NL8701863A - Werkwijze ter bereiding van lysofosfolipiden, die nagenoeg geen lysofosfolipiden behalve lysofosfatidycholine (lpc) bevatten. - Google Patents
Werkwijze ter bereiding van lysofosfolipiden, die nagenoeg geen lysofosfolipiden behalve lysofosfatidycholine (lpc) bevatten. Download PDFInfo
- Publication number
- NL8701863A NL8701863A NL8701863A NL8701863A NL8701863A NL 8701863 A NL8701863 A NL 8701863A NL 8701863 A NL8701863 A NL 8701863A NL 8701863 A NL8701863 A NL 8701863A NL 8701863 A NL8701863 A NL 8701863A
- Authority
- NL
- Netherlands
- Prior art keywords
- lysophospholipids
- lpc
- mixture
- solvent
- ion exchanger
- Prior art date
Links
- 238000000034 method Methods 0.000 title claims description 41
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 title claims description 12
- RYCNUMLMNKHWPZ-SNVBAGLBSA-N 1-acetyl-sn-glycero-3-phosphocholine Chemical compound CC(=O)OC[C@@H](O)COP([O-])(=O)OCC[N+](C)(C)C RYCNUMLMNKHWPZ-SNVBAGLBSA-N 0.000 claims description 68
- 239000000203 mixture Substances 0.000 claims description 55
- 150000002632 lipids Chemical class 0.000 claims description 47
- 150000002500 ions Chemical class 0.000 claims description 30
- 230000007935 neutral effect Effects 0.000 claims description 27
- 239000002904 solvent Substances 0.000 claims description 23
- 239000007858 starting material Substances 0.000 claims description 16
- 239000002798 polar solvent Substances 0.000 claims description 10
- 239000012454 non-polar solvent Substances 0.000 claims description 6
- 239000011877 solvent mixture Substances 0.000 claims description 2
- OKKJLVBELUTLKV-UHFFFAOYSA-N Methanol Chemical compound OC OKKJLVBELUTLKV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 27
- 150000003904 phospholipids Chemical class 0.000 description 26
- 239000000047 product Substances 0.000 description 24
- CSCPPACGZOOCGX-UHFFFAOYSA-N Acetone Chemical compound CC(C)=O CSCPPACGZOOCGX-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 22
- JZNWSCPGTDBMEW-UHFFFAOYSA-N Glycerophosphorylethanolamin Natural products NCCOP(O)(=O)OCC(O)CO JZNWSCPGTDBMEW-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 19
- CWRILEGKIAOYKP-SSDOTTSWSA-M [(2r)-3-acetyloxy-2-hydroxypropyl] 2-aminoethyl phosphate Chemical compound CC(=O)OC[C@@H](O)COP([O-])(=O)OCCN CWRILEGKIAOYKP-SSDOTTSWSA-M 0.000 description 19
- 239000000843 powder Substances 0.000 description 17
- 229920001429 chelating resin Polymers 0.000 description 13
- 239000000126 substance Substances 0.000 description 13
- 239000002198 insoluble material Substances 0.000 description 12
- 238000004458 analytical method Methods 0.000 description 11
- LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N Ethanol Chemical compound CCO LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 10
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N water Substances O XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 10
- 229920005989 resin Polymers 0.000 description 9
- 239000011347 resin Substances 0.000 description 9
- HEDRZPFGACZZDS-UHFFFAOYSA-N Chloroform Chemical compound ClC(Cl)Cl HEDRZPFGACZZDS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 8
- 230000000694 effects Effects 0.000 description 8
- 210000002969 egg yolk Anatomy 0.000 description 8
- 239000007795 chemical reaction product Substances 0.000 description 7
- 235000013345 egg yolk Nutrition 0.000 description 7
- ZPDQFUYPBVXUKS-YADHBBJMSA-N 1-stearoyl-sn-glycero-3-phosphoserine Chemical compound CCCCCCCCCCCCCCCCCC(=O)OC[C@@H](O)COP(O)(=O)OC[C@H](N)C(O)=O ZPDQFUYPBVXUKS-YADHBBJMSA-N 0.000 description 6
- 102000002322 Egg Proteins Human genes 0.000 description 6
- 108010000912 Egg Proteins Proteins 0.000 description 6
- 102000004190 Enzymes Human genes 0.000 description 6
- 108090000790 Enzymes Proteins 0.000 description 6
- HEMHJVSKTPXQMS-UHFFFAOYSA-M Sodium hydroxide Chemical compound [OH-].[Na+] HEMHJVSKTPXQMS-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 6
- 229940088598 enzyme Drugs 0.000 description 6
- UOXRPRZMAROFPH-IESLQMLBSA-N lysophosphatidylinositol Chemical compound CCCCCCCCCCCCCCCC(=O)OC[C@@H](O)COP(O)(=O)OC1[C@H](O)[C@@H](O)C(O)[C@@H](O)[C@H]1O UOXRPRZMAROFPH-IESLQMLBSA-N 0.000 description 6
- 238000003756 stirring Methods 0.000 description 6
- 102100037611 Lysophospholipase Human genes 0.000 description 5
- 108010058864 Phospholipases A2 Proteins 0.000 description 5
- 239000003513 alkali Substances 0.000 description 5
- 210000004027 cell Anatomy 0.000 description 5
- 238000006911 enzymatic reaction Methods 0.000 description 5
- 150000004665 fatty acids Chemical group 0.000 description 5
- 238000001914 filtration Methods 0.000 description 5
- 230000007062 hydrolysis Effects 0.000 description 5
- 238000006460 hydrolysis reaction Methods 0.000 description 5
- 239000003456 ion exchange resin Substances 0.000 description 5
- 229920003303 ion-exchange polymer Polymers 0.000 description 5
- 238000003860 storage Methods 0.000 description 5
- 229920002125 Sokalan® Polymers 0.000 description 4
- 239000002244 precipitate Substances 0.000 description 4
- 230000003381 solubilizing effect Effects 0.000 description 4
- UHOVQNZJYSORNB-UHFFFAOYSA-N Benzene Chemical compound C1=CC=CC=C1 UHOVQNZJYSORNB-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- YMWUJEATGCHHMB-UHFFFAOYSA-N Dichloromethane Chemical compound ClCCl YMWUJEATGCHHMB-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- IMNFDUFMRHMDMM-UHFFFAOYSA-N N-Heptane Chemical compound CCCCCCC IMNFDUFMRHMDMM-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- VYPSYNLAJGMNEJ-UHFFFAOYSA-N Silicium dioxide Chemical compound O=[Si]=O VYPSYNLAJGMNEJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 230000002378 acidificating effect Effects 0.000 description 3
- 235000014113 dietary fatty acids Nutrition 0.000 description 3
- 239000003814 drug Substances 0.000 description 3
- 239000000284 extract Substances 0.000 description 3
- 238000000605 extraction Methods 0.000 description 3
- 239000000194 fatty acid Substances 0.000 description 3
- 229930195729 fatty acid Natural products 0.000 description 3
- 238000005342 ion exchange Methods 0.000 description 3
- 239000000463 material Substances 0.000 description 3
- 244000005700 microbiome Species 0.000 description 3
- VLKZOEOYAKHREP-UHFFFAOYSA-N n-Hexane Chemical compound CCCCCC VLKZOEOYAKHREP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 229940042880 natural phospholipid Drugs 0.000 description 3
- 238000000746 purification Methods 0.000 description 3
- 239000000741 silica gel Substances 0.000 description 3
- 229910002027 silica gel Inorganic materials 0.000 description 3
- JQWAHKMIYCERGA-UHFFFAOYSA-N (2-nonanoyloxy-3-octadeca-9,12-dienoyloxypropoxy)-[2-(trimethylazaniumyl)ethyl]phosphinate Chemical compound CCCCCCCCC(=O)OC(COP([O-])(=O)CC[N+](C)(C)C)COC(=O)CCCCCCCC=CCC=CCCCCC JQWAHKMIYCERGA-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- RTZKZFJDLAIYFH-UHFFFAOYSA-N Diethyl ether Chemical compound CCOCC RTZKZFJDLAIYFH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 241000196324 Embryophyta Species 0.000 description 2
- VEXZGXHMUGYJMC-UHFFFAOYSA-N Hydrochloric acid Chemical compound Cl VEXZGXHMUGYJMC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 241001465754 Metazoa Species 0.000 description 2
- OFBQJSOFQDEBGM-UHFFFAOYSA-N Pentane Chemical compound CCCCC OFBQJSOFQDEBGM-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- PNEYBMLMFCGWSK-UHFFFAOYSA-N aluminium oxide Inorganic materials [O-2].[O-2].[O-2].[Al+3].[Al+3] PNEYBMLMFCGWSK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 125000000129 anionic group Chemical group 0.000 description 2
- 210000004556 brain Anatomy 0.000 description 2
- 125000002091 cationic group Chemical group 0.000 description 2
- 239000000470 constituent Substances 0.000 description 2
- 239000002537 cosmetic Substances 0.000 description 2
- 239000012043 crude product Substances 0.000 description 2
- 229940079593 drug Drugs 0.000 description 2
- 230000002255 enzymatic effect Effects 0.000 description 2
- 239000012467 final product Substances 0.000 description 2
- 235000013305 food Nutrition 0.000 description 2
- 238000005259 measurement Methods 0.000 description 2
- 235000011837 pasties Nutrition 0.000 description 2
- 229920001467 poly(styrenesulfonates) Polymers 0.000 description 2
- 239000012264 purified product Substances 0.000 description 2
- 239000000523 sample Substances 0.000 description 2
- 239000004094 surface-active agent Substances 0.000 description 2
- NWUYHJFMYQTDRP-UHFFFAOYSA-N 1,2-bis(ethenyl)benzene;1-ethenyl-2-ethylbenzene;styrene Chemical compound C=CC1=CC=CC=C1.CCC1=CC=CC=C1C=C.C=CC1=CC=CC=C1C=C NWUYHJFMYQTDRP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- JLPULHDHAOZNQI-ZTIMHPMXSA-N 1-hexadecanoyl-2-(9Z,12Z-octadecadienoyl)-sn-glycero-3-phosphocholine Chemical compound CCCCCCCCCCCCCCCC(=O)OC[C@H](COP([O-])(=O)OCC[N+](C)(C)C)OC(=O)CCCCCCC\C=C/C\C=C/CCCCC JLPULHDHAOZNQI-ZTIMHPMXSA-N 0.000 description 1
- IIZPXYDJLKNOIY-JXPKJXOSSA-N 1-palmitoyl-2-arachidonoyl-sn-glycero-3-phosphocholine Chemical compound CCCCCCCCCCCCCCCC(=O)OC[C@H](COP([O-])(=O)OCC[N+](C)(C)C)OC(=O)CCC\C=C/C\C=C/C\C=C/C\C=C/CCCCC IIZPXYDJLKNOIY-JXPKJXOSSA-N 0.000 description 1
- ZIIUUSVHCHPIQD-UHFFFAOYSA-N 2,4,6-trimethyl-N-[3-(trifluoromethyl)phenyl]benzenesulfonamide Chemical compound CC1=CC(C)=CC(C)=C1S(=O)(=O)NC1=CC=CC(C(F)(F)F)=C1 ZIIUUSVHCHPIQD-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 241000283690 Bos taurus Species 0.000 description 1
- 240000002791 Brassica napus Species 0.000 description 1
- 235000004977 Brassica sinapistrum Nutrition 0.000 description 1
- 102100031151 C-C chemokine receptor type 2 Human genes 0.000 description 1
- 101710149815 C-C chemokine receptor type 2 Proteins 0.000 description 1
- OYPRJOBELJOOCE-UHFFFAOYSA-N Calcium Chemical compound [Ca] OYPRJOBELJOOCE-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 241000195649 Chlorella <Chlorellales> Species 0.000 description 1
- 241000235555 Cunninghamella Species 0.000 description 1
- 244000068988 Glycine max Species 0.000 description 1
- 235000010469 Glycine max Nutrition 0.000 description 1
- 102000004882 Lipase Human genes 0.000 description 1
- 108090001060 Lipase Proteins 0.000 description 1
- 239000004367 Lipase Substances 0.000 description 1
- 240000007930 Oxalis acetosella Species 0.000 description 1
- 235000008098 Oxalis acetosella Nutrition 0.000 description 1
- 108010019160 Pancreatin Proteins 0.000 description 1
- 102000015439 Phospholipases Human genes 0.000 description 1
- 108010064785 Phospholipases Proteins 0.000 description 1
- 238000010521 absorption reaction Methods 0.000 description 1
- 230000009286 beneficial effect Effects 0.000 description 1
- 235000013361 beverage Nutrition 0.000 description 1
- 238000009835 boiling Methods 0.000 description 1
- 239000011575 calcium Substances 0.000 description 1
- 229910052791 calcium Inorganic materials 0.000 description 1
- 230000003327 cancerostatic effect Effects 0.000 description 1
- 239000000969 carrier Substances 0.000 description 1
- 238000006243 chemical reaction Methods 0.000 description 1
- 239000003795 chemical substances by application Substances 0.000 description 1
- 238000004440 column chromatography Methods 0.000 description 1
- 239000013256 coordination polymer Substances 0.000 description 1
- 230000020176 deacylation Effects 0.000 description 1
- 238000005947 deacylation reaction Methods 0.000 description 1
- 229910003460 diamond Inorganic materials 0.000 description 1
- 239000010432 diamond Substances 0.000 description 1
- 239000008344 egg yolk phospholipid Substances 0.000 description 1
- 229940068998 egg yolk phospholipid Drugs 0.000 description 1
- 230000001804 emulsifying effect Effects 0.000 description 1
- 238000001704 evaporation Methods 0.000 description 1
- 230000008020 evaporation Effects 0.000 description 1
- 230000001747 exhibiting effect Effects 0.000 description 1
- 238000002474 experimental method Methods 0.000 description 1
- 239000000796 flavoring agent Substances 0.000 description 1
- 235000019634 flavors Nutrition 0.000 description 1
- 238000004108 freeze drying Methods 0.000 description 1
- 230000002538 fungal effect Effects 0.000 description 1
- 239000000499 gel Substances 0.000 description 1
- 239000011521 glass Substances 0.000 description 1
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-M hydroxide Chemical compound [OH-] XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 1
- 125000002887 hydroxy group Chemical group [H]O* 0.000 description 1
- 239000000787 lecithin Substances 0.000 description 1
- 229940067606 lecithin Drugs 0.000 description 1
- 235000010445 lecithin Nutrition 0.000 description 1
- 235000019421 lipase Nutrition 0.000 description 1
- 239000006210 lotion Substances 0.000 description 1
- 238000004519 manufacturing process Methods 0.000 description 1
- 238000000691 measurement method Methods 0.000 description 1
- 239000000693 micelle Substances 0.000 description 1
- 238000002156 mixing Methods 0.000 description 1
- 229940055695 pancreatin Drugs 0.000 description 1
- 239000002304 perfume Substances 0.000 description 1
- 229940067631 phospholipid Drugs 0.000 description 1
- BDERNNFJNOPAEC-UHFFFAOYSA-N propan-1-ol Chemical compound CCCO BDERNNFJNOPAEC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000012488 sample solution Substances 0.000 description 1
- 238000000926 separation method Methods 0.000 description 1
- 230000035943 smell Effects 0.000 description 1
- 239000011343 solid material Substances 0.000 description 1
- 238000000638 solvent extraction Methods 0.000 description 1
- 238000001179 sorption measurement Methods 0.000 description 1
- 239000008347 soybean phospholipid Substances 0.000 description 1
- 241000894007 species Species 0.000 description 1
- 239000000758 substrate Substances 0.000 description 1
- 238000003786 synthesis reaction Methods 0.000 description 1
- 238000005809 transesterification reaction Methods 0.000 description 1
- 239000000052 vinegar Substances 0.000 description 1
- 235000021419 vinegar Nutrition 0.000 description 1
- 229940088594 vitamin Drugs 0.000 description 1
- 239000011782 vitamin Substances 0.000 description 1
- 229930003231 vitamin Natural products 0.000 description 1
- 235000013343 vitamin Nutrition 0.000 description 1
Classifications
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07F—ACYCLIC, CARBOCYCLIC OR HETEROCYCLIC COMPOUNDS CONTAINING ELEMENTS OTHER THAN CARBON, HYDROGEN, HALOGEN, OXYGEN, NITROGEN, SULFUR, SELENIUM OR TELLURIUM
- C07F9/00—Compounds containing elements of Groups 5 or 15 of the Periodic Table
- C07F9/02—Phosphorus compounds
- C07F9/06—Phosphorus compounds without P—C bonds
- C07F9/08—Esters of oxyacids of phosphorus
- C07F9/09—Esters of phosphoric acids
- C07F9/10—Phosphatides, e.g. lecithin
- C07F9/103—Extraction or purification by physical or chemical treatment of natural phosphatides; Preparation of compositions containing phosphatides of unknown structure
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A23—FOODS OR FOODSTUFFS; TREATMENT THEREOF, NOT COVERED BY OTHER CLASSES
- A23J—PROTEIN COMPOSITIONS FOR FOODSTUFFS; WORKING-UP PROTEINS FOR FOODSTUFFS; PHOSPHATIDE COMPOSITIONS FOR FOODSTUFFS
- A23J7/00—Phosphatide compositions for foodstuffs, e.g. lecithin
Landscapes
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- Organic Chemistry (AREA)
- Health & Medical Sciences (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Molecular Biology (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Food Science & Technology (AREA)
- Polymers & Plastics (AREA)
Description
a.
♦ V.0. 9258
Werkwijze ter bereiding van lysofosfolipiden, die nagenoeg geen lysofosfolipiden behalve lysofosfatidylcholine (LPC) bevatten.
De uitvinding heeft betrekking op een nieuwe werkwijze voor de bereiding van lysofosfolipiden, die nagenoeg geen lysofosfolipiden behalve lysofosfatidylcholine (LPC) bevatten.
5 Het lysofosfolypiden wordt verkregen door de verwij dering van een vetzuureenheid per molecuul uit een fosfoly-pide en de invoering van een hydroxylgroep in de plaats daarvan. Het lysofosfolipide, dat sterker hydrofiel is dan het fosfolipide, heeft niet alleen het goede emulserende vermogen, 10 dat eigen is aan het fosfolipide, maar is, naar gezegd wordt, tevens in staat tot vorming van bolvormige micellen onder solubilisering van in water onoplosbare stoffen in transparante toestand, zodat verwacht kan worden dat het kan worden toegepast als solubiliseringsmiddel op het gebied van voe-15 dingsmiddelen, cosmetica en geneesmiddelen.
Tot nu toe werden de lysofosfolipiden in het algemeen bereid door inwerking van een enzyme op natuurlijke fosfolipiden of fosfolipe-bevattende stoffen, afgeleid van organismen, of door onderwerping daarvan aan alkali-hydro-20 lyse. Het aldus verkregen lysofosfolipide is gewoonlijk in de vorm van een mengsel, dat lysofosfolipiden bevat, zoals lysofosfatidylethanolamine (LPE) lysofosfatidylinositol (LPI) en lysofosfatidylserine (LPS) naast LPC.
Een dergelijk lysofosfolipidemengsel kan op zich-25 zelf worden gebruikt als een natuurlijk capillair actief materiaal of solubiliseringsmiddel, maar verandert bij opslag gedurende langere tijd geleidelijk van kleur van gewoonlijk lichtgeel of wit tot bruin en gaat zelfs onaangenaam rieken. Dergelijke verschijnselen van bederf blijken sterker 30 op te treden naarmate het gehalte aan andere lysofosfolypiden dan LPC groter is. Bovendien is gebleken dat naarmate het LPC-gehalte van het lysofosfolipide groter is, de met behulp 8701863 -2- * £.
van het lysofosfolipide geëmulgeerde of gesolubiliseerde produkten stabieler zijn.
Indien derhalve lysofosfolipiden zouden kunnen worden bereid/ die nagenoeg geen andere lysofosfolipiden dan 5 LPC bevatten, zouden dergelijke produkten vanuit commercieel gezichtspunt zeer gunstig en waardevol zijn.
Daar LPC qua molecuulstructuur analoog is aan de andere lysofosfolipiden en alle lysofosfolipiden capillair actieve verbindingen zijn, kunnen de andere lysofosfolipiden 10 dan LPC niet gemakkelijk uit een lysofosfolipidemengsel worden verwijderd door een eenvoudige scheidingsmethode, zoals extractie met een oplosmiddel. De verwijdering uit een dergelijk mengsel is des te moeilijker omdat wat de samenstellende vetzuren betreft noch LPC noch de andere lysofosfolipiden 15 een enkel samenstellend vetzuur bevatten, maar hun respectieve specifieke samenstellingen hebben, die een gevolg zijn van de uitgangsmaterialen.
Hoewel de verwijdering van de bedoelde lysofosfolipiden met de beschreven moeilijkheden gepaard gaat, kunnen 20 de andere lysofosfolipiden dan LPC met grote nauwkeurigheid op laboratoriumschaal worden verwijderd door bijvoorbeeld kolomchromatografie met silicagel of alumina. Uit economisch oogpunt en in het bijzonder de kosten zou schaalvergroting tot commercieel niveau echter nadelig zijn.
25 Onder deze omstandigheden is een doel van de uit vinding het verschaffen van een werkwijze, waarmee lysofosfolipiden, die practisch geen andere lysofosfolipiden bevatten dan LPC, op commerciële schaal tegen lage kosten en op eenvoudige wijze kunnen worden verkregen.
30 Er werd gevonden dat indien lysofosfolipiden worden opgelost in een polair oplosmiddel of een mengsel van een polair oplosmiddel en een niet-polair oplosmiddel en vervolgens in aanraking worden gebracht met een ionenuitwisselaar, de ionenuitwisselaar de lysofosfolipiden behalve LPC selectief 35 en efficiënt adsorberen en verwijderen.
8701863 »
X
-3-
De uitvinding heeft derhalve betrekking op een werkwijze ter bereiding van lysofosfolipiden, die nagenoeg geen andere lysofosfolipiden bevatten dan LPC, welke werkwijze hierdoor wordt gekenmerkt, dat de lysofosfolipiden worden op-5 gelost in een polair oplosmiddel of een mengsel van een polair oplosmiddel en een niet-polair oplosmiddel, de verkregen oplossing in aanraking wordt gebracht met een ionenuitwisselaar en het oplosmiddel uit de oplossing wordt afgedestilleerd.
De lysofosfolipiden, waarvan bij de werkwijze volgens 10 de uitvinding wordt uitgegaan, zijn lipidefracties, die lysofosfolipiden bevatten zoals LPI en LPS naast LPC.
Specifieke voorbeelden van zulke lysofosfolipiden zijn (a) lysofosfolipiden verkregen door inwerking van een enzyme zoals lipase (EC3, 1, 1, 3), fosfolipase A^ (EC3, 1, 1, 32) 15 of fosfolipase A2 (EC3, 1, 1, 4) op natuurlijke fosfolipiden of fosfolipide-bevattende stoffen, afgeleid van organismen, zoals dierlijk of plantaardig weefsel of microörganismecellen, die een grote hoeveelheid fosfolipiden bevatten (bijvoorbeeld eigeel, runderhersens, varkenshersens, sojabonen, raapzaad, 20 Chlorella cellen en schimmelcellen (waaronder Cunninghamella microörganismecellen)), ruwe fosfolipide-extracten, verkregen uit zulk dierlijk of plantaardig weefsel of microörganismecellen ( bijvoorbeeld in de handel verkrijgbaar sojaboonfosfo-lipide en in de handel verkrijgbaar eigeelfosfolipide), en 25 gezuiverde fosfolipiden daarvan, of door onderwerping van deze fosfolipiden of fosfolipide-bevattende stoffen aan alka- li-hydrolyse, welke enzymatische inwerking en alkali-hydrolyse beide bedoeld zijn ter omzetting van de fosfolipiden in lysofosfolipiden en (b) lysofosfolipiden met specifieke vetzuur-30 eenheden, verkregen door de semisynthese methode, die een combinatie is van de enzymatische behandeling of alkali-hydrolyse met chemische synthese, bijvoorbeeld door onderwerping van gezuiverd eigeellecithine (dat ongeveer 80% PC en ongeveer 18% PE bevat) aan alkali-hydrolyse ter deacylering, 35 herestering van het aldus gedeacyleerde eigeellecithine met een specifiek vetzuur, gevolgd door behandeling van het re- 8701663 9 -4- sulterende eigeellecithine met fosfolipase A2 ter verkrijging van het gewenste lysofosfolipide ( dat ongeveer 80% LPC en ongeveer 18% LPE bevat).
Het oplosmiddel voor de lysofosfolipiden, waarvan 5 bij de werkwijze volgens de uitvinding wordt uitgegaan, is een polair oplosmiddel, zoals methanol, ethanol, propanol, aceton of water, of een mengsel daarvan met een niet-polair oplosmiddel, zoals n-pentaan, n-hexaan, n-heptaan, chloroform, dichloormethaan, ether of benzeen. Een niet-polair 10 oplosmiddel alleen kan de lysofosfolipiden niet gemakkelijk oplossen, zodat geen doelmatige verwijdering van andere lysofosfolipiden dan LPC kan worden verwacht. Hoewel de mengver-houding van het polaire oplosmiddel van het niet-polaire oplosmiddel in het oplosmiddelmengsel niet bijzonder beperkt is, 15 verdient het de voorkeur dat het polaire oplosmiddel in het mengsel overheerst. Zo kan bijvoorbeeld de hoeveelheid niet-polair oplosmiddel in het mengsel met voordeel 20% (v/v) of minder zijn.
De concentratie van de lysofosfolipiden in het oplos-20 middel, dat wil zeggen de concentratie van de lysofosfolipiden in de verkregen oplossing, bedraagt bij voorkeur 1-10% (gew./vol.). Een concentratie van minder dan 1% is niet economisch, omdat de benodigde hoeveelheid oplosmiddel dan veel te groot is, maar indien de concentratie 10% over-25 schrijdt worden de lysofosfolipiden moeilijk oplosbaar.
De te gebruiken ionenuitwisselaar is niet bijzonder beperkt, zolang de ionenuitwisselaar een vast materiaal is, dat in staat is tot ionenuitwisseling in het bovenbeschreven oplosmiddel. Voorbeelden van ionenuitwisselaars zijn ionen-30 uitwisselende harsen, ionenuitwisselende gels of structuren, die anorganische substraten omvatten, zoals silicagel en alumina met ionenuitwisselende groepen (elektrisch geladen groepen, covalent gebonden aan de oppervlakken daarvan).. Vele in de handel verkrijgbare sterk of zwakzure kationogene uit-35 wisselaars of sterk of zwak-basische anionogene uitwisselaars zijn geschikt om volgens de uitvinding te worden toegepast.
8701863 -5-
Specifieke voorbeelden van zulke kationogene uitwisselaars zijn Amberlite IR-120B en IRC-50 (Rohm & Haas Co.) DuoLite C-20 en C-433 (Diamond Shamrock Corp.), Dowex HCR-S en CCR-2 (Dow Chemical Co.) en DIAION SK-1B en WK-10 5 (Mitubishi Kasei K.K., Japan) en specifieke voorbeelden van anionogene uitwisselaars zijn Amberlite IRA-400 en IRA-93, DuoLite A-101D en A-368, Dowex 11 and MWA-1 en DIAION Sa-10A en WA-30. Deze ionenuitwisselaars kunnen op zichzelf worden gebruikt, maar kunnen ook hetzij in de vorm van een mengsel 10 in elke verhouding van twee of meer van de genoemde materialen ongeacht de speciës hetzij na elkaar worden toegepast. Zo kan bijvoorbeeld een mengsel van een zure ionenuitwisselaar en een basische ionenuitwisselaar in een gewichtsverhouding van 3:1 tot 1:3 met voordeel worden gebruikt, en een dergelijke 15 uitvoeringsvorm heeft de voorkeur. Ter verbetering van de adsorptieëfficientie wordt voor praktisch gebruik de zure ionenuitwisselaar bereid in de H-vorm en wordt de basische ionenuitwisselaar bereid in de OH-vorm.
De te gebruiken hoeveelheid van de ionenuitwisselaar 20 kan variëren in afhankelijkheid van de hoeveelheid van de andere lysofosfolipiden dan LPC in het uitgangsmateriaal en van het gekozen type ionenuitwisselaar. In het algemeen kan de ionenuitwisselaar met voordeel worden gebruikt in een hoeveelheid, die ten minsten het drievoudige (vol./gew.) is 25 van de andere lysofosfolipiden behalve LPC in het uitgangs-mengsel, daar een hoeveelheid ionenuitwisselaar van minder dan het drievoudige onvoldoende is om het effect op te leveren dat de andere lysofosfolipiden dan LPC worden verwijderd. Bij voorkeur wordt de hoeveelheid ionenuitwisselaar op pas-30 sende wijze gekozen in het traject van het 5- tot 40-voudige (volume/gewicht) van de andere lysofosfolipiden dan LPC in het uitgangsmateriaal. Binnen dit traject is het mogelijk op commerciële schaal de hoeveelheid van de andere lysofosfolipiden dan LPC tot nagenoeg sporenhoeveelheden te verminde-35 ren. Het gebruik van een grotere hoeveelheid ionenuitwisselaar is niet alleen niet economisch, maar verlaagt zelfs de 870185? -6- opbrengst aan het gewenste eindprodukt.
De oplossing van de lysofosfolipide kan met de ionenuitwisselaar in aanraking worden gebracht door de oplossing op conventionele wijze door een kolom te voeren, die gevuld 5 is met een gekozen hoeveelheid van de ionenuitwisselaar, of door een gekozen hoeveelheid van de ionenuitwisselaar onder roeren in de oplossing te suspenderen. Dit contact wordt bij voorkeur uitgevoerd bij een temperatuur beneden het kookpunt van het oplosmiddel, teneinde de verdamping van het op-10 losmiddel te voorkomen.
Bij uitvoering van de werkwijze volgens de uitvinding worden de andere lysofosfolipiden dan LPC door het beschreven contact selectief door de ionenuitwisselaar geadsorbeerd, en het oplosmiddel wordt, bijvoorbeeld onder verlaagde druk, 15 uit de oplossing afgedestilleerd na de selectieve absorptie, indien de oplossing door de kolom is gevoerd, of nadat de ionenuitwisselaar bijvoorbeeld door filtratie is verwijderd, indien de oplossing door roeren met de ionenuitwisselaar in aanraking is geweest.
20 Door toepassing van de werkwijze volgens de uitvinding kunnen in de lysofosfolipiden, waarvan wordt uitgegaan, de andere lysofosfolipiden dan LPC zeer doelmatig worden verminderd, zodat lysofosfolipiden kunnen worden verkregen, die zulke andere lysofosfolipiden nagenoeg niet bevatten. Zoals 25 zal blijken uit de resultaten van de voorbeelden kan in de lysofosfolipiden waarvan wordt uitgegaan, het gehalte aan andere lysofosfolipiden dan LPC op commerciële schaal tot praktisch sporen worden verminderd door toepassing van de ionenuitwisselaar in een hoeveelheid, die ongeveer het vijfvoudige • 30 (volume/gewicht) bedraagt van het gehalte aan andere lysofos folipiden dan LPC. Dat wil zeggen dat slechts een geringe hoeveelheid hars nodig is en dat de procedure bijzonder eenvoudig is. De uitvinding verschaft derhalve een werkwijze, waarmede lysofosfolipiden, die nagenoeg geen andere lysofosfoli-35 piden dan LPC bevatten en derhalve niet blootstaan aan bederf 8701863 -7- tijdens opslag, zoals bruinkleuring of afgifte van een onaangename geur,op commerciële schaal tegen lage kosten op eenvoudige wijze kunnen worden verkregen. Uiteraard kan de werkwijze volgens de uitvinding, indien herhaald toegepast, op 5 geschiktere wijze voor het gewenste doel worden uitgevoerd.
Hoewel het niet de bedoeling is de uitvinding te binden aan enige theorie, wordt aangenomen dat de andere lysofosfolipiden dan LPC effectief kunnen worden verwijderd omdat LPE, LPI, LPS en dergelijke lysofosfolipiden als gevolg 10 van hun aktieve groep meer selectief door de ionenuitwisselaar worden geadsorbeerd dan LPC.
De met de werkwijze volgens de uitvinding verkregen lysofosfolipiden, die zelfs na een lange opslagduur nagenoeg niet blootstaan aan bederf, zoals bruinkleuring of afgifte 15 van een onaangename geur, kunnen ruimer worden toegepast op vele terreinen, onder andere de gebieden van voedingsmiddelen, cosmetica en geneesmiddelen, bijvoorbeeld voor het solubili-seren van in olie oplosbare vitaminen of aroma's in diverse dranken, het solubiliseren van parfums in lotions of het solu-20 biliseren van diverse geneesmiddelen in dragers.
Indien gezuiverde lysofosfolipiden, bijvoorbeeld de gezuiverde lysofosfolipiden die nagenoeg vrij zijn van neutrale lipiden, verkregen op de in de Japanse octrooiaanvrage 177142/1986 beschreven wijze, worden gebruikt als het uit-25 gangsmateriaal voor de werkwijze volgens de uitvinding, kunnen als eindprodukten lysofosfolipiden met een LPC-gehalte van ten minste ongeveer 95% of nagenoeg bestaande uit LPC worden verkregen. Deze LPC produkten hebben het voordeel dat zij de stabiliteit verhogen van geëmulgeerde of gesolubili-30 seerde produkten, die onder toepassing van zulke LPC produkten zijn verkregen, terwijl verder kan worden verwacht dat zij geschikt zijn als uitgangsmaterialen voor fysiologisch actieve lysofosfolipiden, bijvoorbeeld voor carcinostatische middelen.
35 Zelfs indien ruwe lysofosfolipiden, bijvoorbeeld ruwe lysofosfolipiden die neutrale lipiden bevatten, als uitgangs- 8701363 f
Y
-8- materiaal voor de werkwijze volgens de uitvinding worden gebruikt, kunnen uiteindelijk lysofosfolipiden met een LPC gehalte van ten minste ongeveer 95% of in wezen bestaande uit LPC worden verkregen, indien de neutrale lipiden worden 5 verwijderd op de in de Japanse octrooiaanvrage 177142/1986 beschreven wijze, nadat de werkwijze volgens de uitvinding is uitgevoerd.
Wanneer het de bedoeling is lysofosfolipiden, verkregen door inwerking van een enzyme of natuurlijke fosfolipiden 10 of fosfolipide-bevattende stoffen, afkomstig van organismen, te gebruiken als uitgangsmateriaal voor de werkwijze volgens de uitvinding, zullen, mits als uitgangsmateriaal lysofosfolipiden met nagenoeg geen resterende enzyme-activiteit, verkregen op de in de Japanse octrooiaanvrage 106329/1986 be-15 schreven wijze, worden gebruikt, de verkregen eindprodukten nagenoeg geen kwantitatieve vermindering als gevolg van resterende enzyme-aktiviteit vertonen,
De werkwijze volgens de uitvinding zal derhalve, indien uitgevoerd in combinatie met de werkwijzen volgens de Japanse 20 octrooiaanvragen 177142/1986 en 106329/1986, produkten opleveren, die nagenoeg uit LPC bestaan en een uitstekende op-slagstabiliteit vertonen; zulke produkten vinden ruimere toepassing op diverse terreinen.
De uitvinding wordt nader toegelicht aan de hand van 25 de volgende voorbeelden, waarin alle percentages betrekking hebben op het gewicht, tenzij anders wordt vermeld.
Voorbeeld I
(a) Bereiding van ruwe lysofosfolipiden:
Aan 100 kg eigeel werd een oplossing van 5 kg pancre-30 atine (met fosfolipase A2 aktiviteit, geleverd door Wako
Yunyaku K.K., Japan) in 10 kg zuiver water toegevoegd en het mengsel werd gedurende 6 uur onder roeren onderworpen aan een enzymereactie bij 35-45°C, terwijl de pH met IN waterige natriumhydroxyde-oplossing op 7,0 - 8,0 werd gehouden. Het 35 verkregen produkt werd in de verkregen toestand onderworpen aan 8701863 * -9- vriesdroging in overeenstemming met de werkwijze volgens de Japanse octrooiaanvrage 106329/1986, waarbij 47,2 kg gedroogd eigeel met een watergehalte van 1,6% werd verkregen.
Aan het gedroogde eigeel werd 400 liter methanol toe-5 gevoegd, waarna onder roeren gedurende 30 minuten bij 30-40°C een extractie werd uitgevoerd, die gevolgd werd door filtratie. Het aldus verkregen extract werd onder vacuum geconcentreerd, waarbij 21,8 kg van een gele pasta-achtige stof met nagenoeg geen resterende enzyme-aktiviteit werd verkregen.
10 De lipidesamenstelling van deze stof (ruwe lysofosfo- lipiden) werd geanalyseerd met behulp van een IATROSCAN TH-10 (TLC/FID) (geleverd door Yatron K.K., Japan) onder de nader te noemen meetomstandigheden, waarbij gevonden werd dat de stof 74,1% neutrale lipiden en 25,9% fosfolipiden (19,2% LPC, 15 4,8% LPE en 1,9% andere fosfolipiden) bevatte.
Meetomstandigheden
Staaf: Chromarod S-ll (Silicagel)
Ontwikkelingsoplosmiddel: Chloroform: methanol: water = 80 : 35 : 3 (v/v/v) 20 Ontwikkelingsafstand: 10 cm Meting 500 mg van elk proefmonster werd opgelost in 10 ml van een mengsel van chloroform en methanol 2: 1 (v/v) en 1 ynl van de verkregen oplossing werd aangebracht 25 op een staaf. De oplossing van het monster werd ont wikkeld, aan de lucht gedroogd en vervolgens geanalyseerd met behulp van IATROSCAN. De lipidesamenstelling werd bepaald op basis van de oppervlakteverhouding van de respectieve pieken.
30 (b) Bereiding van gezuiverde lysofosfolipiden:
In overeenstemming met de werkwijze volgens de Japanse octrooiaanvrage 177142/1986 werd de zuivering uitgevoerd.
Aan 5 kg van de op bovenbeschreven wijze verkregen ruwe lysofosfolipiden met 50 liter aceton toegevoegd. Het 35 mengsel werd zacht geroerd en 25 ml geconcentreerd zoutzuur werd toegevoegd. Het verkregen mengsel werd gedurende 30 min.
8701863 * r -10- bij 10ÖC krachtig geroerd en het gevormde neerslag werd afgefiltreerd ter verkrijging van in aceton onoplosbaar materiaal. Aan dit onoplosbare materiaal werd 50 liter aceton toegevoegd en het mengsel werd andermaal onder dezelfde omstandigheden 5 geroerd en vervolgens gefiltreerd ter verkrijging van in aceton onoplosbaar materiaal. Deze procedure werd nogmaals herhaald, waarna het oplosmiddel onder vacuum van het in aceton onoplosbare materiaal werd verwijderd, waarbij 1,10 kg van een wit poeder werd verkregen.
10 De lipidesamenstelling van dit poeder werd bepaald met behulp van een IATROSCAN TH-10 volgens de beschreven meetmethode (in alle voorbeelden van de uitvinding wordt de lipidesamenstelling op de beschreven wijze geanalyseerd), waarbij werd gevonden dat het witte poeder 1,5% neutrale li-15 pidenen98,5 fosfolipiden (82,1% LPC, 15,2% LPE en 1,2% andere fosfolipiden) bevatte.
(c) Uitvoering van de werkwijze volgens de uitvinding:
Van het verkregen witte poeder werd 600 g opgelost in 12 liter methanol. Aan de oplossing werden 600 ml Amberlite 20 IR-120B (H-type) en 600 ml Amberlite IRA-400 (OH-type) toegevoegd, waarna het mengsel gedurende 1 uur bij 20-40°C zacht werd geroerd, waarna de ionenuitwisselingsharsen door filtreren werden verwijderd. Vervolgens werd het oplosmiddel onder verlaagde druk afgedestilleerd, waarbij 426 g van een wit 25 poeder als eindprodukt werd verkregen. Bij analysering van de lipidesamenstelling van het produkt werd gevonden, dat het 2,3% neutrale lipiden, 97,7% LPC en sporen LPE bevatte.
Het produkt bestond derhalve nagenoeg uit LPC en was dus een LPC-produkt van hoge zuiverheid.
30 Voorbeeld IX
Van het in voorbeeld I (b) verkregen witte poeder werd 400 g opgelost in 12,5 liter van een mengsel van ethanol en chloroform 90 : IQ (v/v). Aan de verkregen oplossing werden 400 ml DuoLite C-20 (H-type) en 600 ml DuoLite A-101D 35 (OH-type) toegevoegd. Het mengsel werd gedurende 1 uur bij 20-40°C zacht geroerd en vervolgens gefiltreerd ter verwijde- 870 1 863 ft -11- ring van de harsen. Daarna werd het oplosmiddel onder verlaagde druk afgedestilleerd, waarbij 272 g van een wit poeder (LPC-produkt) werd verkregen.
Bij analyse van de lipidesamenstelling van het produkt 5 werd gevonden dat het 2,8% neutrale lipiden, 97,2% LPC en sporen LPE bevatte.
Voorbeeld III
(a) Bereiding van ruwe lysofosfolipiden!
Aan 60 kg van een in de handel verkrijgbaar sojaboon-10 fosfolipideprodukt (38% neutrale lipiden en 62% fosfolipiden) werd een oplossing toegevoegd van 100 g van een fosfolipase A2 preparaat in 3 liter zuiver water, waarna het mengsel gedurende 48 uur onder roeren bij 55°C werd onderworpen aan een enzymereactie, terwijl de pH met een IN waterige calcium-15 hydroxydeoplossing op 8,0-8,5 werd gehouden. Het verkregen enzymereactieprodukt werd onderworpen aan de Folch extractie methode (Yasuhiko Fujino, "Seibutsu-kagaku Jikken-ho 9,
Shishitsu Bunseki-ho Nyumon (TheElementary Lipid Analysis: Biochemical Experimental Method 9)", Gakkai Shuppan Center 20 (1978), biz. 42), waarbij 56,0 kg ruwe lysofosfolipiden werd verkregen.
Bij analyse van de lipidesamenstelling van de ruwe lysofosfolipiden werd gevonden, dat zij 39,0% neutrale lipiden en 61,0% fosfolipiden (LPC + LPE + LPI + LPS in totaal 25 58,5%) bevatte.
(b) Bereiding van gezuiverde lysofosfolipiden.
De volgende zuiveringsprocedure werd uitgevoerd in overeenstemming met de werkwijze volgens de Japanse octrooiaanvrage 177142/1986.
30 Aan 56,0 g van de ruwe lysofosfolipiden werd 500 1 aceton toegevoegd en het mengsel werd zacht geroerd. Aan de verkregen oplossing werd 600 mlijsazijn toegevoegd, waarna het mengsel gedurende 30 minuten bij 10°C krachtig werd geroerd. Het gevormde neerslag werd afgefiltreerd ter verkrij-35 ging van in aceton onoplosbaar materiaal. Aan dit onoplosbare 8701863 β e -12- mater iaal werd 500 liter aceton toegevoegd, waarna het mengsel andermaal onder dezelfde omstandigheden werd geroerd en gefiltreerd ter verkrijging van in aceton onoplosbaar materiaal. Deze procedure werd nog eenmaal herhaald, waarna het op-5 losmiddel onder vacuum van het in aceton onoplosbare materiaal werd verwijderd, waarbij 24,0 kg van een lichtgeel poeder werd verkregen.
Bij analyse van de lipidesamenstelling van het produkt werd gevonden, dat het 1,5% neutrale lipiden, 26,8% LPC en 10 71,7% andere lysofosfolipiden (bijvoorbeeld LPE, LPI en LPS) bevatte.
(c) Toepassing van de werkwijze volgens de uitvinding.
Van het verkregen lichtgele poeder werd 24,0 kg onder roeren opgelost in 980 liter van een mengsel van ethanol en 15 water 95 : 5 (v/v) (waarbij onoplosbaar materiaal, overeenkomende met ongeveer 30% van de andere lysofosfolipiden dan LPC door filtratie werd verwijderd). Aan de verkregen oplossing werden 30 liter Amberlite IR-120D (H-type) en 45 liter Amberlite IRA-400 (OH-type) toegevoegd, waarna het mengsel 20 gedurende 1 uur bij 20-40°C zacht werd geroerd, waarna het werd gefiltreerd ter verwijdering van de harsen. Daarna werd de gebruikte oplossing nagenoeg onder verlaagde druk afgedestilleerd. Aan de verkregen stof werd 80 liter aceton toegevoegd, waarna het mengsel gedurende 1 uur bij 10-30°C krachtig 25 werd geroerd. Het gevormde neerslag werd afgefiltreerd ter verkrijging van in aceton onoplosbaar materiaal. Het oplosmiddel werd onder vacuum van het in aceton onoplosbare materiaal verwijderd, waarbij 5,1 kg van een wit poeder werd verkregen. Bij analyse van de lipidesamenstelling van het produkt werd 30 gevonden, dat het 1,7% neutrale lipiden, 94,5% LPC en 3,8% andere lysofosfolipiden bevatte.
Voorbeeld IV
(a) Bereiding van ruwe lysofosfolipiden:
Aan 50 kg eigeel werd een oplossing toegevoegd van 35 2,5 kg pancreatine (met fosfolipase A2 aktiviteit, geleverd door Wako Junyaku K.K., Japan) opgelost in 5 kg zuiver water, 87 0 1 8 8 3' * -13- waarna het mengsel gedurende 6 uur onder roeren bij 35-45°C werd onderworpen aan een enzymereactie, terwijl de pH met IN waterige natriumhydroxydeoplossing op 7,0-8,0 werd gehouden. Het verkregen enzyme-reactieprodukt werd in de toestand 5 waarin het was gevriesdroogd in overeenstemming met de werkwijze volgens de Japanse octrooiaanvrage 106329/ 1986 , waarbij 23,0 kg gedroogd eigeel met een watergehalte van 2,1% werd verkregen. Aan dit gedroogde eigeel werd 200 1 methanol toegevoegd en gedurende 30 minuten werd onder roeren bij 10 30-40°C een extractie uitgevoerd, gevolgd door filtratie. Het verkregen extract werd onder vacuum geconcentreerd, waarbij 10,3 kg van een gele pasta-achtige stof met nagenoeg geen resterende enzyme-aktiviteit werd verkregen.
Bij analyse van de lipidesamenstelling van de ver-15 kregen stof (ruwe lysofosfolipiden) werd gevonden dat zij 71,8% neutrale lipiden en 28,2 fosfolipiden (21,0% LPC, 5,1% LPE en 2,1% andere fosfolipiden) bevatte.
(b) Uitvoering van de werkwijze volgens de uitvinding.
Van de ruwe lysofosfolipiden werd 10,2 kg opgelost 20 in 50 liter methanol en aan de verkregen oplossing werden 5,5 liter Amberlite IR-12QD (H-type) en 5,5 liter Amberlite IRA-400 (OH-type) toegevoegd. Het mengsel werd gedurende 1 uur bij 20-40°C zacht geroerd en vervolgens gefiltreerd ter verwijdering van de harsen. Daarna werd de gebruikte oplos-25 sing onder verlaagde druk nagenoeg afgedestilleerd.
Bij analyse van de lipidesamenstelling van het aldus verkregen produkt werd gevonden, dat het 70,5% neutrale lipiden en 29,5% fosfolipiden (29,2% LPC, sporen LPE en 0,3% andere fosfolipiden) bevatte.
30 (c) Zuivering (verwijdering van neutrale lipiden).
Aan het verkregen produkt werd 20 liter aceton toegevoegd, waarna het mengsel gedurende 30 minuten bij 20°C krachtig werd geroerd. Het gevormde neerslag werd afgefiltreerd ter verkrijging van in aceton onoplosbaar materiaal.
35 Dit werd tweemaal herhaald, waarna het oplosmiddel onder va- 8 7 0 1 8 * ? t -14- cuum van het aldus verkregen in aceton onoplosbare materiaal werd verwijderd, waarbij 1,96 kg van een wit poeder (LPC-produkt) werd verkregen.
Bij analyse van de lipidesamenstelling van het pro-5 dukt werd gevonden, dat het 3,4 % neutrale lipiden, 96,65 LPC en sporen LPE bevatte.
Voorbeeld V
(a) Bereiding van ruwe lysofosfolipiden.
De procedure van voorbeeld I werd gevolgd.
10 (b) Bereiding van gezuiverde lysofosfolipiden.
De procedure van voorbeeld I werd gevolgd.
(c) Uitvoering van de werkwijze volgens de uitvinding.
Van het in de procedure (b) verkregen witte poeder (bevattende 1,2% neutrale lipiden en 98,8% fosfolipiden, 15 waarvan 81,9% LPC, 16,0% LPE en 2,1 andere fosfolipiden) werd 100 g opgelost in 5 liter van een mengsel van ethanol en water 95 : 5 (v/v).
Afzonderlijk werden 300 ml Amberlite IR-120D (H-type) en 300 ml Ambrlite IRA-400 (OH-type) homogeen gemengd 20 en gevuld in een glazen kolom met een diameter van 5 cm en een hoogte van 40 cm, die vervolgens vanaf de top werd gewassen met 1 liter van een mengsel van ethanol en water 95 : 5 (v/v), waarna de kolom gereed was voor gebruik.
De oplossing werd bij kamertemperatuur in een hoe-25 veelheid van 10-20 ml/minuut vanaf de top door de kolom gevoerd. Het verkregen eluaat werd verzameld en het oplosmiddel werd onder verlaagde druk afgedestilleerd, waarbij 74,2 g van een wit poeder als eindprodukt werd verkregen.
Bij analyse van de lipidesamenstelling van het pro-30 dukt werd gevonden, dat het 1,9% neutrale lipiden, 98,1% LPC en sporen LPE bevatte.
Geen van de eindprodukten, verkregen in de voorbeelden 1-5 vertoonden bruinkleuring of gaf een onaangename geur af, zelfs niet na opslag gedurende 1 jaar bij kamertempera-35 tuur.
8701863 -15-
De volgende proefvoorbeelden dienen om te tonen dat bij de werkwijze volgens de uitvinding de hoeveelheid ionenuitwisselaar op geschikte wijze kan worden vastgesteld aan de hand van het gehalte aan andere lysofosfolipiden dan 5 LPC in het uitgangsmateriaal, ongeacht of een gezuiverd pro-dukt, dat nagenoeg geen neutrale lipiden bevat, als uitgangsmateriaal wordt gebruikt (proefvoorbeeld 1) dan wel een ruw produkt, dat neutrale lipiden bevat, als uitgangsmateriaal wordt gebruikt (proefvoorbeeld 2).
10 Proefvoorbeeld 1
Van het in voorbeeld I (b) verkregen witte poeder (bevattende 1,5% neutrale lipiden, 82,1% LPC, 15,2% LPE en 1,2% andere fosfolipiden) werd 100 g opgelost in 2,5 liter methanol, waarna de verkregen oplossing werd verdeeld in 15 porties van 0,5 liter. Aan elk van de vijf porties werd een equivalent mengsel van Amberlite IR-120B (H-type) en Amberlite IRA-4Ö0 (OH-type) toegevoegd in 3-voudige, 5-voudi-ge, 25-voudige, 40-voudige en 50-voudige (volume/gewicht) hoeveelhedenten opzichte van het totale gehalte aan andere 20 lysofosfolipiden dan LPC in het witte poeder. Alle porties werden gedurende 1 uur bij 30°C zacht geroerd en vervolgens gefiltreerd ter verwijdering van de harsen.
Een zeer gering gedeelte van elk van de verkregen vijf monsters werd gebruikt voor analyse van de lipide-samen-25 stelling, terwijl de rest van de monsters werd onderworpen aan verwijdering van het oplosmiddel onder verlaagde druk ter bepaling van de opbrengst van het witte poeder. De lipidesa-menstellingen werden geanalyseerd onder de in voorbeeld I genoemde omstandigheden, behalve dat de oplossingen na de ver-30 wijdering van de harsen werden gebruikt als monsters zonder verdere behandeling.
De vekregen resultaten zijn vermeld in tabel A.
8701063 £ -16- i“l •H g ε τ) cm cm σ ωρο —* < sh
S-t O·· dPCOOO iH
(0 ;> —· σ o νσ
Λ l vo CU
rrt O .H CO
Ö —^ -____ Φ Q) ~ '-l Cr> p
g -H 5 U
cn'StN ~ σ O -¾1 vo •Ho' <*p - O ·« >> ζ h "r i" CU o o jj f co σ w γ η éi P —g---- <u ^ z?
C Ή i—I
O Ό B H
.Zj 0 — VO O CO o O O dP * 0 Ό > «. ^ co CU o cm •H ‘ cn σ in r- H -TT-3-K------
0) H
<u ? ε > £ u? o m o o) "S *» *. «.
0 5«. diP 1 rH O CO
Λ r in ^ σ r~ <D i ^ Φ m
Cr> ____ V (L) ~ C o tp d > -H e
J (DO
S OiO00 — cm cm o rH
ffl (Uo** dP-«*» - ïï δ S ^ ^ «5P ^ rH σ Ö IH f ~ O' ^ co ”φ u 3 rH CM CM λ SS ->'*·' o •P -Ö -P ^ o
•Η Φ C5 00 ^ rH
£00 CU _0 Φ
H
U Μ Φ CU PU Ό dj i-i ^ 2 T3 ^
•H
CU
3 g, UH g1
o S
m y ° o, η» 5· >1 °
Hl 8701863 ' s -17-
Proefvoorbeeld 2
Van de in voorbeeld IV (a) verkregen gele pasta-achtige stof (bevattende 71,8% neutrale lipiden, 21,0% LPC, 5,1% LPE en 2,1% andere fosfolipiden) werd 100 g opgelost in 2,5 liter 5 methanol en de verkregen oplossing werd verdeeld in porties van 0,5 liter. Aan elk van de vijf porties werd een equivalent mengsel van Amberlite IR-120B (H-type) en Amberlite IRA-400 (OH-type) toegevoegd in 3-voudige, 5-voudige, 25-vou-dige, 40-voudige en 50-voudige (volume/gewicht) hoeveelheden 10 ten opzichte van het totale gehalte van de andere lysofosfo-lipiden dan LPC in de gele pasta-achtige stof. De vijf porties werden gedurende 1 uur bij 30°C zacht geroerd en vervolgens gefiltreerd ter verwijdering van de harsen.
Een zeer klein gedeelte van elk van de vijf monsters 15 werd gebruikt voor de analyse van de lipidesamenstelling zonder verdere behandeling, zoals in proefvoorbeeld 1, terwijl de rest van elk monster werd onderworpen aan oplosmiddelver-wijdering onder verlaagde druk ter bepaling van de opbrengst van de verkregen lichtgele pasta.-achtige stof.
20 De resultaten zijn vermeld in tabel B.
De met de 25-voudige en 40-voudige hoeveelheden ionen-uitwisselend harsmengsel behandelde monsters werden verder behandeld met aceton (gedurende 30 minuten bij 20°C krachtig geroerd in 200 ml aceton en vervolgens gefiltreerd ter ver-25 krijging van in aceton onoplosbaar materiaal), waarna het oplosmiddel onder vacuum werd verwijderd, waarbij witte poeders (LPC-produkten) die praktisch geen neutrale lipiden (1,0% of minder) bevatten eerden verkregen. De lipidesamenstelling van het met de 25-voudige hoeveelheid hars verkregen 30 produkt was 0,7 neutrale lipiden, 99,3% LPC en een spoor LPE, en de lipidesamenstelling van het met de 40-voudige hoeveelheid hars verkregen produkt was 0,9% neutrale lipiden, 99,1% LPC en een spoor LPE.
8701863 -18- tn Λ •H »£> iH P 00 Γ" T3 p .— - - O * *
P C dP rH 00 O O rH
0 η ^ Γ' Cs) o, r- > ° tn ' <N ° Γ" m 3__
Cn UT P ^
•rH ^ ·=*< CN O - CN
rp R - «-0O * P dP rH 00 &, in 0 3. w p* cn cn oo > *> o J2 ____ rH Cn
<U -rH 1ΖΓ · M
cn Ό g in cn o co 'S' p H - O - - C0odPrH 00 & O P- (D > ^ 'r p* cn cn oo Ë l vo tn in ^ in cn 3 (Ö Λ----
Cn r- Ό Ή Ij ro r~ cn oo sa CQ ö *Ö p —. * - - - -
(1) 3 H I» H VOrHO O
Η O ^ - r- CN CP
CU > A cn i ^
cn m L
W -rl___. ----------- - s-- ff) +> Λ
••H O’ rH
< 5 ·Η g
β "p ^ O rH LD O
EH <U p ^ - -· * *
β O M.ÖPCN CN -CT rH
0 > — r- cn as H I 3 oo ttJ —.
+> (U
tn <u η
cd Cn O
!VHM 00 O rH rH —> n, +J MH 4-1 —> *· > ·> * o
*£i O fi # H rH in CN O
^ U+J 0 - P Μ Ή giiin U ~
CU
fp CU
•Η M
& u w cu •rl Ph Οι Ό rH 1-3 t<3 (h P 4-> Φ cn h Cn nS ö
U CU
-P H
G Λ φ Gj s o 8 7 0 1 b t c> 5 -19-
Uit de in de proefvoorbeelden 1 en 2 verkregen gegevens blijkt dat bij de werkwijze volgens de uitvinding de hoeveelheid van de ionenuitwisselende harsen op geschikte wijze kan worden vastgesteld aan de hand van het gehalte aan andere 5 lysofosfolipiden dan LPC in het uitgangsmateriaal, ongeacht of de als uitgangsmateriaal gebruikte lysofosfolipiden ruwe of gezuiverde produkten zijn, en dat 5- tot 40-voudige hoeveelheden (volume/gewicht) bijzonder effectief zijn voor de verwijdering van andere lysofosfolipiden dan LPC. Anderzijds 10 blijkt echter dat door toepassing van de ionenuitwisselende harsen in 40-voudige hoeveelheid of meer de opbrengsten van de gewenste eindprodukten vermindert, hoewel het verwijderings-effect toeneemt.
8701863
Claims (6)
1. Werkwijze ter bereiding van lysofosfolipiden die nagenoeg geen andere lysofosfolipiden bevatten dan LPC (lysofosfa-tidylcholine), met het kenmerk, dat lysofosfolipiden worden opgelost in een polair oplosmiddel of een mengel van een po- 5 lair oplosmiddel en een niet-polair oplosmiddel, de verkregen oplossing in aanraking wordt gebracht met een ionenuitwisselaar, en vervolgens het oplosmiddel of oplosmiddelmengsel uit de oplossing wordt afgedestilleerd.
2. Werkwijze volgens conclusie 1, met het kenmerk, dat 10 de als uitgangsmateriaal gebruikte lysofosfolipiden gezuiverde lysofosfolipiden zijn, die nagenoeg geen neutrale lipiden bevatten.
3. Werkwijze volgens conclusie 1, met het kenmerk, dat de als uitgangsmateriaal gebruikte lysofosfolipiden ruwe lyso-15 fosfolipiden zijn, die neutrale lipiden bevatten.
4. Werkwijze volgens conclusie 3, met het kenmerk, dat de neutrale lipiden worden verwijderd nadat het oplosmiddel is afgedestilleerd.
5. Werkwijze volgens conclusies 1-4, met het kenmerk, dat 20 de ionenuitwisselaar wordt toegepast in een hoeveelheid, die ten minste het 3-voudige (volume/gewicht) bedraagt van het gehalte aan andere lysofosfolipiden dan LPC in het uitgangsmateriaal.
6. Werkwijze volgens conclusie 5, met het kenmerk, dat de 25 ionenuitwisselaar wordt toegepast in een hoeveelheid, die het 5-voudige tot 40-voudige (volume/gewicht) bedraagt van het gehalte aan andere lysofosfolipiden dan LPC in het uitgangsmateriaal . 8701863
Applications Claiming Priority (2)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP62087347A JPH0657715B2 (ja) | 1987-04-09 | 1987-04-09 | Ｌｐｃ以外のリゾ型リン脂質をほとんど含まないリゾリン脂質の製造方法 |
| JP8734787 | 1987-04-09 |
Publications (1)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| NL8701863A true NL8701863A (nl) | 1988-11-01 |
Family
ID=13912339
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| NL8701863A NL8701863A (nl) | 1987-04-09 | 1987-08-07 | Werkwijze ter bereiding van lysofosfolipiden, die nagenoeg geen lysofosfolipiden behalve lysofosfatidycholine (lpc) bevatten. |
Country Status (4)
| Country | Link |
|---|---|
| US (1) | US4849137A (nl) |
| JP (1) | JPH0657715B2 (nl) |
| DE (1) | DE3726377C2 (nl) |
| NL (1) | NL8701863A (nl) |
Families Citing this family (11)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| JPH02273536A (ja) * | 1989-04-13 | 1990-11-08 | Yakult Honsha Co Ltd | 界面活性剤およびその製造法 |
| US5319116A (en) * | 1992-02-12 | 1994-06-07 | Gary Viole | Lecithin fractions and dilutions, methods for their preparation and pharmacological uses thereof |
| WO1998021215A1 (en) * | 1996-11-13 | 1998-05-22 | Q.P. Corporation | Phospholipid composition |
| JP2003093086A (ja) * | 2001-09-21 | 2003-04-02 | Taiyo Kagaku Co Ltd | アレルゲン低減リゾリン脂質の製造方法 |
| KR100472297B1 (ko) * | 2001-09-27 | 2005-03-07 | 주식회사 두산 | 리소인지질의 수용성 조성물 |
| US20110015154A1 (en) * | 2009-07-20 | 2011-01-20 | Kellermann Gottfried H | Supporting acetylcholine function |
| US20110098265A1 (en) * | 2009-10-28 | 2011-04-28 | Neuroscience, Inc. | Methods for reducing cravings and impulses associated with addictive and compulsive behaviors |
| KR102752868B1 (ko) * | 2016-08-31 | 2025-01-09 | 큐피가부시키가이샤 | 난황 인지질 조성물 및 그 제조 방법, 그리고 그 난황 인지질 조성물을 사용한 지방 유제 및 리포화 제제 |
| CN111902053A (zh) * | 2017-12-21 | 2020-11-06 | 阿克海洋生物南极股份公司 | 溶血磷脂酰胆碱组合物 |
| CN115867293A (zh) | 2020-07-06 | 2023-03-28 | 建明工业 | 溶血磷脂酰肌醇的制备方法 |
| CN114644649B (zh) * | 2020-12-21 | 2023-10-24 | 广州白云山汉方现代药业有限公司 | 一种从蛋黄粉中提取高纯度溶血磷脂酰胆碱的方法 |
Citations (4)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| FR1588863A (nl) * | 1967-08-21 | 1970-03-16 | ||
| EP0054770A2 (de) * | 1980-12-13 | 1982-06-30 | A. Nattermann & Cie. GmbH | Verfahren zur Abtrennung von Öl und/oder Phosphatidylethanolamin aus diese enthaltenden alkohollöslichen Phosphatidylcholin-Produkten |
| EP0115981A1 (fr) * | 1983-02-01 | 1984-08-15 | Synthelabo | Procédé de fractionnement des phosphatides |
| EP0259495A1 (en) * | 1986-02-10 | 1988-03-16 | Q.P. Corporation | Process for producing egg yolk lecithin containing a reduced amount of pe and/or containing substantially no impurities |
Family Cites Families (6)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US2864848A (en) * | 1954-07-19 | 1958-12-16 | Ca Nat Research Council | Method of producing l-alpha-glycerylphosphorylcholine |
| DE3023814A1 (de) * | 1980-06-25 | 1982-01-14 | A. Nattermann & Cie GmbH, 5000 Köln | Verfahren zur gewinnung von oelfreiem phosphatidylcholin |
| US4629588A (en) * | 1984-12-07 | 1986-12-16 | W. R. Grace & Co. | Method for refining glyceride oils using amorphous silica |
| IT1201477B (it) * | 1985-10-04 | 1989-02-02 | Istituto Chemioterapico | Procedimento per la preparazione di l-alfa-glicerilfosforilcolina,l-alfa-glicerilfosforiletanolommina e l-alfa-glicerilfosforilinositolo da lecitine grezze e/o deoleate |
| DE3630676A1 (de) * | 1986-09-09 | 1988-03-17 | Peter Siegfried | Verfahren zur gewinnung von phosphatidylcholin aus einem gemisch von phosphatiden |
| JP2524794B2 (ja) * | 1988-01-27 | 1996-08-14 | 株式会社ヤクルト本社 | 複合プラスミドベクタ― |
-
1987
- 1987-04-09 JP JP62087347A patent/JPH0657715B2/ja not_active Expired - Fee Related
- 1987-08-06 US US07/082,333 patent/US4849137A/en not_active Expired - Fee Related
- 1987-08-07 DE DE3726377A patent/DE3726377C2/de not_active Expired - Fee Related
- 1987-08-07 NL NL8701863A patent/NL8701863A/nl not_active Application Discontinuation
Patent Citations (4)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| FR1588863A (nl) * | 1967-08-21 | 1970-03-16 | ||
| EP0054770A2 (de) * | 1980-12-13 | 1982-06-30 | A. Nattermann & Cie. GmbH | Verfahren zur Abtrennung von Öl und/oder Phosphatidylethanolamin aus diese enthaltenden alkohollöslichen Phosphatidylcholin-Produkten |
| EP0115981A1 (fr) * | 1983-02-01 | 1984-08-15 | Synthelabo | Procédé de fractionnement des phosphatides |
| EP0259495A1 (en) * | 1986-02-10 | 1988-03-16 | Q.P. Corporation | Process for producing egg yolk lecithin containing a reduced amount of pe and/or containing substantially no impurities |
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| DE3726377A1 (de) | 1988-11-10 |
| DE3726377C2 (de) | 1996-06-20 |
| JPH0657715B2 (ja) | 1994-08-03 |
| US4849137A (en) | 1989-07-18 |
| JPS63253092A (ja) | 1988-10-20 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| Gray et al. | Different populations of pig epidermal cells: isolation and lipid composition. | |
| O'Brien et al. | Isolation and fatty acid composition of the plant sulfolipid and galactolipids | |
| DK172721B1 (da) | Fremgangsmåde til fremstilling af æggeblommelecithin i det væsentlige uden urenheder og om ønsket med reduceret phosphatidy | |
| Fiscus et al. | The role of phospholipids in stimulating phosphorylcholine cytidyltransferase activity | |
| Dawson | The role of glycerylphosphorylcholine and glycerylphosphorylethanolamine in liver phospholipid metabolism | |
| DE69011739T2 (de) | Verfahren zur Herstellung von Phosphatidsäure. | |
| NL8701863A (nl) | Werkwijze ter bereiding van lysofosfolipiden, die nagenoeg geen lysofosfolipiden behalve lysofosfatidycholine (lpc) bevatten. | |
| Parrish et al. | Haemolytic glycoglycerolipids from Gymnodinium species | |
| Dawson et al. | The aminoethylphosphonate-containing lipids of rumen protozoa | |
| Ellis et al. | Phosphoinositides. 5. The inositol lipids of ox brain | |
| JP5489439B2 (ja) | プラズマローゲン型リン脂質及びスフィンゴ脂質の製造方法 | |
| Whitehead et al. | Imidazole acrylic acid excretion in kwashiorkor | |
| CA2164124A1 (en) | Process for obtaining highly purified phosphatidylcholine | |
| Sawada et al. | Effect of lipid on protoheme ferro-lyase | |
| JPH04135456A (ja) | 高濃度のリゾホスファチジルコリンを含むリゾレシチンを採取する方法 | |
| KR101995643B1 (ko) | 레시틴으로부터 식품원료로 이용가능한 콜린알포세레이트의 제조방법 | |
| Robles et al. | Preparation of deacylated phosphoglycerides | |
| JP6763521B2 (ja) | ２−ｄｈａ−リゾホスファチジルコリン含有脂質組成物及びその製造方法 | |
| JP3992425B2 (ja) | スフィンゴ糖脂質含有物の製造方法 | |
| JP3531876B2 (ja) | ドコサヘキサエン酸を含むリン脂質組成物の取得方法 | |
| JPH05509222A (ja) | リン脂質からの可溶性ホスファチドの酵素的合成 | |
| GB2065659A (en) | Calciumphosphatidylchlorine- chloride, process for producing the same and pharmaceutical preparations containing the same | |
| Vatassery et al. | Hydrolysis of pyrophosphate and ester phosphates by bone extracts | |
| Di Carlo et al. | Incorporation of radioactivity from 14C-nitroglycerin into rat liver glycogen, lipid, protein, ribonucleic acid and deoxyribonucleic acid | |
| JP2002241385A (ja) | ホスファチジルセリンの分画法 |
Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| BA | A request for search or an international-type search has been filed | ||
| BB | A search report has been drawn up | ||
| BB | A search report has been drawn up | ||
| BC | A request for examination has been filed | ||
| BV | The patent application has lapsed |