MXPA06003862A

MXPA06003862A - Composiciones inmunogenicas

Info

Publication number: MXPA06003862A
Application number: MXPA/A/2006/003862A
Authority: MX
Inventors: Elvire Marie Bruck Claudine; Marie Ghislaine Gerard Catherine; Ludmila Jonak Zdenka
Original assignee: Glaxosmithkline Biologicals Sa
Priority date: 2003-10-13
Filing date: 2006-04-06
Publication date: 2007-04-10

Abstract

La presente invención se refiere a una terapia de combinación que encuentra utilidad en el tratamiento o profilaxis de enfermedades infecciosas, cánceres, enfermedades auto-inmunes y padecimientos relacionados.

Description

COMPOSICIONES INMUNOGENICAS Campo de la Invención La presente invención se refiere a una terapia de combinación que encuentra utilidad en el tratamiento o profilaxis de enfermedades infecciosas, cánceres, enfermedades auto-inmunes y padecimientos relacionados. En particular, la terapia de combinación comprende la administración de una citocina TH-1, en particular IL-18, y una composición ¡nmunogénica, en particular, una vacuna que comprende un antígeno y un adyuvante CpG. En particular, la presente invención se refiere al uso de la I L-18 o un fragmento bioactivo o variante de la misma y una composición inmunogénica que comprende un antígeno asociado con el tumor y un adyuvante CpG, para el tratamiento de lesiones preneoplásticas o cáncer. La invención se refiere además a preparaciones combinadas y equipos farmacéuticos adecuados para utilizarse de acuerdo con la presente ¡nvención. Estos métodos de tratamiento y preparaciones farmacéuticas son especialmente útiles para el estímulo de una respuesta inmune adecuada para aplicaciones profilácticas e inmunoterapéuticas, especialmente para la prevención y/o tratamiento de tumores. Antecedentes de la Invención El cáncer es una enfermedad que se desarrolla de una sola célula debido a los cambios genéticos. A pesar de las enormes inversiones de recursos financieros y humanos, el cáncer continúa siendo una de las causas pricipales de la muerte. La detección clínica de estos tumores ocurre la mayoría de las veces, en una etapa relativamente tardía de la enfermedad, cuando el tumor primario puede ser extirpado mediante cirugía, y cuando ya ha ocurrido la existencia de micro metástasis asentadas en diferentes órganos. A pesar de los avances considerables en el entendimiento de los mecanismos que conducen al cáncer, ha habido poco progreso en la terapia de los cánceres metastáticos y para prevenir el progreso de los tumores en etapas tempranas hacia lesiones más malignas y metastáticas. La quimioterapia con frecuencia no elimina completamente estas células, las cuales entonces permanecen como una fuente de enfermedad recurrente. Las citocinas del tipo TH-1, por ejemplo, IFN-?, TNFa, IL-2, IL-12, IL-18, etc, tienden a favorecer la inducción de las respuestas inmunes portadas por las células a un antígeno administrado. En contraste, los niveles altos de citocinas del tipo Th2 (por ejemplo, I L-4, IL-5, II-6 e IL-10) tienden a favorecer la inducción de respuestas inmunes humorales. La interleucina-18 (IL-18), también conocida como el factor inductor del interferon-gama (IFNg), ha sido descrita como una citocina pleotrópica con efectos inmuno-reguladores que estimulan el propio sistema inmune del paciente contra la enfermedad (por ejemplo, el cáncer). La IL-18 es expresada de manera temprana en la respuesta inmune y actúa tanto en las respuestas inmunes celulares como humorales y conduce a las respuestas hacia un mejor perfil del tipo TH-1. Se ha producido mediante células que presentan un antígeno activado y se ha reportado que tienen varias bioactividades, específicamente para promover la diferenciación de las células naturales CD4 T en las células Th1, de estimular las células exterminadoras naturales (NK), las células exterminadoras naturales T (NKT) y para inducir la proliferación de las células T activadas, predominantemente células T citotóxicas (del fenotipo CD8 + ) que secretan el interferon gama (IFN-gama) (Okamura H. et al. 1998, Adv. Immunol. 70: páginas 281 a 312). La l L- 8 también es portadora de la muerte del tumor inducida por Fas, promueve la producción de IL-1a y GMCSF, y tiene una actividad antiangiogénica. La IL-18 tiene la capacidad de estimular la inmunidad innata de ambas respuestas portadas por las células Th1- y Th2-. En la presencia de la IL-12, la IL-18 puede actuar en las células Th1, células T no polarizadas, células NK, células B y células dendríticas para producir el IFNg. Sin la ayuda de la IL-12, la IL-18 tiene el potencial de inducir la producción de I L-4 e I L-13 en las células T, células NK, células de mamas y basófilos. La IL-18 ha mostrado que induce la regresión del tumor, a través de la producción de IFN-gama, el cual es un componente crítico de las respuestas inmunes endógenas y antitumor inducidas por la citocina. Se ha demostrado la eficacia en diferentes modelos de tumores de animales (Jonak Z et al. 2002, J. Immunother. 25, páginas S20-S27; Akamatsu S; et al. 2002, J. lmmunother. 25, páginas S28-S34). Se han descrito composiciones que comprenden la IL-18 combinada con otros agentes, en particular la IL-18 en combinación con agentes quimioterapéuticos (Patente Norteamericana No. 6,582,689). La IL-18 también ha sido descrita como que actúa como un adyuvante para las vacunas (Documentos WO 99/56775; WO 03/031569). Los oligonucleótidos que contienen CpG, (en los cuales el dinucleótido CpG es no metilado) también inducen una respuesta predominantemente Th1. Dichos oligonucleótidos son bien conocidos y se describen, por ejemplo, en los Documentos WO 96/02555, WO 99/33488 y las Patentes Norteamericanas Nos. 6,008,200 y 5,856,462. Las secuencias de ADN inmunoestimulantes también han sido descritas, por ejemplo, por Sato et al., en Science 273: página 352, 1996. Los oligonucleótidos inmunoestimulantes que contienen dinucleótidos CpG no metilados ("en lo sucesivo CpG") son conocidos en la técnica como que son adyuvantes cuando son administrados, tanto por rutas en la mucosa como sistémicas (Documentos WO 96/02555, Patente Europea EP 468520, Davis et al., J.lmmunol, 1998, 160(2): páginas 870 a 876; McCIuskie y Davis, J.lmmunol., 1998, 161(9): páginas 4463 a 4466). CpG es una abreviatura para los patrones del dinucleótido de citocina-guanosina presentes en el ADN. Históricamente, se ha observado que la fracción de ADN del BCG podría ejercer un efecto anti-tumor. En estudios adicionales, los oligonucleótidos sintéticos derivados de las secuencias del gen BCG mostraron tener la capacidad de inducir efectos inmunoestimulantes (tanto in vitro como in vivo). Los autores de estos estudios concluyeron que ciertas secuencias palindrómicas, que incluyen un patrón CG central, portan esta actividad. El rol central del patrón CG en la inmunoestimulación fue evidenciado después en una publicación de Krieg, en Nature 374, página 546, 1995. El análisis detallado ha mostrado que el patrón CG tiene que ser en un cierto contexto de secuencia, y que dicha secuencia es común en el ADN bacteriano, pero es rara en el ADN de vertebrados. La secuencia inmunoestimulante es frecuentemente de: Purina, Purina, C, G, pirimidina, pirimidina; en donde el patrón CG del dinucleótido no es metilado, pero otras secuencias CpG no metiladas son conocidas como que son inmunoestimulantes y pueden ser utilizadas en la presente invención.

En ciertas combinaciones de seis nucleótidos está presente una secuencia palindrómica. Varios de estos patrones, ya sea como repeticiones de un patrón o una combinación de patrones diferentes, pueden estar presentes en el mismo oligonucleótido. La presencia de una o más de estas secuencias inmunoestimulantes que contienen oligonucleótidos puede activar varios subconjuntos inmunes, incluyendo las células exterminadoras naturales (las cuales producen el interferon ? y tienen una actividad citolítica) y los macrófagos (Wooldrige et al Vol 89 (no. 8), 1977). Aunque otras secuencias que contienen el CpG no metilado que no tienen esta secuencia de consenso ahora han mostrado también ser inmuno-reguladoras. El CpG cuando es formulado en vacunas, generalmente es administrado en una solución libre junto con un antígeno libre (Documento WO 96/02555; McCIuskie y Davis, mencionado anteriormente) o conjugado de manera covalente a un antígeno (Publicación PCT No. WO 98/16247), o formulado con un portador, tal como hidróxido de aluminio (antígeno de la superficie de hepatitis) Davis et al., mencionado anteriormente; Brazolot-Millan et al., Proc. Nati. Acad. Sci., EUA, 1998, 95(26), páginas 15553 a 15558). La presente invención se refiere al descubrimiento sorprendente de que la administración combinada de la citocina TH-1 tal como IL-18 y de una composición inmunogénica que comprende un antígeno y un adyuvante CpG es extremadamente potente y proporciona la profilaxis o el tratamiento bien tolerado o eficiente de enfermedades infecciosas, enfermedades neoplásticas, metastáticas primarias (por ejemplo, cánceres), enfermedades autoinmunes y padecimientos relacionados, y es particularmente efectivo, para inhibir la proliferación de las células cancerosas humanas que expresan un antígeno asociado con el tumor. Sumario de la Invención Por consiguiente, se proporciona un método para evidenciar una respuesta inmune mejorada a un antígeno en un paciente, el cual comprende la administración al paciente de una cantidad segura y efectiva de i) una composición ¡nmunogénica, en particular una vacuna, que comprende un antígeno o un derivado inmunogénico del mismo y un adyuvante CpG y ¡i) un polipéptido IL-18 o fragmento bioactivo o variante del mismo. En otra modalidad, la presente invención proporciona un método para reducir la severidad de un cáncer en un paciente, que incluye el tratamiento de tumores previamente establecidos (tumores primarios y tumores metastáticos) o de prevenir las recurrencias de cáncer, comprendiendo dicho método la administración al paciente que lo necesita de una cantidad segura y efectiva de i) un polipéptido I L-18 o fragmento bioactivo o variante del mismo, ii) una composición inmunogénica, en particular una vacuna, que comprende un antígeno o un derivado inmunogénico del mismo y un adyuvante CpG. En una modalidad, el polipéptido IL-18 es un polipéptido múrido, o un polipéptido IL-18 humano o un fragmento bioactivo o variante del mismo. En otra modalidad, el antígeno es un antígeno asociado con el tumor. Por consiguiente, en una modalidad, la presente ¡nvención se refiere a un método para reducir la severidad de un cáncer en un paciente, que incluye el tratamiento de tumores previamente establecidos (tumores primarios y tumores metastáticos) o prevenir de las recurrencias del cáncer, particularmente el carcinoma de mama, el pulmón, (particularmente el carcinoma del pulmón de células no pequeñas), melanoma, el carcinoma colo-rectal, del ovario, de las próstata, vejiga, escamoso de cabeza y cuello, gástrico y otros carcinomas Gl (gastrointestinales), en particular, el cáncer del esófago, leucemia, linfomas, mielomas, plasmacitomas, comprendiendo dicho método la administración al mamífero de i) una composición inmunogénica, en particular una vacuna, que comprende un antígeno asociado con el tumor o un derivado inmunogénico del mismo y un adyuvante CpG y ii) el polipéptido IL-18 o un fragmento bioactivo o variante del mismo. La presente invención también se refiere a una preparación combinada que comprende como ingredientes activos los siguientes componentes individuales: (1) un polipéptido IL-18 o fragmento bioactivo o variante del mismo y (2) una composición ¡nmunogénica que comprende un antígeno y un adyuvante CpG, siendo los ingredientes activos para el uso simultáneo, separado o consecutivo para la profilaxis y/o tratamiento de enfermedades infecciosas, cáncer, ¡ncluyendo tumores primarios y tumores metastáticos, enfermedades autoinmunes y padecimientos relacionados. En una modalidad la composición ¡nmunogénica dentro de la preparación combinada contiene un químico adicional inmunoestimulante seleccionado del grupo consistente de: 3D-MPL, QS21, una mezcla de QS21 y colesterol, hidróxido de aluminio, fosfato de aluminio, tocoferol y una emulsión de aceite en agua o una combinación de dos o más de dichos adyuvantes. Por ejemplo, el adyuvante adicional es una saponina, por ejemplo QS-21. En un aspecto relacionado la presente invención también proporciona un equipo farmacéutico que comprende como ingredientes activos los siguientes componentes individuales: (1) un polipéptido I L-18 o fragmento bioactivo o variante del mismo, (2) una composición ¡nmunogénica que comprende un derivado del antígeno o inmunogénico del mismo y un adyuvante CpG, siendo los ingredientes activos para el uso simultáneo, separado o consecutivo para la profilaxis y/o tratamiento de enfermedades infecciosas, cáncer, incluyendo tumores primarios y tumores metastáticos, y enfermedades autoinmunes. La presente invención se refiere además al uso de (1) un polipéptido I L- 8 o fragmento bioactivo o variante del mismo y (2) una composición inmunogénica que comprende un antígeno o derivado inmunogénico del mismo y un adyuvante CpG, en la manufactura de un medicamento para lograr una respuesta inmune protectora o reducir la severidad de una enfermedad en un paciente, administrando a dicho paciente una cantidad efectiva y segura de ambos componentes. La presente invención se refiere además a procesos para elaborar dichas composiciones inmunogénicas, al uso de dichas composiciones para la prevención y/o el tratamiento de enfermedades, en particular, el cáncer y al uso de dichas composiciones para inhibir el crecimiento de tumores y células cancerosas en los mamíferos, incluyendo los humanos. Descripción Detallada de la Invención En una forma de la presente invención, el adyuvante CpG dentro de la composición inmunogénica contiene uno, o dos o más patrones CpG de dinucleótidos separados por al menos tres, por ejemplo, por al menos seis o más nucleótidos. Los oligonucleótidos de la presente invención generalmente son desoxinucleótidos. En una modalidad el internucleótido del oligonucleótido es fosforoditioato, o fosforotioato enlazado, aunque los enlaces fosfodiéster y otros internucleótidos se encuentran dentro del alcance de la presente invención, incluyendo los oligonucleótidos con enlaces internucleótidos mezclados. Los métodos para producir los oligonucleótidos fosforotioato o fosforoditioato se describen en las Patentes Norteamericanas Nos. 5,666,153, 5,278,302 y el Documento WO95/26204. Los ejemplos de los oligonucleótidos tienen las siguientes secuencias. Las secuencias pueden contener enlaces internucleótidos modificados por fosforotioato. OLIGO 1(SEQ ID NO:1): TCC ATG ACG TTC CTG ACG TT (CpG 1826) OLIGO 2(SEQ ID NO:2): TCT CCC AGC GTG CGC CAT (CpG 1758) OLIGO 3(SEQ ID NO:3): ACC GAT GAC GTC GCC GGT GAC GGC ACC ACG OLIGO 4(SEQ ID NO:4): TCG TCG TTT TGT CGT TTT GTC GTT (CpG 2006, también conocido como CpG 7909) OLIGO 5(SEQ ID NO:5): TCC ATG ACG TTC CTG ATG CT (CpG 1668) Alternativamente los oligonucleótidos CpG pueden comprender las secuencias anteriores, ya que ellos tienen eliminaciones o adiciones intrascendentes de los mismos. Los oligonucleótidos CpG utilizados en la presente invención pueden ser sintetizados por cualquier método conocido en la técnica (por ejemplo, Patente Europea EP 468520). De una manera conveniente, dichos oligonucleótidos pueden ser sintetizados utilizando un sintetizador automático. Los oligonucleótidos utilizados en la presente invención también son generalmente desoxinucleótidos. En una modalidad, los enlaces internucleótidos del oligonucleótido son enlaces fosforoditioato, o fosforotioato, aunque los fosforodiésteres también se encuentran dentro del alcance de la presente invención. Los oligonucleótidos que comprenden enlaces internucleótidos diferentes están contemplados, es decir, fosforotioato fosfodiésteres mezclados. Pueden ser utilizados otros enlaces internucleótidos los cuales estabilizan el oligonucleótido. El antígeno puede ser un antígeno derivado de un organismo infeccioso, por ejemplo, un antígeno asociado con el tumor o un derivado inmunogénico o derivado del mismo. El polipéptido IL-18 puede ser un polipéptido múrido o polipéptido IL-18 humano o un fragmento bioactivo del mismo. La composición inmunogénica y el IL-18 pueden actuar sinérgicamente en la inducción de un anticuerpo específico del antígeno y pueden ser potentes para inducir o mejorar las respuestas inmunes humorales y/o celulares convencionalmente asociadas con el sistema inmune del tipo TH-1. La mejora de la respuesta inmune significa un aumento total en la respuesta inmune, determinada por la respuesta inmune portada por las células y/o humoral, o mediante la reducción del tamaño del tumor y/o la carga. La sinergia significa que el polipéptido IL-18 o el fragmento inmunogénico o variante del mismo tiene la capacidad de inducir una respuesta inmune cuando es administrado en una terapia combinada con la composición inmunogénica de la presente invención y la presencia de dicha composición inmunogénica puede mejorar la eficacia del polipéptido 1L-18 o el fragmento inmunogénico o variante del mismo. El resultado de la inducción de la respuesta inmune puede ser la profilaxis, reducción de la severidad de la enfermedad (incluyendo, en el caso del cáncer, la reducción de tumores previamente establecidos, primarios o metástasis, o la prevención de las recurrencias del cáncer) y/o la terapia. Por consiguiente, en una modalidad se proporciona un método para promover una respuesta inmune a un antígeno en un mamífero, el cual comprende la administración a un mamífero de i) una cantidad efectiva de una composición inmunogénica que comprende un antígeno derivado de un organismo infeccioso, un antígeno asociado con el tumor y un adyuvante CpG y ii) el polipéptido IL-18 o un fragmento bioactivo o variante del mismo. En una modalidad, ambos componentes del tratamiento se administran de manera consecutiva. Se dice que la composición inmunogénica es utilizada para acelerar la respuesta inmune celular y/o humoral preparada por la administración del polipóptido IL-18. Alternativamente, en otra modalidad, la composición inmunogénica de acuerdo con la presente invención es utilizada para preparar una respuesta inmune celular y/o humoral en un individuo el cual recibirá consecutivamente el polipéptido IL-18. Todavía en otra modalidad ambos componentes de dicho tratamiento son administrados simultáneamente, ya sea a través de la co-administración en dos sitios diferentes o mezclados dentro de la misma preparación. Los expertos en la técnica entenderán que ambas la composición inmunogénica y el polipéptido I L- 8 pueden ser administrados una vez o de manera repetida. La terapia de combinación como está contemplada dentro del alcance de la presente invención, es por lo menos tan efectiva, o puede ser de una eficacia aumentada, comparada con su componente utilizado solo. Especialmente en el campo del cáncer, el tratamiento combinado es provechoso debido a que combina dos agentes anti-cáncer, los cuales operan de un modo aditivo, por ejemplo sinérgicamente, por medio de un mecanismo diferente de acción para producir una respuesta citotóxica mejorada contra las células del tumor humano. En una modalidad relacionada se proporciona una preparación combinada (por ejemplo, un equipo farmacéutico o un empaque de frascos farmacéuticos múltiples) que comprenden como ingredientes activos (1) un polipéptido IL-18 o fragmento bioactivo o variante del mismo y (2) una composición ¡nmunogénica que comprende un antígeno y un adyuvante CpG, siendo los ingredientes activos para el uso simultáneo, separado o consecutivo para la profilaxis y/o tratamiento de enfermedades infecciosas y cáncer. La preparación combinada significa una preparación farmacéutica, o un empaque farmacéutico (de frascos múltiples) o un aparato abastecedor el cual puede contener una o más formas de dosis unitaria que contiene los ingredientes activos. El empaque puede comprender, por ejemplo, lámina de metal o plástico, tal como un empaque blister. El empaque o aparato abastecedor puede estar acompañado por instrucciones para la administración. En donde el polipéptido IL-18 y la composición inmunogénica se pretenden para la administración como dos composiciones separadas, éstas pueden ser presentadas en la forma de, por ejemplo, un empaque de frascos múltiples. Los ingredientes activos que son administrados, ya sea al mismo tiempo o por separado, o consecutivamente, de acuerdo con la presente invención, no representan un mero agregado de los agentes conocidos, sino una combinación nueva con la propiedad sorprendentemente valiosa de que el uso del polipéptido IL-18, permite la simulación de ambos componentes innatos y adaptables del sistema inmune, incluyendo la activación de la célula NK, así como las respuestas inmunes portadas por las células T y la producción de citocina, aumentando de este modo la eficacia de la composición inmunogénica. Esto da como resultado un tratamiento nuevo y efectivo. Deberá quedar entendido que la preparación combinada también designada como un equipo de partes significa que los componentes de la preparación combinada no están necesariamente presentes como una unión, es decir en composición, con el objeto de que estén disponibles para la aplicación separada o consecutiva. Por lo tanto, la expresión equipo de partes, significa que no necesariamente es una combinación real, en vista de la separación física de los componentes. La preparación combinada puede ser utilizada, ya sea para el tratamiento o profilaxis del cáncer, en particular, para la reducción de la severidad del cáncer o la prevención de las recurrencias del cáncer. Los cánceres que se pueden beneficiar de la terapia combinada como se describe en este documento, incluyen cualquier enfermedad caracterizada por el crecimiento celular no controlado y la proliferación, lesiones preneoplásticas, tumores primarios y tumores y lesiones neoplásticas metastáticas, e incluyen, pero no están limitadas a, carcinoma de mama, pulmón (particularmente el carcinoma -NSCLC- del pulmón de célula que no es pequeña), melanoma, el carcinoma colo-rectal, del ovario, de la próstata, la vejiga, escamoso de cabeza y cuello, el carcinoma gástrico y otros Gl (gastrointestinales), en particular, el cáncer del esófago, leucemia, linfoma, mieloma, y plasmacitoma. Los antígenos de ejemplo derivados y fragmentos de los mismos, incluyen péptidos (es decir, de menos de aproximadamente 50 aminoácidos), ¡ncluyen el antígeno codificado por la familia de MAGE (Genes que codifican el Antígeno de Melanoma) los cuales son conocidos como antígenos del cáncer (-testículos), (Gaugler B. et al. J. Exp. Med., 1994, 179: página 921; Weynants P. et al. Int. J. Cáncer, 1994, 56: página 826; Patard J.J. et al. Int. J. Cáncer, 1995, 64: página 60). Los cánceres que expresan las proteínas MAGE son conocidos como tumores asociados con MAGE. Los genes MAGE pertenecen a una familia de genes estrechamente relacionados, ¡ncluyendo por ejemplo, MAGE 1, MAGE 2, MAGE 3 (Gen-3 que codifica el Antígeno de Melanoma), MAGE 4, MAGE 5, MAGE 6, MAGE 7, MAGE 8, MAGE 9, MAGE 10, MAGE 11, MAGE 12, localizado en el cromosoma X y que comparte con los otros de un 64% a 85% de homología en su secuencia de codificación (De Plaen E. et al., Immunogenetics, 1994, 40, páginas 360 a 369). Estos algunas veces son conocidos como MAGE A1, MAGE A2, MAGE A3, MAGE A4, MAGE A5, MAGE A6, MAGE A7, MAGE A8, MAGE A9, MAGE A10, MAGE A11 , MAGE A12 (La familia MAGE A). Otros dos grupos de proteínas también son parte de la familia MAGE aunque están relacionadas de una manera más distante. Estas son el grupo MAGE B y el grupo MAGE C. La familia MAGE B incluye MAGE B1 (también conocido como MAGE Xp1, y DAM 10), MAGE B2 (conocido también como MAGE Xp2 y DAM 6) MAGE B3 y MAGE B4 - la familia MAGE C incluye actualmente MAGE C1 y MAGE C2. En términos generales, una proteína MAGE puede ser definida como que contiene una firma de secuencia del núcleo localizada hacia el extremo de la terminal C de la proteína (por ejemplo, con respecto al MAGE A1, una proteína de 309 aminoácidos, la firma del núcleo corresponde a los aminoácidos del 195 al 279). Por lo tanto, el patrón de consenso de la firma del núcleo se describe de la manera siguiente, en donde x representa cualquier aminoácido, los residuos del caso inferior son conservados (se permiten las variantes conservadoras) y los residuos del caso superior son perfectamente conservados. La firma de la secuencia del núcleo: LixvL(2x)l(3x)g(2x)apEExiWexl(2x)m(3-4x)Gxe(3-4x)gxp(2x)llt(3x)VqexYLxYxqVPxsxP(2x)yeFLWGprA(2x)Et(3x )kv Las substituciones conservadoras son bien conocidas y generalmente son preparadas como matrices de calificación por omisión (default) en los programas de cómputo de alineación de secuencias. Estos programas incluyen PAM250 (Dayhoft M.O. et al., 1978, "Un modelo de cambios de evolución en las proteínas", en el "Atlas de secuencias de proteínas y estructura" 5(3) M.O. Dayhoft (ed.), páginas 345 a 352), La Fundación Nacional de Investigación Biomédica, Washington, y Blosum 62 (Steven Henikoft & Jorja G. Henikoft (1992), "Matrices de substitución de aminoácidos de los bloques de proteínas"), Proc. Nati. Acad. Sci. EUA 89 (Bioquímica): páginas 10915 a 10919. En términos generales, la substitución dentro de los siguientes grupos son substituciones conservadoras, pero las substituciones entre los grupos son consideradas no conservadas. Los grupos son: i) Aspartato/asparagina/glutamato/glutamina ¡i) Serina/treonina iii) Lisina/arginina ¡v) Fenilalanina/tirosina/triptofano v) Leucina/isoleucina/valina/metionina vi) Glicina/alanina En general y en el contexto de la presente invención, la proteína MAGE será aproximadamente 50% idéntica en esta región del núcleo a los aminoácidos del 195 al 279 de la MAGE A1.

La MAGE-3 es expresada en el 69% de los melanomas (Gaugler B. et al. J. Exp. Med., 1994, 179: página 921), y también puede ser detectada en un 44% de NSCLC (Yoshimatsu T. J Surg Oncol., 1998, 67, páginas 126 a 129), 75% de cánceres del pulmón de célula pequeña (SCLC) (Traversari C. et al., Gene Ther. 1997, 4: páginas 1029 a 1035), 48% de carcinoma de la célula escamosa de cabeza y cuello, 34% del carcinoma de la célula transicional de la vejiga, 57% del carcinoma del esófago, 32% de cánceres del colón, 24% de cánceres de mama (Van Peí A. et al., Immunol. Rev., 1995, 145: página 229; Inoue H. et al. Int. J. Cáncer, 1995, 63: página 523; Nishimura S et al., Nihon Rinsho Meneki Gakkai Kaishi 1997, Abril 20 (2): páginas 95 a 101). Han sido identificados varios epítopes CTL en la proteína MAGE-3 los cuales tienen patrones de enlace específicos para cualquiera de las moléculas MHC de la clase I HLA.A1, ó HLA.A2 (Van der Bruggen P. et al., Eur. J. Immunol., 1994, 24 páginas 3038 a 3043) y alelos HLA.B44 (Hermán, J. et al., Immunogenetics, 1996, 43, páginas 377 a 383), respectivamente. Otros antígenos de ejemplo o derivados o fragmentos derivados de los mismos incluyen los antígenos MAGE tales como los que se describen en el Documento WO 99/40188, PRAME (Documento WO 96/10577), BAGE, RAGE, LAGE 1 (Documento WO 98/32855), LAGE 2 (también conocido como NY-ESO-1, Documento WO 98/14464), XAGE (Liu et al, Cáncer Res, 2000, 60: páginas 4752 a 4755; el Documento WO 02/18584) SAGE, y HAGE (el Documento WO 99/53061) ó GAGE (Robbins and Kawakami, 1996, Current Opinions in Immunology 8, páginas 628 a 636; Van den Eynde et al., International Journal of Clinical & Laboratory Research (presentado en 1997); Corréale et al. (1997). Journal of the National Cáncer Institute 89, página 293. Indudablemente estos antígenos son expresados en un amplio rango de tipos de tumores, tales como melanoma, carcinoma de pulmón, sarcoma y carcinoma de vesícula. En una modalidad, se utilizan antígenos de la próstata, tales como antígenos del cáncer de la próstata o antígenos de diferenciación específica de la próstata (PSA), PAP, PSCA (PNAS 95(4) páginas 1735 a 1740 1998), PSMA o un antígeno conocido como prostasa. En una modalidad, el antígeno de la próstata es P501S o un fragmento del mismo. El P501S, también denominado prosteína (Xu et al., Cáncer Res. 61, 2001, páginas 1563 a 1568), es conocido como la SEQ ID NO. 113 del Documento WO98/37814 y es una proteína de 553 aminoácidos. Los fragmentos inmunogénicos y fracciones de los mismos que comprenden 20 o por lo menos 20, 50 o por lo menos 50 ó 100 o por lo menos 100 aminoácidos contiguos, se describen en la solicitud de patente a que se hizo referencia anteriormente, y están específicamente contemplados por la presente invención. Los fragmentos se describen en el Documento WO 98/50567 (antígeno PS108), y como la proteína asociada con el cáncer de la próstata (SEQ ID NO: 9 del Documento WO 99/67384). Otros fragmentos tienen los aminoácidos del 51 al 553, del 34 al 553 ó del 55 al 553 de la proteína P501S de longitud completa. En particular, las construcciones 1, 2 y 3 (ver figura 2, SEQ ID NOs. 27-32) están expresamente contempladas y pueden ser expresadas en sistemas de levadura, por ejemplo secuencias de ADN que codifican dichos polipéptidos que pueden ser expresadas en un sistema de levadura. La prostasa es una prostasa de serina específica de la próstata (similar a la tripsina), con una longitud de 254 aminoácidos, con una tríada catalítica H-D-S de proteasa de serina conservada y una secuencia pre-propéptido y ia terminal amino, indicando un punto de secreción potencial (P. Nelson, Lu Gan, C. Ferguson, P. Moss, R. Linas, L. Hood & K. Wand, "Clonación molecular y caracterización de prostasa, una proteasa de serina regulada por el andrógeno con una expresión restringida en la próstata" (Molecular cloning and characterisation of prostase, an androgen-regulated serine protease with prostate restricted expression.) en Proc. Nati. Acad. Sci. EUA (1999) 96, páginas 3114 a 3119). Se ha descrito un sitio de glucosilación. La estructura pronosticada es muy similar a otras proteasas de serina conocidas, mostrando los dobleces del polipéptido maduro en un solo dominio. La proteína madura es de una longitud de 224 aminoácidos, con por lo menos un epítope A2 mostrado para que sea procesado de manera natural. La secuencia de nucleótidos de prostasa y la secuencia de polipéptidos deducida y el homólogo se describen en la publicación de Ferguson, et al. en (Proc. Nati. Acad. Sci. EUA 1999, 96, páginas 3114 a 3119) y en las Solicitudes Internacionales de Patentes Documento WO 98/12302 (y también la Patente Norteamericana concedida correspondiente 5,955,306), el Documento WO 98/20117 (y también las Patentes correspondientes concedidas US 5,840,871 y US 5,786,148) (kallikreina específica de la próstata) y el Documento WO 00/04149 (P703P). Otros antígenos específicos de la próstata son conocidos por el Documento WO98/37418, y el Documento WO/004149. Otro es el STEAP (PNAS 96 14523 14528 páginas de la 7 a la 12, 1999). Otros antígenos asociados con el tumor útiles en el contexto de la presente invención ¡ncluyen: Plu -1 J Biol. Chem 274 (22) páginas 15633 a 15645, 1999, HASH -1, HASH-2 (Alders,M. et al., Hum. Mol. Genet. 1997, 6, páginas 859 a 867), Cripto (Salomón et al Bioassays 199, 21 páginas 61 a 70, la Patente Norteamericana No. 5654140), CASB616 (Documento WO 00/53216), Criptina (Patente Norteamericana No. 5,981,215). Adicionalmente, los antígenos particularmente importantes para las vacunas en la terapia de cáncer también comprenden tirosinasa, telomerasa, P53, NY-Br1.1 (Documento WO 01/47959) y fragmentos de los mismos tales como los que se describen en el Documento WO 00/43420, B726 (Documento WO 00/60076, SEQ ID Nos. 469 y 463; Documento WO 01/79286, SEQ ID Nos. 474 y 475), P510 (Documento WO 01/34802 SEQ ID Nos. 537 y 538) y survivina. La presente invención también es útil en combinación con antígenos del cáncer de mama, tales como Her-2/neu, mamaglobina (Patente Norteamericana No. 5,668,267), B305D (Documento WO00/61753 SEQ ID nos. 299, 304, 305 y 315), y los que se describen en los Documentos WO00/52165, WO99/33869, WO99/19479, WO 98/45328. Los antígenos Her-2/neu se describen entre otros, en la Patente Norteamericana No. 5,801,005. El antígeno Her-2/neu pueden comprender el dominio extracelular completo (comprendiendo de aproximadamente el aminoácido 1 al 645) o fragmentos del mismo y por lo menos una porción inmunogénica de o un dominio ¡ntracelular completo de aproximadamente 580 aminoácidos de la terminal C. En particular, la porción intracelular debe de comprender el dominio de fosforilación y los fragmentos del mismo. Dichas construcciones se describen en el Documento WO00/44899. Una construcción es conocida como ECD-PhD, una segunda es conocida como ECD deltaPhD (ver el Documento WO00/44899) también denominado dHER2. El antígeno Her-2/neu como se usa en la presente invención puede ser derivado de rata, ratón o humano. Ciertos antígenos de tumor son antígenos de péptidos pequeños (es decir de menos de aproximadamente 50 aminoácidos). Los péptidos de ejemplo incluyen péptidos derivados de Mucina, tales como MUC-1 (ver por ejemplo, las Patentes Norteamericanas Nos. 5,744,144; 5,827,666; El Documento WO88/05054, la Patente Norteamericana No. 4,963,484). Están específicamente contemplados los péptidos derivados de MUC-1 que comprenden por lo menos una unidad de repetición del péptido MUC-1, o por lo menos dos de dichas repeticiones, las cuales son reconocidas por el anticuerpo SM3 (Patente Norteamericana No. 6,054,438). Otros péptidos derivados de mucina incluyen el péptido de MUC-5. Alternativamente, dicho antígeno puede ser una interleucina, tal como IL13 e IL14. Dicho antígeno puede ser una hormona de auto péptido, tal como una hormona de liberación de la hormona de Gonadotropina de longitud total (GnRH, Documento WO95/20600), un péptido corto con una longitud de 10 aminoácidos, útil en el tratamiento de muchos cánceres o en la inmunocastración. Otros antígenos específicos del tumor incluyen, pero no están restringidos a, gangliósidos específicos del tumor, tales como GM2 y GM3. El antígeno también puede ser derivado de fuentes que son patogénicas para los humanos, ¡ncluyendo virus, bacterias o parásitos, tales como el virus de Inmunodeficiencia Humana VIH-1 (tales como tat, nef, transcriptasa inversa, gag, gp120 y gp160), el virus del herpes simplex humano, tales como el gD, o derivados del mismo o una proteína Temprana Inmediata, tal como la ICP27 del HSV1 ó HSV2, el citomegalovirus ((especie humana) (tal como el gB o derivados del mismo), Rotavirus (incluyendo virus atenuado vivo), el virus de Epstein Barr (tal como gp350 o derivados del mismo), Virus de Varicela Zoster (tal como gpl, II e IF63), o del virus de hepatitis, tal como el virus de hepatitis B (por ejemplo el antígeno de Superficie de Hepatitis B o un derivado del mismo), el virus de hepatitis A, el virus de hepatitis C y el virus de hepatitis E o de otros patógenos virales, tales como el paramixovirus: el virus Sincitial Respiratorio (tal como las proteínas F y G o derivados de las mismas), el virus parainfluenza, el virus de las viruelas, el virus de las paperas, el virus del papiloma humano (por ejemplo, HPV6, 11, 16, 18, ..), el flavivirus (por ejemplo el Virus de la Fiebre Amarilla, el Virus del Dengue, el virus de encefalitis portado por la Garrapata, Virus de Encefalitis Japonesa) o virus de Influenza (completo vivo o virus inactivado, virus de influenza dividido, que prolifera en los huevos y las células MDCK, o los virosomas completos del flu (tal como lo describen R. Gluck, Vaccine, 1992, 10, páginas 915 a 920) o proteínas recombinantes o purificadas de los mismos, tales como las proteínas HA, NP, NA, o M, o combinaciones de las mismas) o derivados de patógenos bacteriales tales como tal como Neisseria spp, incluyendo N. gonorrhea y N. meningitidis (por ejemplo, polisacáridos capsulares y conjugados de los mismos, proteínas de enlace de transferrina, proteínas de enlace de lactoferrina, PilC, adhesinas); S. pyogenes (por ejemplo, las proteínas M o fragmentos de las mismas, proteasa C5A, ácido lipoteicoico), S. agalactiae, S. mutans; H. ducreyi; Moraxella spp, ¡ncluyendo M Catarrhalis, también conocido como Branhamella catarrhalis (por ejemplo, adhesinas e invasinas de alto y bajo peso molecular); Bordetella spp, incluyendo ß. pertussis (por ejemplo, pertactina, toxina de la pertusis o derivados de la misma, hemaglutinina filamentosa, ciclasa de adenilato, fimbriae), B. parapertussis y B. bronchiseptica; Mycobacterium spp., incluyendo M. tuberculosis (por ejemplo, ESAT6, Antígeno 85A, -B ó -C), M. bovis, M. leprae, M. avium, M. paratuberculosis, M. smegmatis; Legionella spp, incluyendo L. pneumophila; Escherichia spp, incluyendo el E. coli enterotóxico (por ejemplo, factores de colonización, toxinas débiles al calor o derivados de las mismas, toxinas estables al calor o derivados de las mismas), E. coli enterohemorrágico, E. coli enteropatogénico (por ejemplo, la toxina similar a la toxina shiga o derivados de la mismas); Vibrio spp, incluyendo V. cholera (por ejemplo, toxina del cólera y derivados de la misma); Shigella spp, incluyendo S. sonnei, S. dysenteriae, S. flexnerii; Yersinia spp, incluyendo Y. enterocolitica (por ejemplo, la proteína Yop), Y. pestis, Y. pseudotuberculosis; Campylobacter spp, incluyendo C. jejuni (por ejemplo, toxinas, adhesinas e invasinas), y C. coli; Salmonella spp, incluyendo S. typhi; S. paratyphi, S. choleraesuis, S. enteritidis; Listeria spp., incluyendo L. monocytogenes; Helicobacter spp, incluyendo H. pylori (por ejemplo, ureasa, catalasa y toxina de vacuolación); Pseudomonas spp, incluyendo P. aeruginosa; Staphylococcus spp; incluyendo S. aureus, S. epidermidis; Enterococcus spp., incluyendo E. faecalis, E. faecium; Clostridium spp., incluyendo C. tetani (por ejemplo, toxina del tétano y derivados de la misma), C. botulinum (por ejemplo, toxina botulino o derivados de la misma), C. difficile (por ejemplo, toxinas del clostridio A ó B y derivados de las mismas); Bacillus spp., incluyendo B. anthracis (por ejemplo, toxinas del botulino y derivados de las misma); Corynebacterium spp., incluyendo C. diphtheriae (por ejemplo, toxinas de la difteria y derivados de las misma); Borrelia spp., incluyendo B. burgdorferi (por ejemplo, OspA, OspC, DbpA, DbpB), ß. garinii (por ejemplo, OspA, OspC, DbpA, DbpB), B. afzelli (por ejemplo, OspA, OspC, DbpA, DbpB), B. andersonii (por ejemplo, OspA, OspC, DbpA, DbpB), B. hermsii; Ehrlichia spp., incluyendo E. equi y el agente de la Erliquiosis Granulocítica Humana; Rickettsia spp, incluyendo R. rickettsii; Chlamydia spp., incluyendo C. trachomatis (por ejemplo, MOMP, proteínas de enlace a la heparina), C. pneumoniae (por ejemplo, MOMP, proteínas de enlace a la heparina), C. psittaci; Leptospira spp., incluyendo L. interrogans; Treponema spp., incluyendo 7. pallidum (por ejemplo, las proteínas de membrana rara exterior), 7. denticola, 7. hyodysenteriae; o derivados de parásitos, tales como Plasmodium spp., incluyendo P. falciparum; Toxoplasma spp., incluyendo 7. gondii (por ejemplo, SAG2, SAG3, Tg34); Entamoeba spp., incluyendo F. histolytica; Babesia spp., ¡ncluyendo B. microti; Tripanosoma spp., ¡ncluyendo 7. cruzi; Giardia spp., incluyendo G. lamblia; Leshmania spp., incluyendo L. major; Pneumocytis spp., ¡ncluyendo P. carinii; Trichomonas spp., ¡ncluyendo 7. vaginalis; Schisostoma spp., incluyendo S. mansoni, o derivado de la levadura tal como Candida spp., incluyendo C. albicans; Cryptococcus spp., incluyendo C. neoformans. Otros antígenos específicos para el M. tuberculosis son por ejemplo, Tb Ra12, Tb H9, Tb Ra35, Tb38-1, Erd 14, DPV, MTI, MSL, mTTC2 y hTCC1 (Documento WO 99/51748). Las proteínas para el M. tuberculosis también incluyen proteínas de fusión y variantes de las mismas en donde por lo menos dos o tres polipéptidos de M. tuberculosis son fusionadas en una proteína más grande. Las fusiones pueden incluir Ra12-TbH9-Ra35, Erd14-DPV-MTI, DPV-MTI-MSL, Erd14-DPV-MTI-MSL-mTTC2, Erd14-DPV-MTI-MSL, DPV-MTI-MSL-mTCC2, TbH9-DPV-MTI (documento WO 99/51748). La mayor parte de los antígenos para la Chlamydia incluyen, por ejemplo, una Proteína de Alto Peso Molecular (HWMP) (Documento WO 99/17741), ORF3 (Patente Europea 366412), y las proteínas de membrana putativa (Pmps). Otros antígenos de la Chlamydia de la formulación de vacuna pueden ser seleccionados del grupo descrito en el documento WO 99/28475. Los antígenos bacterianos pueden ser derivados de Streptococcus spp., ¡ncluyendo S. pneumoniae (por ejemplo, polisacáridos capsulares y conjugados del mismo, PsaA, PspA, estreptolisina, proteínas de enlace de colina), y el antígeno de proteína Pneumolysin (Biochem Biophys Acta, 1989, 67, página 1007; Rubins et al., Microbial Pathogenesis, 25. páginas 337 a 342), y los derivados mutahtes destoxificados de los mismos (Documentos WO 90/06951; WO 99/03884). Otros antígenos bacterianos pueden ser derivados de Haemophilus spp., ¡ncluyendo el H. influenzae del tipo B (por ejemplo, PRP y conjugados del mismo), H. influenzae no tipificable, por ejemplo, OMP26, adhesinas de alto peso molecular, P5, P6, proteína D y lipoproteína D, y fimbrina y péptidos derivados de fimbrina (Patente Norteamericana 5,843,464), y variantes de copias múltiples y proteínas de fusión de los mismos. Los derivados del antígeno de Superficie de la Hepatitis B son bien conocidos en la técnica e incluyen, entre otros, aquellos antígenos S PreS1, PreS2, establecidos que se describen en la Solicitudes de Patente Europeas EP-A-414 374; EP-A-0304 578 y EP 198-474. En una modalidad, el antígeno HBV es una polimerasa HBV (Ji Hoon Jeong et al, 1996, BBRC 223, páginas 264-271; Lee H.J. et al, Biotechnol. Lett. 15, páginas 821 a 826). Loa antígenos derivados del VIH también están contemplados, tales como el antígeno gp120 del VIH-1, especialmente cuando es expresado en las células CHO. La composición inmunogénica de la presente invención puede comprender un antígeno derivado del Virus de Papiloma Humano (HPV 6a, 6b, 11, 16, 18, 31, 33, 35, 39, 45, 51, 52, 56, 58, 59 y 68), en particular, aquellos serotipos HPV considerados como responsables de las verrugas genitales (HPV 6 ó HPV 11 y otros), y el virus HPV responsable del cáncer cervical (HPV16, HPV18 y otros). Los antígenos de HPV adecuados son E1, E2, E4, E5, E6, E7, L1 y L2. Los ejemplos de las formas profilácticas o terapéuticas de las verrugas genitales, comprenden las fusiones de partículas L1 o capsómeros, y las proteínas de fusión comprenden uno o más antígenos seleccionados del HPV 6 y HPV 11, las proteínas E6, E7, L1 y L2. Los ejemplos de las formas de proteína de fusión son: L2E7 como se describen en el Documento WO 96/26277, y la proteína D(1/3)-E7 descrita en el Documento WO 99/10375. Una infección cervical o cáncer por HPV, en la vacuna de profiláctica o terapéutica, la composición puede comprender los antígenos HPV 16 ó 18. Por ejemplo, los monómeros del antígeno L1 ó L2, o los antígenos L1 ó L2 presentados juntos como un virus similar a partículas (VLP), o la proteína L1 sola presentada sola en una estructura VLP o capsómero. Dichos antígenos, partículas similares a los virus y capsómeros, son conocidos per se. Ver por ejemplo, los documentos WO94/00152, WO94/20137, WO94/05792 y WO93/02184. Las proteínas tempranas adicionales pueden ser incluidas solas o como proteínas de fusión, tales como por ejemplo, las proteínas E7, E2 ó E5; las modalidades de estas proteínas incluyen las proteínas de fusión L1E7 que comprenden el VLP (documento WO96/11272). Los antígenos de HPV 16 pueden comprender las proteínas tempranas E6 ó E7 en fusión con un portador de proteína D para formar las fusiones de Proteína D - E6 ó E7 del HPV 16 o combinaciones de las mismas; o combinaciones de E6 ó E7 con L2 (documento WO96/26277). Alternativamente, las proteínas tempranas de HPV 16 ó 18 E6 y E7, pueden ser presentadas en una sola molécula, por ejemplo, la Proteína de fusión D-E6/E7. Otras fusiones contienen opcionalmente cualquiera o ambas de las proteínas E6 y E7 del HPV 18, por ejemplo, en la forma de una Proteína D - E6, o Proteína de fusión D - E7 o proteína de fusión D E6/E7. Las fusiones pueden comprender antígenos de otras cepas de HPV, por ejemplo, de las cepas HPV 31 ó 33. Los antígenos derivados de parásitos que ocasionan la Malaria también están contemplados. Por ejemplo, los antígenos de Plasmodia falciparum incluyen RTS,S y TRAP. La RTS es una proteína híbrida que comprende substancialmente toda la porción de la terminal C de la proteína de circunsporozoito (CS) de P. falciparum enlazada por cuatro aminoácidos de la porción preS2 del antígeno de superficie de la Hepatitis B al antígeno de superficie (S) del virus de hepatitis B. Su estructura completa se describe en el documento WO93/10152. Cuando es expresado en levadura el RTS es producido como una partícula de lipoproteína y cuando es co-expresada con el antígeno S del HBV produce una partícula mezclada conocida como RTS.S. Los antígenos TRAP se describen en el documento WO90/01496. Una modalidad de la presente invención es una fusión en donde la preparación antigénica comprende una combinación de los antígenos RTS,S y TRAP. Otros antígenos de plasmodia que son probablemente candidatos para ser componentes de las proteínas de fusión son P. faciparum MSP1, AMA1, MSP3, EBA, GLURP, RAP1, RAP2, Sequestrina, PfEMPI, Pf332, LSA1, LSA3, STARP, SALSA, PfEXPI, Pfs25, Pfs28, PFS27/25, Pfs16, Pfs48/45, Pfs230 y sus análogos en el Plasmodium spp. Como se usa en la presente descripción, el término "composición inmunogénica" es usado en el sentido más amplio para que signifique una composición que, al momento de la administración a un paciente, afecte de manera positiva la respuesta inmune de dicho paciente. Una composición inmunogénica proporciona al paciente una respuesta inmune sistémica o local mejorada, ya sea respuestas inmunes celulares tales como CTL o respuestas inmunes humorales tales como la promoción de anticuerpos. En particular, una composición inmunogénica de acuerdo con la presente invención se puede referir a una formulación que comprende una cantidad efectiva de una proteína/polipéptido del antígeno, en particular un antígeno asociado con el tumor, o un derivado inmunogénico derivado del mismo, o particularmente fragmentos del mismo, o los polinucleótidos de codificación y un vehículo farmacéuticamente aceptable. Por una cantidad segura y efectiva se entiende una dosis de proteína, de ser necesario en asociación con un adyuvante, cuando es administrada en un humano, produce una respuesta inmune que se puede detectar, tal como una respuesta humoral (anticuerpos), o una respuesta celular, o tiene la capacidad para inmuno-regular la respuesta inmune, sin los efectos laterales adversos importantes de las vacunas típicas. Dicha cantidad variará dependiendo de cual inmunogén específico es empleado y como es presentado. Generalmente, se espera que cada dosis comprenda de 1 a 5000 µg de proteína, por ejemplo, de 1 a 1000 µg de proteína, por ejemplo, de 1 a 500 µg, por ejemplo de 1 a 100 µg, por ejemplo de 1 a 50 µg. Una cantidad óptima para una vacuna particular puede ser asegurada mediante estudios estándar que comprenden la observación de las respuestas inmunes apropiadas en los sujetos. Después de una vacuna inicial, los sujetos pueden recibir una o varias inmunizaciones de refuerzo separadas de manera adecuada. La preparación de la vacuna se describe generalmente en Diseño de Vacunas ("La subunidad y el método adyuvante"), ("The subunit and adjuvant approach") (editores Powell M.F. & Newman M.J.). (1995) Plenum Press New York). La encapsulación dentro de liposomas se describe por Fullerton, en la Patente Norteamericana No.4,235,877. Los polipéptidos del antígeno inmunogénico se refieren a polipéptidos los cuales reaccionan de manera detectable dentro de un inmunoensayo (tal con un ensayo de ELISA o de estímulo de la célula T) con antisuero y/o células T de un paciente que expresa dicho polipéptido. La selección de la actividad inmunogénica se puede realizar utilizando técnicas bien conocidas para un experto en el arte. Por ejemplo, dichas selecciones se pueden realizar utilizando métodos tales como los que se describen en la publicación de Harlow y Lañe, en "Anticuerpos: Un Manual de Laboratorio" (Antibodies: A Laboratory Manual), Cold Spring Harbor Laboratory, 1988. En un ejemplo ilustrativo, el polipéptido puede ser inmovilizado en un soporte sólido y ponerse en contacto con el suero del paciente para permitir el enlace de los anticuerpos con el suero al polipéptido inmovilizado. El suero no enlazado entonces puede ser eliminado y los anticuerpos enlazados detectados utilizando, por ejemplo, la Proteína A marcada 125l. Los antígenos de polipéptido de la presente invención son proporcionados, por ejemplo, por lo menos 80% puros o por ejemplo, 90% puros como son visualizados por el SDS PAGE. Los antígenos polipéptidos pueden aparecer en una sola banda por medio del SDS PAGE. Los derivados ¡nmunogénicos de los antígenos, tales como los fragmentos ¡nmunogénicos o porciones de los mismos, en particular de antígenos asociados con el tumor o específicos del tumor, también están comprendidos por la presente ¡nvención. El término un "fragmento ¡nmunogénico" como se usa en la presente descripción, es un fragmento que por sí mismo es inmunológicamente reactivo (es decir, que se enlaza específicamente) con las células B y/o los receptores del antígeno de la superficie de la célula T que reconocen el polipéptido. Las porciones inmunogénicas generalmente pueden ser identificadas utilizando técnicas bien conocidas tales como las que se resumen en el libro de Paul, "Inmunología Fundamental" (Fundamental Inmunology), 3a. ed., páginas 243 a 247 (Raven Press, 1993) y las referencias citadas en el mismo. Dichas técnicas incluyen la selección de polipéptidos por su capacidad para reaccionar con anticuerpos específicos del antígeno, antisuero y/o las líneas o clones celulares T. Como se usa en la presente descripción, el antisuero y los anticuerpos son "específicos del antígeno" si se enlazan específicamente a un antígeno (es decir, que reaccionan con la proteína en un inmunoensayo de ELISA u otro, y no reaccionan de manera detectable con proteínas no relacionadas). Dichos antisueros y anticuerpos pueden ser preparados como aquí se describe, y utilizando técnicas bien conocidas. En una modalidad, una porción inmunogénica de un polipéptido es una porción que reacciona con el antisuero y/o las células T en un nivel que no es substancialmente menor que la reactividad del polipéptido de longitud total (por ejemplo, en un ensayo de ELISA y/o de reactividad de la célula T). El nivel de la actividad inmunogénica de la porción ¡nmunogénica puede ser de por lo menos aproximadamente el 50% o por lo menos aproximadamente el 70% o mayor de aproximadamente el 90% de la inmunogenicidad del polipéptido de longitud total. En algunos casos, las porciones inmunogénicas pueden ser identificadas, de modo que tienen un nivel de actividad ¡nmunogénica mayor que la del polipéptido de longitud total correspondiente, por ejemplo, que tienen una actividad ¡nmunogénica mayor de aproximadamente 100% ó 150% o más. En ciertas otras modalidades, las porciones ¡nmunogénicas ilustrativas pueden incluir péptidos en los cuales la secuencia principal de la terminal N y/o el dominio transmembrana han sido eliminados. Otras porciones inmunogénicas ilustrativas contendrán una eliminación pequeña de la terminal C y/o N (por ejemplo, de aproximadamente 1 a 50 aminoácidos, por ejemplo, de aproximadamente 1 a 30 aminoácidos, por ejemplo de aproximadamente de 5 a 15 aminoácidos), en relación con la proteína madura. En otra modalidad, las composiciones inmunogénicas ilustrativas, tales como por ejemplo, las composiciones de vacuna de la presente invención, comprenden un polinucleótido que codifica uno o más de los polipéptidos como aquí se describieron anteriormente, de modo que el polipéptido es generado en el sitio. El polinucleótido puede ser administrado dentro de cualquiera de una variedad de sistemas de administración conocidos. Indudablemente, numerosas técnicas de administración de genes son bien conocidas en el arte, tales como aquellas descritas por Rolland, en Crit. Rev. Therap. Drug Carrier Systems 15: páginas 143 a 198, 1998, y las referencias citadas en la misma. Por supuesto, los sistemas de expresión apropiados del polinucleótido contendrán las secuencias reguladoras de ADN necesarias para la expresión en un paciente (tales como un promotor adecuado y una señal de terminación). Alternativamente, los sistemas de administración bacteriana pueden comprender la administración de una bacteria (tal como Bacillus-Calmette-Guerrin), que expresa una porción inmunogénica del polipéptido en su superficie celular o secreta dicho epítope. En una modalidad de la presente ¡nvención, un polinucleótido es administrado en la forma de un ADN "al natural", por ejemplo, como lo describe la publicación de Ulmer et al., en Science 259: páginas 1745 a 1749, 1993 y revisada por Cohén, en Science 259: páginas 1691 a 1692, 1993. La asimilación del ADN al natural puede ser aumentada recubriendo el ADN sobre cuentas biodegradables, las cuales son transportadas de manera eficiente dentro de las células.

En una modalidad, la composición es administrada de manera intradérmica. En particular, la composición es administrada por medio de técnicas de administración de pistola de genes (particularmente bombardeo de partículas) las cuales comprenden el recubrimiento del vector a una cuenta (por ejemplo, oro) el cual entonces es administrado bajo alta presión en la epidermis; tal como por ejemplo, lo describe Haynes et al., en J. Biotechnology 44: páginas 37 a 42 (1996). En un ejemplo ilustrativo, la aceleración de las partículas conducidas por gas puede ser lograda con aparatos tales como los que fabrican Powderject Pharmaceuticals PLC (Oxford, RV) y Powderject Vaccines Inc. (Madison, Wl), algunos ejemplos de las cuales se describen en las Patentes Norteamericanas Nos. 5,846,796; 6,010,478; 5,865,796; 5,584,807 y la Patente Europea No. 0500 799. El método ofrece un método de administración libre de agujas en donde una formulación de polvo seco de partículas microscópicas, tales como polinucleótidos, son acelerados a una alta velocidad dentro de un chorro de gas de helio generado por un aparato portátil, impulsando las partículas dentro de un tejido objetivo de interés, generalmente la piel. Las partículas pueden ser cuentas de oro de 0.4 a 4.0 µm, por ejemplo de 0.6 a 2.0 µm de diámetro y el conjugado de ADN recubierto sobre estas y luego encerrado en un cartucho o cassette colocándolo dentro de la "pistola de genes". En otra modalidad relacionada, otros aparatos y métodos que pueden ser útiles para la inyección de composiciones sin agujas operada por gas de la presente invención, incluyen la que se proporciona por Bioject, Inc. (Portland. OR), y algunos ejemplos de los cuales se describen en las Patentes Norteamericanas Nos. 4,790,824; 5,064,413; 5,312,335; 5,383,851; 5,399,163; 5,520,639 y 5,993,412. Por lo tanto, en algunas modalidades, los polinucleótidos que codifican los polipéptidos inmunogénicos aquí descritos son introducidos en células huésped de mamífero adecuadas para la expresión utilizando cualquiera de un número de sistemas basados en virus conocidos. En una modalidad ilustrativa, el retrovirus proporciona una plataforma conveniente y efectiva para el sistema de administración genética. Una secuencia de nucleótidos seleccionada que codifica un polipéptido de la presente invención puede ser insertada en un vector y empacada en partículas retrovirales que utilizan técnicas conocidas en el arte. El virus recombinante entonces puede ser aislado y administrado a un sujeto. Se han descrito un número de sistemas retrovírales ilustrativos (por ejemplo, en la Patente Norteamericana No. 5,219,740; en Miller y Rosman (1989) BioTechniques 7: páginas 980 a 990; Miller, A.D. (1990) Human Gene Therapy 1: páginas 5 a 14; Scarpa et al. (1991) Virology 180: páginas 849 a 852; Burns et al, (1993) Proc. Nati. Acad. Sci. EUA 90: páginas 8033 a 8037; y Boris-Lawrie y Temin (1993) Cur. Opin. Genet. Develop. 3: páginas 102 a 109. Además, también se han descrito un número de sistemas ilustrativos basados en el adenovirus. A diferencia del retrovirus el cual se integra en un genoma huésped, el adenovirus persiste fuera del cromosoma, por lo tanto, minimiza los riesgos asociados con la mutagénesis de inserción (Haj-Ahmad y Graham (1986) J. Virol. 57: páginas 267 a 274; Bett et al. (1993) J. Virol. 67: páginas 5911 a 5921; Mittereder et al. (1994) Human Gene Therapy 5: páginas 717 a 729; Seth et al. (1994) J. Virol. 68: páginas 933 a 940; Barr et al. (1994) Gene Therapy 1: páginas 51 a 58; Berkner, K. L. (1988) Bio Techniques 6: páginas 616 a 629; y Rich et al. (1993) Human Gene Therapy 4: páginas 461 a 476). Debido a que los humanos algunas veces son infectados por serotipos comunes del adenovirus humano, tales como el AdHud, una porción importante de la población tiene una respuesta de neutralización del anticuerpo al adenovirus, el cual es probable que efectúe la respuesta inmune a un antígeno heterológo en un sistema basado en una vacuna recombinante. Los vectores de adenovirus de primates no humanos, tales como el adenovirus 68 del chimpancé (AdC68, Fitzgerald et al. (2003) J. Immunof 170(3): páginas 1416 a 1422)) y puede ofrecer un sistema adenoviral alternativo sin la desventaja de la respuesta de la neutralización de anticuerpos previamente existentes. Varios sistemas de vector de virus asociados con el adeno (AAV) también han sido desarrollados para la administración de polinucleótidos. Los vectores AAV pueden ser construidos fácilmente utilizando técnicas bien conocidas en el arte. Ver por ejemplo, las Patentes Norteamericanas Nos. 5,173,414 y 5,139,941; las Publicaciones Internacionales Nos. WO 92/01070 y WO 93/03769; Lebkowski et al. (1988) Molec. Cell. Biol. 8: páginas 3988 a 3996; Vincent et al, (1990) Vaccines 90 (Cold Spring Harbor Laboratory Press); Cárter, B. J. (1992) Current Opinión in Biotechnology 3: páginas 533 a 539; Muzyczka. N. (1992) Current Topics in Microbiol. and Immunol. 158: páginas 97 a 129; Kotin. R. M. (1994) Human Gene Therapy 5: páginas 793 a 801; Shelling y Smith (1994) Gene Therapy 1: páginas 165 a 169; y Zhou et al. (1994) J. Exp. Med. 179: páginas 1867 a 1875. Los vectores virales adicionales útiles para la administración de moléculas de ácido nucleico que codifican polipéptidos de la presente invención mediante la transferencia genética incluyen aquellos derivados de una familia de virus de la viruela, tal como un virus de vacunas y un virus de viruela aviaria. A modo de ejemplo, los virus de vacunas recombinantes que expresan moléculas novedosas pueden ser construidos de la manera siguiente. El ADN que codifica un polipéptido es el primero insertado en un vector apropiado, de modo que está adyacente al promotor de la vacuna y las secuencias de flanqueo de ADN de la vacuna, de modo que la secuencia que codifica la cinasa de timidina (TK). Este vector entonces es utilizado para transfectar las células, las cuales son infectadas simultáneamente con las vacunas. La recombinación homologa sirve para insertar el promotor de vacuna más el gen que codifica un polipéptido de interés en el genoma viral. El recombinante TK.sup.(-) resultante puede ser seleccionado cultivando las células en la presencia de 5-bromodesoxiuridina y recolectando las placas virales resistentes a la misma. Los sistemas de infección/transfección basados en vacunas pueden ser utilizados convenientemente para proporcionar la expresión transitoria, o la co-expresión que se puede inducir de uno o más polipéptidos aquí descritos en las células huésped de un organismo. En este sistema particular, las células son infectadas primero in vitro con el recombinante del virus de vacuna que codifica la polimerasa de ARN T7 del bacteriófago. Esta polimerasa muestra una especificidad exquisita debido a que solamente transcribe plantillas que portan los promotores T7. Después de la infección, las células son transferidas con el polinucleótido o polinucleótidos de interés, e impulsadas por un promotor T7. La polimerasa expresada en el citoplasma del recombinante del virus de vacuna trascribe el ADN transfectado en ARN el cual entonces es traducido en polipéptido por la maquinaria de traducción del huésped. El método proporciona la producción de alto nivel, transitoria, citoplásmica de grandes cantidades de ARN en sus productos de traducción. Ver por ejemplo, las publicaciones de Elroy-Stein y Moss, en Proc. Nati. Acad. Sci. EUA (1990) 87: páginas 6743 a 6747; Fuerst et al. en Proc. Nati. Acad. Sci. EUA (1986) 83: páginas 8122 a 8126. Alternativamente, el virus de pox aviaria, tal como los virus de viruela aviaria en aves o canarios, también pueden ser utilizados para administrar las secuencias de codificación de interés. El virus de viruela aviaria recombinante que expresa los inmunogenes de patógenos mamíferos es conocido que confieren inmunidad protectora cuando son administrados a especies que no son aviarias. El uso del vector Avipox es particularmente deseable en humanos y otras especies de mamíferos, ya que los miembros de los genes Avipox solamente pueden duplicarse de manera productiva en especies aviarias susceptibles y por lo tanto, no son infecciosas en las células de mamíferos. Los métodos para producir los virus de viruela aviaria recombinantes son bien conocidos en la técnica y emplean la recombinación genética, tal y como se describió anteriormente con respecto a la producción de los virus de vacuna. Ver por ejemplo, los Documentos WO 91/12882; WO 89/03429; y WO 92/03545. Cualquiera de un número de vectores del alfavirus también pueden ser utilizados para la administración de composiciones de polinucleótidos de la presente invención, tales como los vectores que se describen en las Patentes Norteamericanas Nos. 5,843,723; 6,015,686; 6,008,035 y 6,015,694. También pueden ser utilizados ciertos vectores basados en la Encefalitis Equina Venezolana (VEE), los ejemplos ilustrativos de los cuales se pueden encontrar en las Patentes Norteamericanas Nos. 5,505,947 y 5,643,576. Los vectores que comprometen las secuencias de nucleótidos que codifican los péptidos antigénicos son administrados en una cantidad tal que podrá ser efectiva profiláctica y terapéuticamente. La cantidad que va a ser administrada, generalmente se encuentra en un rango de un pico-gramo a 16 miligramos, por ejemplo, de 1 pico-gramo a 10 microgramos para la administración portada por partículas, por ejemplo, de 10 microgramos a 16 miligramos para otras rutas de nucleótidos por dosis. La cantidad exacta puede variar considerablemente dependiendo del peso del paciente que está siendo inmunizado y la ruta de administración. Las técnicas adecuadas para la introducción de polinucleótidos o vectores al natural en un paciente también incluyen la aplicación tópica con un vehículo apropiado. El ácido nucleico puede ser administrado tópicamente a la piel, o a superficies de la mucosa, por ejemplo, mediante la administración ¡ntranasal, oral, intravaginal o intra-rectal. El polinucleótido natural o vector puede estar presente junto con un excipiente farmacéuticamente aceptable, tal como una solución salina regulada por fosfato (PBS). La asimilación del ADN puede ser facilitada además mediante el uso de agentes de facilitación, tales como bupivacaina, ya sea por separado o incluida en la formulación del ADN. Otros métodos de administración del ácido nucleico directamente a un recipiente incluyen las técnicas de ultrasonido, estimulo eléctrico, electroporación y micro-sembrado, los cuales se describen en la Patente Norteamericana No. 5,697,901. La asimilación de las construcciones de ácido nucleico pueden ser mejoradas mediante técnicas de transfección conocidas, por ejemplo, aquellas que ¡ncluyen el uso de agentes de transfección. Los ejemplos de estos agentes incluyen agentes catiónicos, por ejemplo, fosfato de calcio y DEAE-Dextrano y lipofectores, por ejemplo, lipofectamo y transfectamo. La dosificación de ácido nucleico que va a ser administrada puede ser alterada. Todavía en otra modalidad, las composiciones inmunogénicas de la presente invención comprenden un anticuerpo, o un suero, o un dominio de un anticuerpo, tal como Fab y el fragmento F(ab')2. Por ejemplo, el anticuerpo es un anticuerpo monoclonal o fragmento del mismo. La dosificación efectiva es generalmente de 100 µg a 500 mg, por ejemplo, de 1 mg a 50 mg por kilo del peso corporal del paciente. Por consiguiente, los métodos de la presente invención ¡ncluyen la inmunoterapia pasiva o la inmunoprofilaxis pasiva. Las composiciones inmunogénicas y el polipéptido IL-18 de la presente invención pueden ser administrados por un número de rutas, tales como intramuscular, subcutánea, intraperitoneal o intravenosa. El polipéptido IL-18 o el fragmento bioactivo del mismo de acuerdo con la presente invención es uno que induce una respuesta inmune predominantemente del tipo Th1. Los niveles altos de citosinas del tipo Th1 (por ejemplo, IFN-?, TNFa, IL-2, IL-12, IL-18, etc) tienden a favorecer la inducción de las respuestas inmunes portadas por la célula a un antígeno administrado. En contraste, los niveles altos de citosinas del tipo Th2 (por ejemplo, I L-4, IL-5, IL-6 e IL-10) tienden a favorecer la inducción de respuestas inmunes humorales. Para una revisión de las familias de citosinas, consultar la publicación de Mosmann y Coffman, Ann. Rev. Immunol. 7: páginas 145 a 173, 1989. Los términos "polipéptido IL-18" o "IL18" significan un polipéptido I L-18 tal y como se describe en la Patentes Europeas EP 0692536, EP 0712931, EP 0767178 y el Documento WO97/2441. Los derivados o variantes de los polipéptidos IL-18 incluyen polipéptidos aislados que comprenden una secuencia de aminoácidos, la cual tiene por lo menos el 70% de identidad. Por ejemplo, por lo menos el 80% de identidad, por ejemplo, por lo menos el 90% de identidad, por ejemplo, por lo menos el 95% de identidad, por ejemplo, por lo menos del 97% al 99% de identidad con la SEQ ID NO:6 (IL-18 humano) o la SEQ ID NO:7 (IL-18 múrida) como se ilustra en la figura 1, sobre la longitud total de las SEQ ID NO:6 y SEQ ID NO:7, respectivamente. Dichos polipéptidos incluyen los que comprenden el aminoácido de las secuencias SEQ ID NO:6 y SEQ ID NO:7, respectivamente. El polipéptido I L-18 puede tener la secuencia de aminoácidos que se establece en la SEQ ID NO:6 y SEQ ID NO:7. Pueden ser usados los fragmentos IL-18 también están contemplados, es decir un fragmento de I L-18 el cual tiene la capacidad de exhibir una actividad biológica (antigénica o ¡nmunogénica) del IL-18, tal como la inducción de IFN-?. Los fragmentos bioactivos del IL-18 y/o los fragmentos inmunogénicos de I L-18. El polipéptido I L-18 puede estar en la forma de una proteína madura o puede ser una parte de una proteína más grande, tal como una proteína de fusión. También están contemplados los variantes de IL-18, es decir polipéptidos que varían mediante sustituciones conservadoras de aminoácidos, por medio de las cuales un residuo es substituido por otro con características similares. Dichas substituciones típicas se encuentran entre Ala, Val, Leu y lie; entre Ser y Tr; entre residuos ácidos de Asp y Glu; entre Asn y Gln; entre residuos básicos Lis y Arg; o residuos aromáticos Fe y Tir. Las variantes pueden ser utilizadas en las cuales varios de 5 a 10, de 1 a 5, de 1 a 3, de 1 a 2 ó 1 aminoácido son substituidos, eliminados o agregados en cualquier combinación. Los fragmentos bioactivos de I L-18 también están contemplados. El término "fragmento bioactivo" significa un fragmento de IL-18 el cual tiene retenida substancialmente la misma bioactividad que el 1L-18 de longitud completa. La palabra bioactividad significa cualquiera de las siguientes propiedades: aumento de la actividad de la célula exterminadora natural (NK) y respuestas de la célula Th1 (activación de células NK, NKT, inducción de la proliferación de células T activada), actividad antiangiogénica, aumento de la expresión del ligando Fas en las células NK, NKT y T activadas, la producción aumentada de IFNg, GM-CSF y otras citosinas, por ejemplo del tipo Th1, la capacidad para estimular la inmunidad innata y las respuestas portadas por ambas Th1 y Th2. En particular, un fragmento bioactivo de I L-18 es un fragmento el cual ha retenido la capacidad para aumentar la producción de IFNg medida, in vitro, en el sistema de ensayo KG-1. Las líneas de células mielomonocíticas humanas (KG- 1), que expresa el receptor I L-18 humano, responderá al tratamiento con I L- 8 aumentando la producción (secreción) de IFNg (medido mediante el ensayo de ELISA) y la activación de NfKB (Matsuko Taniguchi et al. J. Immunological Methods, 1998, 217, páginas 97 a 102). Los polipéptidos IL-18 de acuerdo con la presente invención pueden ser preparados de cualquier manera adecuada. El aislamiento incluye polipéptidos que ocurren de manera natural, de manera recombinante o sintéticamente, produciendo dichos polipéptidos, etc. Dichos medios de preparación son bien entendidos en la técnica. La composición inmunogénica de acuerdo con la presente invención puede incluir de manera provechosa un excipiente o vehículo farmacéuticamente aceptable. Una molécula portadora puede comprender varias formas, incluyendo un organismo portador tal como un vector bacteriano vivo o una cepa del portador bacteriano, agua, solución salina o un químico inmunoestimulante. Un portador puede ser agua, solución salina u otras soluciones fisiológicas reguladas. Una molécula portadora también puede incluir una partícula de polímero poroso, tal como microcuentas o una nanopartícula, y una partícula de sal metálica, tal como hidróxido de aluminio, fosfato de aluminio, fosfato de calcio o fosfato de magnesio, fosfato de hierro, carbonato de calcio, carbonato de magnesio, sulfato de calcio, hidróxido de magnesio, o sales dobles como fosfato de hierro-amonio, fosfato de potasio-hierro, fosfato de calcio-hierro, carbonato de calcio-magnesio, o una mezcla de estas sales. Al momento de la administración de una preparación combinada como aquí se proporciona, un paciente soportará una respuesta inmune que incluye las respuestas del tipo Th1 y Th2. Dentro de las modalidades de la presente invención, la composición inmunogénica puede comprender adicionalmente otro adyuvante, por ejemplo, uno que induce una respuesta inmune predominantemente del tipo Th1. Los adyuvantes de inducción de TH-1 pueden ser seleccionados del tipo de adyuvante que comprenden, adyuvantes derivados del lipopolisacárido tales como lipopolisacáridos enterobacterianos (LPS), 3D-MPL, QS21, una mezcla de QS21 y colesterol, y un oligonucleótido CpG una mezcla de dos o más de dichos adyuvantes. Ciertos adyuvantes para promover la respuesta predominantemente del tipo Th-1 pueden incluir, por ejemplo, una combinación de lípido A monofosforilo, por ejemplo, lípido A 3-de-O-acilado fosforilo, junto con una sal de aluminio. Los adyuvantes MPL® están disponibles en Corixa Corporation (Seattle, WA; ver por ejemplo, las Patentes Norteamericanas Nos. 4,436,727; 4,877,611; 4,866,034 y 4,912,094). En una modalidad, la composición inmunogénica de acuerdo con la presente invención puede comprender adicionalmente un adyuvante de saponina, por ejemplo, una fracción no tóxica de Quil A, por ejemplo, QS-17 ó QS-21, por ejemplo QS-21. Las saponinas son enseñadas en la publicación de: Lacaille-Dubois, M y Wagner H. (1996. Una revisión de actividades biológicas y farmacológicas de las saponinas. Phytomedicine vol 2 páginas 363 a 386). Las saponinas son glucósidos de esteroide o triterpeno ampliamente distribuidos en los reinos vegetal y de animales marinos. Las saponinas son observadas para la formación de soluciones coloidales en agua, las cuales hacen espuma al momento de agitarlas, y para precipitar el colesterol. Cuando las saponinas están cerca de las membranas celulares ellas crean estructuras similares a poros en las membranas, las cuales ocasionan que la membrana reviente. La hemolisis de los eritrocitos es un ejemplo de este fenómeno, el cual es una propiedad de ciertas, pero no todas las saponinas. Es sabido que son conocidas las saponinas como adyuvantes en vacunas para la administración sistémica. El adyuvante y la actividad hemolítica de las saponinas individuales han sido estudiados extensamente en la técnica (Lacaille-Dubois y Wagner, mencionadas anteriormente). Por ejemplo, el Quil A (derivado de la mordida de la Quillajá Saponaria Molina del árbol Sud Americano), y fracciones de la misma se describen en la Patente Norteamericana No. 5,057,540 y en el libro "Saponinas como adyuvantes de vacunas" ("Saponins as vaccine adjuvants") de Kensil, C. R., Crit Rev Ther Drug Carrier Syst., 1996, 12 (1-2): páginas 1 a 55; y la Patente Europea EP 0 362 279 B1. Las estructuras de particulado, los complejos denominados de estímulo inmune (ISCOMS), que comprende Quil A o fracciones del mismo, han sido utilizados en la fabricación de vacunas (Morein, B., Patente Europea 0 109 942 B1). Estas estructuras se ha reportado que tienen una actividad adyuvante (Patente Europea 0 109 942 B1; Documento WO 96/11711). Las saponinas hemolíticas QS21 y QS17 (fracciones purificadas por HPLC de Quil A) han sido descritas como adyuvantes sistémicos potentes y los métodos para su producción se describen en la Patente Norteamericana No. 5,057,540 y la Patente Europea EP 0 362 279 B1. También se describe en estas referencias el uso de la QS7 (una fracción de Quil-A) la cual actúa como un adyuvante potente para vacunas sistémicas. El uso del QS21 se describe además en la publicación de Kensil et al. (1991. en J. Immunology vol 146, páginas 431 a 437). Las combinaciones de QS21 y polisorbato o ciclodextrina también son conocidas (Documento WO 99/10008). Los sistemas adyuvantes de particulados que comprenden fracciones de QuilA, tales como QS21 y QS7 se describen en los Documentos WO 96/33739 y WO 96/11711. Otras saponinas que han sido utilizadas en los estudios de vacunas sistémicas incluyen aquellas derivadas de otras especies de planta tales como Gypsophila y Saponaria (Bomford et al., Vaccine, 10(9): páginas 572 a 577, 1992). También es sabido que las saponinas han sido utilizadas en estudios de vacunas aplicadas en la mucosa, las cuales han encontrado un éxito variable en la inducción de respuestas inmunes. La saponina Quil-A ha mostrado anteriormente que no tiene efecto en la inducción de una respuesta inmune cuando el antígeno es administrado ¡ntranasalmente (Gizurarson et al. 1994. Vaccine Research 3, páginas 23 a 29). Mientras que otros autores han usado este adyuvante con éxito (Maharaj et al., Can. J. Microbiol, 1986, 32(5): páginas 414 a 420; Chavali y Campbell, Immunobiology, 174(3): páginas 347 a 359). Las ISCOMs comprenden saponina Quil A, y han sido utilizadas en las formulaciones intragástricas e ¡ntranasales de vacunas y exhibieron una actividad adyuvante (Mcl Mowat et al., 1991, Immunology, 72, páginas 317 a 322; Mcl Mowat y Donachie, Immunology Today, 12, páginas 383 a 385). El QS21, la fracción no tóxica de la Quil A, también ha sido descrita en un adyuvante oral o intranasal (Sumino et al., J. Virol., 1998, 72(6): páginas 4931 a 4939; y el Documento WO98/56415). Una formulación mejorada puede comprender la combinación de un oligonucleótido que contiene CpG con un derivado de saponina, por ejemplo, la combinación de CpG y QS21 como se describe en el Documento WO00/09159 y en el Documento WO00/62800. Dicha formulación puede comprender adicionalmente una emulsión de aceite en agua y tocoferol. Por consiguiente, todavía una modalidad adicional de la composición inmunogénica de la presente ¡nvención comprende una combinación de un oligonucleótido CpG y una saponina, por ejemplo, QS21, formulada opcionalmente en una emulsión de aceite en agua. La formulación puede comprender de manera opcional adicionalmente un adyuvante 3D-MPL®. La QS-21 puede ser proporcionada en su composición menos reactogénica en donde es extinguida con colesterol, tal y como se describe en el Documento WO 96/33739. En otra modalidad, la composición inmunogénica de la presente invención comprende adicionalmente un lipopolisacárido enterobacteriano derivado como adyuvante, por ejemplo, el lípido A monofosforilo, por ejemplo, 3-de-O-lípido momofosforilo-acilado A. Se ha sabido desde mucho tiempo atrás que el lipopolisacárido enterobacteriano (LPS) es un estimulante potente del sistema inmune, aunque su uso en los adyuvantes ha sido detenido por sus efectos tóxicos. Un derivado no tóxico del LPS, el lípido A monofosforilo (MPL), producido mediante la remoción del grupo de carbohidratos del núcleo y el fosfato de glucosamina del extremo de reducción, ha sido descrito por Ribi et al en (1986, Immunology and Immunopharmacology of bacterial endotoxins, Plenum Publ. Corp., Ny, páginas 407 a 419), y tiene la siguiente estructura: Una versión destoxificada adicional del MPL es el resultado de la remoción de la cadena acilo de la posición 3 de la estructura del disacárido y es denominado lípido A 3-O-monofosforilo-Desacilado (3D-MPL). Este puede ser purificado y preparado mediante los métodos enseñados en la Patente Británica GB 2122204B, cuya referencia también describe la preparación del lípido A difosforilo y variantes 3-O-desaciladas de los mismos. Una forma del 3D-MPL es en la forma de una emulsión que tiene un tamaño pequeño de partícula menor de 0.2µm de diámetro y su método de manufactura se describe en el Documento WO94/21292. Han sido descritas formulaciones acuosas que comprenden el lípido A monofosforilo y un tensioactivo en el Documento WO98/43670A2. Los adyuvantes derivados del lipipolisacárido bacteriano que van a ser formulados en la combinación adyuvante de la presente invención pueden ser purificados y procesados de fuentes bacterianas, o alternativamente, pueden ser sintéticos. Por ejemplo, un lípido A monofosforilo purificado se describe en la publicación de Ribi et al 1986 (mencionado anteriormente) y el lípido A monofosforilo o difosforilo 3-O-Desacilado derivado de Salmonella sp. se describe en la Patente Británica GB2220211 y en la Patente Norteamericana No. 4,912,094. Otros lipopolisacáridos sintéticos y purificados han sido descritos en el Documento (WO98/01139; la Patente Norteamericana 6,005,099 y la Patente Europea EP0729 473 B1; Hilgers et al., 1986, Int. Arch. Allergy. Immunol., 79(4): páginas 392 a 396; Hilgers et al., 1987, Immunology, 60(1): páginas 141 a 146 y la Patente Europea EP0549074B1 ). Los adyuvantes de lipopolisacáridos bacterianos que pueden ser utilizados son 3D-MPL y los disacáridos de glucosamina ß(1-6) descritos en la Patente Norteamericana No.6, 005, 099 y la Patente Europea No. EP0729473B1.

Por consiguiente, los derivados LPS que pueden ser utilizados en la presente ¡nvención son aquellos inmuoestimulantes que son similares en la estructura a la del LPS ó MPL ó 3D-MPL. En otro aspecto de la presente invención, los derivados LPS pueden ser un monosacárido acilado, el cual es una subporción de la estructura anterior del MPL. Un adyuvante disacárido es un lípido A purificado ó sintético de la siguiente fórmula.

En donde R2 puede ser H ó PO3H2; R3 puede ser una cadena acilada o ß-hidroximiristoilo o un residuo 3-aciloiacilo que tienen la fórmula: O donde R« - -C-<CHj)jr-CHj. y en donde X e Y tienen un valor de 0 hasta aproximadamente 20. Las combinaciones de los adyuvantes 3D-MPL y saponina derivados de la mordida de la Quillaja Saponaria molina han sido descritos en la Patente Europea EP0761231B. El Documento WO95/17210 describe un sistema adyuvante de emulsión basado en escualeno, a-tocoferol y monooleato de desorbitan polioxietileno (TWEEN80), formulado con el inmunoestimulante QS21, opcionalmente con 3D-MPL. Por consiguiente, en otra modalidad, la composición inmunogénica de acuerdo con la presente invención comprende (1) un antígeno o fragmento inmunogénico del mismo, (2) una combinación de adyuvante CpG con uno o más de los siguientes adyuvantes seleccionados de la lista que comprende, por ejemplo: un adyuvante de saponina, por ejemplo, QS21, en su forma extinguida con colesterol, 3D-MPL y una emulsión de aceite en agua. En una modalidad adicional, la composición inmunogénica de acuerdo con la presente invención incluye la combinación de un lípido A monofosforilo para el adyuvante CpG y puede incluir ambas, una combinación de un lípido A monofosforilo y de los adyuvantes de saponina, tales como la combinación del adyuvante 3D-MPL® con QS21 como se describe en el Documento WO94/00153 o una composición menos reactogénica en donde el QS21 es extinguido con colesterol, como se describe en el Documento WO96/33739. Otras formulaciones pueden comprender una emulsión de aceite en agua y tocoferol además de QS21. Otra formulación la cual puede ser agregada al adyuvante CpG es una formulación que emplea una combinación de QS21, adyuvante 3D-MPL® y tocoferol en una emulsión de aceite en agua como se describe en le Documento WO95/17210. Por consiguiente, la composición inmunogénica de acuerdo con la presente invención comprende un antígeno, por ejemplo, un antígeno asociado con el tumor, un adyuvante CpG, un adyuvante de saponina, por ejemplo QS-21, opcionalmente junto con el adyuvante 3D-MPL®, que comprende opcionalmente una emulsión de aceite en agua y tocoferol, además del QS-21. Por ejemplo, el QS-21 es extinguido con colesterol. Alternativamente, el adyuvante de saponina cuando está presente dentro de la composición inmunogénica de acuerdo con la presente invención, puede ser combinado con vehículos para vacuna compuestos de quitosan y otros polímeros policatiónicos, poliláctidos y partículas de poliláctido co-glicólido, una matriz de polímero basada en poli-N-acetil glucosamina, partículas compuestas de polisacáridos o polisacáridos químicamente modificados, liposomas y partículas basadas en lípidos, partículas compuestas de monoésteres glicerilo, etc. Las saponinas también pueden ser formuladas en la presencia de colesterol para formar estructuras de particulado, tales como liposomas o ISCOMs. Además, las saponinas pueden ser formuladas junto con un éter o éster polioxietileno, en cualquiera de una solución o suspensión no particulada, o en una estructura particulada, tal como un liposoma paucilamelar o ISCOM. Las saponinas también pueden ser formuladas con excipientes tales como CarbopolR para aumentar la viscosidad o pueden ser formuladas en una forma de polvo seco con un excipiente en polvo, tal como lactosa. Las vacunas y las composiciones ¡nmunogénicas pueden ser presentadas en contenedores de dosis unitarias o dosis múltiples, tales como ampolletas o frascos sellados. Dichos recipientes pueden ser sellados herméticamente para conservar la esterilidad de la formulación hasta el uso. En general, las formulaciones pueden ser almacenadas en la forma de suspensiones, soluciones o emulsiones en vehículos aceitosos o acuosos. Alternativamente, una vacuna o composición inmunogénica puede ser almacenada en una condición congelada seca, que requiere solamente la adición de un veh ículo líquido estéril inmediatamente antes de utilizarla. Cualq uiera de una variedad de veh ículos de administración pueden ser empleados dentro de las composiciones inmunogénicas y las vacunas para facilitar la producción de la respuesta in m u ne específica del antígeno, q ue tiene como objetivo las célu las del tu mor. De acuerdo con una modal idad de la presente invención , la com posición inmunogénica aquí descrita es administrada a un huésped por medio de células q ue presentan el antígeno (APCs), tales como cél ulas dend ríticas, macrófagos, cél ulas B , monocitos y otras células que pueden ser diseñadas para que sean células APCs eficientes. Las células APCs pueden , pero no necesariamente, deben ser genéticamente modificadas para au mentar la capacidad para presentar el antígeno, para mejorar la activación y/o manten imiento de la respuesta de la célula T para que tengan efectos antitumor de por sí y/o ser compatibles inm unológicamente con el receptor (por ejemplo , haploti po H LA acoplado). Las APCs generalmente pueden ser aisladas de cualquiera de una variedad de fl uidos biológicos y órganos, incluyendo tejidos del tumor y peritu morales y pueden ser autólogas alogeneicas, singeneicas y xenogeneicas.

Ciertas modalidades de la presente invención, pueden utilizar células dendríticas o progenitoras de las mismas como las células que presentan el antígeno. Las células dendríticas son APCs altamente potentes (Banchereau J. & Steinman R.M., Nature, 1998, 392: páginas 245 a 251) y han mostrado ser efectivas como un adyuvante fisiológico para promover la inmunidad profiláctica y terapéutica antitumor (ver por ejemplo, la publicación de Timmerman J.M. y Levy R., en Ann. en Rev. Med, 1999, 50: páginas 507 a 529). En general, las células dendríticas pueden ser identificadas basadas en su forma típica (de estrella en el sitio, con procesos citoplásmicos marcados (dendritos) visibles in vitro) y su capacidad para asimilar, procesar y presentar antígenos con alta eficiencia y su capacidad para activar la respuesta de la célula T natural. Las células dendríticas, por supuesto, pueden ser diseñadas para expresar receptores de superficies celulares específicos o ligandos que no son encontrados comúnmente en las células dendríticas in vivo o ex vivo, y dichas células dendríticas modificadas están contempladas por la presente invención. Como una alternativa para las células dendríticas, las células dendríticas cargadas con antígeno de vesículas secretadas (denominadas exosomas) pueden ser utilizadas dentro de una vacuna (ver la publicación de Zitvogel L. et al., en Nature Med., 1998, 4: páginas 594 a 600). Por consiguiente, se proporciona una formulación inmunoestimulante, por ejemplo, una vacuna que comprende una cantidad efectiva de células dendríticas o células que presentan el antígeno, modificadas mediante la carga in vitro con un polipéptido tal y como aquí se describe, o genéticamente modificadas in vitro para expresar un polipéptido como aquí se describe y un vehículo farmacéuticamente aceptable. Las células dendríticas y los progenitores pueden ser obtenidos de la sangre periférica, la médula ósea, células que infiltran el tumor, células que infiltran los tejidos peritumorales, nodos linfáticos, del bazo, la piel, sangre del cordón umbilical y cualquier otro tejido o fluido adecuado. Por ejemplo, las células dendríticas pueden ser diferenciadas y agregando ex vivo una combinación de citocinas, tales como las citocinas GM-CSF, I L-4, I L-13 y/o TNFa a cultivos de monocitos cultivados de la sangre periférica.

Alternativamente, las células CD34 positivas y cultivadas de la sangre periférica, la sangre del cordón umbilical o la médula ósea pueden ser diferenciadas en células dendríticas agregando al medio de cultivo combinaciones de ligando GMCSF, IL-3, TNFa, CD40 lipopolisacárido LPS, ligando flt3 y y/u otros compuestos que inducen la diferenciación, maduración y proliferación de las células dendríticas. Las células dendríticas son categorizadas convenientemente como células "inmaduras" y "maduras", que permiten un medio simple para discriminar entre dos fenotipos bien caracterizados. Sin embargo, esta nomenclatura no debe de ser interpretada como que excluye todas las etapas intermedias posibles de la diferenciación. Las células dendríticas inmaduras se caracterizan como APCs con una capacidad alta de asimilación del antígeno y procesamiento, lo cual se correlaciona con la alta expresión del receptor Fc? y el receptor de mañosa. El fenotipo maduro generalmente es caracterizado por una expresión más baja de estos marcadores, pero una expresión alta de moléculas de la superficie celular responsables de la activación de la célula T, tal como las moléculas MHC clase I y clase II, moléculas de adhesión (por ejemplo, CD54 y CD11) y moléculas coestimulantes (por ejemplo, CD40, CD80, CD86,y 4-1BB). Las APCs pueden generalmente ser transfectadas con un polinucleótido que codifica la proteína del tumor (por ejemplo, MAGE-3, Her2/neu o derivados del mismo) de modo que el polipéptido del tumor o una porción inmunogénica del mismo sea expresado en la superficie de la célula. Dicha transfección puede tener lugar ex vivo y una composición o vacuna que comprende dichas células transfectadas, entonces puede ser utilizada para propósitos terapéuticos como aquí se describen. Alternativamente, un vehículo de administración del gen que tiene como objetivo un antígeno dendrítico o de otra categoría que presenta células puede ser administrado a un paciente, dando como resultado la transfección que ocurre in vivo. La transfección in vivo y ex vivo de las células dendríticas, por ejemplo, puede ser realizada generalmente utilizando cualquiera de los métodos conocidos en la técnica, tales como los que se describen en el Documento WO 97/24447, o el método de pistola de genes descrito por Mahvi D.M. et al., en Immunology y Cell Biology, 1997, 75: páginas 456 a 460. La carga del antígeno de las células dendríticas puede ser lograda incubando células dendríticas o células progenitoras con el polipéptido del tumor, ADN (al natural o dentro de un vector plásmido) o ARN; o con una bacteria o virus recombinante que expresan el antígeno (por ejemplo, vaccinia, virus de viruela aviar, adenovirus o lentivirus). Otros sistemas de administración adecuados incluyen microesferas en donde el material antigénico es incorporado en o conjugado a polímeros/microesferas biodegradables, de modo que el material antigénico puede ser mezclado con un vehículo farmacéutico adecuado y utilizado como una vacuna. El termino "microesferas" generalmente se emplea para describir partículas coloidales las cuales son substancialmente esféricas y tienen un diámetro en un rango de 10 nm a 2mm. Las microesferas hechas de un amplio rango de polímeros naturales y sintéticos han encontrado uso en una variedad de aplicaciones biomédicas. El sistema de administración es especialmente provechoso para proteínas que tienen vidas promedio cortas in vivo que requieren tratamientos múltiples para proporcionar eficacia o que siendo inestables en los fluidos biológicos o no completamente absorbidos del aparato gastrointestinal, debido a sus pesos moleculares relativamente altos. Varios polímeros se han descrito como una matriz para la liberación de proteínas. Dichos polímeros adecuados incluyen gelatina, colágeno, alginatos, dextrano. Los sistemas de administración pueden incluir ácido poli(DL-ácido láctico) (PLA), poli(láctido-co-glicólido) (PLG), poli(ácido glicólico) (PGA), poli(e-caprolactona) (PCL) y copolímeros de ácido poli(DL-ácido lacticoglicólico) (PLGA). Otros sistemas pueden incluir hidrogels heterogéneos, tales como copolímeros de bloques múltiples de poli(éter éster), que contienen bloques repetitivos basados en poli-(etilénglicol) hidrofílico (PEG) y poli (butilén tereftalato) hidrofóbico (PBT) o poli(etilénglicol)-tereftalato/poli(butilén tereftalato) (PEGT/PBT) (Sohier et al. Eur. J. Pharm y Biopharm, 2003, 55, páginas 221 a 228). Los sistemas pueden proporcionar una liberación sostenida de 1 a 3 meses, tales como los sistemas PLGA, PLA Y PEGT/PBT. El régimen de tratamiento será variado de manera importante dependiendo del tamaño y las especies de pacientes involucrados, la cantidad de vacuna de ácido nucleico y/o la composición de la proteína administrada, la ruta de administración, la potencia y dosis de los compuestos adyuvantes utilizados y otros factores los cuales podrían ser apreciados por los expertos en la técnica médica. La presente invención se describirá adicionalmente haciendo referencia a los siguientes ejemplos no limitativos: EJEMPLO 1 Preparación de la vacuna utilizando composiciones inmunogénicas basadas en CpG 1.1. - Preparación inmunogénica que contiene QS21 y CpG en una formulación de liposoma (adyuvante AS15): Este sistema adyuvante AS15 ha sido descrito anteriormente en el Documento WO 00/62800. El AS15 es una combinación novedosa de dos sistemas adyuvantes, ASO1B y AS07A. El AS01B está compuesto de liposomas que contienen 3D-MPL y QS21 y el AS07A está compuesto de CpG 7909 (también conocido como CpG 2006) en una solución salina regulada por fosfato. 3D-MPL: es un derivado inmunoestimulante del lipopolisacárido (LPS) de la bacteria Salmonella minnesota gram positiva. El MPL ha sido desacilado y carece del grupo fosfato en una porción del lípido A. El tratamiento químico reduce de manera dramática la toxicidad mientras que conserva las propiedades inmunoestimulantes (Ribi, 1986). Ribi Inmunochemistry produce y suministra el MPL a GSK-Biologicals.

QS21 : es una molécula natural de saponina extraída de la mordida de la Quillaja saponaria Molina del árbol de Sud América. Una técnica de purificación desarrollada para separar la saponinas individuales de los extractos crudos de la mordida, permitieron el aislamiento de la saponina particular, QS21, la cual es un glucósido triterpeno que demuestra una actividad adyuvante más fuerte y una toxicidad más baja, comparada con el componente de origen. El QS21 ha mostrado activar el MHC clase I restringiendo los CTLs a varias unidades Ags, así como para estimular la proliferación linfocítica específica de Ag (Kensil, 1992). Aquila (formally Cambridge Biotech Corporation) produce y suministra la QS21 a GSK-Biologicals. CpG: El CpG ODN 7909 es un oligodesoxi-nucleótido fosforotioato de cadenas sencillas sintético (ODN) de 24 bases de longitud. Su secuencia básica la cual es 5-TCGTCGTTTTG-TCGTTTTGTCGTT-3'. ha sido optimizada para el estímulo del sistema inmune humano. El ADN del CpG o el ODN sintético que contienen patrones CpG es sabido que activa las células dendríticas, monocitos y macrófagos para que secreten citocinas similares a la TH1 e induzcan la respuesta de la célula T TH1 incluyendo la generación de las células citolíticas, estimulan las células NK y secretan IFNg y aumentan su actividad lítica, también activan las células B para que proliferen (Krieg A et al. 1995 Nature 347: página 546, Chu R et al. 1997 J. Exp. Med. 186 página 1623). El CpG 7909 no es antisentido en cualquiera de las secuencias conocidas del genoma humano. El CpG7909, es un adyuvante de propiedad desarrollado por y producido a nombre de Coley Pharmaceutical Group, Inc., MA, EUA. Formulación con CPG: Las formulaciones se prepararon los días de las inyecciones. El volumen de la inyección por ratón fue de 50 ó 10Oµl . Una formulación típica que contiene CpG, 3D-MPL y QS21 en liposomas se hace de la manera siguiente: se diluyen de 20µg a 25µg del antígeno con H2O y PBS en un pH de 7.4 para la isotonicidad. Después de 5 minutos, el QS21 (0.5 µg), mezclado con los liposomas en una proporción de peso de QS21/colesterol de 1/5 (a la que nos referimos como DQ) se agregó a la formulación. 30 minutos después se agregaron 10µg CpG (ODN 2006) y 30 minutos antes de la adición de 1µg/ml de tiomersal como conservador. Todas ias incubaciones se llevaron a cabo a temperatura ambiente con agitación. 1.2.- Preparación inmunogénica que contiene CpG y AS02 (El AS02 es QS21 y lípido A monofosforilo 3 de-O-acilado (3D-MPL) en una emulsión de aceite en agua): El sistema adyuvante AS02 ha sido descrito anteriormente en el Documento WO 95/17210. 3D-MPL: es como se describió anteriormente. QS2_1.es como se describió anteriormente. La emulsión de aceite/agua está compuesta de una fase orgánica hecha de dos aceites (un tocoferol y escualeno) y una fase acuosa de PBS que contiene Tween 80 como emulsificador. La emulsión comprendía 5% de escualeno, 5% de tocoferol 0.4% de Tween 80 y tenía un tamaño partícula promedio de 180 nm y es conocido como SB62 (ver Documento WO 95/17210). Preparación de la emulsión SB62 (concentrado doble): El Tween 80 es disuelto en solución salina regulada por fosfato PBS para producir una solución al 2% en el PBS. Para producir 100 ml en una emulsión de concentrado doble, se mezclaron completamente mediante agitación en vórtice 5g de DL alfa tocoferol y 5 ml de escualeno. Se le agregaron 90 ml de una solución de PBS/Tween y se mezclaron completamente. La emulsión resultante entonces fue pasada a través de una jeringa y finalmente microfluidificada utilizando una máquina de microfluidificación M110S. Las gotitas de aceite resultantes tienen un tamaño de aproximadamente 180nm. Formulaciones con CpG: Una formulación típica que contiene 3D-MPL y QS21 en una emulsión de aceite/agua se lleva a cabo de la manera siguiente: se diluyen de 20µg a 25µg del antígeno concentradas en 10 dobleces de PBS, pH 6.8 y H2O antes de la adición consecutiva de SB62 (50µL), MPL (20µg), QS21 (20µg), que comprende el oligonucleótido CpG (100 µG) y 1 µg/ml de tiomersal como conservador. La cantidad de cada componente puede variar según sea necesario. Todas las incubaciones se llevan a cabo a temperatura ambiente con agitación. EJEMPLO II Efecto del mlL 18 en combinación con la vacuna Her2/neu adyuvada con AS15 en un modelo terapéutico TC1 Her2 11.1. Diseño experimental Vacuna La vacuna Her-2/neu es ECD-PhD y comprende el dominio extracelular completo (comprendiendo los aminoácidos del 1 al 645) y una porción inmunogénica del dominio intracelular que comprende el dominio de fosforilación. Dicha construcción de vacuna se describe en el Documento WO00/44899 y es denominada dHER2. La proteína dHER2 fue co-liofilizada con CpG, diluyendo el antígeno en una mezcla de H2O, sacarosa NaH2PO4/K2HPO4. Después de 5 minutos, se le agregó CpG ODN 7909 para obtener un volumen final que contiene 625µg/ml de Her2neu, 1250 µg/ml de CpG, 3.15% de sacarosa, y 5mM de PO4, pH 7 antes del secado por congelación. El volumen final fue liofilizado de acuerdo con un ciclo de 3 días. Para la formulación extemporánea, la torta liofilizada que contiene el CpG y el antígeno se suspendió de nuevo con 625µg de AS01B el cual es un diluyente que contiene 100µg/ml de MPL Y DQ. Los animales fueron inyectados con 50µl con un contenido de 25µg de Her2/neu, 50µg de CpG y 5µg MPL y DQ. HER-2/neu que expresa el modelo de tumor El modelo de tumor utilizado en este experimento: TC1HER2 fue generado mediante la transducción retroviral de las células TC1 (proporcionadas por Dr T.C. Wu John's Hopkins University, Baltimore) con un retrovirus recombinante que codifica el HER-2/neu). Los clones individuales han sido aislados, amplificados y la estabilidad del HER2/neu y la expresión MHC clase I fue confirmada mediante citometría de flujo. Grupos de ratones: 4 grupos de 5 ratones CB6F1 hembra recibió en el día 0 una inyección sub-cutánea (SC) con células 2x10e6 TC1Her2 cl8, seguido por la vacunación, ya sea con: -gr1: PBS -gr2: inyección diaria de 100µg de mlL18 (múrido) del día 7 al día 27 (SC). -gr3: 25 µg de proteína dHER2 en AS15 en los días 7 y 14 (IM) -gr4: la combinación de la vacuna y el mlL18 11.2. Proliferación y mortalidad del tumor in vivo: Los resultados se muestran en la figura 2 y en la Tabla 1. Tabla 1: porcentajes de ratones los cuales permanecen libres de tumores, 27 días después de la inyección de TC1HER2al tumor. 11.3 Conclusión La estrategia de la vacuna basada en el uso de la proteína HER-2/neu purificada recombinante (dHER2) formulada en un adyuvante (AS15) combinada con la inyección repetida de recombinante múrido lL-8 produjo resultados mejorados en tumores previamente establecidos, los cuales expresan el antígeno HER2/neu, comparados con una estrategia de vacunación con cualquiera de la composiciones vacuna o el I L-18 solos. La vacunación basada en el uso de las proteínas dHER recombinantes formuladas en el adyuvante AS15 había mostrado anteriormente proteger de una manera muy eficiente contra un reto con estas células del tumor que expresan el antígeno HER2/neu. La protección es específica para el antígeno HER2/neu y está asociada con la inducción de una memoria inmune de largo plazo. En este modelo terapéutico más severo se preestablecieron los tumores y las vacunas han mostrado ser menos efectivas teniendo solamente un impacto limitado en el crecimiento del tumor (ningún ratón rechazó completamente los tumores en estas condiciones). Sin embargo, de manera sorprendente, cuando ambos tratamientos se administraron de manera consecutiva, se observó una sinergia y el 60% de los ratones permaneció completamente libre de tumores mientras que el 40% solamente desarrolló un tumor pequeño. En conclusión, existe un beneficio claro al combinar el mlL-18 y las vacunas como se muestra en la Tabla 1. Esto podría significar que ambas la inducción de las respuestas de la célula T específica de HER2/neu mediante la vacuna en la activación del sistema inmune mediante la inyección repetida de I L-18 son cruciales para obtener la regresión del tumor. EJEMPLO lll Efecto del mlL18 en combinación con la vacuna MAGE-3 adyuvada con AS15 en el modelo terapéutico TC1 Mage3 111.1. Diseño del experimento Vacuna El modelo de tumor que expresa el antígeno del tumor Mage3 ha sido generado (TC1Mage3) modificando genéticamente las células TCIde origen mediante la transfección clásica de un plásmido de ADN que codifica el Mage3 (PcDNA3 Mage3). Este modelo de tumor fue generado transfectando las células TC1 de origen, (proporcionadas por T.C. Wu at John's Hopkins University, Baltimore) con un plásmido PcDNA3 que codifica el Mage3. La transfección fue realizada utilizando lipofectamina de acuerdo con la recomendación del proveedor del equipo (Gibco BRL Life Technologies, catálogo no. 18324-012). Estas células son tumorigénicas y el 100% de los ratones inyectados con ellas desarrollaron un tumor de células 2 10e6 TC1 Mage3. 4 grupos de 5 ratones C57BL/6 hembras recibirán en el día 0 una inyección subcutánea (SC) de desafío con células 2x10e6 TC1Mage3 seguido por la vacunación con cualquiera de: -gr1: PBS -gr2: inyección diaria de 100µg de mlL18 (múrido) del día 7 al día 27 (SC) -gr3. 10µg de proteína Mage3 en AS15 los días 7 y 14 (IM) -gr4: la combinación de la vacuna y el mlL 18 La capacidad del Mage3 en la vacunación AS15, se evaluaron las inyecciones de IL18 y el tratamiento combinado para inducir la regresión del tumor. El impacto de la vacunación y/o el tratamiento de IL 18 en el parámetro inmune también es medido (proliferación linfática, producción de citocinas).

Claims

REIVINDICACIONES 1. Un método para mejorar una respuesta inmune a un antígeno en mamífero, que comprende la administración al mamífero de una cantidad segura y efectiva de 1 (un polipéptido 1L-18 o un fragmento bioactivo variante del mismo, y 2) una composición inmunogénica que comprende un antígeno o derivado inmunogénico del mismo, y un adyuvante CpG. 2. El método tal y como se describe en la reivindicación 1 caracterizado porque el antígeno o el derivado inmunogénico del mismo es derivado de un organismo seleccionado del grupo siguiente: el virus VIH-1 de inmunodeficiencia humana, virus de herpes simple humano, citomegalovirus, Rotavirus, virus de Epstein Barr, Virus de Varicela Zoster, de un virus de hepatitis tal como el virus de hepatitis B, virus de hepatitis A, virus hepatitis C, y virus de hepatitis E, de virus Sincitial Respiratorio, virus de parainfluenza, virus de sarampión, virus de paperas, virus de papiloma humano, flavivirus o virus influenza provenientes de Neisseria spp, Moraxella spp, Bordetella spp; Mycobacterium spp., incluyendo M. tuberculosis; Escherichia spp, incluyendo el E. coli enterotóxico; Salmonella spp,; Listeria spp; Helicobacter spp; Staphylococcus spp.; incluyendo S. aureus, S. epidermidis;; Borrelia spp; Chlamydia spp.; incluyendo C.
Chlamydia spp.; incluyendo C. Trachomatis, C. pneumoniae; Plasmodium spp., incluyendo P. falciparum; Toxoplasma spp., Candida spp.
3. Un método para reducir la severidad de un cáncer en un paciente, que comprende la administración a un paciente que la necesita de una cantidad segura y efectiva de 1) un polipéptido IL-18 o un fragmento bioactivo o variante del mismo y 2) una composición inmunogénica que comprende un antígeno asociado con el tumor o un derivado inmunogénico del mismo y un adyuvante CpG.
4. Un método tal y como se describe en la reivindicación 3, caracterizado porque el antígeno o derivado inmunogénico del mismo asociado con el tumor es seleccionado del grupo que comprende: un antígeno de la familia MAGE, PRAME, BEGE, LAGE 1, LAGE 2, SAGE, HAGE, XAGE, PSA, PAP, PSCA, prosterna, P501S, HASH2, Cripto, B726, NY-BR1.1, P510, MUC-1, prostasa, STEAP, tirosinasa, telomerasa, survivina, CASB616, P53, o her2 neu.
5. Un método tal y como se describe en cualquiera de las reivindicaciones de la 1 a la 4, caracterizado porque el polipéptido I L-18 o el fragmento bioactivo o variante del mismo en la composición inmunogénica son administrados simultáneamente, por separado o consecutivamente en cualquier orden.
6. El método tal y como se describe en la reivindicación 5, caracterizado porque el polipéptido I L-18 o el fragmento bioactivo o variante del mismo y la composición inmunogénica son administrados simultáneamente en la forma de una preparación farmacéutica combinada.
7. Un método tal y como se describe en cualquiera de las reivindicaciones de la 1 a la 6, caracterizado porque el polipéptido IL-18 o el fragmento bioactivo derivado del mismo es de origen humano o múrido.
8. Un método tal y como se describe en la reivindicación 7, caracterizado porque el I L-18 es el polipéptido de la SEQ ID NO.6 ó SEQ ID NO.7 o el fragmento bioactivo o derivado del mismo.
9. Un método tal y como se describe en cualquiera de las reivindicaciones de la 1 a la 7, caracterizado porque el adyuvante CpG comprende una Purina, Purina, C, G, pirimidina, y secuencia de pirimidina.
10. Un método tal y como se describe en cualquiera de las reivindicaciones de la 1 a la 8 caracterizado porque el adyuvante CpG es seleccionado del grupo que comprende: TCC ATG ACG TTC CTG ACG TT (SEQ ID NO:1);TCT CCC AGC GTG CGC CAT (SEQ ID NO:2); ACC GAT GAC GTC GCC GGT GAC GGC ACC ACG (SEQ ID NO.3) TCG TCG TTT TGT CGT TTT GTC GTT (SEQ ID NO:4); TCC ATG ACG TTC CTG ATG CT (SEQ ID NO:5).
11. Un método tal y como se describe en cualquiera de las reivindicaciones de la 1 a la 8 caracterizado porque el adyuvante CpG contiene por lo menos dos repeticiones CG no metiladas, estando separadas por lo menos por 3 nucleótidos.
12. Un método tal y como se describe en la reivindicación 11, caracterizado porque el oligonucleótido inmunoestimulante contiene por lo menos tres repeticiones CG no metiladas, estando separadas por 6 nucleótidos.
13. Una preparación combinada que comprende como ingredientes activos los siguientes componentes individuales: (1) un polipéptido I L-18 o fragmento bioactivo o variante del mismo (2) una composición inmunogénica que comprende un antígeno y un adyuvante CpG, siendo los ingredientes activos para el uso simultáneo, separado o consecutivo para la profilaxis y/o tratamiento de enfermedades infecciosas, cáncer, enfermedades autoinmunes y padecimientos relacionados.
14. Una preparación combinada tal y como se describe en la reivindicación 13 caracterizada porque los componentes (1) y (2) son mezclados en una composición.
15. Una preparación combinada tal y como se describe en las reivindicación 13 ó 14 caracterizada porque la composición inmunogénica comprende un antígeno o derivado inmunogénico del mismo asociado con el tumor y es profilácticamente o terapéuticamente activo contra el cáncer.
16. Una preparación combinada tal y como se describe en la reivindicación 15, caracterizada porque el antígeno o derivado inmunogénico del mismo asociado con el tumor es seleccionado del grupo que comprende un antígeno de la familia MAGE, PRAME, BAGE, LAGE 1, LAGE 2, SAGE, HAGE, XAGE, PSA, PAP, PSCA, prosterna, P501S, HASH2, Cripto, B726, NY-BR1.1, P510, MUC-1, Prostasa, STEAP, tirosinasa, telomerasa, sirvivina, CASB616, P53, ó her 2 neu.
17. Una preparación combinada tal y como se describe en cualquiera de las reivindicaciones de la 3 a la 16, caracterizada porque el polipéptido IL-18 o el fragmento bioactivo derivado del mismo es de un origen humano o múrido.
18. Una preparación combinada tal y como se describe en la reivindicación 17, caracterizada porque el I L-18 es el polipéptido de la secuencia SEQ ID NO. 6 ó SEQ ID NO. 7 ó un fragmento bioactivo derivado del mismo.
19. Una preparación combinada tal y como se describe en cualquiera de las reivindicaciones de la 13 a la 18, caracterizado porque el adyuvante CpG es tal y como se describe en cualquiera de las reivindicaciones de la 9 a la 12.
20. La preparación combinada tal y como se describe en cualquiera de las reivindicaciones de la 13 a la 19, en la cual la composición inmunogénica comprende adicionalmente un químico inmunoestimulante seleccionado del grupo que comprende: 3D-MPL, QS21, una mezcla de QS21 y colesterol, hidróxido de aluminio, fosfato de aluminio, tocoferol y una emulsión de aceite en agua o una combinación de dos o más de dichos adyuvantes.
21. La preparación combinada tal y como se describe en la reivindicación 20, caracterizada porque el adyuvante de la composición inmunogénica comprende 3D-MPL, CpG, QS21, colesterol o una emulsión de aceite en agua.
22. La preparación combinada tal y como se describe en la reivindicación 21, caracterizada porque la emulsión de aceite en agua comprende escualeno, tocoferol y monooleato de polioxietilensorbitan (Tween 80).
23. La preparación combinada tal y como se describe en la reivindicación 20, caracterizada porque la composición inmunogénica comprende QS21, colesterol y un adyuvante CpG.
24. La preparación combinada tal y como se describe en cualquiera de las reivindicaciones de la 13 a la 23, caracterizada porque ambos componentes activos se encuentran en formas de soluciones que se pueden inyectar.
25. Un equipo farmacéutico que comprende como ingredientes activos los siguientes componentes individuales (1) un polipéptido IL-18 ó fragmento bioactivo del mismo (2) una composición inmunogénica que comprende un antígeno o derivado inmunogénico del mismo y un adyuvante CpG, siendo los ingredientes activos para el uso simultáneo, separado o consecutivo para la profilaxis y/o tratamiento de enfermedades infecciosas, cáncer y enfermedades auntoinmunes.
26. El equipo farmacéutico tal y como se describe en la reivindicación 25 caracterizado porque la composición inmunogénica comprende un antígeno asociado con el tumor o un derivado inmunogénico del mismo y es profilácticamente o terapéuticamente activo contra el cáncer:
27. Un equipo farmacéutico tal y como se describe en la reivindicación 26, caracterizado porque el antígeno asociado con el tumor o derivado inmunogénico del mismo es seleccionado del grupo que comprende: un antígeno de la familia MAGE, PRAME, BAGE, LAGE 1, LAGE 2, SAGE, HAGE, XAGE, PSA, PAP, PSCA, prosterna, P501S, HASH2, Cripto, B726, NY-BR1.1, P510, MUC-1, Prostasa, STEAP, tirosinasa, telomerasa, survivina, CASB616, P53, ó su her 2 neu.
28. Una preparación combinada tal y como se describe en cualquiera de la reivindicaciones de la 13 a la 23 para utilizarse en una medicina.
29. Un método tal y como se describe en cualquiera de las reivindicaciones de la 1 a la 12 el cual comprende el uso de una preparación combinada de acuerdo con cualquiera de las reivindicaciones de la 13 a al 24.
30. El uso de un polipéptido 1L-18 o fragmento bioactivo derivado del mismo en la fabricación de un medicamento para la profilaxis y/o tratamiento de pacientes que sufren o son susceptibles a enfermedades infecciosas, cáncer, enfermedades autoinmunes o padecimientos relacionados, y que ya ha sido preparado con una composición ¡nmunogénica que comprende un antígeno o derivado inmunogénico del mismo y un adyuvante CpG.
31. El uso de una composición inmunogénica que comprende un antígeno o un derivado ¡nmunogénico del mismo y un adyuvante CpG en la fabricación de un medicamento para el tratamiento de pacientes que sufren de o son susceptibles a enfermedades infecciosas, cáncer, enfermedades autoinmunes y padecimientos relacionados, y que ya han sido preparados con un polipéptido I L-18 ó fragmento bioactivo derivado del mismo.
32. El uso tal y como se describe en la reivindicación 30 ó 31 en donde el antígeno es un antígeno asociado con el tumor y el cáncer es seleccionado del grupo consistente de cáncer de mama, cáncer de pulmón, NSCLC, cáncer de colón, melanoma, cáncer de ovario, cáncer de la vejiga, carcinoma escamosa de cabeza y cuello, cáncer del esófago.
33. El uso tal y como se describe en las reivindicaciones de la 30 a la 32, caracterizado porque el polipéptido IL-18 y el fragmento bioactivo derivado del mismo es de un origen humano o múrido.
34. El uso tal y como se describe en la reivindicación 33, en donde el I L-18 es el polipéptido de la secuencia SEQ ID NO.6 ó SEQ ID NO. 7 ó un fragmento bioactivo o derivado del mismo.
35. El uso tal y como se describe en cualquiera de las reivindicaciones de la 30 a la 34, caracterizado porque el adyuvante CpG es tal y como se describe en cualquiera de las reivindicaciones de la 9 a la 12.