MXPA06005950A

MXPA06005950A - Biomarcadores para determinar la eficacia del tratamiento con calcitonina y hormona paratiroides.

Info

Publication number: MXPA06005950A
Application number: MXPA06005950A
Authority: MX
Inventors: Maria Bobadilla
Original assignee: Novartis Ag
Priority date: 2003-11-25
Filing date: 2004-11-24
Publication date: 2006-07-06
Also published as: JP2007522100A; US20070099828A1; WO2005053731A1; CN1905894A; EP1689427A1; AU2004294268A1; KR20060110304A; IL175575A0; CA2546111A1; BRPI0416945A; RU2006122632A

Abstract

Un analisis de perfilacion genetica de multiples organos de los resultados de una administracion a un sujeto de calcitonina de salmon o de un analogo de hormona paratiroides, proporciona biomarcadores de la eficacia del tratamiento con calcitonina y de la eficacia del tratamiento con hormona paratiroides o con un analogo de hormona paratiroides. Entre los biomarcadores estan los perfiles de expresion de los genes para la proteina de enlace de cuadro- Y, BMPs, FGFs, IGFs, VEGF, glicoproteina a-2-IIS (AIISG), OSF, receptores nucleares (familia de esteroides/tiroides), y otros. Los resultados obtenidos apoyan al efecto anabolico de la calcitonina de salmon sobre el metabolismo oseo.

Description

BIOM ARCADO RES PARA DETERMINAR LA EFICACIA DEL TRATAMIENTO CON CALCITONINA Y HORMONA PARATIROIDES CAMPO DE LA INVENCIÓN Esta invención se refiere en general a la prueba analítica de muestras de tejido in vitro, y más particularmente a aspectos de la perfilación de la expresión genética con respecto a la regulación de calcio.

ANTECEDENTES DE LA INVENCIÓN El calcio es esencial para muchos procesos celulares en el cuerpo, y es en especial importante para el metabolismo óseo. El nivel de calcio en el cuerpo se mantiene cuidadosamente mediante un sistema de control endocrino. Dos de las hormonas en este sistema de control endocrino son ia calcitonina y la hormona paratiroides. Las calcitoninas, que son hormonas de polipéptidos de aproximadamente 32 aminoácidos, son un regulador endógeno de la homeostasis de calcio, y se pueden utilizar como agentes contra la resorción para el tratamiento de trastornos asociados con hipocalcemia. La calcitonina se produce en las células parafoliculares (células C) de la glándula tiroides. Varias calcitoninas, incluyendo, por ejemplo, calcitonina de salmón y de anguila, están comercialmente disponibles, y se emplean comúnmente en el tratamiento, por ejemplo, de enfermedad de huesos de Paget, hipocalcemia maligna, y osteoporosis post-menopáusica. Pondel . Intl. J. Exp. Pat ol. 81 (6):405-22 (2000). Está disponible una versión de la calcitonina (Miacalcin®) como un aerosol nasal . La hormona paratiroides (PTH) es un polipéptido de 84 aminoácidos. La hormona paratiroides regula la remodelación ósea y la homeostasis de Ca2 + . La hormona paratiroides también es un activador paracrino conocido de la diferenciación y actividad de los osteoclastos. PTS893 [SDZ PTS 893; Leu8, Asp10, Lys11 , Ala16, Gln18, Thr33, Ala34, PTH humana 1-34 [h PTH ( 1 - 34) ]] , es un análogo de paratiroides de 34 aminoácidos que mejora la masa ósea y las propiedades biomecánicas. Kneissel M . y colaboradores, Bone 28:237-50 (marzo de 2001); Stewart A. F. y colaboradores, J. Bone. Miner. Res. 15(8) : 1517-25 (agosto de 2000), Thomsen J. S. y colaboradores, Bone 25(5):561-9 (noviem bre de 1999). Se sabe que la calcitonina y la hormona paratiroides interactúan de una manera compleja e interdependiente, pero ha sido incompleto el entendimiento de la manera en que interactúan la calcitonina y la hormona paratiroides. Se han documentado bien los efectos inhibidores de calcitonina sobre la actividad de resorción de los osteoclastos, y sobre la resorción de calcio tubular renal.

Sin embargo, los efectos potenciales de la calcitonina sobre ios osteoblastos y las interacciones con cualesquiera otros factores relacionados con el metabolismo esquelético han seguido siendo controversiales. Un análisis de perfilación genética de múltiples órganos proporcionaría una mejor imagen de los cambios inducidos por un compuesto sobre todo el organismo, y también daría una nueva perspectiva al entendimiento de la farmacología de las hormonas. Las tecnologías genómicas son una fuente de las nuevas capacidades generadoras de hipótesis que están ahora facultando a los investigadores biomédicos. En el contexto del desarrollo de fármacos, proporcionan una nueva perspectiva al entendimiento de la farmacología de los fármacos. De conformidad con lo anterior, existe una necesidad en la técnica de un entendimiento de todo el organismo sobre la actividad de la calcitonina y la hormona paratiroides.

COMPENDIO DE LA INVENCIÓN La invención proporciona una respuesta a la necesidad de la técnica. El análisis de perfilación de genética de múltiples órganos proporciona una imagen completa de los cambios inducidos por un compuesto sobre todo el organismo, y da una nueva perspectiva al entendimiento de la farmacología de los fármacos. En un aspecto, la Invención proporciona la primera descripción de los mecanismos moleculares de acción de la remodelación ósea mediada por hormonas mediante la cale i tonina de salmón, por medio del análisis de perfilación genética. Los mecanismos de acción conocidos de la cale i tonina como un agente contra la resorción se podrían reconstruir al nivel molecular. También se observaron los efectos sobre los efectores y las sendas ligadas a las actividades de remodelación ósea - BMPs, IGFs, componentes de matriz ext ra ce I u I a r , y VEGF -. Estos resultados apoyan el papel de la calcitonina como un agente anabólico. En otro aspecto, la invención proporciona la primera reconstrucción de los mecanismos moleculares de acción de un agente farmacológico sobre uno de sus tejidos objetivos en un modelo animal de primate intacto, mediante la evaluación de los cambios de expresión genética inducidos por la calcitonina de salmón o por el análogo de hormona paratiroides PTS893 sobre los huesos de monos cinomolgos, con el fin de elucidar los mecanismos moleculares de acción que median sus efectos. El análisis de perfilación genética permitió hacer la reconstrucción de las sendas involucradas en la transducción de la señal de calcitonina, desencadenada por el estímulo del receptor enlazado con proteína-G, y su influencia sobre el ciclo celular, como se indica por los cambios observados en las ciclinas. Los estudios de expresión de pe rf ilación genética in vivo permiten hacer la identificación de los mecanismos moleculares subyacentes a un efecto farmacológico. En una modalidad, la invención proporciona el uso de calcitonina en la fabricación de un medicamento para el tratamiento de una condición para la cual se indique un agente anabólico. En una modalidad, la condición es ateroesclerosis. La invención también proporciona el uso de calcitonina en la fabricación de un medicamento para el tratamiento de trastornos del metabolismo de calcio en una población de pacientes seleccionada, en donde la población de pacientes se selecciona con base en el perfil de expresión genética que indica la eficacia de la calcitonina por parte del paciente a quien se administre la calcitonina. En una modalidad, la calcitonina es calcitonina de salmón. La invención proporciona además el uso de una hormona paratiroides o de un análogo de hormona paratiroides en la fabricación de un medicamento para el tratamiento de trastornos del metabolismo de calcio en una población de pacientes seleccionada, en donde la población de pacientes se selecciona con base en el perfil de expresión genética que indica la eficacia de la hormona paratiroides o del análogo de hormona paratiroides por parte del paciente al que se administre la hormona paratiroides o el análogo de hormona paratiroides. En una modalidad, el análogo de hormona paratiroides es PTS893. En una modalidad, el medicamento se administra en una dosis terapéutica antes de determinar el perfil de expresión genética por parte del paciente. En otra modalidad, el medicamento se administra en una dosis sub-terapéutica antes de determinar el perfil de expresión genética por parte del paciente. La invención también proporciona un método para el tratamiento de una condición en un sujeto, en donde la condición es una para la cual se indica ia administración de una calcitonina, hormona paratiroides, un análogo de hormona paratiroides, o una combinación de los mismos. El método involucra administrar primeramente un compuesto de interés al sujeto (por ejemplo, un sujeto primate), y luego obtener el perfil de expresión genética del sujeto en seguida de la administración del compuesto. El perfil de expresión genética del sujeto se compara con un perfil de expresión genética de un biomarcador. El perfil de expresión genética del biomarcador indica la eficacia del tratamiento con una calcitonina, una hormona paratiroides, un análogo de hormona paratiroides, o una combinación de los mismos. En una modalidad, el perfil de expresión genética del biomarcador es el perfil de expresión genética de la línea base del sujeto antes de la administración del compuesto. En otra modalidad, el perfil de expresión genética del biomarcador es el perfil de expresión genética o el promedio de los perfiles de expresión genética de un vertebrado al que se haya administrado cale i ton i na (por ejemplo, calcitonina de salmón), u hormona paratiroides, o un análogo de hormona paratiroides (por ejemplo, PTS893). Una similitud en el perfil de expresión genética del sujeto al que se administró el compuesto, con el perfil de expresión genética dei biomarcador, indica la eficacia del tratamiento con el compuesto. De conformidad con lo anterior, la invención proporciona biomarcadores para determinar la eficacia del tratamiento de una condición para la cual se indique calcitonina, hormona paratiroides, o una com inación de las mismas. Entre los biomarcadores están los perfiles de expresión de los genes para la proteína de enlace de cuadro-Y, las proteínas morfogenéticas óseas (BMPs), los factores de crecimiento de fibroblastos (FGFs), los factores de crecimiento tipo insulina (IGFs), el factor de crecimiento endotelial vascular (VEGF), la glicoproteína a-2-HS (AHSG), el factor estimulante de osteoclastos (OSF), los receptores nucleares (familia de esteroi d es/ti ro ides) , y otros. La invención proporciona métodos para determinar a un sujeto para incluirse en un estudio clínico, basándose en un análisis de los biomarcadores expresados en el sujeto que se vaya a tratar. Se administra al sujeto el compuesto que se vaya a probar. En una modalidad, El compuesto que se va a probar se administra en una dosis sub-terapéutica. Entonces se obtiene el perfil de expresión genética del sujeto en seguida de la administración del compuesto. El sujeto se puede incluir en el estudio clínico cuando el perfil de expresión genética del sujeto al que se administró el compuesto, sea similar a un perfil de expresión genética de un biomarcador que indique la eficacia del tratamiento con una calcitonina, hormona paratiroides, un análogo de hormona paratiroides, o una combinación de los mismos. El sujeto se puede excluir del estudio clínico cuando el perfil de expresión genética del sujeto sea distinto del perfil de expresión genética del biomarcador que indique la eficacia del tratamiento. Estas similitudes o diferencias pueden ser observadas por los expertos en este campo. La invención también proporciona ensayos clínicos, estuches de partes, y reactivos para determinar la eficacia del tratamiento de una condición para la que se indique la administración de una calcitonina, una hormona paratiroides, o un análogo de hormona paratiroides. En una modalidad, los estuches de partes contienen reactivos para determinar la expresión genética de los genes biomarcadores, mediante hibridación. En otra modalidad, los estuches de partes contienen reactivos para determinar la expresión genética de los genes biomarcadores, mediante la reacción en cadena de la polimerasa DESCRIPCIÓN DE LAS MODALIDADES PREFERIDAS Esta Invención se basa en el entendimiento de los efectos de la administración a un sujeto de calcitonina (por ejemplo, calcitonina de salmón; SEQ ID NO:1) u hormona paratiroides (SEQ ID NO:2), o un análogo de la misma (por ejemplo, PTS893; SEQ ID NO:3). Un análisis de perfilación genética de múltiples órganos de los resultados de la administración a un sujeto de calcitonina de salmón o de un análogo de hormona paratiroides, proporciona biomarcadores de la eficacia del tratamiento con calcitonina y de la eficacia del tratamiento con hormona paratiroides o con un análogo de hormona paratiroides. Como se utiliza en la presente, un sujeto es un vertebrado. En una modalidad, ei vertebrado es un mamífero. En una modalidad más particular, el sujeto es un primate, por ejemplo un mono cinomolgo o un ser humano. El análisis roporcionado en la presente, describe globalmente los mecanismos moleculares de acción de la calcitonina de salmón y de la PTS893 para cambiar el contenido de ácido ribonucleico (ARN) en diferentes órganos, mediante el análisis de perfilación genética de múltiples órganos en primates. El contenido de ARN de la célula, el "transcriptomo" es un reflejo de las funciones y del estado de la célula. Adentro de una célula individual o de un órgano, las expresiones de los diferentes elementos de un transcriptomo no son independientes. El cambio en el nivel de expresión puede desencadenar una serie de eventos que conducirán finalmente a otra modificación del transcriptomo. Estos eventos interdependientes se describen en términos de sendas. Debido a que los cambios en las diferentes funciones adentro de una célula están estrechamente interconectados, los cambios en diferentes órganos adentro del organismo están ligados. La aplicación de la perfilación genética a diferentes órganos sometidos al mismo tratamiento da un mejor panorama de los efectos y de las modificaciones del estado fisiológico. Como se muestra en la presente, ésta es particularmente la situación cuando se va a llevar a cabo el análisis de perfilación de múltiples órganos de los compuestos p I e i o t r ó p i co s , tales como calcitonina. En realidad, la firma global descrita para la calcitonina se refleja no solamente en el órgano objetivo principal (es decir, el hueso), sino también en los otros órganos analizados en la presente. En este análisis de perfilación genética de múltiples órganos, los mecanismos de acción conocidos de la calcitonina como un agente contra la resorción y de la hormona paratiroides PTS893 como un activador paracrino de ¡a diferenciación y acti idad de los osteoclastos, se podrían reconstruir al nivel molecular. Se podría reconstruir el efecto inhibidor de la calcitonina sobre los osteociastos, con los cambios que afecten, entre otros, a los genes para PU.1 (SPI1; SpiB; SEQ ID NO:4), al factor estimulante de colonias (CSF-1 (SEQ ID NO:6); a la diferenciación y sobrevivencia); a la anhidrasa carbónica (SEQ ID NO:8), H + -ATPasas, catepsina K (actividad de resorción), tubulinas, PAK4 (movilidad). También se observaron los efectos sobre los efectores y las sendas ligadas a las actividades de remodelación ósea (proteínas morfogenéticas óseas (B Ps), factores de crecimiento de fibroblastos (FGFs), factores de crecimiento tipo insulina (IGFs), componentes de matriz extracelular, hormonas esferoides, factor de crecimiento endotelial vascular (VEGF), y g I i co p rote í n a a-2-HS (AHSG), compartidos en muchos casos tanto por la calcitonina de salmón como por PTS893. Es interesante que la calcitonina de salmón también regula la expresión de la codificación genética para el factor estimulante de osteociastos (OSF), y la cistatina. También es interesante que la PTS893 así mismo regula los genes implicados en la diferenciación y sobrevivencia de los osteociastos (SPM, CSF-1 , proteína asociada con la diferenciación de monocitos a macrófagos ( MD)). La PTS893 también produjo un fuerte aumento de los receptores nucleares (familia de esteroides/tiroides). De conformidad con lo anterior, estos resultados apoyan el papel de la calcitonina como un agente anabólico.

La calcitonina se utiliza actualmente en el tratamiento de enfermedades esqueléticas sistémicas caracterizadas por una alta masa ósea, que son una consecuencia del desequilibrio entre la formación de hueso (anabólica) y la resorción de hueso, predominando la primera. La calcitonina promueve la síntesis de la proteína morfogenética ósea-2 (BMP-2), que se sabe que es un potente agente anabólico. Es fuerte la evidencia de que, cuando la calcitonina llega a las células óseas, éstas pueden tener un efecto anabólico al aumentar la producción de BMP-2. Por consiguiente, la calcitonina se puede utilizar en un método para el tratamiento de un individuo con el fin de ajustar la densidad mineral ósea de un sujeto. Éste es el primer planteamiento para caracterizar, en un modelo in vivo, los efectos de la calcitonina sobre el metabolismo óseo, mediante la perfilación de la expresión genética. Se podría reconstruir el efecto inhibidor de la calcitonina sobre los osteoclastos, con cambios que afecten a los genes como anhidrasa carbónica, H + -ATPasas, y catepsina K. La calcitonina de salmón también pareció regular la expresión del gen que codifica para cistatina, siendo este efecto descrito en la presente por primera vez. La calcitonina de salmón también tiene efectos moduladores sobre los genes que afectan a la regulación directa, autocrina, paracrina, y endocrina, de las funciones celulares mesenquimales, tales como pleiotropina, periostina, factor de crecimiento de fibro lastos, factores de crecimiento transformante-betas (TGF-betas), factores de crecimiento tipo insulina/proteínas de enlace ( I G Fs/I G F B Ps) , proteínas morfogenéticas óseas (B Ps), Factor de Crecimiento Endotelial Vascular (VEGF), Factor de Necrosis Tumoral (TNF), neurocondrina, tipo folistatina 3, o receptor de hormona paratiroides. También regula la síntesis y la degradación de los componentes de la matriz extracelular (colágenos, osteopontina, osteocalcina, dermatopontina, condroadherina, glipicano, o sindecano), y de las enzimas. La calcitonina de salmón también tiene influencia sobre algunos aspectos de la mineralización ósea, debido a que se observaron cambios en la dentina. Como se proporciona en la presente, la calcitonina tam ién se puede utilizar como un agente anabólico en el tratamiento de otras condiciones en donde sea terapéuticamente deseable el anabolismo o el crecimiento de tejido. Esta condición es la ateroesclerosis, una enfermedad ateromatosa en donde se complica la placa ateromatosa por fibrosis y calcificación. Más aún, la invención proporciona biomarcadores de la eficacia del tratamiento con calcitonina o con hormona paratiroides. Como se utiliza en la presente, un perfil de expresión genética es un diagnóstico para determinar la eficacia del tratamiento cuando la expresión genética aumentada o disminuida es un aumento o una disminución (por ejemplo, cuando menos una diferencia de 1.5 veces) sobre la expresión genética de la línea base en seguida de la administración del compuesto (es decir, el perfil de expresión genética del biomarcador es el perfil de expresión genética de la línea base del sujeto antes de la administración del compuesto). De una manera alternativa o en adición, el perfil de expresión genética es el diagnóstico para determinar la eficacia del tratamiento, comparándose con el tratamiento de calcitonina (por ejemplo, calcitonina de salmón), o de hormona paratiroides, o de análogos de hormona paratiroides (por ejemplo, PTS893), cuando el perfil de expresión genética del sujeto tratado se puede comparar con un perfil de expresión genética de un biomarcador estándar. En una modalidad, el perfil de expresión genética del biomarcador estándar es el perfil de expresión genética o el promedio de perfiles de expresión genética de un vertebrado al que se haya administrado una calcitonina, una hormona paratiroides, un análogo de hormona paratiroides, o una combinación de los mismos, siendo este perfil el estándar con el que se comparan los resultados del sujeto en seguida de la administración. Este planteamiento, que contiene aspectos de terapia y diagnóstico, es denominado como "teranóstico" por muchos expertos en este campo.

En una modalidad, el sujeto es un vertebrado. En una modalidad particular, el vertebrado es un mamífero. En una modalidad más particular, ei mamífero es un primate, tal como un mono cinomolgo o un ser humano. Como se utiliza en 5 la presente, la administración de un agente o de un fármaco a un sujeto o paciente, incluye la auto-administración o la administración por parte de otro. Como se utiliza en la presente, un perfil de expresión genética es el diagnóstico de la eficacia del 10 tratamiento con calcitonina o con hormona paratiroides cuando la expresión genética aumentada o disminuida es un aumento o una disminución (por ejemplo, cuando menos una diferencia de 1.5 veces) sobre la expresión genética de la línea base en seguida de la administración de una 15 calcitonina, o de una hormona paratiroides o un análogo. Como se utiliza en la presente, un patrón de expresión genética es "más alto de lo normal" cuando la expresión genética (por ejemplo, en una muestra de un sujeto tratado) muestra una diferencia de 1.5 veces (es decir, más alta) en 2o el nivel de expresión, comparándose con las muestras de la línea base. Un patrón de expresión genética es "más bajo de lo normal" cuando la expresión genética (por ejemplo, en una muestra de un sujeto tratado) muestra una diferencia de 1.5 veces (es decir, más baja) en el nivel de expresión, „ comparándose con las muestras de la línea base.

Las técnicas para la detección de la expresión genética de los genes descritos por esta invención incluyen, pero no se limitan a, Northern blots, RT-PCT, reacción en cadena de la polimerasa en tiempo real, extensión del cebador, protección de ARNsa, perfilación de expresión de ARN, y técnicas relacionadas. Las técnicas para la detección de la expresión genética mediante la detección de los productos de proteína codificados por los genes descritos por esta invención incluyen, pero no se limitan a, anticuerpos que reconocen los productos de proteína, Western blots, inmunofluorescencia, inmunoprecipitación, ELiSAs, y técnicas relacionadas. Estas técnicas son bien conocidas por los expertos en la materia. Sambrook J. y colaboradores, Molecular Cloning: A Laboratory Manual, Tercera Edición, (Cold Spring Harbor Press, Cold Spring Harbor, 2000). En una modalidad, la técnica para detectar la expresión genética incluye el uso de un chip genético. La construcción y uso de los chips genéticos son bien conocidos en la materia. Ver las Patentes de los Estados Unidos de Norteamérica Números 5,202,231; 5,445,934; 5,525,464; 5,695,940; 5,744,305; 5,795,716, y 5,800,992. Ver también, Johnston, M. Curr. Biol. 8:R171 -174 (1998); lyer V. R. y colaboradores, Science 283:83-87 (1999) y Elias P. "New human genome 'chip' is a revolution in the offing" Los Angeles Daily News (3 de octubre de 2003).

El perfil de expresión genética puede incluir uno o más genes seleccionados a partir del grupo de isoforma a de fosfatasa ácida 1 ; 1 tipo receptor de activina A, tipo II; precursor de receptor de activina A tipo IIB; cadena beta-C de activina; glicoproteína alfa 2 HS; amelogenina; anexina V; precursor de arilsulfatasa E; ATPasa H( + ) vacuolar; ATPasa H( + ), subunidad vacuolar; ATPasa, transporte de H + , lisosomal; ATPasa, transportación de H + , lisosomal; ATPasa, transportación de H + , lisosomal; bigücano; proteína morfogenética ósea 1; proteína m orfogenética ósea 10; proteína morfogenética ósea 2A; proteína morfogenética ósea 5; precursor de proteína morfogenética ósea 6; proteína de enlace de calcio 1 (calbraína); quinasa de proteína dependiente de calcio/calmodulina (quinasa CaM) II gamma; calreticulina; modulador de elemento que responde a cAMP (CREM); anhidrasa carbónica I; anhidrasa carbónica II; precursor de proteína de matriz oligomérico de cartílago; catepsina K; catepsina W; quinasa 1 tipo CDC; quinasa 2 tipo CDC, isoforma hclk2/139; proteoglicano 2 de sulfato de condroitina (versican); proteoglicano 3 de sulfato de condroitina (neurocan); hormona de somatomamotropina coriónica 1 ; quimiotripsina C (caldecrina); colágeno tipo 1 y transcripción de fusión de PDGFB; colágeno tipo II alfa 1 ; colágeno tipo III alfa 1 ; colágeno tipo IV alfa 2; colágeno tipo IX alfa 1; colágeno tipo VI alfa 1; colágeno tipo VI alfa 2 (AA 570 998); colágeno tipo XI alfa 1; colágeno tipo XI alfa 2; colágeno tipo XI alfa 2; colágeno, tipo I, alfa 2; colágeno tipo IV, alfa 1; colágeno tipo IX, alfa 2; colágeno tipo V, alfa 2; colágeno tipo VI, alfa 1; precursor de colágeno tipo VI, alfa 1; colágeno tipo XVI, alfa 1 ; colágeno tipo XVI, alfa 1; colagenasa 3 (metaloproteinasa de matriz 13); factor de crecimiento de tejido conectivo; ciclina A2; ciclina B1; ciclina D2; ciclina E2; qulnasa 5 dependiente de ciclina; quinasa 5 dependiente de ciclina, subunidad reguladora 1 (p35); quinasa 6 dependiente de ciclina; inhibidor de quinasa dependiente de ciclina 1A ( p 21 , C i p 1 ) ; cistatina B (estefina B); quinasa inducible por citoquina; quinasa de proteína 1 asociada con muerte; quinasa de proteína 3 asociada con muerte; f osf o p roteí n a ácida de matriz de dentina 1 (DMP1); fosfatasa de especificidad doble 9; quinasa de proteína miotónica de distrofia; pirofosfatasa/fosfodiesterasa de ectonucleótido 1 ; pirofosfatasa/fosfodiesterasa de ecto-nucleótido 1 ; diferenciación endoteiial, precursor de receptor acoplado con proteína-G 6, receptor de estrógeno; receptor de estrógeno; proteína relacionada con receptor de estrógeno; proteína de cuadro B que responde a estrógeno (EBBP); proteína de activación de fibroblastos; factor de crecimiento de fibroblastos 1 (ácido); factor de crecimiento de fibroblastos 18; factor de crecimiento de fibroblastos 4; receptor del factor de crecimiento de fibroblastos; folistatina tipo 1 ; folistatina tipo 1; receptor de glutamato, metabotrópico 1 ; componente . de acetil-glucosaminil-transferasa GPI1 N, g p í 1 ; factor estimulante de colonias de macrófagos de granulocitos (CSF1); inducible por paro de crecimiento y daño del ADN, alfa; proteína 10 enlazada con receptor de factor de crecimiento; proteoglicano de sulfato de heparano 2 (perlecan); receptor de 1 , 4 , 5-trif osfato de inositol, tipo 1; receptor de 1 ,4, 5-trifosfato de inositol, tipo 1 ; receptor de 1 ,4, 5-trif osfato de inositol, tipo 2; isoenzima de quinasa 3 de 1 ,4, 5-trifosfato de inositol; fosfatasa de polifosfato de inositol 4 tipo I beta; fosfatasa de polifosfato de inositol 5; monofosfatasa 1 de inositol (mió) 1 (ó 4), 1; monofosfatasa 2 de inositol (mió) 1 (ó 4); factor de crecimiento tipo insulina (IGF II); factor de crecimiento tipo insulina 2 ( somatomedina A); proteína de enlace de factor de crecimiento tipo insulina; proteína de en lace 2 de factor de crecim iento tipo insulina; proteína de e n lace 3 de factor de crecimiento tipo insulina; proteína de enl lace 5 de factor de crecim iento tipo insulina; proteína de e n l lace 2 de factor de crecimiento tipo insulina; precursor de factor de crecimiento tipo insulina II; precursor de factor de crecimiento tipo insulina II; subunidad alfa-10 de ¡ntegrina; quinasa asociada con receptor de interleucina 1; quinasa Janus 3; proteína LIM (similar al enigma de enlace de la quinasa C de proteína de rata); proteína tipo oxidasa de lisilo; MAD, homólogo 3 de madres contra decapentaplégico; MAGUKs (homólogos de quinasa de guanilato asociados con membrana; quinasa de quinasa de quinasa AP ( M T K 1 ) ; MAPK13; quinasa 13 de proteína activada por mitógeno; MAPK8IP1: proteína 1 de interacción con quinasa de proteína 8 activada por mitógeno; quinasa EK; metaloproteinasa; quinasa 1 de proteína activada por mitógeno; quinasa 8 de proteína activada por mitógeno; quinasa 1 de quinasa de proteína activada por mitógeno; quinasa 4 de quinasa de quinasa de quinasa de proteína activada por mitógeno; quinasa 2 de proteína activada por quinasa de proteína activada por mitógeno; quinasa 3 de proteína activada por quinasa de proteína activada por mitógeno; MDD: asociada con diferenciación de monocito a macrófago; neurocondrina; factor nuclear de células-T activadas, citoplásmico, dependiente de calcineurina 1; proteína OS 4 (OS 4); factor 2 específico de osteoblastos OSF 2 (periostina); factor estimulante de osteoclastos (OSF); PAK4; proteína asociada con PDFG; quinasa de fosfatidilinositol 4, catalítica, polipéptido beta; f o sf at i d i I i n o si t o I -g I i ca n o , clase L; fosfatasa de polifosfato de fosfatidilinositol 5, isoforma B; quinasa 5 de fosfato de fosfatidilinositol 4, isoforma C (1); quinasa 5 de fosfato de fosfatidilinositol 4, tipo I, beta; quinasa 5 de fosfato de fosfatidilinositol 4, tipo II, beta; fosfatidilinositol-glicano, clase C (PIG C); f osfodiesterasa 4A, específica de cAMP; fosfodiesterasa 4D, específica de cAMP (f osf od iesterasa E3 homologa de dunce {Drosophila)); fosfodiesterasa IB, dependiente de calmodulina; quinasa de fosfoinositida 3 quinasa de fosfoinositida 3, catalítica, polipépíido gamma quinasa de fosfoinositida 3, clase 3; fosfolipasa C b3 fosfolipasa C, beta 4; fosfolipasa D; proteína de transferencia de f o sf ati d i I i n os ito I ; quinasa D2 de proteína PKD2; pre-pro-colágeno tipo !, alfa 2; pre-pro-colágeno tipo I, alfa 1; pro-colágeno alfa 1, tipo II; dioxigenasa de lisina de procolágeno 5; procolágeno-prolina, 2-oxoglutarato-4-dioxigenasa (hidroxilasa de prolina 4), polipéptido alfa I; proteína endometrial asociada con progestágeno (proteína placentaria 14, globulina alfa 2 endometrial asociada con embarazo, ' proteína uterina alfa); prolidasa (imido-dipeptidasa) PEPD; antígeno nuclear de células proliferantes; hidroxilasa de prolilo 4 beta; proteasa, serina, 11 (enlace de IGF); subunidad de proteasoma (prosoma, macropaína), tipo beta, 10; inhibidor de proteína de STAT X activado; quinasa de proteína 1 PCTAIRE; sustrato 80K H de quinasa C de proteína; quinasa C de proteína, alfa; quinasa de proteína, dependiente de cAMP, catalítica, gamma; quinasa de proteína, dependiente de cAMP, reguladora, tipo I, beta; quinasa de proteína, dependiente de cAMP, reguladora, tipo II, alfa; receptor purinérgico P2Y, acoplado con proteína G, 11; sustrato 2 de toxina de botulinio C3 relacionado con RAC2 Ras (familia rho, proteína de enlace de GTP pequeña Rac2); quinasa de tirosina receptora DDR; receptor retinoide X, gamma; quinasa de proteína ri osomal S6; quinasa de proteína ribosomal S6, 9kD, polipéptido 3; SCAMP1: proteína de membrana portadora secretora 1 (transporte vesicular); f osfoproteína secretada 1 (osteopontina, si a I o p rote i n a ósea I, activación de linfocitos-T temprana 1); inhibidor de proteinasa de serina (o cisteína), racimo H (proteína de choque por calor 47), miembro 2; quinasa de serina/treonina 38; quinasa de proteína serina/treonina; SF 1; factor esteroidogénico 1; transductor de señal y activador de transcripción 1; transductor de señal y activador de transcripción 2, 113 k D ; transductor de señal y activador de transcripción 5A; transductor de señal y activador de transcripción 5A; transductor de señal y activador de transcripción 6 (STAT6); Smad 3; ancla Smad para activación del receptor, ¡soforma 1; Smad5; SMAD6 (inhibe B P/Smad1 (MADH1)); quinasa relacionada con SNF1; factor de transcripción SpiB (relacionado con SPI1/PU.1); Stat5b (stat5b); quinasa de serina/treonina relacionada con Ste20 TEIG; respuesta de crecimiento temprano inducible por TGFB respuesta de crecimiento temprano inducible por TGFB; TIEG factor anti-apoptótico 1 inducido por TGFB1; proteína de apoptosis 12 inducida por TGF beta; precursor de TGF beta; proteína de superfamilia TGF beta; Tob; quinasa 1 tipo desmelenada; receptor de factor de crecimiento transformante, beta III (betaglicano, 300kD); factor de crecimiento transformante beta 3 (TGF beta 3); TRIO: dominio funcional triple (interacción con PTPRF); tubulina alfa 1; tubulina alfa 3; tubulina alfa, isotipo H2 alfa; tubulina beta 2; tubulina beta 3; tubulina beta 4; tubulina beta, cofactor D; precursor de cadena alfa-2 de colágeno tipo VI; proteína portadora de ubiquitina E2 C; factor de crecimiento endotelial vascular; factor de crecimiento endotelial vascular; factor de crecimiento endotelial vascular B; y proteína 1 de enlace de cuadro-Y. Como se utiliza en la presente, la administración de un agente o de un fármaco a un sujeto o paciente, incluye la auto-administración y la administración por parte de otro. Calcitonina. El término "calcitonina" incluye no solamente las caicitoninas que se presentan naturalmente, sino también sus derivados y análogos farmacéuticamente activos, por ejemplo, en donde uno o más de los residuos peptídicos presentes en el producto que se presenta naturalmente son reemplazados, o en donde se modifica el término N ó C. Las caicitoninas preferidas para utilizarse de acuerdo con la invención son las caicitoninas de salmón, humana, y porcina, y la Elcatonina. Todos estos compuestos están comercialmente disponibles, y se han descrito extensamente, junto con sus propiedades farmacéuticas, en la literatura. Ver las Patentes de los Estados Unidos de Norteamérica Números 5,733,569 y 5,759,565, cuyo contenido se incorpora como referencia. La cantidad de calcitonina que se va a administrar de acuerdo con el método de la invención, y por consiguiente, la cantidad de ingrediente activo en la composición de la invención, depende de la calcitonina particular seleccionada, de la condición que se vaya a tratar, de la frecuencia de administración deseada, y del efecto deseado. La biodisponibilidad para las calcitoninas, en particular para la calcitonina de salmón, como se determina en términos de concentración en plasma sanguíneo en seguida de la administración nasal, es alta, en general del orden de aproximadamente el 50 por ciento de los niveles alcanzados con la inyección intramuscular. De conformidad con lo anterior, la administración de acuerdo con la invención se efectuará apropiadamente como para dar un índice de dosificación del orden de dos veces o más, por ejemplo de aproximadamente dos a cuatro veces, el índice de dosificación requerido para el tratamiento por medio de administración intraparietal, por ejemplo intramuscular. La información con respecto a la administración de Micalcín® (calcitonina de salmón) en aerosol nasal, está disponible en la información de Prescripción de M iacalcin® (Novartis, noviembre de 2002). Para ia inyección intramuscular, se aplican dosificaciones individuales de aproximadamente 50 a 100 unidades MRC, a un índice de aproximadamente una vez al día hasta aproximadamente tres veces por semana. Para la administración nasal de acuerdo con la . resente invención, por consiguiente, el tratamiento comprenderá adecuadamente la administración de dosificaciones de aproximadamente 50 a aproximadamente 400 unidades MRC, más preferiblemente de aproximadamente 100 a aproximadamente 200 unidades MRC, a una frecuencia de aproximadamente una vez al día a aproximadamente tres veces por semana. De una manera conveniente, las dosificaciones anteriormente mencionadas se administrarán en una sola aplicación, es decir, el tratamiento comprenderá la administración de dosificaciones nasales individuales que comprendan de aproximadamente 50 a aproximadamente 400 unidades MRC, de preferencia de aproximadamente 100 a aproximadamente 200 unidades MRC de calcitonina. De una manera alternativa, estas dosificaciones se pueden dividir sobre una serie, por ejemplo, de dos a cuatro aplicaciones tomadas a intervalos durante el día, comprendiendo entonces la dosificación en cada aplicación de aproximadamente 10 a aproximadamente 200 unidades MRC, de preferencia de aproximadamente 25 a aproximadamente 100 unidades MRC.

La cantidad de la composición total administrada en cada aplicación nasal adecuadamente comprende de aproximadamente 0.05 a 0.15 mililitros, típicamente aproximadamente 0.1 mililitros, por ejemplo 0.09 mililitros. Las composiciones para utilizarse de conformidad con lo anterior, adecuadamente comprenden de aproximadamente 150 a aproximadamente 8,000, de preferencia de aproximadamente 500 a aproximadamente 4,000, más preferiblemente de aproximadamente 500 a aproximadamente 2,500, y de una manera muy preferible de aproximadamente 1,000 a aproximadamente 2,000 unidades MRC de calcitonina, por ejemplo calcitonina de salmón, por mililitro. El término "calcitonina" también abarca los análogos peptídicos activos y los miméticos, tales como se describen, por ejemplo, en las Patentes de los Estados Unidos de Norteamérica Números 5,719,122, 5,175,146, y 5,698,6721. Ver la Solicitud de Patente de los Estados Unidos de Norteamérica Número 2003015815. La "superfam il ia de calcitonina" consiste en calcitonina, péptido relacionado con el gen de calcitonina (CGRP), y amilina. La calcitonina y CGRP se derivan del gen CT/CGRP en los seres humanos. Un empalme alternativo de la transcripción del ARN primario conduce a la traducción de los péptidos CGRP y CT de una manera específica del tejido. CGRP (un neuropéptido de 37 aminoácidos) y sus receptores, se distribuyen ampliamente en el cuerpo. La amilina (un péptido de 37 aminoácidos) se genera a partir de un gen localizado sobre el cromosoma 12 (se piensa que es una duplicación evolucionaría del cromosoma 11) y comparte una homología de la secuencia de aminoácidos del 46 por ciento con CGRP, y del 20 por ciento con la calcitonina humana. El término "péptido relacionado con el gen de calcitonina" o "CGRP" incluye el CGRP nativo, de preferencia el CGRP humano, y sus análogos activos. Se sabe que el CGRP tiene una variedad de papeles en la formación de los huesos. El término "amilina" incluye la amilina nativa, tí icamente de una fuente humana, y sus análogos farmacéuticamente activos. Se sabe que la hormona induce la formación de la masa ósea a través de una variedad de mecanismos. Los "agentes tipo calcitonina" incluyen "calcitonina", "CGRP", y "amilina". Ver la Solicitud de Patente de los Estados Unidos de Norteamérica Número 003015815. Hormona paratiroides. El término "hormona paratiroides" se refiere a la hormona paratiroides, a fragmentos o metabolitos de la misma, y a análogos estructurales de la misma, que pueden estimular la formación ósea y aumentar la masa ósea. También se incluyen los péptidos relacionados con la hormona paratiroides, y los fragmentos acti os y análogos de los péptidos relacionados con la hormona paratiroides. Ver las Patentes de los Estados Unidos de Norteamérica Números 4,086,196; 5,001,223; 6,541 ,450, y 6,649,657, y las Solicitudes de Patente del TCP publicadas Números WO 94/01460 y WO 93/06845. La actividad funcional de la hormona paratiroides es determinada fácilmente por los expertos en este campo, de acuerdo con los ensayos convencionales. Una variedad de estos compuestos se describen y se referencian más adelante; sin embargo, los expertos en la técnica conocerán otras hormonas paratiroides. Las hormonas paratiroides de ejemplo se dan a conocer en las referencias citadas en las Patentes de los Estados Unidos de Norteamérica Números 6,541 ,450 y 6,649,657, cuyo contenido total se incorpora como referencia. La utilidad de las hormonas paratiroides como agentes médicos en el tratamiento de condiciones que se presenten con una baja masa ósea (por ejemplo, osteoporosis) en mamíferos, se demuestra por la actividad de las hormonas paratiroides en los ensayos convencionales, incluyendo los ensayos in vivo, el ensayo de enlace de receptor, los ensayos de AMP cíclica, y los ensayos de sanado de fracturas. PTS893 es un análogo de la hormona paratiroides endógena, en donde se eliminan ciertos sitios de inestabilidad química dentro de los fragmentos de hormona paratiroides N-terminales, haciendo las sustituciones de aminoácidos apropiadas en los residuos particulares, lo cual da como resultado fragmentos de hormona paratiroides humana estables y biológicamente activos. Los fragmentos N-terminales de las hormonas paratiroides humanas incluyen las muteínas hPTH(1-34)OH y las muteínas hPTH(1 -38)OH. PTS893 comprende cuando menos las primeras 27 unidades de aminoácidos N-terminales de la hormona paratiroides. Los derivados de hormona paratiroides preferidos son aquéllos que comprenden cuando menos una unidad de aminoácido reemplazada en una o más de las siguientes posiciones de la secuencia de la hormona paratiroides: 8-11, 13, 16-19, 21, 22, 29 a 34, en particular 8-11 , 16-19, 33 y/o 34. Estos compuestos exhiben propiedades formadoras de hueso deseables, tanto in vivo como in vitro, que son iguales a, o están arriba de, el nivel de la hormona paratiroides natural y sus fragmentos N-terminales. Ver la Patente Europea Número EP 0,672,057; la Solicitud de Patente del TCP publicada Número WO 94/02510; Kneissel M . y colaboradores, Bone 28:237-50 (marzo de 2001); Stewart A. F. y colaboradores, J, Bone Miner. Res. 15(8) : 1517-25 (agosto de 2000); Thomsen J. S. y colaboradores, Bone 25(5):561 -9 (noviembre de 1999). Estuches de partes. Los estuches de partes de la invención pueden contener un producto escrito sobre o dentro del recipiente del estuche. El producto escrito describe la manera de utilizar los reactivos contenidos en el estuche de partes, por ejemplo, para determinar si un paciente está respondiendo efectivamente, o si puede responder efectivamente, a un compuesto para utilizarse en el tratamiento de una condición para la cual se indique la calcitonina, la hormona paratiroides, un análogo de hormona paratiroides, o una combinación de los mismos. En varias modalidades, el uso de los reactivos puede ser de acuerdo con los métodos de la invención. En una modalidad, el reactivo es un chip genético para determinar la expresión genética de los genes relevantes. El siguiente Ejemplo se presenta con el objeto de ilustrar más completamente las modalidades preferidas de la invención. Este Ejemplo de ninguna manera debe interpretarse para limitar el alcance de la invención, como se define mediante las reivindicaciones adjuntas.

EJEMPLO CALCITONINA DE SALMÓN Y PTS893, ESTUDIO EXPLORATORIO FARMACOGENÓMICO EN MONOS; ANÁLISIS DE EXPRESIÓN GENÉTICA DE MICROARREGLO. Introducción y resumen . El propósito de este Ejemplo fue evaluar los cambios de expresión genética en monos cinomolgos en seguida de un tratamiento subcutánea de dos semanas con calcitonina de salmón (sCT) a 50 microgramos/animal/día, y PTS893 a 5 microgramos/animai día, con el fin de elucidar los mecanismos de acción que median sus efectos, así como para la identificación de los biomarcadores de las indicaciones terapéuticas. Se cree que este Ejemplo es el primer análisis que describe globalmente los mecanismos moleculares de acción de la calcitonina de salmón y de un análogo de hormona paratiroides, mediante análisis de perfilación genética de múltiples órganos en primates. También se cree que éste es el primer análisis de perfilación genética que describe los mecanismos moleculares de acción de la remodelación ósea mediada por hormonas mediante la calcitonina de salmón y PTS893. En este Ejemplo, se encontró que tanto la calcitonina de salmón como el PTS893 tienen efectos moduladores sobre los genes que afectan a la regulación directa, autocrina, paracrina, y endocrina de las funciones celulares mesenquimales, tales como los factores de crecimiento transformante betas (TGF-ps), los factores de crecimiento tipo insulina (IGFs), las proteínas morfogenéticas óseas (BMPs), y el factor de crecimiento endotelial vascular (VEGF). Ambos compuestos también regulan la síntesis y la degradación de los componentes de matriz extracel u lar. La calcitonina de salmón también regula al receptor de estrógeno y al factor esteroidogénico, mientras que el PTS893 produce un fuerte aumento sobre los receptores nucleares de la familia del receptor de esteroides/tiroides. Por consiguiente, estos datos apoyan el papel de la calcitonina como un agente anabólico. En adición, la calcitonina de salmón y el PTS893, también tuvieron influencia sobre algunos aspectos de la mineralización de la matriz extracelular, debido a que se observaron cambios en la amelogenina, dentina, y p i rof osf atasas de ectonucleótido. En adición, el PTS893 mostró un efecto sobre la mediación de la activación paracrina de la diferenciación y actividad de los osteoclastos, a través de la citoquina y el ligando RANK. No se pudieron atribuir diferencias significativas en la perfilación de expresión genética a! hecho de administrar calcitonina de salmón y PTS893 en combinación, con respecto a la terapia individual. Por consiguiente, el análisis de perfilación genética de este ejemplo permitió hacer la reconstrucción de las sendas involucradas en la transducción de señales de calcitonina y hormona pa rati roid es , desencadenada por el estímulo del receptor enlazado con proteína-G y su influencia sobre el ciclo celular, como se indica por los cambios observados en las ciclinas. Animales. Se llevó a cabo un tratamiento subcutáneo de dos semanas con calcitonina de salmón (sCT), PTS893, ó una combinación de los dos, cada uno de los cuales se disolvió en suero regulado con fosfato (PBS) conteniendo suero autólogo al 9 por ciento. Se utilizó un solvente como vehículo para el grupo de control. Los animales utilizados en este análisis fueron monos cinomolgos (Macaca fascicularis) , suministrados por el Centre de Recherches, Primatologiques, Port Louis, Mauritius. Se utilizaron dos animales por grupo y sexo. Al principio del período de tratamiento, los animales eran de cuando menos 24 meses de edad, con un peso corporal de aproximadamente 3 kilogramos. Los animales se mantuvieron bajo condiciones estándares para el bienestar del animal. Los animales se examinaron diariamente para determinar la mortalidad, el consumo de alimento, y para las observaciones clínicas. El peso corporal se registró una vez por semana. Las dosificaciones fueron de 0 microgramos/animal/día (como el control), 50 microgramos/animal día de calcitonina de salmón, y 5 microgramos/animal/día de PTS893. Como se muestra más adelante, las observaciones clínicas y el análisis, así como los exámenes histopatológicos llevados a cabo en este Ejemplo, mostraron que la calcitonina de salmón administrada subcutáneamente en una dosis de 50 microgramos/animal/día, fue bien tolerada por los monos cinomolgos. Exámenes in vivo. No se observaron cambios histopatológicos significativos. No se observaron cambios relevantes diferentes de una reducción del peso corporal que estuvo en el intervalo del 8 al 12 por ciento en el grupo con calcitonina de salmón. También se observó una reducción en el consumo de alimento, aunque no siempre fue consistente con la reducción en el peso corporal. TABLA 1 Consumo de Alimento - Machos Control Calcitonina de Salmón Día -6 ¦5 -4 -3 -2 -1 1 2 3 4 5 Animal no. W62503 50 75 50 75 100 75 75 75 50 100 100 Animal no. W62504 50 75 75 75 100 75 50 25 100 75 100 Día 6 7 8 9 10 11 12 13 14 Prom Animal no. W62503 75 100 100 100 100 75 75 25 70.8 Animal no. W62504 75 75 75 100 100 75 75 25 75 75.0 Ambos animales 72.9 PTS893 Los animales a los que se les administró la calcitonina de salmón presentaron una reducción en el peso corporal que estuvo en el intervalo de entre el 8 y el 12 por ciento, que se puede atribuir a una reducción en el consumo de alimento. Previamente se había descrito un efecto anoréxico para la calcitonina de salmón, que actúa a través de los receptores de amilina, Eiden S. y colaboradores, J. Physiol. 541 (pt3) : 1041-1048 (2002); Lutz T. A. y colaboradores, Peptides 21 (2):233-8 (2000). Sin embargo, aquí no se observaron signos de toxicidad. Los cambios hormonales y de lípidos observados en este ejemplo, más probablemente están relacionados con una adaptación metabólica consecuente. No se observaron cambios relevantes en los electrocardiogramas (ECG) o en la presión sanguínea.

TABLA 2 Presión Sanguínea Animal Sexo Compuesto Semana 1 Semana 2 Diferencia no. administrado (mm Hg) (mm Hg) (mm Hg) W62501 Masculino Control 121 98 -23 W62501 Masculino Control 90 29 -61 W62502 Masculino Control 86 107 21 W62502 Masculino Control 26 34 8 W62503 Masculino Calcitonina de 135 99 -36 Salmón W62503 Masculino Calcitonina de 61 40 -21 Salmón W62504 Masculino Calcitonina de 102 79 -23 Salmón W62504 Masculino Calcitonina de 56 35 -21 Salmón W82505 Masculino PTS893 76 87 11 W82505 Masculino PTS893 18 22 4 W82506 Masculino PTS893 106 101 -5 W82506 Masculino PTS893 53 33 -20 W62551 Femenino Control 96 76 -20 W62551 Femenino Control 27 26 -1 W62552 Femenino Control 102 93 -9 W62552 Femenino Control 26 36 10 W62553 Femenino Calcitonina de 98 82 -16 Salmón W62553 Femenino Calcitonina de 50 25 -25 Salmón W62554 Femenino Calcitonina de 92 44 -48 Salmón W62554 Femenino Calcitonina de 26 30 4 Salmón W62555 Femenino PTS893 92 70 -22 W62555 Femenino PTS893 43 42 -1 W62556 Femenino PTS893 78 87 9 W62556 Femenino PTS893 24 28 4 Muestreo de sangre. Los animales se pusieron en ayuno durante la noche antes de la recolección de sangre, pero tuvieron acceso libre al agua. Se tomaron muestras de sangre de una vena periférica. Se llevaron a cabo análisis estándares de hematología y química clínica una vez durante la pre-prueba, y al final del período de tratamiento. Se recolectaron muestras de sangre de cada animal a los mismos intervalos que se describen para las investigaciones de la química clínica. Las muestras de suero se congelaron profundamente (a aproximadamente -80°C) hasta los análisis, para la determinación de hormonas.

Química clínica y determinaciones de hormonas.

Se observó una ligera anemia en todos los animales del estudio, incluyendo en los controles. Ésta se atribuyó al muestreo repetido de sangre, y no se consideró relevante.

TABLA 3 Hematología - Machos Control Animal no. W62501 W62502 Prueba Unidades d-6 d7 d13 d-6 d7 d13 WBC G/l 10.0 11.1 12.9 6.1 11.2 6.3 RBC T/l 7.3 6.5 6.4 6.8 6.5 6.2 HB g/di 12.9 11.9 11.7 13.1 12.3 11.9 PCV l/l 0.44 0.40 0.44 0.42 0.41 0.41 MCV fl 60 61 68 61 63 66 MCH pg 17.8 18.2 18.1 19.3 19.0 19.0 CHC g/di 29.8 29.6 26.8 31.5 30.1 28.9 PLAT G/l 316 371 266 458 500 547 N G/l 6.46 4.93 3.65 2.09 6.77 1.24 E G/l 0.01 0.14 0.20 0.10 0.10 0.10 B G/i 0.02 0.03 0.06 0.02 0.02 0.00 L G/l 3.05 5.45 8.44 3.60 3.65 4.51 M G/l 0.46 0.51 0.54 0.33 0.64 0.46 Calcitonina de Salmón d-6, d7, y d13 indican el día -6, el día 7, y el día 13, en relación con el día de inicio de la dosificación.

TABLA 3 Hematología - Machos PTS893 d-6, d7, y d13 indican el día -6, el día 7, y el día 13, en relación con el día de inicio de la dosificación.

TABLA 4 Hematología - Hembras Control d-8, d7, y d13 indican el día -8, el día 7, y el día 13, en relación con el día de inicio de la dosificación.

TABLA 4 Hematología - Hembras Calcitonina de Salmón PTS893 d-8, d7, y d13 Indican el día -8, el día 7, y el día 13, en relación con el día de inicio de la dosificación. Entre las pruebas de química clínica estándares llevadas a cabo, se dieron disminuciones ligeras a moderadas en el fósforo y/o en el magnesio, y una disminución moderada a notoria en los triglicéridos, en los grupos a los que se administró calcitonina de salmón y PTS893.

TABLA 5 Química Clínica - Machos Control d-6, d7, y d 3 indican el día -6, el día 7, y el día 13, en relación con el día de inicio de la dosificación.

TABLA 5 Química Clínica - Machos Calcitonina de Salmón d-6, d7, y d13 indican el día -6, el día 7, y el día 13, en relación con el día de inicio de la dosificación.

TABLA 5 Química Clínica - Machos PTS893 d-6, d7, y d13 indican ei día -6, el día 7, y el día 13, en relación con el día de inicio de la dosificación.

TABLA 6 Química Clínica - Hembras Control d-8, d7, y d13 indican el día -8, el día 7, y el día 13, en relación con el día de inicio de la dosificación.

TABLA 6 Química Clínica - Hembras Calcitonina de Salmón d-8, d7, y d13 indican el día -8, el día 7, y el día 13, en relación con el día de inicio de la dosificación.

TABLA 6 Química Clínica - Hembras PTS893 d-8, d7, y d13 indican el día -8, el día 7, y el día 13, en relación con el día de inicio de la dosificación.

No se observaron cambios relevantes en las pruebas de urianálisis convencionales llevadas a cabo.

TABLA 7 Análisis urinario ¦ Machos Control Animal no. W62501 W62502 Prueba Unidades -6 -5 13 -6 -5 13 VOLUMEN mi 15 10 77 22 130 30 CREAT µ????/? 18000 17000 5460 7920 2480 5160 NTx n BCE - 9954 3425 - 1197 3167 9 CTx M9I - 21592 6810 - 2716 5323 9 D-PYR nmol/l 2345 1110 2904 1461 LDH IU/L 6.0 nd 8.0 8.0 NAG IU/1 3.5 1.5 3.2 1.6 Na+ mmol/l 163 43 87 77 K+ mmol/l 258 67 125 75 Cl- mmol/l 132 43 52 59 Ca2+ mmol/l 5.15 16.80 15.95 15.50 LPHOS mmol/l 11.10 1.05 11.30 8.90 Mg2+ mmol/l 2.75 7.50 7.85 6.25 Na/Crea m /m 9.10 7.90 1 .00 14.90 K/Crea m /mM 14.30 12.20 15.80 14.50 C/Crea mM/mM 7.40 7.90 6.50 11.40 Ca/Crea m /mM 0.29 3.08 2.01 3.00 Pho/Crea mM/mM 0.62 0.19 1.43 1.73 g/Crea mM/m 0.20 1.40 1.00 1.20 LDH/crea lU/mM 0.33 nd 1.01 1.55 NAG/crea lU/mM 0.19 0.28 0.40 0.31 NTx/Crea n E/mM 586 627 4830 614 CTx/Crea 1270 1247 10955 1032 Pyr/Crea nM/m 138 203 1171 283 d-6, d-5, y d 13 indican el día -6, el día -5, y el día 13, en relación con el día de inicio de la dosificación.

TABLA 7 Análisis urinario - Machos Calcitonina de Salmón Animal no. W62503 ? W62504 Prueba Unidades -6 -5 13 -6 -5 13 VOLUMEN mi 62 38 68 37 10 54 CREAT µ????/? 4300 7840 4620 13600 17360 4400 NTx n BCE 6023 5186 16067 3790 CTx ug/i 11618 10088 26370 6130 D-PYR nmol/l 1733 1083 _ 5113 1476 LDH IU/L 9.0 7.0 13.0 17.0 NAG IU/1 2.7 1.4 4.2 7.2 Na+ mmol/l 22 14 119 15 K+ mmol/l 65 78 134 76 Cl- mmol/l 10 55 64 68 Ca2+ mmol/l 0.90 18.25 3.70 23.40 LPHOS mmol/l 4.35 2.50 5.33 3.00 Mg2+ mmol/i 1.40 7.05 7.55 9.80 NaCrea mM/m 5.20 3.10 8.70 3.40 KCrea mM/m 15.10 16.90 9.90 17.20 C/Crea mM/mM 2.20 11.80 4.70 15.30 Ca/Crea mM/mM 0.21 3.95 0.27 5.32 Pho/Crea mM/m 1.01 0.54 0.39 0.68 Mg/Crea mM/mlM 0.30 1.59 0.60 2.20 LDH/crea lU/mM 2.09 1.52 0.96 3.86 NAG/crea lU/mM 0.63 0.30 0.31 1.64 NTx/Crea nME/mM 768 1123 926 861 CTx/Crea µ9/µ?t? 1482 2184 1519 1393 Pyr/Crea nM/m 221 234 295 336 d-6, d-5, y d13 indican el día -6, el día -5, y el día 13, en relación con el día de inicio de la dosificación.

TABLA 7 Análisis urinario ¦ Machos PTS893 Animal no. W62505 W62506 Prueba Unidades -6 -5 13 -6 -5 13 VOLUMEN mi 14 14 48 58 34 130 CREAT µ????/? 16160 16160 7840 9940 16120 3840 NTx nM BCE 5403 4871 8757 2102 CTx Mg/I - 11865 9365 - 2010 3705 8 D-PYR nmol/l 1660 1676 2278 782 LDH IU/L 7.0 14.0 9.0 19.0 NAG IU/1 23.4 2.9 7.1 2.6 Na+ mmol/l 174 111 59 35 K+ mmol/l 86 107 125 69 Cl- mmol/l 22 117 50 48 Ca2+ mmol/l 5.10 7.55 3.50 13.10 LPHOS mmol/l 74.40 0.10 3.86 0.17 Mg2+ mmol/l 11.25 8.70 2.95 5.25 Na/Crea m /mM 10.80 14.10 6.00 9.10 K/Crea mM/mM 5.30 13.60 12.60 17.90 C/Crea mM/mM 1.40 15.00 5.00 12.60 Ca/Crea mM/mM 0.32 0.96 0.35 3.41 d-6, d-5, y d13 indican el di -6, el día -5, el día 13, en relación con el día de inicio d la dosificación TABLA 8 Análisis urinario - Hembras Control Animal no. W62551 W62552 Prueba Unidades -8 -7 13 •8 -7 13 VOLUMEN mi 21 21 43 18 53 53 CREAT Mmol/I 16420 16420 9560 14300 6700 5380 NTx n BCE 9248 7824 5053 4695 CTx pgi 19280 17916 12014 10557 D-PYR nmol/l 2500 2748 1397 2159 LDH IU/L 10.0 15.0 9.0 25.0 NAG IU/1 19.2 4.2 10.3 3.5 Na+ mmol/l 110 44 140 64 K+ mmol/i 82 122 124 87 Cl- mmol/l 24 73 72 56 Ca2+ mmol/l 2.90 16.10 11.90 19.50 LPHOS mmol/l 88.2 7.7 20.3 3.5 g2+ mmol/l 2.35 7.20 9.00 5.45 Na/Crea mM/m 6.70 4.60 9.80 11.90 K/Crea m /m 5.00 12.80 8.70 16.20 C/Crea mM/m 1.50 7.60 5.10 10.50 Ca/Crea m /mM 0.18 1.68 0.83 3.63 P o/Crea mM/mM 5.37 0.81 1.42 0.64 Mg/Crea m /mM 0.10 0.80 0.60 1.00 LDH/crea lU/mM 0.61 1.57 0.63 4.65 NAG/crea lU/mM 1.17 0.44 0.72 0.65 NTx/Crea nME/mM 563 818 754 783 CTx/Crea MgMm 1174 1874 1793 1962 Pyr/Crea nlWmM 152 288 209 401 d-8, d-7, y d13 indican el día -8, el día -7, y el día 13, en relación con el día de inicio de la dosificación.

TABLA 8 Análisis urinario - Hembras Calcitonina de Salmón Animal no. W62553 W62554 Prueba Unidades -8 -7 13 ¦8 -7 13 VOLUMEN mi 11 58 67 32 14 49 CREAT µ????/? 10780 6920 4800 11260 1338 4200 0 NTx nM BCE 4624 3465 7393 2812 CTx MQ/i - 6983 5392 - 1341 5631 1 D-PYR nmol/l 2762 1644 2016 1110 LDH IU/L 14.0 6.0 6.0 36.0 NAG IU/1 10.2 2.8 1.2 2.7 Na+ mmol/l 98 40 156 32 K+ mmol/l 104 53 172 57 Cl- mmol/l 31 63 156 65 Ca2+ mmol/l 3.00 17.55 3.50 12.70 LPHOS mmol/l 25.4 5.1 10.8 5.8 Mg2+ mmol/l 3.35 5.40 3.80 4.85 Na/Crea mM/m 9.10 8.30 13.90 7.60 K/Crea mM/mM 9.60 11.10 15.20 13.50 C/Crea mM/mM 2.90 13.20 13.80 15.40 Ca/Crea imM/m 0.28 3.66 0.31 3.02 Pho/Crea mM/m 2.35 1.05 0.96 1.38 Mg/Crea mM/m 0.30 1.10 0.30 1.20 LDH/crea lU/mM 1.30 1.25 0.53 8.57 NAG/crea lU/mM 0.95 0.58 0.11 0.64 NTx/Crea nME/mM 668 722 553 670 CTx/Crea 1009 1123 1002 1341 Pyr/Crea nM/mM 399 343 151 264 d-8, d-7, y d13 indican el día -8, el día -7, y el día 13, en relación con el día de inicio de la dosificación.

TABLA 8 Análisis urinario - Hembras PTS893 Animal no. W62555 l W62556 Prueba Unidades -8 -7 13 -8 -7 13 VOLUMEN mi 14 15 52 39 69 42 CREAT µ????/? 19160 18240 5620 14060 7600 8060 NTx nM BCE 10499 2514 4818 5679 CTx 21919 3813 8877 11236 D-PYR nmol/l 2963 1356 1377 2036 LDH IU/L 11.0 10.0 18.0 9.0 NAG IU/1 0.5 1.2 5.9 5.1 Na+ mmol/l 145 71 118 146 K+ mmo!/1 302 50 164 70 Cl- mmol/l 119 101 53 133 Ca2+ mmol/l 11.50 20.05 6.60 12.35 LPHOS mmo!/l 0.2 0.1 7.6 2.9 Mg2+ mmol/l 7.35 6.90 4.00 5.90 NaCrea mM/mM 7.60 12.60 8.40 18.10 K/Crea mM/m 15.80 26.80 11.70 8.60 C/Crea mM/mM 6.20 18.00 3.70 16.50 Ca/Crea mM/m 0.60 3.57 0.47 1.53 Pho/Crea mM/mM 0.01 0.02 0.54 0.36 Mg/Crea mM/mM 0.40 1.20 0.30 0.70 LDH/crea lU/mM 0.57 1.78 1.28 1.12 NAG/crea lU/mM 0.03 0.21 0.42 0.63 NTx/Crea n E/m 576 447 634 705 CTx/Crea Mg/pm 1202 679 1168 1394 Pyr/Crea nM/m 163 241 181 253 d-8, d-7, y d13 indican ei día -8, el día -7, y el día 13, en relación con el día de inicio de la dosificación. El grupo de calcitonina de salmón presentó disminuciones moderadas en la somatomedina en suero (S.MED., ver las Tablas 9 y 10).

TABLA 9 Hormonas - Machos Control d-6, d7, y d13 indican el día -6, el día 7, y el día 13, en relación con el día de inicio de la dosificación.

TABLA 9 Hormonas - Machos Control Animal no. W62503 W6250¿ l Prueba Unidades d-6 d7 d13 d-6 d7 d13 ACTH pg/ml 98 87 87 115 78 73 CORTISOL nmol/l 2316 979 1611 1578 1523 1709 ALDOST pg/ml 983 1058 819 465 987 977 INSULINA mU/l 13.0 14.0 17.0 4.0 10.0 22.0 GLUCAG pg/ml 905 247 428 869 218 503 C-PEPTI ng/ml n/a 1.70 1.80 n/a 1.20 2.30 GASTRINA pg/ml n/a 83 88 n/a 128 136 d-6, d7, y d13 Indican el día -6, el día 7, y el día 13, en relación con el día de inicio de la dosificación.

TABLA 9 Hormonas - Machos PTS893 6, d7, y d 13 indican el día -6 el día 7, y el día 13, ación con el día de inicio de la dosificación TABLA 10 Hormonas - Hembras Control G5 Animal no. W62551 W62552 Prueba Unidades d-8 d7 d13 d-8 d7 d13 ACTH pg/ml 146 276 121 58 60 101 CORTISOL nmol/l 1983 1546 827 1894 837 818 0 ALDOST pg/ml 244 953 312 149 90 199 INSULINA mU/l 8.0 12.0 7.0 2.0 29.0 21.0 GLUCAG pg/ml 729 779 583 818 507 514 C-PEPTI ng/ml n/a 2.40 1.40 n/a 3.30 2.30 GASTRINA pg/ml n/a 84 102 n/a 90 92 5 d-8, d7, y d13 indican el día -8, el día 7, y el día 13, en relación con el día de inicio de la dosificación.

TABLA 10 Hormonas - Hembras Calcitonina de Salmón , d7, y d 13 indican el día -8 el día 7 , y el d ía 13, ación con el día de inicio de la dosificación TABLA 10 Hormonas - Hembras PTS893 Animal no. W62555 \V62556 Prueba Unidades d-8 d7 d13 d-8 d7 d13 ACTH pg/ml 109 104 110 95 132 126 CORT1SOL nmol/l 1482 1331 917 1532 1253 1375 ALDOST pg/ml 314 217 330 210 228 226 INSULINA mU/l 1.0 22.0 19.0 15,0 30.0 22.0 GLUCAG pg/ml 711 591 657 696 437 380 C-PEPTI ng/ml n/a 3.00 2.40 n/a 3.80 3.50 GASTRINA pg/ml n/a 83 82 n/a 96 91 d-8, d7, y d13 indican el día -8, el día 7, y el día 13, en relación con el día de inicio de la dosificación.

Muestreo de tejido. Los animales se sacrificaron mediante anestesia profunda inducida por medio de una inyección intravenosa de Pentothal®, seguida por exsanguinaciones. Todos los tejidos pertinentes se muestrearon para la histopatología y la pe rf ilación de la expresión genética. Las siguientes muestras de tejido se procesaron para el análisis: hígado, riñon, pituitaria, músculo, hueso, duodeno, bazo, y traquea. Las muestras para la histopatología se fijaron en formalina al 10 por ciento regulada con fosfato. La desmineralización ósea se llevó a cabo con ácido fórmico al 10 por ciento. Las muestras de tejido se empotraron en Paraplast®, y se seccionaron a 4 mieras, para teñir con hematoxilina y eosina. Las muestras para la perfilación de la expresión genética se congelaron rápidamente en nitrógeno líquido inmediatamente después del corte, se almacenaron sobre hielo seco, y subsecuentemente en un congelador profundo a aproximadamente -80°C hasta su uso posterior. Todos los tejido seleccionados para la perfilación de la expresión genética se examinaron histopatológicamente. Histopatología. El examen histopatológico de los tejidos seleccionados para el análisis de perfilación genética exhibió un espectro normal de lesiones incidentales que, en términos de severidad y distribución de las lesiones, no fueron diferentes de los controles en todos los grupos de tratamiento. Se observó una incidencia ligeramente más alta de cambios inflamatorios y regenerativos en los riñones de las hembras a las que se administró calcitonina de salmón. Estos cambios no se consideraron relevantes, debido a que no existen registros de toxicidad del riñon después de 40 años de uso terapéutico de calcitonina. Las secciones de hueso se tiñeron para osteonectina, osteopontina, y osteocalcina, y se evaluaron histopatológicamente. Se llevó a cabo la histomorfometría del tejido óseo con respecto a los parámetros para la resorción ósea y la síntesis (formación osteoide). El teñido con osteonectina, osteopontina, y osteocalcina de la tibia no mostró diferencia entre los grupos 1 (control) y dos (calcitonina de salmón). La osteonectina exhibió un ag ra nd amiento mayor y deterioro de la placa de crecimiento epifisial del animal número 2553, debido a un estado patológico severo no relacionado con el tratamiento (epif isiólisis subaguda severa). Se llevó a cabo la histomorfometría del tejido óseo para determinar los parámetros relacionados con la resorción ósea y la síntesis ósea (formación osteoide). Los resultados (ver las Tablas 11 y 12) mostraron que la calcitonina de salmón aumentó el volumen y espesor trabecular en aproximadamente un 17 por ciento en la tibia, pero no en las vértebras. El PTS893 redujo el espesor cortical (18 por ciento) y aumentó la porosidad cortical (54 por ciento) en la tibia (T), pero no en las vértebras (V). En contraste, el PTS893 indujo un aumento en el volumen osteoide (37 por ciento en la tibia, 213 por ciento en las vértebras), y en la superficie osteoide (49 por ciento en la tibia, 37 por ciento en las vértebras), así como un aumento en la superficie de los osteobiastos (40 por ciento en la tibia, 24 por ciento en las vértebras), tanto en la tibia como en las vértebras, respectivamente.

TABLA 11 Histomorf ometría de la Tibia (Promedio de Machos y H em bras) promedio 25.83 126.88 2.01 391.68 2.02 1009.14 34.97 6.65 4.95 15.66 SD 7.17 10.68 0.43 144.81 0.33 124.65 5.56 3.46 1.93 6.21 PTS893 19.69 129.22 1.52 526.99 2.76 1022.62 54.84 .24 4.62 16.16 16.65 93.20 1.79 466.69 2.94 893.43 43.57 9.61 4.76 21.25 25.74 120.52 2.13 347.63 2.94 950.33 43.63 8.14 4.21 18.46 24.78 126.07 1.97 382.61 2.95 939.53 54.97 9.95 2.85 25.25 promedio 21.72 117.25 1.85 430.98 2.90 951.48 49.25 9.74 4.11 20.28 SD 4.30 16.43 0.26 81.20 0.09 53.46 6.53 1.28 0.87 3.91 sCT: Calcitonina de salmón; SD: Desviación estándar. BV/TV, volumen óseo trabecular; Tb. Th. Espesor trabecular; Tb. N. Número trabecular; Tb. Sp. Separación trabecular; Ct. Por. Porosidad cortical; Ct. Th. Espesor cortical; OS/BS, superficie osteoide; OV/BV, volumen osteoide; ES/BS, superficie erosionada; Obs/BS, superficial de osteoblastos.

TABLA 12 H istom o rfom etría de las Vértebras (Promedio de Machos y H em bras) promedio 19.75 144.72 1.39 598.07 0.71 637.20 18.47 1.45 6.36 7.74 SD 2.82 25.07 0.28 138.62 0.30 193.78 5.15 0.45 3.34 5.65 sCT 17.32 113.29 1.53 540.84 1.70 705.10 3.95 0.46 11.60 3.21 19.33 144.31 1.34 602.15 1.18 810.09 5.82 0.86 2.55 3.97 20.11 118.49 1.70 470.71 1.18 576.42 11.48 1.43 4.93 6.81 19.46 123.71 1.57 511.96 0.12 907.16 4.91 0.32 3.47 1.23 promedio 19.06 124.95 1.53 531.42 1.05 749.69 6.54 0.77 5.64 3.80 SD 1.21 13.59 0.15 55.24 0.66 141.96 3.38 0.50 4.09 2.31 PTS893 15.15 105.46 1.44 590.67 1.49 707.43 18.84 3.24 9.31 10.36 20.23 118.79 1.70 468.39 1.45 629.35 41.28 8.42 2.30 9.07 23.56 134.66 1.75 436.79 0.41 740.87 23.65 3.49 2.55 10.47 24.86 134.82 1.84 407.56 0.92 624.35 17.66 2.66 3.96 8.33 promedio 20.95 123.43 1.68 475.85 1.07 675.50 25.36 4.45 4.53 9.56 SD 4.33 14.15 0.17 80.47 0.51 57.85 10.93 2.67 3.27 1.04 sCT: Calcitonina de salmón; SD: Desviación estándar. BV/TV, volumen óseo trabecular; Tb. Th. Espesor trabecular; Tb. N. Número trabecular; Tb. Sp. Separación trabecular; Ct. Por. Porosidad cortical; Ct. Th. Espesor cortical; OS/BS, superficie osteoide; OV/BV, volumen osteoide; ES/BS, superficie erosionada; Obs/BS, superficial de osteoblastos.

La histomorfometría mostró resultados inconsistentes entre el hueso de la tibia y de las vértebras, excepto por un aumento en la síntesis osteoide inducida por el PTS893. Este efecto está bien documentado para la hormona paratiroides, cuando se administra de una manera discontinua. Extracción y purificación del ARN. Se seleccionó un conjunto de tejidos para la perfilación de la expresión genética. Este conjunto incluyó muestras de riñon, hueso, músculo, duodeno, pituitaria, e hígado. En particular, se procesó el hueso diafiseal de fémur y tibia para la perfilación de la expresión genética. Dicho de una manera breve, se obtuvo el ARN total mediante extracción con tiocianato de guanidinio ácido-fenol-cloroformo (Trizol®, Invitrogen Life Technologies, Carlsbad, Calif. EUA) de cada sección de tejido congelada, y luego se purificó el ARN total sobre una resina de afinidad (RNeasy®, Qiagen) de acuerdo con las instrucciones del fabricante. Se cuantificó el ARN total mediante la absorbencia a ? = 260 nanómetros (A260nm), y se estimó la pureza mediante la proporción de A260nm/A280nm . La integridad de las moléculas de ARN se confirmó mediante electroforesis en gel de agarosa no desnaturalizante. El ARN se almacenó a aproximadamente -80°C hasta el análisis. Una parte de cada muestra de ARN individual se guardó para el análisis de los genes críticos por medio de reacción en cadena de la polimerasa en tiempo real. Ensayo de hibridación. Se hizo la perfilación de transcripción por medio de arreglos de sondas de expresión GeneChip® en los laboratorios de Genomics Factory EU, como es recomendado por el fabricante del sistema GeneChip® (GeneChip Expression Analysis Technical Manual, Affymetrix Inc., Santa Clara, Calif. EUA). Se utilizaron arreglos de sondas de expresión HG-U95Av2 GeneChip® (Affymetrix, Santa Clara Calif. EUA). Se sintetizó el ADNc de doble cadena con una cantidad inicial de aproximadamente 5 microgramos de ARN total de longitud completa, utilizando el Superscript Choice System (Invitrogen Life Technologies) en la presencia de un cebador de oligonucleótido de ADN T7-(dT)24. En seguida de la síntesis, se purificó el ADNc mediante extracción con fenol/cloroformo/aicohol ¡soamílico, y precipitación en etanol. Luego se transcribió el ADNc purificado in vitro, utilizando el Estuche de Marcado de Transcripción de ARN de alto rendimiento BioArray® (ENZO) en la presencia de ribonucleótidos biotinilados de ARNc marcado con biotina. Entonces se purificó el ARNc marcado sobre una resina de afinidad (Rneasy®, Qiagen), se cuantificó, y se fragmentó. Se híbrido una cantidad de aproximadamente 10 microgramos de ARNc marcado durante aproximadamente 16 horas a 45°C, a un arreglo de sonda de expresión. Luego el arreglo se lavó y se tiñó dos veces con estreptavidina-ficoeritrina (Molecular Probes), utilizando la estación de trabajo GeneChips Fluidics 400 (Affymetrix). Luego se escaneó el arreglo dos veces utilizando un escáner de láser confocal (GeneArray® Scanner, Agilent), dando como resultado una imagen escaneada. Este "archivo-. data" se procesó utilizando el programa Micro Array Analysis Suite versión 4 (MAS4) (Affymetrix) en un "archivo- .cel" . El "archivo-. cel" se capturó y se cargó en el Sistema de Manejo de Información de Laboratorio Affymetrix GeneChip (LIMS). La base de datos LIMS se conecta a un servidor UNIX Sun Solaris a través de un sistema de archivo de red que permite que se descarguen las intensidades promedio para todas las células de sonda (archivo CEL) en una base de datos Oracle. Los datos brutos se convirtieron a los niveles de expresión utilizando una "intensidad objetiva" de 150. Los valores numéricos exhibidos son los promedios ponderados de las intensidades de señal de los pares de sondas comprendidos en un conjunto de sondas para una secuencia de transcripción dada (valor PromDif). Se verificó la calidad de los datos, y se cargaron en el software GeneSpring® versiones 4.2.4 y 5 (Silicon Genetics, Calif. EUA) para el análisis. Análisis de datos. El análisis de datos se llevó a cabo con el paquete de software de Silicon Genetics, GeneSpring, versión 4.2.1 y 5. Los valores de diferencia promedio debajo de 20 se establecieron en 20. Se utilizaron diferentes herramientas de filtración y acumulación en estos programas, para explorar los conjuntos de datos y para identificar los cambios en el nivel de transcripción que informan sobre las funciones celulares y de tejido alteradas, y que se pueden utilizar para establecer hipótesis de trabajo sobre los modos de acción del compuesto. El intervalo umbral para la consideración sobre la regulación hacia arriba o hacia abajo se determinó dentro del contexto de la interpretación biológica del ejemplo. El contenido de información de estos conjuntos de datos es un conjunto de cambios numéricos e información biológica. La decisión de considerar un gen específico relevante, se basó en un conjunto de cambios numéricos identificados por los algoritmos comparativos y estadísticos, y la relación con otros genes modulados que señalan hacia un tema biológico común. El peso de esa relación fue evaluada por el analista a través de una revisión de la literatura científica pertinente. El aumento y la disminución reportados aquí se refieren a la abundancia de la transcripción, a menos que se informe específicamente. Perf ilación de la expresión genética. Se llevó a cabo el análisis de perf ilación genética comparativa de múltiples órganos en el grupo en el que se administró calcitonina de salmón en 50 microgramos/an i mal/día. Los órganos seleccionados para el análisis fueron hígado, riñon, pituitaria, músculo esquelético, hueso, duodeno, bazo, y tráquea.

TABLA 13 Perfilación de Expresión Genética de Múltiples Órganos de Calcitonina de Salmón Identificador de conjunto de sondas de expresión Gen Codificante Hueso GeneChip® 36611 at fosfatasa ácida 1 , isoforma a ó Riñn -1.33 -1.33 32714 s at 1 tipo receptor de activina A tipo II -1.62 -1.83 í Hdgao 39314_at precursor de receptor de activina A -1.12 1.41 -4.15 tipo II B ú Mlscuo 35915 at cadena beta-C de activina -1.21 -2.41 -1.67 Piittiuara 36621 at glicoproteína alfa-2-HS 1.33 1.53 1.12 34588 i at amelogenina -1.61 á Trquea 37747 at anexina V -1.30 1.87 -2.58 40376 at precursor de arilsulfatasa E -1.59 39326 at ATPasa H(+)-vacuolar -1.57 -2.80 -1.62 38814 at ATPasa H(+)-subunidad vacuolar 1.22 33741_at ATPasa, transporte de H+, 1.23 -1.50 lisosomal 33033_at ATPasa, transportación de H+, -1.29 -3.19 -1.43 1.23 lisosomal 38814_at ATPasa, transportación de H+, 1.30 -1.28 1.14 lisosomal 38126 at biqlicano 1.75 -1.61 39407 at proteína morfogenética ósea 1 -1.20 -1.55 31399 at proteína morfogenética ósea 10 1.44 1.45 -1.31 -1.77 1113 at proteína morfogenética ósea 2A -1.12 2.63 1.29 1831 at proteína morfogenética ósea 5 -1.43 1.39 1.40 1733_at precursor proteína morfogenética -1.37 -1.17 -1.64 -1.27 -1.1 ósea 6 34500_at proteína de enlace de calcio 1 2.31 1.21 (calbraína) 31670_s_at quinasa de proteína dependiente 1.17 1.57 -1.28 1.60 de calcio/calmodulina (quinasa CaM) II gamma 1751 g at calreticulina -4.03 -1.60 1.67 32067_at modulador de elemento que 1.39 -1.24 -1.50 responde a cAMP (CRE ) 39241 at anhidrasa carbónica I -2.68 1.18 -1.69 40095 at anhidrasa carbónica II -1.69 40163_r_at precursor de proteína de matriz 2.36 5.61 oligomérica de cartílago 128 at catepsina k 1.18 1.35 -2.33 129_g_at catepsina k 1.20 -1.54 1.17 -1.28 38466 at catepsina k 1.27 1.40 -1.19 39333 at colágeno, tipo IV, alfa 1 -1.49 39925 at colágeno, tipo IX, alfa 2 -2.38 -1.36 38420 at colágeno, tipo V, alfa 2 -1.29 -1.18 -1.11 -1.10 41351 at colágeno, tipo VI, alfa 1 -2.29 -1.27 -1.50 41350_at precursor de colágeno, tipo VI, alfa -3.55 1 35168 f at colágeno, tipo XVI, alfa 1 -1.59 35169 at colágeno, tipo XVI, alfa 1 -1.18 39632_at colagenasa 3 (metaloproteinasa de 1.20 matriz 13) 36638_at factor de crecimiento de tejido -2.11 conectivo 40697 at ciclina A2 -1.60 34736 at ciclina B1 -2.83 36650 at ciclina D2 1.21 35249 at ciclina E2 -2.95 1206 at quinasa 5 dependiente de ciclina 1.56 -1.54 799_at quinasa 5 dependiente de ciclina, 1.32 subunidad reguladora 1 (p35) 41546 at quinasa 6 dependiente de ciclina 1.15 1.52 1.34 2031_s_at inhibidor 1A de quinasa 1.95 dependiente de ciclina (p21 , Cip1 ) 35816 at cistatina B (estefina B) 1.57 806 at quinasa inducible por citoquina 1.20 1.35 | 40049_at quinasa 1 de proteína asociada con -1.47 -1.29 muerte 33903_at quinasa 3 de proteína asociada con -1.22 muerte 34029_at fosfoproteína 1 ácida de matriz de 1.65 dentina (D P1 ) 40186 at fosfatasa de especificidad doble 9 1.59 37996_s_at quinasa de proteína miotónica de 1.25 -1.50 distrofia 342_at pirofosfatasa/fosfodiesterasa de 1.45 ectonucleótido 1 343_s_at pirofosfatasa/fosfodiesterasa de 1.1 1 -1.42 ectonucleótido 1 33602_at diferenciación endotelial, precursor 1.15 2.24 -1.66 de receptor 6 acoplado con proteína G 1442 at receptor de estrógeno 1.47 1.23 1.60 33670 at receptor de estrógeno 1.30 1487_at proteína relacionada con receptor 1.11 -1.52 1.24 de estrógeno 38882_r_at proteína de cuadro B que responde 1.22 -1.51 a estrógeno (EBBP) 39945_at proteína de activación de -1.27 -1.48 -1.32 fibroblastos 996 at factor de crecimiento de 1.17 -1.41 41280_r_at MAPK8IP1 : proteína 1 de -1.31 1.92 1.58 interacción con quinasa 8 de proteína activada por mitógeno 2004 at quinasa MEK 1.13 -1.62 1.16 1509 at metaloproteínasa -1.42 -1.11 -1.23 -1.18 976_s_at quinasa 1 de proteína activada por -1.61 mitógeno 34006_s_at quinasa 8 de proteína activada por 1.32 mitógeno 1844_s_at quinasa 1 de quinasa de proteína -1.60 1.15 activada por mitógeno 35694_at quinasa 4 de quinasa de quinasa 1.26 de quinasa de proteína activada por mitógeno 1469_at quinasa 2 de proteína activada por 113 -1.30 1.16 quinasa de proteína activada por mitógeno 1637_at quinasa 3 de proteína activada por 1.11 1.34 quinasa de proteína activada por mitógeno 37565_at MMD: asociada con diferenciación 1.28 -2.48 -1.28 de monocitos a macrófagos 38307 at neurocondrina 2.80 -1.39 39144_at factor nuclear de céiulas-T 2.72 1.42 -1.70 activadas, citoplásmico, (Drosophila) fosfodiesterasa E3) 38921 at fosfodiesterasa IB 1.52 1.42 1.12 31699_at 3-quinasa de fosfoinositida 1.56 -1.56 dependiente de calmodulina 36287_at 3-quinasa de fosfoinositida, 1.31 catalítica, polipéptido gamma 35665 at 3-quinasa de fosfoinositida, clase 3 -1.11 1.21 364 s at fosfolipasa Cb3 1.22 901_g at fosfolipasa C, beta 4 -1.20 1.41 -1.55 1293 s at fosfolipasa D -1.26 38023_at proteína de transferencia de 2.25 1.33 1.55 1.71 fosfatidil-inositol 38269 at quinasa D2 de proteína PKD2 1.34 32306 g at pre-pro-colágeno tipo I, alfa-2 1.19 -1.38 -1.75 -1.31 35473 at pre-pro-colágeno tipo I, alfa 1 -2.72 -1.37 -3.94 -2.70 32307 s at pro-colágeno 1.13 -1.26 -2.44 -1.56 -1.82 37605 at pro-colágeno alfa 1 , tipo II -1.84 -1.61 36184_at 5-dioxigenasa de pro-colágeno- 2.52 -2.15 -1.30 lisina 37037_at pro-colágeno-prolina, 4- 1.87 1.46 -1.67 1.29 dioxigenasa de 2-oxoglutarato (4- hidroxilasa de prolina), alfa polipéptido I 37633_s_at proteína endometrial asociada con 2.00 progestágeno (proteína placentaria 33679 f at tubulina beta 2 -1.31 1.45 709 ai tubulina beta 3 -1.18 -1.35 1.20 471 f at tubulina beta 4 -1.38 1.50 39399 at tubulina beta, cofactor D -1.85 -4.69 32098_at precursor de cadena alfa-2 de -3.79 colágeno tipo VI 1651_at proteína portadora de ubiquitina -3.74 E2-C 1953_at factor de crecimiento endotelial 1.40 vascular 36101_s_at factor de crecimiento endotelial 1.45 vascular 37268_at factor de crecimiento endotelial -1.58 vascular B 36140 at proteína-1 de enlace de cuadro Y 2.30 1.86 2.36 -2.72 En adición, se evaluó el efecto del PTS893 en hueso.

TABLA 14 Análisis de Perfilación Genética de la Calcitonina de Salmón v del PTS893 en Hueso Identificador Veces de Veces de conjunto aumento de de sondas con aumento de expresión Gen Codificante calcitonina con GeneChip® de salmón PTS893 38909_at 1-alfa-hidroxilasa de 25-hidroxivitamina -1.14 D3 32714 s at receptor de activina A tipo I l-tipo 1 -1.62 35915 at cadena beta-C de activina -1.21 39279 at receptor de activina tipo II 1.24 39383 at ciclasa de adenilato 6, isoforma a -1.22 38965 at agrecano 1 2.03 39206 s at agrecano 1 1.41 36621 at glicoproteína alfa-2-HS 1.33 34589 f at amelogenlna 1.10 -3.10 39326 at ATPasa h(+) vacuolar -1.57 -1.19 38814 at ATPasa H(+) vacuolar 1.22 33741 at ATPasa, transporte de H+, lisosomal 1.23 33033_at ATPasa, transportación de H+, -1.29 -1.17 lisosomal 40328 at factor de transcripción bHLH 2.57 38466 at catepsina k 1.27 40718 at catepsina w -1.31 32833 at quinasa tipo CDC 1 1.63 646 s at quinasa tipo CDC 2, isoforma hclk2/139 1.19 34763_at proteoglicano 6 de sulfato de -1.18 condroitina 598 at colágeno tipo i I, alfa- -1.38 -1.19 32488 at colágeno tipo III, alfa 1 -1.41 38952 s at colágeno tipo IV, alfa 2 1.23 1.44 35379 at colágeno tipo IX, alfa 1 -2.22 34802 at colágeno tipo VI, alfa-2 (AA 570-998) -1.37 38566 at colágeno tipo X, alfa 1 1.67 37892 at colágeno tipo XI, alfa 1 1.24 1.18 1026 s at colágeno tipo XI, alfa 2 -1.20 1027 at colágeno tipo XI, alfa 2 1.11 39632_at colagenasa 3 (metaloproteinasa de 1.20 matriz 13) 36638_at factor de crecimiento de tejido -1.32 conectivo 1943 at ciclina A -1.74 40697 at ciclina A2 -1.60 -1.39 34736 at ciclina B -2.83 39251 at ciclina C -2.03 1983 at ciclina D2 -1.28 36650 at ciclina D2 1.21 35249 at ciclina E2 -2.95 1649 at proteína de interacción con cicJina G1 1.31 1913 at ciclina G2 -1.29 160024_at quinasa dependiente de ciclina (tipo 1.53 CDC2) 10 PISSLRE 1942 s at quinasa dependiente de ciclina 4 -1.22 1206 at quinasa dependiente de ciclina 5 1.56 40549 at quinasa dependiente de ciclina 5 -1.40 799_at quinasa dependiente de ciclina 5, 1.32 subunidad reguladora 1 (p35) 41546 at quinasa dependiente de ciclina 6 1.15 2031_s_at inhibidor 1A de quinasa dependiente de 1.95 ciclina A (p21 , Cip1) 1787_at inhibidor 1 C de quinasa dependiente de 1-18 ciclina 38673_s_at inhibidor 1 C de quinasa dependiente de 1.13 ciclina 39545_at inhibidor 1C de quinasa dependiente de 1.24 ciclina 1797_at inhibidor 2D de quinasa dependiente de -1.21 ciclina (p19, inhibe CDK4) 35816 at cistatina B (estefina B) 1.57 806 at quinasa inducible por citoquina ¡ 1.20 40049_at quinasa 1 de proteína asociada con -1.30 muerte 33903_at quinasa 3 de proteína asociada con -1.22 -7.73 muerte 34029_at fosfoproteína ácida 1 de matriz de 1.65 dentina (DMP1) 38059_g_at dermatopontina 1.72 343_s_at pirofosfatasa/fosfodiesterasa de 1.11 ectonucleótido 1 342_at pirofosfatasa/fosfodiesterasa de 1.45 ectonucleótido 1 1442 at receptor de estrógeno 1.47 33670 at receptor de estrógeno 1.30 1487_at proteína relacionada con receptor de 1.11 estrógeno 38882_r_at proteína de cuadro B que responde a 1.22 estrógeno (EBBP) 38902_r_at proteína de cuadro B que responde a 1.23 estrógeno (EBBP) 39945 at proteína de activación de fibroblastos -1.27 424_s_at receptor del factor de crecimiento de -1.17 fibroblastos 466 at factor de transcripción general II 1.34 1102 s at receptor alfa de glucocorticoide 1.43 33510 s at receptor de glutamato, metabotrópico 1 1.26 1.23 (somatomedina C) 1232_s_at proteína de enlace de factor de -1.31 crecimiento tipo insulina 40422_at proteína de enlace 2 de factor de -1.27 crecimiento tipo insulina 1586_at proteína de enlace 3 de factor de 1.45 crecimiento tipo insulina 37319_at proteína de enlace 3 de factor de 2.17 crecimiento tipo insulina 1737_s_at proteína de enlace 4 de factor de 1.13 crecimiento tipo insulina 41420_at proteína de enlace 5 de factor de 1.18 crecimiento tipo insulina 1396_at proteína de enlace 5 de factor de 1.62 crecimiento tipo insulina 1678_g_at proteína de enlace 5 de factor de 1.44 crecimiento tipo insulina 38650_at proteína de enlace 5 de factor de 1.53 crecimiento tipo insulina 1741_s_at proteína de enlace 2 de factor de -2.49 -2.11 crecimiento tipo insulina 1464_at precursor de factor de crecimiento tipo 1.18 insulina II 1591_s_at precursor de factor de crecimiento tipo 1.41 1.31 insulina II mitógeno 41280_r_at MAP 8IP1: proteína 1 de interacción -1.31 -1.31 con quinasa 8 de proteína activada por mitógeno 1509 at metaloproteinasa -1.42 976_s_at quinasa 1 de proteína activada por -1.61 1.12 mitógeno 34006_s_at quinasa 8 de proteína activada por 1.32 mitógeno 1439_s_at quinasa 2 de proteína activada por 1.78 quinasa de proteína activada por mitógeno 37565_at MMD: asociado con diferenciación de 1.28 1.30 monocitos a macrófagos 38369_at gen de respuesta primaria de -1.10 diferenciación mieloide (88) 1052 s at proteína NF-IL6-beta 1.30 36472 at interacción con N-myc y STAT -1.35 38354 at factor nuclear NF-IL6 (AA 1-345) 1.92 33106_at subfamilia de receptor nuclear LXR-alfa 3.29 del receptor huérfano nuclear 1, grupo H, miembro 3 33381 at coactivador de receptor nuclear 1.11 279_at subfamilia de receptor nuclear 4, grupo 2.30 A, miembro 1 | inositol, isoforma C (-1) 751 at fosfatidilinositol-glicano-clase C (PIG-C) 1.14 -1.25 666 at fosfodiesterasa 4A, específica de cAMP 1.33 1.30 38526 at fosfodiesterasa 4D, específica de cAMP 1.30 3.53 38921_at fosfodiesterasa IB, dependiente de 1.52 calmodulina 38944_at fosfodiesterasa IB, dependiente de 1.17 calmodulina 32029_at quinasa-1 de proteína dependiente de 1.16 fosfoinositida (3) 31699 at 3-quinasa de fosfoinositida 1.56 1.16 1085 s at fosfolipasa C -1.14 364 s at fosfolipasa C b3 1.22 901. g_at fosfolipasa C, beta 4 -1.20 1293 s at fosfolipasa D -1.26 32306_g_at pre-pro-colágeno tipo I, alfa 2 1.19 35473 at pre-pro-colágeno tipo I, alfa 1 -2.72 38951 at quinasa C de proteína PRKCQ, teta 1.43 32307 s at pro-colágeno 1.13 34494 at proteinasa de pro-colágeno l-N 1.92 37605 at procolágeno tipo II, alfa 1 1.91 36109 at prolidasa (imidodipeptidasa) PEPD -2.55 1884_s_at antígeno nuclear de células -1.85 proliferantes 34390_at subunidad alfa (II) de 4-hidroxilasa de 1.19 prolilo 37037_at subunidad alfa de 4-hidroxi!asa de 1.20 prolilo 36666 at 4-hidroxilasa de prolilo beta 1.95 36533 at sintasa de prostaciclina 1.20 718 at proteasa, serina, 1 1 (enlace de IGF) -1.30 7 9_g_at proteasa, serina, 11 (enlace de IGF) -1.43 385_at subunidad de proteasoma (prosoma, 1.36 macropaína), tipo beta, 10 39183 at quinasa 1 de proteína PCTAIRE -1.17 37698_at quinasa A de proteína (PRKA), proteína 1.29 de ancla 1 3971 1_at sustrato 80K-H de quinasa C de 1.13 proteína 39161 at quinasa de proteína Njmu-R1 1.21 35348_at quinasa de proteína, activada por AMP, 2.10 subunidad beta 1 no catalítica 36359_at quinasa de proteína, dependiente de 1.39 cAMP, catalítica, gamma 546_at quinasa de proteína, dependiente de 1.14 cAMP, catalítica, inhibidor alfa 227_g_at quinasa de proteína, dependiente de 1.18 cAMP, reguladora, tipo I, alfa 41768 at quinasa de proteína, dependiente de 1.15 32548 at receptor de progesterona inactivo -1.33 1953_at factor de crecimiento endotelial 1.40 1.20 vascular 36101_s_at factor de crecimiento endotelial 1.45 1.44 vascular 36140 at proteína-1 de enlace de cuadro Y 2.30 5.49 números (-) = regulados hacia abajo. números ( + ) = regulados hacia arriba.

Reacción en cadena de la polimerasa en tiempo real. Basándose en los datos del microarreglo de ADN, se seleccionó un conjunto de transcripciones para el análisis cuantitativo mediante reacción en cadena de la polimerasa en tiempo real (RT-PCR). Dicho de una manera breve, el método explota el tinte verde SyBr, que se intercala en el ADN de doble cadena. La acumulación de los productos de la reacción en cadena de la polimerasa se detecta directamente monitoreando el aumento en la fluorescencia del tinte verde SyBr. las reacciones se caracterizan por el punto del tiempo durante el ciclaje cuando se detecta primeramente la amplificación de un producto de ia reacción en cadena de la polimerasa, en lugar de la cantidad del producto de la reacción en cadena de la polimerasa acumulado después de un número fijo de ciclos. Mientras más alto sea el número de copias inicial del objetivo del ácido nucleico, más pronto se observará un aumento significativo en la fluorescencia. A partir de cada muestra de ARN, se hizo el ADNc utilizando el estuche de partes Applied Biosystems (Applied Biosystems #N808-0234), siguiendo la recomendación del fabricante. La mezcla de reacción en cadena de la polimerasa se preparó utilizando la Mezcla Maestra de Reacción en Cadena de la Polimerasa Universal Verde SyBr (Applied Biosystems #4309155) como sigue: 5 microlitros de plantilla de ADNc, 400 n M de cada cebador, trifosfatos de desoxinucleótido 0.2 m M , MgCI2 1 mM, y 0.5 unidades de polimerasa de ADN Taq, 5 microlitros de regulador de reacción en cadena de la polimerasa verde SyBr, y agua sin ARNsa hasta un volumen final de 50 microlitros. La reacción en cadena de la polimerasa se llevó a cabo utilizando el Sistema de Detección de Secuencia ABl Prism 7700, después de un paso a 95°C durante 10 minutos, y el programa del ciclo por pasos se llevó a cabo para un total de 40 ciclos como sigue: 95°C durante 30 segundos, 60°C durante 1 minuto. Se incluyó un control negativo: mezcla de reacción en cadena de la polimerasa con agua en lugar de la muestra de ADNc. La concentración de plantilla inicial se determinó basándose en el ciclo del umbral. El ciclo del umbral es el ciclo de la reacción en cadena de la polimerasa en donde se detectó primero la fluorescencia sobre el fondo, y se ha demostrado que es inversamente proporcional al número de copias objetivas presentes en la muestra. La cuantificación se llevó a cabo calculando ia concentración objetiva desconocida en relación con un estándar absoluto, y mediante la normalización con un control endógeno validado, tal como un gen de mantenimiento (ß-actina). Los resultados se presentan como un porcentaje del control, una vez que se ha calculado la proporción entre los números de moléculas para ei gen de interés divididos entre el número de moléculas para la ß-actina. Basándose en los datos del microarreglo de ADN, se seleccionó el siguiente conjunto de transcripciones para el análisis cuantitativo mediante RT-PCR: receptor de adhesión CD44, ang iopoietina, proteína morfogenética ósea 5, anhidrasa carbónica II, proteína de matriz oiigomérica de cartílago, catepsina K, osteopontina, colágeno tipo I pre-pro-alfa-2, Spi-B, y proteína de enlace de cuadro Y.

TABLA 15 d a cción en Cadena de la Polimerasa en Tiem o Real n.a.: no aplicable.

La reacción en cadena de la polimerasa en tiempo real confirmó en la mayoría de los casos los cambios observados en el análisis de perfilación genética, como fue el caso para la proteína morfogenética 5, ia anhidrasa carbónica II, catepsina K, proteína de matriz oligomérica de cartílago, colágeno tipo I pre-pro-alfa-2, SpiB, y proteína de enlace de cuadro-Y. Sin embargo, no se detectaron cambios en el nivel de expresión del receptor de adhesión CD44, angiopoietina 1, y osteopontina. Análisis. Se sabe que la calcitonina ejerce un efecto sobre la diferenciación, sobrevivencia, y actividad de resorción de los osteocl astos , dando como resultado una actividad osteoclástica disminuida. Pondel . Intl. J. Exp. Pathol. 81 (6):405-22 (2000). Estos efectos se podrían reconstruir mediante perfilación genética de múltiples órganos (Tabla 16).

TABLA 16 Efectos Sobre los Osteoclastos actividad de resorción de osteoclastos) Resorción ósea ATP-asas H+ ALL B por parte de osteoclastos Anhidrasa B, L, P carbónica 1, 11 Catepsina K ALL ODF/OPGL: B ligando de osteoprote- gerina Movilidad de Tubulinas ALL osteoclastos Proteína PAK4 B, M, P Perfilación de expresión genética de múltiples órganos en animales tratados con calcitonina de salmón. Se exhiben los órganos en donde se vieron los cambios en la expresión. B = hueso; K = riñon; M = músculo; P = pituitaria; L = hígado, T = tráquea. La calcitonina de salmón parece ejercer una regulación paracrina de la actividad de resorción de los osteoclastos, a través de la regulación de la expresión de cistatina en el osteoblasto, como se muestra en la Tabla 17.

TABLA 17 Perfilación de Expresión Genética: Función de Osteoclastos Identificador de conjunto de sondas Veces de Controles sCT de expresión Gen Codificante Promedio Promedio Cambio GeneChip® 40729_s_at ATPasa, transportación de 204 327 1.6 H+, lisosomal (bomba de protones vacuolar), subunidad G, isoforma 2 37367_at ATPasa, transportación de 272 328 1.2 H+, lisosomal, 31kDa, V1 subunidad E, isoforma 1 40568_at ATPasa, transportación de 938 1132 1.21 H+, lisosomal, 56/58kDa, V1 subunidad E, isoforma 2 39241 at anhidrasa carbónica I 1266 441 -2.87 128 at catepsina K (picnodisostosis) 5690 7821 1.37 129 g at catepsina K (picnodisostosis) 5036 6757 1.34 38466 at catepsina K (picnodisostosis) 5494 7267 1.32 36611 at fosfatasa acida 1, soluble 254 331 1.3 PU.1 está involucrada en las etapas iniciales de la osteoclastogénesis. Tondravi . M . y colaboradores, Nature 386(6620): 81-4 (1997). CSF- es imperativo para la maduración de los macrófagos; se enlaza con su receptor c-5 fms sobre los precursores de osteoclastos tempranos, proporcionando las señales requeridas para su sobrevivencia y proliferación. Teitelbaum SL, Science 289(5484): 1504-1508 (2000). Es interesante que PTS893 también regula los 0 genes implicados en la diferenciación y sobrevivencia de los osteoclastos, SPI 1 , CSF-1 , y MMD. Esta regulación de los osteoclastos no se ha descrito anteriormente. Se demostró que la calcitonina de salmón regula la expresión del gen que codifica para el factor estimulante de 5 osteoclastos (OSF), que es una proteína intracelular producida por los osteoclastos, que induce indirectamente la formación de los osteoclastos y la resorción ósea. Reddy S. y colaboradores, J. Cell Physiol. 177(4) :636-45 (1998). Esto implicaría un efecto autocrino de la calcitonina de salmón en o la regulación de la función de los osteoclastos, que se describe en la presente por primera vez. En adición, la calcitonina de salmón parece ejercer una regulación paracrina de la actividad de resorción de los osteoclastos, a través de la regulación de la expresión de c cistatina en el osteoblasto. La anhidrasa carbónica I, II, las ATPasas H + , y la catepsina K, son los efectos principales para disolver la degradación mineral ósea y de la matriz. Blair H. C. y colaboradores, Biochem. (2002). La regulación de las tubulinas y de los genes PAK4 puede estar relacionada con el efecto de la calcitonina sobre la movilidad del osteoclasto PAK 4. Zaidi M. y colaboradores, Bone 30(5): 655-63 (2002); Jaffer Z. M . & Chernoff J. Intl. J. Biochem. Cell Biol. 34(7):713-7 (2002). Estos resultados muestran los efectos moduladores de la calcitonina sobre los genes que afectan a la regulación directa, autocrina, paracrina, y endocrina de la función del osteoblasto (Tabla 18). Estos datos apoyan la hipótesis que atribuye un efecto anabólico óseo a la calcitonina. TABLA 18 Efectos Sobre los Osteoblastos Función Gen Codificante Calcitonina PTS893 de Salmón Antagonistas de Cistatinas B catepsinas; actividad contra la resorción Regulación Glicoproteína alfa-2-HS ?,?,? autocrina/paracrina de la función del osteoblasto Perfilación de expresión genética de múltiples órganos en animales tratados con caícitonina de salmón. Se ex iben los órganos en donde se vieron cambios en la expresión. B = hueso; K = riñon; M = músculo; P = pituitaria; L = hígado; T = tráquea. Los resultados de este ejemplo muestran los efectos moduladores de la calcitonina sobre los genes que afectan a la regulación directa, autocrina, paracrina, y endocrina de la función dei osteoblasto. Estos datos apoyan la hipótesis que atri uye un efecto anabólico óseo a la calcitonina. Se considera que tres familias de factores de crecimiento, los factores de crecimiento transformante betas (TGF- s), los factores de crecimiento tipo insulina (IGFs), y las proteínas morfogenéticas óseas (BMPs), son los reguladores locales principales de la osteogénesis. Se piensa que las proteínas morfogenéticas óseas tienen sus efectos principales sobre la réplica de células óseas precursoras tempranas y el compromiso de los osteoblastos. En contraste, se piensa que los TGB-ps son los inductores más potentes de la réplica de células óseas comprometidas y de la producción de la matriz de los osteoblastos, mientras que los IGFs parecen integrar y extender el efecto de ambos factores. McCarthy T. L. y colaboradores, Crit. Rev. Oral Biol. Med. 11(4):409-22 (2000). Estos resultados apoyan el hecho de que tanto la calcitonina de salmón como el PTS893 son capaces de regular estos factores locales y sistémicos implicados en el metabolismo óseo. El hecho de que la cale i tonina de salmón regule la glicoproteína a2-HS (AHSG), que bloquea la señalización dependiente de TGF-ß en las células oste o I á sti cas , también apoya este papel. Los ratones que carecían de defectos de la placa de crecimiento de exhibición de AHSG, aumentaron la formación ósea con la edad, y mejoraron la osteogénesis dependiente de citoquina. Szweras M . y colaboradores, J. Biol. Chem., 27 (22) : 19991 - 19997 (2002). También se demostró que la calcitonina de salmón y el PTS893 modulan la expresión de los genes que codifican para el factor de crecimiento endotelial vascular (VEGF). Se sabe que el VEGF tiene un papel clave en la angiogénesis normal y patológica. Está bien documentado el papel crítico de la angiogénesis para la osteogénesis de éxito durante la osificación endocondral. El factor de crecimiento endotelial vascular induce indirectamente la proliferación y diferenciación de los osteoblastos mediante el estímulo de las células endoteliales para producir factores de crecimiento osteoanabólicos. Wang D. S. y colaboradores, Endocrinology 138(7): 2953-62 (1997). En adición, el factor de crecimiento endotelial vascular estimula la migración q u i m i ota cti ca de los osteoblastos humanos primarios, sugiriendo un papel funcional en la formación y remodelación ósea. ayr-Wohlfahrt U. y colaboradores, Bone 30(3=:472-7 (2002).

Se han descrito ampliamente los efectos de la hormona paratiroides sobre los osteoblastos para mediar tanto ia resorción como la formación ósea. Swarthout J. T. y colaboradores, Gene 282 ( 1 -2) : 1 - 17 (2002). Aquí fue posible confirmar el efecto del PTS893 sobre las citoquinas tipo interleucina 6 ( I L- 6 ) , que media la activación paracrina de la diferenciación y actividad de los osteoclastos. Greenfield E. M. y colaboradores, Life Sci. 65:1087-102 (1999). El PTS893 también produjo un fuerte aumento sobre los receptores nucleares (familia de esteroides/tiroides) . TABLA 19 Perfilación de Expresión Genética: Factores de Crecimiento y Hormonas Identificador de conjunto de sondas Veces de Controles sCT de expresión Gen Codificante Promedio Promedio Cambio GeneChip® 39407 at proteína morfogenética ósea 1 448 607 1.36 1122_at gonadotropina coriónica, 263 380 1.44 polipéptido beta 39945_at proteína de activación de 636 436 -1.46 fibroblastos, alfa 1970_s_at receptor de factor de 184 108 -1.69 crecimiento de fibroblastos 2 (quinasa expresada en bacterias, receptor de factor de crecimiento de queratinocitos, disostosis craneofacial 1 , síndrome de Crouzon, síndrome de Pfeiffer, síndrome de Jackson-Weiss) 32254_at 3 tipo folistatina (glicoproteína 1514 2209 1.46 secretada) 38737_at factor de crecimiento tipo 66 37 -1.79 insulina 1 (somatomedina C) 36782_s_at factor de crecimiento tipo 212 323 1.52 insulina 2 (somatomedina A) 1591_s_at factor de crecimiento tipo 293 402 1.37 insulina 2 (somatomedina A) 40422_at proteína de enlace de factor de 181 105 -1.73 crecimiento tipo insulina 2, 36kDa 37319_at proteína de enlace de factor de 495 1561 3.15 crecimiento tipo insulina 3 1586_at proteína de enlace de factor de 428 722 1.69 crecimiento tipo insulina 3 37319 at proteína de enlace de factor de 604 879 1.46 crecimiento tipo insulina 3 1586_at proteína de enlace de factor de 355 445 1.25 crecimiento tipo insulina 3 1451_s_at factor específico de 538 292 -1.84 osteoblastos 2 (tipo fasciclina I), periostina 532_at receptor de hormona 1337 1849 1.38 paratiroides 1 234_s_at pleiotrofina (factor específico 710 507 -1.4 de osteoblastos 1) 34820_at pleiotrofina (factor de 422 329 -1.28 crecimiento de enlace de heparina 8, factor promotor de crecimiento de neuritas 1) 1897_at transcripción 1 inducida por 176 296 1.68 factor de crecimiento transformante beta 1 1385_at factor de crecimiento 187 292 1.57 transformante, beta-inducido, 68kDa 39588_at superfamilia de factor de 176 127 -1.39 necrosis tumoral (ligando), miembro 12 31410_at superfamilia de factor de 197 128 -1.54 necrosis tumoral (ligando), miembro 4 38631_at superfamilia de receptor de 134 240 1.79 factor de necrosis tumoral, miembro 13B 35150_at superfamilia de receptor de 443 298 -1.48 factor de necrosis tumoral, miembro 5 595_at factor de necrosis tumoral, 118 191 1.62 proteína 3 alfa-inducida 1953_at factor de crecimiento endotelial 351 557 1.59 vascular 36100_at factor de crecimiento endotelial 282 407 1.45 vascular 1953_at factor de crecimiento endotelial 521 629 1.21 vascular 37268_at factor de crecimiento endotelial 379 504 1.33 vascular B 39091_at respuesta a vitamina A; 421 299 -1.41 relacionada con citoesqueleto Tanto los receptores de caicitonina como de hormona paratiroides pertenecen a la superfamilia de receptores de proteína-G. Después del estímulo del receptor, la transducción de señal es mediada por las sendas de ciclasa de adenilato/cAMP/quinasa de proteína, fosfolipasa fosfolipasa D, y MAPK (como un efector tardío) en el caso de la calcitonina, y por la ciclasa de adenllato y la fosfolipasa C en el caso de la hormona paratiroides. El análisis de perfilación genética permitió hacer la reconstrucción de estas sendas, mostrando genes que eran modulados por el tratamiento y que se localizan en diferentes niveles de la senda de transduccion de señales.

TABLA 20 Efectos Sobre la Transduccion de Señales y el Ciclo C e I u lar Función Gen Codificante Calcitonina PTS893 de Salmón Transduccion de Ciclasa de adenilato B señal Proteína de enlace de calciclina B Calreticulina B, K, M CREM B, L, P B Quinasa CDC B, M MAPK ALL B Quinasas de proteína ALL Senda de fosfatidil-inositol ALL B Fosfodiesterasa (IB, 4A, 4B) ALL B Fosfolipasa (C, D) ALL B PCNA B Perfilación de expresión genética de múltiples órganos en animales tratados con calcitonina de salmón. Se exhiben los órganos en donde se vieron cambios en la expresión. B = hueso; K = riñon; M = músculo; P = pituitaria; L = hígado; T = tráquea.

La calcitonina de salmón también parece ejercer una influencia directa sobre el ciclo celular, debido a que también se pudieron observar cambios en las ciclinas y en las proteínas relacionadas con ciclina, como se muestra en la Tabla 21.

TABLA 21 Perfilación de la Expresión Genética: Transducción de Señales La proteína morfogenética ósea (BMP) controla la proliferación y diferenciación de los osteoblastos a través de las proteínas Smad. Tob, un miembro de la familia emergente de proteínas antiproliferativas, es un regulador negativo de la señalización de BMP/Smad en los osteoblastos. También se identificaron las sendas de Smad, así como Tob como uno de sus reguladores, como los genes modulados por el tratamiento con sCT y PTS893, de acuerdo con el efecto hipotetizado de ambos compuestos sobre la regulación de la proteína morfogenética ósea sobre la remodelación ósea. Dentro de este contexto, ambos compuestos parecen ejercer una influencia directa sobre el ciclo celular, debido a que también se pudieron observar cambios en las ciclinas y en las proteínas relacionadas con ciclina. Ambos compuestos regulan también la síntesis y degradación de los componentes de matriz extracelular (Tabla 22), TABLA 22 Efectos Sobre la Matriz Extracelular Función Gen Codificante Calcitonina PTS893 de Salmón Unión celular Integrinas B, M, P B Transducción de Colagenasa B señal. Digestión de colágeno Metaloproteinasas de matriz 1, II B, L, P, T Síntesis de Endopeptidasa/proteinasa de B colágeno procolágeno Hidroxilasa de lisilo B Perfilación de expresión genética de múltiples órganos en animales tratados con calcitonina de salmón. Se exhiben los órganos en donde se vieron cambios en la expresión. B = hueso; K = riñon; = músculo; P = pituitaria; L = hígado; T = tráquea.

La calcitonina de salmón regula también la síntesis y degradación de los componentes de matriz extracelular, como se muestra en la Tabla 23.

TABLA 23 Perfilación de Expresión Genética: Matriz Extracelular Identificador de conjunto de sondas de Controles sCT Veces de expresión Gen Codificante Promedio Promedio cambio GeneChip® 36253_at proteína de gamma- 26305 33265 1.26 carboxiglutamato óseo (gla) (osteocalcina) 32094_at sulfotransferasa de 253 130 -1.95 carbohidrato (condroitina 6) 3 32094_at sulfotransferasa de 292 241 -1.21 carbohidrato (condroitina 6) 3 41447_at sintasa de carbohidrato 192 107 -1.79 (condroitina) 1 34042 at condroadherina 7965 10266 1.29 32306_g at colágeno, tipo I, alfa 2 7740 9337 1.21 32488_at colágeno, tipo III, alfa 1 2399 1294 -1.85 (síndrome de Ehlers-Danlos tipo IV, dominante autosomal) 34802 at colágeno, tipo VI, alfa 2 2374 1500 -1.58 ósea 1, activación de linfocitos-T temprana 1) 38308 at neurocondrina 679 490 -1.39 Es de particular interés la regulación de la proteína de enlace de cuadro-Y (YB-1), que parece ser modulada por ambos tratamientos, y en 4 de 6 órganos analizados en el grupo de calcitonina de salmón. YB-1 es una proteína que interactúa con el elemento de respuesta a TGF-ß en la región dista! del gen de colágeno alfa 1(1). La proteína YB-1 activa al promotor de colágeno, y se translocaliza en el núcleo durante la adición de TGF-ß a los fibroblastos, sugiriendo un papel para esta proteína en la señalización del TGF-ß. Sun W. y colaboradores, Matrix Biol. 20(8);527-41 (2001 ).

En adición, la calcitonina de salmón y el PTS893 regularon algunos aspectos de la mineralización de la matriz extracelular ósea, debido a que se observaron cambios en la amelogenina, dentina, y en las p I rof osf atasas de ectonucleótido.

TABLA 20 Efectos Sobre ¡a ineralización y Visualización Perfilación de expresión genética de múltiples órganos en animales tratados con calcitonina de salmón. Se exhiben los órganos en donde se vieron los cambios en la expresión. B = hueso; K = riñon; = músculo; P = pituitaria; L = hígado, T = tráquea. Todas las referencias citadas en la presente se incorporan a la presente por referencia en su totalidad y para todos los propósitos hasta el mismo grado como si cada publicación o patente o solicitud de patente individual fuera indicada de una manera específica o individual como incorporada por referencia en su totalidad para todos los propósitos. En adición, todos los números de acceso GenBank, números Unigene Cluster, y números de acceso de proteínas citados en la presente, se incorporan a la presente como referencia en su totalidad y para todos los propósitos hasta el mismo grado como si cada uno de estos números fuera indicado de una manera específica e individual como incorporado por referencia en su totalidad para todos los propósitos. La presente invención no debe limitarse en términos de las modalidades particulares descritas en esta solicitud, las cuales se pretenden como simples ilustraciones de los aspectos individuales de la invención. Se pueden hacer muchas modificaciones y variaciones sin apartarse de su espíritu y alcance, como será aparente para los expertos en la materia. A partir de la descripción anterior y de los dibujos acompañantes, serán aparentes para los expertos en este campo los métodos y aparatos funcionalmente equivalentes dentro del alcance de la invención, en adición a los enumerados en la presente. Se pretende que estas modificaciones y variaciones caigan dentro del alcance de las reivindicaciones adjuntas, la presente invención se debe limitar solamente por los términos de las reivindicaciones adjuntas, junto con el alcance completo de los equivalentes a los que tienen derecho estas reivindicaciones.

Claims

REIVINDICACIONES

1. El uso de calcitonina en la fabricación de un medicamento para el tratamiento de una condición para la que se indique el tratamiento con un agente anabólico.

2. El uso de la reivindicación 1 , en donde la condición es ateroesclerosis.

3. El uso de la reivindicación 1 ó 2, en donde la calcitonina es calcitonina de salmón,

4. Ei uso de calcitonina en la fabricación de un medicamento para ei tratamiento de trastornos del metabolismo de calcio en una población de pacientes seleccionada, en donde la población de pacientes se selecciona con base en el perfil de expresión genética que indique la eficacia de calcitonina por parte del paciente al que se administre la calcitonina.

5. El uso de la reivindicación 4, en donde la calcitonina es calcitonina de salmón.

6. El uso de la reivindicación 4 ó 5, en donde la calcitonina se administra en una dosis terapéutica antes de determinar el perfil de expresión genética por parte del paciente.

7. El uso de la reivindicación 4 ó 5, en donde la calcitonina se administra en una dosis s u b-terapéutica antes de determinar el perfil de expresión genética por parte del paciente.

8. El uso de hormona paratiroides o de un análogo de hormona paratiroides en la fabricación de un medicamento para el tratamiento de trastornos del metabolismo de calcio en una población de pacientes seleccionada, en donde la población de pacientes se selecciona con base en el perfil de expresión genética que indique la eficacia del tratamiento con hormona paratiroides o con el análogo de hormona paratiroides por parte del paciente al que se administre la hormona paratiroides o el análogo de hormona paratiroides.

9. El uso de la reivindicación 8, en donde el análogo de hormona paratiroides es PTS893.

10. El uso de la reivindicación 8 ó 9, en donde la hormona paratiroides o el análogo de hormona paratiroides se administra en una dosis terapéutica antes de determinar el perfil de expresión genética por parte del paciente.

11. El uso de la reivindicación 8 ó 9, en donde la hormona paratiroides o el análogo de hormona paratiroides se administra en una dosis sub-terapéutica antes de determinar el perfil de expresión genética por parte del paciente.

12. Un método para el tratamiento de una condición en un sujeto, en donde la condición es una para la cual se indica la administración de una calcitonina, una hormona paratiroides, un análogo de hormona paratiroides, o una combinación de los mismos, el cual comprende los pasos de: (a) administrar un compuesto al sujeto; (b) obtener el perfil de expresión genética del sujeto, en donde el perfil de expresión genética comprende el patrón de expresión genética de uno o más genes, en donde los patrones de expresión del uno o más genes son una consecuencia de la administración del compuesto; y (c) comparar el perfil de expresión genética del sujeto al que se administró el compuesto, con el perfil de expresión genética de un biomarcador, que indica la eficacia del tratamiento por una calcitonina, una hormona paratiroides, un análogo de hormona paratiroides, o una combinación de los mismos, en donde una similitud en el perfil de expresión genética del sujeto al que se administró el compuesto, con el perfil de expresión genética del biomarcador, indica la eficacia del tratamiento con el com uesto.

13. El método de la reivindicación 12, en donde la condición es una para la cual se indica la calcitonina de salmón .

14. El método de la reivindicación 12, en donde la condición es una para la cual se indica el PTS893.

15. El método de cualquiera de las reivindicaciones 12 a 14, en donde el compuesto administrado es una calcitonina, una hormona paratiroides, un análogo de hormona paratiroides, o una combinación de los mismos.

16. El método de la reivindicación 15, en donde la 5 calcitonina es calcitonina de salmón.

17. El método de la reivindicación 15, en donde el análogo de hormona paratiroides es PTS893.

18. El método de cualquiera de las reivindicaciones 12 a 17, en donde el sujeto es un mamífero. 10

19. El método de la reivindicación 18, en donde el mamífero es un primate.

20. El método de la reivindicación 19, en donde el primate es un mono cinomoigo o un ser humano.

21. El método de cualquiera de las 15 reivindicaciones 12 a 20, en donde el perfil de expresión genética del biomarcador es el perfil de expresión genética de la línea base del sujeto antes de la administración del compuesto.

22. El método de cualquiera de las 20 reivindicaciones 12 a 20, en donde el perfil de expresión genética del biomarcador es el perfil de expresión genética o el promedio de perfiles de expresión genética de un vertebrado al que se haya administrado una calcitonina, una hormona paratiroides, un análogo de hormona paratiroides, o „, una combinación de los mismos.

23. El método de cualquiera de las reivindicaciones 12 a 22, en donde el perfil de expresión genética comprende uno o más genes seleccionados a partir del grupo que consiste en isoforma a de fosfatasa ácida 1; 1 tipo receptor de activina A, tipo II; precursor de receptor de activina A tipo IIB; cadena beta-C de activina; glicoproteína alfa 2 HS; amelogenina; anexina V; precursor de arilsulfatasa E; ATPasa H( + ) vacuolar; ATPasa H( + ), subunidad vacuolar; ATPasa, transporte de H + , lisosomal; ATPasa, transportación de H + , lisosomal; ATPasa, transportación de H + , lisosomal; biglicano; proteína m o rf o g e n é t i ca ósea 1; proteína m o rf o g e n é t i ca ósea 10; proteína m o rf o g e n ét i ca ósea 2A; proteína morfogenética ósea 5; precursor de proteína morfogenética ósea 6; proteína de enlace de calcio 1 (calbraína); quinasa de proteína dependiente de calcio/calmodulina (quinasa CaM) II gamma; calreticulina; modulador de elemento que responde a cAMP (CREM); anhidrasa carbónica I; anhidrasa carbónica II; precursor de proteína de matriz oligomérico de cartílago; catepsina K; catepsina W; quinasa 1 tipo CDC; quinasa 2 tipo CDC, isoforma hclk2/139; proteoglicano 2 de sulfato de condroitina (versican); proteoglicano 3 de sulfato de condroitina (neurocan); hormona de somatomamotropina coriónica 1; quimiotripsina C (caldecrina); colágeno tipo 1 y transcripción de fusión de PDGFB; colágeno tipo II alfa 1; colágeno tipo III alfa 1; colágeno tipo IV alfa 2; colágeno tipo IX alfa 1; colágeno tipo VI alfa 1 ; colágeno tipo VI alfa 2 (AA 570 998); colágeno tipo XI alfa 1 ; colágeno tipo XI alfa 2; colágeno tipo XI alfa 2; colágeno, tipo I, alfa 2; colágeno tipo IV, alfa 1; colágeno tipo IX, alfa 2; colágeno tipo V, alfa 2; colágeno tipo VI, alfa 1; precursor de colágeno tipo VI, alfa 1; colágeno tipo XVI, alfa 1; colágeno tipo XVI, alfa 1; colagenasa 3 (metaloproteinasa de matriz 13); factor de crecimiento de tejido conectivo; ciclina A2; ciclina B1; ciclina D2; ciclina E2; quinasa 5 dependiente de ciclina; quinasa 5 dependiente de ciclina, subunidad reguladora 1 (p35); quinasa 6 dependiente de ciclina; inhibidor de quinasa dependiente de ciclina 1A ( p 21 , Cip1); cistatina B (estefina B); quinasa inducible por citoquina; quinasa de proteína 1 asociada con muerte; quinasa de proteína 3 asociada con muerte; f osf o p rote í n a ácida de matriz de dentina 1 (DMP1); fosfatasa de especificidad doble 9; quinasa de proteína miotónica de distrofia; pirofosfatasa/fosfodiesterasa de ectonucleótido 1 ; pirofosfatasa/fosfodiesterasa de ectonucleótido 1; diferenciación endotelial, precursor de receptor acoplado con proteína-G 6, receptor de estrógeno; receptor de estrógeno; proteína relacionada con receptor de estrógeno; proteína de cuadro B que responde a estrógeno (EBBP); proteína de activación de fibroblastos; factor de crecimiento de fibroblastos 1 (ácido); factor de crecimiento de fibroblastos 18; factor de crecimiento de fibroblastos 4; receptor del factor de crecimiento de fibroblastos; folistatina tipo 1 ; folistatina tipo 1 ; receptor de glutamato, metabotrópico 1 ; componente de acetil-glucosaminil-transferasa GPM N, g i ; factor estimulante de colonias de macrófagos de granulocitos (CSF1); inducible por paro de crecimiento y daño del ADN, alfa; proteína 10 enlazada con receptor de factor de crecimiento; proteoglicano de sulfato de heparano 2 (periecan); receptor de 1 ,4, 5-trif osfato de inositol, tipo 1 ; receptor de 1 ,4, 5-trifosf ato de inositol, tipo 1 ; receptor de 1 ,4, 5-trifosfato de inositol, tipo 2; isoenzima de quinasa 3 de 1 ,4, 5-trifosfato de inositol; fosfatasa de poiifosfato de inositol 4 tipo I beta; fosfatasa de poiifosfato de inositol 5; monofosfatasa 1 de inositol (mió) 1 (ó 4), 1 ; monofosfatasa 2 de inositol (mió) 1 (ó 4); factor de crecimiento tipo insulina (IGF II); factor de crecimiento tipo insulina 2 (somatomedina A ) ; p r o t e í n a de enlace de factor de crecimiento tipo insulina; proteína de en lace 2 de factor de crecimiento tipo insulina; proteína de en I lace 3 de factor de crecimiento tipo insulina; proteína de en l lace 5 de factor de crecimiento tipo insulina; proteina de enlace 2 de factor de crecimiento tipo insulina; precursor de factor de crecimiento tipo insulina I I; precursor de factor de crecimiento tipo insulina II; subunidad aifa-10 de integrina; quinasa asociada con receptor de interleucina 1 ; quinasa Janus 3; proteína LIM (similar al enigma de enlace de la quinasa C de proteína de rata); proteína tipo oxidasa de lisilo; MAD, homólogo 3 de madres contra decapentaplégico; AGUKs (homólogos de quinasa de guanilato asociados con membrana; quinasa de quinasa de quinasa M A P ( TK1); MAPK13; quinasa 13 de proteína activada por mitógeno; MAPK8IP1 : proteína 1 de interacción con quinasa de proteína 8 activada por mitógeno; quinasa MEK; metaloproteinasa; quinasa 1 de proteína activada por mitógeno; quinasa 8 de proteína activada por mitógeno; quinasa 1 de quinasa de proteína activada por mitógeno; quinasa 4 de quinasa de quinasa de quinasa de proteína activada por mitógeno; quinasa 2 de proteína activada por quinasa de proteína activada por mitógeno; quinasa 3 de proteína activada por quinasa de proteína activada por mitógeno; MDD: asociada con diferenciación de monocito a macrófago; neurocondrina; factor nuclear de células-T acti adas, citoplásmico, dependiente de caicineurina 1 ; proteína OS 4 (OS 4); factor 2 específico de osteoblastos OSF 2 (periostina) ; factor estimulante de osteoclastos (OSF); PAK4; proteína asociada con PDFG; quinasa de f o sf ati d i I i n osito I 4, catalítica, polipéptldo beta; fosfatidilinositol-glicano, clase L; fosfatasa de polifosfato de fosfatidilinositol 5, isoforma B; quinasa 5 de fosfato de fosfatidilinositol 4, isoforma C (1 ); quinasa 5 de fosfato de fosfatidilinositol 4, tipo I, beta; quinasa 5 de fosfato de fosfatidilinositol 4, tipo I I, beta; fosfatidilinositol-glicano, clase C (PIG C); f osfodiesterasa 4A, específica de cA P; fosfodiesterasa 4D, específica de cAMP (f osf od iesterasa E3 homologa de dunce (Drosophila)); fosfodiesterasa IB, dependiente de calmodulina; quinasa de fosfoinositida 3 quinasa de fosfoinositida 3, catalítica, polipéptido gamma quinasa de fosfoinositida 3, clase 3; fosfolipasa C b3 fosfolipasa C, beta 4; fosfolipasa D; proteína de transferencia de fosfatidilinositol; quinasa D2 de proteína PKD2; p r e- p ro-col á g e n o tipo I , alfa 2; p re- ro- co I á g e n o tipo I, alfa 1 ; pro-colágeno alfa 1 , tipo II; dioxigenasa de lisina de procolágeno 5; procolágeno-prolina, 2-oxog lutarato-4-dioxigenasa (hidroxilasa de prolina 4), polipéptido alfa I; proíeína endometrial asociada con progestágeno (proteína placentaria 14, globulina alfa 2 endometrial asociada con embarazo, proteína uterina alfa); prolidasa (imidodipeptidasa) PEPD; antígeno nuclear de células proliferantes; hidroxilasa de proiilo 4 beta; proteasa, serina, 11 (enlace de IGF); subunidad de proteasoma (prosoma, macropaína), tipo beta, 10; inhibidor de proteína de STAT X activado; quinasa de proteína 1 PCTAIRE; sustrato 80 H de quinasa C de proteína; quinasa C de proteína, alfa; quinasa de proteína, dependiente de cAMP, catalítica, gamma; quinasa de proteína, dependiente de cAMP, reguladora, tipo I, beta; quinasa de proteína, dependiente de cAMP, reguladora, tipo II, alfa; receptor purinérgico P2Y, acoplado con proteína G, 11 ; sustrato 2 de toxina de botulinio C3 relacionado con RAC2 Ras" (familia rho, proteína de enlace de GTP pequeña Rac2); quinasa de tirosina receptora DDR; receptor retinoide X, gamma; quinasa de proteína ribosomal S6; quinasa de proteína ribosomal S6, 9kD, polipéptido 3; SCA P1: proteína de membrana portadora secretora 1 (transporte vesicular); f osfoproteína secretada 1 ( o s teo p o nt i n a , sialoproteína ósea I, activación de linfocitos-T temprana 1); inhibidor de proteinasa de serina (o cisteína), racimo H (proteína de choque por calor 47), miembro 2; quinasa de serina/treonina 38; quinasa de proteína serina/treonina; SF 1; factor esteroidogénico 1; transductor de señal y activador de transcripción 1; transductor de señal y activador de transcripción 2, 113kD; transductor de señal y activador de transcripción 5A; transductor de señal y activador de transcripción 5A; transductor de señal y activador de transcri ción 6 (STAT6); Smad 3; ancla Smad para activación del receptor, isoforma 1; Smad5; S AD6 (inhibe B P/Smad1 (MADH1)); quinasa relacionada con SNF1; factor de transcripción SpiB (relacionado con SPM/PU.1); Stat5b (stat5b); quinasa de serina/treonina relacionada con Ste20; TEIG; respuesta de crecimiento temprano inducible por TGFB; respuesta de crecimiento temprano inducible por TGFB; TIEG; factor anti-apoptótico 1 inducido por TGFB1; proteína de apoptosis 12 inducida por TGF beta; precursor de TGF beta; proteína de superfamilia TGF beta; Tob; quinasa 1 tipo desmelenada; receptor de factor de crecimiento transformante, beta III (betaglicano, 300kD); factor de crecimiento transformante beta 3 (TGF beta 3); TRIO: dominio funcional triple (interacción con PTPRF); tubulina alfa 1; tubulina alfa 3; tubulina alfa, isotipo H2 alfa; tubulina beta 2; tubulina beta 3; tubulina beta 4; tubulina beta, cofactor D; precursor de cadena alfa-2 de colágeno ti o I; proteína portadora de ubiquitina E2 C; factor de crecimiento endotelial vascular; factor de crecimiento endotelial vascular; factor de crecimiento endotelial vascular B; y proteína 1 de enlace de cuadro-Y.

24. El método de la reivindicación 23, en donde el perfil de expresión genética comprende un aumento en uno o más genes seleccionados a partir del grupo que consiste en proteína morfogenética ósea 5; proteína de matriz oligomérica de cartílago; catepsina K; colágeno tipo I pre-pro-alfa-2; y proteína de enlace de cuadro-Y (hueso y riñon).

25. El método de la rei indicación 23, en donde el perfil de expresión genética en hueso comprende una reducción en uno o más genes seleccionados a partir del grupo que consiste en anhidrasa carbónica II; Spi-B; y proteína de enlace de cuadro-Y (músculo).

26. El método de la reivindicación 23, en donde el perfil de expresión genética en hueso comprende uno o más genes seleccionados a partir del grupo que consiste en PU.1 (SPI1; Spi-B); factor estimulante de colonias de granulocitos a macrófagos (CSF1), y asociado de diferenciación de monocitos a macrófagos (M D).

27. El método de la reivindicación 23, en donde el perfil de expresión genética en hueso comprende un cambio en la expresión del factor estimulante de osteoclastos (OSF).

28. El método de la reivindicación 23, en donde el perfil de expresión genética en hueso comprende un cambio en la expresión del factor de crecimiento endotelial vascular (VEGF).

29. El método de la reivindicación 23, en donde el perfil de expresión genética en hueso comprende un cambio en la expresión de un gen seleccionado a partir del grupo que consiste en integrinas; colagenasa; metaloproteinasas de matriz I y II; endopeptidasa/proteinasa de procolágeno; hidroxilasa de lisilo; agrecano; precursor de proteína de matriz oligomérica de cartílago; colágenos tipo I, tipo II, tipo III, tipo IV, tipo V, tipo VI, tipo IX, tipo X, tipo XI, tipo XIII, tipo XIV, tipo XV, y tipo XVI); proteoglicano de sulfato de condroitina; dermatopontina; proteoglicano de sulfato de heparano; y sindecano.

30. El método de la reivindicación 23, en donde el perfil de expresión genética en hueso comprende un cambio en la expresión de un gen seleccionado a partir del grupo que consiste en amelogenina; dentina; pirofosfatasas de ectonucleótido; y factor de crecimiento endotelial vascular.

31. Un método para seleccionar sujetos para incluirse en un estudio clínico para la determinación de la eficacia de un compuesto, con el fin de determinar la eficacia del tratamiento de una condición, en donde la condición es una para la cual se indica la administración de una calcitonina, una hormona paratiroides, un análogo de hormona paratiroides, o una combinación de los mismos, el cual comprende los pasos de: (a) administrar un compuesto al sujeto; (b) obtener el perfil de expresión genética del sujeto, en donde el perfil de expresión genética comprende el patrón de expresión genética de uno o más genes, en donde los patrones de expresión del uno o más genes son una consecuencia de la administración del compuesto; (c) comparar el perfil de expresión genética del sujeto al que se administró el compuesto, con el perfil de expresión genética de un biomarcador; y (d) entonces: (i) incluir al sujeto en el estudio clínico cuando el perfil de expresión genética del sujeto al que se administró el compuesto sea similar al perfil de expresión genética del biomarcador que indique la eficacia del tratamiento por parte de una calcitonina, una hormona paratiroides, un análogo de hormona paratiroides, o una combinación de los mismos; o (ii) excluir al sujeto del estudio clínico cuando el perfil de expresión genética del sujeto al que se administró el compuesto sea distinto del perfil de expresión genética del biomarcador que indique la eficacia del tratamiento por parte de una calcitonina, una hormona paratiroides, un análogo de hormona paratiroides, o una combinación de los mismos.

32. El método de la reivindicación 31, en donde el compuesto se administra al sujeto en una dosis sub-terapéutica.

33. Un método para determinar si un compuesto tiene una eficacia terapéutica similar a aquélla de la calcitonina, el cual comprende los pasos de: (a) administrar un compuesto al sujeto; (b) obtener el perfil de expresión genética del sujeto, en donde el perfil de expresión genética comprende el patrón de expresión genética de uno o más genes, en donde los patrones de expresión dei uno o más genes son una consecuencia de la administración del compuesto; (c) comparar el perfil de expresión genética del sujeto al que se administró el compuesto, con el perfil de expresión genética de un biomarcador, que indique la eficacia del tratamiento por parte de la calcitonina; y (d) entonces: (i) determinar que el compuesto tenga una eficacia terapéutica similar a aquélla de la calcitonina cuando el perfil de expresión genética del sujeto al que se administró el compuesto sea similar al perfil de expresión genética del biomarcador de un sujeto al que se administró la calcitonina; o (ii) determinar que el compuesto tenga una eficacia terapéutica diferente de aquélla de la calcitonina cuando el perfil de expresión genética del sujeto al que se administró el compuesto sea diferente del perfil de expresión genética del biomarcador de un sujeto al que se administró la calcitonina.

34. El método de la reivindicación 33, en donde la calcitonina es calcitonina de salmón.

35. El método de la rei i dicación 33 ó 34, en donde el sujeto es un mamífero.

36. El método de la reivindicación 35, en donde el mamífero es un primate.

37. El método de la reivindicación 36, en donde el primate es un mono cinomolgo o un ser humano.

38. El método de cualquiera de las reivindicaciones 33 a 37, en donde el compuesto se administra al sujeto en una dosis sub-terapéuti ca.

39. Un método para determinar si un compuesto tiene una eficacia terapéutica similar a aquélla de un análogo de hormona paratiroides, el cual comprende los pasos de: (a) administrar un compuesto al sujeto; (b) obtener el perfil de expresión genética del sujeto, en donde el perfil de expresión genética comprende el patrón de expresión genética de uno o más genes, en donde los patrones de expresión del uno o más genes son una consecuencia de la administración del compuesto; (c) comparar el perfil de expresión genética del sujeto al que se administró el compuesto, con el perfil de expresión genética de un biomarcador, que indique la eficacia del tratamiento por parte de un análogo de hormona paratiroides; y (d) entonces: (i) determinar que el compuesto tenga una eficacia terapéutica similar a aquélla de un análogo de hormona paratiroides cuando el perfil de expresión genética del sujeto al que se administró el compuesto sea similar al perfil de expresión genética del biomarcador de un sujeto al que se administró un análogo de hormona paratiroides; o (ii) determinar que el compuesto tenga una eficacia terapéutica diferente de aquélla de un análogo de hormona paratiroides cuando el perfil de expresión genética del sujeto al que se administró el compuesto sea diferente del perfil de expresión genética del biomarcador de un sujeto al que se administró un análogo de hormona paratiroides.

40. El método de la reivindicación 39, en donde el análogo de hormona paratiroides es PTS893.

41. El método de la reivindicación 39 ó 40, en donde el sujeto es un mamífero.

42. El método de la reivindicación 41, en donde el mamífero es un primate.

43. El método de la reivindicación 42, en donde el primate es un mono cinomolgo o un ser humano.

44. El método de la reivindicación 39, en donde el compuesto se administra al sujeto en una dosis sub-terapéutica.

45. Un estuche de partes para utilizarse en la determinación de la eficacia del tratamiento de una condición para la que se indique la administración de una cale i tonina, una hormona paratiroides, o un análogo de hormona paratiroides, el cual comprende: (a) un reactivo para detectar un biomarcador de ia eficacia del tratamiento de una condición para la cual se indique la administración de una calcitonina, una hormona paratiroides, o un análogo de hormona paratiroides; (b) un recipiente para el reactivo; y (c) un producto escrito sobre o dentro del recipiente, que describa el uso del biomarcador en la determinación de la estrategia de tratamiento de la condición.

46. El estuche de partes de la reivindicación 45, en donde el reactivo es un chip genético.

47. El estuche de partes de la reivindicación 45, en donde el reactivo es una sonda de hibridación.

48. El estuche de partes de la reivindicación 45, en donde el reactivo es un reactivo de amplificación genética.

49. El estuche de cualquiera de las rei indicaciones 45 a 48, en donde el biomarcador comprende uno o más genes seleccionados a partir del grupo que consiste en isoforma a de fosfatasa ácida 1; 1 tipo receptor de activina A, tipo II; precursor de receptor de activina A tipo IIB; cadena beta-C de activina; glicoproteína alfa 2 HS; amelogenina; anexina V; precursor de ariisulfatasa E; ATPasa H( + ) vacuolar; ATPasa H( + ), subunidad vacuolar; ATPasa, transporte de H + , lisosomal; ATPasa, transportación de H + , lisosomal; ATPasa, transportación de H + , lisosomal; biglicano; proteína morfogenética ósea 1; proteína morfogenética ósea 10; proteína morfogenética ósea 2A; proteína morfogenética ósea 5; precursor de proteína morfogenética ósea 6; proteína de enlace de calcio 1 (calbraína); quinasa de proteína dependiente de calcio/calmodulina (quinasa CaM) II gamma; calreticulina; modulador de elemento que responde a cAMP (CREM); anhidrasa carbónica I; anhidrasa carbónica II; precursor de proteína de matriz oligomérico de cartílago; catepsina K; catepsina W; quinasa 1 tipo CDC; quinasa 2 tipo CDC, isoforma hclk2/139; p roteog I i ca n o 2 de sulfato de condroitina (versican); proteoglicano 3 de sulfato de condroitina (neurocan); hormona de somatomamotropina coriónica 1; q u i m i otri s i n a C (caldecrina); colágeno tipo 1 y transcripción de fusión de PDGFB; colágeno tipo II alfa 1; colágeno tipo MI alfa 1 ; colágeno tipo IV alfa 2; colágeno tipo IX alfa 1; colágeno tipo VI alfa 1; colágeno tipo VI alfa 2 (AA 570 998); colágeno tipo XI alfa 1 ; colágeno tipo XI alfa 2; colágeno tipo XI alfa 2; colágeno, tipo I, alfa 2; colágeno tipo IV, alfa 1; colágeno tipo IX, alfa 2; colágeno tipo V, alfa 2; colágeno tipo VI, alfa 1; precursor de colágeno tipo VI, alfa 1; colágeno tipo XVI, alfa 1; colágeno tipo XVI, alfa 1; colagenasa 3 (metaloproteinasa de matriz 13); factor de crecimiento de tejido conectivo; ciclina A2; ciclina B1; ciclina D2; ciclina E2; quinasa 5 dependiente de ciclina; quinasa 5 dependiente de ciclina, subunidad reguladora 1 (p35); quinasa 6 dependiente de ciclina; inhibidor de quinasa dependiente de ciclina 1A (p21, Cip1); cistatina B (estefina B); quinasa inducible por citoquina; quinasa de proteína 1 asociada con muerte; quinasa de proteína 3 asociada con muerte; fosfoproteína ácida de matriz de dentina 1 (DMP1); fosfatasa de especificidad doble 9; quinasa de proteína mioíónica de distrofia; pirofosfatasa/fosfodiesterasa de ectonucleótido 1 ; pirofosfatasa/fosfodiesterasa de ectonucleótido 1; diferenciación endotelial, precursor de receptor acoplado con proteína-G 6, receptor de estrógeno; receptor de estrógeno; proteína relacionada con receptor de estrógeno; proteína de cuadro B que responde a estrógeno (EBBP); proteína de activación de fibroblastos; factor de crecimiento de fibroblastos 1 (ácido); factor de crecimiento de fibroblastos 18; factor de crecimiento de fibroblastos 4; receptor del factor de crecimiento de fibroblastos; folistatina tipo 1 ; folistatina tipo 1 ; receptor de glutamato, metabotrópico 1; componente de acetii-glucosaminil-transferasa GPI1 N, gp¡1; factor estimulante de colonias de macrófagos de granulocitos (CSF1); inducible por paro de crecimiento y daño del ADN, alfa; proteína 10 enlazada con receptor de factor de crecimiento; proteoglicano de sulfato de heparano 2 (perlecan); receptor de 1 ,4,5-trifosfato de inositol, tipo 1; receptor de 1 , 4 , 5-t r i f o sf at o de inositol, tipo 1; receptor de 1 ,4,5-trifosfato de inositol, tipo 2; isoenzima de quinasa 3 de 1 , 4 , 5-trif osfato de inositol; fosfatasa de polifosfato de inositol 4 tipo I beta; fosfatasa de polifosfato de inositol 5; m o n of osf at a s a 1 de inositol (mío) 1 (ó 4), 1; monofosfatasa 2 de inositol (mió) 1 (ó 4); factor de crecimiento tipo insulina (IGF II); factor de crecimiento tipo insulina 2 (somatomedina A); proteína de enlace de factor de crecim iento tipo insulina; proteína de enlace 2 de factor de crecim iento tipo insulina; proteína de enlace 3 de factor de crecim iento tipo insulina; proteína de enlace 5 de factor de crecim iento tipo insulina; proteína de enlace 2 de factor de crecimiento tipo insulina; precursor de factor d e crecimiento tipo insulina II; precursor de factor de crecimiento tipo insulina II; subunidad alfa-10 de integrina; quinasa asociada con receptor de interleucina 1; quinasa Janus 3; proteína LIM (similar al enigma de enlace de la quinasa C de proteína de rata); proteína tipo oxidasa de lisilo; MAD, homólogo 3 de madres contra decapentaplégico; MAGUKs (homólogos de quinasa de guanilato asociados con membrana; quinasa de quinasa de quinasa MAP (MTK1); APK13; quinasa 13 de proteína activada por mitógeno; MAPK8IP1: proteína 1 de interacción con quinasa de proteína 8 activada por mitógeno; quinasa MEK; metaloproteinasa; quinasa 1 de proteína activada por mitógeno; quinasa 8 de proteína activada por mitógeno; quinasa 1 de quinasa de proteína activada por mitógeno; quinasa 4 de quinasa de quinasa de quinasa de proteína activada por mitógeno; quinasa 2 de proteína activada por quinasa de proteína activada por mitógeno; quinasa 3 de proteína activada por quinasa de proteína activada por mitógeno; MDD: asociada con diferenciación de monocito a macrófago; neurocondrina; factor nuclear de células-T activadas, citoplásmico, dependiente de calcineurina 1 ; proteína OS 4 (OS 4); factor 2 específico de osteoblastos OSF 2 (periostina) ; factor estimulante de osteoclastos (OSF); PAK4; proteína asociada con PDFG; quinasa de fosfatidilinositol 4, catalítica, polipéptido beta; fosfatidilinositol-glicano, clase L; fosfatasa de polifosfato de fosfatidilinositol 5, ¡soforma B; quinasa 5 de fosfato de fosfatidilinositol 4, isoforma C (1); quinasa 5 de fosfato de fosfatidilinositol 4, tipo i, beta; quinasa 5 de fosfato de fosfatidilinositol 4, tipo II, beta; fosfatidilinositol-glicano, clase C (PIG C); f o sf od i e st e rasa 4A, específica de cAMP; f osf od i esterasa 4D, específica de cAMP (f osf od iesterasa E3 homologa de dunce (Drosophila)); fosfodiesterasa IB, dependiente de calmodulina; quinasa de fosfoinositida 3; quinasa de fosfoinositida 3, catalítica, polipéptido gamma; quinasa de fosfoinositida 3, clase 3; fosfolipasa C b3; fosfolipasa C, beta 4; fosfolipasa D; proteína de transferencia de fosfatidilinositol; quinasa D2 de proteína PKD2; pre-pro-colágeno tipo I, alfa 2; pre-pro-colágeno tipo I, alfa 1 ; pro-colágeno alfa 1 , tipo II; dioxigenasa de lisina de procolágeno 5; procolágeno-prolina, 2-oxoglutarato-4-dioxigenasa (hidroxilasa de prolina 4), polipéptido alfa I; proteína endometrial asociada con progestágeno (proteína placentaria 14, globulina alfa 2 endometrial asociada con embarazo, proteína uterina alfa); prolidasa (im idodipeptidasa) PEPD; antígeno nuclear de células proliferantes; hidroxilasa de proliío 4 beta; proteasa, serina, 11 (enlace de IGF); subunidad de proteasoma (prosoma, macropaína), tipo beta, 10; inhibidor de proteína de STAT X activado; quinasa de proteína 1 PCTAIRE; sustrato 80K H de quinasa C de proteína; quinasa C de proteína, alfa; quinasa de proteína, dependiente de cAMP, catalítica, gamma; quinasa de proteína, dependiente de cAMP, reguladora, tipo I, beta; quinasa de proteína, dependiente de cAMP, reguladora, tipo II, alfa; receptor purinérgíco P2Y, acoplado con proteína G, 11; sustrato 2 de toxina de botulinio C3 relacionado con RAC2 Ras (familia rho, proteína de enlace de GTP pequeña Rac2); quinasa de tirosina receptora DDR; receptor retino i de X, gamma; quinasa de proteína ribosomal S6; quinasa de proteína ribosomal S6, 9kD, polipéptido 3; SCAMP1: proteína de membrana portadora secretora 1 (transporte vesicular); f osfoproteína secretada 1 (osteopontina, sialoproteína ósea I, activación de linfocitos-T temprana 1); inhibidor de proteinasa de serina (o cisteína), racimo H (proteína de choque por calor 47), miembro 2; quinasa de s eri n a/t reo n i n a 38; quinasa de proteína s er i n a/t r eo n i n a ; SF 1; factor es t e ro i d o g é n i c o 1; transductor de señal y activador de transcripción 1; transductor de señal y activador de transcripción 2, 113kD; transductor de señal y activador de transcripción 5A; transductor de señal y activador de transcripción 5A; transductor de señal y activador de transcripción 6 (STAT6); Smad 3; ancla Smad para activación del receptor, isoforma 1; Smad5; SMAD6 (inhibe BMP/Smad1 (MADH1)); quinasa relacionada con SNF1; factor de transcripción SpiB (relacionado con SPI1/PU.1); Stat5b (stat5b); quinasa de serina/treonina relacionada con Ste20; TEIG; respuesta de crecimiento temprano inducible por TGFB; respuesta de crecimiento temprano inducible por TGFB; TIEG; factor anti-apoptótico 1 inducido por TGFB1; proteína de apoptosis 12 inducida por TGF beta; precursor de TGF beta; proteína de superfamilia TGF beta; Tob; quinasa 1 tipo desmelenada; receptor de factor de crecimiento transformante, beta III (betaglicano, 300kD); factor de crecimiento transformante beta 3 (TGF beta 3); TRIO: dominio funcional triple (interacción con PTPRF); tubulina alfa 1; tubulina alfa 3; tubulina alfa, isotipo H2 alfa; tubulina beta 2; tubulina beta 3; tubulina beta 4; tubulina beta, cofactor D; precursor de cadena alfa-2 de colágeno tipo VI; proteína portadora de ubiquitina E2 C; factor de crecimiento endotelial vascular; factor de crecimiento endotelial vascular; factor de crecimiento endotelial vascular B; y proteína 1 de enlace de cuadro-Y. ESUMEN Un análisis de perfilación genética de múltiples órganos de los resultados de una administración a un sujeto de calcitonina de salmón o de un análogo de hormona paratiroides , proporciona biomarcadores de la eficacia del tratamiento con calcitonina y de la eficacia del tratamiento con hormona paratiroides o con un análogo de hormona paratiroides. Entre los biomarcadores están los perfiles de expresión de los genes para la proteína de enlace de cuadro-Y, BMPs, FGFs, IGFs, VEGF, g I i c o p r ote í n a a-2-IIS (AIISG), OSF, receptores nucleares (familia de esteroides/tiroides), y otros. Los resultados obtenidos apoyan el efecto anabólico de la calcitonina de salmón sobre el metabolismo óseo.