MXPA06003777A - Compuesto de microorganismos adaptados para biodegradar la fraccion organica contenida en residuos solidos y proceso para su preparacion. - Google Patents
Compuesto de microorganismos adaptados para biodegradar la fraccion organica contenida en residuos solidos y proceso para su preparacion.Info
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Landscapes
- Processing Of Solid Wastes (AREA)
- Micro-Organisms Or Cultivation Processes Thereof (AREA)
Abstract
La presente invención proporciona un compuesto de microorganismos adaptados para biodegradar la fracción orgánica contenida en residuos sólidos. La estructura genética, metabólica y morfológica de estos microorganismos adaptados trabaja eficientemente mineralizando los residuos sólidos biodegradables procedentes de los residuos sólidos municipales y de cosecha, disminuyendo la producción de gases y de lixiviados. Este compuestos enriquece y aumenta la concentración de microorganismos benéficos, generando abonos biológicos de alta calidad, aptos para ser utilizados en la producción agrícola, en la recuperación y conservación de tierras, bajo los parámetros establecidos en la agricultura orgánica sostenible donde se busca conservar, recuperar y utilizar la naturaleza o el ambiente sin generar el mínimo impacto negativo.
Description
COMPUESTO DE MICROORGANISMOS ADAPTADOS PARA BIODEGRADAR LA
FRACCION ORGANICA CONTENIDA EN RESIDUOS SOLIDOS Y PROCESO
PARA SU PREPARACIÓN
ANTECEDENTES DE LA INVENCION Los problemas de contaminación ambiental que aquejan las grandes urbes del planeta exigen soluciones prontas y eficientes que permitan mejorar la calidad de vida de las personas y garanticen una conservación y recuperación de los recursos naturales.
Esta investigación surge como una necesidad en la busca de soluciones o alternativas para tratar el grave problema de contaminación ambiental como es el aportado por los residuos sólidos municipales generados en las diferentes actividades del desarrollo humano.
Inicialmente se observaron y analizaron las grandes cantidades de basuras y el alto porcentaje de la materia orgánica contenida en estos residuos, que diariamente se producen en las ciudades y municipios, su forma de recolección, manipulación y disposición final; y los
inconvenientes y daños que surgen en las sociedades por la falta de responsabilidad o conciencia ambiental y social .
El problema de los residuos sólidos municipales, inicia con la producción excesiva, la falta de separación en la fuente, la mala disposición, la falta de áreas para su manejo y la f lta de tratamiento o aprovechamiento .
Dentro de los problemas más relevantes que se causan, esta la producción de gases contaminantes, los cuales afectan la atmósfera, los lixiviados contaminantes de los suelos, aguas subterráneas y aguas superficiales y además la generación de focos de enfermedades o vectores transmisores de ellas.
Para disminuir esta problemática que básicamente se presenta en el uso de los llamados rellenos sanitarios y vertederos, existe el compostaje convencional, el cual surge como alternativa a este problema y se efectúa utilizando materia - orgánica proveniente de residuos de cosechas, residuos sólidos municipales y residuos de plantas de sacrificio .
El compost posee una sección anaerobia que compromete la mayoría de su volumen produciendo reacciones acidas que generan varios tipos de gases, su humedad oscila en un promedio de 70% y con un pH que varia entre 2 a 10. El exceso de humedad que se presenta disminuye la aireación e interfiere con la autocombustión, debido a la capacidad calorífica del agua.
Con estas condiciones se presenta la proliferación de microorganismos como Clostridium, Pseudomonas, Licheniformes, Streptomyces vulgaris, etc . , cuya actividad se desarrolla obteniendo energía de componentes sulfatados emitiendo estos gases a la atmósfera.
Igualmente, en cuanto a la relación Carbono - Nitrógeno
(C/N) , el rango óptimo en los residuos orgánicos para un correcto compostaje se encuentra entre 20 y 50 a 1. Los excesos de cualquiera de los dos componentes conllevan a una situación de carencia. Si el residuo de partida es rico en carbono y pobre en nitrógeno, la biodegradación será lenta, las temperaturas no serán altas y el carbono se perderá en forma de dióxido de carbono. Para el caso contrario, en altas concentraciones relativas de nitrógeno, éste se transformará
en amoníaco, impidiendo la correcta actividad biológica y generando la producción de gases olorosos .
En determinadas condiciones se producen algunos gases, que representan un 89% del volumen producido por las reacciones bioquímicas, dentro de este tipo de gases se encuentran:
• c¾ Gas Metano (60 - 70%) • H2S Ácido Sulfhídrico (2 - 5%) • CO - Monóxido de Carbono (2 - 5%) • co2 Bióxido de Carbono (26 - 30%) • ¾ y N2 - Hidrógeno y Nitrógeno en menor proporción.
Con la humedad que se maneja en el compostaje tradicional se presentan altos niveles de lixiviación que contaminan suelos, aguas superficiales y aguas subterráneas. El lixiviado es un producto que tiene una Demanda Bioquímica de Oxígeno (DBO) que oscila entre 20 , 000 y 80 , 000 moléculas.
El compost generado posee gran cantidad de microorganismos y su efecto no ha sido el esperado, se presentan riesgos al
aplicar este bioestimulador en suelos usados para pastos o cultivos forrajeros debido a la presencia de cierto tipo de bacterias patógenas tanto para las plantas como para los animales .
La invención que se presenta surge como alternativa para dar solución a los problemas anteriormente descritos ya que se realiza el control de los microorganismos patógenos presentes en el proceso de biodegradacion en el compostaje y fortalece la proliferación de microorganismos benéficos tales como, los nitrificantés que aportan nitrógeno requerido para la reproducción vegetal y de otros saprofitos, acelerando la biodegradacion y estabilización.
Esta invención parte de la observación del compost convencional y luego de un análisis del proceso se efectuó enriquecimiento, identificación y caracterización de los microorganismos interactuantes , efectuando a partir de estos una selección de los que presentaron mejor actividad metabólica e importancia en las diferentes etapas del proceso. Asi, los microorganismos seleccionados se sometieron a variaciones de su ambiente y medio original buscando un cambio, adaptación y/o conversión adecuada para optimizar
factores como el tiempo, capacidad, velocidad de biodegradación y producto obtenido.
Esta adaptación inducida es respuesta de los mecanismos de resistencia microbiana que permiten a unos pocos soportar, desarrollarse y proliferar pese su contacto con ambientes adversos, generando en el término de pocas horas microorganismos totalmente eficientes en la tarea específica de biodegradación orgánica y bajo las condiciones requeridas.
Para la obtención de la mezcla objeto de la presente invención, se realiza una adaptación de los microorganismos, en busca de mejor actividad en la biodegradación y mineralización. Esta adaptación se efectuó manipulando las variables fisicoquímicas de tiempo, pH, temperatura, luminosidad, concentración de material orgánico, organoclorados , organofosforados y mercuriales. Al final se obtuvo una mezcla apta para el tratamiento y biodegradación de los residuos sólidos orgánicos y la posterior producción de un abono biológico con altos contenidos de Nitrógeno, Fósforo, Potasio y elementos menores.
Durante toda la investigación, con cada una de las bacterias y en cada una de las etapas se realizaron:
1. Modificaciones al medio inicial. 2. Coloraciones de Gram y verde de malaquita para diferenciación y observación de estructuras celulares, 3. Curvas de crecimiento y recuento de unidades formadoras de colonias por mililitro (UFC/ml) en los tiempos determinados para esta investigación.
Las cepas se sometieron a iluminación (luz visible) directa en cada una de las etapas buscando contribuir en la adaptación y modificación esperada.
Los residuos orgánicos que se adicionaron al medio estaban constituidos por un 80% de hidratos de carbono.
MATERIALES Y METODOS
TOMA DE MUESTRAS Para la toma de muestras se utilizaron muestreadotes cilindricos que permitían obtenerlas de una determinada profundidad, luego se transportaron en bolsas de polietileno. Transportando las muestras al laboratorio bajo condiciones
que eviten exceso de calor y que cumplían con los parámetros de esterilidad y aislamiento térmico. Cada muestra consistió en 500 g de material en biodegradacion. El número de lugares para muestreo era de 10 diferentes sitios en donde se presentaba materia orgánica en descomposición. De cada uno se tomó una muestra por duplicado en diferentes etapas del proceso de descomposición. Para el aislamiento de los microorganismos se utilizó el Modelo Microcosmos (Kabir y cois, 1995) . Las cepas se clasificaron mediante métodos tradicionales (taxonomía numérica) e inmunoquímicos (inmunofluorescencia indirecta- IFI, según Lle ot y Stead, 1991) . Se utilizaron cepas puras procedentes de diferentes lugares. Los lugares de muestreo fueron:
1. Relleno Doña Juana. 2. Botadero de Basuras El Cortijo. 3. Botadero de Basuras de Mondoñedo . . Residuos de Plaza de Mercado . 5. Residuos de Fincas . 6. Residuos de matadero 7. Residuos Domésticos,
El momento (tiempo) de toma de muestra fue a:
A. 2 horas de descargada B. 1 día de descargada C. 2 días de descargada D. 4 días de descargada E. 12 días de descargada F. 20 días de descargada y enterrada G. 30 días de descargada y enterrada H. 40 días de descargada y enterrada I . 60 días de descargada y enterrada J. 70 días de descargada y enterrada
A partir del material orgánico recolectado llevado al laboratorio se inicio el trabajo de enriquecimiento, aislamiento e identificación de las diferentes especies que se encontraban en el proceso de descomposición.
El estado de las muestras y los procesos presentaban similitud en factores como pH, olor, color, alta humedad, generación de gases y lixiviados en relación a el tiempo de descomposición .
Cada muestra del material adquirido, se identificaba completamente, con lugar de origen, fecha, hora y etapa de muestreo, características organolépticas y responsables de la toma .
ENRIQUECIMIENTO, AISLAMIENTO E IDENTIFICACIÓN MICROORGANISMOS
El inicio del trabajo con la muestra en el laboratorio no superó las dos horas luego de la toma. Se realizó un pre-enriquecimiento, aislamiento y finalmente la identificación macroscópica, microscópica y bioquímica de los microorganismos por medio de los métodos y técnicas estandarizadas para determinado fin. Esta determinación se realizó en la etapa mesófila y termófila y en condiciones aerobias como anaerobias del mismo, en los diferentes procesos .
Durante 12 años de estudios y observaciones con las especies de microorganismos presentes en el proceso, se determinó que sólo 10 especies de microorganismos eran los más relevantes funcionalmente, además se desarrollaban y ejercían un papel biodegradador y controlador mucho más eficiente y metabólicamente óptimo en el proceso de
biodegradacion, además por la velocidad de crecimiento, comportamiento nutricional, desarrollo y actividad biodegradable .
A estas 10 especies de microorganismos se les indujo un cambio en su estructura genética y morfológica, debido a la exposición continua iluminación directa (luz visible) y a condiciones diferentes en donde se incrementaba o disminuía determinado factor o constituyente nutritivo, generando un cambio y adaptación que permitía trabajar eficientemente teniendo como limitantes el tiempo, la temperatura, pH, humedad y concentraciones de materiales orgánicos y metales pesados, simulando los posibles componentes de los residuos orgánicos contaminados, provenientes de residuos sólidos municipales (basuras) . Finalmente el producto obtenido al inocular estos organismos a un proceso de biodegradacion fue, un abono biológico de excelente calidad, con altos contenidos de nitrógeno, fósforo y potasio (NPK) y con características fisicoquímicas y microbiológicas sobresalientes para ser utilizado en la agricultura orgánica sostenible.
PROCEDIMIENTO REALIZADO Los microorganismos se siembran en medio líquido y medio sólido simultáneamente en cada etapa y con diferentes modificaciones en cuanto a pH, temperatura, humedad adición de organanoclorados y material orgánico en proporciones que indujeran una adaptación - selección por medio de resistencia y utilización metabólica, con radiación directa. Al final se evaluaron para determinar diferencias significativas en:
1. Velocidad de crecimiento 2. Porcentaje de Inhibición medido en Número de UFC/ml
Todas las pruebas realizadas de estabilidad térmica y pH para todas las cepas, nos demostró que las especies bacterianas soportaron el estrés al que fueron sometidas, logrando presentar una actividad inicialmente baja hasta lograr una actividad variable y alta, en rangos de temperatura muy superiores al estándar de su hábitat . En cuanto a las pruebas de estabilidad se determino su eficiente actividad en pHs neutros y finalmente se logro manejar el estrés para los microorganismos que cambiaron su condición de anaerobio estricto a aerobio, trabajando en
cada uno de los ensayos con aireación forzada permanente o inyección porcentual de oxigeno.
Inicialmente los microorganismos se sembraron por triplicado con temperaturas de incubación definidas para posteriormente realizar recuento microbiológico según estándares de "valoración de crecimiento microbiano.
A cada especie se le realizaron los ensayos analizando los tiempos que requería para el cubrimiento total del campo de la caja. Una vez determinado este tiempo se dejaba en reposo por un periodo de 3 a 5 días y posteriormente se sometía al siguiente cambio al que se había programado para cada una de las investigaciones.
ADAPTACIÓN DE ESPECIES SELECCIONADAS Bacillus licheniformis Es un bacilo Gram positivo, no patógeno, anaerobio facultativo, formador de esporas, su tamaño inicial es de 1.2 µp? de ancho x 3,5 µ?a de largo en promedio, su temperatura óptima de crecimiento oscila entre 10 a 25 °C y su actividad se desarrolla dentro de un pH de 5.5 - 6.5, con una humedad
de 20 - 40%. Las esporas que produce le permiten a éste resistir ambientes hostiles, ya sea por calor o sequía.
El medio de cultivo que se utiliza para el 1icheniformis es un medio nutritivo, que consiste en peptona, agua destilada, extracto de levadura y agar celulosa.
ETAPAS REALIZADAS EN EL LABORATORIO E-l El día 1 se incuba a 25 °C el medio de cultivo y se inyecta oxígeno constante, manteniendo constantes los demás parámetros del medio de cultivo primitivo. Con este cambio se registró una mortalidad del 5%.
E-2 El día 9 se resiembran las cepas modificando el medio de cultivo, aumentando el rango de la temperatura de 25°C a 30 °C, con este cambio se registra una mortalidad del 12%.
E-3 El día 21 los microorganismos obtenidos se resembraron, manteniendo los mismos parámetros del medio de cultivo, adicionando trazas de organoclorados , presentándose una mortalidad de los microorganismos del 38 %.
E-4 El día 48 se agregaron residuos orgánicos al 10% al medio de cultivo de los microorganismos obtenidos, este cambio presenta una mortalidad del 25%.
E-5 El dia 81 los microorganismos obtenidos se resiembran, manteniendo las mismas condiciones hasta esta etapa, se realiza un segundo cambio a la temperatura de 30°C a 35°C. Se presentó una mortalidad del 25%.
E-6 El dia 101 los microorganismos adaptados se sometieron a un cambio, adicionando al medio de cultivo trazas de organofosforados, presentándose una mortalidad de los microorganismos del 32%.
E-7 El día 126 la cepa obtenida se sometió a un cambio en el medio de cultivo, agregando un 15% de material orgánico seco y triturado, se mantienen los demás parámetros. En esta etapa se presentó una mortalidad del 25% de la población.
E-8 El día 146 se resembraron las cepas modificando el medio de cultivo, alterando la temperatura de 35°C a 40°C con este cambio se registra una mortalidad del 25%.
E-9 El día 166 los microorganismos adaptados se someten a un cambio adicionando trazas mercuriales, presentándose una mortalidad de los microorganismos del 30%.
E-10 El día 191 al medio de cultivo de los microorganismos se le agregó un 20% de material orgánico seco y triturado, manteniéndose los demás parámetros. En esta etapa se presentó una mortalidad del 18% de la población. E-ll El día 203 se resembraron las cepas modificando el medio de cultivo, alterando la temperatura de 40°C a 45°C con este cambio se registra una mortalidad del 22%.
E-12 El día 220 los microorganismos se sometieron a un cambio en el medio de cultivo, incrementando en un 10% trazas de organoclorados , manteniendo los demás parámetros. En esta etapa se presentó una mortalidad del 27%.
E-13 El día 243 se adicionó un 25% de residuos orgánicos al medio de cultivo manteniendo los demás parámetros, presentándose una mortalidad del 15%.
E-14 El día 260 se resembraron las cepas modificando el medio de cultivo, alterando la temperatura de 45°C a 50°C con este cambio se registra una mortalidad del 20%.
E-15 El día 283 los microorganismos son sometidos a un cambio en el medio de cultivo, incrementando en un 10% la trazas de organofosforados , manteniendo los demás parámetros. En esta etapa se presenta una mortalidad del 25%.
E-16 El día 312 se adicionó 30% de residuos orgánicos al medio del cultivo manteniendo los demás parámetros, presentándose una mortalidad del 10%.
E-17 El día 325 se resiembran las cepas modificando el medio de cultivo, alterando la temperatura de 50°C a 55°C; con este cambio se registró una mortalidad del 8%.
E-18 El día 343 con los microorganismos adaptados, se incrementa al medio de cultivo trazas mercuriales en un
10%; se mantienen los demás parámetros, presentándose una mortalidad de los microorganismos del 20%.
E-19 El día 366 los microorganismos adaptados se sometieron a un cambio en el medio de cultivo, aumentándose en 40% los residuos orgánicos, manteniéndose los demás parámetros, registrándose una mortalidad del 10%.
E-20 El día 394 se resiembran las cepas modificando la temperatura de 55 °C a 60 °C, los demás parámetros del medio de cultivo se mantienen, este cambio registra una mortalidad del 5%.
E-21 El día 419 se incrementan trazas de' organoclorados en un 15% al medio de cultivo de los microorganismos adaptados, los demás parámetros se mantienen, presentándose una mortalidad del 10%.
E-22 El día 436 al medio de cultivo de la cepa obtenida, se le somete a un cambio adicionando una concentración 50% de material orgánico seco y triturado igualmente se somete a una disminución del 5% la humedad de 40% a 35%, manteniendo los demás parámetros . En este ensayo se presenta una mortalidad del 12%.
E-23 El día 451 se resiembran las cepas modificando la temperatura de 60 °C a 65 °C, los demás parámetros del medio de cultivo se mantienen, y la inyección de oxigeno es constante, este cambio registra una mortalidad del 5%.
E-24 El día 466 al medio de cultivo de los microorganismos adaptados, se le incrementan trazas de mercuriales en un 10%, los demás parámetros se mantienen, presentándose una mortalidad del 8%.
E-25 El día 481 se somete a un cambio adicionando una concentración 55% de material orgánico seco y triturado al medio de cultivo de la cepa obtenida, manteniendo los demás parámetros . En este ensayo se presenta una mortalidad del 6%.
E-26 El día 501 se resiembran las cepas modificando la temperatura de 65 °C a 70 °C, los demás parámetros del medio de cultivo se mantienen, este cambio registra una mortalidad del 12%.
E-27 El día 510 se le incrementan trazas de órgano fosforados en un 10% al medio de cultivo de los microorganismos adaptados, los demás parámetros se mantienen, presentándose una mortalidad del 8%.
E-28 El día 524 se somete a un cambio adicionando una concentración 60% de material orgánico seco y estabilizado al medio de cultivo de la cepa obtenida, manteniendo los demás parámetros. En este ensayo se presenta una mortalidad del 5% durante el proceso.
E-29 El día 534 se resiembran las cepas modificando la temperatura de 70 °C a 75 °C, los demás parámetros del medio de cultivo se mantienen, este cambio registra una mortalidad del 5%.
E-30 El día 542 al medio de cultivo de los microorganismos adaptados, se le incrementan trazas de órgano fosforados en un 10%, los demás parámetros se mantienen, presentándose una mortalidad del 8%.
E-31 El día 552 se somete a un cambio al medio de cultivo de la cepa obtenida adicionando una concentración 60% de
material orgánico seco y estabilizado, manteniendo los demás parámetros . En este ensayo se presenta una mortalidad del 3% durante el proceso.
RESULTADOS OBTENIDOS Al finalizar el proceso de adaptación, el medio y las características de cultivo fueron las siguientes :
Cuadro comparativo No.l
El microorganismo presenta una actividad normal en estas condiciones, encontrándose en sus membranas trazas de Nitrógeno .
Se observa además que el material orgánico constituido en un 80% de hidratos de Carbono se estabiliza en un periodo de 35 días en promedio, a diferencia del microorganismo silvestre con el cual el tiempo fue de 120 días.
BASILLUS lícheniformís - GRAMPOSITIVO - AEROBIOS ó ANAEROBIOS FACULTATIVOS Se realizan recuentos de colonias cada 36 horas - Coloraciones gram verde de mala uita
Clostridivm pasteuranium Estos microorganismos son bacilos Gram positivos, anaerobios y heterótrofos, su habitat natural es el suelo, carecen de un sistema citocromo y un mecanismo para la fosforilación con transporte de electrones, y de aquí que obtengan su ATP solo por la fosforilación a nivel de sustrato .
Su desarrollo óptimo se presenta en un rango de 20 a 30°C de temperatura. Son móviles, se desplazan utilizando un flagelo. Son quimioorganotróficos . Este bacilo es anaerobio facultativo .
ETAPAS REALIZADAS EN EL LABORATORIO E-l El día 1 se resiembran las cepas modificando el medio de cultivo, inyectando aireación forzada y aumentando el pH de 5.0 a 5.5%, con este cambio se registra una mortalidad del 5%.
E-2 El día 9 se resiembran las cepas modificando el medio de cultivo, inyectando aireación forzada y aumentando la temperatura de 35% a 40%, con este cambio se
\ registra una mortalidad del 12%.
E-3 El día 22 se resiembran los microorganismos obtenidos, manteniendo la aireación forzada y los mismos parámetros del caldo de cultivo, adicionando trazas de organoclorados, presentándose una mortalidad del 22%.
El día 43 se mantienen los mismos parámetros del medio de cultivo, y además se le adiciona 10% de residuos orgánicos pulverizados y esterilizados, este cambio presenta una mortalidad del 15% de los microorganismos.
El día 58 se somete a los microorganismos obtenidos a un cambio de pH aumentando de 5.5 a 6.0. Se registró una mortalidad del 5%, el cubrimiento total del campo se dio a los 5 días .
E-6 El día 73 se resiembran las cepas modificando el medio de cultivo, inyectando aireación forzada y aumentando la temperatura de 40% a 45%, con este cambio se registra una mortalidad del 5%.
E-7 El día 83 se somete a los microorganismos adaptados a un cambio, adicionando trazas mercuriales,
presentándose una mortalidad de los microorganismos del 18%.
E-8 El dia 103 se mantienen los mismos parámetros del medio de cultivo y además se le adiciona 15% de residuos orgánicos pulverizados y esterilizados, este cambio presenta una mortalidad del 12% de los microorganismos.
E-9 El día 123, se somete a los microorganismos obtenidos a un cambio de pH aumentando de 6.0 a 6.5. Se registró una mortalidad del 10%, el cubrimiento total del campo se dio a los 5 días .
E-10 El día 135 se resiembran las cepas modificando el medio de cultivo, inyectando aireación forzada y aumentando la temperatura de 45% a 50%, con este cambio se registra una mortalidad del 12%.
E-ll El día 150 se somete a los microorganismos adaptados a un cambio, adicionando trazas mercuriales, presentándose una mortalidad de los microorganismos del 20%.
E-12 El día 170 se mantienen los mismos parámetros del medio de cultivo y además se le adiciona 15% de residuos orgánicos pulverizados y esterilizados, este cambio presenta una mortalidad del 12% de los microorganismos.
E-13 El día 183, se somete a los microorganismos obtenidos a un cambio de pH aumentando de 6.5 a 7.0. Se registró una mortalidad del 10%.
E-14 El día 200 se resiembran las cepas modificando el medio de cultivo, inyectando aireación forzada y aumentando la temperatura de 50% a 55%, con este cambio se registra una mortalidad del 18%.
E-15 El día 220 se somete a los microorganismos adaptados a un cambio, adicionando trazas de organofosforados , presentándose una mortalidad de los microorganismos del 15%.
E-16 El día 245 se somete a los microorganismos obtenidos a un aumento de residuos orgánicos estabilizados y manteniendo la aireación forzada, incubándose a 55 °C, registrando una mortalidad del 8%.
E-17 El día 257 se somete a los microorganismos obtenidos a un cambio de pH aumentando de 7.0 a 7.5. Se registró una mortalidad del 10%.
E-18 El día 274 se resiembran las cepas modificando el medio de cultivo, inyectando aireación forzada y aumentando la temperatura de 55% a 60%, con este cambio se registra una mortalidad del 10%.
E-19 El día 294 se somete a los microorganismos adaptados a un cambio, adicionando trazas de organoc1orados , presentándose una mortalidad de los microorganismos del 15%.
E-20 El día 317 se someten a los microorganismos obtenidos a un aumento de residuos orgánicos estabilizados y manteniendo la aireación forzada, incubándose a 60 °C, registrando una mortalidad del 12%.
E-21 El día 367 se resiembran las cepas modificando el medio de cultivo, inyectando aireación forzada y aumentando
la temperatura de 60% a 65%, con este cambio se registra una mortalidad del 10%.
E-22 El día 354 se somete a los microorganismos adaptados a un cambio, adicionando trazas de mercuriales, presentándose una mortalidad de los microorganismos del 8%.
E-23 El día 369 se somete a los microorganismos obtenidos a un aumento de residuos orgánicos estabilizados y manteniendo la aireación forzada, incubándose a 65 °C, registrando una mortalidad del 5%.
E-24 El día 382 se resiembran las cepas modificando el medio de cultivo, inyectando aireación forzada y aumentando la temperatura de 65% a 70%, con este cambio se registra una mortalidad del 8%.
E-25 El día 392 se somete a los microorganismos adaptados a un cambio, adicionando trazas de mercuriales, presentándose una mortalidad de los microorganismos del 4%.
E-26 El día 402 se somete a los microorganismos obtenidos a un aumento de residuos orgánicos estabilizados y manteniendo la aireación forzada, incubándose a 70 °C, registrando una mortalidad del 6%.
RESULTADOS OBTENIDOS Tabla No .2. Cuadro Comparativo Características Iniciales y Finales .
El microorganismo presenta una actividad normal en dicho medio encontrándose en ' su membrana celular trazas de Nitrógeno.
Se observa además que el material orgánico constituido en un 80% de hidratos de Carbono se estabiliza en un periodo de 35 dxas en promedio y a diferencia del microorganismo silvestre con el cual el tiempo fue de 120 días.
Clostridium pasteuranium Se realizan resiembras de colonias cada 24 horas - Coloraciones ram verde de mala uita
Arthrobacter globiformis Es una bacteria Gram positiva, no patógeno, esporógeno, aerobio, su tamaño inicial es de 1.2 µt de ancho x 2.5 µta de largo en promedio, la temperatura óptima de crecimiento oscila entre 20 y 30°C. Su actividad se desarrolla en un pH de 6.5 a 7.0 y con una humedad del 90%.
Las células de Arthrobacter sp. en medios complejos, sufren un marcado cambio de su forma a lo largo del ciclo de crecimiento. Los cultivos más viejos constan de células cocoides, en otros estadios son bacilares. Las células son inmóviles o móviles mediante un flagelo polar o varios flagelos laterales. No forma endosporas . Quimiorganotrofo . Forman poco o no forman ácido a partir de glucosa. Bacterias típicamente del suelo.
Para su mantenimiento en el laboratorio se cultivo en un agar nutritivo con los elementos mínimos esenciales, estableciendo pH, humedad y temperatura óptima.
ETAPAS REALIZADAS EN EL LABORATORIO E-l El día 1 se sembró la cepa en un medio modificado, alterando la humedad de 90% a 85%, luego de incubación
se registra un crecimiento lento hasta las 48 horas y una mortalidad del 14%.
E-2 El día 16 se resembraron las cepas obtenidas anteriormente en un medio modificado, alterando la temperatura de 30 °C a 35 °C. Se registra una mortalidad del 10%.
E-3 El dia 26 los microorganismos obtenidos se sembraron con adición de -5% de residuos orgánicos. Este cambio permitió un desarrollo lento y se presentó una mortalidad del 14% de los microorganismos.
E-4 El dia 46 los microorganismos obtenidos se resiembran, con adición de trazas de organoclorados, presentándose una mortalidad del 48%.
E-5 El dia 96 los microorganismos obtenidos, se someten a un segundo cambio de humedad, de 85% a 80%. Se registró una mortalidad del 15%. E-6 El día 119 se resiembran las cepas en el medio de cultivo pero alterando la temperatura de 35°C a 40°C. Se registra una mortalidad del 32%.
E-7 El día 184 la cepa obtenida se sometió a un cambio en el medio de cultivo, agregándose un 10% de material orgánico seco y triturado, manteniendo los demás parámetros. Se presenta una mortalidad del 10%.
E-8 El día 194 al medio de cultivo de los microorganismos adaptados se le adicionó trazas de organofosforados, presentándose una mortalidad del 43%.
E-9 El día 214 los microorganismos obtenidos se resiembran, y al medio de cultivo se le altera la humedad de 80% a 75% manteniendo los demás parámetros, presentándose una mortalidad del 28%.
E-10 El día 264 se resiembran las cepas modificando el medio de cultivo, alterando la temperatura de 40 °C a 42 °C. Se registra una mortalidad del 15%.
E-11 El día 287 al medio de cultivo de los microorganismos se agrega 15% de material orgánico seco y triturado, se mantienen los demás parámetros . Se presenta una mortalidad del 52%.
El día 352 los microorganismos adaptados se sometieron a un cambio incrementando en un 5% trazas mercuriales, presentándose una mortalidad de los microorganismos del 42%.
El día 382 los microorganismos se someten a un cambio de humedad, de 75% a 70% se mantienen los demás parámetros, presentándose una mortalidad del 27%.
El día 427 se resembraron las cepas modificando el medio de cultivo, alterando la temperatura de 42 °C a 45 °C. Se registra una mortalidad del 24%.
El día 455 se adicionó 20% de residuos orgánicos al medio de cultivo manteniendo los demás parámetros, presentándose una mortalidad del 35%.
El día 491 los microorganismos se sometieron a un cambio en el medio de cultivo, aumentando en un 10% trazas de organoclorados , manteniendo los demás parámetros. Se presenta una mortalidad del 37%.
E-17 El día 521 los microorganismos adaptados se sometieron a un cambio de humedad de 70% a 65%, manteniendo los demás parámetros, presentándose una mortalidad del 24%.
E-18 El día 569 se resembraron las cepas modificando el medio de cultivo, alterando la temperatura de 45°C a 50°C, registrándose una mortalidad del 22%.
E-19 El día 589 se adicionó 25% de residuos orgánicos al medio de cultivo manteniendo los demás parámetros, presentándose una mortalidad del 28%.
E-20 El día 622 los microorganismos se sometieron a un cambio en el medio de cultivo, aumentándose en un 10% trazas de organofosforados, manteniendo los demás parámetros, presentándose una mortalidad del 30%.
E-21 El día 645 el medio de cultivo de los microorganismos se sometió a un cambio de humedad, de 65% a 60%, manteniendo los demás parámetros incubando a 50 °C. En este ensayo se presenta una mortalidad del 37% de la población.
E-22 El día 685 se resembraron las cepas modificando el medio de cultivo, alterando el rango de temperatura de 50°C a 55°C, registrándose una mortalidad del 19%.
E-23 El día 706 los microorganismos adaptados se sometieron a un cambio en el medio de cultivo, aumentándose a 30% los residuos orgánicos, manteniendo los parámetros, presentándose una mortalidad del 24%.
E-24 El día 741 a los microorganismos adaptados al medio de cultivo se incrementaron trazas mercuriales en un 10%, manteniendo los parámetros, presentándose una mortalidad del 26%.
E-25 El día 778 se alteró el grado de humedad 60% a 55% al medio de cultivo de los microorganismos obtenidos, manteniendo los demás parámetros, incubando a 55 °C. Se presenta una mortalidad del 17%.
E-26 El día 818 se resembraron las cepas modificando el medio de cultivo, alterando la temperatura de 55°C a 60°C, registrándose una mortalidad del 17%.
E-27 El día 845 la cepa obtenida se sometió a un cambio en el medio de cultivo, agregando un 35% de material orgánico seco y triturado, manteniendo los demás parámetros, presentándose una mortalidad del 26%.
E-28 El día 878 se adicionó trazas de organoclorados en un 15% al medio de cultivo de los microorganismos adaptados, los demás parámetros se mantienen, presentándose una mortalidad del 42%.
E-29 El día 913 se alteró el grado de humedad de 55% a 50% al medio de cultivo de los microorganismos adaptados, manteniendo los demás parámetros e incubando a 65 °C. Se presentó una mortalidad del 45%.
E-30 El día 946 se resembraron las cepas modificando el medio de cultivo, alterando el rango de temperatura de 60 °C a 65°C, registrándose una mortalidad del 16%.
E-31 El día 971 se incrementó a 50% el material orgánico seco y triturado al medio de cultivo de la cepa obtenida, manteniendo los demás parámetros, presentándose una mortalidad del 24%.
E-32 El día 1001 se incrementó las trazas de organofosforados en un 15% al medio de cultivo de los microorganismos adaptados, los demás parámetros se mantienen, presentándose una mortalidad del 26%.
E-33 El día 1026 se altera el grado de humedad de 50% a 45% del medio de cultivo de los microorganismos obtenidos, manteniendo los demás parámetros e incubando a 65 °C. Se presenta una mortalidad del 23%.
E-34 El día 1056 se resembraron las cepas modificando el medio de cultivo, alterando la temperatura de 65 °C a 68°C, registrándose una mortalidad del 14%.
E-35 El día 1077 se incrementó a 55% el material orgánico seco y triturado del medio de cultivo de la cepa obtenida, manteniendo los demás parámetros, presentándose una mortalidad del 25%.
E-36 El día 1104 se incrementó las trazas de organofosforados en un 20% del medio de cultivo, los demás parámetros se
mantienen y se incuba a 68 °C. Se presenta una mortalidad del 32%.
E-37 El día 1145 se altera el grado de humedad de 45% a 40% del medio de cultivo de los microorganismos obtenidos, manteniendo los demás parámetros e incubando a 68 °C. Se presenta una mortalidad del 23%.
E-38 El día 1177 se resembraron las cepas modificando el medio de cultivo, alterando la temperatura de 68 °C a
70 °C, registrándose una mortalidad del 12%.
E-39 El día 1192 se incrementó a 60% el material orgánico seco y triturado del medio de cultivo de la cepa obtenida, manteniendo los demás parámetros, presentándose una mortalidad del 18%. E-40 El día 1213 se incrementó las trazas de mercuriales en un 25% del medio de cultivo, los demás parámetros se mantienen y se incuba a 68 °C. Se presenta una mortalidad del 12%.
E-41 El día 1250 se altera el grado de humedad de 40% a 35% del medio de cultivo de los microorganismos obtenidos,
manteniendo los demás parámetros e incubando a 70 °C. Se presenta una mortalidad del 15%.
E-42 El día 1285 se resembraron las cepas modificando el medio de cultivo, alterando la temperatura de 70 °C a 72 °C, registrándose una mortalidad del 10%.
E-43 El día 1297 se incrementó las trazas de organoclorados en un 30% del medio- de cultivo de los microorganismos adaptados, los demás parámetros se mantienen y se incuba a 72 °C. Se presenta una mortalidad del 7%.
RESULTADOS OBTENIDOS Tabla No. 3 Cuadro comparativo
El microorganismo presenta una actividad normal en dicho medio encontrándose en su membrana celular trazas de Nitrógeno.
Se observa además que el material orgánico constituido en un80% de hidratos de Carbono se estabiliza en un periodo de 35 días en promedio y a diferencia del microorganismo silvestre con el cual el tiempo fue de 120 días.
ARTHROBACTER globiformis - GRAMPOSITIVO A GRAMNEGATIVA- AEROBI/
Se realizan recuentos de colonias cada 12 horas - Coloraciones gram verde de malaquita
Bacillus megaterium Es un bacilo Gram positivo, formador de esporas, aerobio o anaerobio facultativo; su tamaño inicial es de 1.5 µ? de ancho x 5 µt? de largo en promedio, su temperatura óptima de crecimiento oscila entre 3 a 45 °C y su actividad se desarrolla dentro de un pH de 3 a 5.5, con una humedad de 60%. Las esporas que produce le permiten a éste resistir ambientes hostiles, ya sea por calor o sequía.
El medio de cultivo que se utiliza para el B. megaterium es un medio nutritivo, que consistía en peptona, agua destilada, extracto de levadura y NaCl .
ETAPAS REALIZADAS EN EL LABORATORIO E-l El día 1 se le cambió el pH de 5.5 a 5.7 al medio de cultivo y se incubó a 45 °C, manteniendo constantes los demás parámetros del medio de cultivo inicial registrándose una mortalidad del 12%.
E-2 El día 11 se resiembran las cepas modificando el medio de cultivo alterando la humedad de 60% a 55%, registrándose una mortalidad del 18%.
E-3 El día 36 se resembraron las cepas modificando el medio de cultivo, alterando la temperatura de 45 °C a 48 "C, registrándose una mortalidad del 22%.
E-4 El día 49 los microorganismos obtenidos se resembraron, manteniendo los mismos parámetros del medio de cultivo, adicionando trazas de organoclorados, presentándose una mortalidad de los microorganismos del 28%.
E-5 El día 74 se agregaron residuos orgánicos al 10% al medio de cultivo de los microorganismos obtenidos, presentándose una mortalidad del 25%.
E-6 El día 102 los microorganismos obtenidos se resiembran, manteniendo las mismas condiciones hasta esta etapa, se realiza un segundo cambio al pH de 5.7 a 6.0. Se presentó una mortalidad del 22%.
E-7 El día 119 se altera la humedad de 55% a 50% del medio de cultivo de los microorganismos obtenidos, Se registró una mortalidad del 24%.
E-8 El día 139 se resembraron las cepas modificando el medio de cultivo, alterando la temperatura de 48 °C a 50 °C, registrándose una mortalidad del 20%.
E-9 El día 154 los microorganismos adaptados se sometieron a un cambio, adicionando al medio de cultivo trazas de organofosforados , presentándose una mortalidad de los microorganismos del 30%.
E-10 El día 189 la cepa obtenida se sometió a un cambio en el medio de cultivo, agregando a 15% material orgánico seco y triturado, se mantienen los demás parámetros, presentándose una mortalidad del 23%.
E-ll El día 209 el medio de cultivo de los microorganismos obtenidos se somete a un tercer cambio de pH de 6.0 a 6.5, presentándose una mortalidad del 15%.
E-12 El día 223 los microorganismos obtenidos se resiembran, y al medio de cultivo se le altera la humedad de 50% a
48% manteniendo los demás parámetros, presentándose una mortalidad del 12%.
E-13 El día 247 se resembraron las cepas modificando el medio de cultivo, alterando la temperatura de 50°C a 52 °C registrándose una mortalidad del 18%.
E-14 El día 263 los microorganismos adaptados se someten a un cambio adicionando trazas mercuriales, presentándose una mortalidad de los microorganismos del 26%.
E-15 El día 295 se agregó un 20% de material orgánico seco y triturado al medio de . cultivo de los microorganismos, manteniéndose los demás parámetros, presentándose una mortalidad del 28%.
E-16 El día 325 los microorganismos adaptados se someten a un cambio de pH de 6.5 a 6.8, manteniendo los demás parámetros y presentándose una mortalidad del 8%.
E-17 El día 337 estos microorganismos se sometieron a un cambio de humedad, de 48% a 45%, manteniéndose las demás condiciones, presentándose una mortalidad de los microorganismos del 10%.
E-18 El día 355 se resembraron las cepas modificando el medio de cultivo, alterando la temperatura de 52 °C, registrándose una mortalidad del 15%.
E-19 El día 367 los microorganismos se sometieron a un cambio en el medio de cultivo, incrementando en un 10% trazas de organoclorados, manteniendo los demás parámetros. En esta etapa se presentó una mortalidad del 20%.
E-20 El día 395 se adicionó un 25% de residuos orgánicos al medio de cultivo, manteniendo los demás parámetros, presentándose una mortalidad del 20%.
E-21 El día 420 la cepa obtenida, se sometió a un cambio de pH de 6.8 a 7.0, manteniendo los demás parámetros, presentándose una mortalidad del 5%.
E-22 El día 430 los microorganismos adaptados se sometieron a un cambio de humedad, de 45% a 40%, manteniendo los demás parámetros, presentándose una mortalidad del 8%.
E-23 El día 445 se resembraron las cepas modificando el medio de cultivo, alterando la temperatura de 55°C a 60°C, registrándose una mortalidad del 10%.
E-24 El día 460 los microorganismos son sometidos a un cambio en el medio de cultivo, incrementando en un 10% trazas de organofosforados, manteniendo los demás parámetros. En esta etapa se presenta una mortalidad del 15%.
E-25 El día 475 cultivo se adicionó 30% de residuos orgánicos al medio de cultivo manteniendo los demás parámetros, presentándose una mortalidad del 16%.
E-26 El día 495 los microorganismos obtenidos se someten a un cambio de pH, de 7.0 a 7.2, manteniendo los demás parámetros del medio de cultivo, presentándose una mortalidad del 5%.
E-27 El día 505 se sometió a un cambio de humedad de 40% a 38% al medio de cultivo, manteniendo los demás parámetros e incubando a 60 °C, presentándose una mortalidad del 7%.
E-28 El día 517 se resiembran las cepas modificando el medio de cultivo, alterando la temperatura de 60 °C a 65 °C; con este cambio se registró una mortalidad del 12%.
E-29 El día 523 con los microorganismos adaptados, se incrementa al medio de cultivo trazas mercuriales en un 10%, se mantienen los demás parámetros, presentándose una mortalidad de los microorganismos del 17%.
E-30 El día 531 los microorganismos adaptados se sometieron a un cambio en el medio de cultivo, aumentándose en 40% los residuos orgánicos, manteniéndose los demás parámetros, registrándose una mortalidad del 8%.
E-31 El día 536 se le altera la humedad 38% a 36% al medio de cultivo de los microorganismos obtenidos, manteniendo los demás parámetros e incubando a 65 °C. Se presentó una mortalidad del 12%.
E-32 El día 541 se resiembran las cepas modificando la temperatura de 65 °C a 70°C, los demás parámetros del medio de cultivo se mantienen, este cambio registra una mortalidad del 15%.
E-33 El día 544 al medio de cultivo de los microorganismos adaptados, se le incrementan trazas de organoclorados en un 15%, los demás parámetros se mantienen, presentándose una mortalidad del 10%.
E-34 El día 549 se somete al medio de cultivo de la cepa obtenida a un cambio, adicionando una concentración 50% de material orgánico seco y triturado, manteniendo los demás parámetros, presentándose una mortalidad del 8%.
E-35 El día 554 se disminuye la humedad de 36 a 32% incubando a 70 °C al medio de cultivo de los microorganismos adaptados, los demás parámetros se mantienen, presentándose una mortalidad de los microorganismos del 15%.
E-36 El día 572 se resiembran las cepas modificando la temperatura de 70°C a 72 °C, los demás parámetros del medio de cultivo se mantienen, este cambio registra una mortalidad del 12%.
E-37 El día 597 se incrementan trazas de mercuriales en un 10% al medio de cultivo de los microorganismos
adaptados, los demás parámetros se mantienen, presentándose una mortalidad del 18%.
E-38 El día 644 se somete a un cambio al medio de cultivo de la cepa obtenida, adicionando una concentración 55% de material orgánico seco y triturado, manteniendo los demás parámetros. En este ensayo se presenta una mortalidad del 10%.
E-39 El día 679 se disminuye la humedad de 32 a 30% incubando a 72 °C del medio de cultivo de los microorganismos adaptados, los demás parámetros se mantienen, presentándose una mortalidad de los microorganismos del 8%.
E-40 El día 699 se resiembran las cepas modificando la temperatura de 72 °G a 75 °C, los demás parámetros del medio de cultivo se mantienen, este cambio registra una mortalidad del 5%.
E-41 El día 724 se incrementan trazas de órgano fosforados en un 10% al medio de cultivo de los microorganismos
adaptados, los demás parámetros se mantienen, presentándose una mortalidad del 5%.
E-42 El día 759 se somete a un cambio adicionando una concentración 60% de material orgánico seco y estabilizado al medio de cultivo de la cepa obtenida, manteniendo los demás parámetros, presentándose una mortalidad del 8%.
E-43 El día 799 se disminuye la humedad de 30% a 28% incubando a 75 °C el medio de cultivo de los microorganismos adaptados, los demás parámetros se mantienen, presentándose una mortalidad de los microorganismos del 4%.
RESULTADOS OBTENIDOS Al finalizar el proceso de adaptación el medio y las características de cultivo fueron las siguientes:
Tabla No.4 Cuadro comparativo
El microorganismo presenta una actividad normal en estas condiciones, encontrándose en sus membranas trazas de Nitrógeno .
Se observa además que el material orgánico constituido en un 80% de hidratos de Carbono se estabiliza en un periodo de 35 días en promedio, a diferencia del microorganismo silvestre con el cual el tiempo fue de 120 días.
BASILLUS MEGATERIUM - GRAMPOSITIVO ¦ AEROBIOS ó ANAEROBIOS FACULTATIVOS Se realizan recuentos de colonias cada 48 horas - Coloraciones gram verde de malac
Bacillus subtillis Es un bacilo Gram positivo, esporógeno, aerobio estricto, con una capa gruesa de mureína, su tamaño inicial es en promedio de 0.75 µt? de grosor x 0.9 µt? de largo; su temperatura ambiente de crecimiento oscila entre 15 a 55 °C, dado que el hábitat natural de B. subtilis es el suelo, el cual está sometido a grandes fluctuaciones de temperatura. Sin embargo las células de este microorganismo sufren un cambio fenotípico cuando se modifica la temperatura de 30 °C a 45°C o a 80°C. Su actividad se desarrolla dentro de un pH de 4.7 a 5.5, una humedad de 70 a 80% y acepta unos niveles de concentración tóxica mínima, representadas en trazas.
Es utilizado para la producción de un antibiótico denominado bacitracina, que actúa contra Gram negativas deteriorando su membrana celular e inhibiendo la formación de la pared. Además en la producción de enzimas como la amilasa bacteriana útil en la industria del papel y textil, y enzima aplicada para curtir pieles, quitar manchas y ablandar carne.
Para el aislamiento de los microorganismos se utilizó el Modelo Microcosmos (Kabir y cois, 1995) . Las cepas se clasificaron mediante métodos tradicionales (Taxonomía
numérica) e inmunoquímicos (inmunofluorescencia indirecta-IFI, según Llewot y Stead, 1991) . Se utilizaron cepas puras procedentes de diferentes sectores. El medio de cultivo que se utiliza para el B. subtilis es un medio nutritivo, con 5% de agar-soya manteniendo los parámetros de pH, niveles mínimos de oxígeno, humedad y temperatura de su estado original .
ETAPAS REALIZADAS EN EL LABORATORIO E-l El día 1 al medio de cultivo se le cambia el pH inicial de 5.9, manteniendo constantes los demás parámetros. Con este cambio el crecimiento es lento y se registra una mortalidad del 68%.
E-2 El día 46 se resembraron las cepas modificando el medio de cultivo y se agregó 10% de materia orgánica; con este cambio se registró una mortalidad del 52%.
E-3 El día 86 con los microorganismos obtenidos, manteniendo los mismos parámetros del caldo de cultivo, se someten a un cambio de temperatura de 40°C a 55 °C, presentándose una mortalidad del 14%.
E-4 El día 106 se realiza una resiembra de microorganismos, manteniendo los mismos parámetros del caldo de cultivo, exceptuando la humedad, la cual se altera de 80% a 70%, presentándose una baja mortalidad del 7%.
E-5 El día 126 se realiza una resiembra de microorganismos, manteniendo los mismos parámetros, incrementando trazas de organoclorados, presentándose una mortalidad en el cultivo de los microorganismos en un 78%.
E-6 El día 186 se realiza una resiembra de microorganismos, al medio de cultivo se le realiza un segundo cambio de pH de 5.9 a 6.1. Se presentó una mortalidad del 31%.
E-7 El día 251 la cepa obtenida se sometió a un cambio en el medio de cultivo, agregando un 15% de material orgánico seco y triturado, manteniendo los demás parámetros constantes . En esta etapa se presentó una mortalidad del 8% de la población.
E-8 El día 271 los microorganismos adaptados se someten a un cambio de temperatura de 57 a 59°C, manteniendo los
demás parámetros; este cambio presenta una mortalidad del 24%.
E-9 El día 296 los microorganismos obtenidos se someten a un cambio de humedad, de 70% a 65%, presentándose una mortalidad del 55%, la movilidad y crecimiento es mayor, visualizándose un cambio a nivel de fenotipo.
E-10 El día 346 con los microorganismos obtenidos se realiza una resiembra, manteniendo los mismos parámetros, adicionando trazas de organofosforados, presentándose una mortalidad del 65%.
E-ll El día 394 los microorganismos se someten a un tercer cambio de pH de 6.1 a 6.5, manteniendo los demás parámetros; en este cambio se presentó una mortalidad del 45%.
E-12 El día 514 los microorganismos son sometidos a un cambio en el medio de cultivo, agregando un 20% de material orgánico seco y triturado, manteniendo los demás parámetros e incubando a 59 °C. En este ensayo se presenta una mortalidad del 22%.
E-13 El día 524 los microorganismos adaptados se someten a un cambio de temperatura de 59 a 62 °C, presentándose una mortalidad del 17%.
E-14 El día 531 estos microorganismos se someten a un cambio de humedad, de 65% a 55%, manteniendo los demás parámetros, se presentó una mortalidad de los microorganismos del 58%.
E-15 El dia 596 con los microorganismos obtenidos se realiza una resiembra, manteniendo los mismos parámetros, adicionando trazas mercuriales, presentándose una mortalidad del 68%.
E-16 El día 626 a los microorganismos obtenidos se someten a un cuarto cambio de pH, de 6.5 a 6.8, manteniendo los demás parámetros del medio de cultivo, presentándose una mortalidad del 24%.
E-17 El día 641 se adicionó al medio de cultivo de la cepa obtenida, un 25% de material orgánico seco y triturado, manteniendo los demás parámetros de humedad, temperatura
e incubando a 62 °C. En ésta etapa se presentó una mortalidad del 24% de la población.
E-18 El día 656 los microorganismos adaptados se someten a un cambio de temperatura de 62°C a 65°C, manteniendo los parámetros de humedad, medio de cultivo, concentraciones de trazas químicas y pH, presentándose una mortalidad del 20%.
E-19 El día 681 estos microorganismos se someten a un cambio de humedad, de 55% a 53%, manteniendo los demás parámetros, presentándose una mortalidad de los microorganismos del 58%.
E-20 El día 746 con los microorganismos obtenidos se realiza una resiembra, manteniendo los mismos parámetros, adicionando trazas de organoclorados en un 10%, presentándose una mortalidad del 36%.
E-21 El día 801 los microorganismos obtenidos se someten a un quinto cambio de pH de 6.8 a 7.0, manteniéndose los demás parámetros del medio de cultivo; presentándose una mortalidad del 2%.
E-22 El día 816 al medio de cultivo de los microorganismos se agregó 30% de material orgánico seco y triturado, manteniendo los demás parámetros de humedad, temperatura e incubando a 65 °C. En esta etapa se presentó una mortalidad del 5% de la población.
E-23 El día 831 los microorganismos adaptados se someten a un cambio de temperatura de 65 °C a 68 °C, manteniendo los parámetros de humedad, medio de cultivo y pH, presentándose una mortalidad del 7%.
E-24 El día 841 los microorganismos adaptados se someten a un cambio de humedad, de 53% a 50%, manteniéndose los demás parámetros, registrándose una mortalidad del 23%.
E-25 El día 856 con los microorganismos adaptados, al medio de cultivo se incrementan las trazas de organofosforados en un 10%, manteniendo los demás parámetros, registrándose una mortalidad del 68%.
E-26 El día 886 los microorganismos obtenidos se someten a un sexto cambio de pH, de 7.0 a 7.2, manteniendo los demás
parámetros del medio de cultivo e incubando a 68 °C. Se presentó una mortalidad del 17%.
E-27 El día 896 la cepa obtenida se somete a un cambio en el medio de cultivo, agregándose un 40% de material orgánico seco y triturado, manteniéndose los demás parámetros de humedad, temperatura e incubando a 68°C. Se registra una mortalidad del 13%.
E-28 El día 904 los microorganismos adaptados, se someten a un cambio de temperatura de 68 a 72 °C, manteniendo los demás parámetros del medio de cultivo, presentándose una mortalidad del 10%.
E-29 El día 911 los microorganismos adaptados se someten a un cambio de humedad de 50% a 45%, manteniéndose los demás parámetros del medio de cultivo, presentándose una mortalidad del 12%.
E-30 El día 926 al medio de cultivo de los microorganismos obtenidos se incrementan las trazas mercuriales en un 10%, manteniendo los demás parámetros, presentándose una mortalidad del 32%.
E-31 El día 954 al medio de cultivo de los microorganismos se agregó 50% de material orgánico seco y triturado, manteniéndose los demás parámetros de humedad, temperatura e incubándose a 12°d, presentándose una mortalidad del 14% de la población.
E-32 El día 975 al medio de cultivo de los microorganismos obtenidos se le realiza un cambio de humedad, de 45% a 40%, presentándose una mortalidad del 16%.
E-33 El día 1023 al medio de cultivo de los microorganismos obtenidos se le realiza un cambio de temperatura de 72 °C a 75 °C, presentándose una mortalidad del 20%.
E-34 El día 1054 al medio de cultivo de los microorganismos obtenidos se le realiza un aumento de material orgánico al medio de cultivo, incubando a 75 °C, presentándose una mortalidad del 18%.
E-35 El día 1118 al medio de cultivo de los microorganismos obtenidos se le realiza un cambio en la humedad,
disminuyéndola de 40 a 36% e incubando a 75 °C, presentándose una mortalidad del 20%.
E-36 El día 1178 al medio de cultivo de los microorganismos obtenidos se le realiza un cambio aumentando la incubación de 75 a 78 °C, presentándose una mortalidad del 10%.
E-37 A partir del día 1198 las cepas se mantienen en una incubación a 78 °C, humedad de 36% y un medio de cultivo con mas del 50% de material orgánico estabilizado, presentándose una mortalidad del 14%.
RESULTADOS OBTENIDOS La características del medio son las siguientes (Tabla
No. 5) :
Tabla No. 5. Cuadro comparativo Características iniciales y Finales
Al finalizar el proceso de adaptación, el microorganismo presenta una actividad normal en dicho medio encontrándose en su membrana celular trazas de fósforo (P2O5) .
Se observa además que el material orgánico constituido en un 80% de hidratos de Carbono se estabiliza en un periodo de 35 días en promedio a diferencia del microorganismo silvestre con el cual el tiempo fue de 120 días.
BASILLUS SUBTILLIS - GRAMPOSITIVO - AEROBIO ESTRICTO Se realizan recuentos de colonias cada 24 horas utilizando coloraciones de ram verde de mala uita
Bacillus stearother ophilus Esta especie es un bacilo Gram positivo, termófilo, formador de esporas, aerobio o anaerobio facultativo. Su tamaño inicial es de 0.9 µ?t? de ancho x 3.5 µp\ de largo en promedio, su temperatura óptima de crecimiento oscila entre 30 a 75 °C, su membrana celular es completamente lisa, y su actividad se desarrolla en un rango de pH de 2.0 a 4.5 y una humedad de 60%. Es una de las bacterias importantes cuando empieza el incremento de temperatura. Este microorganismo suele ser dominante en zonas con temperaturas alrededor de los 55 °C.
El medio de cultivo es nutritivo, con 5% de agar-soya manteniendo los parámetros de pH, niveles mínimos de oxígeno, humedad y temperatura que su estado original requería.
ETAPAS REALIZADAS EN EL LABORATORIO E-l El día 1 al medio de cultivo se le cambia el grado de acidez inicial, llevándolo a un pH de 4.7 manteniendo constantes los demás parámetros, registrándose una mortalidad del 16%.
E-2 El día 21 se resiembran las cepas modificando el medio de cultivo, alterando la humedad de 60% a 55%; con este cambio se registra una mortalidad del 24%.
E-3 El dia 66 los microorganismos obtenidos, manteniendo los mismos parámetros del caldo de cultivo, se someten a un cambio, aumentando el porcentaje de residuos orgánicos en 10%; este cambio presenta una mortalidad del 32% de los microorganismos.
E-4 El dia 116 a los microorganismos obtenidos se resiembran, manteniendo los mismos parámetros del caldo de cultivo, adicionando trazas de organoclorados , presentándose una mortalidad de los microorganismos del 38%.
E-5 El día 176 se resiembran los microorganismos obtenidos, manteniendo las mismas condiciones hasta esta etapa; se realiza un segundo cambio de pH de 4.7 a 5.0. Se presentó una mortalidad del 32%. Los que resistieron el cambio presentaron un retraso en su crecimiento .
E-6 El día 226 a los microorganismos obtenidos, se les realiza un segundo cambio a la humedad, de 55% a 50%. Se registró una mortalidad del 25%. Los que resistieron el cambio presentaron un retraso en su crecimiento .
E-7 El día 271 se sometió a la cepa obtenida a un cambio en el medio de cultivo, agregando material orgánico seco y triturado hasta un 15%, manteniendo los demás parámetros . En esta etapa se presenta una mortalidad del 42% de la población.
E-8 El día 301 se sometió a los microorganismos adaptado a un cambio, adicionando trazas de organofosforados, presentándose una mortalidad de los microorganismos del 27%.
E-9 El día 346 los microorganismos obtenidos se sometieron a un tercer cambio de pH de 5.0 a 5.5; presentándose una mortalidad del 15% y se registra un crecimiento en su estructura .
E-10 El día 366 los microorganismos obtenidos se resiembran, y al medio de cultivo se le altera la humedad de 50% a
45% manteniendo los demás parámetros, presentándose una mortalidad del 25%.
E-ll El día 411 se agregó 20% de material orgánico seco y triturado, al medio de cultivo de los microorganismos manteniendo los demás parámetros . En esta etapa se presentó una mortalidad del 40% de la población.
E-12 El día 486 los microorganismos se sometieron a un cambio en el medio de cultivo, agregando trazas químicas mercuriales, manteniéndose los demás parámetros. En esta etapa se presentó una mortalidad del 33%.
E-13 El día 546 los microorganismos adaptados se someten a un cambio de pH de 5.0 a 6.0, manteniéndose los demás parámetros a los que a sido sometida la cepa, presentándose una mortalidad del 15%.
E-14 El día 564 estos microorganismos se someten a un cambio de humedad, de 45% a 42%, manteniéndose los demás parámetros; presentándose una mortalidad del 12%.
El día 574 se adicionó 25% de residuos orgánicos al medio del cultivo, manteniéndose los demás parámetros, registrándose una mortalidad del 33%.
16 El día 619 los microorganismos obtenidos se resiembran en un medio de cultivo, incrementando las trazas de órganoelorados en un 10%, manteniendo los demás parámetros, registrándose una mortalidad del 22%.
E-17 El día 644 la cepa obtenida se sometió a un cambio de pH de 6.0 a 6.5, manteniendo los demás parámetros. En esta etapa se presentó una mortalidad del 20% de la población .
E-18 El día 659 los microorganismos adaptados se someten a un cambio de humedad de 42% a 40%, manteniéndose los demás parámetros, presentándose una mortalidad del 16%.
E-19 El día 677 se adicionó un 30% de residuos orgánicos al medio del cultivo, manteniendo los demás parámetros, presentándose una mortalidad del 15%.
E-20 El día 697 se incrementó en un 10% las trazas de organofosforados al medio del cultivo de los microorganismos adaptados, presentándose una mortalidad del 12%.
E-21 El día 715 los microorganismos obtenidos se someten a un cambio de pH de 6.5 a 6.8, manteniéndose los demás parámetros del medio de cultivo, presentándose una mortalidad del 8%.
E-22 El día 722 se sometió el medio de cultivo de los microorganismos a un cambio de humedad de 40% a 38%, manteniendo los demás parámetros e incubando a 75°C. En este ensayo se presenta una mortalidad del 18% de la población.
E-23 El día 747 los microorganismos adaptados se someten a un cambio en el medio de cultivo, aumentando a un 40% los residuos orgánicos, manteniendo los demás parámetros, presentándose una mortalidad del 20%.
E-24 El día 762 con los microorganismos adaptados al medio de cultivo, se incrementó en un 10% las trazas mercuriales, manteniendo los demás parámetros, presentándose una mortalidad de los microorganismos del 15%.
E-25 El día 782 se sometió al medio de cultivo a un cambio de pH de 6.8 a 7.0, manteniendo los demás parámetros, presentándose una mortalidad de los microorganismos del 15%.
E-26 El día 802 se sometió al medio de cultivo a un cambio de humedad, de 40% a 38%, manteniéndose los demás parámetros del medio de cultivo e incubando a 75 °C. Se presentó una mortalidad del 10%. ·
E-27 El día 817 la cepa obtenida se sometió a un cambio en el medio de cultivo, adicionando un 50% de material orgánico seco y triturado, manteniéndose los demás parámetros. En este ensayo se presentó una mortalidad del 8%.
E-28 El día 824 con los microorganismos adaptados, al medio de cultivo se le incrementó trazas de organoclorados en
un 15%, manteniéndose los demás parámetros, presentándose una mortalidad de los microorganismos del 18%.
E-29 El día 849 los microorganismos adaptados se sometieron a un cambio de pH, de 7.0 a 7.2, manteniéndose los demás parámetros del medio de cultivo, presentándose una mortalidad del 15%.
E-30 El día 861 se altera la humedad de 38% a 36% al medio de cultivo de los microorganismos obtenidos, manteniéndose los demás parámetros, incubando a 75 °C. Se presentó una mortalidad del 12%.
E-31 El día 876 se incrementa la materia orgánica al medio de cultivo de los microorganismos en un 55%, manteniéndose los demás parámetros, presentándose una mortalidad de los microorganismos del 6%.
E-32 El día 876 se le incrementan trazas de organofosforados en un 15% al medio de cultivo de los microorganismos, manteniéndose los demás parámetros, presentándose una mortalidad de los microorganismos del 4%.
RESULTADOS OBTENIDOS Al finalizar el proceso de adaptación, el microorganismo presenta una actividad normal en el medio, encontrándose en su membrana celular trazas de fósforo (P2O5) .
Las características del medio de cultivo y de desarrollo microbiano fueron las siguientes: Tabla No. 6. Cuadro comparativo Características iniciales y Finales
Se observa además que el material orgánico constituido en un 80% de fibras celulolítica se estabiliza en un periodo de 35 días en promedio a diferencia del microorganismo silvestre con el cual el tiempo fue de 120 días.
BASILLUS Stearothermophilus - GRAMPOSITIVO - AEROBIOS ó ANAEROBIOS FACULTATIVOS Se realizan recuentos de colonias cada 48 horas - Coloraciones gram verde de mala uita
Cellulomonas flavigena Bacilos Gram positivos a Gram variables, irregulares, de 0.5 µt? de diámetro por 0.7 -2.0 fíra o más de largo, los cuales algunas veces son rectos, angulares o curvos. A medida que el cultivo envejece, los bacilos se acortan. Su desarrollo óptimo se presenta entre 30 a 37°C de temperatura. Son móviles, se desplazan utilizando un flagelo que generalmente es polar o subpolar. Son quimioorganotróficos . Este bacilo es aerobio pero puede desarrollarse en condiciones de anaerobiosis . Tiene actividad celulolxtica.
El medio de cultivo que se utiliza para su mantenimiento es un medio nutritivo, con 5% de agar-soya manteniendo los parámetros de pH, humedad y temperatura óptima para su crecimiento.
ETAPAS REALIZADAS EN EL LABORATORIO E-l El día 1 los microorganismos obtenidos se desarrollaron bajo los mismos parámetros del medio de cultivo inicial, pero con adición de un 5% de residuos orgánicos, presentándose una disminución o mortalidad del 12%.
E-2 El día 16 se resiembran las cepas modificando el medio de cultivo, alterando la humedad de 90% a 85%, con este cambio se registra una mortalidad del 10%.
E-3 El día 26 se resiembran las cepas modificando el medio de cultivo, alterando la temperatura de 37°C a 40°C; con este cambio se registra una mortalidad del 14%.
E-4 El día 46 los microorganismos obtenidos se resiembran, manteniendo los mismos parámetros del caldo de cultivo, adicionando trazas de organoclorados , presentándose una mortalidad de los microorganismos del 48%.
E-5 El día 96 la cepa obtenida se somete a un cambio en el medio de cultivo, adicionando un 10% de material orgánico seco y triturado, manteniendo los demás parámetros constantes . En esta etapa se presenta una mortalidad del 15% de la población.
E-6 El día 119 al medio de cultivo de los microorganismos obtenidos, se le realiza un cambio de humedad de 85% a 80%. Se registró una mortalidad del 32%.
E-7 El día 184 se resiembran las cepas modificando el medio de cultivo, alterando la temperatura de 40°C a 45 °C, con este cambio se registra una mortalidad del 22%.
E-8 El día 214 al medio de cultivo de los microorganismos adaptados se les somete a un cambio adicionando trazas de organofosforados, presentándose una mortalidad de los microorganismos del 43%.
E-9 El día 259 al medio de cultivo de los microorganismos se le agrega un 15% de material orgánico seco y triturado, manteniendo los demás parámetros constantes . En esta etapa se presenta una mortalidad del 24% de la población.
E-10 El día 286 los microorganismos obtenidos se resiembran, y al medio de cultivo se le altera el rango de humedad de 80% a 75% manteniendo los demás parámetros, presentándose una mortalidad del 35%.
E-ll El día 323 se resiembran las cepas modificando el medio de cultivo, alterando el rango de temperatura de 45 °C a
50 °C, con este cambio se registra una mortalidad del 22%.
E-12 El dia 353 los microorganismos adaptados se someten a un cambio adicionando trazas mercuriales, presentándose una mortalidad de los microorganismos del 48%.
E-13 El día 401 al medio del cultivo se le adiciona un 20% de residuos orgánicos manteniendo los demás parámetros, presentándose una mortalidad del 12%.
E-14 El dia 421 estos microorganismos se someten a un cambio de humedad, de 75% a 70%, se manteniem las demás condiciones, presentándose una mortalidad de los microorganismos del 30%.
E-15 El día 454 se resiembran las cepas modificando el medio de cultivo, alterando la temperatura de 50 °C a 55°C; con este cambio se registra una mortalidad del 20%.
E-16 El día 477 los microorganismos son sometidos a un cambio en el medio de cultivo, aumentando las trazas químicas de organofosforados en un 10%, manteniendo los demás
parámetros . En esta etapa se presenta una mortalidad del 37%.
E-17 El día 517. al medio del cultivo se le adiciona un 25% de residuos orgánicos, manteniendo los demás parámetros, presentándose una mortalidad del 15%.
E-18 El día 538 los microorganismos adaptados se someten a un cambio de humedad de 70% a 65%, manteniendo los demás parámetros, presentándose una mortalidad del 32%.
E-19 El día 573 se resiembran las cepas modificando el medio de cultivo, alterando la temperatura de 55 °C a 60°C, con este cambio se registra una mortalidad del 35%.
El día 610 con los microorganismos adaptados al medio de cultivo, se adicionan trazas de organofosforados en un 10%, manteniendo los demás parámetros, presentándose una mortalidad de los microorganismos del 42%.
E-21 El día 650 los microorganismos adaptados se someten a un cambio en el medio de cultivo, aumentando a un 30% los
residuos orgánicos, manteniendo los demás parámetros, presentándose una mortalidad del 17%.
E-22 El día 677 el medio de cultivo de los microorganismos se somete a un cambio de humedad, de 65% a 60%; manteniendo los demás parámetros e incubando a 60 °C. En este ensayo se presenta una mortalidad del 26% de la población.
E-23 El día 710 se resiembran las cepas modificando el medio de cultivo, alterando el rango de temperatura de 60 °C a 65 °C. Con este cambio se registra una mortalidad del 38%.
E-24 El día 795 con los microorganismos adaptados, se adicionan trazas mercuriales en un 10% al medio de cultivo, los demás parámetros que hasta esta etapa se ha sometido se mantienen, presentándose una mortalidad de los microorganismos del 68%.
E-25 El día 882 se somete la cepa obtenida a un cambio en el medio de cultivo, agregando un 35% de material orgánico
seco y triturado, manteniendo los demás parámetros. En este ensayo se presenta una mortalidad del 65%.
E-26 El día 972 se altera el grado de humedad de 60% a 58%, al medio de cultivo, manteniendo los demás parámetros e
.incubando a 65°C. Se presenta una mortalidad del 24%.
E-27 El día 1057 se resiembran las cepas modificando el medio de cultivo, alterando la temperatura de 65°C a 68°C; con este cambio se registra una mortalidad del 43%.
E-28 El día 1109 con los microorganismos adaptados, al medio de cultivo se le adicionan trazas de organofosforados en un 15%; los demás parámetros se mantienen, presentándose una mortalidad de los microorganismos del 40%.
E-29 El día 1159 la cepa obtenida se somete a un cambio en el medio de cultivo, agregando un 40% de material orgánico seco y triturado, manteniendo los demás parámetros . En este ensayo se presenta una mortalidad del 32%.
E-30 El día 1214 con los microorganismos obtenidos, al medio de cultivo se les alteró la humedad de 58% a 55%, manteniendo los demás parámetros del medio de cultivo, incubando a 68°C. Se presenta una mortalidad del 36%.
E-31 El día 1261 se resiembran las cepas modificando el medio de cultivo, alterando la temperatura de 68 °C a 70 °C; con este cambio se registra una mortalidad del 32%.
E-32 El día 1302 con los microorganismos adaptados, al medio de cultivo se le adicionan trazas de organoclorados en un 15%; los demás parámetros se mantienen, presentándose una mortalidad de los microorganismos del 30%.
E-33 El día 1334 se somete a la cepa obtenida a un cambio en el medio de cultivo, adicionando un 50% de material orgánico seco y triturado, manteniendo los demás parámetros . En este ensayo se presenta una mortalidad del 26%.
E-34 El día 1359 con los microorganismos obtenidos, al medio de cultivo se le altera la humedad de 55% a 50%,
manteniendo los demás parámetros del medio de cultivo, incubando a 70 °C. Se presenta una mortalidad del 23%.
E-35 El día 1380 se resiembran las cepas modificando el medio de cultivo, alterando la temperatura de 70°C a 72°C; con este cambio se registra una mortalidad del 28%.
E-36 El día 1417 con los microorganismos adaptados, al medio de cultivo se incrementan trazas mercuriales en un 15%; los demás parámetros que hasta esta etapa se han sometido se mantiene, presentándose una mortalidad de los microorganismos del 26%.
E-37 El día 1452 se somete a la cepa obtenida a un cambio en el medio de cultivo, adicionando un 55% de material orgánico seco y triturado, manteniendo los demás parámetros. En este ensayo se presenta una mortalidad del 18%.
E-38 El día 1474 con los microorganismos obtenidos, al medio de cultivo se le altera la humedad de 50% a 45%, manteniendo los demás parámetros del medio de cultivo, incubando a 72 °C. Se presenta una mortalidad del 15%.
E-39 El día 1493 se resiembran las cepas modificando el medio de cultivo, alterando la temperatura de 72 °C a 74°C; con este cambio se registra una mortalidad del 12%.
E-40 El día 1510 con los microorganismos adaptados, al medio de cultivo se incrementan trazas de organofosforados en un 20%; los demás parámetros que hasta esta etapa se han sometido se mantienen, presentándose una mortalidad de los microorganismos del 17%.
E-41 El día 1530 se somete la cepa obtenida a un cambio en el medio de cultivo, adicionando material orgánico seco y triturado, manteniendo los demás parámetros. En este ensayo se presenta una mortalidad del 12%.
E-42 El día 1544 con los microorganismos obtenidos, al medio de cultivo se le altera la humedad de 45% a 40%, manteniendo los demás parámetros del medio de cultivo, incubando a 7 °C. Se presenta una mortalidad del 8%.
E-43 El día 1557 se resiembran las cepas modificando el medio de cultivo, alterando la temperatura de 74 °C a
77°C; con este cambio se registra una mortalidad del 5%.
E-44 El día 1572 con los microorganismos adaptados, al medio de cultivo se incrementan trazas de organoclorados en un
25% los demás parámetros se mantiene, presentándose una mortalidad de los microorganismos del 12%.
E-45 El día 1587 se somete la cepa obtenida a un cambio en el medio de cultivo, adicionando material orgánico seco y triturado, manteniendo los demás parámetros. En este ensayo se presenta una mortalidad del 6%.
E-46 El día 1593 se le altera la humedad al medio de cultivo de 401 a 361, manteniendo los demás parámetros del medio de cultivo, incubando a 11°Z. Se presenta una mortalidad del 10%.
E-47 El ¦ día 1613 se incrementan trazas de mercuriales al medio de cultivo en un 30% e incubándose a 77°C, los demás parámetros se mantienen, presentándose una mortalidad de 12%.
E-48 El día 1633 la cepa obtenida se somete a un cambio en el medio de cultivo, adicionando material orgánico seco y triturado, manteniendo los demás, parámetros. En este ensayo se presenta una mortalidad del 6%.
E-49 El día 1650 se altera la humedad de 36% a 32%, manteniendo los demás parámetros del medio de cultivo, incubando a 77 °C. Se presenta una mortalidad del 4%.
RESULTADOS OBTENIDOS Al finalizar el proceso de adaptación, el medio de cultivo y las características de desarrollo del microorganismo fueron las siguientes (Tabla No 7) :
Tabla No. 7. Cuadro Comparativo Características Iniciales y Finales
El crecimiento y desarrollo del microorganismo es óptimo con estas características fisicoquímicas y ambientales. En su membrana celular presenta trazas de potasio.
Se observa además que el material orgánico constituido en un 80% de fibras celulolíticasa se estabiliza en un
periodo de 35 días en promedio, diferenciándose del comportamiento de la cepa silvestre de Cellulomonas. sp. cuyo tiempo de biodegradacion es 120 días.
Cellulomonas flavigena - GRAMPOSITIVO A GRAMNEGATIVA- AEROBIAS
Se realizan recuentos de colonias cada 24 horas - Coloraciones gram verde de mala uita
Streptomyces thermonitrificans Son microorganismos Gram positivos, formadores de endosporas, presentan bacilos irregulares de 0.5 a 1.0 µt de diámetro por 0.7 - 2.0 µp? o más de largo, los cuales algunas veces son rectos, angulares o curvos. A medida que el cultivo envejece, los bacilos se acortan. Su desarrollo óptimo se presenta en un rango de 25 a 65 °C de temperatura. Son móviles, se desplazan utilizando un flagelo que generalmente es polar o subpolar. Son quimioorganotróficos . Este bacilo es aerobio pero puede desarrollarse en condiciones de anaerobiosis .
ETAPAS REALIZADAS EN EL LABORATORIO E-l El día 1 se resiembran las cepas modificando el medio de cultivo, inyectando aireación forzada y disminuyendo la humedad de 90% a 85%, con este cambio se registra una mortalidad del 8% y el cubrimiento total del campo se da a los 2 días .
E-2 El día 8 a los microorganismos obtenidos se resiembran, manteniendo la aireación forzada y los mismos parámetros del caldo de cultivo, adicionando trazas de
organoclorados , presentándose una mortalidad del 43% y el campo se llena a los 8 días .
E-3 El día 20 se mantienen los mismos parámetros del medio de cultivo, y además se le adiciona 10% de residuos orgánicos pulverizados y esterilizados, este cambio presenta una mortalidad del 40% de los microorganismos y el campo se cubre totalmente a los 55 días.
E-4 El día 80 los microorganismos obtenidos se someten a un cambio de humedad de 85% a 80%. Se registró una mortalidad del 35%, el cubrimiento total del campo se dió a los 42 días.
E-5 El día 127 al medio de cultivo de los microorganismos adaptados se adicionan trazas de organofosforados, presentándose una mortalidad de los microorganismos del 45% y el cubrimiento del campo se da a los 58 días.
E-6 El día 190 se somete a un cambio en el medio de cultivo a la cepa obtenida, adicionando un 15% de material orgánico seco y triturado, se mantienen los demás parámetros constantes . En esta etapa se presenta una
mortalidad del 37% de la población, cubriéndose totalmente el campo a los 41 días.
El dia 236 al medio de cultivo se le altera el rango de humedad de 80% a 75% manteniendo los demás parámetros, presentándose una mortalidad del 35% y el campo se cubre totalmente a los 39 días.
E-8 El día 280 a los microorganismos adaptados se les someten a un cambio, adicionando trazas mercuriales, presentándose una mortalidad de los microorganismos del 32%, el cubrimiento total del campo se da a los 55 días .
El día 340 se le agrega un 20% de material orgánico seco y triturado al medio de cultivo de los microorganismos, se mantienen los demás parámetros constantes. En esta etapa se presenta una mortalidad del 34% de la población, recuperándose totalmente el campo a los 45 días.
E-10 El día 390 se someten a un cambio de humedad a estos microorganismos, de 75% a 70%, manteniendo las demás
condiciones, presentándose una mortalidad de los microorganismos del 30%; el cubrimiento total del campo se registra a los 43 días.
E-ll El día 438 los microorganismos son sometidos a un cambio en el medio de cultivo, aumentando en un 10% las trazas químicas de organofosforados, manteniendo los demás parámetros . En esta etapa se presenta una mortalidad del 28%.
E-12 El día 483 al medio del cultivo se adiciona un 25% de residuos orgánicos manteniendo los demás parámetros, presentándose una mortalidad del 30%.
E-13 El día 535 se someten a un cambio de humedad a los microorganismos adaptados, de 70% a 65%, manteniendo los demás parámetros, presentándose una mortalidad del 35%.
E-14 El día 590 a los microorganismos adaptados al medio de cultivo se aumentan las trazas de organofosforados en un 10% y la temperatura de 65 a 72 °C, los demás
parámetros que hasta esta etapa se han sometido se mantienen, presentándose una mortalidad del 28%.
E-15 El dia 638 al medio del cultivo se le adiciona un 30% de residuos orgánicos manteniendo los demás parámetros, presentándose una mortalidad del 25%.
E-16 El dia 691 se somete a un cambio de rango de humedad al medio de cultivo de los microorganismos, de 65% a 60%; manteniendo los demás parámetros, incubando a 72 °C. En este ensayo se presenta una mortalidad del 22% de la población.
E-17 El día 746 se adicionan trazas mercuriales en un 10% a los microorganismos adaptados al medio de cultivo, los demás parámetros se mantienen; presentándose una mortalidad de los microorganismos del 20%.
E-18 El dia 786 se somete a un cambio en el medio de cultivo a los microorganismos adaptados, aumentando a un 40% los residuos orgánicos, manteniendo los demás parámetros, presentándose una mortalidad del 21%.
E-19 El día 834 se altera la humedad del medio de cultivo, de 60% a 55%, manteniendo los demás parámetros del medio de cultivo, incubando a 72 °C. Se presenta una mortalidad del 26%.
E-20 El día 892 se adicionan trazas de organofosforados en un 15% al medio de cultivo de los microorganismos adaptados, manteniendo los demás parámetros, presentándose una mortalidad de los microorganismos del 24%.
E-21 El día 952 a la cepa obtenida se somete a un cambio en el medio de cultivo, agregando un 50% de material orgánico seco y triturado, manteniendo los demás parámetros. En este ensayo se presenta una mortalidad del 20%.
E-22 El día 987 se altera la humedad al medio de cultivo, de 55% a 50%, manteniendo los demás parámetros del medio de cultivo, incubando a 72 °C. Se presenta una mortalidad del 15%.
E-23 El día 1027 se incrementan trazas de organoclorados en un 15% al medio de cultivo de los microorganismos adaptados; los demás parámetros se mantienen, presentándose una mortalidad del 12%.
E-24 El día 1057 se somete a un cambio el medio de cultivo, agregando un 50% de material orgánico seco y triturado, manteniendo los demás parámetro, incubando a 11°0.. Se presenta una mortalidad del 20%.
E-25 El día 1099 se altera el grado de humedad al medio de cultivo, de 50% a 45%, manteniendo los demás parámetros del medio de cultivo, incubando a 72 °C. Se presenta una mortalidad del 22%.
E-26 El día 1144 se incrementan trazas mercuriales en un 20% al medio de cultivo de los microorganismos adaptados; los demás parámetros se mantienen, presentándose una mortalidad del 34%.
E-27 El día 1209 se somete a un cambio en el medio de cultivo, agregando un 55% de material orgánico seco y
triturado, manteniendo los demás parámetro, incubando a 72 °C. Se presenta una mortalidad del 30%.
E-28 El día 1260 se altera el grado de humedad al medio de cultivo, disminuyendo de un rango de 45% a 40%, manteniendo los demás parámetros del medio de cultivo, incubando a 72 °C. Se presenta una mortalidad del 23%.
E-29 El día 1297 al medio de cultivo de los microorganismos adaptados, se incrementan trazas organoclorados en un
25%; los demás parámetros se mantienen, presentándose una mortalidad del 15%.
E-30 El día 1335 se somete a un cambio el medio de cultivo, agregando un 60% de material orgánico seco y triturado, manteniendo los demás parámetro, incubando a 72 °C. Se presenta una mortalidad del 16%.
E-31 El día 1370 se altera el grado de humedad al medio de cultivo, disminuyendo de un rango de 40% a 35%, manteniendo los demás parámetros del medio de cultivo, incubando a 72 °C. Se presenta una mortalidad del 8%.
RESULTADOS OBTENIDOS Tabla No.8. Cuadro Comparativo Características Iniciales y Finales .
El microorganismo presenta una actividad normal en dicho medio encontrándose en su membrana celular trazas de Nitrógeno .
Se observa además que el material orgánico constituido en un 80% de hidratos de Carbono se estabiliza en un periodo de 35 días en promedio y a diferencia del microorganismo silvestre con el cual el tiempo fue de 120 días.
STREPTOMYCES thermonitrífícans - GRAMPOSITIVOS - AEROBIOS FACULTALTIVO Se realizan resiembras de colonias cada 24 horas - Coloraciones gram verde de malaquita
Bacillus brevis Es un bacilo Gram positivo, no patógeno, esporógeno, anaerobio facultativo; su tamaño inicial es de 0.85 µta de ancho x 1.2 µp? de largo en promedio, su temperatura óptima de crecimiento oscila entre 21 a 37°C y en ausencia total de oxígeno. Su actividad se desarrolla dentro de un pH de 2.0 a 4.5, a una humedad promedio de 80%. Este microorganismo se obtiene del rumen.
Las células de B. brevis producen gramicidina, un antibiótico utilizado contra bacterias Gram positivas.
El medio de cultivo que se utiliza para el B. brevis es medio nutritivo, con 5% de agar-soya manteniendo los parámetros de pH, niveles de C02 y aumento cíclico de oxigenación y radiación directa, humedad y temperatura para desarrollo óptimo.
ETAPAS REALIZADAS EN EL LABORATORIO E-l El día 1 se inyecta aireación forzada al 2.5% al medio de cultivo, manteniendo los demás parámetros e incubación a 36°C. Con este cambio se registró una
mortalidad del 75%, por lo tanto hay un lento crecimiento de la colonia.
E-2 El día 91 se inyecta aireación forzada al 5% al medio de cultivo y se altera la humedad del 80% a 75%, manteniendo los . demás parámetros . Con este cambio se registra una mortalidad del 25%.
E-3 El día 115 se inyectó aireación forzada al 7.5% al medio de cultivo y se altera la temperatura de 36°C a 40 °C; con este cambio se registra una mortalidad del 48%.
E-4 ,El dia 160 se inyectó aireación forzada al 10% al medio de cultivo y se le adicionaron trazas de organofosforados, con este cambio se registra una mortalidad del 68%.
E-5 El día 232 se inyectó aireación forzada al 12.5% al medio de cultivo y se adicionó 10% de residuos orgánicos, manteniendo los demás parámetros, este cambio registra una mortalidad del 30%.
E-6 El día 264 se inyectó aireación forzada al 15% al medio de cultivo y se altera el pH de 5 a 5.3, manteniendo los demás parámetros, con este cambio se registra una mortalidad del 70%.
E-7 El día 344 se inyecta aireación forzada al 17.5% al medio de cultivo, se altera la humedad, de 75% a 70% manteniendo los demás parámetros del caldo de cultivo, presentándose una mortalidad del 28%.
E-8 El día 376 se inyecta aireación forzada al 20% al medio de cultivo y se altera la temperatura de 40°C a 45 °C manteniendo los demás parámetros del caldo de cultivo, presentándose una mortalidad del 38%.
E-9 El día 411 se inyecta aireación forzada al 22.5% al medio de cultivo y se adicionan trazas de organofosforados, manteniendo los demás parámetros presentándose una mortalidad de los microorganismos del 40%.
E-10 El día 473 se inyecta aireación forzada al 25% al medio de cultivo y se adicionó 15% de material orgánico,
manteniendo los demás parámetros, presentándose una mortalidad de los microorganismos del 25%.
El día 496 se inyecta aireación forzada al 27% al medio de cultivo y se altera el pH, de 5.3 a 5.5. Se registró una mortalidad del 72%.
El día 569 se inyecta aireación forzada al 30% al medio de cultivo y se altera la humedad de 70% a 65%. Se registró una mortalidad del 23%.
El día 589 se inyecta aireación forzada al 32.5% al medio de cultivo y se somete a un cambio de temperatura, de 45°C a 48°C, se mantienen los demás parámetros. En esta etapa se presenta una mortalidad del 25% de la población.
El día 616 se inyecta aireación forzada al 35% al medio de cultivo y se adicionan trazas mercuriales, manteniendo los demás parámetros . En esta etapa se presenta una mortalidad del 32% de la población.
E-15 El día 661 se inyecta aireación forzada al 37.5% al medio de cultivo y se aumentó a 20% de residuos orgánicos, registrándose una mortalidad del 43%.
E-16 El día 713 se inyecta aireación forzada al 40% al medio de cultivo y se altera el pH de 5.5 a 5.8, registrándose una mortalidad del 62%.
E-17 El día 767 se inyecta aireación forzada al 42.5% al medio de cultivo y se altera la humedad de 65% a 60%, registrándose una mortalidad del 20%, la movilidad y crecimiento es baja.
E-18 El día 792 se inyecta aireación forzada al 45% al medio de cultivo y se altera la temperatura de 48 °C a 50 °C, registrándose una mortalidad del 18%, la movilidad y crecimiento es baja.
E-19 El día 815 se inyecta aireación forzada al 47.5% al medio de cultivo y se incrementa en un 10% las trazas de organofosforados, presentándose una mortalidad del 36%.
E-20 El día 858 se inyecta aireación forzada al 50% al medio de cultivo, adicionando 25% de residuos orgánicos, presentándose una mortalidad del 25%.
E-21 El día 880 se inyecta aireación forzada al 52.5% al medio de cultivo, alterando el pH de 5.8 a 6.0; los demás parámetros se mantienen; en este cambio se presenta una mortalidad del 53%.
E-22 El día 925 se inyecta aireación forzada al 55% al medio de cultivo y se altera la humedad, de 60% a 55%, los demás parámetros se mantienen; en este cambio se presenta una mortalidad del 18%.
E-23 El día 945 se inyecta aireación forzada al 57.5% al medio de cultivo y se altera la temperatura de 50 °C a 55 °C, manteniendo los demás parámetros. En esta etapa se presenta una mortalidad del 20%.
E-24 El día 971 se inyecta aireación forzada al 60% al medio de cultivo y se incrementan las trazas de organofosforados en un 10%, manteniendo los demás
parámetros. En este ensayo se presenta una mortalidad del 25%.
E-25 El día 1006 se inyecta aireación forzada al 62.5% al medio de cultivo y se aumenta 30% de residuos orgánicos estabilizados, registrándose una mortalidad del 32%.
E-26 El día 1049 se inyecta aireación forzada al 65% al medio de cultivo y se altera el pH, de 6.0 a 6.2, registrándose una mortalidad del 43%.
E-27 El día 1087 se inyecta aireación forzada al 67.5% al medio de cultivo y se altera la humedad, de 55% a 50%, manteniéndose los demás parámetros, registrándose una mortalidad del 15%.
E-28 El día 1111 se inyecta aireación forzada al 70% al medio de cultivo y se altera la temperatura, de 55 °C a 60 °C, manteniendo los demás parámetros, presentándose una mortalidad del 16%.
E-29 El día 1129 se inyecta aireación forzada al 72.5% al medio de cultivo, incrementando las trazas de
organofosforados en un 10%, manteniendo los demás parámetros del cultivo, presentándose una mortalidad de los microorganismos del 27%.
E-30 El día 1162 se inyecta aireación forzada al 75% al medio de cultivo y se adiciona 40% de residuos orgánicos, manteniendo los demás parámetros del cultivo, presentándose una mortalidad de los microorganismos del 25%.
E-31 El día 1191 se inyecta aireación forzada al 77.5% al medio de cultivo, aumentando el pH de 6.2 a 6.5, manteniendo los demás parámetros del medio de cultivo; presentándose una mortalidad del 25%.
E-32 El día 1215 se inyecta aireación forzada al 80% al medio de cultivo y la humedad se reduce, de 50% a 45%, manteniendo los demás parámetros del medio de cultivo, registrándose una mortalidad del 18%.
E-33 El día 1233 se inyecta aireación forzada al 82.5% al medio de cultivo y se altera la temperatura de 60 °C a
65 °C, manteniendo los demás parámetros. Se presenta una mortalidad del 12% de la población.
E-34 El día 1247 se inyecta aireación forzada al 85% al medio de cultivo y se incrementaron las trazas mercuriales en un 10%, manteniendo los demás parámetros e incubando a 65 °C. Se presenta una mortalidad del 28% de la población.
E-35 El día 1277 se inyecta aireación forzada al 87.5% al medio de cultivo y se aumentaron a un 50% los residuos orgánicos, manteniendo los demás parámetros, presentándose una mortalidad del 15%.
E-36 El día 1300 se inyecta aireación forzada al 90% al medio de cultivo y se altera el pH de 6.5 a 6.8, manteniendo los demás parámetros, presentándose una mortalidad del 21%.
E-37 El día 1317 se inyecta aireación forzada al 92.5% al medio de cultivo y se altera la humedad de 45% a 40%, se mantienen los demás parámetros. Se registra una mortalidad del 12%.
E-38 El día 1332 se inyecta aireación forzada al 95% al medio de cultivo y se incrementa el porcentaje de trazas mercuriales en un 15%, manteniéndose los demás parámetros. Se registra una mortalidad del 25%.
E-39 El día 1360 se inyecta aireación forzada al 97.5% al medio de cultivo y se altera el pH de 6.8 a 7.0, los demás parámetros se mantienen, presentándose una mortalidad del 15%.
?-40 El día 1375 se inyecta aireación forzada al 100% al medio de cultivo y se le altera la temperatura de 65 °C a 70 °C, los demás parámetros se mantienen, presentándose una mortalidad del 8%.
E-41 El día 1392 se mantuvo con aireación forzada al 100% el medio de cultivo, se altera el pH de 7.0 a 7.2, manteniendo los demás parámetros del medio de cultivo; registrándose una mortalidad del 12%.
E-42 El día 1415 se mantuvo con aireación forzada al 100% el medio de cultivo, se altera la humedad de 40% a 36%,
manteniendo los demás parámetros del medio de cultivo; registrándose una mortalidad del 25%.
E-43 El día 1443 se mantuvo con aireación forzada al 100% el medio de cultivo, aumentando el nivel de temperatura de de 70 a 72 °C y manteniendo los demás parámetros del medio- de cultivo; registrándose una mortalidad del 17%.
E-44 El día 1468 se mantuvo con aireación forzada al 100% el medio de cultivo, incubando a 72 °C y se realizó un aumento en la materia orgánica estabilizada del medio de cultivo, manteniendo los demás parámetros del medio de cultivo; registrándose una mortalidad del 11%.
E-45 El día 1483 se mantuvo con aireación forzada al 100% el medio de cultivo, incubando a 72 °C y se realizó un aumento al medio de cultivo adicionando trazas químicas, manteniendo los demás parámetros del medio de cultivo; registrándose una mortalidad del 15%.
E-46 El día 1512 se mantuvo con aireación forzada al 100% el medio de cultivo, aumentando el nivel de temperatura de
de 72 a 75 °C y manteniendo los demás parámetros del medio de cultivo; registrándose una mortalidad del 10%.
E-47 El día 1530 se mantuvo con aireación forzada al 100% el medio de cultivo, incubando a 75 °C y se realizó un aumento al medio de cultivo adicionando trazas químicas, manteniendo los demás parámetros del medio de cultivo; registrándose una mortalidad del 7%.
RESULTADOS OBTENIDOS Al finalizar el proceso de adaptación, el microorganismo presenta una actividad normal en un medio con las siguientes características (Tabla No.9 ) :
Tabla No. 9. Cuadro comparativo Características iniciales y Final
Como característica importante el B. brevis cambia su condición de respiración anaerobia por un desarrollo bajo condiciones de aerobiosis .
Se observa además que el material orgánico constituido en un 80% de fibras celulolíticas se estabiliza en un periodo de 35 días en promedio a diferencia del microorganismo silvestre con el cual el tiempo fue de 120 días.
BACILLUS BREVIS - GRAMPOSITIVOS - ANAEROBIOS FACULTATIVOS Se realizan recuentos de colonias cada 24 horas - Coloraciones ram verde de mala uita
Bacillus thuringiensis Es un bacilo Gram positivo, no patógeno, esporógeno, anaerobio facultativo, su tamaño inicial es en promedio de 1.2 µta de ancho x 4.8 µtt? de largo en promedio, su temperatura óptima ambiente de crecimiento oscila entre 10 a 45°C, su membrana celular es completamente lisa y su actividad se desarrolla dentro de un pH de 6.5 a 7.2 con una humedad de 60%.
Las células de B. thuringiensis forman inclusiones cristalinas visibles al microscopio óptico durante la esporulación. Éstas inclusiones cristalinas están compuestas por protoxinas, que contienen d-endotoxinas , de actividad insecticida específica contra insectos. Algunas variedades de Bacillus thuringiensis pueden además producir otra toxina, la b-exotoxina. Es una toxina que se produce durante el crecimiento vegetativo, y es un derivado nucleotídico de la adenina que funciona como inhibidor de la ARN-polimerasa . Pero la utilización de esta toxina está prohibida en algunos países, pues es tóxica también para mamíferos.
El medio de cultivo para mantener el B. thuringiensis es un medio nutritivo, con 5% de agar-soya manteniendo los
parámetros de H, niveles mínimos de oxígeno, humedad y temperatura de su estado original .
ETAPAS REALIZADAS EN EL LABORATORIO E-l El día 1 se inyecta aireación forzada al 5% al medio de cultivo, manteniendo constantes los demás parámetros. La temperatura de incubación fue de 50 °C. Con este cambio se registra una mortalidad del 16%, registrándose un aumento en la velocidad de crecimiento de las colonias y UFC/ml . E-2 El día 21 se inyecta aireación forzada al 10% al medio de cultivo y se disminuye la humedad de 60% a 55%; con este cambio se registra una mortalidad del 24%, tiempo durante el cual fue necesario inocularlo a 50 °C.
E-3 El día 56 se inyecta aireación forzada al 15% al medio de cultivo y se le adiciona un 10% de residuos orgánicos, manteniendo los demás parámetros, incubando a 50 °C, este cambio registra una mortalidad del 32%.
E-4 El día 106 se inyecta aireación forzada al 20% al medio de cultivo, manteniendo los demás parámetros, se
adicionan trazas mercuriales, presentándose una mortalidad de los microorganismos del 38%.
E-5 El día 166 se inyecta aireación forzada al 25% al medio de cultivo y se altera el rango de temperatura de 50 °C a
55 °C, manteniendo los demás parámetros, presentándose una mortalidad del 32%.
E-6 El dia 216 se inyecta aireación forzada al 30% al medio de cultivo y se altera el rango de humedad de 55% a 50%. Se registró una mortalidad del 25%.
E-7 El día 261 se inyecta aireación forzada al 35% al medio de cultivo y se le somete a un cambio én el medio de cultivo, agregando un 15% de material orgánico seco y triturado, se mantienen los demás parámetros constantes. En esta etapa se presenta una mortalidad del 42% de la población .
E-8 El día 351 se inyecta aireación forzada al 40% al medio de cultivo y se somete a un aumento en las trazas químicas, adicionando trazas de organofosforados ,
registrándose una mortalidad del 27%, la movilidad y crecimiento es baja.
E-9 El dia 396 se inyecta aireación forzada al 45% al medio de cultivo y se altera el rango de temperatura de 55 °C de 65°C, registrándose una mortalidad del 45%; la movilidad y crecimiento es variable.
E--10 El dia 416 se inyecta aireación forzada al 50% al medio de cultivo y se altera el rango de humedad de 50% a 45% presentándose una mortalidad del 25%.
E-ll El día 461 se inyecta aireación forzada al 55% al medio de cultivo y se altera el porcentaje de residuos orgánicos aumentándolo a un 20%, los demás parámetros de humedad, temperatura, etc. se mantienen; en este cambio se registró una mortalidad del 40%.
E-12 El dia 536 se inyecta aireación forzada al 60% al medio de cultivo y se aumentan las trazas químicas en órganoelorados en un 5%, manteniendo los demás parámetros, e incubando a 65°C. En este ensayo se presenta una mortalidad del 33%.
El día 596 se inyecta aireación forzada al 65% al medio de cultivo y se altera el rango de temperatura de 65 °C a 68 °C, presentándose una mortalidad del 15%.
El día 614 se inyecta aireación forzada al 70% al medio de cultivo y se altera el rango de humedad de 45% a 40%, se mantienen los demás parámetros, presentándose una mortalidad de los microorganismos del 33%.
El día 659 se inyecta aireación forzada al 75% al medio de cultivo y se aumenta el porcentaje de residuos orgánicos a un 25% manteniendo los demás parámetros del cultivo, presentándose una mortalidad de los microorganismos del 18%.
El día 684 se inyecta aireación forzada al 80% al medio de cultivo y se aumenta el porcentaje de trazas mercuriales en un 10%, manteniendo los demás parámetros, presentándose una mortalidad del 28%.
El día 699 se inyecta aireación forzada al 85% al medio de cultivo y se somete a un aumento en el rango de
temperatura de 68 °C a 70°C, presentándose una mortalidad del 15%.
E-18 El día 719 se inyecta aireación forzada al 90% al medio de cultivo y se altera el rango de humedad disminuyendo el rango de 40% a 36%, manteniendo los demás parámetros, presentándose una mortalidad del 15%.
E-19 El dia 739 se inyecta aireación forzada al 95% al medio de cultivo y se aumentan los residuos orgánicos a un 30% incubándose a 70 °C y manteniendo los demás parámetros, presentándose una mortalidad de los microorganismos del 12%.
E-20 El día 754 se inyecta aireación forzada al 100% al medio de cultivo y se aumenta el porcentaje de trazas químicas en un 10% de organofosforados , se mantienen los demás parámetros. Se registra una mortalidad del 16%.
E-21 El día 772 se mantiene la aireación forzada al 100% al medio de cultivo, rango de humedad al 36%, se somete a un aumento de temperatura de 70 °C a 72 °C, presentándose una mortalidad del 35%.
E-22 El día 827 se mantiene la aireación forzada al 100% al medio de cultivo y se incuba a 72 °C, se disminuye el rango de humedad de 36% a 34%, manteniendo los demás parámetros del medio de cultivo, registrándose una mortalidad del 29%.
E-23 El día 872 se mantiene la aireación forzada al 100% al medio de cultivo, incubación a 72 °C, aumentando el porcentaje de residuos orgánicos al medio de cultivo, en esta etapa se presenta una mortalidad del 20% de la población, se registra mayor movilidad y crecimiento.
E-24 El día 887 se mantiene la aireación forzada al 100% al medio de cultivo, y se aumenta el porcentaje de trazas químicas en un 10% de organoclorados registrándose una mortalidad del 15%. La turbidez es uniforme.
E-25 El día 912 se mantiene la aireación forzada al 100% al medio de cultivo, se somete a un aumento de temperatura de 72 °C a 74 °C, registrándose una mortalidad del 15%.
La turbidez es uniforme .
E-26 El día 927 se mantiene la aireación forzada al 100% al medio de cultivo y se incuba a 74 °C, se disminuye el rango de humedad de 34% a 32%, manteniendo los demás parámetros del medio de ? ?^??, registrándose una mortalidad del 8%.
E-27 El día 947 se mantiene la aireación forzada al 100% al medio de cultivo, incubación a 74 °C, aumentando el porcentaje de residuos orgánicos al medio de cultivo, en esta etapa se presenta una mortalidad del 15% de la población, se registra mayor movilidad y crecimiento.
E-28 El día 962 se mantiene la aireación forzada al 100% al medio de cultivo y se aumenta el porcentaje de trazas químicas en un 20% de mercuriales registrándose una mortalidad del 10%. La turbidez es uniforme.
RESULTADOS OBTENIDOS Al finalizar el proceso de adaptación el medio de cultivo y el desarrollo microbiano presenta las siguientes características ( Tabla No. 10) :
Tabla No. 10. Cuadro Comparativo Características Iniciales y Finales.
Como característica importante el B. thuringiensis cambia su condición de anaerobio facultativo, por un desarrollo bajo condiciones de aerobiosis.
e observa además que el material orgánico constituido 80% de fibras celulolíticas se estabiliza en un periodo
35 días en promedio a diferencia del microorganismo Ivestre con el cual el tiempo fue de 120 días.
BASILLUS thuringiensis - GRAMPOSITIVO - ANAEROBIOS FACULTATIVOS | Se realizan recuentos de colonias cada 12 horas - Coloraciones gram verde de malaquita
FINALIZACIÓN DE TRABAJO DE ADAPTACIÓN PRODUCCIÓN INOCULO BIODEGRADADOR Al finalizar el trabajo de adaptación de los microorganismos se observa que el medio de cultivo utilizado para todos se compone de :
Caldo Nutritivo convencional Agar soya 10% Materia orgánica 50% pH 7 - 7.2 Temperatura entre 65 y 78 °C Humedad entre 30 y 36%
Por lo anterior y teniendo en cuenta las características finales de los microorganismos adaptados, para la obtención de la muestra, estos se adicionan a dicho medio de cultivo en cantidades tales que estén comprendidas dentro de los siguientes rangos :
Luego de obtenerse la mezcla anterior con los microorganismos en el laboratorio, es transportada en medio liquido convencional en recipientes adecuados que permitan el mantenimiento de sus características y propiedades. La concentración de microorganismos es 2.5 - 3X10e UFC/ml .
INOCULACIÓN EN PROCESOS DE BIODEGRADACION El proceso de inoculación de la mezcla en campo comprende los siguientes pasos : • Realizar de forma manual o mecánica una separación de los residuos no biodegradables, en caso de llegar a proceso sin su debida selección y triturar mediante el empleo de maquinaria el material para permitir una mayor área de contacto y consecuentemente una mejor
acción de los microorganismos. Así mismo mantener u obtener humedad de material entre 20 y 30%.
Someter los residuos sólidos orgánicos a tratar a un proceso de estabilización de pH de 7.0 a 7.2, utilizando los métodos convencionales para tal fin.
Organizar y distribuir los residuos en hazadas de 2.5 metros (m) de alto, por 3 m de ancho, por 10 o más de longitud dependiendo esta última medida de las cantidades a manejar.
Efectuar una primera inoculación teniendo en cuenta que, el mayor porcentaje dentro de los rangos, sea de los microorganismos degradadores de hidratos de Carbono y en menor proporción los celuloliticos . Estos inician el proceso de biodegradación en la etapa de inicial o de adaptación elevando la temperatura paulatinamente producto de sus reacciones metabólicas. Este incremento llega aproximadamente hasta los 63 °C. Realizar una segunda inoculación de la mezcla a los 15 días, cambiando los porcentajes de manera que se inviertan a la inoculación anterior, siendo mayor la
concentración de microorganismos celuloliticos y menor los descomponedores de hidratos de carbono.
Es necesario llevar un seguimiento del proceso y establecer los puntos críticos de control que permitan garantizar la calidad del mismo. Para esto inicialmente es necesario controlar y evitar la proliferación de insectos, roedores samuros o aves de carroña, asi como analizar posible generación de malos olores y de lixiviados.
El proceso microbiológico desde la primera inoculación tiene una duración aproximada de 35 días, posteriores a los cuales el material biodegradado se traslada a un invernadero o recinto adecuado para realizar operaciones de tamizaje y obtención de granulometrica adecuada.
Claims (5)
1. Un compuesto de microorganismos para biodegradar fracción orgánica contenida en residuos sólidos, caracterizado porque comprende una mezcla de los siguientes microorganismos: Bacillus licheniformis, Bacillus brevis, Bacillus megaterium, Bacillus stearothermophilus, Bacillus subtilis, Bacillus thuringiensis, Clostridium pasteuranium, Streptomyces thermonitrificans, Arthrobacter globiformis, Celluíomonas fl vigena .
2. El compuesto de conformidad con la reivindicación 1, caracterizado porque dichos organismos se encuentran a los siguientes porcentajes: 5 a 15% de Bacillus licheniformis, 5 a 20% de Bacillus brevis, 5 a 15% de Bacillus megaterium, 5 a 10% de Bacillus stearothermophilus, 5 a 10% de Bacillus subtilis, 5 a 10% de Bacillus thuringiensis, 5 a 15% de Clostridium pasteuranium, 5 a 15% de Streptomyces thermonitrificans, 5 a 20% de Artárobacter globiformis, 5 a 10% de Cellulomonas flavigena.
3. El compuesto de conformidad con la reivindicación 1, caracterizado porque los ingredientes del medio de cultivo del compuesto y las condiciones son: 40% de caldo nutritivo convencional, 10% de agar soya, 10% de agar celulosa y 40% de materia orgánica triturada y esterilizada. Las condiciones son: pH entre 7.0 y 7.2, humedad entre 30 y 36% y una temperatura entre 65 y 78 °C.
4. El compuesto de conformidad con la reivindicación 1, caracterizado porgue se aplica a una fracción orgánica que cumple con las siguientes características: a. Residuos orgánicos con un pH de 7.0 a 7.2 b. Material biodegradable libre en un 80% de otros materiales . c. Humedad del material orgánico entre 20 y 40% d. Construcción de hazadas de 3 m. a 11 m de ancho x 4.5 m a 6.5 m de alto y la longitud depende de las cantidades que se manejen que pueden ser de 20 hasta 85 metros de largo.
5. Un proceso para la preparación del compuesto de la reivindicación 1, caracterizado porque comprende los siguientes pasos : a) Una primera inoculación que debe realizarse con mayor cantidad de microorganismos mineralizadores de hidratos de carbono, en promedio 65 a 80% y menor cantidad de mineralizadores de celulosa. b) Un refuerzo con esta misma mezcla transcurridos ocho días . c) Una primera aplicación a los 15 dias con el compuesto conformado por 65% a 80% de microorganismos mineralizadores de fibra celulolitica y menor cantidad de microorganismos mineralizadores de hidratos de carbono. d) Una cuarta inoculación o segundo refuerzo con este compuesto microbiano ocho días después. e) Una quinta inoculación con una tercera mezcla de microorganismos controladores de patógenos.
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| MXPA06003777 MXPA06003777A (es) | 2006-04-04 | 2006-04-04 | Compuesto de microorganismos adaptados para biodegradar la fraccion organica contenida en residuos solidos y proceso para su preparacion. |
Publications (1)
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|---|---|---|---|
| MXPA06003777 MXPA06003777A (es) | 2006-04-04 | 2006-04-04 | Compuesto de microorganismos adaptados para biodegradar la fraccion organica contenida en residuos solidos y proceso para su preparacion. |
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| MX (1) | MXPA06003777A (es) |
Cited By (3)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| WO2019160400A1 (es) * | 2018-02-19 | 2019-08-22 | Salus Mundi Investments Limited | Consorcio de bacterias resistentes a tiodicarb (carbamato) y bifentrina (piretroide) y su uso para degradar materia orgánica contaminada con estos pesticidas |
| US11472752B2 (en) | 2018-02-19 | 2022-10-18 | Salus Mundi Investments Limited | Method for making resistant to thiodicarb (carbamate) and bifenthrin (pyrethroid) a consortium of fungi that solubilise phosphorous and antagonise certain pathogens, for use in liquid biofertilisers for foliar and/or soil application |
| US11470848B2 (en) | 2018-02-19 | 2022-10-18 | Salus Mundi Investments Limited | Consortium of (carbamate) thiodicarb-resistant and (pyrethroid) biphenthrin-resistant bacteria and use thereof in liquid fertilizers |
-
2006
- 2006-04-04 MX MXPA06003777 patent/MXPA06003777A/es active IP Right Grant
Cited By (4)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| WO2019160400A1 (es) * | 2018-02-19 | 2019-08-22 | Salus Mundi Investments Limited | Consorcio de bacterias resistentes a tiodicarb (carbamato) y bifentrina (piretroide) y su uso para degradar materia orgánica contaminada con estos pesticidas |
| US11472752B2 (en) | 2018-02-19 | 2022-10-18 | Salus Mundi Investments Limited | Method for making resistant to thiodicarb (carbamate) and bifenthrin (pyrethroid) a consortium of fungi that solubilise phosphorous and antagonise certain pathogens, for use in liquid biofertilisers for foliar and/or soil application |
| US11470848B2 (en) | 2018-02-19 | 2022-10-18 | Salus Mundi Investments Limited | Consortium of (carbamate) thiodicarb-resistant and (pyrethroid) biphenthrin-resistant bacteria and use thereof in liquid fertilizers |
| US11639493B2 (en) | 2018-02-19 | 2023-05-02 | Salus Mundi Investments Limited | Consortium of bacteria that mineralises lipids, starches and sugars (carbohydrates) and are resistant to lethal doses of thiodicarb (carbamate) and bifenthrin (pyrethroid) for inoculation into organic matter of different origins |
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