MXPA06004680A - Compuestos de nucleosido para el tratamiento de infecciones virales. - Google Patents

Abstract

Se exponen compuestos, composiciones y los metodos para el tratamiento de infecciones virales provocadas por un virus de la familia flaviviridae, tal como por ejemplo, el virus de la hepatitis C.

Description

COMPUESTOS DE UCLEOSIDO PARA EL TRATAMIENTO DE INFECCIONES VIRALES CAMPO DE LA INVENCIÓN La invención se relaciona con métodos para preparar compuestos particulares para el tratamiento de infecciones virales en mamíferos provocadas, al menos en parte, por un virus de la familia de los virus flaviviridae. Esta invención también se dirige los intermedios novedosos utilizados en estos métodos.

ANTECEDENTES DE LA INVENCIÓN La familia de virus Flaviviridae se compone de tres géneros: pestivirus, flavivirus y hepacivirus (virus de la hepatitis C) . De estos géneros, los flavivirus y hepacivirus representan patógenos importantes en el hombre y son prevalentes a nivel mundial . Existen 38 flavivirus asociados con enfermedades humanas, incluyendo los virus de la fiebre del dengue, el virus de la fiebre amarilla y el virus de la encefalitis japonesa. Los flavivirus provocan una variedad de afecciones febriles agudas y enfermedades encefalíticas y hemorrágicas . Los hepacivirus infectan aproximadamente del 2 al 3% de la población mundial y provocan infecciones persistentes que conducen a una enfermedad hepática crónica, cirrosis, carcinoma hepatocelular y deficiencia hepática. Los pestivirus humanos no se han caracterizado extensivamente como pestivirus en animales. Sin embargo, los estudios serológicos indican una considerable exposición a pestivirus en seres humanos. Las infecciones por pestivirus en el hombre se han implicado en diversas enfermedades entre las que se incluyen de manera enunciativa: lesión cerebral congénita, gastroenteritis infantil y diarrea crónica en pacientes positivos con el virus de la inmunodeficiencia humana (VIH).1-6 Actualmente, no existen fármacos farmacéuticos antivirales para evitar o tratar infecciones por pestivirus o flavivirus. Para los hepacivirus, es decir, las infecciones por el virus de la hepatitis C (HCV, por sus siglas en inglés) , el alfa interferón (IFN, por sus siglas en inglés) actualmente es el único fármaco aprobado en los Estados Unidos. El HCV es el principal agente causante de la hepatitis que no es A, ni B, después de transfusiones y esporádica. La infección por el HCV es insidioso en una alta proporción de portadores infectados crónicamente (e infecciosos) quienes podrían no experimentar síntomas clínicos durante muchos años. Actualmente, el único tratamiento aceptable para el HCV crónico es el interferón (IFN-alfa) y esto requiere al menos seis (6) meses del tratamiento y/o ribavirina que puede inhibir la replicación viral en células infectadas y también mejorar lá función hepática en algunas personas. El IFN-alfa pertenece a una familia de pequeñas proteínas que se presentan en la naturaleza con efectos biológicos característicos tales como por ejemplo, actividades antiviral, inmunorreguladoras y antitumorales que se producen y secretan por la mayoría de las células nucleadas en animales en respuesta a diversas enfermedades, en particular infecciones virales. IFN-alfa es un regulador importante del crecimiento y diferenciación que afectan la comunicación celular y el control inmunológico. El tratamiento del HCV con interferón, sin embargo, tiene una eficacia limitada a largo plazo con una proporción de respuesta de aproximadamente 25%. Además, el tratamiento del HCV con interferón se ha asociado frecuentemente con efectos secundarios adversos tales como por ejemplo, fatiga, fiebre, escalofríos, dolor de cabeza, mialgias, artralgias, alopecia leve, efectos psiquiátricos y trastornos asociados, fenómenos autoinmunes y trastornos asociados y disfunción de la tiroides. Ribavirina (1-ß-D-ribofuranosil-lH-1, 2,-4-triazol-3-carboxamida) , un inhibidor de la inosina 5'-monofosfato deshidrogenasa (IMPDH, por sus siglas en inglés) , intensifica la eficacia del IFN-alfa en el tratamiento del HCV. A pesar de la introducción de la ribavirina, más del 50% de los pacientes no eliminan el virus con la terapia estándar actual del alfa interferón (IFN) y ribavirina. Por ahora, la terapia estándar de la hepatitis C crónica se ha cambiado a la combinación de PEG-IFN más ribavirina. Sin embargo, varios pacientes todavía tienen significativos efectos secundarios, relacionados principalmente con la ribavirina. La ribavirina provoca hemolisis significativa en 10-20% de los pacientes tratados a dosis recomendadas actualmente, y el fármaco es tanto teratogénico como embriotóxico. Otros procedimientos se están llevando a cabo para combatir el virus. Los mismos incluyen, por ejemplo, la aplicación de oligonucleotidos antisentido o ribozimas para inhibir la replicación del HCV. Además, los compuestos de bajo peso moleculares que inhiben directamente las proteínas del HCV e interfieren con la replicación viral se consideran como estrategias atractivas para controlar la infección por el HCV. La serina proteasa NS3/4A, la helicasa del ácido ribonucleico (ARN) , la polimerasa de ARN dependiente del ARN se consideran como blancos potenciales para nuevos fármacos .7'8 Devos, et al.9 describe los derivados de nucleósido de pirimidina y pirimidina y su utilización como inhibidores de la replicación del ARN del HCV. Sommadossi, et al.10 describe nucleósidos 1 ' . 2 ' o 3' modificados y su utilización para el tratamiento de un hospedero infectado con el HCV. Carroll, et al.11'12, describe nucleósidos como inhibidores de la polimerasa viral de ARN dependiente del ARN. Recientemente, Roberts, et al.13'14 expusieron que ciertos compuestos de 7- (2' -sustituido-ß-D-ribofuranosil) -4-amino-5- (etin-1-ilo sustituido opcionalmente) -pirrólo [2, 3-d] pirimidina poseen una potente actividad contra el HCV. Estas referencias se incorporan en la presente como referencia en su totalidad.

SUMARIO DE LA INVENCIÓN Esta invención se dirige a compuestos novedosos que son útiles en las infecciones virales en mamíferos provocadas al menos en parte por un virus de la familia de virus flaviviridae. Específicamente, esta invención se dirige a los compuestos de la Fórmula I, en donde Y se selecciona del grupo que consiste de un enlace, -CH2- o -0-; cada uno de W, 1 y 2 se selecciona independientemente del grupo que consiste de hidrógeno y un profármaco farmacéuticamente aceptable; y las sales farmacéuticamente aceptables o sales parciales de los mismos. En una modalidad preferida, Y es oxígeno. En otra modalidad preferida cada uno de W, W1 y W2 es independientemente hidrógeno o un profármaco farmacéuticamente aceptable seleccionado del grupo que consiste de acilo, oxiacilo, fosfonato, fosfato, fosfatoésteres, fosfonamidato, fosforodiamidato, monoéster de fosforamidato, fosforamidato cíclico, fosforodiamidato cíclico, fosforamidato diéster, y -C(0)CHR2NH2 en donde R2 se selecciona del grupo que consiste de hidrógeno, alquilo, alquilo sustituido, arilo, arilo sustituido, cicloalquilo, cicloalquilo sustituido, heteroarilo y heteroarilo sustituido, heterocíclico y heterocíclico sustituido. De preferencia, es hidrógeno, o W1 es hidrógeno, o W2 es hidrógeno. De mayor preferencia, W y W1 son hidrógeno, o W y W2 son hidrógeno, o 1 y 2 son hidrógeno. Incluso de mayor preferencia W, 1 y W2 son hidrógeno. Todavía en otra modalidad preferida W1 y 2 son hidrógeno y es hidrógeno o un profármaco farmacéuticamente aceptable seleccionado del grupo que consiste de acilo, oxiacilo, fosfonato, fosfatoésteres, fosfato, fosfonamidato, fosforodiamidato, monoéster de fosforamidato, fosforamidato cíclico, fosforodiamidato cíclico, fosforamidato diéster, y -C (O) CHR2NH2. En una modalidad particularmente preferida, W1 y 2 son hidrógeno y se representa por la fórmula: en donde R2 es como se definió anteriormente, R3 es hidrógeno o alquilo y R1 se selecciona del grupo que consiste de alquilo, alquilo sustituido, arilo, arilo sustituido, cicloalquilo, cicloalquilo sustituido, heteroarilo, heteroarilo sustituido, heterocíclico y heterocíclico sustituido. En una modalidad preferida R2 se deriva de un L-aminoácido. En otra modalidad particularmente preferida, y W2 son hidrógeno y 1 se representa por la fórmula: en donde R2 es como se definió anteriormente. ün aspecto particularmente preferido de esta invención se dirige a los compuestos de la Fórmula II: II en donde: W se selecciona del grupo que consiste de hidrógeno, y un profármaco farmacéuticamente aceptable; o sales farmacéuticamente aceptables o sales parciales del mismo. Los compuestos preferidos de esta invención incluyen los mismos en la Tabla I más adelante: Tabla I Estructura Nombre 105 7- (2 ' -metil-5' -fenoxi-L- alaninil) fosfato-ß-D- ribofuranosil) -4-amino-5- (etin-1-il) -pirrólo [2, 3- d] pirimidina 106 7- (2 ' -metil-3' -0-L- éstervalina-ß-D- ribofuranosíl) -4-amino-5- (etin-1-il) -pirrólo [2, 3- d] pirimidina 107 7- (2' -metil-3' -0-L- ésteralanina-ß-D- ribofuranosil) -4-amino-5- (etin-1-il) -pirrólo [2, 3- d] pirimidina Los compuestos de esta invención son ya sea activos como agentes antivirales o son útiles como intermediarios en la preparación de los agentes antivirales según se describe en la presente. Esta invención también se dirige a las composiciones farmacéuticas que comprenden un diluyente farmacéuticamente aceptable y una cantidad terapéuticamente eficaz de un compuesto según se describe en la presente o mezclas de uno o más de estos compuestos. Esta invención todavía se dirige además a los métodos para el tratamiento de una infección viral provocada al menos en parte por un virus de la familia de los virus flaviviridae, tal como por ejemplo el HCV, en mamíferos, los métodos comprenden administrar a un mamífero, al que se le haya diagnosticado con infección viral o que esté en riesgo de desarrollar la infección viral, una composición farmacéutica que comprende un diluyente farmacéuticamente aceptable y una cantidad terapéuticamente eficaz de un compuesto según se describe en la presente o mezclas de uno o más de estos compuestos. Todavía en otra modalidad de la invención, los métodos de tratamiento o para evitar infecciones virales en mamíferos se proporcionan en donde los compuestos de esta invención se administran en combinación con la administración de una cantidad terapéuticamente eficaz de uno o más agentes activos contra el HCV. Los agentes activos contra el HCV incluyen ribavirina, levovirina, viramidina, limosina alfa-1, un inhibidor de la serina proteasa NS3, y un inhibidor de la inosina monofosfato deshidrogenada, interferón-alfa, interferón-alfa pegilado, cualquiera, solos o en combinación con ribavirina o levovirina. De preferencia, el agente adicional activo contra el HCV es el interferón-alfa o interferón-alfa pegilado solos o en combinación con ribavirina o levovirina.

DESCRIPCIÓN DETALLADA DE LA INVENCIÓN La invención se dirige a los compuestos, composiciones y métodos para el tratamiento de virus de flaviviridae, tales como por ejemplo, las infecciones por el virus de la hepatitis C. Sin embargo, antes de describir esta invención en detalle, primero se definirán los siguientes términos: Definiciones En el sentido en el que se utiliza en la presente, el término alquilo" se refiere a grupos alquilo que tienen de 1 a 6 átomos de carbono, y de mayor preferencia de 1 a 2 átomos de carbono. Este término se ejemplifica por los grupos tales como por ejemplo, metilo, etilo, n-propilo, iso-propilo, .n-butilo, t-butilo, n-pentilo y lo semejante. "Alquilo sustituido" se refiere a un grupo alquilo que tiene de 1 a 3, y de preferencia de 1 a 2, sustituyentes seleccionados del grupo que consiste de alcoxi, alcoxi sustituido, acilo, acilamino, aciloxi, oxiacilo, amino, amino sustituido, a inoacilo, arilo, arilo sustituido, ariloxi, ariloxi sustituido, ciano, halógeno, hidroxilo, nitro, carboxilo, carboxilésteres, cicloalquilo, cicloalquilo sustituido, heteroarilo, heteroarilo sustituido, heterocíclico, y heterocíclico sustituido. "Alcoxi" se refiere al grupo "alquil-O-" que incluye, a manera de ejemplo, metoxi, etoxi, .n-propoxi, iso-propoxi, n-butoxi, t-butoxi, sec-butoxi, n-pentoxi y lo semejante. "Alcoxi sustituido" se refiere al grupo "alquil-0 sustituido". "Acilo" se refiere a los grupos alquil-C (0) -, alquil-C (0) -sustituido, alquenil-C (0) -, alquenil-C (0) -sustituido, alquinil-C (0) -, alquinil-C (0) -sustituido, cicloalquil-C (0) -, cicloalquil-C (0) -sustituido, aril-C(O)-, aril-C- (0) -sustituido, heteroaril-C (0) -, heteroaril-C (0) sustituido, heterocíclico-C (0) -, y heterocíclico C (O) -sustituido . "Acilamino" se refiere al grupo -C(0)NR4R4 en donde cada R4 se selecciona independientemente del grupo que consiste de hidrógeno, alquilo, alquilo sustituido, alquenilo, alquenilo sustituido, alquinilo, alquinilo sustituido, arilo, arilo sustituido, cicloalquilo, cicloalquilo sustituido, heteroarilo, heteroarilo sustituido, heterocíclico, heterocíclico sustituido y en donde cada R4 se une para formar conjuntamente con el átomo de nitrógeno un anillo heterocíclico o heterocíclico sustituido. "Aciloxi" se refiere a los grupos alquil-C (0) 0-, alquil-C (0) O-sustituido, alquenil-C (0) 0-, alquenil-C (0) 0-sustituido, alquinil-C (0) 0-, alquinil-C (0) O-sustituido, aril-C(0)0-, aril-C (0) O-sustituido, cicloalquil-C (0) 0-, cicloalquil-C (0) O-sustituido, heteroaril-C (0) 0-, heteroaril-C (0) O-sustituido, heterocíclico-C (0) 0-, y heterocíclico -C (0) O-sustituido. "Oxiacilo" se refiere a los grupos alquil- 0C(0)-, alquil-OC(O) -sustituido, alquenil-OC (0) -, alquenil-OC- (0) -sustituido, alquinil-OC (0) -, alquinil-OC - (0) -sustituido, aril-OC (0)-, aril-OC- (0) -sustituido, cicloalquil-OC (0) -, cicloalquil-OC- (0) -sustituido, heteroaril-OC (0) -, heteroaril-OC- (0) -sustituido, heterocíclico-OC (0)-, y heterocíclico-OC (0) -sustituido. "Alquenilo" se refiere a un grupo alquenilo que tenga de 2 a 6 átomos de carbono y de 2 a 4 átomos de carbono y que tenga al menos 1 y de preferencia 1-2 sitios de instauración con alquenilo. Estos grupos se ejemplifican por vinil (eten-1-il) , alilo, but-3-en-l-ilo, y lo semejante. "Alquenilo sustituido" se refiere a grupos alquenilo que tiene de 1 a 3 sustituyentes, y de preferencia de 1 a 2 sustituyentes, seleccionados del grupo que consiste de alcoxi, alcoxi sustituido, acilo, acilamino, aciloxi, amino, amino sustituido, aminoacilo, arilo, arilo sustituido, ariloxi, ariloxi sustituido, ciano, halógeno, hidroxilo, nitro, carboxilo, carboxilésteres, cicloalquilo, cicloalquilo sustituido, heteroarilo, heteroarilo sustituido, heterocíclico, y heterocíclico sustituido con la condición de que cualquier sustitución con hidroxilo no esté unida a un átomo de carbono de vinilo (insaturado) . Los grupos alquenilo sustituidos preferidos se seleccionan de manera enunciativa: 2, 2-difluoroeten-1-ilo, 2-metoxieten-l-ilo, y lo semejante. Se debe entender que el término "alquenilo sustituido" incluye los isómeros tanto E ( cis) como Z ( trans) según sea adecuado. Los isómeros pueden ser compuestos isoméricos puros o mezclas de los componentes E y Z. "Alquinilo" se refiere a un hidrocarburo insaturado que tiene al menos 1 sitio de insaturación con alquinilo y que tiene de 2 a 6 átomos de carbono y de mayor preferencia de 2 a 4 -átomos de carbono. Los grupos alquinilo preferidos se seleccionan de manera enunciativa de: etin-1-ilo, propin-1-ilo, propin-2-ilo, l-metilprop-2-in-l-ilo, butin-1-ilo, butin-2-ilo, butin-3-ilo, y lo semejante.

"Alquinilo sustituido" se refiere a grupos alquinilo que tiene de 1 a 3 sustituyentes, y de preferencia de 1 a 2 sustituyentes, seleccionados del grupo que consiste de alcoxi, alcoxi sustituido, acilo, acilamino, aciloxi, amino, amino sustituido, aminoacilo, arilo, arilo sustituido, ariloxi, ariloxi sustituido, ciano, halógeno, hidroxilo, nitro, carboxilo, carboxilésteres, cicloalquilo, cicloalquilo sustituido, heteroarilo, heteroarilo sustituido, heterocíclico, y heterocíclico sustituido. Los grupos alquinilo sustituidos preferidos se seleccionan de manera enunciativa de: 2-fluoroetin-l-ilo, 3, 3, 3-trifluoropropin-1-ilo, 3-aminopropín-l-ilo, 3-hidroxipropin-l-ilo, y lo semejante. "Amino" se refiere al grupo -NH2. "Amino sustituido" se refiere al grupo -NR'R" en donde R' y R" se seleccionan independientemente del grupo que consiste de hidrógeno, alquilo, alquilo sustituido, alquenilo, alquenilo sustituido, alquinilo, alquinilo sustituido, arilo, arilo sustituido, cicloalquilo, cicloalquilo sustituido, heteroarilo, heteroarilo sustituido, heterocíclíco, heterocíclico sustituido y en donde R' y R" se unen, conjuntamente con el enlace de nitrógeno al mismo para formar un grupo heterocíclico o heterocíclico sustituido con la condición de que R' y R" no sean ambos hidrógeno. Cuando R' es hidrógeno y R" es alquilo, el grupo amino sustituido algunas veces se denomina en la presente como alquilamino. Cuando R' y R" son alquilo, el grupo amino sustituido algunas veces se denomina en la presente como dialquilamino. ?Aminoacilo' se refiere a los grupos -NR5C(0) alquilo, -NR5C(0) alquilo sustituido, -NR5C (0) cicloalquilo, -NR5C (0) cicloalquilo sustituido, -NR5C (0) alquenilo, -NR5C (0) alquenilo sustituido, -NR5C (O) alquinilo, -NR5C(0) alquinilo sustituido, -NR5C(0) arilo, -NR5C(0) arilo sustituido, -NR5C (O) heteroarilo, -NR5C (0) heteroarilo sustituido, -NR5C (0) heterocíclico, y -NR5C (0) heterocíclico sustituido en donde R5 es hidrógeno o alquilo. "Arilo" o "Ar" se refiere a un grupo carbocíclico aromático monovalente de 6 a 14 átomos de carbono que tiene un anillo individual (por ejemplo, fenilo) o múltiples anillos condensados (por ejemplo, naftilo o antrilo) , estos anillos condensados pueden o no ser aromáticos (por ejemplo, 2-benzoxazolinona, 2H-1,4-benzoxazin-3 (4H) -ona-7-ilo, y lo semejante) con la condición de que el punto de unión esté en un átomo de carbono aromático. Los arilos preferidos incluyen fenilo y naftilo. "Arilo sustituido", incluyendo "fenilo sustituido" se refiere a grupos arilo o grupos fenilo que se sustituyen con 1 a 3 sustituyentes, y de preferencia 1 a 2 sustituyentes, seleccionados del grupo que consiste de hidroxilo, acilo, acilamino, aciloxi, alquilo, alquilo sustituido, alcoxi, alcoxi sustituido, alquenilo, alquenilo sustituido, alquinilo, alquinilo sustituido, amino, amino sustituido, aminoacilo, arilo, arilo sustituido, ariloxi, ariloxi sustituido, cicloalcoxi, cicloalcoxi sustituido, carboxilo, carboxilésteres, ciano, tiol, tioalquilo, tioalquilo sustituido, tioarilo, tioarilo sustituido, tioheteroarilo, tioheteroarilo sustituido, tiocicloalquilo, tiocicloalquilo sustituido, tioheterocíclico, tioheterocíclico sustituido, cicloalquilo, cicloalquilo sustituido, halo, nitro, heteroarilo, heteroarilo sustituido, heterocíclico, heterocíclico sustituido, heteroariloxi, heteroariloxi sustituido, heterocicliloxi, y heterocicliloxi sustituido. "Ariloxi" se refiere al grupo aril-O- que incluye, a manera de ejemplo, fenoxi, naftoxi y lo semejante. "Ariloxi sustituido" se refiere a grupos aril-O-sustituidos. "Carboxilo" se refiere a -COOH o sales del mismos . "Carboxilésteres" se refiere a los grupo -C(0)0-alquilo, -C (0) O-alquilo sustituido, -C (0) 0-arilo, y-C(0)0-arilo sustituido en donde alquilo, alquilo sustituido, arilo y arilo sustituido son como se definen en la presente. "Cicloalquilo" se refiere a grupos alquilo cíclicos de 3 a 10 átomos de carbono que tienen anillos cíclicos individuales o múltiples, uno o más de los cuales pueden ser aromático o heteroaromáticos disponibles de un punto de unión al final de un anillo de cicloalquilo. Tales grupos incluyen a manera de ejemplo, adamantilo, ciclopropilo, ciclobutilo, ciclopentilo, ciclooctilo y lo semejante. "Cicloalquilo sustituido" se refiere a una saturación o instauración, pero no aromática de cicloalquilo que tiene de 1 a 5 sustituyentes seleccionados del grupo que consiste de oxo (=0) , tioxo(=S), alquilo, alquilo sustituido, alcoxi, alcoxi sustituido", acilo, acilamino, aciloxi, amino, amino sustituido, aminoacilo, arilo, arilo sustituido, ariloxi, ariloxi sustituido, ciano, halógeno, hidroxilo, nitro, carboxilo, carboxilésteres, cicloalquilo, cicloalquilo sustituido, heteroarilo, heteroarilo sustituido, heterocíclico y heterocíclico sustituido. "Cicloalcoxi" se refiere a grupos -0-cicloalquilo.

"Cicloalcoxi sustituido" se refiere a grupos cicloaquil-O-sustituidos . "Formilo" se refiere a HC(0)-. "Halo" o "halógeno" se refiere a flúor, cloro, bromo e iodo y de preferencia es flúor o cloro. "Heteroarilo" se refiere a un grupo aromático de de 1 a 10 átomos de carbono y de 1 a 4 heteroátomos seleccionados del grupo que consiste de oxígeno, nitrógeno, azufre en el anillo. Los heteroátomos de azufre y átomos nitrógeno también pueden estar presentes en sus formas oxidadas, tales como por ejemplo, >N(0), >S (O) y >S(0)2. Estos grupos heteroarilo pueden tener un anillo individual (por ejemplo, piridilo o furilo) o múltiples anillos condensados (por ejemplo, indolizinilo o benzotienilo) en donde los anillos condensados pueden o no ser aromáticos y/o contener un heteroátomo con la condición de que el punto de unión sea a través de un átomo del grupo heteroarilo aromático. Los heteroarilos preferidos incluyen piridilo, pirrolilo, indolilo, tiofenilo y furilo. "Heteroarilo sustituido" se refiere a grupos heteroarilo que se sustituyen con 1 a 3 sustituyentes seleccionados del mismo grupo de sustituyentes definidos para arilo sustituido. "Heteroariloxi" se refiere al grupo -O-heteroarilo y "heteroariloxi sustituido" se refiere al grupo heteroaril-O-sustituido. "Heterociclo" o "heterocíclico" o "heterocicloalquilo" se refiere a un grupo saturado o insaturado (pero no heteroarílo) que tenga un anillo individual o múltiples anillos condensados, de 1 a 10 átomos de carbono y de 1 a 4 heteroátomos seleccionados del grupo que consiste de nitrógeno, oxígeno y azufre, >S(0), y >S(0)2 dentro del anillo, en donde, en los sistemas de anillo fusionado, uno o más de los anillos puede ser cicloalquilo, arilo o heteroarilo con la condición de que el punto de unión sea a través del anillo heterocíclico . "Heterocíclico sustituido" o "heterociclo sustituido" se refiere a grupos heterociclo que se sustituyen con 1 a 3 de los mismos sustituyentes según se definió para cicloalquilo sustituido. Los ejemplos de heterociclos y heteroarilos incluyen de manera enunciativa, azetidina, pirrol, imidazol, pirazol, piridina, pirazina, pirimidina, piridazina, indolizina, isoindol, indol, dihidroindol, indazol, purina, quinolizina, isoquinolina, quinolina, ftalazina, naftilpiridina, quinoxalina, quinazolina, cinnolina, pteridina, difenilenoimina, carbolina, fenantridina, dibenzopiridina, fenantrolina, isotiazol, fenazina, isoxazol, fenoxazina, fenotiazina, imidazolidina, imidazolina, piperidina, piperacina, indolina, ftalimida, 1, 2, 3, 4-tetrahidroissquinolina, 4, 5, 6, 7-tetrahidrobenzo [b] tiofeno, tiazol, tiazolidina, tiofeno, benzo [b] tiofeno, morfolinilo, tiomorfolinilo (también denominado como tiamorfolinilo) , piperidinilo, tetrahidropirol, tetrahidrofuranilo, y lo semejante. "Heterocicliloxi" se refiere al grupo -0-heterocíclico y "heterocicliloxi sustituido" se refiere al grupo heterocíclico-O-sustituido. "Fosfato" se refiere a los grupo -0P(0) (0H)2 (monofosfato o fosfo), -OP (0) (OH) OP (0) (OH) 2 (difosfato o difosfo) y -0P(0) (0H)0P(0) (OH)OP(O) (0H) (trifosfato o trifosfo) o sales de los mismos incluyendo las sales parciales de los mismos. Se debe entender, por supuesto, que el oxígeno inicial del mono-, di- y tri-fosfato (fosfo, difosfo y trifosfo) incluye el átomo de oxígeno en la posición 5- de ribosa azúcar. "Fosfato esteres" se refiere a los grupos mono-, di- y tri-fosfato descritos anteriormente, en donde uno o más de los grupos hidroxilo se reemplaza por un grupo alcoxi. "Fosfonato" se refiere a los grupo -0P(0) (R6) (OH) o -0P(0) (R6) (0Rd) o las sales de los mismos incluyendo las sales parciales de los mismos, en donde cada R6 se selecciona independientemente de hidrógeno, alquilo, alquilo sustituido, ácido carboxílico, y carboxiléster. Se debe entender, por supuesto, que el oxígeno inicial del fosfonato incluye el átomo de oxígeno en la posición 5 de la ribosa azúcar. "Fosforodiamidato" se refiere al grupo: donde cada R7 puede ser igual o diferente y cada uno es hidrógeno, alquilo, alquilo sustituido, cicloalquilo, o cicloalquilo sustituido. Un fosforodiamidato preferido es el siguiente grupo: "Fosforamidato monoéster" se refiere al siguiente grupo, en donde R2 es como se definió anteriormente, R3 son como se definieron anteriormente.

En una modalidad preferida R2 se deriva de un L-aminoácido: "Fosforamidato diéster" se refiere al siguiente grupo, en donde R1, R2 y R3 son como se definió anteriormente, En una modalidad preferida R2 se deriva de un L-aminoácido.

"Fosforamidato cíclico" se refiere al siguiente grupo, en donde n es 1 a 3, de mayor preferencia n es de 1 a 2.

"Fosforodiamidato cíclico" se refiere al siguiente grupo, en donde n es de 1 a 3, de mayor preferencia n es de 1 a 2.

"Fosfonamidato" se refiere al siguiente grupo, en donde R11 es hidrógeno, alquilo, alquilo sustituido, cicloalquilo, o cicloalquilo sustituido.

"Tiol" se refiere al grupo-SH. "Tioalquilo" o "alquiltioéter" o "tioalcoxi" se refiere al grupo -S-alquilo. "Tioalquilo sustituido" o "alquiltioéter sustituido" o "tioalcoxi sustituido" se refiere al grupo alquil-S-sustituido . "Tiocicloalquilo" se refiere a los grupos -S-cicloalquilo y "tiocicloalquilo sustituido" se refiere al grupo cicloalquil-S-sustituido . "Tioarilo" se refiere al grupo -S-arilo y "tioarilo sustituido" se refiere al grupo aril-S-sustituido. "Tioheteroarilo" se refiere al grupo -S-heteroarilo y "tioheteroarilo sustituido" se refiere al grupo heteroarilo -S-sustituido. "Tíoheterocíclico" se refiere al grupo -S-heterocíclico y "tioheterocíclico sustituido" se refiere al grupo heterocíclico -S-sustituido. El término "cadena lateral de aminoácidos" se refiere al sustituyente R12 de los a-aminoácidos de la fórmula R13NHCH(R12) COOH en donde R12 se selecciona del grupo que consiste de hidrógeno, alquilo, alquilo sustituido, y arilo y R13 es hidrógeno o junto con R12 y el nitrógeno y átomos de carbón unidos a los mismos respectivamente forman un anillo heterocíclico. De preferencia, la cadena lateral de los a-aminoácidos es la cadena lateral de uno de los veinte L-aminoácidos que se presentan en la naturaleza. El término "profármacos farmacéuticamente aceptables" se refiere a las modificaciones reconocidas en la técnica para uno o más grupos funcionales, los grupos funcionales se metabolizan in vivo para proporcionar un compuesto de esta invención o un metabolito activo de los mismos. Estos grupos funcionales son bien conocidos en la técnica e incluyen grupos acilo para la sustitución con hidroxilo y/o amino, esteres de mono- di- y tri-fosfatos, en donde uno o más de los grupos hidroxilo colgantes se han convertido a un alcoxi, un alcoxi sustituido, un grupo ariloxi o un ariloxi sustituido, y lo semejante.

El término "sal farmacéuticamente aceptable" se refiere a las sales farmacéuticamente aceptables de un compuesto, estas sales se derivan de una variedad de contraiones orgánicos e inorgánicos bien conocidos en la técnica e incluyen, a manera de ejemplo únicamente, sodio, potasio, calcio, magnesio, amonio, tetra-alquilamonio, y lo semejante; y en donde la molécula contiene un grupo funcional básico, las sales de los ácidos orgánicos o inorgánicos, tales como por ejemplo, clorhidrato, bromhidrato, tartrato, mesilato, acetato, el maleato, oxalato y lo semejante. El término "sales parciales farmacéuticamente aceptables" se refiere a compuestos que tienen un sustituyente capaz de tener más de un grupo para la formación de una sal pero menos de la cantidad máxima de estos grupos realmente para formar una sal. Por ejemplo, un grupo difosfo puede formar una pluralidad de sales y, si únicamente se ioniza parcialmente, el grupo resultante algunas veces se denomina en la presente como una sal parcial. Se debe entender que en todos los grupos sustituidos definidos anteriormente, los polímeros que llegan al definir los sustituyentes con sustituyentes adicionales para sí mismos (por ejemplo, arilo sustituido que tiene un grupo arilo sustituido como un sustituyente que por sí mismo se sustituye con un grupo arilo sustituido, etc.) no se pretende que se incluyan en la presente. En estos casos, el número máximo de estos sustituyentes es tres. Es decir, que cada una de las definiciones anteriores se restringe por una limitación, por ejemplo, los grupos arilo sustituidos se limitan a -arilo sustituido- (arilo sustituido) -arilo sustituido. De manera similar, se debe entender que las definiciones anteriores no pretenden incluir patrones de sustitución que no estén permitidos (por ejemplo, metilo sustituido con 5 grupos flúor o un grupo alfa hidroxilo para instauración etilénica o acetilénica) . Estos patrones de sustitución no permitidos son bien conocidos por los expertos en la técnica.

Métodos Sintéticos Generales Los métodos de esta invención emplea materiales de partida disponibles fácilmente utilizando los siguientes métodos y procedimientos generales. Se apreciará que cuando se proporcionen condiciones preferidas de proceso (es decir, temperaturas de reacción, tiempos, proporciones molares de reactivos, solventes, presiones, etc.), también se pueden utilizar otras condiciones de proceso a menos que se establezca de otra manera. Las condiciones de reacción óptimas pueden variar con los reactivos o solventes particulares utilizados, aunque estas condiciones se pueden determinar por alguien con experiencia en la técnica mediante procedimientos de optimización de rutina. Adicionalmente, los métodos de esta invención emplean grupos protectores que son necesarios para evitar que ciertos grupos funcionales experimenten reacciones no deseadas. Los grupos protectores adecuados para diversos grupos funcionales, así como también, las condiciones adecuadas para proteger y desproteger los grupos funcionales particulares, son bien conocidos en la técnica. Por ejemplo, muchos grupos protectores se describen en T. W. Greene and G. M. Wuts, Protecting Groups in Organic Synthesis, Tercera edición, Wiley, New York, 1999, y las referencias citadas en la presente. Además, los compuestos de esta invención contienen uno o más centros quirales y tales compuestos se pueden preparar o aislar como estereoisómeros puros, es decir, como enantiómeros o diastómeros, o como mezclas enriquecidas con estereoisómeros. Todo estos estereoisómeros (y mezclas enriquecidas) se incluyen dentro del alcance de esta invención, a menos que se indique de otra manera. Los estereoisómeros puros (o las mezclas enriquecidas) se pueden preparar utilizando, por ejemplo, materiales de partida ópticamente activos o reactivos estereoselectivos bien conocido en la técnica. Alternativamente, las mezclas racémicas de estos compuestos se pueden separar utilizando, por ejemplo, cromatografía en columna quiral, agentes para resolución quiral y lo semejante. Los materiales de partida para las siguientes reacciones en general son compuestos conocidos o se pueden preparar mediante procedimientos conocidos o modificaciones evidentes de los mismos. Por ejemplo, muchos de los materiales de partida están disponibles de proveedores comerciales tales como por ejemplo, Aldrich Chemical Co . (Milwaukee, Wisconsin, USA), Bachem (Torrance, California, USA), Emka-Chemce o Sigma (St.

Louis, Missouri, USA) . Otros se pueden preparar mediante procedimientos, o modificaciones evidentes de los mismos, descritos en los textos para referencia estándar tales como por ejemplo, Fieser and Fieser' s Reagents for Organic Synthesis, Volúmenes 1-15 (John Wiley and Sons, 1991) , Rodd's Chemistry of Carbón Compounds, Volúmenes 1-5 y suplementales (Elsevier Science Publishers, 1989) , Organic Reactions, Volúmenes 1-40 (John Wiley and Sons, 1991) , March's Advanced Organic Chemistry, (John Wiley and Sons, 4a Edición) , y Larock' s Comprehensive Organic Transformations (VCH Publishers Inc., 1989). Específicamente, los compuestos de esta invención se pueden preparar mediante diversos métodos conocidos en la técnica de la química orgánica en general y en particular mediante una síntesis de análogos de nucleósido y nucleótido. Los resúmenes generales de la preparación de los análogos de nucleósido y nucleótido incluyen: 1) Michelson A. M. "The Chemistry of Nucleosides and Nucleotides, " Academic Press, New York, 1963; 2) Goodman L. "Basic Principies in Nucleic Acid Chemistry," Academic Press, New York, 1974, vol. 1, Ch. 2; y 3) "Synthetic Procedures in Nucleic Acid Chemistry," Eds. Zorbach W. & Tipson R., Wiley, New York, 1973, vol. 1 & 2. La síntesis de los compuestos de esta invención en general sigue una trayectoria sintética ya sea convergente o lineal según se describe más adelante. El siguiente Esquema 1 describe dos diferentes métodos para preparar 7- (2'metil-ß-D-ribofuranosil) -4-amino-5- (etin-1-il) -pirrólo [2, 3-d] pirimidina ?A 1 Específicamente, en el Esquema 1, la 4-cloro-pirrolo [2 , 3-d] pirimidina, disponible comercialmente, compuesto 2, se convirtió a la 4-cloro-5-iodo-pirrolo [2 , 3-d] pirimidina, compuesto 3, mediante el contacto con un exceso ligero y de preferencia entre aproximadamente 1.05 y 2 equivalentes de N-iodo-succinimida en un diluyente inerte adecuado tal como por ejemplo, DMF, acetonitrilo, y lo semejante. La reacción se condujo típicamente entre aproximadamente 0 o y 40 °C y de preferencia condiciones ambiente hasta el término sustancial de la reacción. De preferencia, la reacción se conduce en la oscuridad (por ejemplo, en una cámara de reacción cubierta con laminillas) y se completó típicamente en aproximadamente 6 a 24 horas. La 4-cloro-5-iodo-pirrolo [2, 3-d] pirimidina, compuesto 3, se puede aislar mediante métodos convencionales tales como por ejemplo, filtración, evaporación y lo semejante. La purificación de preferencia se lleva a cabo mediante la cristalización con el rendimiento del compuesto 3 que será mayor al 90 por ciento. La 4-cloro-5-iodo-pirrolo [2, 3-d] pirimidina, compuesto 3, se combinó en un solvente inerte adecuado tal como por ejemplo, acetonitrilo, DMF, y lo semejante a condiciones ambiente. Se agregó en porciones a la solución un exceso ligero de hidruro de sodio, típicamente entre aproximadamente 1.01 hasta 1.1 y de preferencia aproximadamente 1.04 equivalente con relación al compuesto 3. El sistema resultante se mantuvo con agitación a condiciones ambientales durante un período entre aproximadamente 0.5 hasta 4 horas y de preferencia durante aproximadamente 2 horas . Al término sustancial de la reacción, cualesquiera partículas insolubles se eliminaron de la mezcla de reacción mediante filtración. La sal de sodio del compuesto 3 (no mostrado) en este filtrado se utilizó en el siguiente paso sin purificación adicional. Por separado, l-metoxi-2-metil-3, 5-di-O- (2, 4-diclorobencil) -D-ribofuranosa, compuesto 8 (descrito más adelante) , se disolvió en un diluyente inerte adecuado tal como por ejemplo, cloroformo, cloruro de metileno, tetrahidrofurano y lo semejante y el sistema resultante se enfrió a aproximadamente 0o hasta 10°C. La l-bromo-2-metil-3, 5-di-O- (2, 4-diclorobencil) -D-ribofuranosa correspondiente (no mostrada) se preparó in situ mediante la reacción con bromuro de hidrógeno gaseoso que se burbujeó a través del sistema de reacción hasta el término sustancial de la reacción que típicamente se presentó entre 0.1 hasta 1 hora. El producto resultante se obtuvo mediante evaporación, de preferencia a temperaturas que no excedieron los 20 °C y las trazas residuales de bromuro de hidrógeno se eliminaron in vacuo (de preferencia a una presión menor a aproximadamente 15 torr) . Un exceso, típicamente entre aproximadamente 1.01 hasta 2 equivalentes, (de mayor preferencia 1.5 hasta 2 eq) de la sal de sodio del compuesto 3 se combinó con 1-brom-2-metil-3, 5-di-O- (2, 4-diclorobencil) -D-ribofuranosa en un solvente adecuado tal como por ejemplo, acetonitrilo, DMF, y lo semejante. Típicamente, la reacción se mantuvo a condiciones ambiente hasta que se completó sustancialmente, lo cual típicamente se presentó en un término entre aproximadamente 6 hasta 24 horas. El producto resultante, la 7- (2' -metil-3' , 5' -di-O- (2, 4-diclorobencil) -ß-D-ribofuranosil) -4-cloro-5-iodo-pirrolo [2, 3-d] pirimidina, compuesto 4, se aisló mediante procedimientos convencionales. De preferencia, la solución de reacción se neutralizó y el solvente se evaporó. El compuesto 4 luego se trituró con un solvente adecuado, por ejemplo, tolueno, xilenos, y lo semejante. El producto se puede purificar mediante cromatografía instantánea seguida por cristalización. Posteriormente, se eliminaron los grupos protectores de diclorobencilo mediante procedimientos convencionales tales como por ejemplo, poner en contacto la 7- (2' -metil-3' , 5' -di-O- (2, 4-diclorobencil) -ß-D-ribofuranosil) -4-cloro-5-iodo-pirrolo [2, 3-d] pirimidina, compuesto 4, con BC13 para proporcionar la 7- (2' -metil-p-D-ribofuranosil) -4-cloro-5-iodo-pirrolo [2, 3-d] pirimidina, compuesto 5. De preferencia, la reacción se condujo en un diluyente inerte tal como por ejemplo, cloroformo, cloruro de metileno y lo semejante. La mezcla de reacción se mantuvo inicialmente entre aproximadamente -60° y -80 °C durante un período entre aproximadamente 1 hasta 4 horas y luego se dejó calentar a -40° hasta 0°C hasta que prácticamente se terminó la reacción lo cual típicamente se presentó después de aproximadamente 1 hasta 24 horas adicionales. Después de esto, la reacción se inactivo con metanol y luego se neutralizó al aumentar el nivel de pH a aproximadamente 7, con una base, de preferencia con hidróxido de amonio. La 7- (2' -metil-ß-D-ribofuranosil) -4-cloro-5-iodo-pirrolo [2, 3-d] pirimidina resultante, compuesto 5, se aisló mediante métodos convencionales tales como por ejemplo, filtración, evaporación, cromatografía, precipitación, y lo semejante. El grupo 4-cloro del compuesto 5 luego se amino al poner en contacto con un exceso de amoniaco líquido. La reacción de preferencia se condujo casi a una temperatura entre aproximadamente 75° hasta 90 °C en un reactor a presión mantenido típicamente entre aproximadamente 100 hasta 500 psi. La reacción se continuó hasta que se completó sustancial lo cual típicamente se presentó entre aproximadamente 12 hasta 48 horas. La 7- (2' -metil-ß-D-ribofuranosil) -4-amino-5-iodo-pirrolo [2, 3-d] pirimidina resultante, compuesto 6, se aisló mediante métodos convencionales tales como por ejemplo, filtración, evaporación, cromatografía, precipitación, y lo semejante. Según se muestra en el Esquema 1, el grupo iodo de ya sea la 7- (2' -metil-ß-D-ribofuranosil) -4-cloro-5-iodo-pirrolo [2, 3-d] pirimidina, compuesto 5, o la 7-(2'-metil-ß-D-ribofuranosil) -4-amino-5-iodo-pirrolo [2, 3-d] pirimidina, compuesto 6, se convirtió al grupo (trimetil) sililacetilenilo correspondiente. La conversión se llevó a cabo primero al disolver el compuesto 5 ó 6 en un diluyente inerte adecuado tal como por ejemplo, DMF, THF o una mezcla de DMF/THF tal como por ejemplo, a una proporción de 3:7. Luego se agregó a la mezcla de reacción una cantidad catalítica tanto de yoduro cuproso (Cul) y éster de titanio (trifenilfosfina) paladio (O) junto con un exceso, típicamente 1.1 a 2 equivalente, de (trimetilsilil) acetileno. La reacción de preferencia se condujo en presencia de una base tal como por ejemplo, trietilamina y de preferencia se condujo bajo una atmósfera inerte. La reacción típicamente se condujo entre aproximadamente 10° hasta 30 °C y se continuó hasta que se completó sustancialmente lo cual típicamente se presentó entre aproximadamente 12 hasta 48 horas. El producto derivado del compuesto 5, es decir, la 7- (2' -metil-ß-D-ribofuranosil) -4-cloro-5- (trimetilsililetinil) pirrólo [2, 3-d] pirimidina, compuesto 10, se aisló mediante métodos convencionales tales como por ejemplo, filtración, evaporación, cromatografía, precipitación, y lo semejante. El producto derivado del compuesto 6, es decir, la 7- (2' -metil-ß-D-ribofuranosil) -4-amino-5- (trimetilsilil-etinil) pirrólo [2, 3-d] pirimidina, compuesto 7, se aisló mediante métodos convencionales tales como por ejemplo, filtración, evaporación, cromatografía, precipitación, y lo semejante. El compuesto 7 luego se puede convertir al derivado de acetileno (-C=CH) mediante desililación, lo cual se presenta vía los métodos convencionales que utilizan hidróxido de amonio, carbonato de potasio o aniones de fluoruro. Por ejemplo, la reacción de la 7- (2' -metil-ß-D-ribofuranosil) -4-amino-5- (trimetilsilil-etinil) pirrólo [2, 3-d] pirimidina, compuesto 7, con hidróxido de amonio en metanol proporciona el compuesto 1. Alternativamente, se pueden emplear desililación y aminación con el compuesto 10 mediante la reacción con amoniaco concentrado para proporcionar el compuesto 1. En una modalidad alternativa, el compuesto 3 primero se trata con un trimetilsililacetileno según se describió anteriormente para formar el compuesto 5a. El compuesto 5a se puede acoplar a las 2' -metil-3, 5-di-O- (2, 4-diclorobencil) -D-ribofuranosaas descritas anteriormente para formar el compuesto 7a. Por último, la eliminación de los grupos protectores de 2 , 4-diclorobencilo del azúcar proporciona el compuesto 10 . El siguiente Esquema 2 ilustra las variaciones sintéticas en la preparación de la 7- (2' -metil-ß-D-ribofuranosil) -4-amino-5- (etin-1-il) -pirrólo [2, 3-d] pirimidina, compuesto 1.

ESQUEMA 2 En el Esquema 2, la 7- (2' -metil-3' , 5' -di-O- (2, 4-diclorobencil) -ß-D-ribofuranosil) -4-cloro-5-iodo-pirrolo [2, 3-d] pirimidina, compuesto 4, se amina en los métodos según se describieron anteriormente para proporcionar la 7- (2' -metil-3' , 5' -di-O- (2, 4-diclorobencil) -ß-D-ribofuranosil) -4-amino-5-iodo-pirrolo [2, 3-d] pirimidina, compuesto 12. Este compuesto sirve como un punto de enfoque para una variedad de esquemas de reacción que se pueden utilizar para preparar la 7- (2' -metil-ß-D-ribofuranosil) -4-amino-5- (etin-1-il) -pirrólo [2, 3-d] pirimidina, compuesto 1. En una primera modalidad, los grupos protectores hidroxi del compuesto 12 se eliminan utilizando tricloruro de boro en la forma descrita en el Esquema 1 anterior para proporcionar la 7- (2' -metil- [3-D-ribofuranosil) -4-amino-5-iodo-pirrolo [2, 3-d] pirimidina, compuesto 6. El compuesto 6, a su vez, se convierte a la 7- (2' -metil-ß-D-ribofuranosil) -4-amino-5- (trimetilsililetinil) -pirrólo [2, 3-d] pirimidina correspondiente, compuesto 7 utilizando una cantidad catalítica tanto de yoduro cuproso (Cul) como éster de titanio (trifenilfosfina) paladio (0) junto con un exceso, típicamente 1.1 a 2 equivalentes, de (trimetilsilil) acetileno en presencia de una base según se describió anteriormente.

En una modalidad, 7- (2' -metil-ß-D-ribofuranosil) -4-amino-5- (trimetilsililetinil) -pirrólo [2, 3-d] pirimidina, compuesto 7 se deshiló según se describió anteriormente para proporcionar el compuesto 1. En otra modalidad, el compuesto 12 se convirtió a la 7- (2' -metil-3' ,5' -di-O- (2, 4-diclorobencil) -ß-D-ribofuranosil) -4-amino-5- (trimetilsililetinil) -pirrólo [2, 3-d] pirimidina correspondiente, compuesto 13 utilizando una cantidad catalítica tanto del yoduro cuproso (Cul) como éster de titanio (trifenilfosfina) paladio (0) junto con un exceso, típicamente de 1.1 a 2 equivalente, de (trimetilsilil) acetileno en presencia de una base según se describió anteriormente. El compuesto 13 se somete tanto a desililación como a eliminación de los grupos protectores hidroxi para proporcionar el compuesto 1. Según se muestra en el Esquema 2, el orden de estos dos pasos no es importante y en una modalidad, la desililación prosigue primero de la manera descrita anteriormente para proporcionar la 7-(2'-metil-3' , 5' -di-O- (2, 4-diclorobencil) -ß-D-ribofuranosil) -4-amino-5-etinil-pirrolo [2, 3-d] pirimidina, compuesto 14, que luego se somete a la eliminación de los grupos bloqueadores hidroxi, también como se describió anteriormente, para proporcionar el compuesto 1. En otra modalidad, la eliminación de los grupos bloqueadores hidroxi prosigue primero para proporcionar la 7- (2' -metil-ß-D-ribofuranosil) -4-amino-5- (trimetilsilil-etinil) -pirrólo [2, 3-d] pirimidina, compuesto 7 que luego se somete a desililación para proporcionar el compuesto 1. Alternativamente, el compuesto 7a se puede preparar al hacer reaccionar el compuesto 4 con un trimetilsililacetileno según se describió anteriormente. El grupo trimetilsililo del compuesto 7a se puede eliminar según se describió anteriormente para proporcionar el compuesto 15. El compuesto 16 se prepara mediante la eliminación de los grupos protectores bencilo del compuesto 15. La aminación del compuesto 15 utilizando las técnicas descritas anteriormente proporciona el compuesto 1. En otros procesos alternativos, el compuesto 7a se puede convertir directamente al compuesto 14 mediante aminación con amoniaco líquido. Los azúcares de ribosa 2-sustituidos utilizados en los Esquemas 1 y 2 anteriores se pueden preparar a partir de métodos bien conocidos en la técnica. Por ejemplo, un material de partida de estos compuestos es un azúcar sustituido adecuadamente con 2'-OH y 2'-H. El azúcar se puede adquirir o se puede preparar mediante cualesquiera medios conocidos entre los que se incluyen técnicas estándar de epimirización, sustitución, oxidación y/o reducción. Por ejemplo, se puede utilizar la 1,3,5-tri-O-benzoil-a-D-ribofuranosa disponible comercialmente (Pfanstiel Laboratories, Inc.). El azúcar sustituido luego se puede oxidar con el agente oxidante adecuado en un solvente compatible a una temperatura adecuada para proporcionar el azúcar 2' -modificado. Los posibles agentes oxidantes son, por ejemplo, reactivo periodado Dess-Martin Ac20+ DCC en DMSO, oxidación Swern (DMSO, cloruro de oxalilo, e trietilamina) , reactivo de Jones (una mezcla de ácido crómico y ácido sulfúrico) , reactivo de Collins (óxido de dipiridina Cr(VI), reactivo de Corey (clorocromato de piridinio) , bicromato de piridinio, bicromato ácido, permanganato de potasio, Mn02, tetraóxido de rutenio, catalizadores de transferencia de fase tales como por ejemplo, ácido crómico o permanganato soportado sobre un polímero, Cl2-piridina, H202 molibdato de amonio, NaBr02-CAN, NaOCl en HOAc, cromito de cobre, óxido de cobre, níquel Raney, acetato de paladio, reactivo de Meerwin-Pondorf-Verley (t-butóxido de aluminio con otra cetona) y N-bromosuccinimida. El acoplamiento de un nucleófilo de carbono organometálico, tal como por ejemplo, un reactivo Grignard, un organolitio, dialquilcobre de litio o CH3-SiMe3 en TBAF con la cetona con el solvente no prótico adecuado a una temperatura adecuada, proporciona el azúcar 2' -metilo. Por ejemplo, CH3MgBr/TiCl4 o CH3MgBr/CeCl3 se pueden utilizar como se describe en Wolfe et al . 1991. J Org. Chem . 62: 1754-1759. El azúcar metilado se puede proteger opcionalmente con un grupo protector adecuado, de preferencia con un grupo acilo, alquilo sustituido o sililo, mediante métodos bien conocidos por aquellos expertos en la técnica, como se muestra por Greene et al . Protective Groups in Organic Synthesis , John Wiley and Sons, Segunda Edición, 1991. Además de los anteriores, los azúcares 2'-C-sustituidos utilizados en los métodos sintéticos descritos en la presente son bien conocidos en la técnica y se describen, por ejemplo, por Sommadossi, et al.10 y Carrol, et al.11,12 todos se incorporan en la presente como referencia en su totalidad. El siguiente Esquema 3 describe la síntesis alternativa de un azúcar protegido que es útil para el acoplamiento a las bases descritas en la presente.

ESQUEMA 3 en donde Ph es fenilo y X' es un grupo saliente adecuado tal como por ejemplo, halo La formación del azúcar a en el Esquema 1, anterior, se lleva a cabo según se describe por Mandal, S.B., et al . , Synth . Commun . , 1993, 9, página 1239, iniciando de D-ribosa comercial. La protección de los grupos hidroxi para formar el azúcar b se describe en Witty, D.R., et al . , Tet . Lett . , 1990, 31, página 4787. Los azúcares c y d se preparan utilizando el método de Ning, J. , et al . , Carbohydr. Res . , 2001, 330, página 165, y los métodos descritos en la presente. El azúcar e se prepara al utilizar una modificación de la reacción Grignard con CH3MgBr u otro organometálico adecuado según se describe en la presente (sin que sea necesario titanio/cerio) . Por último, el azúcar halogenado (X' = halo) utilizado en la reacción de acoplamiento posterior se prepara utilizando el mismo método de protección según se utilizó para la producción del azúcar b anterior. La halogenación se describe en Seela, patente de los Estados Unidos No. 6,211,158. Posteriormente, cualquiera de los nucleósidos descritos se puede desproteger mediante métodos bien conocidos por aquellos expertos en la técnica, según se muestra por Greene et al . Protective Groups in Organic Synthesis , Jon Wiley and Sons, Segunda Edición, 1991. ün procedimiento alternativo para la elaboración de azúcares protegidos útiles para el acoplamiento con bases heterocíclicas se detalla en el siguiente Esquema 4.

ESQUEMA 4 i En el Esquema 4, la metilación del grupo hidroxi del compuesto g prosigue vía la metodología convencional para proporcionar el compuesto h. Los grupos hidroxi 2, 3 y 5 del compuesto h cada uno se protegen con grupos 2,4-diclorobencilo para proporcionar el compuesto i. La desprotección selectiva del grupo 2- (2' , 4' -diclorobencilo) en el compuesto i prosigue vía el contacto con cloruro de estaño en un solvente adecuado tal como por ejemplo, cloruro de metileno, cloroformo y lo semejante a temperaturas reducidas, por ejemplo, ~ 0 a 5°C, hasta que se completa la reacción, por ejemplo, 24-72 horas para proporcionar el compuesto j . La oxidación del grupo 2-hidroxi prosigue según se describe en la presente para proporcionar el compuesto k. La metilación también prosigue según se describe en la presente para proporcionar el compuesto 1. La preparación de los compuestos donde W, W1 o W2 es distinto de hidrógeno, utilizando los compuestos preparados tal como por ejemplo, los materiales de partida, se puede llevar a cabo utilizando los métodos descritos en los siguientes resúmenes de la preparación de fármacos : 1) Cooperwood, J.S. et al . , "Nucleoside and Nucleotide prodrugs, " en Ed(s) Chu, C.K. Recent Advances in Nucleosides (2002), 92-147. 2) Zemlicka, J. et al . , Biochimica et Biophysica Acta (2002), 158 (2-3) , 276-286. 3) Wagner, C. et al . , Medicinal Research Reviews (2002), 20(6), 417-451. 4) Meier, C. et al . , Synlett (1998), (3), 233-242. Por ejemplo, la conversión del grupo 5'-hidroxilo de los compuestos 1- [5- (alquinilo) -4-amino-pirrólo [2, 3-d] pirimidina] -2' -C-metil-ß-D-ribofuranosido a un análogo fosfo, difosfo o trifosfo se puede preparar utilizando los métodos descritos en D. W. Hutchinson, (Ed. Leroy b. Townsend) "The Synthesis, reaction and Properties of Nucleoside Mono-, Di-, Tri-, and tertaphosphate and Nucleosides with Changes in the Phosphoryl Residue," Chemistry of Nucleosides and Núcleo ides, Plenum Press, (1991) 2. La preparación de los esteres de aminoácido en el ribofuranosido se puede llevar a cabo como se muestra en el siguiente Esquema 5: ESQUEMA 5 El aminoácido Boc-protegido deseado y de preferencia un L-aminoácido y N, ' -carbonildiimidazol se disuelven en un solvente inerte tal como por ejemplo, THF. La mezcla de reacción se mantiene entre aproximadamente 20 y 40 °C durante aproximadamente 0.5 hasta 24 horas. Una solución que contiene un exceso ligero del nucleósido deseado en un solvente inerte tal como por ejemplo, DMF, se agrega a la mezcla de aminoácidos Boc-protegido y se calienta entre aproximadamente 40 hasta 80°C durante aproximadamente 2 hasta aproximadamente 24 horas. Una mezcla de isómeros estructurales se aisla y se separa utilizando técnicas convencionales tales como por ejemplo, evaporación, precipitación, filtración, cristalización, cromatografía y lo semejante. El éster deseado luego se acidifica utilizando, por ejemplo, solución TFA/DCM 1:1 v/v durante aproximadamente 0.1 hasta 1 horas entre aproximadamente 20 y 40°C y se evapora. El residuo se disuelve en agua y se mantiene entre aproximadamente 0 hasta 30 °C durante aproximadamente 2 hasta aproximadamente 24 horas. La mezcla se puede separar y el producto deseado se puede aislar mediante HPLC en RP utilizando técnicas y condiciones estándar. Mientras que el esquema anterior demuestra la producción de pro-fármacos deazapurina, este proceso se puede utilizar en cualquier compuesto de nucleósido deseado. Asimismo, el aminoácido se puede proteger con cualquier grupo protector adecuado para las condiciones de reacción. Estos grupos protectores son bien conocidos en la técnica. La preparación de otros alquilésteres sobre la ribofuranosida se pueden acompañar como se muestra en el Esquema 6 más adelante.

ESQUEMA 6 32 31 El compuesto 1 se disuelve en un solvente seco, tal como por ejemplo, piridina, y se agrega un sililhaluro, tal como por ejemplo, ter-butilclorodifenilsilano, para formar un grupo protector en la posición 5' sobre el azúcar. Se puede utilizar cualquier grupo protector que se pueda dirigir a la posición 5' y se pueda eliminar ortogonalmente al éster 3' final deseado. Esta reacción se ejecuta durante aproximadamente 4 hasta 24 horas a una temperatura entre aproximadamente 10 y 40 °C. El cloruro de acilo deseado se agrega al nucleósido protegido, el compuesto 30, y se agita durante aproximadamente 4 y hasta aproximadamente 24 horas para formar el compuesto 31. El cual se puede aislar y purificar utilizando técnicas estándar tales como por ejemplo, aislamiento, cristalización, extracción, filtración, cromatografía y lo semejante. El compuesto 32 se prepara al eliminar el grupo protector en la posición 5' . Esto se puede llevar a cabo al hacer reaccionar el compuesto 30 con una solución 1M de fluoruro de tetrabutilamonio en THF. El producto final se aisla y se purifica utilizando técnicas estándar tales como por ejemplo, aislamiento, cristalización, extracción, filtración, cromatografía y lo semejante. Mientras que el esquema anterior demuestra la producción de pro-fármacos de deazapurina, este proceso se puede utilizar en cualquier compuesto de nucleósido deseado.

UTILIDAD, PRUEBA Y ADMINISTRACIÓN Utilidad La presente invención proporciona compuestos novedosos que poseen actividad antiviral, incluyendo el virus contra la hepatitis C. Los compuestos de esta invención inhiben la replicación viral al inhibir las enzimas implicadas en la replicación, incluyendo la polimerasa de ARN dependiente de ARN. Los mismos también pueden inhibir otras enzimas utilizadas en la actividad o proliferación de los virus en la familia flaviviridae, tal como por ejemplo, HCV. Los compuestos de la presente invención también se pueden utilizar como nucleósidas de pro-fármacos. Como tales, los mismos se colocan en células y se pueden fosfolirar intracelularmente mediante cinasas para el trifosfato y luego son los inhibidores de la polimerasa (NS5b) y/o actúan como terminadores de cadena. Los compuestos de esta invención se pueden utilizar solos o en combinación con otros compuestos para el tratamiento de virus.

Administración y composición farmacéutica En general, los compuestos de esta invención se administrarán en una cantidad terapéuticamente eficaz mediante cualquiera de los modos de administración aceptados para los agentes que sirvan a utilidades similares. La cantidad real del compuesto de esta invención, es decir, el ingrediente activo, dependerá de muchos factores tales como por ejemplo, la gravedad de la enfermedad que será tratada, la edad y salud relativa del sujeto, la potencia del compuesto utilizado, la vía y forma de administración, y otros factores. El fármaco se puede administrar más de una vez al día, de preferencia una vez o dos veces al día. Las cantidades terapéuticamente eficaces de los compuestos de la Fórmula I pueden variar de aproximadamente 0.05 hasta 50 mg por kilogramo de peso corporal del recipiente al día; de preferencia aproximadamente 0.01-25 mg/kg/día, de mayor preferencia de aproximadamente 0.5 hasta 10 mg/kg/día. De esta forma, para la administración a una persona de 70 kg, la dosificación podría variar de mayor preferencia de aproximadamente 35-70 mg al día. En general, los compuestos de esta invención se administrarán como composiciones farmacéuticas mediante cualquiera de las siguientes vías: administración oral, sistémica (por ejemplo, transdérmica, intranasal o mediante supositorios), o parenteral (por ejemplo, intramuscular, intravenosa o subcutánea) . La forma preferida de administración es la oral utilizando un régimen de dosificación diaria conveniente que se pueda ajustar de acuerdo con el grado de la dolencia. Las composiciones pueden tener la forma de tabletas, pildoras, cápsulas, semisólidos, polvos, formulaciones de liberación sostenida, soluciones, suspensiones, elixires, aerosoles, o cualesquiera otras composiciones adecuadas. Otra forma preferida para administrar los compuestos de esta invención es la inhalación. La elección de la formulación depende de diversos factores tales como por ejemplo, el modo de administración del fármaco y biodisponibilidad de la sustancia farmacológica. Para el suministro vía inhalación, el compuesto se puede formular como una solución líquida, suspensiones, propelentes en aerosol o polvo en seco y se puede cargar en un aplicador adecuado para administración. Existen diversos tipos de dispositivos para inhalación farmacéutica-inhaladores nebulizadores, inhaladores de dosificación medida (MDI, por sus siglas en inglés) y inhaladores de polvo en seco (DPI, por sus siglas en inglés) . Los dispositivos nebulizadores producen una corriente de aire de alta velocidad que provoca que los agentes terapéuticos (que se formulan en una forma líquida) se rocíen como un vapor que entra en el tracto respiratorio del paciente. Los MDI típicamente son una formulación envasada con un gas comprimido. En el momento del accionamiento, el dispositivo descarga una cantidad medida del agente terapéutico mediante el gas comprimido, produciendo así un método confiable para administrar una cantidad justa del agente. El DPI suministra los agentes terapéuticos en la forma de un polvo de flujo libre que se puede dispersar en la corriente de aire inspiratoria del paciente durante la respiración por el dispositivo. Con el fin de alcanzar un polvo de flujo libre, el agente terapéutico se formula con un excipiente tal como por ejemplo, lactosa. Una cantidad medida del agente terapéutico se almacena en una forma de cápsula y se suministra con cada accionamiento. Recientemente, las formulaciones farmacéuticas se han desarrollado para fármacos que muestran biodisponibilidad eficiente con base en el principio de que la biodisponibilidad se puede aumentar al aumentar el área superficial, es decir, disminuir el tamaño de partícula. Por ejemplo, la patente de los Estados Unidos No. 4,107,288 describe una formulación farmacéutica que tiene partículas que varían de tamaño de 10 hasta 1,000 nm en las cuales el material activo se soporta sobre una matriz reticulada de macromoléculas. La patente de los Estados Unidos No. 5,145,684 describe la producción de una formulación farmacéutica en la cual la sustancia farmacológica se pulveriza a nanopartículas (tamaño de partícula promedio de 400 nm) en presencia de un modificador superficial y luego se dispersa en un medio líquido para proporcionar una formulación farmacéutica que exhibe una biodispsnibilidad remarcadamente alta. Las composiciones constan en general de un compuesto de la Fórmula I en combinación con al menos un excipiente farmacéuticamente aceptable. Los excipientes aceptables no son tóxicos, son auxiliares de la administración, y no afectan adversamente el beneficio terapéutico del compuesto de la Fórmula I. Este excipiente puede ser cualquier sólido, líquido, semisólído o, en el caso de una composición en aerosol, un excipiente gaseoso que en general está disponible para alguien con experiencia en la técnica. Los excipientes farmacéuticos sólidos incluyen almidón, celulosa, talco, glucosa, lactosa, sacarosa, gelatina, malta, arroz, harina, yeso, gel de sílice, estearato magnésico, estearato de sodio, monoestearato de glicerol, cloruro de sodio, leche descremada deshidratada y lo semejante. Los excipientes líquidos y semisólidos se pueden seleccionar de glicerol, propilenglicol, agua, etanol y diversos aceites, incluyendo aquellos de petróleo, animales, vegetales o de origen sintético, por ejemplo, aceite de cacahuete, aceite soya, aceite mineral, aceite de ajonjolí, etc. Los portadores líquidos preferidos, en particular para soluciones inyectables, incluyen agua, solución salina, dextrosa acuosa y glicoles . Los gases comprimidos se pueden utilizar para dispersar un compuesto de . esta invención en forma de aerosol. Los gases inertes adecuados para este fin son nitrógeno, dióxido de carbono, etc. Otros excipientes farmacéuticos adecuados y sus formulaciones se describen en Remington's Pharmaceutical Sciences, editado por E. W. Martin (Mack Publishing Company, 18ava ed. , 1990). La cantidad del compuesto en una formulación puede variar dentro de la variación total empleada por aquellos expertos en la técnica. Típicamente, la formulación contendrá, sobre una base porcentual en peso (% en peso), de aproximadamente 0.01-99.99% en peso de un compuesto de la Fórmula I con base en la formulación total, con el resto que es uno o más excipientes farmacéuticos adecuados. De preferencia, el compuesto está presente a un nivel de aproximadamente 1-80% en peso. Las formulaciones farmacéuticas representativas que contienen un compuesto de la Fórmula I se describirán más adelante. Adicionalmente, la presente invención se dirige a una composición farmacéutica que comprende una cantidad terapéuticamente eficaz de un compuesto de la presente invención en combinación con una cantidad terapéuticamente eficaz de otro agente activo contra el virus con ARN dependiente del ARN y, en particular, contra el HCV. Los agentes activos contra el HCV, incluyen de manera enunciativa, ribavirina, levovirina, viramidina, timosina alfa-1, inhibidor de la proteasa serina NS3 del HCV, o un inhibidor para inosina monofosfato deshidrogenada, interferón-a, interferón-a pegilado (peginterferón-a) , una combinación de interferón-a y ribavirina, una combinación de peginterferón-a y ribavirina, una combinación de interferón-a y levovirina, y una combinación de peginterferón-a y levovirina. El interferón-a incluye, de manera enunciativa, el interferón-a2a recombinante (tal como por ejemplo, ROFERON interferón disponible de Hoffman-LaRoche, Nutley, NJ) , el interferón-a2b (tal como por ejemplo, Intron-A interferón disponible de Schering Corp., Kenilworth, New Jersey, USA), un interferón generalizado, y un producto de interferón-a purificado. Para un análisis de la ribavirina y su actividad contra el HCV, véase J.O. Saunders y S.A. Raybuck, "Inosine Monophosphate Dehydrogenase : Consideration of Structure, Kinetics and Therapeutic Potential," Ann . Rep. Med. Chem . , 35:201-210 (2000).

EJEMPLOS Los siguientes ejemplos, así como también, a lo largo de la solicitud, las siguientes abreviaturas tienen los siguientes significados. Si no se definen, los términos tienen sus significados en general aceptados.

AcOH o HOAc = ácido acético Ac20 = anhídrido acético Ar = arilhidrógeno atm = atmósfera CAN = nitrato de amonio sérico bs = singlete amplio cm = centímetro d = doblete dd = doblete de dobletes dt = doblete de tripletes DBU = 1, 8-diazabiciclo [5.4.0] undec-7-eno DCB = 2, 4-diclorobencilo DCM = diclorometano DCC = dicíclohexilcarbodíimida DMEM = medio eagle mínimo en Delbecco's DMF = dimetilformamida DMSO = dimetiisulfóxido DTT = ditiotreitol EDTA = ácido etilendiamintetraacético Fmoc = cloroformiato de 9-fluorenilmetilo eq. o eq = equivalentes g = gramo h o hr = hora HCV = virus de la hepatitis C HPLC = cromatografía en fase líquida de alta eficacia IC50 = concentración inhibitoria a 50% de inhibición IPTG = ß-D-1-tiogalactopiranosido de isopropilo IU = unidades internacionales kg = kilogramo L = litros m = multiplete M = molar Me = metilo mg = miligramo min = minuto mL = mililitro mm = milímetros mM = milimolar mmol = milimol MS = espectro másico mp = punto de fusión ng = nanogramos nm = nanómetros nM = nanomolar NMR = resonancia magnética nuclear NTA = ácido nitrilo triacético NTP = nucleótido trifosfato HPLC en RP = cromatografía líquida de alta eficacia en fase inversa = singlete t = triplete TBAF = fluoruro de tetratubilamonio TC50 = concentración tóxica a 50% de toxicidad celular TEA TFA = ácido trifluoroacético THF = tetrahidrofurano Tic o TLC = cromatografía en capa fina UTP = trifosfato de uridina UV = ultravioleta µL = microlitros µg = microgramos µM = micromolar v/v = volumen a volumen Wt% = por ciento en peso Además, toda la reacción y temperaturas de fusión se presentan en grados Celsius a menos que se reporte de otra manera y todos los porcentajes y por cientos molares nuevamente a menos que se indique de otra manera . En los siguientes ejemplos, así como también, donde sea a lo largo de esta solicitud, los compuestos reivindicados emplean el siguiente sistema de numeración: Ejemplo 1 Síntesis del intermediario de azúcar l-metoxi-2-metil-3, 5- di-O- (2, 4-diclorobencil) -D-ribofuranosa (Compuesto 8) El compuesto del título se sintetizó utilizando el método descritos en Marin, P . ; Helv. Chím . Acta, 1995, 78, 486 y Carroll, et al. Solicitud internacional de patente WO 02/057287 A2.

Ejemplo 2 Preparación de 7- (2' -C-metil-ß-D-ribofuranosil) -4-amino-5- (etin-1-il) -pirrólo ["2, 3-d] pirimidina (Compuesto 1) Paso 1: 4-Cloro-5-iodo-7H-pirrolo[23-d]pirimidina (Compuesto 3) Se disolvieron 4-cloro-7H-pirrolo [2, 3-d] pirimidina 10.75g (70 mmol) (Toronto Research Chemicals, Inc) y N-iodosuccinimida (16.8g, 75 mmol) en 400 mL de DMF seca y se dejaron a temperatura ambiente en la oscuridad durante noche. El solvente se evaporó. El residuo amarillo se suspendió en solución al 10% caliente de NaS03, se filtró, se lavó dos veces con agua caliente y se cristalizó a partir de etanol para proporcionar 14.6 g (74.6%) del compuesto del título como cristales blanquecinos. El licor madre se evaporó hasta 1/3 del volumen y se cristalizó nuevamente a partir de etanol para proporcionar 2.47 g (12.3%) del producto del título. Rendimiento total se cerró al 100%; P.f. 212-214 (descomposición) UV ?max: 307, 266, 230, 227 nm (metanol); MS: 277.93 (M-H), 313 (M+Cl) ; XH-NMR (DMS0-d6) : 12.94 (s, 1H, NH) , 8.58 (s, ÍH, H- 2) , 7.94 (s, ÍH, H-8) .

Paso 2: 7- (2' -metil-3' ,5' -bis-O- (2 ,4-diclorobencil) -ß-D-ribofuranosil) -4-cloro-5-iodo-pirrolo [2 , 3-d]pirimidina (Compuesto 4) La base (Compuesto 3) , obtenida anteriormente (33.5 g, 120 mmol) se suspendió en 1000 mL de CH3CN. Se agregó porciones de NaH (5 g, 125 mmol 60% en aceite) y la mezcla de reacción se agitó a temperatura ambiente hasta que se disolvió en NaH (aproximadamente 2 hora) . Se disolvió l-0-metoxi-2-metil-3, 5-di-O- (2, 4-diclorobencil) -D-ribofuranosa (Compuesto 8, véase el Ejemplo 1 anterior) (33 g, 60 mmol) en 1000 L de DCM y se enfrió a 4°C en un baño de agua helada. Se burbujeó HBr-gas a través de la solución de DCM durante aproximadamente 30 min. La reacción se supervisó mediante TLC mediante la desaparición del azúcar de partida (éter/hexano 1:9 v/v). Al término de la reacción, el solvente se evaporó con un baño a una temperatura no mayor a 20 °C y se mantuvo durante 30 min. a vacío profundo para eliminar todas las trazas de HBr. Una solución del preformado de sal de sodio de base 3 se filtró y el filtrado se agregó al componente de azúcar rápidamente. La reacción se mantuvo durante la noche a temperatura ambiente, se neutralizó con HCl/dioxano y se evaporó. Se agregó tolueno (300 mL) para formar un precipitado color canela claro de una base heterocíclica que se filtró. El filtrado se concentró a un volumen de 150 L y se cargó sobre el filtro de vidrio 2 L con gel de sílice. El filtro se lavó cbn 1 L en tolueno, el producto se eluyó con acetato de etilo al 10% en tolueno (aproximadamente 9 L del solvente) . El solvente se evaporó y el residuo se cristalizó a partir de etanol para proporcionar 27.5 g (55.6%) del nucleósido del título . P.f. 67-70; 2H-NMR (DMSO-d6) : 8.66 (s, ÍH, H-2) , 8.07 (s, 1H) , 7.62-7.34 (m, 6H, diclorofenilo) , 6.22 (s, 1H, H-l'), 5.64 (s, ÍH, H-3'), 4.78-4.55 ( , 4H, CH2-bencil, 2'- OH, H-4'), 4.20 (s, 2H, CH2~bencil) , 3.97-3.93 y 3.78- 3.75 (dd, 1H, H-5' ) , 0.92 (s, 3H, 2'metil) MS: 743.99 (M+H); Paso 3. 7- (2' -metil-ß-D-ribofuranosil) -4-cloro-5-iodo-pirrolo [2 ,3-d]pirimidina (compuesto 5) A una solución del compuesto 4 del paso anterior (27.5 g) en DCM (800 mL) a -70°C se agregó tricloruro de boro (1M en DCM, 400 mL) gota a gota. La mezcla se agitó a -70 °C durante 2.5 horas y adicionalmente durante la noche a -20 °C. La reacción se inactivo mediante la adición de metanol/DCM (500 mL, 1:1) y la mezcla resultante se agitó a -20°C durante 30 min., luego se neutralizó mediante amoniaco acuoso a la misma temperatura. El sólido se filtró y se lavó 3 veces con metanol/DCM (1:1 v/v). Los filtrados se combinaron con 200 L de gel de sílice y se evaporaron a sequedad. El residuo seco se distribuyo entre 1500 L de acetonitrilo y 300 mL de hexano. El acetonitrilo se recolectó, se extrajo 3 veces con hexano y se evaporó. El residuo se disolvió en acetato etilo (600 L) y se lavó 5 veces con agua, salmuera, se secó sobre sulfato de sodio y se evaporó. El residuo se purificó a partir de una pequeña cantidad de base sin reaccionar mediante cromatografía instantánea sobre gel de sílice en metanol/acetona 1:2 v/v (aproximadamente 3 litros) . El solvente se evaporo y el residuo se cristalizó a partir de acetona/hexano para proporcionar 12.9 g (82%) del nucleósido del título 5. XH-NMR (DMSO-d6) : 8.84 (s, 1H, H-2) , 8.20 (s, 1H, H- 8), 6.21 (s, 1H, H-l), 4.00-3.60 (m, azúcar), 0.84 (s, 3H, 2' -metilo) MS: 426.26 (M+H) P.f. 182-185 Paso 4. 7- (2' -metil-ß-D-ribofuranosil) -4-amino-5-iodo-pirrolo [2 , 3-d]pirimidina (Compuesto 6) El nucleósido 5 (1.5 g, 3.5 mmol) preparado anteriormente se trató con amoniaco líquido a 85 °C durante 24 horas en un reactor metálico a presión. Después de la evaporación del amoniaco, el residuo crudo se disolvió en metanol, se agregó gel de sílice (aproximadamente 20 L) y se concentró a sequedad. El producto que porta el gel de sílice luego se cargó sobre una columna de gel de sílice (5 x 10 cm) en acetona y luego se eluyó, recolectando fracciones de 50 L. Las fracciones 2-8 contuvieron el compuesto del título. La acetona se evaporó y el residuo se cristalizó a partir de metanol/acetonitrilo para proporcionar 1.2 g (84%) del nucleósido del título. P.f. 220-222 (descomposición) ^- MR (DMSO-d6) : 8.20 (s, ÍH, H-2) , 7.80 (s, 1H, H- 8), 6.80-6.50 (bs, 2H, NH2) , 6.09 (s, 1H, H-l), 5.19 (t, 1H, azúcar), 5.13-5.11 (m, 2H, azúcar), 4.00-3.70 (m, 3H, azúcar), 3.60-3.20 (m, ÍH, azúcar), 0.84 (s, 3H, 2' -metilo) . MS 407.32 (M+H) .

Paso 5. 7- (2' -metil-ß-D-ribofuranosil) -4-amino-5-(trimetilsilaniletin-1-il) -pirrólo [2 , 3-d]pirimidina (Compuesto 7) El aminonucleósido 6, sintetizado en el paso anterior, (1.7 g, 4.2 mmol) se disolvió en una mezcla de 12 mL de DMF seca y 28 mL de THF seco. Se agregaron trietilamina (3.6 mmol, 0.5 mL) y Cul (1 mmol, 80 mg) y el matraz se rellenó con argón. Se agregaron éster de titanio (trifenilfosfina) paladio (0) (0.04 mmol, 46 mg) seguido por último por (trimetilsilil) acetileno (1.5 eq. ) y la mezcla se agitó bajo argón durante 20 horas. El solvente luego se evaporó, el residuo se disolvió en acetona y luego se filtró a través de gel de sílice (5 x 10 cm) en un embudo con filtro de vidrio. La acetona se evaporó, el residuo se disolvió en acetonitrilo y se filtró nuevamente a través de la columna de gel de sílice del mismo tamaño con elusión utilizando acetonitrilo. El acetonitrilo se concentró a un pequeño volumen, aproximadamente 10 volúmenes de éter se agregaron y la solución se sometió a ultrasonido durante 5 min. Se formaron cristales blancos del compuesto del título, proporcionando 0.8 g del compuesto 7 (71%). P.f. 188-191 (descomposición) aH-NMR (DMSO-d6) : 8.17 (s, ÍH, H-2) , 7.92 (s, ÍH, H- 8), 7.20-6. 80 (t, 2H, NH2) , 5.83 (s, 1H, H-l), 3.75- 3.20 (m, azúcar), 0.45 (s, 3H, 2' -metilo), 0 (s, 9H, Si(CH3)3) .

Paso 6. Preparación de compuesto del título: 7-(2'-metil-ß-D-ribofuranosil) -4-amino-5- (etin-1-il) -pirrólo [2 , 3-d]pirimidina (Compuesto 1) El nucleósido sililado 7 (1 g, 2.6 mmol) se -disolvió en 10 mL de metanol, se agregaron 10 L de NH0H y la mezcla se dejó a temperatura ambiente durante 1 hora. El solvente se evaporó, el residuo se disolvió en metanol y se co-evaporó con gel de sílice (30 L) . La sílice seca se cargó sobre el filtro de vidrio con gel de sílice (4 x 6 cm) , el compuesto se eluyó con acetona. El solvente se evaporo y el residuo se cristalizó a partir de metanol/acetonitrilo, rendimiento de 0.5 g (62%); P.f. 209-219 (descomposición); MS 305.13 (M+H) ; ^-NMR (DMSO-d6) : 8.10 (s, 1H, H-2) , 7.94 (s, 1H, H- 8), 6.08 (s, ÍH, H-l), 5.32-5.13 (m, 3H, azúcar), 3.96-3.62 (m, 4H, azúcar), 0. 68 (s, 3H, metilo).

Ejemplo 3 Preparación de la 7- (2' -metil-3' -O-L-valina éster-ß-D- ribofuranosil) -4-amino-5- (etin-1-il) -pirrólo [2, 3- d] pirimidina (22a) La síntesis de este compuesto se muestra en general en el Esquema 5. Se disolvieron L-valina Boc-protegida (271 mg, 1.25 mmol) y N,N' -carbonildiimidazol (203 mg, 1.25 mmol) en 5 ml de THF y se mantuvieron a temperatura ambiente durante 2 horas. Se agregó una solución del compuesto 1 (300 mg, 1 mmol) en 5 ml de DMF y la mezcla se calentó a 65 °C durante la noche. El análisis mediante HPLC de la mezcla de reacción demostró la presencia de un nucleósido de partida y el producto 5' -monoacilado (compuesto 21a). El derivado de Boc-Valina blanco (compuesto 21a) se aisló mediante HPLC EN RP preparativa de 0 a 100% de B, A-0.1% de TFA en agua, B-0.1% de TFA en CH3CN. El rendimiento fue del 40% (la mezcla de dos isómeros 1:5). Isómero mayor: MS 504 (M+l) ; NMR (CD3OD) : d 8.11 y 7.93 (s, ÍH, base), 6.23 (s, 1H, H-l), 5.44 (d, 1H, H-3' ) , 4.27 (dt, 1H, H-4) , 4.02- 3.96 y 3.75-3.70 (dd, ÍH, H-5'a y H-5'b), 3.42 (d, ÍH, a-H), 2.21 (m, ÍH, (3-H) , 0.9 (m, 9H, Boc), 0.89 (s, 3H, 2'-CH3) .

Isómero menor: MS 504 (M+l) ; NMR (CD3OD) : d 8.92 y 8.10 (s, 1H, base), 6.28 (s, 1H, H-l'), 5.53 (d, ÍH, H-3' ) , 4.32 (dt, 1H, H-4) , 4.10- 4.05 y 3.80-3.74 (dd, ÍH, H-5'a y H-5'b), 3.43 (d, 1H, a-H), 2.21 (m, 1H, (3-H) , 1.3-0.9 (m, 15H, Boc y Val- CH3) , 0.89 (s, 3H, 2'-CH3) . El éster proveniente del paso anterior se trató con TFA/DCM 1:1 v/v durante 20 min a temperatura ambiente y se evaporó. El residuo se disolvió en agua y se dejó a 10 °C durante la noche. La mezcla se evaporó mediante HPLC en RP de 0 hasta 100% de B, los amortiguadores son como se describieron anteriormente. El compuesto con el tiempo de retención más prolongado se recolectó, se evaporó y se identificó como el isómero 3' del nucleósido 22a. MS 404.14 (M+l) ; UV (pHl) : 251nm, 282nm; NMR (CD3OD) : d 8.17 y 7.87 (s, 1H, base), 6.21 (s, 1H, H-l), 4.72 (d, 1H, a-H), 4.12-3.82 (m, 4H, azúcar), 2.28 (m, ÍH, ß-H) , 1.08 (dd, 6H, Val-CH3) , 0.84 (s, 3H, 2'-CH3). Después de 3 días de almacenamiento en condiciones secas o unas cuantas horas en solución, el compuesto se transformó en la mezcla de dos isómeros. ?jemplo 4 Síntesis de 7- ( 2 ' -metil-3' -O-L-alanina éster-ß-D- ribofuranosil) -4-amino-5- (etin-1-il) -pirrólo [2, 3-d] pirimidina (22b) El compuesto 22b se sintetizó según se describió anteriormente para 22a utilizando la L-alanina Boc-protegida; MS 376.17 (M+l) ; NMR (CD3OD) : d 8.61 y 8.28 (s, 1H, base), 6.38 (s, 1H, H-l), 4.12 (m, 5H, un-H y azúcar), 1.71 (d, 3H, Ala- CH3) , 1.60 (m, ÍH, (3-H) , 0.85 (s, 3H, 2'-CH3). Después de 3 horas de almacenamiento en condiciones secas o 30 min. de almacenamiento en solución, el compuesto 22b se transformó en la mezcla de dos isómeros.

Ejemplo 5 Síntesis de 7- (2' -metil-3'-O-trimetilacetiléster-ß-D- ribofuranosil-4-amino-5- (etin-1-il) -pirrólo [2, 3- d] pirimidina (32 en donde alquilo es t-butilo) El compuesto 1 (150 mg, 0.5 mmol) se disolvió en 10 mL de piridina seca. Luego se agregó ter-butilclorodifenilsilano (274 mL, 1 mmol) y la reacción se mantuvo durante 16 horas a temperatura ambiente. Se agregó cloruro de trimetilacetilo a la mezcla de reacción (90 µL 0.75 mmol) y la mezcla se agitó durante 16 horas. La mezcla se disolvió en 70 L de cloroformo y se extrajo con agua (30 L) , 10% de NaHC03 (30 mL) , se secó sobre Na2S0 , se evaporó y se co-evaporó con tolueno para eliminar las trazas de piridina. El aceite resultante se disolvió en 20 mL de THF y se agregaron 2 L de una solución 1M de fluoruro del tetrabutilamonio en THF. En 16 horas el solvente se evaporó, y el aceite resultante se disolvió en 10 mL de DMF y se separó mediante HPLC en RP preparativa de 0 a 100% de B en 20 min, F = 10 ml/min. Columna Phenominex 250 x 20 mm, Synergi 4u, Hidro PP 80A. Amortiguador A - agua, amortiguador B - CH3CN. El tiempo de retención para el compuesto blanco fue de 15 min. Se recolectaron las fracciones correspondientes, se evaporaron para proporcionar una espuma color canela claro. MS 389.10 (M+l) ; H1NMR (DMSO-d6) : 8.20 y 7.80 (s, 1H, base), 6.04 (s, 1H, H-l'), 3.92-3.80 (m, 6H, azúcar), 3.40 (s, 9H, CH3-acetilo) , 0.65 (s, 3H, CH3-2').

Ejemplo 6 Síntesis de 5' -trifosfato de 7- (2 ' -metil-ß-D-ribofuranosil) - 4-amino-5- (etin-1-il ) -pirrólo [2 , 3-d] pirimidina La 7- ( 2 ' -metil-ß-D-ribofuranosil ) -4-amino-5- (etin-1-il) -pirrólo [2, 3-d] pirimidina 5' (0.1 mmol) se coevaporó 3 veces con DMF seca, se disolvió en 2 L de PO (OMe) 3, se enfrió a 5°C y se agregaron P0C13 (35 µL) y una esponja protónica (64 mg) . La mezcla se agitó a 5°C durante 3 h, luego se agregó pirofosfato de tetrabutilamonio (2 mmol, 4 mL de solución 0.5M en DMF) y la mezcla se mantuvo durante 2 h más a la misma temperatura. La reacción se inactivo con amortiguador (pH 7.5) (Et3N)HC03 seguido por agua. Los solventes se evaporaron, el residuo se disolvió en metanol (3 mL) y se precipitó con éter (30 mL) . El residuo sólido se purificó mediante HPLC de intercambio iónico (IE) en una columna Vydac (250 x 10 mm) 0 a 100% B. El amortiguador A fue NaH2P04/Na2HP04, 25 mm, pH 3, el amortiguador B fue NaH2P04/Na2HP04, 310 mm, pH 3. El último pico se recolectó, se concentró hasta el volumen de 5 mL y se volvió a purificar en HPLC en RP sobre una columna Pheno inex (250 x 20 mm) en un gradiente de 0 hasta 100% del amortiguador B en el amortiguador A. El amortiguador A fue una solución acuosa al 0.5 M de acetato de trietilamonio, el amortiguador B fue una solución de acetonitrilo 0.5 M de acetato de trietilamonio. Las fracciones que contuvieron el compuesto del título, se combinaron, se evaporaron, se co-evaporaron 3 veces con agua y se liofilizaron a partir de agua; MS: 542.99 (M-H); 270.99 (1/2M-H) ; UV (0.1% TFA) ?max: 212.24, 235.62, 277.98; aH-NMR: 8.01 y 7.59 (s, 1H cada uno, base), 6.00 (s, 1H, H-l), 4.32-4.00 (m, 4H, azúcar), 3.55 (s, 1H, etinil), 0.65 (s, 3H, metil-2' ) ; 31P-NMR: -8.60 (d, 1P, P-a),-10.12 (d, 1P, P-?),-21.42 (t, 1P, P-ß) . ?jemplo 7 Síntesis de 5' -fosfato 7- (2' -metil-ß-D-ribofuranosil) -4- amino-5- (etin-1-il) -pirrólo [2, 3-d] pirimidina La 7- (2' -metil-ß-D-ribofuranosil) -4-amino-5-(etin-1-il) -pirrólo [2, 3-d] pirimidina 5' (0.1 mmol) se coevaporó 3 veces con DMF seca, se disolvió en 2 L de PO (OMe) 3, se enfrió a 5°C y se agregaron P0C13 (35 µL) y una esponja protónica (64 mg) . La mezcla se agitó a 5°C durante 3 h. La reacción se inactivo con amortiguador (Et3N)HC03 (pH 7.5) seguido con agua. Los solventes se evaporaron, el residuo se disolvió en metanol (3 mL) y se precipitaron con éter (30 mL) . El residuo sólido se purificó mediante HPLC de intercambio iónico en una columna Vydac (250 x 10 mm) 0 a l00% B. El amortiguador A fue NaH2P04/Na2HP0 25 mm, pH 3, el amortiguador B fue NaH2P04/Na2HP04 310 mm, pH 3. El último pico se recolectó, se concentró hasta el volumen de 5 mL y se volvió a purificar sobre HPLC en RP sobre una columna Phenominex (250 x 20 mm) en un gradiente de 0 a 100% del amortiguador B en el amortiguador A. El amortiguador A fue una solución acuosa a 0.5 M de acetato de trietilamonio, el amortiguador B fue una solución de acetonitrilo 0.5 M de acetato de trietilamonio. Las fracciones que contuvieron el compuesto del título, se combinaron, se evaporaron, se co-evaporaron 3 veces con agua y se liofilizaron a partir del agua; MS: 384.12 (M-H) ; Hl-NMR: 7.97 y 7.67 (s, ÍH cada uno, base), 6.12 (s, 1H, H-l'), 4.10-3.85 (m, 4H, azúcar), 3.15 (s, ÍH, etinil), 0.87 (s, 3H, metil-2' ) ; 31P-NMR: 5.02 (s, 1P) .

Ejemplo comparativo A Preparación de 7- (2' -C-metil-ß-D-ribofuranosil) -4-amino-5- (propin-1-il) -pirrólo [2, 3-d] pirimidina A una solución del producto proveniente del Paso 4, Ejemplo 2 (50.0 mg, 0.123 mmol) en 3.2 mL de THF-DMF (2:1 y/v) se agregó Cul (9.2 mg, 0.048 mmol), TEA (16 µL, 0.113 mmol), éster de titanio (trifenilfosfina) paladio (0) (14.0 mg, 0.012 mmol) y la solución se desgasificó con argón. La solución se refrescó a 0°C y se burbujeo gas propino a través de la solución durante 1 min. La reacción luego se dejó calentar lentamente a temperatura ambiente durante 4 horas. El procedimiento para cargar la reacción con propino se repitió dos veces más hasta que ya no se observaron trazas del material de partida mediante TLC. La mezcla de reacción se concentró in vacuo, se extrajo en DMF y se purificó mediante HPLC en RP sobre una columna Phenominex (250 x 20 mm) utilizando un gradiente de acetonitrilo en agua de 0 hasta 50% durante 30 min a 10 mL/min para proporcionar 26 mg (66%) del compuesto del título; 1H-NMR (CD30D) : 8.07 (s, ÍH) , 7.67 (s, 1H) , 6.19 (s, 1H) , 4.11-3.84 (m, 4H, azúcar), 2.09 (s, 3H) , 0.82 (s, 3H) ; MS: 319.11 (M+H) .

Ejemplo comparativo B Preparación de 7- (2' -C-metil-ß-D-ribofuranosil) -4-amino-5- (butin-1-il) -pirrólo [2, 3-d] pirimidina A una solución del producto del Paso 4, Ejemplo 2 (50.0 mg, 0.123 mmol) en 3.2 mL de THF-DMF (2:1 v/v) se agregó Cul (9.2 mg, 0.048 mmol), TEA (16 µL, 0.113 mmol), éster de titanio (trifenilfosfina) paladio (0) (14.0 mg, 0.012 mmol) y la solución se desgasificó con argón. La solución se enfrió a 0°C y se burbujeó gas butino a través de la solución durante 1 min. La reacción luego se dejó calentar lentamente a temperatura ambiente durante 4 horas. La mezcla de reacción se concentró in vacuo, se extrajo en DMF y se purificó mediante HPLC en RP sobre una columna Phenominex (250 x 20 mm) usando un gradiente de acetonitrilo en agua de 0 a 50% durante 30 min a 10 mL/min para proporcionar 13 mg (32%) del compuesto del título; ^•H-NMR (CD3OD) : 8.08 (s, ÍH) , 7.67 (s, 1H) , 6.19 (s, 1H) , 4.11-3.80 (m, 4H, azúcar), 2.48 (q, 2H) , 1.26 (t, 3H) , 0.83 (s, 3H) ; MS: 333.13 (M+H) .

Ejemplo comparativo C Preparación de 7- (2' -C-metil-ß-D-ribofuranosil) -4-amino-5- (3-hidroxipropin-l-il) -pirrólo [2, 3-d] pirimidina Se preparó una solución del producto del Paso 4, Ejemplo 2 (50.0 mg, 0.1231 mmol) en 5 ml de dimetilformamida. La solución se desgasificó mediante burbujeo con argón mientras se estaba sometiendo a ultrasonido durante 5 min. A esta solución se agregó trietilamina (16.0 µL, 0.1145 mmol), yoduro de cobre (9.4 mg, 0.0492 mmol), y éster de titanio (trífenilfosfina) paladio (0) (14.2 mg, 0.0123 mmol). Después, se agregó propargiloxitrimetilsilano (113.7 µL, 0.7386 mmol). La mezcla se agitó bajo argón durante 4 horas. Al terminar, la mezcla se concentró in vacuo. La reacción cruda se disolvió en 1 mL de dimetilformamida, se diluyó a 50 mL con agua desionizada y luego se lavó a través de una almohadilla de celite. La solución se concentró nuevamente a sequedad, luego se volvió a disolver en 1.0 mL de dimetilformamida y 3.5 mL de agua. El compuesto del título se purificó mediante HPLC; XH-NMR (CD3OD) : 8.10 (s, 1H) , 7.80 (s, 1H) , 6.21 (s, 1H) , 4.44 (d, 2H), 4.11-3.82 (m, 4H) , 0.83 (s, 3H) . MS: 335.13 (m/z).

Ejemplo comparativo D Preparación de 7- (2' -C-metil-ß-D-ribofuranosil) -4-amino-5- (3-aminopropin-l-il) -pirrólo [2, 3-d] pirimidina Paso 1. 9H-fluoren-9-ilmetiléster del ácido prop-2-inil-carbámico: A una solución de propargilamina (250 µL, 3.645 mmol) en diisopropiletilamina (1.273 L, 7.290 mmol), se agregó cloroformiato de 9-fluorenilmetilo (Fmoc) , se disolvió en 7 mL de dimetilformamida. La mezcla se agitó bajo argón durante la noche a temperatura ambiente. Después de terminar, la solución se redujo in vacuo . Se realizó un procedimiento de extracción con acetato de etilo/agua para aislar el producto; MS: 278.10 (m/z).

Paso 2. 7- (2' -C-metil-ß-D-ribofuranosil) -4-amino-5- (3-aminopropin-1-il) -pirrólo [2, 3-d] pirimidina: Se preparó una solución del producto del Paso 4, Ejemplo 2 (124.5 mg, 0.3065 mmol) en 10 mL de dimetilformamida que se desgasificó mediante burbujeo con argón mientras se estaba sometiendo a ultrasonido durante 5 min. A esta solución se agregó trietilamina (39.7 µL, 0.2850 mmol), yoduro de cobre (23.5 mg, 0.1226 mmol), y éster de titanio (trifenilfosfina) paladio (0) (35.4 mg, 0.0307 mmol). Se agregó Fmoc-propargilamina del Paso 1 (465.9 mg, 0.1. 680 mmol) y la mezcla se agitó bajo argón durante 4 h. Al terminar, la mezcla se concentró in vacuo. La reacción cruda se disolvió en 1 L de DMF, y luego se diluyó a 50 L con agua desionizada y luego se lavó a través de una almohadilla de celite. La solución se evaporó a sequedad y se volvió a disolver en 1.0 L de DMF y 3.5 mL de agua. El compuesto del título se purificó mediante por HPLC; aH-NMR (DMF-d7) : 8.17 (s, ÍH) , 8.08 (s, 1H) , 6.28 (s, 1H) , 5.80-5.32 (m, 3H) , 4.19-3.82 ( , 4H) , 3.37-3-30 (m, 2H) , 0.83 (s, 3H) . MS: 334.15 (m/z).

Ejemplos biológicos Ejemplo 1. Actividad Anti-hepatitis C Los compuestos pueden exhibir una actividad anti-hepatitis C al inhibir la polimerasa del HCV, inhibiendo otras enzimas necesarias por el ciclo de replicación, o mediante otras trayectorias. Ya se han publicado varios análisis para valorar estas actividades. Un método general que valora el aumento total del virus de HCV en cultivos se expone en la patente de los Estados Unidos No. 5,738,985 de Miles et al . Los análisis in vitro se han reportado en Ferrari et al . Jnl . de Vir. , 73:1649-1654, 1999; Ishii et al . , Hepatology, 29:1227-1235, 1999; Lohmann et al . , Jnl of Bio . Chem . , 274:10807-10815, 1999; y Yamashita et al . , Jnl . Bio . Chem . , 273:15479-15486, 1998. La WO 97/12033, presentada el 27 de septiembre de 1996, por Emory University, que lista a C. Hagedorn y A. Reinoldus como inventores que reivindica la prioridad de la solicitud de patente provisional de los Estados Unidos No. de serie 60/004,383, presentada en septiembre de 1995, describe un análisis de polimerasa del HCV que se puede utilizar para evaluar la actividad de los compuestos descritos en la presente. Otro análisis de polimerasa del HCV se había reportado por Bartholomeusz, et al . , Hepatitis C Virus (HCV) RNA polymerase assay using cloned HCV non-structural proteins; Antiviral Therapy 1996: 1 (Supp 4) 18-24. Las selecciones que miden la reducción en la actividad de quinasa de los fármacos de HCV se exponen en la patente de los Estados Unidos No. 6,030,785, de Katze et al . , la patente de los Estados Unidos No. 6,228,576, de Delvecchio, y la patente de los Estados Unidos No. 5,759,795 de Jubin et al . Las selecciones que miden la actividad inhibidora de proteasa de los fármacos de HCV propuestos se exponen en la patente de los Estados Unidos No. 5,861,267 de Su et al . , la patente de los Estados Unidos No. 5,739,002 de De Francesco et al . , y la patente de los Estados Unidos No. 5,597,691 de Houghton et al .

Ejemplo 2. Análisis con replicones Se utilizó una línea celular, ET (Huh-lucubineo- ET) para seleccionar los compuestos de la presente invención por la polimerasa de ARN dependiente del ARN del HCV. La línea celular ET se transfectó establemente con transcripciones de ARN que albergan un I389luc-ubi-neo/NS3-3'/ET; el replicón con la proteína de fusión de luciferasa-ubiquitina-neomicina fosfotransferasa de luciérnaga y EMCV-IRES que conduce a la poliproteína NS3-5B que contuvo las mutaciones de adaptación del cultivo celular (E1202G; T1280I; K1846T) (Krieger al al, 2001 y sin publicar) . Las células ET se desarrollaron en DMEM, suplementadas con suero fetal de ternero al 10%, Glutamina 2 mm, Penicilina (100 IU/mL) /Estreptomicina (100 µg/mL), aminoácidos no esenciales Ix, y 250 µg/mL de G418 ("Geneticina") . Los mismos estuvieron disponibles a través de Life Technologies (Bethesda, MD) . Las células se colocaron en placas a 0.5-1.0 x 104 células/cavidad en placas de 96 cavidades y se incubaron durante 24 hrs antes de agregar los análogo de nucleósido. Luego los compuestos se agregaron a las células hasta alcanzar una concentración final de 5 ó 50 µM. La actividad de luciferasa se medirá 48-72 horas después de agregar un amortiguador de lisis y el sustrato (número de catálogo Glo-lysis amortiguador E2661 y el sistema de leuciferasa Bright-Glo E2620 Promega, Madison, Wl) . Las células no serán muy confluyentes durante el análisis. La inhibición porcentual de la replicación se graficará con relación a ningún control del compuesto. Bajo las mismas condiciones, se determinarán la citotoxicidad de los compuestos utilizando un reactivo de proliferación celular, WST-1 (Roche, Alemania) . Los compuestos que muestran actividades antivirales, pero no citotoxicidades significativas se escogerá a partir de IC50 y TC50. Para estas determinaciones, se utilizaron 6 diluciones de cada compuesto. Los compuestos se diluyeron típicamente 3 veces hasta abarcar una variación de concentración de 250 veces. Los valores IC50 y TC50 se calcularon al ajustar el % de inhibición en cada concentración de la siguiente ecuación: % de inhibición = 100%/ [IC50/ [I] ) b+l ] en donde b es el coeficiente Hill: Los datos para los compuestos de esta invención y para los mismos compuestos homólogos y análogos de esta invención se proporcionan en las Tablas II y III siguientes .

Para formar el nucleósido de 5-etilo mostrado más adelante en la Tabla III, el nucleósido de 5-acetileno, compuesto 1, se hidrogenó utilizando Pd/C en presencia de hidrógeno a presiones elevadas, de preferencia en un solvente tal como por ejemplo metanol.

TABLA III Ejemplo 3. Clonación y expresión del HCV-NS5b recombinante La secuencia codificante de la proteína NS5b se clonó mediante PCR a partir de pFKI389luc/NS3-3' /ET según se describe por Lohmann, V., et al . , (1999) Science 285, 110-113 utilizando los siguientes cebadores: aggacatggatccgcggggtcgggcacgagacag (SEQ. ID. NO. 1) aaggctggcatgcactcaatgtcctacacatggac (SEQ. ID. NO. 2) El fragmento clonado estuvo perdiendo 21 residuos de aminoácidos en el término C. El fragmento clonado se insertó en un plásmido de expresión inducible con IPTG que proporciona una marca de epítope (His) 6 en el término carboxi de la proteína. La enzima recombinante se expresa en células XL- 1 y después de la inducción de la expresión, la proteína se purifica utilizando cromatografía de afinidad sobre una columna de níquel-NTA. La condición de almacenamiento es Tris-HCl 10 mM, pH 7.5, NaCl 50 mM, EDTA 0.1 mM, DTT 1 mM, 20% de glicerol a -20 °C.

Ejemplo 4. Análisis de la enzima HCV-NS5b La actividad de la polimerasa se analizó al medir la incorporación del UTP radiomarcado en un producto de ARN utilizando un molde heteropolimérico biotinilado, que incluye una porción del genoma del HCV. Típicamente, la mezcla de análisis (50 µL) contuvo Tris-HCl 10 mM (pH 7.5), MgCl2 5 M, EDTA 0.2 mM, KCl 10 mM, 1 unidad/µL de ARNsin, DTT 1 mM, 10 µM cada uno de NTP, incluyendo [3H] -UTP, y 10 ng/µl de un molde heteropolimérico. Los compuestos de prueba se disolvieron inicialmente en DMSO al 100% y se diluyeron adicionalmente en un amortiguador acuoso que contuvo DMSO al 5%. Típicamente, los compuestos se probaron a concentraciones entre 1 NM y 100 µM. Las reacciones se iniciaron con la adición de una enzima y se dejaron continuar a 37 °C durante 2 horas. Las reacciones se inactivaron con 8 µL de EDTA 100 mM y las mezclas de reacción (30 µL) se transfirieron a placas microtituladoras en proximidad de centelleo recubiertas con estreptavidina (FlashPlates) y se- incubaron a 4°C durante la noche. La incorporación de la radioactividad se determinó mediante conteo por centelleo.

Ejemplos de formulación Las siguientes son formulaciones farmacéuticas representativas que contienen un compuesto de la presente invención.

Ejemplo 1: Formulación de tabletas Los siguientes ingredientes se mezclaron completamente y se sometieron a presión en tabletas con una sola raya.

Ingrediente cantidad por tableta, mg Compuesto de esta invención 400 Almidón de maíz 50 Croscarmelosa sodio 25 Lactosa 120 Estearato de magnesio 5 Ejemplo 2 : formulación de cápsulas Los siguientes ingredientes se mezclaron completamente y se cargaron en una cápsula de gelatina con revestimiento duro.

Ingrediente cantidad por cápsula, mg Compuesto de esta invención 200 Lactosa, rociada en seco 148 Estearato de magnesio 2 Ejemplo 3: Formulación de suspensión Los siguientes ingredientes se mezclaron para formar una suspensión para administración oral.

Ingrediente Cantidad Compuesto de esta invención 1.0 g Ácido fumárico 0.5 g Cloruro de sodio 2.0 g Metilparabeno 0.15 g Propilparabeno 0.015 g Azúcar granulado 25.0 g Sorbitol (solución al 70%) 13.00 g Veegu K (Vanderbilt Co.) 1.0 g Saborizante 0.035 mL Colorantes 0.5 mg Agua destilada q.b.para 100 mL Ejemplo 4: Formulación Inyectable Los siguientes ingredientes se mezclaron para formar una formulación inyectable.

Ingrediente Cantidad Compuesto de esta invención 0.2 mg-20 Solución amortiguadora con acetato de sodio, 0.4 M 2.0 mL HCl (1N) o NaOHG (1N) c.b. para un pH adecuado Agua (destilada, estéril) q.b. para 20 L Ejemplo 5: Formulación de Supositorios Se preparó un supositorio con peso total de 2.5 g al mezclar el compuesto de la invención con Witepsol® H-15 (triglicéridos de ácido graso vegetal saturado; Riches-Nelson, Inc., Nueva York), y tuvo la siguiente composición: Ingrediente Cantidad Compuesto de esta invención 500 mg Witepsol® H-15 el resto Referencias Las siguientes solicitudes se citan en esta solicitud como índices: 1. Giangaspero, et al., Arch. Virol. Suppl., 7: 53-62 (1993); 2. Giangaspero, et al., Int. J. STD. AIDS, 4(5) : 300-302 (1993) ; 3. Yolken, et al., Lancet, 1(8637): 517-20 (1989) ; 4. Wilks, et al., Lancet, 1(8629): 107 (1989); 5. Giangaspero, et al., Lancet, 2: 110(1988); 6. Potts, et al., Lancet, 1(8539): 972-973 (1987); 7. Cornberg, et al., "Hepatitis C: therapeutic perspectives." Forum (Genova), ll(2):154-62 (2001); 8. Dymock, et al., Antivir. Chem. Chemother. 11(2) :79-96 (2000) ; 9. Devos, et al., Publicación de solicitud internacional de patente No. WO 02/18404 A2, publicada el 7 de marzo de 2002; 10. Sommadossi, et al., Publicación de solicitud internacional de patente No. WO 01/90121, publicada el 23 de Mayo de 2001; 11. Carroll, S.S., et al., Publicación de solicitud internacional de patente No. WO 02057287, publicada el 25 de julio de 2002; 12. Carroll, S.S., et al . , Publicación de solicitud internacional de patente No. WO 02057425, publicada 25 July, 2002; 13. Roberts, et al . , Solicitud de patente de los Estados Unidos número de serie 10/861,090, presentada el 4 de junio de 2004. 14. Roberts, et al . , Solicitud de patente de los Estados Unidos número de serie 10/861,311, presentada el 4 de junio de 2004. Todas las publicaciones y solicitudes anteriores se incorporan en la presente como referencia en su totalidad al mismo grado como si cada publicación o solicitud individual se hubiera indicado específica e individualmente para estar incorporada como referencia en su totalidad.

Claims (1)

1. NOVEDAD DE LA INVENCIÓN Habiendo descrito el presente invento, se considera como una novedad y, por lo tanto, se reclama como propiedad lo contenido en las siguientes REIVINDICACIONES : 1. Un compuesto de la Fórmula I, caracterizado porque Y se selecciona del grupo que consiste de un enlace, -CH2- o -0-; cada • uno de W, W1 y W2 se selecciona independientemente del grupo que consiste de hidrógeno y un profármaco farmacéuticamente aceptable; y sales farmacéuticamente aceptables o sales parciales de los mismos. 2. El compuesto según la reivindicación 1, caracterizado porque Y es oxígeno. 3. El compuesto según la reivindicación 1, caracterizado porque cada uno de W, W1, y W2 es independientemente hidrógeno o un profármaco farmacéuticamente aceptables seleccionado del grupo que consiste de acilo, oxiacilo, fosfonato, fosfato, fosfatoésteres, fosfonamidato, fosforodiamidato, fosforamidatomonoéster, fosforamidato cíclico, fosforodiamidato cíclico, fosforamidato diéster, y -C(0)CHR2NH2 en donde R2 se selecciona del grupo que consiste de hidrógeno, alquilo, alquilo sustituido, arilo, arilo sustituido, cicloalquilo, cícloalquilo sustituido, heteroarilo, heteroarilo sustituido, heterocíclico, heterocíclico sustituido y una cadena lateral de un aminoácido. 4. El compuesto según la reivindicación 3, caracterizado porque W es hidrógeno, o W1 es hidrógeno, o W2 es hidrógeno. 5. El compuesto según la reivindicación 3, caracterizado porque W y W1 son hidrógeno, o W y W2 son hidrógeno, o W1 y W2 son hidrógeno. 6. El compuesto según la reivindicación 3, caracterizado porque W, W1 y W2 son hidrógeno. 7. El compuesto según la reivindicación 5, caracterizado porque W1 y W2 son hidrógeno y W es hidrógeno o un profármaco farmacéuticamente aceptable seleccionado del grupo que consiste de acilo, oxiacilo, fosfonato, fosfato, fosfatoésteres, fosfato, fosfonamidato, fosforodiamidato, fosforamidatomonoéster, fosforamidato cíclico, fosforodiamidato cíclico, fosforamidato diéster, y -C(0)CHR2NH2 en donde R2 se selecciona del grupo que consiste de hidrógeno, alquilo, alquilo sustituido, arilo, arilo sustituido, cicloalquilo, cicloalquilo sustituido, heteroarilo, heteroarilo sustituido, heterocíclico, heterocíclico sustituido y una cadena lateral de un aminoácido . 8. El compuesto según la reivindicación 7, caracterizado porque W1 y W2 son hidrógeno y W está representado por la fórmula: caracterizado porque R2 se selecciona del grupo que consiste de hidrógeno, alquilo, alquilo sustituido, arilo, arilo sustituido, cicloalquilo, cicloalquilo sustituido, heteroarilo, hetereoarilo sustituido, heterocíclico, heterocíclico sustituido, y un cadena lateral de un aminoácido; R3 es hidrógeno o alquilo; y R1 se selecciona del grupo que consiste de alquilo, alquilo sustituido, arilo, arilo sustituido, cicloalquilo, cicloalquilo sustituido, heteroarilo, heteroarilo sustituido, heterocíclico y heterocíclico sustituido. 9. El compuesto según la reivindicación 5, caracterizado porque W y W2 son hidrógeno y W1 se representa por la fórmula: caracterizado porque R2 se selecciona del grupo que consiste de hidrógeno, alquilo, alquilo sustituido, arilo, arilo sustituido, cicloalquilo, cicloalquilo sustituido, heteroarilo, hetereoarilo sustituido, heterocíclico, heterocíclico sustituido, y una cadena lateral de un aminoácido. 10. Un compuesto de la Fórmula II: II caracterizado porque W se selecciona del grupo que consiste de hidrógeno y un profármaco farmacéuticamente aceptable; o las sales farmacéuticamente aceptables o las sales parciales del mismo. 11. El compuesto según la reivindicación 10, caracterizado porque W es independientemente hidrógeno o un profármaco farmacéuticamente aceptable del mismo seleccionado del grupo que consiste de acilo, oxiacilo, fosfonato, fosfato, fosfatoésteres, fosfonamidato, fosforodiamidato, fosforamidatomonoéster, fosforamidato cíclico, fosforodiamidato cíclico, fosforamidato diéster y -C(0)CHR2NH2 donde R2 se selecciona del grupo que consiste de hidrógeno, alquilo, alquilo sustituido, arilo, arilo sustituido, cicloalquilo, cicloalquilo sustituido, heteroarilo, hetereoarilo sustituido, heterocíclico, heterocíclico sustituido y una cadena lateral de un aminoácido. 12. El compuesto según la reivindicación 11, caracterizado porque W se representa por la fórmula: caracterizado porque R2 se selecciona del grupo que consiste de hidrógeno, alquilo, alquilo sustituido, arilo, arilo sustituido, cicloalquilo, cicloalquilo sustituido, heteroarilo, hetereoarilo sustituido, heterocíclico, heterocíclico sustituido, y una cadena lateral de un aminoácido; R3 es hidrógeno o alquilo; y R1 se selecciona del grupo que consiste de alquilo, alquilo sustituido, arilo, arilo sustituido, cicloalquilo, cicloalquilo sustituido, heteroarilo, heteroarilo sustituido, heterocíclico y heterocíclico sustituido. 13. 7- (2' -C-metil-ß-D-ribofuranosil) -4-amino-5- (etin-1-il) -pirrólo [2, 3-d] pirimidina o sales farmacéuticamente aceptables o las sales parciales de la misma. 1 . 7- (2' -C-metil-5' -fofo-ß-D-ribofuranosil) -4-amino-5- (etin-1-il) -pirrólo [2, 3-d] pirimidina o sales farmacéuticamente aceptables o las sales parciales de la misma. 15. 7- (2 ' -C-metil-5' -difosfo-ß-D-ribofuranosil) -4-amino-5- [etin-1-il] -pirrólo [2,3-d] pirimidina o sales farmacéuticamente aceptables o las sales parciales de la misma. 16. 7- (2' -C-metil-5' -trifosfo-ß-D-ribofuranosil) -4-amino-5- (etin-1-il) -pirrólo [2, 3-d] pirimidina o sales farmacéuticamente aceptables o las sales parciales de la misma. 17. 7- (2' -metil-5' - (fenoxi-L-alaninil) fosfato-ß-D-ribofuranosil) -4-amino-5- (etin-1-il) -pirrólo [2, 3-d] pirimidina o sales farmacéuticamente aceptables o las sales parciales de la misma. 18. 7- (2' -metil-3' -O-L-valinaéster-ß-D-ribofuranosil) -4-amino-5- (etin-1-il) -pirrólo [2, 3-d] pirimidina o sales farmacéuticamente aceptables o las sales parciales de la misma. 19. 7-(2'-metil-3'-0-L-alaninéster-ß-D-ribofuranosil) -4-amino-5- (etin-1-il) -pirrólo [2, 3-d] pirimidina o sales farmacéuticamente aceptables o las sales parciales de la misma. 20. La composición farmacéutica que comprende un diluyente farmacéuticamente aceptable y una cantidad terapéuticamente eficaz de un compuesto o una mezcla de uno o más de estos compuestos según se define en cualquiera de las reivindicaciones 1 a 19. 21. La composición farmacéutica según la reivindicación 20, caracterizada porque la composición comprende además una cantidad terapéuticamente eficaz de uno o más agentes activos contra el HCV. 22. La composición farmacéutica según la reivindicación 21, caracterizada porque uno o más agentes se selecciona o se seleccionan del grupo que consiste de ribavirina, levovirina, limosiha alfa-1, un inhibidor de la serina proteasa NS3, y un inhibidor de la inosina monofosfato deshidrogenada, interferón-alfa o interferón-alfa pegilado, ya sea solos o en combinación con ribavirina o levovirina. 23. La composición farmacéutica según la reivindicación 22, caracterizada porque uno o más agentes es/son interferón-alfa o interferón-alfa pegilado solo o en combinación con ribavirina o levovirina. 24. Un método por tratar y/o inhibir una infección viral en un mamífero, la infección se produce al menos en parte por un virus de la familia de virus flaviviridae, el método caracterizado porque comprende administrar al mamífero, al que se le haya diagnosticado con la infección viral o que esté en riesgo de desarrollar esa infección viral, una composición farmacéutica según la reivindicación 20. 25. El método según la reivindicación 24, caracterizado porque el virus es virus de la hepatitis C. 26. El método según la reivindicación 25, caracterizado porque la composición farmacéutica comprende además una cantidad terapéuticamente eficaz de uno o más agentes activo contra el HCV. 27. El método según la reivindicación 26, caracterizado porque uno o más agentes se selecciona o se seleccionan del grupo que consiste de ribavirina, levovirina, viramidina, timosina alfa-1, un inhibidor de la serina proteasa NS3, y un inhibidor de la inosina monofosfato deshidrogenasa, interferón-alfa, interferón-alfa pegilado, solos o en combinación con ribavirina o levovirina. 28. El método según la reivindicación 27, caracterizado porque uno o más agentes se selecciona o se seleccionan de interferón-alfa o interferón-alfa pegilado solos o en combinación con ribavirina o levovirina.