MXPA06009352A

MXPA06009352A - Modificacion quimica especifica del sitio de peptidos derivados de gp 41 del vih

Info

Publication number: MXPA06009352A
Application number: MXPA/A/2006/009352A
Authority: MX
Inventors: Bray Brian; Zhang Huyi
Original assignee: Bray Brian; Trimeris Inc; Zhang Huyi
Priority date: 2004-03-15
Filing date: 2006-08-17
Publication date: 2007-04-10

Abstract

Se proporciona un método para la modificación química específica del sitio de un péptido derivado de gp41 del VIH, en donde, durante la síntesis uno o más grupos amina del péptido derivado del gp41 del VIH se eligen para ser bloqueados por una gente de protección química y uno o mas grupos amina se seleccionan para estar desprotegidos, y permanecen libres para ser unidos por reacción con una funcionalidad reactiva con amina. El péptido derivado de gp41 del VIH resultante se puede usar para producir un conjugado substancialmente homogéneo compuesto de péptido derivado de gp41 del VIH y polímero, acoplando covalentemente el polímero al uno o más grupos amina libres (desprotegidos) del péptido derivado de gp41 del VIH.

Description

MODIFICACIÓN QUÍMICA ESPECIFICA DEL SITIO DE PEPTIDOS DERIVADOS DE GP41 DEL VIH CAMPO DE LA INVENCIÓN La presente invención se refiere a un método para la modificación quimica especifica del sitio de un péptido derivado de gp41 del VIH de tal manera que, durante la síntesis del péptido, se agregan uno o más amino ácidos que tienen un grupo amina protegido químicamente con un agente protector químico, dejando que uno o más de los grupos amina del péptido sintético elegidos estén desprotegidos, de manera que son reactivos químicamente ("libres") . El péptido sintético resultante se puede acoplar entonces covalentemente a un polímero reactivo con amina al formar un conjugado substancialmente homogéneo compuesto del péptido derivado de gp41 del VIH al cual se acopla covalentemente el polímero en el (los) sitio (s) específico (s) y seleccionado (s) . ANTECEDENTES DE LA INVENCIÓN Es bien sabido actualmente que las células se pueden infectar por el VIH a través de un proceso mediante el cual ocurre la fusión entre la membrana celular y la membrana viral. El modelo aceptado generalmente de este proceso es que el complejo glicoproteico de la envoltura viral (gpl20/gp41) interactúa con los receptores de la superficie celular en las membranas de las células objetivos. El enlace siguiente de la gpl20 a los receptores celulares (por ejemplo, CD4 en combinación con un co-receptor de quimocina tal como CCR-5 o CXCR-4), inducido es un cambio conformacional en el complejo gpl20/gp41 que permite al gp41 insertarse en la membrana de las células objetivo y la fusión de la membrana mediada. La secuencia de aminoácidos de gp41, y su variación entre las diferentes cepas de VIH, son bien conocidas. La FIG. 1 es una representación esquemática de los dominios funcionales de gp41 aceptados en general (nótese que los números de la secuencia de aminoácidos pueden variar ligeramente dependiendo de la cepa de VIH) . Se cree que el péptido de fusión (el dominio fusogénico) está involucrado en la inserción y en la ruptura de la membrana de las células objetivo. El dominio de transmembrana, el cual contiene la secuencia de ancla de transmembrana, se localiza en el extremo C-terminal de la proteína. Entre el péptido de fusión y el ancla de transmembrana se encuentran dos regiones distintas, conocidas como regiones de repetición de septeto (HR) , cada región tiene una pluralidad de septetos. La secuencia de aminoácidos que comprende la región HRl y la secuencia de aminoácidos que comprende la región HR2 son regiones altamente conservadas cada una en la proteína envolvente del VIH-1. La región HRl, más cercana al extremo de N-terminal de la proteína que la región HR2, ha sido descrita por lo general por comprender los residuos de aminoácidos de la SEC ID N0:1 o, polimorfismos de la misma (véase, por ejemplo, la FIG. 2) . La región HR2 ha sido descrita por comprender los residuos de secuencia de aminoácidos de la SEC ID NO: 2, o polimorfismos de la misma (véase, por ejemplo, la FIG. 3) . Como se muestra adicionalmente en la FIG. 1, las regiones HR tienen una pluralidad de trechos de 7 residuos de aminoácidos o "septetos" (los 7 aminoácidos en cada septeto se llaman "a" al "g") , con una predominancia de residuos hidrofóbicos en la primera ("a") y la cuarta ("d") posiciones, residuos cargados frecuentemente en la quinta ("e") y séptima g") posiciones, y con los aminoácidos en las posiciones "a" y "d" que son principalmente determinantes que influencian el estado oligomérico y la orientación de la hebra. Se descubrió que los péptidos derivados de la secuencia nativa de cualquiera de la región HRl (los "péptidos HRl") o la región HR2 (los "péptidos HR2") de gp41 del VIH inhiben la transmisión del VIH a las células hospederas tanto en ensayos in vitro y en estudios clínicos in vivo. Por ejemplo, los péptidos HR2, los cuales se ejemplifican por DP178 (también conocida como T20, efuvirtida, y Fuzeon®; SEC ID NO:3), T651 (SEC ID NO:4), T649 (SEC ID NO:5), bloquean la infección de las células objetivo con potencias de 0.5 ng/ml (EC50 contra VIH-11AI), 5 ng/ml (IC50; VIH-1 IIIB) , y 2 ng/ml (IC50; VIH-1 IIIB) , respectivamente. Se han hecho esfuerzos para mejorar la actividad biológica de los péptidos derivados gp41 de VIH, tales como por ejemplo, tratar de estabilizar la estructura helicoidal del péptido. También se han hecho varios esfuerzos por mejorar las propiedades farmacológicas de los péptidos derivados de gp41 del VIH. Los polímeros se han usado extensivamente para mejorar la farmacocinética y la far acodinámica (y por lo tanto, la eficiencia farmacológica) de los fármacos tales como péptidos, proteínas y moléculas pequeñas . El polímero usado más ampliamente para aplicaciones farmacéuticas es el polietilenglicol ("PEG") . La "PEGilación" es el proceso mediante el cual los fármacos se modifican químicamente para resultar en la adhesión covalente ("acoplamiento") de una o más moléculas de PEG al fármaco (dependiendo de cuantos sitios estén disponibles en el fármaco para interactuar con, y ser conjugados al PEG) . Las propiedades farmacológicas y biológicas mejoradas asociadas con la PEGilación de los fármacos son bien conocidas en la técnica farmacéutica. Por ejemplo, la PEGilación puede aumentar la eficiencia terapéutica por medios que incluyen, pero no se limitan a, reducir la degradación por las enzimas proteolíticas y aumentando por ello la concentración del fármaco; aumentar el tamaño del fármaco al cual se enlaza, mejorando por ello la biodistribución del fármaco; y bloqueando los epitopes antigénicos al reducir la inmunogenicidad, cuando se desee. Aumentando la eficiencia terapéutica, se puede reducir la frecuencia de dosificación y/o la cantidad del fármaco necesario para lograr un efecto terapéutico. El PEG, como un poliéter lineal, tiene una estructura general de: HO-(CH2-CH20)n-CH2CH2-OH donde n puede variar típicamente de aproximadamente 10 a aproximadamente 2000. El PEG, como un poliéter ramificado, tiene una estructura general de: PEG-T-PEG I Z en donde T es un enlazador o puente molecular que enlaza las moléculas de PEG, y Z es el grupo funcional con la porción químicamente reactiva. Muchas de las modificaciones del PEG, al formar derivados de PEG (el PEG y los derivados de PEG se conocen en la técnica como "PEG") , se dirigen a los grupos ("funcionalidades") extremos al agregar o variar sus funcionalidades químicas para ser usados al enlazar covalentemente la molécula de PEG a un fármaco. Varios derivados de PEG son bien conocidos en la técnica. Para acoplar el PEG a un fármaco, típicamente una funcionalidad de la molécula de PEG necesita ser activada para ser reactiva químicamente. El tipo y la especificidad de la funcionalidad se basan en la elección del grupo reactivo químicamente en el fármaco al cual se debe acoplar el PEG. Más comúnmente para las proteínas y los péptidos, el grupo reactivo químicamente se presenta en un aminoácido seleccionado del grupo que consiste de un aminoácido interno que tiene una cadena lateral con un grupo químicamente reactivo libre (por ejemplo, incluyendo, pero no limitados a lisina, cisteína, ácido glutámico, serina, treonina y los similares) , el aminoácido de la N-terminal (que tiene un grupo amina N-terminal, o un grupo amina de cadena lateral, como un grupo reactivo químicamente libre) , un amino ácido de la C-terminal (que tiene un ácido carboxílico de C-terminal, o un grupo amina de cadena lateral, como un grupo reactivo químicamente libre) , y una combinación de los mismos. De los sitios de un péptido a ser acoplados al PEG, el más frecuentemente elegido es el grupo amina de N-terminal ("alfa amina") del aminoácido de N-terminal del péptido, y el grupo amina épsilon ("épsilon amina") de una lisina (una lisina encontrada en la secuencia de aminoácidos la cual no es el aminoácido de N-terminal o el aminoácido C-terminal del péptido) o un grupo épsilon amina de lisina cuando la lisina se presenta en un péptido como un aminoácido de N-terminal o como un amino ácido de C-terminal .

Sin embargo, surge un problema con esta estrategia estándar para la PEGilación. La lisina es uno de los aminoácidos más predominantes en las proteínas. Cuando se relaciona con el gp41 del VIH, hay múltiples residuos de lisina en las secuencia de aminoácidos de la región HRl y la región HR2 (véase, por ejemplo, las FIGs . 1-3). Con respecto al péptido T20 derivado de gp41 del VIH (SEC ID N0:1), por ejemplo, hay dos residuos de lisina internos en este péptido de 36 residuos de aminoácidos. Por lo tanto, con una pluralidad de residuos de lisina en la secuencia de aminoácidos (consecuentemente una pluralidad de aminas de cadena lateral (épsilon aminas) disponibles para ser reactivas con el PEG activado que contiene la funcionalidad reactiva con amina) y una alfa amina, existen varios sitios a los cuales se puede acoplar covalentemente el PEG activado con la funcionalidad reactiva con amina. El resultado de la PEGilación estándar de tal péptido es una mezcla heterogénea que consiste de una población de varios conjugados que varían en el número de moléculas de PEG enlazadas en los sitios de enlace. La heterogeneidad de tal conjugado de péptido-polímero sintético es frecuentemente un resultado indeseable. Esto se debe a que las propiedades farmacológicas y/o biológicas asociadas con la PEGilación de péptidos pueden ser dependientes de factores tales como (a) el número de moléculas de PEG enlazadas al péptido, y (b) la ubicación de los sitios en el péptido a los cuales se acopla el PEG. Por ejemplo, la actividad biológica in vitro del factor de liberación de la hormona de crecimiento humana depende tanto del sitio y del grado de PEGilación. Además de la PEGilación estándar, es muy difícil, si es posible en modo alguno, para separar las especies del conjugado de péptido-polímero (con el número deseado de moléculas de PEG y el (los) sitio (s) deseado (s) de enlace) de una mezcla heterogénea usando las técnicas de separación convencionales conocidas en la técnica. Tal separación intenta sumarse al costo, el tiempo, y los reactivos necesarios para producir el conjugado de péptido-polímero de las especies deseadas. Varios residuos de lisina en la secuencia de aminoácidos de un péptido a ser PEGilado se perciben como tal problema que se desarrollo un método de PEGilación específica del sitio el cual involucra reemplazar los residuos de lisina con aminoácidos diferentes de lisina, y los cuales carezcan de una cadena lateral que tanga una amina libre. Por lo tanto, en la formación de los conjugados compuestos de un péptido derivado de gp41 del VIH (que contienen uno o más residuos de > aminoácidos internos que tienen una amina de cadena lateral en sus secuencia de aminoácidos) y el polímero, hay una necesidad en cuanto a una modificación específica del sitio del péptido sintético de tal manera que se produce un péptido sintético que contiene uno o más aminoácidos que tienen una amina de cadena lateral protegida químicamente con un agente protector químico, y uno o más aminoácidos que tienen una amina libre, no protegida disponible. Por consiguiente, un polímero se puede acoplar covalentemente sólo a un sitio específico, o sitios específicos, en el péptido sintético, según lo seleccione una persona que lleve a cabo la síntesis y la conjugación. Adicionalmente, cuando el polímero a ser conjugado se ramifica, hay una necesidad en cuanto a una modificación específica del sitio del péptido sintético para seleccionar sólo una amina libre a ser acoplada covalentemente al polímero, al evitar varias ramificaciones de la misma molécula del polímero que se conjuga a (y la reticulación de) la misma molécula de péptido sintético. Más específicamente, en el péptido derivado de gp41 del VIH que contiene más de un grupo amina reactivo químicamente ("libre") el cual se encuentra disponible para acoplarse a un polímero que tenga funcionalidad (es) reactiva (s) con amina, es deseable proteger químicamente uno o más grupos amina seleccionados, dejando el (los) grupos amina libre, desprotegidos, disponibles para acoplarse covalentemente al polímero. Adicionalmente, serpia ventajoso proporcionar un péptido derivado de gp41 del VIH el cual tenga el PEG acoplado en una manera específica del sitio a uno o más sitios seleccionados (es decir, en una o más posiciones de aminoácidos seleccionados) en el péptido sintético . BREVE DESCRIPCIÓN DE LA INVENCIÓN La presente invención se refiere a un método para la modificación química específica del sitio de un péptido derivado de gp41 del VIH durante la síntesis del péptido, en donde el péptido sintetizado tiene uno o más aminoácidos que tienen una amina de cadena lateral . El método comprende incorporar en el péptido, o en un fragmento del mismo, durante la síntesis, al menos un aminoácido seleccionado por tener su amina de cadena unida químicamente por reacción con un agente protector químico el cual protege la amina de cadena lateral de la reactividad química subsecuente con una funcionalidad reactiva con amina; y al menos un aminoácido que tiene una amina desprotegida y libre para reaccionar con una funcionalidad reactiva con amina, en donde la amina libre se selecciona del grupo que consiste de una amina de N-terminal, una amina de cadena lateral, y una combinación de las mismas. También, se produce a partir de este método un péptido derivado de gp41 del VIH que tiene uno o más aminoácidos que contienen una amina de cadena lateral, en donde al menos un aminoácido tiene su amina de cadena lateral unida químicamente por reacción con un agente protector químico el protege la amina de cadena lateral de la reactividad química subsecuente con una funcionalidad reactiva con amina; y al menos un aminoácido del péptido sintético tiene una amina desprotegida y libre para reaccionar con una funcionalidad reactiva con amina, en donde la amina libre se selecciona del grupo que consiste de una amina de N-terminal, una amina de cadena lateral, y una combinación de las mismas. La presente invención se refiere a un método para producir una conjugado substancialmente homogéneo compuesto del péptido derivado de gp41 del VIH y el polímero, en donde el péptido derivado de gp41 del VIH tiene, incorporado en su secuencia de aminoácidos durante la síntesis, uno o más aminoácidos que tienen una amina de cadena lateral la cual se ha seleccionado para ser bloqueada por un agente protector químico, dejando desbloqueada sólo la amina libre deseada (seleccionada) del péptido sintético para estar disponible para la reacción con un polímero que contiene una funcionalidad reactiva con amina, al acoplar covalentemente el péptido sintético con el polímero sólo en el (los) sitio (s) específico (s) (la (las) posición (es) de aminoácidos del péptido sintético) que contienen una amina libre. La presente invención también se refiere a un conjugado substancialmente homogéneo compuesto del péptido derivado de gp41 del VIH y el polímero producido de acuerdo con este método, de acuerdo con la presente invención. La presente invención también proporciona un método para la PEGilación específica del sitio de un péptido derivado gp41 de VIH, en donde el PEG se acopla covalentemente en una manera específica del sitio a un péptido derivado de gp41 del VIH. más particularmente, el péptido derivado de gp41 del VIH, que ha tenido incorporado en su secuencia de aminoácidos en las posiciones de aminoácidos seleccionados durante la síntesis, uno o más grupos amina (por ejemplo uno o más de: una alfa amina o una épsilon amina (s)) los cuales se bloquean con un agente protector químico de la reactividad química con las funcionalidades reactivas con amina del PEG durante la PEGilación, dejando por ello disponibles para la PEGilación sólo el (los) grupo (s) amina libres en las posiciones de aminoácidos seleccionados (a través de modificación química) del péptido sintético para ser acoplado covalentemente al PEG. Usando el método de la presente invención, se proporciona una composición substancialmente homogénea que comprende un péptido derivado de gp41 del VIH PEGilado que contiene uno o más (según se seleccione al llevar a cabo el método de modificación química específica del sitio) grupos amina conjugados al PEG.

Los métodos de la presente invención pueden comprender además la remoción del agente protector químico (en un paso de "desprotección") al proporcionar un conjugado substancialmente homogéneo compuesto de un péptido derivado de gp41 del VIH el cual se conjuga a un polímero sólo en sitio (s) específico (s) del péptido sintético, según se seleccione en la realización del método de la presente invención (por ejemplo, a través del uso de la protección química) , en donde tal conjugado retiene la actividad substancial anti-VIH (cuando se compara con la actividad anti-VIH del péptido sintético cuando no está conjugado al polímero) . La presente invención también hace posible un método para tratar infecciones de VIH (preferiblemente, infecciones de VIH-1) el cual comprende administrar a un individuo infectado de VIH una composición farmacéutica que comprende un conjugado substancialmente homogéneo compuesto de un péptido sintético derivado de VIH gp41 acoplado de manera específica del sitio (por ejemplo, conjugado) al polímero. Preferiblemente, la composición farmacéutica se encuentra en una cantidad efectiva para inhibir la transmisión del VIH a las células objetivo, y/o en una cantidad efectiva para inhibir la fusión mediada por gp41 del VIH a células objetivo. También se proporciona un método para la inhibición de la transmisión del VIH a las células, el cual comprende poner en contacto el virus en presencia de células con el conjugado substancialmente homogéneo del polímero y el péptido sintético de acuerdo con la presente invención, en una cantidad efectiva para inhibir la infección de las células por el VIH. Adicionalmente, se proporciona un método para la inhibición de la transmisión del VIH a las células, el cual comprende agregar al virus y a las células, una cantidad del conjugado substancialmente homogéneo del polímero y el péptido sintético de acuerdo con la presente invención, efectiva para inhibir la infección de las células por el VIH. También se proporciona un método para inhibir la fusión del VIH (por ejemplo, un proceso mediante el cual el gp41 del VIH media la fusión entre la membrana viral y la membrana de las células durante la infección por VIH de las células objetivo), el cual comprende poner en contacto el virus en presencia de las células con una cantidad del conjugado homogéneo substancialmente del polímero y el péptido sintético de acuerdo con la presente invención, efectiva para inhibir la fusión del VIH. Estos métodos se pueden usar para tratar a los individuos infectados de VIH. La presente invención también señala el uso de un conjugado homogéneo substancialmente de polímero y el péptido sintético, producido mediante el método de acuerdo con la presente invención, en la fabricación de un medicamento para usarse en la terapia de infecciones de VIH (por ejemplo, se usa en un método para inhibir la transmisión del VIH, un método para inhibir la fusión del VIH, o un método para tratar las infecciones de VIH), como se describe aquí. El medicamento se encuentra preferiblemente en forma de una composición farmacéutica que comprende un conjugado substancialmente homogéneo de polímero y el péptido sintético de acuerdo con la presente invención, junto con un portador aceptable farmacéuticamente . Las descripciones, características y ventajas anteriores de la presente invención serán aparentes en la siguiente Descripción Detallada de la Invención cuando se lean en conjunción con los' dibujos anexos. BREVE DESCRIPCIÓN DE LOS DIBUJOS La FIG. 1 es un esquema del gp41 de VIH-1 que muestra la región 1 de repetición de septeto (HRl) y la región 2 de repetición de septeto (HR2) junto con otras regiones funcionales de la gp41. Las secuencias ejemplares correspondientes a HRl y HR2, y la numeración de las posiciones de aminoácidos se muestran para propósitos de ilustración y con relación a la gplßO, cepa VIHnIB. La FIG. 2 muestra una comparación de las secuencias contenidas dentro de la región HRl de gp41 del VIH-1 para propósitos de ilustración, y no de limitación, como se determina de varias cepas de laboratorio y aislados clínicos, en donde se ilustran algunas de las variaciones en la secuencia de aminoácidos (por ejemplo, los polimorfismos), como se indica por el código de una letra del aminoácido. La FIG. 3 muestra una comparación de las secuencias contenidas dentro de la región HR2 de gp41 del VIH-1 para propósitos de ilustración, y no de limitación, como se determina a partir de varias cepas de laboratorio y aislados clínicos, en donde se ilustran algunas de las variaciones en la secuencia de aminoácidos (por ejemplo, los polimorfismos) , como se indica por el código de una letra del aminoácido. La FIG. 4 es un esquema que muestra la síntesis de un péptido derivado de gp41 del VIH usando una técnica de condensación de fragmentos, en donde: los numerosa representan las posiciones de aminoácidos respectivas con relación al péptido derivado de gp41 del VIH sintetizado; "K" representa una lisina interna a la secuencia del péptido sintético, o a un fragmento usado en la síntesis del péptido sintético; "Ac" representa la acetilación de la N-terminal; y "NH" representa la amidación de la C-terminal. La FIG. 5 es un esquema que muestra la síntesis del péptido derivado de gp41 del VIH modificado, y un conjugado del polímero y el péptido sintético de acuerdo con la presente invención, en donde: los números representan las posiciones de los aminoácidos respectivos con relación al péptido de derivado de gp41 del VIH sintetizado; "K" representa una lisina interna a la secuencia del péptido sintético, o a un fragmento usado en la síntesis del péptido sintético; "Ac" representa la acetilación de la N-terminal; "NH" representa la amidación de la C-terminal; "X" representa un agente protector químico el cual se acopla a una épsilon amina de un aminoácido seleccionado al bloquear selectivamente la cadena lateral del aminoácido ante la reactividad química adicional; e "?" representa un polímero el cual tiene especificidad para acoplarse químicamente con un grupo amina libre, y queda conjugado a una amina libre de un aminoácido el cual no está acoplado a un agente protector químico en una modificación química específica del sitio. Se producen: un péptido aislado derivado de gp41 del VIH que tiene al menos un grupo amina (es decir, épsilon amina del residuo de lisina en la posición del aminoácido 18) protegido químicamente por un agente protector químico; y un conjugado substancialmente homogéneo compuesto del péptido derivado de gp41 del VIH y el polímero, con un polímero conjugado al péptido de manera específica del sitio (por ejemplo, en la épsilon amina del residuo de ' lisina en la posición del aminoácido 28). La FIG. 6 es un esquema que muestra la síntesis del péptido modificado derivado de gp41 del VIH, y un conjugado del polímero y el péptido sintético, de acuerdo con la presente invención, en donde los números representan las posiciones de los aminoácidos con relación al péptido derivado gp41 de VIH sintetizado; "K" representa una lisina interna a la secuencia del péptido sintético, o al fragmento usado en la síntesis del péptido sintético; "Ac" representa la acetilación de la N-terminal; "NH" representa la amidación de la C-terminal; "X" representa un agente protector químico el cual se acopla a una épsilon amina al bloquear selectivamente la cadena lateral del aminoácido ante la reactividad química; e "?" representa un polímero el cual se conjuga a una amina de un aminoácido la cual no está acoplada a un agente protector químico en una modificación química específica del sitio. Se produce: un péptido derivado gp41 de VIH que tiene al menos un grupo amina (por ejemplo, la épsilon amina del residuo de lisina en la posición del aminoácido 28) protegida químicamente por un agente protector químico; y un conjugado substancialmente homogéneo compuesto del péptido derivado de gp41 del VIH y el polímero, con un polímero conjugado de manera específica del sitio con el péptido sintético (por ejemplo, en la épsilon amina del residuo del lisina en la posición del aminoácido 18). DESCRIPCIÓN DETALLADA DE LA INVENCIÓN Definiciones El término "individuo", cuando se usa aquí para propósitos de la especificación y las reivindicaciones, significa un mamífero, y preferiblemente un humano. El término "células objetivo", cuando se usa aquí para los propósitos de la especificación y las reivindicaciones, significa las células capaces de ser infectadas por el VIH. Preferiblemente las células son células humanas; y más preferiblemente, células humanas capaces de ser infectadas por el VIH vía un proceso que incluye fusión de membrana. El término "portador aceptable farmacéuticamente", cuando se usa para los propósitos de la especificación y las reivindicaciones, significa un medio portador que no altera significativamente la actividad biológica del ingrediente activo (por ejemplo, un conjugado de polímero y el péptido sintético de acuerdo con la presente invención) al cual se agrega. Un portador aceptable farmacéuticamente incluye, pero no se limita a uno o más de agua, agua amortiguada, solución salina, glicina al 0.3%, alcoholes acuosos, solución acuosa isotónica; y puede incluir además una o más substancias tales como glicerol, aceites, sales tales como de sodio, potasio magnesio y amonio, fosfonatos, carbonato esteres, ácidos grasos, sacáridos (por ejemplo, manitol) , polisacáridos, excipientes, y conservadores y/o estabilizadores (para aumentar la vida de almacenamiento o cuando sea necesario y adecuado para la fabricación y distribución de la composición) . Preferiblemente, el portador aceptable farmacéuticamente es adecuado para la administración intravenosa, intramuscular, subcutánea o parenteral. Por el término "aminoácido" para los propósitos de la especificación y las reivindicaciones y con referencia a los péptidos sintéticos usados en la presente invención, esta hecho para referirse a una molécula que tiene al menos un grupo amina libre y al menos un grupo carboxilo libre. El aminoácido puede tener más de un grupo amina" libre, o más de un grupo carboxilo libre, o puede comprender además uno o más grupos libres reactivos químicamente que no sean un grupo amina o carboxilo (por ejemplo, un hidroxilo, un sulfihidrilo, etc.). El aminoácido puede ser un aminoácido de formación natural (por ejemplo, L-aminoácido) , un aminoácido que no es de formación natural (por ejemplo, D-aminoácido, un aminoácido sintético, un aminoácido modificado, un derivado de aminoácido, un precursor de aminoácido, y una substitución conservativa. Una persona experimentada en la técnica sabría que la elección de los aminoácidos incorporados en un péptido dependerá en parte de las características físicas, químicas o biológicas específicas requeridas para el péptido antiviral. Tales características se determinan en parte, por la determinación de la estructura y las funciones (por ejemplo, actividad antiviral; como se describe con más detalle aquí) . Por ejemplo, los artesanos expertos sabrían por las descripciones de aquí que los aminoácidos en un péptido sintético pueden estar compuestos de uno o más (L) -aminoácidos de formación natural y de (D) -aminoácidos que no son de formación natural. Un aminoácido preferido se puede usar para la exclusión de los aminoácidos que no sean el aminoácido preferido. Una "substitución conservativa", con relación a la secuencia de aminoácidos de un péptido sintético usado en la presente invención, es un término usado de aquí en adelante para los propósitos de la especificación y las reivindicaciones para referirse a la substitución de uno o más aminoácidos en la secuencia del péptido sintético de tal manera que su actividad biológica permanece substancialmente sin cambios (por ejemplo, si antes de la substitución el péptido inhibe la fusión mediada por gp41 del VIH a una concentración en el rango nanomolar, después de la substitución la inhibición de la fusión mediada por gp41 de VIH se observa aun en el rango nanomolar) . Como se conoce en la técnica la "substitución conservativa" se define por la función antes mencionada, e incluye las substituciones de aminoácidos que tienen substancialmente la misma carga, tamaño, hidrofilicidad, y/o aromaticidad que el aminoácido reemplazado. Tales substituciones son conocidas por aquellas personas con experiencia ordinaria en la técnica por incluir, pero no se limitan a, glicina-alanina-valina; isoleucina- leucina; triptofan-tirosina; ácido aspártico-ácido glutámico; arginina-lisina; asparagina-glutamina; y serina-treonina. Con relevancia particular para la presente invención, se conoce en la técnica que una substitución conservativa incluye también la substitución de lisina con ornitina, al proporcionar un grupo amina libre (por ejemplo, épsilon amina) . Para los péptidos derivados de gp41 del VIH, tales substituciones también pueden comprender polimorfismos en las varias posiciones de aminoácidos a lo largo de la región HR relevante (HRl o HR2) del gp41 encontrada en alguna o varias placas, cepas de laboratorio, o aislados clínicos de VIH, los cuales están disponibles de las bases de datos publicas y son bien conocidos en la técnica (véase también, por ejemplo, las FIGs . 2 y 3, como ejemplos ilustrativos) . El término "polímero" cuando se usa aquí para los propósitos de la especificación y las reivindicaciones, significa una molécula polimérica la cual (a) se emplea en aplicaciones farmacéuticas para mejorar las propiedades farmacológicas y/o biológicas cuando se conjuga a un fármaco (y por lo tanto es substancialmente no toxico y substancialmente soluble en agua) ; (b) tiene una o más funcionalidades las por si mismas, y/o después de la activación para volverse reactivas químicamente, pueden ser usadas para acoplarse covalentemente a una amina libre del fármaco (por ejemplo, un péptido sintético) al formar un conjugado de fármaco-polímero. Con respecto a lo último, el polímero preferiblemente tiene una funcionalidad reactiva con amina para acoplarse covalentemente a un péptido sintético. Un polímero puede incluir, pero no se limita a, polilisinas o poli (D-L-alanina) -poli (L-lisina) s, o polioles. Un poliol preferido comprende un polímero de poli (óxido de alquileno) soluble en agua, y puede tener una cadena lineal o ramificada. El término "poliol" es preferiblemente un polialcohol, soluble en agua el cual puede incluir, pero no se limita a, polietilenglicol ("PEG"), polipropilenglicol ("PPG"), dietilenglicol, trietilenglicol, etilenglicol, dipropilenglicol, copolímeros que comprenden PPG (por ejemplo, etilenglicol/PPG) , copolímeros que comprenden PEG (por ejemplo, PEG/PPG) , mPEG (monometoxi-poli (etilen) glicol) y los similares. Un poliol que abarca tanto homopolímeros y copolímeros, que puede tener además una estructura que comprende una estructura ramificada o una estructura lineal como se conoce por aquellas personas experimentadas en la técnica. Preferiblemente, el polímero es substancialmente no toxico cuando se usa para aplicaciones in vivo en individuos.

En una modalidad preferida, el polímero tiene un peso molecular en el rango entre aproximadamente 200 dalton a aproximadamente 40,000 dalton; y en una modalidad más preferida, el polímero tiene un rango de peso molecular entre aproximadamente 400 dalton a aproximadamente 10,000 dalton. Un polímero preferido para la aplicación en la presente invención comprende un poliletilenglicol ("PEG") , y un polímero más preferido para la aplicación en la presente invención comprende un polietilen glicol que tiene un rango de peso molecular, en donde el rango de peso molecular no es menor de aproximadamente 400 dalton y no es mayor de aproximadamente 20,000 dalton. Como se describe previamente aquí, hay varias formas de PEG que difieren típicamente en los grupos terminales o los grupos funcionales reactivos químicamente a ser usados para enlazar covalentemente la molécula de PEG a un fármaco. Varios PEGs son bien conocidos en la técnica. Un PEG preferido, para usarse en el acoplamiento a uno o más grupos amina desprotegidos del péptido sintético de acuerdo con la presente invención, tiene un grupo reactivo químicamente (por ejemplo "una funcionalidad") el cual se puede usar para acoplar covalentemente el PEG a uno o más de los grupos amina desprotegidos. El PEG puede incluir pero no se limita a, PEG-tresilato, PEG heterobifuncional, diclorotriazina de PEG, succimidil carbonato de PEG, benzotriazol carbonato de PEG, p- nitrofenil carbonato de PEG, triclorofenil carbonato de PEG, carbonilimidazol de PEG, succinimidil succinato de PEG, succinimidil propionato de mPEG, succinimidil butanoato de mPEG, PEG butiraldehído, mPEG-propionaldehído, PEG aldehido, PEG-acetaldehiío, PEG acetaldehído dietil acetal, PEG ácido carboxílico, mPEG fenil éter succinimidil carbonatos, mPEG benzamida succinimidil carbonatos, tioéster de PEG, PEG lineal, PEG ramificado, y PEG bifurcado. Un polímero preferido puede ser aplicado a la presente invención para la exclusión de un polímero diferente del polímero preferido. Los términos "péptido sintético" y "péptido derivado de gp41 del VIH" se usan a modo de sinónimos aquí, con relación a un péptido empleado en la presente invención, y para los propósitos de la especificación y las reivindicaciones, para referirse a un péptido (a) que comprende una secuencia de aminoácidos no menor de aproximadamente 15 aminoácidos y no mayor de aproximadamente 60 residuos de aminoácidos de longitud, y comprende al meno una porción de la secuencia de aminoácidos (preferiblemente, al menos 90 aminoácidos contiguos) contenidos bien en la región HRl o bien en la región HR2 de gp41 del VIH (más preferiblemente de VIH-1) ; y (b) capaces de inhibir la transmisión de Aviv a las células objetivo (preferiblemente, por formación de complejos con una región HR de gp41 del VIH-1 e inhibición de la fusión entre VIH-1 y las células objetivo), como se puede determinar por evaluación de la actividad antiviral in vitro y/o in vivo, como se describirá con más detalle aquí. Más preferiblemente, el péptido sintético empleado en la presente invención puede comprender una secuencia de no más de 28 aminoácidos y no más de aproximadamente 51 aminoácidos de longitud, y aun más preferiblemente no más de aproximadamente 36 aminoácidos y no más de aproximadamente 51 aminoácidos de longitud. El término "aislado" cuando se usa con referencia a un péptido sintético significa que este está substancialmente libre de componentes que no forma parte de la estructura integral del péptido en si; por ejemplo, tales como los precursores substancialmente libres de otros químicos cuando se sintetizan. Producen, o modifican químicamente usando procesos biológicos, bioquímicos, o químicos. El péptido sintético puede comprender en su secuencia de aminoácidos, una o más substituciones conservativas y/o uno o más polimorfismos encontrados en la secuencia de la región relevante del gp41 del VIH, o puede comprender una o más substituciones de aminoácidos las cuales se agregan para estabilizar la estructura helicolidal y/o afectar la oligomerización; siempre que estas retengan substancialmente la actividad antiviral contra el VIH-1 (por ejemplo, un IC50 en el rango picomolar a micromolar) . Los siguientes son ejemplos ilustrativos de los péptidos derivados de gp41 del VIH que pueden ser conjugados de manera específica del sitio al polímero de acuerdo con la presente invención. Sin embargo, un péptido sintético preferido se puede usar en la presente invención para la exclusión de un péptido sintético diferente del péptido sintético preferido. Como es aparente a una persona experimentada en la técnica y a partir de las enseñanzas de aquí, una lisina en la secuencia de aminoácidos de un péptido sintético puede ser substituida con otro aminoácido (de formación natural o que no es de formación natural) , el cual tiene una cadena lateral con un grupo amino libre (por ejemplo, épsilon amina) . La ornitina es un ejemplo ilustrativo de tal aminoácido que se puede usar para sustituir una lisina. Preferiblemente, para usarse de acuerdo con la presente invención, para un péptido sintético que comprende la secuencia derivada de la región HRl de gp41 del VIH, el péptido sintético comprende una secuencia contigua de al menos 15 residuos de aminoácidos en la secuencia de aminoácidos de la SEC ID N0:1, o polimorfismos de la misma, como los determinantes clave en esta porción de la región HRl (por ejemplo, tal como, señalado por la designación de aminoácidos de una sola letra, NNLLRAIEQQHLLQLTVWG IKQLQARI LAVERYLKD, la cual representa los residuos de aminoácidos 18 al 54 de la SEC ID NO:l) se ha encontrado que influencian la estructura y los parámetros bioquímicos y antivirales descritos aquí. Nótese que hay dos residuos de lisina internas a esta porción de la región HRl, uno o más de los cuales se pueden usar para el acoplamiento específico del sitio a un polímero de acuerdo a la presente invención. Un ejemplo preferido de un péptido sintético derivado de la región HRl de gp41 del VIH, y como contiene los aminoácidos encontrados en la secuencia nativa de esta región, se ilustra por tener una secuencia de aminoácidos de la SEC ID NO: 6. Otros ejemplos de un péptido sintético derivado de la región HR-1 de gp41 del VIH, y el cual contiene los aminoácidos encontrados en la secuencia nativa de esta región, se ilustran por tener las secuencia de aminoácidos de las SEC ID NOs: 7-22, y puede comprender además una secuencia de aminoácidos que tiene al menos 95% de identidad, y que tiene más preferiblemente al menos 90% de identidad, con una o más de las SEC ID NOs: 6-22. Más preferiblemente para usarse de acuerdo con la presente invención, un péptido sintético derivado de la región HRl de VIH gp41 contiene una o más substituciones de aminoácidos (por ejemplo, cuando se comparan con la secuencia de aminoácidos de la SEC ID NO:l), las cuales preferiblemente permiten al péptido sintético auto-ensamblarse en trímeros (por ejemplo, un trímero que se compone de tres moléculas del péptido sintético) , como se describe con más detalle en la solicitud, en tramite junto con la presente, publicada como U.S. 20040076637. Los ejemplos de un péptido sintético derivado de la región HR-1 de VIH gp41 y el cual comprende además una o más substituciones de aminoácidos las cuales permiten al péptido sintético auto-ensamblarse en trímeros, se ilustran por tener las secuencias de aminoácidos de la SEC ID NOs: 23-36, y puede comprender además una secuencia de aminoácidos que tiene al menos 95% de identidad, y que tiene más preferiblemente al menos 90% de identidad, con una o más de las SEC ID NOs: 23-36. Nótese que tales péptidos sintéticos tienen uno o más residuos de lisina internos a esta porción de la región HRl, uno o más de los cuales se pueden elegir para ser dejados sin protección (es decir, su grupo reactivo de cadena lateral no se elige para ser acoplado al agente protector químico) ; o se pueden elegir para ser protegidos químicamente en la modificación química específica del sitio de acuerdo a la presente invención. Preferiblemente para usarse de acuerdo con la presente invención, para un péptido sintético que comprende la secuencia derivada de la región HR2 de gp41 del VIH, el péptido sintético comprende una secuencia contigua de al menos 43 a 51 residuos de aminoácidos de la SEC ID NO: 2 (por ejemplo, QQEKNEQEL) , o polimorfismos de la misma, ya que se ha descubierto que los determinantes clave en esta porción de la región HR2 influencian los parámetros bioquímicos y antivirales descritos aquí. Nótese que hay un residuo de lisina interno en esta secuencia. Los péptidos sintéticos ilustrativos derivados de la región HR2 incluyen, pero no se limitan a los péptidos que tienen las secuencias de aminoácidos mostradas en las SEC ID NOs: 3, 4, 5, 37 a 63, y 175, y pueden comprender una secuencia de aminoácidos que tiene al menos 95% de identidad, y más preferiblemente que tiene al menos 90% de identidad, con una o más de las SEC ID NOs: 3, 4, 5, 37 a 63 y 175. Nótese que tales péptidos sintéticos tienen uno o más residuos de lisina internos (y/o en el caso de las SEC ID NOs: 34, 39, 48, y 175, en la carboxi Terminal) , uno o más de los cuales se pueden elegir para ser dejados sin protección, o se pueden elegir para ser protegidos químicamente, en la modificación química específica del sitio de acuerdo a la presente invención. Más preferiblemente para usarse de acuerdo con la presente invención, un péptido sintético derivado de la región HR2 de gp41 del VIH contiene una o más substituciones de aminoácidos (por ejemplo, cuando se copara con una porción relativa de la secuencia de aminoácidos de la SEC ID NO: 2), las cuales preferiblemente promueven la felicidad y/o estabilidad helicoidal del péptido sintético ("péptido de hélice estabilizada") al impartir actividad biológica mejorada, como se describe con más detalle en la solicitud PCT/US04/42918, en tramite junto a la presente. Los ejemplos de tales péptidos de hélice estabilizada se ilustran por tener las secuencias de aminoácidos de las SEC ID NOs: 64-92, y 113-174, y pueden comprender además una secuencia de aminoácidos que tiene al menos 95% de identidad, y que tiene más preferiblemente al menos 90% de identidad, con una o más de las SEC ID NOs: 64-92 y 113-174. Otros ejemplos de péptidos escogidos por su felicidad mejorada y derivados de la región HR2 de gp41 del VIH pueden incluir las SEC ID NOs: 93-95. Nótese que tales péptidos de hélice estabilizada tienen uno o residuos de lisina internos (y en algunos casos más del 25% de la secuencia de aminoácidos del péptido sintético) , uno o más de los cuales se pueden elegir para ser dejado sin protección, o elegido para ser protegido químicamente, en la modificación química específica del sitio de acuerdo con la presente invención. En otra modalidad preferida de acuerdo con la presente invención, el péptido sintético puede comprender un péptido "híbrido" que comprende las secuencias de aminoácidos derivadas de una o más de las proteínas de fusión de VIH-1, VIH-2 (véase, por ejemplo, la Patente Norteamericana No. 6,258,782). Los ejemplos de un péptido sintético híbrido se ilustran por tener las secuencias de aminoácidos de las SEC ID NOs: 96 a 112, y pueden comprender además una secuencia de aminoácidos que tiene al menos 95% de identidad, y que tiene más preferiblemente al menos 90% de identidad, con una o más de las SEC ID NOs: 96 a 112. Nótese que tales ejemplos ilustrados de péptidos sintéticos híbridos tienen al menos dos residuos de lisina internos, uno o más de los cuales se pueden elegir para ser dejados sin protección, o elegidos para ser protegidos químicamente, en la modificación química de acuerdo a la presente invención. El término "por ciento de identidad", cuando se usa aquí para los propósitos de la especificación y las reivindicaciones, con referencia a una secuencia usada de acuerdo con la presente invención, significa que la secuencia se compara ("Secuencia Comparada") con una secuencia descrita o de referencia ("Secuencia de Referencia") , en donde se determina un por ciento de identidad de acuerdo con la siguiente fórmula: por ciento de identidad = [l-(xC/yR) x 100] en donde xC es el número de diferencias entre la Secuencia de Referencia y la Secuencia comparada a través de la longitud de alineación entre la Secuencia Comparada y la Secuencia de Referencia, en donde (a) cada base o aminoácido en la Secuencia de Referencia que no tiene una base o aminoácido alineado correspondiente en comparación con la Secuencia comparada, y (b) cada brecha en la Secuencia de Referencia, y (c) cada base o aminoácido alineados en la Secuencia Comparada que sean diferentes de una base o aminoácido alineados en la Secuencia de Referencia, constituye una diferencia; e yR es el número de bases ó aminoácidos en la Secuencia de Referencia a través de la longitud de la Secuencia Comparada con cualquier brecha creada en la Secuencia de Referencia como resultado de alineación que se contabiliza como una base o aminoácido. Los métodos y los programas para la alineación entre dos secuencias predeterminadas son bien conocidos en la técnica. Así, por ejemplo, una Secuencia de Referencia puede ser un péptido sintético de acuerdo con cualquiera de las SEC ID NOs: 1-175, y una Secuencia Comparada es un péptido derivado de gp41 del VIH el cual se compara con la Secuencia de Referencia, al determinar una secuencia de aminoácidos que tiene al menos 85 de identidad con una o más de las secuencias de aminoácidos de las SEC ID NOs: 1-175. El término "agente protector químico", cuando se usa aquí para los propósitos de la especificación y las reivindicaciones, significa una porción química que: (a) es reactiva químicamente con una amina de un aminoácido, bloqueando por ello ("protegiendo químicamente") la amina ante la reacción con un polímero que tenga una funcionalidad que es reactiva con amina; (b) puede soportar (por ejemplo, permanece unido químicamente por reacción con la amina a la cual está protegiendo químicamente) un paso de desprotección conocidos por aquellas personas experimentadas en la técnica para remover el tBU (t-butilo), Fmoc (9-fluorenilmetoxicarbonilo) , Boc (ter-butiloxicarbonilo) o trt (trifenilmetil (trietilo) ) de un aminoácido; y (c) puede ser removido subsecuentemente de la amina del aminoácido al cual se une químicamente por reacción, de tal manera que la amina queda desprotegida y libre para la reactividad química con una funcionalidad reactiva con amina. Más particularmente, el agente protector químico puede soportar la -remoción del Fmoc o Boc de un péptido por los reactivos usados típicamente en la técnica para tal desprotección, incluyendo, por ejemplo, uno o más de piperidina al 20%, DBU al 2% (1, 8-diazabiciclo [5, 4, 0] undeca-7-eno) , ácido trifluoroacetico del 50% al 90%, una amina cuaternaria (tal como fluoruro de tetrabutil amonio) , o una base orgánica tal como carbonato de potasio. Por ejemplo, como se describe con más detalle aquí, el agente protector químico puede permanecer estable (unido por reacción con el grupo amina) hasta que se desee remover el agente protector químico, y después se remueve el agente protector químico en un paso de desprotección subsecuente y separado (por ejemplo, usando hidrazina al 2% u otro reactivo adecuado) para dar una amina libre. Tales agentes de protección química se conocen en la técnica por incluir, pero no se limitan a, 1- (4, 4-dimetil-2, 6- dioxociclohexa-1-iliden) etilo ("Dde"), 1- (4, 4-dimetil-2, 6- dioxociclohexa-1-iliden) -3-metilbutilo (ivDde) , aliloxicarbonilo (Alloc") , benciloxicarbonilo ("Cbz") , y 2- clorobenciloxicarbonilo ("2-C1-Z") . Preferiblemente, en un péptido sintético, el grupo amina libre que reacciona con el agente protector químico es una amina de N-terminal de un aminoácido de N-terminal, o un grupo amina de una cadena lateral (por ejemplo, épsilon amina) de un aminoácido (si tal aminoácido es el aminoácido de N-terminal, un aminoácido de C-terminal, o un aminoácido interno) , o una combinación de los mismos, como se determina por la modificación química específica del sitio. En una modalidad preferida, el agente protector químico es estable a las bases de amina a las cuales son inestables el Fmoc, Boc, tBu, trt, o los similares. El término "substancialmente homogéneo", cuando se usa aquí para los propósitos de la especificación y las reivindicaciones y con referencia a un conjugado compuesto de un péptido derivado de gp41 del VIH acoplado con un polímero producido de acuerdo con la presente invención, significa que al menos 90%, y más preferiblemente al menos 95% del conjugado resultante producido, contiene el péptido sintético acoplado de manera específica del sitio al polímero según se pretende (es decir, como una sola especie) por una estrategia de protección ortogonal empleada (como se describe con más detalle en el Ejemplo 5 de aquí), de acuerdo con el método de la presente invención. El conjugado puede ser purificado adicionalmente usando la tecnología de separación que incluye, pero no se limita a las técnicas cromatográficas conocidas en la técnica. La presente invención proporciona un método para la modificación química específica del sitio de un péptido derivado de gp41 del VIH, y proporciona un péptido derivado de gp41 del VIH aislado que contiene al menos una amina de cadena lateral protegida químicamente, y que contiene al menos una amina (por ejemplo alfa amina de aminoácido de N-terminal, una o más aminas de cadena lateral), o una combinación de las mismas) , desprotegida y libre para la reactividad con una funcionalidad reactiva con amina. El péptido derivado de gp41 del VIH aislado se puede conjugar entonces (acoplar covalentemente) con un polímero en una ubicación específica del sitio (es decir, en una posición particular del aminoácido, en el péptido sintético, que tenga una amina libre) la cual se selecciona (no protegiéndola intencionalmente con un agente protector químico) para ser acoplada al polímero. Por lo tanto, el acoplamiento del polímero al péptido sintético es vía uno o más de los grupos amina libres del péptido sintético, disponibles para la reacción química con un polímero que tenga una funcionalidad la cual es reactiva con amina. Por consiguiente, por ejemplo, una molécula o polímero se acopla covalentemente a un aminoácido el cual se selecciona por tener una amina libre, para producir un conjugado substancialmente homogéneo compuesto del polímero y el péptido derivado de gp41 del VIH. Para propósitos de ilustración, y sin limitación, el siguiente esquema demuestra los métodos de acuerdo con la presente invención, un péptido derivado de gp41 del VIH producido por un método de acuerdo con la presente invención, y un compuesto substancialmente homogéneo compuesto de polímero péptido sintético de acuerdo con la presente invención, usando un péptido derivado de gp41 del VIH conocido como T20 (SEC ID NO : 3 ) . Esquema 1; el péptido sintético, que se encuentra sin modificaciones en la N-terminal después de la síntesis, tiene 3 grupos amina libres ("NH2") disponibles para acoplarse a un polímero que tiene un grupo funcional reactivo con amina; la amina alfa del aminoácido de N-terminal, y dos residuos de lisina internos designados Ki y K2 por facilidad de descripción) , cada uno con una cadena lateral que tiene una épsilon amina. Péptido sintético : KINE E LELD K2WASLWNWF N iH2 N lH2 .

Esquema 2: El péptido sintético mostrado en el esquema 1 se conjuga a un polímero ("?") que tiene una funcionalidad reactiva con amina para acoplarlo al péptido sintético. Es posible una población heterogénea de conjugados a partir del proceso de conjugación, como sigue: Conjugados: ?.?t$L!HSUEESQNQQE KgWASWWF 2t**YTSUHSLIEESQNQQE KINEQELLELD KgWASL N F ¡ I ?-YTSUHSUEESQNQQE ?-YTSUHSL1EESQNGQE 2H{ TSUHSUEESQNQQ LWNWF I?TSLIHSL1EESQNQQE KtNEQELLELD K2WASLWN F NH2 NH2 Esquema 3: Para propósitos de ilustración solamente, la amina libre del residuo de lisina interna "Kx" se selecciona para estar libre para la reactividad química con una funcionalidad reactiva con amina. Primero, el péptido sintético se sintetiza para incorporar los aminoácidos, los que tienen los grupos amina deseados para ser bloqueados ante la reactividad con el polímero, protegidos por un agente protector químico ("X") para formar un péptido derivado de VIH gp41 aislado que tiene al menos un aminoácido con su amina de cadena lateral protegida químicamente (esquema 3A) ; el polímero se conjuga entonces con tal péptido derivado de VIH gp41 (esquema 3B) en el único aminoácido que tiene una amina libre (el residuo de lisina Ki) ; y el agente de protección químico se remueve subsecuentemente de los aminoácidos a los cuales se enlazó químicamente por reacción, para dar un conjugado substancialmente homogéneo (esquema 3C) . Esquema 3A: ? ^?TSLIHSLJEESQNQQEKiNEQELLELD K2WASLWNWF I I NH2 NH2X Esquema 3B : X^TTSLIHSLIEESQNQQE KiNEQELLELD K2WASLW F 1 I I NH2X E s quema 3 C : KlNEQELLELD K2WASLWNWF I NH2 Los siguientes ejemplos ilustran la presente invención y no se deben considerar como limitantes de la misma. EJEMPLO 1 Los péptidos sintéticos típicamente pueden ser, y han sido, sintetizados por síntesis lineal en un sintetizador de péptidos, utilizando técnicas estándar de síntesis en fase sólida y usando química de péptidos Fmoc y otras químicas de péptidos estándar. Por lo tanto, como se muestra en la síntesis de un fragmento, ilustrada aquí, la síntesis en fase sólida u otra química de péptidos estándar se puede utilizar para sintetizar el péptido sintético, en donde un aminoácido químicamente protegido (por ejemplo un aminoácido que tenga su amina de cadena lateral protegida químicamente como se describe aquí) se puede agregar en la posición del aminoácido deseado en el punto en la síntesis donde se incorpora tal aminoácido en la cadena de aminoácidos para producir el péptido sintético (como se ilustra en el ejemplo 6 de aquí) . Sin embargo, en una modalidad preferida, el péptido derivado gp41 de VIH que experimenta se sintetiza usando una técnica de condensación de fragmentos (véase, por ejemplo, las FIGs. 4-6), como se describe con más detalle en el Ejemplo 5 de aquí. Brevemente, se sintetizan 2 o más fragmentos, cada fragmento que contiene la secuencia de aminoácidos encontrada en una porción respectiva del péptido sintético. En la síntesis de un fragmento, si se desea, se puede incorporar un aminoácido que tenga su amina libre (por ejemplo la amina de cadena lateral) protegida químicamente por un agente de protección química. Los fragmentos se ensamblan entonces (se acoplan covalentemente en una manera y orden) de tal manera que se produce el péptido sintético (con la secuencia de aminoácidos apropiada). T20 (SEC ID NO: 3) se sintetizó por la técnica de condensación de fragmentos, como se describe previamente con más detalle (véase, por ejemplo, la Patente Norteamericana No. 6,015,881). Brevemente, y como se resume en la FIG. 4, primero se sintetizan los fragmentos a ser ensamblados en el péptido sintético. Se sintetizó un fragmento que comprende los primeros 16 aminoácidos de la SEC ID NO: 2, mediante síntesis en fase sólida estándar (usando una resina sensible a super ácidos) , con acetilación ("Ac") de la N-terminal en tanto que se tenia un grupo hidroxilo (-OH) en la C-terminal. Se sintetizó un fragmento que comprende los aminoácidos 17-26 de la SEC ID NO: 3, mediante síntesis en fase sólida estándar con Fmoc en la N-terminal, y -OH en la C-terminal. Se sintetizó un fragmento que comprende los aminoácidos 27-35 de la SEC ID NO: 3, mediante síntesis en fase sólida estándar con Fmoc en la N-terminal y -OH en la C-terminal. Como se muestra en la FIG. 4, el fragmento que comprende los aminoácidos 27-35 de la SEC ID NO: 3, se acopló químicamente al aminoácido 36 en fase de solución para resultar en un fragmento que comprende los aminoácidos 27-36 con amidación de la C-terminal. El fragmento de los aminoácidos 17-26 de la SEC ID NO: 3 se acopló con el fragmento de los aminoácidos 27-36 de la SEC ID NO: 3 (después de la remoción del Fmoc del aminoácido 27 de N-terminal) . La secuencia de aminoácidos resultante que tiene los aminoácidos 17-36 de la SEC ID NO: 3, se acopló químicamente con el fragmento que comprende los aminoácidos 1-16 de la SEC ID NO: 3 (después de la remoción del Fmoc del aminoácido 17 de la N- ter inal) para formar un péptido sintético que comprende la secuencia de aminoácidos de la SEC ID NO: 3. El péptido sintético se desprotegió/sometió a descarboxilación (para remover el tBU, trt, y Boc usados en la síntesis de cada fragmento) con un paso de desprotección, usando un cóctel de ácido trifluoroacetico/ditiotrietol/agua (por ciento de volumen: 90/5/5) a 30 grados C durante 5 a 6 horas con agitación; y después se purificó usando cromatografía de líquidos de alta resolución, en fase invertida. Se confirmó la identidad del péptido con espectrometría de masas por electro-rocío. EJEMPLO 2 Se ilustra una modalidad de un método para la modificación química específica del sitio del péptido derivado de gp41 del VIH, el cual se puede usar para producir (a) un péptido derivado de gp41 del VIH aislado que tiene un grupo amina de cadena lateral de uno o más de sus aminoácidos internos, protegido químicamente; y (b) un conjugado substancialmente homogéneo compuesto del péptido derivado de gp41 del VIH y el polímero. Más específicamente, se incorporan en un péptido sintético (o un fragmento del mismo si se usa la técnica de ensamble de fragmentos) durante la síntesis: uno o más aminoácidos que tienen su amina de cadena lateral bloqueada por un agente de protección química ante la reactividad química subsecuente con una funcionalidad reactiva con amina; y uno o más aminoácidos que tienen una amina (por ejemplo seleccionada del grupo que consiste de alfa amina de N-terminal, una o más épsilon aminas, y una combinación de las mismas) desprotegida, y libre para la reactividad con una funcionalidad reactiva con amina. Un péptido sintético aislado producido por este método para la modificación química específica del sitio, puede ser entonces acoplado covalentemente al polímero, para producir un conjugado substancialmente homogéneo, haciendo reaccionar químicamente el (los) grupo (s) amina desprotegidos (libres) del péptido sintético, con la funcionalidad reactiva con amina del polímero. En esta modalidad ilustrativa, se seleccionó el T20 (SEC ID NO: 3) como el péptido sintético ejemplificante, y el residuo de lisina en la posición del aminoácido 18 ("K18") (un aminoácido con una amina de cadena lateral) se eligió para ser protegido químicamente por una modificación química específica del sitio, dejando el residuo de lisina en la posición del aminoácido 28 ("K28") como el aminoácido interno que tiene una amina libre. Subsecuentemente la amina libre se puede hacer reaccionar químicamente con una funcionalidad reactiva con amina de un polímero, para acoplar covalentemente el polímero al péptido sintético vía la lisina en la posición del aminoácido 28 de la secuencia de aminoácidos del péptido sintético. Con referencia a la FIG. 5, T20 (SEC ID NO: 3) se sintetizó usando la técnica de condensación de fragmentos descrita previamente en el Ejemplo 1 de aquí. Brevemente, y como se resumen en la FIG. 5, se sintetizó un fragmento que comprende los primeros 16 aminoácidos de la SEC ID NO: 3, mediante síntesis en fase sólida estándar con la amina de N-terminal del residuo de aminoácido 1 ("Y") que se somete a acetilación ("Ac") . Un fragmento que comprende los aminoácidos 17-26 de la SEC ID NO: 3 se sintetizó por síntesis en fase sólida estándar usando Fmoc-Lys (ivDde) como el residuo de aminoácido 18, de tal manera que el agente de protección química ivDde ("X" en la FIG. 5) bloquea el grupo épsilon amina de K18 para reaccionar subsecuentemente con una funcionalidad reactiva con amina. Se sintetizó un fragmento que comprende los aminoácidos 27-35 de la SEC ID NO: 3 por síntesis en fase sólida estándar, y se acopló químicamente al aminoácido 36 en fase de solución para formar un fragmento que comprende los aminoácidos 27-36 de la SEC ID NO: 3. El fragmento que comprende los aminoácidos 17-26 de la SEC ID NO: 3 (con el K18 protegido con ivDde) se acopló químicamente con el fragmento de los aminoácidos 27-36 de la SEC ID NO: 3 (que contiene una lisina en la posición 28 ("K28") con una épsilon amina libre) . La secuencia de aminoácidos resultante que comprende los aminoácidos 17-36 de la SEC ID NO: 3 se combinó con el fragmento que comprende los aminoácidos 1-16 de la SEC ID NO: 3 para formar un péptido derivado gp41 de VIH aislado que tiene la secuencia de aminoácidos de la SEC ID NO: 3 y que contiene al menos un aminoácido que tiene su grupo amina de cadena lateral protegido químicamente (bloqueado ante la reactividad química subsecuente con una funcionalidad reactiva con amina) por un agente de protección químico. El péptido sintético (SEC ID NO: 3) se desprotegió para remover los grupos protectores trt, Boc, y tBU en la síntesis en fase sólida estándar como se describe con más detalle en el Ejemplo 1, aquí (en tanto que K18 permanece protegido químicamente) ; se somete a descarboxilación; y después se purifica usando cromatografía de líquidos de alta resolución de fase invertida. El péptido derivado de gp41 del VIH aislado se usó después para acoplar un polímero de manera específica del sitio a la épsilon amina de K28 de la SEC ID NO: 3. Para producir un conjugado substancialmente homogéneo compuesto del péptido derivado de gp41 del VIH y el polímero, el succinimidil propionato de mPEG ("mPEG-SPA") se eligió como el polímero ejemplificante para conjugarlo al T20 (SEC ID NO:3). El T20 (SEC ID N0:3) con ivDde en el grupo épsilon amina de K18 (9.0 mg, 2.0 µmol) se disolvió en dimetil formamida (DMF) (0.3 ml) . Se agregó diisopropiletilamina (DIEA) (10 µl) a la reacción, y después se agregó mPEG-SPA (peso molecular promedio, 500 daltons ("5K") ; 20 mg, 4.0 µmol) en DMF (1 ml) . La mezcla se agitó a la temperatura ambiente y la reacción se supervisó por HPLC hasta que la PEGilación estuvo completa. Para remover el agente de protección química ivDde del grupo épsilon amina de K18, se agregó hidracina (40 µL) a la reacción para alcanzar 3% (v/v) de hidracina en la mezcla de reacción. Se continuó la agitación por otros 30 minutos o hasta que la HPLC mostró que la desprotección fue completa. La mezcla de reacción se diluyó con agua (6.5 ml) para generar la concentración final de DMF al 20%, y después se filtró a través de un filtro de jeringa (0.45 µm, 2 ml) . Se llevó a cabo la purificación por HPLC en una columna de poliestireno/divinilbenceno (PRLP-S, 300A, 10 µm, 250*21.2mm) con acetonitrilo-agua-amortiguador de ácido trifluoroácido al 0.1% como eluyente. Las fracciones recolectadas se evaluaron por HPLC con detectores tanto de UV y ELS. Las fracciones puras se combinan y se someten a liofilización por dos días. El conjugado deseado, un conjugado substancialmente homogéneo compuesto de 5K-PEG-T20 se obtuvo como sólido blanco esponjoso (5.5 mg) después de la liofilización.

En otra variación de esta modalidad, la alfa amina del aminoácido de N-terminal de la SEC ID N0:1 no se sometió a acetilación, sino que en lugar de ello se protegió con un grupo Fmoc. El proceso de síntesis del péptido sintético y la conjugación al polímero se llevaron a cabo como se contempla en este Ejemplo 2. Por lo tanto, el conjugado substancialmente homogéneo resultante comprende 5K-PEG-T20 en K28, excepto que el T20 (SEC ID NO: 3) del conjugado contiene una alfa amina libre en el aminoácido de N-terminal (Y) . EJEMPLO 3 Se ilustra otra modalidad de un método para la modificación química específica del sitio del péptido derivado de gp41 del VIH, el cual se puede usar para producir (a) un péptido derivado de gp41 del VIH que tiene uno o más aminoácidos internos con una amina de cadena lateral protegida químicamente; y (b) un conjugado substancialmente homogéneo compuesto del péptido derivado de gp41 del VIH y el polímero. En esta modalidad ilustrativa, el T20 (SEC ID NO: 3) se seleccionó como el péptido sintético ejemplificante, y el residuo de lisina en la posición del aminoácido 28 ("K28") se eligió para ser protegido químicamente por una modificación química específica del sitio, dejando el residuo de lisina en la posición del aminoácido 18 ("K18") como el aminoácido interno que está libre para el acoplamiento subsecuente al polímero vía la amina de cadena lateral de la lisina y una funcionalidad reactiva con amina de un polímero. Con referencia a la FIG. 6, el T20 (SEC ID NO: 3) se sintetizó usando la técnica de condensación de fragmentos esencialmente como se describe en el Ejemplo 1 de aquí. Brevemente, y como se resume en la FIG. 6, un fragmento de la SEC ID NO: 3 que comprende los primero 16 aminoácidos se sintetizó por síntesis en fase sólida estándar con la amina N-terminal del residuo del aminoácido 1 (Tyr) que se sometió a acetilación ("Ac") . Se sintetizó un fragmento de la SEC ID NO: 3 que comprende los aminoácidos 17-26, mediante síntesis en fase sólida estándar. Se sintetizó un fragmento de la SEC ID NO: 3 que comprende los aminoácidos 27-35, mediante síntesis en fase sólida estándar, usando Fmoc-Lys- (ivDde) como el residuo de aminoácido 28 ("K28") , de tal manera que el agente de protección química ivDde ("X" en la FIG. 6) bloquea el grupo épsilon amina de K28 ante la reactividad química subsecuente con un grupo funcional reactivo con amina. El último fragmento se acopló con el aminoácido 36 en fase de solución para formar un fragmento que tiene los aminoácidos 27-36 de la SEC ID NO: 3. El fragmento que tiene los aminoácidos 17-26 (que contiene el K18 con una épsilon amina libre) se combinó con el fragmento de los aminoácidos 27-36 (con el K26 protegido por ivDde) . La secuencia de aminoácidos resultante que tiene los aminoácidos 17-36 se combinó con el fragmento que comprende los aminoácidos 1-16 para formar un péptido sintético que comprende la secuencia de aminoácidos de la SEC ID NO: 3. El péptido sintético (SEC ID NO: 3) se desprotegió para remover los grupos protectores trt, Boc, y TBu usados en la síntesis en fase sólida estándar como se describe con más detalle en el Ejemplo 1 de aquí (en tanto que el K28 permanece protegido químicamente) ; se sometió a descarboxilación; y después se purificó usando cromatografía de líquidos de alta resolución en fase invertida. El péptido derivado de gp41 del VIH aislado se uso después para acoplarlo a un polímero de manera específica del sitio con la épsilon amina libre de K18 de SEC ID NO:3. El succinimidil propionato de mPEG ("mPEG-SPA") se eligió como el polímero ejemplificante para conjugarlo a T20 (SEC ID NO:3). El T20 (SEC ID NO:3) con ivDde en el grupo épsilon amina de K28 (19.7 mg, 4.4 µmol) se disolvió en DMF (0.5 ml) . Se agregó DIEA (20 µL) a la reacción, y después se agregó mPEG-SPA (peso molecular promedio, 5000 dalton ("5K") ; 50 mg, 10 µmol) en DMF (1 ml) . La mezcla se agitó a la temperatura ambiente y la reacción se supervisó por HPLC hasta que la PEGilación estuvo completa. Para remover el agente de protección química ivDde del grupo épsilon amina de K28, se agregó hidracina (45 µL) a la reacción para alcanzar 3% (v/v) de hidracina en la mezcla de reacción. La agitación se continuó por otros 30 minutos (o hasta que la HPLC muestre que está completa la desprotección) . La mezcla de reacción se diluyó con agua (8.5 ml) para generar una concentración final de DMF al 20%, después se filtró a través de un filtro de jeringa (0.45 µm, 2 ml) . Se llevó a cabo la purificación por HPLC en una columna de poliestireno/divinilbenceno (PRLP-S, 300A, 10 µm, 250*21.2mm) con amortiguador de acetonitrilo-agua ácido trifluoroácido al 0.1% como eluyente. Las fracciones recolectadas se evaluaron por HPLC con detectores tanto de UV y ELS. Las fracciones puras se combinaron y se sometieron a liofilización por dos días. Se obtuvo el conjugado deseado, un conjugado substancialmente homogéneo compuesto de 5K-PEG-T20 en K18, como sólido blanco esponjoso (10.4 mg) después de la liofilización. En otra variación de esta modalidad, la alfa amina del aminoácido de N-terminal de la SEC ID NO:l no se sometió a acetilación, sino que en lugar de ello se protegió con un grupo Fmoc. El proceso de síntesis del péptido sintético y la conjugación a un polímero se llevaron a cabo como se establece en este Ejemplo 3. Por lo tanto, el conjugado resultante comprende un conjugado substancialmente homogéneo compuesto de 5K-PEG-T20 en K18, excepto que el T20 (SEC ID NO: 3) del conjugado contenía una alfa amina libre en el aminoácido de N- terminal (Y) . EJEMPLO 4 En este ejemplo se ilustran: (a) un método para determinar la actividad antiviral de los conjugados substancialmente homogéneos producidos de acuerdo con la presente invención; y (b) la necesidad de una modificación química específica del sitio de acuerdo con la presente invención para producir un conjugado substancialmente homogéneo compuesto del polímero acoplado covalentemente al péptido derivado de gp41 del VIH. Al usar un ensayo in vitro para demostrar la potencia antiviral, es importante señalar que el efecto antiviral del péptido sintético, demostrado en el ensayo in vitro, ha sido correlacionado con el efecto antiviral del péptido sintético in vivo. Al determinar la actividad antiviral (por ejemplo, una medida es la habilidad para inhibir la transmisión del VIH a células objetivo) de los conjugados de péptido-polímero producidos de acuerdo con la presente invención, se usa un ensayo in vitro el cual se ha demostrado, por lo datos generados usando los péptidos sintéticos derivados de cualesquiera de las regiones HR de gp41 del VIH, que es predictivo de la actividad antiviral observada in vivo. Más particularmente, se ha demostrado que la actividad antiviral observada usando un ensayo de infectividad in vitro ("ensayo de infectividad Magi-CCR5", véase las Patentes Norteamericanas Nos. 6,258,782) se correlaciona razonablemente con la actividad antiviral observada in vivo para los mismos péptidos derivados de gp41 del VIH. Para enfatizar este punto adicionalmente, Se ha demostrado que el T20 (SEC ID NO: 3) y el T1249 (SEC ID NO: 96), tienen cada uno actividad antiviral potente contra el VIH tanto en el ensayo de infectividad in vitro y en pruebas clínicas en humanos . Los ensayos de infectividad registra la reducción del título de virus infecciosos empleando las líneas indicadoras celulares MAGI o el derivado de expresión de CCR5 cMAGI . Ambas líneas celulares explotan la habilidad del VIH-1 tat para transactivar la expresión de un gen reportero de ß-galactosidasa estimulado por el VIH-LTR. El gen reportero ß~ gal ha sido modificado para localizarse en el núcleo y puede ser detectado con el substrato de X-gal como teñido nuclear intenso en un plazo de unos cuantos días de la infección. El número de núcleos teñidos se puede interpretar por lo tanto como igual al número de viriones infecciosos en el inoculo de desafío antes del teñido. Las células infectadas se enumeran usando un dispositivo de de generación de imágenes CCD y los aislados adaptados tanto primarios y de laboratorio muestran una relación lineal entre la entrada de virus y el número de células infectadas visualizadas por el dispositivo de generación de imágenes. En los ensayos MAGI y CMAGI, una reducción del 50% en el título infeccioso (Vn/Vo=0.5) es significativa, y proporciona el valor de truncamiento primario para evaluar la actividad antiviral ("IC50" se define como la dilución que resulta en un 50% de reducción en el título del virus infeccioso) . También se evalúa un truncamiento secundario de Vn/Vo=0.1 correspondiente a una reducción del 90% en el título infeccioso ("IC90") . Los conjugados substancialmente homogéneos evaluados por su actividad viral se diluyeron en varias concentraciones, y se evaluaron por triplicado contra un inoculo ajustado para dar aproximadamente 1500-2000 células infectadas/pozo de una placa de microtitulación de 48 pozos. El conjugado substancialmente homogéneo (en la dilución respectiva) se agregó a las células cMAGI o MAGI, seguido por el inoculo del virus; y 24 horas después, se agregó un inhibidor de la infección y de la fusión célula-célula (por ejemplo, T20) , para evitar que se dispersen las rondas secundarias de la infección de VIH y el virus célula por célula. Las células se cultivaron por 2 días más, y después se fijaron y se tiñeron con el substrato de X-gal para detectar las células infectadas con VIH. Se determinó el número de células infectadas por cada control y para las diluciones de conjugado substancialmente homogéneo, con el dispositivo de imágenes CCD, y después se calcularon el IC50 y el IC90 (expresados típicamente en µg/ml) . En este ejemplo, varios conjugados substancialmente homogéneos, producidos por separado mediante los métodos descritos aquí, se analizaron en cuanto a su actividad antiviral como se muestra en la Tabla 1, y se identificaron como sigue. "Conjugado A" es un péptido sintético que tiene la secuencia de aminoácidos de la SEC ID NO: 3, que tiene un PEG de 2K conjugado de manera específica del sitio a la amina de N-terminal (por lo tanto, las aminas de cadena lateral tanto de K18 y de K28 se protegieron químicamente durante la síntesis) . "Conjugado B" es un péptido sintético que tiene la secuencia de aminoácidos de la SEC ID NO: 3, que tiene un PEG de 2K conjugado de manera específica del sitio a K18 (por lo tanto, la amina de N-terminal y la amina de cadena lateral de K28 se protegieron químicamente durante la síntesis) . "Conjugado C" es un péptidos sintético que tiene la secuencia de aminoácidos de la SEC ID NO: 3, que tiene un PEG de 2K conjugado de manera específica del sitio a K28 (por lo tanto, la amina de N-terminal y la amina de cadena lateral de K18 se protegieron químicamente durante la síntesis) . "Conjugado D" es un péptido sintético que tiene la secuencia de aminoácidos de la SEC ID NO: 3 que tiene un PEG de 5K conjugado de manera específica del sitio a la amina de N-terminal (por lo tanto, las aminas de cadena lateral tanto de K18 y de K28 se protegieron químicamente durante la síntesis) . "Conjugado E" es un péptido sintético que tiene la secuencia de aminoácidos de la SEC ID NO: 3 que tiene un PEG de 5K conjugado de manera específica del sitio a K18 (por lo tanto la amina de N-terminal y la amina de cadena lateral de K28 se protegieron químicamente durante la síntesis) . "Conjugado F" es un péptido sintético que tiene la secuencia de aminoácidos de la SEC ID NO: 3, que tiene un PEG de 5K conjugado de manera específica del sitio a K28 (por lo tanto, la amina de N-terminal y la amina de cadena lateral de K18 se protegieron químicamente durante la síntesis) . Tabla 1 De esta comparación, es claro que la actividad antiviral del péptido sintético se preserva mejor cuando un polímero del tamaño promedio de 2K (2,000 dalton) se conjuga con la amina de N-terminal versus a K18 (con al menos 5 veces menos actividad) o K28 (con al menos 10 veces menos actividad) . De manera similar, es claro que la actividad antiviral del péptido sintético se preserva mejor cuando un polímero 5K se conjuga con la amina de N-terminal versus a K18 (aproximadamente 5 veces menos actividad) o K28 (aproximadamente 7 veces menos actividad) . Además, se puede concluir de este ejemplo, que el método de la modificación química específica del sitio de acuerdo con la presente invención, se puede usar para acoplar de manera específica del sitio un polímero a un aminoácido seleccionado del péptido sintético para producir un conjugado substancialmente homogéneo de conjugado de péptido-polímero que tiene un nivel deseado de actividad biológica (por ejemplo, en este ejemplo, la actividad antiviral deseada se mide por tener un IC50 menor de 0.02 µg/ml) (por ejemplo, el "Conjugado A de la Tabla 1) en tanto que se evita producir un conjugado de péptido-polímero de varias especies que carezca del nivel deseado de actividad biológica usando la PEGilación estándar (por ejemplo, una mezcla del "Conjugado A" y el "Conjugado B" y el "Conjugado C" de la Tabla 1) . EJEMPLO 5 En este ejemplo, se ilustran las modalidades adicionales del método para la modificación química específica del sitio de un péptido derivado de gp41 del VIH, en donde se incorporan en un péptido sintético durante la síntesis: uno o más aminoácidos que tengan su amina de cadena lateral bloqueada por un agente de protección química ante la reactividad subsecuente con una funcionalidad reactiva con amina; y uno o más aminoácidos que tienen una amina (por ejemplo, seleccionada del grupo que consiste de alfa amina de N-terminal, una o más épsilon aminas, y una combinación de las mismas) desprotegidas y libres para la reactividad química con una funcionalidad reactiva con amina. El derivado de gp41 del VIH aislado resultante se conjuga después con un polímero para producir un conjugado substancialmente homogéneo compuesto de polímero y el péptido derivado de gp41 del VIH. Con base en las enseñanzas en el Ejemplo 1 sobre una técnica de condensación de fragmentos para sintetizar un péptido derivado de gp41 del VIH, es aparente para una persona experimentada en la. técnica que esta técnica de ensamble de fragmentos se puede usar, y ha sido usada para algunos columna de perforación de los péptidos sintéticos que tiene una secuencia mostrada en la SEC ID NOs: 3-175, en los métodos de acuerdo con la presente invención. Hablando en general, típicamente se sintetizan 3 fragmentos (véase, por ejemplo, la FIG. 3) : un "fragmento de N-terminal" (compuesto usualmente de entre 10 y 20 de los aminoácidos de la amino terminal del péptido sintético) , un fragmento de C-terminal" (compuesto usualmente de entre 10 y 20 de los aminoácidos de la carboxi terminal del péptido sintético) , y un "fragmento medio" (compuesto usualmente de entre 10 y 20 de los aminoácidos encontrados entre el fragmento de N-terminal y el fragmento de c-terminal, en el péptido sintético) , los cuales se ensamblan después para producir el péptido sintético completo. Sin embargo, dependiendo de la longitud, la secuencia de aminoácidos, el número y la ubicación de los aminoácidos con aminas de cadena lateral en la secuencia de aminoácidos de un péptido sintético particular, en cualquier parte de 2 a 4 fragmentos se han sintetizado, y después se ensamblan para completar la síntesis de ese péptido sintético particular. Por ejemplo, T1249 (SEC ID NO: 96) se uso en el método de modificación química específica del sitio de acuerdo a la presente invención. En este ejemplo, el péptido sintético se sintetizo por la técnica de condensación de fragmentos usando 3 fragmentos : un fragmento de N-terminal que comprende los aminoácidos 1-12 y que contiene una lisina en la posición de aminoácido 7 ("K7") , y un aminoácido de N-terminal acetilado; un fragmento medio que comprende los aminoácidos 13 a 26 y que contiene una lisina en la posición del aminoácido 21 ("K21") ; y un fragmento de c-terminal que comprende los aminoácidos 27 a 36 y que contiene una lisina en la posición del aminoácido 28 ("K28") y una lisina en la posición del aminoácido 31 ("K31") (la numeración de las posiciones de aminoácidos que corresponde a las posiciones respectivas en la SEC ID NO: 96, es decir, en el péptido sintético ensamblado) . Un número de péptidos derivados de gp41 del VIH aislados de acuerdo a la presente invención se produjeron por separado: (a) un péptido sintético que tiene la secuencia de aminoácidos de la SEC ID NO: 96, con un agente de protección química en K7, K21, K28, y K31 (dejando sólo la amina de N-terminal libre para la conjugación subsecuente al polímero) ; (b) un péptido sintético que tiene la secuencia de aminoácidos de la SEC ID NO: 96 con un agente de protección química en la amina de N-terminal, K21, K26, y K31 (dejando sólo la amina de cadena lateral de K7 libre para la conjugación subsecuente al polímero) , (c) un péptido sintético que tiene la secuencia de aminoácidos de la SEC ID NO: 96 con un agente de protección química en la amina de N-terminal, K7, K28, y K31 (dejando sólo la amina de cadena lateral de K21 libre para la conjugación subsecuente al polímero) ; (d) un péptido sintético que tiene la secuencia de aminoácidos de la sec 96 con un agente de protección química en la amina de N-terminal, K7, K21, y K31 (dejando sólo la amina de cadena lateral de K28 libre para la conjugación subsecuente al polímero; y (e) un péptido sintético que tiene la secuencia de aminoácidos de la SEC ID NO: 96 con un agente de protección química en la amina de N-terminal, K7, K21, y K28 (dejando sólo la amina de cadena lateral de K31 libre para la conjugación subsecuente al polímero) . Varios conjugados substancialmente homogéneos se produjeron por separado a partir de estos péptidos derivados gp41 de VIH aislados que tienen una secuencia de aminoácidos de la SEC ID NO: 96 y el método para la modificación química específica descrito aquí, usando diferentes tamaños del PEG, que varían desde un promedio de 2K daltons ("2K") a un promedio de 20K daltons ("20K") . La Tabla 2 muestra la actividad antiviral de algunos de estos conjugados substancialmente homogéneos identificados como sigue. "Conjugado A" es un péptido sintético que tiene la secuencia de aminoácidos de la SEC ID NO: 96 que tiene un PEG de 2K conjugado de manera específica del sitio a la amina de N-terminal (por lo tanto, las aminas de cadena lateral de K7, K21, K28, y K31 se protegieron químicamente durante la síntesis) . "Conjugado B" es un péptido sintético que tiene la secuencia de aminoácidos de la SEC ID NO: 96, que tiene un PEG de 2K conjugado de manera específica del sitio a K7 (por lo tanto, la amina de N-terminal, y las aminas de cadena lateral de K21, K28 y K31 se protegieron químicamente durante la síntesis) . "Conjugado C" es un péptido sintético que tiene la secuencia de aminoácidos de la SEC ID NO: 96 que tiene un PEG de 2K conjugado de manera específica del sitio a K21 (por lo tanto, la amina de N-terminal, y las aminas de cadena lateral de K7, K28, y K31 se protegieron químicamente durante la síntesis) . "Conjugado D" es un péptido sintético que tiene la secuencia de aminoácidos de la SEC ID NO: 96, que tiene un PEG de 2K conjugado de manera específica del sitio a K28 (por lo tanto la amina de N-terminal, y las aminas de cadena lateral de K7, K21, y K31 se protegieron químicamente durante la síntesis) . "Conjugado E" es un péptidos sintético que tiene la secuencia de aminoácidos de la SEC ID NO: 96, que tiene un PEG de 2K conjugado de manera específica del sitio a K31 (por lo tanto, la amina de N-terminal, y las aminas de cadena lateral de K7, K21, y K28) se protegieron químicamente durante la síntesis) . "Conjugado F" es un péptido sintético que tiene la secuencia de aminoácidos de la SEC ID NO: 96 que tiene un PEG de 5K conjugado de manera específica del sitio a la amina de n-termina. "Conjugado G" es un péptido sintético que tiene la secuencia de aminoácidos de la SEC ID NO: 96, que tiene un PEG de 5K conjugado de manera específica del sitio a K7.

"Conjugado H" es un péptido sintético que tiene la secuencia de aminoácidos de la SEC ID NO: 96, que tiene un PEG de 5K conjugado de manera específica del sitio a K21. "Conjugado I" es un péptido sintético que tiene la secuencia de aminoácidos de la SEC ID NO: 96 que tiene un PEG de 5K conjugado de manera específica del sitio a K28. "Conjugado J" es un péptido sintético que tiene la secuencia de aminoácidos de la SEC ID NO: 96 que tiene un PEG de 5K conjugado de manera específica del sitio a K31. Tabla 2 De este ejemplo y observando los resultados usando un PEG del tamaño promedio de 2K (2000 daltons) , se puede concluir que el método de modificación química específica del sitio de acuerdo con la presente invención se puede usar para acoplar de manera específica del sitio un polímero a un aminoácido seleccionado del péptido sintético para producir un conjugado substancialmente homogéneo que tiene un nivel deseado de actividad biológica (por ejemplo, en este ejemplo, la actividad antiviral deseada se mide teniendo un IC50 menor de 0.01 µg/ml) (por ejemplo, el "Conjugado A", el "Conjugado B", y el "Conjugado D" de la Tabla 2) mientras que se evita producir un conjugado de péptido sintético-polímero de varias especies que carezcan de tal nivel deseado de actividad biológica, usando la PEGilación estándar (por ejemplo, una mezcla de los Conjugados A-E de la Tabla 2) . EJEMPLO 6 En otro ejemplo, un péptido sintético que tiene una secuencia de aminoácidos de la SEC ID NO: 174 se usó en el método de modificación química específica del sitio de acuerdo con la presente invención. En este ejemplo, el péptido sintético que contiene una lisina en la posición del aminoácido 30 ("K30") y una lisina en la posición del aminoácido 39 ("K39", el aminoácido de C-terminal; la numeración de las posiciones de los aminoácidos que corresponde a la posición en la SEC ID NO:174), se sintetizó por síntesis lineal con un agente de protección química en la amina de N-terminal del aminoácido de N-terminal, y en la amina de cadena lateral de K30 (dejando sólo la amina de cadena lateral de K39 libre para la conjugación subsecuente al polímero) . Se produjeron por separado los conjugados substancialmente homogéneos a partir de este péptido derivado de gp41 de VIH aislado, usando un polímero que tiene un tamaño promedio de 2K, un polímero que tiene un tamaño promedio de 5K, y un polímero que tiene un tamaño promedio de 20K. Por ejemplo, el péptido sintético sólo (no conjugado a un polímero) tiene un nivel deseado de actividad biológica (por ejemplo, una actividad antiviral se mide teniendo un IC50 menor de o igual a 0.02 µg/ml), en tanto que un conjugado substancialmente homogéneo que tiene un polímero con un tamaño promedio de 2K tuvo actividad biológica aproximadamente igual a 0.02 µg/ml. Los conjugados substancialmente homogéneos que tienen un polímero de tamaño promedio ya sea de 5K o de 20K tuvo una actividad biológica mucho mayor de 0.1 µg/ml (es decir, fuera del rango de la actividad biológica para este ejemplo) . EJEMPLO 7 La presente invención proporciona conjugados substancialmente homogéneos compuestos de un péptido derivado de gp41 del VIH al cual se acopla de manera específica del sitio un polímero ("conjugados péptido sintético-polímero") . La actividad antiviral de tales conjugados péptido sintético-polímero se puede utilizar en un método para inhibir la transmisión de VIH a células objetivo, que comprende agregar al virus y a las células una cantidad de conjugado de péptido sintético-polímero de acuerdo con la invención, efectiva para inhibir la infección de las células por el VIH, y más preferiblemente, para inhibir la fusión mediada por VIH entre los virus y las células objetivos. Este método se puede usar para tratar a los individuos infectados con VIH (terapéuticamente) o para tratar a individuos recién expuestos a, o con alto riesgo de exposición (por ejemplo, a través del uso de fármacos o comportamiento sexual de alto riesgo) al VIH (profilácticamente) . Así, por lo tanto, en el caso de un individuo infectado con VIH-1, una cantidad efectiva de conjugado de péptido-sintético-polímero sería una dosis suficiente (por si sola y/o en conjunción con un régimen de dosis) para reducir la carga viral de VIH en el individuo a ser tratado. Como se conoce por aquellas personas experimentadas en la técnica, hay varios métodos estándar para medir la carga viral del VIH, los cuales incluyen, pero no se limitan a, cultivos cuantitativos de células mononucleares de sangre periférica y por mediciones de ARN de VIH del plasma. Los conjugados de péptido sintético-polímero de la invención se pueden administrar en una administración individual, intermitentemente, periódicamente, o continuamente, como puede ser determinado por un medico, tales como monitoreando la carga viral . Dependiendo de la formulación que contiene el conjugado de péptido sintético-polímero, y factores tales como las composiciones del polímero y del péptido sintético usado para formar el conjugado de péptido sintético-polímero y si comprenden un portador aceptable farmacéuticamente o no, y la naturaleza del portador aceptable farmacéuticamente, el conjugado de péptido sintético-polímero de acuerdo con la presente invención se puede administrar con una periodicidad que varía de días a semanas o posiblemente más tiempo. Además, un conjugado de péptido sintético-polímero de acuerdo con la presente invención se puede usar, en la terapia antiviral, cuando se usa en combinación o en un régimen terapéutico (por ejemplo, cuando se usa simultáneamente, o en un periodo con un fármaco y cambio de periodo con otro) con otros fármacos antivirales usados para el tratamiento del VIH (por ejemplo, incluyendo, pero no limitados a, otros inhibidores de la entrada del VIH (por ejemplo, inhibidores de CCR5, retociclina, y los similares), inhibidores de VIH integrasa, inhibidores de la transcriptasa inversa (por ejemplo, nucleósidos o no nucleósidos) , inhibidores de proteasa, inhibidores de la transcripción específica viral, inhibidores del procesamiento viral, inhibidores de la mutación del VIH, inhibidores de la enzima fosforilante de uridina, vacunas de VIH, y los similares, como se conoce bien en la técnica.

Por ejemplo, en una modalidad preferida, uno o más agentes antivirales se pueden combinar en la terapia con el conjugado de péptido sintético-polímero de acuerdo con la presente invención, aumentando así la eficacia de la terapia, y reduciendo la habilidad del virus para volverse resistente a los fármacos antivirales. Tales combinaciones se pueden preparar a partir de las cantidades efectivas de los agentes antivirales (útiles en el tratamiento de infecciones de VIH) aprobados actualmente o aprobados en el futuro, los cuales incluyen, pero no se limitan a, abacavir, AZT, delaviridina, ddC, ddl, afaviranz, FTC, FTC (+) y (-) , Raverset, GS 840, HBY097, 3TC, nevirapina, d4T FLT, emtricitabina, amprenivir, CGP-73547, CGP-61755, DMP-450, indinavir, nelfinavir, PNU-140690, ritonavir, saquinavir, telinavir, tenofovir, adefovir, atazanavir, iopinavir, VX 478, PRO-542, y betulin y derivados de dihidrobetulin (por ejemplo, PA-457) . Las dosificaciones efectivas de estos agentes antivirales ilustrativos, las cuales se pueden usar en combinaciones con el conjugado de péptido-sintético polímero de acuerdo con la presente invención, se conocen en la técnica. Tales combinaciones pueden incluir un número de agentes antivirales que se pueden administrar por una o más rutas, secuencialmente o simultáneamente, dependiendo de la ruta de administración y el efecto farmacológico deseado, como es aparente para una persona experimentada en la técnica. Las dosificaciones efectivas de un conjugado de péptido sintético-polímero de la invención para ser administradas, se pueden determinar a través de los procedimientos bien conocidos por aquellas personas experimentadas en la técnica; por ejemplo, determinando la potencia, la vida media biológica, la biodisponibilidad, y la toxicidad. En una modalidad preferida, un rango de dosificación efectiva del conjugado de péptido sintético-polímero de determina por una persona experimentada en la técnica usando los datos de los estudios in vitro e in vivo de rutina bien conocidos por aquellas personas experimentadas en la técnica, por ejemplo, los ensayos de efectividad in vitro de la actividad antiviral, tal como se describen aquí, permiten a una persona experimentada en la técnica para determinar la concentración inhibitoria promedio (IC) del conjugado de péptido sintético-polímero, necesaria para bloquear alguna cantidad de efectividad viral (por ejemplo, 50% de inhibición, IC5o; o 90% de inhibición, IC90) . Las dosis apropiadas se pueden seleccionar entonces por una persona experimentada en la técnica usando los datos farmacocinéticos de uno o más modelos animales estándar, de tal manera que se obtiene una concentración plasmática mínima (C(min)) del conjugado de péptido sintético-polímero, la cual es igual a o excede un valor de IC predeterminado. En tanto que la dosificación varía típicamente dependiendo de la ruta de administración elegida y la formulación de la dosificación, un rango de dosificación ejemplificante del conjugado de péptido sintético-polímero de acuerdo con la presente invención puede variar de no menos de 0.1 µg/kg de peso corporal y no más de 10 mg/kg de peso corporal; preferiblemente un rango de dosificación de desde aproximadamente 0.1-100 µg/mg de peso corporal, y más preferiblemente, una dosificación de entre aproximadamente 10 mg a aproximadamente 250 mg de conjugado de péptido sintético-polímero. Un conjugado de péptido sintético-polímero de la presente invención se puede administrar a un individuo por cualquier medio que permita al agente activo alcanzar las células objetivo (las células que pueden ser infectadas por el VIH) . Por lo tanto, los conjugados de péptido sintético-polímero de este invención se pueden administrar por cualquier técnica adecuada, incluyendo las rutas de administración oral, parenteral (por ejemplo, inyección o infusión intramuscular, intraperitoneal, intravenosa, o subcutánea, intradérmica o implantes) , nasal, pulmonar, vaginal, rectal, sublingual o tópica, y se pueden formular en formas de dosificación apropiadas para cada ruta de administración. La ruta de administración específica dependerá, por ejemplo, de la historia medica del individuo, incluyendo cualquier efecto secundario percibido o anticipado de tal administración, y la formulación del conjugado a ser administrado (por ejemplo, la naturaleza del polímero y el péptido sintético de los cuales se componen el conjugado de péptido sintético polímero) . Más preferiblemente, la administración es por inyección (usando, por ejemplo, medios intravenosos o subcutáneos) , pero podría ser por infusión continua (usando, por ejemplo, dispositivos de liberación lenta o minibombas tales como bombas osmóticas, y los similares) . Un conjugado de péptido sintético-polímero de acuerdo co la presente invención puede comprender además un portador aceptable farmacéuticamente, y puede depender además de la formulación deseada, el sitio de administración, el método de administración, el itinerario de administración, y otros factores conocidos por los médicos. La descripción anterior de las modalidades especificas de la presente invención se han descrito con detalle para propósitos de ilustración, en vista de las descripciones e ilustraciones, otras personas experimentadas en la técnica pueden modificar y adaptar fácilmente la presente invención para varias aplicaciones aplicando el conocimiento actual, sin apartarse del concepto básico y por lo tanto, tales modificaciones y/o adaptaciones se consideran estar dentro del significado y el ámbito de las reivindicaciones anexas.

Claims

REIVINDICACIONES 1. Un método para la modificación química específica del sitio de un péptido derivado de pg41 del VIH durante la síntesis del péptido, en donde el péptido sintetizado tiene uno o más aminoácidos que tienen una amina de cadena lateral, el método caracterizado porque comprende incorporar en el péptido, o un fragmento del mismo, durante la síntesis: (a) al menos un aminoácido seleccionado por tener su amina de cadena lateral unida químicamente por reacción con un agente de protección químico el cual protege la amina de cadena lateral ante la reactividad química subsecuente con una funcionalidad reactiva con amina; y (b) al menos un aminoácido que tiene una amina desprotegida y libre para reaccionar con una funcionalidad reactiva con amina, en donde la amina libre se selecciona del grupo que consiste de una amina de N-terminal, una amina de cadena lateral, y una combinación de las mismas.
2. El método de acuerdo con la reivindicación 1, caracterizado porque el péptido derivado de gp41 del VIH se sintetiza acoplando covalentemente dos o más fragmentos para producir el péptido sintetizado; y en donde se encuentra incorporado en al menos uno de los fragmentos, un aminoácido que tiene una amina de cadena lateral enlazada químicamente por reacción con un agente de protección químico.
3. El método de acuerdo con la reivindicación 1, caracterizado porque, el péptido derivado de gp41 del VIH es un péptido que tiene una secuencia de aminoácidos de alguna de las SEC ID NOs: 1-175, o una secuencia de aminoácidos que tiene al menos 95% de identidad con una o más de las SEC ID NOs: 1-175.
4. El método de acuerdo con la reivindicación 1, caracterizado porque, el agente de protección química se selecciona del grupo que consiste de 1- (4, 4-dimetil-2, 6-dioxociclohexa-1-iliden) etilo, 1- (4, 4-dimetil-2, 6-dioxociclohexa-1-iliden) -3-metilbutilo, aliloxicarbonilo, benciloxicarbonilo y 2-clorobenciloxicarbonilo.
5. El método de acuerdo con alguna de las reivindicaciones 1, 2, 3, o 4, caracterizado porque, un aminoácido que tiene su amina de cadena lateral unida químicamente por reacción con un agente de protección química es lisina.
6. El método de acuerdo con alguna de las reivindicaciones 1, 2, 3, o 4, caracterizado porque, una amina de cadena lateral que está unida químicamente por reacción con un agente de protección química es una épsilon amina.
7. Un péptido derivado de gp41 del VIH aislado que tiene uno o más aminoácidos que contienen una amina de cadena lateral, caracterizado porque, al menos un aminoácido tiene su amina de cadena lateral unida químicamente por reacción con un agente de protección química el cual protege la amina de cadena lateral ante la reactividad química subsecuente con una funcionalidad reactiva con amina; y al menos un aminoácido del péptido tiene una amina desprotegida y libre para reaccionar con una funcionalidad reactiva con amina, en donde la amina libre se selecciona del grupo que consiste de una amina de n-termina, una amina de cadena lateral, y una combinación de las mismas .
8. El péptido derivado de gp41 del VIH de acuerdo con la reivindicación 7, caracterizado porque, el péptido es un péptido que tiene una secuencia de aminoácidos de cualquiera de las SEC ID NOs: 1-175, o una secuencia de aminoácidos que tenga al menos 95% de identidad con una o más de las SEC ID NOs: 1-175.
9. El péptido derivado de gp41 del VIH de acuerdo con la reivindicación 7, caracterizado porque, el agente de protección química se selecciona del grupo que consiste de 1-(4, 4-dimetil-2, 6-dioxociclohexa-l-iliden) etilo, 1- (4, 4-dimetil-2, 6-dioxociclohexa-l-iliden) -3-metilbutilo, aliloxicarbonilo, benciloxicarbonilo y 2-clorobenciloxicarbonilo .
10. El péptido derivado de gp41 del VIH de acuerdo con alguna de las reivindicaciones 7, 8, o 9, caracterizado porque, el aminoácido que tiene su amina de cadena lateral unida químicamente por reacción con un agente de protección química es lisina.
11. El péptido derivado de gp41 del VIH de acuerdo con alguna de las reivindicaciones 7, 8, o 9, caracterizado porque, la amina de cadena lateral que está unida químicamente por reacción con un agente de protección química es una épsilon amina.
12. Un método para producir un conjugado substancialmente homogéneo compuesto por el péptido derivado de gp41 del VIH y el polímero, el método, caracterizado porque, comprende: (a) sintetizar un péptido derivado de gp41 del VIH que tiene uno o mas aminoácidos que contienen una amina de cadena lateral, de tal manera que al menos un aminoácido se selecciona para tener su amina de cadena lateral unida químicamente por reacción con un agente de protección química el cual protege la amina de cadena lateral ante la reactividad química subsecuente con una funcionalidad reactiva con amina, y al menos un aminoácido del péptido tiene una amina desprotegida y libre para reaccionar con una funcionalidad reactiva con amina, en donde la amina libre se selecciona del grupo que consiste de una amina de N-terminal, una amina de cadena lateral, y una combinación de las mismas; y (b) acoplar covalentemente un polímero al péptido derivado de gp41 del VIH haciendo reaccionar químicamente una funcionalidad reactiva con amina del polímero con un grupo amina libre del péptido derivado de gp41 del VIH, en donde el polímero de acopla covalentemente sólo a uno o más aminoácidos que tienen una amina libre, y no a, al menos un aminoácido protegido por el agente de protección química, para producir el conjugado substancialmente homogéneo.
13. El método de acuerdo con la reivindicación 12, caracterizado porque, el conjugado comprende un péptido derivado de gp41 del VIH acoplado covalentemente a más de una molécula de polímero, en donde cada molécula de polímero se copla a un aminoácido del péptido derivado de gp41 del VIH.
14. El método de acuerdo con la reivindicación 12, caracterizado porque, el método comprende además remover el agente de protección química del conjugado substancialmente homogéneo.
15. El método de acuerdo con la reivindicación 12, caracterizado porque, el péptido derivado de gp41 del VIH se sintetiza acoplando covalentemente dos o más fragmentos para producir el péptido sintetizado; y en donde en al menos uno de los fragmentos se incorpora un aminoácido que tiene una amina de cadena lateral unida químicamente por reacción con un agente de protección químico.
16. El método de acuerdo con la reivindicación 12, caracterizado porque, el péptido derivado de gp41 del VIH es un péptido que tiene una secuencia de aminoácidos de alguna de las SEC ID NOs: 1-175, o una secuencia de aminoácidos que tiene al menos 95% de identidad con una o más de las SEC ID NOs: 1- 175.
17. El método de acuerdo con la reivindicación 12, caracterizado porque, el agente de protección química se selecciona del grupo que consiste de 1- (4, 4-dimetil-2, 6-dioxociclohexa-1-iliden) etilo, 1- (4, 4-dimetil-2, 6-dioxociclohexa-1-iliden) -3-metilbutilo, aliloxicarbonilo, benciloxicarbonilo y 2-clorobenciloxicarbonilo.
18. El método de acuerdo con la reivindicación 12, caracterizado porque, el polímero comprende polietilenglicol.
19. El método de acuerdo con alguna de las reivindicaciones 12, 13, 14, 15, 16, 17 o 18, caracterizado porque, un aminoácido que tiene su amina de cadena lateral unida químicamente por reacción con un agente de protección química es lisina.
20. El método de acuerdo con alguna de las reivindicaciones 12, 13, 14, 15, 16, 17 o 18, caracterizado porque, la amina de cadena lateral que ha sido unida químicamente por reacción con un agente de protección química es una épsilon amina.
21. Un conjugado substancialmente homogéneo de péptido derivado de gp41 del VIH y polímero, producido de acuerdo con el método de cualquiera de las reivindicaciones 12, 13, 14, 15, 16, 17 o 18.
22. El conjugado substancialmente homogéneo compuesto de péptido derivado de gp41 del VIH y polímero de acuerdo con la reivindicación 21, caracterizado porque, comprende además un portador aceptable farmacéuticamente. -
23. El uso de un conjugado substancialmente homogéneo compuesto del péptido derivado de gp41 del VIH y el polímero de acuerdo con la reivindicación 21 como una sustancia terapéutica activa para la preparación de un medicamento en la terapia de infecciones de VIH.
24. El uso de un conjugado substancialmente homogéneo compuesto del péptido derivado de gp41 del VIH y el polímero de acuerdo con la reivindicación 22 como una sustancia terapéutica activa para la preparación de un medicamento en la terapia de infecciones del VIH.
25. El uso de un conjugado substancialmente homogéneo compuesto del péptido derivado de gp41 del VIH y el polímero de acuerdo con cualquiera de las reivindicaciones 23 o 24, caracterizado porque, el conjugado substancialmente homogéneo se usa como parte de un régimen terapéutico que contiene uno o más agentes antivirales adicionales para la preparación de un medicamento para la terapia de infecciones de VIH.
26. El uso de un conjugado substancialmente homogéneo compuesto del péptido derivado de gp41 del VIH y el polímero de acuerdo con la reivindicación 21, para la preparación de un medicamento para una aplicación terapéutica que comprende el tratamiento del VIH.
27. Una composición farmacéutica, caracterizada porque, comprende un conjugado substancialmente homogéneo compuesto del péptido derivado de gp41 del VIH y el polímero de acuerdo con la reivindicación 21.
28. Una composición farmacéutica, caracterizada porque, se compone de un conjugado substancialmente homogéneo de péptido derivado de gp41 del VIH y el polímero de acuerdo con la reivindicación 22.
29. El uso de una cantidad efectiva del conjugado substancialmente homogéneo compuesto del péptido derivado de gp41 del VIH y el polímero de acuerdo con la reivindicación 21, para la preparación de un medicamento para la inhibición de la transmisión del VIH a las células.
30. El uso de una cantidad efectiva de una composición farmacéutica de acuerdo con la reivindicación 27, para la preparación de un medicamento para la inhibición de la transmisión del VIH a las células.
31. El uso de acuerdo con la reivindicación 29, caracterizado porque, el conjugado substancialmente homogéneo se agrega como un componente de un régimen terapéutico.
32. El uso de acuerdo con la reivindicación 30, caracterizado porque, la composición farmacéutica se agrega como un componente de un régimen terapéutico.
33. El uso del conjugado substancialmente homogéneo compuesto de péptido derivado de gp41 del VIH y polímero de acuerdo con la reivindicación 21, para la preparación de un medicamento para inhibir la fusión del VIH.
34. El uso de una composición farmacéutica de acuerdo con la reivindicación 27, para la preparación de un medicamento para inhibir la fusión de VIH.