[go: up one dir, main page]

NL193107C - N-[4-(3-aminopropyl)aminobutyl]-2-(omega-guanidinovetzuuramido -2-gesubstitueerde ethaanamide, zout daarvan en werkwijze ter bereiding daarvan. - Google Patents

N-[4-(3-aminopropyl)aminobutyl]-2-(omega-guanidinovetzuuramido -2-gesubstitueerde ethaanamide, zout daarvan en werkwijze ter bereiding daarvan. Download PDF

Info

Publication number
NL193107C
NL193107C NL8203874A NL8203874A NL193107C NL 193107 C NL193107 C NL 193107C NL 8203874 A NL8203874 A NL 8203874A NL 8203874 A NL8203874 A NL 8203874A NL 193107 C NL193107 C NL 193107C
Authority
NL
Netherlands
Prior art keywords
aminobutyl
aminopropyl
guanidino
mixture
formula
Prior art date
Application number
NL8203874A
Other languages
English (en)
Other versions
NL193107B (nl
NL8203874A (nl
Original Assignee
Zaidan Hojin Biseibutsu
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by Zaidan Hojin Biseibutsu filed Critical Zaidan Hojin Biseibutsu
Publication of NL8203874A publication Critical patent/NL8203874A/nl
Publication of NL193107B publication Critical patent/NL193107B/nl
Application granted granted Critical
Publication of NL193107C publication Critical patent/NL193107C/nl

Links

Classifications

    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07C—ACYCLIC OR CARBOCYCLIC COMPOUNDS
    • C07C277/00—Preparation of guanidine or its derivatives, i.e. compounds containing the group, the singly-bound nitrogen atoms not being part of nitro or nitroso groups
    • C07C277/08—Preparation of guanidine or its derivatives, i.e. compounds containing the group, the singly-bound nitrogen atoms not being part of nitro or nitroso groups of substituted guanidines
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07D—HETEROCYCLIC COMPOUNDS
    • C07D209/00—Heterocyclic compounds containing five-membered rings, condensed with other rings, with one nitrogen atom as the only ring hetero atom
    • C07D209/02—Heterocyclic compounds containing five-membered rings, condensed with other rings, with one nitrogen atom as the only ring hetero atom condensed with one carbocyclic ring
    • C07D209/44—Iso-indoles; Hydrogenated iso-indoles
    • C07D209/48—Iso-indoles; Hydrogenated iso-indoles with oxygen atoms in positions 1 and 3, e.g. phthalimide
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P35/00—Antineoplastic agents
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07C—ACYCLIC OR CARBOCYCLIC COMPOUNDS
    • C07C279/00—Derivatives of guanidine, i.e. compounds containing the group, the singly-bound nitrogen atoms not being part of nitro or nitroso groups
    • C07C279/04—Derivatives of guanidine, i.e. compounds containing the group, the singly-bound nitrogen atoms not being part of nitro or nitroso groups having nitrogen atoms of guanidine groups bound to acyclic carbon atoms of a carbon skeleton
    • C07C279/12—Derivatives of guanidine, i.e. compounds containing the group, the singly-bound nitrogen atoms not being part of nitro or nitroso groups having nitrogen atoms of guanidine groups bound to acyclic carbon atoms of a carbon skeleton being further substituted by nitrogen atoms not being part of nitro or nitroso groups
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07C—ACYCLIC OR CARBOCYCLIC COMPOUNDS
    • C07C279/00—Derivatives of guanidine, i.e. compounds containing the group, the singly-bound nitrogen atoms not being part of nitro or nitroso groups
    • C07C279/04—Derivatives of guanidine, i.e. compounds containing the group, the singly-bound nitrogen atoms not being part of nitro or nitroso groups having nitrogen atoms of guanidine groups bound to acyclic carbon atoms of a carbon skeleton
    • C07C279/14—Derivatives of guanidine, i.e. compounds containing the group, the singly-bound nitrogen atoms not being part of nitro or nitroso groups having nitrogen atoms of guanidine groups bound to acyclic carbon atoms of a carbon skeleton being further substituted by carboxyl groups
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12P—FERMENTATION OR ENZYME-USING PROCESSES TO SYNTHESISE A DESIRED CHEMICAL COMPOUND OR COMPOSITION OR TO SEPARATE OPTICAL ISOMERS FROM A RACEMIC MIXTURE
    • C12P13/00—Preparation of nitrogen-containing organic compounds
    • C12P13/02—Amides, e.g. chloramphenicol or polyamides; Imides or polyimides; Urethanes, i.e. compounds comprising N-C=O structural element or polyurethanes

Landscapes

  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Organic Chemistry (AREA)
  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Zoology (AREA)
  • Wood Science & Technology (AREA)
  • Engineering & Computer Science (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
  • General Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Biochemistry (AREA)
  • Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
  • Genetics & Genomics (AREA)
  • General Engineering & Computer Science (AREA)
  • Biotechnology (AREA)
  • Microbiology (AREA)
  • Pharmacology & Pharmacy (AREA)
  • Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
  • Medicinal Chemistry (AREA)
  • Public Health (AREA)
  • Animal Behavior & Ethology (AREA)
  • Veterinary Medicine (AREA)
  • Acyclic And Carbocyclic Compounds In Medicinal Compositions (AREA)
  • Organic Low-Molecular-Weight Compounds And Preparation Thereof (AREA)
  • Pharmaceuticals Containing Other Organic And Inorganic Compounds (AREA)
  • Peptides Or Proteins (AREA)
  • Medicines That Contain Protein Lipid Enzymes And Other Medicines (AREA)

Description

1 193107 N-[4-(3-aminopropyl)aminobutyl]-2-(co-guanidinovetzuuramido)-2- gesubstitueerde ethaanamide, zout daarvan en werkwijze ter bereiding daarvan
De uitvinding heeft betrekking op N-[4-(3-aminopropyl)aminobutyl]-2-(ro-guanidinovetzuuramido)-2-5 gesubstitueerd ethaanamiden met carcinostatische werkzaamheid en met de algemene formule 1 van het formuleblad, waarin Y een groep met de formule 1 g, 1 h of 1 j voorstelt, R een waterstofatoom, een alkylgroep met 1 tot en met 4 koolstofatomen, die een hydroxylgroep als substituent kan bevatten, of een benzylgroep voorstelt, en n een geheel getal is van 1 tot en met 8, met dien verstande dat, wanneer Y de groep met de formule 1j voorstelt en n gelijk aan 4 is, R de groepen anders dan een waterstofatoom 10 voorstelt; of een zout daarvan.
Het gaat daarbij om nieuwe verbindingen die nuttig zijn als carcinostatische stof.
Tijdens de systematische onderzoeken van carcinostatische middelen, werd een nieuw carcinostatisch antibioticum BMG162-aF2 gevonden, dat spergualin werd genoemd, in een kweekfiltraat van een stam BMGl62-aF2 (FERM P-5230; ATCC 31932) van Bacillus laterosporus die behoort tot het genus Bacillus 15 [Journal of Antibiotics, Vol. 34, blz. 1619 en blz. 1622 (1981)]. De chemische structuur van spergualin wordt weergegeven door de formule 1k. De configuratie in de positie 15 is S, terwijl die in de positie 11 nog moet worden bepaald [Journal of Antibiotics Vol. 34, 1622 (1981)]. De verbinding van deze formule wordt gesynthetiseerd door condensatie van een carbonamide en glyoxylspermidine. De ontstane epimere verbinding wordt gescheiden in natuurlijk (-)-spergua-lin en niet-natuurlijk (+)-spergualin [Journal of 20 Antibiotics Vol. 34, 1 625 (1981)].
In het kader van de onderhavige uitvinding werd een uitvoerig onderzoek uitgevoerd naar uiteenlopende verbindingen, die met spergualin verwant zijn. De uitvinding berust op de vondst dat de verbindingen die zijn weergegeven door de algemene formule 1, een uitstekende carcinostatische werkzaamheid vertonen. In het bijzonder wanneer R een groep anders dan een waterstofatoom voorstelt, zijn de verbindingen uitstekend, 25 ook wat betreft stabiliteit.
De verbindingen volgens de onderhavige uitvinding worden gesynthetiseerd zoals hieronder wordt beschreven.
De verbindingen met de algemene formule 1 waarin R een waterstofatoom voorstelt, worden bereid door condensatie van een ω-guanidino-vetzuuramide met de algemene formule 2, waarin Y en n als boven zijn 30 gedefinieerd, en N-[4-(3-aminopropyl)aminobutyl]-2,2-di-hydroxyethaanamide met formule 3.
In het geval dat R in de algemene formule (1) één van de andere groepen dan een waterstofatoom voorstelt, worden de onderhavige verbindingen gesynthetiseerd doordat men de verbinding die door de bovenvermelde condensatie verkregen is, of spergualin dat verkregen is uit het microbische kweekfiltraat, waarbij in de verbindingen of in het spergualin, de amino- en iminogroepen, indien noodzakelijk, zijn 35 beschermd, te laten reageren met een alifatische een- of tweewaardige alcohol met 1 tot en met 4 koolstofatomen, een diazo-alkaan met 1 tot en met 4 koolstofatomen, of benzylalcohol, en de groepen die de amino- en iminogroepen beschermen, indien deze aanwezig zijn, te verwijderen.
De verbindingen volgens de onderhavige uitvinding worden in het algemeen gebruikt in de vorm van een farmacologisch aanvaardbaar zuuradditiezout. Voorbeelden van zuuradditiezouten zijn zouten met 40 anorganische zuren zoals chloorwaterstofzuur, zwavelzuur, fosforzuur, en boorzuur, en organische zuren zoals azijnzuur, citroenzuur, wijnsteenzuur en glutaarzuur.
De verbindingen volgens de onderhavige uitvinding die zijn weergegeven door de algemene formule 11 waarin Y, R en n als boven zijn gedefinieerd, hebben eik een asymmetrisch koolstofatoom in de positie 11 en bestaan daarom in de vorm van epimeren ten opzichte van koolstofatoom 11, dat wil zeggen in de vorm 45 van linksdraaiend epimeer [hierna aan te duiden als (-)] en in de vorm van rechtsdraaiend epimeer [hierna aan te duiden als (+)]. Tenzij dat speciaal staat aangegeven is een verbinding volgens de onderhavige uitvinding een mengsel (bij benadering 1:1) van een paar epimeren [als dat noodzakelijk is, aangeduid met (+)]. Wanneer Y een groep voorstelt met formule 1m heeft de verbinding ook een asymmetrisch koolstofatoom in de positie 15. Daarom is er één epimeer met S-configuratie in de positie 15, terwijl het andere 50 epimeer de R-configuratie in de positie 15 heeft. Tenzij dit speciaal is aangegeven, is de onderhavige verbinding een mengsel (bij benadering 1:1) van (S)-epimeer en (R)-epimeer.
De fysisch-chemische en biologische eigenschappen van typerende voorbeelden van de verbindingen van deze uitvinding zijn hieronder weergegeven.
(1) Fysisch chemische eigenschappen.
55 De namen van typerende verbindingen van deze uitvinding zijn weergegeven in tabel A. De molecule-formules en elementanalyses van hydrochloriden van deze verbindingen zijn samengevat in tabel B, en de infrarood spectra (KBr-tablet) en proton-NMR spectra {in deutero-methanol, tetramethylsilaan = TMS als 193107 2 inwendige standaard) in tabel C. De specifieke rotaties van optische isomeren van verscheidene verbindingen van deze uitvinding zijn weergegeven in tabel D.
De chemische stabiliteit van de onderhavige verbindingen werd beoordeeld door de retentie (%) te bepalen na 4 uur lang verhitten bij 60°C. In tabel E zijn de testresultaten te zamen met die voor spergualin 5 als referentie weergegeven. De retentie werd bepaald door middel van vloeistofchromatografie met hoog prestatievermogen (HPLC). De kolom had als pakking Nucleosil(R) 5C18. Het voor spergualin gebruikte oplosmiddel was een mengsel (6:94) van acetonitril-0,01 M natriumpentaansulfonaat +0,01 M Na2HP04 (pH
3), terwijl dat voor de verbindingen volgens de uitvinding een mengsel van acetonitril -0.005M natriumpentaansulfonaat en +0,01 M Na2HP04 (pH 3) was. De mengverhouding in het laatste geval liep uiteen voor 10 elke bepaalde verbinding. Bijvoorbeeld werd een mengverhouding van 10:90 gebruikt voor verbinding No 9, terwijl die verhouding 7:93 was voor verbinding No. 22.
TABEL A
15 verbinding η Y R Naam van de verbinding
No.
I 1 CH2CH2 H N-[4-(3-aminopropyl)aminobutyI]-2-(4-guanidinobutaan- amino)-2-hydroxyethaanamide 20 2 2 ” N-[4-(3-aminopropyl)aminobutyl]-2-(5-guanidinopentaan- amido )-2-hydroxyethaanamide 3 3 ” N-[4-(3-aminopropyl)aminobutyl]-2-(6-guanidinohexaan- amido)-2-hydroxyethaanamide 4 4 ” N-[4-(3-aminopropyl)aminobutyl]-2-(7-guanidinoheptaan- 25 amido)*2-hydroxyethaanamide 5 5 " ” N-[4-(3-aminopropyl)aminobutyl]-2-(8-guanidinooctaan- amido) -2-hyd roxyethaanamide 6 6 ” N-[4-(3-aminopropyl)aminobutyl]-2-(9-guanidinonontaan- amido)-2-hydroxyethaanamide 30 7 1 CH2CH2 CH3 N-[4-(3-aminopropyl)aminobutyl]-2-(4-guanidinobutaan- amido)-2-methoxyethaanamide 8 3 ” N-(4-(3-aminopropyl)aminobutyl]-2-(6-guanidinohexaan- amido)-2-methoxyethaanamide 9 4 ” ” N-[4-(3-aminopropyl)aminobutyl]-2-(7-guanidinoheptaan- 35 amido)-2-methoxyethaanamide 10 5 ” N-[4-(3-am inopropyl)aminobutyl]-2-(8-guanidinooctaan- amido)-2-methoxyethaanamide II 6 ” ” N-[4-(3-aminopropyl)aminobutyl]-2-(9-guanidinononaan- amido)-2-methoxyethaanamide 40 12 4 CH2CH3 N-[4-(3-aminopropyl)aminobutyl]-2-(7-guanidinoheptaan- amido)-2-ethoxyethaanamide 13 4 CH2CH2 CH2CH2- N-[4-(3-aminopropyl)aminobutyl]-2-(7-guanidinoheptaan- CH2CH3 amido)-2-butoxyethaanamide 14 4 CH2CH2OH N-[4-(3-aminopropyl)aminobutyl]-2-(7-guanidinoheptaan- 45 amido)-2-(2-hydroxy)ethoxyethaanamide 15 4 CH2- N-(4-(3-aminopropyl)aminobutyl]-2-(7-guanidinoheptaan- C6N5 amido)-2-benzyloxyethaanamide 16 4 CH=CH H N-[4-(3-aminopropyl)aminobutyl]-2-(7-guanidino-2-hepteen- amido)-2-hydroxyethaanamide 50 17 5 ” N-[4-(3-aminopropyl)aminobutyl]-2-(8-guanidino-2-octeen- amido)-2-hydroxyethaanamide 18 6 ” N-[4-{3-aminopropyl)aminobutyl]-2-(9-guanidino-2-noneen- amido)-2-hydroxyethaanamide 19 4 CH=CH CH3 N-[4-(3-aminopropyl)aminobutyl]-2-(7-guanidino-2-hepteen- 55 amido)-2-methoxyethaanamide 3 193107 TABEL A (vervolg) verbinding η Y R Naam van de verbinding
No.
5 ----- 20 5 CHCH2 H N-[4-(3-aminopropyl)aminobutyl]-2-(8-guanidino-3- ( hydroxyocytaanamido/-2-hydroxyethaanamide
OH
21 6 CHCH2 ” N-[4-(3-aminopropyl)aminobutyl]-2-(9-guanidino-3- 10 j hydroxynonaanamido)-2-hydroxyethaanamide
OH
22* 4 (S) CH3 N-[4-(3-aminopropyl)aminobutyl]-2-(7-guanidino-3- CHCH2 hydroxyheptaanamido)-2-methoxyethaanamide
15 OH
23* 4 ” CH2CH3 N-[4-(3-aminopropyl)aminobutyl]-2-(7-guanidino-3- hydroxyheptaanamido)-2-ethoxyethaanamide 24* 4 (S) CH2CH2- N-[4-(3-aminopropyl)aminobutyl]-2-(7-guanidino-3- CHCH2 CH2CH3 hydroxyheptaanamido)-2-butoxyethaanamide 20 \
OH
25* 4 ” CH2CH2 N-[4-(3-aminopropyl)aminobutyl]-2-(7-guanidino-3- OH hydroxyheptaanamido)-2-(2-hydroxy)ethoxyethaanamide 26* 4 ” CH2CH6 N-[4-(3-aminopropyl)aminobutyl]-2-(7-guanidino-3- 25 Hs hydroxyheptaanamido)-2-benzyloxyethaanamide
Noot: * Die verbindingen met de algemene formule 1, waarin Y is, n is 4, en R is een groep anders dan het waterstofatoom worden hierna kortweg aangeduid als "11-0-(naam van R)-spergualin'\ (S) -CHCH2- 30 1
OH
TABEL B 35
Verbinding Moleculeformule Element analyse (%)
No. - C Η N C1 1 C14H31 N703.3HCI.3/2 H20 Berekend 34,90 7,74 20,35 22,07 40 Gevonden 34,92 7,87 20,21 21,96 2 C-15H33N7.O3.3HCI.3/2 H20 Berekend 36,33 7,93 19,77 21,45
Gevonden 36,27 8,05 19,68 21,30 3 C16H35N703.3HCI.3/2 H20 Berekend 37,69 8,10 19,23 20,86
Gevonden 37,83 8,38 19,18 20,67 45 4 C17H37N703.3HCI.3/2 H20 Berekend 38,97 8,27 18,71 20,30
Gevonden 39,10 8,42 18,57 20,18 5 C18H39N703.3HCI.3/2 H20 Berekend 40,19 8,43 18,23 19,77
Gevonden 40,31 8,74 17,96 19,51 6 C19H41N703.3HCI.3/2 H20 Berekend 41,34 8,58 17,76 19,27 50 Gevonden 41,32 8,79 17,65 19,13 7 C15H33N703.3HCI.3/2 H20 Berekend 36,33 7,93 19,77 21,45
Gevonden 36,41 8,10 19,46 21,32 8 C17H37N703.3HCI.3/2 H20 Berekend 38,97 8,27 18,71 20,30
Gevonden 39,20 8,31 18,48 20,11 55 193107 4 TABEL B (vervolg)
Verbinding Moleculeformule Element analyse (%)
No. - 5 C Η N C1 9 C18H39N703.3HCI.3/2 H20 Berekend 40,19 8,43 18,23 19,77
Gevonden 40,33 8,51 20,11 18,08 10 C19H41N703.3HCI.3/2 H20 Berekend 41,34 8,58 17,76 19,27 10 Gevonden 41,39 8,82 17,62 19,15 11 C20H43N7O3.3HCI.3/2 H20 Berekend 42,44 8,73 17,32 18,79
Gevonden 42,52 8,92 17,33 18,50 12 C19H41N703.3HCI.3/2 H20 Berekend 41,34 8,58 17,76 19,27
Gevonden 41,44 8,75 17,59 19,11 15 13 C21H45N703.3HCI.3/2 H20 Berekend 43,48 8,86 16,90 18,34
Gevonden 43,61 9,04 16,78 18,43 14 C19H41N704.3HCI.3/2 H20 Berekend 40,18 8,34 17,26 18,73
Gevonden 40,07 8,39 17,31 18,58 15 C21H43N703.3HCI.3/2 H20 Berekend 46,94 8,04 15,97 17,32 20 Gevonden 47,03 8,20 15,76 17,12 16 C17H35N703.3HCI.3/2 H20 Berekend 39,12 7,92 18,79 20,38
Gevonden 39,10 8,02 19,05 20,07 17 C18H37N703.3HCI.3/2 H20 Berekend 40,34 8,09 18,29 19,85
Gevonden 40,53 8,22 18,26 19,69 25 18 C19H39N703.3HCI.3/2 H20 Berekend 41,49 8,25 17,83 19,34
Gevonden 41,46 8,07 17,93 19,20 19 C18H37N703.3HCI.3/2 H20 Berekend 40,34 8,09 18,29 19,85
Gevonden 40,09 7,86 18,11 19,71 20 C18H39N703.3HCI.3/2 H20 Berekend 39,03 8,19 17,70 19,20 30 Gevonden 38,77 8,05 17,64 20,41 21 C19H41N704.3HCI.3/2 H20 Berekend 40,18 8,34 17,26 18,73
Gevonden 40,41 8,60 17,35 18,58 22 C18H39N704.3HCI.3/2 H20 Berekend 39,03 8,19 17,70 19,20
Gevonden 39,03 8,50 17,49 19,15 35 23 Cl9H41N704.3HCI.3/2 H20 Berekend 40,18 8,34 17,26 18,73
Gevonden 40,23 8,75 17,17 18,35 24 C21 H45N704.3HCI.3/2 H20 Berekend 42,32 8,62 16,45 17,84
Gevonden 42,37 8,90 16,31 17,74 25 C19H41N705.3HCI.3/2 H20 Berekend 39,08 8,11 16,79 18,21 40 Gevonden 39,15 8,26 16,42 18,10 26 C24H43N704.3HCI.3/2 H20 Berekend 45,75 7,84 15,56 16,88
Gevonden 45,77 7,93 15,39 16,64
TABEL C
45 _
Verbinding Infrarood absorptie spectrum (cm'1) Proton-NMR spectrum (6 waarde)
No.
1 3320, 2950, 1655, 1525, 1460, 1365, 1,4-2,4 (CH2x4), 2,40 (CH2), 2,0-3,4 50 1260, 1160, 1115, 1070 (NCH^ö), 5,55 (CH) 2 3400, 2950, 1660, 1530, 1465, 1170, 1,9-2,0 (CH2x4), 2,0-2,5 (CHzx2), 2,0-3,4 1120,1080,1020 (NCHgXö), 5,53 (CH) 3 3270, 2950, 1560, 1530, 1460, 1370, 1,4-2,0 (CH2x5), 2,0-2,5 (CH2x2), 2,9-3,4 1240, 1165, 1120, 1080 (NCH^ö), 5,52 (CH) 55 _ 5 193107 TABEL C {vervolg)
Verbinding Infrarood absorptie spectrum (cm'1) Proton-NMR spectrum (δ waarde)
No.
5 -—----- 4 3400, 2950, 1653, 1525, 1460, 1360, 1,2-2,0 (CH2x6), 2,24 (CH2), 2,30 (CH2), 1160, 1120, 1030 2,9-3,4 (NCH2x5), 5,56 (CH) 5 3330, 2925, 1655, 1520, 1460, 1350, 1,20-2,0 (CH2x7), 2,0-2,4 (CH;>x2), 2,9-3,4 1160, 1120, 1080 (NCH2x5), 5,52 (CH) 10 6 3370,2925,1655,1520,1460,1155, 1,2-2,0 (CH2x8), 2,0-2,4 (CHzx2), 2,9-3,4 1115,1080 (NCH2x5), 5,50 (CH) 7 3400, 2930, 1650, 1520, 1460, 1360, 1,4-2,4 (CH2x4), 2,40 (CH2), 2,8-3,4 1190, 1160, 1090 (NCH2x5), 3,38 (OCH3), 5,30 (CH) 8 3420, 2940, 1650, 1520, 1460, 1355, 1,4-2,0 (CH2x5), 2,0-2,5 (CH2x2), 2,9-3,4 15 1190, 1160, 1090 (NCH2x5), 3,38 (OCHa), 5,29 (CH) 9 3420, 2950, 1650, 1520, 1460, 1360, 1,2-2,0 (CH^), 2,0-2,5 (CH2x2), 2,9-3,4 1190, 1160, 1090 (NCH.>x5), 3,37 (OCH3), 5,26 (CH) 10 3400, 2925, 1650, 1520, 1455, 1355, 1,2-2,0 (CH2x7), 2,0-2,5 (CH2x2), 2,9-3,4 1250, 1190, 1160, 1090 (NCHgXS), 3,37 (OCH3), 5,28 (CH) 20 11 3400, 2930, 1655, 1520, 1460, 1360, 1,2-2,0 (CH2x8), 2,0-2,5 (CH2x2), 2,9-3,4 1190, 1160, 1090 (NCH2x5), 3,37 (0CH3), 5,29 (CH) 12 3400, 2930, 1655, 1520, 1460, 1360, 1,23 (CH3), 1,3-2,0 (CH2x6), 2,0-2,5 1160, 1085 (CHax2), 2,9-3,4 (NCH2x5), 3,64 (CH2), 5,42 (CH) 25 13 3380, 2925, 1655, 1520, 1455, 1360, 0,92 (CH3), 1,2-2,0 (CH^), 2,0-2,5 1155, 1080 (CH2x2), 2,9-3,4 (NCH2x5), 3,61 (CH2), 5,41 (CH) 14 3370, 2930, 1655, 1520, 1455, 1355, 1,2-2,0 (ΟΗ-,χδ), 2,0-2,5 (CH2x2), 2,9-3,4 1165, 1110, 1060 (NCH^Ö), 3,70 (CH2x2), 5,45 (CH) 30 15 3340,2930,1655,1520,1450,1160, 1,2-2,0 (CH2x6), 2,0-2,5 (CHzx2), 2,9-3,4 1065, 1020, 740, 695 (NCH2x5), 4,64 (CH2), 5,51 (CH), 7,32 (66H5 16 3350, 2930, 1660, 1520, 1460, 1355 1,4-2,5 (CH2x6), 2,9-3,4 (NCH2x5), 5,56 (CH), 6,01 (CH), 6,81 (CH) 35 17 3400,2925,1660,1530,1460,1360, 1,4-2,5 (CH2x7), 2,9-3,4 (NCH2x5), 5,60 1165, 1115, 1080 (CH), 6,02 (CH), 6,85 (CH) 18 3400, 2940, 2850, 1660, 1530, 1460, 1,2-2,5 (CHjptè), 2,9-3,4 (NCH^ö), 5,65 1360, 1225, 1115, 1080 (CH), 6,04 (CH), 6,88 (CH) 19 3400, 2940, 1665, 1520, 1455, 1350, 1,4-2,5 (CH^Ö), 2,9-3,4 (NCH2x5), 3,4 40 1195,1095,985 (OCH3), 5,39 (CH), 6,09 (CH), 6,90 (CH) 20 3450, 2925, 1650, 1525, 1460, 1160, 1,4-2,3 (CH2x7), 2,38 (CH2), 2,9-3,4 1110, 1075 (NCHgXö), 4,0 (CH), 5,52 (CH) 21 3400, 2950, 1655, 1520, 1460, 1165, 1,2-2,4 (CH^x.8), 2,41 (CH2), 2,9-3,4 1110, 1075 (NCH2x5), 4,0 (CH), 5,58 (CH) 45 22 3330,2930,1655,1520,1460,1360, 1,4-1,9 (CH^ö), 2,19 (CH2), 2,49 (CH2), 1190, 1160, 1090, 1020 2,9-3,4 (NCH2x5), 3,41 (CH3), 4,04 (CH), 5,35 (CH) 23 3350, 2925, 1655, 1520, 1460, 1360, 1,23 (CH3), 1,4-1,9 (CH^ö), 2,16 (CH2), 1160, 1085, 1020 2,46 (CH3), 2,9-3,4 (NCH2x5), 3,64 (CH2), 50 4,02 (CH2), 5,43 (CH) 24 3380, 2925, 1655, 1520, 1455, 1370, 0,92 (CH3), 1,2-1,9 (CH^), 2,09 (CH2), 1155, 1080, 1020 2,43 (CH2), 2,^-3,4 (NCH2x5), 3,61 (CH2), 4,01 (CH), 5,41 (CH) 25 3375, 2930, 1655, 1520, 1450, 1165, 1,4-1,9 (CH^ö), 2,13 (CH2), 2,45 (CH2), 55 1115, 1060 2,9-3,4 (NCH2x5), 3,70 (CH2x2), 4,02 (CH), 5,44 (CH) 193107 6 TABEL C (vervolg)
Verbinding Infrarood absorptie spectrum (cm'1) Proton-NMR spectrum (δ waarde)
No.
5 - 26 3330, 2930, 1655, 1520, 1445, 1360, 1,4-1,9 (CH2x5), 2,12 (CH2), 2,46 (CH2), 1160, 1065, 1020, 740, 695 2,9-3,4 (NCH2x5), 4,00 (CH), 4,64 (CH2), 5,50 (CH), 7,32 (C6H5)
10 TABEL D
Verbinding Positie 15 Positie 11 Specifieke rotatie - 25 [a]|5
No 15 (±) 0,0° (Cl, H20) 9 (-) -30,4° (Cl, H20) (+) +29,5° (Cl. H20) (±) -1.0° (CI,H20) 22 (S) (-) +27,3° (Cl, H20) 20 (+) -25,5° (Cl, HaO) (±) -0,2° (Cl, H20) 23 (S) (-) -25,0° (Cl, H20) (+) +24,2° (Cl, H20) (±) +0,5° (Cl, H20) 25 24 (S) (-) -22,9° (Cl, H20) (+) +23,5° (Cl, H20) (±) -2,1° (Cl, H20) 25 (S) (-) -18,7° (Cl, H20) (+) +15,8° (Cl, H20) 30 (±) -3,1° (Cl, H20) 26 (S) (-) -24,3° (Cl, H20) (+) +21,0° (Cl, H20) 35 TABEL E retentie (%)
Verbinding pH 23456789 10
No.
0 9 69,3 89,3 100 100 100 100 100 97,5 97,9 13 72,4 90,1 100 - 100 - 100 98,0 96,0 14 71,8 90,6 100 - 100 - 100 97,5 97,3 15 76,5 91,4 100 - 100 - 100 99,0 96,2 22(-) 79,7 - 100 100 100 100 100 97,6 95,7 45 (+) 79,7 - 100 100 100 100 100 100 95,6 24 76,3 - 100 100 100 100 100 97,1 94,8 25 68,9 - 100 100 100 100 100 97,7 95,5 26 77,2 - 100 100 100 100 100 95,9 94,5 (-) Spergualin 88,1 88,0 87,8 82,5 46,5 12,6 6,1 0 50 (2) Biologische eigenschappen.
Alle verbindingen volgens de uitvinding bezitten een duidelijke carcinostatische werkzaamheid en vertonen een sterk groei-belemmerend effect op kankercellen in vitro en een levensverlengend effect op muizen die geïmplanteerde kankercellen dragen zoals hieronder is weergegeven.
55 I. Groeibelemmerende werkzaamheid tegen kankercellen in vitro.
DBA/2 muizen werden geïmplanteerd met elk 105 muis-leukemie L-1210 cellen. De aseptisch verzamelde asciten van de muizen na 4 dagen voeding werden dire maal gewassen met fysiologisch zouthoudend water 7 193107 ter verkrijging van L-1210 cellen, die daarna werden gesuspendeerd in RPMI 1640 kweekmedium. [G. E. Moore, Journal of the American Medical Association, Vol. 199, 519 (1967); H. J. Morton, In Vitro, Vol 6, 89 (1970)] waaraan 10% fetaal kalfserum en 5 uM 2-mercaptoethanol was toegevoegd, en de ontstane suspensie werd verdund tot 5 x 104 L-1210 cellen per 0,9 ml. Een microschaal waarop aanwezig was 0,9 ml 5 van de celsuspensie en 0,1 ml van het kweekmedium dat het te onderzoeken monster bevatte, werd in een kooldioxide-incubator bij 37°C gehouden. Na 48 uur kweken werd het aantal cellen gemeten door middel van een coulter-teller (Coulter Electronics, Inc. U.S.A.) ter verkrijging van de groeibelemmering (%) = (l-T/C) x 100 = [1 - (aantal gegroeide cellen in het monster-bevattende medium)/(aantal gegroeide cellen in vergelijkingsmedium)] x 100. De 50% groeibelemmeringsconcentratie werd berekend uit de waarde van 10 groeibelemmering bij uiteenlopende monsterconcentraties.
De resultaten van onderzoeken aan typerende verbindingen volgens de uitvinding voor de groeibelemmering van L-1210 cellen waren zoals is weergegeven in tabel F.
TABEL F
15 -
Verbinding Groeibelemmering (%), (l-T/C) x 100 50% belemmeringsconcentratie
No (mcg/ml)
Concentratie van onderzochte verbinding, mcg/ml 2o - 1,25 2,5 5 10 20 40 80 160 1 - 52,2 89,3 101 100 - - 2,4 2 9,6 30,5 46,9 69,5 77,6 79,6 79,6 - 5,0 25 3 20,6 36,7 64,2 81,6 86,7 - - - 3,7 4 20,0 27,5 29,9 58,4 75,5 78,7 - - 8,1 5 - 24,9 29,1 40,0 54,2 66,0 88,5 96,8 18 6 38,0 40,3 45,5 50,3 57,5 - - 8,0 7 38,7 80,7 98,5 99,8 99,9 99,3 - - 1,5 30 8 - 33,2 38,1 46,8 53,5 66,3 88,2 28 9 - - 35,5 45,9 62,3 78,1 90,9 96,0 12 10 - - 19,9 28,5 36,5 52,4 62,4 79,5 39 11 - - 35,0 52,2 59,4 71,8 77,9 - 10 12 21,5 31,1 38,4 47,3 58,6 73,5 - 21 35 13 17,0 21,3 24,0 33,2 65,7 72,5 - - 14 14 - 22,3 24,6 29,9 42,7 58,6 - 52 15 27,1 39,0 71,0 94,5 97,7 100 - - 3,1 16 - 22,6 31,1 32,5 56,3 17 17 2,1 4,5 13,3 16,5 33,7 52,53 70 40 18 - 15,7 20,9 29,5 32,3 47,8 - 90 19 29,9 32,2 46,4 56,4 75,6 85,4 93,1 - 6,3 20 17,2 20,1 28,9 30,7 45,7 - 27 21 14,6 21,5 29,7 37,5 51,6 84,0 94,5 - 18 22 - 60,8 82,6 94,5 96,9 98,3 - - 1,8 45 23 - 58,5 85,5 93,0 96,1 96,4 - - 2,2 24 - 47,3 75,6 89,5 95,0 97,2 - - 2,6 25 - 9,0 20,0 42,0 63,5 74,7 - - 7,2 26 - 54,2 79,0 90,2 96,6 97,3 - - 2,2 50 II. Therapeutisch effect op geïmplanteerde kanker bij muizen.
Mannetjes-muizen van de BDF^stam (5 weken oud) werden elk intraperitoneaal geïnoculeerd met 105 muis-leukemie L-210 cellen en één maal per dag intraperitoneaal toegediend met een testverbinding die was opgelost in fysiologisch zouthoudend water gedurende 6 achtereenvolgende dagen te beginnen vanaf 55 de dag van inoculatie. Terwijl zij werden opgefokt, werden de muizen 30 dagen lang geobserveerd ter vaststelling van de verlenging van de overlevingsperiode = 100 x T/C = 100 x (gemiddelde overlevingsda-gen van behandelde groep)/(gemiddelde overlevingsdagen van vergelijkingsgroep). Het therapeutisch effect 193107 8 van typerende verbindingen van deze uitvinding op muisleukemie L 2110 was als is weergegeven in tabel G.
TABEL G
5 -
Verbinding Dosering (mg/kg/dag) Verlenging van overle- Aantal muizen dat in leven
No. vingsperiode (%), bleef gedurende 30 dagen T/C x 100 10 50 0 0/4 25 336 0/4 12.5 >357 2/4 6.25 >369 1/4 4 3,13 >364 2/4 15 1,56 >429 4/4 0,78 >429 4/4 0,39 >390 3/4 0,20 197 0/4 20 50 0 0/4 25 306 0/4 5 12,5 181 0/4 6.25 125 0/4 3,13 118 0/4 25 1,56 104 0/4 50 0 0/4 25 0 0/4 12.5 >429 4/4 30 6,25 >429 4/4 6 3,13 >386 2/4 1,56 >393 3/4 0,78 >429 4/4 0,39 >383 2/4 35 0,20 >354 2/4 50 0 0/4 25 0 0/4 12.5 >429 4/4 40 6,25 >429 4/4 9 3,13 >429 4/4 (±) 1,56 >411 1/4 0,78 >300 2/4 0,39 171 0/4 45 0,20 114 0/4 25 0 0/4 12.5 >390 2/4 6.25 >336 1/4 50 9 3,13 >411 3/4 (-) 1,56 >356 2/4 0,78 >370 2/4 0,39 >342 2/4 0,20 127 0/4 55 0,10 110 0/4 9 193107 TABEL G (vervolg)
Verbinding Dosering (mg/kg/dag) Verlenging van overle- Aantal muizen dat in leven
No. vingsperiode (%), bleef gedurende 30 dagen
5 T/CxlOO
50 0 0/4 25 0 0/4 10 12,5 129 0/4 10 6,25 107 0/4 3.13 100 0/4 1.56 100 0/4 50 0 0/4 15 25 0 0/4 12.5 >357 2/4 6.25 >393 3/4 11 3,13 >357 2/4 1.56 200 0/4 20 0,78 200 0/4 0,39 143 0/4 0,20 107 0/4 50 0 0/4 25 25 236 0/4 12.5 >354 2/4 16 6,25 >350 2/4 3.13 >343 2/4 1.56 >233 0/4 30 0,78 129 0/4 12.5 0 0/4 6.25 >350 2/4 3.13 >429 4/4 35 18 1,56 >429 3/4 0,78 200 0/4 0,39 157 0/4 0,20 136 0/4 0,10 129 0/4 40 - 25 0 0/4 12.5 >364 2/4 6.25 >429 3/4 3.13 >321 2/4 45 19 1,56 >350 2/4 0,78 164 0/4 0,39 107 0/4 0,20 100 0/4 50 50 0 0/4 25 229 0/4 12.5 200 0/4 6.25 164 0/4 21 3,13 129 0/4 55 1,56 114 0/4 0,78 100 0/4 193107 10 TABEL G (vervolg)
Verbinding Dosering (mg/kg/dag) Verlenging van overle- Aantal muizen dat in leven
No. vingsperiode (%), bleef gedurende 30 dagen
5 T/CxlOO
0,39 100 0/4 0,20 100 0/4 10 50 7 0/8 22 25 >414 6/8 (S) 12,5 >380 5/8 (±) 6,25 >332 4/8 3.13 163 0/8 15 1,56 117 0/8 22 25 >423 5/5 (S) 12,5 >408 4/5 (-) 6,25 >400 4/5 20 3,13 >290 1/5 1,56 177 0/5 25 200 0/4 23 12,5 129 0/4 25 6,25 119 0/4 3.13 104 0/4 50 >429 4/4 25 229 0/4 30 25 12,5 193 0/4 6,25 107 0/4 III. Toxiciteit 35 Alle verbindingen volgens de uitvinding vertonen een vergelijkenderwijs lage toxiciteit en worden gekenmerkt door de lage opeenhoping van toxiciteit bij voortgezette toediening. In tabel H zijn weergegeven de mediane lethale dosis (LD50) van typerende verbindingen volgens de uitvinding bij muizen bij enkelvoudige intraperitoneale toediening, en voorts maximaal verdragen dosis in termen van totale dosis wanneer een vastgestelde hoeveelheid per eenheid lichaamsgewicht intraperitoneaal werd toegediend aan muizen 40 één maal per dag gedurende 6 achtereenvolgende dagen.
TABEL H
Verbinding LD^* (mg/kg) Maximum verdragen dosis** (mg/kg) 45 No.
1 50< 300< 2 50< 300< 3 50< 300< 50 4 25-50 150< 5 25-50 150< 6 12,5-25 75< 8 25-50 150< 55 9 12,5-25 75< 10 12,5-25 75< 11 193107 TABEL H <vervolg)
Verbinding LD^,* (mg/kg) Maximum verdragen dosis** (mg/kg)
No.
5 - 11 12,5-25 75< 12 12,5-25 75< 14 25-50 150< 10 15 12,5-25 75< 16 25-50 150< 17 12,5-25 75< 18 6,25-12,5 37,5< 19 12,5-25 75< 15 20 50< 300< 21 25-50 150< 22 25-50 150< 23 25< 150< 24 50< 300< 20 25 50< 300< 26 12,5-25< 75<
Noot: * Mediane lethale dosis bij enkelvoudige toediening.
** Maximum waarde van de totale dosis die niet de dood veroorzaakt wanneer een vastgestelde hoeveelheid per eenheid lichaams-25 gewicht wordt toegediend aan muizen, een maal per dag gedurende 6 achtereenvolgende dagen.
Zoals uit de voorafgaande beschrijving duidelijk is zijn de verbindingen volgens de uitvinding die zijn weergegeven met de formule 1 bruikbaar als carcinostatische stoffen. Alle afzonderlijke verbindingen die in het voorafgaande zijn opgesomd vertonen een uitstekende groei-belemmerende werkzaamheid tegen 30 muisleukemie L1210 cellen. Van deze verbindingen hebben in het bijzonder die verbindingen de zeer hoge werkzaamheid, waarin R een waterstofatoom, een alkylgroep van 1 tot en met 4 koolstofatomen die een hydroxylgroep als substituent kan hebben, of een benzylgroep voorstelt, en n een geheel getal is van 1 tot en met 6, met dien verstande dat, wanneer Y een groep met formule 1j voorstelt, R de groepen voorstelt anders dan een waterstofatoom. Voorts bleek een uitstekend therapeutisch effect bij de muizen die 35 geïmplanteerde kanker hadden, op te treden tengevolge van die verbindingen waarin R een waterstofatoom of een alkylgroep van 1 of 2, bij voorkeur 1 koolstofatoom, die een aantal hydroxylgroepen als substituenten kan hebben voorstelt,en n 4 of 6 n. Van deze verbindingen zijn die, waarin R een methylgroep (een alkylgroep met 1 koolstofatoom) voorstelt, uitstekend, ook voor wat betreft chemische stabiliteit, waarbij de verbindingen Nos. 9, 19 en 22 het wenselijkst zijn.
40 De werkwijze voor de synthese van de verbindingen volgens de uitvinding is hieronder beschreven. Hoewel uitvoering kan plaatsvinden in organische oplosmiddelen, wordt de condensatie van een ω-guanidinovetzuuramide van de formule 2 en een dihydroxyethaanamide van de formule 3 volgens de uitvinding in het algemeen uitgevoerd in aanwezigheid van kleine hoeveelheden water, vanwege de oplosbaarheid van beide verbindingen die in het algemeen worden behandeld in de vorm van zuuradditie-45 zouten.
Wanneer organische oplosmiddelen moeten worden gebruikt zijn aceton en dimethylformamide geschikt, maar de condensatie wordt in het algemeen uitgevoerd in aanwezigheid van kleine hoeveelheden water zonder gebruik te maken van organische oplosmiddelen. De hoeveelheid te gebruiken water dient zo min mogelijk te zijn voor het oplossen van beide verbindingen. In de praktijk wordt het gebruikt in een hoeveel-50 heid in het traject van 2 tot 60, bij voorkeur van 4 tot 40 mol per mol guanidinovetzuuramide van de formule 2. Omdat deze verbindingen van formules 2 en 3 gewoonlijk worden gebruikt in de vorm van zuuradditie-zouten, is het niet noodzakelijk een zuur in de oplossing voor de reactie toe te voegen. Met het oog op de opbrengst aan condensaat heeft het echter de voorkeur een zure katalysator te gebruiken. Voorbeelden van geschikte zure katalysatoren zijn anorganische zuren zoals zoutzuur, zwavelzuur, fosforzuur, en boorzuur en 55 organische zuren zoals azijnzuur, citroenzuur, wijnsteenzuur, barnsteenzuur, glutaarzuur en adipinezuur.
Een dicarbonzuur zoals glutaarzuur heeft de voorkeur. De hoeveelheid van een te gebruiken zuur bedraagt 0 tot 10, bij voorkeur 0,5 tot 4 mol/mol guandinovetzuuramide van formule 2. De reactietemperatuur is 0° tot 193107 12 100°C, gewoonlijk van kamertemperatuur tot 80°C, bij voorkeur 40° tot 70°C. De reactietijd loopt uiteen met de reactietemperatuur. Een reactietijd van 1 tot 2 dagen heeft de voorkeur ter verhoging van de opbrengst. Hoewel de verhouding van guanidinovetzuuramide van formule 2 tot dihydroxyethaanamide van formule 3 niet specifiek is begrensd, is het in het algemeen praktisch 0,4 tot 4, bij voorkeur 0,8 tot 1,5 mol van de 5 laatste per mol van de eerste te gebruiken. De ontstane verbinding is een N-[4-{3-aminopropyl)aminobutyl]- 2- {<ü>-guanidinovetzuur-amido)-2-hydroxyethaanamide dat is weergegeven met de algemene formule 1a, waarin Y en n zijn zoals boven is gedefinieerd, welke de verbinding van formule 1 is, waarin R een waterstofatoom voorstelt.
De verbindingen van formule 1 waarin R een groep anders dan het waterstofatoom voorstelt, worden 10 verkregen door de hydroxylgroep in de positie 11 van de verbinding van formule 1a te alkyleren met de in het voorgaande genoemde alifatische alcohol, diazoalkaan of benzylalcohol. De verbinding die verkregen is door de bovengenoemde condensatie of spergualin verkregen uit de microbische kweek kan allebei worden gebruikt voor de verbinding van formule 1a. De door de alkylering verkregen verbinding is een N-[4-(3-aminopropyl)aminobutyl]-2- (co-guanidinovetzuuramido)-2-alkoxyethaanamide die wordt weergegeven door 15 de algemene formule 1b, waarin Y en n zijn zoals boven is gedefinieerd en R' een alkylgroep van 1 tot en met 4 koolstofatomen voorstelt, die een hydroxylgroep als substituent kan hebben, of een benzylgroep. De alkylering wordt op de volgende manier uitgevoerd,
De reactie tussen een N-[4-(3-aminopropyl)aminobutyl]-2-(o)-guanidinovetzuut-amido)-2-hydroxyethaanamide van formule 1 a en de alcohol wordt in het algemeen uitgevoerd in aanwezigheid van 20 een zure katalysator. Voor de reactie zijn de guanidino- en aminogroepen in het hydroxyethaanamide van formule 1a niet noodzakelijkerwijze beschermd maar kunnen zijn beschermd. De alcohol wordt weergegeven door de formule 4, waarin R' een alkylgroep van 1 tot en met 4 koolstofatomen voorstelt, die een hydroxylgroep als substituent kan hebben, of een benzylgroep. Dergelijke alcoholen sluiten in lagere alcoholen zoals methanol, ethanol, propanol en butanol, glycolen zoals ethyleenglycol en propyleenglycol, 25 en benzylalcohol. De reactie wordt bij voorkeur uitgevoerd in de alcohol van bovengenoemde formule 4, hoewel een inert oplosmiddel kan worden gebruikt. Voorbeelden van geschikte zure katalysatoren zijn anorganische zuren zoals zoutzuur en zwavelzuur, organische zuren zoals azijnzuur en p-tolueensulfonzuur, en kationische uitwisselingsharsen. De reactietemperatuur ligt in het traject van 0° tot 100°C, in het algemeen van kamertemperatuur van 80°C, waarbij kamertemperatuur de meeste voorkeur heeft. De 30 reactietijd varieert met de reactietemperatuur en ligt in het traject van 1 uur tot 10 dagen, bij voorkeur van 1 tot 2 dagen.
Wanneer de oplosbaarheid van een hydroxyethaanamide van de formule 1a in een alcohol van de formule 4 laag is, is de bescherming van amino- en iminogroepen van het hydroxyethaanamide met beschermende groepen voordelig ter verhoging van de opbrengst. Geschikte beschermende groepen 35 worden gekozen onder verwijzing naar de literatuur (J. F. W. Mcomie, Ed., ’’Protective Groups in Organic Chemistry”, Plenum Press. N.Y. 1973). Deze beschermende groepen voor de aminogroep die in het algemeen worden gebruikt in de peptidesynthese zijn nuttig. Voorbeelden zijn eenwaardige beschermende groepen zoals benzyloxycarbonyl, p-methoxy-benzyloxycarbonyl, p-nitrobenzyloxycarbonyl, tert-butoxycarbonyl, trichloorethoxycarbonyl, en isobormyloxycarbonyl en tweewaardige beschermende groepen 40 zoal ftaloyl en succinyl, Van deze groepen verdienen aralkyloxycarbonylgroepen zoals benzyloxycarbonyl en p-methoxybenzyloxycarbonylgroepen, de voorkeur vanwege het gemak van invoering en verwijdering. De invoering van deze beschermende groepen wordt met bekende werkwijzen tot stand gebracht en gebeurt met voordeel onder toepassing van de werkwijze met actieve ester. Bij deze werkwijze blijft de guanidino-groep in de verbinding van formule 1a onveranderd.
45 De alkylering van de hydroxylgroep in de positie 11 van het hydroxyethaanamide van formule 1a door de reactie met een diazoalkaan (diazoparaffine) wordt op de volgende manier uitgevoerd.
In het algemeen worden eerst de amino- en iminogroepen van het hydroxyethaanamide van de formule 1a beschermd met de bovenvermelde beschermende groep en wordt de ontstane verbinding onderworpen aan de reactie met een diazoalkaan in een inert organisch oplosmiddel zoals methyleenchloride of 50 tetrahydrofuran bij een temperatuur van -20° tot 20°C, gewoonlijk -10° tot 10°C, bij voorkeur -3 tot 3°C gedurende 1 tot 15, gewoonlijk 2 tot 8 uur, teneinde alkylering tot stand te brengen. De reactie vereist niet noodzakelijkerwijze een katalysator, maar kan worden versneld in aanwezigheid van een Lewis-zuurkatalysator zoals boriumtrifluoride, aluminiumchloride, hydrofluorboorzuur, of seleendioxide. Als voorbeelden van diazoalkanen met 1 tot en met 4 koolstofatomen kan melding worden gemaakt van 55 diazomethaan, diazoethaan, diazopropaan, en diazobutaan. Deze diazoalkanen kunnen worden gesynthetiseerd uit het overeenkomstige N-nitrosoalkylureum, N-nitrosoalkyluretan, N-nitrosoalkylsulfonamide, en N-nitrosoalkyl-N'-nitroguanidine onder toepassing van de bekende werkwijzen {bijvoorbeeld "Organic 13 193107
Synthesis” (John Wiley en Sons, Inc.), N, 165 (1943); III, 119 (1955); Journal of Organic Chemistry, 13, 763 (1948); "Organic Synthesis”, IV, 250 (1963); Chemische Berichte, 94, 2547 (1961); Canadian Journal of Research, 26b, 683 (1950); ’Organic Synthesis”, III, 244 (1955); Journal of Chemical Society, 1935, 286[.
De alkylering met een diazoalkaan maakt het mogelijk dat de hydroxylgroep in de positie 11 wordt 5 gealkyleerd zonder verandering in de configuratie in de positie 11 van de verbinding met de formule 1 a. Bijvoorbeeld wordt een (-)hydroxyethaanamide met de formule 1a omgezet in het overeenkomstige (-)alkoxyethaanamide met de formule 1b. Een (+)alkoxyethaanamide of een epimeer mengsel (±) ten opzichte van de positie 11 wordt verkregen uit respectievelijk het (+)hydroxyethaanamide of (±) hydroxy-ethaanamide.
10 De hydroxyethaanamide-verbinding met de formule 1a zal hydroxylgroepen hebben in beide posities 11 en 15 wanneer Y een groep met formule 1j van het formuleblad voorstelt. In dit geval is het tengevolge van het verschil in reactiviteit tussen de twee hydroxylgroepen mogelijk de hydroxylgroep in de positie 11 selectief te alkyleren.
De beschermende groepen voor de amino- en iminogroepen van het gealkyleerde product kunnen op 15 een gewone manier worden verwijderd, waarbij een alkoxyethaanamide met de formule 1 b achterblijft.
Bijvoorbeeld kan, wanneer de beschermende groep een aralkyloxycarbonylgroep is, deze worden verwijderd door gewone katalytische hydrogenering bij atmosferische druk. De reactie wordt uitgevoerd in een geschikt oplosmiddel zoals methanol, ethanol, dioxan, of een mengsel daarvan in aanwezigheid van palladium of platina als katalysator. De reactie wordt versneld door de toevoeging van een zuur zoals zoutzuur of 20 azijnzuur.
Wanneer R. een groep met de formule 1j voorstelt, is het 2-gesubstitueerde ethaanamide met de formule 1 N-[4-(3-aminopropyl)aminobutyl]-2- (oi-guanidino-6-hydroxyvetzuur-amido)-2-gesubstitueerd ethaanamide dat wordt weergegeven met de algemene formule 1c waarin R en n zijn zoals boven is gedefinieerd, met dien verstande dat, wanneer n 4 is, R de groepen anders dan een waterstofatoom voorstelt. Wanneer de 25 configuratie in de positie 15 can deze verbinding hetzij (S) hetzij (R) is en de verbinding een epimeer mengsel is ten opzichte van de positie 11, kan de verbinding worden gescheiden in beide epimeren [(+)-vorm en (-)vorm[ door middel van chromatografie. Voor dit doel is vloeistofchromatografie met hoog prestatievermogen (HPLC) geschikt. Een wenselijk resultaat wordt verkregen door bijvoorbeeld Nucleo-sil<R)C18 (M. Nagel Co.) te gebruiken als kolompakkingsmateriaal en een mengsel van 30 acetonitrilnatriumpentaansulfonaat-fosfaatbuffer als eluent.
Zoals hierboven is beschreven levert alkylering van de hydroxylgroep in de positie 11 met een diazoalkaan of scheiding door middel van HPLC een optisch actief N-[4-(3-aminopropyl)aminobutyl]-2- (u>-guanidino^-hydroxyvetzuur-amido]-2-alkoxyethaanamide die wordt weergegeven door de algemene formule 1d, waarin R' en n zijn zoals boven is gedefinieerd. Wanneer de hydroxylgroep in positie 15 van deze 35 verbinding wordt verwijderd door dehydratatie of wordt gedeoxygeneerd, zal een optisch actief N-[4-(3-aminopropyl)aminobutyl]-2- (tü-guanidino-(a, p-onverzadigde)-vetzuur-amido]-2-alkoxyethaanamide worden gevormd, dat wordt weergegeven door de algemene formule 1 e waarin R' en n zijn zoals boven is gedefinieerd, of een optisch actief N-[4-(3-aminopropyl)aminobutyl]-2- (lo-guanidino-(verzadigd)vetzuur-amino]-2-alkoxyethaanamide dat weergegeven is met de algemene formule 1f, waarin R' en n zijn zoals 40 boven is gedefinieerd.
De verbinding van formule (1e) wordt verkregen door de amino- en iminogroepen van de verbinding van formule 1d te beschermen met de in het voorgaande vermelde beschermende groepen, waarbij de ontstane verbinding wordt onderworpen aan een dehydratatiebehandeling, en de beschermende groepen verwijderd worden. De dehydratatie kan bijvoorbeeld tot stand worden gebracht door een bekende methode waarbij 45 men dicyclohexylcarbodiimide laat reageren in aanwezigheid van een koper(l of ll)chloride (Journal of the American Chemical Society, 90, 3245 (1965)). Deze werkwijze heeft de voorkeur omdat hij wordt uitgevoerd onder milde neutrale omstandigheden. Een overmaat dicyclohexylcarbodiimide verkort de reactietijd. Met het oog op de oplosbaarheid van uitgangsmaterialen is Ν,Ν-dimethylformamide een voorbeeld van een geschikt oplosmiddel. De reactietemperatuur bedraagt gewoonlijk van kamertemperatuur tot 100°C. De reactietijd 50 loopt uiteen van verscheidene uren tot verscheidene dagen afhankelijk van de reactietemperatuur.
De verbinding van formule 1f, die zal worden gevormd uit de verbinding van formule 1d van het formuleblad door de deoxygenering van de hydroxylgroep in de positie 15, wordt bij voorkeur verkregen uit de verbinding van formule 1e door de dubbele binding te hydrogeneren. De hydrogenering van de dubbele binding wordt tot stand gebracht door gebruikelijke werkwijzen zoals bijvoorbeeld katalytische hydrogene-55 ring. Als de voor amino- en iminogroepen beschermende groep van aralkyloxycarbonylgroep is, worden door hydrogenering van de dubbele binding en de verwijdering van de beschermende groepen tegelijkertijd door de katalytische hydrogenering bereikt.
193107 14
Wanneer R’ van de alkoxyethaanamideverbinding van formule 1b een benzylgroep voorstelt, wordt de benzylgroep door de katalytische hydrogenering verwijderd en wordt de verbinding omgezet in de hydroxy-ethaanamideverbinding van formule 1a, terwijl de configuratie in de positie 11 behouden blijft. In dit geval verloopt de katalytische hydrogenering voor de verwijdering van een beschermende aralkyloxycarbonylgroep 5 bij een lage snelheid onder atmosferische druk, terwijl een resultaat naar tevredenheid wordt verkregen met verminderde reactietijd door de reactie uit te voeren in een waterige azijnzure oplossing onder een hogere druk van verscheidene tot verscheidene tientallen bar.
Het ω-guanidinovetzuuramide dart is weergegeven door de formule 2, waar Y en n zijn zoals boven is gedefinieerd, hetgeen een uitgangsmateriaal is voor de synthese van de verbinding van formule 1a van het 10 formuleblad, wordt gesynthetiseerd zoals hieronder wordt beschreven.
a. Synthese van een verbinding van formule 2 waarin Y is -CH2CH2:
Deze verbinding is een ω-guanidinoverzadigd vetzuuramide weergegeven met de algemene formule 2a waarin n is zoals boven is gedefinieerd. Deze ω-guanidinoverzadigde vetzuuramiden zijn bekende verbindingen en kunnen worden gesynthetiseerd uit in de handel verkrijgbare ruwe materialen door bekende 15 reacties. Bijvoorbeeld wordt de verbinding verkregen door de aminogroep van een ω-aminovetzuur van de formule 5 waarin is zoals boven is gedefinieerd, te beschermen, daarna de carboxylgroep te veresteren, de ontstane ester te behandelen met ammoniak ter omzetting in een amide, de aminobeschermende groep te verwijderen, en de aminogroep om te zetten in een guanidinogroep.
De verbinding van de formule 2a kan ook worden bereid door een diamine te oxyderen tot een 20 overeenkomstige nitrilverbinding door de formule 4, waarin n is zoals boven is gedefinieerd, daarna de nitrilgroep te hydrolyseren ter vorming van een amideverbinding en de aminogroep om te zetten in een guanidinogroep. Voorbeelden van bepaalde ω-guanidinoverzadigde vetzuuramiden van formule 2a zijn 4-guanidinobutaanamide, 5-guanidinopentaanamide, 6-guanidinohexaanamide, 7-guanidinonoheptaanamide, 8- guanidinooctaanamide, 9-guanidinononaanamide, 10-guanidinodecaanamide en 11-guanidinoun-25 decaanamide.
b. Synthese van een verbinding van formule 2 waarin Y groep 1j voorstelt:
Deze verbinding is een co-guanidino-6-hydroxy vetzuuramide weergegeven met de algemene formule 2b waarin n is zoals boven is gedefinieerd, en wordt op uiteenlopende manieren gesynthetiseerd door middel van bekende reacties. Bijvoorbeeld wordt het gesynthetiseerd door de aminogroep van een 6-aminovetzuur 30 weergegeven met de formule 7 waarin n is zoals boven is gedefinieerd, te beschermen, daarna de koolstofketen te verlengen met twee koolstofatomen, de ontstane verbinding om te zetten in een β-hydroxyvetzuuramide via een reeks van reacties die algemeen gebruikt worden bij de bereiding van een 6-hydroxycarbonzuurderivaat, daarna de beschermende groep te verwijderen ter terugwinning van de aminogroep, en de aminogroep om te zetten in de guanidinogroep. De werkwijze wordt verder hieronder in 35 detail beschreven onder verwijzing naar een voorbeeld.
Een cü-guanidino-ê-hydroxyvetzuuramide wordt gesynthetiseerd door de aminogroep van een ω-aminovetzuur van formule 7 te beschermen met een aminobeschermende groep zoals benzyloxycarbonyl-groep, het carbonzuur om te zetten in een reactief derivaat zoals een zuur imidazolide, het reactieve derivaat te condenseren met magnesiumenolaat van monoethylmalonaat met de formule 8 [Belletin de la 40 Société Chimique de France, 945 (1964)[ ter verkrijging van een 6-keto-ester van formule 9 waarin X' een amino-beschermde groep voorstelt en n als boven gedefinieerd is, de ketoncarbonylgroep te reduceren ter vorming van een 6-hydroxyester, de ester te behandelen met ammoniak ter vorming van een amide, de amino-beschermende groep te verwijderen, en de teruggewonnen aminogroep om te zetten in een guanidinogroep. Bij wijze van aldus bereide (ü-guanidino-6-hydroxyvetzuuramiden kan melding worden 45 gemaakt van 4-guanidino-3-hydroxybutaanamide, 5-guanidino-3-hydroxypentaanamide, 6-guanidino-3-hydroxyhexaanamide, 7-guanidino-3-hydroxyheptaanamide, 8-guanidino-3-hydroxyoctaanamide, en 9- guanidino-3-hydroxynonaanamide.
(S)-7-guanidino-3-hydroxyheptaanamide wordt ook verkregen door hydrolyse met een zuur of base van de antibiotische stof BMG 162-aF2 (spergualin) die wordt weergegeven door de formule 9a die wordt 50 geïsoleerd uit het kweekfiltraat van een micro-organisme van het genus Bacillus zoals bijvoorbeeld, Bacillus BMG162laF2 (FERM-P5230; ATCC 31932). Het wordt ook gesynthetiseerd, zoals in Journal of Antibiotics, Vol. 34, 1625 (1981) wordt beschreven, door (S)-3,7-diaminoheptaanzuur uit L-lysine te vormen door de Arndt-Eistert reactie [Journal of Organic Chemistry, Vol, 17, 347 (1952)[, daarna de aminogroep te deamineren met salpeterzuur, de carboxylgroep om te zetten in een carbonoylgroep, en voorts de 55 aminogroep om te zetten in de guanidinogroep.
c. Synthese van een verbinding van formule 2 waarin Y is -CH=CH-:
Deze verbinding is een ω-guanidino-a, 6-onverzadigd vetzuuramide dat is weergegeven met de formule 15 193107 2c waarin n is zoals boven is gedefinieerd. Deze verbindingen worden met voordeel gesynthetiseerd door dehydratatie van ü)-guanidino-6-hydroxyvetzuuramiden van formule 2b van het formuleblad, waarvan de bereiding hierboven is beschreven. Hoewel de dehydratatie kan worden uitgevoerd met behulp van de methoden, die gewoonlijk worden gebruikt bij het dehydrateren van een 6-hydroxyvetzuuramide, heeft het 5 toch de voorkeur de reactie uit te voeren onder milde neutrale omstandigheden, Eén van de geschikte manieren is dehydratatie te weeg te brengen door de werking van dicyclohexylcarbodiimide in de aanwezigheid van koper(ll)chloride [Journal of the American Chemical Society, '90 3245 (1968)[. Omdat de verbinding van formule 2b in het algemeen wordt behandeld in de vorm van een zuuradditiezout, is een voorkeuroplosmiddel Ν,Ν-dimethylformamide vanwege de oplosbaarheid van het zuuradditiezout. De 10 reactietemperatuur ligt in het algemeen tussen kamertemperatuur en 100°C. De reactietijd lig in het algemeen in het traject van verscheidene uren tot verscheidene dagen, afhankelijk van de reactietemperatuur. De reactietijd kan worden verminderd door het dicyclohexylcarbodiimide in overmaat te gebruiken. Voorbeelden van aldus bereide ü)-guanidino-a,6-onverzadigde vetzuuramiden zijn 4-guanidino-2-buteenamide, 5-guanidino-2-penteenamide, 6-guanidino-2-hexeenamide, 7-guanidino-2-hepteenamide, 15 8-guanidino-2-octeenamide, 9-guanidino-2-noneenamide.
De hydrogenering van de dubbele binding in het a)-guanidino-a,6-onverzadigde-vetzuuramide met formule 2c, hetzij katalytisch op een gebruikelijke manier hetzij onder toepassing van natriumboorhydride in aanwezigheid van een overgangsmetaalverbinding zoals nikkelchloride of kobaltchloride [Chemical and Pharmaceutical Bulletin, 19, 817, (1971)[, geeft een ω-guanidino-verzadigd-vetzuuramide met de formule 2a. 20 N-[4-(3-aminopropyl)aminobutyl]-2-dihydroxy-ethaanamide met de formule 3, dat een uitgangsmateriaal is voor de synthese van de verbinding met de formule 1a, wordt gesynthetiseerd op de volgende manier zoals in detail is weergegeven in Journal of Antibiotics, Vol. 34, 1625 (1981).
De vrije aminogroep van de verbinding die wordt weergegeven door de formule 10, waarin X1 een amino-beschermende groep voorstelt, wordt geacyleerd met een dialkyiacetaal van glyoxylzuur zoals is 25 weergegeven door formule 11 waarin X2 een alkylgroep met 1 tot en met 5 koolstofatomen voorstelt, of met een reactief derivaat van carbonzuur, en daarna worden de amino-beschermende groepen X1 en alkylgroe-pen X2 verwijderd, zodat de verbinding met formule 3 wordt verkregen.
De verbinding met formule 3 kan ook in hoge opbrengst worden verkregen door hydrolyse van de in het voorgaande vermelde antibiotische stof BMG 162-aF2 (spergualin).
30 De uitvinding wordt hieronder toegelicht onder verwijzing naar referentievoorbeelden en voorbeelden.
Referentievoorbeeld 1
Synthese van (S)-7-guanidino-3-hydroxyheptaanamide 35 (a) Synthese van (S)-3,7-diaminoheptanoïsch zuur:
Aan een oplossing van 15 g (82,15 mmol) L-lysine-hydrochloride in 150 ml water werden 8,7 g (82,15 mmol) natriumcarbonaat en 43,2 g (200 mmol) N-ethoxycarbonylftalimide toegevoegd. Het mengsel werd 20 uur lang bij kamertemperatuur geroerd. Het reactiemengsel werd met 50 ml ethylacetaat gewassen. De 40 waterige laag werd met 6N zoutzuur op een pH van 3,0 ingesteld en 3 maal met 100 ml tolueen geëxtraheerd. Het extract werd 2 maal met 100 ml water (pH 2,0) gewassen, gedroogd boven watervrij natrium-sulfaat, en tot droog ingedampt onder verminderde druk ter verkrijging van 27,95 g (84% opbrengst) van een wit poeder van di-N-ftaloyl-L-lysine; ontledingspunt, 71°-72°C; [a]^ -32° (C1, methanol).
Aan 27,0 g (66,4 mmol) di-N-ftaloyl-L-lysine werd 40 ml oxalylchloride toegevoegd. Het mengsel werd in 45 een oliebad bij 90°C verhit, daarna vermengd met 40 ml 1,2-dimethoxyethaan, en onder terugvloeiing onder verhitting 2 uur lang gekookt. Het reactiemengsel werd ingedampt tot droog, opnieuw opgelost in 20 ml 1,2-dimethoxyethaan, en toegedruppeld aan 500 ml van een etheroplossing die 330 mrnol diazomethaan bevatte, terwijl in ijswater werd gekoeld. Het mengsel werd daarna 1 uur lang geroerd. Het reactiemengsel werd tot droog ingedampt, en opgelost in 250 ml watervrije methanol. Aan de oplossing werd 50 ml 50 triethylamine-oplossing die 3,4 g (14,8 mmol) zilverbenzoaat bevatte, toegevoegd. Het mengsel werd 15 uur lang bij kamertemperatuur geroerd. Het neerslag werd gefiltreerd en bijeengebracht, opgelost in 100 ml chloroform, gefiltreerd uit onoplosbare stoffen, en tot droog ingedampt ter verkrijging van 15,3 g (53% opbrengst) (S)-3,7-diftaloylaminoheptanoïsch zure methylester. Ontledingspunt 118°-119°C; [a]“-3° (C2, chloroform).
55 Aan 15,0 g (34,5 mmol) {S)-3,7-diftaloylaminoheptanoïsch zure methylester werd 100 ml 1 molair ethanolisch hydrazinehydraat en 100 ml 95% ethanol toegevoegd. Het mengsel werd 1 uur lang onder verhitting (oliebadtemperatuur: 90°C) gekookt onder terugvloeiing. Het reactiemengsel werd tot droog 193107 16 ingedampt, opgelost in 250 ml 5% zoutzuur, 1 uur lang bij 80°C verhit, ingesteld op een pH van 7,1 met 17% waterige ammoniak, en door een kolom {27 mm inwendige diameter) met een pakking van 300 ml Amberlite<H) CG-50 (70% NH4-type) geleid. De kolom werd achtereenvolgens gewassen met 900 ml water en 900 ml 0,2 molair waterige ammoniak, en geëlueerd met 0,5 molaire waterige ammoniak. De ninhydrine-5 positieve fracties werden verzameld en tot droog ingedampt ter verkrijging van 3,15 g (57% opbrengst) van (S)-3,7-diaminoheptanoïsch zuur (c7H16N202.1/4 H2C03) in kleurloze siroopvorm; [α]ο2 + 2,9° (C1, Water).
(b) Synthese van (S)-7-guanidino-3-hydroxyheptaanamide:
Aan 30 ml van een pyridine-water-triethylamine (10:10:1) mengsel dat 3,1 g (19,3 mmol) van in (a) 10 hierboven verkregen (S)-3,7-diaminohepaanzuur bevatte, werd langzaam 4,81 g (19,3 mmol) N-benzoyloxycarbonyloxy-succinimide toegevoegd. Het mengsel werd 5 uur lang bij kamertemperatuur geroerd. Het reactiemengsel werd ingedampt tot droog, daarna opgelost in 30 ml water, net 6N zoutzuur op een pH van 6,4 ingesteld en door een 100 ml kolom (16 mm inwendige diameter) met een pakking van Amberlite(R) CG-50 (80% NH4-type) geleid. De kolom werd ontwikkeld met 300 ml water. Het verzamelde 15 effluent werd verder geleid door een kolom (16 mm inwendige diameter) met een pakking van 100 ml Dowex<r) 50W-X4 (H-type). De kolom werd achtereenvolgens gewassen met elk 300 ml water en 0,2 M waterige ammoniak en geëlueerd met 0,5 M waterige ammoniak (10 ml fractiegrootte). De fracties No. 16 tot en met 33 werden gecombineerd en afgedampt tot droog ter verkrijging van 2,73 g (48% opbrengst) van wit poeder van (S)-3-amino-7-benzyloxycarbonylaminoheptanoïsch zuur C15H22N204.H20); ontledingspunt, 20 143°-147°C; [α]|2 + 14° (C1, methanol). De Amerblite <R) CG-50 kolom werd geëlueerd met 0,5 N waterige ammoniak ter terugwinning van 746 mg (24% terugwinning (S)-3,7-diaminoheptanoïsch zuur.
Aan een oplossing van 2,7 g (9,17 mmol) (S)-3-amino-7-benzyloxycarbonylaminoheptanoïsch zuur in 33%’s waterig azijnzuur, werd, terwijl werd gekoeld in ijs over een periode van 1 uur, een oplossing van 1,9 g (27,51 mmol) natriumnitriet in 10 ml water toegedruppeld. Het mengsel werd nog eens 1 uur lang geroerd 25 en men liet het bij 5°C 24 uur lang staan. Na toevoeging van 50 ml water werd het reactiemengsel 2 maal geëxtraheerd met 50 ml ethylacetaat. De organische laag werd boven watervrij natriumsulfaat gedroogd en tot droog ingedampt ter verkrijging van 2,16 g van een ruw poeder. Onder toepassing van kolom (28 mm inwendige diameter)-chromatografie met 200 g silica gel (Wakogel<R) C-200) werd de bovengenoemde ruwe poeder ontwikkeld met een chloroform-methanol-geconcentreerde waterige ammoniak (30:10:1 volume) 30 mengsel (20 ml fractiegrootte) ontwikkeld. De fracties No. 51 tot en met 60 werden gecombineerd en ingedampt tot droog ter verkrijging van 460 mg (17% opbrengst) van een wit poeder van (S)-7-benzyloxycarbonylamino-3-hydroxyheptanoïsch zuur; ontledingspunt, 115°C-117°C; [a]o3 + 3° (C2, methanol).
Aan een oplossing van 450 ml (1,52 mmol) (S)-7-benzyloxycarbonylamino-3-heptaanzuur in 1,2-35 dimethoxyethaan werd, terwijl in ijs werd gekoeld, 7 ml (4,56 mmol) van een oplossing van diazomethaan in ether toegedruppeld. Het mengsel werd 30 min. lang geroerd. Het reactiemengsel werd ingedampt tot droog ter verkrijging van 461 mg (98% opbrengst) methyl-(S)-7-benzyloxycarbonylamino-3-heptaanaat; [a]“ + 1 °.
Een oplossing van 450 ml (1,45 mmol) methyl (S)-7-benzyloxycarbonylamino-3-hydroxyheptanoaat in 50 ml van waterig methanol werd, terwijl werd gekoeld bij -10°C, met gasvormig ammoniak verzadigd en men 40 liet haar 3 dagen lang in een luchtdicht afgesloten buis bij kamertemperatuur staan. Het reactiemengsel werd tot droog ingedampt en onderworpen aan een chromatografische behandeling onder toepassing van een kolom (20 mm inwendige diameter) die 50 g silicagel (Wakogel(R) C-200) bevatte en onder ontwikkeling met chloroform-methanol (100:1 volume). De fracties No. 82 tot en met 106 elk met een volume van 10 ml werden gecombineerd en tot droog ingedampt ter verkrijging van 371 mg (87% opbrengst) van een wit 45 poeder van (S)-7-benzyloxycarbonylamino-3-hydroxyheptaanamide; ontledingspunt 126°-127°C; [a]“ + 3° (C5, methanol).
In een mengsel van 10 ml 90%’s waterig methanol en 0,01 ml azijnzuur werd 350 mg (1,19 mmol) (S)-7-benzyloxycarbonylamino-3-hydroxyheptaanamide opgelost. Na toevoeging van 50 mg 5%’s palladium-koolstof werd het mengsel 3 uur lang bij kamertemperatuur geroerd onder een waterstof stroom. Na 50 verwijdering van de katalysator door filtratie werd het filtraat ingedampt tot droog, opnieuw opgelost in een klein volume water en geleid door een kolom (12 mm inwendige diameter) die 30 ml Dowex(R) 50W-X4 (H-type) bevatte. De kolom werd gewassen met 90 ml water en geëlueerd met 0,5 M waterige ammoniak (3 ml in fractiegrootte). De fracties Nos. 28 tot en met 34 werden gecombineerd en ingedampt tot droog ter verkrijging van 201 mg (96% opbrengst) (S)-7-amino-3-hydroxyheptaanamide; [a]|2 - 2° (C2, Water).
55 Aan een oplossing van 190 mg (1,08 mmol) (S)-7-amino-3-hydroxyheptaanamide in 3 ml water werd 0,54 ml 2N waterige natriumhydroxide-oplossing toegevoegd. Aan de ontstane oplossing werd, terwijl in ijs werd gekoeld, over een periode van 30 min. 1 ml van een methanoloplossing die 129 mg (1,08 mmol) 2-methyl-1- 17 193107 nitrosoureum bevatte, toegedruppeld. Het mengsel werd verder 5 uur lang geroerd, daarna met 6N zoutzuur tot een pH van 6,0 ingesteld, ingedampt tot droog, en gezuiverd door chromatografie onder gebruikmaking van een kolom (15 mm inwendige diameter) die 30 g silicagel (Wakogel<R) C-200) bevatte en onder ontwikkeling met een mengsel van chloroform, methanol en geconcentreerde waterige ammoniak (60:10:1 5 volume). De fracties Nos. 67 tot en met 90 (6 ml in fractiegrootte) werden gecombineerd en ingedampt tot droog ter verkrijging van 187 mg (70% opbrengst) van een wit poeder van (S)-7-nitroguanidino-3-hydroxyheptaanamide; ontledingspunt, 148°-149°C; [a]§,2 -2° (C2, methanol).
In een mengsel van 15 ml water, 15 ml methanol en 7,5 ml azijnzuur werd 170 mg (0,69 mmol) (S)-7-nitro-guanidino-3-hydroxyheptaanamide opgelost. Na toevoeging van 50 mg van 5%’s palladium-10 koolstof werd het mengsel 1 uur lang bij kamertemperatuur onder een waterstofstroom geroerd. Na verwijdering van de katalysator door filtratie werd het filtraat ingedampt tot droog ter verkrijging van 165 mg van een ruw poeder. Het ruwe poeder werd opgelost in 10 ml water, geleid door een kolom (12 mm inwendige diameter) met een pakking van 20 ml CM-Sephadex<R) G-25 (Na-type), en geëlueerd met 0,5 M waterige natrium-chloride-oplossing (2ml in fractiegrootte). De fracties Nos. 18 tot en met 25 werden 15 gecombineerd, ingedampt tot droog en drie maal met 10 ml methanol geëxtraheerd. De methanol- oplossingen werden gecombineerd, geleid door een kolom (20 mm inwendige diameter) met een pakking van 100 ml Sephadex(R> LH-20 en geëlueerd met methanol (1 ml in fractiegrootte). De fractie Nos. 28 tot 46 werden gecombineerd en tot droog ingedampt ter verkrijging van 149 mg (91% opbrengst) van een wit poeder van (S)-7-guanidino-3-hydroxyheptaanamide-hydrochloride (C8H18N402.HC1); [a]|2 -2° (C2, 20 Water).
Referentievoorbeeld 2
Synthese van 7-guanidino-2-hepteenamide.
25 Aan een oplossing van 955 mg (4 mmol) (S)-7-guanidino-3-hydroxyheptaanamide-hydrochloride in 20 ml watervrij Ν,Ν-dimethylformamide werd 2,48 g (12 mmol) dicyclohexylcarbodiimide en 40 mg koper(ll)chloride toegevoegd. Het mengsel werd 2 dagen lang bij kamertemperatuur geroerd. Het reactiemengsel werd gefiltreerd ter verwijdering van het neerslag en het filtraat werd onder verminderde druk geconcentreerd. Het residu werd in 10 ml water opgelost en twee maal met 10 ml ethylacetaat gewassen. De waterige laag werd 30 ingedampt tot droog, opgelost in 5 ml water, geleid door een kolom (20 mm inwendige diameter) met een pakking van 50 ml CM-Sephadex(R) C-25 (Na-type) en de kolom werd geëlueerd met 200 ml 0,5 M waterige natriumchloride-oplossing (10 ml fractiegrootte). De fracties No 17 tot en met 30 werden gecombineerd, tot droog ingedampt, en drie maal geëxtraheerd met methanol. De methanol-oplossing werd geleid door een kolom (20 mm inwendige diameter) die een pakking had van 150 ml Sephadex(R) LH-20 en werd ontwikkeld 35 met methanol (5 ml fractiegrootte). De fracties No. 9 tot en met No. 16 werden gecombineerd en tot droog ingedampt. Het residu, dat 950 mg woog, werd gekristalliseerd uit ethanol-aceton zodat 790 mg (89,5% opbrengst) 7-guanidino-2-hepteenamide-hydrochloride met een smeltpunt van 162°-168°C werd verkregen.
Proton NMR (gemeten in deuteromethanol), δ: 1,4-1,8 (CH2 x 2); 2,27 (CH2); 3,20 (CH2); 5,98 (CH); 6,80 (CH) 40 Infrarood absorptie spectrum (KBr tablet), cm'1: 3370, 3150, 1660, 1625, 1610, 1590, 1415, 1395, 1370. Referentievoorbeeld 3
Synthese van 7-guanidinoheptaanamide-hydrochloride 45 Aan een oplossing van 441 mg (2 mmol) 7-guanidino-2-hepteenamide-hydrochloride in 7 ml methanol, werd 47,5 mg (0,2 mmol) nikkelchloride toegevoegd. Aan het mengsel werd, terwijl bij kamertemperatuur werd geroerd, 189 mg (5 mmol) natriumboriumhydride in kleine porties toegevoegd. Na de toevoeging werd het mengsel 1,5 uur lang verder geroerd, daarna gefiltreerd vanuit een zwart neerslag, en het filtraat werd tot droog ingedampt. Het residu werd opgelost in 5 ml 0,5 M waterige natriumchloride-oplossing, geleid door 50 een kolom (30 mm inwendige diameter), die een pakking had van 100 ml Diaion(R) HP-20, en ontwikkeld met 300 ml 0,5 M waterige natriumchloride-oplossing en daarna met 300 ml water (15 ml fractiegrootte). De fracties No. 25 tot en met No. 33 werden gecombineerd, tot droog ingedampt, en drie maal met 5 ml ethanol geëxtraheerd. De methanollaag werd geleid door een kolom (20 mm inwendige diameter) die een pakking had van 150 ml Sephadex(R) LH-20, en ontwikkeld met methanol (5 ml fractiegrootte). De fracties 55 No. 8 tot en met 13 werden gecombineerd, tot droog ingedampt, en gekristalliseerd uit ethanol-aceton zodat 372 mg (83,5% opbrengst) kleurloze kristallen van 7-guanidinoheptaanamide-hydrochloride met een smeltpunt van 140°-141°C werd verkregen.
193107 18
Proton NMR (gemeten in deuteromethanol), δ: 1,2-1,9 (CH2 x 4); 2,23 (CH2); 3,20 (CH2).
Infrarood absorptie spectrum (KBr tablet), cm'1: 3350, 3150, 2920, 1655, 1630, 1590, 1455, 1430, 1400, 1220, 1165, 1130, 1065.
5 Referentievoorbeeld 4
Synthese van 8-guanidino-3-hydroxyoctaanamide (a) Synthese van 8-benzyloxycarbonylamino-3-ketooctanoïsch zure ethylester: 10 Aan een oplossing van 6,56 g (50 mmol) 6-amino-hexaanzuur in 25 ml 2N waterige natriumhydroxide-oplossing werd 5 ml ethylether toegevoegd. Aan het mengsel werd, terwijl in ijs werd gekoeld en geroerd, over een periode van 30 min. 10 ml benzyloxycarbonylchloride en 37,5 ml 2N waterige natriumhydroxideop-lossing toegedruppeld. Na de toevoeging werd de temperatuur tot kamertemperatuur teruggebracht en werd het roeren 2 uur lang voortgezet. Het reactiemengsel werd twee maal gewassen met 20 ml ethylether. De 15 waterige laag werd aangezuurd met geconcentreerd zoutzuur en drie maal geëxtraheerd met 50 ml ehtylacetaat. De extract-oplossingen werden gecombineerd, gewassen met verzadigd zouthoudend water, gedroogd boven watervrij natriumsulfaat, en vrijgemaakt van oplosmiddel door destillatie ter verkrijging van 12,16 g (92% opbrengst) 6-benzyloxycarbonylaminohexaanzuur met een smeltpunt van 127-128°C.
Een oplossing van 2,65 g (10 mmol) 6-benzyloxycarbonylaminohexaanzuur en 1,62 g (10 mmol) in de 20 handel verkrijgbaar 1,1'-carbonyldiimidazool en 25 ml watervrij tetrahydrofuran werd 15 min. lang bij kamertemperatuur geroerd. Aan het reactiemengsel werd een suspensie van 6,18 g (40 mmol) van een wit poeder van magnesiumenolaat van monoethylmalonaat (bereid uit 5,28 g monoethylmalonaat en 972 g magnesium) in 50 ml watervrij tetrahydrofuran toegevoegd. Het mengsel werd 2 uur lang bij kamertemperatuur geroerd. Na toevoeging van 50 ml 1N zoutzuur en 10 min. lang roeren werd het mengsel drie maal met 25 50 ml chloroform geëxtraheerd. De chloroformlaag werd achtereenvolgens gewassen met 1N zoutzuur, verzadigde waterige natriumwaterstofcarbonaat-oplossing en verzadigd zouthoudend water, daarna gedroogd boven watervrij natriumsulfaat, en vrijgemaakt van oplosmiddel door destillatie. Het residu werd geleid door een kolom van 100 g "Silica Gel 50: (Merck and Co.) en geëlueerd met chloroform (20 g fractiegrootte). De fracties No. 43 tot en met No. 105 werden gecombineerd en tot droog ingedampt ter 30 verkrijging van 2,35 g (70% opbrengst) ethyl 8-benzyloxycarbonylamino-3-ketooctanoaat.
Proton NMR spectrum (in deuteromethanol), δ: 1,27 (CH3); 1,1 - 1,9 (CH2x3); 2,52 (CH2); 3,17 (NCH2); 3,40 (CH2); 4,18 (CH2); 5,05 (NH); 5,09 (CH2; 7,32 (C6H5).
Infrarood absorptiespectrum (KBr tablet), cm'1: 3360, 2920, 1730, 1710, 1520, 1240.
(b) Synthese van 8-guanidino-3-hydroxyoctaanamide 35 In 20 ml ethanol werd 2,01 g (6 mmol) ethyl-8-benzyloxycarbonylamino-3-ketooctanoaat dat hierboven in (a) werd verkregen, opgelost. Aan de oplossing werd portiegewijs onder roeren bij kamertemperatuur 227 mg (6 mmol) natriumboriumhydride toegevoegd. Het mengsel werd 30 min. lang geroerd, daarna vermengd met verscheidene druppels azijnzuur, uitgegoten in 100 ml water, en drie maal met 50 ml chloroform geëxtraheerd. De chloroformlagen werden gecombineerd, achtereenvolgens gewassen met 1N zoutzuur, 40 verzadigde waterige natriumwaterstofcarbonaatoplossing en verzadigd zouthoudend water, daarna gedroogd boven watervrij natriumsulfaat, en vrijgemaakt van het oplosmiddel door destillatie zodat 2,00 g (99% opbrengst) ethyl 8-benzyloxycarbonylamino-3-hydroxyoctanoaat met een smeltpunt van 47°-50°C werd verkregen.
In 40 ml methanol dat was verzadigd met gasvormige ammoniak, werd 1,69 g (5 mmol) ethyl 45 8-benzyloxycarbonylamino-3-hydroxy-octanoaat opgelost. De oplossing werd 3 dagen lang bij kamertemperatuur geroerd en het reactiemengsel werd tot droog ingedampt. Het residu werd uit ethanol gekristalliseerd zodat 1,18 g (72,5% opbrengst) 8-benzyloxycarbonylamino-3-hydroxyoctaanamide met een smeltpunt van 100°-101°C werd verkregen.
Aan een oplossing van 1,04 g (3,2 mmol) 8-benzyloxycarbonylamino-3-hydroxyoctaanamide in 20 ml 50 methanol werden 3,2 ml 1N zoutzuur en 200 ml 10% palladium-koolstof toegevoegd. Het mengsel werd onder een stikstofstroom 3 uur lang bij kamertemperatuur geroerd. De katalysator werd door filtratie verwijderd en het filtraat werd tot droog ingedampt ter verkrijging van 670 mg 8-amino-3-hydroxyoctaan-amidehydrochioride.
Aan een oplossing van 670 mg 8-amino-3-hydroxyoctaanamidehydrochloride in 8 ml 1N waterige 55 natriumhydroxideoplossing werd 668 mg (2,4 mmol) S-methylisotioureumhemisulfaat toegevoegd. Het mengsel werd bij kamertemperatuur gedurende de nacht geroerd. Het reactiemengsel werd met 1M zoutzuur op een pH van 6 ingesteld, tot droog ingedampt, en in 5 ml 1N^ zouthoudend water opgelost. De 19 193107 oplossing werd geleid door een kolom van 160 ml Diaion(R) HP120 (Mitsubishi Chemical Co.) en de kolom werd achtereenvolgens geëlueerd met 400 ml 1M zouthoudend water, 400 ml 0,8 M zouthoudend water en 800 ml 0,6M zouthoudend water (15 g fractiegrootte). De fracties No. 41 tot en met No. 87 werden gecombineerd, tot droog ingedampt, en drie maal geëxtraheerd met 10 ml methanol. De methanollaag werd 5 geleid door een kolom van 300 ml Sephadex(R) LH-20 en geëlueerd met methanol teneinde ontzouting (7 ml fractiegrootte) tot stand te brengen. De fracties No. 25 tot en met 35 werden gecombineerd en tot droog ingedampt zodat 687 mg (85% opbrengst) 8-guanidino-3-hydroxyoctaan-amidehydrochloride werd verkregen.
Proton NMR spectrum (in deuteromethanol), δ: 1,4-1,8 (CH2x4); 2,36 (CH2); 3,20 (NCH2); 3,95 (CH) 10 Infrarood absorptiespectrum (KBr tablet), cm'1: 3350, 3170, 2930, 1655, 1400, 1175.
Referentievoorbeeld 5
Synthese van 8-guanidino-2-octeenamide 15 Op een manier soortgelijk aan die in de synthese van 7-guanidino-2-hepteenamide in referentievoorbeeld 2 werd 218 mg (86% opbrengst) 8-guanidino-2-octeenamidehydrochloride met een smeltpunt van 163°-165°C verkregen uit 270 mg 8-guanidino-3-hydroxyoctaanamidehydrochloride.
Proton NMR spectrum (in deuteromethanol), δ: 1,4-1,9 (CH2x3); 2,25 (CH2); 3,19 (NCH2); 5,94 (CH); 6.79 (CH) 20 Infrarood absorptiespectrum (KBr tablet), cm'1: 3400, 3120, 2920, 1660, 1630, 1400.
Referentievoorbeeld 6
Synthese van 9-guanidino-3-hydroxynonamide 25 Op een manier soortgelijk aan die in de synthese van 8-guanidino-3-hydroxyoctaanamide in referentievoorbeeld 4, werd 892 mg 9-guanidino-3-hydroxynonaanamidehydrochloride verkregen uit 2,56 g 7-aminoheptanoïsch zuur.
Proton NMR spectrum (in deuteromethanol), δ: 1,2-1,9 (CH2x5); 2,35 (CH2); 3,19 (NCH2); 3,29 (CH). Infrarood absorptiespectrum (KBr tablet), cm'1: 3350, 3180, 2940, 1660, 1400, 1175.
30
Referentievoorbeeld 7
Synthese van 9-guanidino-2-noneenamide
Op een manier soortgelijk aan die in de synthese van 7-guanidino-2-hepteenamide in referentievoorbeeld 2 35 werd 253 mg (75% opbrengst) 9-guanidino-2-noneenamidehydrochloride verkregen uit 361 mg 9-guanidino- 3-hydroxynonaanamidehydrochloride; smeltpunt 132°-135°C.
Proton NMR spectrum (in deuteromethanol), δ: 1,2-1,9 (CH2x4); 2,23 (CHZ); 3,20 (NCH2); 5,97 (CH); 6.80 (CH)
Infrarood absorptiespectrum (KBr tablet), cm'1: 3350, 3175, 2940, 1660, 1620, 1420.
40
Referentievoorbeeld 8
Synthese van N-[4-(3-aminopropyl)aminobutyI]-2- dihydroxyethaanamide.
45 (a) Synthese van mono-N-benzyioxycarbonyl-1,4-butaandiamine:
Aan een oplossing van 1,76 g (20 mmol) 1,4-butaandiamine in 30 ml van 50% waterig methanol, werd 5,48 g (20 mmol) benzyl-S-4,6-dimethylpyrimide-2-ylthiocarbonaat (Kokusan-kagaku Co.) toegevoegd. Het mengsel werd 3 uur lang geroerd. Het reactiemengsel werd gefiltreerd ter verwijdering van het neerslag {2,08 g (29%) di-N-benzyloxycarbonylverbinding werd verkregen uit het neerslag[. Het filtraat werd tot droog 50 ingedampt, opgelost in 250 ml chloroform, en vijf maal gewassen met 100 ml water. De chloroformlaag werd gedroogd boven watervrij natriumsulfaat, en tot droog ingedampt ter verkrijging van 1,0 g (23% opbrengst) mono-N-benzyloxycarbonyl-1,4-butaandiamine, een kleurloze siroop.
{b) Synthese van 0-tosyl-3-tert-butoxycarbonyl-amino-1-propanoi: 55 Aan een oplossing van 1,5 g (20 mmol) 3-amino-1 -propanol in 30 ml methanol, werd 4,8 g (20 mmol) tert-butyl S-4,6-dimethyl-pyrimide-2-ylthiocarbonaat toegevoegd. Het mengsel werd 6 uur lang geroerd. Het reactiemengsel werd tot droog ingedampt, opgelost in 200 ml chloroform en met 200 ml water gewassen.
193107 20
De chloroformlaag werd geconcentreerd en onderworpen aan kolomchromatografie onder gebruikmaking van 300 g silicagel (Wakogel(R) C-200) en een tolueen-ethylacetaat(1:1 volume)-mengsel als ontwikkelings-oplosmiddel (15 ml fractiegrootte). De fracties No. 82 tot en met 151 werden gecombineerd en tot droog ingedampt ter verkrijging van 2,95 g (84% opbrengst) 3-tert-butyloxycarbonylamino-1-propanol, een 5 kleurloze olieachtige stof.
Aan een oplossing van 2,95 g (16,9 mmol) 3-tert-butoxycarbonylamino-1 -propanol in 50 ml pyridine werd, terwijl in ijs werd gekoeld onder een argon atmosfeer, over een periode van 40 min. een pyridine-oplossing die 3,36 g (17,7 mmol) p-tolueensulfonylchloride bevatte, toegedruppeld. Het mengsel liet men bij 7°C gedurende de nacht staan, en daarna werd een klein volume water bijgemengd en tot droog ingedampt. Het 10 residu werd opgelost in 200 ml chloroform, achtereenvolgens gewassen met 5% waterige kaliumwaterstof-sulfaatoplossing, verzadigde waterige natriumwaterstofcarbonaatoplossing, en water, daarna gedroogd boven watervrij natriumsulfaat, en tot droog ingedampt. Het residu werd onderworpen aan kolomchromatografie onder gebruikmaking van 120 g silicagel (Wakogel(R) C-200) en een tolueen-ethylacetaat(8:1 volume)-mengsel als ontwikkelingsoplosmiddel (15 ml fractiegrootte). De fracties No. 35 tot 15 en met No. 68 werden gecombineerd en ingedampt tot droog ter verkrijging van 3,06 g (55% opbrengst) 0-tosyl-3-tert-butoxycarbonylamino-1-propanol, een kleurloze olieachtige stof.
(c) synthese van N-tert-butoxycarbonyl-N-(tert-butoxycarbonylaminopropyi)-1,4-butaandiamine
In 15 ml Ν,Ν-dimethylformamide werd 800 mg (2,43 mmol) van de in (b) hierboven verkregen O-tosyl-3-tert-20 butoxycarbonylamino-1-propanol opgelost. Na toevoeging van 510 mg (4,8 mmol) lithiumbromide (LiBr.H20), werd het mengsel 24 uur lang bij kamertemperatuur geroerd. Aan het reactiemengsel dat de broom-verbinding bevatte, werd 540 mg (2,43 mmol) van hierboven in (a) verkregen mono-N-benzyloxycarbonyl- 1,4-butaandiamine en 0,34 ml triethylamine toegevoegd. Het mengsel werd bij kamertemperatuur 48 uur lang geroerd. Aan het reactiemengsel werd 699 mg (2,9 mmol) tert-butyl-S-4,6-dimethylpyrimide-2-25 ylthiocarbonaat toegevoegd. Het mengsel werd 13 uur lang bij kamertemperatuur geroerd. Het reactiemengsel werd tot droog ingedampt, opgelost in 100 ml chloroform, gewassen met 50 ml water, gedroogd boven watervrij natriumsulfaat, en tot droog ingedampt. Het residu werd onderworpen aan kolomchromatografie onder gebruikmaking van 200 g silicagel (Wakogel(R) C-200) en een tolueen-ethylacetaat (4:1 volume) mengsel als ontwikkelingsoplosmiddel (12 ml fractiegrootte). De fracties No. 134 tot en met 30 165 werden gecombineerd en tot droog ingedampt ter verkrijging van 608 mg (52% opbrengst) N-benzyloxycarbonyl-N'-tert-butoxycarbonyl-N'-(ter t-butoxycarbonylaminopropyl)-1,4-butaandiamine, een kleurloze siroopachtige stof.
Aan een oplossing van 144 mg (0,3 mmol) van de bovengenoemde siroopachtige stof in 5 ml methanol, werd toegevoegd 100 mg 5%’s palladium-bariumcarbonaat. Het mengsel werd onder een waterstofstroom 35 bij kamertemperatuur 5 uur lang geroerd. Na verwijdering van de katalysator door filtratie werd het filtraat tot droog ingedampt ter verkrijging van 103 mg (100% opbrengst) N-tert-butoxycarbonyl-N'-(tert-butoxycarbonylaminopropyl )-1,4-butaandiamine.
(d) Synthese van N-[4-(3-aminoproly)-amino-butyl]-2,2-dihydroxyethaanamide: 40 In 2 ml ethylacetaat werd 100 mg (0,29 mmol) van het hierboven in (c) verkregen N-tert-butoxycarbonyl-N-(tert-butoxycarbonylaminopropyl)-1,4-b butaandiamine en 148 mg (1 mmol) 2,2-diethoxyazijnzuur opgelost. Aan de ontstane oplossing werd 135 mg (1 mmol) 1-hydroxybenzotriazool en 206 mg (1 mmol) dicyclohexyl-carbodiimide toegevoegd. Het mengsel werd 15 uur lang bij kamertemperatuur geroerd. Het neerslag werd afgescheiden door filtratie en gewassen met koude ethylacetaat. Het filtraat en de wassingen werden 45 gecombineerd en met 1M waterige ammoniak en daarna met water gewassen. De ethylacetaatlaag werd gedroogd boven watervrij natriumsulfaat, tot droog ingedampt, en onderworpen aan kolomchromatografie onder gebruikmaking van een kolom van 20 g silicagel (Wakogel(R) C-200) en een tolueen-ethylacetaat (1:2 volumeverhouding) mengsel als ontwikkelingsoplosmiddel (3 ml fractiegrootte). De fracties No. 14 tot en met 21 werden gecombineerd en tot droog ingedampt ter verkrijging van 109 mg (79% opbrengst) N-[4-(3-tert-50 butoxycarbonylaminobutyl'-4-tert-butoxy-carbonylaminobutyl]-2,2-diethoxyethaanamide een kleurloze siroopachtige stof.
Aan een oplossing van 44 mg (0,13 mmol) van bovengenoemde siroopachtige stof in 1 ml dioxan werd 2,5 ml 0,1 N zoutzuur toegevoegd. Het mengsel werd in een oliebad bij 100°C 4 uur lang geroerd. Het reactiemengsel werd geneutraliseerd met 0,2N waterige natriumhydroxideoplossing tot een pH van 6, en 55 daarna tot droog ingedampt. Het residu werd geëxtraheerd met 1,5 ml methanol en de methanollaag werd geleid door een kolom (16,5 mm inwendige diameter) met een pakking van 100 ml Sephadex(R> LH-20, en ontwikkeld met methanol (2 ml fractiegrootte). De fracties No. 22 tot en met 25, positief op ninhydrinereac- 21 193107 tie, werden gecombineerd en ingedampt tot droog, zodat 13 mg (46% opbrengst) N-[4-(3-aminopropyl)aminobutyl]- 2,2-dihydroxyethaanamidedihydrochloride, een kleurloze siroopachtige stof, werd verkregen.
5 Voorbeeld I
Synthese van N-[4-(3-aminopropyl)aminobutyl]- 2(4-guanidinobutaanamido)-2-hydroxyethaanamide Een mengsel van 360 mg (2 mmol) 4-guanidino-butaanamidehydrochloride, 701 mg (2,4 mmol) N-[4-(3-aminopropyl)aminobutyl]- 2,2-dihydroxyethaanamidedihydrochloride, 264 mg (2 mmol) glutaarzuur en 0,36 10 ml water werd bij 60°C 24 uur lang verhit.
Na voltooiing van de reactie werd 5 ml water aan het reactiemengsel toegevoegd en daarna werd het geleid door een kolom (20 mm inwendige diameter) met een pakking van 150 ml CM-Sephadex(R) C-25 (Na-type), en gefractioneerd door de gradiënt eluering met 1,5 I water en 1,5 I 0,8M waterige natriumchloride-oplossing (15 ml fractiegrootte). De fracties No. 125 tot en met 137 die overeen kwamen 15 met de natriumchlorideconcentraties van 0,48 - 0,56M werden gecombineerd, daarna geconcentreerd, en drie maal met 10 ml methanol geëxtraheerd. De methanollaag werd geleid door een kolom (20 mm inwendige diameter) met een pakking van 150 ml Sephadex(R) LH-20, en ontwikkeld met methanol (7 ml fractiegrootte). De fracties No. 9 tot en met 15 werden gecombineerd en tot droog ingedampt, zodat 318 mg (35% opbrengst) van een wit poeder van N-[3-(3-aminopropyl)aminobutyl]-2-4(4-guanidinobutaanamido)-2-20 hydroxyethaanamidetrihydrochloride werd verkregen.
Voorbeeld II
Synthese van N-[4-(3-aminopropyl)aminobutyl]-2-(5-guanideopentaanamido)-2-hydroxyethaan-amide 25 Een mengsel van 92,4 mg (0,48 mmol) 5-guanidino-pentaanamidehydrochloride, 166,5 mg (0,57 mmol N-[4-(3-aminopropyl)aminobutyl]- 2,2-dihydroxyethaanamidedihydrochloride, 62,8 mg (0,48 mmol) glutaarzuur, en 0,1 ml water werd bij 60°C uur lang verhit. Na voltooiing van de reactie werd 5 ml water toegevoegd aan het reactiemengsel dat daarna werd gezuiverd op een manier die soortgelijk was aan die van voorbeeld I onder gebruikmaking van CM-Sephadex(R) C-25 (Na-type) en Sephades(R> LH-20 zodat 82,5 30 mg (37,1% opbrengst) van een wit poeder van N-[4-(3-aminopropyl)aminobutylj- 2-(5-guanidinopenthaan-amido)-2-hydroxyethaanamidetrihydrochloride werd verkregen.
Voorbeeld III
35 Synthese van N-[4-(3-aminopropyl)aminobutyl]- 2-(6-guanidinohexaanamido)-2-hydroxyethaanamide Een mengsel van 446 mg (2,14 mmol) 6-guanidino-hexaanamidehydrochloride, 750 mg (2,57 mmol) N-[4-(3-aminopropyl)aminobutyl]- 2,2-dihydroxyethaanamidedihydrochloride, 283 mg (2,14 mmol) glutaarzuur en 0,45 ml water werd bij 60°C 24 uur lang verhit. Na voltooiing van de reactie werd 5 ml water toegevoegd aan het reactiemengsel en het ontstane mengsel werd gezuiverd op een manier die soortgelijk was aan die 40 in voorbeeld I onder gebruikmaking van CM-Sephadex(R) C-25 (Na-type) en Sephadex<R) LH-20 ter verkrijging van 459 mg (44% opbrengst) van een wit poeder van N-[4-(3-aminopropyl)aminobutyl]- 2-(6-guanidinohexaanamido)-2-hydroxyethaanamidetrihydrochloride.
Voorbeeld IV 45
Synthese van N-[4-(3-aminopropyl)aminobutyl]- 2-(7-guanidinoheptaanamido)-2-hydroxyethaanamide Een mengsel van 360 mg (1,62 mmol) 7-guanidino-heptaanamidehydrochloride, 568 mg (19,4 mmol) N-[4-(3-aminopropyl)aminobutyl]- 2,2-dihydroxyethaanamidedihydrochloride, 214 mg (1,62 mmol) glutaarzuur, en 0,36 ml water werd bij 60°C 24 uur lang verhit. Na voltooiing van de reactie werd 5 ml water 50 toegevoegd aan het reactiemengsel en het ontstane reactiemengsel werd gezuiverd op een manier die soortgelijk was aan die in voorbeeld I onder gebruikmaking van CM-Sephadex(R) C-25 (Na-type) en Sephadex(R) LH-20 ter verkrijging van 317 mg (39% opbrengst) van een wit poeder van N-[4-(3-aminopropyl)aminobutylj- 2-(7-guanidinoheptaanamido)-2-hydroxyethaanamidetrihydrochloride.
193107 22
Voorbeeld V
Synthese van N-[4-(3-aminopropyl)aminobutyl]- 2-(8-guanidinooctaanamido)-2-hydroxyethaanamide Een mengsel van 500 mg (2,11 mmol) 8-guanidino-octaanamidehydrochloride, 740 mg (2,53 mmol) 5 N-[4-(3-aminopropyl)aminobutyl]- 2,2-dihydroxyethaanamidedihydrochloride, 335 mg (2,53 mmol) glutaar-zuur, en 0,34 ml water werd bij 60°C 24 uur lang verhit. Na voltooiing van de reactie werd 5 ml water toegevoegd aan het reactiemengsel en het ontstane reactiemengsel werd gezuiverd op een manier die soortgelijk was aan die in voorbeeld I onder gebruikmaking van CM-Sephadex<R) C-25 (Na-type) en Sephadex(R> LH-20 ter verkrijging van 526 mg (49% opbrengst) van een wit poeder van N-[4-(3-10 aminopropyl)aminobutyl]- 2-(8-guanidinooctaanamido)-2-hydroxyethaanamidetrihydrochloride.
Voorbeeld VI
Synthese van N-[4-(3-aminopropyl)aminobutyl]- 2-{9-guanidinononaanamido) -2-hydroxyethaanamide 15 Een mengsel van 316 mg (1,26 mmol) 9-guanidino-nonaanamidehydrochloride, 442 mg (1,51 mmol) N-[4-(3-aminopropyl)aminobutyl]- 2,2-dihydroxyethaanamidedihydrochloride, 166 mg (1,62 mmol) glutaar-zuur, en 0,01 ml water werd bij 60eC 24 uur lang verhit. Na voltooiing van de reactie werd 5 ml water toegevoegd aan het reactiemengsel en het mengsel werd gezuiverd op een manier die soortgelijk was aan die in voorbeeld I onder gebruikmaking van CM-Sephadex(R) C-25 (Na-type) en Sephadex(R) LH-20 ter 20 verkrijging van 324 mg (49% opbrengst) van een wit poeder van N-[4-(3-aminopropyl)aminobutyl]- 2-(9-guanidinononaanamido)-2-hydroxyethaanamidetrihydrochloride.
Voorbeeld VII
25 Synthese van N-[4-(3-aminopropyl)aminobutyl]- 2-(4-guanidinobutaanamido)-2-methoxyethaanamide
Aan een oplossing van 45,5 mg (0,10 mmol) N-[4-(3-aminopropyl)aminobutyl]- 2-(4-guanidinobutaanamide)- 2-hydroxyethaanamidetrihydrochloride in 1 ml watervrije methanol, werd 0,1 ml 2N zoutzuur methanol toegevoegd. Het mengsel werd bij kamertemperatuur 17 uur lang geroerd. Het reactiemiddel werd geconcentreerd onder verminderde druk en opgelost in 3 ml water. De ontstane oplossing werd geleid door 30 een kolom (20 mm inwendige diameter) met een pakking van 150 ml CM-Sephadex(R) C-25 en gefractio-neerd door de gradiënt eluering met elk 1 I water en 1M waterige natriumchloride-oplossing (17 ml fractiegrootte). De fracties No. 67 tot en met 71 die overeen kwamen met de zoutconcentraties van 0,63-0,67M werden gecombineerd, tot droog ingedampt en drie maal met 5 ml methanol geëxtraheerd. De methanollaag werd geleid door een kolom (20 mm inwendige diameter) met een pakking van 150 ml 35 Sephadex(R) LH-20 en ontwikkeld met methanol (7 ml fractiegrootte). De fractie No. 10 tot en met 14 werden gecombineerd en tot droog ingedampt, ter verkrijging van 31,4 mg (67% opbrengst) van een wit poeder van N-[4-(3-aminopropyl)aminobutyl]- 2-(4-guanidinononaanamido)-2-metoxyethaanamide-trihydrochloride .
40 Voorbeeld VIII
Synthese van N-[4-(3-aminopropyl)aminobutyl]- 2~(6-guanidinobutaanamido)-2-methoxyethaanamide Aan een oplossing van 177 mg (0,37 mmol) N-[4-(3-aminopropyl)aminobutyl]- 2-(6-guanidinohexaanamide)- 2-hydroxyethaanamidetrihydrochloride in 3,6 ml watervrije methanol, werd 0,36 ml 2N zoutzuur methanol 45 toegevoegd. Het mengsel werd bij kamertemperatuur 17 uur lang geroerd. Het reactiemiddel werd onder verminderde druk geconcentreerd en het ontstane witte poeder werd gezuiverd op een manier die soortgelijk was aan die in voorbeeld VII onder gebruikmaking van CM-Sephadex<R) C-25 (Na-type) en Sephadex(R) LH-20 ter verkrijging van 110 mg (60% opbrengst) van een wit poeder van N-[4-(3-aminopropyl)aminobutyl]- 2-(6-guanidinohexaanamido)-2-metoxyethaanamidetrihydrochloride.
50
Voorbeeld IX
Synthese van N-[4-(3-aminopropyl)aminobutyl]- 2-(7-guanidinohexaanamido)-2-methoxyethaanamide Aan een oplossing van 920 mg (1,85 mmol) N-[4-(3-aminopropyl)aminobutyl]- 2-{7-guanidinohexaanamido)-55 2-hydroxyethaanamidetrihydrochloride in 20 ml watervrije methanol, werd 2 ml 2N zoutzuur methanol toegevoegd. Het mengsel werd 15 uur lang bij kamertemperatuur geroerd. Het reactiemengsel werd geconcentreerd onder verminderde druk en de ontstane witte poeder werd opgelost in 15 ml water. De 23 193107 waterige oplossing werd ingesteld op een pH van 6 met 1N waterige natriumhydroxideoplossing, daarna geleid door een kolom (25 mm inwendige diameter) met een pakking van 300 ml CM-Sephadex(R) C-25 (Na-type), en gefractioneerd door de gradiënt eluering met elk 2 I water en 1M waterige natriumchloride-oplossing (fractiegrootte 17 ml). De fracties No. 138 tot en met 152 die overeen kwamen met de 5 natriumchlorideconcentraties van 0,59-0,65M werden gecombineerd, tot droog ingedampt en twee maal met 10 ml methanol geëxtraheerd. De methanollaag werd geleid door een kolom (25 mm inwendige diameter) met een pakking van 300 ml Sephadex(R) LH-20, en ontwikkeld met methanol (fractiegrootte, 7 ml). De fracties No. 18 tot en met 32 werden gecombineerd en tot droog ingedampt, ter verkrijging van 607 mg (64% opbrengst) van een wit poeder van N-[4-(3-aminopropyl)aminobutyl]- 2-(7-guanidinoheptaanamido)-2-10 methoxyethaanamidetrihydrochloride.
Voorbeeld X
Synthese van N-[4-(3-aminopropyl)aminobutyl]- 2-(8-guanidinooctaanamido)-2-methoxyethaanamide 15 Aan een oplossing van 220 mg (0,43 mmol) N-[4-(3-aminopropyl)aminobutyl]- 2-(8-guanidinooctaanamido)- 2-hydroxyethaanamidetrihydrochloride in 4,4 ml watervrije methanol, werd 0,44 ml 2N zoutzuurmethanol toegevoegd. Het mengsel werd bij kamertemperatuur gedurende de nacht geroerd. Het reactiemengsel werd onder verminderde druk geconcentreerd en het ontstane witte poeder werd gezuiverd op een manier, die soortgelijk was aan die in voorbeeld Vil onder gebruikmaking van CM-Sephadex(R) C-25 (Na-type) en 20 Sephadex(R) LH-20 ter verkrijging van 195 mg (86% opbrengst) van een wit poeder van N-[4-(3-aminopropyl)aminobutyl]- 2-(8-guanidinooctaanamido)-2-methoxyethaanamidetrihydrochloride.
Voorbeeld XI
25 Synthese van N-[4-(3-aminopropyl)aminobutyl]- 2-(9-guanidinononaanamido)-2-methoxyethaanamide
Aan een oplossing van 160 mg (0,31 mmol) N-[4-(3-aminopropyl)aminobutylj- 2-(9-guanidinononaanamido)-2-hydroxyethaanamidetrihydrochloride in 3,2 mi watervrije methanol, werd 0,32 ml 2N zoutzuurmethanol toegevoegd. Het mengsel werd bij kamertemperatuur gedurende de nacht geroerd. Het reactiemengsel werd onder verminderde druk geconcentreerd en het ontstane witte poeder werd gezuiverd op een manier die 30 soortgelijk was aan die in voorbeeld Vil onder gebruikmaking van CM-Sephadex(R> C-25 (Na-type) en Sephadex(R) LH-20 ter verkrijging van 107 mg (65% opbrengst) van een wit poeder van N-[4-(3-aminopropyl)aminobutyl]- 2-(9-guanidinononaanamido)-2-methoxyethaanamidetrihydrochloride.
Voorbeeld XII 35
Synthese van N-[4-(3-aminopropyl)aminobutyl]- 2-(7-guanidinoheptaanamido)-2-ethoxyethaanamide Aan 100 mg (0,20 mmol) N-[4-(3-aminopropyl)aminobutyl]- 2-(7-guanidinoheptaanamido)-2-ethydroxyethaan-amide trihydrochloride, werd 10 ml watervrije ethanol en 1 ml watervrije ethanol verzadigd met gasvormig waterstofchloride toegevoegd. Het mengsel werd bij kamertemperatuur gedurende 24 uur lang geroerd. Het 40 reactiemengsel werd gefiltreerd ter verwijdering van de onoplosbare stoffen en het filtraat werd geconcentreerd onder verminderde druk. Het ontstane witte poeder werd gezuiverd op een manier die soortgelijk was aan die in voorbeeld VII onder gebruikmaking van CM-Sephadex(R) C-25 (Na-type) en Sephadex(R) LH-20 ter verkrijging van 71 mg (68% opbrengst) van een wit poeder van N-[4-(3-aminopropyl)aminobutyl]-2-(7-guanidinoheptaanamido)-2-ethoxyethaanamidetrihydrochloride.
45
Voorbeeld XIII
Synthese van N-[4-(3-aminopropyl)aminobutyt]- 7-(7-guanidinoheptaanamido)-2-butoxyethaanamide Aan 100 mg (0,2 mmol) N-[4-(3-aminopropyl)aminobutyl]-2-(7-guanidinoheptaanamido)-2-hydroxyethaan-50 amidetrihydrochloride, werd 10 ml n-butanol en 1 ml n-butanol verzadigd met gasvormig waterstofchloride toegevoegd. Het mengsel werd 2 dagen lang bij kamertemperatuur geroerd. Het reactiemengsel werd gefiltreerd ter verwijdering van de onoplosbare stoffen en het filtraat (n-butanol-oplossing) werd drie maal met 5 ml water geëxtraheerd. De waterige laag werd geneutraliseerd met Amberlite(R) IR-410 en geconcentreerd onder verminderde druk. Het residu werd gezuiverd op een manier die soortgelijk was aan die in 55 voorbeeld VII onder gebruikmaking van CM-Sephadex(R) C-25 (Na-type) en Sephadex(R) LH-20 ter verkrijging van 15 mg (13,5% opbrengst) van een wit poeder van N-[4-(3-aminopropyl)aminobutylj-2-(7-guanidinoheptaanamido)-2-butoxyethaanamidetrihydrochloride.
193107 24
Voorbeeld XIV
Synthese van N-[4-(3-aminopropyl)aminobutyl]- 2- (7-guanidinoheptaanamido)-2-(2-hydroxy) -ethoxyethaanamide 5 Aan een oplossing van 100 mg (0,20 mmol) N-]-(3-aminopropyl)aminobutyl]-2 -(7-guanidinoheptaanamide)-2-hydroxyethaanamidetrihydrochloride in 5 ml ethyleenglycol, werd 0,5 ml ethyleenglycol verzadigd met gasvormig waterstofchloride toegevoegd. Het mengsel werd gedurende de nacht bij kamertemperatuur geroerd. Na toevoeging van 25 ml water werd het reactiemengsel ingesteld tot een pH van 6 met 1N waterige natriumhydroxide-oplossing en gezuiverd op een manier die soortgelijk was aan die in voorbeeld 10 VII onder gebruikmaking van CM-Sephadex(R) C-25 (Na-type) en Sephadex<R) LH-20 ter verkrijging van 63 mg (58% opbrengst) van een wit poeder van N-[4-(3-aminopropyl)aminobutyl]-2-(7-guanidinoheptaanamido)-2-(2-hydroxy)ethoxyethaanamidetrihydrochloride.
Voorbeeld XV 15
Synthese van N-[4-(3-aminopropyl)aminobutyl]- 2-(7-guanidinoheptaanamido)-2-benzyloxyethaanamide Aan 100 mg (0,20 mmol) N-[4-(3-aminopropyl)aminobutylj- 2-(7-guanidinoheptaanamido)-2-hydroxyethaanamidetrihydrochloride, werd 10 ml benzylalcohol en 1 ml benzylalcohol verzadigd met gasvormig waterstofchloride toegevoegd. Het mengsel werd bij kamertemperatuur gedurende 18 uur lang 20 geroerd. Het reactiemengsel werd gefiltreerd ter verwijdering van de onoplosbare stoffen en de benzylalco-holiaag werd drie maal met 5 ml water geëxtraheerd. De waterige laag werd geneutraliseerd met Amberli-te(R) IR-410, tot droog ingedampt, en gezuiverd op een manier die soortgelijk was aan die in voorbeeld VII onder gebruikmaking van CM-Sephadex(R) C-25 (Na-type) en Sephadex(R) LH-20 ter verkrijging van 61 mg (52% opbrengst) van een wit poeder van N-[4-(3-aminopropyl)aminobutyl]-2-(7-guanidinoheptaanamido)-2-25 benzyloxyethaanamidetrihydrochloride.
Voorbeeld XVI
Synthese van N-[4-(3-aminopropyl)aminobutyl]- 2-(7-guanidino-2-hepteenamido)-2-hydroxyethaanamide 30 Een mengsel van 234,5 mg (1,06 mmol) 7-guanidino-2-hepteenamidehydrochloride, 372,3 mg (1,27 mmol), N-[4-(3-aminopropyl)aminobutyl]-2,2-dihydroxyethaanamidedihydrochloride, 140,4 mg (1,06 mmol) glutaar-zuur, en 0,2 ml water werd bij 60°C 24 uur lang verhit. Na voltooiing van de reactie werd het reactiemengsel gezuiverd op een manier die soortgelijk was aan die in voorbeeld I onder gebruikmaking van CM-Sephadex(R) C-25 (Na-type) en Sephadex(R) LH-20 ter verkrijging van 244,6 mg (46,5% opbrengst) van een 35 wit poeder van N-[4-(3-aminopropyl)aminobutyl]-2-(7-guanidino-2-hepteenamido)-2-hydroxyethaan-amidehydrochloride.
Voorbeeld XVII
40 Synthese van N-[4-(3-aminopropyl)aminobutyl]- 2-(8-guanidino-2-octeenamido)-2-hydroxyethaanamide Een mengsel van 202,4 mg (0,86 mmol) 8-guanidino-2-octeenamidehydrochloride, 302,4 mg (1,04 mmol), N-[4-(3-aminopropyl)aminobutyl]-2,2-dihydroxyethaanamidedihydrochloride, 113,9 mg (0,86 mmol) glutaar-zuur, en 0,2 ml water werd bij 60°C 24 uur lang verhit. Na voltooiing van de reactie werd het reactiemengsel gezuiverd op een manier die soortgelijk was aan die in voorbeeld I onder gebruikmaking van CM-45 Sephadex(R) C-25 (Na-type) en Sephadex(R) LH-20 ter verkrijging van 128,3 mg (29,2% opbrengst) N-[4-(3-aminopropyl)aminobutyl]-2-(8-guanidino-2-octeenamido)-2-hydroxyethaanamidehydrochloride.
Voorbeeld XVIII
50 Synthese van N-[4-(3-aminopropyl)aminobutyl]- 2-(9-guanidino-2-noneenamido)-2-hydroxyethaanamide Een mengsel van 206,2 mg (0,84 mmol) 9-guanidino-2-noneenamidehydrochloride, 291,0 mg (1,00 mmol), N-[4-(3-aminopropyl)aminobutyl]- 2,2-dihydroxyethaanamidedihydrochloride, 109,6 mg (0,84 mmol) glutaarzuur, en 0,2 ml water werd bij 60°C 24 uur lang verhit. Na voltooiing van de reactie werd het reactiemengsel gezuiverd op een manier die soortgelijk was aan die in voorbeeld I onder gebruikmaking van 55 CM-Sephadex(R) C-25 (Na-type) en Sephadex(R) LH-20 ter verkrijging van 135,0 mg (31,1% opbrengst) van een wit poeder van N-[4-(3-aminopropyl)aminobutyl]-2-(9-guanidino-2-noneenamido)-2-hydroxyethaan-amidehydrochloride.
25 193107
Voorbeeld XIX
Synthese van N-[4-(3-aminopropyl)aminobutyl]- 2- (7-guanidino-2-hepteenamido)-2-methoxyethaanamide Aan een oplossing van 50,3 mg (0,10 mmol) N-[4-(3-aminopropyl)aminobutyl]- 2-(7-guanidino-2-5 hepteenamido)-2-hydroxyethaanamidedihydrochloride, in 1 ml watervrij methanol, werd 0,1 ml 2N zoutzuur-methanol toegevoegd. Het mengsel werd gedurende de nacht bij kamertemperatuur geroerd en het reactiemengsel werd onder verminderde druk geconcentreerd. Het residu werd gezuiverd op een manier soortgelijk aan die in voorbeeld VII onder gebruikmaking van CM-Sephadex(R) C-25 (Na-type) en Sepha-dex(R) LH-20 ter verkrijging van 37,2 mg (72,4% opbrengst) N-[4-(3-aminopropyl)aminobutyl]-2-(7-guanidino-10 2-hepteenamido)-2-methoxyethaanamidehydrochloride.
Voorbeeld XX
Synthese van N-[4-(3-aminopropyt)aminobutyl]- 2-(8-guanidino-3-hydroxyoctaanamido)-2-15 hydroxyethaanamide
Een mengsel van 150 mg (0,59 mmol) 8-guanidino-3-hydroxyoctaanamidehydrochloride, 208 mg (0,71 mmol), N-[4-(3-aminopropyl)aminobutyl]- 2,2-dihydroxyethaanamidedihydrochloride, 78 mg (0,59 mmol) glutaarzuur, en 0,1 ml water werd bij 60°C 24 uur lang verhit. Na voltooiing van de reactie werd het reactiemengsel gezuiverd op een manier die soortgelijk was aan die in voorbeeld I onder gebruikmaking van 20 CM-Sephadex(R) C-25 (Na-type) en Sephadex(R) LH-20 ter verkrijging van 120,7 mg (38,6% opbrengst) van een wit poeder van N-[4-(3-aminopropyl)aminobutyl]- 2-(8-guanidino-3-hydroxyoctanamido)-2-hydroxyethaan-amidetrihydrochloride.
Voorbeeld XXI 25
Synthese van N-[4-(3-aminopropyl)aminobutyl}- 2-(9-guanidino-3-hydroxynonaanamido)-2-hydroxyethaanamide
Een mengsel van 325,8 mg (1,23 mmol) guanidino-3-hydroxynonaanamidehydrochloride, 428,1 mg (1,47 mmol), N-[4-(3-aminopropyl)aminobutylj- 2,2-dihydroxyethaanamidedihydrochloride, 161,4 mg (1,23 mmol) 30 glutaarzuur, en 0,3 ml water werd bij 60°C 24 uur lang verhit. Na voltooiing van de reactie werd het reactiemengsel gezuiverd op een manier die soortgelijk was aan die in voorbeeld I onder gebruikmaking van CM-Sephadex(R> C-25 (Na-type) en Sephadex(R) LH-20 ter verkrijging van 220,8 mg (33,4% opbrengst) van een wit poeder van N-[4-(3-aminopropyl)aminobutyl]- 2-(9-guanidino-3-hydroxynonanamido)-2-hydroxyethaanam id etri hydrochl oride.
35
Voorbeeld XXII
Synthese van 11-O-methylspergualln
Aan een oplossing van 1,8 g (3,51 mmol) (-)-spergualintrihydrochloride in 35 ml watervrije methanol, werd 40 3,5 ml 2N zoutzuur methanol toegevoegd. Het mengsel werd bij kamertemperatuur 15 uur lang geroerd. Het reactiemengsel werd ingedampt tot droog, daarna opgelost in 30 ml water, geleid door een kolom van CM-Spehadex(R) C-25 (Na-type 600 ml) en gefractioneerd door de gradiënteluering met elk 3 I water en 1M waterige natriumchlorideoplossing (fractiegrootte, 17 g). De fracties No. 208 tot en met No. 230 werden gecombineerd, tot droog ingedampt, en 3 maal met 10 ml methanol geëxtraheerd. De methanollaag werd 45 geleid door een kolom van Sephadex <R) LH-20 (300 ml) en geëlueerd met methanol teneinde ontzouting tot stand te brengen (fractiegrootte, 7 g). De fracties No. 19 tot en met 33 werden gecombineerd en ingedampt tot droog ter verkrijging van 1,528 g (82% opbrengst) van een wit poeder van 11 -O-methylspergualintri-hydrochloride.
Voor de afscheiding van 11-O-methylspergualintrihydrochloride in zijn epimerische componenten werd 50 gebruik gemaakt van HPLC op een kolom, 2 cm 0 x 25 cm, met een pakking van Nucleosil(R) 30 C18, een omgekeerde fase pakkingmateriaal van M. Nagel Co., onder de volgende omstandigheden Stroomsnelheid : 10 ml/min.
Druk : 30 kg/cm2
Oplosmiddel : acetonitril-/0,01 M natriumpentaansulfonaat + 0,01 M Na2HP04 (pH3)/ = 9:91 55 Belading : 6 mg
Detectie : UV 205 nm 193107 26
In HPLC verscheen de UV absorptiepiek voor (-)-11-O-methylspergualin (retentietijd, 48,3 min.) het eerst en die voor (+)-11-O-methylspergualin (retentietijd, 56,5 min.) volgde. De fractionering werd 12 maal herhaald. De fracties die overeenkwamen met elke piek werden verzameld en gezuiverd op een manier die soortgelijk was aan die in voorbeeld I onder gebruikmaking van CM-Sephadex(R) C-25 (Na type) en 5 Sephadex(R) LH-20 ter verkrijging van 32,9 mg van een wit poeder van ()-11-O-methylspergualintrihydro-chloride en 24,5 mg van een wit poeder van (+)-11-0-methylspergualintrihydrochloride.
Voorbeeld XXIII
10 Synthese van 11-O-ethylspergualin
Aan 484 mg (0,94 mmol) spergualindihydrochloride [(-)-spergualin: (+)-spergualin = 1:1[, werd 20 ml watervrij ethanol en 2 ml 2N zoutzuur ethanol toegevoegd. Het mengsel werd 2 dagen lang bij kamertemperatuur geroerd. Het reactiemengsel werd tot droog ingedampt, daarna opgelost in 10 ml water, ingesteld op een pH van 4 met 1N waterige natriumhydroxide-oplossing, en gezuiverd op in wezen dezelfde manier als 15 sin voorbeeld XXII onder gebruikmaking van CM-Sephadex<R) C-25 (Na-type) en Sephadex(R) H-20, zodat 355,6 mg (70% opbrengst) van een wit poeder van 11-O-ethyIspergualintrihydrochloride werd verkregen.
Voor de afscheiding van het 11-O-ethylspergualintrihydrochIoride in zijn epimerische componenten werd gebruik gemaakt van HPLC op in wezen dezelfde manier als in voorbeeld XXII, behalve dat het gebruikte oplosmiddel een mengsel van acetonitril-(0,10M natriumpentaansulfonaat + 0,01 M Na2HP04 (pH 3)[ 20 (10:5:89:5) was. Bij herhaalde fractionering, 6 maal in totaal, werd verkregen 11 mg van een wit poeder van (-)-11-O-ethylspergualintrihydrochloride en 14,5 mg van een wit poeder van (+)-11-O-ethylspergualintri-hydrochloride.
Voorbeeld XXIV 25
Synthese van 11-O-butylspergualin
Aan 493 mg (0,96 mmol) van (-)-spergualindihydrochloride werd 30 ml n-butanol en 3 ml n-butanol verzadigd met waterstofchloride toegevoegd. Het mengsel werd 2 dagen lang bij kamertemperatuur geroerd. Het in n-butanol oplosbare gedeelte van het reactiemengsel werd tot droog ingedampt, daarna opgelost in 30 10 ml water, ingesteld op een pH van 4 met 1N waterige natriumhydroxide-oplossing, en gezuiverd met CM-Sephadex<R) C-25 (Na-type) en Sephadex(R> H-20 op in wezen dezelfde manier als in voorbeeld XXII ter verkrijging van 114,7 mg (21% opbrengst) van een wit poeder van 11-O-butylspergualintrihydrochloride.
Voor de scheiding van het 11-O-butylspergualintrihydrochloride in zijn epimerische componenten werd gebruik gemaakt van HPLC op in wezen dezelfde manier als in voorbeeld XXII, behalve dat het gebruikte 35 oplosmiddel een mengsel van acetonitril-[0,10M natriumpentaansulfonaat + 0,01 M Na2HP04 (pH 3)[ (14:5:85:5) was. Bij herhaalde fractionering, 6 maal in totaal, werd 15 mg van een wit poeder van (-)-11-0-n-butylspergualintrihydrochloride en 16 mg van een wit poeder van (+)-11-O-n-ethylspergualintrihydro-chloride verkregen.
40 Voorbeeld XXV
Synthese van 11-0-(2-hydroxy)ethylspergualin
Aan een oplossing van 2,88 g (5,61 mmol) (-)-spergualintrihydrochloride in 100 ml ethyleenglycol, werd 10 ml ethyleenglycol verzadigd met waterstofchloride toegevoegd. Het mengsel werd 24 uur lang bij kamertem-45 peratuur geroerd. Na toevoeging van 200 ml water werd het reactiemengsel ingesteld op een pH van 4 met 1N waterige natriumhydroxide-oplossing, en gezuiverd met CM-Sephadex(R) C-25 (Na-type) en Sephadex<R) H-20 op dezelfde manier als in voorbeeld XXII ter verkrijging van 2,7 g (73% opbrengst) van een wit poeder van 11-0-(2-hydroxy)ethylspergualintrihydrochloride.
Voor de scheiding van het 11-0-2-hydroxy)-ethylspergualintrihydrochloride in zijn epimerische compo-50 nenten werd gebruik gemaakt van HPLC zoals in voorbeeld XXII, behalve dat het oplosmiddel en de belading als volgt waren:
Oplosmiddel: acetonitril-[0,01M natriumpentaansulfonaat + 0.01M Na2HP04 (pH 3)[ (7:93)
Belading: 20 mg
Bij herhaalde fractionering, 6 maal in totaal, werd verkregen 2,3 mg van een wit poeder van (-)-11-0-(2-55 hydroxy)ethylspergualintrihydrochloride en 2,5 mg van een wit poeder van (+)-11-0-(2-hydroxy)ethylspergualintrihydrochloride.
Voorbeeld XXVI
27 193107
Synthese van 11-O-benzylspergualin
Aan 2,36 g (4,60 mmol) (-)-spergualintrihydrochloride werden 90 ml benzylalcohol en 9 ml benzylalcohol 5 verzadigd met waterstofchloride, toegevoegd. Het mengsel werd gedurende de nacht bij kamertemperatuur geroerd. Het reactiemengsel werd geëxtraheerd met 350 ml water en de waterige laag werd ingesteld op een pH van 6,0 met 1N waterige natriumhydroxide-oplossing en tot droog geconcentreerd. Het residu werd opgelost in 20 mil M waterige natriumchloride-oplossing, geleid door een kolom van 500 ml Diaion<R) HP120 (Mitsubishi Chemical Co.) en achtereenvolgens geëlueerd met elk 1,5 I 0.6M zouthoudend water, 10 0,4M zouthoudend water en water. Het met water geëlueerde gedeelte werd tot droog ingedampt en ontzout met Sephadex(R) LH-20 zoals in voorbeeld I ter verkrijging van 1,92 g (69% opbrengst) van een wit poeder van 11 -O-benzylspergualintrihydrochloride.
Voor de scheiding van het 11-O-benzylspergualintrihydrochloride in zijn epimerische componenten wordt gebruik gemaakt van HPLC dat werd uitgevoerd op dezelfde manier als in voorbeeld XXII, behalve dat het 15 gebruikte oplosmiddel een mengsel was van acetonitril-[0,10M natriumpentaansulfonaat + 0,01 M Na2HP04 (pH 3)[ (16:84). Bij herhaalde fractionering, 9 maal in totaal, werd 21,2 g van een wit poeder van (-)-11-0-benzylspergualintrihydrochioride en 18,8 g van een wit poeder van (+)-11-O-benzylspergualintrihydro-chloride.
20 Voorbeeld XXVII
Synthese van (-)-11-O-methylspergualin (a) (-)-1 -N,4-bis(benzyloxycarbonyl)spergualin 25 Aan een oplossing van 2,3 g (4,48 mmol) (-)-spergualintrihydrochloride in een mengsel van 11 ml N,N-dimethylformamide en 11 ml water, werd, terwijl werd gekoeld in ijs, 1,25 ml (8,96 mmol) triethylamine toegevoegd, hetgeen werd gevolgd door toevoeging van een oplossing van 2,24 g (8,97 mmol) N-benzyloxycarbonyloxysuccimide in 11 ml Ν,Ν-dimethylformamide. Het mengsel werd bij 5eC 15 uur lang geroerd. Het reactiemengsel werd onder verminderde druk geconcentreerd, opgelost in 10 ml 0,5 waterige 30 natriumchloride-oplossing, daarna geleid door een kolom van Diaion(R) HP-20 in evenwicht met 0,5M waterige natriumchloride-oplossing, gewassen met 11 0,5M zouthoudend water, daarna met 1 I water, en geëlueerd met methanol (fractiegrootte, 15 g). De fracties No. 21 tot en met 30 werden gecombineerd en tot droog ingedampt ter verkrijging van 287 mg (2% opbrengst) van een wit poeder van (-)-N,4-bis(benzyloxycarbonyl)spergualinhydrochloride; [a]|1 - 11°C (C1, water). Proton NMR (indeuteromethanol), 35 b: 1,3 - 2,0 (CH2x6), 2,38 (CH2), 2,9-3,4 (NCH2x5), 4,0 (CH), 5,04 (CH2), 5,07 (CH^, 5,56 (CH), 7,30 (C6H5x2) (b) (-)-1-N,4-bis(benzyloxycarbonyl)-11-0-methyl-spergualin:
Aan een oplossing van 78 mg (0,484 mmol) van het bovengenoemde (-)-1 -N,4-bis(benzyloxycarbonyl)-40 spergualintrihydrochloride in 12 ml methyleenchloride werd, terwijl in ijs werd gekoeld, 2,44 ml (0,484 mmol) van een oplossing van 0,1 ml boriumtrifluoride-ethercomplex in 4 ml methyleenchloride toegevoegd. Aan het mengsel werd portiegewijs 9 ml (1 ml met een tijdsinterval van 30 min. tot 1 uur) van een oplossing van diazomethaan in methyleenchloride toegevoegd. [De diazomethaan-oplossing werd bereid door geleidelijk 10 g N-nitrosomethylureum toe te voegen aan een mengsel van 30 ml van een 40%’s kaliumhydroxide-45 oplossing en 100 ml methyleenchloride terwijl gekoeld werd bij 40°C in water. De organische laag werd afgescheiden en de waterige laag geëxtraheerd met 10 ml methyleenchloride. De organische lagen werden gecombineerd en 3 uur lang boven korrelig kaliumhydroxide bij 5°C gedroogd.[ Na 3,5 uur vanaf het begin van de reactie werd het roeren stopgezet. Na toevoeging van verscheidene druppels verdund azijnzuur werd het reactiemengsel geconcentreerd onder verminderde druk, daarna opgelost in 3 ml 50%’s waterige 50 methanol, geleid door een kolom van Diaion(R) HP120 (100 ml), gewassen met 300 ml 10%’s waterige methanol, en geëlueerd met methanol (fractiegrootte, 15 ml). De fractie No. 25 tot en met 28 werden gecombineerd en tot droog ingedampt ter verkrijging van 262,4 mg van een wit poeder van een mengsel van (-)-1 -N,4-bis(benzyloxycarbonyl)-11-0-methylspergualinhydrochloride en onomgezet (-)-1-N,4-bis(benzyloxycarbonyl)spergualinhydrochloride (terugwinning, 69,2 gew.%). De samenstelling van dit 55 mengsel werd bepaald door HPLC op een kolom van Nucleosil(R) 5C18 (4,0 x 150 mm), geëlueerd met een mengsel (1:1) van acetonitril en 0,01 M (NH4)2HP04 bij een stroomsnelheid van 0,8 ml/min. Gevonden werd dat de verhouding tussen (-)-1-N,4-bis(benzyloxycarbonyl)-11-0-methylspergualinhydrochloride (retentietijd, 193107 28 10,47 min.) en (-)-1-N,4-bis(benzyloxycarbonyl)spergualinhydrochloride (retentietijd, 7,74 min.) 47:50 bedroeg.
Het bovengenoemde mengsel (78,5 mg) werd geleid door een kolom van 30 ml Silicagel<R) 60 (Merck Co.) en geëlueerd met 10%’s methanol-chloroformmengsel. Het eluaat werd gezuiverd door HPLC en 5 geëlueerd onder dezelfde omstandigheden als boven beschreven zijn. De fracties, die een UV absorptie bij 220 nm bij een retentietijd van 10,47 min. vertoonden, werden opgevangen en ingedampt tot droog, zodat 28,6 mg werd verkregen van een wit poeder van (-)-1 -N,4-bis(benzyloxycarbonyl)-11-O-methyl-spergualinhydrochloride. [α]ο5-14,4° (C1, methanol). Proton NMR (indeuteromethanol), δ: 1,3 - 2,0 (CH2x6), 2,42 (CH2), 2,9-3,4 (NCH2x5), 3,37 (OHa), 4,0 (CH), 5,03 (CH2), 5,08 (CH2), 5,34 (CH), 7,29 (C6Hsx2).
10 (c) (-)-11-O-methylspergualin:
In een mengsel van 5 ml ethanol, 5 ml water en 0,36 ml 1N zoutzuur, werd 130 mg van het bovengenoemde mengsel (47:50) van (-)-1-N,4-bis(benzyloxycarbonyl)-11-0-spergualintrihydrochloride en (-)-1-N,4-bis(benzyloxycarbonyl)spergualintrihydrochloride opgelost. Na toevoeging van 50 ml 10%’s palladium 15 koolstof aan de oplossing werd het mengsel 4 uur lang bij kamertemperatuur onder waterstofstroom geroerd. De katalysator werd door filtratie verwijderd en het filtraat werd ingedampt tot droog. Het residu werd opgelost in 3 ml water, geleid door een kolom van 150 ml CM-Sephadex(R) C-25 (Na-type) en gefractioneerd door de gradiënt eluering met elk 900 ml water in 1M waterige natriumchloride-oplossing (fractiegrootte, 17g). De fracties No. 76 tot en met 81 werden gecombineerd en ontzout zoals in voorbeeld 20 XXII, onder gebruikmaking van Sephadex(R) LH-20 ter verkrijging van 25,4 mg (51% opbrengst) van een wit poeder van (-)-11-O-methyl-spergualintrihydrochlonde [a]o5 -27,1° (C1, water).
De fracties No. 83 tot en met 86 van het eluaat uit de CM-Sephadex(R) kolom werden op soortgelijke wijze ontzout ter terugwinning van 24,5 mg (52% terugwinning) van een wit poeder van (-)-spergualintrihydrochloride.
25
Voorbeeld XXVIII
Synthese van (-)-11-O-ethylspergualin
Op een manier soortgelijk aan die in voorbeeld XXVII (b) liet men een methyleenchloride-oplossing van 30 diazoethaan reageren met 352 mg (0,451 mmol) van het in voorbeeld XXVII (a) verkregen (-)-1-N,4- bis(benzyloxycarbonyl)spergualinhydrochloride ter verkrijging van 217,0 mg van een mengsel van (-)-1-N,4-bis(benzyloxycarbonyl)-ethylspergualinhydrochloride en (-)-1 -N,4-bis(benzyloxycarbonyl)spergualintri-hydrochloride. Het mengsel werd op in wezen dezelfde manier als in voorbeeld XXVII (c) behandeld ter verkrijging van 41,7 mg van een wit poeder van (-)-11-O-ethylspergualintrihydrochloride in een totale 35 opbrengst van 17,1%; [α]ο5 -24,8° (C1, water).
Voorbeeld XXIX
Synthese van (-)-1 -N[4-(3-aminopropyl)aminobuyt]-2-(7-guanidinohepteenamido)-2-methoxyethaanamide 40 (a) (-)-1 -N[4- (3-benzyloxycarbonylaminopropyl)-benzyloxycarbonylaminobutyl]-2-(7-guanidino-2-hept-amido)-2-methoxyethaanamide:
In 1,2 ml Ν,Ν-dimethylformamide werd opgelost 134,8 mg (0,187 mmol) van het in voorbeeld XXVII (b) verkregen (-)-1 -N,4-bis(benzyloxycarbonyl)-11-0-methyl-spergualintrihydrochloride. Aan de oplossing werd 45 toegevoegd 192,9 mg (0,935 mmol) dicyclohexylcarbodiimide en 5,6 mg koperchloride (CuC1). Het mengsel werd 3 uur lang bij 70°C verhit. Na afkoeling werd het neerslag door filtratie verwijderd en het filtraat werd onder verminderde druk geconcentreerd. Het residu werd in 5 ml 30%’s waterig methanol opgelost, ingesteld op een pH van 7, geleid door een kolom (80 ml) van Diaion(B) HP120, gewassen met 300 ml water, daarna met 300 ml 10%’s waterig methanol, en geëlueerd met methanol. Fracties die positief waren 50 ten opzichte van de Sakaguchi-reactie werden opgevangen en geconcentreerd onder verminderde druk ter verkrijging van 114 mg ruw (-)-1-N[4-(3-benzyloxycarbonylaminopropyl)-benzyloxycarbonylaminobutyl]-2-(7-guanidino-2-hepteenamido)-2-methoxyethaanamidehydrochloride dat een signaal vertoonde van een alkeen-proton bij δ 6,02 in proton NMR spectrum (in deuteromehanol).
55 (b) (-)- 1-N[4-(3-aminopropyl)aminobutyl]-2-(7-guanidinohepteenamido)-2-methoxyethaanamide:
In een mengsel van 5 ml methanol en 5 ml water werd 114 mg van het hierboven in (a) verkregen ruwe (-)-1-N[4-(3-benzyloxycarbonylaminopropyl)-benzyloxycarbonylaminobutyI]-2-(7-guanidino-2-

Claims (4)

29 193107 hepteenamido)-2-methoxyethaanamidehydrochloride opgelost. Aan de ontstane oplossing werden 0,32 ml 1N zoutzuur en 50 mg 10%’s palladium-koolstof toegevoegd. Het mengsel werd 1,5 uur lang bij kamertemperatuur onder een waterstofstroom geroerd. De katalysator werd door filtratie verwijderd en het filtraat werd onder verminderde druk geconcentreerd. Het residu werd geleid door een kolom van 100 ml CM-5 Sephadex(R> C-25 (Na-type) en gefractioneerd door de gradiënt eluering met elk 500 ml water en 1M waterige natriumchloride-oplossing (fractiegrootte, 10 g). De fracties No. 69 tot 74 werden gecombineerd, onder verminderde druk geconcentreerd, en drie maal met 5 ml methanol geëxtraheerd. De methanollaag werd geleid door een kolom (150 ml) van Sephadex (R) LH-20 en geëlueerd met methanol teneinde ontzouting tot stand te brengen (fractiegrootte, 5 g). De fracties No. 16 tot en met 121 werden gecombi-10 neerd en tot droog ingedampt ter verkrijging van 17,4 mg van een wit poeder van (-)-1-N[4-(3- aminopropyl)aminobutyl]-2-(7-guanidinohepteenamido)-2-methoxyethaanamidetrihydrochloride; totaal-opbrengst 16,7%; [a]p5 -30,4° (C1, water), 15 Conclusies
1. N[4-(3-aminopropyl)aminobutyl]-2-(io-guanidinovetzuuramido)- 2-gesubstitueerd ethaanamiden met carcinostatische werkzaamheid en met de algemene formule van het formuleblad, waarin Y een groep met de formule 1g, 1h of 1j van het formuleblad voorstelt, R een waterstofatoom, een alkylgroep met 1 tot en 20 met 4 koolstofatomen, die een hydroxylgroep als substituent kan bevatten, of een benzylgroep voorstelt, en n een geheel getal is van 1 tot en met 8, met dien verstande dat, wanneer Y de groep met de formule 1j van het formuleblad voorstelt en n gelijk aan 4 is, R de groepen anders dan een waterstofatoom voorstelt; of een zout daarvan.
2. Verbinding of een zout daarvan volgens conclusie 1, met het kenmerk, dat R een waterstofatoom of 25 methylgroep voorstelt en n gelijk aan 4 of 6 is.
3. Verbinding volgens conclusie 1, met het kenmerk dat deze bestaat uit N[4-(3-aminopropyl)aminobutyl]-2-(7-guanidino-heptaanamido)-2- hydroxyethaanamide (n
= 4, Y = -CH2CH2-, R = H) of een zout daarvan. Hierbij 6 bladen tekening
NL8203874A 1981-10-08 1982-10-06 N-[4-(3-aminopropyl)aminobutyl]-2-(omega-guanidinovetzuuramido -2-gesubstitueerde ethaanamide, zout daarvan en werkwijze ter bereiding daarvan. NL193107C (nl)

Applications Claiming Priority (2)

Application Number Priority Date Filing Date Title
JP15950381 1981-10-08
JP56159503A JPS5862152A (ja) 1981-10-08 1981-10-08 Ｎ−〔４−（３−アミノプロピル）アミノブチル〕−２−（ω−グアニジノ脂肪酸アミド）−２−ヒドロキシエタンアミドおよびその誘導体ならびにその製造法

Publications (3)

Publication Number Publication Date
NL8203874A NL8203874A (nl) 1983-05-02
NL193107B NL193107B (nl) 1998-07-01
NL193107C true NL193107C (nl) 1998-11-03

Family

ID=15695187

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
NL8203874A NL193107C (nl) 1981-10-08 1982-10-06 N-[4-(3-aminopropyl)aminobutyl]-2-(omega-guanidinovetzuuramido -2-gesubstitueerde ethaanamide, zout daarvan en werkwijze ter bereiding daarvan.

Country Status (19)

Country Link
US (3) US4518532A (nl)
JP (1) JPS5862152A (nl)
KR (1) KR870000656B1 (nl)
AT (1) AT393680B (nl)
AU (1) AU554489B2 (nl)
BE (1) BE894651A (nl)
CA (1) CA1187513A (nl)
CH (1) CH653015A5 (nl)
CS (1) CS268654B2 (nl)
DE (1) DE3236725A1 (nl)
DK (1) DK166080C (nl)
ES (2) ES516258A0 (nl)
FR (1) FR2514350B1 (nl)
GB (1) GB2111480B (nl)
HU (1) HU187417B (nl)
IT (1) IT1189373B (nl)
NL (1) NL193107C (nl)
SE (1) SE452006B (nl)
YU (1) YU44678B (nl)

Families Citing this family (29)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
JPS5862152A (ja) * 1981-10-08 1983-04-13 Microbial Chem Res Found Ｎ−〔４−（３−アミノプロピル）アミノブチル〕−２−（ω−グアニジノ脂肪酸アミド）−２−ヒドロキシエタンアミドおよびその誘導体ならびにその製造法
JPS60181056A (ja) * 1984-02-29 1985-09-14 Takara Shuzo Co Ltd Ν−〔４−（３−アミノプロピル）アミノブチル〕−２，２−ジヒドロキシエタンアミドの製造法
JPS60185758A (ja) * 1984-03-02 1985-09-21 Microbial Chem Res Found フエニレン基を有するスパガリン関連化合物およびその製造法
JPS61129119A (ja) * 1984-11-13 1986-06-17 Microbial Chem Res Found 新規免疫抑制剤
JPS61165322A (ja) * 1985-01-14 1986-07-26 Microbial Chem Res Found スパガリン類の注射用凍結乾燥製剤
JPH0742268B2 (ja) * 1985-08-27 1995-05-10 財団法人微生物化学研究会 フエニレン基を有するスパガリン類縁化合物及びその製造法
EP0241797B1 (en) * 1986-04-04 1991-06-12 Microbial Chemistry Research Foundation Novel spergualin-related compounds and process for producing the same
JP2605762B2 (ja) * 1986-12-10 1997-04-30 武田薬品工業株式会社 δ−ハイドロキシ−β−リジン誘導体およびその製造法
US5061787A (en) * 1988-06-24 1991-10-29 Nippon Kayaku Kabushiki Kaisha Novel spergualin-related compounds and compositions
JPH0776204B2 (ja) * 1988-07-01 1995-08-16 寳酒造株式会社 スパガリン類の精製法
US4990536A (en) * 1989-04-03 1991-02-05 Nippon Kayaku Kabushiki Kaisha Immunopotentiator and spergualin-related compound therefor
US5196453A (en) * 1989-05-29 1993-03-23 Takara Shuzo Co., Ltd. Crystalline deoxyspergualin, process for its preparation and suppository containing the same
RU2171811C2 (ru) * 1989-05-29 2001-08-10 Такара Сузо Ко., Лтд., (Jp), Ниппон Каяку Кабусики Кайся КРИСТАЛЛИЧЕСКИЙ ТРИГИДРОХЛОРИД ДЕОКСИСПЕРГУАЛИНА В β-ФОРМЕ, ОБЛАДАЮЩИЙ ПРОТИВООПУХОЛЕВОЙ АКТИВНОСТЬЮ И СПОСОБ ЕГО ПОЛУЧЕНИЯ
YU48230B (sh) * 1989-05-29 1997-08-22 Takara Shuzo Co.Ltd. Kristalni deoksispergvalin i postupak za njegovo pripremanje
US5162581A (en) * 1989-05-29 1992-11-10 Takaru Shuzo Co., Ltd. Crystalline deoxyspergualin, process for its preparation and suppository containing the same
DE69104291T2 (de) * 1990-07-20 1995-05-18 Nippon Kayaku Kk Spergulinähnliche Verbindungen und ihre Verwendung.
WO1994004140A1 (fr) * 1992-08-19 1994-03-03 Nippon Kayaku Kabushiki Kaisha Medicament anti-protozoose
CA2183917A1 (en) * 1995-09-26 1997-03-27 Xuebao Wang Preparation of optically active (s)-(-) and (r)-(+)- deoxyspergualin and novel intermediates thereof
CN1203846C (zh) 1998-03-19 2005-06-01 布里斯托尔-迈尔斯斯奎布公司 高溶解性药物的双相控释递送系统和方法
US20020142000A1 (en) * 1999-01-15 2002-10-03 Digan Mary Ellen Anti-CD3 immunotoxins and therapeutic uses therefor
US6656917B1 (en) 1999-06-30 2003-12-02 Marker Gene Technologies, Inc. Compositions and methods for targeted enzymatic release of cell regulatory compounds
US8716558B2 (en) 1999-06-30 2014-05-06 Marker Gene Technologies, Inc. Method of altering glycosylation of proteins in response to nojirimycin glucuronide in a plant cell expressing glucuronidase
EP1516597A4 (en) * 2002-06-27 2010-11-10 Microport Medical Shanghai Co MEDICINES ELUTIONSSTENT
US7635773B2 (en) 2008-04-28 2009-12-22 Cydex Pharmaceuticals, Inc. Sulfoalkyl ether cyclodextrin compositions
CN107080846A (zh) 2010-07-09 2017-08-22 詹姆斯.特林卡.格林 用于包括瑞格列净的短半衰期药物的组合立即/延迟释放递送系统
US9751957B2 (en) 2012-02-15 2017-09-05 Cydex Pharmaceuticals, Inc. Manufacturing process for cyclodextrin derivatives
HK1211311A1 (en) 2012-02-28 2016-05-20 锡德克斯药物公司 Alkylated cyclodextrin compositions and processes for preparing and using the same
MX360192B (es) 2012-10-22 2018-10-24 Cydex Pharmaceuticals Inc Composiciones de ciclodextrinas alquiladas y procesos para preparar y usar las mismas.
DK3183295T3 (da) 2014-08-22 2023-08-21 Cydex Pharmaceuticals Inc Fraktioneret alkyleret cyclodextrinsammensætning og fremgangsmåder til fremstilling og anvendelse af samme

Family Cites Families (7)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US3799988A (en) * 1969-04-02 1974-03-26 Taiho Pharmaceutical Co Ltd {107 -guanidino acid diamide derivatives and manufacturing the same
JPS5748957A (en) * 1980-09-08 1982-03-20 Microbial Chem Res Found Novel antibiotic bmg 162-af2, its preparation and carcinostatic agent comprising it as active ingredient
JPS57192347A (en) * 1981-05-18 1982-11-26 Microbial Chem Res Found N-(4-(3-aminopropyl)aminobutyl)-2,2-dihydroxyethanamide and its synthesis
JPS57185254A (en) * 1981-05-11 1982-11-15 Microbial Chem Res Found Novel carcinostatic substances and their preparation
JPS5862152A (ja) * 1981-10-08 1983-04-13 Microbial Chem Res Found Ｎ−〔４−（３−アミノプロピル）アミノブチル〕−２−（ω−グアニジノ脂肪酸アミド）−２−ヒドロキシエタンアミドおよびその誘導体ならびにその製造法
JPS5942356A (ja) * 1982-09-02 1984-03-08 Microbial Chem Res Found スパガリン関連化合物およびその製造法
US4525299A (en) * 1983-05-10 1985-06-25 Zaidan Hojin Biseibutsu Kagaku Kenkyu Kai (-)-15-Deoxyspergualin, process for the preparation thereof, and intermediate of the same

Also Published As

Publication number Publication date
ES526501A0 (es) 1985-04-16
GB2111480B (en) 1985-03-13
US4518532A (en) 1985-05-21
ES8402558A1 (es) 1984-02-01
CA1187513A (en) 1985-05-21
SE452006B (sv) 1987-11-09
NL193107B (nl) 1998-07-01
AU554489B2 (en) 1986-08-21
AT393680B (de) 1991-11-25
DE3236725C2 (nl) 1991-01-24
NL8203874A (nl) 1983-05-02
DK166080B (da) 1993-03-08
DK445182A (da) 1983-04-09
ATA369682A (de) 1991-05-15
KR870000656B1 (ko) 1987-04-04
AU8912182A (en) 1983-04-14
KR840001952A (ko) 1984-06-07
HU187417B (en) 1986-01-28
GB2111480A (en) 1983-07-06
CS717982A2 (en) 1989-08-14
CH653015A5 (de) 1985-12-13
DE3236725A1 (de) 1983-04-28
ES516258A0 (es) 1984-02-01
US4983328A (en) 1991-01-08
IT1189373B (it) 1988-02-04
ES8504690A1 (es) 1985-04-16
JPS6123183B2 (nl) 1986-06-04
CS268654B2 (en) 1990-04-11
BE894651A (fr) 1983-01-31
YU44678B (en) 1990-12-31
FR2514350B1 (fr) 1985-10-25
SE8205698D0 (sv) 1982-10-06
JPS5862152A (ja) 1983-04-13
US4658058A (en) 1987-04-14
SE8205698L (sv) 1983-04-09
IT8249228A0 (it) 1982-10-07
DK166080C (da) 1993-08-02
YU227682A (en) 1985-06-30
FR2514350A1 (fr) 1983-04-15

Similar Documents

Publication Publication Date Title
NL193107C (nl) N-[4-(3-aminopropyl)aminobutyl]-2-(omega-guanidinovetzuuramido -2-gesubstitueerde ethaanamide, zout daarvan en werkwijze ter bereiding daarvan.
Deutsch et al. Synthesis of congeners and prodrugs. 3. Water-soluble prodrugs of taxol with potent antitumor activity
Husain et al. 2-Arylidene-4-(4-phenoxy-phenyl) but-3-en-4-olides: synthesis, reactions and biological activity
AU634125B2 (en) (diethylamino-n-oxide) ethylamino-dihydroxyanthracene-9, 10-dione derivatives
HUP0000667A2 (en) Antithrombotic organic nitrates
CA1199641A (en) Spergualin-related compounds and process for production thereof
DE69706690T2 (de) Acryloyl-substituierte distamycin-derivate, verfahren zu ihrer herstellung und ihre verwendung als antitumor- und antivirale mittel
US4102948A (en) ω-Aminocarboxylic acid amide phosphates
CH646441A5 (de) Nucleosidderivate, ihre herstellung und diese enthaltende pharmazeutische mittel.
US4140788A (en) N-Substituted imidazolecarboxamide derivatives
US5545654A (en) Pleuromutilin derivatives
FR2505330A1 (fr) Nouvelle substance carcinostatique a base d&#39;un derive de n-(4-(3-aminopropyl) aminobutyl)-2-((s)-7-guanidino-3-hydroxyhaptanamido)-2-hydroxyethanamide et son procede de preparation
RU2030394C1 (ru) 4-броманилид n -аллил-n-(адамантоил - 1`)-антраниловой кислоты, проявляющий противовоспалительную и анальгетическую активность
US4892939A (en) Oligopeptidyl-5-fluorouridine compounds and process for preparing the same
DE69624236T2 (de) Ausgewählte lösliche ester von indolcarbazolen die hydroxyl enthalten
NL8803092A (nl) Tromethaminezout van 1-methyl-beta-oxo-alfa-(fenylcarbamoyl)-2-pyrroolpropionitril.
US5750547A (en) Certain carbanate anti-cancer agents
US5658952A (en) 1-[4-(4&#39;-sulfanilyl)phenyl]urea and derivatives for the treatment of Leishmaniasis
FR2566410A1 (fr) Nouveaux derives de l&#39;acide diaminopimelique, leur procede de preparation et leur application en therapeutique
JP2585079B2 (ja) 新規ジペプチド化合物
Gireesha et al. Synthesis characterization and pharmacological activity of novel thiazolidin–4 one analogues
US4073807A (en) Propionamide antitumor agents
EP0212606B1 (en) Spergualin-related nitrile compounds containing a phenylene group and a process for producing the same
US5849797A (en) D-β-lysylmethanediamine derivatives and preparation thereof
US2571852A (en) Substituted amino analogs of pantothenic acid and process

Legal Events

Date Code Title Description
BT A notification was added to the application dossier and made available to the public
A85 Still pending on 85-01-01
BA A request for search or an international-type search has been filed
BB A search report has been drawn up
BC A request for examination has been filed
V4 Discontinued because of reaching the maximum lifetime of a patent

Free format text: 20021006