MXPA06009794A

MXPA06009794A - Composicion farmaceutica.

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Publication number: MXPA06009794A
Application number: MXPA06009794A
Authority: MX
Inventors: Karl-Hermann Schlingensiepen; Reimar Schlingensiepen; Piotr Jachimczak; Gerhard Stauder; Astrid Bischof; Michael Hafner; Tamara Egger
Original assignee: Antisense Pharma Gmbh
Priority date: 2004-02-27
Filing date: 2005-02-28
Publication date: 2007-03-15
Also published as: JP5650367B2; AU2005218759A1; CA2558667A1; WO2005084712A2; WO2005084712A3; AU2009222442A1; AU2009222442B2; EP1722823A2; AU2005218759B2; IL177480A0; JP2007523943A; US20070155685A1

Abstract

La presente invencion se relaciona con composiciones farmaceuticas para inhibir la metastasis y para el tratamiento de distintos tipos de cancer tales como carcinoma de vejiga, cancer de colon, cancer de endometrio, carcinoma hepatocelular, leucemia, linfoma, melanoma, cancer de pulmon de celulas no pequenas (NSCLC), cancer de ovario, cancer de pancreas, cancer de prostata, cancer de tejidos blandos, cancer renal, osteosarcoma, mesotelioma, mieloma multiple, carcinoma de vejiga y cancer esofagico, asi como el uso de estas composiciones farmaceuticas para el tratamiento de dichas metastasis y de distintos tipos de cancer. Otro aspecto de esta invencion comprende nuevos oligonucleotidos antisentido que inhiben la formacion de interleuquina 10 humana y la sintesis de la misma. Un aspecto adicional de esta invencion es el uso de oligonucleotidos antisentido IL-10 de utilidad en la preparacion de composiciones farmaceuticas y para el tratamiento de cancer y metastasis.

Description

COMPOSICIÓN FARMACÉUTICA Campo de la Invención Esta invención se relaciona con medicamentos eficaces en terapias contra el cáncer. La formación del cáncer se combina por un lado con el crecimiento indeseado de tejido y por el otro con la formación de metástasis.

Antecedentes de la Invención La investigación en este campo ha revelado numerosos mecanismos, pero aún no hay una terapia sin efectos secundarios severos para inhibir la metástasis o para inhibir el avance del tumor en los tumores sólidos, respectivamente, tal como cáncer de próstata, carcinoma de vejiga, cáncer de colon, cáncer de endometrio, carcinoma hepatocelular, melanoma, leucemia, linfoma, cáncer de pulmón de células no pequeñas (NSCLC) o cáncer de ovario. Otros tipos de cáncer en este campo son mesotelioma, mieloma múltiple, osteosarcoma, cáncer renal, cáncer de esófago o cáncer de tejidos blandos.

Se ha descrito que el factor de crecimiento transformante beta (TGF-beta) derivado de tumores cumple un rol esencial en el avance de formas malignas por inducción de metástasis, angiogénesis y proliferación de células tumorales. Además, parece cumplir una función central en el mecanismo de escape del sistema inmune en células tumorales.

Pero en la literatura, el rol del TGF beta está ampliamente discutido. Por un lado hay algunos experimentos que indican que el TGF-beta inhibe el crecimiento tumoral, por otro lado hay otros experimentos que señalan que el TGF-beta induce la proliferación celular, lo que vuelve a su rol en la terapia tumoral un tanto ambivalente.

Un punto adicional es que el TGF-beta comprende muchas subclases diferentes, TGF-beta 1, TGF-beta 2 y TGF-beta 3, cuyos roles específicos en el avance tumoral son muy discutidos, a menudo se resumen como TGF-beta y por ende a menudo se confunden. El rol específico de cada subclase de TGF-beta, a saber TGF-beta 1, TGF-beta 2 y TGF-beta 3, no ha sido investigado suficientemente hasta el momento.

En las publicaciones EP 1008 649 y EP 0695354 se describe que se pueden usar ambos oligonucleótidos antisentido, TGF-beta 1 y TGF-beta 2, para elaborar una composición farmacéutica destinada al tratamiento de tumores mamarios, carcinomas esofágicos y gástricos y carcinogénesis de la piel. Visto que los estudios clínicos parecieran mostrar que en el glioma el TGF-beta cumpliría una función clave y por ello los oligonucleótidos antisentido TGF-beta 2 constituyen los blancos preferidos en el tratamiento de, por ejemplo, cáncer de glioma y de mama. La situación es completamente diferente en otros tumores.

Por ejemplo, en el cáncer de próstata (Wikstrom, P., Scand J Urol Nephrol 34 S. 85-94), así como en algunos otros tipos de cáncer, hay indicios que sugieren que los niveles de TGF-beta están incrementados, pero no queda claro si este sistema puede ser manipulado con fines terapéuticos.

Se sabe que la interleuquina 10 (IL-10) cumple una función central en la regulación de la respuesta inmune. Dado que se demostró que algunos oligonucleótidos antisentido de interleuquina 10 pueden mejorar la respuesta inmune mediada por células, era importante encontrar inhibidores potentes de IL-10 en humanos para modular la respuesta inmune de una manera que permitiera compensar los mecanismos de escape de las células tumorales, de inhibir el crecimiento tumoral y de reducir la formación de metástasis.

Por ello, un objeto de esta invención comprende hallar productos terapéuticos apropiados para el tratamiento de tumores que inhiban una proliferación celular indeseada en el crecimiento tumoral y/o para inhibir la formación de metástasis.

Un objeto de esta Invención comprende hallar productos terapéuticos que inhiban la formación de metástasis.

Los tumores, tales como carcinoma de vejiga, cáncer de colon, cáncer de endometrio, carcinoma hepatocelular, leucemia, linfoma, melanoma, cáncer de pulmón de células no pequeñas (NSCLC), cáncer de ovario, cáncer de páncreas y cáncer de próstata, tienen un pronóstico pobre y hasta el momento no se ha encontrado una terapia satisfactoria para los mismos. Este también es el caso de tumores tales como mesotelioma, mieloma múltiple, osteosarcomna, cáncer renal, cáncer de esófago o cáncer de tejidos blandos. Por ello, un objeto de esta invención comprendía hallar nuevos productos terapéuticos que tuvieran la propiedad de inhibir específicamente estos tumores y el uso de estos productos terapéuticos en el tratamiento del cáncer respectivo.

Otro objeto de esta invención comprende hallar nuevos Inhibidores de interleuquina 10 (IL-10) para modular el sistema inmune y métodos apropiados para la síntesis de los mismos, así como el uso de tales inhibidores en la preparación de composiciones farmacéuticas preferidas para terapias de cáncer e inmunomodulación.

El mecanismo de los oligonucleótidos antisentido parece funcionar a través de efectos inmunomoduladores, así como efectos directos, que podrían comprobarse en estudios experimentales. Esto supera la inhibición del estado de la técnica de TGF-beta usando, por ejemplo, anticuerpos, dado que los autores pudieron demostrar que la migración celular es inhibida más eficazmente con los ollgonucleótldos antlsentldo TGF-beta de lo que era posible con los anticuerpos TGF-beta.

Las composiciones farmacéuticas de esta invención tienen menos efectos secundarios, son más eficaces, tienen mayor biodisponibilidad, presentan una mayor seguridad y/o mayor estabilidad química.

Los autores descubrieron sorpresivamente, que los oligonucleótidos antisentido que inhiben la formación de TGF-beta 1, TGF-beta 2, TGF-beta 3, moléculas de adhesión celular (CAM), integrinas, selectlnas, metaloproteasas (MMP), sus inhibidores tisulares (TIMP) y/u oligonucleótidos antisentido específicos de la interleuquina 10, inhiben la formación de metástasis en líneas de células tumorales y en tumores.

Los autores encontraron además que los oligonucleótidos antisentido de TGF-beta 1 , TGF- beta 3 e interleuquina 10 inhiben la proliferación tumoral de tumores sólidos tales como carcinoma de vejiga, cáncer de colon, cáncer de endometrio, carcinoma hepatocelular, melanoma, cáncer de pulmón de células no pequeñas (NSCLC), cáncer de ovario, cáncer de páncreas y cáncer de próstata, así como de enfermedades mieloproliferativas malignas tales como leucemia y linfoma. Otras indicaciones para los ollgonucleótidos antisentido TGF-beta 1, TGF-beta 3 e interleuquina 10 comprenden cáncer renal, osteosarcoma, mesotelioma, mieloma múltiple, cáncer de esófago y/o cáncer de tejidos blandos.

El oligonucleótido antisentido de TGF-beta 2 inhibe la proliferación tumoral como se describió antes para el oligonucleótidos antisentido de TGF-beta 1, TGF-beta 3 y/o interleuquina.

Otro aspecto de esta invención comprende nuevos oligonucleótidos antisentido superiores que inhiben la formación de ¡nterleuquina 10 (IL-10) y de esta manera modulan la respuesta inmune.

Aún otro aspecto de esta invención es la producción de oligonucleótídos antisentido IL-10.

Un aspecto adicional de esta invención es el uso de un oligonucleótidos antisentido de interleuquina 10 para la preparación de una composición farmacéutica. Los oligonucleótidos antisentido de interleuquina 10 también se usan para la preparación de composiciones farmacéuticas destinadas al tratamiento de metástasis y/o crecimiento tumoral y se usan en el tratamiento de estas enfermedades.

Breve descripción de las figuras Figura 1: En la Figura 1 se muestra la inhibición de la línea celular PC-3 de cáncer de próstata. Los dos cuadrados superiores indican la migración del grupo control incubado solamente con llpofectina. Los dos cuadrados inferiores muestran claramente la migración reducida de las células Incubadas con lipofectlna y el ollgonucleótldo antisentido identificado en el listado de secuencias con la SEQ ID N°: 14. Los dos cuadrados de la izquierda muestran las condiciones iniciales. Los dos cuadrados de la derecha muestran la migración después de 24 horas, que claramente había sido inhibida. Esto indica una reducción en la formación de metástasis.

Figura 2: El PTO de la SEQ ID N°: 14 Inhibe la secreción de TGF-beta 1 por las células HCT-116 CRC según se describe en el ejemplo 8. La concentración de TGF-beta 1 en el sobrenadante de las células no tratadas (barra blanca) se define como el 100%. La concentración de TGF-beta 1 en los sobrenadantes de células tratadas con llpofectina (barra cuadriculada) y de células tratadas con el PTO de la SEQ ID N°: 14/lipofectina (barra con rayas diagonales) se expresa como un % del control no tratado. Se indica la media y DE de tres experimentos independientes.

Figura 3: El PTO de la SEQ ID N°: 14 inhibe la proliferación de células HCT-116 CRC según se describe en el ejemplo 8. Los datos de un ensayo de proliferación basado en tetrazolio (ensayo EZ4U) de células no tratadas (barra blanca) se establecieron como el 100%. Los datos de las células tratadas con lipofectina (barra cuadriculada) y de células tratadas con el PTO de la SEQ ID N°: 14/lipofectina (barra con rayas diagonales) se expresan como un % del control no tratado. Se indica la media y DE de dos experimentos independientes.

Figura 4: El PTO de la SEQ ID N°: 14 inhibe la migración de esferoides HCT-116 CRC según se describe en el ejemplo 8. Las áreas de esferoides no tratados (círculos) a las 0, 24, 48 hs se expresan en µm2. Las áreas de esferoides tratados con lipofectina se muestran con triángulos. Las áreas de esferoides tratados con el PTO de la SEQ ID N°: 14/lipofectina se muestran con cuadrados negros. Se indican las medias ± DE de al menos duplicados.

Figura 5: El PTO de la SEQ ID N°: 14 aumenta la cltotoxicidad mediada por células de PBMC cultivadas en el sobrenadante de células HCT-116 CRC según se describe en el ejemplo 18. La citotoxicidad mediada por células para las células blanco K562 de PBMC cultivadas en sobrenadantes de células HCT-116 no tratadas (barra blanca) se determina con el ensayo CARE-LASS a las relaciones de célula efectora:blanco (E:T) Indicadas. La citotoxicidad mediada por células para las células blanco K562 de PBMC cultivadas en sobrenadantes de células HCT-116 tratadas con lipofectina se muestra en la barra cuadriculada y la citotoxicidad mediada por células para las células blanco K562 de PBMC cultivadas en sobrenadantes de células HCT-116 tratadas con PTO de la SEQ ID N°: 14/llpofectlna se muestra en la barra con rayas diagonales, respectivamente. Se indica la mediana, máxima y mínima de cuadriplicados.

Figura 6: El PTO de la SEQ ID N°: 14 inhibe la secreción de TGF-beta 1 por células Hep-G2 HCC según se describe en el ejemplo 9. La concentración de TGF-beta 1 en el sobrenadante de células no tratadas (barra blanca) se expresa en pg/ml. La concentración de TGF-beta 1 en sobrenadantes de células tratadas con lipofectina se muestra en la barra cuadriculada y la concentración de TGF-beta 1 en sobrenadantes de células tratadas con el PTO de la SEQ ID N°: 14/lipofectina se muestra en la barra con rayas diagonales, respectivamente. Se indica la media y DE de triplicados.

Figura 7: El PTO de la SEQ ID N°: 14 inhibe la proliferación de células Hep-G2 HCC según se describe en el ejemplo 9. El número de células no tratadas determinado por recuento celular electrónico se muestra en la barra blanca. El número de células tratadas con lipofectina se muestra en la barra cuadriculada y el número de células tratadas con PTO de la SEQ ID N°: DE de triplicados.

Figura 8: El PTO de la SEQ ID N°: 14 inhibe la secreción de TGF-beta 1 de células de melanoma MES 100a según se describe en el ejemplo 10. La concentración de TGF-beta 1 en el sobrenadante de células no tratadas (barra blanca) se expresa en pg/ml. La concentración de TGF- beta 1 en sobrenadantes de células tratadas con PTO de la SEQ ID N°: 14 se muestra en la barra con rayas diagonales, respectivamente. Se indica la media y DE de triplicados.

Figura 9: El PTO de la SEQ ID N°: 14 inhibe la proliferación de células de melanoma MER- 116 según se describe en el ejemplo 10. El número de células no tratadas determinado mediante recuento celular electrónico se indica con la barra blanca. El número de células tratadas con lipofectina se muestra en la barra cuadriculada y el número de células tratadas con PTO de la SEQ ID N°: 14/lipofectina se muestra en la barra con rayas diagonales, respectivamente. Se indica la media y DE de triplicados.

Figura 10: El PTO de la SEQ ID N°: 14 inhibe la secreción de TGF-beta 1 de células A-549, SW-900 y NCI-H661 NSCLC según se describe en el ejemplo 11. La concentración de TGF-beta 1 en los sobrenadantes de células no tratadas (barra blanca) se establecieron como el 100%. La concentración de TGF-beta 1 en los sobrenadantes de células tratadas con llpofectina (barra cuadriculada) y de células tratadas con PTO de la SEQ ID N°: 14/llpofectina (barra con rayas diagonales) se expresa como un % del control no tratado. Se indica la media y DE de tres experimentos independientes para cada línea celular.

Figura 11: El PTO de la SEQ ID N°: 14 inhibe la proliferación de células A-549, SW-900 y NCI-H661 NSCLC según se describe en el ejemplo 11. Los datos de un ensayo de proliferación basado en tetrazolio (ensayo EZ4U) de células no tratadas (barra blanca) se establecieron como el 100%. Los datos de las células tratadas con lipofectina (barra cuadriculada) y de células tratadas con PTO de la SEQ ID N°: 14/lipofectina (barra con rayas diagonales) se expresan como un % del control no tratado. Se indica la media y DE de al menos dos experimentos independientes para cada línea celular.

Figura 12: El PTO de la SEQ ID N°: 14 inhibe la migración de células SW-900 NSCLC según se describe en el ejemplo 11. La migración de células no tratadas (círculos) determinada con el ensayo de raspado a las 0, 17, 24, 48 y 65 hs se representan en µm. La migración de células tratadas con lipofectina se muestran con triángulos y la migración de células tratadas con PTO de la SEQ ID N°: 14/lipofectina se muestran con cuadrados (200 nM) o rombos (400 nM), respectivamente. Se indican las medias ± DE de tres experimentos independientes.

Figura 13: El PTO de la SEQ ID N°: 14 aumenta la citotoxicidad mediada por células de PBMC cultivadas en el sobrenadante de células A-549 NSCLC según se describe en el ejemplo 18. La citotoxicidad mediada por células para las células blanco NCI-H661 de PBMC cultivadas en sobrenadantes de células A-549 no tratadas (barra blanca) se determina con el ensayo CARE-LASS a las relaciones de célula efectora:blanco (E:T) indicadas. La citotoxicidad mediada por células para las células blanco NCI-H661 de PBMC cultivadas en sobrenadantes de células A-549 tratadas con lipofectina se muestra en la barra cuadriculada y la citotoxicidad mediada por células sobre células blanco NCI-H661 de PBMC cultivadas en sobrenadantes de células A-549 tratadas con PTO de la SEQ ID N°: 14/llpofectlna se muestra en la barra con rayas diagonales, respectivamente. Se indica la mediana, máxima y mínima de cuadriplicados.

Figura 14: El PTO de la SEQ ID N°: 14 Inhibe la secreción de TGF-beta 1 de células de cáncer de ovario Coló 704 según se describe en el ejemplo 12. La concentración de TGF-beta 1 en el sobrenadante de células no tratadas (barra blanca) se expresa en pg/ml. La concentración de TGF-beta 1 en sobrenadantes de células tratadas con lipofectina se muestra en la barra cuadriculada y la concentración de TGF-beta 1 en sobrenadantes de células tratadas con PTO de la SEQ ID N°: 14/lipofectina se muestra en la barra con rayas diagonales, respectivamente. Se indica la media y DE de duplicados.

Figura 15: El PTO de la SEQ ID N°: 14 Inhibe la proliferación de células de cáncer de ovario Coló 704 según se describe en el ejemplo 12. El número de células no tratadas determinado por recuento con un hemocitómetro Fuchs-Rosenthal se muestra en la barra blanca. El número de células tratadas con lipofectina se muestra en la barra cuadriculada y número de células tratadas con PTO de la SEQ ID N°: 14/lipofectina se muestra en la barra con rayas diagonales, respectivamente. Se indican los datos de recuentos individuales.

Figura 16: El PTO de la SEQ ID N°: 14 inhibe la secreción de TGF-beta 1 de células DanG de cáncer de páncreas según se describe en el ejemplo 13. La concentración de TGF-beta 1 en el sobrenadante de células no tratadas (barra blanca) se expresa en pg/ml. La concentración de TGF-beta 1 en sobrenadantes de células tratadas con lipofectina se muestra en la barra cuadriculada y la concentración de TGF-beta 1 en sobrenadantes de células tratadas con PTO de la SEQ ID N°: 14/lipofectina se muestra en la. barra con rayas diagonales, respectivamente. Se indica la media y DE de triplicados.

Figura 17: El PTO de la SEQ ID N°: 14 inhibe la proliferación de células DanG de cáncer de páncreas según se describe en el ejemplo 13. El número de células no tratadas determinado por recuento celular electrónico se muestra en la barra blanca. El número de células tratadas con lipofectina se muestra en la barra cuadriculada y número de células tratadas con PTO de la SEQ ID N°: 14/lipofectina se muestra en la barra con rayas diagonales, respectivamente. Se indica la media y DE de triplicados.

Figura 18: El PTO de la SEQ ID N°: 14 inhibe la secreción de TGF-beta 1 de células PC-3 y DU-145 de cáncer de próstata según se describe en el ejemplo 14. La concentración de TGF-beta 1 en los sobrenadantes de células no tratadas (barra blanca) se establecieron como el 100%. La concentración de TGF-beta 1 en sobrenadantes de células tratadas con lipofectina (barra cuadriculada) y de células tratadas con PTO de la SEQ ID N°: 14/lipofectina (barra con rayas diagonales) se expresa como un % del control no tratado. Se indica la media y DE de tres experimentos independientes para cada línea celular.

Figura 19: El PTO de la SEQ ID N°: 14 inhibe la proliferación de células PC-3 y DU-145 de cáncer de próstata según se describe en el ejemplo 14. Los datos de un ensayo de proliferación basado en tetrazolio (ensayo EZ4U) de células no tratadas (barra blanca) se establecieron como el 100%. Los datos de células tratadas con lipofectina (barra cuadriculada) y de células tratadas con PTO de la SEQ ID N°: 14/llpofectina (barra con rayas diagonales) se expresan como un % del control no tratado. Se indica la media y DE de al menos dos experimentos independientes para cada línea celular.

Figura 20: El PTO de la SEQ ID N°: 14 inhibe la migración de células PC-3 de cáncer de próstata según se describe en el ejemplo 14. La migración de células no tratadas (círculos) determinada con el ensayo de raspado a las 0, 6, 17 y 24 h se muestra en µm. La migración de células tratadas con llpofectina se muestran con triángulos y la migración de células tratadas con PTO de la SEQ ID N°: 14/lipofectina se muestran con cuadrados, respectivamente. Se indican las medias de tres experimentos independientes.

Figura 21: El PTO de la SEQ ID N°: 14 aumenta la citotoxicidad mediada por células de PBMC cultivadas en el sobrenadante de células PC-3 de cáncer de próstata según se describe en el ejemplo 18. La citotoxicidad mediada por células sobre células blanco K562 de PBMC cultivadas en sobrenadantes de células PC-3 no tratadas (barra blanca) se determina con el ensayo CARE-LASS a las relaciones de célula efectora:blanco (E:T) indicadas. La citotoxicidad mediada por células para las células blanco K562 de PBMC cultivadas en sobrenadantes de células PC-3 tratadas con lipofectina se muestra en la barra cuadriculada y la citotoxicidad mediada por células para las células blanco K562 de PBMC cultivadas en sobrenadantes de células PC-3 tratadas con PTO de la SEQ ID N°: 14/lipofectina se muestra en la barra con rayas diagonales, respectivamente. Se indica la mediana, máxima y mínima de cuadriplicados.

Figura 22: El PTO de la SEQ ID N°: 14 inhibe la secreción de TGF-beta 1 de células Caki- 1 de cáncer renal según se describe en el ejemplo 15. La concentración de TGF-beta 1 en el sobrenadante de células no tratadas (barra blanca) se expresa en pg/ml. La concentración de TGF-beta 1 en sobrenadantes de células tratadas con lipofectina se muestra en la barra cuadriculada y ia concentración de TGF-beta 1 en sobrenadantes de células tratadas con PTO de la SEQ ID N°: 14/llpofectina se muestra en la barra con rayas diagonales, respectivamente. Se indica la media y DE de triplicados.

Figura 23: El PTO de la SEQ ID N°: 14 inhibe la proliferación de células Caki-1 de cáncer renal según se describe en el ejemplo 15. El número de células no tratadas determinado por recuento celular electrónico se muestra en la barra blanca. El número de células tratadas con lipofectina se muestra en la barra cuadriculada y el número de células tratadas con PTO de la SEQ ID N°: 14/lipofectina se muestra en la barra con rayas diagonales, respectivamente. Se indica la media y DE de triplicados.

Figura 24: El PTO de la SEQ ID N°: 30 inhibe la proliferación de células HCT-116 CRC según se describe en el ejemplo 8. El número de células no tratadas determinado por recuento celular electrónico se muestra en la barra blanca. El número de células tratadas con lipofectina se muestra en la barra cuadriculada y número de células tratadas con PTO de la SEQ ID N°: 30/lipofectina se muestra en la barra con rayas diagonales, respectivamente. Se indica la media y DE de triplicados.

Figura 25: El PTO de la SEQ ID N°: 30 inhibe la secreción de TGF-beta 2 de células RPMI-7951 de melanoma según se describe en el ejemplo 10. La concentración de TGF-beta 2 en el sobrenadante de células no tratadas (barra blanca) se define como el 100%. La concentración de TGF-beta 2 en sobrenadantes de células tratadas con lipofectlna (barra cuadriculada) y de células tratadas con PTO de la SEQ ID N°: 30/lipofectina (barra con rayas diagonales) se expresa como un % del control no tratado. Se Indica la media y DE de cuatro experimentos independientes.

Figura 26: El PTO de la SEQ ID N°: 30 inhibe la proliferación de células RPMI-7951 de melanoma según se describe en el ejemplo 10. El número de células no tratadas (barra blanca) determinada por recuento celular electrónico se define como el 100%. El número de células tratadas con lipofectina (barra cuadriculada) y de células tratadas con PTO de la SEQ ID N°: 30/lipofectina (barra con rayas diagonales) se expresa como un % del control no tratado. Se índica la media y DE de cuatro experimentos independientes.

Figura 27: El PTO de la SEQ ID N°: 30 inhibe la secreción de TGF-beta 2 de células EFO-21 de cáncer de ovario según se describe en el ejemplo 12. La concentración de TGF-beta 2 en el sobrenadante de células no tratadas (barra blanca) se define como el 100%. La concentración de TGF-beta 2 en sobrenadantes de células tratadas con lipofectina (barra cuadriculada) y de células tratadas con PTO de la SEQ ID N°: 30/lípofectina (barra con rayas diagonales) se expresa como un % del control no tratado. Se indica la media y DE de tres experimentos independientes.

Figura 28: El PTO de la SEQ ID N°: 30 inhibe la proliferación de células EFO-21 de cáncer de ovario según se describe en el ejemplo 12. El número de células no tratadas (barra blanca) determinado por recuento celular electrónico se define como el 100%. El número de células tratadas con lipofectina (barra cuadriculada) y de células tratadas con PTO de la SEQ ID N°: 30/llpofectina (barra con rayas diagonales) se expresan como un % del control no tratado. Se indica la media y DE de tres experimentos independientes.

Figura 29: El PTO de la SEQ ID N°: 30 Inhibe la secreción de TGF-beta 2 de células Hup-T3, Hup-T4, y PA-TU-8902 de cáncer de páncreas según se describe en el ejemplo 13. La concentración de TGF-beta 2 en los sobrenadantes de células no tratadas (barra blanca) se estableció como el 100%. La concentración de TGF-beta 2 en sobrenadantes de células tratadas con lipofectina (barra cuadriculada) y de células tratadas con PTO de la SEQ ID N°: 30/lipofectina (barra con rayas diagonales) se expresa como un % del control no tratado. Se indica la media y DE de tres experimentos independientes para cada línea celular.

Figura 30: El PTO de la SEQ ID N°: 30 inhibe la proliferación de células Hup-T3, Hup-T4 y PA-TU-8902 de cáncer de páncreas según se describe en el ejemplo 13. Los datos de un ensayo de proliferación basado en tetrazolio (ensayo EZ4U) o recuento celular electrónico de células no tratadas (barra blanca) se establecieron como el 100%. Los datos de células tratadas con lipofectina (barra cuadriculada) y de células tratadas con PTO de la SEQ ID N°: 30/lipofectina (barra con rayas diagonales) se expresa como un % del control no tratado. Se indica la media y DE de tres experimentos independientes para cada línea celular.

Figura 31: El PTO de la SEQ ID N°: 30 inhibe la migración de esferoides PA-TU-8902 de cáncer de páncreas según se describe en el ejemplo 13. El diámetro de los esferoides no tratados (círculos) a las 0, 7, 24, 41 y 65 hs se representan en µm. El diámetro de los esferoides tratados con PTO de la SEQ ID N°: 30 se muestran como cuadrados cerrados. El diámetro de esferoides tratados con rh TGF-beta 2 se muestran como cuadrados abiertos. El diámetro de esferoides tratados con anticuerpos anti TGF-beta 2 se muestran como triángulos abiertos. Se indica la mediana, máxima y mínima de al menos cuadriplicados.

Figura 32: El PTO de la SEQ ID N°: 30 aumenta la cltotoxicidad mediada por células de PBMC cultivadas en el sobrenadante de células PA-TU-8902 de cáncer de páncreas según se describe en el ejemplo 18. La cltotoxlcidad mediada por células para las células blanco Hup-T3 de PBMC cultivadas en sobrenadantes de células PA-TU-8902 no tratadas (barra blanca) se determina con el ensayo CARE-LASS a las relaciones de célula efectora:blanco (E:T) indicadas. La citotoxicidad mediada por células para las células blanco Hup-T3 de PBMC cultivadas en sobrenadantes de células PA-TU-8902 tratadas con lipofectina se muestra en la barra cuadriculada y la citotoxlcidad mediada por células para las células blanco Hup-T3 de PBMC cultivadas en sobrenadantes de células PA-TU-8902 tratadas con PTO de la SEQ ID N°: 30/llpofectina se muestra en la barra con rayas diagonales, respectivamente. Se indica la mediana, máxima y mínima de cuadriplicados.

Figura 33: El PTO de la SEQ ID N°: 30 inhibe la secreción de TGF-beta 2 de células PC-3 y DU-145 de cáncer de próstata según se describe en el ejemplo 14. La concentración de TGF- beta 2 en los sobrenadantes de células no tratadas (barra blanca) se expresa en pg/ml. Las concentraciones de TGF-beta 1 en sobrenadantes de células tratadas con lipofectina se muestran en la barra cuadriculada y las concentraciones de TGF-beta 2 en sobrenadantes de células tratadas con PTO de la SEQ ID N°: 30/lipofectina se muestran en la barra con rayas diagonales, respectivamente. Se indica la media y DE de triplicados.

Figura 34: El PTO de la SEQ ID N°: 30 Inhibe la proliferación de células PC-3 y DU-145 de cáncer de próstata según se describe en el ejemplo 14. El número de células no tratadas determinado por recuento celular electrónico se muestra en la barra blanca. El número de células tratadas con lipofectina se muestra en la barra cuadriculada y el número de células tratadas con PTO de la SEQ ID N°: 14/lipofectina se muestra en la barra con rayas diagonales. Se indica la media y DE de triplicados.

Descripción detallada de la Invención En una realización, los oligonucleótidos o derivados activos de esta invención son oligonucleótidos antisentido que inhiben la formación de metástasis. Estos oligonucleótidos se usan para la preparación de composiciones farmacéuticas. Estas composiciones farmacéuticas se usan para el tratamiento de metástasis. Una metástasis en el contexto de esta invención significa que al menos una célula se separa o disocia de un tejido tumoral y se mueve, por ejemplo, por el sistema linfático y/o los vasos sanguíneos hacia otra parte del cuerpo de un ser humano o de un animal, donde se establece y forma un nuevo tejido tumoral.

En otra realización, los oligonucleótidos, o los derivados activos de los mismos, son ollgonucleótidos antisentido que inhiben la síntesis de las proteínas relacionadas con la formación de metástasis.

En una realización adicional, las proteínas cuya síntesis es inhibida se seleccionan del grupo formado por, por ejemplo, el factor de crecimiento tumoral beta 1 (TGF-beta 1), TGF-beta 2, TGF-beta 3, moléculas de adhesión celular (CAM), integrinas, selectinas, metaloproteasas (MMP), sus inhibidores tisulares (TIMP) y/o interleuquina 10.

En el contexto de esta invención, el término factor de crecimiento tumoral se usa como sinónimo de factor de crecimiento transformante. El término TGF-beta comprende en particular TGF-beta 1, TGF-beta 2 y/o TGF-beta 3.

Una realización de la invención comprende el uso de al menos un oligonucleótido, o los derivados activos de los mismos, de TGF-beta 1, TGF-beta 2, TGF-beta 3, moléculas de adhesión celular (CAM), integrinas, selectinas, metaloproteasas (MMP), sus Inhibidores tisulares (TIMP) y/o ¡nterleuquina 10 y/o los derivados activos de los mismos en la preparación de una composición farmacéutica para inhibir la formación de metástasis en el tratamiento de cáncer.

Las moléculas de adhesión celular (CAM) comprenden moléculas tales como la molécula de adhesión intercelular-1 (ICAM-1), molécula de adhesión de células vasculares-1 (VCAM-1), molécula de adhesión de leucocitos endoteliales-1 (ELAM-1).

Las metaloproteasas comprenden al menos 15 miembros relacionados estructuralmente también numeradas para su identificación (MMP-1, MMP-2, etc.), con amplias actividades proteolíticas contra los componentes de la matriz extracelular. Las metaloproteasas comprenden, en un sentido no limitativo, colagenasas, gelatinasas, estromelisinas y metaloelastasas.

Los derivados activos de esta invención son modificaciones de los oligonucleótidos según se describirá más adelante.

En una realización preferida, dicho al menos un oligonucleótído antisentído, o un derivado activo del mismo, de utilidad en la preparación de una composición farmacéutica para inhibir la formación de metástasis comprende las secuencias identificadas en el listado de secuencias con las SEQ ID N°: 1 a 68, aún más preferidas son las secuencias identificadas en el listado de secuencias con las SEQ ID N°: 1, 5, 6, 8, 9, 14, 15, 16, 28, 29, 30, 34, 35, 36, 40 y 42. Otras realizaciones de estos oligonucleótidos antlsentido de utilidad en la preparación de una composición farmacéutica para inhibir la formación de metástasis se ofrecen en los ejemplos 19 a 24. Estos oligonucleótidos tienen una mayor afinidad con la molécula blanco. Otros avances de estas moléculas comprenden menos efectos secundarios, mayor eficacia, mayor biodisponibllidad, mayor seguridad y/o mayor estabilidad química en comparación con los oligonucleótidos que se describen en el estado de la técnica.

En aún otra realización de esta invención, el oligonucleótido, o un derivado activo del mismo, es de utilidad en la inhibición de metástasis en distintos tipos de cáncer tales como carcinoma de los ductos biliares, carcinoma de vejiga, tumor de cerebro, cáncer de mama, carcinoma broncogénico, carcinoma de riñon,, cáncer cervical, coriocarcinoma, cistadenocarcinoma, carcinoma cervical, carcinoma de colon, carcinoma colorrectal, carcinoma embrionario, cáncer de endometrio, carcinoma epitelial, cáncer de esófago, cáncer de vesícula, cáncer gástrico, cáncer de cabeza y cuello, cáncer hepatocelular, carcinoma de hígado, carcinoma de pulmón, carcinoma de médula, carcinoma broncogénica/de pulmón de células no pequeñas, cáncer de ovario, carcinoma de páncreas, carcinoma papilar, adenocarcinoma papilar, cáncer de próstata, carcinoma de intestino delgado, cáncer rectal, carcinoma de células renales, carcinoma de glándulas sebáceas, cáncer de piel, carcinoma broncogénica/de pulmón de células pequeñas, cáncer de tejidos blandos, carcinoma de células escamosas, carcinoma testicular, cáncer uterino, neuromas acústicos, neurofibromas, tracomas y granulomas piogénicos; tumores premalignos, blastoma, tumor de Ewing, craniofaringlioma, ependimoma, meduloblastoma, hemanglioblastoma, meduloblastoma, melanoma, mesotelioma, neuroblastoma, neurofibroma, pinealoma, retinoblastoma, retinoblastoma, sarcoma (incluyendo angiosarcoma, condrosarcoma, endotellosarcoma, fibrosarcoma, gliosarcoma, lelomlosarcoma, liposarcoma, linfangioendoteliosarcoma, linfangiosarcoma, melanoma, meningioma, miosarcoma, sarcoma osteogénico, osteosarcoma), seminoma, tracomas, tumor de Wilm.

En una realización más preferida, el ollgonucleótido, o un derivado activo del mismo, es de utilidad en la inhibición de metástasis en distintos tipos de cáncer tales como carcinoma de vejiga, cáncer de colon, cáncer de endometrio, carcinoma hepatocelular, melanoma, cáncer de pulmón de células no pequeñas (NSCLC), cáncer de ovario, cáncer de páncreas, cáncer de próstata, cáncer de tejidos blandos. El término de utilidad, en el contexto de esta invención, significa que se usan para la preparación de composiciones farmacéuticas y/o se usan para el tratamiento del respectivo cáncer, carcinoma y/o metástasis.

En el contexto de esta invención, el uso del término cáncer es sinónimo de carcinoma. Además, se considera que se describen todas las combinaciones de indicaciones y TGF-beta en la presente.

En otras realizaciones preferidas de esta invención, el oligonucleótido, o un derivado activo del mismo, se usa para la preparación de composiciones farmacéuticas y/o se usa para el tratamiento de cáncer renal, leucemia, linfoma, osteosarcoma, mesotelioma, cáncer de esófago y/o mieloma múltiple.

En una realización de la invención, los oligonucleótidos, o los derivados activos de los mismos, se usan para la preparación de una composición farmacéutica para el tratamiento de carcinoma de vejiga, cáncer de colon, cáncer de endometrio, carcinoma hepatocelular, leucemia, linfoma, melapoma, cáncer de pulmón de células no pequeñas (NSCLC), cáncer de ovario, cáncer de páncreas, cáncer de próstata. En otras realizaciones, los oligonucleótidos de esta invención y/o los derivados activos de los mismos también se usan para la preparación de una composición farmacéutica para el tratamiento de cáncer renal, osteosarcoma, mesotelioma, mieloma múltiple, cáncer de esófago y/o cáncer de tejidos blandos.

En otras realizaciones, los oligonucleótidos de esta invención y/o los derivados activos de los mismos, se usan para el tratamiento y/o la preparación de composiciones farmacéuticas para el tratamiento de distintos tipos de cáncer tales como carcinoma de los ductos biliares, carcinoma de vejiga, tumor de cerebro, cáncer de mama, carcinoma broncogénico, carcinoma de riñon, cáncer cervical, coriocarcinoma, cistadenocarcinoma, carcinoma cervical, carcinoma de colon, carcinoma colorrectal, carcinoma embrionario, cáncer de endometrio, carcinoma epitelial, cáncer de esófago, cáncer de vesícula, cáncer gástrico, cáncer de cabeza y cuello, cáncer hepatocelular, carcinoma de hígado, carcinoma de pulmón, carcinoma de médula, carcinoma broncogénica/de pulmón de células no pequeñas, cáncer de ovario, carcinoma de páncreas, carcinoma papilar, adenocarcinoma papilar, cáncer de próstata, carcinoma de intestino delgado, cáncer rectal, carcinoma de células renales, carcinoma de glándulas sebáceas, cáncer de piel, carcinoma broncogénica/de pulmón de células pequeñas, cáncer de tejidos blandos, carcinoma de células escamosas, carcinoma testicular, cáncer uterino, neuromas acústicos, neurofibromas, tracomas y granulomas piogénicos; tumores premalignos, blastoma, tumor de Ewing, craniofaringlioma, ependimoma, meduloblastoma, hemanglioblastoma, meduloblastoma, melanoma, mesotelioma, neuroblastoma, neurofibroma. pinealoma, retinoblastoma, retinoblastoma, sarcoma (Incluyendo angiosarcoma, condrosarcoma, endotellosarcoma, fibrosarcoma, gllosarcoma, leiomiosarcoma, llposarcoma, llnfangioendoteliosarcoma, llnfangiosarcoma, melanoma, meningioma, miosarcoma, sarcoma osteogénico, osteosarcoma), seminoma, tracomas y/o tumor de Wílm.

Estos ollgonucleótidos y los derivados activos respectivos se describen con más detalle más adelante en este texto.

En aún otra realización, el oligonucleótido, o un derivado activo del mismo, de utilidad en la preparación de una composición farmacéutica para el tratamiento de los distintos tipos de cáncer descritos previamente es un oligonucleótido antisentido que inhibe la producción del factor de crecimiento tumoral beta 1, o respectivamente factor de crecimiento transformante, (TGF-beta 1), TGF-beta 3 y/o interleuquina 10.

En otra realización, el oligonucleótido, o un derivado activo del mismo, de utilidad en el tratamiento de los distintos tipos de cáncer descritos previamente y/o en la preparación de una composición farmacéutica para el tratamiento de los distintos tipos de cáncer descritos previamente es un oligonucleótido antisentido que inhibe la producción del factor de crecimiento transformante beta 2 (TGF-beta 2).

En una realización más preferida, los oligonucleótidos, o los derivados activos de los mismos, de utilidad en la preparación de una composición farmacéutica para el tratamiento de los distintos tipos de cáncer descritos previamente son los oligonucleótidos antisentido identificados en el listado de secuencias con las SEQ ID N°: 1 a 21 ó 49 a 68., 22 a 48 ó 69 a 107. Aún más preferidas son las secuencias identificadas en el listado de secuencias con las SEQ ID N0:. 1,5,6,8, 9, 14, 15, 16, 25, 26, 28, 29, 30, 34, 35, 36 y 37. Estas secuencias tienen una afinidad especialmente alta.

Estas secuencias tienen una afinidad especialmente alta por ei ARNm del gen respectivo, tienen menos efectos secundarios, muestras mayor eficacia, tienen mayor biodisponibilidad, muestran mayor seguridad y/o mayor estabilidad química. Otro aspecto de esta invención es el uso de antagonistas de TGF-beta 2 para el tratamiento de distintos tipos de cáncer seleccionado entre el grupo de cáncer de colon, cáncer de próstata, melanoma, cáncer de vejiga, cáncer de endometrio, cáncer de ovario, páncreas cáncer y/o mesotelioma. Aunque algunos de estos tumores están acompañados de niveles altos de TGF-beta 1, sorpresivamente la inhibición de TGF-beta 2 reduce significativamente la proliferación de células tumorales, lo que constituye un factor importante para el tratamiento de estos distintos tipos de cáncer.

Los antagonistas de TGF-beta 2 (factor de crecimiento transformante 2) comprenden, en el contexto de esta invención, cualquier compuesto que inhiba la función TGF-beta 2, lo que significa que se inhibe cualquier efecto que sea inducido por TGF-beta.

En realizaciones preferidas, los antagonistas de TGF-beta 2 son sustancias que inhiben la producción de TGF-beta 2, son sustancias que se unen a TGF-beta 2 y/o son sustancias que inhiben la función de TGF-beta 2 posteriormente con respecto a su cascada activadora. Por más detalles acerca de los antagonistas de TGF-beta, véase Wojtowicz-Praga, Investigational New Drugs 2V. 21-32, 2003.

Un Inhibidor comprende en un sentido no limitativo proteínas que se unen a TGF-beta 2, inhibidores relacionados con el receptor de TGF-beta, inhibidores de Smad, péptidos de unión a TGF-beta 2 (péptidos asociados con la latencia), anticuerpos anti-TGF-beta 2, reguladores de la expresión de TGF-beta.

Los ejemplos de proteínas que se unen a TGF-beta 2 son fetuína, decorlna, un pequeño condroitin-dermatán sulfato proteoglicano y los proteoglicanos biglicano y fibromodulina. Un inhibidor del receptor de TGF-beta es, por ejemplo, betaglícano (región extracelular del receptor de TGF-beta de tipo III).

Un ejemplo de un regulador de la expresión de TGF-beta es tranilast (ácido N-[3,4-dimetoxicinamo/IJ-antranílico) o vectores de plásmido antiseptido TGF-beta 2 u oligonucleótidos antisentido TGF-beta 2. En otra realización preferida, los oligonucleótidos aptisentido TGF-beta 2 se seleccionan entre las secuencias descritas en las SEQ ID N°: 22 a 48, más preferentemente en las SEQ ID N°: 25, 26, 28, 29, 30, 34, 35, 36, 37.

Aún otro aspecto de esta invención comprende nuevos oligonucleótidos antisentido IL-10 y los derivados activos de los mismos identificados en el listado de secuencias con las SEQ ID N°: 49 a 68. Estos oligonucleótidos tienen una afinidad muy alta por el ARNm de IL-10 y de esta manera inhiben eficazmente la síntesis de IL-10.

En una realización, el proceso de elaboración del oligonucleótido antisentido de IL-10, o un derivado activo del mismo, comprende la adición consecutiva de nucleósidos y ligadores por pasos o el recorte del oligonucleótido de una cadena de oligonucleótidos más larga.

Aún otro aspecto de esta invención es una composición farmacéutica que comprende un oligonucleótido antisentido IL-10 o un derivado activo del mismo identificado en el listado de secuencias con las SEQ ID N°: 49 a 68.

Una realización adicional de esta invención comprende el uso del ollgonucleótido antisentldo IL-10 o un derivado activo del mismo, identificado en el listado de secuencias con las SEQ ID N°: 49 a 68 de utilidad en la preparación de una composición farmacéutica para el tratamiento de cáncer y/o metástasis.

Un oligonucleótido de esta invención se usa en la preparación de una composición farmacéutica que inhibe la formación de metástasis en el tratamiento de cáncer, los oligonucleótidos de esta invención también se usan para la preparación de una composición farmacéutica para el tratamiento de carcinoma de vejiga, cáncer de colon, cáncer de endometrio, carcinoma hepatocelular, leucemia, linfoma, melanoma, cáncer de pulmón de células no pequeñas (NSCLC), cáncer de ovario, cáncer de páncreas, cáncer de próstata o cáncer de tejidos blandos y los nuevos oligonucleótidos que inhiben la síntesis de IL-10 también forman parte de esta Invención.

Los términos oligonucleótido o ácido nucleico se refieren a múltiples nucleótidos (es decir, moléculas que comprenden un azúcar (por ejemplo, ribosa o desoxirribosa) ligado a un grupo fosfato y a una base orgánica variable, que puede ser ya sea una pirimidina sustituida (por ejemplo, citosina (C), timina (T) o uracilo (U)) o una purina sustituida (por ejemplo, adenina (A) o guanina (G)) o una modificación de las mismas. Tal como se utiliza en la presente, los términos se refieren a oligorribonucleótidos así como a oligodesoxirribonucleótidos. Los términos también incluirán oligonucleósidos (es decir, un oligonucleótido sin el fosfato) y cualquier otro polímero que contenga base orgánica.

Aunque los oligonucleótidos de esta invención son de cadena simple, en algunas realizaciones al menos partes del ácido nucleico de cadena simple es de cadena doble. Las moléculas de cadena doble pueden ser más estables in vivo, en tanto las moléculas de cadena simple pueden ser más activos.

En una realización, el oligonucleótido antisentido es complementario del ARNm completo del gen o se puede emplear cualquier parte más pequeña de la proteína que será inhibida, por ejemplo TGF-beta 1 TGF-beta 2, TGF-beta 3, moléculas de adhesión celular (CAM), integrinas, selectinas, metaloproteasas (MMP), sus inhibidores tisulares (TIMP) y/o interleuquina 10. En realizaciones más preferidas, los oligonucleótidos antisentido de esta invención tienen una longitud entre aproximadamente 6 y aproximadamente 300 nucleótidos; en aún otra realización los nucleótidos son de una longitud entre aproximadamente 7 y aproximadamente 100 nucleótídos, respectivamente, entre aproximadamente 8 y aproximadamente 30 nucleótidos, aún más preferentemente entre 12 y 24 nucleótidos.

Las secuencias del gen respectivo son conocidas para el especialista en la técnica, y algunas de ellas se muestran en el ejemplo 14.

En aún otras realizaciones, los ácidos nucleicos no son ácidos nucleicos antisentido, lo que significa que no funcionan uniéndose a especies complementarias de ADN genómico o ARN dentro de una célula y para así inhibir la función de dicha especie de ADN genómico o ARN. Tal como se utiliza en la presente, con respecto a las unidades ligadas de un ácido nucleico, "ligado" o "ligamiento" significa que dos entidades están unidos entre sí por cualquier medio físicoquímico. La presente abarca cualquier ligamiento conocido por el especialista en la técnica, ya sea covalente o no covalente. Los ligamientos naturales, que son los que habltualmente se observan en la naturaleza uniendo las unidades individuales de un ácido nucleico, son los más comunes. Sin embargo, las unidades individuales de un ácido nucleico pueden estar ligadas mediante ligamientos sintéticos o modificados.

En una realización de esta invención, al menos un llgador de fosfato del oligonucleótido está sustituido por un péptido. Estos derivados del oligonucleótido también se denominan ácidos nucleicos peptídicos.

En una realización, los extremos respectivos de esta estructura polimérica lineal se puede unir además para formar una estructura circular. Sin embargo, en general se prefieren las estructuras lineales abiertas. Dentro de la estructura de los oligonucleótidos, los grupos fosfato comúnmente se conocen por ser los formadores del esqueleto intemucleósldo del ollgonucleótldo.

El ligamiento o esqueleto normal de ARN y ADN es un ligamiento fosfodiéster 3' y 5'.

Los oligonucleótidos o ácidos nucleicos incluyen oligonucleótidos que contienen porciones no naturales con una función similar. Dichos oligonucleótidos modificados o sustituidos a menudo se prefieren antes que las formas nativas debido a propiedades deseables tal como, por ejemplo, mayor captación celular, mayor afinidad por el ácido nucleico blanco (por ejemplo, una proteína), localización intracelular alterada y mayor estabilidad en presencia de nucleasas. Las modificaciones de los oligonucleótidos, tal como se utilizan en la presente, comprenden cualquier modificación química del azúcar, de la base y/o del ligamiento intemucleósido.

En una realización, los ácidos nucleicos o los oligonucleótidos que contienen una base y/o un azúcar modificado de forma covalente incluyen, por ejemplo, ácidos nucleicos cuyos azúcares del esqueleto están unidos de forma covalente a grupos orgánicos de bajo peso molecular distintos de un grupo hidroxilo en la posición 3' y/o 2' y distintos de un grupo fosfato en la posición 5'. Por lo tanto, los ácidos nucleicos modificados pueden incluir un grupo rlbosa 2'-0-alquilado. En aún otra realización, los ácidos nucleicos modificados incluyen azúcares tales como arabinosa en lugar de ribosa. Entonces, los ácidos nucleicos pueden ser heterogéneos en la composición del esqueleto que así puede contener cualquier combinación posible de unidades poliméricas ligadas entre sí, tales como ácidos nucleicos peptídicos (que conforman un esqueleto de aminoácidos con las bases del ácido nucleico). En algunas realizaciones los ácidos nucleicos son homogéneos en la composición del esqueleto.

Las purinas y pirimidlnas sustituidas de los ácidos nucleicos incluyen purinas y pirimidinas estándar tal como citosina así como análogos de bases tales como bases sustituidas de C-S propina (Wagner et al., Nature Biotechnology 14:840-844, 1996). Las purinas y pirimidinas incluyen, en un sentido no limitativo, adenina, citosina, guanina, timipa, 5-metilcitosina, 2-aminopurina, 2-amino-6-cIoropurina, 2,6-diaminopurina, hipoxantina y otros grupos aromáticos de nucleobases naturales y no naturales, sustituidos y no sustituidos.

Los nucleótidos individuales de cada ollgonucleótldo o polímero de pollnucleótidos pueden contener las mismas modificaciones, pueden contener combinaciones de estas modificaciones o pueden combinar estas modificaciones con ligamientos fosfodiéster. Los métodos de volver resistentes a nucleasas a los oligonucleótidos o polímeros de polinucleótidos incluyen, en un sentido no limitativo, la modificación covalente de bases de purina o pirimidlna. Por ejemplo, las bases pueden estar metlladas, hidroxlmetiladas o sustituidas de otra manera (por ejemplo, glicosiladas) de modo tal que los oligonucleótidos o polinucleótidos se vuelven sustancialmente resistentes a ácidos y nucleasas.

Se considera que el especialista en la técnica comprenderá que los oligonucleótidos antisentido en los cuales algunos nucleótidos de la secuencia están sustituidos por otro nucleótido o aún otros espaciadores, los derivados de los oligonucleótidos antisentido, de esta invención aún inhiben la síntesis de proteínas tales como TGF-beta 1, TGF-beta 2, TGF-beta 3, moléculas de adhesión celular (CAM), integrinas, selectinas, metaloproteasas (MMP), sus inhibidores tisulares (TIMP) y/o interleuquina 10, etc. En una realización preferida, entre aproximadamente 0,1% y aproximadamente 50% de los nucleótidos están sustituidos o entre aproximadamente 0,1% y aproximadamente 10% o entre aproximadamente 0,1% y aproximadamente 5%.

Un espaciador, según se mencionara previamente, puede ser cualquier sustancia química que une dichas al menos dos partes del oligonucleótido antisentido, sustituyendo el espacio de al menos un ácido nucleico.

En aún otra realización, al menos una T (Timidina) está sustituido por un U (Uracilo).

En una realización preferida, el espaciador es otro nucleótido o es un azúcar tal como glucosa, ribosa etc., un aminoácido o una o varias unidades de un polímero tal como polipropileno.

En una realización preferida, al menos un bloque terminal del oligonucleótido es una biotina, un análogo de biotina, avidina o un análogo de avidlna. Estas moléculas tienen la capacidad tanto para bloquear la degradación del oligonucleótido o polinucleótido protegido como para proveer un medio para una unión de gran afinidad de los ácidos nucleicos modificados al soporte sólido. Los derivados de avidina y biotina que se pueden usar para preparar los reactivos de esta invención incluyen estreptavidina, avidina succinilada, avidlna monomérica, biocitina (biotlna-D-N-lisina), biocitina hldrazida, derivados amina o sulfhidrilo de 2-iminobiotina y ácido biotinil-D-aminocaproico hldrazida. Otros derivados de biotina, tal como biotina-N-hldroxisuccinimida éster, N-hidroxisuccinimida éster del ácido biotinil-D-aminocaproico, 6-(biotinamido)hexanoato de sulfosucclnimidilo, N-hldroxisuccinimidaiminobiotina, biotinbromoacetilhidrazida, p-diazobenzoílblocitlna y 3-(N-maleimidopropionil)biocitina, también se pueden usar como grupos de bloques terminales en los polinucleótidos de la presente invención.

En otra realización, el oxígeno en la estructura en anillo del grupo ribosa de los nucleótidos en el oligonucleótido o polinucleótido modificado está sustituido con N-H, N-R (siendo R un sustituyente alquilo o arilo), S y/o metileno.

En una realización preferida, al menos un grupo azúcar del oligonucleótido es un derivado morfolino y el derivado activo es entonces un oligonucleótido morfolino.

En otra realización, están ligados dos carbonos de al menos un grupo azúcar. El ligamiento puede ser con un grupo metoxi u otro. Este ligador fija al grupo azúcar de una manera tal que permanece en una conformación específica, que permite, por ejemplo, una mayor selectividad y mayor estabilidad de estos ácidos nucleicos bloqueados. Los ácidos nucleicos bloqueados se describen, por ejemplo, en J. Wengel, Acc. Chem. Res., 120, 5458-5463 (1999) o J. Wengel et al., Nucleosides & Nucleotides, 18(6&7), S. 1365-1370, incorporadas en la presente a modo de referencia.

En aún otra realización, las unidades de bases se mantienen para una hibridación con un compuesto de ácido nucleico blanco apropiado. Uno de dichos compuestos oligoméricos, un oligonucleótido mimético que ha demostrado excelentes propiedades de hibridación, se conoce como un ácido nucleico peptídico (PNA). En los compuestos PNA, el esqueleto de azúcar de un oligonucleótido es reemplazado por un esqueleto que contiene una amida, en particular un esqueleto de aminoetilglicina. Las nucleobases están unidas directa o indirectamente a los átomos de nitrógeno aza de la porción amida del esqueleto. Las Patentes de EE.UU. representativas que describen la preparación de compuestos PNA incluyen, en un sentido no limitativo, las Patente de EE.UU. N°: 5.539.082; 5.714.331; y 5.719.262, cada una de las cuales se incorpora en la presente a modo de referencia. Otras descripciones de los compuestos PNA se pueden consultar en Nielsen et al., Science, 1991, 254, 1497-1500.

Otros esqueletos de oligonucleótidos modificados incluyen, por ejemplo, fosforotioatos, fosforotioatos quirales, fosforoditioatos, fosfotriésteres, aminoalquilfosfotriésteres, metilo y otros alquilfosfonatos Incluyendo 3'-alquilenfosfonatos y fosfonatos quirales, fosfinatos, fosforam ¡datos incluyendo 3'-aminofosfoamldato y aminoalquilfosforamidatos, tlonofosforamidatos, tionoalquilfosfonatos, tionoalquilfosfotriésteres y boranofosfatos que tienen ligamientos norm 3'-5', análogos ligados en 2'-5' de los mismo y los que tienen polaridad invertida, donde las unidades de pares de nucleósidos adyacentes están ligados en 3'-5' y 5'-3' o 2'-5' y 5'-2'. También se incluyen diversas sales, sales mixtas y formas de ácido libre.

En algunas realizaciones los ácidos nucleicos que tienen modificaciones en el esqueleto acordes con la invención son ácidos nucleicos antineoplásicos S- o R-quirales. Un "ácido nucleico S quiral", tal como se utiliza en la presente, es un ácido nucleico en donde al menos dos nucleótidos tienen una modificación en el esqueleto que forma un centro quiral y en donde una pluralidad de los centros quirales tienen una quiralidad S. Un "ácido nucleico R quiral", tal como se utiliza en la presente, es un ácido nucleico en donde al menos dos nucleótidos tienen una modificación del esqueleto que forma un centro quiral y en donde una pluralidad de los centros quirales tienen una quiralidad R. La modificación del esqueleto puede ser cualquier tipo de modificación que forma un centro quiral. Las modificaciones incluyen, en un sentido no limitativo, fosforotioato, metilfosfonato, metllfosforotioato, fosforoditioato, p-etox¡, 2'-0-Me y combinaciones de los mismos.

Otro tipo de esqueleto modificado, de utilidad de acuerdo con la invención, es un ácido nucleico peptídico. El esqueleto se compone de aminoetilgllcina y le brinda soporte a las bases que le proveen el carácter al ácido nucleico. El esqueleto no incluye ningún fosfato y por lo tanto es posible que, opcionalmente, no tenga una carga neta. La falta de carga permite una unión de ADN-ADN más fuerte porque no existe repulsión de cargas entre las dos cadenas. Además, dado que el esqueleto contiene un grupo metileno adicional, los oligonucleótidos son resistentes a enzimas/proteasas. Los ácidos nucleicos peptídicos se pueden obtener de diversas fuentes comerciales, por ejemplo, de Perkin Elmer, o se pueden sintetizar de novo.

En una realización adicional, a\ menos un nucleótido del oligonucleótido está modificado como se describe para una de las modificaciones anteriores.

En aún otra realización, se combinan ambas modificaciones del oligonucleótido.

En realizaciones preferidas, hay entre aproximadamente 1 y 12 o entre aproximadamente 1 y 8 o entre aproximadamente 1 y 4 o entre aproximadamente 1 y 2 oligonucleótidos y/o ligamientos de nucleótidos en el extremo 3' y/o 5' del oligonucleótido que están modificados como se describió previamente.

En aún otra realización, los oligonucleótidos de esta invención se hibridizan con el mismo blanco (por ejemplo TGF-beta 1 , TGF-beta 2, TGF-beta 3, moléculas de adhesión celular (CAM), integrinas, selectinas, metaloproteasas (MMP), sus inhibidores tisulares (TIMP) y/o interleuquina 10) que comprende uno de los oligonucleótidos del listado de secuencias pero además tienen secuencias que contienen entre aproximadamente 1 y aproximadamente 20 nucleótidos, más preferentemente entre 1 y 15, 1 y 10, 1 y 5, 1 y 3 ó 1 a 2 nucleótidos en al menos uno de los extremos 2', 3' y/o 5' que aún se encuentran dentro del alcance de esta invención.

En otras palabras, se puede elegir cualquier secuencia de esta invención. Por ejemplo, se toma una secuencia del listado de secuencias o de los ejemplos. Estas secuencias forman parte de la secuencia antisentido complementaria del ARNm de la molécula blanco, por ejemplo TGF-beta 1, TGF-beta 2, TGF-beta 3 o IL-10, indicadas en el ejemplo 16. Los nucleótidos se pueden agregar por cualquier extremo de estas secuencias después de la secuencia de la secuencia antisentido complementaria del ARNm de la molécula blanco para crear nuevos oligonucleótidos antisentido que se hibridizarán con el ARNm. Por cualquiera de los extremos del ollgonucleótido se agregan nucleótidos de una longitud entre aproximadamente 1 y aproximadamente 20 nucleótidos, más preferentemente entre aproximadamente uno y aproximadamente 25, más preferentemente aún entre aproximadamente 1 y aproximadamente 10, entre aproximadamente 1 y aproximadamente 5, entre aproximadamente 1 y aproximadamente 3 nucleótidos. Como se mencionara precedentemente, se considera que el especialista en la técnica, que si algunos de los nucleótidos están sustituidos o si se incluyen espaciadores en lugar de un nucleótido, este derivado del oligonucleótido aún se hibridizará con el ARNm de la molécula blanco.

Los blancos de los oligonucleótidos mencionados en esta invención son conocidos por los especialistas en la técnica. En una realización preferida, los blancos se seleccionan del grupo formado por ARNm de TGF-beta 1, TGF-beta 2 y/o TGF-beta 3, moléculas de adhesión celular (CAM), integrinas, selectinas, metaloproteasas (MMP), sus inhibidores tisulares (TIMP) y/o interleuquina 10. La secuencia del ARNm de TGF-beta-1 y TGF beta-2 se muestra en el ejemplo 6. Las secuencias de secuencias antisentido complementarias del ARNm de TGF-beta 1, TGF-beía 2, TGF-beta 3 e IL-10 y una variante de procesamiento de la secuencia antisentldo complementaria de TGF-beta se muestran en el ejemplo 16.

Aún otro objeto de esta invención consistía en hallar un proceso de elaboración los oligonucleótidos antisentido IL-10 de esta invención o los derivados activos de los mismos.

Para el uso en la presente invención, los ácidos nucleicos pueden sintetizarse ote novo usando cualquiera de numerosos procedimientos que son bien conocidos en la técnica. Dichos compuestos se conocen como 'ácidos nucleicos sintéticos'. Por ejemplo, el método de b-cianoetilo fosforamidlta (Beaucage, S. L., y Caruthers, M. H., Tet. Let. 22:1859, 1981); el método de nucleósido H-fosfonato (Garegg et al., Tet. Let. 27:4051-4054, 1986; Froehler et al., Nucí. Acid. Res. 14:5399-5407, 1986, Garegg et al, Tet. Let. 27:4055-4058, 1986, Gaffney et al., Tet. Let. 29:2619-2622, 1988). Estas químicas se pueden conducir con una variedad de sintetizadores automáticos de oligonucleótidos disponibles en el mercado.

En un proceso preferido los oligonucleótidos antisentido IL-10 de esta invención se sintetizan usando química de fosfito triéster que aumentan la cadena de nucleótidos en la dirección 3 '-5', en donde el respectivo nucleótido se acopla al primer nucleótido que está unido de forma covalente a la fase sólida, que comprende los pasos de clivar primero el grupo protector 5' DMT del nucleótido previo, luego agregar el respectivo nucleótido para prolongar la cadena, a continuación los grupos fosfito modificantes protegen a los grupos hidroxilo 5' sin reaccionar y clivar los oligonucleótidos del soporte sólido y finalmente aislar y purificar el producto de la síntesis.

En aún otra realización, los ácidos nucleicos se producen a gran escala en plásmidos, (véase, por ejemplo, Sambrook, et al., Molecular Cloning: A Laboratory Manual, Cold Spring Harbor Laboratory Press, Nueva York, 1989) y se separan en trozos más pequeños o se administran como un todo.

En aún otra realización, los ácidos nucleicos se preparan a partir de secuencias de ácido nucleico existentes (por ejemplo, ADNc o genómico) usando técnicas conocidas por el especialista en la técnica, tal como empleando enzimas de restricción, exonucleasas o endonucleasas. Los ácidos nucleicos preparados de esta manera son ácidos nucleicos aislados. El término ácido nucleico abarca ácidos nucleicos antineoplásicos sintéticos y aislados.

En otra realización, los ácidos nucleicos de esqueleto modificado, tal como los que contienen enlaces fosforotioato, se sintetizan usando técnicas automáticas empleando, por ejemplo, química de fosforamidato o H-fosfonato. Los aril- y alquilfosfonatos se pueden elaborar, por ejemplo, como se describe en la Patente de EE.UU. N°: 4.469.863. Los alquilfosfotriésteres, en los cuales la porción de oxígeno con carga es alquilada como se describe en Patente de EE.UU. N°: 5.023.243 y en la Patente Europea N°: 092.574, se pueden preparar mediante síntesis automática en fase sólida usando los reactivos disponibles comercialmente.

Los métodos para elaborar otras modificaciones y sustituciones en el esqueleto de ácidos nucleicos ya fueron descritos (Uhlmann, E. y Peyman, A., Chem. Rev. 90:544, 1990; Goodchild, J., Bioconjugate Chem. 1 : 165, 1990).

Las descripciones de la síntesis de ácidos nucleicos bloqueados son conocidas por el especialista en la técnica, por detalles adicionales véase, por ejemplo, Wengel, J., Chem. Res., 120, S. 5458-5463 (1999) o Koch, T., J. Physics Condese ?feífer 15, S. 1861-1871 (2003).

En una realización, los fosforotioatos se sintetizan usando técnicas automáticas, empleando una química de ya sea fosforamidato o H-fosfonato. Los aril- y alquilfosfonatos se pueden elaborar, por ejemplo, como se describe en la Patente de EE.UU. N°: 4.469.863; y los alquilfosfotriésteres (en los cuales la porción de oxígeno con carga está alquilada como se describe en la Patente de EE.UU. N°: 5.023.243 y en la Patente Europea N°: 092.574) se pueden preparar mediante síntesis automática en fase sólida usando reactivos disponibles comercialmente. Los métodos para elaborar otras modificaciones y sustituciones en el esqueleto de ADN ya fueron descritos (Uhlmann, E. y Peyman, A., Chem. Rev. 90:544, 1990; Goodchild, J., Bioconjugate Chem. 1:165, 1990).

Otras fuentes de ácidos nucleicos de utilidad de acuerdo con la invención incluyen vectores virales y bacterianos estándar, muchos de los cuales se encuentran disponibles comercialmente. En el sentido más amplio, un "vector" es cualquier material de ácido nucleico que comúnmente se usa para distribuir y facilitar la transferencia de ácidos nucleicos a las células. El vector, tal como se utiliza en la presente, puede ser un vector vacío o un vector que lleva un gen que pueda expresarse. En el caso cuando el vector lleva un gen, dicho vector generalmente transporta dicho gen a las células blanco con una menor degradación con relación al grado de degradación que daría como resultado la ausencia del vector. En este caso, el vector incluye opcionalmente secuencias de expresión genética para mejorar la expresión del gen en las células blanco, tal como células inmunes, pero no es necesario que el gen se exprese en la célula.

Los oligonucleótidos y análogos de ollgonucleótidos de esta invención, que son sinónimos de los derivados activos de esta invención, se pueden usar para diagnóstico, en productos terapéuticos y como reactivos y conjuntos de elementos para investigación. Para uso terapéutico, el oligonucleótido o análogo de oligonucleótido es administrado a un animal, en especial un ser humano, que padece una enfermedad, más preferentemente que sufre de un tumor y/o metástasis.

En una realización preferida, el oligonucleótido antisentido IL-10 se usa en la preparación de una composición farmacéutica para el tratamiento de cáncer y/o que inhibe la formación de metástasis.

En una realización preferida, los oligonucleótidos antisentido TGF-beta 1, TGF-beta 2, TGF-beta 3, moléculas de adhesión celular (CAM), integrinas, selectinas, metaloproteasas (MMP), sus inhibidores tisulares (TIMP) y/o interleuquina 10 constituyen objetos particulares de la presente invención. Por lo tanto, la presentación de los oligonucleótidos y los derivados activos de los mismos acordes con la presente invención en vehículos aceptables para uso farmacéutico es de gran utilidad. Esto es especialmente así para el tratamiento de enfermedades tales como distintos tipos de cáncer y metástasis indeseados.

En una realización, los oligonucleótidos y/o derivados activos de los mismos, son de utilidad en el tratamiento de distintos tipos de cáncer o carcinomas indeseados tal como, pero en un sentido no limitativo, carcinoma de los ductos biliares, carcinoma de vejiga, tumor de cerebro, cáncer de mama, carcinoma broncogénico, carcinoma de riñon, cáncer cervical, coriocarclnoma, cistadenocarcinoma, carcinoma embrionario, carcinoma epitelial, cáncer de esófago, carcinoma cervical, carcinoma de colon, carcinoma colorrectal, cáncer de endometrio, cáncer de vesícula, cáncer gástrico, cáncer de cabeza, carcinoma de hígado, carcinoma de pulmón, carcinoma de médula, cáncer de cuello, carcinoma broncogénica/de pulmón de células no pequeñas, cáncer de ovario, carcinoma de páncreas, carcinoma papilar, adenocarcinoma papilar, cáncer de próstata, carcinoma de intestino delgado, carcinoma de próstata, cáncer rectal, carcinoma de células renales, cáncer de piel, carcinoma broncogénica/de. pulmón de células pequeñas, carcinoma de células escamosas, carcinoma de glándulas sebáceas, carcinoma testicular, cáncer uterino.

Neuromas acústicos, neurofibromas, tracomas y granulomas piogénicos; tumores premalignos, astrocitoma, blastoma, tumor de Ewing, craniofaringlioma, ependimoma, meduloblastoma, glioma, hemanglioblastoma, linfoma de Hodgkins, meduloblastoma, leucemia, mesotelioma, neuroblastoma, neurofibroma, linfoma no Hodgkins, pinealoma, retinoblastoma, retinoblastoma, sarcoma (incluyendo angiosarcoma, condrosarcoma, endoteliosarcoma, fibrosarcoma, leiomiosarcoma, llposarcoma, linfangioendoteliosarcoma, linfangiosarcoma, melanoma, meningioma, miosarcoma, ollgodendroglioma, sarcoma osteogénico, osteosarcoma), seminoma, tracomas, tumor de Wilm.

En una realización, los oligonucleótidos de esta invención se administran en soluciones acuosas isotónicas apropiadas para una aplicación intravenosa así como una administración ¡ntratumoral. Otras composiciones farmacéuticas de la presente invención comprenden oligonucleótidos con uno o más vehículos, excipientes y/o adyuvantes no tóxicos, aceptables para uso farmacéutico (denominados en su conjunto en la presente como "material de vehículo"). Los materiales de vehículo son aceptables en el sentido que son compatibles con los otros ingredientes de la composición y que no son nocivos para el receptor. Las composiciones farmacéuticas de la presente invención pueden adaptarse para su administración por cualquier ruta adecuada por selección de los materiales de vehículo apropiados y una dosificación de oligonucleótidos eficaz para el tratamiento pretendido. Por ejemplo, estas composiciones se pueden preparar en una forma adecuada para su administración por vía oral, iptravascular, intraperitoneal, subcutánea, intramuscular, rectal o intratumoral. Por consiguiente el material de vehículo empleado puede ser sólido o líquido o ambos, y se formula preferentemente con el compuesto como una composición de dosis unitaria, por ejemplo, una tableta, que puede contener entre aproximadamente 1% y aproximadamente 95%, en peso de oligonucleótidos. La concentración de los oligonucleótidos en la solución depende del volumen que será administrado. Dichas composiciones farmacéuticas de la invención se pueden preparar mediante cualquiera de las técnicas bien conocidas de farmacia, que consiste esencialmente en el mezclado de los componentes.

La composición farmacéutica de esta invención se administra sola o en mezclas. Una mezcla comprende uno o más oligonucleótidos de esta invención. Dichas al menos dos sustancias en la presente también se denominan compuestos.

En una realización, dichos al menos dos compuestos pueden estar mezclados puros o hallarse en un vehículo aceptable para uso farmacéutico. En aún otra realización, dichos al menos dos compuestos de la composición farmacéutica están separados y puros o están separados y se hallan en un vehículo aceptable para uso farmacéutico. En una realización, dichos al menos dos componentes se encuentran en el mismo vehículo aceptable para uso farmacéutico; en aún otra realización, dichos al menos dos componentes se encuentran en diferentes vehículos aceptables para uso farmacéutico.

Formas de administración La administración de las composiciones farmacéuticas de la presente invención se puede llevar a cabo mediante cualquier medio conocido por el especialista en la técnica. Las rutas de administración incluyen, en un sentido no limitativo, la vía oral, intranasal, intratraqueal, ocular, pulmonar, vaginal, rectal, parenteral (por ejemplo intramuscular, intradérmica, intravenosa, ¡ntratumoral o subcutánea o por inyección directa), tópica, transdérmica.

En una realización de una composición farmacéutica para el tratamiento de distintos tipos de cáncer o carcinomas indeseados, la composición farmacéutica se administra por medio de un implante biodegradable, polimérico o catéteres implantados.

El término "composición farmacéutica" se refiere a los líquidas o las sustancias de esta composición puros y/o combinados con vehículos aceptables para uso farmacéutico.

El término "vehículo aceptable para uso farmacéutico" se refiere a uno o más rellenos, diluyentes o sustancias encapsulantes compatibles, sólidos o líquidos, que sean adecuados para su administración a un ser humano u otro animal vertebrado. El término "vehículo" indica un ingrediente orgánico o inorgánico, natural o sintético, con el cual se combina el ingrediente activo para facilitar la aplicación. Los componentes de las composiciones farmacéuticas también se pueden mezclar con los compuestos de la presente invención, y entre sí, de una manera tal que no se produzca una interacción que dañaría sustancialmente la eficiencia farmacéutica deseada.

Dichos vehículos permiten formular a los compuestos de la invención como tabletas, tabletas recubiertas, granulos, polvos, pildoras, grageas, (micro)cápsulas, líquidos, geles, jarabes, suspensiones espesas, suspensiones, emulsiones y semejantes, para la ingestión oral por un sujeto a tratar.

Las composiciones farmacéuticas también pueden incluir granulos, polvos, tabletas, tabletas recubiertas, (micro)cápsulas, supositorios, jarabes, emulsiones, suspensiones, cremas, gotas, recubiertos sobre partículas de oro microscópicas o preparaciones con una liberación prologada de los compuestos activos, en cuya preparación se emplean los excipientes y aditivos y/o auxiliares comúnmente usados, tales como desintegrantes, aglutinantes, agentes de recubrimiento, agentes de disolución, lubricantes, saborizantes, edulcorantes o solubilizantes como se describió previamente.

Por una revisión breve de los presentes métodos de administración de drogas, véase Langer, Science 249:1527-1533, 1990, cuyo contenido se incorpora en la presente a modo de referencia. Para una administración oral, la composición farmacéutica se administra sola sin vehículos farmacéuticos o se formula fácilmente combinando uno o más compuestos con vehículos aceptables para uso farmacéutico.

En una realización, las composiciones farmacéuticas para uso oral se obtienen en un excipiente sólido, opcionalmente moliendo la mezcla resultante y procesando ia mezcla de granulos, agregando después los auxiliares adecuados, si se deseara, para obtener tabletas o núcleos de grageas. Los excipientes adecuados son, en particular, rellenos tales como azúcares, incluyendo lactosa, sacarosa, manitol o sorbitol; preparaciones de celulosa tales como, por ejemplo, almidón de maíz, almidón de trigo, almidón de arroz, almidón de papa, gelatina, goma tragacanto, metilcelulosa, hidroxipropilmetilcelulosa, carboximetllcelulosa de sodio y/o polivinilpirrolidona (PVP).

En aún otra realización, se agregan agentes desintegrantes, tal como polivinilpirrolidona entrecruzada, agar o ácido algínico o una sal del mismo tal como, alginato de sodio. Opcionalmente, las formulaciones orales también se pueden formular en salina o soluciones amortiguadoras para neutralizar las condiciones acidas internas.

En aún otra realización, los núcleos de las grageas se proveen con recubrimientos adecuados. Para este fin, se pueden usar soluciones concentradas de azúcar, que opcionalmente puede contener goma arábiga, talco, polivinilpirrolidona, gel de carbopol, polietilenglicol y/o dióxido de titanio, soluciones de laca y solventes o mezclas de solventes orgánicos adecuados.

En aún otra realización, se agregan productos colorantes o pigmentos a las tabletas o recubrimientos de grageas para su identificación o para caracterizar diferentes combinaciones de dosis de compuesto activo.

En otra realización, las preparaciones farmacéuticas que se pueden usar oralmente incluyen cápsulas duras hechas de gelatina, así como cápsulas blandas, selladas, hechas de gelatina y un plastlficante, tal como glicerol o sorbitol. En una realización, las cápsulas duras contienen al ingrediente activo en una mezcla con un relleno tal como lactosa, aglutinantes tal como almidones y/o lubricantes tal como talco o estearato de magnesio y, opcionalmente, estabilizantes. En otra realización de las cápsulas blandas, los compuestos activos se disuelven o suspenden en líquidos adecuado, tal como aceites grasos, parafina líquida o polietilenglicoles líquidos. Además, se pueden agregar estabilizantes.

En aún otra realización, se usan microesferas formuladas para administración oral, bien conocidas por el especialista en la técnica.

Las formulaciones para una administración oral se encuentran como dosificaciones adecuadas para dicha administración.

En aún otra realización, para una administración bucal, las composiciones pueden tomar la forma de tabletas o pastillas formuladas de manera convencional.

Inhalación En aún otra realización, para la administración por inhalación, los compuestos para usar de acuerdo con la presente invención se pueden administrar convenientemente en la forma de un rociador para aerosol, a partir de envases presurizados o un nebulizador, con el uso de un propelente adecuado, por ejemplo, diclorodifluorometano, triclorofluorometano, diclorotetrafluoroetano, dióxido de carbono u otro gas adecuado. En el caso de un aerosol presurizado, la unidad de dosificación puede determinarse suministrando una válvula para administrar una cantidad medida. Se pueden formular cápsulas y cartuchos de, por ejemplo, gelatina para su uso en un inhalador o insuflador que contienen una mezcla en polvo del compuesto y una base de polvo adecuada, tal como lactosa o almidón.

Los vehículos farmacéuticos adecuados son, por ejemplo, soluciones acuosas o salinas para inhalación, microencapsuladas, para inclusiones, contenidas en liposomas, para nebulizaciones, para aerosoles.

En aún otra realización, los vehículos aceptables para uso farmacéutico de los compuestos para una administración parenteral, intratecal, intraventricular o intratumoral incluyen soluciones acuosas estériles que también pueden contener soluciones amortiguadoras, diluyentes y otros aditivos adecuado tales como, pero en un sentido no limitativo, mejoradores de la penetración, compuestos transportadores y otros vehículos o excipientes aceptables para uso farmacéutico.

En aún otra realización, para una administración sistémica de los compuestos se encuentran en vehículos farmacéuticos para administración parenteral por inyección (por ejemplo, por inyección de un bolo o una infusión continua). Las formulaciones para inyectables se pueden presentar en una forma de dosificación unitaria, por ejemplo, en ampollas o en recipientes para múltiples dosis, con la adición de un conservante. Las composiciones farmacéuticas se encuentran en formas tales como suspensiones, soluciones o emulsiones en vehículos oleosos o acuosos, y contienen agentes de formulación tales como agentes de suspensión, estabilizantes y/o de dispersión.

En una realización, los vehículos farmacéuticos para una administración parenteral incluyen soluciones acuosas de los compuestos activos en formas solubles en agua.

En aún otra realización, se preparan suspensiones de al menos un oligonucleótido como suspensiones inyectables oleosas apropiadas. Los solventes o vehículos lipofílicos adecuados incluyen aceites grasos tales como aceite de sésamo, o esteres de ácidos grasos sintéticos, tales como oleato de etilo o triglicéridos o liposomas. Las suspensiones inyectables acuosas comprenden sustancias que incrementan la viscosidad de la suspensión, tal como carboximetilcelulosa de sodio, sorbitol o dextrano. Opcionalmente, la suspensión también puede contener estabilizantes adecuados o agentes que incrementan la solubilidad de los compuestos para poder preparar soluciones altamente concentradas.

En aún otra realización, los compuestos activos se pueden encontrar en la forma de polvos que serán reconstituidos con un vehículo adecuado, por ejemplo, agua estéril libre de pirógenos, antes del uso o secados sobre un objeto afilado para ser raspado en la piel.

En aún otra realización, los compuestos se formulan como composiciones rectales o vaginales tales como supositorios o enemas de retención que contienen, por ejemplo, las bases de supositorios convencionales tales como manteca de cacao u otros glicéridos.

En aún otra realización, los compuestos se formulan como una preparación depot. En una realización, dichas formulaciones de acción prolongada se formulan con materiales poliméricos o hidrofóbicos adecuados (por ejemplo, como una emulsión en un aceite aceptable) o resinas de intercambio ¡ónico o como derivados escasamente solubles, por ejemplo, como una sal escasamente soluble.

En otras realizaciones, los sistemas de administración incluyen sistemas de administración de liberación en el tiempo, de liberación demorada o de liberación sostenida. Dichos sistemas permiten evitar administraciones repetidas de los compuestos, mejorar la conveniencia para el sujeto y para el médico. Hay muchos tipos de sistemas de administración de liberación y son conocidos por los especialistas en la técnica.

En una realización, el sistema de administración incluye sistemas con bases de polímeros, tales como poli(lactida-glicolida), copolioxalatos, policaprolactonas, poliesteramldas, poliortoésteres, ácido polihidroxibutírico y polianhídridos. Las microcápsulas de los polímeros anteriores que contienen drogas se describen, por ejemplo, en la Patente de EE.UU. N°: 5.075.109.

En otra realización, los sistemas de administración incluyen sistemas no poliméricos que son, por ejemplo, lípidos incluyendo esterales tal como colesterol, esteres de colesterol y ácidos grasos o grasas neutras tal como mono-, di-y triglicéridos; sistemas de liberación con hidrogel; sistemas silásticos; sistemas basados en péptidos; recubrimientos de cera; tabletas comprimidas usando aglutinantes y excipientes convencionales; implantes parcialmente fusionados; y semejantes.

Los ejemplos específicos incluyen, en un sentido no limitativo: (a) sistemas erosionables, en los cuales un agente de la Invención está contenido en una forma dentro de una matriz tales como las descritas en las Patentes de EE.UU. N°: 4.452.775, 4.675.189 y 5.736.152, y (b) sistemas de difusión, en los cuales el componente activo permea a una velocidad controlada de un polímero tales como las descritas en las Patentes de EE.UU. N°: 3.854.480, 5.133.974 y 5.407.686. Además, se pueden usar sistemas de administración con hardware basados en bombas, algunos de los cuales están adaptados para ser implantados.

En aún otras realizaciones, el antagonista y el agente antineoplásico se formulan con GELFOAM, un producto comercial que consiste de fibras de colágeno modificado que se degradan lentamente.

En una realización, las composiciones farmacéuticas también comprenden vehículos o excipientes en fase sólida o gel adecuados. Los ejemplos de tales vehículos o excipientes incluyen, en un sentido no limitativo, carbonato de calcio, fosfato de calcio, diversos azúcares, almidones, derivados de celulosa, gelatina y polímeros tales como polietilenglicoles.

En una realización, los oligonucleótidos de esta invención se administran puros o en la forma de una sal aceptable para uso farmacéutico. Las sales deben ser aceptables para uso farmacéutico, pero se pueden emplear convenientemente sales no aceptables para uso farmacéutico para preparar las sales aceptables para uso farmacéutico de los mismos. Dichas sales incluyen, en un sentido no limitativo, las que se pueden preparar a partir de los siguientes ácidos: clorhídrico, bromhídrico, sulfúrico, nítrico, fosfórico, maleico, acético, salicílico, p-toluensulfónico, tartárico, cítrico, metansulfónico, fórmico, malónico, succínico, naftalen-2-sulfónico y bencensulfónico. Además, dichas sales se pueden preparar como sales de metales alcalinos o alcalino-térreos, tal como sales de sodio, potasio o calcio del grupo ácido carboxílico.

En una realización, los agentes amortiguadores incluyen, en un sentido no limitativo: ácido acético y una sal (1-2% p/v); ácido cítrico y una sal (1-3% p/v); ácido bórico y una sal (0,5-2,5% p/v); y ácido fosfórico y una sal (0,8-2% p/v).

Los conservantes adecuados incluyen cloruro de benzalconlo (0,003-0,03% p/v); clorobutanol (0,3-0,9% p/v); parabeno (0,01-0,25% p/v) y timerosal (0,004-0,02% p/v).

En una realización, el vehículo aceptable para uso farmacéutico para una administración tópica de al menos dos compuestos de una composición farmacéutica de acuerdo con esta invención incluye parches transdérmicos, ungüentos, lociones, cremas, geles, gotas, supositorios, sprays, líquidos y polvos. Los vehículos farmacéuticos convencionales, las bases acuosas, en polvo u oleaginosas, espesantes y semejantes pueden ser necesarios o deseables. En aún otra realización, son de utilidad para preservativos, guantes y semejantes recubiertos.

En aún otra realización, las composiciones farmacéuticas también incluyen mejoradores de la penetración con el fin de mejorar la administración alimentaria. Los mejoradores de la penetración se pueden clasificar como pertenecientes a uno de cinco grandes categorías, a saber, ácidos grasos, sales biliares, agentes quelantes, agentes tensioactivos y agentes no tensioactivos (Lee et al., Critical Reviews in Therapeutic Drug Carrier Systems, 1991, 8, 91-192; Muranishi, Crítical Reviews in Therapeutic Drug Carrier Systems, 1990, 7, 1-33). Se puede incluir uno o más mejoradores de la penetración de uno o más de estas categorías generales.

Los diversos ácidos grasos y los derivados de los mismos que actúan como mejoradores de la penetración incluyen, por ejemplo, ácido olelco, ácido láurico, ácido cáprico, ácido mirístico, ácido palmítico, ácido esteárico, ácido linoleico, ácido linolénico, dicaprato, tricaprato, recinoleato, monooleína (también denominada 1-monooleoil-rac-glicerol), dilaurina, ácido caprílico, ácido araquidónico, 1-monocaprato de glicerilo, 1-dodecilazacicloheptan-2-ona, acilcarnitinas, acilcolinas, mono- y diglicéridos y sales aceptables para uso fisiológico de los mismos (es decir, oleato, laurato, caprato, miristato, palmitato, estearato, linoleato, etc.) (Lee et al., Crítical Reviews in Therapeutic Drug Carrier Systems, 1991, 8:2, 91-192; Muranishi, Critical Reviews in Therapeutic Drug Carrier Systems, 1990, 7:1 , 1-33; El-Harirl et al., J. Pharm. Pharmacol., 1992, 44, 651-654). Los ejemplos de algunos ácidos grasos preferidos en la presente son caprato de sodio y laurato de sodio, usados solos o en combinación a concentraciones entre 0,5% y 5%.

El rol fisiológico de la bilis incluye la facilitación de la dispersión y absorción de lípidos y vitaminas solubles en grasas (Brunton, capítulo 38, en: Goodman & Gilman's The Pharmacological Basis of Therapeutics, 9a Ed., Hardman et al., eds., McGraw-Hill, Nueva York, N.Y., 1996, páginas 934-935). Hay diversas sales biliares naturales, y derivados sintéticos de los mismos, que actúan como mejoradores de la penetración. Por consiguiente, el término "sal biliar" incluye cualquiera de los componentes naturales de la bilis, así como cualquiera de los derivados sintéticos de los mismos. Una sal biliar preferida en la presente es el ácido quenodeoxlcóllco (CDCA) (Sigma Chemical Company, St. Louis, Mo.), usado en general a concentraciones entre 0,5% y 2%.

Se pueden usar formulaciones complejas que comprenden uno o más mejoradores de la penetración. Por ejemplo, las sales biliares se pueden usar en combinación con ácidos grasos para obtener formulaciones complejas. Las combinaciones preferidas incluyen CDCA combinado con caprato de sodio o laurato de sodio (en general entre 0,5% y 5%).

En una realización, se usan otros agentes quelantes que incluyen, en un sentido no limitativo, etilendiamintetraacetato disódica (EDTA), ácido cítrico, salicilatos (por ejemplo, salicilato de sodio, 5-metoxisallcilato y homovanilato), derivados N-acilo de colágeno, lauret-9 y derivados N-amlnoacilo de beta-dicetonas (enaminas)(Lee et al., Critical Reviews in Therapeutic Drug Carrier Systems, 1991, 8:2, 92-192; Muranishi, Critical Reviews in Therapeutic Drug Carrier Systems, 1990, 7:1 , 1-33; Buur et al., J. Control Reí., 1990, 14, 43-51). Los agentes quelantes tienen la ventaja adicional de servir también como inhibidores de ADNasa.

En aún otra realización, se usan otros agentes tensioactivos. Los agentes tensioactivos incluyen, por ejemplo, laurilsulfato de sodio, polioxietilen-9-lauriléter y polioxietilen-20-cetiléter (Lee et al., Critical Reviews in Therapeutic Drug Carrier Systems, 1991 , 8:2, 92-191); y emulsiones perfluoroquímicas, tal como FC-43 (Takahashi et al., J. Pharm. Pharmacol., 1988, 40, 252-257).

Los agentes no tensioactivos incluyen, por ejemplo, ureas insaturadas cíclicas, derivados 1 -alquil- y 1 -alquenilazaciclo-alcanona (Lee et al., Critical Reviews in Therapeutic Drug Carrier Systems, 1991 , 8:2, 92-191); y agentes antiinflamatorios no esteroldes tales como diclofenac sódico, ¡ndometacina y fenilbutazona (Yamashita et al., J. Pharm. Pharmacol., 1987, 39, 621-626).

En una realización, las composiciones farmacéuticas de la presente Invención contienen además otros componentes adjuntos que convencionalmente se encuentran en las composiciones farmacéuticas, a los niveles de uso establecidos en la técnica. Así, por ejemplo, las composiciones pueden contener materiales farmacéuticamente activas compatibles adicionales, tales como, por ejemplo, antipruríticos, astringentes, anestésicos locales o agentes antiinflamatorios, o pueden contener materiales adicional de utilidad en la formulación física de las diversas formas de dosificación de la composición de la presente invención, tales como colorantes, agentes saborizantes, conservantes, antioxidantes, opacantes, agentes espesantes y estabilizantes. Sin embargo, cuando se agregan dichos materiales no deberían interferir indebidamente con las actividades biológicas de los componentes de las composiciones de la invención.

En las realizaciones de oligonucleótidos de utilidad en la preparación de una composición farmacéutica para inhibir la formación de metástasis en el tratamiento de cáncer o para el tratamiento de distintos tipos de cáncer tales como cáncer de colon colorrectal, carcinoma hepatocelular, leucemia, linfoma, melanoma, carcinoma de pulmón de células no pequeñas, carcinoma de ovario, carcinoma de páncreas, carcinoma de próstata, cáncer de tejidos blandos, se aplican cantidades eficaces de al menos un oligonucleótido antisentido. En otras realizaciones, se aplican cantidades eficaces de los derivados activos. En aún otras realizaciones, los oligonucleótidos, o los derivados activos de los mismos, de utilidad en la preparación de una composición farmacéutica para inhibir la formación de metástasis en el tratamiento de cáncer o para el tratamiento de distintos tipos de cáncer tales como cáncer renal, cáncer de endometrio, osteosarcoma, mesotelioma, mieloma múltiple, cáncer de esófago o cualquier otro tipo de cáncer mencionados en esta invención, se aplican en cantidades eficaces. Los antagonistas, oligonucleótidos y los derivados activos de los mismos no sólo se usan en la preparación de composiciones farmacéuticas, sino que también se usan para el tratamiento de los respectivos tipos de cáncer en cantidades eficaces. En general, el término "cantidad eficaz" de un oligonucleótido antisentido, derivado activo o antagonista se refiere a la cantidad necesaria o suficiente para lograr un efecto biológico deseado. Específicamente, la cantidad eficaz es aquella cantidad que reduce el índice de formación, o la inhibe del todo, de distintos tipos de cáncer o carcinomas o inhibe la formación de metástasis. Por ejemplo, cuando el sujeto padece de un cáncer indeseado, una cantidad eficaz es aquella cantidad que disminuye o elimina al cáncer indeseado. Además, una cantidad eficaz puede ser aquella cantidad que impida un incremento o cause una disminución del nuevo cáncer ¡ndeseado y/o reduzca la formación de metástasis.

La cantidad eficaz varía dependiendo de si la composición farmacéutica se usa dosificaciones simples o múltiples y de si solamente hay uno o numerosos oligonucleótidos antisentldo dentro de la composición farmacéutica.

Las dosificaciones mencionadas en la presente son para adultos. Para el especialista en la técnica resultará claro que es necesario adaptar estas dosificaciones si el ser humano es un niño, un paciente afectado por una enfermedad adicional u otras circunstancias. Asimismo, la cantidad eficaz también debe ser adaptada si se trata un animal lo que también se encuentra dentro del alcance de esta invención.

La dosificación eficaz depende también del método y del medio de administración, que puede ser localizada o sistémica. Por ejemplo, en algunas aplicaciones, como en el tratamiento de melanoma o cáncer oftálmico, la combinación se administra preferentemente en un vehículo tópico u oftálmico.

En una realización, las dosis sujeto de los oligonucleótidos descritos en la presente varían típicamente en un rango entre aproximadamente 0,1 µg y aproximadamente 10 mg por administración, que según la aplicación pueden ser administradas por vía oral, diariamente, semanalmente o mensualmente y cualquier otro período de tiempo comprendido en dichos lapsos. En aún otra realización, las dosis varían en un rango entre aproximadamente 10 µg y aproximadamente 5 mg por administración o entre aproximadamente 100 µg y aproximadamente 1 mg, con 1-10 administraciones separadas entre sí por horas, días o semanas. Sin embargo, en algunas realizaciones se pueden usar dosis en rangos aún 2 a 100 veces mayores o menores que las dosis típicas descritas previamente.

En una realización de esta invención, dicho al menos un oligonucleótido de una composición farmacéutica de acuerdo con esta invención es un ollgonucleótido antisentido que inhibe la producción de TGF-beta 1, TGF-beta 3 TGF-beta 1, moléculas de adhesión celular (CAM), integrinas, selectinas, metaloproteasas (MMP), sus inhibidores tisulares (TIMP) y/o interleuquina 10, es administrado a un dosis que varía en un rango entre aproximadamente 1 µg/kg/día y aproximadamente 100 mg/kg/día o entre aproximadamente 10 µg/kg/día y aproximadamente 10 mg/kg/día o entre aproximadamente 100 µg/kg/día y aproximadamente 1 mg/kg/día.

EJEMPLOS A menos que se Indique de otra manera, las secuencias usadas en los ensayos se usaron como fosforotioatos. El término TGF-IS1 , respectivamente TGF-S2, en el contexto de esta invención es sinónimo de TGF-beta 1, respectivamente TGF-beta 2. AP12009 y AP11014 son sinónimos de oligonucleótidos antisentido, AP12009 es un oligonucleótido Antisentido complementaria del ARNm de TGF-beta 2 y AP11014 es un oligonucleótido Antisentido complementaria del ARNm de TGF-beta 1.

Ejemplo 1 Condiciones de cultivo celular para los sistemas de prueba Las líneas celulares evaluadas fueron: Cáncer de colon: HCT-116 Melanoma: MER 191a, MER 116, MES 100a NSCLC: SW 900, NCI-H661 Cáncer de ovario: EFO-21 , Coló 704 Cáncer de páncreas: PATU-8902, Hup-T3, Hup-T4 Cáncer de próstata: PC-3, DU-145 Las líneas celulares se obtuvieron de American Type Culture Collection (ATCC), de Germán Collection of Microorganisms and Cell Cultures. Todas las células se cultivaron según las instrucciones del proveedor. Otras líneas celulares bajo prueba: Cáncer hepatocelular: HepG2 Melanoma RPMI-7951, SK-Mel3 NSCLC: A-549 Cáncer renal Caki-1 También se obtuvieron líneas celulares de Cell Line Service (CLS).

Ejemplo 2 Ensayo de citotoxicidad mediada por células: Para la generación de los sobrenadantes de células tumorales, se cultivaron células en medio de cultivo suplementado con FCS 1% y Panexina 3% (Pan Biosystems) para reducir la cantidad de TGF-ß en el medio. Las células fueron tratadas con lipofectina o con la sustancia de prueba con lipofectina durante dos días consecutivos o se dejaron sin tratar. Se tomaron sobrenadantes de cultivo 3 días después del último tratamiento con lipofectina. El TGF-beta producido por las células tumorales era activado por HCl 1 N (dilución 1:20) durante 10 min a RT. Para la neutralización se agregó NaOH. Se incubaron monocitos de sangre periférica humana (PBMC) aislados de donantes sanos con los sobrenadantes de las células tumores en presencia de IL-2 (10 ng/ml) para la generación de las células asesinas activadas con linfoquina. Para bloquear el TGF-beta 1 activado se agregó un anticuerpo específico de TGF-beta 1 (1 µg/ml, R&D Systems). Después de 3 días, se determinó la actividad citotóxica de células LAK en un ensayo CARE-LASS de 4 hs contra la respectiva línea celular de cáncer como blanco.

Para TGF-beta 2 se aplicó el mismo protocolo. En lugar del anticuerpo específico de TGF- beta 1 se agregó un anticuerpo específico de TGF-beta 2. En experimentos para medir TGF-beta 1 o TGF-beta 2 debajo de la medición de células LAK, se determinó la actividad citotóxica de PBMC en un ensayo CARE-LASS de 4 hs.

Ejemplo 3 Ensayo de proliferación con lipofectina® Se cultivaron aproximadamente 75.000 células por mililitro de la respectiva línea de células tumorales en placas de microtitulación de fondo plano de 12 cavidades en medio MEM-Dulbecco suplementado con suero fetal bovino 10% (FCS, Gibco), según las recomendaciones de ATCC (American Type Culture Collection). Después de 24 horas y después de 48 horas, las células fueron tratadas con la concentración indicada de los respectivos oligonucleótidos antisentido específicos de TGF-beta 1 durante 6 hs. Para mejorar la captación celular, se agregó más Lipofectina® (Invitrogen, EE.UU.) a las concentraciones indicadas durante las 2 x 6 horas. Algunos experimentos se condujeron sin adición de Lipofectina®. Entre estos dos períodos de 6 hs y durante los 3 días finales las células fueron tratadas con una concentración 5 µM del oligonucleótido antisentido específico de TGF-beta 1 mencionado en ausencia de Lipofectina®. Las células control se cultivaron en medio puro por el mismo período. Además, se trataron células de referencia con la concentración indicada de Lipofectina®.

En lugar del medio MEM-Dulbecco, se pueden usar otros medios de cultivo de acuerdo con las recomendaciones de los proveedores de las líneas celulares.

Finalmente, se cuantificó el número de células en todas las muestras por coloración de las células con azul de Trypan y recuento de las mismas en un hemocitómetro "Neubauer".

Como alternativa, la cuantlficación de las células vivas se realizó con el ensayo EZ4U de acuerdo con el protocolo del proveedor, o mediante recuento celular electrónico con el contador Coulter Z2 (Beckmann) de acuerdo con las instrucciones del proveedor.

Además, se midieron las concentraciones de TGF-beta 1 en los sobrenadantes usando el ensayo de inmunoabsorcisn ligado a enzimas para TGF-beta 1 (ELISA TGF-beta 1, R&D Systems, EE.UU.) de acuerdo con las instrucciones del proveedor. Se restaron los valores del medio suplementado con suero sin células para no tener en cuenta los valores de TGF-beta 1 derivado del suero.

Este ensayo de proliferación también se usó para medir los niveles de TGF-beta 2. En tal caso, en lugar de los oligonucleótidos antisentldo específicos de TGF-beta 1, se usaron oligonucleótidos antisentido específicos de TGF-beta 2 y en lugar de medir las concentraciones de TGF-beta 1 , se midieron las concentraciones de TGF-beta 2 en los sobrenadantes usando un ensayo de ¡nmunoabsorclón ligado a enzimas para TGF-beta 2 (ELISA TGF-beta 2).

Ejemplo 4 Ensayo de proliferación sin adición de Lipofectina® Se cultivaron aproximadamente 25.000-200.000 células por mililitro, dependiendo del diámetro celular y la velocidad de proliferación celular en placas de microtítulación de fondo plano de 12 cavidades en medio MEM-Dulbecco suplementado con suero fetal bovino 10% (FCS, Gibco), según las recomendaciones de ATCC (American Type Culture Collection). Además, se agregaron ollgonucleótidos antisentido específicos de TGF-beta 1 durante tres días, en tanto las células control permanecieron sin tratar durante los tres días.

Después de los tres días, se cuantificó el número de células en todas las muestras por coloración de las mismas con el método de azul de Trypan y recuento de las mismas con un hemocitómetro "Neubauer".

Además, se midieron las concentraciones de TGF-beta 1 en los sobrenadantes el día 3 con el ensayo de inmunoabsorción ligado a enzimas para TGF-beta 1 (ELISA TGF-beta 1 , Genzyme, Cambridge, MA, EE.UU.) de acuerdo con las instrucciones del proveedor. Se restaron los valores del medio suplementado con suero sin células para no tener en cuenta los valores de TGF-beta 1 derivado de suero.

En otros ensayos de proliferación, se agregaron oligonucleótidos antisentido específicos de TGF-beta 2. En estos experimentos se midieron los niveles de TGF-beta 2 en los sobrenadantes del día 3. En los experimentos de 6 días, usados para las líneas celulares de melanoma, se midieron los niveles de TGF-beta 1 o de TGF-beta 2 el día 3 y el día 6. Los niveles de TGF-beta 1 y TGF-beta 2 se midieron con el ensayo de inmunoabsorción ligado a enzimas para TGF-beta 1 o TGF-beta 2 (provistos por R&D Systems).

En los ensayos de proliferación de 6 días, se cambió el medio después de los primeros tres días y las células fueron tratadas durante los tres días restantes con los respectivos oligonucleótidos antisentido a las concentraciones indicadas. A continuación, se cuantificó el número de células después de tres y seis días.. La cuantificación de las células vivas se efectuó con el ensayo EZ4U de acuerdo con el protocolo del proveedor o por recuento celular electrónico con el contador Coulter Z2 (Beckmann) de acuerdo con las instrucciones del proveedor.

En lugar del medio MEM-Dulbecco se usaron otros medios de cultivo suplementados con suero fetal bovino 10% (FCS, Gibco), según las recomendaciones de los proveedores de las distintas líneas celulares.

Ejemplo 5 Ensayo de raspado Se sembraron células tumorales (900.000/cavldad aproximadamente) en placas de 6 cavidades. Al día siguiente, las células fueron tratadas una vez con la sustancia de prueba y Lipofectina o con lipofectina durante 6 hs en Optimem (Invitrogen) o se dejaron sin tratar. Después, se raspó la monocapa de células confluentes (inicio) de manera normalizada con una punta de pipeta de plástico estéril para crear una zona libre de células en cada cavidad, de aproximadamente 1.000 µm de ancho. A continuación, las células se lavaron una vez y se incubaron a 37 °C en medio estándar. La migración in vitro fue documentada fotográficamente y la distancia de migración fue cuantificada mediante análisis de imágenes asistida por computadora usando el programa NIH Image 1.6. Cada experimento se efectuó por cuadruplicado.

Dado que la migración cumple una función clave en la formación de metástasis, este experimento "in vitro" se correlaciona con la formación "in vivo" de metástasis. La inhibición de ía migración "in vitro" indica inhibición de formación de metástasis "in vivo".

Ejemplo 6 Modelo de migración de esferoides: Se estableció un modelo de migración de esferoides como ya se ha descrito (Nygaard et al., 1998). Se cultivaron células tumorales en frascos de cultivo tisular recubiertos con agar 2%. Después de 3 días, se transfirieron los esferoides multicelulares a placas de 96 cavidades y se dejaron sin tratamiento, se trataron con sustancia de prueba o se trataron con TGF-B2 recombinante a 10 ng/ml (R&D Systems). Se analizó el comportamiento de migración de la respectiva línea celular por microscopía de contraste de fases (x10).

Dado que la migración cumple una función clave en la formación de metástasis, este experimento "in vitro" se correlaciona con la formación "in vivo" de metástasis. La inhibición de la migración "in vitro" indica que se inhibe la formación de metástasis "in vivo".

Ejemplo 7 ELISA TGF-ß1/ß2 Se determinó la cantidad de TGF-ß1 o TGF-ß2 secretada por las células tumorales por ELISA. Brevemente, se sembraron células tumorales (15.000 - 200.000, dependiendo del tamaño celular y el crecimiento celular) en placas para cultivo tisular de 12 cavidades y se trataron con los ollgonucleótidos de prueba en presencia de lípidos catiónicos (reactivo de Lipofectina, Gibco BRL) durante 6 hs en medio Optimem libre de suero (Invitrogen) por dos días consecutivos (concentraciones finales: AP 11014: 200 nmol/l; Lipofectina: 3 µg/ml) o se dejaron sin tratamiento. A continuación, las células se cultivaron en presencia de AP 11014 5 µmol/l o se dejaron sin tratamiento. A las 72 hs después del segundo tratamiento con lipofectina y el oligonucleótido de prueba se recolectaron los sobrenadantes del cultivo celular. Se midió la cantidad de TGF-ß1/ß2 en los sobrenadantes empleando un conjunto de elementos estándar para ELISA de TGF-ß1 o TGF- ß2 (Quantlkine, R&D Systems, EE.UU.).

Las concentraciones finales de TGF-beta 1 o de ollgonucleótidos antisentido TGF-beta 2 en este ensayo eran de 200 nMol/l, con concentraciones de lipofectina de 3 µg/ml, o de 400 nMol/l y 6µg/ml, respectivamente.

Ejemplo 8: Cáncer de colon Supresión de TGF-B1: El análisis con el ELISA específico para TGF-ß1 , como se describe en el ejemplo 7, permitió determinar que el fosforotioato de la SEQ ID N°: 14 200 nM en presencia de Lipofectina 3 µg/ml redujo la secreción de TGF-B1 en la línea celular HCT-116 de cáncer de colon en aproximadamente un 13,8% en comparación con el control no tratado, que se definió como el 100%. En otros experimentos, la proliferación se redujo en un 46% aproximadamente. Proliferación celular: En el ensayo de proliferación según se describe en el ejemplo 3, la SEQ ID N°: 14 en presencia de Lipofectina 3 µg/ml redujo la proliferación de la línea celular (HCT-116) de cáncer de colon en un 35% aproximadamente en comparación con el control no tratado, que se definió como el 100%. Se usó una concentración de 200 nMol de la SEQ ID N°: 14.

Ensayo de raspado En los ensayos de raspado según se describe en el ejemplo 5, la SEQ ID N°: 14 inhibe significativamente la migración de la línea celular HCT-116 de cáncer de colon a una concentración de 200 nM en presencia de Lipofectina 3 µg/ml.

Ejemplo 9: Cáncer hepatocelular Supresión de TGF-beta 1 El análisis con el ELISA específico para TGF-ß1 , como se describe en el ejemplo 7, permitió determinar que el fosforotioato de la SEQ ID N°: 14 400 nM en presencia de Lipofectina 6 µg/ml redujo la secreción de TGF-ß1 en la línea celular Hep G2 del cáncer hepatocelular en un 75% aproximadamente en comparación con el control no tratado, que se definió como el 100%.

Proliferación celular: En el ensayo de proliferación según se describe en el ejemplo 3, la SEQ ID N°: 14 redujo la proliferación de la línea celular HepG2 de cáncer hepatocelular en un 39% aproximadamente a una concentración de 400 nM en presencia de Lipofectina 6 µg/ml en comparación con el control no tratado, que se definió como el 100%.

Ejemplo 10: Melanoma TGF-beta 1 El análisis con el ELISA específico para TGF-ß1 , como se describe en el ejemplo 7, permitió determinar que el fosforotioato de la SEQ ID N°: 14 400 nM en presencia de Lipofectina 1 µg/ml redujo la secreción de TGF-ß1 en la línea celular MER-116 de melanoma en un 0% aproximadamente en comparación con el control no tratado, que se definió como el 100%.

Supresión de TGF-beta 1 El análisis con el ELISA específico para TGF-B1, como se describe en el ejemplo 7, permitió determinar que el fosforotioato de la SEQ ID N°: 14 10 µM redujo la secreción de TGF-ß1 en la línea celular MES-100a de melanoma en un 23% aproximadamente en comparación con el control no tratado, que se definió como el 100%.

Supresión de TGF-beta 2 El análisis con el ELISA específico para TGF-ß2, como se describe en el ejemplo 7, permitió determinar que el fosforotioato de la SEQ ID N°: 30 400 nM en presencia de Lipofectina 6 µg/ml redujo la secreción de TGF-ß2 en la línea celular RPMI-7951 de melanoma en un 14,2% aproximadamente en comparación con el control no tratado, que se definió como el 100%.

Inhibición de la proliferación En el ensayo de proliferación según se describe en el ejemplo 3, la SEQ ID N°: 14 redujo la proliferación de la línea celular de melanoma (MER-116) en un 33% aproximadamente a una concentración de 50 nM y en un 23% aproximadamente a una concentración de 200 nM en presencia de Lipofectina 3 µg/ml en comparación con el control no tratado, que se definió como el 100%. En otros experimentos en que se usó la línea celular A-549, la proliferación se redujo en un 0,4% aproximadamente en comparación con el control no tratado, que se definió como el 100%.

Inhibición de la proliferación En el ensayo de proliferación según se describe en el ejemplo 3, la SEQ ID N°: 30 redujo la proliferación de la línea celular de melanoma (RPMI-7951) en un 17,8% aproximadamente a una concentración de 400 nM en presencia de Lipofectina 6 µg/ml en comparación con el control no tratado, que se definió como el 100%.

Ejemplo 11: NSCLC Supresión de TGF-ß1 El análisis con el ELISA específico para TGF-ß1, como se describe en el ejemplo 7, permitió determinar que el fosforotioato de la SEQ ID N°: 14 200 nM en presencia de Lipofectína 3 µg/ml redujo la secreción de TGF-ß1 en la línea celular SW-900 de cáncer de pulmón de células no pequeñas en un 34% aproximadamente y en NCI-H661 en un 38% aproximadamente en comparación con el control no tratado, que se definió como el 100%.

En la línea celular de cáncer A-549 TGF, bajo las mismas condiciones, se redujo la secreción de TGF-B1 en un 0,4% aproximadamente.

Proliferación celular: En el ensayo de proliferación según se describe en el ejemplo 3, la SEQ ID N°: 14 redujo la proliferación de la línea celular NSCLC (SW-900) en un 30% aproximadamente a una concentración de 200 nM en presencia de Lipofectina 3 µg/ml en comparación con el control no tratado, que se definió como el 100%. La SEQ ID N°: 14 se aplicó a una concentración de 200 nM. En otros ejemplos del ensayo de proliferación según se describe en el ejemplo 3, la SEQ ID N°. 4 a una concentración de 200 nM redujo la proliferación de la línea celular A-549 NSCLC en un 36% aproximadamente y NCI-H661 en un 44% aproximadamente.

Ensayo de raspado En los ensayos de raspado según se describe en el ejemplo 5, la SEQ ID N°: 14 Inhibe significativamente la migración de la línea celular de cáncer SW-900 NSCLC a una concentración de 200 nM y 400 nM en presencia de Lipofectina 6 µg/ml. La migración después de 17 h de las células tratadas con ambas concentraciones de SEQ ID N°: 14 era de 50 µm aproximadamente, en tanto la célula Incubada con lipofectina migró aproximadamente 75 µm y las células control aproximadamente 80 µm. Después de 24 hs, los resultados fueron aproximadamente: control 120 µm, células tratadas con Lipofectina: 115 µm y células tratadas con SEQ ID N°: 14 60 µm aproximadamente. La migración después de 48 hs era de aproximadamente 250 µm para el control y para células tratadas con Lipofectina de aproximadamente 150 µm para ambas concentraciones de células tratadas con la SEQ ID N°: 14.

En el ensayo de raspado, bajo las mismas condiciones, las células SEQ ID N°: 14 incubadas con lipofectina migraron aproximadamente 75 µm y las células control aproximadamente 80 µm. Después de 24 hs los resultados fueron aproximadamente: control 120 µm, células tratadas con Lipofectina: 115 µm y las células tratadas con SEQ ID N°: 14 aproximadamente 60 µm. La migración después de 48 hs era de aproximadamente 250 µm para el control y para las células tratadas con Lipofectina de aproximadamente 150 µm para ambas concentraciones de células tratadas con la SEQ ID N°: 14.

Ejemplo 12: Cáncer de ovario Supresión de TGF-beta 1 El análisis con el ELISA específico para TGF-ß1, como se describe en el ejemplo 7, permitió determinar que el fosforotioato de la SEQ ID N°: 14 10 nM en presencia de Lipofectina 3 µg/ml redujo la secreción de TGF-ß1 en Coló 704 de cáncer de ovario en un 54% aproximadamente en comparación con el control no tratado, que se definió como el 100%. Supresión de TGF-beta 2 El análisis con el ELISA específico para TGF-ß2, como se describe en el ejemplo 7, permitió determinar que el fosforotioato de la SEQ ID N°: 30 200 nM en presencia de Lipofectina 3 µg/ml redujo la secreción de TGF-ß2 en EFO-21 de cáncer de ovario en un 31% aproximadamente en comparación con el control no tratado, que se definió como el 100%.

Proliferación celular: TGF-beta 1 : En el ensayo de proliferación según se describe en el ejemplo 3, la SEQ ID N°: 14 redujo la proliferación de la línea celular Coló 704 de cáncer de ovario en un 54% aproximadamente a una concentración de 50 nM en presencia de Lipofectina 3 µg/ml en comparación con el control no tratado, que se definió como el 100%.

En otro ensayo de proliferación según se describe en el ejemplo 3, la SEQ ID N°: 14 redujo la proliferación de línea celular Coló 704 de cáncer de ovario en un 40% aproximadamente a una concentración de 200 nM en presencia de Lipofectina 3 µg/ml en comparación con el control no tratado, que se definió como el 100%.

TGF-beta 2: En el ensayo de proliferación según se describe en el ejemplo 3, la SEQ ID N°: 30 redujo la proliferación de células EFO-21 de cáncer de ovario en un 31% aproximadamente a una concentración de 200 µM y en un 45% aproximadamente a una concentración de 50 nM en presencia de Lipofectina 3 µg/ml en comparación con el control no tratado, que se definió como el 100%.

En otro ensayo de proliferación según se describe en el ejemplo 3, ia SEQ ID N°: 30 redujo la proliferación de células EFO-21 de cáncer de ovario en un 63% aproximadamente a una concentración de 200 nM en presencia de Lipofectina 3 µg/ml en comparación con el control no tratado, que se definió como el 100%.

Ejemplo 13: Cáncer de páncreas: Supresión de TGF-beta 1 El análisis con el ELISA específico para TGF-ß1, como se describe en el ejemplo 7, permitió determinar que el fosforotioato de la SEQ ID N°: 14 10 µM redujo la secreción de TGF-B1 en Hup T3 de cáncer de páncreas en un 74% aproximadamente en comparación con el control no tratado, que se definió como el 100%.

En otro experimento del ejemplo 7 analizado con el ELISA específico de TGF-B1 el fosforotioato de la SEQ ID N°: 14 200 nM en presencia de Lipofectina 3 µg/ml redujo la secreción de TGF-ß1 en la línea celular DanG de cáncer de páncreas en un 3% aproximadamente en comparación con el control no tratado, que se definió como el 100%.

Supresión de TGF-beta 2 El análisis con el ELISA específico para TGF-beta 2, como se describe en el ejemplo 7, permitió determinar que el fosforotioato de la SEQ ID N°: 30 200 nM en presencia de Lipofectina 3 µg/ml redujo la secreción de TGF-B2 en la línea celular Hup-T3 de cáncer de páncreas en un 2% aproximadamente y en PATU-8902 en un 10% aproximadamente en comparación con el control no tratado, que se definió como el 100%.

Con el ELISA específico de TGF-beta 2, como se describe en el ejemplo 7, el fosforotioato de la SEQ ID N°: 30 200 nM en presencia de Lipofectlna 3 g/ml redujo la secreción de TGF-B2 en las líneas celulares Hup-T4 de cáncer de páncreas en un 24% aproximadamente y en células PA- TU-8902 en un 6% aproximadamente en comparación con el control no tratado, que se definió como el 100%.

Proliferación celular de TGF-beta 2 En el ensayo de proliferación según se describe en el ejemplo 3, la SEQ ID N°: 30 redujo la proliferación de la línea celular Hup-T3 de cáncer de páncreas en un 1 % aproximadamente a una concentración de 200 nM en presencia de Lípofectina 3 µg/ml en comparación con el control no tratado, que se definió como el 100%; en la línea celular PATU-8902 la proliferación se redujo en un 10% aproximadamente.

En otro ensayo de proliferación según se describe en el ejemplo 3, la SEQ ID N°: 30 redujo la proliferación de la línea celular Hup-T3 de cáncer de páncreas en un 24% aproximadamente, las células Hup-T4 en un 24% aproximadamente y las células PATU-8902 en un 27% aproximadamente a una concentración de 200 nM en presencia de Lipofectina 3 µg/ml en comparación con el control no tratado, que se definió como el 00 %.

Proliferación celular con TGF-beta 1 En el ensayo de proliferación según se describe en el ejemplo 4, la SEQ ID N°: 14 redujo la proliferación de la línea celular Hup-T3 de cáncer de páncreas en un 13% aproximadamente á una concentración de 10 µM en presencia de Llpofectlna 3 µg/ml en comparación con el control no tratado, que se definió como el 100%; en la línea celular PATU-8902 la proliferación se redujo en un 10% aproximadamente.

En otro ensayo de proliferación según se describe en el ejemplo 4, la SEQ ID N°: 14 redujo la proliferación de la línea celular DanG de cáncer de páncreas en un 27% aproximadamente a una concentración de 200 nM en presencia de Lipofectina 3 µg/ml en comparación con el control no tratado, que se definió como el 100%.

Migración celular La migración de la línea celular pancreática PATU-8902, medida de acuerdo con el protocolo del ejemplo 6 tratada con la SEQ ID N°: 30 a una concentración de 5 µMol/l, era inhibida casi por completo durante aproximadamente 65 hs, en comparación con la referencia no tratada, en tanto el diámetro de la esfera de células control aumentó a 1000 µm aproximadamente durante el mismo período.

En el mismo experimento, se evaluaron anticuerpos TGF-beta 2 humanos que prácticamente no mostraron ningún efecto, lo que indica que la inhibición de la migración es específica de los oligonucleótidos antisentido y no sólo se correlaciona con los TGF-beta antagonizantes.

Ejemplo 14: Cáncer de próstata Supresión de TGF-beta 1 El análisis con el ELISA específico para TGF-ß1, como se describe en el ejemplo 7, permitió determinar que el fosforotioato de la SEQ ID N°: 14 200 nM en presencia de Lipofectina 3 µg/ml redujo la secreción de TGF-ß1 en la línea celular PC-3 de cáncer de próstata en un 36% y en células DU-145 en un 57% aproximadamente en comparación con el control no tratado, que se definió como el 100%.

Supresión de TGF-beta 2 El análisis con el ELISA específico para TGF-B2, como se describe en el ejemplo 7, permitió determinar que el fosforotioato de la SEQ ID N°: 14 200 nM en presencia de Lipofectina 3 µg/ml redujo la secreción de TGF-ß2 en la línea celular PC-3 de cáncer de próstata en un 19% aproximadamente y en células DU-145 en un 20% aproximadamente en comparación con el control no tratado, que se definió como el 100%.

Proliferación celular con TGF-beta 1: En el ensayo de proliferación según se describe en el ejemplo 3, la SEQ ID N°: 14 redujo la proliferación de la línea celular PC-3 de carcinoma de próstata en un 74% aproximadamente a una concentración de 200 nM en presencia de Lipofectina 3 µg/ml en comparación con el control no tratado, que se definió como el 100%.

En otro experimento según se describe en el ejemplo 3, la SEQ ID N°: 14 redujo la proliferación de la línea celular DU-145 de carcinoma de próstata en un 81% aproximadamente a una concentración de 200 nM en presencia de Lipofectina 3 µg/ml en comparación con el control no tratado, que se definió como el 100 %.

Proliferación celular con TGF-beta 2: En el ensayo de proliferación según se describe en el ejemplo 3, la SEQ ID N°: 30 redujo la proliferación de la línea celular PC-3 de carcinoma de próstata en un 29% aproximadamente y en células DU-145 en un 34% aproximadamente a una concentración de 200 nM en presencia de Lipofectina 3 µg/ml en comparación con el control no tratado, que se definió como el 00%.

Ensayo de raspado En los ensayos de raspado según se describe en el ejemplo 5, fa SEQ ID N°: 14 inhibe significativamente la migración de la línea celular PC-3 de cáncer de próstata a una concentración de 400 nM en presencia de Lipofectina 6 µg/ml. La migración después de 17 hs de tratamiento de las células con la SEQ ID N°: 14 era de 37 µm aproximadamente, en tanto las células incubadas con lipofectina mlgraron 140 µm aproximadamente y las células control 165 µm aproximadamente. Después de 24 hs, los resultados fueron aproximadamente: control 288 µm, células tratadas con Lipofectina: 213 µm y células tratadas con la SEQ ID N°: 1460 µm aproximadamente. La migración después de 48 hs era de 366 µm aproximadamente para ei control, 328 µm para las células tratadas con Lipofectina y 150 µm aproximadamente para las células tratadas con la SEQ ID N°: 14.

En otro experimento, los ensayos de raspado según se describe en el ejemplo 5, la SEQ ID N°: 14 inhibe significativamente la migración de la línea celular PC-3 de cáncer de próstata a una concentración de 400 nM en presencia de Lipofectina 6 µg/ml. La migración después de 17 hs de las células tratadas con la SEQ ID N°: xx era de 118 µm aproximadamente, en tanto las células incubadas con lipofectina migraron 207 µm aproximadamente y las células control 215 µm aproximadamente. Después de 24 hs, los resultados fueron aproximadamente: control 288 µm, células tratadas con Lipofectina: 313 µm y las células tratadas con SEQ ID N°: 14 era las 166 µm aproximadamente. La migración después de 48 hs era de 420 µm aproximadamente para el control, 421 µm para las células tratadas con Lipofectina y de 197 µm aproximadamente para las células tratadas con la SEQ ID N°: 14.

Ejemplo 15: Cáncer renal Supresión de TGF-beta 1 El análisis con el ELISA específico para TGF-ß1, como se describe en el ejemplo 7, permitió determinar que el fosforotioato de la SEQ ID N°: 14 200 nM en presencia de Lipofectina 3 µg/ml redujo la secreción de TGF-ß1 en la línea celular Caki-1 de cáncer renal en un 4% aproximadamente en comparación con el control no tratado, que se definió como el 100%.

Proliferación celular: En el ensayo de proliferación según se describe en el ejemplo 3, la SEQ ID N°: 14 redujo la proliferación de la línea celular Cak¡-1 de carcinoma renal en un 5% aproximadamente a una concentración de 200 nM en presencia de Lipofectina 3 µg/ml en comparación con el control no tratado, que se definió como el 100%.

Ejemplo 16: Antisentido complementaria del ARNm de los genes TGF-beta 1, TGF- beta 2, TGF-beta 3 I L-10 Antisentido complementaria del ARNm del factor de crecimiento transformante humano beta l (TGF-beta 1): CTGCAGCCTTGACCTCCCAGGATCAAGTGATCCTCCCACCTTAGCCTCCAGAGTAGCTGGGAC CACAGGTGTACATTTTTTAAAAGTGTTTTGTAGAGATAGGGTCTCACTATGTTACCCAGGCTGG TCTCAAATGCCTGGATTCAAGTATCCTCCCATCTCTGCCTCCCAAAAGTGCTAGGATTACAGGC GTGAGCACCCCGCCTGGCCTGAACTACTATCTTTTATTGTCTTCTTCACTATCCCCCACTAAAG CAGGTTCCTGGTGGGCAGGAACTCCTCCCTTAACCTCTCTGGGCTTGTTTCCTCAACCTTTAAA ATGGGTGTTATCAGAGTCCCTGCCATCTCAGAGTGTTGCTATGGTGACTGAATGAGTTCATTAA TGTAAGGCACTTCAACAGTGCCCAAGGTGCTCAATAAATAGATCTAACTACAGTAGTGTTCCCC ACTGGTCCCCTGTGCCTTGATGCCGGGCAAAGGAATAGTGCAGACAGGCAGGAGGAGGCAGA GAGGGAGAGAGAGGGAGTGGGAGTGGGGGAACGTCAGGGATGGAGACCCCAGGCAGGCGC CCAATGACACAGAGATCCGCAGTCCTCTCTCCATCTTTAATGGGGCCCCAGGTGGGCTTGGG GCACGGTGTCCTTAAATACAGCCCCCATGGGCAAGGCAGCGGGGGCGGGGCGGGGTGGGG CCGGGCCTGCCGGGGCGGGGCGGGGCGGGGCGGGACCTCAGCTGCACTTGCAGGAGCGCA CGATCATGTTGGACAGCTGCTCCACCTTGGGCTTGCGGCCCACGTAGTACACGATGGGCAGC GGCTCCAGCGCCTGCGGCACGCAGCACGGCGCCGCCGAGGCGCCCGGGTTATGCTGGTTGT ACAGGGCCAGGACCTTGCTGTACTGCGTGTCCAGGCTCCAAATGTAGGGGCAGGGCCCGAG GCAGAAGTTGGCATGGTAGCCCTTGGGCTCGTGGATCCACTTCCAGCCGAGGTCCTTGCGGA AGTCAATGTACAGCTGCCGCACGCAGCAGTTCTTCTCCGTGGAGCTGAAGCAATAGTTGGTGT CCAGGGCTCGGCGGTGCCGGGAGCTTTGCAGATGCTGGGCCCTCTCCAGCGGGGTGGCCAT GAGAAGCAGGAAAGGCCGGTTCATGCCATGAATGGTGGCCAGGTCACCTCGGCGGCCGGTA GTGAACCCGTTGATGTCCACTTGCAGTGTGTTATCCCTGCTGTCACAGGAGCAGTGGGCGCTA AGGCGAAAGCCCTCAATTTCCCCTCCACGGCTCAACCACTGCCGCACAACTCCGGTGACATCA AAAGATAACCACTCTGGCGAGTCGCTGGGTGCCAGCAGCCGGTTGCTGAGGTATCGCCAGGA ATTGTTGCTGTATTTCTGGTACAGCTCCACGTGCTGCTCCACTTTTAACTTGAGCCTCCTCAGC AGACGCAGCTCTGCCCGGGAGAGCAACACGGGTTCAGGTACCGCTTCTCGGAGCTCTGATGT GTTGAAGAACATATATATGCTGTGTGTACTCTGCTTGAACTTGTCATAGATTTCGTTGTGGGTTT CCACCATTAGCACGCGGGTGACCTCCTTGGCGTAGTAGTCGGCCTCAGGCTCGGGCTCCGGT TCTGCACTCTCCCCGGCCACCCGGTCGCGGGTGCTGTTGTACAGGGCGAGCACGGCCTCGG GCAGCGGGCCGGGCGGCACCTCCCCCTGGCTCGGGGGGCTGGCGAGCCGCAGCTTGGACA GGATCTGGCCGCGGATGGCCTCGATGCGCTTCCGCTTCACCAGCTCCATGTCGATAGTCTTG CAGGTGGATAGTCCCGCGGCCGGCGGGCCAGGCGTCAGCACCAGTAGCCACAGCAGCGGTA GCAGCAGCGGCAGCAGCCGCAGCCCGGAGGGCGGCATGGGGGAGGCGGCGCCCCCCGGC ACTGCCGAGAGCGCGAACAGGGCTGGTGTGGTGGGGAGGCCCCGCCCCTGCAGGGGCTGG GGGTCTCCCGGCAAAAGGTAGGAGGGCCTCGAGGGAAAGCTGAGGCTCCTCAGGGAGAAGG GCGCAGTGGTGGAGGGGAGGCTTGGACCGGGGGTGTCTCAGTATCCCACGGAAATAACCTA GATGGGCGCGATCTGGTACCAGAAGGTGGGTGGTCTTGAATAGGGGATCTGTGGCAGGTCGG AGAGAGATCCGTCTCCTGGAGGAGAAAGGGTCTAGGATGCGCGGGGGCTCAGGAGACAGGC CGGGGATGAAGGCGGCGTGCAGGGGGTGCGCCCGAGGTCTGGGGAAAAGTCTTTGCGGGA GGCCGGGTCGGCGACTCCCGAGGGCTGGTCCGGAATGGGGGCGCCTGAGGGACGCCGTGT AGGGGGCAGGGAGGGAGCAAGCGTCCCCGGCGGCAAAGGGAGGCGGTCTGGGGTCCCCAA GTCCTGCCTCCTCGCGGGGCAGCGTCGCGCCAAGAGGTCCCCGCGCCTCCGGCTCCCAGCG GCAACGGAAAAGTCTCAAAAGTTTTTTTCCTCTTCTCCCGACCAGCTCGTCCCTCCTCCCGCTC CTCCTCCCCCTCCTCCCCGCAGTGGCGGGGGCGGCGGCGGCTCGTCTCAGACTCTGGGGCC TCAGGCTGCTCCTCGGCGACTCCTTCCTCCGCTCCGGGCCGAGGCCGGCCCCGCGGGCGGC TCAGAGCCGGGGGGGGTGCCCCGGACGGGGCGTCCCCCCTGCCCCCGGCCGGGGCCCTCG CTGTCTGGCTGCTCCGCGGAGGGAGGT Antisentido complementaria del ARNm del factor de crecimiento transformante humano beta 2 (TGF-beta 2): TTTAAAAAAATTTGCTTCTTGTCTCTCTCACTTACAAAGTAGGTGAAATGTAGAATAAGGCCTTC CTTTTTTTGTGTCAGATGCCAGTTTTAACAAACAGAACACAAACTTCCAAAGTGTCTGAACTA GTACCGCCTTTTCAAAAATTTTTTMCACTGATGMCC GGCTCTCTTATGTTTTCTTGTTACA AGCATCATCGTTGTCGTCGTCATCATCATTATCATCATCATTGTCATTTTGGTCTTGCCACTTTT CC GAATTTTAGCTGCATTTGCAAGACTTTACAATCATATTAGAAAGCTGTTCAATCTTGGGTG TTTTGCCAATGTAGTAGAGAATGGTTAGAGGTTCTAAATCTTGGGACACGCAGCAAGGAGAAG CAGATGCTTCTGGATTTATGGTATTATATAAGCTCAGGACCCTGCTGTGCTGAGTGTCTGAACT CCATAAATACGGGCATGCTCCAGCACAGAAGTTGGCATTGTACCCTTTGGGTTCGTGTATCCA TTTCCACCCTAGATCCCTCTTGAAATCAATGTAAAGTGGACGTAGGCAGCAATTATCCTGCACA TTTCTAAAGCAATAGGCCGCATCCAAAGCACGCTTCTTCCGCCGGTTGGTCTGTTGTGACTCA AGTCTGTAGGAGGGCAATAACATTAGCAGGAGATGTGGGGTCTTCCCACTG I l i l i l í I CCTAG TGGACTTTATAGTTTTCTGATCACCACTGGTATATGTGGAGGTGCCATCAATACCTGCAAATCT TGCTTCTAGTTCTTCACTTTTATTTGGGATGATGTAATTATTAGATGGTACAAAAGTGCAGCAGG GACAGTGTAAGCTTATTTTAAATCCCAGGTTCCTGTCTTTATGGTGAAGCCATTCATGAACAGC ATCAGTTACATCGAAGGAGAGCCATTCGCCTTCTGCTCTTGTTTTCACAACTTTGCTGTCGATG TAGCGCTGGGTTGGAGATGTTAAATCTTTGGACTTGAGAATCTGATATAGCTCAATCCGTTGTT CAGGCACTCTGGCTTTTGGGTTCTGCAAACGAAAGACTCTGAACTCTGCTTTCACCAAATTGGA AGCATTCTTCTCCATTGCTGAGACGTCAAATCGAACAATTCtGAAGTAGGGTCTGTAGAAAGTG GGCGGGATGGCATTTTCGGAGGGGAAGAAGGGCGGCATGTCTATTTTGTAAACCTCCTTGGC GTAGTACTCTTCGTCGCTCCTCTCGCGCTCGCAGGCGGCCGCCCTCCGGCTCGCCTTCTCCT GGAGCAAGTCCCTGGTGCTGTTGTAGATGGAAATCACCTCCGGGGGGACTTCCTCGGGCTCA GGATAGTCTTCTGGGGGACTGGTGAGCTTCAGCTTGCTCAGGATCTGCCCGCGGATCGCCTC GATCCTCTTGCGCATGAACTGGTCCATATCGAGTGTGCTGCAGGTAGACAGGCTGAGCGCGA CCGTGACCAGATGCAGGATCAGAA GCGCTCAGCACACAGTAGTGCATTTTTTAAAAAAGTG GAAAAAAAAGTTGTTTTTAAAAGTCAGAATAAAAAAAAAGAAATCAACAATTCTCAAAGTATAGA TCMGGAGAGTTGTTTGGTTTTTTGTTGTTGTTGTTTGTTTTTGATGCGA CTTTTGCAAACAA TCTAGTCAATGCCCAACAGAAAAACGTATCCTGCTTG Variante de procesamiento de la secuencia antisentido complementaria del ARNm del factor de crecimiento transformante humano beta 2 (TGF-beta 2) que comprende un inserto adicional comparado con la secuencia antisentido complementaria del ARNm del factor de crecimiento transformante humano beta 2 que se muestra precedentemente. El Inserto se encuentra entre la posición 812 y 900, comenzando a contar desde el principio. Los oligonucleótidos que se hibridizan con partes de esta molécula antisentido también se encuentran dentro del alcance de esta invención. CTGACTGAAAGTTTCTTTTATTAACAGTCTTTTTAGTTTTTGGACCTTAC GAAGCTTCCTTAG GCAGCTGATACATAACATGTGTTTTCAGGGTCTTTATCTTAATGCAGACTTTCTCGGTCATATAA TAACTCACTTGGGTTTTCATCCCATTAATATGACCTCTTTTTTTCTGGCTCGTTTGAGTTCAAGT TCCTT GCCATCCATGAGTTTCTGGCAAAGTATTTGGTCTCCACTTTATACACCTGTTTTATTT TCCAAGGGCAATGAAACGTTCATTATATAGTAACACACAATAAATAACTCACTGTTAACTCTAAG AGTAAGAATGGGAAGGGTGCCTATTGCATAGCAATACAGAAAAATCAAGTGAGGCGCGGGATA GG CGGTACGTACAGCAACTCCACTTAATGGGATTTTCCTGTTTGTTGTTGTTGTTGTTGTTG TCGTTGTTCACATAATTAACACTAATAAATTCTTCCAGTGTTTAI I I I I I I CTTTAAAAAAAATTTG CTTCTTGTCTCTCTCACTTACAAAGTAGGTGAAATGTAGAATAAGGCCTTCAAC I I I I I I I GTGT CAGATGCCAGTTTTAACA CAGAACACAAACTTCCAAAGTGTCTGAACTAGTACCGCCTTTTC AAAAA I I I I lAACACTGATGAACCAAGGCTCTCTTATGTTTTCTTGTTACAAGCATCATCGTTG TCGTCGTCATCATCATTATCATCATCATTGTCATTTTGGTCTTGCCACTTTTCCAAGAATTTTAG CTGCATTTGCAAGACTTTACAATCATATTAGAAAGCTGTTCMTCTTGGGTGTTTTGCCAATGTA GTAGAGAATGGTTAGAGGTTCTAAATCTTGGGACACGCAGCAAGGAGAAGCAGATGCTTCTGG ATTTATGGTATTATATAAGCTCAGGACCCTGCTGTGCTGAGTGTCTGAACTCCATAAATACGGG CATGCTCCAGCACAGAAGTTGGCATTGTACCCTTTGGGTTCGTGTATCCATTTCCACCCTAGAT CCCTCTTGAAATCAATGTAAAGTGGACGTAGGCAGCAATTATCCTGCACATTTCTAAAGCAATA GGCCGCATCCAAAGCACGCTTCTTCCGCCGGTTGGTCTGTTGTGACTCAAGTCTGTAGGAGG GCAAT CATTAGCAGGAGATGTGGGGTCTTCCCACTGTTTTTTTTCCTAGTGGACTTTATAGT TTTCTGATCACCACTGGTATATGTGGAGGTGCCATCAATACCTGCAAATCTTGCTTCTAGTTCTT CACTTTTATTTGGGATGATGTAATTATTAGATGGTACAAAAGTGCAGCAGGGACAGTGTAAGCT TATTTTAAATCCCAGGTTCCTGTCTTTATGGTGAAGCCATTCATGAACAGCATCAGTTACATCGA AGGAGAGCCATTCGCCTTCTGCTCTTGTTTTCACAACTTTGCTGTCGATGTAGCGCTGGGTTG GAGATGTTAAATCTTTGGACTTGAGAATCTGATATAGCTCAATCCGTTGTTCAGGCACTCTGGC TTTTGGGTTCTGCAAACGAAAGACTCTGAACTCTGCTTTCACCAAATTGGAAGCATTCTTCTCC ATTGCTGAGACGTCAAATCGAACAATTCTGAAGTAGGGTCTGTAGAAAGTGGGCGGGATGGCA TCAAGGTACCCACAGAGCACCTGGGACTGTCTGGAGCACAAGCTGCCCACTGAGCCAGAGGG TGTTGTAACAACTGGGCAGACAGTTTCGGAGGGGAAGAAGGGCGGCATGTCTATTTTGTAAAC CTCCTTGGCGTAGTACTCTTCGTCGCTCCTCTCGCGCTCGCAGGCGGCCGCCCTCCGGCTCG CCTTCTCCTGGAGCAAGTCCCTGGTGCTGTTGTAGATGGAAATCACCTCCGGGGGGACTTCCT CGGGCTCAGGATAGTCTTCTGGGGGACTGGTGAGCTTCAGCTTGCTCAGGATCTGCCCGCGG ATCGCCTCGATCCTCTTGCGCATGAACTGGTCCATATCGAGTGTGCTGCAGGTAGACAGGCTG AGCGCGACCGTGACCAGATGCAGGATCAGAAAAGCGCTCAGCACACAGTAGTGCATTTTTTAA AA GTGGAAAAAA GTTGTTTTTAAMGTCAGMTAAAAAAAAGAAATCAACAATTCTCAAAG TATAGATC GGAGAGTTGTTTGGTTTTTTGTTGTTGTTGTTTTTGATGCGAAACTTTTGCAAAC AATCTAGTCAATGCCCAACAGAAAAACGTATCCTGCTTGAATTCCTTTAAAAAGAAAAGGCCAG TAGTTCCAAAAGTGGAAATATTAATACGGGACGGGCAGAGGGAACCCTGACTTTGGCGAGTAA G GAAAAAAATTCTTGGAGCAATGAGATGGGGAAAAAAAGAGACGAGTGGCTATTAAGTAGA AATAAATTTAAGAGGAGGAAGTGGAGTTCAGTGTGTCAGTCTCGGGTGCGGAGTGGCGGATCT GAACTCGGCTCCTCCGGCCAAAAGGGAAGAGATGAAAAGGTCCCGGGGCTGGCAGCTGGCG AACTGACGGGAGGGGC Antisentido complementaria del ARNm del factor de crecimiento transformante humano beta 3 (TGF-beta 3) CAGGATGCCCCAAA TATTTATTTATACAAAGATTTTGAGAGTAATATTCATACTTGTCTTTATA CCTCAGTCTATGCGTCTGGGGCCAAGTCACTGTGTGGCACATGTCGAGCTTCCCCGAATGCCT CACATGTTGTCGCACCTGCTTCCAGGAACACCAAATGAACACAGGGTCTTGGAGGGGAAGTG GGGGAAGAACCCATAATGCCCCAACCCTGCATGGAACCACAATCCAGAAATGTGCATCCTGAC CTGGAAGGCGTCTAACCAAGTGTCCAAGGGGAAATATGATCGAGGGAGAGGTGAGAGGAGGG ACCCAGAGGCAGACAGGAGAGGGTTGATTTCCACCCTTTCTTCTGCGTTCAGCATATCCAAAA GGCCCAATACAGTTGATGGGCCAGGAACTGCATGACCTGGATTTTCTCCCTGTAGTGACCCAC GATGTTAATTGATGTAGAGGACAGTTTGCAAAAGTAATAGATTTGCCCTTAATCCCAGACAGTA TGAGATACAATTCTGGGACTTTGTCTTCGT CCTGTCTTTAAAAAAAAAAAAAAATGCTTGCCT TGTATAACATAATCCAGATTCCCTAGAGCAGATGTGGTACAGCAATGAGCAAATCCAACCTCAG ATCTGAAGTGTCTTCCAGTCTGGCCCTGACCCAGCCATTCTCTGCCCTTCCTTCTCCCTTTAGG GTAGCCCAAATCCCATTGCCACACAACATCTCAACTTACCATCCCTTTCCTCTATCCCCATCCC CTCTGTCTGCGTCACAGAAAGTCTGTGTGTTCTGAAGAGTTCAGCCTTCCTCTAACCAAACCCA CACTTTCTTTACCACCGTGATTCTCAGAGCCAGCMGA GAAATGTTCCAAAAGGAAACCTCC ATCTCAGCCATTTGCCCGGAGCCGAAGGTTGTGGGCTCCAGGCCTCTCAGTGAGGTTTGTTG CTTGTGTGTTTCCCGAGGAGCGGGCAGTCAGGCAGTGGTGGTTCTCTCTCCCCTCTCTCTGTC GCACGTGGGGTCTCAGCTACATTTACAAGACTTCACCACCATGTTGGAGAGCTGCTCCACTTT GGGGGTCCTCCCAACATAGTACAGGATGGTCAGGGGCTCCAGGTCCTGGGGCACGCAGCAA GGCGAGGCAGATGCTTCAGGGTTCAGAGTGTTGTACAGTCCCAGCACCGTGCTGTGGGTTGT GTCTGCACTGCGGAGGTATGGGCAAGGGCCTGAGCAGAAGTTGGCATAGTAGCCCTTAGGTT CATGGACCCACTTCCAGCCCAGATCCTGTCGGAAGTCAATGTAGAGGGGGCGCACACAGCAG TTCTCCTCCAAGTTGCGGAAGCAGTAATTGGTGTCCAAAGCCCGCTTCTTCCTCTGACCCCCC TGGCCCGGGTTGTCGAGCCGGTGTGGGGGAATCATCATGAGGATTAGATGAGGGTTGTGGTG ATCCTTCTGCTTCTTGAGGCGCCCCAGATCTCCACGGCCATGGTCATCCTCATTGTCCACGCC TTTG TTTGATTTCCATCACCTCGTGAATGTTTTCCAGGATATCTCCATTGGGCTGAAAGGTGT GACATGGACAGTGAATGCTGATTTCTAGACCTAAGTTGGACTCTCTTCTCAACAGCCACTCACG CACAGTGTCAGTGACATCAAAGGACAGCCACTCGGCAGTGCCCCGTGTGGGCAGATTCTTGC CACCGATATAGCGCTGTTTGGCAATGTGCTCATCTGGCCGAAGGATCTGGAAGAGCTCGATCC TCTGCTCATTCCGCTTAGAGCTGGGGTTGGGCACCCGCAAGACCCGGAATTCTGCTCGGAATA GGTTGGTTCTATTTTTCTCCACTGAGGACACATTGMGCGGAAAACCTTGGAGGTAATTCCTTT AGGGCAGACAGCCAGTTCGTTGTGCTCCGCCAGCCCCTGGATCATGTCGAATTTATGGATTTC TTTGGCATAGTATtCCGACTCGGTGTTTTCCTGGGTGCAGCCTTCCTCCCTCTCCCCATGCATC TCCTCCAGCAGCTCCCGGGTGCTGTTGTAAAGGGCCAGGACCTGATAGGGGACGTGGGTCAT CACCGTTGGCTCAGGGGGGCTGGTGAGCCTGAGCTTGCTCAAGATCTGTCCCCTAATGGCTT CCACCCTCTTCTTCTTGATGTGGCCGAAGTCCAAGGTGGTGCAAGTGGACAGAGAGAGGCTG ACCGTGGCAAAGTTCAGCAGGGCCAGGACCACCAGAGCCCTTTGCAAGTGCATCTTCATGTGT GAGCTGGGAAGAGAGGCCAGGGGGACGGCAAGGCCTGGAGAGGAAGAGACCCCAGCAGAC GTGCAGAAGGAGGGAGGAAAACCAGGCGGCCTCCCCAGATCCCAAAGACTGAGGCTTGGCA AGAAGGTGCATGAACTCACTGCACTGCGAGAGCTTCAGGACTTCCAGGAAGCGCTGGCAACC CTGAGGACGAAGAAGCGGACTGTGTGCCTTGTAGCGCTGGGATTCTTGTCCATGTGTCTAAAC AGGTTTTGCTGG Antisentido de ARNm de la interleuquina 10 humana TCACCCTATGGAAACAGCTTAAAAACAGGTGAAAATAATAAATATTGAAAAAAATTATAATATTG GGCTTCTTTCTAAATCGTTCACAGAGAAGCTCAGTAAATAAATAGAAATGGGGGTTGAGGTATC AGAGGTAATAAATATTCTATAAGAGAGGTACAATAAGGTTTCTCAAGGGGCTGGGTCAGCTATC CCAGAGCCCCAGATCCGATTTTGGAGACCTCTAATTTATGTCCTAGAGTCTATAGAGTCGCCAC CCTGATGTCTCAGTTTCGTATCTTCATTGTCATGTAGGCTTCTATGTAGTTGATGAAGATGTCAA ACTCACTCATGGCTTTGTAGATGCCTTTCTCTTGGAGCTTATTAAAGGCATTCTTCACCTGCTC CACGGCCTTGCTCTTGTTTTCACAGGGAAGAAATCGATGACAGCGCCGTAGCCTCAGCCTGAG GGTCTTCAGGTTCTCCCCCAGGGAGTTCACATGCGCCTTGATGTCTGGGTCTTGGTTCTCAGC TTGGGGCATCACCTCCTCCAGGTAAAACTGGATCATCTCAGACAAGGCTTGGCAACCCAGGTA ACCCTTAAAGTCCTCCAGCAAGGACTCCTTTAACAACAAGTTGTCCAGCTGATCCTTCATTTGA AAGAAAGTCTTCACTCTGCTGAAGGCATCTCGGAGATCTCGAAGCATGTTAGGCAGGTTGCCT GGGAAGTGGGTGCAGCTGTTCTCAGACTGGGTGCCCTGGCCTGGGCTGGCCCTCACCCCAG TCAGGAGGACCAGGCAACAGAGCAGTGCTGAGCTGTGCATGCCTTCTTTTGCAAGTCTGTCTT GTGGTTTGGTTTTGCAAGAGCAACCCCCTGATGTGTAGACCTTCACCTCTCTGTCCCCCTTTTA TATTGTAAGCTCAGGGAGGCCTCTTCATTCATTAAAAAGCCACAATCAAGGTTTCCCGGCACAG GATTTTTTCTGCTTAGAGCTCCTCCTTCTCT CCTCTCTAATA CTTAGTTTTCAATTTTTGCA TCGTAAGCAAAAATGATTGGTTG CATGMCTTCTGCATTACAGCTATTTTTAGGATGGGCTA CCTCTCTTAGAATAATTTTTTAGCTTCTC TTAAAAAAAGTTGATTTCCTGGGGAGAACAGCTG TTCTGTCCGCAGAGGCCCTCAGCTGTGGGTTCTCATTCGCGTGTTCCTAGGTCACAGTGACGT GGACAAATTGCCCATTCCAGAATACAATGGGATTGAGAAATAATTGG Ejemplo 17: Síntesis de oligonucleótidos Un método para sintetizar oligodesoxinucleótidos comprende la adición por pasos de nucleósidos 5 protegidos usando química de fosfito-triéster. El primer nucleótido se introduce como fosforamidita de 5'-dimetoxitritil-deoxiadenosln(N4benzoil)-N N'diisopropil-2-cianoetllo (0,1 M); C se introduce por una fosforamidita de 5'dimetoxltr¡til-deoxicitidin(N benzoil)-N, N'-diisopropil-2-cianoetilo; G se introduce como fosforamidita de 5'-dimetoxitritil-déoxiguanosin(N8isobutiril)-N,N'diisopropil-2-cianoetilo y T se introduce como fpsforamidita de 5'-dimetoxitritil-deoxitimidin-N,N'-di-isopropil-2-cianoetilo. Los nucleósidos se aplicaron, preferentemente a una concentración 0,1 M disueltos en acetonitrilo.

La síntesis se efectúa sobre partículas de vidrio de poros controlados de aproximadamente 150 Fm de diámetro (diámetro de poro de 500 Á aproximadamente) a las cuales los nucleósidos más 3' se unen de forma covalente a través de un ligador de alquilamina de cadena larga (carga promedio de aproximadamente 30 Fmol/g de soporte sólido).

El soporte sólido se carga en una columna de síntesis cilindrica tapada por ambos extremos con filtros que permitan el flujo adecuado de reactivos pero retenga el soporte de síntesis sólido. Los reactivos se administran y retiran de la columna de síntesis usando presión positiva de un gas inerte. Los nucleótidos se agregaron a la cadena de oligonucleótidos creciente en dirección 3' -> 5'. Cada nucleótido se acopló usando una ronda del siguiente ciclo de síntesis.

Se iva el grupo protector 5' DMT (dimetoxitritil) del nucleótido previo con ácido 3-cloroacético en diclorometano seguido de lavado de la . columna con acetonltrilo anhidro. A continuación se agrega simultáneamente una de las bases en la forma de un derivado protegido del mismo, dependiendo de la secuencia, más tetrazol en acetonitrilo. Después de la reacción, se retira la mezcla de reacción y se oxida el fosfito con una mezcla de azufre (S8) en bisulfuro de carbono/pirldina/trietilamlna. Después de la reacción de oxidación, se retira la mezcla y se lava la columna con acetonitrilo. Los grupos hidroxilo 5' sin reaccionar se protegen con la adición simultánea de 1-metilimidazol y anhídrido acético/lutidina/tetrahldrofurano. Luego se lava la columna de síntesis con acetonitrilo y se inicia el siguiente ciclo.

El procedimiento de aislamiento y purificación de los productos de síntesis se efectúa de la siguiente manera: Después de la adición del último nucleótido, los desoxinucleótidos se clavaron del soporte sólido por incubación en una solución de amoníaco. Los grupos protectores de bases exocíclicas se eliminan por incubación adicional en amoníaco. Después se evapora el amoníaco bajo vacío. Los productos de síntesis de longitud completa que aún contienen al grupo protector 5' DMT se separan de los contaminantes fallados más cortos usando cromatografía líquida de alta presión de fase reversa sobre una fase estacionaria C18 de silicio. Los eluyentes del pico de producto se recolectan, se secan bajo vacío y se diva el grupo protector 5'-DMT por incubación en ácido acético, que luego es evaporado bajo vacío. Los productos de síntesis se solubllizán en el agua desionizada y se extraen tres veces con dietiléter. A continuación, los productos se secan bajo vacío. Se obtiene otra cromatografía HPLC-AX y los eluyentes del pico de producto se dializan contra un exceso de solución amortiguadora Tris y luego contra agua desionizada. Los productos finales se liofilizan y se guardan secos.

Ejemplo 18 Los ensayos de citotoxicidad mediada por células se realizaron de acuerdo con el protocolo del Ejemplo 2 con ollgonucleótidos antisentldo fosforotlodatados de TGF beta 2: SEQ ID N°: 30 o TGF-beta 1: SEQ ID N°: 14.

TGF-beta 2: línea celular PA-TU-8902 de cáncer de páncreas.

Sorpresivamente, la citotoxicidad mediada por células inhibida por niveles altos de TGF-beta 2 era restablecida casi por completo en la línea celular PA-TU-8902 de cáncer de páncreas con una concentración 200 nM de la SEQ ID N°: 30 en presencia de Lipofectina 3 µg ml. La prueba se consolidó con diferentes proporciones de células mononucleares de sangre periférica (PBMC) a células tumorales (10:1, 5:1, 2,5:1). El restablecimiento respectivo de la citotoxicidad mediada por células era del 80%, 88% y 100%. Los resultados se obtuvieron a partir de triplicados. Se hallaron resultados comparables con la línea celular K562 de carcinoma de pulmón de células no pequeñas, la línea celular HCT-116 de cáncer de colon.

TGF-beta 2: línea celular PA-TU-8902 de cáncer de páncreas Sorpresivamente, la citotoxicidad mediada por células sobre células Hup-T3 blanco de PBMC cultivadas en los sobrenadantes de cultivo celular de células PA-TU-8902 que fueron tratadas con 400 nM de la SEQ ID N°: 30 en presencia de Lipofectina 6 µg ml, aumentaba aproximadamente un 140-400% en comparación con el control no tratado a diferentes relaciones de célula efectora:blanco (20:1, 10:1, 5:1, 2,5:1, 1,25:1). Los resultados se obtuvieron a partir de cuadriplicados.

TGF-beta 1: línea celular K562 de cáncer de colon La citotoxicidad mediada por células inhibida por niveles altos de TGF-beta 1 era completamente restablecida en la línea de células K562 de cáncer de colon con una concentración 400 nM de la SEQ ID N°: 30 en presencia de Lipofectina 6 µg/ml. La prueba se consolidó con diferentes proporciones de células mononucleares de sangre periférica (PBMC) a células tumorales (20:1, 10:1, 5:1, 2,5:1, 1,25:1). El restablecimiento respectivo de la citotoxicidad mediada por células para todas estas proporciones era del 100%. Los resultados se obtuvieron a partir de triplicados.

TGF-beta 1: línea celular HCT-116 de cáncer de colon Sorpresivamente, la citotoxicidad mediada por células sobre células blanco K562 de PBMC cultivadas en los sobrenadantes de cultivo celular de células HCT-116 que fueron tratadas con una concentración 400 nM de la SEQ ID N°: 30 en presencia de Lipofectina 6 µg/ml, aumentaba aproximadamente un 170-285% en comparación con el control no tratado a las relaciones de célula efectorablanco indicadas (20:1, 10:1, 5:1, 2,5:1, 1,25:1). Los resultados se obtuvieron a partir de cuadriplicados.

TGF-beta 1: línea celular HCI-H661 de carcinoma de pulmón de células no pequeñas (NSCLC) La citotoxicidad mediada por células inhibida por niveles altos de TGF-beta 1 también era restablecida por completo en la línea celular HCI-H661 carcinoma de pulmón de células no pequeñas con una concentración 200 nM de la SEQ ID N°: 30 en presencia de Lipofectina 3 µl/g/ml. La prueba se consolidó con diferentes proporciones de células mononucleares de sangre periférica (PBMC) a células tumorales (20:1, 10:1, 5:1, 2,5:1). El restablecimiento respectivo de la cltotoxicldad mediada por células para todas estas proporciones era del 100%. Los resultados se obtuvieron a partir de triplicados. t TGF-beta 1: línea celular A-549 de carcinoma de pulmón de células no pequeñas (NSCLC) Sorpresivamente, la citotoxicidad mediada por células sobre células blanco Hup-T3 de PBMC cultivadas en los sobrenadantes de cultivo celular de células PA-TU-8902 que fueron tratadas con una concentración 200 nM de la SEQ ID N°: 30 en presencia de Lipofectina 3 µg/ml, aumentaba aproximadamente un 250-415% a las relaciones de célula efectora:blanco indicadas (10:1, 5:1, 2,5:1 ,1 ,25:1 ,0,6251 ). Los resultados se obtuvieron a partir de cuadriplicados.

TGF-beta 1: línea celular PC-3 de cáncer de próstata Sorpresivamente, la citotoxicidad mediada por células sobre células blanco K562 de PBMC cultivadas en los sobrenadantes de cultivo celular de células PC-3 que fueron tratadas con una concentración 400 nM de la SEQ ID N°: 30 en presencia de Lipofectina 6 µg/ml, aumentaba aproximadamente un 130-270% a las relaciones de célula efectora:blanco indicadas (20:1, 10:1, 5:1, 2,5:1 , 1 ,25:1 ). Los resultados se obtuvieron a partir de cuadriplicados.

Ejemplo 19 Los oligonucleótidos antisentido TGF-beta 1 de este ejemplo forman parte de la invención.

Además constituyen realizaciones de oligonucleótidos que inhiben la formación de TGF-beta 1 "in vitro" e "in vivo" y entonces se pueden usar en vehículos aceptables para uso farmacéutico como una composición farmacéutica para el tratamiento de distintos tipos de cáncer como se describe en esta invención y/o para inhibir la formación de metástasis.

Oligonucleótidos antisentido TGF-beta 1: ctgcagccttgacctccc, aggatcaagtgatcctcc, caccttagcctccagagt, agctgggaccacaggtgt, acattttttaaaagtgtt, ttgtagagatagggtctc, actatgttacccaggctg, gtctcaaatgcctggatt, caagtatcctcccatctc, tgcctcccaaaagtgcta, ggattacaggcgtgagca, ccccgcctggcctgaact, actatcttttattgtctt, cttcactatcccccacta, aagcaggttcctggtggg, caggaactcctcccttaa, cctctctgggcttgtttc, ctcaacctttaaaatggg, tgttatcagagtccctgc, catctcagagtgttgcta, tggtgactgaatgagttc, attaatgtaaggcacttc, aacagtgcccaaggtgct, caataaatagatctaact, acagtagtgttccccact, ggtcccctgtgccttgat, gccgggcaaaggaatagt, gcagacaggcaggaggag, gcagagagggagagagag, ggagtgggagtgggggaa, cgtcagggatggagaccc, caggcaggcgcccaatga, cacagagatccgcagtcc, tctctccatctttaatgg, ggccccaggtgggcttgg, ggcacggtgtccttaaat, acagcccccatgggcaag, gcagcgggggcggggcgg, ggtggggccgggcctgcc, ggTgcggggcggggcggg, gcgggacctcagctgcac, ttgcaggagcgcacgatc, atgttggacagctgctcc, accttgggcttgcggccc, acgtagtacacgatgggc, agcggctccagcgcctgc, ggcacgcagcacggcgcc, gccgaggcgcccgggtta, tgctggttgtacagggcc, aggaccttgctgtactgc, gtgtccaggctccaaatg, taggggcagggcccgagg, cagaagttggcatggtag, cccttgggctcgtggatc, cacttccagccgaggtcc, ttgcggaagtcaatgtac, agctgccgcacgcagcag, ttcttctccgtggagctg, aagcaatagttggtgtcc, agggctcggcggtgccgg, gagctttgcagatgctgg, gccctctccagcggggtg, gccatgagaagcaggaaa, ggccggttcatgccatga, atggtggccaggtcacct, cggcggccggtagtgaac, ccgttgatgtccacttgc, agtgtgttatccctgctg, tcacaggagcagtgggcg, ctaaggcgaaagccctca, atttcccctccacggctc, aaccactgccgcacaact, ccggtgacatcaaaagat, aaccactctggcgagtcg, ctgggtgccagcagccgg, ttgctgaggtatcgccag, gaattgttgctgtatttc, tggtacagctccacgtgc, tgctccacttttaacttg, agcctcctcagcagacgc, agctctgcccgggagagc, aacacgggttcaggtacc, gcttctcggagctctgat, gtgttgaagaacatatat, atgctgtgtgtactctgc, ttgaacttgtcatagatt, tcgttgtgggtttccacc, attagcacgcgggtgacc, tccttggcgtagtagtcg, gcctcaggctcgggctcc, ggttctgcactctccccg, gccacccggtcgcgggtg, ctgttgtacagggcgagc, acggcctcgggcagcggg, ccgggcggcacctccccc, tggctcggggggctggcg, agccgcagcttggacagg, atctggccgcggatggcc, tcgatgcgcttccgcttc, accagctccatgtcgata, gtcttgcaggtggatagt, cccgcggccggcgggcca, ggcgtcagcaccagtagc, cacagcagcggtagcagc, agcggcagcagccgcagc, ccggagggcggcatgggg, gaggcggcgccccccggc, actgccgagagcgcgaac, agggctggtgtggtgggg, aggccccgcccctgcagg, ggctgggggtctcccggc, aaaaggtaggagggcctc, gagggaaagctgaggctc, ctcagggagaagggcgca, gtggtggaggggaggctt, ggaccgggggtgtctcag, tatcccacggaaataacc, tagatgggcgcgatctgg, taccagaaggtgggtggt, cttgaataggggatctgt, ggcaggtcggagagagat, ccgtctcctggaggagaa, agggtctaggatgcgcgg, gggctcaggagacaggcc, ggggatgaaggcggcgtg, cagggggtgcgcccgagg, tctggggaaaagtctttg, cgggaggccgggtcggcg, actcccgagggctggtcc, ggaatgggggcgcctgag, ggacgccgtgtagggggc, agggagggagcaagcgtc, cccggcggcaaagggagg, cggtctggggtccccaag, tcctgcctcctcgcgggg, cagcgtcgcgccaagagg, tccccgcgcctccggctc, ccagcggcaacggaaaag, tctcaaaagtttttttcc, tcttctcccgaccagctc, gtccctcctcccgctcct, cctccccctcctccccgc, agtggcgggggcggcggc, ggctcgtctcagactctg, gggcctcaggctgctcct, cggcgactccttcctccg, ctccgggccgaggccggc, cccgcgggcggctcagag, ccggggggggtgccccgg, acggggcgtcccccctgc, ccccggccggggccctcg, ctgtctggctgctccgcg, tgcagccttgacctccca, ggatcaagtgatcctccc, accttagcctccagagta, gctgggaccacaggtgta, cattttttaaaagtgttt, tgtagagatagggtctca, ctatgttacccaggctgg, tctcaaatgcctggattc, aagtatcctcccatctct, gcctcccaaaagtgctag, gattacaggcgtgagcac, cccgcctggcctgaacta, ctatcttttattgtcttc, ttcactatcccccactaa, agcaggttcctggtgggc, aggaactcctcccttaac, ctctctgggcttgtttcc, tcaacctttaaaatgggt, gttatcagagtccctgcc, atctcagagtgttgctat, ggtgactgaatgagttca, ttaatgtaaggcacttca, acagtgcccaaggtgctc, aataaatagatctaacta, cagtagtgttccccactg, gtcccctgtgccttgatg, ccgggcaaaggaatagtg, cagacaggcaggaggagg, cagagagggagagagagg, gagtgggagtgggggaac, gtcagggatggagacccc, aggcaggcgcccaatgac, acagagatccgcagtcct, ctctccatctttaatggg, gccccaggtgggcttggg, gcacggtgtccttaaata, cagcccccatgggcaagg, cagcgggggcggggcggg, gtggggccgggcctgccg, gggcggggcggggcgggg, cgggacctcagctgcact, tgcaggagcgcacgatca, tgttggacagctgctcca, ccttgggcttgcggccca, cgtagtacacgatgggca, gcggctccagcgcctgcg, gcacgcagcacggcgccg, ccgaggcgcccgggttat, gctggttgtacagggcca, ggaccttgctgtactgcg, tgtccaggctccaaatgt, aggggcagggcccgaggc, agaagttggcatggtagc, ccttgggctcgtggatcc, acttccagccgaggtcct, tgcggaagtcaatgtaca, gctgccgcacgcagcagt, tcttctccgtggagctga, agcaatagttggtgtcca, gggctcggcggtgccggg, agctttgcagatgctggg, ccctctccagcggggtgg, ccatgagaagcaggaaag , gccggttcatgccatgaa, tggtggccaggtcacctc, ggcggccggtagtgaacc, cgttgatgtccacttgca, gtgtgttatccctgctgt, cacaggagcagtgggcgc, taaggcgaaagccctcaa, tttcccctccacggctca, accactgccgcacaactc, cggtgacatcaaaagata, accactctggcgagtcgc, tgggtgccagcagccggt, tgctgaggtatcgccagg, aattgttgctgtatttct, ggtacagctccacgtgct, gctccacttttaacttga, gcctcctcagcagacgca, gctctgcccgggagagca, acacgggttcaggtaccg, cttctcggagctctgatg, tgttgaagaacatatata, tgctgtgtgtactctgct, tgaacttgtcatagattt, cgttgtgggtttccacca, ttagcacgcgggtgacct, ccttggcgtagtagtcgg, cctcaggctcgggctccg, gttctgcactctccccgg, ccacccggtcgcgggtgc, tgttgtacagggcgagca, cggcctcgggcagcgggc, cgggcggcacctccccct, ggctcggggggctggcga, gccgcagcttggacagga, tctggccgcggatggcct, cgatgcgcttccgcttca, ccagctccatgtcgatag, tcttgcaggtggatagtc, ccgcggccggcgggccag, gcgtcagcaccagtagcc, acagcagcggtagcagca, gcggcagcagccgcagcc, cggagggcggcatggggg, aggcggcgccccccggca, ctgccgagagcgcgaaca, gggctggtgtggtgggga, ggccccgcccctgcaggg, gctgggggtctcccggca, aaaggtaggagggcctcg, agggaaagctgaggctcc, tcagggagaagggcgcag, tggtggaggggaggcttg, gaccgggggtgtctcagt, ' atcccacggaaataacct, agatgggcgcgatctggt, accagaaggtgggtggtc, ttgaataggggatctgtg, gcaggtcggagagagatc, cgtctcctggaggagaaa, gggtctaggatgcgcggg, ggctcaggagacaggccg, gggatgaaggcggcgtgc, agggggtgcgcccgaggt, ctggggaaaagtctttgc, gggaggccgggtcggcga, ctcccgagggctggtccg, gaatgggggcgcctgagg, gacgccgtgtagggggca, gggagggagcaagcgtcc, ccggcggcaaagggaggc, ggtctggggtccccaagt, cctgcctcctcgcggggc, agcgtcgcgccaagaggt, ccccgcgcctccggctcc, cagcggcaacggaaaagt, ctcaaaagtttttttcct, cttctcccgaccagctcg, tccctcctcccgctcctc, ctccccctcctccccgca, gtggcgggggcggcggcg, gctcgtctcagactctgg, ggcctcaggctgctcctc, ggcgactccttcctccgc, tccgggccgaggccggcc, ccgcgggcggctcagagc, cggggggggtgccccgga, cggggcgtcccccctgcc, cccggccggggccctcgc, tgtctggctgctccgcgg, gcagccttgacctcccag, gatcaagtgatcctccca, ccttagcctccagagtag, ctgggaccacaggtgtac, attttttaaaagtgtttt, gtagagatagggtctcac, tatgttacccaggctggt, ctcaaatgcctggattca, agtatcctcccatctctg, cctcccaaaagtgctagg, attacaggcgtgagcacc, ccgcctggcctgaactac, tatcttttattgtcttct, tcactatcccccactaaa, gcaggttcctggtgggca, ggaactcctcccttaacc, tctctgggcttgtttcct, caacctttaaaatgggtg, ttatcagagtccctgcca, tctcagagtgttgctatg, gtgactgaatgagttcat, taatgtaaggcacttcaa, cagtgcccaaggtgctca, a aaa aga c aac ac, ag ag g ccccac gg, cccc g gcc ga gc, cgggcaaaggaa agtgc, agacaggcaggaggaggc, agagagggagagagaggg, agtgggagtgggggaacg, tcagggatggagacccca, ggcaggcgcccaatgaca, cagagatccgcagtcctc, tctccatctttaatgggg, ccccaggtgggcttgggg, cacggtgtccttaaatac, agcccccatgggcaaggc, agcgggggcggggcgggg, tggggccgggcctgccgg, ggcggggcggggcggggc, gggacctcagctgcactt, gcaggagcgcacgatcat, gttggacagctgctccac, cttgggcttgcggcccac, gtagtacacgatgggcag, cggctccagcgcctgcgg, cacgcagcacggcgccgc, cgaggcgcccgggttatg, ctggttgtacagggccag, gaccttgctgtactgcgt, gtccaggctccaaatgta, ggggcagggcccgaggca, gaagttggcatggtagcc, cttgggctcgtggatcca, cttccagccgaggtcctt, gcggaagtcaatgtacag, ctgccgcacgcagcagtt, cttctccgtggagctgaa, gcaatagttggtgtccag, ggctcggcggtgccggga, gctttgcagatgctgggc, cctctccagcggggtggc, catgagaagcaggaaagg, ccggttcatgccatgaat, ggtggccaggtcacctcg, gcggccggtagtgaaccc, gttgatgtccacttgcag, tgtgttatccctgctgtc, acaggagcagtgggcgct, aaggcgaaagccctcaat, ttcccctccacggctcaa, ccactgccgcacaactcc, ggtgacatcaaaagataa, ccactctggcgagtcgct, gggtgccagcagccggtt, gctgaggtatcgccagga, attgttgctgtatttctg, gtacagctccacgtgctg, ctccacttttaacttgag, cctcctcagcagacgcag, ctctgcccgggagagcaa, cacgggttcaggtaccgc, ttctcggagctctgatgt, gttgaagaacatatatat, gctgtgtgtactctgctt, gaacttgtcatagatttc, gttgtgggtttccaccat, tagcacgcgggtgacctc, cttggcgtagtagtcggc, ctcaggctcgggctccgg, ttctgcactctccccggc, cacccggtcgcgggtgct, gttgtacagggcgagcac, ggcctcgggcagcgggcc, gggcggcacctccccctg, gctcggggggctggcgag, ccgcagcttggacaggat, ctggccgcggatggcctc, gatgcgcttccgcttcac, cagctccatgtcgatagt, cttgcaggtggatagtcc, cgcggccggcgggccagg, cgtcagcaccagtagcca, cagcagcggtagcagcag, cggcagcagccgcagccc, ggagggcggcatggggga, ggcggcgccccccggcac, tgccgagagcgcgaacag, ggctggtgtggtggggag, gccccgcccctgcagggg, ctgggggtctcccggcaa, aaggtaggagggcctcga, gggaaagctgaggctcct, cagggagaagggcgcagt, ggtggaggggaggcttgg accgggggtgtctcagta, tcccacggaaataaccta, gatgggcgcgatctggta, ccagaaggtgggtggtct, tgaataggggatctgtgg, caggtcggagagagatcc, gtctcctggaggagaaag, ggtctaggatgcgcgggg, gctcaggagacaggccgg, ggatgaaggcggcgtgca, gggggtgcgcccgaggtc, tggggaaaagtctttgcg, ggaggccgggtcggcgac, tcccgagggctggtccgg, aatgggggcgcctgaggg, acgccgtgtagggggcag, ggagggagcaagcgtccc, cggcggcaaagggaggcg, gtctggggtccccaagtc, ctgcctcctcgcggggca, gcgtcgcgccaagaggtc, cccgcgcctccggctccc, agcggcaacggaaaagtc, tcaaaagtttttttcctc, ttctcccgaccagctcgt, ccctcctcccgctcctcc, tccccctcctccccgcag, tggcgggggcggcggcgg, ctcgtctcagactctggg, gcctcaggctgctcctcg, gcgactccttcctccgct, ccgggccgaggccggccc, cgcgggcggctcagagcc, ggggggggtgccccggac, ggggcgtcccccctgccc, ccggccggggccctcgct, gtctggctgctccgcgga, cagccttgacctcccagg, atcaagtgatcctcccac, cttagcctccagagtagc, tgggaccacaggtgtaca, ttttttaaaagtgttttg, tagagatagggtctcact, atgttacccaggctggtc, tcaaatgcctggattcaa, gtatcctcccatctctgc, ctcccaaaagtgctagga, ttacaggcgtgagcaccc, cgcctggcctgaactact, atcttttattgtcttctt, cactatcccccactaaag, caggttcctggtgggcag, gaactcctcccttaacct, ctctgggcttgtttcctc, aacctttaaaatgggtgt, tatcagagtccctgccat, ctcagagtgttgctatgg, tgactgaatgagttcatt, aatgtaaggcacttcaac, agtgcccaaggtgctcaa, taaatagatctaactaca, gtagtgttccccactggt, cccctgtgccttgatgcc, gggcaaaggaatagtgca, gacaggcaggaggaggca, gagagggagagagaggga, gtgggagtgggggaacgt, cagggatggagaccccag, gcaggcgcccaatgacac, agagatccgcagtcctct, ctccatctttaatggggc, cccaggtgggcttggggc, acggtgtccttaaataca, gcccccatgggcaaggca, gcgggggcggggcggggt, ggggccgggcctgccggg, gcggggcggggcggggcg, ggacctcagctgcacttg, caggagcgcacgatcatg, ttggacagctgctccacc, ttgggcttgcggcccacg, tagtacacgatgggcagc, ggctccagcgcctgcggc, acgcagcacggcgccgcc, gaggcgcccgggttatgc, tggttgtacagggccagg, accttgctgtactgcgtg, tccaggctccaaatgtag, gggcagggcccgaggcag, aagttggcatggtagccc, ttgggctcgtggatccac, ttccagccgaggtccttg, cggaagtcaatgtacagc, tgccgcacgcagcagttc, ttctccgtggagctgaag, caatagttggtgtccagg, gctcggcggtgccgggag, ctttgcagatgctgggcc, ctctccagcggggtggcc, atgagaagcaggaaaggc, cggttcatgccatgaatg, gtggccaggtcacctcgg, cggccggtagtgaacccg, ttgatgtccacttgcagt, gtgttatccctgctgtca, caggagcagtgggcgcta, aggcgaaagccctcaatt, tcccctccacggctcaac, cactgccgcacaactccg, gtgacatcaaaagataac, cactctggcgagtcgctg, ggtgccagcagccggttg, ctgaggtatcgccaggaa, ttgttgctgtatttctgg, tacagctccacgtgctgc, tccacttttaacttgagc, ctcctcagcagacgcagc, tctgcccgggagagcaac, acgggttcaggtaccgct, tctcggagctctgatgtg, ttgaagaacatatatatg, ctgtgtgtactctgcttg, aacttgtcatagatttcg, ttgtgggtttccaccatt, agcacgcgggtgacctcc, ttggcgtagtagtcggcc, tcaggctcgggctccggt, tctgcactctccccggcc, acccggtcgcgggtgctg, ttgtacagggcgagcacg, gcctcgggcagcgggccg, ggcggcacctccccctgg, ctcggggggctggcgagc, cgcagcttggacaggatc, tggccgcggatggcctcg, atgcgcttccgcttcacc, agctccatgtcgatagtc, ttgcaggtggatagtccc, gcggccggcgggccaggc, gtcagcaccagtagccac, agcagcggtagcagcagc, ggcagcagccgcagcccg, gagggcggcatgggggag, gcggcgccccccggcact, gccgagagcgcgaacagg, gctggtgtggtggggagg, ccccgcccctgcaggggc, tgggggtctcccggcaaa, aggtaggagggcctcgag, ggaaagctgaggctcctc, agggagaagggcgcagtg, gtggaggggaggcttgga, ccgggggtgtctcagtat, cccacggaaataacctag , atgggcgcgatctggtac, cagaaggtgggtggtctt, gaataggggatctgtggc, aggtcggagagagatccg, tctcctggaggagaaagg, gtctaggatgcgcggggg, ctcaggagacaggccggg, gatgaaggcggcgtgcag, ggggtgcgcccgaggtct, ggggaaaagtctttgcgg, gaggccgggtcggcgact, cccgagggctggtccgga, atgggggcgcctgaggga, cgccgtgtagggggcagg, gagggagcaagcgtcccc, ggcggcaaagggaggcgg, tctggggtccccaagtcc, tgcctcctcgcggggcag, cgtcgcgccaagaggtcc, ccgcgcctccggctccca, gcggcaacggaaaagtct, caaaagtttttttcctct, tctcccgaccagctcgtc, cctcctcccgctcctcct, ccccctcctccccgcagt, ggcgggggcggcggcggc, tcgtctcagactctgggg, cctcaggctgctcctcgg, cgactccttcctccgctc, cgggccgaggccggcccc, gcgggcggctcagagccg, gggggggtgccccggacg, gggcgtcccccctgcccc, cggccggggccctcgctg, tctggctgctccgcggag, agccttgacctcccagga, tcaagtgatcctcccacc, ttagcctccagagtagct, gggaccacaggtgtacat, tttttaaaagtgttttgt, agagatagggtctcacta, tgttacccaggctggtct, caaatgcctggattcaag, tatcctcccatctctgcc, tcccaaaagtgctaggat, tacaggcgtgagcacccc, gcctggcctgaactacta, tcttttattgtcttcttc, actatcccccactaaagc, aggttcctggtgggcagg, aactcctcccttaacctc, tctgggcttgtttcctca, acctttaaaatgggtgtt, atcagagtccctgccatc, tcagagtgttgctatggt, gactgaatgagttcatta, atgtaaggcacttcaaca, gtgcccaaggtgctcaat, aaatagatctaactacag, tagtgttccccactggtc, ccctgtgccttgatgccg, ggcaaaggaatagtgcag, acaggcaggaggaggcag, agagggagagagagggag, tgggagtgggggaacgtc, agggatggagaccccagg, caggcgcccaatgacaca, gagatccgcagtcctctc, tccatctttaatggggcc, ccaggtgggcttggggca, cggtgtccttaaatacag, cccccatgggcaaggcag, cgggggcggggcggggtg, gggccgggcctgccgggg, cggggcggggcggggcgg, gacctcagctgcacttgc, aggagcgcacgatcatgt, tggacagctgctccacct, tgggcttgcggcccacgt, agtacacgatgggcagcg, gctccagcgcctgcggca, cgcagcacggcgccgccg, aggcgcccgggttatgct, ggttgtacagggccagga, ccttgctgtactgcgtgt, ccaggctccaaatgtagg, ggcagggcccgaggcaga, agttggcatggtagccct, tgggctcgtggatccact, tccagccgaggtccttgc, ggaagtcaatgtacagct, gccgcacgcagcagttct, tctccgtggagctgaagc, aatagttggtgtccaggg, ctcggcggtgccgggagc, tttgcagatgctgggccc, tctccagcggggtggcca, tgagaagcaggaaaggcc, ggttcatgccatgaatgg, tggccaggtcacctcggc, ggccggtagtgaacccgt, tgatgtccacttgcagtg, tgttatccctgctgtcac, aggagcagtgggcgctaa, ggcgaaagccctcaattt, cccctccacggctcaacc, actgccgcacaactccgg , tgacatcaaaagataacc, actctggcgagtcgctgg, gtgccagcagccggttgc, tgaggtatcgccaggaat, tgttgctgtatttctggt, acagctccacgtgctgct, ccacttttaacttgagcc, tcctcagcagacgcagct, ctgcccgggagagcaaca, cgggttcaggtaccgctt, ctcggagctctgatgtgt, tgaagaacatatatatgc, tgtgtgtactctgcttga, acttgtcatagatttcgt, tgtgggtttccaccatta, gcacgcgggtgacctcct, tggcgtagtagtcggcct, caggctcgggctccggtt, ctgcactctccccggcca, cccggtcgcgggtgctgt, tgtacagggcgagcacgg, cctcgggcagcgggccgg, gcggcacctccccctggc, tcggggggctggcgagcc, gcagcttggacaggatct, ggccgcggatggcctcga, tgcgcttccgcttcacca, gctccatgtcgatagtct, tgcaggtggatagtcccg, cggccggcgggccaggcg, tcagcaccagtagccaca, gcagcggtagcagcagcg, gcagcagccgcagcccgg, agggcggcatgggggagg, cggcgccccccggcactg, ccgagagcgcgaacaggg, ctggtgtggtggggaggc, cccgcccctgcaggggct, gggggtctcccggcaaaa, ggtaggagggcctcgagg, gaaagctgaggctcctca, gggagaagggcgcagtgg, tggaggggaggcttggac, cgggggtgtctcagtatc, ccacggaaataacctaga, tgggcgcgatctggtacc, agaaggtgggtggtcttg, aataggggatctgtggca, ggtcggagagagatccgt, ctcctggaggagaaaggg, tctaggatgcgcgggggc, tcaggagacaggccgggg, atgaaggcggcgtgcagg, gggtgcgcccgaggtctg, gggaaaagtctttgcggg, aggccgggtcggcgactc, ccgagggctggtccggaa, tgggggcgcctgagggac, gccgtgtagggggcaggg, agggagcaagcgtccccg, gcggcaaagggaggcggt, ctggggtccccaagtcct, gcctcctcgcggggcagc, gtcgcgccaagaggtccc, cgcgcctccggctcccag, cggcaacggaaaagtctc, aaaagtttttttcctctt, ctcccgaccagctcgtcc, ctcctcccgctcctcctc, cccctcctccccgcagtg, gcgggggcggcggcggct, cgtctcagactctggggc, ctcaggctgctcctcggc, gactccttcctccgctcc, gggccgaggccggccccg, cgggcggctcagagccgg, ggggggtgccccggacgg, ggcgtcccccctgccccc, ggccggggccctcgctgt, ctggctgctccgcggagg, gccttgacctcccaggat, caagtgatcctcccacct, tagcctccagagtagctg, ggaccacaggtgtacatt, ttttaaaagtgttttgta, gagatagggtctcactat, gttacccaggctggtctc, aaatgcctggattcaagt, atcctcccatctctgcct, cccaaaagtgctaggatt, acaggcgtgagcaccccg, cctggcctgaactactat, cttttattgtcttcttca, ctatcccccactaaagca, ggttcctggtgggcagga, actcctcccttaacctct, ctgggcttgtttcctcaa, cctttaaaatgggtgtta, tcagagtccctgccatct, cagagtgttgctatggtg, actgaatgagttcattaa, tgtaaggcacttcaacag, tgcccaaggtgctcaata, aatagatctaactacagt, agtgttccccactggtcc, cctgtgccttgatgccgg, gcaaaggaatagtgcaga, caggcaggaggaggcaga, gagggagagagagggagt, gggagtgggggaacgtca, gggatggagaccccaggc, aggcgcccaatgacacag, agatccgcagtcctctct, ccatctttaatggggccc, caggtgggcttggggcac, ggtgtccttaaatacagc, ccccatgggcaaggcagc, gggggcggggcggggtgg, ggccgggcctgccggggc, ggggcggggcggggcggg, acctcagctgcacttgca, ggagcgcacgatcatgtt, ggacagctgctccacctt, gggcttgcggcccacgta, gtacacgatgggcagcgg, ctccagcgcctgcggcac, gcagcacggcgccgccga, ggcgcccgggttatgctg, gttgtacagggccaggac, cttgctgtactgcgtgtc, caggctccaaatgtaggg, gcagggcccgaggcagaa, gttggcatggtagccctt, gggctcgtggatccactt, ccagccgaggtccttgcg, gaagtcaatgtacagctg, ccgcacgcagcagttctt, ctccgtggagctgaagca, atagttggtgtccagggc, tcggcggtgccgggagct, ttgcagatgctgggccct, ctccagcggggtggccat, gagaagcaggaaaggccg, gttcatgccatgaatggt, ggccaggtcacctcggcg, gccggtagtgaacccgtt, gatgtccacttgcagtgt, gttatccctgctgtcaca, ggagcagtgggcgctaag, gcgaaagccctcaatttc, ccctccacggctcaacca, ctgccgcacaactccggt, gacatcaaaagataacca, ctctggcgagtcgctggg, tgccagcagccggttgct, gaggtatcgccaggaatt, gttgctgtatttctggta, cagctccacgtgctgctc, cacttttaacttgagcct, cctcagcagacgcagctc, tgcccgggagagcaacac, gggttcaggtaccgcttc, tcggagctctgatgtgtt, gaagaacatatatatgct, gtgtgtactctgcttgaa, cttgtcatagatttcgtt, gtgggtttccaccattag, 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gagaaagggtctaggatg, cgcgggggctcaggagac, aggccggggatgaaggcg, gcgtgcagggggtgcgcc, cgaggtctggggaaaagt, ctttgcgggaggccgggt, cggcgactcccgagggct, ggtccggaatgggggcgc, ctgagggacgccgtgtag, ggggcagggagggagcaa, gcgtccccggcggcaaag, ggaggcggtctggggtcc, ccaagtcctgcctcctcg, cggggcagcgtcgcgcca, agaggtccccgcgcctcc, ggctcccagcggcaacgg, aaaagtctcaaaagtttt, tttcctcttctcccgacc, agctcgtccctcctcccg, ctcctcctccccctcctc, cccgcagtggcgggggcg, gcggcggctcgtctcaga, ctctggggcctcaggctg, ctcctcggcgactccttc, ctccgctccgggccgagg, ccggccccgcgggcggct, cagagccggggggggtgc, cccggacggggcgtcccc, cctgcccccggccggggc, cctcgctgtctggctgct; tcccaggatcaagtgatc, ctcccaccttagcctcca, gagtagctgggaccacag, gtgtacattttttaaaag, tgttttgtagagataggg, tctcactatgttacccag, gctggtctcaaatgcctg, gattcaagtatcctccca, tctctgcctcccaaaagt, gctaggattacaggcgtg, agcaccccgcctggcctg, aactactatcttttattg, tcttcttcactatccccc, actaaagcaggttcctgg, tgggcaggaactcctccc, ttaacctctctgggcttg, tttcctcaacctttaaaa, tgggtgttatcagagtcc, ctgccatctcagagtgtt, gctatggtgactgaatga, gttcattaatgtaaggca, cttcaacagtgcccaagg, tgctcaataaatagatct, aactacagtagtgttccc, cactggtcccctgtgcct, tgatgccgggcaaaggaa, tagtgcagacaggcagga, ggaggcagagagggagag, agagggagtgggagtggg, ggaacgtcagggatggág, accccaggcaggcgccca, atgacacagagatccgca, gtcctctctccatcttta, atggggccccaggtgggc, ttggggcacggtgtcctt, aaatacagcccccatggg, caaggcagcgggggcggg, gcggggtggggccgggcc, tgccggggcggggcgggg, cggggcgggacctcagct, gcacttgcaggagcgcac, gatcatgttggacagctg, ctccaccttgggcttgcg, gcccacgtagtacacgat, gggcagcggctccagcgc, ctgcggcacgcagcacgg, cgccgccgaggcgcccgg, gttatgctggttgtacag, ggccaggaccttgctgta, ctgcgtgtccaggctcca, aatgtaggggcagggccc, gaggcagaagttggcatg, gtagcccttgggctcgtg, gatccacttccagccgag, gtccttgcggaagtcaat, gtacagctgccgcacgca, gcagttcttctccgtgga, gctgaagcaatagttggt, gtccagggctcggcggtg, ccgggagctttgcagatg, ctgggccctctccagcgg, ggtggccatgagaagcag, gaaaggccggttcatgcc, atgaatggtggccaggtc, acctcggcggccggtagt, gaacccgttgatgtccac, ttgcagtgtgttatccct, gctgtcacaggagcagtg, ggcgctaaggcgaaagcc, ctcaatttcccctccacg, 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ctatggtgactgaatgag, ttcattaatgtaaggcac, ttcaacagtgcccaaggt, gctcaataaatagatcta, actacagtagtgttcccc, actggtcccctgtgcctt, gatgccgggcaaaggaat, agtgcagacaggcaggag, gaggcagagagggagaga, gagggagtgggagtgggg, gaacgtcagggatggaga, ccccaggcaggcgcccaa, tgacacagagatccgcag, tcctctctccatctttaa, tggggccccaggtgggct, tggggcacggtgtcctta, aatacagcccccatgggc, aaggcagcgggggcgggg, cggggtggggccgggcct, gccggggcggggcggggc, ggggcgggacctcagctg, cacttgcaggagcgcacg, atcatgttggacagctgc, tccaccttgggcttgcgg, cccacgtagtacacgatg, ggcagcggctccagcgcc, tgcggcacgcagcacggc, gccgccgaggcgcccggg, ttatgctggttgtacagg, gccaggaccttgctgtac, tgcgtgtccaggctccaa, atgtaggggcagggcccg, aggcagaagttggcatgg, tagcccttgggctcgtgg, atccacttccagccgagg, tccttgcggaagtcaatg, tacagctgccgcacgcag, cagttcttctccgtggag, ctgaagcaatagttggtg, tccagggctcggcggtgc, cgggagctttgcagatgc, tgggccctctccagcggg, gtggccatgagaagcagg, aaaggccggttcatgcca, tgaatggtggccaggtca, cctcggcggccggtagtg, aacccgttgatgtccact, tgcagtgtgttatccctg, ctgtcacaggagcagtgg, gcgctaaggcgaaagccc, tcaatttcccctccacgg, ctcaaccactgccgcaca, actccggtgacatcaaaa, gataaccactctggcgag, tcgctgggtgccagcagc, cggttgctgaggtatcgc, caggaattgttgctgtat, ttctggtacagctccacg, tgctgctccacttttaac, ttgagcctcctcagcaga, ' cgcagctctgcccgggag, agcaacacgggttcaggt, accgcttctcggagctct, gatgtgttgaagaacata, tatatgctgtgtgtactc, tgcttgaacttgtcatag, atttcgttgtgggtttcc, accattagcacgcgggtg, acctccttggcgtagtag, tcggcctcaggctcgggc, tccggttctgcactctcc, . ccggccacccggtcgcgg, gtgctgttgtacagggcg, agcacggcctcgggcagc, gggccgggcggcacctcc, ccctggctcggggggctg, gcgagccgcagcttggac, aggatctggccgcggatg, gcctcgatgcgcttccgc, ttcaccagctccatgtcg, atagtcttgcaggtggat, agtcccgcggccggcggg, ccaggcgtcagcaccagt, agccacagcagcggtagc, agcagcggcagcagccgc, agcccggagggcggcatg, ggggaggcggcgcccccc, ggcactgccgagagcgcg, aacagggctggtgtggtg, gggaggccccgcccctgc, aggggctgggggtctccc, ggcaaaaggtaggagggc, ctcgagggaaagctgagg, ctcctcagggagaagggc, gcagtggtggaggggagg, cttggaccgggggtgtct, cagtatcccacggaaata, acctagatgggcgcgatc, tggtaccagaaggtgggt, ggtcttgaataggggatc, tgtggcaggtcggagaga, gatccgtctcctggagga, gaaagggtctaggatgcg, cgggggctcaggagacag, gccggggatgaaggcggc, gtgcagggggtgcgcccg, aggtctggggaaaagtct, ttgcgggaggccgggtcg, gcgactcccgagggctgg, tccggaatgggggcgcct, gagggacgccgtgtaggg, ggcagggagggagcaagc, gtccccggcggcaaaggg, aggcggtctggggtcccc, aagtcctgcctcctcgcg, gggcagcgtcgcgccaag, aggtccccgcgcctccgg, ctcccagcggcaacggaa, aagtctcaaaagtttttt, tcctcttctcccgaccag , ctcgtccctcctcccgct, cctcctccccctcctccc, cgcagtggcgggggcggc, ggcggctcgtctcagact, ctggggcctcaggctgct, cctcggcgactccttcct, ccgctccgggccgaggcc, ggccccgcgggcggctca, gagccggggggggtgccc, cggacggggcgtcccccc, tgcccccggccggggccc, tcgctgtctggctgctcc, ccaggatcaagtgatcct, cccaccttagcctccaga, gtagctgggaccacaggt, gtacattttttaaaagtg, ttttgtagagatagggtc, tcactatgttacccaggc, tggtctcaaatgcctgga, ttcaagtatcctcccatc, tctgcctcccaaaagtgc, taggattacaggcgtgag, caccccgcctggcctgaa, ctactatcttttattgtc, ttcttcactatcccccac, taaagcaggttcctggtg, ggcaggaactcctccctt, aacctctctgggcttgtt, tcctcaacctttaaaatg, ggtgttatcagagtccct, gccatctcagagtgttgc, tatggtgactgaatgagt, tcattaatgtaaggcact, tcaacagtgcccaaggtg, ctcaataaatagatctaa, ctacagtagtgttcccca, ctggtcccctgtgccttg, atgccgggcaaaggaata, gtgcagacaggcaggagg, aggcagagagggagagag, agggagtgggagtggggg, aacgtcagggatggagac, cccaggcaggcgcccaat, gacacagagatccgcagt, cctctctccatctttaat, ggggccccaggtgggctt, ggggcacggtgtccttaa, atacagcccccatgggca, aggcagcgggggcggggc, ggggtggggccgggcctg, ccggggcggggcggggcg, gggcgggacctcagctgc, acttgcaggagcgcacga, tcatgttggacagctgct, ccaccttgggcttgcggc, ccacgtagtacacgatgg , gcagcggctccagcgcct, gcggcacgcagcacggcg, ccgccgaggcgcccgggt, tatgctggttgtacaggg, ccaggaccttgctgtact, gcgtgtccaggctccaaa, tgtaggggcagggcccga, ggcagaagttggcatggt, agcccttgggctcgtgga, tccacttccagccgaggt, ccttgcggaagtcaatgt, acagctgccgcacgcagc, agttcttctccgtggagc, tgaagcaatagttggtgt, ccagggctcggcggtgcc, gggagctttgcagatgct, gggccctctccagcgggg, tggccatgagaagcagga, aaggccggttcatgccat, gaatggtggccaggtcac, ctcggcggccggtagtga, acccgttgatgtccactt, gcagtgtgttatccctgc, tgtcacággagcagtggg, cgctaaggcgaaagccct, caatttcccctccacggc, tcaaccactgccgcacaa, ctccggtgacatcaaaag , ataaccactctggcgagt, cgctgggtgccagcagcc, ggttgctgaggtatcgcc, aggaattgttgctgtatt, tctggtacagctccacgt, gctgctccacttttaact, tgagcctcctcagcagac, gcagctctgcccgggaga, gcaacacgggttcaggta, ccgcttctcggagctctg, atgtgttgaagaacatat, atatgctgtgtgtactct, gcttgaacttgtcataga, tttcgttgtgggtttcca, ccattagcacgcgggtga, cctccttggcgtagtagt, cggcctcaggctcgggct, ccggttctgcactctccc, cggccacccggtcgcggg, tgctgttgtacagggcga, gcacggcctcgggcagcg, ggccgggcggcacctccc, cctggctcggggggctgg, cgagccgcagcttggaca, ggatctggccgcggatgg, cctcgatgcgcttccgct, tcaccagctccatgtcga, tagtcttgcaggtggata, gtcccgcggccggcgggc, caggcgtcagcaccagta, gccacagcagcggtagca, gcagcggcagcagccgca, gcccggagggcggcatgg, gggaggcggcgccccccg, gcactgccgagagcgcga, acagggctggtgtggtgg, ggaggccccgcccctgca, ggggctgggggtctcccg, gcaaaaggtaggagggcc, tcgagggaaagctgaggc, tcctcagggagaagggcg, cagtggtggaggggaggc, ttggaccgggggtgtctc, agtatcccacggaaataa, cctagatgggcgcgatct, ggtaccagaaggtgggtg, gtcttgaataggggatct, gtggcaggtcggagagag, atccgtctcctggaggag, aaagggtctaggatgcgc, gggggctcaggagacagg, ccggggatgaaggcggcg, tgcagggggtgcgcccga, ggtctggggaaaagtctt, tgcgggaggccgggtcgg, cgactcccgagggctggt, ccggaatgggggcgcctg, agggacgccgtgtagggg, gcagggagggagcaagcg, tccccggcggcaaaggga, ggcggtctggggtcccca, agtcctgcctcctcgcgg, ggcagcgtcgcgccaaga, ggtccccgcgcctccggc, tcccagcggcaacggaaa, agtctcaaaagttttttt, cctcttctcccgaccagc, tcgtccctcctcccgctc, ctcctccccctcctcccc, gcagtggcgggggcggcg, gcggctcgtctcagactc, tggggcctcaggctgctc, ctcggcgactccttcctc, cgctccgggccgaggccg, gccccgcgggcggctcag, agccggggggggtgcccc, ggacggggcgtcccccct, gcccccggccggggccct, cgctgtctggctgctccg, Ejemplo 20 Los oligonucleótidos antisentido TGF-beta 2 de este ejemplo forman parte de la invención. Además constituyen realizaciones de oligonucleótidos que inhiben la formación de TGF-beta 2 "in vitro" e "in vivo" y entonces se pueden usar en vehículos aceptables para uso farmacéutico como una composición farmacéutica para el tratamiento de distintos tipos de cáncer como se describe en esta invención y/o para inhibir la formación de metástasis.

Oligonucleótidos antisentido TGF-beta 2: tttaaaaaaatttgcttc, ttgtctctctcacttaca, aagtaggtgaaatgtaga, ataaggccttcaactttt, tttgtgtcagatgccagt, tttaacaaacagaacaca, aacttccaaagtgtctga, actagtaccgccttttca, aaaattttttaacactga, tgaaccaaggctctctta, tgttttcttgttacaagc, atcatcgttgtcgtcgtc, atcatcattatcatcatc, attgtcattttggtcttg, ccacttttccaagaattt, tagctgcatttgcaagac, tttacaatcatattagaa, agctgttcaatcttgggt, gttttgccaatgtagtag, agaatggttagaggttct, aaatcttgggacacgcag, caaggagaagcagatgct, tctggatttatggtatta, tataagctcaggaccctg, ctgtgctgagtgtctgaa, ctccataaatacgggcat, gctccagcacagaagttg, gcattgtaccctttgggt, tcgtgtatccatttccac, cctagatccctcttgaaa, tcaatgtaaagtggacgt, aggcagcaattatcctgc, acatttctaaagcaatag, gccgcatccaaagcacgc, ttcttccgccggttggtc, tgttgtgactcaagtctg, taggagggcaataacatt, agcaggagatgtggggtc, ttcccactgttttttttc, ctagtggactttatagtt, ttctgatcaccactggta, tatgtggaggtgccatca, atacctgcaaatcttgct, tctagttcttcactttta, tttgggatgatgtaatta, ttagatggtacaaaagtg, cagcagggacagtgtaag, cttattttaaatcccagg, ttcctgtctttatggtga, agccattcatgaacagca, tcagttacatcgaaggag, agccattcgccttctgct, cttgttttcacaactttg, ctgtcgatgtagcgctgg, gttggagatgttaaatct, ttggacttgagaatctga, tatagctcaatccgttgt, tcaggcactctggctttt, gggttctgcaaacgaaag, actctgaactctgctttc, accaaattggaagcattc, ttctccattgctgagacg, tcaaatcgaacaattctg, aagtagggtctgtagaaa, gtgggcgggatggcattt, tcggaggggaagaagggc, ggcatgtctattttgtaa, acctccttggcgtagtac, tcttcgtcgctcctctcg, cgctcgcaggcggccgcc, cfccggctcgccttctcc, tggagcaagtccctggtg, ctgttgtagatggaaatc, acctccggggggacttcc, tcgggctcaggatagtct, tctgggggactggtgagc, ttcagcttgctcaggatc, tgcccgcggatcgcctcg, atcctcttgcgcatgaac, tggtccatatcgagtgtg, ctgcaggtagacaggctg, agcgcgaccgtgaccaga, tgcaggatcagaaaagcg, ctcagcacacagtagtgc, attttttaaaaaagtgga, aaaaaaagttgtttttaa, aagtcagaataaaaaaaa, agaaatcaacaattctca, aagtatagatcaaggaga, gttgtttggttttttgtt, gttgttgtttgtttttga, tgcgaaacttttgcaaac, aatctagtcaatgcccaa, cagaaaaacgtatcctgc, ttaaaaaaatttgcttct, tgtctctctcacttacaa, agtaggtgaaatgtagaa, taaggccttcaacttttt, ttgtgtcagatgccagtt, ttaacaaacagaacacaa, acttccaaagtgtctgaa, ctagtaccgccttttcaa, aaattttttaacactgat, gaaccaaggctctcttat, gttttcttgttacaagca, tcatcgttgtcgtcgtca, tcatcattatcatcatca, ttgtcattttggtcttgc, cacttttccaagaatttt, agctgcatttgcaagact, ttacaatcatattagaaa, gctgttcaatcttgggtg, ttttgccaatgtagtaga, gaatggttagaggttcta, aatcttgggacacgcagc, aaggagaagcagatgctt, ctggatttatggtattat, ataagctcaggaccctgc, tgtgctgagtgtctgaac, tccataaatacgggcatg, ctccagcacagaagttgg, cattgtaccctttgggtt, cgtgtatccatttccacc, ctagatccctcttgaaat, caatgtaaagtggacgta, ggcagcaattatcctgca, catttctaaagcaatagg, ccgcatccaaagcacgct, tcttccgccggttggtct, gttgtgactcaagtctgt, aggagggcaataacatta, gcaggagatgtggggtct, tcccactgttttttttcc, tagtggactttatagttt, tctgatcaccactggtat, atgtggaggtgccatcaa, tacctgcaaatcttgctt, ctagttcttcacttttat, ttgggatgatgtaattat, tagatggtacaaaagtgc, agcagggacagtgtaagc, ttattttaaatcccaggt, tcctgtctttatggtgaa, gccattcatgaacagcat, cagttacatcgaaggaga, gccattcgccttctgctc, ttgttttcacaactttgc, tgtcgatgtagcgctggg, ttggagatgttaaatctt, tggacttgagaatctgat, atagctcaatccgttgtt, caggcactctggcttttg, ggttctgcaaacgaaaga, ctctgaactctgctttca, ccaaattggaagcattct, tctccattgctgagacgt, caaatcgaacaattctga, agtagggtctgtagaaag, tgggcgggatggcatttt, cggaggggaagaagggcg, gcatgtctattttgtaaa, cctccttggcgtagtact, cttcgtcgctcctctcgc, gctcgcaggcggccgccc, tccggctcgccttctcct, ggagcaagtccctggtgc, tgttgtagatggaaatca, cctccggggggacttcct, cgggctcaggatagtctt, ctgggggactggtgagct, tcagcttgctcaggatct, gcccgcggatcgcctcga, tcctcttgcgcatgaact, ggtccatatcgagtgtgc, tgcaggtagacaggctga, gcgcgaccgtgaccagat, gcaggatcagaaaagcgc, tcagcacacagtagtgca, ttttttaaaaaagtggaa, aaaaaagttgtttttaaa, agtcagaataaaaaaaaa, gaaatcaacaattctcaa, agtatagatcaaggagag, ttgtttggttttttgttg, ttgttgtttgtttttgat, gcgaaacttttgcaaaca, atctagtcaatgcccaac, agaaaaacgtatcctgct, taaaaaaatttgcttctt, gtctctctcacttacaaa, gtaggtgaaatgtagaat, aaggccttcaactttttt, tgtgtcagatgccagttt, taacaaacagaacacaaa, cttccaaagtgtctgaac, tagtaccgccttttcaaa, aattttttaacactgatg, aaccaaggctctcttatg, ttttcttgttacaagcat, catcgttgtcgtcgtcat, catcattatcatcatcat, tgtcattttggtcttgcc, acttttccaagaatttta, gctgcatttgcaagactt, tacaatcatattagaaag, ctgttcaatcttgggtgt, tttgccaatgtagtagag, aatggttagaggttctaa, atcttgggacacgcagca, aggagaagcagatgcttc, tggatttatggtattata, taagctcaggaccctgct, gtgctgagtgtctgaact, ccataaatacgggcatgc, tccagcacagaagttggc, attgtaccctttgggttc, gtgtatccatttccaccc, tagatccctcttgaaatc, aatgtaaagtggacgtag, gcagcaattatcctgcac, atttctaaagcaataggc, cgcatccaaagcacgctt, cttccgccggttggtctg, ttgtgactcaagtctgta, ggagggcaataacattag, caggagatgtggggtctt, cccactgttttttttcct, agtggactttatagtttt, ctgatcaccactggtata, tgtggaggtgccatcaat, acctgcaaatcttgcttc, tagttcttcacttttatt, tgggatgatgtaattatt, agatggtacaaaagtgca, gcagggacagtgtaagct, tattttaaatcccaggtt, cctgtctttatggtgaag, ccattcatgaacagcatc, agttacatcgaaggagag, ccattcgccttctgctct, tgttttcacaactttgct, gtcgatgtagcgctgggt, tggagatgttaaatcttt, ggacttgagaatctgata, tagctcaatccgttgttc, aggcactctggcttttgg, gttctgcaaacgaaagac, tctgaactctgctttcac, caaattggaagcattctt, ctccattgctgagacgtc, aaatcgaacaattctgaa, gtagggtctgtagaaagt, gggcgggatggcattttc, ggaggggaagaagggcgg, catgtctattttgtaaac, ctccttggcgtagtactc, ttcgtcgctcctctcgcg, ctcgcaggcggccgccct, ccggctcgccttctcctg, gagcaagtccctggtgct, gttgtagatggaaatcac, ctccggggggacttcctc, gggctcaggatagtcttc, tgggggactggtgagctt, cagcttgctcaggatctg, cccgcggatcgcctcgat, cctcttgcgcatgaactg, gtccatatcgagtgtgct, gcaggtagacaggctgag, cgcgaccgtgaccagatg, caggatcagaaaagcgct, cagcacacagtagtgcat, ttttttttttaaaaaaaaaaaaggttggggaaaaaa,, aaaaagttgtttttaaaa, gtcagaataaaaaaaaag, aaatcaacaattctcaaa, gtatagatcaaggagagt, tgtttggttttttgttgt, tgttg tttgtttttg atg , cgaaacttttgcaaacaa, tctagtcaatgcccaaca, gaaaaacgtatcctgctt, aaaaaaatttgcttcttg, tctctctcacttacaaag, taggtgaaatgtagaata, aggccttcaacttttttt, gtgtcagatgccagtttt, aacaaacagaacacaaac, ttccaaagtgtctgaact, agtaccgccttttcaaaa, attttttaacactgatga, accaaggctctcttatgt, tttcttgttacaagcatc, atcgttgtcgtcgtcatc, atcattatcatcatcatt, gtcattttggtcttgcca, cttttccaagaattttag, ctgcatttgcaagacttt, acaatcatattagaaagc, tgttcaatcttgggtgtt, ttgccaatgtagtagaga, atggttagaggttctaaa, tcttgggacacgcagcaa, ggagaagcagatgcttct, ggatttatggtattatat, aagctcaggaccctgctg, tgctgagtgtctgaactc, cataaatacgggcatgct, ccagcacagaagttggca, ttgtaccctttgggttcg, tgtatccatttccaccct, agatccctcttgaaatca, atgtaaagtggacgtagg, cagcaattatcctgcaca, tttctaaagcaataggcc, gcatccaaagcacgcttc, ttccgccggttggtctgt, tgtgactcaagtctgtag, gagggcaataacattagc, aggagatgtggggtcttc, ccactgttttttttccta, gtggactttatagttttc, tgatcaccactggtatat, gtggaggtgccatcaata, cctgcaaatcttgcttct, agttcttcacttttattt, gggatgatgtaattatta, gatggtacaaaagtgcag, cagggacagtgtaagctt, attttaaatcccaggttc, ctgtctttatggtgaagc, cattcatgaacagcatca, gttacatcgaaggagagc, cattcgccttctgctctt, gttttcacaactttgctg, tcgatgtagcgctgggtt, ggagatgttaaatctttg, gacttgagaatctgatat, agctcaatccgttgttca, ggcactctggcttttggg, ttctgcaaacgaaagact, ctgaactctgctttcacc, aaattggaagcattcttc, tccattgctgagacgtca, aatcgaacaattctgaag, tagggtctgtagaaagtg, ggcgggatggcattttcg, gaggggaagaagggcggc, atgtctattttgtaaacc, tccttggcgtagtactct, tcgtcgctcctctcgcgc, tcgcaggcggccgccctc, cggctcgccttctcctgg, agcaagtccctggtgctg, ttgtagatggaaatcacc, tccggggggacttcctcg, ggctcaggatagtcttct, gggggactggtgagcttc, agcttgctcaggatctgc, ccgcggatcgcctcgatc, ctcttgcgcatgaactgg, tccatatcgagtgtgctg, caggtagacaggctgagc, gcgaccgtgaccagatgc, aggatcagaaaagcgctc, agcacacagtagtgcatt, ttttaaaaaagtggaaaa, aaaagttgtttttaaaag, tcagaataaaaaaaaaga, aatcaacaattctcaaag, tatagatcaaggagagtt, gtttggttttttgttgtt, gttgtttgtttttgatgc, gaaacttttgcaaacaat, ctagtcaatgcccaacag, aaaaacgtatcctgcttg, aaaaaatttgcttcttgt, ctctctcacttacaaagt, aggtgaaatgtagaataa, ggccttcaactttttttg, tgtcagatgccagtttta, acaaacagaacacaaact, tccaaagtgtctgaacta, gtaccgccttttcaaaaa, ttttttaacactgatgaa, ccaaggctctcttatgtt, ttcttgttacaagcatca, tcgttgtcgtcgtcatca, tcattatcatcatcattg, tcattttggtcttgccac, ttttccaagaattttagc, tgcatttgcaagacttta, caatcatattagaaagct, gttcaatcttgggtgttt, tgccaatgtagtagagaa, tggttagaggttctaaat, cttgggacacgcagcaag, gagaagcagatgcttctg, gatttatggtattatata, agctcaggaccctgctgt, gctgagtgtctgaactcc, ataaatacgggcatgctc, cagcacagaagttggcat, tgtaccctttgggttcgt, gtatccatttccacccta, gatccctcttgaaatcaa, tgtaaagtggacgtaggc, agcaattatcctgcacat, ttctaaagcaataggccg, catccaaagcacgcttct, tccgccggttggtctgtt, gtgactcaagtctgtagg, agggcaataacattagca, ggagatgtggggtcttcc, cactgttttttttcctag, tggactttatagttttct, gatcaccactggtatatg, tggaggtgccatcaatac, ctgcaaatcttgcttcta, gttcttcacttttatttg, ggatgatgtaattattag, atggtacaaaagtgcagc, agggacagtgtaagctta, ttttaaatcccaggttcc, tgtctttatggtgaagcc, attcatgaacagcatcag, ttacatcgaaggagagcc, attcgccttctgctcttg, ttttcacaactttgctgt, cgatgtagcgctgggttg, gagatgttaaatctttgg, acttgagaatctgatata, gctcaatccgttgttcag, gcactctggcttttgggt, tctgcaaacgaaagactc, tgaactctgctttcacca, aattggaagcattcttct, ccattgctgagacgtcaa, atcgaacaattctgaagt, agggtctgtagaaagtgg, gcgggatggcattttcgg, aggggaagaagggcggca, tgtctattttgtaaacct, ccttggcgtagtactctt, cgtcgctcctctcgcgct, cgcaggcggccgccctcc, ggctcgccttctcctgga, gcaagtccctggtgctgt, tgtagatggaaatcacct, ccggggggacttcctcgg, gctcaggatagtcttctg, ggggactggtgagcttca, gcttgctcaggatctgcc, cgcggatcgcctcgatcc, tcttgcgcatgaactggt, ccatatcgagtgtgctgc, aggtagacaggctgagcg, cgaccgtgaccagatgca, ggatcagaaaagcgctca, gcacacagtagtgcattt, tttaaaaaagtggaaaaa, aaagttgtttttaaaagt, cagaataaaaaaaaagaa, atcaacaattctcaaagt, atagatcaaggagagttg, tttggttttttgttgttg, ttgtttgtttttgatgcg, aaacttttgcaaacaatc, tagtcaatgcccaacaga, aaaaatttgcttcttgtc, tctctcacttacaaagta, ggtgaaatgtagaataag, gccttcaactttttttgt, gtcagatgccagttttaa, caaacagaacacaaactt, ccaaagtgtctgaactag, taccgccttttcaaaaat, tttttaacactgatgaac, caaggctctcttatgttt, tcttgttacaagcatcat, cgttgtcgtcgtcatcat, cattatcatcatcattgt, cattttggtcttgccact, tttccaagaattttagct, gcatttgcaagactttac, aatcatattagaaagctg, ttcaatcttgggtgtttt, gccaatgtagtagagaat, ggttagaggttctaaatc, ttgggacacgcagcaagg, agaagcagatgcttctgg, atttatggtattatataa, gctcaggaccctgctgtg, ctgagtgtctgaactcca, taaatacgggcatgctcc, agcacagaagttggcatt, gtaccctttgggttcgtg, tatccatttccaccctag, atccctcttgaaatcaat, gtaaagtggacgtaggca, gcaattatcctgcacatt, tctaaagcaataggccgc, atccaaagcacgcttctt, ccgccggttggtctgttg, tgactcaagtctgtagga, gggcaataacattagcag, gagatgtggggtcttccc, actgttttttttcctagt, ggactttatagttttctg, atcaccactggtatatgt, ggaggtgccatcaatacc, tgcaaatcttgcttctag, ttcttcacttttatttgg, gatgatgtaattattaga, tggtacaaaagtgcagca, gggacagtgtaagcttat, tttaaatcccaggttcct, gtctttatggtgaagcca, ttcatgaacagcatcagt, tacatcgaaggagagcca, ttcgccttctgctcttgt, tttcacaactttgctgtc, gatgtagcgctgggttgg, agatgttaaatctttgga, cttgagaatctgatatag, ctcaatccgttgttcagg, cactctggcttttgggtt, ctgcaaacgaaagactct, gaactctgctttcaccaa, attggaagcattcttctc, cattgctgagacgtcaaa, tcgaacaattctgaagta, gggtctgtagaaagtggg, cgggatggcattttcgga, ggggaagaagggcggcat, gtctattttgtaaacctc, cttggcgtagtactcttc, gtcgctcctctcgcgctc, gcaggcggccgccctccg, gctcgccttctcctggag, caagtccctggtgctgtt, gtagatggaaatcacctc, cggggggacttcctcggg, ctcaggatagtcttctgg, gggactggtgagcttcag, cttgctcaggatctgccc, gcggatcgcctcgatcct, cttgcgcatgaactggtc, catatcgagtgtgctgca, ggtagacaggctgagcgc, gaccgtgaccagatgcag, gatcagaaaagcgctcag, cacacagtagtgcatttt, ttaaaaaagtggaaaaaa, aagttgtttttaaaagtc, agaataaaaaaaaagaaa, tcaacaattctcaaagta, tagatcaaggagagttgt, ttggttttttgttgttgt, tgtttgtttttgatgcga, aacttttgcaaacaatct, agtcaatgcccaacagaa, aaaatttgcttcttgtct, ctctcacttacaaagtag, gtgaaatgtagaataagg, ccttcaactttttttgtg, tcagatgccagttttaac, • aaacagaacacaaacttc, caaagtgtctgaactagt, accgccttttcaaaaatt, ttttaacactgatgaacc, aaggctctcttatgtttt, cttgttacaagcatcatc, gttgtcgtcgtcatcatc, attatcatcatcattgtc, attttggtcttgccactt, ttccaagaattttagctg, catttgcaagactttaca, atcatattagaaagctgt, tcaatcttgggtgttttg, ccaatgtagtagagaatg, gttagaggttctaaatct, tgggacacgcagcaagga, gaagcagatgcttctgga, tttatggtattatataag, ctcaggaccctgctgtgc, tgagtgtctgaactccat, aaatacgggcatgctcca, gcacagaagttggcattg, taccctttgggttcgtgt, atccatttccaccctaga, tccctcttgaaatcaatg, taaagtggacgtaggcag, caattatcctgcacattt, ctaaagcaataggccgca, tccaaagcacgcttcttc, cgccggttggtctgttgt, gactcaagtctgtaggag, ggcaataacattagcagg, agatgtggggtcttccca, ctgttttttttcctagtg, gactttatagttttctga, tcaccactggtatatgtg, gaggtgccatcaatacct, gcaaatcttgcttctagt, tcttcacttttatttggg, atgatgtaattattagat, ggtacaaaagtgcagcag, ggacagtgtaagcttatt, ttaaatcccaggttcctg, tctttatggtgaagccat, tcatgaacagcatcagtt, acatcgaaggagagccat, tcgccttctgctcttgtt, ttcacaactttgctgtcg, atgtagcgctgggttgga, gatgttaaatctttggac, ttgagaatctgatatagc, tcaatccgttgttcaggc, actctggcttttgggttc, tgcaaacgaaagactctg, aactctgctttcaccaaa, ttggaagcattcttctcc, attgctgagacgtcaaat, cgaacaattctgaagtag, ggtctgtagaaagtgggc, gggatggcattttcggag, gggaagaagggcggcatg, tctattttgtaaacctcc, ttggcgtagtactcttcg, tcgctcctctcgcgctcg, caggcggccgccctccgg, ctcgccttctcctggagc, aagtccctggtgctgttg, tagatggaaatcacctcc, ggggggacttcctcgggc, tcaggatagtcttctggg, ggactggtgagcttcagc, ttgctcaggatctgcccg, cggatcgcctcgatcctc, ttgcgcatgaactggtcc, atatcgagtgtgctgcag, gtagacaggctgagcgcg, accgtgaccagatgcagg, atcagaaaagcgctcagc, acacagtagtgcattttt, taaaaaagtggaaaaaaa, agttgtttttaaaagtca, gaataaaaaaaaagaaat, caacaattctcaaagtat, agatcaaggagagttgtt, tggttttttgttgttgtt, gtttgtttttgatgcgaa, acttttgcaaacaatcta, gtcaatgcccaacagaaa, aaatttgcttcttgtctc, tctcacttacaaagtagg, tgaaatgtagaataaggc, cttcaactttttttgtgt, cagatgccagttttaaca, aacagaacacaaacttcc, aaagtgtctgaactagta, ccgccttttcaaaaattt, tttaacactgatgaacca, aggctctcttatgttttc, ttgttacaagcatcatcg, ttgtcgtcgtcatcatca, ttatcatcatcattgtca, ttttggtcttgccacttt, tccaagaattttagctgc, atttgcaagactttacaa, tcatattagaaagctgtt, caatcttgggtgttttgc, caatgtagtagagaatgg, ttagaggttctaaatctt, gggacacgcagcaaggag, aagcagatgcttctggat, ttatggtattatataagc, tcaggaccctgctgtgct, gagtgtctgaactccata, aatacgggcatgctccag, cacagaagttggcattgt, accctttgggttcgtgta, tccatttccaccctagat, ccctcttgaaatcaatgt, aaagtggacgtaggcagc, aattatcctgcacatttc, taaagcaataggccgcat, ccaaagcacgcttcttcc, gccggttggtctgttgtg, actcaagtctgtaggagg, gcaataacattagcagga, gatgtggggtcttcccac, tgttttttttcctagtgg, actttatagttttctgat, caccactggtatatgtgg, aggtgccatcaatacctgr caaatcttgcttctagtt, cttcacttttatttggga, tgatgtaattattagatg, gtacaaaagtgcagcagg, gacagtgtaagcttattt, taaatcccaggttcctgt, ctttatggtgaagccatt, catgaacagcatcagtta, catcgaaggagagccatt, cgccttctgctcttgttt, tcacaactttgctgtcga, tgtagcgctgggttggag, atgttaaatctttggact, tgagaatctgatatagct, caatccgttgttcaggca, ctctggcttttgggttct, gcaaacgaaagáctctga, actctgctttcaccaaat, tggaagcattcttctcca, ttgctgagacgtcaaatc, gaacaattctgaagtagg, gtctgtagaaagtgggcg, ggatggcattttcggagg, ggaagaagggcggcatgt, ctattttgtaaacctcct, tggcgtagtactcttcgt, cgctcctctcgcgctcgc, aggcggccgccctccggc, tcgccttctcctggagca, agtccctggtgctgttgt, agatggaaatcacctccg, gggggacttcctcgggct, caggatagtcttctgggg, gactggtgagcttcagct, tgctcaggatctgcccgc, ggatcgcctcgatcctct, tgcgcatgaactggtcca, tatcgagtgtgctgcagg, tagacaggctgagcgcga, ccgtgaccagatgcagga, tcagaaaagcgctcagca, cacagtagtgcatttttt, aaaaaagtggaaaaaaaa, gttgtttttaaaagtcag, aataaaaaaaaagaaatc, aacaattctcaaagtata, gatcaaggagagttgttt, ggttttttgttgttgttg, 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aagcgctcagcacacagt, agtgcattttttaaaaaa, gtggaaaaaaaagttgtt, tttaaaagtcagaataaa, aaaaaagaaatcaacaat, tctcaaagtatagatcaa, ggagagttgtttggtttt, ttgttgttgttgtttgtt, tttgatgcgaaacttttg, caaacaatctagtcaatg, cccaacagaaaaacgtat, cttcttgtctctctcact, tacaaagtaggtgaaatg, tagaataaggccttcaac, tttttttgtgtcagatgc, cagttttaacaaacagaa, cacaaacttccaaagtgt, ctgaactagtaccgcctt, ttcaaaaattttttaaca, ctgatgaaccaaggctct, cttatgttttcttgttac, aagcatcatcgttgtcgt, cgtcatcatcattatcat, catcattgtcattttggt, cttgccacttttccaaga, attttagctgcatttgca, agactttacaatcatatt, agaaagctgttcaatctt, gggtgttttgccaatgta, gtagagaatggttagagg, ttctaaatcttgggacac, gcagcaaggagaagcaga, tgcttctggatttatggt, attátataagctcaggac, cctgctgtgctgagtgtc, tgaactccataaatacgg, gcatgctccagcacagaa, gttggcattgtacccttt, gggttcgtgtatccattt, ccaccctagatccctctt, gaaatcaatgtaaagtgg, acgtaggcagcaattatc, ctgcacatttctaaagca, ataggccgcatccaaagc, acgcttcttccgccggtt, ggtctgttgtgactcaag, tctgtaggagggcaataa, cattagcaggagatgtgg, ggtcttcccactgttttt, tttcctagtggactttat, 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gagagttgtttggttttt, tgttgttgttgtttgttt, ttgatgcgaaacttttgc, aaacaatctagtcaatgc, ccaacagaaáaacgtatc, ttcttgtctctctcactt, acaaagtaggtgaaatgt, agaataaggccttcaact, ttttttgtgtcagatgcc, agttttaacaaacagaac, acaaacttccaaagtgtc, tgaactagtaccgccttt, tcaaaaattttttaacac, tgatgaaccaaggctctc, ttatgttttcttgttaca, agcatcatcgttgtcgtc, gtcatcatcattatcatc, atcattgtcattttggtc, ttgccacttttccaagaa, ttttagctgcatttgcaa, gactttacaatcatatta, gaaagctgttcaatcttg, ggtgttttgccaatgtag, tagagaatggttagaggt, tctaaatcttgggacacg, cagcaaggagaagcagat, gcttctggatttatggía, ttatataagctcaggacc, ctgctgtgctgagtgtct, gaactccataaatacggg, catgctccagcacagaag, ttggcattgtaccctttg, ggttcgtgtatccatttc, caccctagatccctcttg, aaatcaatgtaaagtgga, cgtaggcagcaattatcc, tgcacatttctaaagcaa, taggccgcatccaaagca, cgcttcttccgccggttg, gtctgttgtgactcaagt, ctgtaggagggcaataac, attagcaggagatgtggg, gtcttcccactgtttttt, ttcctagtggactttata, gttttctgatcaccactg, gtatatgtggaggtgcca, tcaatacctgcaaatctt, gcttctagttcttcactt, ttatttgggatgatgtaa, ttattagatggtacaaaa, gtgcagcagggacagtgt, aagcttattttaaatccc, aggttcctgtctttatgg, tgaagccattcatgaaca, gcatcagttacatcgaag, gagagccattcgccttct, gctcttgttttcacaact, ttgctgtcgatgtagcgc, tgggttggagatgttaaa, tctttggacttgagaatc, tgatatagctcaatccgt, tgttcaggcactctggct, tttgggttctgcaaacga, aagactctgaactctgct, ttcaccaaattggaagca, ttcttctccattgctgag, . acgtcaaatcgaacaatt, ctgaagtagggtctgtag, aaagtgggcgggatggca, ttttcggaggggaagaag, ggcggcatgtctattttg, taaacctccttggcgtag, tactcttcgtcgctcctc, tcgcgctcgcaggcggcc, gccctccggctcgccttc, tcctggagcaagtccctg, gtgctgttgtagatggaa, atcacctccggggggact, tcctcgggctcaggatag, tcttctgggggactggtg, agcttcagcttgctcagg, atctgcccgcggatcgcc, tcgatcctcttgcgcatg, aactggtccatatcgagt, gtgctgcaggtagacagg, ctgagcgcgaccgtgacc, agatgcaggatcagaaaa, gcgctcagcacacagtag, tgcattttttaaaaaagt, ggaaaaaaaagttgtttt, taaaagtcagaataaaaa, aaaagaaatcaacaattc, tcaaagtatagatcaagg, agagttgtttggtttttt, gttgttgttgtttgtttt, tgatgcgaaacttttgca, aacaatctagtcaatgcc, caacagaaaaacgtatcc, tcttgtctctctcactta, caaagtaggtgaaatgta, gaataaggccttcaactt, tttttgtgtcagatgcca, gttttaacaaacagaaca, caaacttccaaagtgtct, gaactagtaccgcctttt, caaaaattttttaacact, gatgaaccaaggctctct, tatgttttcttgttacaa, gcatcatcgttgtcgtcg, tcatcatcattatcatca, tcattgtcattttggtct, tgccacttttccaagaat, tttagctgcatttgcaag, actttacaatcatattag, aaagctgttcaatcttgg, gtgttttgccaatgtagt, agagaatggttagaggtt, ctaaatcttgggacacgc, agcaaggagaagcagatg, cttctggatttatggtat, tatataagctcaggaccc, tgctgtgctgagtgtctg, aactccataaatacgggc, atgctccagcacagaagt, tggcattgtaccctttgg, gttcgtgtatccatttcc, accctagatccctcttga, aatcaatgtaaagtggac, gtaggcagcaattatcct, gcacatttctaaagcaat, aggccgcatccaaagcac, gcttcttccgccggttgg, tctgttgtgactcaagtc, tgtaggagggcaataaca, ttagcaggagatgtgggg, tcttcccactgttttttt, tcctagtggactttatag, ttttctgatcaccactgg, tatatgtggaggtgccat, caatacctgcaaatcttg, cttctagttcttcacttt, tatttgggatgatgtaat, tattagatggtacaaaag, tgcagcagggacagtgta, agcttattttaaatccca, ggttcctgtctttatggt, gaagccattcatgaacag, catcagttacatcgaagg, agagccattcgccttctg, ctcttgttttcacaactt, tgctgtcgatgtagcgct, gggttggagatgttaaat, ctttggacttgagaatct, gatatagctcaatccgtt, gttcaggcactctggctt, ttgggttctgcaaacgaa, agactctgaactctgctt, tcaccaaattggaagcat, tcttctccattgctgaga, cgtcaaatcgaacaattc, tgaagtagggtctgtaga, aagtgggcgggatggcat, tttcggaggggaagaagg, gcggcatgtctattttgt, aaacctccttggcgtagt, actcttcgtcgctcctct, cgcgctcgcaggcggccg, ccctccggctcgccttct, cctggagcaagtccctgg, tgctgttgtagatggaaa, tcacctccggggggactt, cctcgggctcaggatagt, cttctgggggactggtga, gcttcagcttgctcagga, tctgcccgcggatcgcct, cgatcctcttgcgcatga, actggtccatatcgagtg, tgctgcaggtagacaggc, tgagcgcgaccgtgacca, gatgcaggatcagaaaag, cgctcagcacacagtagt, gcattttttaaaaaagtg, gaaaaaaaagttgttttt, aaaagtcagaataaaaaa, aaagaaatcaacaattct, caaagtatagatcaagga, gagttgtttggttttttg, ttgttgttgtttgttttt, gatgcgaaacttttgcaa, acaatctagtcaatgccc, aacagaaaaacgtatcct Procesamiento: región no codificante: agcacacagtagtgcatt, ttttaaaaaagtggaaaa, aaaagttgtttttaaaag, tcagaataaaaaaaagaa, atcaacaattctcaaagt, atagatcaaggagagttg, tttggttttttgttgttg, ttgtttttgatgcgaaac, ttttgcaaacaatctagt, caatgcccaacagaaaaa, cgtatcctgcttgaattc, ctttaaaaagaaaaggcc, agtagttccaaaagtgga, aatattaatacgggacgg, gcagagggaaccctgact, ttggcgagtaagaagaaa, aaaattcttggagcaatg, agatggggaaaaaaagag, acgagtggctattaagta, gaaataaatttaagagga, ggaagtggagttcagtgt, gtcagtctcgggtgcgga, gtggcggatctgaactcg, gctcctccggccaaaagg, gaagagatgaaaaggtcc, cggggctggcagctggcg, gcacacagtagtgcattt, tttaaaaaagtggaaaaa, aaagttgtttttaaaagt, cagaataaaaaaaagaaa, tcaacaattctcaaagta, tagatcaaggagagttgt, ttggttttttgttgttgt, tgtttttgatgcgaaact, tttgcaaacaatctagtc, aatgcccaacagaaaaac, gtatcctgcttgaattcc, tttaaaaagaaaaggcca, gtagttccaaaagtggaa, atattaatacgggacggg, cagagggaaccctgactt, tggcgagtaagaagaaaa, aaattcttggagcaatga, gatggggaaaaaaagaga, cgagtggctattaagtag, aaataaatttaagaggag, gaagtggagttcagtgtg, tcagtctcgggtgcggag, tggcggatctgaactcgg, ctcctccggccaaaaggg, aagagatgaaaaggtccc, ggggctggcagctggcga, cacacagtagtgcatttt, ttaaaaaagtggaaaaaa, aagttgtttttaaaagtc, agaataaaaaaaagaaat, caacaattctcaaagtat, agatcaaggagagttgtt, tggttttttgttgttgtt, gtttttgatgcgaaactt, ttgcaaacaatctagtca, atgcccaacagaaaaacg, tatcctgcttgaattcct, ttaaaaagaaaaggccag, tagttccaaaagtggaaa, tattaatacgggacgggc, agagggaaccctgacttt, ggcgagtaagaagaaaaa, aattcttggagcaatgag, atggggaaaaaaagagac, gagtggctattaagtaga, aataaatttaagaggagg, aagtggagttcagtgtgt, cagtctcgggtgcggagt, ggcggatctgaactcggc, tcctccggccaaaaggga, agagatgaaaaggtcccg, gggctggcagctggcgaa, acacagtagtgcattttt, taaaaaagtggaaaaaaa, agttgtttttaaaagtca, gaataaaaaaaagaaatc, aacaattctcaaagtata, gatcaaggagagttgttt, ggttttttgttgttgttg, tttttgatgcgaaacttt, tgcaaacaatctagtcaa, tgcccaacagaaaaacgt, atcctgcttgaattcctt, taaaaagaaaaggccagt, agttccaaaagtggaaat, attaatacgggacgggca, gagggaaccctgactttg, gcgagtaagaagaaaaaa, attcttggagcaatgaga, tggggaaaaaaagagacg, agtggctattaagtagaa, ataaatttaagaggagga, agtggagttcagtgtgtc, agtctcgggtgcggagtg, gcggatctgaactcggct, cctccggccaaaagggaa, gagatgaaaaggtcccgg, ggctggcagctggcgaac, cacagtagtgcatttttt, aaaaaagtggaaaaaaaa, gttgtttttaaaagtcag, aataaaaaaaagaaatca, acaattctcaaagtatag, atcaaggagagttgtttg, gttttttgttgttgttgt, ttttgatgcgaaactttt, gcaaacaatctagtcaat, gcccaacagaaaaacgta, tcctgcttgaattccttt, aaaaagaaaaggccagta, gttccaaaagtggaaata, ttaatacgggacgggcag, agggaaccctgactttgg, cgagtaagaagaaaaaaa, ttcttggagcaatgagat, ggggaaaaaaagagacga, gtggctattaagtagaaa, taaatttaagaggaggaa, gtggagttcagtgtgtca, gtctcgggtgcggagtgg, cggatctgaactcggctc, ctccggccaaaagggaag, agatgaaaaggtcccggg, gctggcagctggcgaact, acagtagtgcatttttta, aaaaagtggaaaaaaaag, ttgtttttaaaagtcaga, ataaaaaaaagaaatcaa, caattctcaaagtataga, tcaaggagagttgtttgg, ttttttgttgttgttgtt, tttgatgcgaaacttttg, caaacaatctagtcaatg, cccaacagaaaaacgtat, cctgcttgaattccttta, aaaagaaaaggccagtag, ttccaaaagtggaaatat, taatacgggacgggcaga, gggaaccctgactttggc, gagtaagaagaaaaaaat, tcttggagcaatgagatg, gggaaaaaaagagacgag, tggctattaagtagaaat, aaatttaagaggaggaag, tggagttcagtgtgtcag, tctcgggtgcggagtggc, ggatctgaactcggctcc, tccggccaaaagggaaga, gatgaaaaggtcccgggg, ctggcagctggcgaactg, cagtagtgcattttttaa, aaaagtggaaaaaaaagt, tgtttttaaaagtcagaa, taaaaaaaagaaatcaac, aattctcaaagtatagat, caaggagagttgtttggt, tttttgttgttgttgttt, ttgatgcgaaacttttgc, aaacaatctagtcaatgc, ccaacagaaaaacgtatc, ctgcttgaattcctttaa, aaagaaaaggccagtagt, tccaaaagtggaaatatt, aatacgggacgggcagag, ggaaccctgactttggcg, agtaagaagaaaaaaatt, cttggagcaatgagatgg, ggaaaaaaagagacgagt, ggctattaagtagaaata, aatttaagaggaggaagt, ggagttcagtgtgtcagt, ctcgggtgcggagtggcg, gatctgaactcggctcct, ccggccaaaagggaagag, atgaaaaggtcccggggc, tggcagctggcgaactga, agtagtgcattttttaaa, aaagtggaaaaaaaagtt, gtttttaaaagtcagaat, aaaaaaaagaaatcaaca, attctcaaagtatagatc, aaggagagttgtttggtt, ttttgttgttgttgtttt, tgatgcgaaacttttgca, aacaatctagtcaatgcc, caacagaaaaacgtatcc, tgcttgaattcctttaaa, aagaaaaggccagtagtt, ccaaaagtggaaatatta, atacgggacgggcagagg, gaaccctgactttggcga, gtaagaagaaaaaaattc, ttggagcaatgagatggg, gaaaaaaagagacgagtg, gctattaagtagaaataa, atttaagaggaggaagtg, gagttcagtgtgtcagtc, tcgggtgcggagtggcgg, atctgaactcggctcctc, cggccaaaagggaagaga, tgaaaaggtcccggggct, ggcagctggcgaactgac, gtagtgcattttttaaaa, aagtggaaaaaaaagttg, tttttaaaagtcagaata, aaaaaaagaaatcaacaa, ttctcaaagtatagatca, aggagagttgtttggttt, tttgttgttgttgttttt, gatgcgaaacttttgcaa, acaatctagtcaatgccc, aacagaaaaacgtatcct, gcttgaattcctttaaaa, agaaaaggccagtagttc, caaaagtggaaatattaa, tacgggacgggcagaggg, aaccctgactttggcgag, taagaagaaaaaaattct, tggagcaatgagatgggg, aaaaaaagagacgagtgg, ctattaagtagaaataaa, tttaagaggaggaagtgg, agttcagtgtgtcagtct, cgggtgcggagtggcgga, tctgaactcggctcctcc, ggccaaaagggaagagat, gaaaaggtcccggggctg, gcagctggcgaactgacg , tagtgcattttttaaaaa, agtggaaaaaaaagttgt, ttttaaaagtcagaataa, aaaaaagaaatcaacaat, tctcaaagtatagatcaa, ggagagttgtttggtttt, ttgttgttgttgtttttg, atgcgaaacttttgcaaa, caatctagtcaatgccca, acagaaaaacgtatcctg, cttgaattcctttaaaaa, gaaaaggccagtagttcc, aaaagtggaaatattaat, acgggacgggcagaggga, accctgactttggcgagt, aagaagaaaaaaattctt, ggagcaatgagatgggga, aaaaaagagacgagtggc, tattaagtagaaataaat, ttaagaggaggaagtgga, gttcagtgtgtcagtctc, gggtgcggagtggcggat, ctgaactcggctcctccg, gccaaaagggaagagatg, aaaaggtcccggggctgg, cagctggcgaactgacgg, agtgcattttttaaaaaa, gtggaaaaaaaagttgtt, tttaaaagtcagaataaa, aaaaagaaatcaacaatt, ctcaaagtatagatcaag, gagagttgtttggttttt, tgttgttgttgtttttga, tgcgaaacttttgcaaac, aatctagtcaatgcccaa, cagaaaaacgtatcctgc, ttgaattcctttaaaaag, aaaaggccagtagttcca, aaagtggaaatattaata, cgggacgggcagagggaa, ccctgactttggcgagta, agaagaaaaaaattcttg, gagcaatgagatggggaa, aaaaagagacgagtggct, attaagtagaaataaatt, taagaggaggaagtggag, ttcagtgtgtcagtctcg, ggtgcggagtggcggatc, tgaactcggctcctccgg, ccaaaagggaagagatga, aaaggtcccggggctggc, agctggcgaactgacggg, gtgcattttttaaaaaag, tggaaaaaaaagttgttt, ttaaaagtcagaataaaa, aaaagaaatcaacaattc, tcaaagtatagatcaagg, agagttgtttggtttttt, gttgttgttgtttttgat, gcgaaacttttgcaaaca, atctagtcaatgcccaac, agaaaaacgtatcctgct, tgaattcctttaaaaaga, aaaggccagtagttccaa, aagtggaaatattaatac, gggacgggcagagggaac, cctgactttggcgagtaa, gaagaaaaaaattcttgg, agcaatgagatggggaaa, aaaagagacgagtggcta, ttaagtagaaataaattt, aagaggaggaagtggagt, tcagtgtgtcagtctcgg, gtgcggagtggcggatct, gaactcggctcctccggc, caaaagggaagagatgaa, aaggtcccggggctggca, gctggcgaactgacggga, tgcattttttaaaaaagt, ggaaaaaaaagttgtttt, taaaagtcagaataaaaa, aaagaaatcaacaattct, caaagtatagatcaagga, gagttgtttggttttttg, ttgttgttgtttttgatg, cgaaacttttgcaaacaa, tctagtcaatgcccaaca, gaaaaacgtatcctgctt, gaattcctttaaaaagaa, aaggccagtagttccaaa, agtggaaatattaatacg, ggacgggcagagggaacc, ctgactttggcgagtaag, aagaaaaaaattcttgga, gcaatgagatggggaaaa, aaagagacgagtggctat, taagtagaaataaattta, agaggaggaagtggagtt, cagtgtgtcagtctcggg, tgcggagtggcggatctg, aactcggctcctccggcc, aaaagggaagagatgaaa, aggtcccggggctggcag, ctggcgaactgacgggag, gcattttttaaaaaagtg, gaaaaaaaagttgttttt, aaaagtcagaataaaaaa, aagaaatcaacaattctc, aaagtatagatcaaggag, agttgtttggttttttgt, tgttgttgtttttgatgc, gaaacttttgcaaacaat, ctagtcaatgcccaacag, aaaaacgtatcctgcttg, aattcctttaaaaagaaa, aggccagtagttccaaaa, gtggaaatattaatacgg, gacgggcagagggaaccc, tgactttggcgagtaaga, agaaaaaaattcttggag, caatgagatggggaaaaa, aagagacgagtggciatt, aagtagaaataaatttaa, gaggaggaagtggagttc, agtgtgtcagtctcgggt, gcggagtggcggatctga, actcggctcctccggcca, aaagggaagagatgaaaa, ggtcccggggctggcagc, tggcgaactgacgggagg, cattttttaaaaaagtgg, aaaaaaaagttgttttta, aaagtcagaataaaaaaa, agaaatcaacaattctca, aagtatagatcaaggaga, gttgtttggttttttgtt, gttgttgtttttgatgcg, aaacttttgcaaacaatc, tagtcaatgcccaacaga, aaaacgtatcctgcttga, attcctttaaaaagaaaa, ggccagtagttccaaaag, tggaaatattaatacggg, acgggcagagggaaccct, gactttggcgagtaagaa, gaaaaaaattcttggagc, aatgagatggggaaaaaa, agagacgagtggctatta, agtagaaataaatttaag, aggaggaagtggagttca, gtgtgtcagtctcgggtg, cggagtggcggatctgaa, ctcggctcctccggccaa, aagggaagagatgaaaag, gtcccggggctggcagct, ggcgaactgacgggaggg, attttttaaaaaagtgga, aaaaaaagttgtttttaa, aagtcagaataaaaaaaa, gaaatcaacaattctcaa, agtatagatcaaggagag, ttgtttggttttttgttg, ttgttgtttttgatgcga, aacttttgcaaacaatct, agtcaatgcccaacagaa, aaacgtatcctgcttgaa, ttcctttaaaaagaaaag, gccagtagttccaaaagt, ggaaatattaatacggga, cgggcagagggaaccctg, actttggcgagtaagaag, aaaaaaattcttggagca, atgagatggggaaaaaaa, gagacgagtggctattaa, gtagaaataaatttaaga, ggaggaagtggagttcag, tgtgtcagtctcgggtgc, ggagtggcggatctgaac, tcggctcctccggccaaa, agggaagagatgaaaagg, tcccggggctggcagctg, gcgaactgacgggagggg, ttttttaaaaaagtggaa, aaaaaagttgtttttaaa, agtcagaataaaaaaaag, aaatcaacaattctcaaa, gtatagatcaaggagagt, tgtttggttttttgttgt, tgttgtttttgatgcgaa, acttttgcaaacaatcta, gtcaatgcccaacagaaa, aacgtatcctgcttgaat, tcctttaaaaagaaaagg, ccagtagttccaaaagtg, gaaatattaatacgggac, gggcagagggaaccctga, ctttggcgagtaagaaga, aaaaaattcttggagcaa, tgagatggggaaaaaaag, agacgagtggctattaag, tagaaataaatttaagag, gaggaagtggagttcagt, gtgtcagtctcgggtgcg, gagtggcggatctgaact, cggctcctccggccaaaa, gggaagagatgaaaaggt, cccggggctggcagctgg, cgaactgacgggaggggc Procesamiento: Inserto: agtgggcgggatggcatc, aaggtacccacagagcac, ctgggactgtctggagca, caagctgcccactgagcc, agagggtgttgtaacaac, tgggcagacagtttcgga, gtgggcgggatggcatca, aggtacccacagagcacc, tgggactgtctggagcac, aagctgcccactgagcca, gagggtgttgtaacaact, gggcagacagtttcggag, tgggcgggatggcatcaa, ggtacccacagagcacct, gggactgtctggagcaca, agctgcccactgagccag, agggtgttgtaacaactg, ggcagacagtttcggagg, gggcgggatggcatcaag, gtacccacagagcacctg, ggactgtctggagcacaa, gctgcccactgagccaga, gggtgttgtaacaactgg, cagacagtttcggaggg, ggcgggatggcatcaagg, tacccacagagcacctgg, gactgtctggagcacaag, ctgcccactgagccagag, ggtgttgtaacaactggg, cagacagtttcggagggg, gcgggatggcatcaaggt, acccacagagcacctggg, actgtctggagcacaagc, tgcccactgagccagagg, gtgttgtaacaactgggc, agacagtttcggagggga, cgggatggcatcaaggta, cccacagagcacctggga, ctgtctggagcacaagct, gcccactgagccagaggg, tgttgtaacaactgggca, gacagtttcggaggggaa, gggatggcatcaaggtac, ccacagagcacctgggac, tgtctggagcacaagctg, cccactgagccagagggt, gttgtaacaactgggcag, acagtttcggaggggaag, ggatggcatcaaggtacc, cacagagcacctgggact, gtctggagcacaagctgc, ccactgagccagagggtg, ttgtaacaactgggcaga, cagtttcggaggggaaga, gatggcatcaaggtaccc, acagagcacctgggactg, tctggagcacaagctgcc, cactgagccagagggtgt, tgtaacaactgggcagac, agtttcggaggggaagaa, atggcatcaaggtaccca, cagagcacctgggactgt, ctggagcacaagctgccc, actgagccagagggtgtt, gtaacaactgggcagaca, gtttcggaggggaagaag, tggcatcaaggtacccac, agagcacctgggactgtc, tggagcacaagctgccca, ctgagccagagggtgttg, taacaactgggcagacag, tttcggaggggaagaagg, ggcatcaaggtacccaca, gagcacctgggactgtct, ggagcacaagctgcccac, tgagccagagggtgttgt, aacaactgggcagacagt, gcatcaaggtacccacag, agcacctgggactgtctg, gagcacaagctgcccact, gagccagagggtgttgta, acaactgggcagacagtt, catcaaggtacccacaga, gcacctgggactgtctgg, agcacaagctgcccactg, agccagagggtgttgtaa, caactgggcagacagttt, atcaaggtacccacagag, cacctgggactgtctgga, gcacaagctgcccactga, gccagagggtgttgtaac, aactgggcagacagtttc, tcaaggtacccacagagc, acctgggactgtctggag, cacaagctgcccactgag, ccagagggtgttgtaaca, actgggcagacagtttcg Procesamiento: extremo aagaaaaaaataaacact, ggaagaatttattagtgt, taattatgtgaacaacga, caacaacaacaacaacaa, caaacaggaaaatcccat, taagtggagttgctgtac, gtaccgttcctatcccgc, gcctcacttgatttttct, gtattgctatgcaatagg, cacccttcccattcttac, tcttagagttaacagtga, gttatttattgtgtgtta, ctatataatgaacgtttc, attgcccttggaaaataa, aacaggtgtataaagtgg, agaccaaatactttgcca, gaaactcatggatggctt, aaggaacttgaactcaaa, cgagccagaaaaaaagag, gtcatattaatgggatga, aaacccaagtgagttatt, atatgaccgagaaagtct, gcattaagataaagaccc, tgaaaacacatgttatgt, atcagctgcctaaggaag, cttcttgtaaggtccaaa, aactaaaaagactgttaa, taaaagaaactttcagtc, agaaaaaaataaacactg, gaagaatttattagtgtt, aattatgtgaacaacgac, aacaacaacaacaacaac, aaacaggaaaatcccatt, aagtggagttgctgtacg, taccgttcctatcccgcg, cctcacttgatttttctg, tattgctatgcaataggc, acccttcccattcttact, cttagagttaacagtgag, ttatttattgtgtgttac, tatataatgaacgtttca, ttgcccttggaaaataaa, acaggtgtataaagtgga, gaccaaatactttgccag, aaactcatggatggctta, aggaacttgaactcaaac, gagccagaaaaaaagagg, tcatattaatgggatgaa, aacccaagtgagttatta, tatgaccgagaaagtctg, cattaagataaagaccct, gaaaacacatgttatgta, tcagctgcctaaggaagc, ttcttgtaaggtccaaaa, actaaaaagactgttaat, aaaagaaactttcagtca, gaaaaaaataaacactgg, aagaatttattagtgtta, attatgtgaacaacgaca, acaacaacaacaacaaca, aacaggaaaatcccatta, agtggagttgctgtacgt, accgttcctatcccgcgc, ctcacttgatttttctgt, attgctatgcaataggca, cccttcccattcttactc, ttagagttaacagtgagt, tatttattgtgtgttact, atataatgaacgtttcat, tgcccttggaaaataaaa, caggtgtataaagtggag, accaaatactttgccaga, aactcatggatggcttaa, ggaacttgaactcaaacg, agccagaaaaaaagaggt, catattaatgggatgaaa, acccaagtgagttattat, atgaccgagaaagtctgc, attaagataaagaccctg, aaaacacatgttatgtat, cagctgcctaaggaagct, tcttgtaaggtccaaaaa, ctaaaaagactgttaata, aaagaaactttcagtcag, aaaaaaataaacactgga, agaatttattagtgttaa, ttatgtgaacaacgacaa, caacaacaacaacaacaa, acaggaaaatcccattaa, gtggagttgctgtacgta, ccgttcctatcccgcgcc, tcacttgatttttctgta, ttgctatgcaataggcac, ccttcccattcttactct, tagagttaacagtgagtt, atttattgtgtgttacta, tataatgaacgtttcatt, gcccttggaaaataaaac, aggtgtataaagtggaga, ccaaatactttgccagaa, actcatggatggcttaag, gaacttgaactcaaacga, gccagaaaaaaagaggtc, atattaatgggatgaaaa, cccaagtgagttattata, tgaccgagaaagtctgca, ttaagataaagaccctga, aaacacatgttatgtatc, agctgcctaaggaagctt, cttgtaaggtccaaaaac, taaaaagactgttaataa, aaaaaataaacactggaa, gaatttattagtgttaat, tatgtgaacaacgacaac, aacaacaacaacaacaaa, caggaaaatcccattaag, tggagttgctgtacgtac, cgttcctatcccgcgcct, cacttgatttttctgtat, tgctatgcaataggcacc, cttcccattcttactctt, agagttaacagtgagtta, tttattgtgtgttactat, ataatgaacgtttcattg, cccttggaaaataaaaca, ggtgtataaagtggagac, caaatactttgccagaaa, ctcatggatggcttaagg, aacttgaactcaaacgag, ccagaaaaaaagaggtca, tattaatgggatgaaaac, ccaagtgagttattatat, gaccgagaaagtctgcat, taagataaagaccctgaa, aacacatgttatgtatca, gctgcctaaggaagcttc, ttgtaaggtccaaaaact, aaaaagactgttaataaa, aaaaataaacactggaag, aatttattagtgttaatt, atgtgaacaacgacaaca, acaacaacaacaacaaac, aggaaaatcccattaagt, ggagttgctgtacgtacc, gttcctatcccgcgcctc, acttgatttttctgtatt, gctatgcaataggcaccc, ttcccattcttactctta, gagttaacagtgagttat, ttattgtgtgttactata, taatgaacgtttcattgc, ccttggaaaataaaacag, gtgtataaagtggagacc, aaatactttgccagaaac, tcatggatggcttaagga, acttgaactcaaacgagc, cagaaaaaaagaggtcat, attaatgggatgaaaacc, caagtgagttattatatg, accgagaaagtctgcatt, aagataaagaccctgaaa, acacatgttatgtatcag, ctgcctaaggaagcttct, tgtaaggtccaaaaacta, aaaagactgttaataaaa, aaaataaacactggaaga, atttattagtgttaatta, tgtgaacaacgacaacaa, caacaacaacaacaaaca, ggaaaatcccattaagtg, gagttgctgtacgtaccg, ttcctatcccgcgcctca, cttgatttttctgtattg, ctatgcaataggcaccct, tcccattcttactcttag, agttaacagtgagttatt, tattgtgtgttactatat, aatgaacgtttcattgcc, cttggaaaataaaacagg, tgtataaagtggagacca, aatactttgccagaaact, catggatggcttaaggaa, cttgaactcaaacgagcc, agaaaaaaagaggtcata, ttaatgggatgaaaaccc, aagtgagttattatatga, ccgagaaagtctgcatta, agataaagaccctgaaaa, cacatgttatgtatcagc, tgcctaaggaagcttctt, gtaaggtccaaaaactaa, aaagactgttaataaaag, aaataaacactggaagaa, tttattagtgttaattat, gtgaacaacgacaacaac, aacaacaacaacaaacag, gaaaatcccattaagtgg, agttgctgtacgtaccgt, tcctatcccgcgcctcac, ttgatttttctgtattgc, tatgcaataggcaccctt, cccattcttactcttaga, gttaacagtgagttattt, attgtgtgttactatata, atgaacgtttcattgccc, ttggaaaataaaacaggt, gtataaagtggagaccaa, atactttgccagaaactc, atggatggcttaaggaac, ttgaactcaaacgagcca, gaaaaaaagaggtcatat, taatgggatgaaaaccca, agtgagttattatatgac, cgagaaagtctgcattaa, gataaagaccctgaaaac, acatgttatgtatcagct, gcctaaggaagcttcttg, taaggtccaaaaactaaa, aagactgttaataaaaga, aataaacactggaagaat, ttattagtgttaattatg, tgaacaacgacaacaaca, acaacaacaacaaacagg, aaaatcccattaagtgga, gttgctgtacgtaccgtt, cctatcccgcgcctcact, tgatttttctgtattgct, atgcaataggcacccttc, ccattcttactcttagag, ttaacagtgagttattta, ttgtgtgttactatataa, tgaacgtttcattgccct, tggaaaataaaacaggtg, tataaagtggagaccaaa, tactttgccagaaactca, tggatggcttaaggaact, tgaactcaaacgagccag, aaaaaaagaggtcatatt, aatgggatgaaaacccaa, gtgagttattatatgacc, gagaaagtctgcattaag, ataaagaccctgaaaaca, catgttatgtatcagctg, cctaaggaagcttcttgt, , , , , gaacaacgacaacaacaa, caacaacaacaaacagga, aaatcccattaagtggag, ttgctgtacgtaccgttc, ctatcccgcgcctcactt, gatttttctgtattgcta, tgcaataggcacccttcc, cattcttactcttagagt, taacagtgagttatttat, tgtgtgttactatataat, gaacgtttcattgccctt, ggaaaataaaacaggtgt, ataaagtggagaccaaat, actttgccagaaactcat, ggatggcttaaggaactt, gaactcaaacgagccaga, . aaaaaagaggtcatatta, atgggatgaaaacccaag, tgagttattatatgaccg, agaaagtctgcattaaga, taaagaccctgaaaacac, atgttatgtatcagctgc, ctaaggaagcttcttgta, aggtccaaaaactaaaaa, gactgttaataaaagaaa, taaacactggaagaattt, attagtgttaattatgtg, aacaacgacaacaacaac, aacaacaacaaacaggaa, aatcccattaagtggagt, tgctgtacgtaccgttcc, tatcccgcgcctcacttg, atttttctgtattgctat, gcaataggcacccttccc, attcttactcttagagtt, aacagtgagttatttatt, gtgtgttactatataatg, aacgtttcattgcccttg, gaaaataaaacaggtgta, taaagtggagaccaaata, ctttgccagaaactcatg, gatggcttaaggaacttg, aactcaaacgagccagaa, aaaaagaggtcatattaa, tgggatgaaaacccaagt, gagttattatatgaccga, gaaagtctgcattaagat, aaagaccctgaaaacaca, tgttatgtatcagctgcc, taaggaagcttcttgtaa, ggtccaaaaactaaaaag, actgttaataaaagaaac, aaacactggaagaattta, ttagtgttaattatgtga, acaacgacaacaacaaca, acaacaacaaacaggaaa, atcccattaagtggagtt, gctgtacgtaccgttcct, atcccgcgcctcacttga, tttttctgtattgctatg, caataggcacccttccca, ttcttactcttagagtta, acagtgagttatttattg, tgtgttactatataatga, acgtttcattgcccttgg, aaaataaaacaggtgtat, aaagtggagaccaaatac, tttgccagaaactcatgg, atggcttaaggaacttga, actcaaacgagccagaaa, aaaagaggtcatattaat, gggatgaaaacccaagtg, agttattatatgaccgag, aaagtctgcattaagata, aagaccctgaaaacacat, gttatgtatcagctgcct, aaggaagcttcttgtaag, gtccaaaaactaaaaaga, ctgttaataaaagaaact, aacactggaagaatttat, tagtgttaattatgtgaa, caacgacaacaacaacaa, caacaacaaacaggaaaa, tcccattaagtggagttg, ctgtacgtaccgttccta, tcccgcgcctcacttgat, ttttctgtattgctatgc, aataggcacccttcccat, tcttactcttagagttaa, cagtgagttatttattgt, gtgttactatataatgaa, cgtttcattgcccttgga, aaataaaacaggtgtata, aagtggagaccaaatact, ttgccagaaactcatgga, tggcttaaggaacttgaa, ctcaaacgagccagaaaa, aaagaggtcatattaatg, ggatgaaaacccaagtga, gttattatatgaccgaga, aagtctgcattaagataa, agaccctgaaaacacatg, ttatgtatcagctgccta, aggaagcttcttgtaagg, tccaaaaactaaaaagac, tgttaataaaagaaactt, acactggaagaatttatt, agtgttaattatgtgaac, aacgacaacaacaacaac, aacaacaaacaggaaaat, cccattaagtggagttgc, tgtacgtaccgttcctat, cccgcgcctcacttgatt, tttctgtattgctatgca, ataggcacccttcccatt, cttactcttagagttaac, agtgagttatttattgtg, tgttactatataatgaac, gtttcattgcccttggaa, aataaaacaggtgtataa, agtggagaccaaatactt, tgccagaaactcatggat, ggcttaaggaacttgaac, tcaaacgagccagaaaaa, aagaggtcatattaatgg, gatgaaaacccaagtgag, ttattatatgaccgagaa, agtctgcattaagataaa, gaccctgaaaacacatgt, tatgtatcagctgcctaa, ggaagcttcttgtaaggt, ccaaaaactaaaaagact, gttaataaaagaaacttt, cactggaagaatttatta, gtgttaattatgtgaaca, acgacaacaacaacaaca, acaacaaacaggaaaatc, ccattaagtggagttgct, gtacgtaccgttcctatc, ccgcgcctcacttgattt, ttctgtattgctatgcaa, taggcacccttcccattc, ttactcttagagttaaca, gtgagttatttattgtgt, gttactatataatgaacg, tttcattgcccttggaaa, ataaaacaggtgtataaa, gtggagaccaaatacttt, gccagaaactcatggatg, gcttaaggaacttgaact, caaacgagccagaaaaaa, agaggtcatattaatggg, atgaaaacccaagtgagt, tattatatgaccgagaaa, gtctgcattaagataaag, accctgaaaacacatgtt, atgtatcagctgcctaag, gaagcttcttgtaaggtc, caaaaactaaaaagactg, ttaataaaagaaactttc, actggaagaatttattag, tgttaattatgtgaacaa, cgacaacaacaacaacaa, caacaaacaggaaaatcc, cattaagtggagttgctg, tacgtaccgttcctatcc, cgcgcctcacttgatttt, tctgtattgctatgcaat, aggcacccttcccattct, tactcttagagttaacag, tgagttatttattgtgtg, ttactatataatgaacgt, ttcattgcccttggaaaa, taaaacaggtgtataaag, tggagaccaaatactttg, ccagaaactcatggatgg, cttaaggaacttgaactc, aaacgagccagaaaaaaa, gaggtcatattaatggga, tgaaaacccaagtgagtt, attatatgaccgagaaag, tctgcattaagataaaga, ccctgaaaacacatgtta, tgtatcagctgcctaagg, aagcttcttgtaaggtcc, aaaaactaaaaagactgt, taataaaagaaactttca, ctggaagaatttattagt, gttaattatgtgaacaac, gacaacaacaacaacaac, aacaaacaggaaaatccc, attaagtggagttgctgt, acgtaccgttcctatccc, gcgcctcacttgattttt, ctgtattgctatgcaata, ggcacccttcccattctt, actcttagagttaacagt, gagttatttattgtgtgt, tactatataatgaacgtt, tcattgcccttggaaaat, aaaacaggtgtataaagt, ggagaccaaatactttgc, cagaaactcatggatggc, ttaaggaacttgaactca, aacgagccagaaaaaaag, aggtcatattaatgggat, gaaaacccaagtgagtta, ttatatgaccgagaaagt, ctgcattaagataaagac, cctgaaaacacatgttat, gtatcagctgcctaagga, agcttcttgtaaggtcca, aaaactaaaaagactgtt, aataaaagaaactttcag Ejemplo 21 Los oligonucleótidos antisentido TGF-beta 3 de este ejemplo forman parte de la invención. Además constituyen realizaciones de oligonucleótidos que inhiben la formación de TGF-beta 3 "in vitro" e "in vivo" y entonces se pueden usar en vehículos aceptables para uso farmacéutico como una composición farmacéutica para el tratamiento de distintos tipos de cáncer como se describe en esta Invención y/o para inhibir la formación de metástasis.

Oligonucleótidos antisentido TGF-beta 3: caggatgccccaaaaata, tttatttatacaaagatt, ttgagagtaatattcata, cttgtctttatacctcag, tctatgcgtctggggcca, agtcactgtgtggcacat, gtcgagcttccccgaatg, cctcacatgttgtcgcac, ctgcttccaggaacacca, aatgaacacagggtcttg, gaggggaagtgggggaag, aacccataatgccccaac, cctgcatggaaccacaat, ccagaaatgtgcatcctg, acctggaaggcgtctaac, caagtgtccaaggggaaa, tatgatcgagggagaggt, gagaggagggacccagag, gcagacaggagagggttg, atttccaccctttcttct, gcgttcagcatatccaaa, aggcccaatacagttgat, gggccaggaactgcatga, cctggattttctccctgt, agtgacccacgatgttaa, ttgatgtagaggacagtt, tgcaaaagtaatagattt, gcccttaatcccagacag, tatgagatacaattctgg, gactttgtcttcgtaacc, tgtctttaaaaaaaaaaa, aaaatgcttgccttgtat, aacataatccagattccc, tagagcagatgtggtaca, gcaatgagcaaatccaac, ctcagatctgaagtgtct, tccagtctggccctgacc, cagccattctctgccctt, ccttctccctttagggta, gcccaaatcccattgcca, cacaacatctcaacttac, catccctttcctctatcc, ccatcccctctgtctgcg, tcacagaaagtctgtgtg, ttctgaagagttcagcct, tcctctaaccaaacccac, actttctttaccaccgtg, attctcagagccagcaag, aaagaaatgttccaaaag, gaaacctccatctcagcc, atttgcccggagccgaag, gttgtgggctccaggcct, ctcagtgaggtttgttgc, ttgtgtgtttcccgagga, gcgggcagtcaggcagtg, gtggttctctctcccctc, tctctgtcgcacgtgggg, tctcagctacatttacaa, gacttcaccaccatgttg, gagagctgctccactttg, ggggtcctcccaacatag, tacaggatggtcaggggc, tccaggtcctggggcacg, cagcaaggcgaggcagat, gcttcagggttcagagtg, ttgtacagtcccagcacc, gtgctgtgggttgtgtct, gcactgcggaggtatggg, caagggcctgagcagaag, ttggcatagtagccctta, ggttcatggacccacttc, cagcccagatcctgtcgg, aagtcaatgtagaggggg, cgcacacagcagttctcc, tccaagttgcggaagcag, . taattggtgtccaaagcc, cgcttcttcctctgaccc, ccctggcccgggttgtcg, agccggtgtgggggaatc, atcatgaggattagatga, gggttgtggtgatccttc, tgcttcttgaggcgcccc, agatctccacggccatgg, tcatcctcattgtccacg, cctttgaatttgatttcc, atcacctcgtgaatgttt, tccaggatatctccattg, ggctgaaaggtgtgacat, ggacagtgaatgctgatt, tctagacctaagttggac, tctcttctcaacagccac, tcacgcacagtgtcagtg, acatcaaaggacagccac, tcggcagtgccccgtgtg, ggcagattcttgccaccg, atatagcgctgtttggca, atgtgctcatctggccga, aggatctggaagagctcg, atcctctgctcattccgc, ttagagctggggttgggc, acccgcaagacccggaat, tctgctcggaataggttg, gttctatttttctccact, gaggacacattgaagcgg, aaaaccttggaggtaatt, cctttagggcagacagcc, agttcgttgtgctccgcc, agcccctggatcatgtcg, aatttatggatttctttg, gcatagtattccgactcg, gtgttttcctgggtgcag, ccttcctccctctcccca, tgcatctcctccagcagc, tcccgggtgctgttgtaa, agggccaggacctgatag, gggacgtgggtcatcacc, gttggctcaggggggctg, gtgagcctgagcttgctc, aagatctgtcccctaatg, gcttccaccctcttcttc, ttgatgtggccgaagtcc, aaggtggtgcaagtggac, agagagaggctgaccgtg, gcaaagttcagcagggcc, aggaccaccagagccctt, tgcaagtgcatcttcatg, tgtgagctgggaagagag, gccagggggacggcaagg, cctggagaggaagagacc, ccagcagacgtgcagaag, gagggaggaaaaccaggc, ggcctccccagatcccaa, agactgaggcttggcaag, aaggtgcatgaactcact, gcactgcgagagcttcag, gacttccaggaagcgctg, gcaaccctgaggacgaag, aagcggactgtgtgcctt, gtagcgctgggattcttg, tccatgtgtctaaacagg, aggatgccccaaaaatat, ttatttatacaaagattt, tgagagtaatattcatac, ttgtctttatacctcagt, ctatgcgtctggggccaa, gtcactgtgtggcacatg, tcgagcttccccgaatgc, ctcacatgttgtcgcacc, tgcttccaggaacaccaa, atgaacacagggtcttgg, aggggaagtgggggaaga, acccataatgccccaacc, ctgcatggaaccacaatc, cagaaatgtgcatcctga, cctggaaggcgtctaacc, aagtgtccaaggggaaat, atgatcgagggagaggtg, agaggagggacccagagg, cagacaggagagggttga, tttccaccctttcttctg, cgttcagcatatccaaaa, ggcccaatacagttgatg, ggccaggaactgcatgac, ctggattttctccctgta, gtgacccacgatgttaat, tgatgtagaggacagttt, gcaaaagtaatagatttg, cccttaatcccagacagt, atgagatacaattctggg, actttgtcttcgtaacct, gtctttaaaaaaaaaaaa, aaatgcttgccttgtata, acataatccagattccct, agagcagatgtggtacag, caatgagcaaatccaacc, tcagatctgaagtgtctt, ccagtctggccctgaccc, agccattctctgcccttc, cttctccctttagggtag, cccaaatcccattgccac, acaacatctcaacttacc, atccctttcctctatccc, catcccctctgtctgcgt, cacagaaagtctgtgtgt, tctgaagagttcagcctt, cctctaaccaaacccaca, ctttctttaccaccgtga, ttctcagagccagcaaga, aagaaatgttccaaaagg, aaacctccatctcagcca, tttgcccggagccgaagg, ttgtgggctccaggcctc, tcagtgaggtttgttgct, tgtgtgtttcccgaggag, cgggcagtcaggcagtgg, tggttctctctcccctct, ctctgtcgcacgtggggt, ctcagctacatttacaag, acttcaccaccatgttgg, agagctgctccactttgg, gggtcctcccaacatagt, acaggatggtcaggggct, ccaggtcctggggcacgc, agcaaggcgaggcagatg, cttcagggttcagagtgt, tgtacagtcccagcaccg, tgctgtgggttgtgtctg, cactgcggaggtatgggc, aagggcctgagcagaagt, tggcatagtagcccttag, gttcatggacccacttcc, agcccagatcctgtcgga, agtcaatgtagagggggc, gcacacagcagttctcct, ccaagttgcggaagcagt, aattggtgtccaaagccc, gcttcttcctctgacccc, cctggcccgggttgtcga, gccggtgtgggggaatca, tcatgaggattagatgag, ggttgtggtgatccttct, gcttcttgaggcgcccca, gatctccacggccatggt, catcctcattgtccacgc, ctttgaatttgatttcca, tcacctcgtgaatgtttt, ccaggatatctccattgg, gctgaaaggtgtgacatg, gacagtgaatgctgattt, ctagacctaagttggact, ctcttctcaacagccact, cacgcacagtgtcagtga, catcaaaggacagccact, cggcagtgccccgtgtgg, gcagattcttgccaccga, tatagcgctgtttggcaa, tgtgctcatctggccgaa, ggatctggaagagctcga, tcctctgctcattccgct, tagagctggggttgggca, cccgcaagacccggaatt, ctgctcggaataggttgg, ttctatttttctccactg, aggacacattgaagcgga, aaaccttggaggtaattc, ctttagggcagacagcca, gttcgttgtgctccgcca, gcccctggatcatgtcga, atttatggatttctttgg, catagtattccgactcgg, tgttttcctgggtgcagc, cttcctccctctccccat, gcatctcctccagcagct, cccgggtgctgttgtaaa, gggccaggacctgatagg, ggacgtgggtcatcaccg, ttggctcaggggggctgg, tgagcctgagcttgctca, agatctgtcccctaatgg, cttccaccctcttcttct, tgatgtggccgaagtcca, aggtggtgcaagtggaca, gagagaggctgaccgtgg, caaagttcagcagggcca, ggaccaccagagcccttt, gcaagtgcatcttcatgt, gtgagctgggaagagagg, ccagggggacggcaaggc, ctggagaggaagagaccc, cagcagacgtgcagaagg, agggaggaaaaccaggcg, gcctccccagatcccaaa, gactgaggcttggcaaga, aggtgcatgaactcactg, cactgcgagagcttcagg, acttccaggaagcgctgg, caaccctgaggacgaaga, agcggactgtgtgccttg, tagcgctgggattcttgt, ccatgtgtctaaacaggt, ggatgccccaaaaatatt, tatttatacaaagatttt, gagagtaatattcatact, tgtctttatacctcagtc, tatgcgtctggggccaag, tcactgtgtggcacatgt, cgagcttccccgaatgcc, tcacatgttgtcgcacct, gcttccaggaacaccaaa, tgaacacagggtcttgga, ggggaagtgggggaagaa, cccataatgccccaaccc, tgcatggaaccacaatcc, agaaatgtgcatcctgac, ctggaaggcgtctaacca, agtgtccaaggggaaata, tgatcgagggagaggtga, gaggagggacccagaggc, agacaggagagggttgat, ttccaccctttcttctgc, gttcagcatatccaaaag, gcccaatacagttgatgg, gccaggaactgcatgacc, tggattttctccctgtag, tgacccacgatgttaatt, gatgtagaggacagtttg, caaaagtaatagatttgc, ccttaatcccagacagta, tgagatacaattctggga, ctttgtcttcgtaacctg, tctttaaaaaaaaaaaaa, aatgcttgccttgíataa, catáatccagaítcccta, gagcagatgtggtacagc, aatgagcaaatccaacct, cagatctgaagtgtcttc, cagtctggccctgaccca, gccattctctgcccttcc, ttctccctttagggtagc, ccaaatcccattgccaca, caacatctcaacttacca, tccctttcctctatcccc, atcccctctgtctgcgtc, acagaaagtctgtgtgtt, ctgaagagttcagccttc, ctctaaccaaacccacac, tttctttaccaccgtgat, tctcagagccagcaagaa, agaaatgttccaaaagga, aacctccatctcagccat, ttgcccggagccgaaggt, tgtgggctccaggcctct, cagtgaggtttgttgctt, gtgtgtttcccgaggagc, gggcagtcaggcagtggt, ggttctctctcccctctc, tctgtcgcacgtggggtc, tcagctacatttacaaga, cttcaccaccatgttgga, gagctgctccactttggg, ggtcctcccaacatagta, caggatggtcaggggctc, caggtcctggggcacgca, gcaaggcgaggcagatgc, ttcagggttcagagtgtt, gtacagtcccagcaccgt, gctgtgggttgtgtctgc, actgcggaggtatgggca, agggcctgagcagaagtt, ggcatagtagcccttagg, ttcatggacccacttcca, gcccagatcctgtcggaa, gtcaatgtagagggggcg, cacacagcagttctcctc, caagttgcggaagcagta, attggtgtccaaagcccg, cttcttcctctgaccccc, ctggcccgggttgtcgag, ccggtgtgggggaatcat, catgaggattagatgagg, gttgtggtgatccttctg, cttcttgaggcgccccag, atctccacggccatggtc, atcctcattgtccacgcc, tttgaatttgatttccat, cacctcgtgaatgttttc, caggatatctccattggg, ctgaaaggtgtgacatgg, acagtgaatgctgatttc, tagacctaagttggactc, tcttctcaacagccactc, acgcacagtgtcagtgac, atcaaaggacagccactc, ggcagtgccccgtgtggg, cagattcttgccaccgat, atagcgctgtttggcaat, gtgctcatctggccgaag, gatctggaagagctcgat, cctctgctcattccgctt, agagctggggttgggcac, ccgcaagacccggaattc, tgctcggaataggttggt, tctatttttctccactga, ggacacattgaagcggaa, aaccttggaggtaattcc, tttagggcagacagccag, ttcgttgtgctccgccag, cccctggatcatgtcgaa, tttatggatttctttggc, atagtattccgactcggt, gttttcctgggtgcagcc, ttcctccctctccccatg, catctcctccagcagctc, ccgggtgctgttgtaaag, ggccaggacctgataggg, gacgtgggtcatcaccgt, tggctcaggggggctggt, 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cttaatcccagacagtat, gagatacaattctgggac, tttgtcttcgtaacctgt, ctttaaaaaaaaaaaaaa, atgcttgccttgtataac, ataatccagattccctag, agcagatgtggtacagca, atgagcaaatccaacctc, agatctgaagtgtcttcc, agtctggccctgacccag, ccattctctgcccttcct, tctccctttagggtagcc, caaatcccattgccacac, aacatctcaacttaccat, ccctttcctctatcccca, tcccctctgtctgcgtca, cagaaagtctgtgtgttc, tgaagagttcagccttcc, tctaaccaaacccacact, ttctttaccaccgtgatt, ctcagagccagcaagaaa, gaaatgttccaaaaggaa, acctccatctcagccatt, tgcccggagccgaaggtt, gtgggctccaggcctctc, agtgaggtttgttgcttg, tgtgtttcccgaggagcg, ggcagtcaggcagtggtg, gttctctctcccctctct, ctgtcgcacgtggggtct, cagctacatttacaagac, ttcaccaccatgttggag, agctgctccactttgggg, gtcctcccaacatagtac, aggatggtcaggggctcc, aggtcctggggcacgcag, caaggcgaggcagatgct, tcagggttcagagtgttg, tacagtcccagcaccgtg, ctgtgggttgtgtctgca, ctgcggaggtatgggcaa, gggcctgagcagaagttg, gcatagtagcccttaggt, tcatggacccacttccag , cccagatcctgtcggaag , tcaatgtagagggggcgc, acacagcagttctcctcc, aagttgcggaagcagtaa, ttggtgtccaaagcccgc, ttcttcctctgacccccc, tggcccgggttgtcgagc, cggtgtgggggaatcatc, atgaggattagatgaggg, ttgtggtgatccttctgc, ttcttgaggcgccccaga, tctccacggccatggtca, tcctcattgtccacgcct, ttgaatttgatttccatc, acctcgtgaatgttttcc, aggatatctccattgggc, tgaaaggtgtgacatgga, cagtgaatgctgatttct, agacctaagttggactct, cttctcaacagccactca, cgcacagtgtcagtgaca, tcaaaggacagccactcg, gcagtgccccgtgtgggc, agattcttgccaccgata, tagcgctgtttggcaatg, tgctcatctggccgaagg, atctggaagagctcgatc, ctctgctcattccgctta, gagctggggttgggcacc, cgcaagacccggaattct, gctcggaataggttggtt, ctatttttctccactgag, gacacattgaagcggaaa, accttggaggtaattcct, ttagggcagacagccagt, tcgttgtgctccgccagc, ccctggatcatgtcgaat, ttatggatttctttggca, tagtattccgactcggtg, ttttcctgggtgcagcct, tcctccctctccccatgc, atctcctccagcagctcc, cgggtgctgttgtaaagg, gccaggacctgatagggg, acgtgggtcatcaccgtt, ggctcaggggggctggtg, agcctgagcttgctcaag, atctgtcccctaatggct, tccaccctcttcttcttg, atgtggccgaagtccaag, gtggtgcaagtggacaga, gagaggctgaccgtggca, aagttcagcagggccagg, accaccagagccctttgc, aagtgcatcttcatgtgt, 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tgtcgagccggtgtgggg, gaatcatcatgaggatta, gatgagggttgtggtgat, ccttctgcttcttgaggc, gccccagatctccacggc, catggtcatcctcattgt, ccacgcctttgaatttga, tttccatcacctcgtgaa, tgttttccaggatatctc, cattgggctgaaaggtgt, gacatggacagtgaatgc, tgatttctagacctaagt, tggactctcttctcaaca, gccactcacgcacagtgt, cagtgacatcaaaggaca, gccactcggcagtgcccc, gtgtgggcagattcttgc, caccgatatagcgctgtt, tggcaatgtgctcatctg, gccgaaggatctggaaga, gctcgatcctctgctcat, tccgcttagagctggggt, tgggcacccgcaagaccc, ggaattctgctcggaata, ggttggttctatttttct, ccactgaggacacattga, agcggaaaaccttggagg, taattcctttagggcaga, cagccagttcgttgtgct, ccgccagcccctggatca, tgtcgaatttatggattt, ctttggcatagtattccg, actcggtgttttcctggg, tgcagccttcctccctct, ccccatgcatctcctcca, gcagctcccgggtgctgt, tgtaaagggccaggacct, gataggggacgtgggtca, tcaccgttggctcagggg, ggctggtgagcctgagct, tgctcaagatctgtcccc, taatggcttccaccctct, tcttcttgatgtggccga, agtccaaggtggtgcaag, tggacagagagaggctga, ccgtggcaaagttcagca, gggccaggaccaccagag, ccctttgcaagtgcatct, tcatgtgtgagctgggaa, gagaggccagggggacgg, caaggcctggagaggaag, agaccccagcagacgtgc, agaaggagggaggaaaac, caggcggcctccccagat, cccaaagactgaggcttg, gcaagaaggtgcatgaac, tcactgcactgcgagagc, ttcaggacttccaggaag, cgctggcaaccctgagga, cgaagaagcggactgtgt, gccttgtagcgctgggat, tcttgtccatgtgtctaa, aatatttatttatacaaa, gattttgagagtaatatt, catacttgtctttatacc, tcagtctatgcgtctggg, gccaagtcactgtgtggc, acatgtcgagcttccccg, aatgcctcacatgttgtc, gcacctgcttccaggaac, accaaatgaacacagggt, cttggaggggaagtgggg, gaagaacccataatgccc, caaccctgcatggaacca, caatccagaaatgtgcat, cctgacctggaaggcgtc, taaccaagtgtccaaggg, gaaatatgatcgagggag, aggtgagaggagggaccc, agaggcagacaggagagg, gttgatttccaccctttc, ttctgcgttcagcatatc,' caaaaggcccaatacagt, tgatgggccaggaactgc, atgacctggattttctcc, ctgtagtgacccacgatg, ttaattgatgtagaggac, agtttgcaaaagtaatag, atttgcccttaatcccag, acagtatgagatacaatt, ctgggactttgtcttcgt, aacctgtctttaaaaaaa, aaaaaaaatgcttgcctt, gtataacataatccagat, tccctagagcagatgtgg, tacagcaatgagcaaatc, caacctcagatctgaagt, gtcttccagtctggccct, gacccagccattctctgc, ccttccttctccctttag, ggtagcccaaatcccatt, gccacacaacatctcaac, ttaccatccctttcctct, atccccatcccctctgtc, tgcgtcacagaaagtctg, tgtgttctgaagagttca, gccttcctctaaccaaac, ccacactttctttaccac, cgtgattctcagagccag, caagaaagaaatgttcca, aaaggaaacctccatctc, agccatttgcccggagcc, gaaggttgtgggctccag, gcctctcagtgaggtttg, ttgcttgtgtgtttcccg, aggagcgggcagtcaggc, agtggtggttctctctcc, cctctctctgtcgcacgt, ggggtctcagctacattt, acaagacttcaccaccat, gttggagagctgctccac, tttgggggtcctcccaac, atagtacaggatggtcag, gggctccaggtcctgggg, cacgcagcaaggcgaggc, agatgcttcagggttcag, agtgttgtacagtcccag, caccgtgctgtgggttgt, gtctgcactgcggaggta, tgggcaagggcctgagca, gaagttggcatagtagcc, cttaggttcatggaccca, cttccagcccagatcctg, tcggaagtcaatgtagag, ggggcgcacacagcagtt, ctcctccaagttgcggaa, gcagtaattggtgtccaa, agcccgcttcttcctctg, acccccctggcccgggtt, gtcgagccggtgtggggg, aatcatcatgaggattag, atgagggttgtggtgatc, cttctgcttcttgaggcg, ccccagatctccacggcc, atggtcatcctcattgtc, cacgcctttgaatttgat, ttccatcacctcgtgaat, gttttccaggatatctcc, attgggctgaaaggtgtg, acatggacagtgaatgct, gatttctagacctaagtt, ggactctcttctcaacag, ccactcacgcacagtgtc, agtgacatcaaaggacag, ccactcggcagtgccccg, tgtgggcagattcttgcc, accgatatagcgctgttt, ggcaatgtgctcatctgg, ccgaaggatctggaagag, ctcgatcctctgctcatt, ccgcttagagctggggtt, gggcacccgcaagacccg, gaattctgctcggaatag, gttggttctatttttctc, cactgaggacacattgaa, gcggaaaaccttggaggt, aattcctttagggcagac, agccagttcgttgtgctc, cgccagcccctggatcat, gtcgaatttatggatttc, tttggcatagtattccga, ctcggtgttttcctgggt, gcagccttcctccctctc, cccatgcatctcctccag, cagctcccgggtgctgtt, gtaaagggccaggacctg, ataggggacgtgggtcat, caccgttggctcaggggg, gctggtgagcctgagctt, gctcaagatctgtcccct, aatggcttccaccctctt, cttcttgatgtggccgaa, gtccaaggtggtgcaagt, ggacagagagaggctgac, cgtggcaaagttcagcag, ggccaggaccaccagagc, cctttgcaagtgcatctt, catgtgtgagctgggaag, agaggccagggggacggc, aaggcctggagaggaaga, gaccccagcagacgtgca, gaaggagggaggaaaacc, aggcggcctccccagatc, ccaaagactgaggcttgg, caagaaggtgcatgaact, cactgcactgcgagagct, tcaggacttccaggaagc, gctggcaaccctgaggac, gaagaagcggactgtgtg, ccttgtagcgctgggatt, cttgtccatgtgtctaaa, atatttatttatacaaag, attttgagagtaatattc, atacttgtctttatacct, cagtctatgcgtctgggg, ccaagtcactgtgtggca, catgtcgagcttccccga, atgcctcacatgttgtcg, cacctgcttccaggaaca, ccaaatgaacacagggtc, ttggaggggaagtggggg, aagaacccataatgcccc, aaccctgcatggaaccac, aatccagaaatgtgcatc, ctgacctggaaggcgtct, aaccaagtgtccaagggg, aaatatgatcgagggaga, ggtgagaggagggaccca, gaggcagacaggagaggg , ttgatttccaccctttct, tctgcgttcagcatatcc, aaaaggcccaatacagtt, gatgggccaggaactgca, tgacctggattttctccc, tgtagtgacccacgatgt, taattgatgtagaggaca, gtttgcaaaagtaataga, tttgcccttaatcccaga, cagtatgagatacaattc, tgggactttgtcttcgta, acctgtctttaaaaaaaa, aaaaaaatgcttgccttg, tataacataatccagatt, ccctagagcagatgtggt, acagcaatgagcaaatcc, aacctcagatctgaagtg, tcttccagtctggccctg, acccagccattctctgcc, cttccttctccctttagg, gtagcccaaatcccattg, ccacacaacatctcaact, taccatccctttcctcta, tccccatcccctctgtct, gcgtcacagaaagtctgt, gtgttctgaagagttcag, ccttcctctaaccaaacc, cacactttctttaccacc, gtgattctcagagccagc, aagaaagaaatgttccaa, aaggaaacctccatctca, gccatttgcccggagccg, aaggttgtgggctccagg, cctctcagtgaggtttgt, tgcttgtgtgtttcccga, ggagcgggcagtcaggca, gtggtggttctctctccc, ctctctctgtcgcacgtg, gggtctcagctacattta, caagacttcaccaccatg, ttggagagctgctccact, ttgggggtcctcccaaca, tagtacaggatggtcagg, ggctccaggtcctggggc, acgcagcaaggcgaggca, gatgcttcagggttcaga, gtgttgtacagtcccagc, accgtgctgtgggttgtg, tctgcactgcggaggtat, gggcaagggcctgagcag, aagttggcatagtagccc, ttaggttcatggacccac, ttccagcccagatcctgt, cggaagtcaatgtagagg, gggcgcacacagcagttc, tcctccaagttgcggaag, cagtaattggtgtccaaa, gcccgcttcttcctctga, cccccctggcccgggttg, tcgagccggtgtggggga, atcatcatgaggattaga, tgagggttgtggtgatcc, ttctgcttcttgaggcgc, cccagatctccacggcca, tggtcatcctcattgtcc, acgcctttgaatttgatt, tccatcacctcgtgaatg, ttttccaggatatctcca, ttgggctgaaaggtgtga, catggacagtgaatgctg, atttctagacctaagttg, gactctcttctcaacagc, cactcacgcacagtgtca, gtgacatcaaaggacagc, cactcggcagtgccccgt, gtgggcagattcttgcca, ccgatatagcgctgtttg, gcaatgtgctcatctggc, cgaaggatctggaagagc, tcgatcctctgctcattc, cgcttagagctggggttg, ggcacccgcaagacccgg, aattctgctcggaatagg, ttggttctatttttctcc, actgaggacacattgaag, cggaaaaccttggaggta, attcctttagggcagaca, gccagttcgttgtgctcc, gccagcccctggatcatg, tcgaatttatggatttct, ttggcatagtattccgac, tcggtgttttcctgggtg, cagccttcctccctctcc, ccatgcatctcctccagc, agctcccgggtgctgttg, taaagggccaggacctga, taggggacgtgggtcatc, accgttggctcagggggg, ctggtgagcctgagcttg, ctcaagatctgtccccta, atggcttccaccctcttc, ttcttgatgtggccgaag, tccaaggtggtgcaagtg, gacagagagaggctgacc, gtggcaaagttcagcagg, gccaggaccaccagagcc, ctttgcaagtgcatcttc, atgtgtgagctgggaaga, gaggccagggggacggca, aggcctggagaggaagag, accccagcagacgtgcag, aaggagggaggaaaacca, ggcggcctccccagatcc, caaagactgaggcttggc, aagaaggtgcatgaactc, actgcactgcgagagctt, caggacttccaggaagcg, ctggcaaccctgaggacg, aagaagcggactgtgtgc, cttgtagcgctgggattc, ttgtccatgtgtctaaac, tatttatttatacaaaga, ttttgagagtaatattca, tacttgtctttatacctc, agtctatgcgtctggggc, caagtcactgtgtggcac, atgtcgagcttccccgaa, tgcctcacatgttgtcgc, acctgcttccaggaacac, caaatgaacacagggtct, tggaggggaagtggggga, agaacccataatgcccca, accctgcatggaaccaca, atccagaaatgtgcatcc, tgacctggaaggcgtcta, accaagtgtccaagggga, aatatgatcgagggagag, gtgagaggagggacccag, aggcagacaggagagggt, tgatttccaccctttctt, ctgcgttcagcatatcca, aaaggcccaatacagttg, atgggccaggaactgcat, gacctggattttctccct, gtagtgacccacgatgtt, aattgatgtagaggacag, tttgcaaaagtaatagat, ttgcccttaatcccagac, agtatgagatacaattct, gggactttgtcttcgtaa, cctgtctttaaaaaaaaa, aaaaaatgcttgccttgt, ataacataatccagattc, cctagagcagatgtggta, cagcaatgagcaaatcca, acctcagatctgaagtgt, cttccagtctggccctga, cccagccattctctgccc, ttccttctccctttaggg, tagcccaaatcccattgc, cacacaacatctcaactt, accatccctttcctctat, ccccatcccctctgtctg, cgtcacagaaagtctgtg, tgttctgaagagttcagc, cttcctctaaccaaaccc, acactttctttaccaccg, tgattctcagagccagca, agaaagaaatgttccaaa, aggaaacctccatctcag, ccatttgcccggagccga, aggttgtgggctccaggc, ctctcagtgaggtttgtt, gcttgtgtgtttcccgag, gagcgggcagtcaggcag, tggtggttctctctcccc, tctctctgtcgcacgtgg, ggtctcagctacatttac, aagacttcaccaccatgt, tggagagctgctccactt, tgggggtcctcccaacat, agtacaggatggtcaggg, gctccaggtcctggggca, cgcagcaaggcgaggcag, atgcttcagggttcagag, tgttgtacagtcccagca, ccgtgctgtgggttgtgt, ctgcactgcggaggtatg, ggcaagggcctgagcaga, agttggcatagtagccct, taggttcatggacccact, tccagcccagatcctgtc, ggaagtcaatgtagaggg, ggcgcacacagcagttct, cctccaagttgcggaagc, agtaattggtgtccaaag, cccgcttcttcctctgac, ccccctggcccgggttgt, cgagccggtgtgggggaa, tcatcatgaggattagat, gagggttgtggtgatcct, tctgcttcttgaggcgcc, ccagatctccacggccat, ggtcatcctcattgtcca, cgcctttgaatttgattt, ccatcacctcgtgaatgt, tttccaggatatctccat, tgggctgaaaggtgtgac, atggacagtgaatgctga, tttctagacctaagttgg, actctcttctcaacagcc, actcacgcacagtgtcag, tgacatcaaaggacagcc, actcggcagtgccccgtg, tgggcagattcttgccac, cgatatagcgctgtttgg, caatgtgctcatctggcc, gaaggatctggaagagct, cgatcctctgctcattcc, gcttagagctggggttgg, gcacccgcaagacccgga, attctgctcggaataggt, tggttctatttttctcca, ctgaggacacattgaagc, ggaaaaccttggaggtaa, ttcctttagggcagacag, ccagttcgttgtgctccg, ccagcccctggatcatgt, cgaatttatggatttctt, tggcatagtattccgact, cggtgttttcctgggtgc, agccttcctccctctccc, catgcatctcctccagca, gctcccgggtgctgttgt, aaagggccaggacctgat, aggggacgtgggtcatca, ccgttggctcaggggggc, tggtgagcctgagcttgc, tcaagatctgtcccctaa, tggcttccaccctcttct, tcttgatgtggccgaagt, ccaaggtggtgcaagtgg, acagagagaggctgaccg, tggcaaagttcagcaggg, ccaggaccaccagagccc, tttgcaagtgcatcttca, tgtgtgagctgggaagag, aggccagggggacggcaa, ggcctggagaggaagaga, ccccagcagacgtgcaga, aggagggaggaaaaccag, gcggcctccccagatccc, aaagactgaggcttggca, agaaggtgcatgaactca, ctgcactgcgagagcttc, aggacttccaggaagcgc, tggcaaccctgaggacga, agaagcggactgtgtgcc, ttgtagcgctgggattct, tgtccatgtgtctaaaca, Ejemplo 22 Los oligonucleótidos antisentido IL-10 de este ejemplo forman parte de la invención.

Además constituyen realizaciones de oligonucleótidos que inhiben la formación de IL-10 "in vitro" e "in vivo" y entonces se pueden usar en vehículos aceptables para uso farmacéutico como una composición farmacéutica para el tratamiento de distintos tipos de cáncer como se describe en esta invención y/o para el tratamiento de metástasis.

Oligonucleótidos antisentido IL-10: tcaccctatggaaacagc, ttaaaaacaggtgaaaat, aataaatattgaaaaaaa, ttataatattgggcttct, ttctaaatcgttcacaga, gaagctcagtaaataaat, agaaatgggggttgaggt, atcagaggtaataaatat, tctataagagaggtacaa, taaggtttctcaaggggc, tgggtcagctatcccaga, gccccagatccgattttg, gagacctctaatttatgt, cctagagtctatagagtc, gccaccctgatgtctcag, tttcgtatcttcattgtc, atgtaggcttctatgtag, ttgatgaagatgtcaaac, tcactcatggctttgtag, atgcctttctcttggagc, ttattaaaggcattcttc, acctgctccacggccttg, ctcttgttttcacaggga, agaaatcgatgacagcgc, cgtagcctcagcctgagg, gtcttcaggttctccccc, agggagttcacatgcgcc, ttgatgtctgggtcttgg, ttctcagcttggggcatc, acctcctccaggtaaaac, tggatcatctcagacaag, gcttggcaacccaggtaa, cccttaaagtcctccagc, aaggactcctttaacaac, aagttgtccagctgatcc, ttcatttgaaagaaagtc, ttcactctgctgaaggca, tctcggagatctcgaagc, atgttaggcaggttgcct, gggaagtgggtgcagctg, ttctcagactgggtgccc, tggcctgggctggccctc, accccagtcaggaggacc, aggcaacagagcagtgct, gagctgtgcatgccttct, tttgcaagtctgtcttgt, ggtttggttttgcaagag, caaccccctgatgtgtag, accttcacctctctgtcc, cccttttatattgtaagc, tcagggaggcctcttcat, tcattaaaaagccacaat, caaggtttcccggcacag, gattttttctgcttagag, ctcctccttctctaacct, ctctaataaacttagttt, tcaatttttgcatcgtaa, gcaaaaatgattggttga, acatgaacttctgcatta, cagctatttttaggatgg, gctacctctcttagaata, attttttagcttctcaat, taaaaaaagttgatttcc, tggggagaacagctgttc, tgtccgcagaggccctca, gctgtgggttctcattcg, cgtgttcctaggtcacag, tgacgtggacaaattgcc, cattccagaatacaatgg, caccctatggaaacagct, taaaaacaggtgaaaata, ataaatattgaaaaaaat, tataatattgggcttctt, tctaaatcgttcacagag, aagctcagtaaataaata, gaaatgggggttgaggta, tcagaggtaataaatatt, ctataagagaggtacaat, aaggtttctcaaggggct, gggtcagctatcccagag, ccccagatccgattttgg, agacctctaatttatgtc, ctagagtctatagagtcg, ccaccctgatgtctcagt, ttcgtatcttcattgtca, tgtaggcttctatgtagt, tgatgaagatgtcaaact, cactcatggctttgtaga, tgcctttctcttggagct, tattaaaggcattcttca, cctgctccacggccttgc, tcttgttttcacagggaa, gaaatcgatgacagcgcc, gtagcctcagcctgaggg, tcttcaggttctccccca, gggagttcacatgcgcct, tgatgtctgggtcttggt, tctcagcttggggcatca, cctcctccaggtaaaact, ggatcatctcagacaagg, cttggcaacccaggtaac, ccttaaagtcctccagca, aggactcctttaacaaca, agttgtccagctgatcct, tcatttgaaagaaagtct, tcactctgctgaaggcat, ctcggagatctcgaagca, tgttaggcaggttgcctg, ggaagtgggtgcagctgt, tctcagactgggtgccct, ggcctgggctggccctca, ccccagtcaggaggacca, ggcaacagagcagtgctg, agctgtgcatgccttctt, ttgcaagtctgtcttgtg, gtttggttttgcaagagc, aaccccctgatgtgtaga, ccttcacctctctgtccc, ccttttatattgtaagct, cagggaggcctcttcatt, cattaaaaagccacaatc, aaggtttcccggcacagg, attttttctgcttagagc, tcctccttctctaacctc, tctaataaacttagtttt, caatttttgcatcgtaag, caaaaatgattggttgaa, catgaacttctgcattac, agctatttttaggatggg, ctacctctcttagaataa, ttttttagcttctcaatt, aaaaaaagttgatttcct, ggggagaacagctgttct, gtccgcagaggccctcag, ctgtgggttctcattcgc, gtgttcctaggtcacagt, gacgtggacaaattgccc, attccagaatacaatggg, accctatggaaacagctt, aaaaacaggtgaaaataa, taaatattgaaaaaaatt, ataatattgggcttcttt, ctaaatcgttcacagaga, agctcagtaaataaatag, aaatgggggttgaggtat, cagaggtaataaatattc, tataagagaggtacaata, aggtttctcaaggggctg, ggtcagctatcccagagc, cccagatccgattttgga, gacctctaatttatgtcc, tagagtctatagagtcgc, caccctgatgtctcagtt, tcgtatcttcattgtcat, gtaggcttctatgtagtt, gatgaagatgtcaaactc, actcatggctttgtagat, gcctttctcttggagctt, attaaaggcattcttcac, ctgctccacggccttgct, cttgttttcacagggaag, aaatcgatgacagcgccg, tagcctcagcctgagggt, cttcaggttctcccccag, ggagttcacatgcgcctt, gatgtctgggtcttggtt, ctcagcttggggcatcac, ctcctccaggtaaaactg, gatcatctcagacaaggc, ttggcaacccaggtaacc, cttaaagtcctccagcaa, ggactcctttaacaacaa, gttgtccagctgatcctt, catttgaaagaaagtctt, cactctgctgaaggcatc, tcggagatctcgaagcat, gttaggcaggttgcctgg, gaagtgggtgcagctgtt, ctcagactgggtgccctg, gcctgggctggccctcac, cccagtcaggaggaccag, gcaacagagcagtgctga, gctgtgcatgccttcttt, tgcaagtctgtcttgtgg, tttggttttgcaagagca, accccctgatgtgtagac, cttcacctctctgtcccc, cttttatattgtaagctc, agggaggcctcttcattc, attaaaaagccacaatca, aggtttcccggcacagga, ttttttctgcttagagct, cctccttctctaacctct, ctaataaacttagttttc, aatttttgcatcgtaagc, aaaaatgattggttgaac, atgaacttctgcattaca, gctatttttaggatgggc, tacctctcttagaataat, tttttagcttctcaatta, aaaaaagttgatttcctg, gggagaacagctgttctg, tccgcagaggccctcagc, tgtgggttctcattcgcg, tgttcctaggtcacagtg, acgtggacaaattgccca, ttccagaatacaatggga, ccctatggaaacagctta, aaaacaggtgaaaataat, aaatattgaaaaaaatta, taatattgggcttctttc, taaatcgttcacagagaa, gctcagtaaataaataga, aatgggggttgaggtatc, agaggtaataaatattct, ataagagaggtacaataa, ggtttctcaaggggctgg, gtcagctatcccagagcc, ccagatccgattttggag, acctctaatttatgtcct, agagtctatagagtcgcc, accctgatgtctcagttt, cgtatcttcattgtcatg, taggcttctatgtagttg, atgaagatgtcaaactca, ctcatggctttgtagatg, cctttctcttggagctta, ttaaaggcattcttcacc, tgctccacggccttgctc, ttgttttcacagggaaga, aatcgatgacagcgccgt, agcctcagcctgagggtc, ttcaggttctcccccagg, gagttcacatgcgccttg, atgtctgggtcttggttc, tcagcttggggcatcacc, tcctccaggtaaaactgg, atcatctcagacaaggct, tggcaacccaggtaaccc, ttaaagtcctccagcaag, gactcctttaacaacaag, ttgtccagctgatccttc, atttgaaagaaagtcttc, actctgctgaaggcatct, cggagatctcgaagcatg, ttaggcaggttgcctggg, aagtgggtgcagctgttc, tcagactgggtgccctgg, cctgggctggccctcacc, ccagtcaggaggaccagg, caacagagcagtgctgag, ctgtgcatgccttctttt, gcaagtctgtcttgtggt, ttggttttgcaagagcaa, ccccctgatgtgtagacc, ttcacctctctgtccccc, ttttatattgtaagctca, gggaggcctcttcattca, ttaaaaagccacaatcaa, ggtttcccggcacaggat, tttttctgcttagagctc, ctccttctctaacctctc, taataaacttagttttca, atttttgcatcgtaagca, aaaatgattggttgaaca, tgaacttctgcattacag, ctatttttaggatgggct, acctctcttagaataatt, ttttagcttctcaattaa, aaaaagttgatttcctgg, ggagaacagctgttctgt, ccgcagaggccctcagct, gtgggttctcattcgcgt, gttcctaggtcacagtga, cgtggacaaattgcccat, tccagaatacaatgggat, cctatggaaacagcttaa, aaacaggtgaaaataata, aatattgaaaaaaattat, aatattgggcttctttct, aaatcgttcacagagaag, ctcagtaaataaatagaa, atgggggttgaggtatca, gaggtaataaatattcta, taagagaggtacaataag, gtttctcaaggggctggg, tcagctatcccagagccc, cagatccgattttggaga, cctctaatttatgtccta, gagtctatagagtcgcca, ccctgatgtctcagtttc, gtatcttcattgtcatgt, aggcttctatgtagttga, tgaagatgtcaaactcac, tcatggctttgtagatgc, ctttctcttggagcttat, taaaggcattcttcacct, gctccacggccttgctct, tgttttcacagggaagaa, atcgatgacagcgccgta, gcctcagcctgagggtct, tcaggttctcccccaggg, agttcacatgcgccttga, tgtctgggtcttggttct, cagcttggggcatcacct, cctccaggtaaaactgga, tcatctcagacaaggctt, ggcaacccaggtaaccct, taaagtcctccagcaagg, actcctttaacaacaagt, tgtccagctgatccttca, tttgaaagaaagtcttca, ctctgctgaaggcatctc, ggagatctcgaagcatgt, taggcaggttgcctggga, agtgggtgcagctgttct, cagactgggtgccctggc, ctgggctggccctcaccc, cagtcaggaggaccaggc, aacagagcagtgctgagc, tgtgcatgccttcttttg, caagtctgtcttgtggtt, tggttttgcaagagcaac, cccctgatgtgtagacct, tcacctctctgtccccct, tttatattgtaagctcag, ggaggcctcttcattcat, taaaaagccacaatcaag, gtttcccggcacaggatt, ttttctgcttagagctcc, tccttctctaacctctct, aataaacttagttttcaa, tttttgcatcgtaagcaa, aaatgattggttgaacat, gaacttctgcattacagc, tatttttaggatgggcta, cctctcttagaataattt, tttagcttctcaattaaa, aaaagttgatttcctggg, gagaacagctgttctgtc, cgcagaggccctcagctg, tgggttctcattcgcgtg, ttcctaggtcacagtgac, gtggacaaattgcccatt, ccagaatacaatgggatt, ctatggaaacagcttaaa, aacaggtgaaaataataa, atattgaaaaaaattata, atattgggcttctttcta, aatcgttcacagagaagc, tcagtaaataaatagaaa, tgggggttgaggtatcag, aggtaataaatattctat, aagagaggtacaataagg, tttctcaaggggctgggt, cagctatcccagagcccc, agatccgattttggagac, ctctaatttatgtcctag, agtctatagagtcgccac, cctgatgtctcagtttcg, tatcttcattgtcatgta, ggcttctatgtagttgat, gaagatgtcaaactcact, catggctttgtagatgcc, tttctcttggagcttatt, aaaggcattcttcacctg, ctccacggccttgctctt, gttttcacagggaagaaa, tcgatgacagcgccgtag, cctcagcctgagggtctt, caggttctcccccaggga, gttcacatgcgccttgat, gtctgggtcttggttctc, agcttggggcatcacctc, ctccaggtaaaactggat, catctcagacaaggcttg, gcaacccaggtaaccctt, aaagtcctccagcaagga, ctcctttaacaacaagtt, gtccagctgatccttcat, ttgaaagaaagtcttcac, tctgctgaaggcatctcg, gagatctcgaagcatgtt, aggcaggttgcctgggaa, gtgggtgcagctgttctc, agactgggtgccctggcc, tgggctggccctcacccc, agtcaggaggaccaggca, acagagcagtgctgagct, gtgcatgccttcttttgc, aagtctgtcttgtggttt, ggttttgcaagagcaacc, ccctgatgtgtagacctt, cacctctctgtccccctt, ttatattgtaagctcagg, gaggcctcttcattcatt, aaaaagccacaatcaagg, tttcccggcacaggattt, tttctgcttagagctcct, ccttctctaacctctcta, ataaacttagttttcaat, ttttgcatcgtaagcaaa, aatgattggttgaacatg, aacttctgcattacagct, atttttaggatgggctac, ctctcttagaataatttt, ttagcttctcaattaaaa, aaagttgatttcctgggg, agaacagctgttctgtcc, gcagaggccctcagctgt, gggttctcattcgcgtgt, tcctaggtcacagtgacg, tggacaaattgcccattc, cagaatacaatgggattg, tatggaaacagcttaaaa, acaggtgaaaataataaa, tattgaaaaaaattataa, tattgggcttctttctaa, atcgttcacagagaagct, cagtaaataaatagaaat, gggggttgaggtatcaga, ggtaataaatattctata, agagaggtacaataaggt, ttctcaaggggctgggtc, agctatcccagagcccca, gatccgattttggagacc, tctaatttatgtcctaga, gtctatagagtcgccacc, ctgatgtctcagtttcgt, atcttcattgtcatgtag, gcttctatgtagttgatg, aagatgtcaaactcactc, atggctttgtagatgcct, ttctcttggagcttatta, aaggcattcttcacctgc, tccacggccttgctcttg, ttttcacagggaagaaat, cgatgacagcgccgtagc, ctcagcctgagggtcttc, aggttctcccccagggag, ttcacatgcgccttgatg, tctgggtcttggttctca, gcttggggcatcacctcc, tccaggtaaaactggatc, atctcagacaaggcttgg, caacccaggtaaccctta, aagtcctccagcaaggac, tcctttaacaacaagttg, 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gtcgccaccctgatgtct, cagtttcgtatcttcatt, gtcatgtaggcttctatg, tagttgatgaagatgtca, aactcactcatggctttg, tagatgcctttctcttgg, agcttattaaaggcattc, ttcacctgctccacggcc, ttgctcttgttttcacag, ggaagaaatcgatgacag, cgccgtagcctcagcctg, agggtcttcaggttctcc, cccagggagttcacatgc, gccttgatgtctgggtct, tggttctcagcttggggc, atcacctcctccaggtaa, aactggatcatctcagac, aaggcttggcaacccagg, taacccttaaagtcctcc, agcaaggactcctttaac, aacaagttgtccagctga, tccttcatttgaaagaaa, gtcttcactctgctgaag, gcatctcggagatctcga, agcatgttaggcaggttg, cctgggaagtgggtgcag, ctgttctcagactgggtg, ccctggcctgggctggcc, ctcaccccagtcaggagg, accaggcaacagagcagt, gctgagctgtgcatgcct, tcttttgcaagtctgtct, tgtggtttggttttgcaa, gagcaaccccctgatgtg, tagaccttcacctctctg, tcccccttttatattgta, agctcagggaggcctctt, cattcattaaaaagccac, aatcaaggtttcccggca, caggattttttctgctta, gagctcctccttctctaa, cctctctaataaacttag, ttttcaatttttgcatcg, taagcaaaaatgattggt, tgaacatgaacttctgca, ttacagctatttttagga, tgggctacctctcttaga, ataattttttagcttctc, aattaaaaaaagttgatt, tcctggggagaacagctg, ttctgtccgcagaggccc, tcagctgtgggttctcat, tcgcgtgttcctaggtca, cagtgacgtggacaaatt, gcccattccagaatacaa, tgggattgagaaataatt, gcttaaaaacaggtgaaa, ataataaatattgaaaaa, aattataatattgggctt, ctttctaaatcgttcaca, gagaagctcagtaaataa, atagaaatgggggttgag, gtatcagaggtaataaat, attctataagagaggtac, aataaggtttctcaaggg, gctgggtcagctatccca, gagccccagatccgattt, tggagacctctaatttat, gtcctagagtctatagag, tcgccaccctgatgtctc, agtttcgtatcttcattg, tcatgtaggcttctatgt, agttgatgaagatgtcaa, actcactcatggctttgt, agatgcctttctcttgga, gcttattaaaggcattct, tcacctgctccacggcct, tgctcttgttttcacagg, gaagaaatcgatgacagc, gccgtagcctcagcctga, gggtcttcaggttctccc, ccagggagttcacatgcg, ccttgatgtctgggtctt, ggttctcagcttggggca, tcacctcctccaggtaaa, actggatcatctcagaca, aggcttggcaacccaggt, aacccttaaagtcctcca, gcaaggactcctttaaca, acaagttgtccagctgat, ccttcatttgaaagaaag, tcttcactctgctgaagg, catctcggagatctcgaa, gcatgttaggcaggttgc, ctgggaagtgggtgcagc, tgttctcagactgggtgc, cctggcctgggctggccc, tcaccccagtcaggagga, ccaggcaacagagcagtg, ctgagctgtgcatgcctt, cttttgcaagtctgtctt, gtggtttggttttgcaag, agcaaccccctgatgtgt, agaccttcacctctctgt, cccccttttatattgtaa, gctcagggaggcctcttc, attcattaaaaagccaca, atcaaggtttcccggcac, aggattttttctgcttag, agctcctccttctctaac, ctctctaataaacttagt, tttcaatttttgcatcgt, aagcaaaaatgattggtt, gaacatgaacttctgcat, tacagctatttttaggat, gggctacctctcttagaa, taattttttagcttctca, attaaaaaaagttgattt, cctggggagaacagctgt, tctgtccgcagaggccct, cagctgtgggttctcatt, cgcgtgttcctaggtcac, agtgacgtggacaaattg, cccattccagaatacaat, gggattgagaaataattg, Ejemplo 23 Los oligonucleótidos antisentldo TGF beta 1 ,2 y 3 de este ejemplo también forman parte de la invención. Además constituyen realizaciones de oligonucleótidos que inhiben la formación de TGF-beta 1,2 y 3 "in vitro" e "in vivo" y entonces se pueden usar en vehículos aceptables para uso farmacéutico como una composición farmacéutica para el tratamiento de distintos tipos de cáncer como se describe en esta invención y/o para el tratamiento de metástasis.

Oligonucleótidos antisentido TGF-beta 1, 2 y 3: gtgccatcaatacctgcaaa, catcagttacatcgaaggag, tcttgggacacgcagcaagg, gaaatcaatgtaaagtggac, catgaactggtccatatcga, gaggttctaaatcttgggac, gcactctggcttttgggttc, tagctcaatccgttgttcag, ccctagatccctcttgaaat, accaaggctctcttatgttt, tcgagtgtgctgcaggtaga, tgaacagcatcagttacatc, gctgggttggagatgttaaa, agaggttctaaatcttggga, cgccggttggtctgttgtga, ctgctttcaccaaattggaa, aagtatagatcaaggagagt, tgctcaggatctgcccgcgg, gígctgttgtagatggaaat, agggcggcatgtctattttg, taagcttattttaaatccca, tagctgcatttgcaagactt, tctgttgtgactcaagtctg, aagcaataggccgcatccaa, tcaatgtaaagtggacgtag, attttagctgcatttgcaag, tgtagatggaaatcacctcc, ttaacactgatgaaccaagg, attgtaccctttgggttcgt, agatccctcttgaaatcaat, tgtaaagtggacgtaggcag, ccattcgccttctgctcttg, tgttaaatctttggacttga, gaagggcggcatgtctattt, gaccctgctgtgctgagtgt, gaactagtaccgccttttca, cgatcctcttgcgcatgaac, ccggccaaaagggaagagat, aaagagacgagtggctatta, aagtggaaatattaatacgg, agatcaaggagagttgtttg, agttgtttttaaaagtcaga, tgtaacaactgggcagacag, ggtgttgtaacaactgggca, tacccacagagcacctggga, gggatggcatcaaggtaccc, tcgtcatcatcattatcatc, aagggtgcctattgcatagc, ctcactgttaactctaagag, gcaaagtatttggtctccac, caagttccttaagccatcca, ttatcttaatgcagactttc, cttacaagaagcttccttag, actggtgagcttcagcttgc, acttgagaatctgatatagc, aggttcctgtctttatggtg, gtgtatccatttccacccta, cagcacagaagttggcattg, gcaaggagaagcagatgctt, agcaaggagaagcagatgct, ttttccaagaattttagctg, ttcttgttacaagcatcatc, ttaaagaaggagcggttcgg, ctgggctgaaatttatatat, gggcagacagctaggagttt, gtgtactcaccaaggtaccc, cccagcactttgggaggccg, ggctcacgcctgtaatccca, tgaccgtgaactcactattt, atagtggtgatggctataca, ttttggttacctgcaaatct, gaacactcaccctgctgtgc, gaatggctctttaaacccta, gaagaaatggagttcagtgt, tttctcctggaagggagagg, aaatgcaacgcgttcccaac, aatacgaaacttttgcaaag, actagtaattctcagagcgg, aagaaactagtaattctcag, agtgcatgtttttaaaagga, cagtagtgcatgtttttaaa, ctcagcacacagtagtgcat, agatgcaggagcaaaaaggt, caggtagacagactgagcgc, gcctcgatcctcttgcgcat, gcggatggcctcgatcctct, ctcaggatctgcccgcggat, gctccggatagtcttccggg, agatggaaatcacctccggg, gttgtagatggaaatcacct, ctggtactgttgtagatgga, aggcggctgccctccggctt, aacctccttggcgtagtact, attttataaacctccttggc, cggcatgtcgattttataaa, cgggatggcattttcggagg, gtagggtctgtagaaagtgg, tgaagtagggtctgtagaaa, attctgaagtagggtctgta, aagcggacgattctgaagta, cccaggttcctgtctttgtg, ggcagtgtaaacttatttta, ccatcaatacctgcaaatct, aggtgccatcaatacctgca, agttttctgatcaccactgg, ttatagttttctgatcacca, cctagtggactttatagttt, acattagcaggagatgtggg, agggcaacaacattagcagg, actccagtctgtaggagggc, tcctgcacatttctaaagca, cagcaattatcctgcacatt, atgtaaagagggcgaaggca, ctcttaaaatcaatgtaaag, ccaagatccctcttaaaatc, cctttgggttcatggatcca, gcattgtaccctttgggttc, gcacagaagttagcattgta, ctgaggactttggtgtgttg, tcctgggacacacagcaagg, tttagctgcatttacaagac, caaggactttagctgcattt, gtcattgtcaccgtgatttt, ccagttttaacaaacagaac, agatgccagttttaacaaac, gttcattatatagtaacaca, atgaaaggttcattatatag, ttccaagggtaatgaaaggt, cttaagccatccatgagttt, cctggcttatttgagttcaa, ttagtcctataacaactcac, gcaaagaaccatttacaatt, cttgcttaaactggcaaaga, acatgtaaagtagttactgt, acacattacatgtaaagtag, taagatctacacattacatg , attcaaaggtactggccagc, tttgtagtgcaagtcaaaat, catgtcattaaatggacaat, cctacatttgtgcgaacttc, ttccccctttgaaaaactca, tttttaatcagcctgcaaag, actgggcagacagtttcgga, taacaactgggcagacagtt, tgttgtaacaactgggcaga, cacagagcacctgggactgt, gtacccacagagcacctggg, tcaaggtacccacagagcac, tggcatcaaggtacccacag, ggcgggatggcatcaaggta, tttgcaggtattgatggcac, ctccttcgatgtaactgatg, ccttgctgcgtgtcccaaga, tcgatatggaccagttcatg, gtcccaagatttagaacctc, gaacccaaaagccagagtgc, atttcaagagggatctaggg, aaacataagagagccttggt, tctacctgcagcacactcga, tcacaacagaccaaccggcg, ttccaatttggtgaaagcag, actctccttgatctatactt, ccgcgggcagatcctgagca, caaaatagacatgccgccct, tgggatttaaaataagctta, cagacttgagtcacaacaga, ttggatgcggcctattgctt, ctacgtccactttacattga, ggaggtgatttccatctaca, ccttggttcatcagtgttaa, acgaacccaaagggtacaat, attgatttcaagagggatct, ctgcctacgtccactttaca, caagagcagaaggcgaatgg, tcaagtccaaagatttaaca, aaatagacatgccgcccttc, acactcagcacagcagggtc, tgaaaaggcggtactagttc, gttcatgcgcaagaggatcg, atctcttcccttttggccgg, taatagccactcgtctcttt, ccgtattaatatttccactt, caaacaactctccttgatct, ctgtctgcccagttgttaca, tgcccagttgttacaacacc, tcccaggtgctctgtgggta, gatgataatgatgatgacga, gctatgcaataggcaccctt, ctcttagagttaacagtgag, gtggagaccaaatactttgc, gaaagtctgcattaagataa, ctaaggaagcttcttgtaag, gcaagctgaagctcaccagt, tagggtggaaatggatacac, caatgccaacttctgtgctg, aagcatctgcttctccttgc, cagctaaaattcttggaaaa, gatgatgcttgtaacaagaa, aaactcctagctgtctgccc, gggtaccttggtgagtacac, cggcctcccaaagtgctggg, tgggattacaggcgtgagcc, tgtatagccatcaccactat, acactgaactccatttcttc, cctctcccttccaggagaaa, gttgggaacgcgttgcattt, ccgctctgagaattactagt, ctgagaattactagtttctt, tttaaaaacatgcactactg, atgcactactgtgtgctgag, gcgctcagtctgtctacctg, atgcgcaagaggatcgaggc, agaggatcgaggccatccgc, atccgcgggcagatcctgag, cccggaagactatccggagc, cccggaggtgatttccatct, aggtgatttccatctacaac, tccatctacaacagtaccag, aagccggagggcagccgcct, agtactacgccaaggaggtt, gccaaggaggtttataaaat, tttataaaatcgacatgccg, cctccgaaaatgccatcccg, ccactttctacagaccctac, tttctacagaccctacttca, tacagaccctacttcagaat, tacttcagaatcgtccgctt, cacaaagacaggaacctggg, taaaataagtttacactgcc, tgcaggtattgatggcacct, ccagtggtgatcagaaaact, tggtgatcagaaaactataa, cctgctaatgttgttgccct, gccctcctacagactggagt, tgctttagaaatgtgcagga, tgccttcgccctctttacat, gattttaagagggatcttgg, tggatccatgaacccaaagg, gaacccaaagggtacaatgc, tacaatgctaacttctgtgc, ccttgctgtgtgtcccagga, gtcttgtaaatgcagctaaa, aaatgcagctaaagtccttg, aaaatcacggtgacaatgac, gttctgtttgttaaaactgg, gtttgttaaaactggcatct, tgtgttactatataatgaac, accíttcattacccttggaa, aaactcatggatggcttaag, aattgtaaatggttctttgc, tctttgccagtttaagcaag, acagtaactactttacatgt, ctactttacatgtaatgtgt, catgtaatgtgtagatctta, gctggccagtacctttgaat, ctttgcaggctgattaaaaa, aactgtctgcccagttgtta, tctgcccagttgttacaaca, acagtcccaggtgctctgtg, cccaggtgctctgtgggtac, gtgctctgtgggtaccttga, ctgtgggtaccttgatgcca, taccttgatgccatcccgcc, ttccaccattagcacgcggg, ccgtgaccagatgcaggatc, Ejemplo 24 Los oligonucleótidos antisentido TGF beta 1 y 2 de este ejemplo también forman parte de la invención. Además constituyen realizaciones de oligonucleótidos que inhiben la formación de TGF-beta 1 y 2 "in vitro" e "in vivo" y entonces se pueden usar en vehículos aceptables para uso farmacéutico como una composición farmacéutica para el tratamiento de distintos tipos de cáncer como se describe en esta invención y/o para el tratamiento de metástasis.

Oligonucleótidos antisentido complementarios del ARNm de TGF-beta 1: cgatagtcttgcag, gtcgatagtcttgc, cttggacaggatct, ccaggaattgttgc, cctcaatttcccct, gatgtccacttgca, ctccaaatgtaggg, accttgctgtactg, gtagtacacgatgg, cacgtagtacacga, catgttggacagct, gcacgatcatgttg, tgtactctgcttgaac, ctgatgtgttgaagaaca, ctctgatgtgttgaag, ggaagtcaatgtacag, catgtcgatagtcttgca, agctgaagcaatagttgg, gtcatagatttcgttgtg, ctccacttttaacttgag, tgctgtatttctggtaca, tgcaggtggatagt, ccatgtcgatagtc, ctccatgtcgatag, tgctgttgtacagg, gtgctgttgtacag, ttggcgtagtagtc, tccaccattagcac, gatttcgttgtggg, gtgtactctgcttg, tgctgtgtgtactc, gctctgatgtgttg, gagctctgatgtgt, cacttttaacttgagcct, ttgctgaggtatcg, gataaccactctgg, caaaagataaccactctg, cggtgacatcaaaag, gttatccctgctgt, gcagtgtgttatcc, tagtgaacccgttg, tgccatgaatggtg, gttcatgccatgaatg, catgagaagcagga, gctttgcagatgct, gagctttgcagatg, tagttggtgtccag, ctgaagcaatagttgg, ggagctgaagcaat, caatgtacagctgc, cggaagtcaatgtac, gcggaagtcaatgt, agttggcatggtag, gcagaagttggcat, tgctggttgtacag, ggttatgctggttg, cgtagtacacgatg, acctccttggcgtagta, cgggggcggggcgggg, cggggcggggcggggcg, cggcgccgccgaggcgcccg, ccgaggtccttgcgg, cggcggtgccggga, ctcggcggccggtag, cgctaaggcg, ccgcacaactccgg, gcgagtcgctgg, cggttgctgaggtatcg, ccgggagagcaacacgg, cgcttctcg, ccattagcacgcggg, cgggctccg, ccggccacccggtcgcgg, cgagcacggcctcg, cgggcagcgggccgggcg, cgcggatggcctcg, cgatgcgcttccg, cccgcggccggcggg, cgcagcccggagggcg, cggcgccccccg, cggcactgccgagagcgcg, cggggatgaaggcggcg, cgggtcggcgactcccg, cgcctgagggacgccg, aagcgtccccggcg, cgcggggcagcgtcgcg, ccccgcgcctccgg, cggcggcggctcg, cgctccgggccgaggccg, cggccccgcgggcg, cggacggggcgtcc, cggccggggccctcg, gggaaagctgaggc, tcgagggaaagctga, cctcgagggaaagc, gggctggtgtggtg, gaacagggctggtgtg, gaacagggctggtg, agagcgcgaacagg, gagagcgcgaacagg, cgagagcgcgaacag, cccctggctcggggg, ccctggctcgggg, cccctggctcgggg, tccccctggctcgg, ctccccctggctcg, tgcgcttccgcttcac, cctcgatgcgcttc, gatggcctcgatgc, ggatggcctcgatgc, atggcctcgatgcgctt, cccggagggcggcatggggga, cctcagggagaagggcgc, gtaggagggcctcgaggg, ctgcaggggctgggggtc, agggctggtgtggtgggg, ggcatgggggaggcggcg, ccggagggcggcatgggg, ggggggctggcgagccgc, ggacaggatctggccgcggatgg, ccccctggctcggggggc, gggccgggcggcacctcc, gggcagcgggccgggcgg, acggcctcgggcagcggg, gggtgctgttgtacaggg, gggtttccaccattagcacgcggg, tcatagatttcgtt, ttgtcatagattt, aagaacatatatatg, aagaacatatatat, ttgaagaacatatata, ccgggagagcaacacggg, acttttaacttga, attgttgctgtattt, attgttgctgtatt, aattgttgctgtatt, aattgttgctgtat, ggcgagtcgctgggtgccagcagccgg, ggcgagtcgctggg, acatcaaaagataa, tgacatcaaaagat, gggccctctccagcgggg, gggctcggcggtgccggg, ggggcagggcccgaggca, ggctccaaatgtaggggc, cgggttatgctggttgtacagggc, cggcgccgccgaggcgcccggg, ggggcggggcgggacc, gggcggggcggggcgggg, gggcggggtggggccggg, gggcaaggcagcgggggcgggg, cggtagcagcagcg, ccagtagccacagc, gcaggtggatagtcc, cttgcaggtggatag, cgatagtcttgcagg, ccatgtcgatagtcttgc, ctcgatgcgcttccg, cctcgatgcgcttcc, ggacaggatctggcc, cgcagcttggacagg, gagccgcagcttgg, cgagccgcagcttg, acctccccctggct, ccaccattagcacg, gaacttgtcatagatttc, gctgtgtgtactctgc, gctccacgtgctgc, gaattgttgctgtatttc, gccaggaattgttgc, gtgacatcaaaagataac, ggctcaaccactgcc, gctgtcacaggagc, cctgctgtcacagg, gcagtgtgttatccctgc, gcagtgtgttatccc, ccaggtcacctcgg, gccatgaatggtggc, gccatgaatggtgg, ccatgagaagcagg, ggaagtcaatgtacagc, ccacgtagtacacgatgg, gcacttgcaggagc, Oligonucleótidos antisentido complementarios del ARNm de TGF-beta 2: cacacagtagtgca, gcacacagtagtgc, gcttgctcaggatctgc, tactcttcgtcgct, cttggcgtagtact, gtaaacctccttgg, gtctattttgtaaacctcc, gcatgtctattttgtaaacc, cggcatgtctattttgta, ctgtagaaagtggg, acaattctgaagtagggt, tcaccaaattggaagcat, gctttcaccaaattggaagc, ctggcttttgggtt, tctgatatagctcaatcc, tcctagtggactttatag, tttttcctagtggact, caattatcctgcacatttc, gcaattatcctgcaca, gcagcaattatcctgc, tggcattgtaccct, tgtgctgagtgtct, cctgctgtgctgagtg, cttgggtgttttgc, tttagctgcatttgcaag, gccacttttccaag, gatcagaaaagcgc, accgtgaccagatg, gtagacaggctgag, tatcgagtgtgctg, ttgcgcatgaactg, ttgctcaggatctg, actggtgagcttca, atagtcttctgggg, gctcaggatagtct, tgtagatggaaatcacct, tggtgctgttgtag, ttctcctggagcaa, ttttcggaggggaa, cgggatggcatttt, attgctgagacgtcaaat, tctccattgctgag, ctctgaactctgct, aacgaaagactctgaact, tgggttctgcaaac, gttgttcaggcact, tctttggacttgagaatc, tgggttggagatgt, tgctgtcgatgtag, acaactttgctgtcga, attcgccttctgct, gaaggagagccatt, tcagttacatcgaagg, tgaagccattcatgaaca, tcctgtctttatggtg, aaatcccaggttcc, ggacagtgtaagcttatt, gtacaaaagtgcagca, tagatggtacaaaagtgc, cacttttatttgggatgatg, gcaaatcttgcttctagt, gtgccatcaatacc, ggtatatgtggagg, tctgatcaccactg, agatgtggggtctt, caataacattagcagg, aagtctgtaggagg, tctgttgtgactcaag, gttggtctgttgtg, caaagcacgcttct, tttctaaagcaataggcc, acgtaggcagcaat, atcaatgtaaagtggacg, ctagatccctcttg, ccatttccacccta, tgggttcgtgtatc, tccagcacagaagt, ataaatacgggcatgc, agtgtctgaactcc, ataagctcaggacc, aggagaagcagatg, agcaaggagaagca, aatcttgggacacg, tagagaatggttagaggt, gttttgccaatgtagtag, gcaagactttacaatc, gcatttgcaagactttac, ttggtcttgccact, cagcacacagtagt, ctttcaccaaattggaag, caccaaattggaagc, tcaccaaattggaagc, ctctggcttttggg, cggcatgtctattttg, catcgttgtcgtcg, cgcttcttccgccg, cgaaggagagccattcg, cgatgtagcg, cgtcaaatcg, cgtagtactcttcgtcg, cgcgctcgcaggcg, cggccgccctccggctcg, cgcggatcgcctcg, gagcgcgaccgtgac, acctccttggcgtagta, agggcggcatgtctattttg, cagaagttggcattgtac, agggcggcatgtctattttgta, tgggacacgcagcaagg, gcaggatcagaaaagc, gcaggtagacaggc, gcaagtccctggtgc, cctggagcaagtcc, cgtagtactcttcg, gagaatctgatatagctc, ggagatgttaaatctttgg, gctgtcgatgtagc, ccaggttcctgtctttatgg, cagcagggacagtg, cttgcttctagttcttcac, gccatcaatacctgc, ggtgccatcaatacc, ccactggtatatgtgg, ggactttatagttttctg, ctcaagtctgtaggag, ggtctgttgtgactc, ggcagcaattatcc, ggttcgtgtatccatttcc, gcacagaagttggc, ccagcacagaagttgg, gtgctgagtgtctg, gctcaggaccctgc, gcagcaaggagaagc, ccaatgtagtagagaatgg, gctgcatttgcaag, aaaaaagaaatcaa, aaaaaaagaaatcaa, aaaaaaaagaaatcaa, cagaataaaaaaaa, tcagaataaaaaaa, ttgtttttaaaagt, agttgtttttaaaa, aagttgtttttaaaa, aaagttgtttttaaaa, aaaagttgtttttaaaa, aaaaagttgtttttaaaa, aaaaaagttgtttttaaaa, aaaaaaagttgtttttaaaa, aaaaaaaagttgtttttaaa, tttttaaaaaagtg, ttttttaaaaaagtg, attttttaaaaaagtg, cattttttaaaaaagt, gcattttttaaaaaa, tgcattttttaaaaaa, agcttattttaaat, aagcttattttaaat, taagcttattttaaat, tgtaattattagat, atgtaattattagat, tgatgtaattatta, atgatgtaattatta, atggtattatataa, tatggtattatataa, ttatggtattatataa, tttatggtattatataa, atttatggtattatataa, aatcatattagaaa, ttacaatcatatta, tttacaatcatatta

Claims

Reivindicaciones 1. Uso de al menos un oligonucleótido, o un derivado activo del mismo, de utilidad en la preparación de una composición farmacéutica para inhibir la formación de metástasis en el tratamiento de cáncer.
2. Uso de acuerdo con la reivindicación 1, en donde el ollgonucleótido es un oligonucleótido antisentido que inhibe la síntesis de las proteínas relacionadas con la formación de metástasis.
3. Uso de acuerdo con la reivindicación 1 ó 2, en donde el oligonucleótido es un ollgonucleótido antisentido que inhibe la producción de TGF-beta 1, TGF-beta 2, TGF-beta 3, moléculas de adhesión celular (CAM), integrinas, selectinas, metaloproteasas (MMP), sus inhibidores tisulares (TIMP) y/o interleuquina 10.
4. Uso de acuerdo con cualquiera de las reivindicaciones 1 a 3, en donde el oligonucleótido está identificado en el listado de secuencias con las SEQ ID N°: 1 a 68, 69 a 107 o está identificado en los ejemplos 19 a 24.
5. Uso de los oligonucleótidos de acuerdo con cualquiera de las reivindicaciones 1 a 4, en donde el oligonucleótido está identificado en el listado de secuencias con las SEQ ID N°: 1 , 5, 6, 8, 9, 14, 15, 16, 28, 2930, 34, 35, 36, 40, 42.
6. Uso de acuerdo con cualquiera de las cláusulas 1 y 5, en donde el cáncer se selecciona del grupo de carcinoma de los ductos biliares, carcinoma de vejiga, tumor de cerebro, cáncer de mama, carcinoma broncogénico, carcinoma de riñon, cáncer cervical, coriocarclnoma, cistadenocarcinoma, carcinoma cervical, carcinoma de colon, carcinoma colorrectal, carcinoma embrionario, cáncer de endometrio, carcinoma epitelial, cáncer de esófago, cáncer de vesícula, cáncer gástrico, cáncer de cabeza y cuello, cáncer hepatocelular, carcinoma de hígado, carcinoma de pulmón, carcinoma de médula, carcinoma broncogénica/de pulmón de células no pequeñas, cáncer de ovario, carcinoma de páncreas, carcinoma papilar, adenocarclnoma papilar, cáncer de próstata, carcinoma de intestino delgado, cáncer rectal, carcinoma de células renales, carcinoma de glándulas sebáceas, cáncer de piel, carcinoma broncogénica/de pulmón de células pequeñas, cáncer de tejidos blandos, carcinoma de células escamosas, carcinoma testicular, cáncer uterino, neuromas acústicos, neurofibromas, tracomas, y granulomas piogénicos; tumores premalignos, blastoma, tumor de Ewing, craniofaringlioma, ependimoma, meduloblastoma, hemanglioblastoma, meduloblastoma, melanoma, mesotelioma, neuroblastoma, neurofibroma, pinealoma, retinoblastoma, retinoblastoma, sarcoma (incluyendo angiosarcoma, condrosarcoma, endoteliosarcoma, fibrosarcoma, gliosarcoma, leiomiosarcoma, liposarcoma, llnfangioendoteliosarcoma, linfangiosarcoma, melanoma, meningioma, miosarcoma, sarcoma osteogénico, osteosarcoma), seminoma, tracomas, tumor de Wilm y/o mieloma, múltiple.
7. Uso de acuerdo con cualquiera de las cláusulas 1 y 5, en donde el cáncer se selecciona del grupo de cáncer de próstata, carcinoma de colon, cáncer de endometrio, cáncer de esófago, cáncer hepatocelular, carcinoma de pulmón de células no pequeñas, cáncer de ovario, carcinoma de páncreas y cáncer de tejidos blandos o se selecciona del grupo de melanoma, cáncer renal, leucemia, linfoma, osteosarcoma, mesotelioma, mieloma múltiple y/o cáncer de vejiga.
8. Uso de oligonucleótidos, o los derivados activos de los mismos, de utilidad en la preparación de una composición farmacéutica para el tratamiento de cáncer de próstata, carcinoma de vejiga, cáncer de colon, cáncer de endometrio, carcinoma hepatocelular, leucemia, linfoma, melanoma, cáncer de pulmón de células no pequeñas (NSCLC), cáncer de ovario, cáncer de páncreas o se selecciona entre el grupo de melanoma, cáncer renal, leucemia, linfoma, osteosarcoma, mesotelioma, mieloma múltiple y/o cáncer de vejiga.
9. Uso de acuerdo con la reivindicación 8, en donde el oligonucleótido es un oligonucleótido antisentido que inhibe la producción del factor de crecimiento transformante beta 1 (TGF-beta 1), TGF-beta 3 y/o interleuquina 10 o inhibe la producción del factor de crecimiento transformante TGF-beta 2.
10. Uso de acuerdo con la reivindicación 9, en donde el oligonucleótido está identificado en el listado de secuencias con las SEQ ID N°: 1 a 21 ó 49 a 68, 22 a 48 ó 69 a 107 o está identificado en los ejemplos 19 a 24.
11. Un ollgonucleótido antisentido, o un derivado activo del mismo, seleccionado del grupo de los oligonucleótidos antisentido de IL-10 identificados en el listado de secuencias con las SEQ ID N°: 49 a 68 o está identificado en el ejemplo 22.
12. Un proceso de elaboración del oligonucleótido antlsentido, o un derivado activo del mismo, de acuerdo con la reivindicación 11 que comprende la adición consecutiva de nucleósidos y ligador por pasos o el recorte del oligonucleótido a partir de oligonucleótidos de cadena más larga.
13. El proceso de acuerdo con la reivindicación 12, con el uso de la química de fosfito-triéster para incrementar la cadena de nucleótidos en la dirección 3'-5' en donde el nucleótido respectivo se acopla al primer nucleótido que está unido de forma covalente a la fase sólida que comprende los pasos de clivar el grupo protector 5' DMT del nucleótido anterior - agregar el nucleótido respectivo para prolongar la cadena modificar los grupos fosfito, luego proteger los grupos hidroxilo 5' sin reaccionar y clivar los oligonucleótidos del soporte sólido seguido de aislamiento y purificación del producto de síntesis.
14. Una composición farmacéutica que comprende un oligonucleótido antisentido identificado en el listado de secuencias con las SEQ ID N°: 49 a 68 o está identificado en el ejemplo 22.
15. Uso del oligonucleótido antisentldo de acuerdo con la reivindicación 10 de utilidad en la preparación de una composición farmacéutica para el tratamiento de cáncer y/o metástasis.
16. Uso de un antagonista TGF-beta 2 de utilidad en la preparación de una composición farmacéutica para el tratamiento de cáncer de colon, cáncer de próstata, melanoma, cáncer de endometrio, cáncer de vejiga, cáncer de ovario, cáncer de páncreas y/o mesotelioma.
17. Uso de acuerdo con la reivindicación 16, en donde el antagonista se selecciona del grupo formado por proteínas que se unen a TGF-beta 2, inhibidores relacionados con el receptor de TGF-beta, inhibidores de Smad, péptidos de unión a TGF-beta 2, anticuerpos TGF-beta, reguladores de la expresión de TGF-beta 2, oligonucleótidos antisentido TGF-beta 2 o los derivados activos de los mismos.
18. Uso de acuerdo con la reivindicación 17, en donde el oligonucleótido está identificado en el listado de secuencias con las SEQ ID N°: 22 a 48 o está Identificado en el ejemplo 20, ejemplo 23 o ejemplo 24.
19. Uso de un antagonista de TGF-beta 2 para el tratamiento de cáncer de colon, cáncer de próstata, melanoma, cáncer de endometrio, cáncer de vejiga, cáncer de ovario, cáncer de páncreas y/o mesotelioma.
20. Uso de al menos un oligonucleótido, o un derivado activo del mismo, para el tratamiento de metástasis.
21. Uso de al menos un oligonucleótido, o los derivados activos de los mismos, para el tratamiento de cáncer de colon, cáncer de próstata, melanoma, cáncer de vejiga, cáncer de endometrio, cáncer de esófago, cáncer hepatocelular, cáncer de pulmón de células no pequeñas, cáncer de ovario, osteosarcoma, mesotelioma, cáncer renal, mieloma múltiple, carcinoma de páncreas, leucemia, linfoma y/o cáncer de tejidos blandos.
22. Uso de al menos un oligonucleótido antisentido identificado en el listado de secuencias con las SEQ ID N°: 49 a 69 o identificado en el ejemplo 22 para el tratamiento de cáncer y/ metástasis.