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MXPA06008780A - Manejo de alteraciones oftalmologicas, incluida la degeneracion macular. - Google Patents

Manejo de alteraciones oftalmologicas, incluida la degeneracion macular.

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MXPA06008780A
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hydrogen
compound
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aryl
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MXPA06008780A
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Robert R Rando
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Harvard College
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Abstract

Se puede utilizar una sustancia activa en la preparacion de un medicamento para el tratamiento o prevencion de una alteracion oftalmologica, en donde la sustancia activa inhibe, antagoniza o corta el circuito de un ciclo visual en un paso del ciclo visual que se presenta fuera de un disco de una celda fotorreceptora en forma de baston.

Description

MANEJO DE ALTERACIONES OFTALMOLÓGICAS, INCLUIDA LA DEGENERACIÓN MACULAR REFERENCIA A LA SOLICITUD RELACIONADA Esta solicitud reclama el beneficio ante la solicitud de patente provisional US serie No. 60/545,456, presentada el 17 de febrero de 2004; la solicitud de patente provisional US serie No. 60/567,604 presentada el 3 de mayo de 2004; y solicitud de patente provisional US serie No. 60/578,324 presentada el 7 de junio de 2004, todas las cuales se incorporan en la presente para referencia en su totalidad.
ENUNCIADO RELACIONADO CON LA INVESTIGACIÓN O DESARROLLO PATROCINADA POR EL GOBIERNO FEDERAL El apoyo para la investigación que dio origen al tema de esta solicitud fue proporcionado en parte por los Institutos Nacionales de Salud, subsidio No. R01-EY-04096. Por consiguiente, el gobierno de Estados Unidos tiene cierto derecho con respecto al tema de esta solicitud.
INTRODUCCIÓN Las enfermedades de la vista relacionadas con la edad son un problema de salud creciente en las sociedades industrializadas. La degeneración macular relacionada con la edad (AMD) afecta a millones de personas en todo el mundo y es la causa principal de pérdida de la visión y ceguera en poblaciones en edades avanzadas. En esta enfermedad se degrada con el tiempo la visión diurna (la visión dominada por los conos) porque los foto-receptores de los conos, que se concentran en la región de la fobia de la retina, mueren. La incidencia de esta enfermedad aumenta desde menos de 10% de la población de 50 años de edad a más de 30% a los 75 y sigue en aumento con el avance de la edad. El inicio de la enfermedad ha sido correlacionado con la acumulación de sustancias bioquímicas complejas y tóxicas en y alrededor del epitelio pigmentario de la retina (RPE) y lipofuscina en el RPE. La acumulación de estas mezclas retinotóxicas es uno de los factores de riesgo conocidos, más importantes, en la etiología de AMD.
El RPE forma parte de la barrera hematoretinal y también da soporte a las funciones de las células foto-receptoras, incluidos los bastones y colonos. Entre otras actividades, el RPE habitualmente fagocita los segmentos externos agotados de las células de los bastones. En por lo menos algunas formas de la generación macular, la acumulación de lipofuscina en el RPE se debe en parte a esta fagocitosis. Los compuestos retinotóxicos se forman en los discos de los segmentos externos foto-receptores de los bastones. En consecuencia, los compuestos retinotóxicos en el disco se ponen en contacto con el RPE, donde perjudican más la fagocitosis de los segmentos externos y provocan apoptosis del RPE.
Las células foto-receptoras, incluidas las células de los conos esenciales para la visión diurna, entonces mueren, despoj adas del soporte del RPE .
Uno de los compuestos retinotóxicos que se forman en los discos de los segmentos externos de los conos es N-retiniliden-N-retiniletanolamina (A2E) , que es un componente importante de las lipofuscinas retinotóxicas. La A2E normalmente se forma en los discos pero en cantidades tan pequeñas que no dañan la función del RPE con la fagocitosis. Sin embargo, en algunos estados patológicos, se puede acumular tanta A2E en el disco que el RPE se "envenena" cuando se fagocita el segmento externo .
La A2E se produce a partir de todo- trans-retinal, uno de los intermediarios del ciclo visual de los bastoncitos. Durante el ciclo visual normal (como se resumen en la Figura 1) , el todo- trans-tetinal se produce dentro de los discos del segmento externo de los bastones. El todo-trans-retinal puede reaccionar con fosfatidiletanolamina (PE) , un componente de la membrana de los discos, para formar N-retiniliden-PE . La proteína Ri (RmP) , un transportador del cásete de unión la ATP, ubicada en las membranas de los discos del segmento externo de los bastoncitos, entonces transporta el todo-trans-retinal y N-retiniliden-PE hacia afuera del disco y hacia el citoplasma del segmento externo de los bastoncitos. El entorno entonces favorece la hidrólisis del N-retiniliden-PE. El todo-trans-retinal se reduce a todo-trans-retinol en el citoplasma de los bastoncitos. Entonces el todo-trans-retinol atraviesa la membrana plasmática del segmento externo de los bastoncitos hacia el espacio extracelular y es captado por células del epitelio pigmentario retina (RPE) . El todo-trans-retinol se convierte por una serie de reacciones en 11-cis-retinal, el cual regresa al foto-receptor y continúa en el ciclo visual.
No obstante, defectos en la RmP pueden trastornar este proceso impidiendo la separación del todo-trans-retinal del disco. En una forma recesiva de la degeneración macular denominada enfermedad de Stargard (tasa de incidencia 1-10,000 que muchas veces afecta a niños; 25,00 [sic] individuos afectados en EUA), el gen que codifica RmP, abr, esta mutado, y no funciona el transportador. Como resultado, el todo-trans-retinal y/o retiniliden-PE queda atrapado en el disco. Entonces el N-retiniliden-PE puede reaccionar con otra molécula de todo-trans-retinal para formar N-retiniliden-N-retiniletanolamina (A2E) ; esto se resumen en la figura 2. Como ya se menciono, algo de la A2E se forma incluso en condiciones normales; no obstante, su producción aumenta en gran medida cuando sus precursores se acumulan dentro de los discos debido al transportador defectuoso, y esto puede ocasionar la degeneración macular.
Otras formas de degeneración macular también pueden resultar de patologías que dan origen a la acumulación de lipofucsina. Una forma dominante de la enfermedad de Stargart, conocida como distrofia macular dominante, autonómica, ligada al cromosoma 6 (ADMD, OMIM # 600110) , es causada por una mutación en el gen que codifica la elongación de los ácidos grasos de cadena muy larga-4, elolvl4.
Existen pocos, si es que existe alguno, tratamientos preventivos para AMD, y se dispone de intervenciones terapéuticas para solo algunas formas, menos comunes, de la enfermedad.
RESUMEN Esta descripción se refiere a las composiciones, sistemas y métodos para manejar la degeneración macular y, más específicamente, para prevenir la acumulación de compuestos retinotóxicos en y alrededor del epitelio pigmentario de la retina.
En una modalidad, la acumulación de A2E en los discos del segmento externo de los bastoncitos se previene o se reduce. Se ha encontrado que la producción de A2E en los discos se puede reducir administrando un fármaco que emite el ciclo visual. La limitación se puede obtener en diversas formas. En un enfoque, un principio activo puede cortar eficazmente el circuito de la porción del ciclo visual que genera el precursor de A2E, el todo-trans-retinal. En otro enfoque, un principio activo puede inhibir los pasos particulares en el ciclo visual necesarios para sintetizar todo-trans-retinal. En todavía otro enfoque, un principio activo puede prevenir la unión de los productos intermediarios (esteres retinílicos) a ciertas proteínas chaperonas en el epitelio pigmentario de la retina.
En una modalidad, un método de tratamiento o prevención de la degeneración macular en un individuo puede consistir en administrar a un individuo un principio activo que interrumpa el ciclo visual en un paso del ciclo visual que ocurra fuera de un disco de un bastoncito foto-receptor. En otra modalidad, un método de tratamiento o prevención de degeneración macular en una persona puede consistir en administrar a la persona un principio activo que inhiba y/o interfiera con por lo menos una de las siguientes: lecitin retinol acil transferasa, RPME65, 11-cis-retinol deshidrogenasa e isomerohidrolasa.
En todavía otra modalidad, un método para identificar un principio activo para la degeneración macular puede consistir en administrar un principio activo candidato a una persona que tenga, o este en riesgo de desarrollar, degeneración macular, y medir la acumulación de un compuesto retinotóxico en el epitelio pigmentario de la retina de la persona.
Una amplia variedad de principios activos están contemplados para su uso. En algunas modalidades, los inhibidores del ciclo visual pueden ser análogos del ácido retinóico. En otras modalidades, los principios activos que interrumpen el ciclo visual pueden ser las aminas aromáticas e hidracinas .
BREVE DESCRIPCIÓN DE LAS FIGURAS La Figura 1 representa un ciclo visual.
La Figura 2 representa la síntesis de A2E.
La Figura 3 representa una intervención para interrumpir el ciclo visual.
La Figura 4A-C representa datos relacionados con la unión del ácido todo-trans-retinóico a RPE65.
Las Figuras 5A-C representan datos relacionados con la unión del ácido 13-cis-retinóico a RPE 65.
Las Figuras 6A-C representan datos relacionados con la unión de N- (4-hidroxifenil) retinamida (4-HPR) a RPE 65.
La Figura 7 representa datos relacionados con la unión competitiva entre el ácido todo-trans-retinóico y palmitato de todo- trans-retinilo a RPE65.
La Figura 8 representa datos relacionados con el efecto del ácido todo-trans-retinóico (atRA) , el ácido 13-cis-retinóico (13cRA) y N- (4-hidroxifenil) -retinamida (4-HPR) sobre la biosíntesis de 11-cis-retinol.
Las Figuras 9A1-A2, Bl y B2 representan datos relacionados con la unión de todo-trans-retinol y palmitato de todo-trans-retinilo a sRPE65 purificado. La figura 9C representa datos relacionados con la unión de la vitamina A a SROE65. La Figura 9D enlista constantes de unión medidas para diversas parejas de unión.
Las Figuras 10A-C representan datos relacionados con la palmitoilación in vivo de mRPE65.
Las Figuras 11A-D representan datos relacionados con la interconversión de mRPE65 y sRPE65.
Las Figuras 12 -C representan datos relacionados con la palmitoilación de 11-cis-retinol .
Las Figuras 13A y B representan como los elementos reguladores descritos podrían dirigir el flujo de los retinoides en la visión.
Las Figuras 14A-18B representan datos relacionados con los efectos in vivo de los principios activos para el corto circuito.
Las Figuras 19-24 representan datos relacionados con los efectos in vivo de los inhibidores enzimáticos y/o antagonistas de RPE65.
La Figura 25 presenta datos relacionados con la formación in vitro de A2E en presencia de aminas aromáticas .
DESCRIPCIÓN DETALLADA 1. Generalidades La presente descripción proporciona las composiciones y los métodos para manejar degeneración macular previniendo o reduciendo la acumulación de A2E en los discos del segmento externo de los bastoncitos. La acumulación de A2E se puede prevenir o reducir disminuyendo la cantidad del compuesto todo-trans-retinal presente en los discos de los segmentos externos de los bastoncitos. En un enfoque, se puede administrar un principio activo que inhiba uno o más de los pasos enzimáticos del ciclo visual, de modo que se disminuya la producción de todo-trans-retinal. En otro enfoque, se puede administrar un principio activo que haga funcionar la isomerización de 11-cis-retinal a todo-trans-retinal en el RPE, disminuyendo con ello la cantidad de 11-cis-retinal que regresa a los discos del segmento externo para ser reisomerizados a todo-trans-retinal. 2. Definiciones Por conveniencia, antes de describir más las modalidades ejemplares, algunos términos empleados en la especificación, ejemplos y las reivindicaciones anexas se recopilan en esta sección. Estas definiciones deben leídas a luz del resto de la descripción y como lo entiende una persona experta en la técnica.
Los artículos "un" y "uno" se utilizan en la presente para referirse a uno o más de uno (es decir, por lo menos uno), del objeto gramatical del artículo. Por ejemplo, "un elemento" significa un elemento o más de un elemento .
El término "dispositivo de acceso" es un término utilizado en la materia e incluye cualquier dispositivo médico adaptado para obtener o mantener el acceso a un área anatómica. Estos dispositivos son comunes para los expertos en los campos médicos y quirúrgicos. Un dispositivo de acceso puede ser una aguja, catéter, cánula, trocar, tubo, derivación, dren o un endoscopio, como puede ser un otoscopio, nasofaringoscopio, broncoscopio o cualquier otro endoscopio adaptado para utilizarlo en el área contigua, o cualquier otro dispositivo médico adecuado para entrar o permanecer colocado dentro del área anatómica previamente elegida.
Los términos "compuesto biocompatible" y "biocompatibilidad" cuando se utilizan en relación con los compuestos son bien conocidos en la materia. Por ejemplo, los compuestos biocompatibles pueden ser los compuestos que por sí mismo no son tóxicos para el hospedero (animal o humano) ni se degradan (si se degrada el compuesto) a una velocidad que produzca subunidades monoméricas u oligoméricas u otros subproductos en concentraciones tóxicas para el hospedero. En algunas modalidades, la biodegradación generalmente involucra la degradación del compuesto en un organismo, por ejemplo en sus subunidades monoméricas, las cuales, por lo que se sabe, son efectivamente no tóxicas. No obstante, los productos oligoméricos intermediarios que resulten de tal degradación pueden tener diferentes propiedades toxicológicas; o la biodegradación puede incluir la oxidación u otras reacciones bioquímicas que generan moléculas diferentes de las subunidades monoméricas del compuesto. En consecuencia, en algunas modalidades, es posible que la toxicología de un compuesto biodegradable destinado para utilizarse in vivo, como un implante o inyección en paciente, se determine después de uno o más análisis de la toxicidad. No es necesario que composición particular tenga una pureza de 100% para ser considerada biocompatible; en realidad, solo es necesario que las composiciones particulares sean biocompatibles como ya se menciono. Por tanto, una composición específica puede contener compuestos que contengan 99%, 98%, 97%, 96%, 95%, 90%, 85%, 80%, 75% o incuso menos de compuestos bíocompatibles, por ejemplo, que incluya compuestos y otros materiales y excipientes descritos en la presente, y todavía sea biocompatible.
Para determinar si un compuesto u otro material es biocompatible, puede ser necesario realizar un análisis de toxicidad. Estos análisis son bien conocidos en la técnica. Un ejemplo de estos análisis puede hacerse con células vivas de carcinoma, como pueden ser las células de tumor GT3TKB, en la siguiente forma. La muestra se degrada en NaOH 1M a 37°C hasta que se observa completa degradación. La solución entonces se neutraliza con HCl 1M. Aproximadamente 200 µL de diversas concentraciones de los productos muestra degradados se colocan en placas de cultivo de tejido de 96 pozos y se siembran con células de carcinoma gástrico humano (GT3T B) con una densidad de 10 /pozo. Los productos muestra degradados se incuban con las células GT3TKB durante 48 horas. Los resultados del análisis se pueden graficar como por ciento de crecimiento relativo contra la concentración de la muestra degrada en el pozo de cultivo de tejido. Además, también es posible evaluar los compuestos y las formulaciones por las pruebas in vivo bien conocidas, como pueden ser implantes subcutáneos en ratas para confirmar que no causen niveles significativos de irritación o inflamación en los lugares de implante subcutáneo.
El término "biodegradable" es bien conocido en la materia, e incluye compuestos, composiciones y formulaciones, como las descritas en la presente, que estén destinadas a degradarse durante el uso. Los compuestos biodegradables normalmente son diferentes de los compuestos no biodegradables en que los primeros pueden degradarse durante el uso. En algunas modalidades, el uso consiste en el uso in vivo, como puede ser la terapéutica in vivo, y en otras modalidades tal uso consiste en el uso in vi tro . En general, la degradación que se le puede atribuir a la biodegradabilidad consiste en la degradación de un compuesto biodegradable en sus subunidades componentes, o digestión, por ejemplo por un proceso bioquímico, del compuesto en subunidades más pequeñas, en algunas modalidades, en general se pueden identificar dos tipos diferentes de biodegradación. Por ejemplo, un tipo de biodegradación puede consistir en la disociación o clivaje de enlaces (sean covalentes u otros) en el compuesto. En una biodegradación así normalmente se obtienen monómeros y oligómeros, e incluso más comúnmente, la biodegradación como esta ocurre por disociación de un enlace que conecta uno o más de los sustituyentes de un compuesto. Por el contrario, otro tipo de biodegradación puede consistir en la disociación de un enlace (sea covalente u otros) interno a la cadena lateral o que conecta una cadena lateral con el compuesto. Por ejemplo, un agente terapéutico u otra porción química unidad como una cadena lateral al compuesto puede ser liberada por biodegradación. En algunas modalidades, uno o el otro o ambos tipos de biodegradación generalmente pueden ocurrir durante el uso de un compuesto. Cuando se utiliza en la presente, el término "biodegradación", comprende ambos tipos generales de biodegradación.
La velocidad de degradación de un compuesto biodegradable muchas veces, depende, en parte, de diversos factores, como puede ser la identidad química del enlace responsable de cualquier degradación, el peso molecular, cristalinidad, bioestabilidad y el grado de reticulación de tal compuesto, las características físicas del implante, forma y tamaño y el modo y ubicación de la administración. Y el modo y ubicación de la administración. Por ejemplo, a mayor peso molecular mayor el grado de cristalinidad, y/o a mayor bioestabilidad, la biodegradación de cualquier compuesto biodegradable normalmente es más lenta. El término "biodegradable" se propone para cubrir materiales y procesos así denominados "bioerosionable".
En algunas modalidades, si el compuesto biodegradable también tiene un agente terapéutico u otro material asociado con este, la velocidad de biodegradación de este compuesto se puede caracterizar por una velocidad de liberación de estos materiales. En tales casos, la velocidad de biodegradación puede depender no solo de la identidad química y las características físicas del compuesto, sino también de la identidad de cualquier otro material incorporado en éste.
En ciertas modalidades, las formulaciones de compuestos se biodegradan en un periodo que es aceptable en la aplicación deseada. En algunas modalidades, como pueden ser las terapéuticas in vivo, tal degradación se presenta en un periodo normalmente menor que aproximadamente cinco años, un año, seis meses, tres meses, un mes, quince días, cinco días, tres días o incluso un día de exposición a una solución fisiológica con un pH entre 6 y 8 que tenga una temperatura entre 25 y 37°C. En otras modalidades, el compuesto se degrada en un tiempo entre aproximadamente una hora y siete semanas, dependiendo de la aplicación que se desea.
Los términos "contiene", "comprende", "incluye", "que incluye", "tiene" y "que tiene" se utilizan en el sentido inclusivo, abierto, entendiéndose que se pueden incluir otros elementos. Los términos "como puede ser", "por ejemplo", cuando se utilizan en la presente son no limitadores y son para propósitos ilustrativos solamente. "que incluye" y "que incluye pero no se limita a" se utilizan de manera indistinta.
El término "dispositivo" para "suministro de medicamentos" es un término reconocido por la materia y se refiere a cualquier dispositivo médico adecuado para la aplicación de un principio activo a un órgano o región anatómica diana. El término incluye aquellos dispositivos que transportan o realizan la instilación de las composiciones hacia el órgano o área anatómica diana, incluso si el propio dispositivo no esta formulado para contener la composición. Como un ejemplo, una aguja o u catéter a través del cual se inserta la composición en un área anatómica o en un vaso sanguíneo u otra estructura relacionada con el área anatómica se entiende que es un dispositivo para suministro de medicamentos. Como otro ejemplo, un stent, o una derivación o un catéter que tiene la composición incluida en su sustancia [sic] o recubierta en su superficie se entiende que es un dispositivo de suministro de medicamentos.
Cuando se utiliza con respecto a un agente terapéutico u otro material, el término "liberación sostenida" es reconocido en la materia. Por ejemplo, una composición específica que libere una sustancia con el tiempo puede presentar características de liberación sostenida, en contraste con una administración equipo bolo en la que toda la cantidad de sustancia se hace disponible en el medio biológico en un momento, en modalidades particulares, por el contacto con los fluidos corporales como la sangre, fluido tisular, linfa o similares, las matrices de compuestos (formuladas como se proporciona en la presente o de otro modo como es bien sabido por los expertos en la técnica) pueden sufrir degradación paulatina (por ejemplo por hidrólisis) con la liberación concurrente de cualquier material incorporado en esta, durante un tiempo prolongado o sostenido (si se compara con la liberación de un bolo) . Esta liberación puede dar como resultado el suministro prolongado de cantidades terapéuticas eficaces de cualquier agente terapéutico incorporado. La liberación prolongada puede variar en algunas modalidades como se describe con mayor detalle más adelante.
El término "agente de suministro" es un término reconocido en la materia, e incluye moléculas que facilitan el suministro intracelular de un agente terapéutico u otro material. Los ejemplos de agentes de suministro incluyen: esteróles (como el colesterol) y lípidos (como el lípido catiónico, virosoma o liposoma) .
El término "o" cuando se utiliza en la presente debe entenderse "y/o" a menos que el contexto indique claramente lo contrario.
Las frases "administración parenteral" y "administrado por vía parenteral" son términos bien conocidos e incluyen modos de administración diferentes a la administración entérica y tópica, como las inyecciones, e incluye, sin limitación, inyección e infusión intravenosa, intramuscular, intrapleural, intravascular, intrapericardial, intraarterial, intratecal, intracapsular, , intraorbital, intracardiaca, intradérmica, intraperitoneal, transtraqueal, subcutánea, subcuticular, intraarticular, subcapsular, subaracnoidea, intraespinal e intraesternal .
El término "tratamiento" es bien conocido en la técnica e incluye inhibir una enfermedad, alteración o estado en una persona que haya sido diagnosticada con la enfermedad, alteración o estado, por ejemplo impidiendo su avance; y aliviando la enfermedad, alteración o estado, por ejemplo, favoreciendo el retroceso de la enfermedad, alteración y/o estado. El tratamiento de la enfermedad o estado incluye la mejoría de por lo menos un síntoma de la enfermedad o estado específico, incluso si no esta afectada la fisiopatología subyacente.
El término "prevención" es bien conocido en la materia e incluye interrumpir una enfermedad, alteración o estado para que no se presente en una persona que sea predispuesta a la enfermedad, alteración y/o estado pero que no haya sido diagnosticado de tenerla. La prevención de un estado relacionado con la enfermedad consiste en impedir que ele estado se presente después de que se haya diagnosticado la enfermedad pero antes de que se haya diagnosticado el estado.
El término "fluido" es bien conocido en la técnica y se refiere a un estado no sólido de la materia en el que los átomos o moléculas están libres para moverse unas en relación con las otras, como en un gas o líquido. Si no se restriegue tras la aplicación, un material fluido puede fluir para tomar la forma del espacio disponible para este, cubriendo por ejemplo las superficies de un lugar de escisión o el espacio muerto que se deja bajo un colgajo. Un material fluido puede ser insertado o inyectado en una parte limitada de un espacio y luego puede fluir para entrar en una parte más grande del espacio o en su totalidad. Un material como este puede ser denominado "fluido". Este término es bien conocido en la técnica e incluye, por ejemplo, composiciones líquidas que se puedan rociar en un lugar; inyectadas con una jeringa manual adaptada con, por ejemplo, una aguja calibre 23; o puede ser suministrado por un catéter.
También incluidos en el término "fluido" están aquellos materiales altamente viscosos "tipo gel" a temperatura ambiente que pueden ser suministrados en el lugar deseado vertiéndolos, exprimiéndolos de un tubo o inyectándolos con algunos de los dispositivos para inyección disponibles en el comercio que proporcionen presiones de inyección suficientes para expulsar materiales altamente viscosos a través de un sistema de suministro como una aguja o catéter. Cuando el propio compuesto que se utiliza es fluido, una composición que lo contiene no necesita incluir un disolvente biocompatible que permita su dispersión dentro de una cavidad corporal. En cambio, el compuesto fluido puede ser suministrado en la cavidad corporal utilizando un sistema de suministro que dependa de la fluidez natural del material para su aplicación en las superficies de tejido deseadas. Por ejemplo, si fluye, una composición que contiene los compuestos se puede inyectar para formar, después de la inyección, una barrera biomecánica temporal para recubrir o encapsular los órganos o tejidos internos, o se puede utilizar para producir recubrimientos para dispositivos sólidos que se pueden implantar. En algunos casos, las composiciones específicas fluidas tienen la capacidad de tomar, con el tiempo, la forma del espacio que las contiene a la temperatura corporal .
En la presente se entiende que la viscosidad es conocida en la técnica como la fricción interna de un fluido o la resistencia a fluir que presenta un material fluido cuando se le somete a la deformación. El grado de viscosidad del compuesto se puede ajustar por el peso molecular del compuesto, y otros métodos para alterar las características físicas de un compuesto particular serán evidentes para los expertos en la materia mediante experimentación habitual . El peso molecular del compuesto utilizado puede variar extensamente, dependiendo de si se desea un estado sólido rígido (pesos moleculares superiores) , o si se desea un estado fluido (pesos moleculares menores) .
La frase "aceptado para uso farmacéutico" es bien conocido en la técnica. En algunas modalidades, el término consiste en las composiciones, compuestos y otros materiales y/o formas de dosificación o presentaciones que, sean del alcance del juicio médico, son convenientes para utilizarlos en contacto con los tejidos de seres humanos y animales sin toxicidad, irritación, respuesta alérgica, excesivas y otros problemas o complicaciones ponderando una relación beneficio/riesgo razonable.
La frase "portador aceptado para uso farmacéutico" es bien conocido en la técnica e incluye, por ejemplo, materiales, composiciones o vehículos, aceptados para uso farmacéutico, como carga líquida o sólida, diluyente, excipiente, disolvente o material encapsulante, involucrados para llevar o transportar cualquier composición desde un órgano, o una parte del cuerpo, a otro órgano o parte del cuerpo. Todo portador debe ser "aceptable" en el sentido de ser compatibles con los demás ingredientes de una composición específica y no lesionar al paciente. En algunas modalidades, el portador aceptado para uso farmacéutico es no pirogénico. Algunos ejemplos de materiales que pueden servir como portadores aceptados para uso farmacéutico son: (1) azúcares, como lactosa, glucosa y sacarosa; (2) almidones como almidón de maíz y almidón de papa; (3) celulosa y sus derivados, como carboximetil celulosa de sodio, etil celulosa y acetato de celulosa; (4) tragacanto en polvo; (5) malta; (6) gelatina; (7) talco; (8) excipientes como manteca de cacao y ceras de supositorios; (9) aceites como el aceite de cacahuate, aceite de semilla de algodón, aceite de girasol, aceite de sésamo, aceite de oliva, aceite de maíz y aceite de soya; (10) glicoles como propilenglicol; (11) polioles como glicerina, sorbitol, manitol y polietilenglicol; (12) esteres como oleato de etilo y laurato de etilo; (13) agar; (14) agentes amortiguadores como hidróxido de magnesio e hidróxido de aluminio; (15) ácido algínico; (16) agua libre de pirógenos; (17) salina isotónica; (18) solución de Ringer; (19) alcohol etílico; (20) soluciones amortiguadoras de fosfatos; y (21) otras sustancias compatibles, no tóxicas, que se emplean en las formulaciones farmacéuticas .
El término "sales aceptadas para uso farmacéutico" es reconocida en la técnica, e incluye las sales de adición acida de las composiciones, inorgánicas y orgánicas, relativamente no tóxicas, e incluye sin limitación, agentes terapéuticos, excipientes, otros materiales y similares. Los ejemplos de las sales aceptadas para uso farmacéutico incluyen las obtenidas de ácidos minerales como el ácido clorhídrico y ácido sulfúrico, y aquellas obtenidas de ácidos orgánicos como ácido etansulfónico, ácido bencensulfónico, ácido P-toluensulfónico y similares. Los ejemplos de las bases inorgánicas adecuadas para la formación de las sales incluyen los hidróxidos, carbonatos y bicarbonatos de amoniaco [sic], sodio, litio, potasio, calcio, magnesio, aluminio, zinc y similares. Las sales también pueden ser formadas con bases orgánicas convenientes como aquellas que son no tóxicas y bastante fuertes para formar estas sales. Como un ejemplo, la clase de bases orgánicas pueden incluir mono-, di- y trialquilaminas como metilamina, dimetilamina y trietilamina; mono-, di-, o trihidroxialquilaminas como mono-, di-, y trietanolamina; aminoácidos; como arginina y lisina; guanidina; N-metilglucosamina, N-metilglucamina, L-glutamina; N-metilpiperazina; morfolina; etilendiamina; N-bencilfenetilamina; (trihidroximetil) aminoetano; y similares. Ver, por ejemplo, J. Pharm. Sci., 66: 1-19 (1977) .
Un "paciente", "individuo" o "huésped" que va a ser tratado por el método puede significar un animal humano o no humano, como primates, mamíferos y vertebrados.
El término tratamiento "profiláctico o terapéutico" es bien reconocido en la técnica y consiste en la administración al hospedero de una o más de las composiciones presentes. Si se administra antes de la manifestación clínica del estado no deseado (por ejemplo enfermedad u otro estado no deseado del animal hospedero) entonces el tratamiento es profiláctico, es decir, protege al hospedero contra el desarrollo del estado no deseado, mientras que si se administra después de la manifestación del estado no deseado, el tratamiento es terapéutico (es decir, se pretende disminuir, mejorar o estabilizar el estado no deseado existente o los efectos colaterales de este) .
Los términos "agente terapéutico", "fármaco", "medicamento" y "sustancia bioactiva" son bien conocidos e incluyen moléculas y otros agentes que son sustancias con actividad biológica, fisiológica o farmacológica que actúan en forma local o sistémica en un paciente o individuo para tratar un estado o enfermedad, como la degeneración macular. Los términos incluyen sin limitación las sales aceptadas para uso farmacéutico de estos y los profármacos. Estos agentes pueden ser ácidos, básicos o sales; estos pueden ser moléculas neutras, moléculas polares o complejos moleculares con capacidad de unión al hidrógeno; estos pueden ser profármacos en forma de éteres, esteres, amidas y similares con actividad biológica cuando se administran a un paciente o individuo .
La frase "cantidad terapéutica eficaz" es un término bien reconocido. En algunas modalidades, el término se refiere a una cantidad de un agente terapéutico que, cuando se incorpora en un compuesto, producto el mismo efecto deseado en una relación beneficio/riesgo razonable que se puede aplicar a cualquier tratamiento médico. En ciertas modalidades, el término se refiere a aquella cantidad necesaria o suficiente para eliminar, reducir o mantener (por ejemplo prevenir la propagación de) un tumor u otro diana de un esquema terapéutico específico. La cantidad eficaz puede variar dependiendo de factores tales como la enfermedad o estado que se este tratando, las construcciones particulares elegidas que están siendo administradas, el tamaño del individuo o la gravedad de la enfermedad o estado. Un experto en la técnica puede determinar en forma empírica la cantidad eficaz de un compuesto específico sin necesitar experimentación indebida. En algunas modalidades, una cantidad terapéutica eficaz de un agente terapéutico para uso in vivo probablemente dependerá de algunos factores que incluyen la velocidad de liberación de un agente a partir de una matriz del compuesto, lo cual dependerá en parte de las características químicas y físicas del compuesto; la identidad del agente; el modo y método de administración; y cualquier otro material incorporado en la matriz del compuesto además del agente.
"Radiosensibilizador" se define como un agente terapéutico que, tras la administración en una cantidad terapéutica y eficaz, favorece el tratamiento de una o más enfermedades o estados que se puedan tratar con radiación electromagnética. En general, los radiosensibilizadores están destinados para utilizarse junto con radiación electromagnética como parte de un tratamiento profiláctico o terapéutico. Los radiosensibilizadores apropiados para utilizarlos junto con el tratamiento con las composiciones presentes serán conocidos para los expertos en la técnica.
"Radiación electromagnética" cuando se utiliza en esta especificación incluye, pero no se limita a, radiación que tenga la longitud de onda de 10 —20 a 10 metros. Las modalidades específicas de la radiación electromagnética emplean radiación electromagnética de: radiación gama (10 -20 a 10-13 m) , radiación de rayos X (10 —11 a 10—9 m) , luz ultravioleta (10 nm a 400 nm) , luz visible (400 nm) , radiación infrarroja (700 nm a 1.0 mm) , y radiación de microondas (1 mm a 30 cm) .
Las frases "administración sistémica", "administrado en forma sistémica", "administración periférica" y "administrada en forma periférica" son bien conocidas, e incluyen la administración de una composición presente u otro material en un lugar alejado del sitio afectado por la enfermedad que se esté tratando. La administración de un agente directamente en, sobre o dentro de las cercanías de una lesión de enfermedad que se este tratando, incluso si el agente posteriormente se distribuye en forma sistémica, se puede denominar administración "local" o "tópica" o "regional".
El término "ED50" es bien conocido en la técnica. En algunas modalidades, la ED5 significa la dosis de medicamento que produce 50% de su respuesta o efecto máximo, o de otro modo, la dosis que produce una respuesta predeterminada en 50% de los individuos o preparaciones experimentales. El término "LD50" es bien conocido en la técnica. En algunas modalidades, el ED50 significa la dosis de un fármaco que es letal en 50% de los individuos de prueba. El término "índice terapéutico" es bien conocido en la técnica y se refiere al índice terapéutico de un fármaco, definido como LD50/ED50.
Los términos "incorporado" y "encapsulado" son bien conocidos en la técnica cuando se utilizan con referencia un agente terapéutico y un compuesto, como puede ser una composición descrita en la presente. En algunas modalidades, estos términos incluyen la incorporación, formulación o de otro modo que incluyen tal agente en una composición que permite liberación prolongada de tal agente en la aplicación deseada. Los términos pueden comprender cualquier forma mediante la cual un agente terapéutico u otro material se incorpore en una matriz del compuesto, que incluye por ejemplo: el compuesto es un polímero, y el agente se une a un monómero de tal polímero (por enlace covalente u otra interacción de unión) y habiendo sido tal monómero parte de la polimerización para obtener una formulación polimérica, distribuida a lo largo de la matriz polimérica, anexada a la superficie de la matriz polimérica (por unión covalente u otra interacción de unión) , encapsulado dentro de la matriz polimérica, etcétera. El término "coincorporación" o "co-encapsulación" se refiere a la incorporación de un agente terapéutico u otro material y por lo menos otro agente terapéutico u otro material en una composición de la presente.
Más específicamente, la forma física en la que un agente terapéutico u otro material se encapsula en los compuestos puede variar con la modalidad particular. Por ejemplo, un agente terapéutico u otro material puede ser encapsulado primero en una microesfera y luego combinarse con el compuesto en tal forma que se mantenga por lo menos una porción de la estructura de la microesfera. En otra versión, un agente terapéutico u otro material puede ser suficientemente inmiscible en un compuesto de liberación controlada en el que este se ha dispersado en gotas pequeñas, en lugar de estar disuelto, en el compuesto. Cualquier forma de encapsulación o incorporación esta considerada por la presente descripción, en tanto como la liberación sostenida de cualquier agente terapéutico encapsulado u otro material determina si la forma de encapsulación es suficientemente aceptable para cualquier uso específico.
El término "plastificador biocompatible" es bien reconocido en la técnica e incluye materiales que son solubles o dispersibles en las composiciones de liberación controlada descritas en la presente, lo cual aumenta la flexibilidad de la matriz del compuesto y que, en las cantidades empleadas, son biocompatibles. Los plastificadores convenientes son bien conocidos en la técnica e incluye los descritos en las Patentes US Nos. 2,784,127 y 4,444,933. Los plastificadores específicos pueden ser, por ejemplo, acetiltri-n-butilcitrato (aproximadamente 20 por ciento en peso o menos) , acetil triexil citrato (aproximadamente 20 por ciento o menos en peso) , butil bencil ftalato, dibutil ftalato, dioctil ftalato, n-butiril tri-n-hexil citrato, dietilen glicol dibenzoato (c. 20% en peso o menos) y similares.
"Molécula pequeña" es un término bien conocido en la técnica. En algunas modalidades, este término se refiere a una molécula que tiene un peso molecular de menos de aproximadamente 2000 a u o menos de aproximadamente 1000 amu, e incluso menos de aproximadamente 500 amu.
El término "alquilo" es bien conocido e incluye grupos alifáticos saturados, incluidos los grupos alquilo de cadena lineal, grupos alquilo de cadena ramificada, grupos cicloalquilo (alicílieos) , grupos cicloalquilo sustituidos con alquilo y grupos alquilo sustituidos con cicloalquilo. En ciertas modalidades, un alquilo de cadena lineal o de cadena ramificada tiene aproximadamente 30 o menos átomos de carbono en su estructura (por ejemplo C1-C30 para la cadena lineal, C3-C30 para la cadena ramificada) , y de otro modo, aproximadamente 20 o menos. Del mismo modo, los cicloalquilos tienen desde alrededor de 3 a alrededor de 10 átomos de carbono en su estructura de anillo, y de otro modo cerca de 5, 6 6 7 carbonos en la estructura del anillo.
A menos que el número de carbono se especifique de otro modo, "alquilo inferior" se refiere a un grupo alquilo, como se define en lo anterior, pero tiene desde 1 hasta aproximadamente 10 carbonos, de otro modo desde 1 hasta aproximadamente 6 átomos de carbono en su estructura. Del mismo modo, "alquenilo inferior" y "alquinilo inferior" tienen longitudes de cadena similares.
El término "aralquilo" es bien conocido y se refiere a un grupo alquilo sustituido con un grupo arilo (por ejemplo grupo aromático o heteroaromático) .
Los términos "alquenilo" y "alquinilo" son reconocidos en la técnica y se refieren a grupos alifáticos insaturados con longitud semejante y sustitución posible a los alquilos antes descritos, pero que contienen por lo menos un enlace doble o triple, respectivamente .
El término "arilo" es bien conocido y se refiere a grupos aromáticos de un solo anillo de 5, 6 y 7 miembros que puede incluir desde 0 a 4 heteroátomos, por ejemplo benceno, naftaleno, antraceno, pireno, pirrol, furano, tiofeno, imidazol, oxazol, tiazol, triazol, pirazol, piridina, pirazina, piridazina y pirimida, y similares. Estos grupos arilo que tienen heteroátomos en la estructura del anillo también se pueden mencionar como "heterociclos de arilo" o "heteroaromáticos". El anillo aromático puede estar sustituido en una o más posiciones del anillo con sustituyentes tales como los antes descritos, por ejemplo, halógeno, azida, alquilo, aralquilo, alquenilo, alquinilo, cicloalquilo, hidroxilo, alcoxilo, amino, nitro, sulfhidrilo, imino, amido, fosfonato, fosfinato, carbonilo, carboxilo, sililo, éter, alquiltio, sulfonilo, sulfamido, cetona, aldehido, éster, heterociclilo, porciones aromáticas o heteroaromáticas, -CF3, -CN o similares. El término "arilo" también incluye sistemas de anillos policíclicos que tengan 2 o más anillos cíclicos en los que dos o más átomos de carbono sean comunes a dos anillos contiguos (los anillos son "anillos fusionado") en donde por lo menos uno de los anillos es aromático, por ejemplo, los demás anillos cíclicos pueden ser cicloalquilos, cicloalquenilos, cicloalquinilos, arilos y/o heterociclilos.
Los términos orto, meta y para son bien conocidos en la técnica y se refieren a bencenos disustituidos con las posiciones 1, 2-, 1,3- y 1,4-, respectivamente. Por ejemplo, los nombres 1, 2-dimetilbenceno y orto-dimetilbenceno son sinónimos.
Los términos "heterociclilo", "heteroarilo" o "grupo heterocíclico" son bien conocidos y se refieren a las estructuras de anillos de 3 a aproximadamente 10 miembros, de otro modo anillos de 3 a aproximadamente 7 miembros cuyas estructuras de anillo incluyen 1 a 4 heteroátomos. Los heterociclos también pueden ser policiclos. Los grupos heterociclilo incluyen, por ejemplo: tiofeno, tiantreno, furano, pirano, isobenzofurano, cromeno, xanteno, fenoxanteno, pirrol, imidazol, pirazol, isotiazol, isoxazol, piridina, pirazina, pirimidina, piridazina, indolizina, isoindol, indol, indazol, purina, quinolizina, isoquinolina, quinolina, ftalazina, naftiridina, quinoxalina, quinazolina, cinnolina, pteridina, carbazol, carbolina, fenantridina, acridina, pirimidina, fenantrolina, fenazina, fenarsazina, fenotiazina, furazan, fenoxazina, pirrolidina, oxolano, tiolano, oxazol, piperidina, piperazina, morfolina, lactonas, lactamas como azetidinonas y pirrolidinonas, sultamas, sultonas, y similares. El anillo heterocíclico puede estar sustituido en una o más posiciones con sustituyentes tales como los antes descritos, por ejemplo, halógeno, alquilo, aralquilo, alquenilo, alquinilo, cicloalquilo, hidroxilo, amino, nitro, sulfhidrilo, imino, amido, fosfonato, fosfinato, carbonilo, carboxilo, sililo, éter, alquiltio, sulfonilo, cetona, aldehido, éster, un heterociclilo, una porción aromática o heteroaromática, -CF3, -CN o similar.
Los términos "policiclilo" o "grupo policíclico" son bien conocidos y se refieren a dos o más anillos (por ejemplo los cicloalquilos, cicloalquenilos, cicloalquinilos, arilos y/o heterociclilos) en los que dos o más átomos de carbono son comunes a dos anillos adyacentes, por ejemplo, los anillos son "anillos fusionado". Los anillos que están unidos a través de átomos no contiguos se denominan anillos "con puente". Cada uno de los anillos del policiclo puede estar sustituido con sustituyentes tales como los antes descritos, por ejemplo halógeno, alquilo, aralquilo, alquenilo, alquinilo, cicloalquilo, hidroxilo, amino, nitro, sulfhidrilo, imino, amido, fosfonato, fosfinato, carbonilo, carboxilo, sililo, éter, alquiltio, sulfonilo, cetona, aldehido, éster, un heterociclilo, una porción aromática o heteroaromática, -CF3, -CN o similar.
El término "carbociclo" es bien conocido en la técnica y se refiere a un anillo aromático o no aromático en el que cada átomo del anillo es carbono .
El término "nitro" es bien conocido y se refiere a-NO2; el término "halógeno" es bien conocido en la técnica y se refiere a -F, -Cl, -Br ó -I; el término "sulfhidrilo" es bien conocido en la técnica y se refiere a SH; el término "hidroxilo" significa -OH; y el término "sulfonilo" es bien conocido y se refiere a SO2 . "Haluro" designa el anión correspondiente del halógeno, y "pseudohaluro" tiene una definición establecida en la página 560 de "Advanced Inorganic Chemistry" de Cotton y ilkinson.
Los términos "amina" y "amino" son bien conocidos en la técnica y se refieren a aminas no sustituidas y sustituidas, por ejemplo una porción que puede estar representada por las fórmulas generales: en donde R50, R51 y R52 cada una, independientes entre sí, representa un hidrógeno, un alquilo, un alquenilo, (CH2)m-R61, o R50 y R51, tomados junto con el átomos de N al que están unidos completan un heterociclo que tiene desde 4 hasta 8 átomos en la estructura del anillo; R61 representa un arilo, un cicloalquilo, un cicloalquenilo, un heterociclo o un policiclo; y m es 0 o un entero en el intervalo de 1 a 8. En otras modalidades, R50 y R51 (y como una opción R52) cada independientemente representa un hidrógeno, un alquilo, un alquenilo o -(CH2)m-R61. Así pues, el término "alquilamina" incluye un grupo amina, como ya se definió, que tiene un alquilo sustituido o no sustituido unido a esta, es decir, por lo menos R50 o R51 es un grupo alquilo.
El término "acilamino" es bien conocido en la técnica y se refiere a una porción que puede estar representada por la siguiente fórmula general : en donde R50 es como ya se definió, y R54 representa un hidrógeno, un alquilo, un alquenilo o -(CH2)m-R61, donde m es R61 son como se define en lo anterior.
El término "amido" es bien conocido en la técnica como un carbonilo sustituido con amino e incluye una porción que puede estar representada por la fórmula general : donde R50 y R51 son como ya se definió. Algunas modalidades de la amida en la presente invención no incluirán imidas que pueden ser inestables.
El término "alquiltio" se refiere a un grupo alquilo, como se define en lo anterior, que tiene un radical azufre unido a este. En algunas modalidades, la porción "alquiltio" esta representada por uno de los siguientes: S alquilo, -S-alquenilo, -S-alquinilo y -S- (CH2)m-R61, en donde m y R61 están definidas en lo anterior. Los grupos alquiltio representativos incluyen metiltio, etiltio y similares.
El término "carboxilo" es reconocido en la técnica e incluye porciones tales como las que se pueden representar por las fórmulas generales: en donde X50 es un enlace o representa un oxígeno o un azufre, y R55 y R56 representan un hidrógeno, un alquilo, un alquenilo, - (CH2) -Rßl o una sal aceptada para uso farmacéutico, R56 representa un hidrógeno, un alquilo, un alquenilo o - (CH2) -R61, donde m y R61 están definidas en lo anterior. Donde X50 es un oxígeno y R55 o R56 no es hidrógeno, la fórmula representa un "éster". Cuando X50 es un oxígeno y R55 es como ya se definió, la porción esta mencionada en la presente como un grupo carboxilo, y particularmente cuando R55 es un hidrógeno, la fórmula representa un "ácido carboxílico". Cuando X50 es un oxígeno y R56 es hidrógeno, la fórmula representa un "formato". En general, cuando el átomo de oxígeno de la fórmula anterior es sustituido por azufre, la fórmula representa un grupo "tiolcarbonilo". Cuando X50 es un azufre y R55 ó R56 no es hidrógeno, la fórmula representa un "tioléster". Cuando X50 es un azufre y R55 es hidrógeno, la fórmula representa un "ácido tiol carboxílico. Cuando X50 es un azufre y R56 es hidrógeno, la fórmula representa un "tiolformato". Por otra parte, cuando X50 es un enlace y R55 no es hidrógeno, la fórmula anterior representa un grupo "cetona". Cuando X50 es un enlace y R55 es hidrógeno, la fórmula anterior representa un grupo "aldehido".
El término "carbamoilo" se refiere a -0(C=0)NRR', donde R y R' son independientemente H, grupos alifáticos, grupos arilo o grupos heteroarilo.
El término "oxo" se refiere a un oxígeno carbonilo (=0) .
Los términos "oxima" y "éter oxima" son bien conocidos en la técnica y se refieren a porciones que pueden representarse por la fórmula general: donde R75 es hidrógeno, alquilo, cicloalquilo, alquenilo, alquinilo, arilo, aralquilo o -(CH2)m-R61. La porción es una "oxima" cuando R es H; y es un "éter oxima" cuando R es alquilo, cicloalquilo, alquenilo, alquinilo, arilo, aralquilo o -(CH2)m-R61.
Los términos "alcoxilo" o "alcoxi" son bien conocidos en la técnica y se refieren a un grupo alquilo, como ya se definió, que tiene un radical oxígeno unido a éste. Los grupos alcoxilo representativos pueden ser metoxi, etoxi, propiloxi, ter-butoxi y similares. Un "éter" es dos hidrocarburos unidos en forma covalente por un oxígeno. Por consiguiente, el sustituyente de un alquilo que convierte a el alquilo en éter es o se asemeja a un alcoxilo, como puede ser representado por uno de los siguientes: -O-alquilo, -O-alquenilo, -O-alquinilo, -O- (CH2)m-R61, donde m y R61 están definidos en lo anterior.
El término "sulfonato" es bien conocido en la técnica y se refiere a una porción que puede representarse por la fórmula general: O n ~GSR5 >/ o en la que R57 es un par de electrones, hidrógeno, alquilo, cicloalquilo o arilo.
El término "sulfato" es bien conocido en la técnica e incluye una porción que se puede representar por la fórmula general : en la que R57 es como se define en lo anterior.
El término "sulfonamido" es bien conocido en la técnica e incluye una porción que puede ser representada por la fórmula general: en la que R50 y R57 es como se define en lo anterior, El término "sulfamoilo" es bien conocido en la técnica y se refiere a una porción que puede ser representada por la fórmula general : en la que R50 y R51 es como se define en lo anterior.
El término "sulfonilo" es bien conocido en la técnica y se refiere a una porción que puede ser representada por la fórmula general : en la que R58 es uno de los siguientes: hidrógeno, alquilo, alquenilo, alquinilo, cicloalquilo, heterociclilo, arilo o heteroarilo.
El término "sulfóxido" es bien conocido en la técnica y se refiere a una porción que puede ser representada por la fórmula general : en la que R58 es como se define en lo anterior.
El término "fosforilo" es bien conocido en la técnica y puede en general ser representado por la fórmula general : en donde Q50 representa S u O, y R59 representa hidrógeno, un alquilo inferior o un arilo. Cuando se utiliza para sustituir, un alquilo, el grupo fosforilo del fosforilalquilo puede representarse por las fórmulas generales : en donde Q50 y R59, independientes entre sí, están definidos en lo anterior y Q51 representa O, S o N. Cuando Q50 es S, la porción fosforilo es un "fosforotioato" .
El término "fosforamidita" es bien conocido en la técnica y puede representarse en las siguientes fórmulas : en donde Q51, R50, R51 y R59 son como se define en lo anterior.
El término "fosfonamidita" es bien conocido en la técnica y puede representarse por las siguientes fórmulas generales: en donde Q51, R50, R51 y R59 son como se define en lo anterior, y R60 representa un alquilo inferior o un arilo.
Las sustituciones análogas se pueden hacer para los grupos alquenilo y alquinilo para producir, por ejemplo, amino alquenilos, amino alquinilos, amido alquenilos, amido alquinilos, iminoalquenilos, iminoalquinilos, tioalquenilos, tioalquinilos, alquenilos o alquinilos sustituidos con carbonilo.
La definición de cada expresión, por ejemplo, alquilo, m, n y similares, cuando se presentan más de una vez en cualquier estructura, se pretende que sean independientes de su definición en cualquier otra parte de la misma estructura.
El término "selenoalquilo" es bien conocido y se refiere a un grupo alquilo que tiene un grupo seleno sustituido unido a este. Los "selenoéteres" ejemplares que pueden estar sustituidos en el alquilo se seleccionan de uno de los siguientes :-Se-alquilo, -Se-alquenilo, -Se-alquinilo y -Se- (CH2)m-R61, siendo m y R61 como se define en lo anterior.
Los términos trifilo, tosilo, esilo y nonaflilo son bien conocidos en la técnica y se refieren a difluorometansulfonilo, p-toluensulfonilo, metansulfonilo y nonafluorobutansulfonilo, respectivamente. Los términos triflato, tosilato, mesilato y nonaflato son bien conocidos en la técnica y se refieren a trifluorometansulfonato éster, p-toluensulfonato éster, metansulfonato éster y nonafluorobutansulfonato éster, grupos funcionales y las moléculas que contienen estos grupos, respectivamente.
Las abreviaturas Me, Et, Ph, Tf, Ts y Ms representan metilo, etilo, fenilo, trifluorometansulfonilo, nonafluorobutansulfonilo, p-toluensulfonilo y metansulfonilo, respectivamente. Una lista más amplia de las abreviaturas que se utilizan en la química orgánica y que conocen muy bien los expertos en la técnica aparece en la primera publicación de cada volumen del Journal Organic Chemistry; esta lista normalmente se representa en la tabla titulada Standard List of Abbreviations.
Algunos compuestos contenidos en las composiciones de la presente invención pueden existir en formas geométricas o estereoisoméricas particulares. Además, los polímeros de la presente invención también pueden ser ópticamente activos. La presente invención considera todos estos compuestos, incluidos los isómeros cis y trans, los enantiómeros R y S, los diasterómeros, los isómeros (D) , los isómeros (L) , las mezclas racémicas de estos y otras mezclas de estos, conforme entren dentro del alcance de la invención. Los átomos de carbono asimétricos adicionales pueden estar presentes en un sustituyente como puede ser un grupo alquilo. Todos estos isómeros, así como las mezclas de estos, están destinados para estar incluidos en esta invención.
Si se desea, por ejemplo, un enantiómero específico del compuesto de la presente invención, este se puede preparar por síntesis asimétrica o por derivación con un auxiliar quiral, donde la mezcla diasteromérica resultante se separe y se disocie el grupo auxiliar para obtener los enantiómeros puros deseados. De otro modo, cuando la molécula contiene un grupo básico funcional, como amino, o un grupo ácido funcional, como carboxilo, se forman sales diasteroméricas con un ácido o base que tenga actividad óptica, apropiado, seguido por la resolución del diasterómero así formado por cristalización fraccionaria o por medios cromatográficos bien conocidos en la materia y posteriormente la recuperación de los enantiómeros puros.
Se entenderá que "sustitución" o "sustituido con" incluye la condición implícita de tal sustitución es de acuerdo con la valencia permitida del átomo sustituido y no el sustituyente, y que la sustitución da como resultado un compuesto estable, por ejemplo, que no sufre espontáneamente transformación como un re-arreglo, ciclación, eliminación u otra reacción.
El término "sustituido" también esta considerado para incluir todos los sustituyentes permitidos de los compuestos orgánicos. En un amplio espectro, los sustituyentes permitidos incluyen sustituyentes acíclicos y cíclicos, ramificados y no ramificados, carbocíclicos y heterocíclicos, aromáticos y no aromáticos de los compuestos orgánicos. Los sustituyentes ejemplares pueden ser aquellos que se describen en lo anterior.
Los sustituyentes permitidos pueden ser uno o más y los mismos o diferentes para los compuestos orgánicos apropiados. Para el objetivo de esta invención, los heteroátomos como nitrógeno pueden tener sustituyentes hidrógeno y/o cualquier sustituyente permitido de los compuestos orgánicos descritos en la presente que satisfagan las valencias de los heteroátomos. Esta invención no esta destinada para ser limitada en ninguna forma por los sustituyentes permitidos de los compuestos orgánicos . 3. Composiciones Como ya se describió, la degeneración macular se puede tratar o prevenir por la interferencia con el ciclo visual en tal forma que disminuya la cantidad de todo-trans-retinal, presente en los discos de los segmentos externos de los fotorreceptores bastoncitos. La producción de compuestos retinotóxicos por las células de los conos es insignificante se puede ignorar, por que las varillas representan el 95% de todos los fotorreceptores.
La Figura 1 representa el ciclo visual de mamífero.
El transcurso del ciclo visual, un complejo de 11-cis-retinal y opsina, conocida como rodopsina, pasa a través de una serie de pasos bioquímicos iniciados por la absorción de luz. Algunos pasos de este ciclo en lugares distintos. Como muestra la Figura 1, los primeros pasos de la absorción de luz hasta la disociación de la opsina y la formación de todo-trans-retinal ocurre en los discos del segmento externo de los bastoncitos fotorreceptores. La reducción de todo-trans-retinal a todo-trans-retinol se lleva a cabo en el citoplasma de los bastoncitos, y los pasos restantes para regenerar 11-cis-retinal ocurren en el epitelio pigmentario de la retina (RPE) .
Para prevenir la acumulación de todo-trans-retinal en el disco se contemplan por lo menos dos enfoques amplios. En un enfoque, uno o más pasos enzimáticos o pasos de unión al chaperón en el ciclo visual se pueden inhibir para bloquear la vía sintética para el todo-trans-retinal. En otro enfoque, se puede hacer un "corto circuito" en una parte del ciclo visual, es decir, en el ciclo se interrumpe un intermediario previo a un intermediario que esta dos o más pasos después en el ciclo visual, de modo que estos pasos de ciclo se derivan, mientras que en el disco no están presentes los precursores de todo-trans-retinal .
A. Inhibidores enzimáticos La limitación del flujo de los retinoides a través del ciclo visual se puede lograr inhibiendo cualquiera de las reacciones bioquímicas importantes del ciclo visual. Cada paso del ciclo se puede tratar potencialmente de este modo. La inhibición de un paso enzimático podría de este modo utilizarse para "estancar" el ciclo visual en el RPE, manteniendo con ello el todo-trans-retinal fuera de los discos.
Otros pasos del ciclo visual también se pueden inhibir. Por ejemplo, como se muestra en la figura 1, algunas enzimas actúan en todo-trans-retinol y sus derivados luego de su regreso al RPE, incluida la LRAT (lecitina retinol acil transferasa) , 11-cis-retinol deshidrogenasa y IMH (isomerohidrolasa) . Además, el RPE 65 chaperón se une a retinil esteres para hacer los compuestos normalmente hidrofóbicos disponibles para el IMH para el procesamiento hacia 11-cis-retinol. Estas enzimas y el chaperón pueden ser el blanco para la inhibición y/o interferencia.
En ciertas modalidades, un inhibidor de isomerohidrolasa (IMH) , un inhibidor 11-cis-retinol deshidrogenasa, un inhibidor de lecitina retinol acil transferasa (LRAT) ó un antagonista del epitelio pigmentario de la retina, chaperón, (RPE65) tiene la estructura representada por la fórmula I: I en donde, independientemente, cada vez que aparezca n es 0 a 10 inclusive; R es hidrógeno o alquilo; 2 R es hidrógeno, alquilo, cicloalquilo, alquenilo, cicloalquenilo, alquinilo, arilo o aralquilo; Y es -C(Rb)p-, -C(=0)~ ó -C (Rb)pC (=0) -; X es -0-, -N(Ra)-, -C(Rb)p- ó -S-; Z es alquilo, haloalquilo, - (CH2CH20) pRb ó -C(=0)Rb; p es 0 a 20 inclusive Ra es hidrógeno, alquilo, arilo o aralquilo; Rb es hidrógeno, alquilo o haloalquilo; y ^^ indica un enlace sencillo, un enlace doble cis ó un enlace doble trans .
En ciertas modalidades, un inhibidor de isomerohidrolasa (IMH), un inhibidor 11-cis-retinol deshidrogenasa, un inhibidor de lecitina retinol acil transferasa (LRAT) ó un antagonista del epitelio pigmentario de la retina, chaperón, (RPE65) tiene la estructura representada por la fórmula II: II en donde, n es 0 a 10 inclusive; i R es hidrógeno o alquilo; 2 R es hidrógeno, alquilo, cicloalquilo, alquenilo, cicloalquenilo, alquinilo, arilo o aralquilo; Y es -C(Rb)p-, -C(=0)- ó -C(Rb)pC(=0)-; X es hidrógeno, -0-, -S-, -N(Ra)-, -N(Ra) -N (Ra) -, -C(=0)-, -C(=NRa)-, -C(=N0H)-, -C(=S)- ó -C(Rb)p-; Z es ausente, hidrógeno, alquilo, haloalquilo, arilo, aralquilo, -CN, -0R, - (CH2CH20)pRb, -C(=0)R-, -C(=0)CH2F, -C(=0)CHF2, -C(=0)CF3, C(=0)CHN2, -C(=0)0Rb, -C(=0)CH2OC(=0)Rb, -C (=0) C (=C (Rb) 2) b/ p es O a 20 inclusive Ra es hidrógeno, alquilo, arilo o aralquilo; Rb es hidrógeno, alquilo o haloalquilo; y indica un enlace sencillo, un enlace doble cis ó un enlace doble trans En ciertas modalidades, un inhibidor de isomerohidrolasa (IMH) , un inhibidor 11-cis-retinol deshidrogenasa, un inhibidor de lecitina retinol acil transferasa (LRAT) ó un antagonista del epitelio pigmentario de la retina, chaperón, (RPE65) tiene la estructura representada por la fórmula III: III n es 0 a 10 inclusive; R es hidrógeno o alquilo; 2 R es hidrógeno, alquilo, cicloalquilo, alquenilo, cicloalquenilo, alquinilo, arilo o aralquilo; Y es -CRb(ORb)-, -CRb(N(Ra)2)-, ~C(Rb)p-, -C (=0) - ó -C(Rb)pC(=0)-; X es -O-, -S-, -N(Ra)-, -C (=0) - ó -C(Rb)p-; Z es hidrógeno, alquilo, haloalquilo, arilo, aralquilo, -0Rb-, -N(Rb)2-, - (CH2CH20) pRb, -C(=0)Rb, -C(=NRa)Rb, -C(=NORb)Rb, -C (ORb) (Rb) 2, "C (N (Ra) 2) (Rb) 2 ó -(CH2CH20)pRb, p es 0 a 20 inclusive Ra es hidrógeno, alquilo, arilo o aralquilo; Rb es hidrógeno, alquilo o haloalquilo; y ^ indica un enlace sencillo, un enlace doble cis ó un enlace doble trans .
En ciertas modalidades, un inhibidor de isomerohidrolasa (IMH) , un inhibidor 11-cis-retinol deshidrogenasa, un inhibidor de lecitina retinol acil transferasa (LRAT) ó un antagonista del epitelio pigmentario de la retina, chaperón, (RPE65) tiene la estructura representada por la fórmula VI: ¥1 en donde, independientemente, cada vez que aparezca R es hidrógeno, alquilo, arilo o aralquilo; X es alquilo, alquenilo, ~C(Rb)2-, -C(=0)- -C(=NRa)-, -C(OH)Rb ó -C (N (Ra) 2) Rb-; 2 R es hidrógeno, alquilo, cicloalquilo, alquenilo, cicloalquenilo, alquinilo, arilo o aralquilo; Ra es hidrógeno, alquilo, arilo o aralquilo; y Rb es hidrógeno ó alquilo.
En ciertas modalidades, un inhibidor de isomerohidrolasa (IMH) , un inhibidor 11-cis-retinol deshidrogenasa, un inhibidor de lecitina retinol acil transferasa (LRAT) ó un antagonista del epitelio pigmentario de la retina, chaperón, (RPE65) tiene la estructura representada por la fórmula I: en donde, independientemente, cada vez que aparezca n es 0 a 10 inclusive; R es hidrógeno o alquilo; 2 R es hidrógeno, alquilo, cicloalquilo, alquenilo, cicloalquenilo, alquinilo, arilo o aralquilo; Y es -C(Rb)p-, -C(=0)- ó -C(Rb)pC(=0)-; X es -O-, -N(Ra)-, -C(Rb)p- ó -S-; Z es alquilo, haloalquilo, - (CH2CH0)pRb ó -C(=0)Rb; p es 0 a 20 inclusive Ra es hidrógeno, alquilo, arilo o aralquilo; Rb es hidrógeno, alquilo o haloalquilo; y -^^ indica un enlace sencillo, un enlace doble cis ó un enlace doble trans .
En ciertas modalidades, un inhibidor de isomerohidrolasa (IMH) , tiene la estructura representada por la fórmula la, Ib, le ó Id: le M en donde, independientemente, cada vez que aparezca n es 0 a 4 inclusive; R es hidrógeno o alquilo; 3 R es hidrógeno, halógeno, alquilo, alquenilo, alquinilo, arilo, heteroarilo, aralquilo, aralquenilo, aralquinilo, heteroaralquilo, heteroaralquenilo, heteroaralquinilo, ciano, nitro, sulfhidrilo, hidroxilo, sulfonilo, amino, acilamino, amido, alquiltio, carboxilo, carbamoilo, alcoxilo, sulfonato, sulfato, sulfonamido, sulfamoilo, sulfonilo y sulfóxido; R es ausente, hidrógeno, halógeno, alquilo, alquenilo, alquinilo, arilo, heteroarilo, aralquilo, aralquenilo, aralquinilo, heteroaralquilo, heteroaralquenilo, heteroaralquinilo, ciano, nitro, sulfhidrilo, hidroxilo, sulfonilo, amino, acilamino, amido, alquiltio, carboxilo, carbamoilo, alcoxilo, sulfonato, sulfato, sulfonamido, sulfamoilo, sulfonilo y sulfóxido; Y es -C(Rb)2- ó -C(=0)-; X es -O-, -N(Ra)-, -C(Rb)2- ó -S-; Z es alquilo, haloalquilo ó -C(=0)R; Ra es hidrógeno, alquilo, arilo ó aralquilo; Rb es hidrógeno, alquilo o haloalquilo; y 7^ indica un enlace sencillo, un enlace doble cis ó un enlace doble trans .
En otras modalidades, un inhibidor de isomerohidrolasa (IMH) tiene la estructura de la fórmula la, Ib, Is ó Id, en donde R es metilo. En otras modalidades, un inhibidor de isomerohidrolasa (IMH) tiene la estructura de la fórmula la, Ib, le ó Id, en donde n es 0.
En otras modalidades, un inhibidor de isomerohidrolasa (IMH) tiene la estructura de la fórmula la, Ib, le ó Id, en donde n es 1. En otras modalidades, un inhibidor de isomerohidrolasa (IMH) tiene la estructura de la fórmula la, Ib, le ó Id, en donde Y es -CH2-. En otras modalidades, un inhibidor de isomerohidrolasa (IMH) tiene la estructura de la fórmula la, Ib, le ó Id, en donde X es -0-. En otras modalidades, un inhibidor de isomerohidrolasa (IMH) tiene la estructura de la fórmula la, Ib, le ó Id, en donde X es -N(H)-. En otras modalidades, un inhibidor de isomerohidrolasa (IMH) tiene la estructura de la fórmula la, Ib, le ó Id, en donde Z es -C(=0)Rb. En otras modalidades, un inhibidor de isomerohidrolasa (IMH) tiene la estructura de la fórmula la, Ib, le ó Id, en donde Z es -C(=0)Rb; y Rb es haloalquilo . En otras modalidades, un inhibidor de isomerohidrolasa (IMH) tiene la estructura de la fórmula la, Ib, le ó Id, en donde Z es alquilo. En otras modalidades, un inhibidor de isomerohidrolasa (IMH) tiene la estructura de la fórmula la, Ib, le ó Id, en donde Z es haloalquilo.
En otras modalidades, un inhibidor de isomerohidrolasa (IMH) tiene la estructura de la fórmula la, Ib, le ó Id, en donde R es hidrógeno. En otras modalidades, un inhibidor de isomerohidrolasa (IMH) tiene la estructura de la fórmula la, Ib, le ó Id, en donde R es hidrógeno, metilo o está ausente. En ciertas modalidades, un inhibidor de isomerohidrolasa (IMH) tiene la estructura representada por las fórmulas, le, If, Ig o Ih: en donde, independientemente, cada vez que aparezca n es 0 a 4 inclusive; R es hidrógeno o alquilo; 3 R es hidrógeno, halógeno, alquilo, alquenilo, alquinilo, arilo, heteroarilo, aralquilo, aralquenilo, aralquinilo, heteroaralquilo, heteroaralquenilo, heteroaralquinilo, ciano, nitro, sulfhidrilo, hidroxilo, sulfonilo, amino, acilamino, amido, alquiltio, carboxilo, carbamoilo, alcoxilo, sulfonato, sulfato, sulfonamido, sulfamoilo, sulfonilo y sulfóxido; X es -O-, -N(Ra)-, -C(Rb)2- ó -S-; Z es alquilo, haloalquilo ó -C(=0)Rb; Ra es hidrógeno, alquilo, arilo ó aralquilo; R es hidrógeno, alquilo o haloalquilo.
En otras modalidades, un inhibidor de isomerohidrolasa (IMH) tiene la estructura de la fórmula le, If, Ig ó Ih, en donde n es 0. En otras modalidades, un inhibidor de isomerohidrolasa (IMH) tiene la estructura de la fórmula le, If, Ig ó Ih en donde n es 1. En otras modalidades, un inhibidor de isomerohidrolasa (IMH) tiene la estructura de la fórmula le, If, Ig ó Ih, en donde X es -0-. En otras modalidades, un inhibidor de isomerohidrolasa (IMH) tiene la estructura de la fórmula le, If, Ig ó Ih, en donde X es -N(H)-. En otras modalidades, un inhibidor de isomerohidrolasa (IMH) tiene la estructura de la fórmula le, If, Ig ó Ih, en donde Z es -C(=0)Rb.
En otras modalidades, un inhibidor de isomerohidrolasa (IMH) tiene la estructura de la fórmula le, If, Ig ó Ih, en donde Z es -C(=0)Rb; y Rb es haloalquilo. En otras modalidades, un inhibidor de isomerohidrolasa (IMH) tiene la estructura de la fórmula le, If, Ig ó Ih, en donde Z es alquilo. En otras modalidades, un inhibidor de isomerohidrolasa (IMH) tiene la estructura de la fórmula le, If, Ig ó Ih, en donde Z es haloalquilo. En otras modalidades, un inhibidor de isomerohidrolasa (IMH) tiene la estructura de la fórmula 3 le, If, Ig ó Ih, en donde R es hidrógeno. En otras modalidades, un inhibidor de isomerohidrolasa (IMH) tiene la estructura de la fórmula le, If, Ig ó Ih, en donde X es -0-; y Z es alquilo. En otras modalidades, un inhibidor de isomerohidrolasa (IMH) tiene la estructura de la fórmula le, If, Ig ó Ih, en donde X es -0-; y Z es haloalquilo. En otras modalidades, un inhibidor de isomerohidrolasa (IMH) tiene la estructura de la fórmula le, If, Ig ó Ih, en donde X es -N (H)-; y Z es alquilo. En otras modalidades, un inhibidor de isomerohidrolasa (IMH) tiene la estructura de la fórmula le, If, Ig ó Ih, en donde X es -N(H)-; y Z es haloalquilo.
En una modalidad, un inhibidor de isomerohidrolasa (IMH) es 11-cis-retinil bromoacetato (cBRA) : En ciertas modalidades, un inhibidor de isomerohidrolasa (IMH) , un inhibidor 11-cis-retinol deshidrogenasa, un inhibidor de lecitina retinol acil transferasa (LRAT) ó un antagonista del epitelio pigmentario de la retina, chaperón, (RPE65) tiene la estructura representada por la fórmula II: en donde, n es 0 a 10 inclusive; R es hidrogeno o alquilo; 2 R es hidrogeno, alquilo, cicloalquilo, alquenilo, cicloalquenilo, alquinilo, arilo o aralquilo; Y es -C(Rb)p-, -C(=0)- ó -C(Rb)pC(=0)-; X es hidrógeno, -O-, -S-, -N(Ra)-, -N(Ra) -N(Ra) -, -C(=0)-, -C(=NRa)-, -C(=NOH)-, -C(=S)- ó -C(Rb)p-; Z es ausente, hidrógeno, alquilo, haloalquilo, arilo, aralquilo, -CN, -ORb, - (CH2CH20) pRb, -C(=0)Rb, -C(=0)CH2F, -C(=0)CHF2, -C(=0)CF3, C(=0)CHN2, -C(=0)ORb, -C(=0)CH2OC(=0)Rb, -C (=0) C (=C (Rb) 2)Rb, j p es 0 a 20 inclusive Ra es hidrógeno, alquilo, arilo o aralquilo; Rb es hidrógeno, alquilo, haloalquilo, arilo ó aralquilo; y indica un enlace sencillo, un enlace doble cis ó un enlace doble trans En ciertas modalidades, un inhibidor de lecitina retinol acil transferasa (LRAT) tiene la estructura representada por la fórmula lia, 11b, lie ó lid: ?a m e m en donde, independientemente, cada vez que aparezca n es 0 a 4 inclusive; R es hidrogeno o alquilo; R es hidrógeno, halógeno, alquilo, alquenilo, alquinilo, arilo, heteroarilo, aralquilo, aralquenilo, aralquinilo, heteroaralquilo, heteroaralquenilo, heteroaralquinilo, ciano, nitro, sulfhidrilo, hidroxilo, sulfonilo, amino, acilamino, amido, alquiltio, carboxilo, carbamoilo, alcoxilo, sulfonato, sulfato, sulfonamido, sulfamoilo, sulfonílo y sulfóxido; R es ausente, hidrógeno, halógeno, alquilo, alquenilo, alquinilo, arilo, heteroarilo, aralquilo, aralquenilo, aralquinilo, heteroaralquilo, heteroaralquenilo, heteroaralquinilo, ciano, nitro, sulfhidrilo, hidroxilo, sulfonilo, amino, acilamino, amido, alquiltio, carboxilo, carbamoilo, alcoxilo, sulfonato, sulfato, sulfonamido, sulfamoilo, sulfonilo y sulfóxido; Y es -C(=0)- ó -C(Rb)2- ó; X es hidrógeno, -0-, -S-, -N(Ra)-, -N(Ra) -N (Ra) -, -C(=0)-, -C(= Ra)-, -C(=N0H)-, -C(=S)- ó -C(Rb)2-; Z es ausente, hidrógeno, alquilo, haloalquilo, arilo, aralquilo, -CN, ~0Rb, -C(=0)Rb, -C(=0)CH2F, -C(=0)CHF2, -C(=0)CF3, C(=0)CHN2, -C(=0)CH20C(=0)Rb, -C(=0)0Rb, -C(=0) C(=C(Rb) 2)Rb Ra es hidrógeno, alquilo, arilo o aralquilo; Rb es hidrógeno, alquilo, haloalquilo, arilo ó aralquilo; y indica un enlace sencillo, un enlace doble cis ó un enlace doble trans .
En otras modalidades, un inhibidor de lecitina retinol acil transferasa (LRAT) tiene la estructura representada por la fórmula lia, Ilb, lie ó lid, en donde n es 0. En otras modalidades, un inhibidor de lecitina retinol acil transferasa (LRAT) tiene la estructura representada por la fórmula lia, Ilb, lie ó lid, en donde n es 1. En otras modalidades, un inhibidor de lecitina retinol acil transferasa (LRAT) tiene la estructura representada por la fórmula lia, Ilb, lie ó lid, en donde R es hidrógeno o metilo. En otras modalidades, un inhibidor de lecitina retinol acil transferasa (LRAT) tiene la estructura representada por la fórmula lia, Ilb, lie ó lid, en donde 3 R es hidrógeno . En otras modalidades, un inhibidor de lecitina retinol acil transferasa (LRAT) tiene la estructura representada por la fórmula lia, Ilb, lie ó lid, en donde R es hidrógeno o metilo . En otras modalidades, un inhibidor de lecitina retinol acil transferasa (LRAT) tiene la estructura representada por la fórmula lia, Ilb, lie ó lid, en donde Y es -CH2- En otras modalidades, un inhibidor de lecitina retinol acil transferasa (LRAT) tiene la estructura representada por la fórmula lia, 11b, lie ó lid, en donde X es -0-. En otras modalidades, un inhibidor de lecitina retinol acil transferasa (LRAT) tiene la estructura representada por la fórmula lia, Ilb, lie ó lid, en donde X es -NH-. En otras modalidades, un inhibidor de lecitina retinol acil transferasa (LRAT) tiene la estructura representada por la fórmula lia, Ilb, lie ó lid, en donde X es -C(Rb)2-.
En otras modalidades, un inhibidor de lecitina retinol acil transferasa (LRAT) tiene la estructura representada por la fórmula lia, Ilb, lie ó lid, en donde X es -C(=0)-. En otras modalidades, un inhibidor de lecitina retinol acil transferasa (LRAT) tiene la estructura representada por la fórmula lia, Ilb, lie ó lid, en donde Z es alquilo. En otras modalidades, un inhibidor de lecitina retinol acil transferasa (LRAT) tiene la estructura representada por la fórmula lia, Ilb, lie ó lid, en donde Z es haloalquilo. En ciertas modalidades, un inhibidor de lecitina retinol acil transferasa (LRAT) tiene la estructura representada por la fórmula lie, Ilf, Ilg ó Ilh: He m en donde, independientemente, cada vez que aparezca n es 0 a 4 inclusive; R es hidrógeno o alquilo; R es hidrógeno, halógeno, alquilo, alquenilo, alquinilo, arilo, heteroarilo, aralquilo, aralquenilo, aralquinilo, heteroaralquilo, heteroaralquenilo, heteroaralquinilo, ciano, nitro, sulfhidrilo, hidroxilo, sulfonilo, amino, acilamino, amido, alquiltio, carboxilo, carbamoilo, alcoxilo, sulfonato, sulfato, sulfonamido, sulfamoilo, sulfonilo y sulfóxido; X es hidrógeno, -0-, -S-, -N(Ra)-, -N (Ra) -N(Ra) -, -C(-O)-, -C(=NRa)-, -C(=N0H)-, -C(=S)- ó -C(Rb)2-; Z es ausente, hidrógeno, alquilo, haloalquilo, arilo, aralquilo, -CN, -0Rb, -C(=0)Rb, -C (=0) CH2F, -C(=0)CHF2, -C(=0)CF3, C(=0)CHN2, -C (=0) CH20C (=0) Rb, Ra es hidrógeno, alquilo, arilo o aralquilo; y Rb es hidrógeno, alquilo, haloalquilo, arilo ó aralquilo.
En otras modalidades, un inhibidor de lecitina retinol acil transferasa (LRAT) tiene la estructura representada por la fórmula lie, Hf, Hg ó Ilh, en donde n es 0.
En otras modalidades, un inhibidor de lecitina retinol acil transferasa (LRAT) tiene la estructura representada por la fórmula lie, Ilf, Ilg ó Ilh, en donde n es 1. En otras modalidades, un inhibidor de lecitina retinol acil transferasa (LRAT) tiene la estructura representada por la fórmula lie, Ilf, Ilg ó Ilh, en donde R es hidrógeno o metilo. En otras modalidades, un inhibidor de lecitina retinol acil transferasa (LRAT) tiene la estructura representada por la fórmula lie, Ilf, Ilg ó Ilh, en donde R es hidrógeno. En otras modalidades, un inhibidor de lecitina retinol acil transferasa (LRAT) tiene la estructura representada por la fórmula lie, Ilf, Ilg ó Ilh, en donde R es hidrógeno o metilo. En otras modalidades, un inhibidor de lecitina retinol acil transferasa (LRAT) tiene la estructura representada por la fórmula lie, Ilf, Ilg ó Ilh, en donde X es -0-. En otras modalidades, un inhibidor de lecitina retinol acil transferasa (LRAT) tiene la estructura representada por la fórmula lie, Ilf, Ilg ó Ilh, en donde X es -NH-. En otras modalidades, un inhibidor de lecitina retinol acil transferasa (LRAT) tiene la estructura representada por la fórmula lie, Ilf, Ilg ó Ilh, en donde X es -CH2-.
En otras modalidades, un inhibidor de lecitina retinol t acil transferasa (LRAT) tiene la estructura representada por la fórmula lie, Hf, Ilg ó Ilh, en donde X es -C(=0)-. En otras modalidades, un inhibidor de lecitina retinol acil transferasa (LRAT) tiene la estructura representada por la fórmula lie, Ilf, Ilg ó Ilh, en donde Z es alquilo. En otras modalidades, un inhibidor de lecitina retinol acil transferasa (LRAT) tiene la estructura representada por la fórmula lie, Ilf, Ilg ó Ilh, en donde Z es haloalquilo. En otras modalidades, un inhibidor de lecitina retinol acil transferasa (LRAT) tiene la estructura representada por la fórmula lie, Ilf, Ilg ó Ilh, en donde Z es -C(=0)Rb. En otras modalidades, un inhibidor de lecitina retinol acil transferasa (LRAT) tiene la estructura representada por la fórmula lie, Hf, Ilg ó Ilh,, en donde X es -0-; y Z es -C(=0)Rb. En otras modalidades, un inhibidor de lecitina retinol acil transferasa (LRAT) tiene la estructura representada por la fórmula lie, Ilf, Ilg ó Ilh, en donde X es -CH2-; y Z es -C(=0)Rb. En otras modalidades, un inhibidor de lecitina retinol acil transferasa (LRAT) tiene la estructura representada por la fórmula lie, Hf, Hg ó Ilh, en donde X es -NH-; y Z es -C(=0)Rb.
En una modalidad, un inhibidor de lecitina retinol acil transferasa (LRAT) es 13-desmetil-13, 14-dihidro-al-trans-retinil trifluoroacetato (RFA) : En una modalidad, un inhibidor de lecitina retinol acil transferasa (LRAT) es al- trans-retinil bromoacetato.
En ciertas modalidades, un inhibidor de isomerohidrolasa (IMH) , un inhibidor 11-cis-retinol deshidrogenasa, un inhibidor de lecitina retinol acil transferasa (LRAT) ó un antagonista del epitelio pigmentario de la retina, chaperón, (RPE65) tiene la estructura representada por la fórmula III: III en donde n es 0 a 10 inclusive; R es hidrógeno o alquilo; 2 R es hidrógeno, alquilo, cicloalquilo, alquenilo, cicloalquenilo, alquinilo, arilo o aralquilo; Y es -CRb(0Rb)-, -CRb(N(Ra)2)-, -C(Rb)p-, -C (=0) - ó -C(R )pC(=0)-; X es -0-, -S-, -N(Ra)-, -C(=0)- ó -C(Rb)p-; Z es hidrógeno, alquilo, haloalquilo, arilo, aralquilo, -0Rb-, -N(Rb)2-, - (CH2CH20)pRb, -C(=0)Rb, -C(=NRa)Rb, -C(=N0Rb)Rb, -C (0Rb) (Rb) 2, -C (N (Ra) 2) (Rb) 2 Ó -(CH2CH20)pRb, p es 0 a 20 inclusive Ra es hidrógeno, alquilo, arilo o aralquilo; Rb es hidrógeno, alquilo, haloalquilo, arilo ó aralquilo; y —— indica un enlace sencillo ó un enlace doble trans.
En ciertas modalidades, un antagonista del epitelio pigmentario de la retina, chaperón, (RPE65) tiene la estructura representada por la fórmula Illa, Illb, IIIc ó Illd: Illa Mb Me p d en donde, independientemente, cada vez que aparezca n es 0 a 4 inclusive; R es hidrógeno o alquilo; Y es -C(=0)-, -CRb(ORb)-, -CRb (N (Ra) 2) - ó -C(Rb)2-; X es -0-, -S-, -N(Ra)-, -C(=0)- ó -C(Rb)2-; Z es hidrógeno, alquilo, haloalquilo, arilo, aralquilo, -0Rb-, -N(Rb)2-, -C(=0)Rb, -C (=NRa) Rb, -C(=N0Rb)Rb, -C(0Rb) (Rb)2, -C (N (Ra) 2) (Rb) 2 ó -(CH2CH20)pRb, Ra es hidrógeno, alquilo, arilo o aralquilo; Rb es hidrógeno, alquilo, haloalquilo, arilo ó aralquilo; y rz-r indica un enlace sencillo ó un enlace doble trans.
En otras modalidades, un antagonista del epitelio pigmentario de la retina (RPE65) tiene la estructura representada por la fórmula Illa, Illb, lile ó Illd, en donde n es 0.
En otras modalidades, un antagonista del epitelio pigmentario de la retina (RPE65) tiene la estructura representada por la fórmula Illa, Illb, lile ó Illd, en donde n es 1. En otras modalidades, un antagonista del epitelio pigmentario de la retina (RPE65) tiene la estructura representada por la fórmula Illa, Illb, lile ó Illd, en donde R1 es hidrógeno o metilo . En otras modalidades, un antagonista del epitelio pigmentario de la retina (RPE65) tiene la estructura representada por la fórmula Illa, Illb, lile ó Illd, en 3 donde R es hidrogeno. En otras modalidades, un antagonista del epitelio pigmentario de la retina (RPE65) tiene la estructura representada por la fórmula Illa, Illb, lile ó Illd, en donde R es hidrógeno o metilo. En otras modalidades, un antagonista del epitelio pigmentario de la retina (RPE65) tiene la estructura representada por la fórmula Illa, Illb, lile ó Illd, en donde X es -0- . En otras modalidades, un antagonista del epitelio pigmentario de la retina (RPE65) tiene la estructura representada por la fórmula Illa, Illb, lile ó Illd, en donde X es -NH-.
En otras modalidades, un antagonista del epitelio pigmentario de la retina (RPE65) tiene la estructura representada por la fórmula Illa, Illb, lile ó Illd, en donde X es -C(Rb)2~. En otras modalidades, un antagonista del epitelio pigmentario de la retina (RPE65) tiene la estructura representada por la fórmula Illa, Illb, lile ó Illd, en donde X es -C(=0) -. En otras modalidades, un antagonista del epitelio pigmentario de la retina (RPE65) tiene la estructura representada por la fórmula Illa, Illb, lile ó Illd, en donde Z es alquilo . En otras modalidades, un antagonista del epitelio pigmentario de la retina (RPE65) tiene la estructura representada por la fórmula Illa, Illb, lile ó Illd, en donde Z es haloalquilo. En ciertas modalidades, un antagonista del epitelio pigmentario de la retina (RPE65) tiene la estructura representada por la fórmula lile, Illf, Illg ó Illh: llíg lííii en donde, independientemente, cada vez que aparezca n es 0 a 4 inclusive; 2 R es hidrógeno o alquilo; X es -0-, -S-, -N(Ra)-, -C(=0)- ó -C(Rb)2-; Z es hidrógeno, alquilo, haloalquilo, arilo, aralquilo, -0Rb, -N(Rb)2~, -C(=0)Rb, -C(=NRa)Rb, -C(=N0H)Rb, -C(0Rb)(Rb)2 ó -C (N (Ra) 2) (Rb) 2 Ó -(CH2CH20)pRb, Ra es hidrógeno, alquilo, arilo o aralquilo; y Rb es hidrógeno, alquilo, haloalquilo, arilo ó aralquilo; y p es 0 a 10 inclusive.
En otras modalidades, un antagonista del epitelio pigmentario de la retina (RPE65) tiene la estructura representada por la fórmula lile, Illf, Illg ó Illh, en donde n es 0. En otras modalidades, un antagonista del epitelio pigmentario de la retina (RPE65) tiene la estructura representada por la fórmula lile, Ill , Illg ó Illh, , en donde n es 1.
En otras modalidades, un antagonista del epitelio pigmentario de la retina (RPE65) tiene la estructura representada por la fórmula lile, Illf, Illg ó Illh, en donde R es hidrógeno o metilo. En otras modalidades, un antagonista del epitelio pigmentario de la retina (RPE65) tiene la estructura representada por la fórmula lile, Illf, Illg ó Illh, en donde Y es -C(=0)-. En otras modalidades, un antagonista del epitelio pigmentario de la retina (RPE65) tiene la estructura representada por la fórmula lile, Illf, Illg ó Illh, en donde Y es -CH2-. En otras modalidades, un antagonista del epitelio pigmentario de la retina (RPE65) tiene la estructura representada por la fórmula lile, IIIfr Illg ó Illh, en donde Z es -C(=0)Rb. En otras modalidades, un antagonista del epitelio pigmentario de la retina (RPE65) tiene la estructura representada por la fórmula lile, Illf, Illg ó Illh, en donde Z es -CH(OH)Rb-. En otras modalidades, un antagonista del epitelio pigmentario de la retina (RPE65) tiene la estructura representada por la fórmula lile, Illf, Illg ó Illh, en donde Z es CH(NH)Rb.
En otras modalidades, un antagonista del epitelio pigmentario de la retina (RPE65) tiene la estructura representada por la fórmula lile, Illf, Illg ó Illh, en donde Z es alquilo . En otras modalidades, un antagonista del epitelio pigmentario de la retina (RPE65) tiene la estructura representada por la fórmula lile, Illf, Illg ó Illh, en donde Z es haloalquilo.
En una modalidad, un antagonista del epitelio pigmentario de la retina (RPE65) es ácido 13-cis-retinóico (isoretinoina, ACCUTANE®) : En ciertas modalidades, un antagonista del epitelio pigmentario de la retina (RPE65) tiene la estructura representada por la fórmula IV: IV en donde, independientemente, cada vez que aparezca n es 1, 2, 3 ó 4; Y es -C(Rb)2~ ó -C(=0)-; X es -O-, -NRa-, -C(Rb)2" ó -(C=0)-; Z es -C(=0)Rb, -ORb, -N(Rb)2, alquilo ó haloalquilo; Ra es hidrógeno, alquilo, haloalquilo, arilo o aralquilo; Rb es hidrógeno, alquilo, haloalquilo, arilo o aralquilo.
En otras modalidades, un inhibidor del epitelio pigmentario de la retina (RPE65) tiene la estructura representada por la fórmula IV, en donde Y es -CH2- . En otras modalidades, un antagonista del epitelio pigmentario de la retina (RPE65) tiene la estructura representada por la fórmula IV, en donde X es -O- . En otras modalidades, un antagonista del epitelio pigmentario de la retina (RPE65) tiene la estructura representada por la fórmula IV, en donde Z es -C(=0)Rb; y Rb es alquilo. En otras modalidades, un antagonista del epitelio pigmentario de la retina (RPE65) tiene la estructura representada por la fórmula IV, en donde Z es alquilo. En otras modalidades, un antagonista del epitelio pigmentario de la retina (RPE65) tiene la estructura representada por la fórmula IV, en donde Y es -CH2-; X es -0-; Z es -C(=0)Rb; y Rb es alquilo.
En otras modalidades, un antagonista del epitelio pigmentario de la retina (RPE65) tiene la estructura representada por la fórmula IV, en donde Y es -CH2-; X es -0-; y Z es alquilo. En otras modalidades, un antagonista del epitelio pigmentario de la retina (RPE65) tiene la estructura representada por la fórmula IV, en donde Y es -CH2-; X es -C(=0)-; y Z es alquilo. En otras modalidades, un antagonista del epitelio pigmentario de la retina (RPE65) tiene la estructura representada por la fórmula IV, en donde Y es -CH2-; X es -C(=0)-; Z es -N(Rb)2; y Rb es alquilo.
En una modalidad, un antagonista del epitelio pigmentario de la retina (RPE65) es palmitato de geranilo (KD = 301 nM) : En una modalidad, un antagonista del epitelio pigmentario de la retina (RPE65) es palmitato de farnesilo ( D = 63 nM) En una modalidad, un antagonista del epitelio pigmentario de la retina (RPE65) es palmitato geranilgeranil (KD = 213 nM) : En una modalidad, un antagonista del epitelio pigmentario de la retina (RPE65) es geranil palmitil éter (KD= 416 nM) : En una modalidad, un antagonista del epitelio pigmentario de la retina (RPE65) es farnesil palmitil éter (KD = 60 nM) : En una modalidad, un antagonista del epitelio pigmentario de la retina (RPE65) es geranilgeranil palmitil éter (KD= 195 nM) : En una modalidad, un antagonista del epitelio pigmentario de la retina (RPE65) es el siguiente compuesto: En una modalidad, un antagonista del epitelio pigmentario de la retina (RPE65) es el siguiente compuesto (KD = 96 nM) : En una modalidad, un antagonista del epitelio pigmentario de la retina (RPE65) es el siguiente compuesto : En una modalidad, un antagonista del epitelio pigmentario de la retina (RPE65) es el siguiente compuesto (KD = 56 nM) : En una modalidad, un antagonista del epitelio pigmentario de la retina (RPE65) es farnesil octil cetona: En una modalidad, un antagonista del epitelio pigmentario de la retina (RPE65) es octil farnésimida: En una modalidad, un antagonista del epitelio pigmentario de la retina (RPE65) es palmitil farnesimia: En una modalidad, un antagonista del epitelio pigmentario de la retina (RPE65) es el siguiente compuesto (KD = 56 nM) : En ciertas modalidades, un antagonista del epitelio pigmentario de la retina (RPE65) tiene la estructura representada por la fórmula V: y en donde, independientemente, cada vez que aparezca, n es 1, 2 ó 3; Y es -C(Rb)2-, -C(=0)- ó -CH(OH)-; X es -O-, -NRa- ó -C(Rb)2-; Z es -C(=0)Rb, hidrógeno, - (CH2CH2?)pRb, alquilo o haloalquilo; Ra es hidrógeno, alquilo, haloalquilo, arilo o aralquilo; Rb es hidrógeno, alquilo, haloalquilo, arilo o aralquilo; y p es 1 a 10 inclusive.
En otras modalidades, un antagonista del epitelio pigmentario de la retina (RPE65) tiene la estructura representada por la fórmula V, en donde Y es -CH2- .
En otras modalidades, un antagonista del epitelio pigmentario de la retina (RPE65) tiene la estructura representada por la fórmula V, en donde Y es -C(=0)-. En otras modalidades, un antagonista del epitelio pigmentario de la retina (RPE65) tiene la estructura representada por la fórmula V, en donde Y es -CH(OH)-. En otras modalidades, un antagonista del epitelio pigmentario de la retina (RPE65) tiene la estructura representada por la fórmula V, en donde X es -0-. En otras modalidades, un antagonista del epitelio pigmentario de la retina (RPE65) tiene la estructura representada por la fórmula V, en donde X es -NRa- En otras modalidades, un antagonista del epitelio pigmentario de la retina (RPE65) tiene la estructura representada por la fórmula V, en donde X es -C(Rb)-. En otras modalidades, un antagonista del epitelio pigmentario de la retina (RPE65) tiene la estructura representada por la fórmula V, en donde Z es alquilo. En otras modalidades, un antagonista del epitelio pigmentario de la retina (RPE65) tiene la estructura representada por la fórmula V, en donde Z es -C(=0)Rb; y Rb es alquilo. En otras modalidades, un antagonista del epitelio pigmentario de la retina (RPE65) tiene la estructura representada por la fórmula V, en donde Z es - (CH2CH20)pRb; y Rb es alquilo.
En una modalidad, un antagonista del epitelio pigmentario de la retina (RPE65) es palmitato de ß-ionoacetilo (KD = 153 nM) : En una modalidad, un antagonista del epitelio pigmentario de la retina (RPE65) es ß-ionoacetil palmitil éter (KD = 156 nM) : En una modalidad, un antagonista del epitelio pigmentario de la retina (RPE65) es palmitato de retinilo (4a; KD = 47 nM) : En una modalidad, un antagonista del epitelio pigmentario de la retina (RPE65) es hexanoato de retinilo (4b; KD = 235nM) : En una modalidad, un antagonista del epitelio pigmentario de la retina (RPE65) es pentanoato de retinílo: En una modalidad, un antagonista del epitelio pigmentario de la retina (RPE65) es acetato de retinilo (4c; D = 1,300 nM) : En una modalidad, un antagonista del epitelio pigmentario de la retina (RPE65) es palmitil retinil éter (4d, KD = 25 nM) : En una modalidad, un antagonista del epitelio pigmentario de la retina (RPE65) es hexil retinil éter (KD = 151 nM) : En una modalidad, un antagonista del epitelio pigmentario de la retina (RPE65) es metil retinil éter (KD = 24 nM) : En una modalidad, un antagonista del epitelio pigmentario de la retina (RPE65) es retinil [2- (2'-metoxi) etoxi] etil éter (KD = 486 nM) : En una modalidad, un antagonista del epitelio pigmentario de la retina (RPE65) es: En una modalidad, un antagonista del epitelio pigmentario de la retina (RPE65) es N palmitil retinimida (KD = 40 nM) : En una modalidad, un antagonista del epitelio pigmentario de la retina (RPE65) es N,N- dimetil retinimida (KD = 3,577 nM) : En una modalidad, un antagonista del epitelio pigmentario de la retina (RPE65) es N-ter-butil retinimida (KD = 4,321 nM) : En una modalidad, un antagonista del epitelio pigmentario de la retina (RPE65) es palmitil retinil alcohol (KD = 170 nM) : En una modalidad, un antagonista del epitelio pigmentario de la retina (RPE65) es metil retinil alcohol: En una modalidad, un antagonista del epitelio pigmentario de la retina (RPE65) es palmitil retinil cetona (KD = 64 nM) : En una modalidad, un antagonista del epitelio pigmentario de la retina (RPE65) es retinil decil cetona: En una modalidad, un antagonista del epitelio pigmentario de la retina (RPE65) es metil retinil cetona ( D = 3,786 nM) : En una modalidad, un antagonista del epitelio pigmentario de la retina (RPE65) es el siguiente compuesto (4e) : En una modalidad, un antagonista del epitelio pigmentario de la retina (RPE65) es el siguiente compuesto (4f; KD = 64 nM) : En una modalidad, un antagonista del epitelio pigmentario de la retina (RPE65) es el siguiente compuesto (KD = 173 nM) : En una modalidad, un antagonista del epitelio pigmentario de la retina (RPE65) es el siguiente compuesto (KD = 3,786 nM) : En una modalidad, un antagonista del epitelio pigmentario de la retina (RPE65) es: En una modalidad, un antagonista del epitelio pigmentario de la retina (RPE65) es: En una modalidad, un antagonista del epitelio pigmentario de la retina (RPE65) es: Los compuestos antagonistas de PRE65 antes descritos, y las fórmulas generales de los compuestos, con sus diferentes definiciones de los sustituyentes y otras modalidades, también son inhibidores de LRAT, y se incorporan en la presente para referencia como inhibidores de LRAT.
Otros antagonistas de RPE65 e inhibidores de LRAT son los agentes que inhiben la palmitoilación. Por ejemplo, el 2-bromopalmitato inhibe la palmitoilación. En algunas modalidades es posible aplicar una mezcla racémica de 2-bromopalmitato para inhibir LRAT y/o antagonizar RPE65. En otras modalidades se puede aplicar ácido (R) -2-bromopalmítico purificado para inhibir LRAT y/o antagonizar RPE65. En todavía otras modalidades modalidades se puede aplicar ácido (S) -2-bromopalmítico purificado para inhibir LRAT y/o antagonizar RPE65.
En ciertas modalidades, un inhibidor de 11-cis-retinol deshidrogenasa tiene una estructura representada por la fórmula VI : en donde, independientemente, cada vez que aparezca, R es hidrógeno, alquilo, arilo o aralquilo; X es alquilo, alquenilo, -C(Rb)2-, -C(=0)-, -C(=NRa)-, -C(OH)Rb ó -C(N(Ra)2)Rb- R es hidrógeno, alquilo, cicloalquilo, alquenilo, cicloalquenilo, alquinilo, arilo, o aralquilo; Ra es hidrógeno, alquilo, arilo o aralquilo; y Rb es hidrógeno o alquilo.
En otras modalidades, un inhibidor de 11-cís-retinol deshidrogenasa tiene la estructura representada por la fórmula VI, en donde R es hidrógeno. En otras modalidades, un inhibidor de 11-cis-retinol deshidrogenasa tiene la estructura representada por la fórmula VI, en donde X es -C(Rb)2-. En otras modalidades, un inhibidor de 11-cis-retinol deshidrogenasa tiene la estructura representada por la fórmula VI, en donde X es -C(=0)-.
En ciertas modalidades, un inhibidor de 11-cis-retinol deshidrogenasa tiene la estructura representada por la fórmula Vía ó VIb: Yin ¥?lí en donde, independientemente, cada vez que aparezca, 2 R es hidrogeno, alquilo, aplo o aralquilo; R es hidrógeno, alquilo, cicloalquilo, alquenilo, cicloalquenilo, alquinilo, arilo, o aralquilo; R es hidrógeno o alquilo; Ra es hidrógeno, alquilo, arilo o aralquilo; R es hidrógeno o alquilo; y indica un enlace sencillo, un enlace doble cis ó un enlace doble trans .
En otras modalidades, un inhibidor de 11-cis-retinol deshidrogenasa tiene la estructura representada por la fórmula Vía ó VIb, en donde 2 R es hidrógeno. En otras modalidades, un inhibidor de 11-cis-retinol deshidrogenasa tiene la estructura representada por la 2 fórmula Vía ó VIb, en donde R es alquilo . En otras modalidades, un inhibidor de 11-cis-retinol deshidrogenasa tiene la estructura representada por la fórmula Vía ó VIb, en donde R es hidrógeno o metilo. En ciertas modalidades, un inhibidor de 11-cis-retinol deshidrogenasa tiene la estructura representada por la fórmula VIc, Vid ó VIe: en donde, independientemente, cada vez que aparezca, n es 1 a 5 inclusive; m es 0 a 30 inclusive; 2 R es hidrógeno, alquilo, arilo o aralquilo; 2 R es hidrógeno, alquilo, cicloalquilo, alquenilo, cicloalquenilo, alquinilo, arilo, o aralquilo; 3 R es hidrógeno o alquilo; 4 R es hidrógeno, halógeno, alquilo, alquenilo, alquinilo, acrilo, heteroarilo, aralquilo, aralquenilo, aralquinilo, heteroaralquilo, heteroaralquenilo, heteroaralquinilo, ciano, nitro, sulfhidrilo, hidroxilo, sulfonilo, amino, acilamino, amido, alquiltio, carboxilo, carbamoilo, alcoxilo, sulfonato, sulfato, sulfonamido, sulfamoilo, sulfonilo, y sulfóxido; Ra es hidrógeno, alquilo, arilo o aralquilo; y Rb es hidrógeno o alquilo.
En otras modalidades, un inhibidor de 11-cis-retinol deshidrogenasa tiene la estructura representada por la 2 fórmula VIc, en donde R es hidrógeno .
En otras modalidades, un inhibidor de 11-cis-retinol deshidrogenasa tiene la estructura representada por la fórmula VIc, en donde R es hidrógeno. En otras modalidades, un inhibidor de 11-cis-retinol deshidrogenasa tiene la estructura representada por la fórmula VIc, en donde R 1 es hidrógeno; y R4 es hidrogeno.
En otras modalidades, un inhibidor de 11-cis-retinol deshidrogenasa tiene la estructura representada por la fórmula Vid, en donde n es 1, 2 ó 3. En otras modalidades, un inhibidor de 11-cis-retinol deshidrogenasa tiene la estructura representada por la fórmula Vid, en donde R 3 es metilo. En otras modalidades, un inhibidor de 11-cis-retinol deshidrogenasa tiene la estructura representada por la fórmula Vid, en donde R es hidrógeno. En otras modalidades, un inhibidor de 11-cis-retinol deshidrogenasa tiene la estructura representada por la 3 fórmula Vid, en donde n es 1, 2 ó 3; R es metilo. En otras modalidades, un inhibidor de 11-cis-retinol deshidrogenasa tiene la estructura representada por la fórmula Vid, en donde n es 1, 2 ó 3; R 3 es metilo; y R1 es hidrógeno . En otras modalidades, un inhibidor de 11-cis-retinol deshidrogenasa tiene la estructura representada por la fórmula Vle, en donde R es hidrógeno.
En otras modalidades, un inhibidor de 11-cis-retinol deshidrogenasa tiene la estructura representada por la fórmula VIe, en donde m es 1 a 10 inclusive. En otras modalidades, un inhibidor de 11-cis-retinol deshidrogenasa tiene la estructura representada por la fórmula VIe, en donde m es 11 a 20 inclusive. En otras modalidades, un inhibidor de 11-cis-retinol deshidrogenasa tiene la estructura representada por la 2 fórmula VIe, en donde m es 11 a 20 inclusive; y R es hidrógeno. Los inhibidores de 11-cis-retinol deshidrogenasa que tienen estructuras representadas por la fórmula VIe se pueden obtener de acuerdo con diversos enfoques de biblioteca como se muestra en el Esquema 1, entre otras formas : Esquema 1 En una modalidad, un inhibidor de 11-cis-retinol deshidrogenasa es el ácido 13-cis-retinóico (isoretinoina, ACCUTANE®) : También se incluyen las sales de adición y los compuestos aceptados para uso farmacéutico de los compuestos de las fórmulas antes mencionadas. En casos en donde los compuestos pueden tener uno o más centros quirales, a menos que se especifique, los compuestos considerados en la presente pueden ser un solo estereoisómero o mezclas racémicas de estereoisómeros. Además se incluyen los profármacos, análogos y derivados de éstos.
En algunas modalidades es posible combinar dos o más inhibidores de enzimas y/o inhibidores de unión a RPE65. En algunas modalidades es posible combinar un inhibidor de enzima y/o inhibidor de unión a RPE65 con un compuesto que haga el corto circuito. Es posible seleccionar combinaciones para inhibir los pasos sucesivos del ciclo visual (es decir, dos pasos que ocurran uno inmediatamente después del otro) .
En ciertas modalidades, un inhibidor de isomerohidrolasa (IMH) , puede ser un compuesto que tenga la estructura representada por la fórmula general 1: en donde, independientemente, cada vez que aparezca R, Rl r R y R3 son H, alquilo, alquenilo, alquinilo arilo, aralquilo, heteroarilo ó heteroaralquilo; y Y son O, NR, R ó S; X es H, alquilo, haloalquilo, arilo ó haluro; m y n son enteros de 1 a 6 inclusive, y p es un entero de 0 a 6 inclusive.
En otra modalidad, el inhibidor de IMH tiene la estructura de la fórmula 1 y las definiciones acompañantes, en donde R2 y R3 son H ó Me. En otra modalidad, el inhibidor de IMH tiene la estructura de la fórmula 1 y las definiciones acompañantes, en donde m es 2. En otra modalidad, el inhibidor de IMH tiene la estructura de la fórmula 1 y las definiciones acompañantes, en donde n es 2.
En otra modalidad, el inhibidor de IMH tiene la estructura de la fórmula 1 y las definiciones acompañantes, en donde es O. En otra modalidad, el inhibidor de IMH tiene la estructura de la fórmula 1 y las definiciones acompañantes, en donde W es C. En otra modalidad, el inhibidor de IMH tiene la estructura de la fórmula 1 y las definiciones acompañantes, en donde Y es 0. En otra modalidad, el inhibidor de IMH tiene la estructura de la fórmula 1 y las definiciones acompañantes, en donde p es 1. En otra modalidad, el inhibidor de IMH tiene la estructura de la fórmula 1 y las definiciones acompañantes, en donde X es Br. En otra modalidad, el inhibidor de IMH tiene la estructura de la fórmula 1 y las definiciones acompañantes, en donde R2 y R3 es H ó Me, y m es 2. En otra modalidad, el inhibidor de IMH tiene la estructura de la fórmula 1 y las definiciones acompañantes, en donde R2 y R3 es H o Me, m es 2, y n es 2. En otra modalidad, el inhibidor de IMH tiene la estructura de la fórmula 1 y las definiciones acompañantes, en donde R2 y R3 es H o Me, m es 2, n es 2, y W es O.
En otra modalidad, el inhibidor de IMH tiene la estructura de la fórmula 1 y las definiciones acompañantes, en donde 2 y R3 es H o Me, m es 2, n es 2, W es O, y Y es O. En otra modalidad, el inhibidor de IMH tiene la estructura de la fórmula 1 y las definiciones acompañantes, en donde R2 y R3 es H ó Me, m es 2, n es 2, W es O, Y es O, y p es 1. En otra modalidad, el inhibidor de IMH tiene la estructura de la fórmula 1 y las definiciones acompañantes, en donde R2 y R3 es H ó Me, m es 2, n es 2, W es O, Y es O, p es 1 y X es Br. En una modalidad, un inhibidor de isomerohidrolasa es 11-cis-retinil bromoacetato (cRBA) : C O C? dr En ciertas modalidades, un inhibidor de IMH puede ser un compuesto de la fórmula 8a: en donde, independientemente, cada vez que aparezca: X es O, S, NR' , CH2 ó NHNR' ; Z es O ó NOH; R2 es -CH2F, -CHF2, -CF3, -CH2N2, -CH2C (O) OR, -OR' , -C(0)CHR', -C(NH)CHR', ó -CH=CHR' ; R' es H, alquilo, heteroalquilo, arilo, heteroarilo, aralquilo o heteroaralquilo; R" ' es CH3 ó H; y n es 0, 1 ó 2; en donde indica un enlace sencillo, un enlace doble cis ó un enlace doble trans .
Los compuestos de la fórmula 8a se pueden considerar inhibidores irreversibles de IMH porque estos se pueden unir en forma covalente a IHM, deshabilitándolo permanentemente .
En ciertas modalidades, un inhibidor de IMH puede ser un compuesto de la fórmula 8a en donde Z es O.
En ciertas modalidades, un inhibidor de IMH puede ser un compuesto de la fórmula 8b: R{ Sb en donde, independientemente, cada vez que aparezca Y es C=0, C=S, C=NR' ó CH2; Rl es R' , -OR' ó -CN; R' es H, alquilo, heteroalquilo, arilo, heteroarilo, aralquilo ó heteroaralquilo; R" ' es CH3 ó H; y n es 0, 1 ó 2; en donde indica un enlace sencillo, un enlace doble cis ó un enlace doble trans .
Los compuestos de la fórmula 8b se pueden considerar inhibidores irreversibles de IMH porque estos se pueden unir en forma no covalente a IHM, deshabilitándolo permanentemente .
En ciertas modalidades, un inhibidor de IMH puede ser un compuesto de la fórmula 8c: 8c en donde, independientemente, cada vez que aparezca X es O, S, NR' , CH2 ó NHNR' ; Z es O ó NOH; Rx es -CH2F, -CHF2, -CF3, -CH2N2, -CH2C(0)OR, -OR' , -C(0)CHR', -C(NH)CHR' ó -CH=CHR' ; R' es H, alquilo, heteroalquilo, arilo, heteroarilo, aralquilo o heteroaralquilo; R" ' es CH3 ó H; y n es 0, 1 ó 2.
Los compuestos de la fórmula 8c se pueden considerar inhibidores irreversibles de IMH porque estos se pueden unir en forma covalente a IHM, deshabilitándolo permanentemente .
En ciertas modalidades, un inhibidor de IMH puede ser un compuesto de la fórmula 8c en donde Z es O.
En ciertas modalidades, un inhibidor de IMH puede ser un compuesto de la fórmula 8d: en donde, independientemente, cada vez que aparezca Y es C=0, C=S, C=NR' ó CH2; Rx es R' , -OR' ó -CN; R' es H, alquilo, heteroalquilo, arilo, heteroarilo, aralquilo ó heteroaralquilo; R" ' es CH3 ó H; y n es 0, 1 6 2.
Los compuestos de la fórmula 8d se pueden considerar inhibidores irreversibles de IMH porque estos se pueden unir en forma no covalente a IHM, deshabilitándolo permanentemente.
En ciertas modalidades, un inhibidor de LRAT puede ser un compuesto que tenga una estructura representada por la estructura general 2: en donde, independientemente, cada vez que aparezca: R, i, R2 y R3 son H, alquilo, alquenilo, alquinilo, arilo, aralquilo, heteroarilo ó heteroaralquilo; W y Y son O, NR, R ó S; X es H, alquilo, haloalquilo ó arilo; m y n son enteros de 1 a 6 inclusive, y p es un entero de 0 a 6 inclusive.
En otra modalidad, el inhibidor de LRAT tiene la estructura de la fórmula 2 y las definiciones acompañantes, en donde R2 y R3 son H ó Me. - En otra modalidad, el inhibidor de LRAT tiene la estructura de la fórmula 2 y las definiciones acompañantes, en donde m es 3. En otra modalidad, el inhibidor de LRAT tiene la estructura de la fórmula 2 y las definiciones acompañantes, en donde n es 1. En otra modalidad, el inhibidor de LRAT tiene la estructura de la fórmula 2 y las definiciones acompañantes, en donde W es 0. En otra modalidad, el inhibidor de LRAT tiene la estructura de la fórmula 2 y las definiciones acompañantes, en donde W es C. En otra modalidad, el inhibidor de LRAT tiene la estructura de la fórmula 2 y las definiciones acompañantes, en donde Y es 0. En otra modalidad, el inhibidor de LRAT tiene la estructura de la fórmula 2 y las definiciones acompañantes, en donde p es 0. En otra modalidad, el inhibidor de LRAT tiene la estructura de la fórmula 2 y las definiciones acompañantes, en donde X es OCF3.
En otra modalidad, el inhibidor de LRAT tiene la estructura de la fórmula 2 y las definiciones acompañantes, en donde R2 y R3 es H ó Me, y m es 3. En otra modalidad, el inhibidor de LRAT tiene la estructura de la fórmula 2 y las definiciones acompañantes, en donde R2 y R3 es H o Me, m es 3, y n es 1. En otra modalidad, el inhibidor de LRAT tiene la estructura de la fórmula 2 y las definiciones acompañantes, en donde R2 y R3 es H o Me, m es 3, n es 1, y W es 0. En otra modalidad, el inhibidor de LRAT tiene la estructura de la fórmula 2 y las definiciones acompañantes, en donde R2 y R3 es H o Me, m es 3, n es 1, es 0, y Y es 0. En otra modalidad, el inhibidor de LRAT tiene la estructura de la fórmula 2 y las definiciones acompañantes, en donde R2 y R3 es H ó Me, m es 3, n es 1, W es 0, Y es 0, y p es 0. En otra modalidad, el inhibidor de LRAT tiene la estructura de la fórmula 2 y las definiciones acompañantes, en donde R y R3 es H ó Me, m es 3, n es 1, W es 0, Y es 0, p es 0 y X es 0CF3. ün inhibidor ejemplar de LRAT es todo-trans-retinil a-bromoacetato. Otro inhibidor ejemplar de LRAT es 13- desmetil-13, 14-dihidro-todo-trans-retinil trifluoroacetato (RFA) : En ciertas modalidades, un compuesto que interfiere con la unión a RPE65 puede ser un compuesto que tenga la estructura representada por la estructura general 3: en donde, independientemente, cada vez que aparezca: R y Ri, son H, alquilo, alquenilo, alquinilo, arilo, aralquilo, heteroarilo ó heteroaralquilo; R2 es H, alquilo, alquenilo, alquinilo, arilo, aralquilo, heteroarilo ó heteroaralquilo ó C02R; 3 es H, alquilo, alquenilo, alquinilo, arilo, aralquilo, heteroarilo, heteroaralquilo ó CH20R4; R4 es H, alquilo, alquenilo, alquinilo, arilo, aralquilo, heteroarilo, heteroaralquilo, heterociclilo; y m es un entero de 1 a 6 inclusive.
En otra modalidad, el inhibidor de LRAT tiene la estructura de la fórmula 3 y las definiciones acompañantes, en donde R2 es H, Me ó -C02H. En otra modalidad, el inhibidor de LRAT tiene la estructura de la fórmula 3 y las definiciones acompañantes, en donde m es 4. En otra modalidad, el inhibidor de LRAT tiene la estructura de la fórmula 3 y las definiciones acompañantes, en donde R3 es H. En otra modalidad, el inhibidor de LRAT tiene la estructura de la fórmula 3 y las definiciones acompañantes, en donde R2 es H, Me ó -C02H y m es 4. En otra modalidad, el inhibidor de LRAT tiene la estructura de la fórmula 3 y las definiciones acompañantes, en donde R2 es H, Me ó -C02H, m es 4 y R3 es H. En ciertas modalidades, un inhibidor de LRAT puede ser un compuesto de la fórmula 6a: FL X' en donde, independientemente, cada vez que aparezca: X es O, S, NR' , CH2 ó NHNR' ; Z es O ó NOH; Rl es -CH2F, -CHF2, -CF3, -CH2N2, -CH2C(0)OR, -OR' , -C(0)CHR', -C(NH)CHR' ó -CH=CHR' ; R' es H, alquilo, heteroalquilo, arilo, heteroarilo, aralquilo o heteroaralquilo; n es 1, 2 ó 3; en donde indica un enlace sencillo, un enlace doble cis ó un enlace doble trans .
Los compuestos de la fórmula 6a se pueden considerar inhibidores irreversibles de LRAT porque estos se pueden unir en forma covalente a LRAT, deshabilitándolo permanentemente .
En ciertas modalidades, un inhibidor de LRAT puede ser un compuesto de la fórmula 6a en donde Z es O. En ciertas modalidades, un inhibidor de LRAT puede ser un compuesto de la fórmula 6b: éb Y es C=0, C=S, C=NR' ó CH2; Rl es R' , -OR' ó -CN; R' es H, alquilo, heteroalquilo, arilo, heteroarilo, aralquilo ó heteroaralquilo; n es 1, 2 ó 3; en donde indica un enlace sencillo, un enlace doble cis ó un enlace doble trans .
Los compuestos de la fórmula 6c se pueden considerar inhibidores irreversibles de LRAT porque estos se pueden unir en forma no covalente a LRAT, deshabilitándolo permanentemente .
En ciertas modalidades, un inhibidor de LRAT puede ser un compuesto de la fórmula 6c: Z R XJlRi 6c en donde, independientemente, cada vez que aparezca: X es O, S, NR' , CH2 ó NHNR' ; Z es O ó NOH; Rl es -CH2F, -CHF2, -CF3, -CH2N2, -CH2C(0)OR, -OR' , -C(0)CHR', -C(NH)CHR' ó -CH=CHR' ; R' es H, alquilo, heteroalquilo, arilo, heteroarilo, aralquilo o heteroaralquilo; n es 1, 2 ó 3.
Los compuestos de la fórmula 6C se pueden considerar inhibidores irreversibles de LRAT porque estos se pueden unir en forma covalente a LRAT, deshabilitándolo permanentemente .
En ciertas modalidades, un inhibidor de LRAT puede ser un compuesto de la fórmula 6c en donde Z es O. En ciertas modalidades, un inhibidor de LRAT puede ser un compuesto de la fórmula 6d: 64 Y es C=0, C=S, C=NR' ó CH2; Rx es R',-OR' ó -CN; R' es H, alquilo, heteroalquilo, arilo, heteroarilo, aralquilo ó heteroaralquilo; n es 1, 2 6 3 .
Los compuestos de la fórmula 6C se pueden considerar inhibidores irreversibles de LRAT porque estos se pueden unir en forma no covalente a LRAT, deshabilitándolo permanentemente .
Una modalidad ejemplar de un compuesto que interfiere con la unión a RPE65 es ácido 13-cis-retinóico (isoretinoina, ACCUTANE®) : El ácido 13-cis-retinóico se convierte in vivo en el ácido todo-trans-retinóico, que es un inhibidor poderoso de la función de RPE65.
En ciertas modalidades, un antagonista de RPE65 es un compuesto que tiene la estructura representada por la estructura general 4 : en donde, independientemente, cada vez que aparezca: R, i, R2 son H, alquilo, alquenilo, alquinilo, arilo, aralquilo, heteroarilo, heteroaralquilo, alcoxi, ariloxi, amino, halo, hidroxi ó carboxilo; R3 es alquilo, alquenilo, alquinilo arilo, aralquilo, heteroarilo, heteroaralquilo o éter; L es H, OH, NH2, N(R)2, alcoxi, ariloxi, halo, hidroxi, carboxilo ó dos L tomados juntos representan O, S ó NR; X es C(R)2, O, S ó NR; y m es un entero de 1 a 6 inclusive.
En otra modalidad, un antagonista de RPE65 tiene la estructura de la fórmula 4 y las definiciones acompañantes, en donde X es O.
En otra modalidad, un antagonista de RPE65 tiene la estructura de la fórmula 4 y las definiciones acompañantes, en donde X es CH2. En otra modalidad, un antagonista de RPE65 tiene la estructura de la fórmula 4 y las definiciones acompañantes, en donde X es NH. En otra modalidad, un antagonista de RPE65 tiene la estructura de la fórmula 4 y las definiciones acompañantes, en donde dos L tomados juntos representan O. En otra modalidad, un antagonista de RPE65 tiene la estructura de la fórmula 4 y las definiciones acompañantes, en donde dos L tomados juntos representan NOH. En otra modalidad, un antagonista de RPE65 tiene la estructura de la fórmula 4 y las definiciones acompañantes, en donde L es H, OH ó NH2. En otra modalidad, un antagonista de RPE65 tiene la estructura de la fórmula 4 y las definiciones acompañantes, en donde cada L es H. En otra modalidad, un antagonista de RPE65 tiene la estructura de la fórmula 4 y las definiciones acompañantes, en donde m es 4. En otra modalidad, un antagonista de RPE65 tiene la estructura de la fórmula 4 y las definiciones acompañantes, en donde m es 3.
En otra modalidad, un antagonista de RPE65 tiene la estructura de la fórmula 4 y las definiciones acompañantes, en donde R2 es H ó metilo. En otra modalidad, un antagonista de RPE65 tiene la estructura de la fórmula 4 y las definiciones acompañantes, en donde R3 es alquilo. En otra modalidad, un antagonista de RPE65 tiene la estructura de la fórmula 4 y las definiciones acompañantes, en donde R3 es éter. En otra modalidad, un antagonista de RPE65 tiene la estructura de la fórmula 4 y las definiciones acompañantes, en donde X es 0 y dos L tomados juntos representan 0. En otra modalidad, un antagonista de RPE65 tiene la estructura de la fórmula 4 y las definiciones acompañantes, en donde X es 0 y cada L es H. En otra modalidad, un antagonista de RPE65 tiene la estructura de la fórmula 4 y las definiciones acompañantes, en donde X es NH y dos L tomados juntos representan 0. En otra modalidad, un antagonista de RPE65 tiene la estructura de la fórmula 4 y las definiciones acompañantes, en donde X es CH2 y dos L tomados juntos representan 0.
En otra modalidad, un antagonista de RPE65 tiene la estructura de la fórmula 4 y las definiciones acompañantes, en donde X es CH2 y dos L tomados juntos representan NOH. En otra modalidad, un antagonista de RPE65 tiene la estructura de la fórmula 4 y las definiciones acompañantes, en donde X es 0, dos L tomados juntos representan 0, R2 es H ó metilo, m es 4 y R3 es alquilo de C15. En otra modalidad, un antagonista de RPE65 tiene la estructura de la fórmula 4 y las definiciones acompañantes, en donde X es 0, dos L tomados juntos representan 0, R2 es H ó metilo, m es 4 y R3 es alquilo de C5. En otra modalidad, un antagonista de RPE65 tiene la estructura de la fórmula 4 y las definiciones acompañantes, en donde X es 0, dos L tomados juntos representan 0, R2 es H ó metilo, m es 4 y R3 es metilo. En otra modalidad, un antagonista de RPE65 tiene la estructura de la fórmula 4 y las definiciones acompañantes, en donde X es 0, cada L es H, R2 es H ó metilo, es 4 y R3 es alquilo de C15. En otra modalidad, un antagonista de RPE65 tiene la estructura de la fórmula 4 y las definiciones acompañantes, en donde X es NH, dos L tomados juntos representan O, R2 es H ó metilo, m es 4 y R3 es alquilo de C15. En otra modalidad, un antagonista de RPE65 tiene la estructura de la fórmula 4 y las definiciones acompañantes, en donde X es CH2, dos L tomados juntos representan 0, R2 es H ó metilo, m es 4 y R3 es alquilo de C15. En otra modalidad, un antagonista de RPE65 tiene la estructura de la fórmula 4 y las definiciones acompañantes, en donde X es O, cada L es H, R2 es H ó metilo, m es 4 y R3 es un éter. En otra modalidad, un antagonista de RPE65 tiene la estructura de la fórmula 4 y las definiciones acompañantes, en donde X es 0, cada L es H, R2 es H ó metilo, es 4 y R3 es -CH2OCH2CH2OCH2CH2OC7H15. En otra modalidad, un antagonista de RPE65 tiene la estructura de la fórmula 4 y las definiciones acompañantes, en donde X es CH2, dos L tomados juntos representan NOH, R2 es H ó metilo, m es 4 y R3 es alquilo de C15. En otra modalidad, un antagonista de RPE65 tiene la estructura de la fórmula 4 y las definiciones acompañantes, en donde X es CH2, L es H, OH ó NH2, R2 es H ó metilo, m es 4 y R3 es alquilo de C15.
En ciertas modalidades, un inhibidor de RPE65 puede ser un compuesto de la fórmula 7a: 7a en donde, independientemente, cada vez que aparezca: X es 0, S, NR' , CH2 ó NHNR' ; Z es 0 ó NOH; Rl es -CH2F, -CHF2, -CF3, -CH2N2, -CH2C(0)0R, -OR' , -C(0)CHR', -C(NH)CHR' ó -CH=CHR' ; R' es H, alquilo, heteroalquilo, arilo, heteroarilo, aralquilo o heteroaralquilo; n es 1, 2 6 3; ^^ indica un enlace sencillo, un enlace doble cis ó un enlace doble trans .
Los compuestos de la fórmula 7a se pueden considerar inhibidores irreversibles de RPE65 porque estos se pueden unir en forma covalente a RPE65, deshabilitándolo permanentemente .
En ciertas modalidades, un inhibidor de RPE65 puede ser un compuesto de la fórmula 7a en donde Z es 0. En ciertas modalidades, un inhibidor de RPE65 puede ser un compuesto de la fórmula 7b: ?í> en donde, independientemente, cada vez que aparezca: Y es O, S, NR' , CH2=0, C=S, C=NR' , CHOR' , CHNR'R", CHSR' ó CH2; Rl es R',-OR', -CN ó (CH2CH20)mR ; R' es H, alquilo, heteroalquilo, arilo, heteroarilo, aralquilo ó heteroaralquilo; R' ' es H, alquilo, heteroalquilo, arilo, heteroarilo, aralquilo ó heteroaralquilo; m es 1, 2 ó 3; n es 1, 2 6 3; en donde ^ indica un enlace sencillo, un enlace doble cis ó un enlace doble trans .
Los compuestos de la fórmula 7b se pueden considerar inhibidores irreversibles de RPE65 porque estos se pueden unir en forma no covalente a RPE65, deshabilitándolo permanentemente .
En ciertas modalidades, un inhibidor de RPE65 puede ser un compuesto de la fórmula 7c: ?c en donde, independientemente, cada vez que aparezca: X es O, S, NR' , CH2 ó NHNR' ; Z es O ó NOH; i es -CH2F, -CHF2, -CF3, -CH2N2, -CH2C(0)OR, -OR' , -C (O) CHR' , -C (NH) CHR' ó -CH=CHR' ; R' es H, alquilo, heteroalquilo, arilo, heteroarilo, aralquilo o heteroaralquilo; or n es 1, 2 ó 3.
Los compuestos de la fórmula 7c se pueden considerar inhibidores irreversibles de RPE65 porque estos se pueden unir en forma covalente a RPE65, deshabilitándolo permanentemente .
En ciertas modalidades, un inhibidor de RPE65 puede ser un compuesto de la fórmula 7c en donde Z es 0. En ciertas modalidades, un inhibidor de RPE65 puede ser un compuesto de la fórmula 7d: 7c¡ en donde, independientemente, cada vez que aparezca: Y es C=0, C=S, C=NR', CHOH, CHOR' , NH2, NHR', NR'R", SH, SR' ó CH2; Rl es R', -OR', -CN ó - (CH2CH20)mR' ; R' es H, alquilo, heteroalquilo, arilo, heteroarilo, aralquilo ó heteroaralquilo; R' ' es H, alquilo, heteroalquilo, arilo, heteroarilo, aralquilo ó heteroaralquilo; m es 1, 2 ó 3; y n es 1, 2 ó 3.
B. Composiciones para hacer el corto circuito El corto circuito del ciclo visual se puede lograr catalizando la isomerización corriente abajo, en forma termodinámica, del 11-cis-retinal a 11-trans-retinal en el RPE, antes de que el 11-cis-retinal salga del RPE. La Figura 3 representa una intervención posible. Para este uso esta considerada una variedad muy amplia de sustancias. En general, los fármacos apropiados incluyen derivados de anilina, es decir, un anillo de benceno con una cadena lateral amina.
Las moléculas para el corto circuito operan formando primero una base de Schiff con un retinal. Cuando se forma una base de Schiff, con 11-cis-retinal ocurre la isomerización. Este es el corto circuito.
Los compuestos para el corto circuito también pueden atrapar retinales para que estos no están disponibles para formar 2E, sus precursores o análogos. Con todo-trans-retinal es posible formar una base de Schiff relativamente estable con los fármacos que atrapan el todo-trans-retinal y evitan la formación A2E y compuestos similares. Los fármacos para el corto circuito compiten con fosfatidil etanolamina para la unión de todo-trans-retinal. Los compuestos atrapados entonces se pueden romper en lisozimas y metabolitos no tóxicos. Un fármaco para corto circuito puede romper el ciclo visual en una o dos formas, es decir, mediante el corto circuito de los 11-cis-retinales y/o atrapando los todo-trans-retinales . (El 2E se caracteriza mejor de las lipofusinas. Estos pueden ser otros aductos entre todo-trans-retinal y aminas —o incluso proteínas— cuya formación se inicia mediante la formación de la base de Schiff entre un retinal reactivo y una amina.
Aunque no se espera que una base de Schiff amina aromática/todo- rans-retinal forme moléculas tipo A2E (por que primero serán degradadas) , esto se puede estar de manera más confiable utilizando un fármaco corto circuitador que es una amina secundaria. Esto se debe a que el mecanismo de formación de A2E necesita una amina primaria (dos H libres) por que se forman dos nuevos enlaces N-alquilo (uno con cada molécula todo-trans-retinal) y esto no puede suceder comenzando con una amina secundaria o terciaria. Si el fármaco para el corto circuito es una amina secundaria, entonces esta se puede unir solo a una molécula de todo-trans-retinal y no tiene un lugar restante para unirse a un segundo todo-trans-retinal, impidiendo con ello la formación de compuestos análogos a A2E semejante al proceso que se muestra en la Figura 2.
Los fármacos para el corto circuito también pueden proporcionar un efecto a largo plazo, de modo que su administración puede ser poco frecuente. En algunos casos, la administración puede ser necesaria cada mes. En otros casos, la administración puede ser necesaria cada semana. Los fármacos para el corto circuito agotan eficazmente las reservas de vitamina A localmente en el ojo atrapando el todo-trans-retinal. Una vez que la reserva de vitamina se disminuye mediante el medicamento, se deteriora el ciclo visual, y se retarda la formación de lipofuscina, que es la meta del tratamiento. Las reservas de vitamina A se reabastecen solo muy lentamente en el ojo, de modo que una sola administración del fármaco para el corto circuito puede tener un efecto prolongado. Además, los fármacos para el corto circuito se pueden aclarar lentamente del ojo, de modo que estos pueden estar disponibles para unirse durante tiempo prolongado .
En algunas modalidades, un compuesto corto circuitador tiene la estructura que se representa por la fórmula VII: en donde, independientemente de cada vez que aparezca: R es H, alquilo, alquenilo, alquinilo, arilo, aralquilo, heteroarilo, heteroaralquilo ó carbonilo; L es una porción hidrofóbica, o cualquiera de dos L contiguos, tomados juntos, forman un anillo aromático o heteroaromático fusionado (por ejemplo un naftaleno, antraceno, indol, quinolina, etcétera) .
En ciertas modalidades, independientemente, cada vez que aparezca, L es alquilo, alquenilo, alquinilo, arilo, aralquilo, heteroarilo, heteroaralquilo, carbonilo, éter ó policíclico. En ciertas modalidades, L tiene la fórmula en donde, independientemente, cada vez que aparezca: R' y X son hidrógeno, alquilo, alquenilo, alquinilo, arilo, aralquilo, heteroarilo, heteroaralquilo, carbonilo, alcoxi, hidroxi, tiol, tioalquilo ó amino; y m es un entero desde 1 hasta 6 inclusive.
En algunas modalidades, un fármaco para el corto circuito puede ser representado por la siguiente fórmula genérica Vllb: Vllb en donde n es un entero de 1 a 8 inclusive.
En algunas modalidades, un fármaco para el corto circuito puede ser representado por la siguiente fórmula genérica VIIc: en donde, independientemente, cada vez que aparezca: R es H, alquilo ó acílo; y R' es alquilo ó éter.
En otra modalidad, un fármaco para el corto circuito tiene la estructura de la fórmula VIIc y las definiciones acompañantes, en donde R es H para ambas veces que aparece [sic] . En otra modalidad, un fármaco para el corto circuito tiene la estructura de la fórmula VIIc y las definiciones acompañantes, en donde R es alquilo. En otra modalidad, un fármaco para el corto circuito tiene la estructura de la fórmula VIIc y las definiciones acompañantes, en donde R es metilo.
En algunas modalidades, un fármaco para el corto circuito puede ser representado por la siguiente fórmula genérica Vlld: en donde, independientemente, cada vez que aparezca: R es H, alquilo ó acilo; y R' es alquilo ó éter.
En otra modalidad, un fármaco para el corto circuito tiene la estructura de la fórmula Vlld y las definiciones acompañantes, en donde R es H para ambas veces que aparece.
En otra modalidad, un fármaco para el corto circuito tiene la estructura de la fórmula Vlld y las definiciones acompañantes, en donde R es alquilo. En otra modalidad, un fármaco para el corto circuito tiene la estructura de la fórmula Vlld y las definiciones acompañantes, en donde R es metilo.
En algunas modalidades, un fármaco para el corto circuito puede ser representado por la siguiente fórmula genérica Vlle: en donde, independientemente, cada vez que aparezca: X es hidrógeno ó -(=0)0Rf ; R es H, alquilo ó acilo; y R' es alquilo.
En otra modalidad, un fármaco para el corto circuito tiene la estructura de la fórmula Vlle y las definiciones acompañantes, en donde R es H. En otra modalidad, un fármaco para el corto circuito tiene la estructura de la fórmula Vlle y las definiciones acompañantes, en donde por lo menos un R es alquilo.
En otra modalidad, un fármaco para el corto circuito tiene la estructura de la fórmula Vlle y las definiciones acompañantes, en donde R es metilo.
En algunas modalidades, un fármaco para el corto circuito puede ser representado por la siguiente fórmula genérica Vllf: Till¬ en donde, independientemente, cada vez que aparezca: R es H, alquilo ó acilo; y R' es alquilo.
En otra modalidad, un fármaco para el corto circuito tiene la estructura de la fórmula Vllf y las definiciones acompañantes, en donde R es H. En otra modalidad, un fármaco para el corto circuito tiene la estructura de la fórmula Vllf y las definiciones acompañantes, en donde por lo menos un R es alquilo. En otra modalidad, un fármaco para el corto circuito tiene la estructura de la fórmula Vllf y las definiciones acompañantes, en donde R es metilo.
En una modalidad, un fármaco para el corto circuito aminofenoxipentano: En una modalidad, un fármaco para el corto circuito netidina: EtO~"<\ - HCOCHÍ En una modalidad, un fármaco para el corto circuito icaina : En una modalidad, un fármaco para el corto circuito butilanalina: En una modalidad, un fármaco para el corto circuito metil-4-butilanalina: En una modalidad, un fármaco para el corto circuito il-3-aminobenzoato : En una modalidad, un fármaco para el corto circuito metil-3-aminobenzoato : En una modalidad, un fármaco para el corto circuito il-2-aminobenzoato: En una modalidad, un fármaco para el corto circuito es N-metil-2-aminobenzoato : En algunas modalidades, un fármaco para el corto circuito puede ser representado por la siguiente fórmula genérica VIII: v en donde R' es hidrógeno, alquilo ó éter; o cualquiera de dos L contiguos, tomados juntos, forman un anillo aromático o heteroaromático fusionado (por ejemplo un naftaleno, antraceno, etcétera.) En ciertas modalidades, un fármaco para el corto circuito tiene la estructura representada por la fórmula IX: A?R, en donde, independientemente, cada vez que aparezca: R es H, alquilo, alquenilo, alquinilo, arilo, aralquilo, heteroarilo, heteroaralquilo ó carbonilo; y A es arilo ó heteroarilo opcionalmente sustituidos.
En algunas modalidades, un fármaco para el corto circuito puede ser representado por la siguiente fórmula genérica X: AC(=0)NHNH2 X en donde, independientemente, cada vez que aparezca: R' es hidrógeno, alquilo ó éter; y A es opcionalmente arilo sustituido ó heteroarilo.
En ciertas modalidades, un fármaco para el corto circuito puede tener la estructura representada por la estructura general 5: en donde, independientemente, cada vez que aparezca: R' es H, alquilo, alquenilo, alquinilo, arilo, aralquilo, heteroarilo, heteroaralquilo ó carbonilo; y L es una porción hidrofóbica o cualquiera de dos L contiguos, tomados juntos, forman un anillo aromático fusionado; y n es un entero de 0 a 5 inclusive.
En ciertas modalidades, independientemente, cada vez que aparezca, L es alquilo, alquenilo, alquinilo, arilo, aralquilo, heteroarilo, heteroaralquilo, carbonilo, éter ó policíclico. En ciertas modalidades, L tiene la fórmula 5a: -o-tco&fcjto-o ~- & <x>f 5a en donde, independientemente, cada vez que aparezca: R' y X son H, alquilo, alquenilo, alquinilo, arilo, aralquilo, heteroarilo, heteroaralquilo, carbonilo, alcoxi, hidroxi, tiol, tioalquilo ó amino; m es un entero de 1 a 6 inclusive; y p es un entero de 0 a 5 inclusive.
Los ejemplos específicos seleccionados de fármacos para el corto circuito incluyen diaminofenoxipentano : fenetidina: y tricaina: En algunas modalidades, un fármaco para el corto circuito puede ser representado por la siguiente fórmula genérica 5b: 5b en donde n es un entero de 1 a 8 inclusive.
En algunas modalidades, un fármaco para el corto circuito puede ser representado por la siguiente fórmula genérica 5c: 5c en donde, independientemente, cada vez que aparezca: R es H, alquilo ó acilo; y R' es alquilo ó éter.
En otra modalidad, un fármaco para el corto circuito tiene la estructura de la fórmula 5c y las definiciones acompañantes, en donde R es H para ambas veces que aparece. En otra modalidad, un fármaco para el corto circuito tiene la estructura de la fórmula 5c y las definiciones acompañantes, en donde R es alquilo. En otra modalidad, un fármaco para el corto circuito tiene la estructura de la fórmula 5c y las definiciones acompañantes, en donde R es metilo. En algunas modalidades, un fármaco para el corto circuito puede ser representado por la siguiente fórmula genérica 5cl: Sel en donde, independientemente, cada vez que aparezca: R es H, alquilo ó acilo; y R' es alquilo ó éter.
En otra modalidad, un fármaco para el corto circuito tiene la estructura de la fórmula 5cl y las definiciones acompañantes, en donde R es H para ambas veces que aparece . En otra modalidad, un fármaco para el corto circuito tiene la estructura de la fórmula 5cl y las definiciones acompañantes, en donde R es alquilo. En otra modalidad, un fármaco para el corto circuito tiene la estructura de la fórmula 5cl y las definiciones acompañantes, en donde R es metilo.
En algunas modalidades, un fármaco para el corto circuito puede ser representado por la siguiente fórmula genérica 5d: en donde, independientemente, cada vez que aparezca: R es H, alquilo ó acilo; y R' es alquilo. En otra modalidad, un fármaco para el corto circuito tiene la estructura de la fórmula 5d y las definiciones acompañantes, en donde R es H.
En otra modalidad, un fármaco para el corto circuito tiene la estructura de la fórmula 5d y las definiciones acompañantes, en donde R es alquilo. En otra modalidad, un fármaco para el corto circuito tiene la estructura de la fórmula 5d y las definiciones acompañantes, en donde R es metilo.
En algunas modalidades, un fármaco para el corto circuito puede ser representado por la siguiente fórmula genérica 5dl : Sal en donde, independientemente, cada vez que aparezca: R es H, alquilo ó acilo; y R' es alquilo.
En otra modalidad, un fármaco para el corto circuito tiene la estructura de la fórmula 5dl y las definiciones acompañantes, en donde R es H. En otra modalidad, un fármaco para el corto circuito tiene la estructura de la fórmula 5dl y las definiciones acompañantes, en donde R es alquilo.
En otra modalidad, un fármaco para el corto circuito tiene la estructura de la fórmula 5dl y las definiciones acompañantes, en donde R es metilo.
En algunas modalidades, un fármaco para corto circuito puede estar representado por la siguiente fórmula genérica 5e: CGNHNHz Se en donde R' es alquilo o éter.
También están incluidas las sales de adición aceptadas para uso farmacéutico y los complejos de los compuestos de las fórmulas anteriores. En los casos en donde los compuestos pueden tener uno o más centros quirales, a menos que se especifique los compuestos considerados en la presente pueden ser un solo estereoisómeros o mezclas racémicas de estereoisómeros. Además están incluidos los profármacos, análogos y derivados de estos.
En algunas modalidades es posible combinar dos o más compuestos corto circuitadores . En algunas modalidades, un inhibir de enzima y/o inhibidor de la unión de RPE65 puede estar combinado con un compuesto corto circuitador.
Las composiciones farmacéuticas para utilizarlas de acuerdo con los presentes métodos pueden ser formuladas en la forma habitual utilizando uno o más portadores o excipientes aceptados para uso en el medio fisiológico. Así pues, los compuestos activadores y sus sales y solvatos aceptados en el medio fisiológico se pueden formular para una administración, por ejemplo, por inyección, inhalación o insuflación (por la boca o la nariz) o para administración oral, bucal, parenteral o rectal. En una modalidad, el compuesto se administra en forma local, en el lugar donde estén presentes las células diana, por ejemplo, las células enfermas, es decir, en el ojo o la retina.
Los compuestos se pueden formular para diversas cargas de administración como puede ser la administración sistémica y tópica o localizada. Las técnicas y formulaciones generalmente se pueden encontrar en Remmngtons Pharmaceuticals Sciences, Meade Publishing Co., Easton PA. Para la administración sistémica se prefiere la inyección, incluida la inyección intramuscular, intravenosa, intraperitoneal y subcutánea.
Para la inyección, los compuestos se pueden formular en soluciones líquidas, preferentemente en soluciones amortiguadoras compatibles con el medio fisiológico, como la solución de Hank o la solución de Ringer. Además, los compuestos pueden ser formulados en forma sólida y se pueden volver a disolver o suspender inmediatamente antes de su uso. Las formas liofilizadas también están incluidas .
Para administración oral, las composiciones farmacéuticas pueden tomar la forma de, por ejemplo, tabletas, pastillas o cápsulas preparadas por los medios tradicionales con excipientes aceptados para uso farmacéutico como los agentes aglutinantes (por ejemplo almidón de maíz pregelatinizado, polivinilpirrolidona o hidroxipropilmetilcelulosa) ; diluyentes (por ejemplo lactosa, celulosa microcristalina o fosfato ácido de calcio); lubricantes (por ejemplo estearato de magnesio, talco o sílice) ; desintegradotes (como el almidón de papa o glicolato almidón de sodio) ; o agentes humectantes, como (lauril sulfato de sodio) . Las tabletas pueden ser recubiertas por los métodos bien conocidos. Las preparaciones líquidas para administración oral pueden tomar la forma de, por ejemplo, soluciones jarabes o suspensiones, o pueden presentarse como un polvo seco para su suspensión con agua u otro vehículo adecuado para su uso. Estas preparaciones líquidas pueden ser elaboradas por los medios tradicionales con aditivos aceptados para uso farmacéutico como agentes suspensotes (por ejemplo el jarabe de sorbitol, derivados de celulosa o grasas comestibles hidrogenadas) ; agentes emulsificadores (lecitina o acacia) ; vehículos no acuosos (por ejemplo aceite de ationd [sic], esteres oleosos, alcohol etílico o aceites vegetales fraccionados) ; y preservadores (por ejemplo metil o propil p-hidroxibenzoatos o ácido sórbico) . Las preparaciones también pueden contener sales de amortiguadores, saborizantes, colorantes y agentes edulcorantes según sea apropiado. Las preparaciones para administración oral se pueden formular convenientemente para proporcionar liberación regulada del compuesto activo.
Para la administración por inhalación, los compuestos pueden estar convenientemente suministrados en forma de una presentación en aerosol de envases presurizados o un nebulizador, con el uso de un propelente conveniente, por ejemplo diclorodifluorometano, triciclorofluorometano, diclorotetrafluoroetano, dióxido de carbono u otro gas adecuado. En el caso de un aerosol presurizado, la unidad de dosificación se puede determinar proporcionando una válvula para el suministro de una cantidad medida. Las cápsulas o cartuchos, por ejemplo de gelatina, para uso en un inhalador o insuflador se pueden formular con un contenido de una mezcla de polvos del compuesto y un polvo base conveniente como lactosa o almidón.
Es posible formular los compuestos para administración parenteral por inyección, por ejemplo por inyección en bolo o infusión continúa. Las formulaciones para inyección pueden presentarse en una forma de dosificación unitaria, por ejemplo en ampolletas o envases para dosis múltiple, con un preservador adicionado . Las composiciones pueden tomar formas tales como suspensiones, soluciones o emulsiones en vehículos oleosos o acuosos, y pueden contener agentes de formulación como agentes suspensores, estabilizadores y/o dispersantes. En otra versión, el ingrediente activo puede estar en forma de polvo para reconstitución con un vehículo adecuado, por ejemplo agua libre de pirógenos, estéril, antes de su uso.
También es posible formular los compuestos en composiciones rectales como supositorios o enemas de retención, por ejemplo, con un contenido de las bases para supositorios tradicionales como la manteca de cacao u otros glicéridos.
Además de las formulaciones antes descritas, también es posible formular los compuestos como una preparación de depósito. Tales formulaciones de acción prolongada se pueden administrar por implantación (por ejemplo subcutánea o intramuscular) o por inyección intramuscular. Así pues, por ejemplo, es posible formular los compuestos con materiales poliméricos o hidrofóbicos convenientes (por ejemplo como una emulsión en un aceite aceptable) o resinas de intercambio iónico, o derivados escasamente solubles, por ejemplo como una sal escasamente soluble.
Las composiciones farmacéuticas (incluidas las preparaciones cosméticas) pueden contener desde aproximadamente 0.00001 a 100%, como puede ser desde 0.001 hasta 10% o desde 0.1% hasta 5% en peso de uno o más compuestos descritos en la presente.
En una modalidad, un compuesto descrito en la presente se incorpora en una formulación tópica que contiene un portador tópico generalmente adecuado para administración tópica del principio activo y que comprende cualquiera de los materiales conocidos en la técnica. El portador tópico puede ser el tejido para proporcionar a la composición la forma deseada, por ejemplo como un ungüento, loción, crema, microemulsión, gel, aceite, solución o similar, y puede estar compuesto de un material de origen natural o sintético. Se prefiere que el portador seleccionado no afecte de manera adversa el principio activo u otros componentes de la formulación tópica. Los ejemplos de los portadores tópicos convenientes para utilizarlos en la presente incluyen agua, alcoholes y otros disolventes orgánicos no tóxicos, glicerina, aceite mineral, silicona, petrolato, lanolina, ácidos grasos, aceites vegetales, parabenos, ceras y similares.
Las formulaciones pueden ser ungüentos, lociones, cremas, microemulsiones y geles incoloros, inodoros.
Los compuestos pueden ser incorporados en ungüentos, que generalmente son preparados semisólidos que normalmente están basados en petrolato u otros derivados de petróleo. La base del ungüento específica que se puede utilizar, como los labran los expertos en la técnica, es aquella que proporcione el suministro óptico del principio activo y, preferentemente, proporcione otras características deseadas también, por ejemplo, que sea emoliente o similar. Al igual que otros portadores o vehículos, una base de ungüento debe ser inerte, estable, no irritante y no sensibilizante. Como se explica en el Remington, mencionado en la sección anterior. Las bases para ungüentos se pueden agrupar en cuatro clases: bases oleaginosas, bases emulsificables, bases para emulsión y bases solubles en agua. Las bases para ungüento u oleaginosas incluyen, por ejemplo, aceites vegetales, grasas obtenidas de animales e hidrocarburos semisólidos obtenidos del petróleo. Las bases emulsificables para ungüento, también conocidas como bases absorbentes para ungüento, contienen poca o ninguna agua e incluyen, por ejemplo, sulfato de hidroxiestearina, lanolina anhidra y petrolato hidrofílico. Las bases para ungüento en emulsión son emulsiones agua en aceite ( /O) o emulsiones aceite en agua (O/W) , e incluyen por ejemplo alcohol cetílico, monoestearato de glicerilo, lanolina y ácido esteárico. Las bases para ungüento solubles en agua, ejemplares se preparan a partir de polietilenglicoles (los PEG) de diferentes pesos moleculares; de nuevo, se hace referencia al Remington, Supra, para más información.
Los compuestos pueden ser incorporados en lociones, las cuales generalmente son preparados que se aplican a la superficie de la piel sin fricción, y normalmente son preparados líquidos o semilíquidos en los cuales las partículas sólidas, e incluido el ingrediente activo, están presentes en una base acuosa o alcohol. Las lociones comúnmente son suspensiones de sólidos y pueden contener una emulsión líquida oleosa del tipo aceite en agua. Las lociones son formulaciones preferidas para el tratamiento de grandes áreas del cuerpo, por la facilidad de aplicación de una composición más fluida. Generalmente es necesario que la materia insoluble en una loción este finamente divida. Las lociones normalmente contendrán agentes de suspensión para producir mejores dispersiones así como compuestos útiles para localizar y mantener el ingrediente activo en contacto con la piel, por ejemplo, metilcelulosa, carboximetil celulosa de sodio o similar. Una formulación de loción ejemplar para utilizarla junto con el método presente contiene propilen glicol mezclado con petrolato hidrofílico como el que se puede obtener de la marca Aquaphor™ de Beiersdorf, Inc. (Norwalk, Conn.) .
Los compuestos pueden ser incorporados en cremas, las cuales generalmente son emulsiones líquidas o semisólidas, viscosas, aceite en agua o agua en aceite.
Las bases para cremas se pueden lavar con agua y contienen una fase oleosa, un emulsificador y una fase acuosa. La fase oleosa generalmente esta compuesta de petrolato y un alcohol graso como alcohol cetílico o estearílico; la fase acuosa normalmente, aunque no es necesario, es mayor que la fase oleosa en cuanto al volumen, y generalmente contiene un humectante. El emulsificador en una formulación en crema, como se explica en el Remington, Supra, generalmente es un tensoactivo no iónico, aniónico, catiónico o anfotérico.
Los compuestos pueden ser incorporados en microemulsiones, las cuales generalmente son dispersiones isotrópicamente claras, con estabilidad termodinámica de dos líquidos inmiscibles como aceite y agua, estabilizadas por una película interfacial de moléculas tensoactivas (Enciclopedia of Pharmaceutical Technology, (New York: Marcel Dekker, 1992) , volumen 9) . Para la preparación de las microemulsiones es necesario el tensoactivo (emulsificador) , co-tensoactivo (co-emulsificador) una fase oleosa y una fase acuosa. Los tensoactivos adecuados incluyen cualquiera de los tensoactivos que sean útiles en los preparados de emulsiones, por ejemplo, los emulsificadores que normalmente se utilizan en el preparado de cremas. El co-tensoactivo (o "co-emulsificador") generalmente se selecciona del grupo de derivados de poliglicerol, derivados de glicerol y alcoholes grasos. Las combinaciones emulsificador/co-emulsificador preferidas generalmente son, aunque no necesariamente, seleccionadas del grupo que consiste en monoestearato de glicerilo y estearato de polioxietileno; palmitoestearato de polietilenglicol y etilenglicol; y triglicéridos caprílico y cáprico y macrogol glicéridos oleílicos. La fase acuosa incluye no solo agua sino también, normalmente, soluciones amortiguadoras, glucosa, propilenglicol, polietilenglicoles, preferentemente polietilenglicoles de peso molecular menor (por ejemplo los PEG 300 y PEG 400) y/o glicerol y similares, aunque la fase oleosa generalmente contendrá, por ejemplo, esteres de ácidos grasos, aceites vegetales modificados, aceites de silicona, mezclas de mono-, di- y triglicéridos, mono- y di- esteres de PEG (por ejemplo glicéridos de oleoil macrogol), etcétera.
Los compuestos pueden ser incorporados en formulaciones en gel, las cuales generalmente son sistemas semisólidos que consisten en suspensiones constituidas de partículas inorgánicas pequeñas (sistemas de dos fases) o moléculas orgánicas grandes distribuidas prácticamente de manera uniforme a lo largo de un líquido portador (geles de una sola fase) . Los geles de una sola fase se pueden preparar, por ejemplo, combinando el principio activo, un líquido portador y un agente gelificador conveniente como tragacanto (al 2 a 5%) , alginato de sodio (al 2-10%) , gelatina (al 2-15%) , metilcelulosa (al 3-5%) , carboximetilcelulosa de sodio (al 2-5%), carbómero (al 0.3-5%) o alcohol polivinílico (al 10-20%) juntos y mezclando hasta que se produzca un producto semisólido característico. Otros agentes gelificadores convenientes incluyen metilhidroxicelulosa, polioxietileno-polioxipropileno, hidroxietilcelulosa y gelatina. Aunque los geles comúnmente emplean líquido portador acuoso, es posible utilizar alcoholes y aceites como el líquido portador también.
Algunos aditivos, conocidos para los expertos en la técnica, pueden estar incluidos en las formulaciones, por ejemplo las formulaciones tópicas. Los ejemplos de los aditivos pueden ser, pero no se limitan a, solubilizadores, potenciadores de la permeación en la piel, opacificadores, preservadores (por ejemplo los antioxidantes) , agentes gelificantes, agentes amortiguadores, tensoactivos (en particular los tensoactivos no iónicos y anfotéricos) , emulsificadores, emolientes, agentes espesantes, estabilizadores, humectantes, colorantes, perfumes y similares. La inclusión de los solubilizadores y/o potenciadores de la permeación en la piel se prefieren particularmente, junto con emulsificadores, emolientes y preservadores. Una formulación tópica óptima contiene aproximadamente: 2% en peso, 60% en peso, preferentemente 2% en peso a 50% en peso de solubilizador y/o potenciador de la permeación en la piel; 2% a 50% en peso, preferentemente 2% a 20% en peso de emulsificadores; 2% a 20% en peso de emoliente y 0.01 a 0.2% en peso de preservador, con principio activo y portador (por ejemplo agua) constituyendo el resto de la formulación.
Un potenciador de la permeación en la piel contribuye facilitando el paso de los niveles terapéuticos del ingrediente activo para que pasen a través de un área de tamaño razonable de la piel íntegra. Los potenciadores convenientes son bien conocidos en la técnica y pueden ser, por ejemplo: alcanoles inferiores como metanol, etanol y 2-propanol; alquilmetilsulfóxidos como dimetilsufóxido (DMSO) , decilmetilsulfóxido (C. sub.10 MSO) y tetradecilmetilsulfóxido; pirrolidonas como 2-pirrolidona, N-metil-2-pirrolidona y N- (-hidroxietil) pirrolidona; urea; N,N-dietil-m-toluamida; alcandioles de (C.sub.2 -C.sub.6); disolventes diversos como dimetilformamida (DMF), N,N-dimetilacetamida (DMA) y alcohol tetrahidrofurfurilo; y las azacicloheptan-2-onas sustituidas en la posición 1, particularmente l-n-dodecilciclazacicloheptan-2-ona (laurocapram; disponible de la marca Azone™ de Whitby Research Incorporated, Richmond, Va.).
Los ejemplos de los solubilizadores pueden ser, pero no se limitan los siguientes: éteres hidrofílicos como dietilenglicol monoetiléter (etoxidiglicol) disponible en el comercio como Transcutol™) y dietilenglicol monoetiléter oleato (disponible en el comercio como Softcutol™) ; derivados de aceite de ricino polietileno como polioxi35 aceite de ricino, polioxi40 aceite de ricino hidrogenado, etc.; polietilenglicol, particularmente los polietilenglicoles de peso molecular inferior como PEG300 y PEG400, y derivados de polietilenglicol como PEG8 glicéridos caprílico/cáprico (disponibles en el comercio como Labrasol™) ; alquilmetilsulfóxidos como DMSO; pirrolidonas como 2-pirrolodina y N-metil-2-pirrolidona; y DMA. Muchos solubilizadores también pueden actuar como potenciadores de la absorción. Se puede incorporar un solo solubilizador en la formulación o una mezcla de solubilizadores pueden ser incorporados en la presente.
Los emulsificadores y co-emulsificadores convenientes pueden ser, sin limitación, aquellos emulsificadores y co-emulsificadores descritos con respecto a las formulaciones para microemulsión. Los emolientes pueden ser, por ejemplo, propilenglicol, glicerol, miristato de isopropilo, polipropilenglicol-2 (PPG-2) , miristil éter propionato y similares.
Otros ingredientes activos también pueden estar incluidas en las formulaciones, como otros agentes anti-inflamatorios, analgésicos, agentes antimicrobianos, agentes antimicóticos, antibióticos, vitaminas, antioxidantes y agentes bloqueadores del sol comúnmente encontrados en formulaciones de filtros solares que incluyen, pero no se limitan a, antranilatos, benzofenonas (en particular benzofenona-3), derivados de canfor, cinamatos (por ejemplo octilmetoxicinamatos) , dibenzoil metanos (butilmetoxidibenzoil metano) , ácido p-aminobenzóico (PABA) y derivados de éstos, y salicilatos (por ejemplo salicilato de octilo) .
En algunas formulaciones tópicas, el ingrediente activo esta presente en una cantidad en el intervalo de aproximadamente 0.25% en peso a 75% en peso de la formulación, preferentemente en el intervalo de aproximadamente 0.25% a 30% en peso de la formulación, más preferentemente en el intervalo de aproximadamente 0.25% en peso a 15% en peso de la formulación y más preferentemente en el intervalo de aproximadamente 1.0% a 10% en peso de la formulación.
Las composiciones tópicas para el tratamiento de la piel se pueden envasar en un envase conveniente adecuado a su viscosidad y el uso propuesto para el consumidor. Por ejemplo, una loción o crema se puede envasar en una botella o un aplicador de bola rodante, o un dispositivo para aerosol accionado por propelente o un envase adaptado con una bomba adecuada para operación con el dedo. Cuando la composición es una crema, esta se puede almacenar simplemente en una botella no deformable o envase que pueda comprimir, como puede ser un tubo o un tarro con tapa. La composición también puede estar incluida en cápsulas como las descritas en la Patente US No. 5,063,507. Por consiguiente, también están provistos los envases cerrados que contienen una composición cosmética aceptable como se define en la presente.
En una modalidad alternativa, una formulación farmacéutica se proporciona para administración oral o parenteral, en cuyo caso la formulación puede contener una microemulsión que contenga el compuesto activador como se describe antes, pero puede contener portadores, vehículos, aditivos y otros aceptados para uso farmacéutico, alternativos, particularmente adecuados para la administración oral o parenteral del medicamento. De otro modo, puede administrarse una microemulsión que contenga el compuesto activo por vía oral o parenteral prácticamente como ya se describió, sin modificación.
Las células, por ejemplo, tratadas ex vivo con un compuesto descrito en la presente, pueden ser administradas de acuerdo con los métodos para administrar un injerto a un individuo. Lo cual puede ser acompañado, por ejemplo, por la administración de un fármaco inmunosupresor, por ejemplo ciclosporina A. Para revisar los fundamentos generales de las formulaciones medicinales, el lector debe consultar Cell Therapy: Stem Cell Transplantation, Gene Therapy, and Cellular Immunotherapy, por G. Morstryn & W. Sheridan eds, Cambridge University Press, 1996; y Hematopoietic Stem Cell Therapy, E. D. Ball, J. Lister & P. Law, Churchill Livingstone, 2000.
También se proporcionan en la presente los kits, por ejemplo kits o equipos para propósitos terapéuticos y/o diagnósticos. Un kit puede incluir uno o más compuestos descritos en la presente, y dispositivos optativos para poner en contacto los tejidos o células con los compuestos. Los dispositivos contienen agujas, jeringas, stents, líquidos para la resuspensión y otros dispositivos para introducir un compuesto en un individuo .
En cualquiera de las modalidades anteriores, es posible excluir específicamente 1, 5-bis (p-aminofenoxi) pentano .
En cualquiera de las modalidades anteriores, se puede excluir específicamente 11-cis-retinol.
En cualquiera de las modalidades anteriores, se puede excluir específicamente palmitato de 11-cis-retinol.
En cualquiera de las modalidades anteriores, se puede excluir específicamente ácido 13-cis-retinóico (accutane) .
En cualquiera de las modalidades anteriores, se puede excluir específicamente el ácido 2-bromopalmítico.
En cualquiera de las modalidades anteriores, se puede excluir específicamente el éster etílico metansulfonato del ácido 3-amino benzoico.
En cualquiera de las modalidades anteriores, se puede excluir específicamente acetaminofeno .
En cualquiera de las modalidades anteriores, se puede excluir específicamente adamantilamina.
En cualquiera de las modalidades anteriores, se puede excluir específicamente todo- trans-retinaldehído.
En cualquiera de las modalidades anteriores, se puede excluir específicamente el ácido todo-trans-retinóico.
En cualquiera de las modalidades anteriores, se puede excluir específicamente todo-trans-retinol (vitamina A) En cualquiera de las modalidades anteriores, se puede excluir específicamente palmitato de todo- trans-retinil.
En cualquiera de las modalidades anteriores, se puede excluir específicamente anilina. En cualquiera de las modalidades anteriores, se puede excluir específicamente ciclohexila ina. En cualquiera de las modalidades anteriores, se puede excluir específicamente dapson. En cualquiera de las modalidades anteriores, se puede excluir específicamente diaminofenoxipentano . En cualquiera de las modalidades anteriores, se puede excluir específicamente m-aminobenzoato de etilo. En cualquiera de las modalidades anteriores, se puede excluir específicamente ácido m-aminobenzóico . En cualquiera de las modalidades anteriores, se puede excluir específicamente m-fenitidina. En cualquiera de las modalidades anteriores, se puede excluir específicamente N-(4-hidroxifenil) retinamida (fenretinida) . En cualquiera de las modalidades anteriores, se puede excluir específicamente N,N-dimetilanilina. En cualquiera de las modalidades anteriores, se puede excluir específicamente N,N-dimentil-p-fenitidina.
En cualquiera de las modalidades anteriores, se puede excluir específicamente N-metilanilina. En cualquiera de las modalidades anteriores, se puede excluir específicamente N-metil-p-fenitidina.
En cualquiera de las modalidades anteriores, se puede excluir específicamente O-fenitidina. En cualquiera de las modalidades anteriores, se puede excluir específicamente p- (N-hexiloxi) anilina. En cualquiera de las modalidades anteriores, se puede excluir específicamente p- (N-hexiloxi) benzamida. En cualquiera de las modalidades anteriores, se puede excluir específicamente hidrazida del ácido p- (N-hexiloxi) benzoico . En cualquiera de las modalidades anteriores, se puede excluir específicamente p-anisidina. En cualquiera de las modalidades anteriores, se puede excluir específicamente p-etilanalina. En cualquiera de las modalidades anteriores, se puede excluir específicamente p-etioxibenzilamina. En cualquiera de las modalidades anteriores, se puede excluir específicamente p-etioxifenol. En cualquiera de las modalidades anteriores, se puede excluir específicamente fenitidina. En cualquiera de las modalidades anteriores, se puede excluir específicamente piperidina. En cualquiera de las modalidades anteriores, se puede excluir específicamente p-n-butoxianilina. En cualquiera de las modalidades anteriores, se puede excluir específicamente p-n-butilanilina.
En cualquiera de las modalidades anteriores, se puede excluir específicamente p-n-dodecilanilina. En cualquiera de las modalidades anteriores, se puede excluir específicamente p-nitroanilina. En cualquiera de las modalidades anteriores, se puede excluir específicamente sulfabenzamida. En cualquiera de las modalidades anteriores, se puede excluir específicamente sulfamoxaol. En cualquiera de las modalidades anteriores, se puede excluir específicamente sulfanilamida. En cualquiera de las modalidades anteriores, se puede excluir específicamente tricaina. Además, cualquier compuesto mencionado en las referencias incorporadas en la presente también se puede excluir específicamente de cualquiera de las modalidades anteriores. 4. Métodos En la presente se describen los métodos para el tratamiento o prevención de un trastorno oftalmológico. Un método ejemplar consiste en administrar a un individuo en necesidad de este una cantidad terapéutica eficaz de una composición, por ejemplo una composición farmacéutica, descrita en la presente. Una persona que necesite de este puede ser una persona que sepa que tiene o probablemente desarrolle un trastorno oftalmológico .
Como se describe en lo anterior, una composición descrita puede ser administrada a una persona para tratar o prevenir degeneración macular. Otras enfermedades, trastornos o estados caracterizados por la acumulación de compuestos retinotóxicos en el RPE pueden ser tratados del mismo modo.
En una modalidad, se administra a una persona un principio activo que haga el corto circuito del ciclo visual en un paso del ciclo visual que ocurra fuera de un disco de un bastoncito fotorreceptor . Por ejemplo, como se muestra en la Figura 3, el fármaco puede reaccionar con 11-cis-retinal en el RPE e interrumpirlo hasta todo-trans-retinal mientras permanece en el RPE. Más específicamente, la terapéutica puede reaccionar con 11-cis-retinal para formar un intermediario que isomerice a la configuración todo- trans . El intermediario todo- trans puede entonces liberar el compuesto terapéutico para formar todo-trans-retinal. El todo-trans-retinal podría entonces ser reprocesado por el resto del ciclo visual como es normal en el RPE. Así pues, el ciclo visual sería reducido a un ciclo vano en el que el todo-trans-retinal tiene poca o ninguna oportunidad de acumularse en el disco.
En una modalidad, una persona puede ser diagnosticada de tener degeneración macular, y luego se le puede administrar un medicamento descrito. En otra modalidad, una persona puede ser identificada como estando en riesgo de desarrollar degeneración macular (factores de riesgo que incluyen un antecedente de tabaquismo, la edad, sexo femenino y antecedentes familiares) . En todavía otra modalidad, una persona puede ser diagnosticada de tener enfermedad de Stargard, una forma familiar de degeneración macular. En algunas modalidades, se puede administrar un medicamento en forma profiláctica. En algunas modalidades, una persona puede ser diagnosticada de tener la enfermedad antes de que sea evidente el daño retinal. Por ejemplo, se puede encontrar que una persona lleva una mutación génica para el gen abcr, elovl y/u otro gen, y de este modo ser diagnosticada de tener enfermedad de Stargard antes de que se manifiesten signos oftalmológicos, o se puede encontrar una persona que tenga cambios maculares tempranos indicados de degeneración macular antes de que la persona este conciente de algún efecto en la visión. En algunas modalidades, una persona puede saber que tiene la necesidad de tratamiento o prevención de degeneración macular.
En algunas modalidades, es posible vigilar a una persona para ver el grado de degeneración macular. Una persona puede ser vigilada en diversas formas, como puede ser por examen oftálmico, examen de ojo dilatado, examen fundoscópico, prueba de agudeza visual, angiografía, angiografía con fluoresceína y/o biopsia. La supervisión o vigilancia se puede hacer en diversos momentos. Por ejemplo, se puede vigilar a una persona después de administrar un medicamento. La vigilancia puede ser de un día, una semana, dos semanas, un mes, dos meses, seis meses, un año, dos años y/o cinco años después de la primera administración de un medicamento. Una persona puede ser vigilada en repetidas ocasiones. En algunas modalidades, se puede alterar la dosis de un fármaco en respuesta a la vigilancia.
En algunas modalidades, es posible combinar los métodos descritos con otros métodos para el tratamiento o prevención de degeneración macular, como puede ser la terapéutica fotodinámica.
En algunas modalidades, se puede administrar en forma crónica un medicamento para el tratamiento o prevención de degeneración macular. El medicamento puede ser administrado diario, más de una vez al día, dos veces a la semana, tres veces a la semana, semanalmente, cada dos semanas, mensualmente, cada dos meses, cada seis meses, anualmente y/o cada dos años.
Las terapéuticas pueden ser administradas por una amplia variedad de vías, las descritas en lo anterior. En algunas modalidades, un medicamento puede ser administrado por vía oral, en forma de una tableta, cápsula, líquido, pasta y/o polvo. En algunas modalidades, un medicamento puede ser administrado en forma local, como puede ser por inyección intraocular. En algunas modalidades, un medicamento puede ser administrado en forma sistémica, en una forma inactiva enjaulada, enmascarada u otra forma y activado en el ojo (como puede ser por terapia fotodinámica) . En algunas modalidades, un medicamento puede ser administrado en una forma de depósito, de modo que se proporcione liberación sostenida del medicamento durante un tiempo, como puede ser por horas, días, semanas y/o meses.
Los agentes terapéuticos se utilizan en cantidades que son terapéuticamente eficaces, las cuales varían ampliamente dependiendo en gran medida del agente específico que se utilice. La cantidad de agente incorporado en la composición también depende del perfil de liberación deseado, la concentración del agente necesario para un efecto biológico y el tiempo que tardará en liberarse la sustancia biológicamente activa para el tratamiento. En algunas modalidades, la sustancia con actividad biológica se puede combinar con una matriz de compuesto a diferentes niveles de carga, en una modalidad a temperatura ambiente y en la necesidad de un disolvente orgánico. En otras modalidades, las composiciones pueden ser formuladas como microesferas. En algunas modalidades, el principio activo puede ser formulado para liberación sostenida.
Debe observarse que el rompimiento del ciclo visual para prevenir la acumulación de A2E puede dañar la visión nocturna (poca luz) de la persona y podría provocar ceguera nocturna. En realidad, algunas de las terapéuticas señaladas en la presente como apropiadas para la prevención de la acumulación de A2E han sido utilizadas escasamente en humanos o no se ha utilizado por completo por su tendencia a provocar ceguera nocturna. Sin embargo, con el reconocimiento que ésta mera causa de ceguera nocturna podría convertirse en el tratamiento terapéutico y/o preventivo de degeneración macular, es muy probable que los pacientes que necesiten de un tratamiento como este acepten fácilmente algo de ceguera nocturna a cambio de moderada visión normal . Esto se debe a que el ciclo visual antes descrito funciona en los foto-receptores bastoncitos, los cuales operan solo en bajos niveles de iluminación y no funcionan durante el día. Por tanto, la función macular se afectaría poco por la disminución en la función del ciclo visual, mientras que habría algún efecto sobre la visión en poca luz en la noche. Por lo menos algunos pacientes, y tal vez la mayoría, podrían sacrificar fácilmente una disminución en la visión nocturna por una disminución de la probabilidad de que finalmente pierdan su visión diurna mediante los conos.
Palmitoilación En algunas modalidades, es posible utilizar inhibidores de LRAT para modular la palmitoilación de RPE65. El RPE65 se presenta en por lo menos dos formas, la asociada con la membrana (mRPE65) y la soluble (sRPE65) . Como se describe con mayor detalle más adelante, el mRPE65 es una forma palmitoilada de RPE65, y el SRPE65 es una forma despalmitoilada.
El flujo de los retinoides en el ciclo visual se puede regular por la palmitoilación reversible de RPE65 mediante LRAT. El mRPE65 se une específicamente a los esteres todo-trans-retinílieos de cadena larga y los moviliza para otro procesamiento en el ciclo visual. Los esteres todo-trans-retinílieos son los sustratos para el IMH, el cual los convierte en 11-cis-retinol. Para la movilización de estos esteres se necesita la función chaperón del éster todo-trans-retinílico para mRPE65. La regulación no esta implícita en este caso porque no hay alteración molecular del mRPE65 implicada durante la función del ciclo. Sin embargo, algunas observaciones reportadas en la presente se apoyan en este aspecto y hacen que sea muy probable que la regulación sea impuesta en el ciclo visual en la etapa del RPE65.
Los hechos sobresalientes con respecto a la invocación de la regulación en el nivel de RPE65 se pueden resumir como sigue: (1) mRPE65 y SRPE65 muestran perfiles de unión al retinoide diferentes y complementarios. El mRPE65 se une específicamente a los esteres todo- rans-retinílieos y los hacen disponibles para el procesamiento del IMH, mientras que el sRPE65 se une específicamente a la vitamina A, haciéndolo disponible para el LRAT. (2) La forma predominante de RPE65 cuando se separa es sRPE65 y no mRPE65. (3) El mRPE65 y sRPE65 son diferente en sus estados de palmitoilación. (4) La interconversión reversible de SRPE65 a mRPE65 es cooperativa y catalizada por LRAT, de modo que pequeños cambios en los niveles de mRPE65 tendrán un efecto aumentado sobre la isomerización. (5) El mRPE65 actúa como un donador de palmitoilo para 11-cis-retinol en presencia de LRAT, manifestando una función doble para mRPE65, como una proteína de unión al retinoide y un donador de acilos que limite la isomerización disminuyendo los niveles de mRPE65, y (6) los esteres todo-trans-retinílieos tienen el efecto contrario, porque estos impulsan el SRPE65 a mRPE65.
Un modelo de trabajo sencillo se puede generar para sintetizar las observaciones experimentales hechas en la presente en un elemento regulador importante para el control del ciclo visual. Las Figuras 13A-B muestran como los elementos reguladores descritos podrían dirigir el flujo de los retinoides en la visión. En la oscuridad, cuando no se requiere la formación del cromóforo visual 11-cis-retinal, se espera que el sRPE65 sea la forma predominante de los RPE65. El sRPE65 se genera mediante la palmitoilación de 11-cis-retinol mediante mRPE65, y tal vez también por la hidrólisis de mRPE65 mediante las palmitoil esterasas activadas en la oscuridad. Es muy posible que en este caso estén involucrados los episodios acoplados con la proteína G. La luz activa el switch (Figura 13A) , porque la fotoisomerización de rodopsina en los fotorreceptores da como resultado un flujo de vitamina A hacia el RPE. El RPE es cebado a la vitamina A chaperón hasta LRAT para generar esteres todo- trans-retinílicos, los sustratos para IMH. Los esteres todo-trans-retinílicos tienen una segunda función, como se muestra en la presente, activar la conversión de sRPE65 a mRPE65. Este proceso es cooperativo, de modo que pequeños cambios en la concentración de mRPE65 tendrán grandes efectos sobre la velocidad de procesamiento de los esteres todo-trans-retinílieos y la isomerización. El mRPE65 dirige el flujo de los esteres todo-trans-retinílicos hacia IMH, donde se procesa para formar 11-cis-retinol. Una vez que se forma el 11-cis-retinol, éste se puede repartir directamente en 11-cis-retinal, el cromóforo de rodopsina por la unión a cRALBP, con la posterior oxidación mediante la 11-cis-retinol deshidrogenasa. Este flujo del cromóforo ocurre a los foto-receptores cuando la opsina se hace disponible como consecuencia del blanqueado de la rodopsina en la luz. La unión exotérmica de opsina con 11-cis-retinal para formar rodopsina activa este proceso.
El switch se apagaría otra vez en la oscuridad porque el 11-cis-retinol esta palmitoilado, utilizando mRPE65 como el donador de acilos para formar palmitato de 11-cis-retinilo, la forma acumulada del cromóforo, y sRPE65. Esto interrumpe el sistema, porque este último es un chaperón para la vitamina A, no de los esteres todo-trans-retinílieos, y es incapaz de facilitar el procesamiento de IMH. De nuevo, debido a la cooperatividad del proceso, un pequeño desplazamiento en la concentración de mRPE65 tendrá un gran efecto sobre la velocidad de síntesis de 11-cis-retinol. La palmitoilación de 11-cis-retinol por mRPE65 también explicaría el recambio putativo de mRPE65 durante la operación del ciclo visual, aunque como se sugiere en lo anterior, otros factores también pueden intensificar la hidrólisis de mRPE65. Así pues, el switch propuesto operaría en una forma muy sencilla: la elevación en los niveles del éster todo-trans-retinílico facilita la biosíntesis del cromóforo por que el mRPE65 se regenera para dirigir el flujo del retinoide al IMH. La elevación en la formación de 11-cis-retinol desactiva el sistema por que impulsa la conversión de mRPE65 a sRPE65. Es ya sabido que el 11-cis-retinol adicionado es un inhibidor poderoso de la biosíntesis del cromóforo in vivo, y se demuestra aquí en la Figura 12A que esta inhibición es por lo menos en parte debida al efecto del switch. Por último, la existencia de este elemento regulador basado en el switch también es consistente con la observación que la regeneración de 11-cis-retinoide en la oscuridad es un asunto muy lento.
Los estudios descritos en la presente son de interés general más allá de su efecto sobre el procesamiento visual. Ciertamente, los mecanismos swtich del palmitoilo operarían en una variedad de contextos de transducción de señales, además del explorador en la presente. A nivel bioquímico la base molecular de las diferencias en la selectividad de unión al ligando entre mRPE65 y sRPE65 están relacionadas solo con las diferencias en sus grados de palmitoilación. La palmitoilación de la proteína representa una modificación post-traduccional bien conocida, cuyas funcionales principales son mejorar la hidrofobicidad de las proteínas, dirigirlas a las membranas y también intensificar las interacciones proteína-proteína en algunos casos. No hay duda que en el caso de la transición mediada por la palmitoilación de RPE65, de sRPE65 a mRPE65, una consecuencia es la elección de la membrana. No obstante, los estudios que se documentan en la presente manifiestan otras dos funciones para la palmitoilación. Primera, como se ya se menciono, la palmitoilación altera la especificidad de unión al ligando de la proteína modificada. Si el grupo o los grupos palmitoilo de mRPE65 interaccionan directamente con los esteres todo- rans-retinílieos, mejorando así la unión para estas moléculas a través de las interacciones hidrofóbicas, o si la palmitoilación provoca un cambio conformacional en la proteína se desconoce en la actualidad. Segundo, también mostramos que una proteína palmitoilada (mRPE65) puede funcionar como un donador de palmitoilo. La palmitoilación reversible ha sido descrita y esta reversibilidad puede ser de significado regulatorio (Houslay 1996; Mumby 1997; Bijlmakers y Marsh 2003; Qanbar y Bouvier 2003) . Este hecho es especialmente interesante en los procesos de transducción de señales donde las proteínas G pequeñas son palmitoiladas (Millingan 1995; Morello 1996; Mumby 1997; Resh 1999; Che y Manning 2001; El-Husseini y Bredt 2002; Bijlmakers y Marsch 2003; Qanbar y Bouvier 2003) . En estos casos, la separación de una porción palmitoilo se considera que sucede por medio de una esterasa, pero no ha sido consignada una función portadora de acilos para las proteínas G pequeñas (Mumby 1997; Resh 1999; Linder y Deschenes 2003) .
La LRAT cataliza la interconversión de mRPE65 y SRPE65, y por tanto esta enzima es bifuncional por que también es responsable de la síntesis de grandes cantidades de los esteres todo-trans-retinílicos en el ciclo visual. En los estudios que se documentan en la presente, el mRPE65 actúa como el donador de palmitoilo en lugar de lecitina. Este resultado es sorprendente por que hasta ahora se ha considerado que la LRAT es una enzima más bien limitadamente específica que utiliza lecitina (es decir, DPPC) como donador de acilos y un retinol como el aceptor de acilos (Cañada y col., 1990; Barry y col., 1989; Saari 2000). Con respecto a la función donadora de acilos, ni las fosfatidil etanolaminas ni las fosfatidilserinas sustituyen la lecitina (Cañada y col., 1990).
La LRAT es el miembro fundador de un grupo en expansión de proteínas, muchas de las cuales tienen una punción desconocida (Jahng y col., 2003b). Las proteínas de función desconocida incluyen la clase de supresores de tumor II y EGL-26, una enzima putativa intermediaria de la morfogénesis de C. elegans (Hanna-Rose 2002; Anantharaman y Arvind 2003) . Estas proteínas deben ser consideradas como posibles palmitoil transferasa candidatas. A lo largo de estas líneas, es interesante señalar que no es próxima la identificación de enzimas palmitoil transferasa dedicadas, y se considera una alternativa la posibilidad de palmitoilación química más que enzimática (Mumby 1997; Resh 1999; Linder y Deschenes 2003; Bijlmakers y Marsh 2003) . Por consiguiente, los compuestos identificados en la presente como moduladores o inhibidores de LRAT pueden ser considerados moduladores o inhibidores de palmitoil transferasa prototipo, y pueden utilizarse para modular otras palmitoil transferasas en la clase LRAT en expansión. 5. Métodos de tamizaje Los fármacos adecuados se pueden identificar por diversos métodos de tamizaje. Por ejemplo, un fármaco candidato puede ser administrado a una persona que tenga o esté en riesgo de tener degeneración macular, por ejemplo, un animal que sea un modelo animal para degeneración macular, y es posible medir la acumulación del compuesto retinotóxico, como puede ser el A2E. Un fármaco que de cómo resultado la acumulación reducida de un compuesto retinotóxico en comparación con un control (ausencia del fármaco) sería identificado como un fármaco conveniente. Por otra parte, los discos foto-receptores pueden ser analizados en cuanto a la presencia de todo-trans-retinal, N-retiniliden-PE, y/o A2E. Los modelos animales que tienen desarrollo rápido de la degeneración macular son de interés enorme por que la degeneración macular que se presenta en forma natural normalmente tarda años en desarrollarse. Diversos modelos animales son modelos aceptados para degeneración macular. Por ejemplo, el ratón knockout abe-/- ha sido descrito como modelo para degeneración macular y/o acumulación de lipofuscina, como lo ha sido el ratón knockout elevl -/-. Además, los ratones knockout deficientes en la proteína 1 quimioatrayente de monolitos (Ccl-2; también conocida como MCP-1) o su receptor cognado, el receptor 2 de quimiocina C-C (Ccr-2) , también han sido descritos como modelos acelerados para degeneración macular.
Además, los modelos in vi tro del sistema visual pueden facilitar estudios de tamizaje para fármacos que inhiben o hacen el corto circuito del ciclo visual. Los modelos in vi tro pueden ser creados colocando intermediarios seleccionados en solución con enzimas apropiadas u otros cofactores necesarios. De otro modo, es posible emplear un sistema de cultivo de RPE65 in vitro . Por ejemplo, se puede probar la inhibición de LRAT adicionando un fármaco candidato a una solución que contenga LRAT y un sustrato para LRAT, inhibiendo la acumulación de un producto esperado. Los sistemas semejantes son ideados para otras dianas de inhibición potenciales descritas en la presente.
La práctica de los métodos presentes empleará, a menos que se indique lo contrario, las técnicas tradicionales de la biología celular, cultivo de células, biología molecular, biología transgénica, microbiología, DNA recombinante e inmunología, que están dentro de las habilidades de la técnica. Estas técnicas se explican con mayor detalle en la literatura. Ver, por ejemplo, Molecular Cloning A Laboratory Manual, 2a Ed., ed. por Sambrook, Fritsch and Maniatis (Cold Spring Harbor Laboratory Press: 1989); DNA Cloning, Volumen I y II (D. N. Glover ed., 1985); Oligonucleotide Synthesis (M. J. Gait ed., 1984); Mullís et al, Patente U. S. No: 4,683,195; Nucleic Acid Hybridization (B. D. Hames & S. J. Higgins eds. 1984); Transcription And Translation (B. D. Hames & S. J. Higgins eds. 1984); Culture Of Animal Cells (R. 1. Freshney, Alan R. Liss, Inc., 1987); Immobilized Cells And Enzymes (IRL Press, 1986) ; B.
Perbal, A Practical Guide To Molecular Cloning (1984) ; the treatise, Methods In Enzymology (Academic Press, Inc., N. Y.); Gene Transfer Vectors For Mammalian Cells (J. H. Miller and M. P. Calos eds. , 1987, Cold Spring Harbor Laboratory); Methods In Enzymology, Vols. 154 and 155 (Wu et al. eds.), Immunochemical Methods In Cell And Molecular Biology (Mayer y Walker, eds., Academic Press, London, 1987) ; Handbook Of Experimental Immunology, Volumen I-IV (D. M. Weir and C. C. Blackwell, eds. , 1986) ; Manipulating the Mouse Embryo, (Cold Spring Harbor Laboratory Press, Cold Spring Harbor, N. Y. , 1986) .
EJEMPLOS La presente descripción se demuestra más por los siguientes ejemplos, los cuales no deben ser considerados como limitadores en ningún sentido. El contenido de todas las referencias mencionadas (incluidas las referencias publicadas como se menciona a lo largo de esta solicitud) se incorporan expresamente por este medio para su referencia.
Ejemplo 1: in vitro Materiales: ojos de bovino, congelados, desprovistos de retinas fueron adquiridos de W. L. Lawson Co., Lincoln, NE. El bicarbonato de amonio, BSA, ha sido etilendiamino tetraacético (EDTA) , clorhidrato de guanidina, imidazol, DEAE-sepharose, fenil-sepharose C1-4B, todo-trans-retinol, palmitato de todo-trans-retinilo, ácido a-ciano-4-hidroxicinámico y Trizma® base fueron de Sigma Aldrich. El ditiotreitol fue de ICN Biomedicals Inc. El 11-cis-retinol y palmitato de 11-cis-retinilo fueron sintetizados siguiendo el procedimiento descrito en otra parte del texto (Shi y col., 1993). Anagrade™ CHAPS y dodecil maltosulfo fueron de Anatrace. Los disolventes grado HPLC fueron de Sigma Aldrich Chemicals. El anticuerpo contra RPE65 (NFITKVNPETLETIK) se obtuvo de Genmed Inc y el anticuerpo contra LRAT fue provisto por el profesor Dean Bok (Universidad de California en Los Angeles) . El baculovirus rHRPE65 fue proporcionado por el profesor Jian-Xin Ma (Universidad de Carolina del Sur) . El medio TNM-FH Insect de Hank se obtuvo de JRH Biosciences. Las células sf21 fueron del material de laboratorio del profesor Steven Harrison (Escuela Médica de Harvard) . El cocktail de inhibidores de la proteasa libres de EDTA, de amplio espectro, se obtuvo de Roche Bioscences. La resina níquel-NTA y la columna níquel-NTA spin fueron adquiridos de Qiagen Inc. Los geles previamente vaciados (4-20%) para electroforesis en gel de dodeciisulfato de sodio-poliacrilamida, BechMark previamente teñidos y los marcadores de peso molecular Magic fueron de Invitrogen. La DEAE Sepharose fue de Amersham Bioscences . Las soluciones amortiguadoras fueron cambiadas por diálisis en la solución amortiguadora solicitada durante la noche en el cásete slide-a-lyser™ de Pierce (10 KDa MWCO) . Las soluciones del RPE65 fueron concentradas con un dispositivos de filtración por centrifuga Amicon Ultra™ (corte 30 KDa) de Millipore Corp. Todos los reactivos fueron grado analítico a menos que se indique de otro modo.
Métodos Purificación de mRPE65, sRPE65 y rHRPE65: La purificación se hizo como se describe antes (Ma y col., 2001) . Las purezas de estas proteínas fueron verificadas por tinción de plata o tinción de Coomassie y análisis Western Blot (1:4000 anticuerpo primario-lh a temperatura ambiente y 1:400 anticuerpo secundario-0.5h a temperatura ambiente).
Purificación de rCRALBP: La purificación se hizo como ya se describió (25) . Las purezas de estas proteínas fueron verificadas por tinción de plata o tinción de Coomassie y análisis Western Blot (1:4000 anticuerpo primario-lh a temperatura ambiente y 1:400 anticuerpo secundario-0.5h a temperatura ambiente).
Ensayos de unión por fluorescencia: en los estudios fluorométricos de titulación se utilizó RPE65 en PBS, 1% de CHAPS, pH 7.4. Se midieron las concentraciones de proteínas por un método de Lowry modificado (Lowry y col., 1951). Todas las titulaciones se hicieron a 25°C.
Las muestras en buffer PBS fueron excitadas a 250 nm y se escaneó la fluorescencia desde 300 hasta 500 nm. Las mediciones de la fluorescencia, utilizando celdas de cuarzo de 450 µL con una longitud de trayectoria de 0.5 cm, se hicieron a 25°C en un instrumento Jobin Yvon, Fluoromax 2 empleando el método de detección de ángulo recto.
La fluorescencia de la solución de proteínas se midió después de equilibrarla a 25°C durante 10 minutos.
La muestra fue luego titulada con una solución de retinoide disuelto en dimetiisulfóxido. En cada titulación, a una solución de 250 µL de la proteína se adicionó una cantidad equivalente de retinoide, por lo regular 0.2 µL y se mezcló perfectamente antes de dejarla llevar al equilibrio durante 10 minutos antes de registrar la intensidad de la fluorescencia. La adición de dimetiisulfóxido (0.1% por adición) no tuvo ningún efecto sobre la intensidad de la fluorescencia. Se calculó la constante de unión (KD) a partir de la intensidad de la fluorescencia utilizando la siguiente ecuación (Gollapalli y col., 2003).
P0c¿ =-— -^—- ~ ' ??(I-ct) n donde Po = concentración total de la proteína, F -F F ?RIX -EU. n_ nu?rLero de sitios de unión independientes, R0 = concentración total del retinoide en cada adición, KD= constante de disociación, Fmax = intensidad de la fluorescencia en la saturación y Fg = intensidad inicial de la fluorescencia.
Unión competitiva del ácido retinóico (todo-trans- y 13-cis) y palmitato de todo-trans-retinilo a RPE65: Se hicieron experimentos de intercambio de solución amortiguadora para investigar las capacidades de los ácidos retinóicos (todo-trans y 13-cis) para desplazar la unión de palmitato de todo-trans-retinilo desde RPE65. A RPE65 (0.5 µM) (PBS, 1% CHAPS, pH 7.4), se adicionó 6 µM de ácido retinóico (todo-trans y 13-cis) y se incubó a 4°C durante 30 minutos. Se incubó una muestra control de RPE65 sin ácidos retinóicos a 4°C durante 30 minutos. Al término de esta incubación se incubaron las muestran 3 durante 30 minutos con palmitato de H-todo-trans-retinilo (0.65 µM, 20.31 Ci/mmol). Al término de este tiempo de incubación se intercambió la solución 4 amortiguadora (PBS-1% CHAPS) 10 veces con filtro Centricon 10K MWCO. La muestra retenida y el flujo de la solución amortiguadora que pasó fueron contados en un contador líquido de centelleo para medir la cantidad del palmitato de 3H-todo-trans-retmilo retenido.
Efecto del ácido todo-trans-retinóico (atRA) , del ácido 13-cis-retinóico (13cRA) y N- (4-hidroxifenil) retinamida (4-HPR) sobre IMH: A 1 mL de suspensión amortiguada de membranas de RPE (100 mM Tris pH 8.0, 76.7 µg de proteína) se adicionó 60 µM o 6 µM de atRA, 13 cRA o 4-HPR y se incubó a temperatura ambiente durante 15 minutos. Una mezcla de reacción control sin inhibidor también se incubó a temperatura ambiente durante 15 minutos. Al término de la incubación de 15 minutos se adicionó todo-trans-retinol [11-12- H2] (0.2 µM) a las mezclas de reacción (tris 100 mM pH 8.0, 76.7 µg de proteína RPE, 0.2% BSA 100 µM de DPPC, 1 M de DTT y 0.2 3 µM de todo-trans-retinol [11-12- H2] ) y se incubaron a temperatura ambiente durante 30 minutos. Al término de estos 30 minutos de incubación una alícuota de cada una de las reacciones fue extinguida para comprobar la adición equivalente de todo-trans-retinol [11-12- H2} y el efecto de estos inhibidores sobre LRAT. Después esta mezcla de reacción control fue incubada con atRA (60 y 6 µM) , 13 cRA (60 y 6 µM) o 4-HPR (60 y 6 µM) durante 15 minutos. Ahora todas las mezclas de reacción fueron incubadas con 30 µM de apo-rCRALBP (100 mM Tris pH 8.0, 7.7 µg de proteína RPE, 0.2% BSA 100 µM de DPPC, 1 mM de DTT 30 µM apo-rCRALBP y 0.2 µM todo-trans-retinol [11-12- H2] ) a 37°C durante 30 minutos. Al término de este tiempo de incubación, 200 µL de la mezcla de reacción fueron extinguidos por la adición de 750 µL de metanol enfriado en hielo después de lo cual se adicionó 100 µL de una solución 1 M de cloruro de sodio, y se adicionó 500 µL de hexano (con un contenido de hidroxitolueno butilado a 1 mg/mL) para efectuar la extracción de los retinoides. Los retinoides fueron analizados como ya se describió (27) . Se utilizó la cantidad de 11-cis-retinol formada como medición de la actividad de IMH. Todos los experimentos fueron realizados por triplicado y los valores promedio de estas mediciones se utilizaron para el análisis. 3 H2 palmitoilación de rHmRPE65: Una membrana humana recombinante 6xHis asociada con RPE65 fue expresada en baculovirus recombinante en células de insecto sf21. Las células sf21 fueron transfectadas con baculovirus recombinante seguido por incubación durante 8 horas a 25°C. Seguido por la adición de (0.09 µM) de ácido 3H2 palmítico (0.5 mCi/mL) . El cultivo fue incubado a 25°C durante 48 horas. Un cultivo similar con ácido palmítico no radioactivo (0.09 µM) fue crecido como control. Al término de la extracción las células fueron cosechadas a 500 xg. Las células fueron usadas en 100 mM de buffer de fosfatos con 500 mM de NaCl-pH 8.0, 5 mM de imidazol y 6 m de guanidina HCl. El buffer para lisis contenía la cantidad apropiada del cocktail de inhibidores de la proteasa según las instrucciones del fabricante. Las células usadas fueron luego centrifugadas a 100,000 xg para sedimentar los desechos celulares, y se purificaron en una columna níquel-NTA siguiendo las instrucciones del fabricante. La solución de proteínas purificada fue dividida en dos partes: (1) fue tratada durante 16 h con 0.5 M de Tris pH 8.0 y (2) fue tratada durante 16 h con hidroxilamina 0.5 M pH 8.0. Las muestras de proteína fueron luego analizadas por electroforesis en gel de dodeciisulfato de sodio-poliacrilamida, análisis Western blot y auto-radiografía.
El análisis MALDI-TOF de mRPE65 y sRPE65 bovino, purificado: el análisis de la masa MALDI-TOF se hizo utilizando un Voyager-DE STR de Applied Biosystems. El mRPE65 y sRPE65 fueron purificados como ya se describió. La banda del gel que contenía mRPE65 y sRPE65 puros fue deshidratada en acetonitrilo durante 10 minutos. Los pedazos de gel se cubrieron con ditiotrietol (100 mM) en bicarbonato de amonio (100 mM) para reducir las proteínas durante una hora a 56°C. Después del enfriamiento a temperatura ambiente se retiró el buffer reductor. El ciclo de lavado/deshidratación del gel se repitió tres veces con bicarbonato de amonio/acetonitrilo antes de tripsina (12.5 mg/µL, 5 µL/mm de gel, durante la noche) para la digestión a 37°C. Las rebanadas de gel fueron centrifugadas y se recolectó el sobrenadante. Los péptidos fueron además extraídos mediante un cambio de bicarbonato de amonio 20 mM y 3 cambios de 50% de acetonitrilo (20 minutos entre cambios) a 25°C. Se utilizó ácido a-ciano-4-hidroxicinámico (0.5 mg/µL, 10 mg/mL) como la matriz para cada muestra (0.5 µL) . Las muestras fueron corridas en el modo del reflector con 20,000 V de voltaje acelerador y 200 nsec del tiempo de retardo de la extracción. La intensidad del láser fue de 1900-2300 y se recolectaron 100-200 disparos de láser para cada espectro. El intervalo de la masa de la adquisición fue 750-4500 Da con una compuerta de masa baja de 600 Da.
Efecto de sRPE65 sobre la esterificación mediada por tLRAT: se determinó la actividad de LRAT vigilando la formación de los esteres retinílicos catalizados por tLRAT a partir de todo-trans-retinol [11-12-3H2] SRPE65 y/o DPPC/maltosuro de dodecilo adicionados . En todos los estudios documentados en la presente se utilizó LRAT truncado (tLRAT) (Jahng y col., 2003b). Esta forma de LRAT tiene los dos dominios transmembrana N y C terminales del LRAT truncado, y el tiene el rotulo His que permite la expresión bacteriana de LRAT y su purificación total (Bok y col., 2003). La LRAT nunca ha sido purificada y no es posible expresarla en bacterias . Los estudios cinéticos de LRAT y tLRAT muestran que tienen un comportamiento idéntico (Bok y col., 2003). En los experimentos actuales, la mezcla de reacción (volumen de 0.1 L) contiene 100 mM de Tris (pH 8.4), 5 µM de tLRAT, 200 µM de DPPC/0.1% de maltosuro de dodecilo y/o 0.04 µM de sRPE65, 1 mM de ditiotreitol y 0.2 µM de todo-trans-retinol [11-12-3H2] y se incubó durante 10 minutos a temperatura ambiente. Después de 10 minutos la reacción fue extinguida con 500 µL de metanol, 100 µL de agua y 500 µL de hexano. La cantidad de palmitato de todo-trans-retinilo [11-12-3H2] formada según se determinó por HPLC en fase normal se utilizó como medida de la actividad. Cada experimento se hizo por duplicado y los puntos de los datos utilizados son un promedio de estos dos puntos.
Esterificación de la vitamina A dependiente de la concentración de mRPE65: Se determinó el efecto de la concentración de mRPE65 sobre las velocidades de formación de palmitato de todo-trans-retinilo vigilando la formación catalizada por tLRAT de palmitato de todo- 3 trans-retinilo a partir de [11-12- H2] -todo-trans-retmol y mRPE65 adicionados. Se debe observar que el palmitato de todo-trans-retinilo formado a partir de mRPE65 y vitamina A fue identificado por sus propiedades espectroscópicas de masa y cromatográficas. La mezcla de reacción (volumen 0.1 mL contiene 100 µM de Tris (pH 8.4), 5 µm de tLRAT, 0.3% de CHAPS, 1 M de ditiotreitol y 5 µM de todo-trans-retinol [11-12-3H2] y mRPE65 (0, 0.008, 0.02, 0.028, 0.04, 0.052, 0.06 y 0.08 µM) se incubó durante 10 minutos a temperatura ambiente. Después de 10 minutos la reacción se extinguió con 500 µL de metanol, 100 µL de agua y 500 µL de hexano. La cantidad 3 de palmitato de todo-trans-retmilo [11-12- H2] formado según se determinó por HPLC en fase normal y se utilizó como medida de la actividad. Se calcularon los parámetros cinéticos KM (kapp) y N como se describe antes (Segal 1993) . Cada experimento se hizo por triplicado y los puntos de los datos utilizados son un promedio de estos tres puntos. Los errores típicos se presentan como barras de error.
Palmitoilación reversible de vitamina A mediada por RPS65: Se investigó la reversibilidad de la palmitoilación de vitamina A, mediada por tLRAT. Una mezcla de reacción consistente en 100 mM de Tris-pH 8.4, 0.06 µM de mRPE65, 1 mM de ditiotreitol, 1 mM de EDTA, 5 µM de tLRAT y 5 µM de todo-trans-retinol se incubó durante una hora. Esto fue seguido por la adición de 5 µM de todo-trans-retinol [11-12-3H2] (4.05 Ci/mmol). Se tomaron alícuotas de la reacción después de 0, 2, 7, 10, 20 y 35 minutos y se extinguió la reacción por la adición de 500 µL de metanol, 100 µL de H20 y se extrajo con 500 µL de hexano. Los esteres todo-trans-retinílieos fueron separados de todo-trans-retinol y de cada fracción se calculó la actividad específica como ya se describió (Gollapalli y Rando 2003) . Cada punto de tiempo se hizo por triplicado y se utilizó el valor promedio. Los errores típicos se presentan como barras de error.
Conversión in vitro de mRPE65 a SRPE65: mRPE65 (0.02 µM) purificado se incubó con tLRAT (5 µM) y todo-trans-retinol (0.2 µM) a temperatura ambiente durante 2 horas. Al término de la reacción, la mezcla de reacción fue irradiada con luz UV (365 nm) durante 15 minutos para destruir los retinoides endógenos. Se dializó la solución contra un buffer de diálisis que contenía buffer de fosfatos 100 mM (pH 8.0), NaCl 500 mM, imidazol 5 mM y 1% de CHAPS. La mezcla de reacción dializada luego se concentró y se pasó a través de una columna níquel-NTA spin para separar la tLRAT con el rótulo 6xHis. El flujo pasante se concentró y se utilizó en el ensayo de unión por fluorescencia como se describe antes. La separación tLRAT fue confirmada por análisis Western blot (análisis del anticuerpo primario 1:4000 1 h a temperatura ambiente y del anticuerpo secundario 1:400-0.5 h a temperatura ambiente) .
Presencia isomérica de la esterificación de retinóles mediada por mRPE65/tLRAT: Se determinó el efecto de mRPE65 sobre el procesamiento de 11-cis-y todo-trans-retinoles supervisando la formación de esteres retinílicos catalizados por tLRAT a partir de 11-trans-retinol [11-12-3H2], 11-cis-retinol [11-12-3H2] y mRPE65 adicionados. La mezcla de reacción (volumen de 0.1 mL) que contenía Tris 100 mM (pH 8.4), 5 µM de tLRAT, 0.3% de CHAPS, ditiotreitol 1 mM y 0.2 µM de todo-trans-retinol [11-12-3H2] o 11-cis-retinol [11-12-3H2] y mRPE65 (0.02 µM) ó 200 µM/0.4% de DPPC/BSA se incubo durante 10 minutos a temperatura ambiente. Después de 10 minutos se extinguió la reacción con 500 µL de metanol, 100 µL de agua y 500 µL de hexano. La cantidad de palmitato de retinilo formado, según se determinó por HPLC de fase normal, se utilizó como medida de la actividad. Cada experimento se hizo por triplicado y los puntos de datos utilizados son un promedio de estos tres puntos. El error típico se presenta como barras de error.
Efecto de la depalmitoilación de mRPE65 mediada por 11-cis-retinol sobre la generación de 11-cis-retinol: A 1 mL de suspensión amortiguada de membranas RPE (Tris 100 mM, pH 8.0, 80 µg de proteína) se adicionó 100 µM de 11-cis-retinol y se incubó a temperatura ambiente durante 45 minutos. También se incubó a temperatura ambiente durante 45 minutos una mezcla de reacción control sin 11-cis-retinol. Al término de los 45 minutos de incubación, las mezclas de reacción fueron expuestas a luz UV (354 nm) durante 10 minutos para destruir los 11-cis-retinoides. 3 Luego se adiciono todo-trans-retinol [11-12- H2] (0.1 µM) a las mezclas de reacción (Tris 100 mM, pH 8.0, 80 µg de proteína RPE y 0.1 µM de todo-trans-retinol [11-12- H2] , y se incubación a 37°C. Alícuota de 100 µL de las reacciones fueron extinguidas después de 0, 5, 10, 15, 20, 30, 45, 60, 90, 120 y 150 minutos mediante la adición de 500 µL de metanol después de lo cual se adicionó 100 µL de H20 y 500 µL de hexano (que contenía hidroxitolueno butilado en una concentración de 1 mg/mL) se adicionó para efectuar la extracción de los retinoides. Los retinoides fueron analizados como ya se describió (Winston y Rando 1998) . La cantidad de 11-cis-retinol formado se utilizó como medición de la actividad de IMH.
Todos los experimentos se hicieron por triplicado y los valores promedio de estas mediciones fueron utilizados para el análisis.
A. Bloqueo de la unión de RPE65 a los esteres retinílicos Efecto del ácido todo-trans-retinóico (atRA) , ácido 13-cis-retinóico (13 cRA) y N- (4-hidroxifenil) retinamida (4-HPR) sobre IMH: A 1 mL de suspensión amortiguada de membranas RPE (Tris 100 mM, pH 8.0, 76.7 µg de proteína) se adiciono 60 µM ó 6 µM de atRA, 13 cRA ó 4 HPR y se incubó a temperatura ambiente durante 45 minutos. Una mezcla de reacción control sin inhibidor también se incubó a temperatura ambiente durante 15 minutos. Al término de la incubación de 15 minutos se adicionó todo-trans-retinol [11-12- H2] (0.2 µM) a las mezclas de reacción (100 mM Tris pH 8.0, 76.7 µg o proteína RPE, 0.2% BSA 100 µM o DPPC, 1 mM de DTT y 0.2 µM todo-trans- 3 retmol [11-12- H2] ) y se incubó a temperatura ambiente durante 30 minutos. Al término de estos 30 minutos de incubación una alícuota de cada una de las reacciones fue extinguida para verificar la adición equivalente de todo-trans-retinol [11-12- H2] y el efecto de estos inhibidores sobre LRAT. Después de esto esta mezcla de reacción control fue incubada con atRA (60 y 6 µM) , 13 cRA (60 y 6 µM) o 4-HPR (60 y 6 µM) durante 15 minutos. Ahora todas las mezclas de reacción fueron incubadas con 30 µM de apo-rCR?LBP (Tris 100 mM pH 8.0, 7.7 µg de proteína RPE, 0.2% BSA, 100 µM de DPPC, 1 mM de DTT 30 µM apo-rCRALBP y 0.2 µM todo-trans-retinol [11-12-3H2] ) a 37°C durante 30 minutos. Al término de este tiempo de incubación, 200 µL de la mezcla de reacción fueron extinguidos por la adición de 750 µL de metanol enfriado en hielo después de lo cual se adicionó 100 µL de una solución 1 M de cloruro de sodio, y 500 µL de hexano (que contenía hidroxitoluenobutilado en una concentración de 1 mg/mL) se adicionó para efectuar la extracción de los retinoides. Los retinoides fueron analizados como ya se describió (27) . La cantidad de 11-cis-retinol formada se utilizó como medición de la actividad de IMH. Todos los experimentos fueron realizados por triplicado y se utilizaron para el análisis los valores promedio de estas mediciones .
La Figura 4A, B, C muestra los datos de la unión específica del ácido todo-trans-retinóico a RPE65 purificado. Como se muestra en la Figura 4A, la unión de ácido todo-trans-retinóico a RPE65 dio origen a una extensión exponencial de la fluorescencia de la proteína. Esta extinción sigue una isoterma de unión saturable (Figura 4B) , y produce una KD promedio para la unión de aproximadamente 109 nM (desviación estándar =10 nM, N = 4) (Figura 4C) . Datos semejantes se muestran en la Figura 5A, B, C para el ácido 13-cis-retinóico, produciendo una KD promedio para la unión de aproximadamente 195 nM (desviación estándar =20 nM, N = 4) (Figura 5C) . Estos experimentos muestran que ambos ácidos retinóicos se unen específicamente a RPE65 con elevadas afinidades. Por comparación, en las mismas condiciones de unión, el palmitato de todo-trans-retinilo se une a RPE65 con KD= 47 nM (no se muestran los datos) . Para evaluar más la especificidad de unión, las interacciones de unión de un retinoide adicional, N- (4-hidroxifenil) retinamida (fenretinida) : con RPE65 fueron estudiadas. Se esperaba que la unión N- (4-hidroxifenil) retinamida a RPE65 fuera considerablemente más débil que para ácidos retinóicos, por que los análogos en las series de la retinamida solo inducen débilmente la ceguera nocturna. De hecho, la N- (4-hidroxifenil) retinamida se une muy débilmente a RPE65. Los datos que se muestran en la Figura 6A, B, C producen una KD promedio para la unión de aproximadamente 3547 nM (DE = 280 nM, N = 4) (Figura 6C) . Así pues, la débil unión observada para la N- (4-hidroxifenil) retinamida es la que se predijo para la hipótesis que RPE65 es la diana de la ceguera nocturna.
B. El ácido retinóico desplaza al palmitato de todo-trans-retinilo del RPE65: La unión competitiva de ácido retinóico (todo-trans y 13-cis) y palmitato de todo-trans-retinilo a RPE65: Se hicieron experimentos de intercambio de buffer para investigar las habilidades de los ácidos retinóicos (todo- trans y 13-cis) para desplazar de RPE65 la unión del palmitato de todo-trans-retinilo. A RPE65 (0.5 µM) (PBS, 1% CHAPS, pH 7.4) se adicionó 6 µM de ácido retinóico (todo-trans- y 13 cis) y se incubó a 4°C durante 30 minutos. Se incubó una muestra control de RPE65 sin ácidos retinóicos a 4°C durante 30 minutos. Al término de esta incubación, las muestras fueron incubadas durante 30 minutos con palmitato de H-todo- rans-retinilo (0.65 µM, 20.31 Ci/mmol). Al término de este tiempo de incubación se intercambió el buffer (PBS-1% CHAPS) 104 veces con filtro Centricon 30K MWCO. La muestra retenida y el flujo del buffer pasante fueron contados en un contador líquido de centelleo para medir la cantidad del palmitato de H-todo-trans-retinilo retenido .
Los estudios de unión directa reportados en lo anterior para los ácidos retinóicos no son determinantes en cuanto a si estas moléculas son competitivas con la unión de los esteres todo-trans-retinílicos, los ligandos fisiológicamente pertinentes de RPE65. Esto puede demostrarse fácilmente por la preunión de palmitato de 3H-todo-trans-retinilo a RPE65 y demostrando que el ácido todo-trans-retinóico compite con la unión (Figura 7) . Este experimento se hizo primero incubando RPE65 con ácido todo-trans-retinóico o ácidos 13-cis-retinóico y (-) ácido retinóico (control) , después de lo cual se incubó la proteína durante 30 minutos con palmitato de H-todo-trans-retinilo. Los retinoides en exceso fueron separados por intercambio del buffer y el flujo pasante y las soluciones retenidas fueron contadas utilizando un contador líquido de centelleo. Los datos muestran que los ácidos retinóicos y los esteres todo-trans-retinílicos aparentemente compiten por el mismo sitio de unión en el RPE65.
C. Los ácidos retinóicos inhiben la función de RPE65 El RPE65 es el chaperón de los esteres todo-trans-retinílieos y, como tal, es primordial para la movilización de estas moléculas hidrofóbicas para la isomerización. En los estudios actuales, un sistema de membranas del epitelio pigmentario de la retina de bovino se utiliza para procesar todo-trans-retinol (vitamina A) adicionado para formar 11-cis-retinol . Puesto que RPE65 es primordial para la biosíntesis de 11-cis-retinol (4,8, 11), los inhibidores de éste podrían bloquear esta síntesis. En los experimentos que se muestran en la Figura 7 la velocidad de la unión de los esteres todo-trans-retinílicos a RPE65 es suficientemente lenta para permitir que el complejo sobreviva a la centrifugación en las columnas Centricon Spin. Lo mismo es cierto para el ácido todo-trans-retinóico (no se muestran los datos) . Esto sugiere que el orden de incubación de los inhibidores de RPE65, según se espera, sea importante para mostrar la inhibición efectiva. La preincubación de estas membranas con vitamina A produce rápidamente los esteres todo-trans-retinílicos mediante la rápida esterificación mediada por LRAT. Los esteres todo-trans-retinílicos se unen estrechamente a RPE65, y luego se procesan hacia 11-cis-retinol por IMH. Este sistema no es susceptible de inhibición por los ácidos todo-trans- o 13-cis-retinóicos incubados a 60 µM (no se muestran los datos) . Este es el resultado esperado por que se sabe que los ácidos retinóicos no inhiben directamente IMH. No obstante, la preincubación con los ácidos retinóicos produce un resultado notablemente distinto, como se muestra en la Figura 8. En este caso, inhibición considerable de la formación de 11-cis-retinol se observa en presencia de ácidos retinóicos por que estos tienen acceso a RPE65. Es interesante señalar que la inhibición observada con N-(4-hidroxifenil) retinamida demostró ser considerablemente más débil (Figura 8) . Este es el resultado esperado, dada su relativamente débil afinidad para RPE65.
D. La unión estereoespecífica de la vitamina A por sRPE65 Como ya se mencionó, el RPE65 asociado a membrana (mRPE65) se une en una forma estereoespecífica a palmitato de todo-trans-retinilo. En este ejemplo, la unión de los retinoides a sRPE65 se mide por la metodología de la fluorescencia ya descrita (Gollapalli D. R., Maiti, P., Rando, R. R., (2003) el RPE65 funciona en el ,ciclo visual de los Biochemistry 42, 11824-30) . La longitud de onda de excitación fue a 280 nm y la emisión fue observada a través de una capa de 0.5 cm de solución. La solución de titulación consistió en 0.37 µM de SRPE65 en 100 mM de salina amortiguada con fosfatos (150 mM) pH 7.4 y 1% CHAPS. En la Figura 9 A, B se muestran los datos de la unión de todo-trans-retinol (tROL) y palmitato de todo-trans-retinilo a sRPE65 purificado. La Figura 9A1 muestra los espectros de emisión de sRPE65 con concentraciones crecientes de tROL. La Figura 9A2 muestra las gráficas del ajuste cuadrado lineal para la titulación de SRPE65 contra tROL. Como se muestra en la Figura 9A, la unión de todo-trans-retinol a sRPE65 dio origen a una extinción exponencial semejante en la fluorescencia de la proteína. La Figura 9B1 muestra los espectros de emisión de sRPE65 con concentraciones crecientes de tRP. La Figura 9B2 muestra las gráficas del ajuste cuadrado lineal de la titulación de sRPE65 contra tRP. Esta extinción siguió una isoterma de unión saturable, y produjo una KD promedio (Figura 9D) para la unión de aproximadamente 1.2 µM (Figura 9B2) . Las constantes de unión de tROL y rRP con mRPE65 y sRPE65 con 1% CHAPS en buffer de fosfatos 100 mM con los datos de unión de cloruro de sodio 150 mM [sic] se compilan en la Figura 9B.
E. sRPE65 como un chaperón de la vitamina A en la formación de los esteres todo-trans-retinílicos Se demuestra que la vitamina A unida a sRPE65 tiene actividad en el metabolismo demostrando su capacidad para ser procesada por LRAT, una enzima que representa la única vía metabólica conocida para el procesamiento de la vitamina A en el RPE65. Como se muestra en la Figura 9C, la vitamina A unida a sRPE65 es un sustrato excelente para LRAT truncada (tarta) , una forma fácilmente expresada de LRAT, la cual no puede ser distinguida mecánicamente de LRAT. Estos estudios demuestran que sRPE65 en realidad puede dirigir la vitamina A hacia LRAT, y de este modo la unión de la vitamina A a SRPE65 puede tener significado funcional. En ausencia de este sRPE65 hay muy poca síntesis de palmitato de todo-trans-retinilo (Figura 9C) . Como se documenta en la Figura 9C, el tRP fue producido en presencia de: (1) sRPE65 (0.04 µM) , maltosuro de dodecilo (0.1%) y DPPC (200 µM) , pero no (2) maltosuro de dodecilo (0.1%) y DPPC (200 µM) ó (3) sRPE65 (0.04 µM) solos. Todas las mezclas de reacción contienen Tris 100 mM, pH 8.4, ditiotreitol 1 mM, EDTA 1 mM, tLRAT 5 µM y tROL 0.2 µM.
F. Palmitoilación de SRPE65 Se estudió la relación bioquímica entre mRPE65 y SRPE65 con respecto a sus estados de modificación post traduccional hidrofóbica. La S-palmitoilación parece ser la posibilidad más probable dado que el proceso es reversible. Esto se puede probar directamente en una forma normalizada haciendo crecer células de insecto ( sf21 ) transfectadas con baculovirus (Ma, J., Zhang, J., Othersen, K. L., Moiseyev, G., Ablonczy, Z., Redmond, T. M., Chen, Y., Crouch, R. K. (2001) Expression, purification, and MALDI analysis of RPE65. Invest Ophthalmol Vis Sci. 42, 1429-35) en ácido H2-palmítico, y determinando si está etiquetado el mRPE65 expresado. La Figura 10 muestra la palmitoilación in vivo de rHmRPE65, 3 expresado en células sf 21 en presencia de ácido H2-palmítico, y aparte en presencia de ácido palmítico no etiquetado. Ll-4 muestra el gel teñido con Coomassie, L5-6 muestra el auto-radiograma de Ll-4, y L8 muestra el análisis Western blot de rHmPE65. En el panel A, (Ll) muestra los marcadores del peso molecular con 14C; (L2) muestra el control con rHmRPE65 purificado expresado en células sx"21 crecidas en presencia de ácido palmítico no etiquetado (0.09 µM) ; (L3) muestra donde rHmRPE65 3 purificado expresado en células s_21 en presencia de H2 palmítico (0.09 µM-0.5 mCi/mL) y tratado durante 16 horas con Tris 0.5 M, pH 8.0; (L4) muestra el rHmRPE65 purificado expresado en células sf"21 en presencia de ácido H2 palmítico (0.09 µM-0.5 mCi/mL) y luego tratado durante 16 h con hidroxilamina 0.5 M pH 8.0; (L5, L6 y L7) muestran los auto-radiogramas de L2, L3 y L4. L7 muestra el análisis Western blot para rHmRPE65 purificado detectado con el anticuerpo primario contra RPE65 (1:4000-1 h, temperatura ambiente).
Como se muestra en la Figura 10A, el mRPE65 purificado, expresado en células de insecto, en realidad está etiquetado por el ácido 3H-palmítico adicionado. Como se esperaba, el tratamiento de mRPE65 etiquetado con hidroxilamina, que disocia los tioésteres, libera la etiqueta. Para definir los sitios de modificación in vivo de mRPE65 se hicieron experimentos de espectroscopia de masas sobre mRPE65 y sRPE65 bovinos, purificados. Estas muestras fueron digeridas con tripsina y sometidas al análisis espectroscópico de masa (Figuras 10B y C) . Los resultados muestran que mRPE65 es triplemente palmitoilado en las posiciones C231, C329 y C330. Por comparación, los datos también muestran que sRPE65, al parecer, no sufre palmitoilación.
Las Figuras 10B y C muestran el análisis de espectrometría de masa de dos péptidos diferentes de mRPE65 y sRPE65. Los péptidos de RPE65 digeridos con tripsina fueron analizados por MALDI-TOF. Las anotaciones de los picos son como sigue: Figura 10B, 1378.9 Da (secuencia de aminoácidos 223-234, SEIWQFPCSDR) , 1429.4 Da (1-14, N-Acetil-SSQVEHPAGGYKK) , 1477.4 Da (34-44, IPLWLTGSLLR) , 1483.0 Da (114-124, NIFSRFFSYFR) , 1616.6 Da (223-234, SEIWQFPC*SDR) , 1700.1 Da (83-96, FIRTDAYVRAMTEK) , 1701.7 (367-381, RYVLPLNID) , 1718.7 (83- 96, FIRTDAYVRAM#TEK) . Figura 10C, 2770.3 (333-354, GFEFVYNYSYLANLRENWEEVK) , 3321.6 (306-332, TSPFNLFHHINTYEDHEFLIVDLCCWK) , 3797.8 (306-332, TSPFNLFHHINTYEDHEFLIVDLC*C*WK) . C* indica cisteína palmitoilada y M# para metionina oxidada.
G. La interconversión de mRPE65 y sRPE65 por LRAT Puesto que el mRPE65 y sRPE65 presentan especificidades de unión al retinoide complementarias, es primordial comprender cómo se interconvierten estas dos moléculas. Lo más interesente, LRAT puede utilizar mRPE65 como donador de palmitoilo (Figura HA) y transfiere esta porción a la vitamina A para generar palmitato de todo-trans-retinilo (Figuras 11 B, C, D) . La Figura 11B muestra la esterificación de todo-trans-retinol, dependiente de mRPE65 solo (-"-) y de DPPC solo (-•-) . En estos experimentos el mRPE65 puro y vitamina A se incuban con LRAT y el palmitato de todo-trans-retinilo resultante se separa por HPLC. El análisis espectroscópico de masa del palmitato de todo-trans-retinilo separado muestra que es auténtico y por tanto una porción palmitoilo fue transferida de mRPE65 a la vitamina A. Estos datos también muestran que mRPE65 es un donador de palmitoilo mucho más eficiente que dipalmitoil fosfatidil colina (DPPC) , el donador de acilos normal en la reacción de LRAT. En las mismas condiciones no se mide recambio observable de DPPC (Figura 11B) . La gráfica cinética mostrada en la Figura 11B revela cinética sigmoidal con una KM (Kapp) calculada de 0.03 µM para mRPE65 (en comparación con un valor de 1.4 µM para DPPC) . La gráfica de Hill (Figura 11C) produce un valor de 2.54 para N, sugiriendo que más de una molécula de mRPE65 está involucrada en la transferencia del grupo palmitoilo. La cinética sigmoidal observada sugiere una función reguladora para este proceso, permitiéndole responder a leves cambios en las concentraciones de mRPE65.
La posibilidad de que la reacción sea reversible se establece fácilmente. En estos experimentos (Figura 11D) todo-trans-retinilo en exceso se incuba con mRPE65 y tLRAT hasta que no se genera más palmitato de todo- trans- 3 retinilo. Esto es seguido por el tratamiento con H-trans-retinol. La elevación posterior de las actividades específicas de palmitato todo-trans-retinilo y la caída de las actividades específicas de todo-trans-retinol en concentraciones constantes del palmitato de todo-trans-retinilo manifiesta el equilibrio de los sustratos (Figura 11D) . La Figura 11D muestra el cambio en las actividades específicas (izquierda eje y) de tRP (-•-) y tROL (-•-) en función del tiempo. El éster retiñílico total (-A-) formado (derecha eje y) muestra la saturación de la reacción que sintetiza el éster. Cada reacción contiene Tris 100 mM pH 8.4, mRPE65 0.06 µM, tLRAT 5 µM, ditiotreitol 1 mM, EDTA 1 mM y tROL 10 µM.
El RPE65 depalmitoilado formado cuando se trata mRPE65 con tLRAT y vitamina A muestra comportamiento de unión al retinoide semejante a sRPE65. El mRPE65 fue incubado con vitamina A y tLRAT en exceso. Después de la separación de los retinoides y tLRAT, entonces se estudió el sRPE65 con respecto a su capacidad para unir vitamina A y palmitato de todo-trans-retinilo. Como se muestra en la Figura 2D, el tratamiento de mRPE65 con LRAT y vitamina A convierte el mRPE65 en una forma de unión funcional de RPE65 que no puede ser distinguida de sRPE65 separado.
H. El 11-cis-retinol se palmitoila por mRPE65 y el LRAT El 11-cis-retinol, el producto directo de la acción de IMH, también se esterifica (Figura 12A) . Como se muestra en la Figura 12B, el 11-cis-retinol realmente es un sustrato superior durante la esterificación mediada por tLRAT/mRPE65 (palmitoilación) de los retinoides en comparación con la vitamina A. (1) 11-cis-retinol (2 µM) y mRPE65 (0.02 µM) . (2) todo-trans-retinol (2 µM) y mRPE65 (0.02 µM) . (3) 11-cis-retinol (2 µM) y DPPC/BSA (250 µM/0.4%). (4) todo-trans-retinol (2 µM) y DPPC/BSA (250 µM/0.4%). Todas las mezclas de reacción contienen Tris 100 mM, pH 8.4, ditiotreitol 1 mM, EDTA 1 mM y tLRAT 5 µM.
La palmitoilación de 11-cis-retinol mediante mRPE65 proporciona un mecanismo natural a través del cual se recambia el mRPE65 y se ejerce control durante la operación del ciclo visual porque 11-cis-retinol impulsa mRPE65 hacia sRPE65 interrumpiendo efectivamente la vía de biosíntesis del cromóforo. Esto se demuestra directamente en la Figura 12C en la que las membranas de RPE son tratadas con 11-cis-retinol 10 µM para impulsar la transición de mRPE65 a SRPE65. Esta figura muestra la 3 generación de [11, 12- H2] -11-a?s-retinol dependiente del tiempo, en presencia de la depalmitoilación (-•-) mediada por 11-cis-retinol y en ausencia de depalmitoilación (-•-) mediada por 11-cis-retinol. El recuadro muestra un intervalo de tiempo completo. La irradiación de la muestra con luz ultravioleta destruye los 11-cis-retinoides. Las muestras control y tratadas entonces se incuban con vitamina A, y se mide las velocidades de 11-cis-retinol, el producto de IMH. La muestra previamente tratada con 11-cis-retinol muestra un periodo de retraso distinto antes de que ocurra la síntesis del producto.
I. Antagonistas ejemplares de RPE65 Las constantes de afinidad (Jj) de los diferentes compuestos para RPE65 de ratón fueron determinadas. Se encontró que los compuestos antes descritos como 4a, 4b y 4c tienen una K¿ de 47 nM, 235 nM y 1300 nM, respectivamente. Así pues, la potencia de la unión está en función de la longitud de la cadena éster, es decir, a mayor longitud de la cadena más fuerte la afinidad para RPE65 y más fuerte es el antagonista.
Los compuestos antes enlistados como 4d, 4e y 4f también son antagonistas potentes de RPE65, con una Kd de 21 nM, 40 nM y 64 nM, respectivamente.
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Ejemplo 2: Efecto de los fármacos que provocan el corto circuito del ciclo visual, in vivo Se inyectaron ratones por vía intraperitoneal (i.p.) con 50 mg/kg de los compuestos enlistados, preparados en 25 microlitros de DMSO. Los ratones control positivo fueron inyectados con ácido 13-cis-retinóico (ACCUTANE®) , en una concentración de 50 mg/kg en 25 microlitros de DMSO. Los ratones control negativo fueron inyectados con 25 microlitros de DMSO.
En tiempos predeterminados después ' de la administración, los ratones fueron expuestos a suficiente luz para provocar blanqueado completo del ciclo visual. Luego se hicieron los electroretinogramas (ERG) en luz brillante o luz tenue, y se midió la amplitud de la onda b. La amplitud de la onda b se supone que es proporcional a la regeneración de rodopsina y por este medio se correlaciona con el funcionamiento del ciclo visual (es decir, a mayor amplitud de la onda b, más grande el funcionamiento del ciclo visual) .
A. 4-butil-anilina y 3-aminobenzoato de etilo Se preparó 4-butil-anilina y 3-aminobenzoato de etilo como soluciones en DMSO. Ratones genéticamente naturales, de 7 meses de nacidos (wt; C57BL/6J X 129/SV; Rpe65 Leu450Leu) fueron inyectados por vía intraperitoneal con 25 µL (50 mg/kg) de cada compuesto.
Los animales inyectados con ACCUTANE (ácido 13-cis-retinóico, 25 microlitros, 50 mg/kg) y DMSO (etiquetado como wt; 25 microlitros) fueron utilizados como controles positivo y negativo, respectivamente. Dos ratones fueron inyectados en cada grupo. Se hicieron mediciones de ERG.
La Figura 14A muestra los efectos de los compuestos una hora después de la inyección. El control negativo tipo natural demostró una recuperación del 50% de la amplitud de la onda b de los datos iniciales (considerada como la recuperación completa) , mientras que el control positivo en los compuestos de prueba mostró mayor daño al ciclo visual.
La Figura 14B muestra los efectos de los compuestos una semana (7 días) después de la inyección. Los compuestos de prueba tuvieron un efecto prolongado, mientras que el control positivo regresó a la recuperación completa.
La Figura 14C muestra los efectos dos semanas (14 días) después de la inyección. Los compuestos de prueba todavía tenían efecto sobre el ciclo visual.
B. Benzoato de etil- (3-N-metil) amino, N-metil-4-butil-anilina Las Figuras 15A-B, 16A-B y 17A-B muestran, respectivamente, tres experimentos con estos compuestos en luz tenue (A) y brillante (B) .
C. Benzoato de etil- (2-N-metil) amino, N-metil-4-butil-anilina Las Figuras 18A-B muestran experimentos con estos compuestos en luz tenue (A) y brillante (B) .
Ejemplo 3: Efecto sobre el ciclo visual de los inhibidores de enzimas y antagonistas de RPE65 in vivo Los experimentos descritos en el Ejemplo 2 se repitieron con otros compuestos.
A. Retinil palmitil cetona y retinil decil cetona La Figura 19 muestra un experimento con estos compuestos .
B. Todo-trans-retinil palmitil cetona, todo-trans retinil palmitil éter Las Figuras 20A-B y 21A-B muestran, respectivamente, dos experimentos con estos compuestos en luz tenue (A) y brillante (B) .
C. Octil farnestimida, palmitil farnestimida La Figura 22A muestra los resultados de un experimento en luz tenue utilizando estos compuestos poco después de la administración. La Figura 22B muestra los resultados una semana después de la administración.
D. Farnesil octil cetona, farnesil decil cetona Las Figuras 23A-C muestran experimentos realizados en luz tenue utilizando estos compuestos. Los datos mostrados en la Figura 23B fueron obtenidos tres días después de la administración. Los datos de la Figura 23C fueron obtenidos ocho días después de la administración.
F. Farnesil palmitil cetona, farnesil decil cetona La Figura 24 muestra los resultados de un experimento hecho en luz tenue una hora después de que se inyectaron estos compuestos.
Ejemplo 4: Formación de A2E en presencia de amina aromática 100 mg (335 µmoles) de todo-trans-retinal fueron disueltos en 3 mL seguido por la adición de 9.5 µL de ácido acético glacial, 9.5 µL de etanolamina (155 µmoles) . Esta solución se dividió en fracciones de 300 µL. Se adicionó a las muestras 3-aminoetilbenzoato (15.5 µmoles) a las 0, 2, 3.75, 14, 16.25, 18.0833, 19.917, 23.75 y 48 horas. Una muestra control no contenía amina aromática. Las soluciones fueron agitadas a temperatura ambiente durante 48 horas. Luego las soluciones se mantuvieron a - 80°C y 15 µL fueron diluidos a 250 µL (metanol) . Las soluciones (15 µL) entonces fueron analizadas en columna de fase inversa (C18-5 µm-4.6 mm x 150 mm) en un gradiente lineal 85%-96% de metanol/agua y detector UV a 430 nm para determinar la cantidad de formación de A2E. El porcentaje de formación de A2E se comparó con la formación de A2E a las 48 horas en ausencia de la amina aromática.
Los datos de la Tabla 1 se presentan en la Figura 25 y muestran que las aminas aromáticas no pueden formar A2E en la reacción in vitro normal; además, evitan que se forme A2E .
Ejemplo 5: Formación de A2E in vivo Se investigaron los efectos sobre la acumulación de A2E en ratones knockout abcr con farnesil decil cetona y N-palmitil farnesimida. Los ratones fueron inyectados con 50 mg/kg de fármaco en 25 microlitros de DMSO o solo con DMSO para el grupo control una o dos veces por semana. Después de 2 a 2 1/2 meses, los ratones fueron sacrificados y se cosechó el A2E y el iso-A2E y se cuantificaron de cuatro ojos por cada fármaco o control. Los resultados se muestran en la Tabla 2.
Tabla 2 : Acumulación de AE en ratones aJcr tratados o no tratados Estos datos muestran que farnesil decil cetona reduce la acumulación de A2E más o menos 80%, el iso-A2E aproximadamente 74%, total aproximadamente 80%. El N-palmitil farnesimida reduce la acumulación de AE más o menos 50%, y el iso-A2E aproximadamente 33%, total por aproximadamente 47%.
Los ejemplos no deben ser considerados como limitadores en ningún sentido. El contenido de todas las referencias mencionadas (incluidas las referencias de la literatura, patentes publicadas, solicitudes de patentes publicadas como se menciona a lo largo de esta solicitud) se incorporan expresamente por este medio para referencia.
Los expertos en la técnica reconocerán, o podrán averiguar utilizando no más que experimentación habitual, múltiples equivalentes de las modalidades específicas descritas en la presente.

Claims (45)

  1. REIVINDICACIONES Un compuesto de la fórmula II: p en donde, n es 0 a 10 inclusive; R es hidrógeno o alquilo; 2 R es hidrógeno, alquilo, cicloalquilo, alquenilo, cicloalquenilo, alquinilo, arilo o aralquilo; Y es -C(Rb)p-, -C(=0)- ó -C(Rb)pC(=0)-; X es hidrógeno, -0-, -S-, -N(Ra)-, -N (Ra) -N (Ra) -, -C(=0)-, -C(=NRa)-, -C(=NOH)-, -C(=S)- ó -C(Rb)p-; Z está ausente, hidrógeno, alquilo, haloalquilo, arilo, aralquilo, -CN, -0Rb, - (CH2CH20) pRb, -C(=0)Rb-, -C(=0)CH2F, -C(=0)CHF2, -C(=0)CF3, C(=0)CHN2, -C(=0)0Rb, -C(=0)CH20C(=0)Rb, -C (=0) C (=C (Rb) 2) Rb, p es 0 a 20 inclusive Ra es hidrógeno, alquilo, arilo o aralquilo; R es hidrógeno, alquilo, haloalquilo, arilo ó aralquilo; y índica un enlace sencillo, un enlace doble cis ó un enlace doble trans; con la condición de que el compuesto no sea ácido 13-cis-retinoico, ácido todo-trans-retinóico ni N-( 4-hidroxifenil) retinamida . Un compuesto de la fórmula lid: pd en donde, independientemente, cada vez que aparezca n es 0 a 4 inclusive; i R es hidrógeno o alquilo; Y es -C(=0)- ó -C(Rb)2~; X es hidrógeno, -0-, -S-, -?(Ra)-, -? (Ra) -? (Ra) -, -C (=0) - f -C(=?Ra)-, -C(=?0H)-, -C(=S)- ó -C(Rb}2-; Z está ausente, hidrógeno, alquilo, haloalquilo, arilo, aralquilo, -C?, -0Rb, -C(=0)Rb, -C(=0)CH2F, -C(=0)CHF2, -C(=0)CF3, C(=0)CH?2, -C (=0) CH20C (=0) Rb, -C(=0)0Rb, -C(=0)C(=C(Rb)2)Rb, Ra es hidrógeno, alquilo, arilo o aralquilo; Rb es hidrógeno, alquilo, haloalquilo, arilo ó aralquilo; y indica un enlace sencillo, un enlace doble cis ó un enlace doble trans . 3. El compuesto de cualquiera de las reivindicaciones 1-2, en donde R es hidrógeno o metilo. 4. El compuesto de cualquiera de las reivindicaciones 1-2, en donde Y es -CH2- . 5. El compuesto de cualquiera de las reivindicaciones 1-2, en donde X es -0-. 6. El compuesto de cualquiera de las reivindicaciones 1-2, en donde X es -NH- . 7. El compuesto de cualquiera de las reivindicaciones 1-2, en donde Z es alquilo. 8. Un compuesto de la fórmula Ilh: en donde, independientemente, cada vez que aparezca: n es 0 a 4 inclusive; R es hidrógeno o alquilo; X es hidrógeno, -O-, -S-, -N(Ra)-, -N (Ra) -N (Ra) -, -C(=0)-, -C(=NRa)-, -C(=NOH)-, -C(=S)- ó -C(Rb)2-; Z es ausente, hidrógeno, alquilo, haloalquilo, arilo, aralquilo, -CN, -0Rb, -C(=0)Rb, -C(=0)CH2F, -C(=0)CHF2, -C(=0)CF3, C(=0)CHN2, -C (=0) CH2OC (=0) Rb, Ra es hidrógeno, alquilo, arilo o aralquilo; y Rb es hidrógeno, alquilo, haloalquilo, arilo ó aralquilo. 9. El compuesto de cualquiera de las reivindicaciones 8 en donde R es hidrógeno ó metilo. 10. Un compuesto que tiene la estructura representada por: 11. Un compuesto de la fórmula III : ip en donde n es 0 a 10 inclusive; i R es hidrógeno o alquilo; 2 R es hidrógeno, alquilo, cicloalquilo, alquenilo, cicloalquenilo, alquinilo, arilo o aralquilo; Y es -CRb(0Rb)-, -CRb(N(Ra)2)-, ~C(Rb)p-, -C(=0)- ó -C(Rb)pC(=0)-; X es -O-, -S-, -N(Ra)-, -C(=0)- ó -C(Rb)p-; Z es hidrógeno, alquilo, haloalquilo, arilo, aralquilo, -0Rb-, -N(Rb)2-, - (CH2CH20) pRb, -C(=0)Rb, -C(=NRa)Rb, -C(=N0Rb)Rb, -C (0Rb) (Rb) 2, -C (N (Ra) 2) (Rb) 2 ó -(CH2CH20)pRb, p es 0 a 20 inclusive Ra es hidrógeno, alquilo, arilo o aralquilo; Rb es hidrógeno, alquilo, haloalquilo, arilo ó aralquilo; y T G: indica un enlace sencillo ó un enlace doble trans; con la condición de que el compuesto no sea ácido 13-cis-retinoico, ácido todo-trans-retinóico ni N- (4-hidroxifenil) retinamida. 12. Un compuesto de la fórmula Illa o Illd: ipa en donde, independientemente, cada vez que aparezca: n es 0 a 4 inclusive; R es hidrógeno o alquilo; 4 R es ausente, hidrogeno, halógeno, alquilo, alquenilo, alquinilo, arilo, heteroarilo, aralquilo, aralquenilo, aralquinilo, heteroaralquilo, heteroaralquenilo, heteroaralquinilo, ciano, nitro, sulfhidrilo, hidroxilo, sulfonilo, amino, acilamino, amido, alquiltio, carboxilo, carbamoilo, alcoxilo, sulfonato, sulfato, sulfonamido, sulfamoilo, sulfonilo y sulfóxido; Y es -C(=0)-, -CRb(ORb)-, -CRb (? (Ra) 2) - ó ~C(Rb)2-; X es -O-, -S-, -?(Ra)-, -C(=0)- ó -C(Rb)2-; Z es hidrógeno, alquilo, haloalquilo, arilo, aralquilo, -0Rb-, -N(Rb)2-, -C(=0)Rb, -C(=NRa)Rb, -C(=NOH)Rb, ~C(ORb) (Rb)2, -C (N (Ra) 2) (Rb) 2 ó -(CH2CH20)pRb, Ra es hidrógeno, alquilo, arilo o aralquilo; Rb es hidrógeno, alquilo, haloalquilo, arilo ó aralquilo; y p es 0 a 10 inclusive; y indica un enlace sencillo ó un enlace doble trans . con la condición de que el compuesto no sea ácido 13-cis-retinoico, ácido todo-trans-retinóico ni N- (4-hidroxifenil) retinamida . 13. El compuesto de cualquiera de las reivindicaciones 11-12, en donde R es hidrógeno o metilo. 14. El compuesto de cualquiera de las reivindicaciones 11-12, en donde X es -0-. 15. El compuesto de cualquiera de las reivindicaciones 11-12, en donde X es -NH- . 16. El compuesto de cualquiera de las reivindicaciones 11-12, en donde X es -C(Rb)2-. 17. El compuesto de cualquiera de las reivindicaciones 11-12, en donde Z es alquilo. 18. Un compuesto de la fórmula Illh: Hit en donde, independientemente, cada vez que aparezca n es 0 a 4 inclusive; i R es hidrógeno o alquilo; X es -O-, -S-, -N(Ra)-, -C(=0)- ó -C(Rb)2-; Z es hidrógeno, alquilo, haloalquilo, arilo, aralquilo, -0Rb, -N(Rb)2-, -C(=0)Rb, -C(=NRa)Rb, -C(=NOH)Rb, -C(ORb) (Rb)2 ó -C (N (Ra) 2) (Rb) 2 Ó -(CH2CH20)pRb, Ra es hidrógeno, alquilo, arilo o aralquilo; y Rb es hidrógeno, alquilo, haloalquiló, arilo ó aralquilo; y p es 0 a 10 inclusive. 19. El compuesto de la reivindicaciones 18, en donde R es hidrógeno o metilo. 20. Un compuesto de la fórmula IV: IV en donde, independientemente, cada vez que aparezca n es 1, 2, 3 ó 4; Y es -C(Rb)2- ó -C(=0)-; X es -O-, -NRa-, -C(Rb)2- ó -(C=0)-; Z es -C(=0)Rb, -ORb, -N(Rb)2, alquilo ó haloalquilo; Ra es hidrógeno, alquilo, haloalquilo, arilo o aralquilo; y R es hidrógeno, alquilo, haloalquilo, arilo o aralquilo. 21. El compuesto de la reivindicación 20, en donde Y es -CH2-. 22. El compuesto de la reivindicación 20, en donde X es -0-. 23. El compuesto de la reivindicación 20, en donde Z es alquilo. 24. El compuesto de la reivindicación 20, en donde Y es -CH2-; X es -0-: y Z es alquilo. 25. Un compuesto que tiene una estructura representada por: 26. Un compuesto de la fórmula V: en donde, independientemente, cada vez que aparezca, n es 1, 2 ó 3; Y es -C(Rb)2-, -C(=0)- ó -CH(OH)-; X es -O-, -NRa- ó ~C(Rb)2-; Z es -C(=0)Rb, hidrógeno, - (CH2CH20) pRb, alquilo o haloalquilo; Ra es hidrógeno, alquilo, haloalquilo, arilo o aralquilo; R es hidrógeno, alquilo, haloalquilo, arilo o aralquilo; y p es 1 a 10 inclusive con la condición de que el compuesto no sea ácido 13-cis-retinoico, ácido todo-trans-retinóico ni N- (4-hidroxifenil) retinamida. 27. El compuesto de la reivindicación 26, en donde Y es -C(=0)-. 28 El compuesto de la reivindicación 26, en donde X es -?Ra- . 29. Un compuesto que tiene la estructura representada por : 30. Una formulación que contiene ácido 13-cis-retinóico, ácido todo-trans-retinóico, N- (4-hidroxifenil) retinamida o un compuesto definido por cualquiera de las reivindicaciones 1-29, y un segundo compuesto, diferente del primer compuesto, en donde el segundo compuesto se selecciona del grupo que consiste en: ácido 13-cis-retinóico, ácido todo-trans-retinóico, N- (4-hidroxifenil) retinamida y compuestos definidos por cualquiera de las reivindicaciones 1-29. 31. El uso del ácido 13-cis-retinóico, ácido todo-trans- retinóico, N- (4-hidroxifenil) retinamida o un compuesto definido por cualquiera de las reivindicaciones 1-29 en la preparación de un medicamento para el tratamiento o prevención de un trastorno oftalmológico. 32. El uso establecido en la reivindicación 31, caracterizado porque el trastorno oftalmológico es degeneración macular, 33. El uso establecido en la reivindicación 30 o la reivindicación 31, caracterizado porque el trastorno oftalmológico es la enfermedad de Stargardt. 34. El uso establecido en alguna reivindicación anterior, caracterizado porque el trastorno oftalmológico es acumulación de lipofuscina. 35. El uso establecido en cualquiera de las reivindicaciones 31-34, caracterizado porque en la preparación de medicamento se utiliza un segundo principio activo diferente del primer principio activo. 36. El uso establecido en la reivindicación 35, caracterizado porque el segundo principio activo inhibe, antagoniza o corta el circuito en el ciclo visual, en un paso del ciclo visual que ocurre fuera de un disco de un bastoncito fotorreceptor . 37. El uso de un principio activo que comprende fenretidina, o una sal aceptada para uso farmacéutico de éste, en la preparación de un medicamento para el tratamiento o prevención de un trastorno oftalmológico. 38. El uso establecido en la reivindicación 37, caracterizado porque la fenretidina inhibe, antagoniza o corta el circuito en el ciclo visual, en un paso del ciclo visual que ocurre fuera de un disco de un bastoncito fotorreceptor. 39. El uso establecido en la reivindicación 37, caracterizado porque el trastorno oftalmológico es degeneración macular. 40. El uso establecido en la reivindicación 37, caracterizado porque el trastorno oftalmológico es enfermedad de Stargardt. 41. El uso establecido en la reivindicación 37, caracterizado porque el trastorno oftalmológico es acumulación de lipofuscina. 42. El uso establecido en cualquier reivindicación anterior, caracterizado porque la fenretidina aumenta la velocidad a la que se isomeriza el 11- cis-retinal a todo-trans-retinal; inhibe, antagoniza o corta el circuito en el ciclo visual en el epitelio pigmentario de la retina; inhibe por lo menos una de las siguientes: lecitin retinol acil transferasa, isómerohidrolasa y 11-cisretinol deshidrogenasa, o inhibe la unión a RPE65. 43. El uso como se establece en cualquiera de las reivindicaciones 37-42, caracterizado porque en la preparación del medicamento se incluye segundo principio activo. 44. El uso establecido en la reivindicación 43, caracterizado porque el segundo principio activo inhibe, antagoniza o corta el circuito en el ciclo visual en un paso del ciclo visual que ocurre fuera de un disco de un bastoncito fotorreceptor. 45. El uso establecido en la reivindicación 43, caracterizado porque la fenretidina y el segundo principio activo inhiben o antagonizan un paso del ciclo visual que ocurre fuera de un disco de un bastoncito fotorreceptor.
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