NO128970B

NO128970B -

Info

Publication number: NO128970B
Application number: NO00504/70A
Authority: NO
Inventors: R Mast
Original assignee: Miles Lab
Priority date: 1969-02-17
Filing date: 1970-02-13
Publication date: 1974-02-04
Also published as: BE746099A; US3585001A; GB1298762A; SE374821B; ES374872A1; FR2035492A5; BR7016743D0; NL7001638A; CH533837A; DK134872C; JPS4929475B1; DE2007013B2; DE2007013A1; DK134872B

Description

Stabilisert testanordning for påvisning av bilirubin, og fremgangsmåte ved fremstilling av denne. Stabilized test device for the detection of bilirubin, and method for its production.

Oppfinnelsen angår en stabilisert testanordning som hurtig forandrer farve når den bringes i kontakt med bilirubin, og en frémgangsmåte for fremstilling av en slik testanordning. The invention relates to a stabilized test device which quickly changes color when it is brought into contact with bilirubin, and a method for producing such a test device.

En rekke forbindelser, spesielt de som forekommer i kroppsvæsker som blod.og urin, er påvisbare•ved en farvereaksjon som forekommer når .de kobles med en diazoforbindelse. En slik forbindelse som er av spesiell interesse for bestemmelse av en persons fysikalske tilstand, er bilirubin. A number of compounds, especially those found in body fluids such as blood and urine, are detectable•by a color reaction that occurs when .they are coupled with a diazo compound. One such compound that is of particular interest in determining a person's physical condition is bilirubin.

Påvisningen av bilirubin i kroppsvæsker er blitt utfort; siden ca. 1883 da Ehrlich innforte diazoreaksjonen for påvisning av bilirubin i urin. Siden den tid er en rekke væskesystem.er for diazoreaksjonen blitt anvendt for påvisning av bilirubin i urin og serum. Disse systemer omfatter en rekke varias joner"hva-- gjelder diazoforbindelsene og de andre reagenser som"anvendes for denne bestemmelse. Slike systemer er imidlertid hovedsakelig avhengige av den rodfiolette azobili-rubinfarve som dannes når' bilirubin'reagerer med et diazoniumsalt, The detection of bilirubin in body fluids has been carried out; since approx. 1883 when Ehrlich introduced the diazo reaction for the detection of bilirubin in urine. Since that time, a number of liquid systems for the diazo reaction have been used for the detection of bilirubin in urine and serum. These systems comprise a number of various ions, as regards the diazo compounds and the other reagents used for this determination. However, such systems rely mainly on the red violet azobili-rubin dye that is formed when 'bilirubin' reacts with a diazonium salt,

og farven kan måles visuelt eller spektrometrisk. and the color can be measured visually or spectrometrically.

Selv om disse væskesystemer gir en helt ..nbyaktig bestemmelse av bilirubin, er de som regel vanskelige å anvende fordi diazoniumsalt-opplosningene i disse systemer er ustabile og derfor gjor det nbd-vendig med en ny fremstilling for hver prove av fluidum som skal under-søkes . Den nodvendige tid for at den påvisende farveforandring skal bli fullstendig, er forholdsvis lang idet den korteste tid er ca. 30 minutter, og av og til tar det hele flere timer. Undersøkelses-resultatene er derfor ikke så hurtig tilgjengelige som onskelig, spesielt ved bestemmelse av bilirubin i barn. Although these liquid systems provide a very close determination of bilirubin, they are usually difficult to use because the diazonium salt solutions in these systems are unstable and therefore it is necessary to make a new preparation for each sample of fluid to be examined. is sought. The time required for the demonstrable color change to become complete is relatively long, with the shortest time being approx. 30 minutes, and sometimes it takes several hours. The examination results are therefore not as quickly available as desired, especially when determining bilirubin in children.

En rekke av disse vanskeligheter unngåes ved å anvende et pro-dukt som* er tilgjengelig i handelen under varemerket 11 ICTOTEST " i form av tbrre tabletter for bestemmelse av bilirubin som beskrevet i US patentskrift nr. 2.85^.317. Disse tabletter omfatter et diazoniumsalt, sulfosalicylsyre og natriumbicarbonat. For anvendelse av denne undersbkelse anbringes 5 dråper urin på en spesiell sterkt absorberende matte. Reagenstabletten anbringes deretter i midten av det fuktede område, og 2 dråper vann får flyte over tabletten. Dersom bilirubin er tilstede, forekommer en farvereaksjon på matten i lopet av ca. 30 sekunder. Selv om "ICTOTEST gir et forholdsvis hurtig og stabilisert system for bestemmelse av bilirubin, er det nodvendig med en lang rekke bestanddeler for avslutning av påvisningsreaksjonen. ;Testanordninger av dyppings- og -avlesningstypen som omfatter ;en kombinasjon av spesielle hurtigreagerende reagenser og et egnet bærermateriale, er utstrakt anvendt spesielt innen medisinen. Slike anordninger anvendes som regel for bestemmelse av pH og påvisning av glucose, protein og lignende i kroppsvæsker. Ved imidlertid å kombinere de kjente undersbkelsessystemer for påvisning av bilirubin med et egnet bærermateriale for fremstilling av en anordning av dyppings- og -avlesningstypen, var den dannede anordning ustabilisert og ga upå-litelige resultater. ;Det taes derfor ved oppfinnelsen sikte på å tilveiebringe en stabilisert testanordning som hurtig forandrer farve når den bringes i kontakt med bilirubin i en opplosning. ;Det taes ved oppfinnelsen også sikte på å tilveiebringe en fremgangsmåte for fremstilling av en enhetlig testanordning som kan anvendes for påvisning av bilirubin i en opplosning. ;Foreliggende oppfinnelse angår en stabilisert testanordning ;for bilirubin, hvilken er kjennetegnet ved at den består av et fortrinnsvis absorberende bærermateriale med en torr rest av en stabil diazoniumsaltopplosning, hvilken rest utgjores av reaksjonsproduktet dannet ved å bringe sammen et organisk polart lbsningsmiddel, et arylamin, vann, et opploselig nitritt, et stabiliseringsmiddel og en sulfonsyre. ;Oppfinnelsen angår også en fremgangsmåte ved fremstilling av testanordningen, og fremgangsmåten er særpreget ved at det i den angitte rekkefolge blandes, ved værelsetemperatur, et polart opplosnings-middel, et arylamin, et opploselig nitritt, et stabiliseringsmiddel og en sulfonsyre for å danne en stabil diazoniumsaltopplosning, hvoretter et bærermateriale bringes i kontakt med diazoopplosningen og torkes slik at det på dette blir igjen en torr rest av diazoniumsaltopplosningen. ;Ved fremstillingen av diazoniums:altopplbsningen anvendes et polart opplbsningsmiddel. Blandingen fremstilles fortrinnsvis av vann og et organisk polart opplbsningsmiddel, som et alkohol, et keton og en ester etc. En alkohol, som methanol og 2-propanol, anvendes fortrinnsvis i et forhold av minst h deler organisk opplbsningsmiddel pr. 1 del vann. Forholdet mellom organisk opplbsningsmiddel og vann velges slik at det i det vesentlige ikke forekommer noen utfelling i den dannede diazoniumsaltopplbsningen. Et hbyt forhold av et hurtigfordampende organisk opplbsningsmiddel er også bnskelig for derved å nedsette tbr-ketiden for et bærermateriale som er blitt bragt i kontakt med oppløs-ningen. ;Et koblbart arylamin som kan diazotiseres tilsettes fortrinnsvis forst til opplbsningsmidlet. Et slik arylamin er fortrinnsvis 2,<L>t—dikloranilin, p-nitroanilin, p-kloranilin, 2, 5-dikloranilin, •+-klor-p-anisidin, 3,3<1->dimethoxy-benzidin og 2-methoxy-5-nitro-anilin. Andre slike arylaminer som kan danne diazoniumforbindelser, kan også anvendes innenfor oppfinnelsens omfan g. ;Et egnet opploselig nitritt som er i stand til å danne salpeter-syrling i et surt vandig medium, blir deretter satt til oppløsningen. Det oppløselige nitritt er fortrinnsvis natriumnitritt, kalium-nitritt eller kalsiumnitritt„ ;Opplbsningen inneholder også en stabiliserende forbindelse. An-vendelsen av et slikt stabiliseringsmiddel har vist seg å være gunstig fordi et eventuelt bunnfall som forekommer ved dannelsen av diazoniumsaltet, dannes i form av et findelt bunnfall som lett opp-loses. Dessuten har stabiliseringsmidlet vist seg å gjore den ferdige testanordning kjemisk mer stabil„ Egnede stabiliseringsmidler omfatter en lang rekke forbindelser,som aromatiske eller alifatiske sulfon» syresalter, sulfater eller sulfonater. Eksempler på slike stabiliseringsmidler er dinatriumsalte,t av 1,5-naf thalendisulf onsyre , natriumsaltet av 2-naf thalensulfonsyre, dinatriumsaltet av ^V-diamino-2,2'-bifenyldisulfonsyre og natriumlaurylsulfat. ;En organisk syre, fortrinnsvis en organisk sulfonsyre, anvendes i blandingen for å oppnå den riktige pH for dannelsen av en diazonium-forbindelse og den etterfølgende koblingsreaksjon mellom denne di-azoniumforbindelse og den koblbare forbindelse. Den organiske sulfonsyre er fortrinnsvis sulfosalicylsyre, sulfaminsyre, hexamin- og p-toluensulfonsyre.- Det bor bemerkes at andre kjente sulfonsyrer og organiske syrer kan anvendes ifolge oppfinnelsen. ;Disse reagenser, et polart opplbsningsmiddel, et arylamin, vann, opploselig nitritt, et stabiliseringsmiddel og en sulfonsyre, bringes sammen for dannelse av den bnskede diazoniumsaltopplbsning« Reagensene bringes fortrinnsvis sammen i den rekkefolge som er blitt angitt ovenfor, selv om rekkefølgen ved sammenblandingen av det polare opplos-ningsmiddel, arylaminet, vannet, det opploselige nitritt og stabiliseringsmidlet ikke er av avgjbrende betydning. Dersom det anvendes flere enn ett stabiliseringsmiddel, kan det annet stabiliseringsmiddel tilsettes etter sulfonsyren. ;Diazofarvestoffer er blitt fremstilt under anvendelse av et lignende reagenssystem som det ovenfor angitte» De i kjente^. systemer fremstilte diazofarvestoffer ble dannet i form av store utfelte partikler som var ønskelige på grunn av at de ikke stbvet. Slike forbindelser ble dannet ved lave temperaturer av ca. 0°C„ Det har nu overraskende vist seg at ved foreliggende fremgangsmåte kan en diazoniumsaltopplbsning dannes ved værelsetemperatur (ca. 23°C) og holdes som en opplosning i det vesentlig fri for bunnfall ved en slik temperatur under anvendelse av lignende reagenser som de som ble anvendt i kjente sy-r. '.erne r . Det. har dessuten vist seg at når et bærermateriale bringes i kJnt&KL med denne diazoniumsaltoppiosning og'deretter tbrkes, dunnes resten uv JJaz:>n'Iumsa 1 toppi6 snlnge n i form av små partikler som lett holdes tilbake av bærermaterialet. ;De forholdsvise, mengder av de .anvendte reagenser for dannelse av diazonlumsaitoppiosningen ligger fortrinnsvis innen de- folgende områder uttrykt, i prosent, vekt/volums ;;Som angitt ovenfor holdes forholdet mellom opplosningsmia.de.. Tg vann fortrinnsvis ved !-t-:l eller derover for å holde d iazoniumsal t,e t. opplost og fremme tørkingen av bærermaterialet. Vektf orholde t. mel i cm syre og arylamin holdes også fortrinnsvis ved ca. 10:1„ ;Det kan anvendes et egnet bærermateriale som er i stand tii å holde tilbake den torre rest av diazoniumsaltopplosningen i. bærermaterialet. Dette bærermateriale anordnes fortrinnsvis på en sl.ik må'..e at det'lett kan bringes i kontakt med en væske som antas å inneholde den kobl bare forbindelse som skal påvises. Bærermaterialet. for tes-.-anordningen kan være en integrerende del av. en s torre del som tjer.er for håndtering av anordningen, eller den kan være en adskilt del som er festet til en storre del for håndtering av anordningen. El slikt, bærermateriale kan omfatte et absorberende materiale som dyppes i eller på annen måte bringes 1 kontakt med diazoniiimsaltopplosnin^c-Mi og deretter torkes. Egnede bærermaterialet' omfatter f .eks. et porøst materiale, som filtrerpapir, glassf iborp ..pi r eller en polypropylen-* filt. Bærermaterialet kan også omfatte en polymer gel som på forhånd er blitt blandet med undersokelsesopplosningen og torket for dannelse av en halvgjennomtrengelig rnembranstruktur. Gel kan dannes ved for-dampning av opplbsni ngsmldle t og kan inneholde et tver r.bi ndingsm Ldde i . A number of these difficulties are avoided by using a product commercially available under the trade mark ICTOTEST in the form of clear tablets for the determination of bilirubin as described in US Patent No. 2,853,317. These tablets comprise a diazonium salt , sulfosalicylic acid, and sodium bicarbonate. To use this subdilution, 5 drops of urine are placed on a special highly absorbent mat. The reagent tablet is then placed in the center of the moistened area, and 2 drops of water are allowed to flow over the tablet. If bilirubin is present, a color reaction occurs on the mat in the course of approximately 30 seconds. Although "ICTOTEST provides a relatively rapid and stabilized system for the determination of bilirubin, a large number of components are required to complete the detection reaction. Test devices of the dipping and reading type, which comprise a combination of special fast-reacting reagents and a suitable carrier material, are widely used, especially in medicine. Such devices are usually used for determining pH and detecting glucose, protein and the like in body fluids. However, by combining the known under-dilution systems for the detection of bilirubin with a suitable carrier material to produce a dip-and-read type device, the resulting device was unstable and gave unreliable results. The invention therefore aims to provide a stabilized test device which quickly changes color when it is brought into contact with bilirubin in a solution. The invention also aims to provide a method for producing a uniform test device which can be used for the detection of bilirubin in a solution. The present invention relates to a stabilized test device for bilirubin, which is characterized in that it consists of a preferably absorbent carrier material with a dry residue of a stable diazonium salt solution, which residue is made up of the reaction product formed by bringing together an organic polar solvent, an arylamine, water, a soluble nitrite, a stabilizer and a sulfonic acid. The invention also relates to a method for the manufacture of the test device, and the method is characterized by mixing, at room temperature, a polar solvent, an arylamine, a soluble nitrite, a stabilizer and a sulphonic acid in the specified order to form a stable diazonium salt solution, after which a carrier material is brought into contact with the diazo solution and dried so that a dry residue of the diazonium salt solution remains on it. A polar solvent is used in the preparation of the diazonium:alto solution. The mixture is preferably prepared from water and an organic polar solvent, such as an alcohol, a ketone and an ester etc. An alcohol, such as methanol and 2-propanol, is preferably used in a ratio of at least h parts organic solvent per 1 part water. The ratio between organic solvent and water is chosen so that essentially no precipitation occurs in the formed diazonium salt solution. A high ratio of a fast-evaporating organic solvent is also desirable in order thereby to reduce the drying time for a carrier material that has been brought into contact with the solution. A linkable arylamine which can be diazotized is preferably added first to the solvent. Such an arylamine is preferably 2,<L>t-dichloroaniline, p-nitroaniline, p-chloroaniline, 2,5-dichloroaniline, •+-chloro-p-anisidine, 3,3<1->dimethoxy-benzidine and 2- methoxy-5-nitroaniline. Other such arylamines which can form diazonium compounds can also be used within the scope of the invention. A suitable soluble nitrite which is capable of forming nitric acid in an acidic aqueous medium is then added to the solution. The soluble nitrite is preferably sodium nitrite, potassium nitrite or calcium nitrite. The solution also contains a stabilizing compound. The use of such a stabilizing agent has proven to be beneficial because any precipitate that occurs during the formation of the diazonium salt is formed in the form of a finely divided precipitate that is easily dissolved. Moreover, the stabilizer has been shown to make the finished test device chemically more stable. Suitable stabilizers include a wide range of compounds, such as aromatic or aliphatic sulfonic acid salts, sulfates or sulfonates. Examples of such stabilizers are disodium salts of 1,5-naphthalenesulfonic acid, the sodium salt of 2-naphthalenesulfonic acid, the disodium salt of ^V-diamino-2,2'-biphenyldisulfonic acid and sodium lauryl sulfate. An organic acid, preferably an organic sulphonic acid, is used in the mixture to achieve the correct pH for the formation of a diazonium compound and the subsequent coupling reaction between this diazonium compound and the coupling compound. The organic sulfonic acid is preferably sulfosalicylic acid, sulfamic acid, hexamine and p-toluenesulfonic acid. It should be noted that other known sulfonic acids and organic acids can be used according to the invention. "These reagents, a polar solvent, an aryl amine, water, soluble nitrite, a stabilizer and a sulfonic acid, are brought together to form the desired diazonium salt solution" The reagents are preferably brought together in the order set forth above, although the order of mixing of the polar solvent, the arylamine, the water, the soluble nitrite and the stabilizer are not of decisive importance. If more than one stabilizer is used, the second stabilizer can be added after the sulphonic acid. ;Diazo dyes have been prepared using a similar reagent system to that indicated above» Those in the known^. systems produced diazo dyes were formed in the form of large precipitated particles which were desirable because they did not stick. Such compounds were formed at low temperatures of approx. 0°C„ It has now surprisingly been found that by the present method a diazonium salt solution can be formed at room temperature (about 23°C) and kept as a solution essentially free of precipitation at such a temperature using similar reagents as those which was used in known sy-r. '.erne r . The. it has also been shown that when a carrier material is brought into contact with this diazonium salt solution and then used, the residue is reduced to the top in the form of small particles which are easily retained by the carrier material. The relative amounts of the reagents used for the formation of the diazone solution are preferably within the following ranges, expressed as a percentage, weight/volume. :l or more to keep diazonium salt t,e t. dissolved and promote drying of the support material. Weight maintenance of flour in cm acid and arylamine is also preferably maintained at approx. 10:1„ ;A suitable carrier material can be used which is able to retain the dry residue of the diazonium salt solution in the carrier material. This carrier material is preferably arranged in such a way that it can easily be brought into contact with a liquid which is assumed to contain the linkable compound to be detected. The carrier material. for the test device can be an integral part of a large part that is for handling the device, or it can be a separate part that is attached to a larger part for handling the device. El such, carrier material may comprise an absorbent material which is dipped in or otherwise brought into contact with the diazonium salt solution and then dried. Suitable carrier material includes e.g. a porous material, such as filter paper, glass fiborp ..pi r or a polypropylene* felt. The carrier material may also comprise a polymeric gel which has been pre-mixed with the test solution and dried to form a semi-permeable membrane structure. Gel can be formed by evaporation of the solvent and can contain a cross-linking agent.

Den samlede konstruksjon av testanordningen er ikke av av-gjørende betydning forutsatt at ved denne tilveiebringes en egnet .in-ordning for å bringe det område som omfatter den torre rest av diazoniumsaltopplosningen,' i kontakt med den væske som skal undr rstfkoi?. The overall construction of the test device is not of decisive importance, provided that it provides a suitable arrangement for bringing the area comprising the dry residue of the diazonium salt solution into contact with the liquid to be removed.

En testanordning kan også fremstilles vod å jmpropnorv ot -.-!.vkkv filtrerpapir, som virker som bærermateriale, med diazoniumsaltopplbsningen, og deretter torke dette. Det impregnerte papir torkes fortrinnsvis ved en moderat temperatur av ca. 65 - 70°C under luftsirkulasjon. Temperaturen bor ikke være for hby da dette antas å ha en skadelig virkning på diazoniumforbindelsene. Det torkede bærermateriale kan deretter oppdeles i små deler og festes til en storre håndteringsanordning for å lette håndteringen. A test device can also be prepared by mixing a piece of filter paper, which acts as a carrier material, with the diazonium salt solution, and then drying this. The impregnated paper is preferably dried at a moderate temperature of approx. 65 - 70°C under air circulation. The temperature should not be too high as this is believed to have a harmful effect on the diazonium compounds. The dried carrier material can then be divided into small parts and attached to a larger handling device for ease of handling.

Eksempel 1 Example 1

Det ble fremstilt en opplosning ved i en glassbeholder å bringe de folgende forbindelser sammen i den angitte rekkefolge- og under kontinuerlig blanding: 20,0 ml methanol, 0,2 g 2,1+-dikloranilin, 20,0 ml destillert vann, 0,1 g natriumnitritt, 0,6 g dinatriumsalt av 1,5-nafthalendisulfonsyre, 1,5 g natriumlaurylsulfat, 2,0 g sulfosalicylsyre og 60,0 ml methanol.. A solution was prepared by bringing the following compounds together in a glass container in the indicated order and with continuous mixing: 20.0 ml of methanol, 0.2 g of 2,1+-dichloroaniline, 20.0 ml of distilled water, 0 .1 g sodium nitrite, 0.6 g disodium salt of 1,5-naphthalenedisulfonic acid, 1.5 g sodium lauryl sulfate, 2.0 g sulfosalicylic acid and 60.0 ml methanol..

Forbindelsene ble brakt sammen ved værelsestemperatur (ca. 23°C), og oppløsningens temperatur ble holdt ved rundt værelsetemperatur uten ytterligere temperaturregulering mens oppløsningen ble dannet. The compounds were brought together at room temperature (about 23°C), and the temperature of the solution was maintained at around room temperature without further temperature control while the solution was being formed.

Eksempel 2 Example 2

Det ble fremstilt en opplosning som beskrevet i eksempel 1, men med den unntagelse at 0,05 g 2, ^--dikloranilin og 0,5 g sulf osalicyl-syre ble anvendt. Oppløsningen hadde i det vesentlige de samme egenskaper som opplosningen ifolge eksempel 1. A solution was prepared as described in Example 1, but with the exception that 0.05 g of 2,^-dichloroaniline and 0.5 g of sulf osalicylic acid were used. The solution essentially had the same properties as the solution according to example 1.

Eksempel ~\ Example ~\

Det ble fremstilt en opplosning som beskrevet i eksempel 1, men med den unntagelse at 0,5 g 2 ,>+-dikloranilin og 5,0 g sulfosalicylsyre ble anvendt. Opplosningen hadde i det vesentlige de samme egenskaper som opplosningen ifolge eksempel 1. A solution was prepared as described in example 1, but with the exception that 0.5 g of 2,>+-dichloroaniline and 5.0 g of sulfosalicylic acid were used. The solution essentially had the same properties as the solution according to example 1.

Eksempel ^- 10 Example ^- 10

Forskjellige oppløsninger ble fremstilt som beskrevet i eksempel 1, med den unntagelse at en av de folgende forbindelser ble anvendt istedenfor 2,<!>+-dikloranilinet: p-nitroanilin, p-kloranilin, 2,5-dikloranilin, ^-klor-o-anisidin, 3,3<1->dimethoxybenzidin, og 2-methoxy-5-nitroanilin . Different solutions were prepared as described in example 1, with the exception that one of the following compounds was used instead of the 2,<!>+-dichloroaniline: p-nitroaniline, p-chloroaniline, 2,5-dichloroaniline, ^-chloro-o -anisidine, 3,3<1->dimethoxybenzidine, and 2-methoxy-5-nitroaniline.

De fremstilte opplbsningers egenskaper var,i det vesentlige de samme som for opplosningen ifolge eksempel 1. The properties of the prepared solutions were essentially the same as for the solution according to example 1.

Eksempel 11 Example 11

Det ble fremstilt en opplosning som beskrevet i eksempel 1, men med den unntagelse at hexaminsyre ble anvendt istedenfor sulfosalicylsyre. Den dannede opplosning hadde i det vesentlige de samme egenskaper som opplosningen ifolge eksempel 1. A solution was prepared as described in example 1, but with the exception that hexamic acid was used instead of sulfosalicylic acid. The solution formed had essentially the same properties as the solution according to example 1.

Eksempel 12 Example 12

Det ble fremstilt en-opplosning som beskrevet i eksempel 1, men med den unntagelse at sulfaminsyre ble anvendt istedenfor sulfosalicylsyre. Den dannede opplosning hadde i det vesentlige de samme egenskaper som opplosningen ifolge eksempel 1. A single solution was prepared as described in example 1, but with the exception that sulfamic acid was used instead of sulfosalicylic acid. The solution formed had essentially the same properties as the solution according to example 1.

Eksempel 1^ Example 1^

Det ble fremstilt en opplosning som beskrevet i eksempel 1, men med den unntagelse at p-toluensulfonsyre ble anvendt istedenfor sulfosalicylsyre. Den dannede opplosning hadde i det vesentlige de samme egenskaper som opplosningen ifolge eksempel 1. A solution was prepared as described in example 1, but with the exception that p-toluenesulfonic acid was used instead of sulfosalicylic acid. The solution formed had essentially the same properties as the solution according to example 1.

Eksempel lh Example lh

En strimmel av filtrerpapir (Eaton and Dikeman No. 6<1>+1) ble neddykket i opplosningen ifolge eksempel 1 og straks fjernet fra denne. Papiret ble deretter torket i ca. 8-10 minutter ved ca. 65-70°C under luftsirkulasjon over papiroverflaten. Det torkede papir hadde en kremhvit farve. A strip of filter paper (Eaton and Dikeman No. 6<1>+1) was immersed in the solution according to Example 1 and immediately removed from it. The paper was then dried for approx. 8-10 minutes at approx. 65-70°C under air circulation over the paper surface. The dried paper had a creamy white colour.

Bilirubinundersokelsesopplosninger ble fremstilt fra en pato-logisk urinprove fra en pasient som viste tegn på gulsott. Urinen fra pasienten ble behandlet med "ICTOTEST" og ga en kraftig reak-sjon som anga en hoy konsentrasjon av bilirubin. Urinen ble også undersokt ved anvendelse av en modifisert metode ifolge E.G. Godfried, Biochem. J. 28, 2056-2060, 193^+ for bilirubin og viste seg å inneholde ca. 10 deler pr. million. Den patologiske urin ble fortynnet videre med normal urin til konsentrasjoner av 5, 2,5 og 1 deler pr. million. Hver opplosning ble undersokt med testanordningen ifolge oppfinnelsen fremstilt som angitt ovenfor, og det ble dannet forskjellige nyanser av blekrod. En dypere blekrbd farve som nærmet seg blekrod-lavendel, ble dannet med oppløsningene med hoyere konsentrasjoner . Bilirubin test solutions were prepared from a pathological urine specimen from a patient showing signs of jaundice. The urine from the patient was treated with "ICTOTEST" and gave a strong reaction indicating a high concentration of bilirubin. The urine was also examined using a modified method according to E.G. Godfried, Biochem. J. 28, 2056-2060, 193^+ for bilirubin and was found to contain approx. 10 parts per million. The pathological urine was further diluted with normal urine to concentrations of 5, 2.5 and 1 parts per million. Each solution was examined with the test device of the invention prepared as indicated above, and various shades of pale red were formed. A deeper bleached color approaching pale red lavender was produced with the higher concentration solutions.

Prover av blodserum ble på lignende måte tatt fra normale pasienter og pasienter med gulsott. Bilirubininnholdet i disse sera, som bestemt med en "Auto Analyzer", var mellom 1 og 180 deler pr. million. Testanordningene fremstilt som angitt ovenfor, ble brakt i kontakt med disse sera, og farver ble dannet som varierte fra blekrod til lavendel ved konsentrasjoner av 10 deier pr. million og" derbver. Farve fo rand r inge n var proporsjonal-med konsentrasjonen av 'bilirubin Blood serum samples were similarly obtained from normal and jaundiced patients. The bilirubin content of these sera, as determined with an "Auto Analyzer", was between 1 and 180 parts per million. The test devices prepared as indicated above were contacted with these sera, and colors were produced which varied from pale red to lavender at concentrations of 10 eggs per day. million and therefore. The color of the border was proportional to the concentration of bilirubin

i oppløsningene. in the solutions.

Eksempel 15 Example 15

Strimler av glassfiberpapir (Gelman Type A-1306 og Type E-74-8) ble behandlet istedenfor filtrerpapir ved fremgangsmåten ifolge eksempel l^.Det dannede,; torkede glassfiberpapir-hadde i det vesentlige samme utseende som papiret ifolge eksempel l<>>+„ Ved kontakt med undersokelsesopplosningene ifolge eksempel 1^ oppsto det farve for-andringer som angitt i eksempel 1^„- Strips of glass fiber paper (Gelman Type A-1306 and Type E-74-8) were treated instead of filter paper by the method according to example 1^. The formed,; dried glass fiber paper had essentially the same appearance as the paper according to example 1<>>+„ Upon contact with the examination solutions according to example 1^, color changes occurred as indicated in example 1^„-

E ksempel 16 Example 16

Fremgangsmåten ifolge eksempel 1^ ble fulgt, men med den unntagelse at en polypropylenfi.lt (Polypropylene MDSE No. Po-8llO fri American Felt Company) ble anvendt istedenfor filtrerpapir. Den torkede grunnmasse hadde i det vesentlige samme farve og viste samme farvereaksjon som angitt i. eksempel 1<>>+ ved kontakt med undersokelsesopplosningene „ The procedure according to Example 1^ was followed, but with the exception that a polypropylene filter (Polypropylene MDSE No. Po-810 free American Felt Company) was used instead of filter paper. The dried base material had essentially the same color and showed the same color reaction as stated in example 1<>>+ upon contact with the test solutions „

Eksempel 17 Example 17

En opplosning ble fremstilt med de ifolge eksempel i anvendte forholdsvi.se mengder-. Et 10,16 cm bredt ark av Eaton & Dikeman No. ^M. filtrerpapir ble fort gjennom denne opplosning og torket i ca. 10 minutter ved ca. 65 - 70°C under luftsirkulasjon. Etter torkirig ble papiret bragt i kontakt med en trykkomfintlig klebemiddeloverflate A solution was prepared with the following examples in the relative quantities used. A 4-inch-wide sheet of Eaton & Dikeman No. ^M. filter paper was quickly passed through this solution and dried for approx. 10 minutes at approx. 65 - 70°C under air circulation. After drying, the paper was brought into contact with a pressure-sensitive adhesive surface

på et dobbeltsidig, trykkomf intlig.,. forsterket klebebånd av . celiu-losefi.bre, spaltet på langs til strimler med en bredde av 5?1 mm og oppspolet til. ruller. En rull ble deretter' anbragt på en akse, og et vokspapirlag eller -foring ble fjernet f"ra den ytre klebeoverfiate til det dobbeltsidige, trykkomfintlige bånd bundet til papiret. Den eksponerte overflate til det trykkomfintlige bånd ble kontinuerlig bundet over heie rullens lengde.til en overflate av et 8,3 cm bredt ark av poly s ty rorifi im med en tykkelse av 0,5 mm. Det trykkomf Intlige bånd ble fast, hund ot til filmen. Laminatet ble over strimlens lengde oppdelt i strimler med ert lengde av 511 mm. Den på denne måte dannede anordning ble hr tgt i kontakt med undersokelsesopplosningene i£olge eksempel l<!>t-, og det oppsto en farve forandring som angitt i. eksempel lheon a double-sided, print-friendly.,. reinforced adhesive tape of . celiu-losefi.bre, split lengthwise into strips with a width of 5?1 mm and wound up to. rolls. A roll was then placed on an axis, and a wax paper layer or liner was removed from the outer adhesive surface of the double-sided pressure-sensitive tape bonded to the paper. The exposed surface of the pressure-sensitive tape was continuously bonded over the length of the roll. a surface of an 8.3 cm wide sheet of 0.5 mm thick poly s ty rorif i m. The press comfort tape became fixed, dog ot to the film. The laminate was divided along the length of the strip into strips of ert length of 511 etc. The device formed in this way was brought into contact with the test solutions in example l<!>t-, and a color change occurred as indicated in example lhe

Claims

1. , Stabilized test device for bilirubin, characterized in that it consists of a preferably absorbent carrier material with a dry residue of a stable diazonium salt solution, which residue is the reaction product formed by bringing together an organic polar solvent, an arylamine, water, a soluble nitrite , qt stabilizer and a sulfonic acid.

2. Test device according to claim 1, characterized in that the stabilizer is an aromatic or aliphatic sulphonic acid salt, sulphate or sulphonate.

3- Test device according to claims 1-2, characterized in that the aromatic sulphonic acid salt consists of the disodium salt of 1,5-naphthalenedisulphonic acid, the sodium salt of 2-naphthalene sulphonic acid or the disodium salt of 4,4'-diamino-2,2*-biphenyldisulphonic acid.

4- Test device according to claims 1-3, characterized in that the stabilizing agent is sodium lauryl sulfate.

5. Test device according to claims 1 - 4> characterized in that the polar solvent is methanol, the arylamine is 2,4-dichloroaniline, the soluble nitrite is sodium nitrite, the stabilizing agents are the disodium salt of 1,5-naphthalenedisulfonic acid and sodium lauryl sulfate, and the sulfonic acid is sulfosalicylic acid.

6. Method for producing a test device according to claims 1-5, characterized in that a polar solvent, an arylamine, a soluble nitrite, a stabilizer and a sulphonic acid are mixed in the specified order at room temperature to form a stable diazonium salt solution , after which a carrier material is brought into contact with the diazo solution and dried so that a dry residue of the diazonium salt solution remains on it.