NL8301261A - Werkwijze voor het omzetten van polysacchariden. - Google Patents

Description

f. *

Ref.ï Case R 299 (R)

Unilever N.V. te Rotterdam

Korte aanduiding: Werkwijze voor het omzetten van polysacchariden

De uitvinding heeft betrekking op een werkwijze voor het omzetten van polysacchariden, meer in het bijzonder zaad-galactomannanen. De polysacchariden kunnen worden omgezet in al dan niet geïsoleerde vorm of in de 5 vorm van zaad-endospermadeeltjes van een aantal Legumi-nosae, in het bijzonder van guarzaad. Guar is Cyamop-sis tetragonolobus en wordt gewoonlijk zodanig verwerkt dat guargom wordt verkregen, dat guaran als het voornaamste polysaccharide-bestanddeel bevat. Van guaran is 10 bekend, dat het een galactomannan-structuur bezit met een hoofdketen van 1-4 gekoppelde beta-D-manno-pyrano-syleenheden, waaraan alpha-D-galactopyranosyleenheden ge-hecht zijn. Gewoonlijk bevat het 35-45 gew. % aan galactose-eenheden en 65-55% aan mannose-eenheden. Men 15 neemt aan, dat het een moleculair gewicht heeft dat varieert van 16 tot 22 x 10^, zoals afgeleid wordt uit een intrinsieke-viscositeitstraject van 12-16 dl/g, zoals dat vermeld wordt in Carbohydrate Research (Elsevier Scientific Publishing Company), 1982, Deel 107, 20 biz. 17-32. Guaran, guargom en guarzaad zijn overvloedig verkrijgbaar, doch bij sommige toepassingen zijn de eigenschappen ervan minder dan de eigenschappen van een andere industrieel vaak toegepaste gom, n.1. johannes-broodpitmeel, welke verkregen wordt uit johannesbrood 25 ("carob seeds") Deze gom bevat echter overwegend een galactomannan welke 20-25 gew.% aan galactose-eenheden en 80-75 gew.% mannose-eenheden bevat. Johannesbrood-pitmeel heeft gunstiger eigenschappen, zoals t.a.v. het geleren, in het bijzonder in combinatie met andere 30 polysacchariden, dan guargom.

Johannesbroodpitmeel wordt duurder en schaars, als gevolg van slechte oogsten en omdat er in het algemeen geen nieuwe aanplant van de johannesbroodboom meer 35 plaats vindt. Er zijn dan ook pogingen gedaan om de 8301261 *' -* R 299 (R) 2 eigenschappen van guaran te verbeteren door verwijdering van een deel van de galactose-eenheden van de ' mannan—hoofdketen. Een bekende werkwijze voor de enzymatische hydrolyse van een deel der gelactose-5 eenheden uit de hoofdketen is beschreven in US - A - 4 332 894 (Whistler), waarin de behandeling van guargom of guaran-oplossingen, in het bijzonder een 1 gew.% waterige oplossing met het enzym alpha-D-galactosidase, wordt vermeld.

10

Een eerdere beschrijving van de enzymatische verwijdering van galactosidase-zijketens uit galactomannan, o.a. uit guar, treft men aan in Phytochemistry (Perga-mon Press), 1975, Deel 11, blz. 1187-1194, in het bij-15 zonder blz. 1191-1192, Tabel 3 en Figuur 2. Deze toont ook aan, dat het noodzakelijk is dat het alpha-galacto-sidase-enzym voldoende vrij is van verontreinigend keten-splitsend enzym (beta-mannanase). Uit het experimentele gedeelte van deze voorpublikatie (blz. 1193, 20 rechter kolom) blijkt duidelijk, dat 0,1 gew.% oplossingen van galactomannan behandeld werden met alpha-galactosidase-enzymen.

Een andere, meer algemene beschrijving van de bereiding 25 van guaran waarvan galactose verwijderd is, met verbeterde synergistische eigenschappen welke gelijken op die van johannesbroodpitmeel, is te vinden in Abstracts of Xth International Carbohydrate Symposium, Sydney. Australië, TH, 16 juli 1980.

30

Voor alle hierboven beschreven werkwijzen en voor alle vroeger gepubliceerde werkwijzen betreffende enzymatische modificatie van galactomannanen die Aanvraagster bekend zijn geldt, dat het algemeen gangbare praktijk 35 was om enzym te incuberen met het polysaccharide in een oplossing met concentraties tot 1 gew.%, teneinde het in een homogeen reactiemengsel om te zetten.

8301261 R 299 (RJ , * 3

Tenslotte is er de dissertatie van Charles Wesley Baker van de Purdue University van 1973, waarin de behandeling van guaranoplossing met enzym wordt beschreven. Op blz. 100 wordt de behandeling van 100 mg/l waterige 5 guaran-oplossing vermeld. Aangezien niet-gedepolymeri- seerd guaran bij deze concentratie geen oplossing vormt, doch een dikke pasta, wordt deze beschrijving, die geen nawerkbare openbaring vormt, buiten beschouwing gelaten. Ofwel de vermelde concentratie is foutief vermeld, 10 of het guaran was zodanig gedepolymeriseerd voordat het werd opgelost, dat het niet meer als representatief uitgangsmateriaal kan worden beschouwd of het was materiaal dat niet bereid was door middel van de zorgvuldige methoden die tot de normale polysaccharidenchemie be 15 horen. Deze laatste mogelijkheid is zeer waarschijnlijk, omdat deze dissertatie op blz. 139 lijkt te bevestigen, dat het gebruikte guaran gedepolymeriseerd was, daar Tabel 6 een intrinsieke viscositeit voor guaran vermeldt van 6,12 dl/g, terwijl de verwachte waarden voor 20 niet-gedepolymeriseerd materiaal 2 tot 3 maal zo hoog zijn als deze waarde.

Men heeft soms hoge concentraties van bepaalde poly-sacchariden (d.w.z. 30 gew.%) toegepast in werkwijzen 25 waarbij enzymatische modificatie, in het bijzonder enzymatische modificatie van zetmeel, plaats vond. Dergelijke, in de literatuur beschreven werkwijzen houden echter in, dat de hoofdketen van het polysaccharide enzymatisch wordt afgebroken, waarbij een zeer sterke 30 vermindering van de viscositeit en het tenietgaan van de geleereigenschappen optreedt. Uiteindelijk verkrijgt men dan toch een homogene oplossing.

Dergelijke enzymatische conversies bij hogere concen-35 traties zijn echter eerder uitzondering dan regel, omdat homogene omstandigheden vereist werden.

8301261 ' R 299 (R) 4

In het onderhavige geval leidt partiële enzymatische hydrolyse, van ongeveer de helft, van de galactose uit galactomannan welke 20-45, bij voorkeur 35-45 gew.% aan galactose bevat, tot het ontstaan van meer syner-5 gistische regionen langs de mannan-keten en derhalve tot meer structuurvorming en gelering na de hydrolyse.

Gevonden werd nu, dat een dikke waterige pasta of brij, welke 2-50 gew.% galactomannan bevat, kan worden geïn-10 cubeerd met een praktisch specifiek alpha-galactosidase-enzympreparaat, teneinde het galactose-gehalte van het galactomannan te verlagen van een waarde tussen 35 en 45 gew.% tot bij voorkeur een waarde tussen 10 en 27 gew.%. De synergistische eigenschappen van het galactomannan 15 worden hierdoor belangrijk verbeterd.

Bij voorkeur bevat de als uitgangsmateriaal gebruikte, waterige galactomannan-pasta van 5 tot 30 gew.% aan galactomannan, meer in het bijzonder van 8 tot 20 gew.%. 20 Het gemodificeerde galactomannan bevat bij voorkeur tussen 13 en 25 gew.%,en bij bijzondere voorkeur tussen 5 en 19% galactose. Dit laatste lijkt een nieuwe stof te zijn met zeer goede geleereigenschappen.

25 Volgens de onderhavige uitvinding wordt het galactoman-nanpreparaat met het gelactosidase-enzym geïncubeerd onder zodanige omstandigheden, dat het enzym slechts een deel van de galactose-eenheden van de mannan-hoofd-keten verwijdert, terwijl de hoofdketen niet of nauwe-30 lijks depolymeriseert.

Dit wordt op praktische wijze bewerkstelligd door de pasta, gewoonlijk bij een temperatuur tussen 0 en 70°C, bij voorkeur tussen 20 en 40°C, te kneden, hetzij met 35 het enzym of het met na hydratering toegevoegde enzym. Desgewenst kan ook enzympoeder met een droog preparaat van het polysaccharide voor de hydratatie worden gemengd.

8301261 R 299 (R) ï 5

De incubatie wordt voortgezet totdat het galactose-gehalte van polysaccharide het gewenste peil heeft bereikt. Dit duurt gewoonlijk van 12 tot 48 uur.

5 De pH van de pasta dient binnen het werkzame gebied van het enzym te liggen, gewoonlijk tussen 4 en 6. Het toevoegen van een kleine hoeveelheid zuur of buffer-oplossing kan gewenst zijn.

10 Het enzympreparaat dient een nagenoeg specificieke al-pha-galactosidase-activiteit en hoogstens een slechts geringe beta-mannanase-activiteit te vertonen. Na het incuberen dient het galactomannan bijgevolg een moleculair gewicht te hebben dat niet beneden twee derde 15 van de oorspronkelijke waarde ligt. Geschikte enzymen kunnen van plantaardige oorsprong zijn (b.v. van lucerne, koffiebonen of guarzaad) of zij kunnen verkregen zijn uit bacterie- of schimmelcultures (b.v. Aspergillus niger).

20

Na het verwijderen van een gedeelte, b.v. de helft, van de galactose-eenheden van het galactomannan, wordt het enzym gedeactiveerd, bijvoorbeeld door een hitte-behan-deling. Ofschoon het gewenst kan zijn het gemodificeer- 25 de galactomannan te zuiveren teneinde vrije galactose en enzymmateriaal daaruit te verwijderen, b.v. door oplossen en neerslaan van het gemodificeerde galactomannan, is dit gewoonlijk niet noodzakelijk en kan het produkt als zodanig worden gebruikt voor diverse toe- 30 passingen waarbij de geleereigenschappen van belang zijn. In het bijzonder kan het worden gebruikt in combinatie met andere polysacchariden zoals agar, agarose, carrageen en xanthan, waarbij gebruik gemaakt wordt van de synergistische wisselwerking met deze stoffen.

8301261 * ' R 299 (R) 6

De Theologische eigenschappen van de volgens de uitvinding verkregen, gemodificeerde guaranen, in het bijzonder van die welke 15 a 19 gew.% galactose bevatten, zijn zodanig dat het waardevolle ingrediënten zijn voor 5 voedingsmiddelen, zoals gegeleerde desserts, "mousses" en consumptie-ijs, en ook voor bepaalde cosmetische preparaten. Voor een doelmatige verwerking is het in sommige gevallen aan te bevelen om vooraf innige of vrij homogene mengsels te bereiden van ten minste één 10 emulgator en/of ander polysaccharide met gemodificeerd guar. Deze mengsels kunnen een hoeveelheid emulgator bevatten die minstens gelijk is aan het gewicht van het gemodificeerde guar en eventuele andere gommen. De combinaties worden doelmatigheidshalve bereid uit oplos-15 singen of smelten, onder toepassing van methoden zoals sproei-drogen, sproei-koelen of trommel-drogen.

Proef 1

Inwerking van gezuiverde alpha-galactosidase op gede-20 polymeriseerd guar-galactomannan (guaran beta-manna- nase grens-galactomannan)_

Doel:

Deze proef werd uitgevoerd ter bepaling van het effect 25 van de substraat-concentratie op de snelheid waarmede D-galactose wordt vrijgemaakt uit guar-galactomannan door alpha-galactosidase-enzym. In deze proeven werd gedeeltelijk gedepolymeriseerd guar-galactomannan (guar beta-mannanase grens-galactomannan) gebruikt om visco-30 siteitseffecten tot een minimum te beperken.

Guaran beta-mannanase grens-galactomannan (GMLG, 0,2 ml 0,2-10 gew.%) in een natriumacetaatbuffer (0,1M, pH 4,5) werd gedurende 5 min. bij 40eC geïncubeerd met guarzaad-35 alpha-galactosidase II (zie B.V. McCleary (1983) Phytochemistry 22, blz. 649-658), 13 n kat op p-nitrofenyl alpha-D-galactopyranoside. De reactie werd beëindigd en 83 0 1 2 6 1 7 R 299 (R) % de stijging van de hoeveelheid reducerende suiker werd genoteerd als maat voor de hydrolyse-graad. De resultaten zijn weergegeven in Tabel I en daaruit blijkt duidelijk, dat om te bereiken dat het enzym met maximale 5 snelheid werkt, een substraatconcentratie van méér dan 10 gew.% (100 ml/ml) vereist is.

Soortgelijke resultaten werden verkregen wanneer een alpha-galactosidase van Aspergillus niger werd toegepast.

10 Verhoging van de substraatconcentratie van 0,2 tot 10 gew.% resulteerde in een bijna tienvoudige toename van de werkzaamhei d.

TABEL I 15

Concentratie van substraat Werkzaamheid van het _(gew.%)_ enzym (% van maximum) 0,2 4.4 0.5 9,5 20 1,0 14.5 2.5 30,5 5.0 71,5 10,0 100,0 25 Deze Tabel verschaft gegevens over de optimale substraatconcentratie ter verkrijging van een maximale hydrolyse zonder de waarschijnlijk modificerende effecten van een buitensporig hoge viscositeit. Het effect van de viscositeit zal duidelijker aan de dag treden in 30 de andere in deze beschrijving te geven voorbeelden, waarin in de natuur voorkomend guar-galactomannan werd toegepast.

Voorbeelden 1 en 2 35 100 g guarmeel werd geëxtraheerd met kokende waterige ethanol (80% v/v) en het door afzuiging gedroogde meel werd toegevoegd aan 3 1 ijskoud water onder snel mengen 830 1 26 1 R 299 (R) 8 in een Kenwood-mengapparaat. Men liet de pasta 2 uur staan, waarna zij (charge-gewijs) gemengd werd in een Waring Blender. De pasta werd verwarmd tot 60°C en opnieuw met behulp van de Kenwood-mixer gemengd.

5

Van bovengenoemde pasta (465 g, bevattende 15 g guar-meel, d.w.z. 3,2 gew./vol.%) werden monsters genomen, welke als volgt werden behandeld: 10 A. Aan het pasta-monster werd toegevoegd: guar alpha- galactosidase II (3 ml, 720 n kat op p-nitrofenyl alpha-D-galactopyranoside) plus natriumacetaatbuffer (2,40 ml, 2M, pH 4,5), en dit mengsel werd gedurende 24 uur bij 37°C geïncubeerd in de mengkom van een Farinograph. De 15 pasta werd gedurende de eerste 8 uur met tussenpozen van 2 uur gedurende 15 min. gemengd.

De reactie werd beëindigd door het reactiemengsel tot 80°C te verhitten, waarna polysaccharide werd gewonnen 20 door alcohol-precipitatie. Het precipitaat werd met ethanol, aceton en ether gewassen en onder vacuüm gedroogd .

Een monster van het gedroogde materiaal werd in water 25 opgelost en gecentrifugeerd, en galactomannan-poly- saccharide werd geprecipiteerd met alcohol. Het gezuiverde polysaccharide had een galactose/mannose-verhou-ding van 25:75 en een specifieke viscositeit van 17,6 dl/g (vgl. de waarde voor het oorspronkelijke galacto-30 mannan van 17,7 dl/g, en een galactose/mannose-verhou- ding van 40:60).

B. Aan guarpasta (465 g, 3,2 gew./vol.% als onder A vermeld) werd guar alpha-galactosidase II (2 ml, 480 35 n kat) plus natriumacetaatbuffer(3 ml, 2M, pH 4,5) en water (41 ml) toegevoegd. De pasta werd met behulp van een spatel grondig gemengd en gedurende 48 uur bij 40°C

8301261 9 zonder verder mengen geïncubeerd. De reactie werd beëindigd door de pasta gedurende 10 min. bij 100°C te behandelen, en het polysaccharide (alsmede een monster van gezuiverd galactomannan) werd bereid als hierboven 5 beschreven. Het gezuiverde galactomannan vertoonde een galactose/mannose-verhouding van 24:76 en een specifieke viscositeit van 17,6 dl/g).

Voorbeeld 3 10 Met ethanol gewassen stukjes guar (40 g) liet men gedurende 4 uur bij 40°C en vervolgens gedurende 2 uur bij 80°C in 60 ml gedestilleerd water staan om dit te absorberen. Het materiaal werd vervolgens in een mengkom van een Parinograph gemengd, terwijl nog eens 100 ml 15 water werd toegevoegd.

Acetaatbuffer (4 ml, 2M, pH 4,5) plus guar alpha-galac-tosidase II (6 ml, 1440 n kat) plus 17 ml water werden onder mengen toegevoegd. De concentratie aan guar-20 stukjes bedroeg 5,5 gew./vol.%. De pasta werd gedurende de volgende periode van 8 uur telkens 5 minuten lang gemengd en men liet ze tijdens de nacht zonder roeren (bij 37°C) in de mengkom van de Farinograph staan. De pasta werd opnieuw gemengd en nog eens 24 uur geïncu-25 beerd (totale incubatietijd 48 uur). Het galactomannan in een evenmatig deel ("aliquot") van deze pasta werd gezuiverd en de resterende pasta werd met alcohol behandeld en door oplosmiddel-uitwisseling gedroogd. Het gezuiverde galactomannan vertoonde een galactose/manno-30 se-verhouding van 23,5:76,5 en een specifieke viscositeit van 14,0 dl/g.

Voorbeelden 4 en 5

Guar-stukjes werden zodanig gemalen dat zij door een 35 zeef van 22 mm gingen, en werden met kokende ethanol gedroogd. Het meel (30 g) in water (180 ml) werd gedurende 10 min in een kokend waterbad verhit en vervolgens 8301261 R 299 (R) » 10 gedurende 20 uur bij 40°C bewaard. De heterogene pasta werd in twee gelijke charges verdeeld en als volgt behandeld: 5 A.

Eén pasta-charge (105 g) werd in de mengkom van een Fa-rinograph geplaatst en de volgende oplossingen werden toegevoegd: guar alpha-galactosidase II (2 ml; 480 n kat); natriumacetaat-buffer (3 ml, 2M, pH 4,5); en wa-10 ter (5 ml). De eindconcentratie van meel in water bedroeg 15 gew./vol.%. De pasta werd gemengd en gedurende 48 uur bij 40°C gelncubeerd.

B.

15 De tweede pasta-charge werd op dezelfde wijze als de eerste behandeld, met dit verschil dat de toegevoegde hoeveelheid water 55 ml bedroeg, tegenover 5 ml voor charge A). De eindconcentratie van deze pasta bedroeg 10 gew./vol.%. De pasta werd gemengd en gedurende 48 20 uur bij 40°C gelncubeerd.

Bij de incubatie werden de reacties beëindigd door de pasta's gedurende 10 min. bij 100°C te incuberen. Een monster van elke pasta werd verwijderd, waarna galacto-25 mannan werd geëxtraheerd om te worden genanalyseerd. De massa van het monster werd gevriesdroogd. De gezuiverde gelactomannanen (monsters A en B) hadden beide een ga-lactose/mannose-verhouding van 27:73 en een specifieke viscositeit van 19,8 dl/g.

30

Voorbeeld 6

Het effect van beta-mannanase verontreiniging in alpha-galactosidase-preparaten op de eigenschappen van door alpha-galactosidase gemodificeerde guar-galactomannanen 35

Men gebruikte guar-pasta's bereid als beschreven in Voorbeeld 1. Guarmeelpasta (3,2 gew./vol.%, 155 ml) 8301261 R 299 (R) 11 werd gedurende 20 uur bij 37°C gelncubeerd met guar-alpha-galactosidase II (0,5 ml, 240 n kat) plus na-triumacetaatbuffer (5 ml, 0-250 n kat). De reactie werd beëindigd door de pasta's gedurende 10 min. bij 100°C 5 te behandelen, en het galactomannan werd gezuiverd en gedroogd door oplosmiddel-uitwisseling (ethanol, ace-ton, ether) en drogen onder vacuüm. De toegepaste hoeveelheden beta-mannanase warenï 0 n kat (monster A) ? 0,025 n kat (monster B); 0,25 n kat (monster C); en 10 2,5 n kat (monster D). De werkzaamheid van het beta- mannanase werd gestandaardiseerd onder gebruikmaking van johannesbrood-galactomannan (0,28 gew./vol.%) in een natriumacetaat-buffer (0,1M, pH 4,5) als substraat.

De galactose/mannose-verhouding van elk der monsters 15 bedroeg 19:81 en de specifieke viscositeit was: 16,54 dl/g (A); 16,21 dl/g (B); 14,34 dl/g (C),* en 4,79 dl/g (D). Deze resultaten tonen aan, dat bij een hoge sub-straat-concentratie een galactomannan met een galactose/ verhouding, die ongeveer gelijk is aan die van johannes-20 brood-galactomannan en met equivalente tot iets betere viscositeiten, kan worden bereid uit guar-galactomannan onder toepassing van guar-alpha-galactosidase die verontreinigd is tot minstens 0,1% door beta-mannanase.

1% beta-mannanase-verontreiniging (monster D) veroor-25 zaakte een significante depolymerisatie.

Voorbeeld 7

Guarmeel (1 kg) werd gedurende 10 min. geëxtraheerd met kokende waterige ethanol (80 gew./vol.%), waarbij vrije 30 vloeistof door afzuiging werd verwijderd. Het meel werd toegevoerd aan de mengkom van een Hobart Mixer, waarin * zich 10 1 ijskoud water bevond. De menger werd ingesteld op draaisnelheid 1 en het meel werd langzaam toegevoegd, teneinde de vorming van klonters tot een mini-35 mumte beperken. Toen de pasta dik begon te worden, werd een verdere hoeveelheid (10 1) ijskoud water in porties toegevoegd. De pasta werd nog eens 10 min. gemengd bij 8301261 V , R 299 (R) 12 een instelling van de mixer op stand 3, waarna men de pasta een nacht liet staan om een volledige hydratering mogelijk te maken. De pasta werd verder gemengd (instelling 3), waarbij guar-alpha-galactosidase II (20 micro-5 kat) in een natriumacetaat-buffer (pH 4,8; 100 ml) onder grondig mengen werd toegevoegd. De kom met inhoud werd met een kunststoffolie afgesloten, waarna de inhoud gedurende 48 uur bij 37°C werd geïncubeerd. De reactie werd beëindigd door de pasta tot 80°C te ver-10 hitten onder gebruikmaking van een stoomstraal, waarna de pasta gevriesdroogd werd. Het aldus behandelde guar-meel bevatte guaran met een galactose/mannose-verhou-ding van 18:82.

15 Voorbeeld 8

Porties consumptie-ijs werden bereid met de volgende samenstelling in een kleinschalige proefinstallatie met een capaciteit van 40 1: 10% niet-vethoudende vaste stof uit melk 20 10% vet 15% sucrose 0,3% emulgator 0,2% stabilisator 64,5% water.

25

Als stabilisator werd resp. toegepast: (1) guargom of (2) johannesbroodpitmeel of (3) met alpha-galactosidase gemodificeerde guargom van Voorbeeld 7.

30 Het consumptie-ijs werd verpakt in blokken van 0,5 1 en de smelteigenschappen ervan werden gemeten bij 15°C.

De resultaten zijn weergegeven in Tabel II.

8301261 R 299 (R) ' * 13

TABEL II

No. Stabilisator Galactose/ Afdruip- Vörm- mannose- snelheid vasth.

5 verhouding van ijs van ijs v. stabil. (ml/h) na 4 h 1 Guargom 40:60 60 slecht 2 Johannesbrood- 10 pitmeel 23:77 23 goed 3 Gemodificeerde guargom 18:82 27 zeer goed 15

Zoals blijkt uit Tabel II leidde het opnemen van met alpha-galactosidase gemodificeerde guargom# in plaats van johannesbroodpitmeel# met een galactose-gehalte dat gelijk is aan dat van johannesbroodpitmeel# tot het 20 verkrijgen van consumptie-ijs dat dezelfde of betere eigenschappen vertoonde in vergelijking met het con-sumptie-ijs dat johannesbroodpitmeel als stabilisator bevatte. De afdruipsnelheid van het consumptie-ijs dat met alpha-galactosidase gemodificeerde guargom bevatte 25 was iets hoger dan die van het ijs met johannesbroodpitmeel# doch de vormvastheid ervan na 4 uur bij 15°C was merkbaar beter. Het consumptie-ijs dat niet-gemodi-ficeerde guargom bevatte was merkbaar slechter# zowel t.a.v. afdruipsnelheid als t.a.v. vormvastheid, dan de 30 ijsprodukten die de andere stabilisatoren bevatten.

Deze resultaten tonen aan, dat de met alpha-galactosidase gemodificeerde guargom# bereid door incubatie met enzym in een dikke pasta# minstens gelijk is aan in de natuur voorkomend johannesbroodpitmeel# wat betreft de 35 functionele eigenschappen daarvan.

8301261 , R 299 (R) 14

Voorbeeld 9

Mengsels van xanthan (0,5 gew./vol.%) en galactomannan (1,0 gew./vol.%) in water werden als volgt bereid: De bestanddelen werd in water gedispergeerd in een fles 5 met schroefdoep, onder gebruikmaking van een Atomix met top-aandrijving, gedurende 5 min. behandeld in een autoclaaf bij 120°C, opnieuw gemengd met de Atomix, gecentrifugeerd (3000 toeren per min., 2 min.) teneinde bellen te verwijderen, verwarmd in een waterbad om opnieuw 10 te smelten, en tenslotte uitgeschonken in perspex-vormen van ca. 1 1/4 cm en een diepte van ca 1,2 cm. De vloei-spanning werd gemeten op de gel-stoppen (?), bij kamertemperatuur, na rijpen gedurende 24 h, waarbij een In-stron Materials Tester werd gebruikt. Monsters werden 15 samengedrukt tussen evenwijdige platen, waarbij een kruiskop-snelheid van 20 mm/min. werd toegepast. Als galactomannan werd gebruikt: (1) guargom of (2) johan-nesbroodpitmeel of (3) met alpha-galactosidase gemodificeerde guargom van Voorbeeld 3, of (4) met alpha-20 galactosidase gemodificeerde guargom van Voorbeeld 7.

De resultaten zijn vermeld in Tabel III

TABEL III

25 -«—--

No. Galactomannan Galactose/ Vloei- mannose- spanning verhouding (N) 30 1 Guargom 40:60 geen gel gevormd 2 Johannesbrood- pitmeel 23:77 3.3 3 Gemodif. guargom 23,5:76,5 3,0 35 4 " " 18:82 5.3 8301261 15 R 299 (R)

De wisselwerking tussen gemodificeerde guargom en xan-than is gelijk aan de wisselwerking tussen johannes-broodpitmeel en xanthan, en is anders dan die tussen guargom en xanthan, waarbij geen gel wordt gevormd.

5 Soortgelijke resultaten zijn verkregen met betrekking tot de wisselwerking tussen galactomannanen en agarose.

830 1 26 1

Claims (7)

1. 2. Werkwijze volgens conclusie 1, met het kenmerk, 10 dat de waterige brij 8-20 gew.% galactomannan bevat.
2. 3. Werkwijze volgens een der conclusies 1 of 2, met het kenmerk, dat de incubatie van de galactomannan-brij gestopt wordt als het gehalte aan galactose van het 15 galactomannan gedaald is tot een waarde tussen 10 en 27 gew.%.
3. 4. Werkwijze volgens een der conclusies 1 t/m 3, met het kenmerk, dat de incubatie gestopt wordt bij een 20 galactose-gehalte van het galactomannan tussen 13 en 25 gew.%.
4. 5. Werkwijze volgens een der conclusies 1 t/m 4, met het kenmerk, dat de incubatie gestopt wordt bij een 25 galactose-gehalte tussen 15 en 19 gew.%.
5. 6. Werkwijze volgens een der conclusies 1 t/m 5, met het kenmerk, dat het uiteindelijke gemiddelde moleculair gewicht van het galactomannan een waarde heeft welke meer 30 dan twee derde van de uitgangswaarde bedraagt.
6. 7. Een galactomannan waarvan het galactose-percentage tussen 15 en 19 bedraagt. 83 0126 1 R 299 (R) ~ r* *
7. 8. Een synergistisch mengsel van polysacchariden, bestaande uit een galactomannan volgens conclusie 7 en een polysaccharide uit de groep bestaande uit xanthan, agar en agarose. 830 1 26 J