4] (5g, lEkv, 0.029 mol) i DCM (50ml). Blandingen ble rørt ved romtemperatur i 24 timer og deretter filtrert over celite. Løsemiddelet ble fordampet, noe som ga et utbytte på 3.25g (66%) av intermediat 1. b).JxemstiJJj_ng.ay.j.nte
Metylmagnesiumklorid (1.47ml, 3.2Ekv, 0.0.004 mol) ble tilsatt dråpevis til en
løsning av intermediat 1 (0.220g, lEkv, 0.0013 mol) i TH F (4ml) ved -5 til 0 °C under N2strøm. Reaksjonen ble rørt ved romtemperatur i 1.5 timer.
Ved 0-10 °C ble ammoniumklorid (10% i vann) og EtOAc tilsatt. Blandingen ble ekstrahert tre ganger med EtOAc og deretter ble den organiske fasen separert, tørket over MgS04, filtrert og løsemiddelet ble fordampet. Residuet (0.215g) ble renset ved kolonnekromatografi over silikagel (Eluent: sykloheksan/EtOAc 50/50). De rene fraksjonene ble samlet og løsemiddelet ble fordampet, noe som ga et utbytte på 0.120g (50%) av intermediat 2.
Eksempel A2
aJ..Fj:ejn_stiJljn^^
Natriumtetrahydroborate (1.92 g, 50.67 mmol) ble tilsatt porsjonsvis ved 5°C til en løsning av intermediat 1 (7.72 g, 46.06 mmol) i MeOH (80 ml). Reaksjonsblandingen ble rørt ved romtemperatur i en natt og deretter helt opp i vann. Blandingen ble ekstrahert tre ganger med EtOAc. Den organiske fasen ble vasket med vann og NaCI-løsning, separert, tørket over MgS04, filtrert og løsemiddelet ble fordampet, noe som ga et utbytte på 6.38 g (81.7%) av intermediat 3 (50/50 blanding RS). Dette produktet ble anvendt uten videre rensing i det neste trinnet.
i>l.FremstjJJing.ay..i.nt
Ved 0 °C og under N2-atmosfære, ble natriumhydrid (1.06 g, 44.22 mmol) tilsatt porsjonsvis til en løsning av intermediat 3 (3.00 g, 17.70 mmol) i THF (vannfri, 30 ml). Reaksjonen ble rørt i 15 minutter ved 0 °C. Deretter ved 0 °C, jodmetan (1.65 ml, 26.53 mmol) ble tilsatt dråpevis til blandingen. Reaksjonen ble rørt ved romtemperatur i en natt. Blandingen ble avkjølt til romtemperatur og kaldt vann ble tilsatt dråpevis. Blandingen ble rørt i 1 time og ble deretter ekstrahert med EtOAc tre ganger. Den organiske fasen ble separert, tørket over MgS04, filtrert og løsemiddelet ble fordampet, noe som ga et utbytte på 3.10 g (95.4%) av intermediat 4.
Dette produktet ble anvendt uten videre rensing i det neste trinnet.
Eksempel A3
aJ..Fj:ejn_stiJlj^
l/Y-Indol-7-karboksylsyre metylester (0.091 mol), Eschenmoser's salt (0.1 mol) i eddiksyre (300 ml) ble varmet ved 65 °C i 2 timer. Det utfelte stoffet ble filtrert fra, oppløst i DCM og kaliumkarbonat 10%. Kaliumkarbonat (fast) ble tilsatt og blandingen ble rørt ved romtemperatur i 1 time og deretter ekstrahert. Den organiske fasen ble separert, tørket over MgS04, filtrert og løsemiddelet ble fordampet, noe som ga et utbytte på 10g av intermedived 5. bJL.FrømstjJJjng.a.v.hrt
Intermedived 5 (0.043 mol), jodmetan (0.047 mol) i EtOH (300ml) ble rørt ved romtemperatur over natten. Det utfelte stoffet ble filtrert fra og tørket, noe som ga et utbytte på 8.3g av intermediat 6.
c).F.re.msti!!ing.ay.jnterrn^
Intermediat 6 (0.023 mol), natriumcyanid (0.03 mol) i DMF (100 ml) ble varmet ved 110 °C i 2 timer. Reaksjonsblandingen ble helt opp i isvann, rørt i 1 time. Det utfelte stoffet ble filtrert fra og tatt opp i DCM. Løsningen ble ekstrahert, den organiske fasen ble separert, tørket over MgS04, filtrert og fordampet, noe som ga et utbytte på 5.lg av intermediat 7. dl.FremstjJJjng.ay..i.nte
Metylmagnesiumklorid (0.058 mol) ble tilsatt dråpevis til en løsning av intermediat 7 (0.018 mol) i TH F (50ml) ved 5°C under N2-strøm. Reaksjonsblandingen ble rørt ved 5°C i 1 time. Ammoniumklorid 10% ble tilsatt dråpevis ved 5°C. Reaksjonsblandingen ble ekstrahert med EtOAc. Den organiske fasen ble separert, tørket over MgS04, filtrert og fordampet, noe som ga et utbytte på 4g av intermediat 8.
e)..Fxe„mstjJljng_ayJnte^
Intermediat 8 (0.019 mol), Raney-nikkel (4g) i MeOH/NH3(50 ml) ble hydrogenen ved romtemperatur under 3 bar i 2 timer. Reaksjonsblandingen ble filtrert over celite, vasket med DCM og filtratet ble fordampet, noe som ga et utbytte på 3.5g av intermediat 9.
fl.F!£JXLStHJjng.^
En blanding av intermediat 9 (0.016 mol), 2-fluor-5-nitrotoluen (0.018 mol), mononatrium karbonatanion (0.019 mol) i DMSO (100 ml) ble varmet ved 60 °C over natten. Blandingen ble avkjølt til romtemperatur. Isvann ble tilsatt, DCM ble tilsatt. Reaksjonsblandingen ble ekstrahert, den organiske fasen ble separert, tørket over MgS04, filtrert og konsentrert. Residuet ble renset ved kolonnekromatografi over silikagel (eluent: sykloheksan/EtOAc 60/40). De rene fraksjonene ble samlet og løsemiddelet ble fordampet, noe som ga et utbytte på 2.8g av intermediat 10.
glJjemstjJJing.ayJnte^
Intermediat 10 (0.0079 mol), vanadiumoksid (0.05 g), tiofen (4%) løsning i DIPE (1 ml), Pt/C 5% (1.3g) i TH F (50 ml) ble hydrogenen ved atmosfærisk trykk i 1 natt ved romtemperatur. Reaksjonen ble filtrert og løsemiddelet ble fordampet, noe som ga intermediat 11. Dette produktet ble anvendt uten videre rensing i det neste trinnet.
Etterfølgende intermediater er fremstilt ifølge fremgangsmåte A3
Eksempel A4
Intermediat 7 ble også alternativt fremstilt som følger
a.l.FremstjJJjng.ayJnter^
l-(trifenylfosforanyliden)- 2-propanon (34.4 mmol) ble tilsatt porsjonsvis ved romtemperatur til en løsning av lW-Indol-7-karboksaldehyd (34.44mmol) i metyl-benzen (60ml). Reaksjonsblandingen ble varmet ved 100 °C i 3 timer og deretter avkjølt til romtemperatur og fordampet til tørrhet. Residuet (17.4g) ble renset ved HPLC over silika: 20-45um (450g). (eluent 99.5/0.5 DCM/MeOH). De rene fraksjonene ble samlet og løsemiddelet ble fordampet, noe som ga et utbytte på 4.3g av intermediat 12. bl^emstijlin^^
Intermediat 12 (3.4mmol) og Eschenmoser's salt (3.8mmol) i eddiksyre (lOml) ble varmet ved 65 °C i 2 timer. Det utfelte stoffet ble filtrert fra, oppløst i DCM og kaliumkarbonat 10%. Kaliumkarbonat (fast) ble tilsatt og blandingen ble rørt ved romtemperatur i 1 time. Reaksjonsblandingen ble ekstrahert, den organiske fasen ble separert, tørket over MgS04, filtrert og løsemiddelet ble fordampet, noe som ga et utbytte på 0.7g av intermediat 13.
c).F.re.mstj!!ing.ay.jnterm
Intermediat 13 (0.13mol), jodmetan (0.14mol) i EtOH (300ml) ble rørt ved romtemperatur i 2 dager. Det utfelte stoffet ble filtrert fra og tørket, noe som ga et utbytte på 47g av intermediat 14. dlJ_remstjJJing_ay__mt 15
Intermediat 14 (136.5mmol), natriumcyanid (177.5mmol) i DMF (400ml) ble rørt ved romtemperatur i 2 timer. Vann ble tilsatt og reaksjonsblandingen ble ekstrahert med EtOAc. Den organiske fasen ble separert, tørket over MgS04, filtrert og fordampet. Residuet ble renset ved høy-ytelses væskekromatografi (Irregular SiOH 20-45um lOOOg MATREX). Mobilfase: sykloheksan 70 %/EtOAc 30%). De rene fraksjonene ble samlet og løsemiddelet ble fordampet, noe som ga et utbytte på 11.8g av intermediat 15.
Sl.FremstjJJjng.ayJnte
Metylmagnesiumklorid (0.07 mol) ble tilsatt dråpevis til en løsning av intermediat 15 (0.022 mol) i THF (50 ml). NH4CI 10% og EOAc ble tilsatt.Reaksjonsblandingen ble ekstrahert, den organiske fasen ble separert, tørket over MgS04, filtrert og løsemiddelet ble fordampet. Residuet (2.9g) ble renset ved høy-ytelses væskekromatografi (Irregular SiOH 20-45um 450g MATREX). Mobilfase: sykloheksan 60%/EtOAc 40%). De rene fraksjonene ble samlet og løsemiddelet ble fordampet, noe som ga et utbytte på 2g av intermediat 16.
Q.FjemstNJjng.ay.jnterm^
Dess-Martin perjodinan (24.9ml) ble tilsatt dråpevis ved romtemperatur til en løsning av intermediat 16 (lOmmol) i DCM (20ml). Reaksjonsblandingen ble rørt ved romtemperatur i 1 time deretter helt opp i isvann, filtrert over celite og filtratet ble ekstrahert med DCM. Den organiske fasen ble separert, tørket over MgS04, filtrert og løsemiddelet ble konsentrert. Residuet (2.8g) ble renset ved kolonnekromatografi over silikagel (eluent sykloheksan/EtOAc 60/40). De rene fraksjonene ble samlet og løsemiddelet ble fordampet, noe som ga et utbytte på 0.8g av intermediat 7.
Eksempel A5
Intermediat 15 ble også alternativt fremstilt som følger.
aJ..Fj:ejn_stiJljng^
Litiumtetrahydroaluminat (0.018mol, 0.69g) ble tilsatt porsjonsvis til en løsning av 3-(cyanometyl)- lW-Indol-7-karboksylsyre metylester (0.012mol, 2.6g) i THF
(50ml) ved 5°C under N2-strøm. Reaksjonsblandingen ble rørt ved romtemperatur i 30 minutter. Vann ble tilsatt dråpevis ved 5°C og reaksjonsblandingen ble filtrert over celite, vasket med EtOAc og ekstrahert. Den organiske fasen ble separert, tørket over MgS04, filtrert og konsentrert, noe som ga et utbytte på 2.4g av intermediat 17.
i>l.FremstjJJing.ay..i.^
Dess-Martin perjodinan (0.016 mol) ble tilsatt dråpevis ved 5°C til en løsning av intermediat 17 (0.0081 mol) i DCM (15ml). Reaksjonsblandingen ble rørt ved romtemperatur i 2 timer. Reaksjonsblandingen ble filtrert over celite, filtratet ble fordampet. Residuet ble renset over silikagel ved kolonnekromatografi (eluent sykloheksan/EtOAc 70/30). De rene fraksjonene ble samlet og løsemiddelet ble fordampet, noe som ga et utbytte på 0.5g av intermediat 15.
Eksempel A6
F„remstjJMng..av
intermedjater.18,. 19_og
20
En blanding av 4-klor-6,7-dihydro-5H-syklopenta[b]pyridin-7-ol (5 g, 0.029 mol) og Lipase Candida Antartica B (2.5 g) i eddiksyre etenylester (50 ml) ble rørt ved romtemperatur i 4 timer. Reaksjonsblandingen ble filtrert over Celite. Celiten ble vasket med DCM. Filtratløsemiddelet ble fordampet. Residuet (6.3 g) ble renset ved kolonnekromatografi over silikagel (eluent: DCM/MeOH fra 100/0 till 98/2; 15-40 um). To forskjellige produktfraksjoner ble samlet og løsemiddelet til hver produktfraksjon ble fordampet, noe som ga et utbytte på 2.1 g med intermediat 18 (42 %; S-enantiomer), og 3.6 g med intermediat 19 (58 %; R-enantiomer). Når ønsket intermediat 19 kan bli konvertert til R-enantiomere av intermediat 18 ved reaksjon i MeOH/NH3, noe som ga intermediat 20.
Intermediater 18 og 20 ble også alternativt fremstilt som følger.
Natriumtetrahydroborat (1.37 g, 36.10 mmol) ble tilsatt porsjonsvis ved 5°C til en løsning av intermediat 1 (5.50 g, 32.82 mmol) i MeOH (50 ml). Reaksjonsblandingen ble rørt ved romtemperatur i en natt og deretter helt opp i vann og blandingen ble ekstrahert tre ganger med EtOAc. Den organiske fasen ble vasket med vann og NaCI-løsning i vann, separert, tørket over MgS04, filtrert og løsemiddelet ble fordampet. Residuet (4.42 g) ble renset ved kiral Superkritisk fluidkromatografi på CHIRALPAK AD-H 5um 250x20mm. Mobilfase: 85% C02, 15% MeOH.
De rene fraksjonene ble samlet og løsemiddelet ble fordampet, noe som ga et utbytte på 1.625 g (29.2%) av forbindelse 18 (S-enantiomer) (DMF, 20 °C, konsentrasjon 0.33w/v%, 589 nm : -77.58°) og 1.620 g (29.1%) av forbindelse 20 (R-enantiomer) (DMF, 20 °C, konsentrasjon 0.33w/v%, 589 nm : +76.74°).
Eksempel A7
F.remstiHing.ay.jntermedjat
Oksalylklorid (0.0079 mol) ble tilsatt dråpevis til 7-[2-[[(l,l-dimetyletyl)dimetylsilyl]oksy]etyl]-lW-indol (0.0047 mol) i dietyleter (20 ml) ved 5°C. Reaksjonsblandingen ble rørt ved 5°C i 2 timer. NH4OH (konsentrert, 20 ml) ble tilsatt dråpevis til løsningen ved 5°C. Reaksjonsblandingen ble rørt ved romtemperatur over natten. Vann og EtOAc ble tilsatt. Den organiske fasen ble separert, tørket over MgS04, filtrert og konsentrert, noe som ga et utbytte på 1.8g av intermediat 21.
FremstjHing.ayJnl^
Litiumtetrahydroaluminat (0.021 mol) ble tilsatt porsjonsvis til en løsning av intermediat 21 (0.0052 mol) i THF (50ml) ved 5°C.
Blandingen ble rørt ved refluks over natten deretter nedkjølt ved 5°C over isbad.
Overskudd av litiumtetrahydroaluminat ble hydrolysert forsiktig med tilsetning av vann dråpevis. Blandingen ble filtrert over celite, vasket med DCM og ekstrahert.
Den organiske fasen ble separert, tørket over MgS04, filtrert og konsentrert, noe som ga et utbytte på 0.6g av intermediat 22.
Eksempel A8
aJ.FremstiJJing.a.y.interm
Oksalylklorid (2.9mmol) ble tilsatt dråpevis ved 5°C til en løsning av 4-(lH-indol-7-yl)- 3-buten-2-en (2.7mmol) i dietyleter (lOml). Kuldebadet ble fjernet og reaksjonen ble tillatt å varme opp til romtemperatur (1.5 time). Det utfelte stoffet ble filtrert fra og tørket, noe som ga et utbytte på 0.49g av intermediat 23.
bJ.FremstiJM.ng ayJntemedjat 24
Ammoniumhydroksid (lOml) ble tilsatt dråpevis til en løsning av intermediat 23 (0.725mmol) i dietyleter (lOml) ved 5°C. Reaksjonsblandingen ble rørt ved romtemperatur over natten. Det utfelte stoffet ble filtrert fra og tørket, noe som ga et utbytte på 0.1 lg av intermediat 24.
cI.F^/IistHJjng.ay.jnte
Litiumtetrahydroaluminat (39.5mmol) ble tilsatt porsjonsvis til en løsning av intermediat 24 (7.9mmol) i THF (20ml) ved 5°C. Blandingen ble rørt ved 80 °C i 2 timer deretter nedkjølt ved 5°C over isbad. Overskudd av litiumtetrahydroaluminat ble hydrolysen forsiktig med dråpevis tilsetning av vann. Blandingen ble filtrert over celite, vasket med DCM og ekstrahert. Den organiske fasen ble separert, tørket over MgS04, filtrert og konsentrert, noe som ga et utbytte på lg av intermediat 25.
dl Fremstig
En blanding av intermediat 25 (4.3mmol), 2-fluor-5-nitrotoluen (4.7 mmol), mononatriumkarbonatanion (5.1mmol) i DMSO (lOml) ble varmet ved 60 °C over natten. Blandingen ble avkjølt til romtemperatur. Isvann ble tilsatt, DCM ble tilsatt. Reaksjonsblandingen ble ekstrahert, den organiske fasen ble separert, tørket over MgS04, filtrert og fordampet. Residuet ble renset ved kolonnekromatografi (eluent : DCM/MeOH 97/3). De rene fraksjonene ble samlet og løsemiddelet ble fordampet. Residuet ble renset ved høy-ytelses væskekromatografi (Irregular SiOH 15-40um 300g MERCK). Mobilfase (NH4OH 0.1%-diklormetan 99%-MeOH 1%). De rene fraksjonene ble samlet og løsemiddelet ble fordampet, noe som ga et utbytte på 200mg med intermediat 26.
eJ.Fre.mstjJJIng a.v.intermedjat .2.7
En blanding av intermediat 26 (0.35 mmol), Raney-nikkel (200 mg) i MeOH (5 ml) ble hydrogenert under atmosfærisk trykk ved romtemperatur. Residuet ble filtrert over celite, vasket med DCM og residuet ble fordampet, noe som ga et utbytte på 0.14g av intermediat 27.
Eksempel A9
al Fremstil ^
Tert-butyldimetylsilylklorid (195mg, 0.91mmol) ble tilsatt til en løsning av intermediat 16 (162mg, 0.81mmol), imidazol (143mg, 2.1mmol) i THF (5ml) ved romtemperatur. Reaksjonsblandingen ble rørt ved romtemperatur over natten. Det utfelte stoffet ble filtrert fra og vasket med DCM. Filtratet ble fordampet. Residuet (365mg) ble renset ved flash-kromatografi over silikagel (15-40um, 30g, DCM/MeOH: 100/0 to 99/1). De rene fraksjonene ble samlet og fordampet til tørrhet, noe som ga et utbytte på 190mg med intermediat 28.
bl EremstiJJj n^
Intermediat 28 (190mg, 0.6mmol), Raney-nikkel (0.7g) i NH3i MeOH 7N (10 ml) ble rørt ved romtemperatur under 3 bar med H2i 4 timer. Reaksjonen ble filtrert over celite og celiten ble vasket med DCM/MeOH (90/10) tre ganger. Løsemiddelet ble fordampet for å gi 147mg med intermediat 29.
.clFremstjJJjng_aYj_n^^
En blanding av intermediat 29 (147mg,0.46mmol), l-fluor-2-metyl-4-nitro-benzen (78mg, 0.51mmol), natriumbikarbonat ( 85mg, lmmol) i DMSO (2 ml) ble varmet
ved 65 °C i en natt. Blandingen ble helt opp i is og rørt 10 minutter, DCM ble tilsatt og blandingen ble ekstrahert med DCM to ganger. Den organiske fasen ble vasket med vann deretter tørket over MgS04, filtrert og løsemiddelet ble fordampet. Residuet ble renset ved flash-kromatografi over silikagel (15-40um, 30g, sykloheksan/EtOAc 85/15). De rene fraksjonene ble samlet og fordampet til tørrhet, noe som ga et utbytte på 200mg med intermediat 30. dJ.EremstiJJjn^
Intermediat 30 (2.8g, 6.17mmol), di-tert-butyldikarbonat (8g, 37mmol), 4-dimetylaminopyridin (0.15g, 1.2mmol) og trietylamin (1.89ml, 13.6mmol) i THF (50ml) ble rørt i 24 timer ved 60 °C. Blandingen ble fordampet til tørrhet. Residuet (7.4g) ble renset ved høy-ytelses væskekromatografi på silikagel (Cartridge 15-40um, 90g). Mobilfase (sykloheksan 50%; diklormetan 50%). De rene fraksjonene ble samlet og løsemiddelet ble fordampet, noe som ga et utbytte på 3.3g av intermediat 31.
eJ.FremstjJ.Mng. ayjntermedja.t .3.2
En blanding av intermediat 31 (3.3g, 5mmol), Raney-nikkel (3g) i MeOH (lOOml) ble hydrogenert ved 2.5 bar i 2 timer. Residuet ble filtrert over celite, vasket med DCM og residuet ble fordampet, noe som ga et utbytte på 2.7g av intermediat 32.
O.f.rø.!TlstiiMng.ay.jnte.r„m
Intermediat 32 (2.6g, 4.2mmol), 4-klor-6,7-dihydro- 5H-syklopenta[b]pyridin-7-ol (0.78g, 4.6mmol), HCI 4M i dioksan (0.21ml, 0.8mmol) i acetonitril (28ml) og EtOH (7ml) ble varmet ved 65 °C i 72 timer. Etter avkjøling ned til romtemperatur ble vann og kaliumkarbonatpulver tilsatt og blandingen ble ekstrahert to ganger med EtOAc. Den organiske fasen ble vasket med vann, tørket over MgS04, filtrert og fordampet. Residuet ble renset ved høy-ytelses væskekromatografi (Irregular SiOH 20-45um 450g MATREX). Mobilfase (NH4OH 0.5%;diklormetan 95%; MeOH 5%) . De rene fraksjonene ble samlet og løsemiddelet ble fordampet, noe som ga et utbytte på 2.35g av intermediat 33.
gJ.FremstilMng ayJntermedja.t 34
Mangan (IV) oksid (4.3g) ble tilsatt porsjonsvis til intermediat 33 (2.2g, 2.9mmol) og tris(2-(2-metoksyetoksy)etyl)amin (47mg, 0.145mmol) i løsning ved romtemperatur i DCM (50ml). Blandingen ble rørt ved romtemperatur i 18 timer. Blandingen ble filtrert over celite. Celite ble vasket med DCM og løsemiddelet fordampet, noe som ga et utbytte på 1.84g av intermediat 34.
hJ.FremstHNng^
Intermediat 34 (1.2g, 1.6mmol) i trifluoreddiksyre (1.2ml, 15.9 mmol) og DCM (lOml) ble rørt ved romtemperatur i 2 dager. Kaliumkarbonat 10% ble tilsatt og blandingen ble ekstrahert to ganger med DCM. Den organiske fasen ble tørket over MgS04, filtrert og fordampet for å gi 0.8g av intermediat 35, anvendt uten videre rensing for det neste trinnet.
Eksempel A10
al Fremstil ^
Jodmetan (0.024 mol) ble tilsatt til en løsning av 3-[(dimetylamino)metyl]- 1H-indol-7-karboksylsyre metylester (0.022 mol) i EtOH (50ml). Blandingen ble rørt ved romtemperatur over natten, deretter konsentrert in vacuo til tørrhet, noe som ga et utbytte på 5.6g (68%) av intermediat 36.
bJ.FremstiJJAn^
En blanding av intermediat 36 (0.015 mol) og natriumcyanid (0.019 mol) i DMF (60ml) ble rørt ved 100 °C i 2 timer. Vann ble tilsatt. Det utfelte stoffet ble filtrert ifra. Filtratet ble fordampet, noe som ga et utbytte på 3.5g (100%) av intermediat 37.
cI.F^/IistHJjng.ay.jnte
En blanding av intermediat 37 (0.016 mol) og Raney-nikkel (3g) i MeOH/NH3(50ml) ble hydrogenen ved romtemperatur under 3 bar trykk, deretter filtrert over celite. Filtratet ble fordampet, noe som ga et utbytte på 3.2g (89%) av intermediat 38.
dJ.FremstiJJ.^
En blanding av intermediat 38 (0.0092 mol), l-fluor-4-nitro-benzen (0.01 mol) og diisopropyletylamin (0.023 mol) ble rørt ved 180 °C i 2 timer. Vann ble tilsatt. Blandingen ble ekstrahert med DCM. Den organiske fasen ble separert, tørket (MgS04), filtrert og løsemiddelet ble fordampet. Residuet (2.6g) ble renset ved kolonnekromatografi over kromasil (eluent: sykloheksan/EtOAc 60/40). De rene fraksjonene ble samlet og løsemiddelet ble fordampet, noe som ga et utbytte på 1.4g (45%) av intermediat 39.
eJ.FremstjJJing. a.y.intermedjat 4.0
Tert-butoksykarbonylanhydrid (0.015 mol) ble tilsatt ved romtemperatur til en blanding av intermediat 39 (0.05 mol) og 4-(dimetylamino)pyridin (få) i THF (50ml). Blandingen ble rørt ved romtemperatur over natten. Blandingen ble ekstrahert med EtOAc. Den organiske fasen ble vasket med vann, tørket (MgS04), filtrert og løsemiddelet ble fordampet. Residuet (4g) ble renset ved kolonnekromatografi over silikagel (eluent: sykloheksan/EtOAc 60/40). De rene fraksjonene ble samlet og løsemiddelet ble fordampet, noe som ga et utbytte på 3.3g (82%) av intermediat 40.
f). F.remstHMnq.^
En blanding av intermediat 40 (0.0061 mol) og Raney-nikkel (3.3g) i MeOH (50ml) ble hydrogenen ved romtemperatur under 3 bar trykk, deretter filtrert over celite. Celite ble vasket med DCM/MeOH (98/2). Filtratet ble fordampet. Residuet (2.8g) ble renset ved kolonnekromatografi over silikagel (eluent: sykloheksan/EtOAc 70/30). De rene fraksjonene ble samlet og løsemiddelet ble fordampet, noe som ga et utbytte på 1.3g (42%) av intermediat 41. gj. F rem.st HJj n_q _ax ^
En blanding av intermediat 41 (0.0018 mol), 4-klor-6,7-dihydro- 5H-syklopenta[b]pyridin-7-ol (0.33g) og HCI/isopropanol (5 dråper) i acetonitril (20ml) ble rørt ved 65 °C i 24 timer. Kaliumkarbonat 10% ble tilsatt. Blandingen ble ekstrahert med EtOAc. Den organiske fasen ble separert, tørket (MgS04), filtrert og løsemiddelet ble fordampet. Residuet (l.lg) ble renset ved kolonnekromatografi over silikagel (eluent: DCM/MeOH/NH4OH 95/5/0.1). De rene fraksjonene ble samlet og løsemiddelet ble fordampet, noe som ga et utbytte på 0.054g av intermediat 42.
.W. Fre.mstH lj n.g .ax
En blanding av intermediat 42 (0.0009 mol) og HCI 3N (0.0039 mol) i acetonitril (lOml) ble rørt ved 65 °C i 3 timer. Kaliumkarbonat 10% ble tilsatt. Blandingen ble ekstrahert med EtOAc. Den organiske fasen ble separert, tørket (MgS04), filtrert og løsemiddelet ble fordampet. Residuet (0.4g, 100%) ble krystallisert fra dietyleter/acetonitril. Det utfelte stoffet ble filtrert fra og tørket, noe som ga et utbytte på 0.3g av intermediat 43, smeltepunkt 164°C.
B . Fremstilling av sluttforbindelsene
Eksempel Bl
F„rejnstjJJjna^
Intermediat 11 (1.00 g, 3.092 mmol), intermediat 2 (0.437 g, 2.381 mmol), HCI (0.155 ml, 0.618 mmol) i acetonitril (10 ml) ble rørt i 5 timer ved 65 °C. Reaksjonen ble avkjølt til romtemperatur og deretter gjort basisk med kaliumkarbonat (10% i vann) og ekstrahert med DCM tre ganger. Den organiske fasen ble vasket med vann, tørket over MgS04, filtrert og løsemiddelet ble fordampet. Residuet (1.37 g) ble renset ved normal fase over silika 5um
150x30.0mm). Mobilfase (Gradient fra 0% NH4OH, 100% DCM, 0% MeOH til 0.8% NH4OH, 92% DCM, 8% MeOH) De rene fraksjonene ble samlet og løsemiddelet ble fordampet. Residuet (0.350 g) ble tatt opp i acetonitril i 1 uke ved romtemperatur. Dette produktet krystalliserte og ble filtrert og tørket under vakuum, noe som ga et utbytte på 300 mg (20.8%) av forbindelse 1, smeltepunkt 209 °C.
Eksempel B2
FremstjJJjng. av forMndeJser.2.og.
3
En løsning av intermediat 11 (0.0031 mol), /V,/V-diisopropyletylamin (0.0028 mol), 4-brompyridin hydroklorid (0.0034 mol) i acetonitril (20ml) ble varmet ved 65 °C i 6 timer. Kaliumkarbonat 10% og EtOAc ble tilsatt. Reaksjonsblandingen ble ekstrahert, den organiske fasen ble separert, tørket over MgS04, filtrert og konsentrert. Residuet (1.3g) ble renset ved kolonnekromatografi over silikagel (eluent 95/5/0.5 DCM/MeOH/NH4OH). To fraksjoner ble samlet og løsemiddelet ble fordampet for å gi 60mg med forbindelse 3 og 80 mg med F2. Residuet F2 (80 mg) ble renset ved superkritisk fluidkromatografi (AMINO kolonne 150x21.2mmm) eluent: MeOH/C0230/70) . De rene fraksjonene ble samlet og løsemiddelet ble fordampet, noe som ga et utbytte på 43mg med forbindelse 2.
Eksempel B3
FremstjMing. a.y fQrbjndeJ.se 4
Intermediat 35 (0.8g, 1.7mmol) og natriumhydroksid 3N (2.57ml, 2.57mmol) i EtOH (22ml) og THF (lOml) ble rørt ved romtemperatur i 30 minutter. NH4CI 10% og DCM ble tilsatt og blandingen ble filtrert over Celite. Den organiske fasen ble dekantert, tørket over MgS04, filtrert og fordampet. Residuet ble renset ved normal fase over sfærisk SiOH lOum 60g PharmPrep MERCK). Mobilfase (NH40H 0.1%, 95% DCM, 5% MeOH) . De rene fraksjonene ble samlet og løsemiddelet ble fordampet, noe som ga et utbytte på 250mg med forbindelse 4.
Eksempel B4
F„remstjMjng..av forbjndeJse..5
Natriumtetrahydroborat (0.69 mmol) ble tilsatt til en løsning av intermediat 49 (0.46 mmol) i MeOH (5ml) ved 5°C. Reaksjonsblandingen ble rørt ved romtemperatur over natten. Vann ble tilsatt, reaksjonsblandingen ble ekstrahert med EtOAc, den organiske fasen ble separert, tørket over MgS04, filtrert og fordampet. Residuet (0.14g) ble krystallisert i acetonitril, det utfelte stoffet ble filtrert fra og tørket, noe som ga et utbytte på O.lg av forbindelse 5.
Eksempel B5
F„remsti.l.l.ing. a.y fp„rbind.el.se .6
Litiumtetrahydroaluminat (0.0003 mol) ble tilsatt porsjonsvis ved 5°C til en løsning av intermediat 43 (0.0002 mol) i THF (4ml) under N2-strøm. Blandingen ble rørt ved romtemperatur i 2 timer. Vann ble tilsatt. Blandingen ble ekstrahert med EtOAc. Den organiske fasen ble separert, tørket (MgS04) filtrert og løsemiddelet ble fordampet. Residuet (0.18g) ble renset ved kolonnekromatografi over kromasil (eluent: DCM/MeOH/NH4OH 98/2/0.2 to 85/15/1; 3.5um). De rene fraksjonene ble samlet og løsemiddelet ble fordampet, noe som ga et utbytte på 0.066g (70 %) av forbindelse 6.
Eksempel B6
F„remstjMjna..av
fo rbj.nd eiser. 7. og..8
Intermediat 47 (1.00 g, 3.23 mmol), intermediat 4 (0.653 g, 3.55 mmol), HCI/dioksan (0.242 ml, 0.97 mmol) i acetonitril (15 ml) ble rørt i en natt ved 70 °C. Reaksjonsblandingen ble avkjølt til romtemperatur. Vann, deretter kaliumkarbonat (10% i vann), ble tilsatt. Blandingen ble ekstrahert tre ganger med DCM. Den organiske fasen ble separert, tørket over MgS04, filtrert og løsemiddelet ble fordampet. Residuet ble renset ved normal fase over silikagel (Cartridge 15-40um 30g). Mobilfase (96% DCM, 4% MeOH) De rene fraksjonene ble samlet og løsemiddelet ble fordampet, noe som ga et utbytte på 0.092 g (6.5%) av forbindelse 7 og 0.030 g med (2.0%) av forbindelse 8.
Eksempel B7
F„rejnstjJJjngL.av fQ.rbjnde.lse.9
Intermediat 27 (0.41mmol) og 4-klor-6,7-dihydro-5A/-syklopenta[b]pyridin-7-ol (0.46mmol) ble varmet ved 125°C i 2 timer. Residuet ble renset ved kolonnekromatografi over silikagel (eluent 90/10/0.1 DCM/MeOH/NH4OH). De rene fraksjonene ble samlet og løsemiddelet ble fordampet, noe som ga et utbytte på 58mg med forbindelse 9.
Eksempel B8
F„remstjMjng..av fo
Forb.nr.24:<*>S
Forb.nr.25:<*>R
<*>betyr relativ stereokjemi (absolutt stereokjemi ikke kjent). Så hvis forbindelse 24 er S-enantiomeren da er forbindelse 25 R-enantiomeren eller hvis forbindelse 24 er R-enantiomeren da er forbindelse 25 S-enantiomeren
Reaksjonen ble utført under N2-atmosfære.
En blanding av intermediat 47 (11.31 mmol), intermediat 4 (12.44 mmol), Pd(dba)2(1.13 mmol), BINAP (1.13 mmol) og tBuONa (22.62 mmol) i toluen (lOOml) ble rørt ved refluks over natten. Blandingen ble filtrert, vasket med MeOH og renset ved høy-ytelses væskekromatografi (kolonne Synergi 50<*>250mm, 10 um; eluent: CH3CN/H20 (0.1% trifluoreddiksyre) gradient på 15% CH3CN ved tid 0 min til 40% CH3CN ved tid 25 min). Den ønskede fraksjonen ble samlet og løsemiddelet ble fordampet in vacuo. Residuet ble ekstrahert med DCM, vasket med vandig NaHC03, tørket over Na2S04, filtrert og fordampet for å gi forbindelse 8 (3.8 g, 98% renhet, 65% utbytte), som ble separert ved Superkritisk Fluid Kromatografi Chiralcel OJ, 20um, 250 mm<*>20 mm; Superkritisk C02: isopropanol (0.05% dietylamin), 40:60 v/v, 70ml/min) for å gi to fraksjoner; 1000.79mg (19%) av forbindelse 24, smeltepunkt 110.5-111.6 °C.
(ee%=99%, [a]D<20>= + 5.034°, (bølgelengde=589, 20 °C i metanol, konsentrasjon 10.33 mg/ml).
og 939.19mg (18%) av forbindelse 25, smeltepunkt 111.4-113.3 °C.
(ee%=99%, [a]D<20>= -3.443°, (bølgelengde=589, 20 °C i MeOH, konsentrasjon 10.74 mg/ml).
Eksempel B9
F„remstjMjng..av forbjndejser
Forb.nr. 26:<*>S
Forb.nr. 27:<*>R
<*>betyr relativ stereokjemi (absolutt stereokjemi ikke kjent). Så hvis forbindelse 26 er S-enantiomeren da er forbindelse 27 R-enantiomeren, eller hvis forbindelse 26 er R-enantiomeren da er forbindelse 27 S-enantiomeren
Reaksjon ble utført under N2-atmosfære.
En blanding av intermediat 11 (9.25 mmol), intermediat 2 (9.25 mmol), tBuONa (18.5 mmol), Pd(dba)2(0.93 mmol) og BINAP (0.93 mmol) i toluen (40 ml) ble varmet til refluks og rørt i 3 timer. Den resulterende blandingen ble avkjølt til romtemperatur og filtrert. Filtratet ble fordampet in vacuo og residuet ble renset ved høy-ytelses væskekromatografi (kolonne Synergi 50<*>250mm, 10 pm; eluent: CH3CN/H20 (0.1% trifluoreddiksyre) gradient på 10% CH3CN ved tid 0 min til 40% CH3CN ved tid 25 min). De ønskede fraksjonene ble samlet og justert til pH>7. Løsemiddelet ble konsentrert og ekstrahert med etylacetat (3 ganger 100 ml) og ønskede organiske faser ble vasket med mettet NaCI(aq)-løsning, tørket over Na2S04, filtrert og løsemiddelet ble fordampet in vacuo for å få 2.5 g (57%) av forbindelse 1 som ble separert ved Superkritisk Fluid Kromatografi (AD 250mm<*>20 mm, 20um; Superkritisk C02: isopropanol (0.05% dietylamin) 40:60, v/v, 70ml/min) for å gi 2 fraksjoner.
Fraksjon 1 (lg) ble videre renset ved høy-ytelses væskekromatografi (kolonne Synergi 50<*>250mm, 10 um; eluent: CH3CN/H20 (0.1% trifluoreddiksyre) gradient på 10% CH3CN ved tid 0 min til 40% CH3CN ved tid 25 min) for å gi 0.88 g (20%) forbindelse nr. 26, smeltepunkt 122.3-124 °C, (ee=100%).
Fraksjon 2 (lg) ble videre renset ved høy-ytelses væskekromatografi (kolonne Synergi 50<*>250mm, 10 um; eluent: CH3CN/H20 (0.1% trifluoreddiksyre) gradient på 10% CH3CN ved tid 0 min til 40% CH3CN ved tid 25 min) for å gi 0.96 g (22%) av forbindelse 27, smeltepunkt 121.4-122.6 °C, ( ee=99%).
Tabell 1 lister opp forbindelsene som ble fremstilt ifølge en av eksemplene over.
Karakterisering av forbindelser
Smeltepunkter:
Verdier er enten toppverdier eller smelteintervaller, og ble oppnådd med eksperimentelle usikkerheter vanligvis forbundet med denne analytiske fremgangsmåten.
Kofler
For forbindelse 4 ble smeltepunktet oppnådd med en Kofler varmebenk, bestående av en oppvarmet plate med lineær temperaturgradient, en skyvepeker og en temperaturskala i grader Celsius.
WRS- 2A
For forbindelse 11, 24, 25, 26, 27, 28, 29, 30, 31, ble smeltepunktet bestemt med et WRS-2A smeltepunktsapparat som ble kjøpt fra Shanghai Precision and Scientific Instrument Co. Ltd. Smeltepunkt ble målt med en lineær oppvarmingshastighet på 0.2-5.0 °C/minutt. Den rapporterte verdien er et smelteintervall. Maksimaltemperaturen var 300 °C.
DSC
For forbindelse 1, ble smeltepunktet bestemt med DSC (differensiell skanning kalorimetri). Smeltepunktet ble målt med en temperaturgradient på 10 °C/minutt. Maksimaltemperaturen var 350 °C. Verdier er toppverdier.
LCMS
For LCMS-karakterisering av forbindelsene ifølge den foreliggende oppfinnelsen, ble de følgende prosedyrer anvendt.
Generell prosedyre A
HPLC-målingen ble utført ved å bruke et Alliance HT 2795 (Waters) system omfattende en kvaternær pumpe med degasser, en autosampler, en diode-array detektor (DAD) og en kolonne som spesifisert i de respektive fremgangsmåter under, kolonnen blir holdt ved en temperatur på 30°C. Strøm fra kolonnen ble splittet til et MS-spektrometer. MS-detektoren var konfigurert med en elektrospray-ioniseringskilde. Kapillærnålsspenningen var 3 kV og kildetemperaturen ble opprettholdt ved 100 °C på LCT (Time of Flight Zspray™ massespektrometeret fra Waters). Nitrogen ble anvendt som forstøvingsgass. Dataopptak ble utført med et Waters-Mikromass MassLynx-Openlynx datasystem.
Generell prosedyre B
LC-målingen ble utført ved å bruke et UPLC (Ultra-ytelse Væskekromatografi) Acquity (Waters) system omfattende en binær pumpe med degasser, en autosampler, en diode-array detektor (DAD) og en kolonne som spesifisert i de respektive fremgangsmåter under, kolonnen blir holdt ved en temperatur på 40°C. Strøm fra kolonnen ble brakt til en MS-detektor. MS-detektoren var konfigurert med enn electrospray-ioniseringskilde. Kapillærnålsspenningen var 3 kV og kildetemperaturen ble opprettholdt ved 130 °C på Quattro (trippel kvadrupol massespektrometer fra Waters). Nitrogen ble anvendt som forstøvingsgass. Dataopptak ble utført med et Waters-Mikromass MassLynx-Openlynx datasystem.
Generell prosedyre C
HPLC-målingen ble utført ved å bruke en Agilent 1100 modul, omfattende en pumpe, en diode-array detektor (DAD) (bølgelengde anvendt 220 nm), en kolonnevarmer og en kolonne som spesifisert i de respektive fremgangsmåtene under. Strøm fra kolonnen ble splittet til en Agilent MSD Series G1946C og G1956A. MS-detektor var konfigurert med API-ES (atmosfærisk trykk elektrosprayionisering). Massespektra ble ervervet ved å skanne fra 100 til 1000. Kapillærnålsspenningen var 2500 V for positiv ioniseringsmodus og 3000 V for negativ ioniseringsmodus. Fragmenteringsspenning var 50 V. Tørkegass-temperaturen ble opprettholdt ved 350 °C ved en strømning på 10 l/min.
Fremgangsmåte 1
I tillegg til den generelle prosedyren A: Omvendt-fase HPLC ble utført på en Xterra-MS C18 kolonne (5 pm, 4.6 x 150 mm) med en strømningshastighet på 1.0 ml/min. To mobilfaser (mobilfase A: 100 % 7 mM ammoniumacetat; mobilfase B: 100 % acetonitril; ble anvendt for å kjøre en gradientbetingelse fra 85 % A , 15 % B (hold i 3 minutter) til 20 % A, 80 % B i 5 minutter, hold ved 20 % A og 80 % B i 6 minutter og reekvilibrert med startbetingelser i 3 minutter. Et injeksjonsvolum på 20 (il ble anvendt. Konspenningen var 20 V for positiv ioniseringsmodus og 20 V for negativ ioniseringsmodus. Massespektra ble ervervet ved å skanne fra 100 til 900 i 0.8 sekunder ved å bruke en interskann-forsinkelse på 0.08 sekunder.
Fremgangsmåte 2
I tillegg til den generelle prosedyren B: Omvendt-fase UPLC ble utført på en Waters Acquity BEH (brokoblet etylsiloksan/silika hybrid) C18 kolonne (1.7 um, 2.1 x
100 mm) med en strømningshastighet på 0.35 ml/min. To mobilfaser (mobilfase A: 95 % 7 mM ammoniumacetat / 5 % acetonitril; mobilfase B: 100 % acetonitril) ble anvendt for å kjøre en gradientbetingelse fra 90 % A og 10 % B (hold i 0.5 minutter) til 8 % A og 92 % B i 3.5 minutter, hold i 2 min og tilbake til startbetingelsene i 0.5 min, hold i 1.5 minutter. Et injeksjonsvolum på 2 (il ble anvendt. Konspenningen var 20 V for positiv og negativ ioniseringsmodus. Massespektra ble ervervet ved å skanne fra 100 til 1000 i 0.2 sekunder ved å bruke en interskann-forsinkelse på 0.1 sekunder.
Fremgangsmåte 3
I tillegg til generell prosedyre C: Omvendt-fase HPLC ble utført på en YMC-Pack ODS-AQ, 50x2.0 mm 5jim kolonne med en strømningshastighet på 0.8 ml/min. To mobilfaser (mobilfase A: vann med 0.1 % TFA; mobilfase B: acetonitril med 0.05 % TFA) ble anvendt. Først, 90 % A og 10 % B ble hold i 0.8 minutter. Deretter ble en gradient brukt til 20 % A og 80 % B i løpet av 3.7 minutter og holdt i 3 minutter. Typisk ble injeksjonsvolumer på 2 ul anvendt. Ovnstemperatur var 50 °C. (MS polaritet: positiv)
Optisk rotasjon
Den optiske rotasjonen ble målt ved å bruke et polarimeter. [a]D<20>indikerer den optiske rotasjonen målt med lys ved bølgelengden til D-linjen til natrium (589 nm) ved en temperatur på 20 °C. Cellelengden er 1 dm. Bak den faktiske verdien er konsentrasjonen, og løsemiddelet til løsningen som ble anvendt for å måle den optiske rotasjonen, nevnt.
C. Farmakologisk eksempel:
Kapasiteten til de foreliggende forbindelsene for å bevare p53 i A2780 celler ble målt med det p53-enzymkoblede immunosorbent-assayet. p53-assayet er et "sandwich" enzym-immunoassay som anvender to polyklonale antistoffer. Et polyklonalt antistoff, spesifikt for p53-proteinet, har blitt immobilisert på overflaten av plastikkbrønnene. Eventuell p53 til stede i prøven som skal bli analysert vil binde til fangst-antistoffet. Det biotinylerte polyklonale detektor-antistoffet gjenkjenner også p53-protein, og vil binde til p53, som har blitt holdt tilbake av fangst-antistoffet. Detektor-antistoffet, er igjen, bundet av pepperrotperoksidase-konjugert streptavidin. Pepperrotperoksidasen katalyserer omdannelsen av det kromogene substratet o-fenylendiamin, intensitet av denne er proporsjonal med mengden av p53-protein bundet til platen. Det fargede reaksjonsproduktet blir kvantifisert ved å bruke et spektrofotometer. Kvantifisering blir oppnådd ved konstruksjonen av en standardkurve ved å bruke kjente konsentrasjoner med renset rekombinant HIS-merket p53-protein (se eksempel Cl.).
Cl. D53 ELISA
■Tm■■■■■■■■■■■■■■al■■■
A2780 celler (ATCC) ble dyrket i RPMI 1640 supplementert med 10% føtalt kalveserum (FCS), 2 mM L-glutamin og gentamycin ved 37°C i en fuktet inkubator med 5% C02.
A2780 celler ble sådd med 20.000 celler per brønn i en 96-brønns plate, dyrket i 24 timer og behandlet med forbindelse i 16 timer ved 37°C i en fuktet inkubator. Etter inkubering ble cellene vasket en gang med fosfat-bufret NaCI(aq)-løsning og 30 pl, per brønn, lav-salt RIPA-buffer (20 mM tris, pH7.0, 0.5 mM EDTA, 1% Nonidet P40, 0.5 % DOC, 0.05% SDS, ImM PMSF, 1 ug/ml aprotinin og 0.5 p/ml leupeptin) ble tilsatt. Plater ble plassert på is i 30 minutter for å fullføre lyseringen. p53-protein ble detektert i lysatene ved å bruke "sandwich"-ELISA'et, beskrevet under.
Høyt-bindende polystyren EIA/RIA 96-brønns plater (Costar 9018) ble belagt med fangst-antistoffet pAbl801 (Abcam ab28-100) ved en konsentrasjon på 1 pg/ml i beleggbuffer (0.1 M NaHC03pH8.2), 50 pl per brønn. Antistoffet ble latt feste seg over natten ved 4°C Belagte plater ble vasket en gang med fosfat-bufret NaCI(aq)-løsning (PBS) / 0.05% Tween 20 og 300 pl med blokkeringsbuffer (PBS, 1% bovint serum albuminer (BSA)) ble tilsatt, for en inkuberingsperiode på 2 timer ved romtemperatur. Fortynninger av renset rekombinant HIS-merket p53-protein, i området fra 3-200 ng/ml, ble lagd i blokkeringsbuffer og anvendt som standarder.
Plater ble vasket to ganger med PBS / 0.05%Tween 20 og blokkeringsbuffer eller standarder ble tilsatt ved 80 pl / brønn. Til standardene ble 20 pl med lyseringsbuffer tilsatt. Prøvene ble tilsatt til de andre brønnene ved 20 pl lysat/ brønn. Etter inkubering over natten ved 4°C, ble plater vasket to ganger med PBS / 0.05%Tween 20. Alikvoter på 100 pl sekundært polyklonalt antistoff p53(FL-393)
(Tebubio, sc-6243) ved en konsentrasjon på 1 pg/ml i blokkeringsbuffer ble tilsatt til hver brønn og latt feste seg i 2 timer ved romtemperatur. Plater ble vasket tre ganger med PBS / 0.05% Tween 20. Deteksjonsantistoff anti-kanin HRP (sc-2004, Tebubio) ved 0.04 pg/ml i PBS/ 1%BSA ble tilsatt og inkubert i 1 time ved romtemperatur. Plater ble vasket tre ganger med PBS / 0.05% Tween 20 og 100 pl med substratbuffer ble tilsatt (substratbuffer ble fremstilt kort tid før anvendelse ved å tilsette 1 tablett med 10 mg o-fenylendiamin (OPD) fra Sigma og 125 pl 3% H202til 25 ml OPD-buffer: 35 mM sitronsyre, 66 mM Na2HP04/pH5.6). Etter 5 til 10 minutter ble fargereaksjonen stoppet ved å tilsette 50 pl stoppebuffer (1 M H2S04) per brønn. Absorbansen ved de to bølgelengdene på 490/655 nm ble målt ved å bruke en Biorad mikroplate-avleser og resultatene ble deretter analysert.
For hvert eksperiment ble kontroller (ikke inneholdende legemiddel) og en blank inkubering (ikke inneholdende celler eller legemidler) kjørt i parallel. Blank-verdien ble trukket fra alle kontroll- og prøveverdier. For hver prøve ble verdien på p53 (i absorbansenheter) uttrykt som prosentandelen av verdien for p53 til stede i kontrollen. Prosentandel bevaring høyere enn 140 % ble definert som betydelig. Heri er virkningene av testforbindelser uttrykt som den laveste dose som gir minst 140% av verdien for p53 til stede i kontrollen (LAD) (se Tabell 4.).
I noen av eksperimentene ble analysen tilpasset for, og anvendt i, 384-brønns dyrkingsplater.
C.2 Proliferasjonsassay
De humane A2780 eggstokkkreftcellene var en vennlig gave fra Dr. T.C. Hamilton (Fox Chase Cancer Centre, Pennsylvania, U.S.A.)- Cellene ble dyrket i RPMI 1640 medium supplert med 2 mM L-Glutamin, 50 pg/ml gentamicin og 10 % føtalt kalveserum.
Reagenser anvendt i Alamar Blue assayet
Resazurin ble kjøpt fra Aldrich (Prod. nr. 199303). Kaliumferrocyanid, kaliumferricyanid, KH2P04og K2HP04ble kjøpt fra Sigma (henholdsvis prod. Nr. P9387, P8131, P5655 og P8281).
Kaliumfosfat-Buffer 0.1 M (PPB) ble lagd som følger: 2.72 gram KH2P04og 13.86 gram K2HP04ble oppløst i 500 ml milli-Q H20, pH ble justert til pH 7.4 og volumet ble brakt til 1 liter med milli-Q H20; bufferen ble filtersterilisert og lagret ved romtemperatur. Resazurin-stamløsning (PPB-A) ble fremstilt nylagd ved å løse opp 45 mg resazurin i 15 ml PBS. 30 mM kaliumferricyanid (PPB-B) ble fremstilt ved å løse opp 0.987 gram kaliumferricyanid i 100 ml PPB. 30 mM kaliumferrocyanid (PPB-C) ble fremstilt ved å løse opp 1.266 gram kaliumferrocyanid i 100 ml PPB. Blanding av PPB-A, PPB-B og PPB-C ble fremstilt ved å blande like volumer av de respektive løsningene. Resazurin-arbeidsløsning (heri kalt"Alamar Blue"-løsning) ble fremstilt ved å fortynne nevnte blanding 20x (vol/vol) i PPB og filtersterilisere; "Alamar Blue"-løsningen kunne bli holdt ved 4°C i maksimalt 2 uker.
Prosedyre for " Alamar Blue"- assayet
For eksperimenter i 384-brønns plater ble cellene sådd ved en tetthet på 5 x IO<3>celler/ml i Falcon 384-brønns dyrkingsplater (Life Technologies, Merelbeke, Belgium), sort med klar bunn, i 45 pl dyrkingsmedium. Celler ble tillatt å feste seg til plastikk i 24 t. Den testede forbindelsen ble for-fortynnet (1/50 i dyrkingsmedium) og 5 pl for-fortynnet forbindelse ble tilsatt til brønnene. Etter 4-dags inkubering, 10 pl med "Alamar Blue"-løsningen ble tilsatt til hver brønn og cellene ble videre inkubert i 5 timer (A2780) ved 37 °C. Fluorescens-intensiteten ble målt for hver brønn med en Fluorescens plateavleser (Fluorscan, Labsystems, 540 nm eksitering og 590 nm emisjon).
Den antiproliferative aktiviteten ble beregnet som prosentandel av gjenværende levedyktige celler i behandlet versus kontroll (ubehandlede celler) betingelser. Innen et eksperiment er resultatet for hver eksperimentelle betingelse gjennomsnittet av 3 replikatbrønner. Når passende ble eksperimentene gjentatt for å etablere hele konsentrasjon-respons-kurver. Når passende ble IC50-verdier (konsentrasjon av legemiddelet som behøves for å redusere cellevekst til 50% av kontrollen) beregnet ved å bruke probit-analyse for graderte data (Finney, D.J., Probit Analyses, 2<nd>Ed. Chapter 10, Graded Responses, Cambridge University Press, Cambridge 1962). Heri er virkningene av testforbindelser uttrykt som pIC50(den negative log-verdien av IC50-verdien (M)) (se Tabell 5A).
Forbindelser ble også testet ifølge protokollen over, men ved å bruke andre cellelinjer: kolorektal kreft cellelinje HCT116, ikke-småcellet lungekreft cellelinje H1299, human prostatakreft cellelinje DU145. Resultater er rapportert i Tabell 5B.
C.3...P450-assay.
CYP P450 (E.coli uttrykt) proteinene (3A4, 2D6, 2C9, 1A2 & 2C19) omdanner deres spesifikke substrater til et fluorescerende molekyl<12>. Det fluorescerende molekylet blir målt ved å bruke en fluoresceringsplateavleser. Forbindelser som inhiberer den enzymatiske reaksjonen vil resultere i en reduksjon av fluorescerende signal.
Omdannelser formidlet av de respektive cDNA - uttrykte cvtokrom P450 isoenzymer .
Forkortelser:
CEC: 7-etoksy-3-cyanokumarin; CHC: 3-cyano-7-hydroksykumarin,
MFC: 7-Metoksy-4-trifluormetyl kumarin; 7-HFC: 7-Hydroksy-trifluormetyl kumarin,
CEC: 7-etoksy-3-cyanokumarin; CHC: 3-cyano-7-hydroksykumarin,
AMMC: 3-[2-(N,N-dietyl-N-metylamino)etyl]-7-metoksy-4-metylkumarin;
AHMC: 3-[2-(N,N-dietylamino)etyl]-7-hydroksy-4-metylkumarin hydroklorid,
BFC: 7-Benzyloksy-trifluormetyl kumarin;
DBF: Dibenzylfluorescein, 7-BQ: Benzyloksykinolin.
Kofaktorblandina: (for alle CYP-enzymer bortsett fra CYP2D6)
Forkortelser: G-6-P: glukose-6-fosfat; G-6-P-DH: glukose-6-fosfat-dehydrogenase.
Kofaktorblandina -. (for CYP2D6)
CYP P450 enzym - løsninger:
Alle disse CYP-enzymene ble oppløst i 0.01 M Na-K-fosfatbuffer + 1.15% KCI, og holdt på is til anvendelse. CYP P450 enzymene ble lagret ved -80 °C.
Fortynning av forbindelse oa referanseinhibitor:
Forbindelser og referanseinhibitorer ble levert til avdelingen som en 5 mM løsning i DMSO. En arbeidsløsning på 5.10"<4>M ble lagd ved seriell fortynning ved å bruke acetonitril. Sluttkonsentasjonen til forbindelsen var 10"<5>M for den primære analysen, og sluttkonsentrasjonen av løsemiddel 2 %. Etter en primær analyse ved en konsentrasjon på 10"<5>M, ble IC50-verdiene til utvalgte potente inhibitorer testet ved et konsentrasjonsintervall på 3.10"<9->10"<5>M. I den primære analysen ble alle forbindelser testet tre ganger.
Referanseinhibitorer ble testet ved et konsentrasjonsintervall på 10"<9->10"<4>M. Referanseinhibitorer:
Substratløsninqer:
Substrat-stamløsningene ble oppløst i acetonitril, og lagret ved -20 °C. Den endelige arbeidsløsningen ble oppløst i 0.1 M Na-K-fosfatbuffer pH 7.4, og denne løsningen ble alltid fremstilt nylagd før analysen ble startet.
Dataanalyse
Platefremstilling, data-linking, dataanalyse, validering & godkjenning av resultater og dataopplastning ble halv-automatisk utført av Lexis-Laplace programvare
(Laplace-DLM-RVAM)
Formelen anvendt i beregningene er:
% aktivitet=(100/(gjennomsnitt positiv kontroll-gjennomsnitt negativ kontroll))x(gjennomsnitt prøve- gjennomsnitt negativ kontroll).
% inhibering = 100 - % aktivitet
Nar beregnet ble IC50-verdien automatisk generert ved grafisk ekstrapolering i RVAM, basert på krysningen med 50% av kontrollaksen.
Fremgangsmåte
Analysen ble utført i en sort 96-brønns Costar plate. Per-brønn analysen omfatter: 40 pl CYP P450 enzym-løsning (i negativ kontroll prøvene ble 40 pl med 0.1M Na-K-fosfat-buffer pH 7.4 uten enzym tilsatt); 40 pl kofaktorblanding; 2 pl forbindelse eller referanseinhibitor for negative kontrollprøver eller løsemiddel for positive kontrollprøver. Etter 5 min preinkubering ved 37°C i en risteinkubator, ble 20 pl substratløsning tilsatt. Platene ble inkubert ved 37°C i 10 min (CYP3A4/DBF), 15 min (CYP1A2), 30 min (CYP2C9 , CYP3A4/BFC og CYP3A4/ 7-BQ & CYP2C19) og 45 min (CYP2D6).Reaksjonen ble stoppet ved tilsetning av 200 pl acetonitril. For CYP3A4/DBF, ble reaksjonen stoppet ved tilsetning av 200 pl 2M NaOH. For CYP3A4/7-BQ, ble reaksjonen stoppet ved tilsetning av 40 pl Tris/ acetonitril (1:5)V:V, etterfulgt av en 10 minutters sentrifugering ved 2000 rpm. Det fluorescerende signalet ble detektert med en fluorescens Victor2 (Wallac) eller Fluorskan (Labsystems) avleser. Eksiterings- og emisjonsbølgelengden for de forskjellige enzymene og deres spesifikke substrat er nevnt i tabellen 6.
Referanser
[1] Microtiter Plate Analysis for Inhibition of Human, Drug-Metabolizing Cytochromes P450
Charles L. Crespi, Vaughn P. Miller, Bruce W. Penman (Gentest)
Analytical Biochemistry 248, 188-190 (1997) Article n° AB972145
[2] Novel High Throughput fluorescent P450 analysis
V.P. Miller, J. Ackermann, D.M. Stresser, CL. Crespi
Gentest Internettsted.
Tabell 7 gir data for forbindelsene ifølge den foreliggende oppfinnelsen (forbindelser nr. 18, 20, 9, 14 og 4) testet i de syv testene når sammenlignet med forbindelser kjent i teknikken. Som beskrevet over ble fem P450-enzymer testet, ett av dem på tre forskjellige substrater (således syv tester totalt). I tabellen 7 er det indikert hvor mange P450-tester hvori en forbindelse viste en inhiberende aktivitet med en IC50< 1.00E-06.
.C.i4.:.Rp.:.4-1284 antagonismej.mu.s
Testen er en modifisering av en prosedyre beskrevet av Colpaert et al. (1975).<3>Hankjønnede NMRI mus (22 ± 3 g) ble oppbevart i macrolon observasjonsbur (L x W x H: 11 x 12 xl7 cm; n = 3 per bur). I begynnelsen av eksperimentene, umiddelbart før testforbindelse-administrasjon, start-kroppstemperature til musene ble målt med en nøyaktighet på 0.1 °C ved å innføre den termosensitive proben (1.0 mm diameter) til et elektrisk termometer (Comark) til en konstant dybde på 3 cm inn i spiserøret til en stabil avlesning ble oppnådd. Diameteren på det høyre øyes pupil ble målt med et gradert mikroskop og uttrykt i 1/24 mm enheter. Femten minutter etter administrasjon av testforbindelse ble musene utfordret med Ro-4-1284 (10 mg/kg, s.c). Ro-4-1284 er en reserpin-lignende inhibitor av vesikulær monoamin transport (VMAT-2), som raskt tømmer sekretoriske vesikler.<3,>4 Femten, 30 og 60 minutter etter utfordring ble musene målt for palpebral åpning (0, 1, 2, 3, 4, 5) og lokomotoraktivitet (-1, 0, 1, 2, 3). Ved 60-minuttsintervallet, umiddelbart etter målingen av åpenbar adferd, ble diameteren på det høyre øyes pupil og spiserørstemperaturen målt igjen. Abnormale fenomener sånn som intens lukting, tygging, oppreising, hyperemi, piloereksjon, sikling, skjelvinger, kramper og død ble notert (det siste fenomenet ble også notert når det skjedde før Ro-4-1284 administrasjon). Kriterier for legemiddel-induserte virkninger: reversering av ptosis: palpebral åpningsskår > 1 ved 15, 30 eller 60 min (2.7, 0.5 og 0% falske positive kontroller, henholdsvis; n > 350); induksjon av utmattelse: skår -1 for bevegelse ved 15, 30 eller 60 min (aldri observert i kontroller); reversering av hypomotilitet: skår > 0 for bevegelse ved 15, 30 og 60 min (2.2, 0.8 og 0% falske positive kontroller, henholdsvis); reversering av miose: pupildiameter
> 5 enheter ved 60 min (0.8% falske positive); forsterking av hypotermi: temperaturreduksjon (over 1 times tidsintervall) > 9.0 °C (1.4% falske positive); reversering av hypotermi: temperaturreduksjon < 3.0 °C (1.8% falske positive).
Ifølge standard prosedyren blir RO-4-1284 injisert 15 min etter subkutan eller oral administrasjon og observasjoner starter 15 min senere. Doser blir til å begynne med gitt til 3 dyr. Når minst 2 av de 3 dyrene viser aktivitet for minst en av observasjonene er forbindelsen ansett aktiv. I andre tilfeller er forbindelsen ansett inaktiv ved det spesifikke tids-måte-doseregimet og klassifisert som ferdig.
Forbindelse nr.20, 18, 1, 27, 24, 25, 31, 30, 7, 29, 28, 26 og 17 ble hver testet på 3 dyr ved en konsentrasjon på 80 mg/kg etter oral administrasjon og de viste ikke aktivitet på reversering av miosis, reversering av ptosis, reversering av hypomotilitet. Forbindelse 4 ble bare testet ved 40 mg/kg og viste ikke aktivitet på reversering av miosis, reversering av ptosis, reversering av hypomotilitet.
Forbindelser fra EP 1809622 ble også testet i den samme testen og resultatene er vist under i Tabell 8.
[3] Colpaert, F.C., Lenaerts, F.M., Niemegeers, C.J.E., Janssen, P.A.J.: "A critical study of Ro-4-1284 antagonism in mouse.", Arch. Int. Pharmacodyn. 215 40-90
(1975).
[4] Colzi, A., D'Agostini, R., Cesura, A.M., Borroni, E., Da Prada, M.: "Monoamine oksidase-A inhibitors and dopamine metabolism in rat caudatus: evidence that an increased cytosolic level of dopamine displaces reversible monoamine oksidase-A inhibitors in vivo.", J. Pharmacol. Exp. Ther. 265 103-111 (1993).
[5] Filinger, E.J.: "Effect of a reserpine-like substance on the release and metabolism of [<3>H]NA in cell bodies and terminals.", Gen. Pharmacol. 25 1039-1043
(1994).
C. 5 " patch- clamp" test- Inhiberinq av HERG- formidlet K+ strøm i HEK293 celler
Eksperimenter ble utført ved å bruke HEK293 celler stabilt uttrykkende HERG kaliumkanalen. Celler ble dyrket ved 37°C og 5% C02i dyrkingskolber i MEM-medium supplert med 10% varmedeaktivert føtalt bovint serum, 1% L-Glutamin-Penicillin-Streptomycin-løsning, 1% ikke-essensielle aminosyrer (100x), 1% natriumpyruvat (100 mM) og 0.8% Geneticin (50 mg/ml). Før anvendelse ble cellene dyrket i MEM-medium i fraværet av 5 ml L-Glutamin-Penicillin-Streptomycin. For anvendelse i det automatiserte "patch-clamp"-systemet PatchXpress 7000A (Axon Instruments) ble celler høstet for å oppnå cellesuspensjon av enkeltstående celler.
Ekstracellulær løsning inneholdt (mM): 150 NaCI, 4 KCI, 1 MgCI2, 1.8 CaCI2, 10 HEPES, 5 Glukose (pH 7.4 med NaOH). Pipette-løsning inneholdt (mM): 120 KCI, 10 HEPES, 5 EGTA, 4 ATP-Mg2, 2 MgCI2, 0.5 CaCI2(pH 7.2 med KOH).
"Patch-clamp"-eksperimenter ble utført i spenning-clamp moduset og hel-celle strømmer ble målt med et automatisert "patch-clamp"-assay som utnytter PatchXpress 7000Et systemet (Axon Instruments). Strømsignaler ble forsterket og digitalisert med en Multiclamp-forsterker, lagret og analysert ved å bruke PatchXpress, DataXpress programvare og Igor 5.0 (Wavemetrics).
Holdepotensialet var -80 mV. HERG-strømmen (K+-selektiv utgående strøm) ble bestemt som den maksimale halestrømmen ved -40 mV etter en 2 sekunders depolarisering til +60 mV. Pulssykliseringshastighet var 15 s. Før hver testpuls ble det gitt en kort puls (0.5 s) til -60 mV fra holdepotensialet for å bestemme (lineær) lekkasjestrøm. Etter å ha fastslått hel-celle konfigurasjon og en stabilitetsperiode ble vehikelen tilført i 5 minutter etterfulgt av teststoffet med økende konsentrasjoner på 10-7 M, 3 x 10-7 M og 3 x 10-6 M. Hver konsentrasjon av teststoffet ble tilført to ganger. Effekten av hver konsentrasjon ble bestemt etter 5 min som en gjennomsnittsstrøm av 3 sekvensielle spenningspulser. For å bestemme omfanget av blokkering ble den gjenværende strømmen sammenlignet med vehikel før-behandling. Data (Tabell 9) er presentert som gjennomsnittsverdier (± standardavvik fra gjennomsnittet (SEM) hvis tilgjengelig) for prosentandel inhibering sammenlignet med kontroll (kontroll er 100%)
(n=antall eksperimenter).
Overraskende viser de foreliggende forbindelsene utmerket in vitro aktivitet, som er kombinert med lav affinitet for P450 enzymer og ingen in vivo legemiddel-induserte nevrologiske virkninger og lave kardiovaskulære virkninger.
C. 6. In vivo anti- tumor virkninger
In vivo antitumoral aktivitet kan bli testet som følger:
NCI standard referanse:
Bissery, M-C, og Chabot, G.G. History og ny utvikling of screening og evaluation fremgangsmåter of anticancer legemidler anvendt in vivo og in vitro. Bull. Cancer. 1991, 78: 587-602.
Dyremodell:
Immuno-defisiente (atymiske) hankjønnede NMRI Naken { Nu/ Nu) mus (20-25 g oppnådd fra Janvier, France) ble anvendt for disse studiene. Startvekt var omtrent 23 til 34 g. Alle dyr ble holdt under SPF "full barrier" betingelser med fri tilgang til mat og vann. Mus ble gruppeoppbevart under en 12 timers lys:mørkesyklus (lys på ved kl. 06:00) ved en temperatur på 19 til 22 °C og 35 til 40% fuktighet i Techniplast type-3 IVC bur. Mus ble foret med standard laboratoriefor. Alle eksperimenter ble utført i henhold til European Communities Council Directives (86/609/EEC) og matte bli godkjent av den lokale etiske komité. For en etablert tumor xenograft model (tumorvolum~200 mm<3>), ble mus randomisert ifølge tumorvolumer, med 5 mus per behandlingsgruppe.
Testsystem:
Den humane U87 glioma-tumorcellelinjen stammet fra en 44 år gammel hunkjønnet kaukasisk pasient. Celler ble dyrket ved 37 °C i en fuktet atmosfære (5% C02, 95% luft), i DMEM-medium supplert med 2 mM L-glutamin, 2.0 mM natriumpyruvat, 25 enheter/ml penicillin / 25 pg/ml streptomycin og 10% føtalt bovint serum. Celler ble holdt som celle-monolagskulturer, som ble passert to ganger ukentlig ved 3 x IO<6>celler per T175-kolbe ved å bruke den følgende prosedyre. Kortvarig ble celler vasket med PBS (uten Mg<2+>, Ca<2+>), før tilsetning av trypsin-EDTA til dyrkingskolbene. Etter løsgjøring av celler ble trypsin-EDTA deaktivert ved tilsetning av komplett medium. Celle-suspensjon ble deretter overført til 50 ml Falcon rør og sentrifugert i 3 min ved 1200 rpm. Medium ble luftet, med cellene re-suspendert i et passende volum med komplett medium. Cellene ble tellet i et hemocytometer og deres levedyktighet ble vurdert ved 0.25% trypan blå eksklusjon. Et passende volum med celle-suspensjon ble deretter tilsatt til enten en ny T175 dyrkingskolbe(r) eller rullekolbe inneholdende nylagd medium. For stor oppskalering av vekst av U87 tumorceller, ble et passende antall rullekolber sådd med 0.5 til 1 x IO<7>celler 1 uke i forkant av inokulering av mus. Mediumet ble byttet to ganger i løpet av denne perioden, med det siste byttet på dagen før celle-injisering. Celler ble samlet som beskrevet over, med unntaket at cellene etter sentrifugering, ble re-suspendert i kaldt (4°C) serum-fritt medium. Mus ble injisert i det inguinale området med 1 x IO<7>celler totalt i et 200 pl volum.
Studieutforming:
Humane U87 glioma celler ble injisert direkte inn i det inguinale området til de hankjønnede NMRI Naken mus (1 x IO<7>celler/200 pl/animal) på dag 0 (DO). På dag 7-10 (kan variere på grunn av tumorfeste/vekst mellom celle-batcher) når tumorvolum hadde nådd et omtrentlig gjennomsnitt på 200 mm<3>, ble mus randomisert ifølge tumorvolum, med 5 mus per behandlingsgruppe. Mus ble deretter behandlet en gang daglig (QD) med enten vehikel (10% HP-p-CD) eller vehikel inneholdende testforbindelse (20 mg/kg) via sonde (p.o.) administrert i et volum på 10 ml/kg kroppsvekt for 5 dager. Spesifikke tumormålinger ble tatt på dag 6 (24 timer etter 5. dose) og deretter igjen på dag 10. Tumor re-vekst (etter at dosering har stoppet) ble overvåket slik at tiden-for-å-nå ("time-to-reach") et volum på 2000 mm<3>(TTR2000) kan bli målt. Dette gir ekstra informasjon om varigheten av legemiddelvirkning på tumorveksten. Generelt ble tumorstørrelse og kroppsvekt målt to ganger ukentlig, med mus overvåket daglig for kliniske tegn på toksisitet i løpet av varigheten av behandlingen. Kliniske tegn på toksisitet inkluderer (men ikke begrenset til), persistent anoreksi eller dehydrering, holdning, moribund, slapphet, hypotermi og/eller anstrengt pusting (ifølge UKCCCR (UK Coordinating Committee on Cancer Research) guidelines for the welfare of animals in experimental neoplasia (July 1997); og Workman, P. et al. UKCCCR guideline. Br. J. Kreft. 1998, 77: 1-10).
Data - analvse:
For hvert individuelle dyr ble kroppsvekt og tumorstørrelse [ ved å bruke den vanlig aksepterte formelen: Tumorvolum ( mm3) = ( a x b2/ 2) ; hvor " a" representerer lengden, og<n>b" bredden av tumoren, bestemt ved kalipermålinger], kontrollert to ganger ukentlig gjennom studiet. Et vedvarende tap av kroppsvekt større enn 15% av startskroppsvekten ble ansett som klinisk toksisitet, med dyret fjernet fra studiet og avlivet. Tid-tumor vekst utvikling er uttrykt som medianverdier, eller kan bli normalisert til initielt tumorvolum på dagen behandling ble startet og uttrykt som gjennomsnitlig standardavvik fra gjennomsnitt (SEM) (5 dyr per gruppe). For pre-etablerte tumorer kan relative tumorvolumer bli beregnet for hver mus (behandlet tumorvolum/tumorvolum på dag 0) og uttrykt som gjennomsnitt ± SEM for hver behandlingsgruppe. Statistisk signifikans er indikert ved ensidige p-verdier fra Wilcokson-Mann-Whitney analyse (Wilcokson rank sum test) og p < 0.05 er ansett som statistisk signifikant. Behandling/kontroll (T/C) forholdstall er beregnet basert på endelige relative tumorvolumer, ved å bruke NCI-kriteria på dag 6 og 10 (dag 1 = start av behandling, når mus har blitt randomisert og tilordnet de passende behandlingsgrupper). De effektive kriteria for T/C forholdstall er 42%.
D. Sammensetninqseksempel: Film- belaqte tabletter
Fremstig
En blanding av 100 g med en forbindelse med formel (I), 570 g laktose og 200 g stivelse blir blandet godt og deretter fuktet med en løsning av 5 g natriumdodecylsulfat og 10 g polyvinyl-pyrrolidon i omtrent 200 ml med vann. Den våte pulverblandingen blir silt, tørket og silt igjen. Deretter blir det tilsatt 100 g mikrokrystallinsk cellulose og 15 g hydrogenert vegetabilsk olje. Det hele blir blandet godt og komprimert til tabletter, noe som gir 10.000 tabletter, hver omfattende 10 mg med en forbindelse med formel (I).
Belegg.
Til en løsning av 10 g metylcellulose i 75 ml med denaturert etanol blir det tilsatt en løsning av 5 g med etylcellulose i 150 ml med diklormetan. Deretter blir det tilsatt 75 ml med diklormetan og 2.5 ml 1,2,3-propantriol, 10 g med polyetylenglykol blir smeltet og oppløst i 75 ml med diklormetan. Den siste løsningen blir tilsatt til den første og deretter blir det tilsatt 2.5 g med magnesiumoktadekanoat, 5 g med polyvinyl-pyrrolidon og 30 ml med konsentrert fargesuspensjon og det hele blir homogenisert. Tablettkjernene blir belagt med den således oppnådde blandingen i et beleggapparat.

Claims (15)

1. En forbindelse med formel (I)
inkludert enhver stereokjemisk isomer form derav, hvori R<1>er hydroksyCi-6alkyl eller C2.6alkenyl; med forbehold om at R<1->substituenten er plassert i posisjon 6 eller 7 på indol-enheten; R<2>er hydrogen eller d-4alkyl; Z er et radikal valgt fra
R3 er hydrogen eller hydroksyCi-4alkyl; R<4>er hydroksy eller Ci.4alkyloksy; R<5>er hydrogen eller Ci-4alkyl; eller R<4>ogR<5>er tatt sammen for å danne okso; et farmasøytisk akseptabelt salt derav eller et solvat derav.
2. En forbindelse som krevd i krav 1, hvori forbindelsen har den følgende formelen
3. En forbindelse som krevd i krav 1 eller 2, hvori R<1>er hydroksyCi-6alkyl.
4. En forbindelse som krevd i hvilket som helst av krav 1 til 3, hvori R<2>er Ci-4alkyl.
5. En forbindelse ifølge hvilket som helst av krav 1 til 4, hvori Z er et radikal med formel (z-1).
6. En forbindelse som krevd i hvilket som helst av krav 1 til 4, hvori Z er et radikal med formel (z-2).
7. En forbindelse som krevd i krav 6, hvori R<4>er hydroksyl og R<5>er hydrogen.
8. En forbindelse som krevd i krav 6, hvori R<4>er hydroksyl og R<5>er Ci-4alkyl.
9. En forbindelse som krevd i krav 1, hvori forbindelsen er en enantiomer som har formelen
og som har en levorotorisk optisk dreining målt med lys ved bølgelengden til D-linjen til natrium (589 nm) ved en temperatur på 20 °C og en cellelengde på 1 dm i kloroform ved en konsentrasjon på 8.59 mg/ml; eller et farmasøytisk akseptabelt salt derav eller et solvat derav.
10. En forbindelse som krevd i krav 1, hvori forbindelsen er en enantiomer som har formelen
og som har en dekstrorotorisk rotasjon målt med lys ved bølgelengden til D-linjen til natrium (589 nm) ved en temperatur på 20 °C og en cellelengde på 1 dm i metanol ved en konsentrasjon på 10.33 mg/ml; eller et farmasøytisk akseptabelt salt derav eller et solvat derav.
11. En forbindelse ifølge ethvert av kravene 1 til 10 for anvendelse som en medisin.
12. En farmasøytisk sammensetning omfattende en farmasøytisk akseptabel bærer og som en aktiv ingrediens en terapeutisk effektiv mengde av en forbindelse som krevd i hvilket som helst av krav 1 til 10.
13. Anvendelse av en forbindelse som krevd i hvilket som helst av krav 1 til 10 for fremstillingen av et medikament for behandlingen av kreft.
14. En kombinasjon av en eller flere antikreft-midler og en forbindelse som krevd i hvilket som helst av krav 1 til 10.
15. En fremgangsmåte for å fremstille en forbindelse som krevd i krav 1,karakterisert veda) å reagere et intermediat med formel (II) med et intermediat med formel (III), hvori Wi er en egnet utgående gruppe, i et reaksjonsinert løsemiddel valgfritt i nærvær av en passende base, eller å reagere et intermediat med formel (II) med et intermediat med formel (III), hvori Wi er en egnet utgående gruppe i nærvær av en egnet katalysator, en egnet ligand, en egnet base og et egnet løsemiddel med R<1>, R2 og Z som definert i krav 1; b) å redusere det tilsvarende karbonylderivatet med formel (IV) i nærvær av et egnet reduksjonsmiddel og et egnet løsemiddel,
med R<2>og Z som definert i krav 1; c) å redusere det tilsvarende esterderivatet med formel (V), hvori Rx representerer -Ci-3alkylC(=0)OCi-4alkyl, i nærvær av et egnet reduksjonsmiddel og et egnet løsemiddel,
med R<2>og Z som definert i krav 1; d) å hydrolysere et intermediat med formel (VI) med en egnet base i nærvær av et egnet løsemiddel,
med R<2>og Z som definert i krav 1; eller, hvis ønsket, å konvertere forbindelser med formel (I) til hverandre ifølge transformasjoner kjente i teknikken, og videre, hvis ønsket, å konvertere forbindelsene med formel (I), til et terapeutisk aktivt ikke-toksisk syreaddisjonssalt ved behandling med en syre, eller til et terapeutisk aktivt ikke-toksisk baseaddisjonssalt ved behandling med en base, eller omvendt, å konvertere syreaddisjonssaltformen til den frie basen ved behandling med base, eller å konvertere baseaddisjonssaltet til den frie syren ved behandling med syre; eller, hvis ønsket, å fremstille stereokjemisk isomere former eller solvater derav.
NO20111199A 2009-02-04 2011-09-02 Indolderivater som antikreftmidler NO20111199A1 (no)

Applications Claiming Priority (2)

Application Number Priority Date Filing Date Title
EP09152089 2009-02-04
PCT/EP2010/051316 WO2010089327A2 (en) 2009-02-04 2010-02-03 Indole derivatives as anticancer agents

Publications (1)

Publication Number Publication Date
NO20111199A1 true NO20111199A1 (no) 2011-11-04

Family

ID=40738626

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
NO20111199A NO20111199A1 (no) 2009-02-04 2011-09-02 Indolderivater som antikreftmidler

Country Status (23)

Country Link
US (1) US8541442B2 (no)
EP (1) EP2393801B1 (no)
JP (1) JP5612611B2 (no)
KR (1) KR101730407B1 (no)
CN (1) CN102307868B (no)
AR (1) AR075235A1 (no)
AU (1) AU2010210178B2 (no)
BR (1) BRPI1008855B8 (no)
CA (1) CA2749209C (no)
CL (1) CL2011001860A1 (no)
CO (1) CO6341625A2 (no)
EA (1) EA021883B1 (no)
ES (1) ES2639752T3 (no)
IL (1) IL214427A (no)
MX (1) MX2011008195A (no)
MY (1) MY152018A (no)
NO (1) NO20111199A1 (no)
NZ (1) NZ594186A (no)
SG (1) SG173495A1 (no)
TW (1) TWI476189B (no)
UA (1) UA107455C2 (no)
WO (1) WO2010089327A2 (no)
ZA (1) ZA201105695B (no)

Families Citing this family (12)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
JP2841517B2 (ja) 1989-08-11 1998-12-24 株式会社ツムラ 入浴剤
JP2872763B2 (ja) 1990-06-28 1999-03-24 紀伊産業株式会社 携帯用肛門洗浄器
CA2853729A1 (en) * 2011-10-28 2013-05-02 Board Of Regents, The University Of Texas System Novel compositions and methods for treating cancer
WO2014085486A2 (en) 2012-11-30 2014-06-05 Waters Technologies Corporation Methods and apparatus for the analysis of vitamin d metabolites
CN108239083B (zh) 2016-12-26 2021-08-17 阿里根公司 芳香烃受体调节剂
CN106632303A (zh) * 2017-01-09 2017-05-10 湖南华腾制药有限公司 一种6‑噻唑基吲哚衍生物的制备方法
TW201925194A (zh) 2017-11-20 2019-07-01 美商雅里俊公司 吲哚化合物及其用途
CN108659003B (zh) * 2018-04-14 2021-01-26 上海朝晖药业有限公司 一种治疗口腔溃疡的化合物的制备方法
TW202039443A (zh) * 2019-01-04 2020-11-01 大陸商江蘇恆瑞醫藥股份有限公司 ６－側氧基－１，６－二氫噠嗪類衍生物、其製備方法及其在醫藥上的應用
WO2020169042A1 (zh) * 2019-02-20 2020-08-27 江苏恒瑞医药股份有限公司 6-氧代-1,6-二氢哒嗪类前药衍生物、其制备方法及其在医药上的应用
AU2020258394A1 (en) 2019-04-15 2021-10-28 Ariagen, Inc. Chiral indole compounds and their use
WO2024102758A2 (en) * 2022-11-08 2024-05-16 The General Hospital Corporation N-(n-aminoalkyl)phenanthridiunium series of chloride-sensitive fluorophores and methods of use thereof

Family Cites Families (19)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
FR901228A (fr) 1943-01-16 1945-07-20 Deutsche Edelstahlwerke Ag Système d'aimant à entrefer annulaire
AUPO863197A0 (en) 1997-08-18 1997-09-11 Fujisawa Pharmaceutical Co., Ltd. Novel derivatives
US6309492B1 (en) 1998-09-16 2001-10-30 Marc A. Seidner Polymer fill coating for laminate or composite wood products and method of making same
UA71587C2 (uk) 1998-11-10 2004-12-15 Шерінг Акцієнгезелльшафт Аміди антранілової кислоти та їхнє застосування як лікарських засобів
HUP0201215A2 (en) 1998-12-02 2002-08-28 Pfizer Prod Inc Methods and compositions for restoring conformational stability of a protein of the p53 family
AU1734401A (en) 1999-12-09 2001-06-18 Mitsubishi Pharma Corporation Carboxyamido derivatives
KR20030029997A (ko) 2000-09-15 2003-04-16 아노르메드 인코포레이티드 케모킨 수용체 결합 헤테로사이클릭 화합물
CZ305838B6 (cs) * 2001-03-29 2016-04-06 Eli Lilly And Company N-(2-arylethyl)benzylaminy jako antagonisté receptoru 5-HT6
US20030149038A1 (en) 2001-11-09 2003-08-07 The Regents Of The University Of California Alpha-helix mimicry by a class of organic molecules
CN1596114A (zh) 2001-11-13 2005-03-16 三维药物公司 取代的1,4－苯并二氮杂䓬类及其在治疗癌症中的应用
ATE389400T1 (de) 2001-12-18 2008-04-15 Hoffmann La Roche Cis-2,4,5- triphenyl-imidazoline und ihre verwendung bei der behandlung von tumoren
GB0215650D0 (en) 2002-07-05 2002-08-14 Cyclacel Ltd Bisarylsufonamide compounds
SG155941A1 (en) * 2004-09-22 2009-10-29 Janssen Pharmaceutica Nv Inhibitors of the interaction between mdm2 and p53
DE602007007065D1 (de) 2006-03-22 2010-07-22 Janssen Pharmaceutica Nv Cycloalkylaminderivate als inhibitoren der wechselwirkung zwischen mdm2 und p53
CA2644643C (en) 2006-03-22 2015-05-19 Janssen Pharmaceutica N.V. Inhibitors of the interaction between mdm2 and p53
US20100129933A1 (en) * 2007-04-26 2010-05-27 Forschungszentrum Karlsruhe Gmbh Method for detecting the binding between mdm2 and the proteasome
PA8792401A1 (es) * 2007-08-06 2009-03-31 Janssen Pharmaceutica Nv Fenilendiaminas
JO2704B1 (en) * 2007-09-21 2013-03-03 جانسين فارماسوتيكا ان في Interference inhibition factors between MD2 and B53
ES2382701T3 (es) 2007-09-21 2012-06-12 Janssen Pharmaceutica, N.V. Inhibidores de la interacción entre MDM2 y p53

Also Published As

Publication number Publication date
CN102307868B (zh) 2016-06-22
CN102307868A (zh) 2012-01-04
WO2010089327A3 (en) 2010-10-21
EA021883B1 (ru) 2015-09-30
BRPI1008855A2 (pt) 2016-03-15
TWI476189B (zh) 2015-03-11
US8541442B2 (en) 2013-09-24
AU2010210178A1 (en) 2011-07-28
MX2011008195A (es) 2011-09-06
EP2393801B1 (en) 2017-07-12
JP5612611B2 (ja) 2014-10-22
CL2011001860A1 (es) 2012-07-20
US20110294846A1 (en) 2011-12-01
KR20110116195A (ko) 2011-10-25
BRPI1008855B8 (pt) 2021-05-25
CA2749209A1 (en) 2010-08-12
WO2010089327A2 (en) 2010-08-12
IL214427A0 (en) 2011-09-27
EA201170997A1 (ru) 2012-01-30
UA107455C2 (uk) 2015-01-12
EP2393801A2 (en) 2011-12-14
SG173495A1 (en) 2011-09-29
BRPI1008855B1 (pt) 2020-05-12
CA2749209C (en) 2017-01-10
CO6341625A2 (es) 2011-11-21
AR075235A1 (es) 2011-03-16
JP2012516872A (ja) 2012-07-26
KR101730407B1 (ko) 2017-04-26
ZA201105695B (en) 2014-01-29
MY152018A (en) 2014-08-15
NZ594186A (en) 2012-12-21
IL214427A (en) 2016-02-29
AU2010210178B2 (en) 2014-06-05
TW201038552A (en) 2010-11-01
ES2639752T3 (es) 2017-10-30

Similar Documents

Publication Publication Date Title
NO20111199A1 (no) Indolderivater som antikreftmidler
CA2783624C (en) Heteroaryl compounds and uses thereof
EP2953943B1 (en) Substituted bicyclic dihydropyrimidinones and their use as inhibitors of neutrophil elastase activity
RU2477724C2 (ru) Ингибиторы взаимодействия между mdm2 и p53
EP2964617B1 (en) Substituted bicyclic dihydropyrimidinones and their use as inhibitors of neutrophil elastase activity
RS51007B (sr) Supstituisani piridinil i pirimidinil derivati kao modulatori metabolizma i lečenje poremećaja proisteklih iz toga
JP2017509687A (ja) 大環状ピリミジン誘導体
EP3019493A1 (de) Modifizierte bet-proteininhibitorische dihydrochinoxalinone und dihydropyridopyrazinone
WO2009019274A1 (en) Substituted phenylenediamines as inhibitors of the interaction between mdm2 and p53
EP3174876B1 (en) Substituted bicyclic dihydropyrimidinones and their use as inhibitors of neutrophil elastase activity
JP6457523B2 (ja) 医薬組成物のためのスルホキシイミン置換キナゾリン
HK1163674B (en) Indole derivatives as anticancer agents
HK1163674A (en) Indole derivatives as anticancer agents
TW202128653A (zh) 作為parp7抑制劑的嗒酮

Legal Events

Date Code Title Description
FC2A Withdrawal, rejection or dismissal of laid open patent application