MXPA06004199A

MXPA06004199A - Terapia en combinacion.

Info

Publication number: MXPA06004199A
Application number: MXPA06004199A
Authority: MX
Inventors: J Rn Roland Muller
Original assignee: Novo Nordisk As
Priority date: 2003-10-17
Filing date: 2004-10-08
Publication date: 2006-06-28
Also published as: JP2013166763A; JP2007508332A; WO2005037306A1; EP1680138A1; CA2542662A1; EP1680138B1; JP2011137008A

Abstract

La invencion proporciona los tratamientos en combinacion con IL-21, analogos y derivados del mismo para el tratamiento del cancer y la infeccion viral.

Description

TERAPIA EN COMBINACION CAMPO DE LA INVENCIÓN La presente invención se refiere a IL-21, análogos o derivados y su uso en combinación con otros compuestos farmacéuticos en el tratamiento del cáncer y las infecciones virales . ANTECEDENTES DE LA INVENCIÓN Las citocinas estimulan en general la diferenciación de células de la línea hematopoyética o participan_en. los..mecanismos de respuesta inmune inflamatoria del -cuerpo-: Las - interl-eucinas son -una- familia- de -citocinas que son mediadoras de las respuestas inmunológicas al producir muchas citocinas y efectúan la inmunidad adaptativa hacia antígenos . Las células T maduras pueden- ser activadas, por ejemplo, por un antígeno u otros estímulos, para producir, por ejemplo, citocinas, moléculas de señalización, bioquímica o receptores adicionalmente influyen el destino de la población de células T. Las citocinas producidas por la célula T ha sido clasificada como tipo 1 y tipo 2 ( elso, A. Immun. Cell Biol . 76: 300-317, 1998). Las citocinas tipo 1 incluyen IL-2, IFN-?, LT-a, y están involucradas en respuestas inflamatorias, la inmunidad viral, la inmunidad contra parásitos intracelulares y el rechazo del injerto. Las citocinas tipo 2 incluyen IL- REF.:172273 4, IL-5, IL-6, IL-10 e IL-13, y están involucradas en las respuestas humorales, la inmunidad hacia helmintos y la respuesta alérgica. Las citocinas compartidas entre el tipo 1 y el tipo 2 incluyen IL-3, GM-CSF y TNF-oc. Existe alguna evidencia que sugiere que las poblaciones de células T productoras del tipo 1 y del tipo 2 migran preferentemente hacia diferentes tipos de tejido inflamado. Las células T maduras pueden ser activadas, por ejemplo, por un antígeno u otro estímulo para producir, por ejemplo, citocinas, moléculas de señalización bioquímicas, receptores que influyen además el destino de la población de células T. Las células T pueden ser activadas vía los receptores sobre la superficie celular incluyendo el receptor de células B y otras moléculas accesorias para realizar las funciones de células accesorias, tales como la producción de citocinas y anticuerpos . Las células asesinas naturales (NK, por sus siglas en inglés) tienen una célula progenitora común con las células T y las células B, y juegan un papel en la sobrevivencia inmune. Las células NK, las cuales comprenden hasta 15% de linfocitos sanguíneos, no expresan los receptores de antígeno, y por lo tanto no utilizan los reconocimientos de MHC como requerimiento para el enlace a una célula objetivo o diana. Las células NK están involucradas en el reconocimiento y muerte de ciertas células tumorales y las células viralmente infectadas. In vivo, se cree que las células NK requieren la activación, no obstante, in vitro, las células NK han mostrado que matan algunos tipos de células tumorales vía la activación dependiente del ligando KIR. La inmunología involucrada en la enfermedad del cáncer incluye una variedad de diferentes células derivadas del sistema inmune. Los compuestos que estimulan tales respuestas pueden ser utilizados en combinación para proporcionar una respuesta me orada para el tratamiento de —tumores .— — - — . .. ... _ . IL-21 ha mostrado que afecta a un número de diferentes células del sistema inmune. De particular interés es la activación observada de los linfocitos T citotóxicos (CTLs, por sus siglas en inglés) y las células NK. Se sabe que ambos tipos celulares están críticamente involucrados en combatir los tumores. De este modo, la presencia de linfocitos T intratumorales está relacionada con el resultado clínico mejorado para un número de diferentes cánceres (Zhang et al. 2003). No obstante, los linfocitos que infiltran tumores (TIL) , no son siempre suficientemente activados para controlar el crecimiento tumoral (Dunn et al. 2002; Kataki et al. 2002; Blohm et al. 2002; Khong y Restifo 2002). Por lo tanto, existe una necesidad para regímenes terapéuticos mejorados para el tratamiento, manejo y prevención de los cánceres. . Otro aspecto importante en el efecto de los IL-21's en el sistema inmune, es el efecto sobre las células B, las cuales pueden conducir a una respuesta mejorada de anticuerpo contra las células tumorales y las células infectadas por virus. La presente invención se refiere al uso combinado de IL-21 y otras modalidades para el tratamiento y manejo del cáncer y las infecciones virales. Aunque las vacunas terapéuticas sintéticas que consisten de uno o únicamente pocos antígenos definidos han mostrado cierta utilidad en el tratamiento del cáncer, existe una fuente necesidad para el mejoramiento. La presente invención también se refiere a una combinación a tiempo de (i) la liberación de antígenos tumorales que conducen a una respuesta inmune dirigida hacia estos antígenos tumorales y (ii) la habilidad única de IL-21 para inducir una respuesta de células T citotóxicas (CTL) sostenida. La liberación de antígenos tumorales puede ser obtenida con un número de diferentes recubrimientos, incluyendo los siguientes ejemplos no limitantes: (i) quimioterapia convencional, (ii) inducción de apoptosis; (iii) inducción de muertes de las células tumorales, vía la interferencia con el suministro sanguíneo hacia el tumor; (iv) interferencia con la estimulación del factor de crecimiento y la transduccion de señales.

BREVE DESCRIPCIÓN DE LA INVENCIÓN La invención también proporciona IL-21, análogos y derivados del mismo en combinación con uno o más de los siguientes · 1. Agentes que inducen la muerte de las células tumorales o la muerte de las células infectadas por virus a) quimioterapia convencional b) terapia con radiación c) anticuerpos monoclonales d) reguladores del control del ciclo celular/apoptosis e) inhibidor del factor de crecimiento y de los moduladores de la transducción f) inhibidores de señales de la vascularización tumoral (inhibidores de angiogénesis, fármacos anti-angiogénesis) g) direccionamiento viral (el ueo de un virus recombinante para destruir células tumorales) h) agentes anti-virales i) agentes hormonales II. Agentes que mejoran la respuesta inmune contra las células tumorales o las células infectadas con virus j) activadores del sistema inmune k) inhibidores del sistema inmune (por ejemplo, agentes que inhiben las señales inmunes que subregulan · la respuesta inmune) , incluyendo agentes anti-anérgicos 1) vacunas terapéuticas III. Agentes que interfieren con el crecimiento tumoral, metástasis o dispersión de las células infectadas con virus m) integrinas, moduladores de las moléculas de adhesión celular · n) anti-metastáticos o) moduladores de la célula endotelial IV. Vacunación interna V. Antagonistas del factor tisular y otros factores que incluyen la cascada de la coagulación _ p) agentes anti-factor Xa, inhibidores de anti-factor I-I-a-, -agentes anti—f-i-br-i-nógenos - - - - -- - q) pentasacáridos, etc. VI. Agentes inmunosupresores/inmunomoduladores r) agentes que influyen sobre el alojamiento de linfocitos T por ejemplo, FTY-720 s) inhibidores de la calcineurina t) inhibidores de TOR La invención proporciona una composición farmacéutica que comprende IL-21, un análogo o un derivado del mismo, en combinación con uno o más de los compuestos de acuerdo a la lista I-VI y a) -t) anteriores. La invención proporciona el uso de IL-21, un derivado o un análogo del mismo, en combinación con uno o más de los compuestos seleccionados del grupo I-VI y a) -t) , como se describieron anteriormente, para la fabricación de un medicamento para el tratamiento del cáncer o las infecciones virales. ' La invención proporciona un método para tratar a un sujeto en necesidad del mismo, con una -cantidad terapéuticamente efectiva de una combinación de IL-21, un análogo y un derivado del mismo, junto con uno o más de los compuestos seleccionados de los grupos I-IV y a) -t) como se describieron anteriormente . En una modalidad de la invención, las enfermedades que van a ser tratadas son trastornos neoplásicos tales como melanoma maligno metastático, carcinoma de las células renales, carcinoma de ovario, cáncer de células tumorales pequeñas, cáncer de células tumorales no pequeñas, cáncer de mama, cáncer colorrectal, cáncer de próstata, cáncer pancreático, cáncer de ve iga, cáncer esofágico, cáncer cervical, cáncer endometrial, linfoma y leucemia. En aspectos más específicos de la invención, los términos "trastornos neoplásicos" , "cáncer" , "crecimiento tumoral" deben ser entendidos como referentes a todas las formas de crecimiento de células neoplásicas, incluyendo los tumores quísticos y sólidos, tumores de tejido óseo y blando, incluyendo tumores benignos y malignos, incluyendo tumores en el tejido anal, en el conducto biliar, en la vejiga, las células sanguíneas, el hueso, hueso (secundario) , intestino (colon y recto) , cerebro, cerebro (secundario) , mama, mama (secundario), carcinoide, cerviz, cánceres de niños, ojo, garganta (esófago) , cabeza y cuello, sarcoma de Kaposi, riñon, laringe, leucemia (linfoblástica aguda) , leucemia (mieloide aguda) , leucemia (linfocítica crónica) , leucemia (mieloide crónica) , leucemia - (otra) , hígado, hígado (secundaria) , pulmón, pulmón (secundario) , nodulos linfáticos (secundario), linfoma (de Hodkins) , linfoma (no Hodkins) , melanoma, mesotelioma, mieloma, ovario, páncreas, pene, próstata, piel, sarcomas de tejido blando, estómago, testículos, tiroides, tumor primario desconocido, vagina, vulva, matriz (útero) . Los tumores de tejidos suaves incluyen la monosomía de schwanoma benigno, tumor desmolde, lipoblastoma, lipoma, leiomioma uterino, sarcoma de células claras, dermatofibrosarcoma, sarcoma de E ign, condrosarcoma mixoide extraesquelético, mixoide liposarcoma, liposarcoma, bien diferenciado, rabdomiosarcoma alveolar, y sarcoma sinovial . Los tumores específicos del hueso incluyen fibroma no osificante, quiste de hueso, unicameral, encondroma, quiste de hueso aneurismal, osteoblastoma, condroblastoma, condromixofibroma, fibroma osificante y adamantinoma, tumor de células gigantes, displasia fibrosa, sarcoma de Ewing, granuloma eosinofílico, osteosarcoma, condroma, condrosarcoma, histiocitoma fibroso maligno, y carcinoma metastático.

Las leucemias se refieren a cánceres de las células blancas que son producidas por la médula ósea. Este incluye pero no está limitado a los cuatro tipos principales de leucemia; linfoblástica aguda (ALL) , " mieloblástica aguda (AML) , linfocítica crónica (CLL) , y mieloide crónica (CML) . En otro aspecto más de la invención, las enfermedades que van a ser tratadas son infecciones virales tales como virus de la hepatitis B, virus de la hepatitis C, virus de inmunodeficiencia humana, virus sincitial respiratoria, virus de Eppstein-Barr, virus de la influenza, ci- omegalovirus-^-^her-pes^ lriiS—^L. síndrome., respiratorio agudo severo" - - - DEFINICIONES Previo a una discusión de las modalidades detallas de la invención, se proporciona una definición de los términos específicos relacionados sobre los aspectos principales de la invención. En el contexto de la presente invención, IL-21 es definida como la secuencia descrita en WO 00/53761 como SEQ ID No.: 2. La invención también abarca las secuencias de ADN que codifican para el péptido como la SEQ ID No. : 1, derivados funcionales y fragmentos del mismo. La presente solicitud también describe los análogos de IL-21 y derivados de la misma. En el contexto de la presente invención, el término IL-21" significa de este modó IL-21 como se describe en WO 00/53761, mientras que "IL-21 y derivados de la misma" cubre también IL-21 como variantes, análogos y derivados de la misma, en consecuencia. De acuerdo con al presente invención, se pueden emplear técnicas convencionales de biología molecular, microbiología, técnicas de ADN recombinantes, dentro de la experiencia de la técnica. Tales técnicas son explicadas completamente en la literatura. Ver, por ejemplo, Sambrook, Fritsch & aniatis, Molecular Cloning : A Laboratory Manual, Segunda Edición (1989) Cold Spring Harbor Laboratory Press, Cold. Spring^_Harbo_r,_. New York (en la presente "Sambrook et al., 1989")- DNA Cloning -:—A- Practical Approach, Volúmenes I y 11/D. N. Glover ed. 1985); Oligonucleotide Synthesis (M. J. Gait ed. 1984); Nucleic Acid Hybridization (B. D. Hames & S. J. Higgins eds (1985) ; Transcription And Translation (B. D. Hames & S. J. Higgins, eds. (1984)); Animal Cell Culture ( . I. Freshney, ed. (1986)); Immobilized Cells And Enzymes (IRL Press, (1986) ); B. .Perbal, A Practical Guide To Molecular Cloning (1984) . . Una "cantidad efectiva" significa una. cantidad que es suficiente para proporcionar un efecto clínico. Esta dependerá del medio de administración, del sitio objetivo, del estado del paciente, si el tratamiento tiene lugar en el sujeto o sobre células aisladas, la frecuencia del tratamiento, etc. Los intervalos de dosis ordinariamente 1 podría esperarse que sean de 0.1 raicrogramos a 3000 microgramos por kilogramo de peso corporal por día. Para una discusión completa de las formulaciones de los fármacos y los intervalos de dosis ver Remington's Pharmaceutical Sciences, 18th Ed., (Mack Publishing Co., Easton, Penn. , 1996) . Se debe entender que esta invención está limitada a la metodología particular, protocolos y reactivos descritos, ya que tales pueden variar. Se entiende también que la terminología utilizada en la presente es para fines de describir las modalidades particulares únicamente, y no se pretende—que-1-TOÍten-el^alcance .de -la presente invención. Aquellos de experiencia apreciarán fácilmente que los niveles de dosis pueden variar como una función del compuesto específico, la severidad de los síntomas y la susceptibilidad del sujeto a los efectos colaterales. LaS dosis preferidas para un compuesto dado son fácilmente determinables para aquellos expertos en la técnica por una variedad de medios. Un medio preferido es medir la potencia fisiológica de un compuesto dado. En el contexto de la presente invención ¦"administración" , "administración combinada" o "terapia en combinación" se refiere a un tratamiento de las infecciones virales o el cáncer al administrar IL-21, un análogo derivado del mismo, y cualquier agente o combinación de agentes que induzcan la muerte celular y/o cualquier agente o combinación de agentes que aumenten la respuesta inmune y/o cualquier agente o combinación de agentes que interfieran con el crecimiento tumoral, las metástasis o la dispersión del cáncer o las células infectadas por el virus . Dicha terapia en combinación puede ser realizada al administrar IL-21, un análogo derivado del mismo antes de los agentes o combinación de agentes y/o por administración simultánea de IL-21, un análogo o un derivado del mismo y los agentes o combinación de agentes y/o por administración de IL-21, un análogo o un derivado del mismo, después de la administración de los agentes o. combinación de.agentes.. En el - contexto de la presente invención "tratamiento" o "tratar" se refiere a la prevención, alivio, manejo, curación o reducción de la enfermedad. En el contexto de la presente invención "cáncer" se refiere a cualquier trastorno neoplásico, incluyendo desórdenes celulares tales como sarcoma, carcinoma, melanoma, leucemia, linfoma, cánceres de mama, de cabeza y cuello,- de ovarios, de vejiga, de pulmón, de faringe, de laringe, de esófago, de estómago, de intestino delgado, de hígado, de páncreas, de colon, de tracto reproductor femenino, del tracto reproductor masculino, de la próstata, de los riñones y del sistema nervioso central. En el contexto de la presente invención las combinaciones proporcionan una "-cantidad efectiva" como es aplicada a IL-21, un análogo o un derivado del mismo, o cualquiera de las combinaciones, y se refiere a la cantidad de cada componente en la mezcla, que es efectivo para la supervivencia del hospedero. La sinergia puede ser medida en términos de la dosis, la supervivencia, el tiempo para la progresión, el periodo libre de enfermedad, la carga tumoral reducida y otros parámetros adecuados para la enfermedad. DESCRIPCIÓN DETALLADA DE LA INVENCIÓN "IL-21" es descrito en la Solicitud de Patente de los Estados Unidos No. WO 00/53761, publicada el 14 de Septiembre del 2000, que se incorpora por referencia en esta solicitud, en su totalidad, describe la IL-21 (como ligando de "Zalfall") como SEQ ID No.: 2, que se incorpora por referencia en esta solicitud, en su totalidad, así como los métodos para producirla y los anticuerpos para ésta, y una secuencia polinucleotidica que codifica para la IL-21 como la SEQ ID No.: 1 en la solicitud anteriormente mencionada. La invención comprende sus ortólogos comprendiendo al menos 70%, al menos 80%, al menos 90%, al menos 95%, o más de 95% de identidad secuencial . La presente invención también incluye el uso de los polipéptidos que comprenden una secuencia de aminoácidos que tienen al menos 70%, al menos 80%, al menos 90%, al menos 95%, o más de 95% de identidad secuencial a la secuencia de residuos de aminoácidos 1 al 162, los residuos 41(Gln) a 148 (lie) de la SEQ ID No.: 2. Los métodos para determinar la identidad porcentual son . descritos más adelante. Los polipéptidos IL-21 de la presente invención han conservado toda o algo de la actividad biológica de la IL-21, que hace a IL-21 útil para el tratamiento por ejemplo de infecciones y cáncer. Algunos de los polipéptidos pueden también tener una actividad biológica que es mayor que la actividad biológica de IL-21. La presente invención abarca las proteínas contrapartes y los polinucleótidos provenientes de otras especies (ortólogos) . De interés particular son los polipéptidos de ._ IL-21 provenientes - de - otras especies de mamíferos, incluyendo roedores, porcinos, ovino, bovinos, caninos, felinos, equinos y otros primates. Las especies de ortólogos de la proteína IL-21 humana pueden ser clonadas utilÍ2ando información y composiciones proporcionadas por la presente invención, en combinación con técnicas de clonación convencionales. Como se utiliza y se reclama, la frase "un polinucleótido aislado que codifica para un polipéptido, el polipéptido que es definido por la SEQ ID No. : 2" incluye las variantes alélicas y los ortólogos de especie de este polipéptido. La presente invención también proporciona los polipéptidos de proteína aislados, que son sustancialmente idénticos al polipéptido de la proteína de la SEQ ID No. : 2 y sus ortólogos de especie. Por "aislado o aislada" se entiende una proteína péptido que es encontrado en una condición diferente de su ambiente nativo, tal como parte de la sangre y el- tejido animal. En una forma preferida, el polipéptido aislado está sustancialmente libre de otros polipéptidos, particularmente otros polipéptidos de origen · animal. Se prefiere proporcionar los polipéptidos en una forma altamente purificada, por ejemplo, más de 95% puros, más preferentemente más del 99% puros . El término "sustancialmente idéntico" se utiliza en la presente, para denotar los polipéptidos que tienen más del 50%, preferentemente más del 60%, más del 70%, o preferentemente •al- menos- 80%, de identidad secuenciaL la secuencia mostrada en la SEQ ID No.: 2 de WO 00/53761 o especies de ortólogos. Tales polipéptidos más preferentemente serán al menos 90% idénticos, y lo más preferentemente al menos 95%- o más idénticos a IL21, o sus ortólogos de especie. La identidad secuencial por ciento es proporcionada mediante métodos convencionales. Ver por ejemplo, Altschul et al., Bull . ath. Bio. 48: 603-616 (1986) y Henikoff y Henikoff, Proc. Nati. Acad. Sci. USA 89: 10915-10919 (1992). La identidad de secuencia de las moléculas polinucleotídicas es determinada mediante métodos similares utilizando una proporción como se describe anteriormente . Los polipéptidos de la variante de IL-21 o como también se utiliza en la presente, los análogos de IL-21, son proteínas y polipéptdios sustancialmente idénticos y son caracterizados por poseer una o más supresiones, sustituciones o adiciones de aminoácidos. Estos cambio son preferentemente de una naturaleza menor, es decir sustituciones conservadoras de aminoácidos (ver Tabla 1) y otras sus ituciones que no afectan significativamente el plegamiento o la actividad de la proteína al polipéptido; supresiones pequeñas, típicamente de uno a aproximadamente 30 aminoácidos; y extensiones pequeñas amino- o carboxilo- terminales tales como un residuo de metionina amino- terminal , un —péptido ligador- peque-ño--de hasta aproximadamente 20- 25 residuos, o una extensión pequeña que facilita la purificación (un marcador de afinidad) , tal como un tramo de poli-histidina , una proteína A, Nilsson et al., EMBO J. 4: 1075 (1985); Nilsson et al., ethods Enzymol . 198: 3 (1991), glutathione S transferase, Smith y Johnson, Gene 67: 31 (1988), u otro epitopo antigénico o dominio de enlace. Ver en general Ford et al., Protein Expression and Purification 2: 95-107 (1991) . Los ADNs que codifican para los marcadores de afinidad son disponibles de proveedores comerciales (por ejemplo, Pharmacia Biotech, Piscataway, NJ) .

Tabla 1 Sustituciones conservadores de aminoácidos Básicos : Arginina Lisina Histidina Acidos Ácido glutámico Ácido aspártico Polar: Glutamina Asparagina Hidrofóbicos Leucina Isoleucina - Valina Aromáticos : Fenilalanina Triptofano Tirosina Pequeños : Glicina Alani a Serina Treonina metionina Las proteínas de la presente invención pueden también comprender residuos de aminoácidos de origen no natural. Los aminoácidos de origen no natural, incluyen sin limitación, trans-3 -metilprolina, 2 , 4-metanoprolina, cis-4- hidroxiprolina, trans-4-hidroxiprolina, N-metiglicina, addo- treonina, metiltreonina, hidroxietilcisteína, hidroxietilhomocisteína, nitroglutamina, homoglutamina, ácido pipecólico, ácido tiazolidincarboxílico, deshidrpprolina, 3- y 4-metilprolina, 3, 3-dimetilprolina, ter-leucina, norvalina, 2-azafenilalanina, 3-azafenilalanina, 4-azafenilalanina, y 4- fluorofenilalanina. Son conocidos diversos métodos en la técnica para incorporar residuos de aminoácidos de origen no natural dentro de las proteínas. Por ejemplo, un sistema in vitro, puede ser empleado, en donde las mutaciones no en ¦- - sentido - son- —suprimidas - utili-zando- ARNts supresores, químicamente aminoacilados . Los métodos para sintetizar aminoácidos y aminoacilar AR t son conocidos en la técnica. Los aminoácidos esenciales en los polipéptidos de la presente invención pueden ser identificados de acuerdo a procedimientos conocidos en la técnica, tales como la mutagénesis dirigida al sitio o la mutagénesis de exploración de alanina [Cunningham y Wells, Science 244: 1081-1085 (1989)]; Bass et al., Proc. Nati. Acad. Sci . EUA 88: 4498- 4502 (1991) . En la última técnica, mutaciones de alanina simple son introducidas con cada residuo en la molécula y las moléculas mutantes resultantes son probadas para la actividad biológica (por ejemplo, enlace del ligando y transducción de señal) para identificar los residuos de aminoácidos que son críticos para la actividad de la molécula. Los sitios de interacción ligando-proteína pueden ser también determinados por análisis de la estructura cristalina, como es determinada por técnicas tales como resonancia magnética nuclear, cristalografía y marcación de fotoafinidad. Sustituciones múltiples de aminoácidos pueden ser realizadas y probadas utilizando métodos conocidos de mutagénesis y selección, tales como aquellos descritos por Reidhaar-Olson y Sauer, Science 241: 53-57 (1988) o Bowie y Sauer Proc. Nati. Acad. Sci . EUA 86: 2152-2156 (1989). En resumen, estos autores_ describen los métodos para repartir aleatoriamente de manera simultánea dos o más posiciones en un polipéptido, seleccionando por polipéptido funcional, y luego secuenciando los polipéptidos mutageneizados para determinar el espectro de sustituciones permisibles en cada posición. Otros métodos que pueden ser utilizados incluyen visualización de fago {por ejemplo, Lo man et al., Biochem. 30: 10832-10837 (1991); Ladner et al., patente de los Estados Unidos No. 5,223, 409; Huse, publicación WIPO O 92/06204) y mutagénesis dirigida al sitio, Derbyshire et al., Gene 46: 145 (1986); Ner et al., DNA 7: 127 (1988). . Las variantes de IL-21 son por ejemplo, polipéptidos IL-21, como se describe anteriormente, sin la secuencia N-terminal. La secuencia N-terminal puede comprender 1-28 aminoácidos iniciales. . También o alternativamente una variante es por ejemplo IL-21 o variantes de IL-21 sin la metionina N-terminal, que es frecuentemente incluida a partir de la expresión en un hospedero bacteriano. Los métodos de mutagénesis como se describe anteriormente pueden ser combinados con los métodos de selección de alto rendimiento para detectar la actividad de las proteínas mutagenizadas, clonadas en las células hospederas . Los ensayos preferidos a este respecto incluyen los ensayos de proliferación celular y los ensayos de enlace al ligando, basados en biosensores, los cuales se describen más adelante-. La-s— moléculas -de- AD —-mutagenizadas que codifican para las proteínas activas "o porciones de las mismas (por ejemplo, fragmentos de enlace al ligando) pueden ser recuperadas de las células hospederas y rápidamente secuencias utilizando equipo moderno. Estos métodos permiten la determinación rápida de la importancia de los residuos de aminoácidos individuales con el polipéptido de interés, y pueden ser aplicadas a los polipéptidos de estructura desconocida. La presente invención proporciona además una variedad de otras fusiones polipeptídicas y proteínas multiméricas relacionadas que comprenden una o más fusiones polipeptídicas. Por ejemplo, el polipéptido IL-21 puede ser preparado como una fusión a una molécula de dimerización como se describe en las patentes de los Estados Unidos Nos. 5,155, 027 y 5,567, 584. Las proteínas de dimerización preferidas a este respecto, incluyen los dominios de región constante de inmunoglobulina. Las fusiones polipeptídicas de inmunoglobulina-IL-21 pueden ser expresadas en células manipuladas mediante ingeniería genética. Los dominios auxiliares pueden ser fusionados a los polipéptidos IL-21 para dirigirlos a las células específicas, tejidos o moléculas específicas . (por ejemplo, colágeno) . Por ejemplo, el polipéptido IL-21 o la proteína podrían ser dirigidos a un tipo. celular predeterminado, mediante fusión de un polipéptido a- un ligando que se enlaza -específicamente a un receptor sobre la superficie de la célula objetivo. De esta manera, los polipéptidos y las proteínas pueden ser dirigidos para fines terapéuticos o de diagnóstico. Un polipéptido IL-21 puede ser fusionado a dos ó más porciones, tal como un marcador de afinidad para la purificación y dominio de dirección al objetivo. Las fusiones polipeptídicas pueden también comprender uno o más sitios de escisión, particularmente entre los dominios. Ver Tuan et al., Connective Tissue Research 34: 1-9 (1996) . "Derivados de IL-21" comprenden la derivatización o enlace a otra molécula funcional. El enlace puede ser acoplamiento clínico, fusión genética, asociación no covalente o similares, a otras entidades moleculares tales como anticuerpos, toxinas, radioisótopos, agentes citotóxicos o citostáticos o moléculas poliméricas o grupos lipofílicos. Los ejemplos no limitantes incluyen grupos poliméricos, tales como por ejemplo, dendrimeros como los que son descritos en PCT/DK2004/000531, óxido de polietileno (PAO) , polialquilenglicol (PAG), polietilenglicol (PEG) , polipropilenglicol (PPG), PEGs ramificados, alcohol polivinílico (PVA), policarboxilato, polivinilpirrolidona, anhídrido de ácido polietilen-co-maleico, anhídrido de ácido poliestiren-co-málico, dextrano, carboximetil-dextrano; ligand s de enlace a proteínas séricas, tales como compuestos — que se enlazan- a- la--albúmi-nar - como- ácidos grasos,- ácido graso de 5 a 24 átomos de carbono, diácido alifático (por ejemplo de 5 a 24 átomos de carbono) . Los aglutinantes de alúmina 5 son descritos en las solicitudes de patentes danesas PCT/DK04/000625. Los aglutinantes de albúmina son también compuestos de la fórmula de la siguiente: Otros ejemplos de grupos de extensión incluyen moléculas orgánicas pequeñas que contienen porciones que bajo condiciones fisiológicas alteran las propiedades de carga, tales como los ácidos carboxílieos o las aminas, o sustituyentes neutros que previenen el reconocimiento específico del glicano (también llamado glucano) tales como sustituyentes alquino más pequeños (por ejemplo, alquilo de 1 a 5 átomos de carbono) . El término "molécula polimérica" o "grupo polimérico" o "porción polimérica" o "molécula polimérica", abarca las funciones formadas mediante enlace covalente de dos o más monómeros, en donde ninguno de los monómeros es un residuo de aminoácido. Los polímeros preferidos son -moléculas poliméricas-Seleccionadas del grupo que consiste de "Toa dendrímeros" -como —- se describe- -en— el documento PCT/DK2004/000531, óxido de polialquileno (PAO),' incluyendo polialquilenglicol (PAG) , tal como polietilenglicol (PEG) y polipropilenglicol (PPG), PEGs ramificados, alcohol polivinílico (PVA) , policarboxilato, polivinilpirrolidona, anhídrido de ácido polietilen-co-maleico, anhídrido de ácido poliestiren-co-maleico, y dextrano, incluyendo carboximetildextrano, PEG que es particularmente preferido. El término "IL-21 PEGilado" significa IL-21, que tiene una o más moléculas de PEG conjugadas a un polipéptido IL-21 humano. Se debe entender que la molécula de PEG puede ser enlazada a cualquier parte del polipéptido IL-21, incluyendo cualquier residuo de aminoácido o porción carbohidrato del · polipéptido IL-21. El término "IL-21 PEGilado cisteína" significa IL-21 que tiene una molécula de PEG conjugada a un grupo . sulfhidrilo de una cisteína introducida en IL-21. El término "polietilenglicol" o "PEG" significa un compuesto de polietilenglicol o un derivado del mismo, con o sin agentes de acoplamiento, porciones de acoplamiento o de activación (por ejemplo, con tiol, triflato, tresilato, azirdina, oxirano, o preferentemente con una porción maleimida) . Los compuestos tales como el maleimido-monometoxi-PEG son ejemplares en los compuestos PEG activados de la invención. El término "PEG" está destinado a indicar el -polietilenglicol—de un peso -molecular entre 500 y 150,000 DA, incluyendo análogos de los mismos, en donde por ejemplo, el grupo OH terminal ha sido reemplazado por un grupo metoxi (referido como mPEG) . El PEG es una molécula polimérica adecuada, ya que ésta tiene únicamente pocos grupos reactivos capaces de reticularse en comparación a los polisacáridos tales como dextrano. En particular, el PEG monofuncional, por ejemplo, metoxipolietilenglicol (mPEG) , es de interés ya que su química de acoplamiento es relativamente simple (únicamente un grupo reactivo es disponible para la conjugación de los grupos de enlace sobre el polipéptido) . En consecuencia, el riesgo de reticulación es eliminado, los conjugados polipeptídicos resultantes son más homogéneos y la reacción de las moléculas poliméricas con el polipéptido es más fácil de controlar. Para efectuar el enlace covalente de la o las moléculas poliméricas al polipéptido, los grupos hidroxilo extremos de la molécula polimérica son proporcionados en forma activa, por ejemplo, con grupos funcionales activos. Las moléculas poliméricas activadas, adecuadas, son comercialmente disponibles, por ejemplo, de Shear ater Corp., Huntsville, Ala., USA, o de PolyMASC Pharmaceuticals pie, Reino Unido. Alternativamente, las moléculas poliméricas — ueden sea: activadas mediante- métodos convencionales ""conocidos" "en la técnica, como se describe en WO 90/13540. Los ejemplos específicos de moléculas poliméricas lineales o ramificadas activadas para el uso en la presente' invención, son descritas en los catálogos de 1997 y 2000 Shearwater Corp. (Polímeros Biocompatibles Funcionalizados para la Investigación y Productos Farmacéuticos, polietilenglicol y derivados, incorporado por referencia en la presente) . Los ejemplos específicos de polímeros de PEG activados incluyen, los siguientes PEGs lineales: NHS-PEG (por ejemplo SPA-PEG, SSPA-PEG, SBA-PEG, SS-PEG, SSA-PEG, SC-PEG, SG-PEG, y SCM- PEG) , y OR-PEG) , BTC-PEG, EPOX-PEG, NCO-PEG, NPC-PEG, CDI- PEG, ALD-PEG, TRES-PEG, VS-PEG, IODO-PEG, y MAL-PEG, y PEGs ramificados tales como PEG2-NHS y aquellos descritos en las patentes de los Estados Unidos Nos. 5,932,462 y 5,643,575, las cuales se incorporan por referencia en la presente. Además, las siguientes publicaciones, incorporadas por referencia en la presente, describen las moléculas poliméricas útiles y/o las químicas de PEGilacion: Patente de los Estados Unidos No. 5,824,778, Patente de los Estados Unidos No. 5,476,653, WO97/32607, EP-229,108, EP-402,378, Patente de los Estados Unidos No. 4,902,502, Patente de los Estados Unidos No. 5,281,698, Patente de los Estados Unidos No. 5,122,614, Patente de los Estados Unidos No. 5,219,564, W092/16555, WO94/04193, W094/14758, O94/17039, W094/18247, W094/28024, WO95/001_6_2,_ W095/11924, WO95/13090, ¦ WQ95/33490/ WO96/-00080, W097/18832, W098/41562,- W098/48837, W099/32134, W099/32139, WO99/32140, WO96/40791, W098/32466, WO95/06058, EP-439,508, WO97/03106, W096/21469, W095/13312, EP-921,131, Patente de los Estados Unidos No. 5,736,625, WO98/05363, EP-809,996, Patente de los Estados Unidos No. 5,629,384, W096/41813, WO96/07670, Patentes de los Estados Unidos Nos. 5,473,034, 5,516,673, EP-605,963, Patente de los Estados Unidos No. 5,382,657, EP-510,356, EP-400,472, EP-183,503 y EP-154,316. La conjugación del polipeptido y de las moléculas poliméricas activadas es conducida mediante el uso de cualquier método convencional, por ejemplo como se describe en las siguientes referencias (que también describen los métodos adecuados para la activación de las moléculas poliméricas) : R.F. Taylor (1991), "Protein immobilisation. Fundamental and applications" , Marcel Dekker, N.Y. ; S.S. Wong (1992), "Chemistry of Protein Conjugation and Crosslinking" , CRC Press, Boca Ratón; G.T. Hermanson et al., (1993), "Immobilized Affinity Ligand Techniques" , Academic Press, N.Y.). La persona de experiencia estará enterada de que el método de activación y/o la química de conjugación que van a ser utilizadas, depende del o de los grupos de enlace del polipéptido (ejemplos de los cuales se dan anteriormente), así como los grupos funcionales del polímero (por ejemplo amina, idroxilo, carboxilo, aldehido, sulfhidrilo, succinimidilo, maleimida, vinilsulfona o haloacetato) . La PEGilación puede estar dirigida hacia la conjugación a todos los grupos de enlace disponibles sobre el polipéptido (por ejemplo tales grupos de enlace que están expuestos en la superficie del polipéptido) o pueden ser dirigidos hacia uno o más grupos de enlace específicos, por ejemplo el grupo amino N-terminal (Patente de los Estados Unidos No. 5,985,265). Además, la conjugación puede ser lograda en un solo paso o de una manera por pasos (por ejemplo como se describe en W099/55377) . Se entenderá que la PEGilación está diseñada para producir la molécula óptima con respecto al número de moléculas de PEG enlazadas, el tamaño y la forma de tales moléculas (por ejemplo si éstas son lineales o ramificadas) , y donde en el polipéptido están enlazadas tales moléculas. El peso molecular del polímero que va a ser utilizado, será elegido tomando en consideración el efecto deseado que va a ser logrado. Por ejemplo, si el propósito principal de la conjugación es obtener un conjugado que tenga un alto peso molecular y un tamaño más grande (por ejemplo, para reducir el despejo renal) , se puede elegir conjugar ya sea una o unas pocas moléculas poliméricas de alto peso molecular, o un número de moléculas poliméricas con un peso molecular más pequeño, para obtener el efecto deseado. Preferentemente, no obstante, diversas moléculas poliméricas con un peso molecular más bajo, serán utilizadas. Éste es también el caso si se desea un alto grado de protección de epitopo. En tales casos, pueden ser por ejemplo utilizados 2 a 8 polímeros con un peso molecular por ejemplo de aproximadamente 5,000 Da, tal como 3 a 6 de tales polímeros. Como lo ilustran los ejemplos siguientes, puede ser ventajoso tener un número más grande de moléculas poliméricas con un menor peso molecular (por ejemplo, 4 a 6 con un peso molecular de 5000) en comparación a un número más pequeño de moléculas poliméricas con un peso molecular más alto (por ejemplo, 1 a 3 con un peso molecular de 12,000 a 20,000) en términos de mejorar la vida media funcional in vivo del conjugado polipeptídico, incluso donde el peso molecular total de las moléculas poliméricas enlazadas en los dos casos, sea el mismo o similar. Se cree que la presencia de un mayor número de moléculas poliméricas más pequeñas, proporciona el polipéptido con un diámetro más grande o tamaño aparente más grande que por ejemplo, una molécula polimérica simple aún más grande, al menos cuando las moléculas poliméricas son distribuidas de manera relativamente uniforme sobre la superficie del polipéptido. Se ha encontrado además que son obtenidos resultados ventajosos cuando el tamaño aparente (también denominado como el "peso molecular aparente" o "masa aparente") de al menos una porción mayor del conjugado de la invención, es al menos aproximadamente 50 kDa, tal como de al menos aproximadamente 55 kDa, tal como al menos de aproximadamente 60 kDa, por ejemplo al menos aproximadamente 66 kDa. Se cree que esto es debido a que el despejo renal es sustancialmente eliminado para los conjugados que tienen un tamaño aparente lo suficientemente grande. En el presente contexto, el "tamaño aparente" de un conjugado de IL-21 o polipéptido de IL-21 es. determinado mediante el método de SDS-PAGE. En una modalidad de la invención, PEG se conjuga a un péptido de acuerdo a la presente invención y puede ser de cualquier peso molecular. En particular, el peso molecular puede estar entre 500 y 100,000 Da, tal como entre 500 y 60,000 Da, tal como entre 1000 y 40,000 Da, tal como entre 5,000 y 40,000 Da. En particular, PEG con pesos moleculares de 10,000 Da, 20,000 Da o 40,000 Da pueden ser utilizados en la presente invención. En todos los casos, las PEGs pueden ser lineal o ramificadas. En una modalidad de la invención, los grupos PEG son de 5kDa, 10 kDa, 20 kDa, 30 kDa, 40 kDa, o 60 kDa. En una modalidad de la invención, una o más moléculas poliméricas son agregadas a IL-21 o un análogo del mismo. El término "grupo lipofílico" está caracterizado porque comprende 4-40 átomos de carbono, y que tiene una solubilidad en agua _20°C en el intervalo de aproximadamente 0.1 mg/100 mi de agua- hasta aproximadamente 250 mg/100 mi de agua, tal como en el intervalo de aproximadamente 0.3 mg/100 mi de agua hasta aproximadamente 75 mg/100 mi de agua. Por ejemplo, el ácido octanoico (8 átomos de carbono) tiene una solubilidad en agua a 20 °C de 68 mg/100 mi, ácido decanoxeo (10 átomos de carbono) tiene una solubilidad en agua a 20°C de 15 mg/100 mi, y el ácido octadecanoico (18. átomos de carbono) tiene una solubilidad en agua a 20°C de 0.3 mg/100 mi. Para obtener un perfil extendido satisfactorio de acción del derivado de IL-21, el sustituyente lipofilico enlazado en la porción IL-21, como un ejemplo, comprende 4-40 átomos de carbono, tal como 8-25 átomos de carbono. El sustituyente lipofílico puede ser enlazado a un grupo amino de una porción IL-21 por medio de un grupo carboxilo del sustituyente lipofílico que forma un enlace amida con un grupo amino del aminoácido al cual se enlaza. Como una alternativa, el sustituyente lipofilico puede ser enlazado a dicho aminoácido de una manera tal que un grupo amino del sustituyente lipofílico forma un enlace amida con un enlace carboxilo del aminoácido. Como una opción adicional, el sustituyente lipofílico puede ser enlazado a la porción de IL-21 vía un enlace éster. Formalmente, el éster puede ser ya sea formado por reacción entre un grupo carboxilo de una porción IL-21 y un grupo hidroxilo del que va a ser sustituyente, o por reacción entre un grupo hidroxilo de la^ jporción IL-21 y un grupo carboxilo del que va a ser sustituyente. - Com una alternativa adicional; -el sustituyente lipofílico puede ser un grupo alquilo que es introducido dentro de un grupo amino primario dentro de la porción IL-21. En una modalidad de la invención, el derivado de IL-21 únicamente tiene un sustituyente lipofílico enlazado al polipéptido IL-21 . En una modalidad de la invención, el sustituyente lipofílico comprende de 4 a 40 átomos de carbono . En una modalidad de la invención, el sustituyente lipofílico comprende de 8 a 25 átomos de carbono . En una modalidad de la invención, el sustituyente lipofílico comprende de 12 a 20 átomos de carbono . En una modalidad de la invención, el sustituyente lipofílico está enlazado a un residuo de aminoácido, de una 2 manera tal que un grupo carboxilo del sustituyente lipofllico forma un enlace amida con un grupo amino del residuo de aminoácido . En otras modalidades preferidas, las lisinas adicionales son sustituidas, insertadas dentro de la secuencia o agregadas en el extremo N o en el extremo C, y luego opcionalmente derivatizadas . Las regiones preferidas de inserciones son donde la actividad total de la proteína no es afectada de manera adversa. En una modalidad de la invención, el sustituyente lipofílico-es enlazado aJjn_residuo de aminoácido, de manera tal que un grupo" amino dl"sustituyente lipofílico -forma-un -enlace-amida con un grupo carboxilo del residuo de aminoácido. En una modalidad de la invención, el sustituyente lipofílico es enlazado al péptido IL-21 por medio de espaciador. En una modalidad de la invención, el espaciador es un ácido alcan-a-?-dicarboxílico no ramificado que tiene de 1 a 7 grupos metileno, tal como dos grupos metileno cuyo espaciador forma un puente entre un grupo amino del péptido IL-21 y un grupo amino del sustituyente lipofílico. En una modalidad de la invención, el espaciador es un residuo de aminoácido, excepto un residuo de Cys, o un dipéptido. Los ejemplos de espaciadores adecuados incluyen ß-alanina, ácido gamma-aminobutírrco (GABA) , ácido y-glutáraico, ácido succínico, Lys, Glu o Asp, o un dipéptido tal como Gly-Lys. Cuando el espaciador es ácido succínico, un grupo carboxilo del mismo puede formar un enlace amida con un grupo amino del residuo de aminoácido, y el otro grupo carboxilo del mismo puede formar un enlace amida con un grupo amino del sustituyente lipofílico. Cuando el espaciador es Lys, Glu o Asp, el grupo carboxilo del mismo puede formar un enlace amina con un grupo amino del residuo de aminoácido, y el grupo amino del mismo puede formar un enlace amida, con un grupo carboxilo del sustituyente lipofilico. Cuando se utiliza Lys como el espaciador, un espaciador adicional puede en- algunos- casos-se-r—insertado entre--el- grupo e-amino de Lys y el sustituyente lipofílico. En una modalidad, tal espaciador adicional es ácido succínico que forma un enlace amida con el grupo e-amino de Lys, y con un grupo amino presente en el sustituyente lipofílico. En una modalidad más, tal espaciador adicional es Glu o Asp que forma un enlace amida con el grupo e-amina de Lys y otro enlace amida con un grupo carboxilo presente en el sustituyente lipofílico, es decir, el sustituyente lipofílico es un residuo de lisina Ix^-acilada. En una modalidad de la invención, el espaciador se selecciona de la lista que consiste de ß-alanina, ácido gamma-aminobutírico (GABA) , ácido ?-glutámico, Lys, Asp, Glu, un dipéptido que contiene Asp, un dipéptido que contiene Glu, o un dipéptido que contiene Lys . En una modalidad de la invención, el espaciador es ß-alanina. En una modalidad de la invención, el espaciador es ácido gamma-aminobutírico (GABA) . En una modalidad de la invención el espaciador es ácido ?-glutámico. En una modalidad de la invención, un grupo carboxilo del péptido de IL-21 progenitor forma un enlace amida con un grupo amino de un espaciador, y el grupo carboxilo del aminoácido o el espaciador dipéptido forma un enlace amida con un grupo amino del sustituyente lipofílico. -En—una—modalidad de la invención, -un grupo amino del péptido de IL-21 progenitor forma un enlace amida con un grupo carboxílico de un espaciador, y el grupo amino del espaciador forma un enlace amida con un grupo carboxilo del sustituyente lipofílico. En una modalidad de la invención, el sustituyente lipofílico comprende un esqueleto de ciclopentanofenantreno parcial o completamente hidrogenado. En una modalidad de la invención, el sustituyente lipofílico es un grupo alquilo de cadena lineal o ramificada. En una modalidad de la invención, el sustituyente lipofílico es el grupo acilo de un ácido graso de cadena lineal o ramificada. En una modalidad de la invención, el grupo acilo de un sustituyente lipofílico se selecciona del grupo que comprende CH3 (CH2) nCO- , en donde n es 4 a 38, tal como CH3(CH2)6CO-, CH3(CH2)8CO-, CH3 (CH2) 10CO- , CH3 <CH2) 12CO- , CH3(CH2)14CO-, CH3 (C¾)ieCO-, CH3 (C¾) 18C0- , CH3 (CH2) 20CO- , y CH3(CH2)22CO~. En una modalidad de la invención, el sustituyente lipofílico es un grupo acilo de un ácido alcan-a,?- dicarboxílico de cadena lineal o ramificada. En una modalidad de la invención, el grupo acilo del sustituyente lipofílico se selecciona del grupo que _comprende HOOC .(CH2LnC0- , en donde m es 4 a 38, tal como H00C(CH2)14C0-, H00C(CH2)16C0-, HOOC (CH2) 18C0- , HOOC (GH2) 20CO- , y HOOC(CH2)22CO- . En una modalidad de la invención, el sustituyente lipofílico es un grupo de la fórmula CH3 (CH2)P ( (CH2) qC00H) CH H- CO(CH2)2CO-, en donde p y q son número enteros y p+q es un número entero de 8 a 40, tal como de 12 a 35. En una modalidad de la invención, el sustituyente lipofílico es un grupo de la fórmula C¾ (CH2)rC0-NHCH(COOH) (CH2)2C0-, en donde r es un número entero de 10 a 2 . En una modalidad de la invención, el sustituyente lipofílico es un grupo de la fórmula CH3(CH2)sCO~ HCH ( (CH2) 2COOH) CO- , en donde s es un número entero de 8 a 24. En una modalidad de la invención, el sustituyente lipofllico es un grupo de la fórmula COOH (CH2) tCO- , en donde t es un número entero de 8 a 24. En una modalidad de la invención, el sustituyente lipofllico es un grupo de la fórmula - HCH(COOH) (CH2) 4NH-C0(CH2)uCH3, en donde u es un número entero de 8 a 18. En una modalidad de la invención, el sustituyente lipofilico es un grupo de la fórmula -NHCH(COOH) (CH2)4NH-COCH( (CH2)2COOH) H-CO(CH2)wCH3, en donde es un número entero de 10 a 16. En una modalidad de la invención, el sustituyente lipofllico es un grupo de la fórmula -NHCH(COOH) (CH2) NH-CO-(CH2)-2CH(CGQH)3IH-CO(CH2)xCH3, en donde x es un-número entero de 10 a 16. En una modalidad de la invención, el sustituyente lipofilico es un grupo de la fórmula -NHCH(COOH) (CH2)4NH-CO(CH2) 2CH(COOH)NHCO (CH2)yCH3/ en donde y es cero o un número entero de 1 a 22. En una modalidad de la invención el sustituyente lipofilico es N-litocoloilo. En una modalidad de la invención el sustituyente lipofilico es N-coloilo. En una modalidad de la invención, el derivado de IL-21 tiene un sustituyente lipofxlico. En una modalidad de la invención el derivado de IL-21 tiene dos sustituyentes lipofílicos. En una modalidad de la invención, el derivado de IL-21 tiene tres sustituyentes lipofílicos. En una modalidad de la invención, el derivado de IL-21 tiene cuatro sustituyentes lipofílicos. En el presente contexto, las palabras "péptido" y "polipéptido" y "proteína" son utilizadas intercambiablemente y están destinadas a indicar lo mismo. IL-21 y variantes del mismo pueden ser expresados en E-coli como se describe en O 04/55168. Opcionalmente, las variantes de la IL-21 pueden ser producidas mediante técnicas de ADN recombinante en otros formalismos. Para - este fin., las secuencias de ADN que codifican para los pól~rpéptrdos relacionados a IL-21 -humano, o las variantes de IL-21, pueden ser aislados mediante preparación de una biblioteca genómica o de ADNc y seleccionando las secuencias de ADN que codifican para toda o parte de la proteína mediante hibridación, utilizando sondas oligonucleotídicas sintéticas de acuerdo con las técnicas estándares. Para el presente propósito, la secuencia de ADN que codifica para la proteína es preferentemente de origen humano, · por ejemplo, derivada de un ADN genómico humano o biblioteca de ADNc . Los polipéptidos proteicos de la invención, incluyendo las proteínas de longitud completa, fragmentos de proteína (por ejemplo fragmentos de enlace al ligando) , y polipéptidos de fusión, pueden ser producidos en células hospederas manipuladas por ingeniería genética, de acuerdo a las técnicas convencionales. Las -células hospederas adecuadas son aquellos tipos celulares que pueden ser transformados o transíectados con el ADN exógeno, y desarrolladas en cultivo, e incluyen bacterias, células de hongos y células eucarióticas superiores cultivadas . Las células eucarióticas, particularmente células cultivadas de organismos multicelulares, son preferidas. Las técnicas para manipular las moléculas de AD clonadas en introducir ADN exógeno dentro de una variedad de células hospederas, se describen -- -por- Sambrook et al., Molecular Cloning: A Laboratory Manual, 2a ed. (Cold Spring Harbor Laboratory Press, Cold Spring Harbor, NY, 1989), y Ausubel et al., ibid. Se debe reconocer que de acuerdo a la presente invención, cuando un ADNc es reclamado como se describe anteriormente, se entiende que lo que se reclama son la hebra en sentido, la hebra anti-sentido y el ADN de doble hebra que tiene la hebra en sentido y anti-sentido recocidas entre sí por sus respectivos puentes de hidrógeno. También se reclama una ARN mensajera (ARNm) que codifica para los polipéptidos de la presente invención, y cuyo- ARN es codificado por el ADNc anteriormente descrito. Un ARN mensajero (ARNm) codificará para un polipéptido utilizando los mismos codones que aquellos definidos anteriormente, con la excepción de que cada nucleótido de timina (T) es reemplazado por un nucleótido de uracilo (U) . Para dirigir un polipéptido IL-21 hacia la via secretora de una célula hospedera, es proporcionada una secuencia de señal secretora (también conocida como una secuencia guía, secuencia prepro o secuencia pre) en el vector de expresión. La secuencia de señal secretora puede ser aquella de la proteína, o puede ser derivada de otra proteína secretada, por ejemplo, o sintetizada de novo. La secuencia de señal secretada es unida a la secuencia de ADN de IL-21 en la estructura de lectura correcta. Las secuencias_de_señal secretoras son.-comúnmente colocadas 5' a la secuencia de ADN que codifica para el polipéptido de interés, aunque ciertas secuencias de señal pueden ser colocadas en cualquier otro sitio en la secuencia de ADN de interés (ver por ejemplo, elch et al., patente de los Estados Unidos No. 5,037, 743; Holland et al., patente de los Estados Unidos No. 5,143, 830). La identidad porcentual de las secuencias entre las dos secuencias de aminoácidos es determinada por una alineación de Needelman-Wunsch, útil para alineaciones de proteínas y de ADN. Para alineaciones de proteínas, la matriz de calificación por emisión, utilizada es BLOSUM50, y la penalidad para el primer residuo en un espacio vacío es -12, mientras que la penalidad para los residuos adicionales en un espacio vacío es -2. La alineación puede ser realizada con el software Align del paquete FASTA versión v20u6 (W. R. Pearson and D. J. Lipman (1988), "Improved Tools for Biological Sequence Analysis" , PNAS 85: 2444- 2448; y W. R. Pearson (1990) " Rapid and Sensitive Sequence Comparison with FASTP and FASTA", Methods in Enzymology, 183: 63-98). En una modalidad, el polipéptido utilizado en la presente invención es un polipéptido aislado. En otra modalidad más, el polinucléotido utilizado en la presente invención es un polijiucleótido aislado. _ _ Se- prefiere que la pureza de los polipeptidos de la presente invención a una pureza > 80%, más preferentemente pureza >90%, aún más preferentemente > 95% la pureza con respecto a las macromoléculas contaminantes, particularmente otras proteínas y ácidos nucleicos, y libres de agentes infecciosos y pirógenos, y particularmente preferido es un estado farmacéuticamente puro, que es más del 98% puro o preferentemente mayor del 99.9% puro con respecto a las macromoléculas contaminantes, particularmente otras proteínas y ácidos nucleicos, y libre de agentes infecciosos y pirógenos. Preferentemente, un polipéptido purificado está sustancialmente libre de estos polipéptidos, particularmente otros polipéptidos de origen animal . La siguiente lista de componentes o agentes que pueden ser utilizados conjuntamente con IL-21, o análogos de IL-21 o derivados de los mismos, en terapia en combinación del cáncer y las infecciones virales, no se pretende de ningún modo que limite el alcance de la invención. I. a) Agentes guimioterapéuticos convencionales En una modalidad de la invención, la terapia en combinación es realizada al administrar IL-21, análogos o derivados del mismo y agentes guimioterapéuticos convencionales . Los agentes quimioterapéuticos tienen diferentes modos de acción tales como a) el nivel de ADN b) el nivel de ARN Los ejemplos no limitantes de agentes quimioterapéuticos convencionales en el nivel ADN o al nivel del ARN son anti-metabolitos (tales como azatioprina, citarabina, fosfato de fludarabina, fludarabina, gemcitabana, citarabina, cladribina, capecitabina, 6-mercaptopurina, 6-tioguanina, metotrexato, S-fluouracilo, e hidroxiurea) , agentes de alquilación (tales como melfalan, busulfan, cis-platino, carboplatino, oiclofosfamida, ifosfamida, dacarbazina, procarbazina, clorambucilo, tiotepa, lomustina, temozolamida) , agentes anti-mitóticos (tales como vinorelbina, vincristina, vinblastina, docetaxel, paclitaxel) , inhibidores de la topoisomerasa (tales como doxorrubicina, amsacrina, irinotecan, daunorrubicina, epirrubicina, mitoraicina, mitoxantrona, idarrubicina, teniposido, etoposido, topotecan) , antibióticos (tales como actinomicina y bleomicina) , asparaginasa, o las antraciclinas o los taxanos . En una modalidad de la invención, la terapia en combinación es realizada mediante la administración de análogos de IL-21 o derivados del mismo, y dacarbazina (DTIC) . b) Radioterapia: Ciertos tumores pueden ser tratados con radiación o productos radiofarmaeéuticos . --La fuente de radiación puede ser ya sea externa o interna para el paciente que se trata. Cuando la fuente es externa para el paciente, la terapia es conocida como terapia de radiación de haz externo (EBRT por sus siglas en ingles) . Cuando la fuente de radiación es interna al paciente, el tratamiento es llamado braquiterapia (BT) . Los átomos radioactivos típicos que han sido utilizados incluyen radio, cesio-137, iridio-192, americio-241, oro-198, cobalto-47, cobre-67, tecnecio-99, yodo-123, yodo-131 e indio-111. La terapia de radiación es el tratamiento estándar para controlar los tumores no extirpables o inoperables y/o metástasis tumorales. Los resultados mejorados han sido observados cuando la terapia con radiación ha sido combinada con otras terapias . En una modalidad de la invención IL-21, un. análogo o derivado del mismo, es administrado en combinación con radioterapia . Los anticuerpos monoclonales (mAb) han sido desarrollados para . el tratamiento de la leucemia y el linfoma, así como de tumores sólidos, y este principio está ganando interés creciente. Estas modalidades funcionan ya sea al inhibir las funciones que son vitales para la supervivencia de las células tumorales, al distribuir una carga tóxica, al interrumpir eventos de señalización claves, o mediante inducción de la toxicidad mediada por células dependientes del anticuerpo (ADCC) o citotoxicidad dirigida al complemento (CDC) contra las células tumorales. La muerte de las células tumorales puede entonces conducir a la liberación de antígenos tumorales que "vacunan" el sistema inmune y lo estimulan para producir una respuesta secundaria que se dirige luego a la célula tumoral (por ejemplo 'vacuna interna' como se describe más adelante) . Los oncogenes sobre-expresados y los antígenos específicos de tumor son objetivos clave para muchos mAb bajo desarrollo. Los antígenos tumorales son descritos por ejemplo en Stauss H, Kawakami Y y Parmiani 3: Tumor antigens recognized by T cells and antibodies . Taylor and Francés (2003) . La invención cubre los anticuerpos producidos contra estos objetivos. La invención también cubre los anticuerpos producidos contra antígenos virales . En una modalidad de la invención, IL-21, un análogo o derivado del mismo es combinado con los anticuerpos tales como Rituximab, Alemtuzumab, Trastuzumab, Gemtuzumab, Gemtuzumab-ozogamicina (Myelotarg Q) , Wyeth) Cetuximab (Erbitux™) , Bevacizumab, Hu- Max-CD20, HuMax-EGFr, Zamyl y Pertuzumab . En una modalidad de la invención, IL-21, un análogo o derivado del mismo es combinado con Rituximab. En una modalidad de l invención, IL-21, un análogo o derivado del mismo es combinado con Cetuximab. En una modalidad de la invención, IL-21, un análogo o derivado del mismo es combinado con un anticuerpo contra el factor tisular, receptores similares a Ig asesina (KIR) , laminina-5, EGF-R, VEGF-R, PDGF-R, HER-2/neu, o un anticuerpo contra un antígeno tumoral tal como PSA, PSCA, CEA, CA125, KSA, etc. En una modalidad de la invención, IL-21, un análogo o derivado del mismo es administrado junto con un anticuerpo terapéutico, tales como aquellos anteriormente mencionados, y combinado además con los compuestos aumentadores de ADCC, adicionales, por ejemplo, que. bloquean los anticuerpos anti-KIR, agonistas de NKG2D, antagonistas de NKG2A, IL-2, IL-12, IL-15 o IL-21. En otra modalidad de la invención, IL21, un análogo o derivado del mismo es administrado como una combinación con anticuerpos contra los antígenos virales. d) Reguladores del control del ciclo celular/apoptosis Una serie de reguladores están involucrados en el mantenimiento del ciclo celular normal. Los compuestos, los cuales se dirigen a los reguladores tales como (i) cdc-25 (con MSC 663284 como un ejemplo no limitante (Pu et al. (2003) J Biol Chem 278, 46877)), (ii) cinasas dependientes de ciclina que sobreestimülan el ciclo celular (con los siguientes ejemplos no limitantes: flavopiridol (L868275, HMR1275; Aventis)_,„_ 7-hidroxitaurosporina (UCN-01, KW-2401; Kyowa Hakko Kogyo) y roscovitina (R-roscovitina, CYC202; Cyclacel) -como se revisa por Fischer & Gianella-Borradori (2003) Exp Op Invest Drugs 12, 955-970), y (iii) telomerasa, la enzima que ayuda a las células cancerosas a reconstruir sus telómeros están dentro de la presente invención, tales como los siguientes ejemplos no limitantes BIBR1532 (Damm et al. (2001) EMBO J 20, 6958-6968) y SOT-095 (Tauchi et al. (2003) Oncogene 22, 5338-5347) . Además, los fármacos que interfieren con las vías apoptóticas están dentro de la presente invención, tales como los siguientes ejemplos no limitantes: el ligando inductor de apoptosis relacionado a T F (TRAIL) /ligando de apoptosis 2 (Apo-2L) , anticuerpos que activan los receptores de TRAIL, IFNa y Bcl-2 anti-sentido (ver Igney y rammer (2002) Nature Rev. Cáncer 2, 277-288; Makin y Dive (2003) Trends Mol Med 9, 2519; Smyth et al. (2003) Imraunity 18, 1-6; Panaretakis et al . (2003) Ohcogene 22, 4543-4556 y referencias en éstas) . En una modalidad de la invención, IL-21, un análogo o derivado del mismo, es combinado con uno o más reguladores del ciclo celular y/o agentes inductores de apoptosis. En una modalidad de la invención, los compuestos son seleccionados del grupo que comprende cdc-25, NSC 663284, flavopiridol , 7-hidroxitaurosporina, roscovitina, BIBR1532 SOT-095, ligando inductor de apoptosis relacionado a TNF (TRAIL) /ligando de apoptosis-2 (Apo-2L) , anticuerpos que activan los receptores de-TRAIL, iFNa y -bcl-2 anti-sentido. e) Inhibidores del factor de crecimiento Un número de anticuerpos monoclonalés mAb contra factores de crecimiento y los receptores del factor de crecimiento están siendo desarrollados para el tratamiento del cáncer. De este modo, como un ejemplo no limitante, los miembros del receptor de la familia del crecimiento epidérmico (EGF-R) son anormalmente activados en muchos tumores epiteliales, los cuales frecuentemente correlacionan con un curso clínico más agresivo. Los anticuerpos dirigidos contra el dominio de enlace al ligando extracelular de estos receptores, y las moléculas de bajo peso molecular que inhiben sus dominios de tirosina-cinasa son el desarrollo clxni-co de etapa final o aprobado para el tratamiento del cáncer, ya sea como agentes simples o en combinación con otros fármacos para el cáncer. Los ejemplos no limitantes son Herceptin (anticuerpo monoclonal) , cetuximab (anticuerpo monoclonal) , tarceva (inhibidor de bajo peso molecular) , e iressa (inhibidor de bajo peso molecular) . Además, el ligando puede ser neutralizado antes del enlace al receptor. En una modalidad de la invención, IL-21, un análogo o derivado del mismo es combinado con los inhibidores del factor de crecimiento. En una modalidad de la invención, los inhibidores del,_factor de crecimiento son seleccionados del grupo que comprende herceptina (anticuerpo monoclonal) - cetuximab (anticuerpo monoclonal) , tarceva (inhibidor de bajo peso molecular) , e iressa (inhibidor de bajo peso molecular) . En una modalidad de la invención, IL-21, un análogo o derivado del mismo es combinado con herceptina. f) Inhibidores de la vascularización tumoral (fármacos anti-angiogénesis y anti-metastáticos El crecimiento tumoral es dependiente de un suministro suficiente de sangre y por lo tanto del desarrollo de nuevos vasos sanguíneos. Esta característica general de los tumores sólidos parece atractiva desde un punto de vista terapéutico, por ejemplo, el crecimiento reducido del tumor y la regresión del tumor es esperada cuando se tratan pacientes con cáncer los fármacos anti-angiogénesis . Actualmente, más 4 de 60 fármacos para la anti-angiogénesis están en pruebas clínicas, incluyendo la endostatina y angiostatina de origen natural (revisado en Marx (2003) Science 301, 452-454) . Pero también fármacos de quimioterapia más viejos, otras medicinas y radioterapia tienen efectos anti-angiogénicos . En un tipo de modalidades de la presente invención está la terapia en combinación con IL-21, análogos o derivados de la misma y uno o más agentes anti-angiogénicos, tales como los siguientes ejemplos no limitantes, endostatina, angiostatina, anticuerpos que bloquean los factores que inician la angiogénesis (.po -ej emplo, anti-VEGF^- Avastina) , compuestos ~de~ "bajo" peso "molecular -que" inhiben la angiogénesis -al inhibir los elementos clave en las vías de transducción de señales relevantes . Ataque de la vasculatura del tumor y la matriz extracelular ha atraído interés creciente. Los siguientes principios han sido desarrollados hasta ahora. El bloqueo de las células endoteliales , la administración de angiostatina y endostatina, la dirección de VEGF y la matriz extracelular. En una modalidad de la invención, IL-21, un análogo o derivado del mismo es combinado con un fármaco anti- angiogénesis. En una modalidad de la invención, el fármaco anti- angiogénesis se selecciona del grupo que comprende: avastina, neovastat, talidomida, PTK787, ZK222584, ZD-6474, SU6668, PD547, 632, VEGF-Trap, CEP-7055, NM-3, SU11248. g) Dirección a objetivos virales La dirección a objetivos virales utiliza virus recombinantes -usualmente incompetentes en replicación- para destruir un tumor directamente. En la práctica, al menos una ronda de replicación ocurre antes de que el virus sea incapacitado. Por lo tanto, el tumor es lisado, lo cual frecuentemente conduce a inmunización, sistémica con la protección resultante. Este procedimiento ha sido refinado adicionalmente utilizando modificación genética para aumentar la respuesta inmune . Por ejemplo, la inserción genética de un-gen-~G -GSF—humano dentro- de un vector-del virus de herpes simple tipo 2 ha sido utilizado para mejorar la eficacia de la vacuna. En una modalidad de la invención, la terapia en combinación es realizada al administrar IL-21, un análogo o un derivado de la misma y la dirección al objetivo viral. h) Agentes hormonales Los agentes hormonales son principalmente conocidos en el tratamiento de los cánceres dependientes de hormonas tales como cáncer de ovario, cáncer de mama y cáncer de próstata, tales como la terapia antiandrógeno y anti-estrógenos . Las hormonas y anti-hormonas son compuestos tales como fosfato de estramustina, fosfato de poliestradiol , estradiol, anastrozol, exemestano, letrozol, tamoxifen, acetato de magestrol, acetato de medroxiprogesterona, 5 octreotido, acetato de ciproterona, bicaltumida, flutamida, tritorelina, leuprorelin , buserelina o goserelina . En una modalidad de la invención, IL-21, un análogo o derivado del mismo es combinado con terapia hormonal . II. Agentes que aumentan la respuesta inmune contra las células tumorales o las células infectadas con el virus J) La siguiente lista de componentes o agentes que pueden' ser utilizados junto con IL-21, un análogo o derivados del mismo en terapia de combinación del cáncer e infecciones virales, mediante el mejoramiento de la eficacia del sistema inmune, no está destinada de ningún modo a limitar el alcance de la invención. Adyuvantes : La inmunoterapia consiste de modalidades específicas y no específicas. Como ejemplos de inmunoterapia no específica están los adyuvantes que actúan principalmente como catalizador para la iniciación de una respuesta inmune. Los ejemplos no ' limitantes de tales adyuvantes de vacuna son 2S21, GM-CSF y CpG, oligodesoxinucleótidos, lipopolisacárido y ácido poliinosínico :pólicitidílico. En una modalidad de la invención, IL-21, un análogo o derivado del mismo es combinado con uno o más adyuvantes . En una modalidad de la invención, los adyuvantes son seleccionados del grupo que comprende: QS21, GM-CSF y CpG, oligodesoxinucleót idos , lipopolisacárido y ácido poliinosínico : policitidí 1 ico , a-galactosilceramida o análogos de la misma, diclorhidrato de histamina, o hidróxido de aluminio . Citocinas Los _.ej^mJL s no. limitantes de citocinas son IFN-a, IFN- ß, IFN-?, IL-2, PEG-IL-2, IL-4, IL-6, IL-7, IL-12, IL-13, IL-15, IL-18, IL-21, IL-23, IL-27, IL-28a, IL-28b, IL-29, GM-CSF , ligando de Flt3 o factor de células madre. En una modalidad de la invención, IL-21, un análogo o derivado del mismo es combinado con una o más citocinas. En una modalidad de la invención, un IL-21 es combinado con uno o más de los compuestos seleccionados del grupo que comprende: IFN-oc, IFN-ß, IFN-?, IL-2, PEG-IL-2, IL-4, IL- 6, IL-7, IL-12, IL-13, IL-15, IL-18, IL-21, IL-23, IL-27, IL-28a, IL-28b, IL-29, GM-CSF, ligando -de Flt3 o factor de células madre, o un análogo o derivado de cualquiera de éstos .

En una modalidad de la invención, los compuestos son seleccionados del grupo que comprende: IFN-cc, IFN-ß, IFN-?, PEG-IL-2, IL-18, IL-23, IL-27, IL-28a, IL-28b, IL-29. (En una modalidad de la invención, IL-21, un análogo o derivado del mismo es combinado con uno o más de los siguientes: IL-2, PEG-IL-2, IL-7, IL-12, IL-15, e IFN-a. En una modalidad de la invención, IL-21, un análogo o derivado del mismo es combinado con IL-12. En una modalidad de la invención, IL-21, un análogo o derivado del mismo es combinado con IF-oc. En una modalidad de la invención, IL-21, un análogo o derivado del mismo es combinado con PEG-IL-2. En una modalidad de la invención, IL-21, un análogo o derivado del mismo es combinado con más de uno de los siguientes: IL-2, PEG-IL-2, IL-7, IL-12, IL-15 e IFN-oo. En una modalidad de la invención, IL-21, un análogo o derivado del mismo es combinado con al menos uno de los siguientes: IL-2, PEG-IL-2, IL-7, IL-12, IL-15 e IFN-ot y un componente activo. En una modalidad de la invención, IL-21, un análogo o derivado del mismo es combinado con al menos uno de los. siguientes: IL-2, PEG-IL-2, IL-7, IL-12, IL-15 e IFN- y una citocina adicional de la lista anterior. En una modalidad de la invención, IL-21, un análogo o derivado del mismo es combinado con IFN-ot y GM-CSF. En una modalidad de la invención, IL-21, un análogo o derivado del mismo es combinado con IFN-a y timopentina. En' una modalidad de la invención, IL-21, un análogo o derivado del mismo es combinado con IFN-?. En una modalidad de la invención, IL-21, un análogo o derivado del mismo es combinado con TIL aut logos e IFN-a. En una modalidad de la invención, IL-21, un análogo o derivado del mismo es combinado con IFN-a e IL-12. En una modalidad de la invención, IL-21, un análogo o derivado del mismo es combinado con Cis-platino e IFN-a. En una_modalidad de la invención, IL-21, un análogo o derivado del mismo es combinado con Cis-platino, tamoxifeno e IFN-a. En una modalidad de la invención, IL-21, un análogo o derivado del mismo es combinado con Cis-platino, DTIC, tamoxifeno e IFN-a. En una modalidad de la invención, IL-21, un análogo o derivado del mismo es combinado con Cis-platino, DTIC, tamoxifeno y GM-CSF. En una modalidad de la invención, IL-21, un análogo o derivado del mismo es combinado con Cis-platino, carmustina, DTIC e IFN-a. En una modalidad de la invención, IL-21, un análogo o derivado del mismo es combinado con Cis-platino, carmustina, DTIC, tamoxifeno e IFN-a.

En una modalidad de la invención, IL-21, un análogo o derivado del mismo es combinado con Cis-platino, carmustina, DTIC, carboplatino, tamoxifeno e IFN-a. En una modalidad de la invención, IL-21, un análogo o derivado del mismo es combinado con Cis-platino, DTIC, vinblastino, tamoxifeno e IFN-a. En una modalidad de la invención, IL-21, un análogo o derivado del mismo es combinado con Cis-platino, vinblastino, temosolomida e IFN-a. En una modalidad de la invención, IL-21, un análogo o derivado del mismo es combinado con Cis-platino, carmustina, DTIC, vindesina, tamoxifeno e IFN-a. En una modalidad de la invención, IL-21, un análogo o derivado del mismo es combinado con Cis-platino, tamoxifeno e IFN-a. En una modalidad de la invención, IL-21, un análogo o derivado del mismo es combinado con Cis-platino, vinblastino, DTIC e IFN-a. En una modalidad de la invención, IL-21, un análogo o derivado del mismo es combinado con DTIC e IFN-a. En una modalidad de la invención, IL-21, un análogo o derivado del mismo es combinado con DTIC, GM-CSF e IFN-a. En una modalidad de la invención, IL-21, un análogo o derivado del mismo es combinado con DTIC, timosina-a e IFN-a.

En una modalidad de la invención, IL-21, un análogo o derivado del mismo es combinado con vinblastino e IFN-a. En una modalidad de la invención, IL-21, un análogo o derivado del mismo es combinado con 5-fluouroacilo e IFN-a. En una modalidad de la invención, IL-21, un análogo o derivado del mismo es combinado con fotemustina e IFN-a. En una modalidad de la invención, IL-21, un análogo o derivado del mismo es combinado con DTIC y células LLAK autólogas . En una modalidad de la invención, IL-21, un análogo o derivado del mismo es combinado con gemcitabina e IFN-a. Cualquiera - de las combinaciones anteriores- puede ser adicionalmente combinada con IL-2. Inmunoterapia celular Los ejemplos ' de inmunoterapia celular (o inmunoterapia adoptiva) incluyen la re-infusión de las células T infiltradoras de tumores, expandidas ex vivo, o las células T genéticamente modificadas . En una modalidad de la invención, la terapia en combinación es combinar la administración de IL-21, un análogo o derivado del mismo e inmunoterapia celular. La inmunoterapia puede incluir el aislamiento de las células que pueden estimular o ejercer una respuesta anti-cancerosa de los pacientes, expandir éstas en grandes números, y reintroducirlas en el mismo o en otro paciente.

En otro aspecto, estas pueden ser células . CD4+ o CD8+ que reconocen antígenos específicos del tumor o antígenos asociados al tumor. En otro aspecto más, éstas pueden ser células B que expresan anticuerpos específicos para los antígenos específicos del tumor o antígenos asociados al tumor. En otro aspecto más, éstas pueden ser células NK que son capaces de matar las células tumorales. En un aspecto preferido, éstas pueden ser células dendríticas (DC) que son cultivadas ex vivo con un agente de expansión de DC (por ejemplo G -CSF o Flt3-L) , cargadas con antígenos específicos del tumor o antígeno. asociado al tumor y reinfundidas dentro - -de -un— aciente en- ecesidad de -las mismas. En una modalidad de la invención, la terapia en combinación es combinar la administración de IL-21, un análogo o derivado del mismo, e inmunoterapia celular o terapia adoptiva. En una modalidad, la terapia adoptiva celular comprende células CD4+ o CD8+ que reconocen antígenos específicos de tumor o antígenos asociados al tumor. En una modalidad de la invención, la terapia adoptiva celular comprende células B que expresan anticuerpos específicos para los antígenos específicos del tumor o antígenos asociados al tumor. En una modalidad de la invención, la terapia adoptiva celular comprende las células NK que son capaces de matar las células tumorales .

En una modalidad de la invención, la terapia adoptiva celular comprende células dendríticas (DC) . En una modalidad de lo anterior, las células dendríticas son cultivadas in vivo con un agente de expansión DC (por ejemplo GM-CSF o Flt3-L) , cargadas con antígenos específicos del tumor o antígenos asociados al tumor y reintroducidas in vivo. k) Agentes que bloquean la señalización inhibitoria en el sistema inmune Las respuestas inmunes, incluyendo las respuestas anti-tumoral y anti-viral, son reguladas por un balance de señalización vía los receptores estimuladores e inhibitorios en las células del sistema inmune . Un cambio hacia la señalización abundante vía los receptores activadores puede conducir a respuestas inmunes más efectivas, mientras que la señalización aumentada vía los receptores inhibitorios, puede conducir a respuestas menos productivas, o incluso puede deteriorar la inmunidad. Con el fin de aumentar las respuestas anti-tumoral o anti-viral, es útil el bloquear terapéuticamente la señalización vía los receptores inhibitorios, con el fin de desplazar el balance hacia la activación. Por lo tanto, los agentes que bloquean los receptores inhibitorios, o las vías de señalización inhibitorias, son agentes preferidos para tratamiento en combinación, en conjunto con IL-21, un análogo o derivado del mismo. Los ejemplos no limitantes de tales agentes que bloquean los receptores inhibitorios son mAb específicos para CTLA-4 (anti-CTLA-4) , mAb específicos para KIR (anti-KIR) , mAb específicos para LIR (anti-LIR) , mAb específicos para CD94 (anti-CD94) , o mAb específicos para NKG2A (anti-N G2A) . Los agentes anti-anérgicos son compuestos .pequeños, proteínas, glucoproteínas o anticuerpos que pueden romper la tolerancia a los antígenos tumorales y cancerosos. Aunque la presencia de linfocitos de infiltración de tumores (TIL) correlaciona con el resultado clínico-mejorado en un número de diferentes formas de cáncer, existe solamente una necesidad para mejorar la actividad de estos TIL debido a la anergia o tolerancia a antígenos tumorales. La condición anérgica puede, en un número sustancial de casos, ser contraatacada por anticuerpos monoclonales que previenen la anergia o tolerancia inducida por CTLA-4. El bloqueo de CTLA-4 ha mostrado en modelos animales, y en pacientes humanos con cáncer, que mejora la efectividad de la terapia contra el cáncer, sugiriendo que el bloqueo de CTLA-4 puede ser utilizado para romper la tolerancia a los antígenos cancerosos o tumorales. Un ejemplo no limitante de un anticuerpo monoclonal que · puede ¦ ser utilizado para- la inducción de la actividad de TIL es MDX-010 (Phan et al. (2003) Proc. Nati. Acad. Sci. EUA 100: 8372). En una modalidad de la invención, la terapia en combinación es realizada al administrar IL-21, un análogo o derivado del mismo y uno o más agentes que rompen la tolerancia hacia el cáncer, hacia los antígenos tumorales o virales. En una modalidad de la invención, IL-21, un análogo o derivado del mismo es combinado con MDX-010. En una modalidad de la invención, IL-21, un análogo o derivado del mismo es combinado con anticuerpos contra CTLA-4. En una modalidad de la invención, IL-21, un análogo o derivado del mismo es combinado con anticuerpos contra KIR. En una modalidad de la invención, IL-21, un análogo o—derivado--del----mismo—es-combinado—con- anticuerpos contra CD9 . En una modalidad de la invención, IL-21, un- análogo o derivado del mismo es combinado con. anticuerpos contra NKG2A. En una modalidad de la invención, IL-21, un análogo o derivado del mismo es combinado con anticuerpos contra un receptor inhibitorio expresado sobre una célula NK, una célula T o una célula NKT. En una modalidad de la invención, IL-21, un análogo o derivado del mismo es combinado con un antagonista . de un receptor inhibitorio. En una modalidad de la invención, IL-21, un análogo o derivado del mismo -es combinado con un antagonista de. una protelna de señalización involucrada en la transmisión de señales inhibitorias . 1) Vacunas terapéuticas El desarrollo de casi todos los cánceres humanos involucra alteraciones genéticas, y esto puede conducir a la expresión de moléculas alteradas en células tumorales y la sobre-exprésion de moléculas normales, respectivamente. En principio, estos cambios deben conducir a una respuesta inmune del hospedero (supervivencia inmune) .' Obviamente, esta activación teórica del sistema inmune únicamente conduce ., a regresión espontánea del tumor en muy pocos casos - excepcionales7 —E-s-t-o puede,- entre otros factores-, ser debido a la falta de "señales de peligro", un fenómeno que ha atraído interés cada vez mayor. Los antígenos específicos del tumor han sido identificados, y la vacunación con tales antígenos puede estimular el sistema inmune para erradicar el tumor. Los antígenos específicos del tumor (TSAs por sus siglas en ' ingles) son un grupo relativamente pequeño de antígenos ejemplificados por los antígenos de cáncer de testículo. Estos genes son silenciosos en el tejido normal pero son expresados por células cancerosas . Éstos son marcadores altamente específicos de la enfermedades incluyen el gen del antígeno de melanoma (MAGE por sus siglas en ingles) - encontrado en el melanoma.

Antígenos asociados al tumor (TAA por sus siglas en ingles) son usualmente antígenos de diferenciación expresados por células normales pero sobre-expresados masivamente en tejido canceroso. .Los objetivos inicialmente pensados para ser específicos para un cáncer particular son efectivamente muy comunes en muchos tumores, tales como los gangliósidos y los antígenos de mucina. Los antígenos de diferenciación clásicos incluyen MART-1 (antígeno del melanoma reconocido por las- células T) y gp 100, ambos del melanoma, tirosinasa, antígeno carcinoembrionario (CEA. por sus siglas en ingles) y gp 75. Antígenos mutacionales : Las mutaciones puntuales son comunes -en-muchos —cánceres, y frecuentemente- ocurren en un sitio similar. Tal como la mutación común de los oncogenes P53 o ras. La inducción in vitro de las respuestas de linfocitos T citotóxicos humanos (CTL) contra los péptidos de tipos motante y silvestre p53, han sido reportadas. En un modelo de ratón, las células dendríticas pulsadas con p53 motante fueron capaces de inducir CTL específicas de p53 e inhibir el crecimiento de tumores establecidos. Antígenos Virales : Ciertos virus son oncogénicos productos génicos codificados por estos virus pueden promover, respuestas inmunes y de este modo servir como antígenos del cáncer. Un ejemplo son las proteínas ES y E7 provenientes del virus de papiloma, humano tipo. 16, que han mostrado que inducen respuestas de linfocitos T citotóxicos, in vitro.

Los antígenos específicos del tumor, antigenos asociados al tumor y/o antígenos mutacionales y antígenos virales, pueden ser utilizados ya sea como péptidos, antígenos de agente simple purificados, recombinantes, combinaciones de antígenos purificados recombinantes y/o purificados o combinados de antígeno aislados de células cancerosas o células tumorales, como una vacuna para promover una respuesta inmune antitumoral. Similarmente, los péptidos, los antígenos de agente único, purificado, recombinantes, combinaciones de antígenos recombinantes y/o puirificados o combinados de antígeno aislados de células infectadas -con--vi-rus, pueden- -ser- utilizados en una— acuna para promover una respuesta contra las células infectadas con el virus . Las vacunas terapéuticas pueden también estar en la forma de lisados o extractos de células tumorales autólogas, o lisados o extractos de líneas celulares tumorales alogénicas. Las vacunas terapéuticas pueden también estar en la forma de una vacuna de ADN para promover la respuesta inmune contra el cáncer y las células infectadas con el virus. Dicha vacuna de ADN puede consistir de un vector de expresión que codifica para el antígeno solo,- que codifica para el antígeno junto con una citocina (por ejemplo G -CSF, IL-2, IL-12 o IL-21) que puede mejorar la respuesta inmune contra el cáncer y las células infectadas con el virus. La vacuna de ADN puede también consistir de un virus modificado (por ejemplo virus de la viruela aviar, virus de la vaccinia o adenovirus) que contiene una secuencia de ADN que codifica para el antígeno solo o que codifica para el antígeno junto con una citocina. Las vacunas terapéuticas pueden también estar en la forma de anticuerpos anti-idiotipo para promover la respuesta inmune contra el cáncer y las células infectadas con el virus. Las vacunas terapéuticas pueden también estar en la forma de células dendríticas autólogas cargadas con los antígenos o péptidos derivados de los mismos, junto con un agente modificador de DC, tales como citocinas, agonisjtas.__del receptor similar a . toll (TLR) , oligodesoxinu-eleótidos de CpG, GM-GSF-7-- -o— roteínas—de -choque térmico . La promoción mediada por la vacuna de una respuesta anti-tumoral o una respuesta contra las células infectadas con el virus , puede ser aumentada por la administración de adyuvantes, citocinas, agonistas del receptor similar a toll (TLR) , oligodesoxinucleótidos CpG, células dendríticas, GM-CSF, o proteínas de choque térmico. En una modalidad de la invención, la terapia en combinación es realizada al administrar IL-21, un análogo o derivado del mismo con una o más vacunas terapéuticas con o sin adyuvantes, citocinas, agonistas del receptor, similar a toll · (TLR) , oligodesoxinucleótidos CpG, ¦ células dendríticas, GM-CSF, o proteínas de choque térmico.

Agentes que interfieren con el crecimiento tumoral, la metástasis o la dispersión de las células infectadas con virus n) Las células cancerosas metastáticas penetran la matriz extracelular (ECM) y la membrana basal de los vasos sanguíneos para realizar la metástasis hacia un órgano objetivo (sito ectópico) . EMC consiste de proteínas incrustadas en un complejo de carbohidrato (peptidoglicanos de sulfato de heparan) , y las proteasas que rodean el- tumor son activas en este rompimiento del tejido del hospedero. Los agentes antimetastáticos antagonizan el efecto de tales jproteasas ^(por eg-emplo-,—inhibidores - de - -metaloproteinasa) (Coussens et al. Science 2002; 295: 2387-2392). En una modalidad de la presente invención está la terapia en combinación con IL-21, un análogo o derivado del mismo y uno o más agentes antimetastáticos, tales como los inhibidores de metaloproteinasa. . . IV. Vacunación interna IV. "Vacunación interna" y "terapia de vacunación interna" se refieren a la muerte celular inducida por fármacos o por radiación, de las células tumorales, que conduce a la promoción de una respuesta inmune dirigida hacia (i) las células tumorales como un todo o (ii) partes .de las células tumorales incluyendo (a) proteínas secretadas, glucoproteínas u otros productos, (b) proteínas asociadas a la membrana o glucoproteínas u otros componentes asociados con o insertados en membranas y (c) proteínas intracelulares u otros componentes intracelulares . La respuesta inmune puede ser humoral (por ejemplo mediada por el anticuerpo - complemento) o mediada por células, incluyendo pero no limitada al desarrollo de linfocitos T citotóxicos que reconocieron las células tumorales o partes de las mismas. La vacunación interna lleva muchas similitudes a otros procedimientos de vacuna e involucra muchos o todos de los mismos componentes celulares del sistema hematopoyético e inmune, con__la_ venta.a_ de_que JLo.s inmunógenos o componentes antxgénleos-son-endógenos -y-de—este- modo- representativos para el repertorio antigénico de las células tumorales. La vacunación interna puede ser considerada de este modo como la ' vacunación personalizada, la cual es promovida por el uso de procedimientos generales para el tratamiento del cáncer, que conduce a la muerte de las células tumorales . Además de la radioterapia, los ejemplos no limitantes de fármacos y agentes que pueden ser utilizados para inducir la muerte de las células tumorales y la vacunación interna, son agentes quimioterapéuticos convencionales, inhibidores del ciclo celular, fármacos anti-angiogénesis, anticuerpos monoclonales, agentes inductores de la apoptosis e inhibidores de la transducción de señales . "1L-21 y terapia en combinación de vacunación interna" se refiere a la terapia en combinación donde IL-21, un análogo o derivado del mismo es administrado a pacientes con cáncer quienes son tratados con vacunación interna. IL-21, un análogo o derivado pueden administrados antes de, concomitante o después de la realización de la vacunación interna. En una modalidad de la invención IL-21, un análogo o derivado del mismo es incluido en una terapia de vacunación interna . La terapia génica incluye la transferencia- de material genético—..dentro de una célula para alterar transitoria o permanentemente el fenotipo celular.- Los diferentes métodos son investigados para la distribución de las citocinas, antígenos tumorales y moléculas estimuladoras adicionales. En el contexto de esta invención, IL-21 puede ser ya sea el agente distribuido o coadministrado. En una modalidad de esta invención, IL-21 puede ser administrado como un polinucleótido. El polinucleótido es descrito en WO00/53761. VI. Agentes inmunosupresores/inmunomoduladores r) agentes con influencia sobre el alojamiento · de linfocitos T, por ejemplo FTY-720. s) inhibidores de calcineurina tales como valspodar, PSC 833, son activos en prevenir el desarrollo de resistencia a los agentes citotóxicos debido a los efectos inhibitorios sobre MDR.-1 y p-glucoproteína. t) inhibidores de TOR actúan mediante el bloqueo de la cinasa serina-treonina de mamíferos TOR (mTOR) . Los compuestos tales como sirolimus, everolimus y rapmicina son agentes antiproliferativos . Éstos están involucrados en las cascadas de la señalización corriente abajo (3') y son por lo tanto relevantes en el tratamiento de todo tipo de tumores (por ejemplo propiedades antiangiogénicas) . COMPOSICIONES FARMACEUTICAS IL-21 u otros polipéptidos de IL-21 opcionalmente unto con el agente en combinación para el uso en tratamiento del cáncer de - acuerdo a la presente invención pueden ser administrados solos o en combinación con portadores o excipientes farmacéuticamente aceptables, ya sea como dosis simples o múltiples. La formulación de la combinación puede ser como una dosis unitaria que combina los compuestos, o puede ser formulada como dosis separadas . Las composiciones farmacéuticas que comprenden IL-21 u otros polipéptidos de IL-21, opcionalmente junto con el agente de combinación para el uso en el tratamiento del cáncer de acuerdo a la presente invención, pueden ser formulados con portadores o diluyentes farmacéuticamente aceptables así como cualesquier otros adyuvantes y excipientes conocidos de acuerdo con . las técnicas convencionales tales como aquellas descritas en" Remington: The Science and Practice of . Pharmacy, 19a Edición, Gennaro, Ed. , Mack Publis ing Co. Easton, PA, 1995. Las composiciones pueden aparecer en formas convencionales, por ejemplo cápsulas, tabletas, aerosoles, soluciones o suspensiones . Las composiciones farmacéuticas pueden ser específicamente formuladas para la administración mediante cualquier ruta adecuada tales como las rutas oral, rectal, nasal, pulmonar, tópica (incluyendo bucal y sublingual), transdérmica, intracisternal , intraperitoneal , vaginal y parenteral (incluyendo subcutánea, intramuscular, intra-tumoral , intratecal , intravenosa e intradérmica) . Se apreciará que la ruta preferida dependerá de la condición general y la edad del sujeto que se trate, de la naturaleza de la condición que se trate y del ingrediente activo elegido. La ruta de administración puede ser cualquier ruta, la cual transporte efectivamente el compuesto activo hacia el sitio de acción apropiado o deseado. Las composiciones farmacéuticas para la administración oral incluyen formas de dosis sólida tales como cápsulas duras o suaves, tabletas, trociscos, grageas, pildoras, pastillas, polvos y gránulos . Donde es apropiado, éstas pueden ser preparadas con recubrimientos tales como recubrimientos entéricos o pueden ser formuladas para proporcionar liberación controlada .. del ingrediente activo, tal como la liberación sostenida o prolongada de acuerdo a los métodos bien conocidos en la técnica. Las formas de dosis líquida para la administración oral incluyen soluciones, emulsiones, suspensiones acuosas o aceitosas, jarabes y elíxires. Las composiciones farmacéuticas para la administración parenteral incluyen soluciones, dispersiones, suspensiones o emulsiones estériles acuosas, y no acuosas, inyectables, así, como polvos estériles para ser reconstituidos en soluciones o dispersiones estériles inyectables, antes del uso. Las formulaciones inyectables de depósito son también contempladas dentro del _alcanee de la presente invención. — —.— — - — Otras formas de administración adecuadas incluyen supositorios, rocíos, ungüentos, cremas, geles, inhalantes, parches dérmicos, implantes, etc. Una dosis oral típica esta en el intervalo de aproximadamente 0.001 hasta aproximadamente 100 mg/kg de peso corporal por día, tal como de aproximadamente 0.01 hasta aproximadamente 50 mg/kg de peso corporal por día, por ejemplo de aproximadamente 0.05· hasta aproximadamente 10 rag/kg de peso corporal por día, administrados en una o más dosis tales como 1 a 3 dosis. La dosis exacta dependerá de la naturaleza del IL-21 o del mimético de IL-21, junto con el- ... agente de combinación elegido,, la frecuencia y el modo de administración, el sexo, la edad, el peso y la condición-general del sujeto que se trate, la naturaleza y la severidad de la condición tratada o cualesquiera enfermedades concomitantes que van a ser tratadas, y otros factores evidentes para aquellos expertos en la técnica. Las formulaciones pueden ser presentadas convenientemente en forma de dosis unitaria mediante métodos conocidos por aquellos expertos en la técnica. Una forma de dosis unitaria típica para la administración oral una o más veces al día, tal como 1 a 3 veces, al día, puede contener de 0.05 a aproximadamente 1000 mg, por ejemplo de aproximadamente 0.1 a aproximadamente 500 mg, tal como de aproximadamente 0-.-5—mg -hasta-aproximadamente 200- mg-.— Para las rutas parenterales tales como la administración intravenosa, intratecal, intramuscular, subcutánea y similares, las dosis típicas están en el orden de aproximadamente la mitad de la dosis empleada para la administración oral. Las sales de los polipéptidos de IL-21 son especialmente relevantes cuando, la proteína está en forma sólida o cristalina. Para la administración parenteral, las soluciones. "·..·" de IL-21 o el mimético de IL-21, opcionalmente junto con el agente de combinación en solución acuosa estéril, · propilenglicol acuoso o aceite de cacahuate o de ajonjolí, pueden ser empleadas. Tales soluciones acuosas deben ser- adecuadamente amortiguadas si es necesario, y el diluyente líquido primeramente hecho isotonico con suficiente solución salina o glucosa. Las soluciones acuosas son particularmente adecuadas para la administración intravenosa, intramuscular, subcutánea e intraperitoneal . Los medios acuosos estériles empleados son todos fácilmente disponibles por técnicas estándares conocidas por aquellos expertos en la técnica. Los .portadores farmacéuticos adecuados . incluyen diluyentes o rellenadores sólidos inertes, solución acuosa estéril y solventes orgánicos diversos. Los ejemplos de portadores sólidos son lactosa, tierra de dia orneas, sucrosa, - -ei-e-l-ode-xt-rina-,- - talco, gelatina,- agar, pectina, -acacia, estearato de magnesio, ácido esteárico y éteres de alquilo inferior de celulosa. Los ejemplos de portadores líquidos son jarabe, aceite de cacahuate, aceite de oliva, fosfollpidos, ácidos grasos, aminas de ácido grasó, polioxietileno y agua. Similarmente, el portador o diluyente puede incluir cualquier material de liberación sostenida conocido en la técnica, tal como monoestearato de glicerilo o diestearato- de glicerilo, solo o mezclado con una cera. Las composiciones f rmacéuticas formadas mediante combinación de un IL-21 o el mimético de IL-21, opcionalmente junto con el agente de combinación para el uso en el tratamiento del cáncer de acuerdo a la ¦ presente invención, y los portadores farmacéuticamente aceptables son luego administrados fácilmente en una variedad de formas de dosis, adecuadas para las rutas de administración descritas. Las formulaciones pueden ser convenientemente presentadas en forma de dosis unitaria mediante métodos conocidos en la técnica de la farmacia . Para la administración nasal, la preparación puede contener un polipéptido IL-21 o mimético de IL-21 disuelto o suspendido en un portador líquido, en particular un portador acuoso, para la aplicación en aerosol. El' portador puede contener aditivos tales como agentes solubilizadores, por ejemplo propilengl eol-,—surfactantes, aumentadores de la absorción, "tales cómo" ^ecirt a fosfatidilcolina) o ciclodextrina, o conservadores tales como parabenos . Las formulaciones de IL-21 o el mimético de IL-21, opcionalmente junto con el agente de combinación para el uso en el tratamiento del cáncer de acuerdo a la presente invención, adecuadas para la administración oral, pueden presentarse como unidades discretas tales como cápsulas o tabletas, cada una conteniendo una cantidad predeterminada del ingrediente activo, y que pueden incluir un excipiente adecuado. Además, las formulaciones oralmente disponibles pueden estar en la forma de un polvo o granulos, una -solución o suspensión en líquido acuoso o no acuoso, o una emulsión líquida aceite en agua o agua en aceite. Las composiciones destinadas para el uso oral pueden ser preparadas de acuerdo a cualquier método conocido, y tales composiciones pueden contener uno o más agentes seleccionados del grupo que consiste de agentes edulcorantes, agentes saborizantes, agentes colorantes y agentes conservadores con el fin de proporcionar preparaciones farmacéuticamente elegantes y gratas al paladar. ¦ Las tabletas pueden contener el ingrediente activo en mezcla con excipientes no tóxicos farmacéutic mente aceptables, los cuales son adecuados para la fabricación de tabletas . Estos excipientes pueden ser por ejemplo, diluyentes inertes, tales como carbonato de calcio, carbonato de sodio, lactosa, fos-f-a-feo- de -caloio—o--fosfato de -sodio; agentes de granulación y de desintegración, por ejemplo, almidón de maíz o ácido algínico; agentes aglutinantes, por ejemplo, almidón, gelatina o acacia; y agentes lubricantes, por ejemplo estearato de magnesio, ácido esteárico o talco. Las tabletas pueden ser no recubiertas o éstas pueden ser recubiertas mediante técnicas conocidas para retrasar la desintegración y absorción en el tracto gastrointestinal, y con esto proporcionar una acción sostenida en un periodo más prolongado. Por ejemplo, un material de retraso de tiempo tal como monoestearato de glicerilo o diestearato . de glicerilo puede ser empleado. Éstos, pueden ser también recubiertos mediante, las técnicas descritas en las Patentes de los Estados Unidas Nos. 4,356,108; 4,166,452; 4,265,874, incorporadas por referencia en la presente, para formar tabletas terapéuticas osmóticas para la liberación controlada. Las formulaciones para el uso oral pueden también presentarse como cápsulas de gelatina dura donde el ingrediente activo es mezclado con un diluyente sólido inerte, por ejemplo, carbonato de calcio, fosfato de calcio o kaolín, o cápsulas de gelatina suave en donde el ingrediente activo es mezclado con agua o un medio aceitoso, por ejemplo aceite de cacahuate, parafina líquida o aceite de oliva. . _ Las suspensiones acuosas pueden contener el IL-21 o el mimético de IL-21, -opeionalmente -j-unto—con- el agente de combinación en mezcla con los excipientes adecuados para la fabricación de suspensiones acuosas . Tales excipientes son agentes suspensores, por ejemplo carboximetilcelulosa de sodio, metilcelulosa, hidroxipropilmetilcelulosa, alginato de sodio, polivinilpirrolidona, goma de tragacanto y goma de acacia; agentes dispersantes o humectantes pueden ser fosfatina de origen natural tal como lecitina, o productos de condensación de un óxido de alquileno con ácidos grasos, por ejemplo estearato de polioxietileno, o productos de condensación de óxido de etileno con alcoholes . alifáticos de cadena larga, por ejemplo, heptadecaetil-enoxicetahol, o productos de condensación de óxido de etileno con ésteres parciales de ácidos grasos y un hexitol tal como monooleato de polioxietilensorbitol , o productos de condensación de óxido de etileno con esteres parciales derivados de ácidos grasos y anhídridos de hexitol , por ej emplo monooleato de polietilensorbitan. Las suspensiones acuosas pueden también contener uno o más- agentes colorantes, uno o más agentes saborizantes, y uno o más agentes edulcorantes, tales como sucrosa, o sacarina. Las suspensiones aceitosas pueden ser formuladas mediante la suspensión del ingrediente activo en un aceite vegetal, por e emplo aceite de cacahuate, aceite de oliva o aceite_de. _cocq, _ en un aceite mineral tal como una parafina -líquida.-- —Las —suspensiones aceitosas pueden contener un agente espesante, por ejemplo cera de abejas, parafina dura o alcohol cetílico. Los agentes edulcorantes tales como aquellos descritos anteriormente, y los agentes saborizantes pueden ser agregados para proporcionar una preparación oral grata al paladar. Estas composiciones pueden ser preservadas por la adición de un anti-oxidante tal como ácido ascórbico. Los polvos y gránulos dispersables adecuados para la preparación de üna suspensión acuosa por la adición de agua, proporcionan el compuesto activo en mezcla con un agente dispersante o humectante, agentes suspensor y uno o más conservadores. Los agentes dispersantes o' humectantes adecuados y los agentes suspensores son ejemplificados por aquellos ya mencionaos anteriormente. Los excipientes, adicionales, por ejemplo, agentes edulcorantes, saborizantes y colorantes, pueden estar también presentes. Las composiciones farmacéuticas de IL-21 o el mimético de IL-21, opcionalmente junto con el agente de combinación para el uso en el tratamiento del cáncer de acuerdo a la presente invención, pueden también estar en la forma de emulsiones aceite en agua. La fase aceitosa puede ser un aceite vegetal, por ejemplo, aceite de oliva o aceite de cacahuate, o un aceite mineral, por ejemplo una parafina líquida, o una mezcla de los mismos. Los agentes emulsificantes adecuados pueden ser gomas .de__orig_en natural.,, por ejemplo goma de acacia o goma de tragacanto,- fos-fat-idas de- origen-- atural, por ejemplo frijol de soya, lecitina y ésteres o ásteres parciales derivados de ácidos grasos y anhídridos de hexitol, por ejemplo monooleato de sorbitan, y productos de condensación de dichos ésteres parciales con óxido de etileno, por ejemplo monooleato de polioxietilensorbitan. Las emulsiones pueden también contener- agentes edulcorantes y saborizantes. Los jarabes y elíxires pueden ser formulados con agentes edulcorantes, por ejemplo glicerol, propilenglicol , sorbitol o sucrosa. Tales formulaciones pueden también contener un demulcente, conservadores y agentes saborizantes y colorantes. Las composiciones farmacéuticas pueden estar en la forma de una suspensión acuosa u oleaginosa inyectable estéril. Esta suspensión puede ser formulada de acuerdo a los métodos conocidos utilizando agentes dispersantes o humectantes adecuados y agentes suspensores descritos anteriormente . La preparación inyectable estéril puede 5 también ser una solución o suspensión inyectable estéril, en un diluyente o solvente no tóxico, parenteralmente aceptable, por ejemplo como una solución en 1 , 3 -butanodiol . Entre los vehículos y solventes aceptables que pueden ser empleados están el agua, solución de Ringer, y solución isotónica de 10 cloruro de sodio. Además, los aceites fijos estériles son _._ ...convenientemente empl.ead s_como solvente o medio suspensor.

- -Para-este- propósito, puede ser empleado cualquier aceite fijo blando utilizando mono- o diglicéridos sintéticos. Además, los ácidos grasos tales como el ácido oleico encuentran uso 15 en la preparación de inyectables . Las composiciones pueden también estar en la forma de supositorios para la administración rectal de los compuestos de la invención. Estas composiciones pueden ser preparadas mediante el mezclado del fármaco con un excipiente 20 no irritante adecuado, el cual es sólido a temperaturas ordinarias pero líquido a la temperatura rectal," ? se fundirán de este modo en el recto para liberar el: fármaco. Tales materiales . incluyen ¦ manteca de cacao y polietilenglicoles, por ejemplo. 25 Para el uso tópico, son contempladas las cremas, ungüentos, jaleas, soluciones o suspensiones, etc.,- que contienen los compuestos de la invención. Para el propósito de esta solicitud, las aplicaciones tópicas incluirán lavados bucales y gárgaras . El IL-21 o el mimético de IL-21, opcionalmente junto con el agente de combinación para el uso en el tratamiento del cáncer de acuerdo a la presente invención, puede también ser administrado en la forma de sistemas de distribución liposomales, tales como vesículas unilaminares pequeñas, vesículas unilaminares grandes, y vesículas muítilaminares . Los liposomas pueden ser formados " a partir r-de— na—-variedad —de— fosfolípidos, tales como- col-esterol, estearilamina, o fosfatidilcolinas . Además, algunos de IL-21 o el -mimético de IL-21, opcionalmente junto con el agente de combinación para el uso en el tratamiento del cáncer de acuerdo a la presente invención, pueden formar solvatos con agua o solventes orgánicos comunes. Tales solvatos son también abarcados dentro del alcance de la invención. Si se utiliza un portador sólido para la administración oral, la preparación puede ser en tableta, colocada en una cápsula de gelatina dura en polvo o forma de pella, o puede estar en la forma de un trocisco o pastilla,.. La cantidad de portador sólido variará ampliamente, pero usualmente será de aproximadamente 25 mg a "aproximadamente 1 g. Si se utiliza un portador líquido, la preparación puede estar en la forma de un jarabe, emulsión, cápsula de gelatina suave, o liquido inyectable estéril, tal como una suspensión o solución líquida acuosa b no acuosa. El IL-21 o el mimético de IL-21, opcionalmente junto con el agente de combinación para el uso en el tratamiento del cáncer de acuerdo a la presente ' invención, puede ser administrado a- un mamífero, especialmente a un humano, en necesidad de tal tratamiento. Tales mamíferos incluyen también animales, animales domésticos, por ejemplo mascotas domésticas y animales no domésticos tales como de la vi-da-sirlvestre . - — -· - —'-·- ¦·· — Las. composiciones farmacéuticas que contienen un compuesto de acuerdo a la invención pueden ser administradas una o más veces al día o a la semana, convenientemente administrada a las horas de los alimentos. Una cantidad efectiva de tal composición farmacéutica es la cantidad que proporciona un efecto clínicamente significativo. Tales cantidades dependerán, en parte, de la condición particular que se trate, de la edad, del peso y dé la salud general del paciente, y de otros factores evidentes para aquellos expertos en la técnica. La invención proporciona en una modalidad particular, lo siguiente: Otro objetivo más de la presente invención es proporcionar una formulación farmacéutica que comprende IL- 21, análogos o derivados del mismo, u opcionalmente junto con cualquier otro compuesto mencionado en la presente solicitud, que esté presente en una concentración de 0.1 mg/ml a 100 mg/ml, y en donde la formulación tiene un pH de 2.0 a 10.0. La formulación puede comprender además un sistema amortiguador, uno o varios conservadores, uno o varios agentes de la tonicidad, uno ovarios agentes quelantes, estabilizadores y surfactantes . ' En una modalidad ..de - la invención, la formulación farmacéutica es una formulación _ acuosa, por ejemplo, la formulación que comprende agua. Tal formulación-es tí-pi-eamenfee— na—solución o una—suspensión. En una modalidad adicional de la invención, la formulación farmacéutica es una solución acuosa. El término "formulación acuosa" es definido como una formulación que comprende al menos 50% p/p de agua. De igual modo, el término "solución acuosa" es definido como una solución que comprende al menos 50% p/p de agua, y el término "suspensión acuosa" es definido como una suspensión que comprende al menos 50% p/p de agua. En otra modalidad más, la formulación farmacéutica · es una formulación liofilizada, y a ésta el médico o el paciente agrega solventes y/o diluyentes antes del uso. En otra modalidad más la formulación farmacéutica es una formulación seca (por ejemplo, liofilizada o secada por rocío) lista para el uso con cualquier disolución previa.

En un aspecto adicional, la invención se refiere a una formulación farmacéutica que comprende una solución acuosa de IL-21 o cualquier otro compuesto como se mencionó anteriormente, y. un amortiguador, en donde el compuesto está presente en una concentración de 0.1 mg/ml o como se mencionó anteriormente, preferentemente de 0.5 mg/ml - 50 mg/ml y en donde la formulación tiene un pH de aproximadamente 2..0 a aproximadamente 10.0. El pH preferido es de 3.0 a aproximadamente 8.0. El intervalo particular preferido es de 4.0-6.0, tal como por ejemplo los intervalos 4.0-4.5, 4.5-5.0, 5.0-5.5 y 5.5-6.0. En otra modalidad de la invención, el pH de la formulación se selecciona de la lista que consiste de 2 • 0, 2.1, 2.2, 2 .3, 2.4, 2.5, 2.5, 2. 7, 2.8, 2. 9, 3.0, 3 .1, 3 • 2, 3.3, 3.4, 3 • 5, 3.6, 3.7, 3.8, 3. 9, 4.0, 4. 1, 4.2, 4 .3, 4 -4, 4.5, 4.6, 4 .7, 4.8, 4.9, 5.0, 5. 1, 5.2, 5. 3, 5.4, 5 .5, 5 .6, 5.7, 5.8, 5 .9, 6.0, 6.1, 6.2, 6. 3, 6.4, 6. 5, 6.6, 6 .7, 6 • 8, 6.9, 7.0, 7 • 1, 7.2, 7.3, 7.4, 7, 5, 7.6, 7. 7, 7.8, 7 • 9, 8 .0, 8.1, 8.2, 8 .3, 8.4, 8.5, 8.6, 8. 7, 8.8, 8. 9, 9.0, 9 • 1, 9 • 2, 9.3, 9.4, 9. 5, 9.6, 9.7, 9 .8, 9.9 y 10.0. En una modalidad adicional de la invención, el amortiguador se selecciona del grupo que consiste de acetato de sodio, carbonato de sodio, citrato, glicilglicina, histidina, glicina, lisina, arginina, fosfato diácido de sodio, fosfato ácido disódico, fosfato de sodio, y tris (hidroximetil) -aminometano, bicina, tricina, ácido málico, succinato, ácido maleico, ácido fumárico, ácido tartárico, ácido aspártico o mezclas de los mismos. Cada uno de estos amortiguadores específicos constituye una modalidad alternativa de la invención. En una modalidad adicional de la invención, la formulación comprende además un conservador antimicrobiano farmacéuticamente aceptable. En una modalidad adicional de la invención, los conservadores se seleccionan del grupo que consiste de fenol, o-cresol, m-cresol, p-cresol, p-hidroxibenzoato de metilo, p-hidroxibenzoato de propilo, 2-fenoxietanol-,-- p-hidroxibenzoato de—-bu-tilo, 2-feniletanol, alcohol bencílico, clorobutanol , y tiomersal, bronopol, ácido benzoico, imidurea, clorohexidina, deshidroacetato de sodio, clorocresol, p-hidroxibenzoato de etilo, cloruro de bencetonio, clorfenesina (3p-clorfenoxipropan-1, 2-diol) o mezclas de los mismos. En una modalidad adicional de la invención, el conservador está presente en una concentración de 0.1 mg/ml a 20 mg/ml . En una modalidad adicional de la invención, el conservador está presente en una concentración de 0.1 mg/ml a 5 mg/ml. En una modalidad adicional de la invención, el conservador está presente en una concentración de 5 mg/ml hasta 10 mg/ml. En una modalidad adicional de la invención, el conservador está presente en una concentración de.10 mg/ml a 20 mg/ml. Cada uno de estos conservadores específicos constituye una modalidad alternativa de la invención. El uso de un conservador en las composiciones farmacéuticas es bien conocido para la persona experta. Por conveniencia se hace referencia a Remington: The Science and Practice of Pharmacy, 19a edición, 1995. En una modalidad adicional de la invención, la formulación comprende además un agente isotónico. · En una modalidad adicional de la invención, el agente isotónico se selecciona del grupo que consiste de una sal (por ejemplo, cloruro de sodio) , un azúcar o alcohol de azúcar, un aminoácido (por ejemplo, L-glicina, L-histidina, arginina, lisina, isoleucina, ácido aspártico, triptofano, treonina) , un alditol (por ejemplo, glicerol (glicerina) , 1,2-propanodiol (propilenglicol) , 1, 3-propanodiol, 1,3-butanodiol) polietilenglicol (por ejemplo PEG400) o mezclas de los mismos. Cualquier azúcar tal como mono-, di- o polisacáridos, o glucanos solubles en agua, incluyendo por ejemplo fructosa, glucosa, mannosa, sorbosa, xilosa, maltosa, lactosa, sucrosa, trehalosa, dextrano, pululano, dextrina, ciclodextrina, almidón soluble, hidroxietilalmidón, y carboximetilcelulosa-Na pueden ser utilizados. En una modalidad, el aditivo de azúcar es sucrosa. El alcohol.de azúcar es definido como un hidrocarburo de 4 a 8 átomos de carbono que tiene al menos un grupo -OH e incluye, por ejemplo, mannitol, sorbitol, inositol, galactitol, dulcitol, xilitol y arabitol . En una modalidad, el aditivo de alcohol de azúcar es mannitol . Los azucares o alcoholes de azúcar mencionados anteriormente pueden ser utilizados individualmente o en combinación. No existe límite fijo para la cantidad utilizada siempre y cuando el azúcar o el alcohol de azúcar sea soluble en la preparación líquida, y no afecte de manera adversa los efectos estabilizadores logrados utilizando los métodos de la invención. En una modalidad, la concentración del azúcar o del alcohol de azúcar está entre aproximadamente 1 mg/ml y aproximadamente 150 mg/ml. En una modalidad adicional de la invención, el agente isotónico está presente- en una concentración de 1 mg/ml hasta--50—mg/ml . En una modalidad adicional de la invención, el agente isotónico está presente en una concentración de 1 mg/ml hasta 7 mg/ml. En una modalidad adicional de la invención, el agente isotónico está presente en una concentración de 8 mg/ml hasta 24 mg/ml. En una modalidad adicional de la invención, el agente isotónico está presente en una concentración de 25 mg/ml hasta 50 mg/ml. Cada uno de estos agentes isotónicos específicos constituye una modalidad alternativa de la invención. El uso de un agente isotónico en composiciones-farmacéuticas, es bien conocido para la persona experta. Por conveniencia, se hace referencia a Reminton: The Science and Practice of P armacy, 19a edición, 1995. En una modalidad adicional de. la invención/ la formulación comprende además un agente quelante. En una modalidad adicional de la invención, el agente quelante se selecciona de las sales de ácido etilendiaminotetraacético (EDTA) , ácido cítrico, y ácido aspártico, y mezclas de los mismos. En una modalidad adicional de la invención, el agente quelante está presente en una concentración de 0.1 mg/ml hasta 5 mg/ml. En una modalidad adicional de la invención, el agente isotónico está presente en una concentración de 1 mg/ml. En una modalidad adicional de la invención, el agente quelante está presente en una concentración de 0.1 mg/ml hasta 2 mg/ml. En. una modalidad adicional de la -invención, el agente- quelante está presente en una concentración de 2 mg/ml hasta 5 mg/ml. Cada uno de estos agentes quelantes específicos constituye una modalidad alternativa de la invención. El uso de un agente quelante en las composiciones farmacéuticas es bien conocido para la persona experta. Por conveniencia se hace referencia a Reminton: The Science and Practi-ce of Pharmacy, 19a edición, 1995. En una. modalidad adicional de la invención, la formulación comprende además un estabilizador. El uso de un estabilizador en las composiciones · farmacéuticas es bien, conocido para la persona experta. Por conveniencia se hace referencia a Reminton: The Science and Practice of Pharmacy, 19a edición, 1995.

Más particularmente, las composiciones de la invención son composiciones farmacéuticas líquidas estabilizadas cuyos componentes terapéuticamente activos incluyen un polipeptido que posiblemente muestra formación de agregados durante el almacenamiento en formulaciones farmacéuticas líquidas. Por "formación de agregados" se entiende una interacción física entre las moléculas del polipéptido, que da como resultado la formación de oligómeros, que pueden permanecer solubles, c agregados visibles grandes que precipitan desde la solución. Por "durante el ¦ almacenamiento" se entiende una composición farmacéutica—líquida- o una formulación que—una vez- preparada no es inmediatamente administrada a un sujeto. Más bien, después de la preparación, ésta es envasada para el almacenamiento, ya sea en una forma líquida, en un estado congelado o en una forma deshidratada para la reconstitución posterior en una forma líquida u otra forma adecuada para la administración a un sujeto. Por "forma secas o anhidra" se entiende la composición farmacéutica líquida o formulación que es secada ya sea por secado por congelamiento (por ejemplo, liofilización; ver, por ejemplo, Williams y Polli (1984) J. Parenteral Sci. Technol . 38: 48-59), secado por rocío (ver Masters (1991) en Spray-Drying Handbook (5a ed. / Longman Scientific and Technical, Essez, Reino Unido) , pp. 491-676; Broadhead et al. (1992) Drug Devel . Ind. Pharm. 18: 1169-1206; y Mumenthaler et al. (1994) Pharm. Res. 11: .12-20) , o secado por aire (Carpenter y Crowe (1988) Cryobiology 25: 459-470; y Roser (1991) Biopharm. 4: 47-53). La' formación de agregados por un polipeptido durante el almacenamiento de una- composición farmacéutica líquida puede- -afectar de manera adversa la actividad biológica de ese polipeptido, dando como resultado la pérdida de eficacia terapéutica de la composición farmacéutica. Además, la · formación de agregados puede provocar otros problemas tales como bloqueo de la tubería, las membranas o las bombas, cuando la composició f rmacéutica ue contiene el polipéptido - - -es admi-n-i-st ada—utilizando un- - -sistema de infusión. Las composiciones farmacéuticas de la invención pueden comprender además una cantidad de una base de aminoácidos suficiente para disminuir la formación de agregados por el polipéptido durante el almacenamiento de la composición. Por Mbase de aminoácidos" se - entiende un aminoácido o una combinación de aminoácidos, donde cualquier aminoácido dado está presente' ya sea en su forma de base libre o en su forma de sal. Donde una combinación de aminoácidos es utilizada, todos los aminoácidos pueden estar presentes en su forma de base libre, todos pueden estar presentes en sus formas de sal, o algunos- pueden, estar presentes en sus formas de base libre mientras que otros están presentes en sus formas de sal . En una modalidad, los aminoácidos para utilizarse en la preparación de las composiciones de la invención son aquellos que llevan una cadena lateral cargada, tales como arginina, lisina, ácido aspártico, y ácido glutámico. Cualquier estereoisómero (por ejemplo, isómero L, D o DL) de un aminoácido particular (por ejemplo, glicina, metionina, istidina, imidazol, arginina, lisina, isoleucina, ácido aspártico, triptofano, treonina y mezclas de los mismos) o combinaciones de estos estereoisómeros, pueden estar presentes en las composiciones farmacéuticas de_ la invención siempre y cuando el aminoácido - particular—esté- presente ya sea en su forma de base—libre o en su forma de sal. En una modalidad, se utiliza el L- estereoisómero. Las composiciones de la invención pueden también ser formuladas con análogos de estos aminoácidos . Por "análogo de aminoácido" se entiende un derivado del aminoácido de origen natural que origina el efecto deseado de disminuir la formación de agregados por el polipéptido durante el almacenamiento de las composiciones farmacéuticas líquidas de la invención. Los análogos de arginina adecuados incluyen, por ejemplo, aminoguanidina, o nitina y N-monoetil- L-arginina, los análogos adecuados de metionina incluyen etionina y butionina, y los análogos adecuados de cisteína incluyen S-metil-L-cisteína . Como con los otros aminoácidos, los análogos de aminoácidos son incorporados . en las composiciones ya sea en su forma de- base libre o en su forma de sal. En una modalidad adicional de la invención, los aminoácidos o análogos de aminoácidos son utilizados en una concentración, que es suficiente para prevenir o retrasar la agregación de la proteína. En una modalidad adicional de la invención, puede ser agregada la metionina (u otros aminoácidos sulfúricos o análogos de aminoácidos) para inhibir la oxidación de los residuos de metionina al sulf xido de metionina, cuando ' el polipéptido que actúa como el agente terapéutico es un polipéptido que comprende al. menos un residuo de metionina susceptible a -ta-1—oxidación-.- -Por -"-inhibir"- se entiende la acumulación mínima de especies oxidadas dé metionina con él tiempo. La inhibición de la oxidación de la metionina da como resultado mayor retención del polipéptido en su forma molecular apropiada. Cualquier estereoisómero de metionina (isómero L, D o DL) o combinaciones de los mismos puede ser utilizado. La cantidad que va a ser agregada debe ser una cantidad suficiente para inhibir la oxidación de los residuos de metionina, tal que la cantidad- del sulf xido' de metionina es aceptable para las agencias reguladoras. Típicamente, esto significa que- la composición no .contiene más de aproximadamente 10% hasta aproximadamente 30% de. sulfóxido de metionina. En general, esto puede ser logrado mediante la adición de metionina tal que la proporción de la metionina agregada a los residuos de metionina está en el intervalo de aproximadamente 1:1 a aproximadamente 100:1, tal como 10:1 a aproximadamente 100:1. En una modalidad adicional de la invención, la formulación comprende además un estabilizador seleccionado del grupo de polímeros de alto peso molecular o compuestos de bajo peso molecular. En una modalidad adicional de la invención, el estabilizador se selecciona de polietilenglicol (por ejemplo PEG 3350) , alcohol polivinílico (PVA) , polivinilpirrolidona, carboxi/hidroxicelulosa o derivados de la —misma — (.por.—ejemplo, HPC, HPC-SL, HPC-L y HPMC) , c±ctofextr±na:-r; sustancias que contienen azufre como monotioglicerol , ácido tioglicólico y 2-metiltioetanol , y diferentes sales (por ejemplo,- cloruro de sodio) . Cada uno de estos estabilizadores específicos constituye una modalidad alternativa de la invención. Las composiciones farmacéuticas pueden también comprender agentes estabilizadores adicionales que aumentan adicionalmente la estabilidad de un polipeptido terapéuticamente activo en éstas . Los " agentes estabilizadores- de interés particular de la presente' invención incluyen, pero no están limitados a, metionina y EDTA, que protegen al polipéptido contra la oxidación de la-metionina, y un surfactante no iónico, el cual protege al polipéptido contra la agregación asociada con el congelamiento/descongelamiento o el esfuerzo cortante mecánico. En una modalidad adicional de la invención, la formulación comprende además un surfactante. En una modalidad adicional de la invención, el surfactante se selecciona de un detergente, aceite de ricino etoxilado, glicéridos poliglicolisados, monogliceridos acetilados, ésteres de ácido graso de sorbitan, polímeros en bloque de polioxipropileno-polioxietileno (por ejemplo, poloxámeros tales como Pluronic® F68, poloxámero 188 y 407, Tritón X-100)_, ésteres _de___ ácido graso de polioxietilensorbi an, de-r-ivados de polioxietileno y polietileno tales como los derivados alquilados y alcoxilados (tweens, por ejemplo Tween 20, Tween 40, Tween 80 y Brij-35), monogliceridos o derivados etoxilados de los mismos, diglicéridos o derivados de polioxietileno de los mismos, alcoholes, glicerol, lecitinas y fosfolípidos (por ejemplo fosfatidilserina, fosfatidilcolina, fosfatidiletanolamina, fosfatidilinositol, difosfatidilglicerol y esfingomielina) , derivados de fosfolípidos (por ejemplo ácido dipalmitoilfosfatídico) y lisofosfolípidos (por ejemplo . pa.lmit.oil-lisofosfatidil-L-serina y ésteres de l-acil-sn-glicero-3-fosfato de etanolamina, colina, serina o treonina) y derivados de alquilo, alcoxilo (éster de alquilo), alcoxi (éter de alquilo) de lisofosfatidilo y fosfatidilcolinas, por ejemplo · derivados de lauroilo y miristoilo de lisofosfatidilcolina, dipalmitoilfosfatidilcolina, y modificaciones del grupo de cabeza polar, es decir colinas, etanolaminas, ácido fosfatídico, serinas, treoninas, glicerol, inositol y los compuestos DODAC, DOTMA, DCP, BISHOP, lisofosfatidilserina y lisofosfatidiltreonina positivamente cargados, y glicerofosfolípidos (por ejemplo cefaliñas) , gliceroglicolípidos (por ejemplo galactopiranósido) , esfingoglucolípidos (por ejemplo ceramidas> gangliósidos) , dodecilfosfocolina, lisolecitina de huevo de gallina, de-r-i-vados de ácido fus dico (por - - .._ej emplo . _tauro-dÍ¾l¾rofusidáto de sodio, etc.), ácidos grasos de cadena larga y sales de los mismos de ¦ 6 a 12 átomos de carbono (por e emplo, ácido oleico y ácido caprílico) , acilcarnitinas y derivados, derivados IS^-acilados de lisina, arginina o histidina, o derivados acilados de cadena lateral de lisina o arginina, derivados IS^-acilados de dipéptidos que comprenden cualquier combinación de lisina, argi ina o histidina y un aminoácido neutro o ácido, derivado l^-acilado de un tripéptido que comprende' cualquier combinación de un aminoácido neutro y dos aminoácidos cargados, DSS (docusato de sodio, registro CAS N. [577-11-7]), docusato de calcio, ' registro CAS No. [128-49-4]), docusato de potasio, registro CAS NO. [7491-09-0]), SDS (dodecil -sulfato de sodio o lauril-sulfato de sodio) , caprilato · de sodio, ¦ ácido cólico o derivados de los mismos, ácidos biliares y sales de los mismos, y conjugados de glicina o taurina, ácido ursodesoxicólico, colato de sodio, desoxicolato de sodio, taurocolato de sodio, glicocolato de sodio, N-hexadecil-N,N-dimetil-3-amonio-l-propansulfonato, surfactantes monovalentes aniónicos (alquil -aril-sulfonatos) , surfactantes anfotéricos (por ejemplo, N-alquil-N,N-dimetilamonio-l-propansulfonatos, 3 -colamido- 1-propildimetilamonio-l-propansulfonato, surfactantes catiónicos (bases de amonio cuaternario) (por ejemplo bromuro de cetil-trimetilamonio, cloruro de cetllpáridinio) , surfactantes no iónicos (por ejemplo ß-D-glucopiranósido -de— dodecilo) ,— pol-oxaminas -- - (por - ejemplo Tetronic's), que son copolímeros en bloque tetrafuncionales derivados de la adición secuencial del óxido de propileno y óxido de etileno a la etilendiamina, o el surfactante puede ser seleccionado del grupo de derivados de imidazolina, o mezclas de los mismos. Cada uno de estos surfactantes específicos constituye una modalidad alternativa de la invención. El uso de un surfactante en las composiciones farmacéuticas es bien conocido para la persona experta. Por conveniencia, se hace referencia a Reminton: The Science and Practice of Pharmacy, 19a edición, 1995. Es posible que. otros ingredientes puedan estar presentes en la formulación farmacéutica . del péptido de la presente invención. Tales ingredientes adicionales pueden incluir agentes humectantes, emulsificantes , antioxidantes , agentes de volumen, modificadores de la tonicidad, agentes quelantes, iones metálicos, vehículos oleaginosos, proteínas (por ejemplo, albúmina sérica humana, gelatina o proteínas) y un anfotero (por ejemplo, un aminoácido tal como betaina, taurina, arginina, glicina, lisina e histidina) . Tales ingredientes adicionales, por supuesto, no deben afectar de manera adversa la estabilidad completa de la formulación farmacéutica de la presente invención. Las composiciones farmacéuticas gue_contienen IL-21 o cualquier-otro- compuesto como -se-menciona anteriormente, de acuerdo a la presente invención pueden ser administrados a un paciente en necesidad de tal tratamiento en diversos sitios, por ejemplo, en sitios tópicos, por ejemplo, la piel y los sitios mucosales, en sitios que desvían la absorción, por ejemplo, la administración en una arteria, en una vena, en el corazón, y en sitios que involucran absorción, por ejemplo, administración en la piel, bajo la piel, en un músculo o e el abdomen. La administración de las composiciones farmacéuticas de acuerdo a la invención, puede ser a través de varias rutas de administración, por ejemplo, lingual, sublingual, bucal, en la boca, oral, en el estómago el intestino, nasal, pulmonar, por ejemplo, a través de los bronqueólos y los alvéolos o una combinación de los mismos, epidérmica, dérmica, transdérmica, vagina, rectal, ocular, por ejemplo a través de la conjuntiva, uretral y parenteral a pacientes en necesidad de tal tratamiento. Las composiciones de la presente invención pueden . ser administradas en varias formas de dosis, por ejemplo, como soluciones, suspensiones, emulsiones, microemulsiones, emulsión múltiple; espumas, solutarios, pastas, emplastos, ungüentos, tabletas, tabletas recubiertas, enjuagues, cápsulas, por ejemplo, cápsulas de gelatina dura y cápsulas de. _gelatina. suave , supositorios , cápsjulas_ rectales, gotas, geles, - rocíos-í pol-vo-, aerosoles-?- inhalantes, gotas oftálmicas, ungüentos oftálmicos, enjuagues . oftálmicos, pesarios vaginales, anillos vaginales, ungüentos vaginales, solución de inyección, soluciones de transformació in situ, por ejemplo gelificación in situ, endurecimiento in situ, precipitación in situ, cristalización in situ, solución de infusión e implantes. •Las composiciones de la invención pueden estar además compuestas en, o unidas a, por ejemplo, a través de interacciones covalentes, hidrofóbicas y electrostáticas, un portador farmacéutico, sistema de distribución de fármaco, y. sistema avanzado de distribución de fármaco, con el fin de aumentar adicionalmente la . estabilidad de IL-21 o cualquier otro compuesto como se mencionó anteriormente, para incrementar la biodisponibilidad, incrementar la solubilidad, disminuir los efectos adversos, lograr la cronoterapia bien conocida por aquellos expertos en la técnica, e incrementar el cumplimiento del paciente o cualquier combinación de los mismos. Los ejemplos de portadores, sistemas de administración de fármacos y sistemas avanzados de administración de fármacos incluyen, pero no están limitados a polímeros, por ejemplo celulosa y derivados, polisacáridos, por ejemplo dextrano y derivados, almidón y derivados-, poli (alcohol vinilico) , polímeros de acrilato y metacrilato, copolímeros en bloque de Iros—msmos, - pol-i-etiienglicoles-,— roteínas—portadoras, por ejemplo albúmina, geles, por ejemplo, sistemas de termogelificación, por ejemplo sistemas copoliméricos en bloque bien conocidos por aquellos expertos en la técnica, micelas, liposomas, microesferas, nanoparticulados, cristales líquidos y dispersiones de los mismos, fase L2 y dispersiones de los mismos, bien conocidos por aquellos expertos ;en la técnica del comportamiento de fases en los sistemas lípido-agua, micelas poliméricas, emulsiones múltiples, auto-emulsificación, auto-microemulsificación, ciclodextrinas y derivados de los mismos, y dendrímeros. Las composiciones · de la presente invención -son útiles en la formulación de sólidos, semisólidos, polvo y soluciones para la administración pulmonar- de IL-21- o cualquier otro compuesto como se mencionó anteriormente utilizando, por ejemplo, un inhalador de dosis medida, inhalador ' de polvo seco y- un nebulizador, siendo todos dispositivos bien conocidos por aquellos expertos en la. 5 técnica. Las composiciones de la presente invención son específicamente útiles en la formulación de sistemas de distribución de fármacos de liberación controlada, sostenida, en intervalos, retardada y lenta. Más específicamente, pero 10 no limitadas a las éstas, las composiciones son útiles en la _ _ formulación de __sjLstemas de ^liberación controlada y de liberación sostenida parenterales (ambos sistemas- conducen a una reducción múltiple en el número de administraciones) , bien conocidos por aquellos expertos en la técnica. Aún más 15 preferentemente, son sistemas de liberación controlada y liberación sostenida administrados subcutáneamente. Sin limitar el alcance de la invención, los ejemplos de sistema, de liberación controlada útiles y composiciones son hidrogeles, geles oleaginosos, cristales líquidos, micelas 20 poliméricas, microesferas, nanopartículas . Los métodos para producir los sistemas de liberación- controlada útiles para las composiciones de la presente invención incluyen, pero no están limitados a cristalización, condensación, co-cristalización, 25 precipitación, co-precipitación, emulsificación, dispersión, homogeneización de alta presión, éncapsulamiento, secado por rocío, microencapsulamiento, coacervación, separación de fases, evaporación de solvente para producir microesferas, extrusión y procesos de fluidos supercríticos . Se hace referencia general a Handbook of Pharmaceutical Controlled Reléase (Wise, D.L., ed. Marcel Dekker, New York, 2000) y Drug and the Pharmaceutical Sciences vol . 99 : Protein Formulation and Delivery (MacNally, E.J. ed. Marcel Dekker, New York, 2000) . La administración parenteral puede ser realizada mediante inyección subcutáne , intramuscular, intraperitoneal o intravenosa por medio de una jeringa, opcionalmente una jeringa en forma de pluma estilográfica. Alternativamente, la administración parenteral puede ser realizada por medio de una bomba de infusión. Una opción adicional es una composición que puede tener una solución o suspensión para la administración de IL-21 o cualquier otro compuesto como se mencionó anteriormente, en la forma de un rocío nasal o pulmonar. Como una opción adicional, las composiciones 'farmacéuticas que contienen IL-21 o cualquier otro compuesto · como se mencionó anteriormente, pueden ser también adaptadas para la administración transdérmica, por ejemplo mediante inyección libre de aguja o a partir de un parche, opcionalmente un parche iontoforático, o transmucosal, por ejemplo administración bucal.

El término "formulación estabilizada" se refiere a una formulación con estabilidad física incrementada, estabilidad química incrementada o estabilidad física y química incrementadas. El término. , "estabilidad física" de la formulación de proteína como se utiliza en la presente, se refiere a la tendencia de la proteína a forma agregados biológicamente inactivos y/o insolubles de la proteína, como resultado de la exposición de la proteína a las tensiones termomecánicas y/o interacción con interfaces y superficies que son de desestabilización, tales como JLas. superficies y las interfaces ¦ -hidrofóbicas-. La estabilidad—física --en- las formulaciones acuosas de proteína es evaluada por medio de inspección visual y/o medición de turbidez después de la exposición de la formulación rellena en recipientes adecuados (por ejemplo cartuchos o frascos) a la tensión mecánica/física (por ejemplo agitación) a diferentes temperaturas por diversos periodos de tiempo. La inspección visual de las formulaciones es realizada en una luz enfocada aguda con un fondo oscuro. La turbidez de la formulación es caracterizada por una calificación visual que clasifica el grado de turbidez, .por ejemplo en- una escala de 0 a 3 (una formulación que no muestra turbidez corresponde a una calificación visual de 0, y una formulación . que muestra. turbidez visual en. luz- diurna, corresponde a .calificación visual de 3) . Una formulación es clasificada físicamente inestable con respecto a la agregación de las proteínas, cuando ésta muestra turbidez visual en luz diurna. Alternativamente, la- turbidez de la formulación puede ser evaluada mediante mediciones de turbidez simples bien conocidas para la persona experta. La ¦ estabilidad física de las formulaciones de proteína acuosa puede también ser evaluada mediante el uso de un agente espectroscopico o sonda del estado conformacional de la proteína. La sonda es preferentemente una molécula- pequeña que se enlaza . preferentemente a un conformador no_nativo de la proteína..

Un -ejemplo de una-sonda espectrosGÓpica molecular- -pequeña de estructura proteica es Tioflavina T. Tioflavina T es un colorante fluorescente que ha sido ampliamente utilizado para la detección de fibrillas amiloides. En la presencia de fibrillas, y quizás de otras configuraciones proteicas también, la Tioflavina T da origen a un nuevo máximo de excitación a aproximadamente 450 nm y emisión aumentada a aproximadamente 482 nm cuando se enlaza a una forma de - proteína fibrilar: La Tioflavina T no- enlazada es esencialmente no fluorescente a las longitudes de onda. ~ Otras moléculas pequeñas pueden ser utilizadas como sondas de los cambios en la estructura de las proteínas a partir de los estados nativo al no nativo. Por ejemplo, las sondas "de parche hidrofóbico'' que se enlazan "preferentemente a los parches hidrofóbicos expuestos de una proteina. Los parches hidrofóbicos están en general enterrados dentro de la estructura terciaria de una proteina en su estado nativo, pero se llegan a exponer conforme una proteína comienza a desplegarse o a desnaturalizarse. Los ejemplos de estas moléculas pequeñas, las sondas espectroscópicas son colorantes hidrofóbicos, .aromáticos, tales como antraceno, acridina, fenantrolina o similares. Otras sondas espectroscópicas son complejos de metal-aminoácido, tales como complejos de metal cobalto de aminoácidos hidrofóbicos, tales como fenilalanina, leucina, isoleucina,- metionina y valina-o -similares-.- - - — - El término "estabilidad química" de la formulación de proteína como se utiliza en la presente, se refiere a los cambios químicos covalentes en la estructura de la proteína, que conduce a la formación de productos de degradación química con pérdida potencial de la potencia biológica y/o propiedades inmunogénicas potencialmente incrementadas, en comparación a la estructura proteica nativa. Los diversos productos de degradación química pueden ser formados dependiendo del tipo y naturaleza de la proteina nativa y del ambiente al cual se exponga la proteína. La eliminación de la degradación química puede ser lo más probablemente no ser completamente evitada, y el incremento' de las cantidades de los productos de degradación química es .frecuentemente observado durante el almacenamiento y uso de la formulación de protéína, como es bien conocido por una persona de experiencia en la técnica. La mayoría de las proteínas son propensas a la desamidación, un proceso del cual el grupo amida de cadena lateral en los residuos de glutaminilo o asparaginilo es hidrolizado para formar un ácido carboxílico libre. Otras vías de degradación involucran la formación de productos de transformación de alto peso molecular, donde dos o más moléculas de proteína son covalentemente enlazadas una con la otra a través de transamidación y/o interaccionés disulfuro que conducen . _ a . la . formación de un dímero covalentemente enlazado - productos de - degradación de oligómeros y polímeros (Stability of Protein Pharmaceuticals, Ahem. T. J. & Manning M.C., Plenu Press, New York, 1992). La oxidación (por ejemplo de los residuos de metionina) puede ser mencionada como otra variante más de la degradación química. La estabilidad química de la formulación de proteína puede ser evaluada mediante la medición de la cantidad de productos de degradación química en diversos puntos de tiempo después de la exposición a diferentes condiciones ambientales (la formación de productos ·-· de degradación puede ser frecuentemente acelerada por ejemplo por el incremento de la temperatura) . - La' cantidad de cada producto de degradación individual- es a menudo determinada por la separación de los productos de degradación, dependiendo del tamaño molecular y/o de la carga utilizando diversas técnicas cromatográficas (por ejemplo SEC-HPLC y/o RP-HPLC) . Por ejemplo, como se describió anteriormente, una "formulación estabilizada." se refiere a una' formulación con estabilidad física incrementada, estabilidad química incrementada o estabilidad física y química incrementadas. En general, una formulación debe ser estable durante el uso y almacenamiento (en cumplimiento con el uso recomendado y las condiciones de almacenamiento) hasta que se alcanza la fecha de expiración. - En una modalidad de la invención, la formulación que comprende IL-21 o cualquier otro compuesto como se mencionó anteriormente, es estable por más de 6 semanas de uso y por más de 3 años de almacenamiento. En otra modalidad de la invención, la formulación que comprende IL-21 o cualquier otro compuesto como se mencionó .anteriormente, es estable -por más de 4 semanas de uso y por más de 3 años de almacenamiento. En una modalidad adicional de la invención, la formulación que comprende IL-21. o cualquier otro compuesto como se mencionó anteriormente, es estable por más de 4 semanas de uso y por más de dos años de almacenamiento. En una modalidad adicional, de la invención, la formulación que comprende IL-21 o cualquier otro-compuesto como se mencionó anteriormente, es estable por más de 2 semanas de uso y por más de dos años de almacenamiento . En una modalidad adicional de la invención, la formulación que comprende IL-21 o cualquier otro compuesto como se mencionó anteriormente, es estable por más je 1 semana_ de _usp _y por más de 18 meses de almacenamiento. - — En una modalidad adicional de la invención, la formulación que comprende IL-21 o cualquier otro compuesto como se mencionó anteriormente, es estable por más de 1 día de uso y por más de 18 meses de almacenamiento . EJEMPLOS MÉTODOS FARMACOLÓGICOS El siguiente es un método · in vitro utilizado para investigar el aumento de ADCC : Las células objetivo que expresan el antígeno objetivo son incubadas con el anticuerpo contra el antigeno objetivo y las células monoñucl'eares de sangre periférica, célula NK, neutróf ilos , macrófagos , monocitos, o DC como células efectoras. Las células efectoras pueden ser pre-incubadas por 1 a 10 días con IL-21, o IL-21 puede ser - agregado al cultivo que contiene las células efectoras. y objetivo. Otros compuestos que pueden aumentar ADCC pueden ser incluidos en el cultivo o en el cultivo pre- incubación . La eficiencia de ADCC será medida como la liberación específica de 51Cr a partir de las células objetivo, o como la actividad de LDH como se describió previamente (Golay et al., Haematologica 88j. 1002-1012, 2.003 o Liu et al., Cáncer Immun 2: 13, -2002 o Watanabe et al., Breast Cáncer Res Treat 53: 199-207, 1999) . La determinación de ADCC utilizando un ensayo basado en citometría de flujo como se describió previamente (Flieger et al., J Immunother 23: 480- 486, 2000 o Flieger et al., J Immunol Methods 180: 1- 13, 1995 o Flieger et al., Hybridoma 18: 63-68, 1999) . La determinación de ADCP a través del ensayo de fluorescencia dé dos colores como se describe en Watanabe et al., Breast Caner Res Treat 53: 199-207, 1999 o Akewanlop et al., Cáncer Res 61:· 4061-4065, 2001. Un método in vivo para determinar el aumento de ADCC se describe enseguida: Células de leucemia o células transformadas son inyectadas intravenosamente, intr-aperitonealmente o subcutáneamente en animales singénicos, seguido por tratamiento con el anticuerpo terapéutico que reconoce un' antígeno expresado por las células de leucemia o las células transformadas, con o sin la terapia con IL-21. Los puntos finales son la carga tumoral y la supervivencia. El involucramiento de ADCC puede ser confirmado por el uso de los anticuerpos de bloqueo FcyRI o mediante -el uso de los ratones deficientes en FcyRI. - Un método in vivo para investigar el aumento de ADCC hacia las células objetivo de origen humano, se describe previamente en Zhang et .al., Blood 102: 284-288, 2003 o Flavell et al., Cáncer Res 58: 5787-5794 , 1998. De acuerdo a estos modelos, las células de leucemia humanas o las células transformadas son inyectadas i.v, i.p. o s.c. en ratones SCID, seguido por tratamiento con el anticuerpo terapéutico que reconoce un antígeno expresado por las células de leucemia o las células transformadas, con o sin la terapia con IL-21. · Las líneas celulares tumorales, por ejemplo Células de Carcinoma de Pulmón de Lewis (LLC) o las células de melanoma B16-F10 o las células de carcinoma de células renales renca, o las células de carcinoma de mama 4T1 son implantadas s.c. en ratones singénicos. Cuando los tumores se vuelven palpables, los ratones son tratados con IL-21 en combinación con otros agentes anti -cancerosos como se describe en esta solicitud. La metodología es descrita en Palumbo et al., Cáncer Res. 62: 6966-6972 (2002); Bove et al., Bioche Biophys Res Com un 291: 1001-1005 (2002); Wigginton et al . , J Imunol 169: 4467-4474 (2002). Las líneas celulares tumorales, por ejemplo Células de Carcinoma de Pulmón de Lewis (LLC) o las células de melanema B16-F-1-0 son-implantadas s.c.—en-ratones—singénicos . El tumor primario es removido después de 1 a 4 semanas, y los ratones son tratados con IL-21 en combinación con otros agentes anti-cancerosos como se describe en esta solicitud. La metodología se describe en Palumbo et al., Cáncer Res. 62: 6966-6972 (2002). Las líneas celulares tumorales, por ejemplo Células de Carcinoma de Pulmón de Lewis (LLC) o las células de melanoma B16-F10 o las células de carcinoma de células renales renca, son inyectadas i.v. en ratones singénicos, y los ratones son tratados con IL-21 en combinación con otros agentes anti-cancerosos, como se describe en esta solicitud. La metodología es descrita en Amirkhosravi et al., Thromb. Haejnost. 87: 930-936 (2002); Osaka et al., Cáncer Lett 161: 231-240 (2000); aini et al., In vivo 17: 119-123 (2003). Las células de carcinoma tumorales de células renales renca son inyectadas intrarrenalmente en un riñon en ratones singénicos. El tumor primario es removido después de 1 a 4 semanas, y los ratones son tratados con IL-21 en' combinación con otros agentes anti -cancerosos como se describe en esta solicitud. La metodología se describe en Murphy et al., J Immunol 170: 2727-2733 (2003). Se hace constar que con relación a esta fecha, el mejor método conocido para llevar a la práctica la citada invención es el que resulta claro de la presente descripción de la invención.

Claims

REIVINDICACIONES Habiéndose descrito la invención como antecede, se reclama como propiedad lo contenido en las siguientes reivindicaciones : 1·. Una combinación de IL-21, caracterizada porque un análogo o derivados del. mismo, y uno o más de los siguientes : 1. Agentes que inducen la muerte de las células tumorales o' la muerte de _las células infectadas por virus — .— _ a)— quimioterapia--convencional b) terapia con radiación c) anticuerpos monoclonales d) reguladores del control del ciclo celular/apoptosis e) inhibidor del factor de crecimiento y de los moduladores de la transducción f) inhibidores de señales de la vascularización tumoral (inhibidores de angiogénesis, fármacos anti- angiogénesis) g) direccionamiento viral (el uso de un virus recombinante para destruir células tumorales) h) agentes anti-virales i) agentes hormonales o II. Agentes que mejoran la respuesta inmune contra las células tumorales o las células infectadas con virus j) activadores del sistema inmune k) inhibidores del sistema inmune (por ejemplo, agentes que inhiben las señales inmunes que subregulan la respuesta inmune) , incluyendo agentes anti-anérgicos 1) vacunas terapéuticas o III. Agentes que interfieren con el crecimiento tumoral, metástasis o dispersión de las células infectadas con virus m) integrinas, moduladores- de las moléculas de adhesión celular n) anti-metastáticos o) moduladores de la célula endotelial o IV. Vacunación interna V. Antagonistas del factor tisular y otros factores que incluyen la cascada de la coagulación - p) agentes anti-factor Xa, inhibidores de anti-factor lia, agentes anti-fibrinógenos q) pentasacáridos , etc. VI. Agentes inmunosupresores/inmunomoduladores r) agentes que influyen sobre el aloj amiento de linfocitos T por ejemplo, FTY-720 s) inhibidores de la calcineurina t) inhibidores de TOR 2. Una combinación de conformidad con la reivindicación 1, caracterizada porque comprende IL-21 humano . 3. Una combinación de conformidad con la reivindicación 1, caracterizada porque comprende un análogo - de IL-21. 4. Una combinación de conformidad con la reivindicación 1, caracterizada porque comprende un derivado ' de IL-21. 5. Una combinación de conformidad con cualquiera - de - las reivindicaciones 1 a 4, caracterizada porque la combinación comprende dacarbazina (DTIC) . 6. Una combinación de conformidad con cualquiera de las reivindicaciones 1 a 4, caracterizada porque la combinación comprende radioterapia. 7. Una combinación de conformidad con cualquiera de las reivindicaciones 1 a 4, caracterizada porque la combinación comprende anticuerpos tales como rituximab, alemtuzumab, trastuzumab, gemtuzumab, gemtuzumab-ozogamicina (Myelotarg®, Wyeth) , cetuximab (Erbitux"11, bevacizumab, HuMax-CD20, Hu-Max-EGFr, zamil, pertuzumáb, anticuerpos contra el factor tisular, receptor similares a Ig asesina (KIR) y laminina 5. 8. Una combinación de · conformidad con la reivindicación 7, caracterizada porque la combinación comprende rituximab . 9. Una combinación de conformidad con la reivindicación 7, caracterizada porque la combinación comprende cetuximab. 10. · Una combinación de conformidad con la reivindicación 7, caracterizada porque el anticuerpo terapéutico es además combinado con compuestos adicionales mej oradores de ADCC, por ejemplo que bloquean los anticuerpos anti-KIR o que activan los anticuerpos N G2A o IL-2. 11. Una combinación de conformidad con cualquiera de las reivindicaciones 1 a 4, caracterizada porque la combinación comprende anticuerpos contra los antígenos virales. 12. Una combinación de conformidad con cualquiera de las reivindicaciones 1 a 4, caracterizada porque la combinación comprende uno o más reguladores del ciclo celular y/o agentes inductores de apoptosis . 13. Una combinación de conformidad con la reivindicación 12, caracterizada, porque la combinación comprende compuestos seleccionados del grupo que comprende cdc^25, NSC 663284, flavopiridol , 7-hidroxistaurosporina, roscovitina, BIBR1532 SOT-095, ligando inductor de apoptosis relacionado a TNF (TRAIL) /ligando 2 de apoptosis (Apo-2L) , anticuerpos que activan los receptores TRAIL, · IFN . y Bel-2 antisentido. 1 . Una combinación de conformidad con cualquiera de las reivindicaciones 1 a 4, caracterizada porque la combinación comprende inhibidores del factor de crecimiento. 15. Una combinación de conformidad con la reivindicación 14, caracterizada porque los inhibidores del factor de crecimiento son seleccionados del grupo que comprende herceptina (anticuerpo monoclonal) ; cetuximab (anticuerpos monoclonales) , tarceva (inhibidor de bajo peso molecular) , e iressa (inhibidor de bajo peso molecular)-. 16. Una combinación de conformidad con las. reivindicaciones 14-15, caracterizada porque la combinación comprende herceptina. 17. Una combinación de conformidad con cualquiera de las reivindicaciones 1 a 4, caracterizada porque la combinación comprende un fármaco anti-angiogénesis . 18. Una combinación de conformidad con la reivindicación 17, caracterizada porque el fármaco anti-angiogénesis se selecciona del · grupo que comprende: avastina, neovastat, talidomida, PTK787, ZK222584 , - ZD-6474, SU6668, PD547, 632, VEGF-Trap, CEP-7055, NM-3, SJ11248. 19. Una combinación de conformidad con cualquiera de las reivindicaciones 1 a 4, caracterizada porque la combinación comprende la dirección a objetivos virales. 20. Una combinación de conformidad con cualquiera de las reivindicaciones 1 a 4, caracterizada porgue la combinación comprende terapia hormonal . 21. Una combinación de conformidad con cualquiera de las reivindicaciones 1 a 4, caracterizada porque la 5 combinación comprende uno o más adyuvantes . 22. Una combinación de conformidad con la reivindicación 21, caracterizada porque los adyuvantes se seleccionan del grupo que comprende: QS21, GM-CSF y oligodesoxinucleótidos CpG, lipopolisacárido y ácido 0 poliinoslnico :policitid£lico. 23. Una combinación de conformidad con cualquiera - —de -las reivindicaciones .1 a 4, caracterizada -porque la combinación comprende una o más citocinas. 24. Una combinación de conformidad con la 15 reivindicación 23, caracterizada porque las citocinas son una o mas de los compuestos seleccionados del grupo que comprende: IFN-a, INF-ß, IFN-?, IL-2, PEG-IL-2, IL-4, IL- 6,IL-7, IL-12, IL-13, IL-15, IL-18, IL-23, IL-27, IL-28a, IL- 28b, IL-29, GM-CSF, ligando Flt3 o el factor de células 0 madre . 25. Una combinación de conformidad con las reivindicaciones 23-24, caracterizada porque las -citocinas son uno o más de los compuestos seleccionados- del grupo que comprende: IFN-oc, INF-ß, IFN-?, IL-2, PEG-IL-2, IL-18, IL- 5 23, IL-27, IL-28a, IL-28b, IL-29. 26. Una combinación de conformidad con cualquiera de las reivindicaciones 1 a 4 y 23, caracterizada porque la combinación comprende uno o más de los compuestos seleccionados del grupo que comprende: IL-2, PEG-IL-2, IL-7, IL-12, IL-15 e IFN-oc. 27. Una combinación de conformidad con cualquiera de las reivindicaciones 14 y 23-24, caracterizada porque la combinación comprende IL-12. 28. Una combinación de conformidad con cualquiera de las reivindicaciones 1 a 4 y 23 a 26, caracterizada porque la cqnúDinación comprende IFN-a. — 29 — Una combinación de conformidad- co cualquiera de las reivindicaciones 1 a 4 y 23 a 26, caracterizada porque la combinación comprende PEG-IL-2. 30. Una combinación de conformidad con cualquiera de las reivindicaciones 1 a 4 y 23, caracterizada porque la combinación comprende al menos dos IL-2, PEG-IL-2, IL-7, IL-12, IL-15 e IFN-a. 31. Una combinación de conformidad con cualquiera de las reivindicaciones 1-4 y 23-24, caracterizada porque la combinación comprende al menos uno de los siguientes: IL-2¿ PEG-IL-2, IL-7, IL-12, IL-15 e IFN-a, y un componente activo adicional. 32. Una combinación de conformidad con cualquiera de las reivindicaciones 1-4 y 23-24, caracterizada porque la combinación comprende al menos uno de los siguientes: IL-2, PEG-IL-2, IL-7, IL-12, IL-15 e IFN-oc, y una citocina adicional . 33. Una combinación de conformidad con cualquiera de las reivindicaciones 1-4 y 23-24, caracterizada porque la combinación comprende IFN-a, y GM-CSF. 34.. Una combinación de conformidad con cualquiera de las reivindicaciones 1-4 y. 23, caracterizada porque la combinación comprende IFN-a, y timopent na. 35. Una combinación de conformidad con cualquiera de las reivindicaciones 1-4 y 23, caracterizada porque la combinación comprende IFN-?. 36. Una combinación de conformidad con cualquiera de las reivindicaciones 1-4 y 23, caracterizada porque la combinación comprende TIL e IFN-cc. 37. Una combinación de conformidad con cualquiera de las reivindicaciones 1-4 y 23, caracterizada porque la combinación comprende IFN-cc e IL-12. 38. Una combinación de conformidad con cualquiera de las reivindicaciones 1-4 y 23, caracterizada porque la combinación comprende Cis-platino e IFN-cc. 39. Una combinación de conformidad con cualquiera de las reivindicaciones 1-4 y 23, caracterizada porque la combinación comprende Cis-platino, tamoxifeno e IFN-cc. 4-0. Una combinación de conformidad -con cualquiera de las reivindicaciones 1-4 y 23, caracterizada porque la combinación comprende Cis-platino, DTIC, tamoxifeno e IFN-bc. 41. Una combinación de conformidad con cualquiera de las reivindicaciones 1-4 y 23, caracterizada porque la combinación comprende Cis-platino, DTIC, tamoxifeno y G -CSF. 42. Una combinación de conformidad con cualquiera de las reivindicaciones 1-4 y 23, caracterizada porque la combinación comprende Cis-platino, Carmustina, DTIC e IFN-cc. - 43. Una combinación de conformidad con cualquiera de las reivindicaciones 1-4 y 23, caracterizada porque la combinación comprende Cis-platino, Carmustina, . DTIC, tamoxifeno e-I-FN-a. - 44. Una combinación de conformidad con cualquiera de las reivindicaciones 1-4 y 23, caracterizada porque la combinación comprende Cis-platino, carmustina, DTIC, carboplatino, tamoxifeno e IFN-a. 45. Una combinación de conformidad con cualquiera de las reivindicaciones 1-4 y 23, caracterizada porque la combinación comprende Cis-platino, DTIC, vinblastin , tamoxifeno e IFN-a. 46. Una combinación de conformidad con - cualquiera de las reivindicaciones 1-4 y 23, caracterizada porque la combinación comprende Cis-platino, vinblastino, .temozolomida e IFN-a. 47. Una combinación de conformidad con cualquiera de las reivindicaciones 1-4 y 23, caracterizada porque la combinación comprende Cis-platino, carmustina, DTIC, vindesina, tamoxifeno e IFN-a. 48. Una combinación de conformidad con cualquiera de las reivindicaciones 1-4 y 23, caracterizada porque la combinación comprende Cis-platino, tamoxifeno e IFN-a. 49. Una combinación de conformidad con cualquiera de las reivindicaciones 1-4 y 23, caracterizada porque la combinación comprende Cis-platino, vinblastino, DTIC e IFN-a. 50. Una combinación de conformidad con cualquiera de las reivindicaciones 1-4 y 23, caracterizada porque la combinación comprende DTIC e IFN-a. 51. Una combinación de conformidad con cualquiera de las reivindicaciones 1-4 y 23, caracterizada porque la combinación comprende DTIC, GM-CSF e IFN-a. 52. Una combinación de conformidad con cualquiera de las reivindicaciones 1-4 y 23, caracterizada porque la combinación comprende DTIC, timosin-a e IFN-a. 53. Una combinación de conformidad con cualquiera de las reivindicaciones 1-4 y 23, caracterizada porque la combinación comprende vinblastino e IFN-a. 54. Una combinación de conformidad con cualquiera de las reivindicaciones 1-4 y 23, caracterizada porque la combinación comprende 5-fluorouracilo e IFN-a. 55. Una combinación de conformidad con cualquiera de las reivindicaciones 1-4 y 26-27, caracterizada porque la combinación comprende fotemustina e IFN-a. 56. Una combinación de conformidad con cualquiera de las reivindicaciones 1-4 y 23, caracterizada porque la combinación comprende gemcitabina e IFN-a. 57. Una combinación de conformidad con cualquiera de las reivindicaciones 1-4 y 23, caracterizada porque la combinaciones comprenden además IL-2. 58. Una combinación de conformidad con las reivindicaciones 6-10, caracterizada porque la combinación comprende inmunoterapia pasiva. 59. Una combinación de conformidad con las reivindicaciones 6-10, caracterizada porque la combinación comprende terapia adoptiva celular. 60. Una combinación de conformidad con la reivindicación 59, caracterizada porque la terapia adoptiva celular es células T CD4+ o CD8+ que reconocen antígenos específicos de tumor o antígenos asociados al tumor. 61. Una combinación de conformidad con la reivindicación 59, caracterizada porque la . terapia adoptiva celular es anticuerpos que expresan células B específicos para antígenos específicos de tumor o antígenos asociados- al · tumor. 62. Una combinación de conformidad con la reivindicación 59, caracterizada porque la terapia adoptiva celular es células NK que son capaces de matar las células tumorales. 63. Una combinación de conformidad con la reivindicación 59, caracterizada porque la terapia adoptiva celular es células dendríticas (DC) . · ¦ 64. Una combinación de conformidad con la reivindicación 63, caracterizada porque las células dendríticas son cultivadas in vivo con un agente de expansión DC (por ejemplo, GM-CSF o Flt3-L) , cargado con antígenos específicos de tumor o antígenos asociados al tumor y reintroducidos in vivo. 65. Una combinación de conformidad con cualquiera de las reivindicaciones 1-4, caracterizada porque la combinación comprende uno o más agentes que rompen la tolerancia al cáncer, a los tumores o a los antígenos virales . 66. Una combinación de conformidad con la reivindicación 65, caracterizada porque el- agente es MDX-010. 67. Una combinación de conformidad con la reivindicación 65, caracterizada porque los agentes son anticuerpos contra CTLA-4. 68. Una combinación de conformidad con cualquiera de las reivindicaciones 1-4, caracterizada porque la combinación comprende una o más vacunas terapéuticas con o sin adyuvantes, citocinas, oligodesoxinucleótidos CpG, células dendrlticas, GM-CSF, o proteínas de choque por calor. 69. Una combinación de conformidad con cualquiera de las reivindicaciones 1-4, caracterizada porque la combinación comprende uno o más agentes anti-metastáticos, tales como inhibidores de metaloproteinasa. 70. Una combinación de conformidad con cualquiera de las reivindicaciones 1-4, caracterizada porque la combinación comprende terapia de vacunación interna. 71. El uso de una combinación de conformidad con cualquiera de las reivindicaciones 1-70, para la fabricación de un medicamento para el tratamiento del cáncer o infecciones virales. 72. Una composición farmacéutica, caracterizada porque comprende una combinación de conformidad con cualquiera de las reivindicaciones 1-70, junto con aditivos farmacéuticamente aceptables. 73. Un método para tratar el cáncer o la infección viral en un sujeto en necesidad del mismo, caracterizado porque comprende administrar una cantidad efectiva de una combinación de conformidad ' con cualquiera de las reivindicaciones 1-70.