NL8501219A - Immunologisch complex, de bereiding en toepassing daarvan. - Google Patents
Immunologisch complex, de bereiding en toepassing daarvan. Download PDFInfo
- Publication number
- NL8501219A NL8501219A NL8501219A NL8501219A NL8501219A NL 8501219 A NL8501219 A NL 8501219A NL 8501219 A NL8501219 A NL 8501219A NL 8501219 A NL8501219 A NL 8501219A NL 8501219 A NL8501219 A NL 8501219A
- Authority
- NL
- Netherlands
- Prior art keywords
- antibodies
- animal species
- immunological
- complex according
- complexes
- Prior art date
Links
- 230000001900 immune effect Effects 0.000 title claims description 28
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 title description 7
- 241001465754 Metazoa Species 0.000 claims description 47
- 230000001588 bifunctional effect Effects 0.000 claims description 28
- 239000000427 antigen Substances 0.000 claims description 26
- 108091007433 antigens Proteins 0.000 claims description 26
- 102000036639 antigens Human genes 0.000 claims description 26
- 239000000126 substance Substances 0.000 claims description 15
- 125000004122 cyclic group Chemical group 0.000 claims description 14
- 102000018071 Immunoglobulin Fc Fragments Human genes 0.000 claims description 13
- 108010091135 Immunoglobulin Fc Fragments Proteins 0.000 claims description 13
- 102000004190 Enzymes Human genes 0.000 claims description 12
- 108090000790 Enzymes Proteins 0.000 claims description 12
- 102000003992 Peroxidases Human genes 0.000 claims description 12
- 238000000034 method Methods 0.000 claims description 12
- 210000003743 erythrocyte Anatomy 0.000 claims description 10
- 108040007629 peroxidase activity proteins Proteins 0.000 claims description 10
- 102000001706 Immunoglobulin Fab Fragments Human genes 0.000 claims description 9
- 108010054477 Immunoglobulin Fab Fragments Proteins 0.000 claims description 9
- 210000000601 blood cell Anatomy 0.000 claims description 4
- 102000004169 proteins and genes Human genes 0.000 claims description 4
- 108090000623 proteins and genes Proteins 0.000 claims description 4
- 238000005571 anion exchange chromatography Methods 0.000 claims description 2
- 239000003814 drug Substances 0.000 claims description 2
- 230000008105 immune reaction Effects 0.000 claims description 2
- 102000004506 Blood Proteins Human genes 0.000 claims 1
- 108010017384 Blood Proteins Proteins 0.000 claims 1
- 239000013543 active substance Substances 0.000 claims 1
- 239000002245 particle Substances 0.000 claims 1
- 210000004027 cell Anatomy 0.000 description 18
- 241000700159 Rattus Species 0.000 description 16
- 229940088598 enzyme Drugs 0.000 description 16
- 239000002953 phosphate buffered saline Substances 0.000 description 11
- 239000000243 solution Substances 0.000 description 11
- 239000000203 mixture Substances 0.000 description 9
- 239000007795 chemical reaction product Substances 0.000 description 7
- 229920001817 Agar Polymers 0.000 description 6
- 102000002260 Alkaline Phosphatase Human genes 0.000 description 6
- 108020004774 Alkaline Phosphatase Proteins 0.000 description 6
- 102000004160 Phosphoric Monoester Hydrolases Human genes 0.000 description 5
- 108090000608 Phosphoric Monoester Hydrolases Proteins 0.000 description 5
- 239000008272 agar Substances 0.000 description 5
- 238000006243 chemical reaction Methods 0.000 description 5
- 238000001962 electrophoresis Methods 0.000 description 5
- 238000001502 gel electrophoresis Methods 0.000 description 5
- 210000004408 hybridoma Anatomy 0.000 description 5
- 230000003211 malignant effect Effects 0.000 description 5
- 108060003951 Immunoglobulin Proteins 0.000 description 4
- 230000015572 biosynthetic process Effects 0.000 description 4
- 239000003153 chemical reaction reagent Substances 0.000 description 4
- 102000018358 immunoglobulin Human genes 0.000 description 4
- 238000004519 manufacturing process Methods 0.000 description 4
- 239000000020 Nitrocellulose Substances 0.000 description 3
- 229920001213 Polysorbate 20 Polymers 0.000 description 3
- 238000012412 chemical coupling Methods 0.000 description 3
- 238000010790 dilution Methods 0.000 description 3
- 239000012895 dilution Substances 0.000 description 3
- 229940072221 immunoglobulins Drugs 0.000 description 3
- 230000003993 interaction Effects 0.000 description 3
- 229920001220 nitrocellulos Polymers 0.000 description 3
- 239000000256 polyoxyethylene sorbitan monolaurate Substances 0.000 description 3
- 235000010486 polyoxyethylene sorbitan monolaurate Nutrition 0.000 description 3
- 108091003079 Bovine Serum Albumin Proteins 0.000 description 2
- 102000006354 HLA-DR Antigens Human genes 0.000 description 2
- 108010058597 HLA-DR Antigens Proteins 0.000 description 2
- 108010001336 Horseradish Peroxidase Proteins 0.000 description 2
- 229920002684 Sepharose Polymers 0.000 description 2
- PXIPVTKHYLBLMZ-UHFFFAOYSA-N Sodium azide Chemical compound [Na+].[N-]=[N+]=[N-] PXIPVTKHYLBLMZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 239000007983 Tris buffer Substances 0.000 description 2
- 230000004520 agglutination Effects 0.000 description 2
- 230000027455 binding Effects 0.000 description 2
- 229940098773 bovine serum albumin Drugs 0.000 description 2
- 230000008878 coupling Effects 0.000 description 2
- 239000007822 coupling agent Substances 0.000 description 2
- 238000010168 coupling process Methods 0.000 description 2
- 238000005859 coupling reaction Methods 0.000 description 2
- LOKCTEFSRHRXRJ-UHFFFAOYSA-I dipotassium trisodium dihydrogen phosphate hydrogen phosphate dichloride Chemical compound P(=O)(O)(O)[O-].[K+].P(=O)(O)([O-])[O-].[Na+].[Na+].[Cl-].[K+].[Cl-].[Na+] LOKCTEFSRHRXRJ-UHFFFAOYSA-I 0.000 description 2
- 238000002474 experimental method Methods 0.000 description 2
- 230000004927 fusion Effects 0.000 description 2
- 230000006872 improvement Effects 0.000 description 2
- 238000002372 labelling Methods 0.000 description 2
- 210000004976 peripheral blood cell Anatomy 0.000 description 2
- 230000004044 response Effects 0.000 description 2
- 238000001350 scanning transmission electron microscopy Methods 0.000 description 2
- 229960000553 somatostatin Drugs 0.000 description 2
- 239000000725 suspension Substances 0.000 description 2
- 231100000419 toxicity Toxicity 0.000 description 2
- 230000001988 toxicity Effects 0.000 description 2
- 230000003612 virological effect Effects 0.000 description 2
- CXNVOWPRHWWCQR-UHFFFAOYSA-N 4-Chloro-ortho-toluidine Chemical compound CC1=CC(Cl)=CC=C1N CXNVOWPRHWWCQR-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 241000342874 Cremnomys cutchicus Species 0.000 description 1
- 238000002965 ELISA Methods 0.000 description 1
- 102000002464 Galactosidases Human genes 0.000 description 1
- 108010093031 Galactosidases Proteins 0.000 description 1
- 108010010803 Gelatin Proteins 0.000 description 1
- 108010015776 Glucose oxidase Proteins 0.000 description 1
- 239000004366 Glucose oxidase Substances 0.000 description 1
- 241000282412 Homo Species 0.000 description 1
- 241001529936 Murinae Species 0.000 description 1
- 241000283973 Oryctolagus cuniculus Species 0.000 description 1
- 102000057297 Pepsin A Human genes 0.000 description 1
- 108090000284 Pepsin A Proteins 0.000 description 1
- 102000005157 Somatostatin Human genes 0.000 description 1
- 108010056088 Somatostatin Proteins 0.000 description 1
- IOMLBTHPCVDRHM-UHFFFAOYSA-N [3-[(2,4-dimethylphenyl)carbamoyl]naphthalen-2-yl] dihydrogen phosphate Chemical compound CC1=CC(C)=CC=C1NC(=O)C1=CC2=CC=CC=C2C=C1OP(O)(O)=O IOMLBTHPCVDRHM-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- SXEHKFHPFVVDIR-UHFFFAOYSA-N [4-(4-hydrazinylphenyl)phenyl]hydrazine Chemical compound C1=CC(NN)=CC=C1C1=CC=C(NN)C=C1 SXEHKFHPFVVDIR-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 238000001042 affinity chromatography Methods 0.000 description 1
- 238000004380 ashing Methods 0.000 description 1
- 230000008901 benefit Effects 0.000 description 1
- 238000011685 brown norway rat Methods 0.000 description 1
- 239000000872 buffer Substances 0.000 description 1
- 238000005119 centrifugation Methods 0.000 description 1
- 239000012228 culture supernatant Substances 0.000 description 1
- KAKKHKRHCKCAGH-UHFFFAOYSA-L disodium;(4-nitrophenyl) phosphate;hexahydrate Chemical compound O.O.O.O.O.O.[Na+].[Na+].[O-][N+](=O)C1=CC=C(OP([O-])([O-])=O)C=C1 KAKKHKRHCKCAGH-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 1
- 229940079593 drug Drugs 0.000 description 1
- 239000012636 effector Substances 0.000 description 1
- 230000000694 effects Effects 0.000 description 1
- 238000001493 electron microscopy Methods 0.000 description 1
- 239000000499 gel Substances 0.000 description 1
- 239000008273 gelatin Substances 0.000 description 1
- 229920000159 gelatin Polymers 0.000 description 1
- 235000019322 gelatine Nutrition 0.000 description 1
- 235000011852 gelatine desserts Nutrition 0.000 description 1
- 229940116332 glucose oxidase Drugs 0.000 description 1
- 235000019420 glucose oxidase Nutrition 0.000 description 1
- 210000004754 hybrid cell Anatomy 0.000 description 1
- 230000028993 immune response Effects 0.000 description 1
- 238000003364 immunohistochemistry Methods 0.000 description 1
- 238000001727 in vivo Methods 0.000 description 1
- 230000007721 medicinal effect Effects 0.000 description 1
- 239000012528 membrane Substances 0.000 description 1
- 244000005700 microbiome Species 0.000 description 1
- 229940111202 pepsin Drugs 0.000 description 1
- 239000000047 product Substances 0.000 description 1
- 230000002285 radioactive effect Effects 0.000 description 1
- 239000013049 sediment Substances 0.000 description 1
- NHXLMOGPVYXJNR-ATOGVRKGSA-N somatostatin Chemical compound C([C@H]1C(=O)N[C@H](C(N[C@@H](CO)C(=O)N[C@@H](CSSC[C@@H](C(=O)N[C@@H](CCCCN)C(=O)N[C@@H](CC(N)=O)C(=O)N[C@@H](CC=2C=CC=CC=2)C(=O)N[C@@H](CC=2C=CC=CC=2)C(=O)N[C@@H](CC=2C3=CC=CC=C3NC=2)C(=O)N[C@@H](CCCCN)C(=O)N[C@H](C(=O)N1)[C@@H](C)O)NC(=O)CNC(=O)[C@H](C)N)C(O)=O)=O)[C@H](O)C)C1=CC=CC=C1 NHXLMOGPVYXJNR-ATOGVRKGSA-N 0.000 description 1
- 241000894007 species Species 0.000 description 1
- 210000004989 spleen cell Anatomy 0.000 description 1
- 238000010186 staining Methods 0.000 description 1
- 239000011550 stock solution Substances 0.000 description 1
- 239000000758 substrate Substances 0.000 description 1
- 239000006228 supernatant Substances 0.000 description 1
- 210000001519 tissue Anatomy 0.000 description 1
- 231100000331 toxic Toxicity 0.000 description 1
- 230000002588 toxic effect Effects 0.000 description 1
- 239000003053 toxin Substances 0.000 description 1
- 231100000765 toxin Toxicity 0.000 description 1
- 108700012359 toxins Proteins 0.000 description 1
- 238000001890 transfection Methods 0.000 description 1
- LENZDBCJOHFCAS-UHFFFAOYSA-N tris Chemical compound OCC(N)(CO)CO LENZDBCJOHFCAS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 210000004881 tumor cell Anatomy 0.000 description 1
- 238000005406 washing Methods 0.000 description 1
Classifications
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K16/00—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies
- C07K16/46—Hybrid immunoglobulins
- C07K16/468—Immunoglobulins having two or more different antigen binding sites, e.g. multifunctional antibodies
-
- G—PHYSICS
- G01—MEASURING; TESTING
- G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
- G01N33/00—Investigating or analysing materials by specific methods not covered by groups G01N1/00 - G01N31/00
- G01N33/48—Biological material, e.g. blood, urine; Haemocytometers
- G01N33/50—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing
- G01N33/53—Immunoassay; Biospecific binding assay; Materials therefor
- G01N33/531—Production of immunochemical test materials
-
- G—PHYSICS
- G01—MEASURING; TESTING
- G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
- G01N33/00—Investigating or analysing materials by specific methods not covered by groups G01N1/00 - G01N31/00
- G01N33/48—Biological material, e.g. blood, urine; Haemocytometers
- G01N33/50—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing
- G01N33/53—Immunoassay; Biospecific binding assay; Materials therefor
- G01N33/531—Production of immunochemical test materials
- G01N33/532—Production of labelled immunochemicals
- G01N33/535—Production of labelled immunochemicals with enzyme label or co-enzymes, co-factors, enzyme inhibitors or enzyme substrates
-
- G—PHYSICS
- G01—MEASURING; TESTING
- G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
- G01N33/00—Investigating or analysing materials by specific methods not covered by groups G01N1/00 - G01N31/00
- G01N33/48—Biological material, e.g. blood, urine; Haemocytometers
- G01N33/50—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing
- G01N33/53—Immunoassay; Biospecific binding assay; Materials therefor
- G01N33/563—Immunoassay; Biospecific binding assay; Materials therefor involving antibody fragments
-
- Y—GENERAL TAGGING OF NEW TECHNOLOGICAL DEVELOPMENTS; GENERAL TAGGING OF CROSS-SECTIONAL TECHNOLOGIES SPANNING OVER SEVERAL SECTIONS OF THE IPC; TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
- Y10—TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC
- Y10S—TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
- Y10S435/00—Chemistry: molecular biology and microbiology
- Y10S435/972—Modified antibody, e.g. hybrid, bifunctional
Landscapes
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Immunology (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Molecular Biology (AREA)
- Urology & Nephrology (AREA)
- Biomedical Technology (AREA)
- Hematology (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- Food Science & Technology (AREA)
- Physics & Mathematics (AREA)
- Biotechnology (AREA)
- Cell Biology (AREA)
- Pathology (AREA)
- Microbiology (AREA)
- General Physics & Mathematics (AREA)
- Analytical Chemistry (AREA)
- Organic Chemistry (AREA)
- Genetics & Genomics (AREA)
- Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
- Biophysics (AREA)
- Preparation Of Compounds By Using Micro-Organisms (AREA)
- Medicines Containing Antibodies Or Antigens For Use As Internal Diagnostic Agents (AREA)
Description
NO 32967 -1- * ^
Immunologisch complex, de bereiding en toepassing daarvan.
Bij het uitvoeren van immunologische bepalingen is het noodzakelijk de mate, waarin een immunologische reactie (antigeen-antilichaam-reactie) heeft plaatsgevonden, te meten. In het algemeen moet het anti-5 geen of het antilichaam daarom voorzien worden van een detecteerbare groep (label). Hiervoor zijn reeds verschillende methoden in gebruik, waarvan het merken met radioactieve, fluorescerende, chemiluminescerende of enzymatisch actieve atomen of groepen genoemd kan worden. In het algemeen worden deze detecteerbare groepen of atomen langs chemische IQ weg in het antigeen of het antilichaam ingevoerd. Verschillende chemische koppelingsmethoden, in het bijzonder voor enzymen,,zijn besproken in Immunohistochemistry 20 (1983), biz. 87-100. Bij het chemisch koppelen van enzymen aan antilichamen gebruikt men doorgaans bifunctionele koppelingsmiddelen, die zowel met het enzym als met het antilichaam 15 reageren. De chemische koppelingsmethoden hebben verscheidene nadelen.
Zo kan het antilichaam door reactie met het koppelingsmiddel gedenatureerd worden, terwijl steeds ook met zichzelf gekoppeld enzym en met zichzelf gekoppeld antilichaam naast het gewenste gemerkte antilichaam worden verkregen.
20 Een andere benadering van het merken van antilichamen is beschreven in Nature 305 (1983), blz. 537-540. Deze publikatie betreft de produktie van hybride antilichamen, die zich met twee verschillende antigenen kunnen binden. De produktie van deze hybride antilichamen geschiedt met behulp van hybride hybridoma's. In het bijzonder is een anti-somatostatine-anti-25 peroxidase antilichaam beschreven, dat derhalve zowel met een label, het enzym peroxidase, als met somatostatine kan reageren. Hoewel deze bifunctionele antilichamen een verbetering ten opzichte van de langs chemische weg gemerkte antilichamen betekenen, hebben ze toch het nadeel, dat voor elk afzonderlijk bifunctioneel antigeen een hybridoma gecon-30 strueerd moet worden, hetgeen zeer tijdrovend is.
Gevonden werd nu, dat immunologische reagentia, die twee verschillende functies bezitten, op een veel eenvoudiger wijze bereid kunnen worden. Er is namelijk gevonden, dat antilichamen van een eerste diersoort een cyclisch tetrameer complex vormen met monoclonale antilichamen 35 van een tweede diersoort, waarvan de Fab-fragmenten gericht zijn tegen de Fc-fragmenten van de eerste diersoort. Het cyclische tetramere complex is opgebouwd uit twee moleculen van antilichamen van de eerste diersoort en twee moleculen van de antilichamen van de tweede diersoort.
C; i? <?'. ·* ^ Ü £ w -> - —' i -2- i ?
Deze cyclische tetramere complexen bezitten een grote stabiliteit. Wanneer de antilichamen van de eerste diersoort van elkaar verschillend zijn is het immunologische complex bifunctioneel en kan op dezelfde manier gebruikt worden als de boven vermelde bifunctionele antilichamen, 5 die met hybridoma’s geproduceerd kunnen worden.
De uitvinding betreft in de eerste plaats een immunologisch complex, dat is opgebouwd uit twee antilichamen van een eerste diersoort, die tot een cyclisch tetrameer geconjugeerd zijn met twee, tegen het Fc-fragment van de antilichamen van de eerste diersoort gerichte mono-10 clonale antilichamen van een tweede diersoort.
De belangrijkste uitvoeringsvorm van de uitvinding is een immunologisch complex, dat bifunctioneel is en waarin twee verschillende antilichamen van de eerste diersoort tot een cyclisch tetrameer geconjugeerd zijn met twee, tegen het Fc-fragment van de antilichamen van de eerste 15 diersoort gerichte monoclonale antilichamen van een tweede diersoort.
De vorming van de cyclische tetramere complexen volgens de uitvinding is aangetoond met behulp van electroforese op agarplaten en met behulp van electronenmicroscopie.
Zo werden muize-antilichamen van de immunoglobuline gamma-1 20 (IgG1) subklasse tegen het enzym peroxidase gemengd met een monoclonaal ratte-antilichaara, dat specifiek is voor muize IgG1. Laatstgenoemd antilichaam werd geselecteerd op het vermogen twee verschillende muize-antilichamen te binden. Bij reactie van het anti-enzym antilichaam met een equimolaire hoeveelheid van het ratte-antilichaam bleek nagenoeg 25 alle enzym-bindende werking bij electroforese als een enkele band te migreren met een mobiliteit, die verschillend was van die van de afzonderlijke antilichamen. Een zelfde proef werd uitgevoerd met muize-antilichamen tegen het enzym alkalische fosfatase. Ook hierbij werd een soortgelijk complex gevormd.
30 De vorming van de complexen geschiedt buitengewoon snel, in ieder geval binnen de tijd, die nodig is om de antilichamen te mengen, een monster op de agarplaat te brengen en de electroforese te beginnen. De minimaal hiervoor benodigde tijd is 20 seconden.
Wanneer men de twee anti-enzym antilichamen eerst met elkaar mengt 35 en daarna het monoclonale ratte-antilichaam toevoegt ontstaan drie verschillende complexen, namelijk een complex, dat uitsluitend het anti-peroxidase bevat, een complex dat uitsluitend het anti-alkalische fosfatase bevat en een complex dat beide anti-enzym antilichamen bevat. Wanneer men de anti-enzym antilichamen eerst afzonderlijk mengt met het 8501119 -3- ’j'ien.'ia.u monoclonale ratte-antilichaam en de beide, zo gevormde homologe complexen daarna met elkaar mengt, wordt geen bifunctioneel complex gevormd. Blijkbaar zijn de gevormde complexen zo stabiel, dat geen uitwisseling van antilichamen onderling plaats vindt. Wanneer men aan een mengsel van 5 de anti-enzym antilichamen een geringere dan equivalente hoeveelheid van het ratte-antilichaam toevoegt, worden de bovengenoemde drie complexen eveneens gevormd, doch blijft er ongebonden anti-enzym antilichaam over.
De structuur van de complexen volgens de uitvinding werd onderzocht met aftastende transmissie-electronenmicroscopie (scanning 10 transmission electron microscopy; STEM). In beelden van negatief gekleurde complexen konden structuren worden waargenomen, die overeenkomen met cyclische tetrameren van immunoglobulinen. In het beeld domineren tetramere complexen, waarvan de Fab-f ragmenten van de muize- en ratte-antilichamen samen met het Fc-fragment van de ratte-antilichamen duide-15 lijk zichtbaar zijn. Bepaalde details van de complexen, zoals de domeinen en de twee ketens van de muize-Fab-fragmenten en de ruimtelijke oriëntatie van de Fab- en Fc-fragmenten konden goed worden onderscheiden.
Uit de resultaten van de agar-gelelectroforese die in figuur 1 en in voorbeeld I zijn toegelicht en de electronenmicroscopische onder-20 zoekingen blijkt duidelijk, dat de cyclische tetramere complexen worden gevormd. De stabiele complexen volgens de uitvinding hebben blijkbaar de structuur, die in figuur 2 schematisch is aangegeven.
Wanneer men de bifunctionele complexen wil bereiden, bijvoorbeeld van antilichamen tegen peroxidase en antilichamen tegen een oppervlakte-25 antigeen op menselijke blcedplaatjes, kan men de beide antilichamen in willekeurige verhouding mengen en het mengsel laten reageren met een monoclonaal antilichaam tegen de Fc-fragmenten van de twee eerst genoemde antilichamen. De hoogste opbrengst aan bifunctioneel complex wordt echter bereikt, wanneer de antilichamen tegen peroxidase en de antilichamen 30 tegen een oppervlakte-antigeen op menselijke bloedplaatjes in equi-molaire verhouding worden gemengd. Zoals boven reeds opgemerkt, bevat het reactieprodukt steeds ook homologe complexen, in het geval van het voorbeeld complexen die alleen antilichamen tegen peroxidase en complexen die alleen antilichamen tegen een oppervlakte-antigeen op mense-35 lijke bloedplaatjes bevatten. Deze homologe complexen behoeven bij het gebruik van het reactieprodukt als immunologisch reagens niet altijd te storen. Wanneer men bijvoorbeeld het bovengenoemde reactieprodukt laat reageren met menselijke bloedplaatjes zullen de uitsluitend antilichamen tegen peroxidase bevattende complexen niet aan de bloedplaatjes 3* n i o i ö
& V V * Om i (J
V S
-4- worden gehecht. Dit is wel het geval met de beide andere complexen, doch alleen de bifunctionele complexen zullen zowel een reactie met plaatjes als een reactie met peroxidase geven.
Desgewenst kan men het bifunctionele complex in zuivere toestand 5 isoleren, bijvoorbeeld door middel van anionen-uitwisselingschromato-grafie. Ook kan men de verhouding tussen het bifunctionele complex en de beide homologe complexen in het reactieprodukt beïnvloeden door de molaire verhouding tussen de toegepaste antilichamen van de eerste diersoort te veranderen. Zo verkrijgt men bij toepassing van het 10 antiperoxidase-antilichaam en het antilichaam tegen een oppervlakte-antigeen op bloedplaatjes in een grotere verhouding dan 1:1, bijvoorbeeld 5:1» een reactieprodukt, waarin de verhouding van het homologe, uitsluitend anti-bloedplaatjes-antilichamen bevattende complex tot het bifunctionele complex ten gunste van het bifunctionele complex is ge-15 wijzigd.
Van de bifunctionele immunologische complexen volgens de uitvinding verdienen de complexen de voorkeur, waarin de Fab-fragmenten van een der antilichamen van de eerste diersoort gericht zijn tegen een stof met een gewenste eigenschap zoals detecteerbaarheid, toxiciteit, 20 geneeskrachtige werking. Een vöorwaarde is in dit verband dat dergelijke stoffen in een dier, met inbegrip van de mens de produktie van antilichamen bewerkstelligen. Voorbeelden van detecteerbare stoffen, die de produktie van antilichamen kunnen opwekken, zijn enzymen, zoals mieriks-wortelperoxidase, alkalische fosfatase, glucose-oxidase en galactosidase. 25 Het andere antilichaam, dat samen met het antilichaam tegen een stof met een gewenste eigenschap tot een bifunctioneel complex wordt gevormd, kan gericht zijn tegen elk willekeurig antigeen. Als voorbeelden van antigenen, waartegen het tweede antilichaam van de eerste diersoort gericht kan zijn, kunnen genoemd worden: oppervlaktemembraanantigenen, 30 zoals antigenen op het oppervlak van bloedcellen, bijvoorbeeld erythro-cyten of bloedplaatjes, of virale antigenen. Verder kan het tweede antilichaam van de eerste diersoort gericht zijn tegen een specifiek antigeen, dat door een kwaadaardige cel geproduceerd wordt. Bifunctionele complexen, die een dergelijk antilichaam van de eerste diersoort bevatten, 35 kunnen niet alleen gebruikt worden voor het aantonen van kwaadaardige cellen doch ook voor het dirigeren van voor deze cellen toxische stoffen naar de kwaadaardige cellen. In het eerste geval is het eerste antilichaam van de eerste diersoort gericht tegen een detecteerbare stof, bijvoorbeeld een enzym, en in het tweede geval tegen een stof die de 850*218 J 1 -5- » groei van de kwaadaardige cellen remt.
De diersoorten waarvan de antilichamen van de onderhavige tetramere complexen zijn afgeleid, zijn niet belangrijk. Het is dikwijls gemakkelijk rauize-antilichamen te combineren met ratte-antilichamen. De monoclo-5 nale antilichamen van de tweede diersoort dienen gericht te zijn tegen de Fc-fragmenten van de antilichamen van de eerste diersoort, terwijl de beide Fab-fragmenten van de monoclonale antilichamen van de tweede diersoort elk in staat moeten zijn te binden met het Fc-fragment van een antilichaam van de eerste diersoort.
10 De aanwezigheid van een Fc-fragment in de monoclonale antilichamen van de tweede diersoort is niet essentieel. Het kan in bepaalde gevallen zelfs voordelig zijn, het Fc-fragment vóór de vorming van het cyclische complex uit de antilichamen van de tweede diersoort af te splitsen. Dit kan op bekende wijze met behulp van een enzym, bijvoorbeeld pepsine, 15 geschieden.
Verder betreft de uitvinding een bifunctioneel immunologisch complex, als boven beschreven, dat gekoppeld is met het antigeen waartegen één der antilichamen van de eerste diersoort gericht is. Dit antigeen kan bijvoorbeeld een detecteerbare stof zijn, zoals een enzym. Het 20 complex heeft dan de eigenschappen van een gemerkt antilichaam. Wanneer het antigeen een stof is met een andere gewenste eigenschap, bijvoorbeeld toxiciteit voor kwaadaardige cellen, kan het complex bijvoorbeeld als geneesmiddel worden toegepast.
De uitvinding betreft ook een werkwijze ter bereiding van immuno-25 logische complexen, die gekenmerkt is doordat men antilichamen van een eerste diersoort laat reageren met een ongeveer equivalente hoeveelheid antilichamen van een tweede diersoort, die gericht zijn tegen de Fc-fragmenten van de antilichamen van de eerste diersoort en men desgewenst het gevormde tetramere complex isoleert.
30 De bereiding van een met een antigeen gekoppeld bifunctioneel complex, die eveneens tot de uitvinding behoort, geschiedt door reactie van een bifunctioneel complex met het desbetreffende antigeen.
Tevens betreft de uitvinding een werkwijze voor het uitvoeren van immunologische reacties, waarbij men de bifunctionele immunologische 35 complexen volgens de uitvinding toepast. Een voorbeeld van een dergelijke reactie is het aantonen van aan virale antigenen gebonden menselijke antilichamen, die na electroforese op nitrocellulosepapier zijn overgebracht, met behulp van bispecifieke anti-menselijk IgG/anti-alkalische fosfatase/alkalische fosfatase complexen.
g 5 Π i Λί V V i t ^ -6-
De uitvinding maakt het oogelijk op eenvoudige, specifieke en efficiënte wijze antilichamen met elkaar te koppelen en bijvoorbeeld van een merk te voorzien. De grote specificiteit van de monoclonale antilichamen van de tweede diersoort maakt het mogelijk, niet-gezuiverde 5 antilichamen te gebruiken. De werkwijze ter bereiding van de tetramere complexen is zeer eenvoudig en vergt buitengewoon weinig tijd. Hierdoor wordt een grote verbetering bereikt in vergelijking met het langs chemische weg merken van antilichamen. Ook in vergelijking met de door hybride cellijnen geproduceerde bifünctionele monoclonale antilichamen 10 biedt de uitvinding het voordeel, dat er geen cellijnen geselecteerd behoeven te worden, terwijl de complexen opgebouwd kunnen worden met bivalente monoclonale antilichamen met bekende eigenschappen.
De bifünctionele complexen volgens de uitvinding kunnen ook worden toegepast voor het specifiek koppelen van antigenen. Geschikte combina-15 ties van monoclonale antilichamen kunnen gebruikt worden voor het identificeren en scheiden van antigenen. Verder kunnen specifieke interacties, die door bifünctionele of homologe tetramere complexen worden geïnduceerd, de effectiviteit van fusies, transfecties en interacties tussen cellen in het algemeen verbeteren. Zo kan men bijvoorbeeld 20 erythrocyten merken met bifünctionele complexen, die opgebouwd zijn uit anti-erythrocyt-antilichamen en anti-HLA-DR-antilichamen. Op deze manier kunnen bifünctionele complexen gebruikt worden om interacties tussen cellen te dirigeren of te verbeteren. In dit verband kan de toepassing in vivo om bepaalde effectorcellen naar micro-organismen, 25 met virussen geïnfecteerde cellen en tumorcellen te dirigeren, genoemd worden.
De homologe cyclische tetramere complexen volgens de uitvinding kunnen bijvoorbeeld worden toegepast voor het aantonen van menselijke antistoffen aan menselijke rode bloedcellen, bijvoorbeeld Rhesus-30 antilichamen. Hierbij worden homologe complexen van anti-menselijk IgG-antilichamen gebruikt als anti-immunoglobuline (Coomb's reagens) voor de agglutinatie van gesensibiliseerde erythrocyten.
De uitvinding wordt toegelicht in de volgende voorbeelden, die de uitvinding echter op geen enkele wijze beperken.
8501219 -7- VOORBBELD I.
Aantonen van de vorming van cyclische tetramere antilichaamcomplexen door middel van gel-electroforese.
i a. Miize-antiperoxidase-antilichaam.
5 Voor de gel-electroforese werden monoclonale muize-antilichamen tegen mierikswortel-peroxidase (CLB-HRP-1) gebruikt. Een voorraadop-lossing (0,2 mg/ml, in een met fosfaat gebufferde zoutoplossing (PBS; pH 7,2}} van het antilichaam, dat gezuiverd was over een proteine-A-Sepharose-kolom werd met PBS verdund tot de gewenste concentratie.
10 b. Muize-anti-alkalische fosfatase-antilichaam.
Er werden monoclonale antilichamen tegen alkalische peroxidase (CLB-AP-4) gebruikt. Er werd uitgegaan van de 20-maal geconcentreerde bovenstaande vloeistof van de weefselcultuur, die 0,2 mg antilichaam/ml bevatte. Deze werd met PBS verdund tot de gewenste concentratie.
15 c. Monoclonale ratte-antimuis-antilichamen.
Bij de gel-electroforese werden monoclonale ratte-antilichamen tegen muize-IgGI gebruikt, die verkregen waren door fusie (Nature 266, 550-553 (1977)) van muize-Sp2/0 Ag14-cellen (Nature 274, 917-919 (1978)) met miltcellen van een Brown Norway rat, die driemaal geïmmuniseerd was 20 net verschillende preparaten van gezuiverd raonoclonaal muize-IgG1. De bovenstaande vloeistoffen van de hybridomacellen werden onderzocht op de eigenschap monoclonale muize-peroxidase-antiperoxidase (PAP) complexen te koppelen aan als een laag op microtiterplaten aangebracht muize-IgG1, met behulp van de ELISA-techhiek. Uit een aantal positief reagerende cel-25 lijnen werd een hybridomacellijn (CLB-MJf1-1) voor verder onderzoek geselecteerd en gebruikt voor cultuur op grotere schaal. Het door deze cellijn geproduceerde IgG1-kappa-antIlichaam werd gezuiverd door affiniteitschro-matografie over een muize-IgG1-sepharose-kolom.
d. Gel-electroforese werd volgens Wieme "Gel Electroforesis" Elsevier 30 Publ. Co., Amsterdam (1976) uitgevoerd op agarplaten.
Op de banen van drie agarplaten werden de volgende produkten gebracht.
Baan 1: Monoclonaal antiperoxidase (anti-POD),"2,5 ^il; 50 ^ig/ml.
Baan 2: Monoclonaal anti-alkalische fosfatase (anti-AP), 2,5 ^il; 50^jg/ml.
35 Baan 3: Anti-POD, gecomplexeerd met gelijke hoeveelheid monoclonaal ratte-antimuis-IgG1 (anti-mIgG1). Eindconcentratie 50 ^Jg/ml, berekend op anti-POD. Van de oplossing van het complex werd 2,5 Jil opgebracht.
OU . - i 'J
-8-
Baan 4: Anti-AP, gecomplexeerd met gelijke hoeveelheid anti-IgGl. Eindconcentratie 50 ^jg/ml, berekend op anti-AP. Van de oplossing van het complex werd 2,5 ^1 opgebracht.
Baan 5: Anti-POD, eerst gemengd met een gelijke hoeveelheid anti-AP 5 en het mengsel daarna gecomplexeerd met een met het totaal van de muize-antilichamen equivalente hoeveelheid anti-mIgG1. Eindconcentratie 50 ^jg/ml, berekend op het totaal van de muize-antilichamen. Van de oplossing werd 2,5 yl opgebracht.
Baan 6: Complex van anti-POD met gelijke hoeveelheid anti-mIgG1, 10 gemengd met zelfde hoeveelheid complex van anti-AP met anti- ralgGI. Eindconcentratie 50 ^ig/ml, berekend op het totaal van de muize-antilichamen. Van de oplossing werd 2,5 ^il opgebracht.
Baan 7: Anti-POD eerst gemengd met gelijke hoeveelheid anti-AP en het mengsel daarna gecomplexeerd met 40% van de met het 15 totaal van anti-POD en anti-AP equivalente hoeveelheid anti- mlgGI. Eindconcentratie 50 jig/ml, berekend op het totaal van de muize-antilichamen. Van de oplossing werd 2,5^1 opgebracht.
De electroforese werd uitgevoerd gedurende 45 minuten bij pH 8,5 en 300 volt. Daarna werden de agarplaten bedekt met nitrocellulosepapier en 20 filtreerpapier en werd gedurende 2 uren een druk aangebracht van ongeveer 2 0,1 kg/cm . De verkregen "blots" werden gedurende 16 uren geïncubeerd in PBS, pH 7,2, met 3% (gew^ol.) runderserumalbumine (BSA).
De drie verkregen "blots" werden op verschillende wijzen met enzymen behandeld en ontwikkeld. De resultaten blijken uit figuur 1.
25 "Blot" a (figuur 1) werd gedurende 2 h geïncubeerd met PBS-BSA, dat met peroxidase gemerkte, voor menselijke kappa-ketens specifieke konijne-immunoglobulinen (DAK0, Kopenhagen, Denemarken, codenummer p-129) in een verdunning 1:100 bevatte. Deze gemerkte immunoglobulinen gaven een sterkere kleurreactie met het aan nitrocellulose gebonden monoclonale anti-30 peroxidase-antilichaam dan gezuiverde (monovalente) peroxidase. De "blots" werden driemaal gedurende 5 minuten gewassen met PBS, dat 0,1 gew.% Tween 20 bevatte en eenmaal gedurende 20 minuten geïncubeerd met 0,5 mg/ml diamino-benzidine (Sigma, Grade II) in 0,05 M tris-buffer, pH 7,5, die 0,01 gew.% H2O2 bevatte. Daarna werd het resultaat gefotografeerd.
35 "Blot" b (figuur 1) werd gedurende 2 h geïncubeerd met PBS-BSA, dat alkalische fosfatase (Sigma, Grade VII, catalogusnummer p-5521) in een concentratie van 10 ^jg/ml bevatte. De "blots" werden driemaal gedurende 8501219 - “«'VV'. V: -9- 5 minuten gewassen met PBS, dat 0,1 gew.% Tween 20 bevatte en eenmaal gedurende 20 minuten geïncubeerd met 0,2 mg/ml naftol-AS-MX-fosfaat (Sigma) in 0,1 M tris-buffer, pH 8,2, die 1 mg/ml Fast Red TR (Sigma) bevatte. Daarna werd het resultaat gefotografeerd.
5 "Blot" c (figuur 1) werd verkregen door eerst te werk te gaan als bij "blot" a en na de behandeling met het peroxidase-substraat driemaal te wassen met PBS, dat 0,1% Tween 20 bevatte, vervolgens te incuberen met <fe alkalische fosfatase, weer te wassen en daarna te ontwikkelen met het fosfatase-substraat.
10 Uit de resultaten blijkt, dat de muize-antilichamen een stabiel com plex vormen met de monodonale ratte-antimuis-antilichamen. In baan 6 van figuur 1a en figuur 1b ziet men namelijk slechts één reactieprodukt.
In baan 6 van figuur 1c worden twee reactieprodukten aangetoond, namelijk het homologe complex van het anti-POD met de ratte-antilichamen en het 15 homologe complex van het anti-AP met de ratte-antilichamen. Hieruit blijkt, dat geen bifunctioneel complex wordt gevormd, wanneer men twee homologe complexen met elkaar mengt.
VOORBEELD II.
Bereiding van homoloog cyclisch tetrameer complex van anti-immunoglobuline.
20 Aan 100 jxL van een oplossing van monodonale antilichamen met een specificiteit voor menselijke IgG van de muis IgG1-klasse in een concentratie van 1 mg/ml in met fosfaat gebufferde zoutoplossing met een pH van 7,2 met 0,1 % (gew./vol.) NaN^ voegt men 100 ratte-antimuis-antilichaam (zie voorbeeld Ic) met een concentratie van 1 mg/ml toe. Laatstgenoemde 25 oplossing bevat eveneens 0,1 % (gew^Vol.) NaN^.
Dit mengsel kan in een verdunning van 1:1000 als Coombs-reagens in een indirekte agglutinatietechniek gebruikt worden om de binding van Rhesus-antistoffen aan menselijke bloedcellen aan te tonen.
VOORBEELD III.
30 Bereiding van een gemerkt bifunctioneel complex.
Aan 100 jil van een oplossing van monodonale muize-antilichamen anti-leu-3a (Becton en Dickinson, commercieel verkrijgbaar) met een concentratie van 0,1 mg/ml in PBS (pH 7,2) met 0,2 % (gew./vol.) gelatine en 0,1 % (gew./vol.) NaN3 wordt 200pi van een oplossing van monodonale muize-anti- 35 alkalische fosfatase antilichamen (zie voorbeeld Ib) met een concentratie van 0,2 mg/ml toegevoegd. Aan het mengsel van muize-IgG1-antilichamen wordt 3 £ Ö 2 1 ö V V v i ί- i ~ -10- vervolgens 100 ^al van een oplossing van ratte-anti-muis-antilichamen (zie voorbeeld Ic) met een concentratie van 1 mg/ml en ten slotte 200 ^il van een oplossing van alkalische fosfatase (Sigma, Grade VII) met een concentratie van 2,5 mg/ml in PBS (pH 7,2) toegevoegd.
5 Dit mengsel kan in een verdunning van 50 a 100 maal gebruikt worden om ten opzichte van leu-3a positieve cellen in vriescoupes van bijvoorbeeld menselijke huid aan te tonen.
VOORBEELD IV.
Monoclonale muize-IgG1-anti-erythrocyt-antilichamen en muize-IgG1-anti 10 HLA-DR-antilichamen werden in een molaire verhouding van 1:4 met elkaar gemengd. Daarna werd een met het totaal van de muize-antilichamen equivalente hoeveelheid van de monoclonale ratte-anti-muis-antilichamen (zie voorbeeld Ic) toegevoegd. Het mengsel werd gebruikt voor het merken van erythrocyten. Daartoe werd aan een erythrocytensuspensie met een concen-8 15 tratie van 10 cellen/ml een zodanige hoeveelheid van het bovengenoemde mengsel van antilichamen toegevoegd, dat de eindconcentratie berekend op de toegepaste muize-antilichamen, 50 ^ig/ml bedroeg. Vervolgens werd 60 min. bij 0°C gelncubeerd. Daarna werden de gemerkte erythrocyten gewassen met PBS-BSA, het mengsel gecentrifugeerd (200 g; 10 min.) en weer gesuspen-20 deerd in het oorspronkelijke volume PBS-BSA. Daarna werden menselijke, mononucleaire perifere bloedcellen toegevoegd in een verhouding van ery-throcyten tot menselijke mononucleaire perifere bloedcellen van 10:1. Na centrifugeren (200 g; 10 minj werd 60 min. gelncubeerd bij 0°C. Daarna werd het sediment voorzichtig gesuspendeerd in PBS-BSA. Cytocentrifugepreparaten 25 van de suspensie werden gekleurd met May-Gr£inwald/Giemsa. Er bleken duidelijke rosetten te zijn gevormd, die bestaan uit door erythrocyten omhulde HLA-DR-positieve cellen. Het percentage rosette-vormende, kern-houdende cellen (25 %) komt goed overeen met het percentage HLA-DR-positieve cellen (29 %) dat wordt bepaald door middel van een stapsgewijs versterkte immuno-30 peroxidase-kleuring (J. Histochemistry and Cytochemistry 32, nr. 2, blz. 172-178 (1984)). Wanneer men dezelfde proef uitvoert, doch de anti-HLA-DR-antilichamen vervangt door anti-peroxidase-antilichamen, worden geen rosetten gevormd.
85012 IS
Claims (19)
1. Immunologisch complex uit twee antilichamen van een eerste diersoort, die tot een cyclisch tetrameer geconjugeerd zijn met twee, tegen het Fc-fragment van de antilichamen van de eerste diersoort gerichte monoclonale antilichamen van een tweede diersoort.
2. Immunologisch complex volgens conclusie 1, m e t het k e n m e r k, dat het een bifunctioneel complex is, waarin twee verschillende antilichamen van de eerste diersoort tot een cyclisch tetrameer geconjugeerd zijn.
3. Immunologisch bifunctioneel complex volgens conclusie 2, 10 gekoppeld met het antigeen, waartegen één der antilichamen van de eerste diersoort gericht is.
4. Immunologisch complex volgens conclusie 2 of 3,met het kenmerk, dat de Fab-f ragmen ten van een der antilichamen van de eerste diersoort gericht zijn tegen een stof met gewenste eigenschappen.
5. Immunologisch complex volgens conclusie 4, m e t het k e n m e r k, dat de stof met gewenste eigenschappen een detecteerbare stof is.
6. Immunologisch complex volgens conclusie 5, m e t het kenmerk, dat de detecteerbare stof een enzym is.
7. Immunologisch complex volgens conclusie 6, m e t het kenmerk, dat het enzym peroxidase is.
8. Immunologisch complex volgens conclusie 2 of 3,met het kenmerk, dat de Fab-fragmenten van één der antilichamen van de eerste diersoort gericht zijn tegen een detecteerbare stof en de
25 Fab-fragmenten van het andere antilichaam van de eerste diersoort tegen een willekeurig antigeen.
9· Immunologisch complex volgens conclusie 8, m e t het k e n m e r k, dat het antigeen een plasma-eiwit is.
10. Immunologisch complex volgens conclusie 8, m e t het 30 kenmerk, dat het antigeen een zich aan het oppervlak van een deeltje bevindend eiwit is.
11. Immunologisch complex volgens conclusie 10, m e t het kenmerk, dat het eiwit een zich op het oppervlak van bloedcellen bevindend eiwit is.
12. Immunologisch complex volgens conclusie 11, met het kenmerk, dat de bloedcellen erythrocyten of bloedplaatjes zijn.
13. Immunologisch complex volgens conclusie 1, m e t het kenmerk, dat de eerste diersoort de muis en de tweede diersoort 85 0 1 2 1 D -12- de rat is.
14. Werkwijze ter bereiding van immunologische complexen, met het kenmerk, dat men antilichamen van een eerste diersoort laat reageren met een ongeveer equimolaire hoeveelheid antilichamen van 5 een tweede diersoort, die gericht zijn tegen de Fc-fragmenten van de antilichamen van de eerste diersoort, en desgewenst het gevormde tetramere complex isoleert.
15. Werkwijze volgens conclusie 14, met het kenmerk, dat men bifunctionele complexen bereidt door twee verschillende anti- 10 lichamen van de eerste diersoort met de antilichamen van de tweede diersoort te laten reageren, en het gevormde complex desgewenst te laten reageren met een antigeen, waartegen één der antilichamen van de eerste diersoort gericht is.
16. Werkwijze volgens conclusie 15, met het kenmerk, 15 dat men immunologische complexen volgens een of meer der conclusies 4-13 bereidt.
17. Werkwijze volgens conclusies 14-16, met het kenmerk, dat men het tetramere complex isoleert door middel van anionenui twis selings chromatografie.
18. Werkwijze voor het uitvoeren van immunologische reacties, met het kenmerk, dat men daarbij een bifunctioneel immunologisch complex volgens een of meer der conclusies 1-13 toepast.
19· Geneesmiddel met één of meer der complexen volgens conclusies 1-13 als actieve stof. 8501213
Priority Applications (3)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| NL8501219A NL8501219A (nl) | 1985-04-29 | 1985-04-29 | Immunologisch complex, de bereiding en toepassing daarvan. |
| US06/855,688 US4868109A (en) | 1985-04-29 | 1986-04-25 | Immunological antibody complex, its preparation and its use |
| EP86200734A EP0205198A1 (en) | 1985-04-29 | 1986-04-28 | Immunological complex, its preparation and its use |
Applications Claiming Priority (2)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| NL8501219 | 1985-04-29 | ||
| NL8501219A NL8501219A (nl) | 1985-04-29 | 1985-04-29 | Immunologisch complex, de bereiding en toepassing daarvan. |
Publications (1)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| NL8501219A true NL8501219A (nl) | 1986-11-17 |
Family
ID=19845900
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| NL8501219A NL8501219A (nl) | 1985-04-29 | 1985-04-29 | Immunologisch complex, de bereiding en toepassing daarvan. |
Country Status (3)
| Country | Link |
|---|---|
| US (1) | US4868109A (nl) |
| EP (1) | EP0205198A1 (nl) |
| NL (1) | NL8501219A (nl) |
Families Citing this family (80)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| DE3714147A1 (de) * | 1987-04-28 | 1988-11-17 | Boehringer Mannheim Gmbh | Immunchemisches verfahren und reagenz zur bestimmung eines polyvalenten antigens in einer fluessigen probe |
| IT1235349B (it) * | 1988-12-23 | 1992-06-30 | Biodata Spa | Saggio immunologico per determinazioni in fase omogenea |
| CA2013006A1 (en) * | 1989-03-24 | 1990-09-24 | Marc E. Key | Reagent complex for immunoassay |
| US5219578A (en) * | 1991-02-25 | 1993-06-15 | Innovet, Inc. | Composition and method for immunostimulation in mammals |
| EP0579767B1 (en) * | 1991-04-11 | 2000-08-23 | Biosite Diagnostics Inc. | Novel conjugates and assays for simultaneous detection of multiple ligands |
| FR2676123B1 (fr) * | 1991-05-02 | 1994-06-17 | Pasteur Diagnostics | Complexe agglutinant et reactif d'identification d'antigenes sur les parois cellulaires. |
| US5364612A (en) * | 1991-05-06 | 1994-11-15 | Immunomedics, Inc. | Detection of cardiovascular lesions |
| US5556759A (en) * | 1993-08-02 | 1996-09-17 | Beach; Peter G. | Assay and method for determining newborn risk for sudden infant death syndrome |
| US5439586A (en) * | 1993-09-15 | 1995-08-08 | The Terry Fox Laboratory Of The British Columbia Cancer Agnecy | Magnetic filter with ordered wire array |
| US5514340A (en) * | 1994-01-24 | 1996-05-07 | Magnetix Biotechnology, Inc. | Device for separating magnetically labelled cells |
| US5650324A (en) * | 1994-05-31 | 1997-07-22 | Johnson & Johnson Clinical Diagnostics, Inc. | Inhibitor and anti-inhibitor monoclonal antibodies specific for horseradish peroxidase |
| US5583004A (en) * | 1994-12-23 | 1996-12-10 | Pincus; Mathew R. | Direct detection of unexpected alloantibodies in the serum of prospective transfusion recipients using a new hemagglutination inhibition assay |
| US6117985A (en) | 1995-06-16 | 2000-09-12 | Stemcell Technologies Inc. | Antibody compositions for preparing enriched cell preparations |
| US6306575B1 (en) | 1995-06-16 | 2001-10-23 | Stemcell Technologies, Inc. | Methods for preparing enriched human hematopoietic cell preparations |
| US5877299A (en) * | 1995-06-16 | 1999-03-02 | Stemcell Technologies Inc. | Methods for preparing enriched human hematopoietic cell preparations |
| US6535393B2 (en) * | 1998-12-04 | 2003-03-18 | Micron Technology, Inc. | Electrical device allowing for increased device densities |
| US7534866B2 (en) | 2005-10-19 | 2009-05-19 | Ibc Pharmaceuticals, Inc. | Methods and compositions for generating bioactive assemblies of increased complexity and uses |
| US7550143B2 (en) | 2005-04-06 | 2009-06-23 | Ibc Pharmaceuticals, Inc. | Methods for generating stably linked complexes composed of homodimers, homotetramers or dimers of dimers and uses |
| US7666400B2 (en) * | 2005-04-06 | 2010-02-23 | Ibc Pharmaceuticals, Inc. | PEGylation by the dock and lock (DNL) technique |
| US7527787B2 (en) * | 2005-10-19 | 2009-05-05 | Ibc Pharmaceuticals, Inc. | Multivalent immunoglobulin-based bioactive assemblies |
| US6750326B2 (en) | 1999-05-28 | 2004-06-15 | Stemcell Technologies Inc. | Method for separating cells using immunorosettes |
| US7135335B2 (en) * | 1999-05-28 | 2006-11-14 | Stemcell Technologies Inc. | Method for separating cells using immunorosettes |
| EP1185867B1 (en) * | 1999-05-28 | 2005-03-30 | Stemcell Technologies Inc. | Method for separating cells using immunorosettes |
| CA2358061A1 (en) * | 2000-09-08 | 2002-03-08 | Stemcell Technologies Inc. | Novel antibody compositions for the negative selection of specific rat leukocyte subsets |
| US8323903B2 (en) | 2001-10-12 | 2012-12-04 | Life Technologies Corporation | Antibody complexes and methods for immunolabeling |
| US20050069962A1 (en) | 2001-10-12 | 2005-03-31 | Archer Robert M | Antibody complexes and methods for immunolabeling |
| US7135340B2 (en) * | 2001-11-07 | 2006-11-14 | Stemcell Technologies Inc. | Tetrameric antibody complexes for blocking non-specific labeling of antigens |
| US8491896B2 (en) * | 2002-06-14 | 2013-07-23 | Immunomedics, Inc. | Anti-pancreatic cancer antibodies |
| US9599619B2 (en) | 2002-06-14 | 2017-03-21 | Immunomedics, Inc. | Anti-pancreatic cancer antibodies |
| US8821868B2 (en) | 2002-06-14 | 2014-09-02 | Immunomedics, Inc. | Anti-pancreatic cancer antibodies |
| US7906118B2 (en) | 2005-04-06 | 2011-03-15 | Ibc Pharmaceuticals, Inc. | Modular method to prepare tetrameric cytokines with improved pharmacokinetics by the dock-and-lock (DNL) technology |
| US20040018556A1 (en) * | 2002-07-29 | 2004-01-29 | Cantor Thomas L. | Reagent and method for determination of a substance using an immunoaggregator |
| US9005613B2 (en) | 2003-06-16 | 2015-04-14 | Immunomedics, Inc. | Anti-mucin antibodies for early detection and treatment of pancreatic cancer |
| WO2005019820A1 (en) * | 2003-08-25 | 2005-03-03 | Marc Ramael | A method and kit for the quantitative and/or qualitative detection of components in a sample |
| US9481878B2 (en) | 2004-02-13 | 2016-11-01 | Immunomedics, Inc. | Compositions and methods of use of immunotoxins comprising ranpirnase (Rap) show potent cytotoxic activity |
| US8551480B2 (en) | 2004-02-13 | 2013-10-08 | Immunomedics, Inc. | Compositions and methods of use of immunotoxins comprising ranpirnase (Rap) show potent cytotoxic activity |
| US8562988B2 (en) * | 2005-10-19 | 2013-10-22 | Ibc Pharmaceuticals, Inc. | Strategies for improved cancer vaccines |
| US8491914B2 (en) | 2004-02-13 | 2013-07-23 | Ibc Pharmaceuticals, Inc. | Dock-and-lock (DNL) complexes for delivery of interference RNA |
| US8034352B2 (en) | 2005-04-06 | 2011-10-11 | Ibc Pharmaceuticals, Inc. | Tetrameric cytokines with improved biological activity |
| US8435539B2 (en) * | 2004-02-13 | 2013-05-07 | Immunomedics, Inc. | Delivery system for cytotoxic drugs by bispecific antibody pretargeting |
| US8003111B2 (en) * | 2005-04-06 | 2011-08-23 | Ibc Pharmaceuticals, Inc. | Dimeric alpha interferon pegylated site-specifically shows enhanced and prolonged efficacy in vivo |
| US20110064754A1 (en) * | 2005-03-03 | 2011-03-17 | Center For Molecular Medicine And Immunology | Immunoconjugates Comprising Poxvirus-Derived Peptides and Antibodies Against Antigen-Presenting Cells for Subunit-Based Poxvirus Vaccines |
| US20110020273A1 (en) * | 2005-04-06 | 2011-01-27 | Ibc Pharmaceuticals, Inc. | Bispecific Immunocytokine Dock-and-Lock (DNL) Complexes and Therapeutic Use Thereof |
| US8652484B2 (en) | 2004-02-13 | 2014-02-18 | Immunomedics, Inc. | Delivery system for cytotoxic drugs by bispecific antibody pretargeting |
| US9931413B2 (en) | 2005-04-06 | 2018-04-03 | Ibc Pharmaceuticals, Inc. | Tetrameric cytokines with improved biological activity |
| US8067006B2 (en) | 2005-04-06 | 2011-11-29 | Immunomedics, Inc. | Polymeric carriers of therapeutic agents and recognition moieties for antibody-based targeting of disease sites |
| US8158129B2 (en) | 2005-04-06 | 2012-04-17 | Ibc Pharmaceuticals, Inc. | Dimeric alpha interferon PEGylated site-specifically shows enhanced and prolonged efficacy in vivo |
| US8481041B2 (en) | 2005-04-06 | 2013-07-09 | Ibc Pharmaceuticals, Inc. | Dock-and-lock (DNL) constructs for human immunodeficiency virus (HIV) therapy |
| US9623115B2 (en) | 2005-04-06 | 2017-04-18 | Ibc Pharmaceuticals, Inc. | Dock-and-Lock (DNL) Complexes for Disease Therapy |
| US8475794B2 (en) | 2005-04-06 | 2013-07-02 | Ibc Pharmaceuticals, Inc. | Combination therapy with anti-CD74 antibodies provides enhanced toxicity to malignancies, Autoimmune disease and other diseases |
| EP1874824A4 (en) * | 2005-04-06 | 2009-12-30 | Ibc Pharmaceuticals Inc | METHODS OF GENERATING STABLE COMPOUND RELATED COMPLEXES OF HOMODIMERS, HOMOTRATEERS OR DIMER SIZES AND USES THEREOF |
| US8349332B2 (en) | 2005-04-06 | 2013-01-08 | Ibc Pharmaceuticals, Inc. | Multiple signaling pathways induced by hexavalent, monospecific and bispecific antibodies for enhanced toxicity to B-cell lymphomas and other diseases |
| JP5231231B2 (ja) * | 2005-10-19 | 2013-07-10 | アイビーシー・ファーマシューティカルズ・インコーポレーテッド | 複雑性が増大した生理活性アセンブリーを生成するための方法および組成物ならびに使用 |
| US20100226884A1 (en) | 2009-01-20 | 2010-09-09 | Immunomedics, Inc. | Novel Class of Monospecific and Bispecific Humanized Antibodies that Target the Insulin-like Growth Factor Type I Receptor (IGF-1R) |
| US8883162B2 (en) | 2005-10-19 | 2014-11-11 | Ibc Pharmaceuticals, Inc. | Multivalent antibody complexes targeting IGF-1R show potent toxicity against solid tumors |
| US9862770B2 (en) | 2005-10-19 | 2018-01-09 | Ibc Pharmaceuticals, Inc. | Multivalent antibody complexes targeting IGF-1R show potent toxicity against solid tumors |
| EP1959993B1 (en) * | 2005-12-16 | 2014-11-19 | IBC Pharmaceuticals, Inc. | Multivalent immunoglobulin-based bioactive assemblies |
| CA2916671C (en) * | 2007-01-17 | 2018-01-09 | Immunomedics, Inc. | Polymeric carriers of therapeutic agents and recognition moieties for antibody-based targeting of disease sites |
| US9272029B2 (en) | 2009-03-26 | 2016-03-01 | Ibc Pharmaceuticals, Inc. | Interferon lambada-antibody complexes |
| EP2277181B1 (en) * | 2008-04-16 | 2017-08-30 | StemCell Technologies Inc. | Magnetic particles |
| AU2011207189B2 (en) * | 2008-08-08 | 2014-01-16 | Immunomedics, Inc. | Detection of early-stage pancreatic adenocarcinoma |
| AU2009282830B2 (en) * | 2008-08-20 | 2013-11-28 | Ibc Pharmaceuticals, Inc. | Dock-and-lock (DNL) vaccines for cancer therapy |
| US9528988B2 (en) * | 2009-04-07 | 2016-12-27 | National Institute Of Transplantation Foundation | Methods and kits for screening transplant recipients and candidates |
| WO2010125932A1 (ja) * | 2009-04-28 | 2010-11-04 | コニカミノルタホールディングス株式会社 | 融合タンパク質含有集合体、その製造方法及び該集合体を用いたアッセイ法 |
| CA2827076A1 (en) | 2011-02-15 | 2012-08-23 | Immumomedics, Inc. | Anti-mucin antibodies for early detection and treatment of pancreatic cancer |
| ES2672974T3 (es) | 2012-06-01 | 2018-06-19 | Ibc Pharmaceuticals, Inc. | Complejos multiméricos con estabilidad in vivo, farmacocinética y eficacia mejoradas |
| US20150231241A1 (en) | 2012-08-14 | 2015-08-20 | Ibc Pharmaceuticals, Inc. | Combination therapy for inducing immune response to disease |
| US9382329B2 (en) | 2012-08-14 | 2016-07-05 | Ibc Pharmaceuticals, Inc. | Disease therapy by inducing immune response to Trop-2 expressing cells |
| EP3586874A1 (en) | 2012-08-14 | 2020-01-01 | IBC Pharmaceuticals, Inc. | T-cell redirecting bispecific antibodies for treatment of disease |
| US9682143B2 (en) | 2012-08-14 | 2017-06-20 | Ibc Pharmaceuticals, Inc. | Combination therapy for inducing immune response to disease |
| WO2014029012A1 (en) | 2012-08-23 | 2014-02-27 | Stemcell Technologies Inc. | Compositions and methods for rapid and reversible biomolecular labeling |
| US10081793B2 (en) | 2013-03-15 | 2018-09-25 | Stemcell Technologies Inc. | Method for separating cells using immunorosettes and magnetic particles |
| US9452228B2 (en) | 2013-04-01 | 2016-09-27 | Immunomedics, Inc. | Antibodies reactive with an epitope located in the N-terminal region of MUC5AC comprising cysteine-rich subdomain 2 (Cys2) |
| WO2015065987A1 (en) | 2013-11-01 | 2015-05-07 | Ibc Pharmaceuticals, Inc. | Bispecific antibodies that neutralize both tnf-alpha and il-6: novel therapeutic agent for autoimmune disease |
| EP3097187B1 (en) * | 2014-01-21 | 2018-07-04 | Stemcell Technologies Inc. | Method for separating target entities from a sample using a composition of mono-specific tetrameric antibody complexes coupled to a surface |
| ES2808914T3 (es) | 2014-09-04 | 2021-03-02 | Stemcell Tech Inc | Complejos de anticuerpo solubles para la activación y expansión de linfocitos T o células NK |
| WO2016191481A1 (en) | 2015-05-28 | 2016-12-01 | Immunomedics, Inc. | T20 constructs for anti-hiv (human immunodeficiency virus) therapy and/or vaccines |
| CN107709366B (zh) * | 2015-06-10 | 2021-10-26 | 干细胞技术公司 | 用于双功能免疫复合物的原位形成的方法 |
| CN108562739A (zh) * | 2018-04-23 | 2018-09-21 | 吉林大学 | 靶点和血红蛋白双特异性免疫复合物及制备和检测方法 |
| CN117659204B (zh) * | 2024-01-31 | 2024-06-11 | 山东微领生物有限公司 | 四聚体抗体复合物及其应用 |
Family Cites Families (8)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US4401764A (en) * | 1980-02-07 | 1983-08-30 | Technicon Instruments Corporation | Immunoassays employing labeled reagent and a conjugate having two binding sites |
| US4355023A (en) * | 1980-09-30 | 1982-10-19 | The Massachusetts General Hospital | Antibody fragment compositions and process |
| US4481298A (en) * | 1981-04-13 | 1984-11-06 | Amf Incorporated | Pre-precipitated double antibody immunoassay method |
| GB2115005B (en) * | 1981-12-03 | 1984-11-14 | Cancer Research Campaign | Anti rat liver monoclonal antibody |
| ES521370A0 (es) * | 1982-04-12 | 1985-04-16 | Hybritech Inc | Un procedimiento para obtener un polidoma. |
| US4470925A (en) * | 1982-05-05 | 1984-09-11 | E. I. Du Pont De Nemours And Company | Immunoglobulin half-molecules and process for producing hybrid antibodies |
| CA1194415A (en) * | 1982-05-05 | 1985-10-01 | E. I. Du Pont De Nemours And Company | Immunoglobulin half-molecules and process for producing hybrid antibodies |
| US4676980A (en) * | 1985-09-23 | 1987-06-30 | The United States Of America As Represented By The Secretary Of The Department Of Health And Human Services | Target specific cross-linked heteroantibodies |
-
1985
- 1985-04-29 NL NL8501219A patent/NL8501219A/nl not_active Application Discontinuation
-
1986
- 1986-04-25 US US06/855,688 patent/US4868109A/en not_active Expired - Lifetime
- 1986-04-28 EP EP86200734A patent/EP0205198A1/en not_active Withdrawn
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| EP0205198A1 (en) | 1986-12-17 |
| US4868109A (en) | 1989-09-19 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| NL8501219A (nl) | Immunologisch complex, de bereiding en toepassing daarvan. | |
| US5086002A (en) | Erythrocyte agglutination assay | |
| US4828981A (en) | Immunoassays for determining Dirofilaria immitis infection using antiidiotype monoclonal antibody reagents | |
| JP2714786B2 (ja) | キメラ抗体の産生方法 | |
| Parker et al. | Isohemagglutinins and xenoreactive antibodies: members of a distinct family of natural antibodies | |
| Hatzubai et al. | The use of a monoclonal anti-idiotype antibody to study the biology of a human B cell lymphoma. | |
| JPS61502417A (ja) | ポリクロナ−ル抗体、製法と用途 | |
| Karawajew et al. | Production and ELISA application of bispecific monoclonal antibodies against fluorescein isothiocyanate (FITC) and horseradish peroxidase (HRP) | |
| JP2988635B2 (ja) | ヒトＩｇＥに対するモノクローナル抗体 | |
| JPH01114758A (ja) | パパインを含まない抗体フラグメント調製物の製造方法 | |
| AU595159B2 (en) | Bispecific antibody determinants | |
| US4918000A (en) | Multi-color labeling of different antigens in a biological system | |
| EP0096463B1 (en) | Immunoglobulin half-molecules and process for producing hybrid antibodies | |
| Krittanai et al. | Expression of actively soluble antigen-binding fragment (Fab) antibody and GFP fused Fab in the cytoplasm of the engineered Escherichia coli | |
| JPS58176550A (ja) | 均一系免疫試験法、それに用いる試薬調製物及び試薬系 | |
| JP2020148557A (ja) | 試料中のｈｍｇｂ１の測定方法及び測定試薬 | |
| US5856106A (en) | Determination of antibody production against administered therapeutic glycoproteins, especially monoclonal antibodies | |
| Yu et al. | Fc-specific and covalent conjugation of a fluorescent protein to a native antibody through a photoconjugation strategy for fabrication of a novel photostable fluorescent antibody | |
| AU628298B2 (en) | Method for measuring human insulin | |
| EP1664773B1 (en) | Assay methods for determining analytes using analyte analogues | |
| CA1329545C (en) | Immunological complex, its preparation and its use | |
| US4971916A (en) | Liposome based homogeneous immunoassay for diagnostic tests | |
| CN117957306A (zh) | 溶菌方法和细菌检测方法 | |
| JP3479073B2 (ja) | 抗ｈｐａ抗体の検出 | |
| EP0308242A2 (en) | Agglutination assay |
Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| A1B | A search report has been drawn up | ||
| BV | The patent application has lapsed |