MXPA06000062A

MXPA06000062A - Sistemas y metodos para separar y concentrar celulas regenerativas de tejido.

Info

Publication number: MXPA06000062A
Application number: MXPA06000062A
Authority: MX
Inventors: Grace Carison
Original assignee: Macropore Biosurgery Inc
Priority date: 2003-06-25
Filing date: 2004-06-25
Publication date: 2006-04-07
Also published as: WO2005012480A2; EP2380970A1; AU2004260937A1; AU2004260937B2; HK1096424A1; WO2005012480A3; CA2530630A1; CN1842589B; JP5604397B2; JP2012075439A; EP2380970B1; BRPI0411798A; CN1842589A; JP2007524396A; EP1648999A2; EP1648999A4; KR20060030861A; IL172800A0; KR101127305B1

Abstract

Se describen sistemas y metodos que se emplean para separar celulas de una amplia variedad de tejidos. En particular, se describen sistemas y metodos automatizados que separan celulas regenerativas, por ejemplo celulas madre y/o progenitoras, de tejido adiposo. Los sistemas y metodos aqui descritos proporcionan metodos rapidos y confiables de separar y concentrar celulas regenerativas adecuadas para reinfusion a un sujeto.

Description

wo 2005/012480 ?2 !iiffliniiiiiiiiiuiiiiiiviiniiii SK, TR), OAPI (BF, BJ, CF, CG, Cl CM, GA, GN, GQ. For two-lr.uer codes cmdotber ahbreviaiions. rtferw tlte "Guvl- GW. ML. MR, E, SN, 1T>. TG). aiux Noies on Codes amlAbbr viaiions" appe ring al ¡he hegft- ing of eai:h regular issue of ¡he PCT Cú eiie. Publishcd: — wiilwui uuemaiional j«o/»:A repon and ¡o be mpublished upan mceipt of thnt repon SISTEMAS Y MÉTODOS PARA SEPARAR Y CONCENTRAR CÉLULAS REGENERATIVAS DE TEJIDO SOLICITUDES RELACIONADAS Esta solicitud corresponde a una solicitud de continuación-en-parte de la solicitud de patente de los E.U.A. No. de Serie 10/316,127, presentada en diciembre 9 del 2002, con título "SYSTEMS AND METHODS FOR TREATING PATIENTS WITH PROCESSED LIPOASPIRATE CELLS" (SISTEMAS Y MÉTODOS PARA TRATAR PACIENTES CON CÉLULAS LIPO-ASPI RADAS PROCESADAS) que reclama el beneficio de la solicitud provisional de patente de los E.U.A. No. de Serie 60/338,856, presentada en diciembre 7 del 2001. Esta solicitud también reclama prioridad de la solicitud provisional de patente de los E.U.A. No. de Serie 60/496,467 con título "SYSTEMS AND METHODS FOR SEPARATING CELLS FROM ADIPOSE TISSUE" (SISTEMAS Y MÉTODOS PARA SEPARAR CÉLULAS DE TEJIDO ADIPOSO) presentada en agosto 20, 2003, y La solicitud provisional de patente de los E.U.A. No. Serie 60/4682, 820, con título "SYSTEMS AND METHODS FOR SEPARATING CELLS FROM ADIPOSE TISSUE" (SISTEMAS Y MÉTODOS PARA SEPARAR CÉLULAS DE TEJIDO ADIPOSO) presentada en junio 25, 2003. Los contenidos de todas las solicitudes anteriormente mencionadas se incorporan aquí expresamente por esta referencia.

ANTECEDENTES DE LA INVENCIÓN 1. Campo de la Invención La presente invención se refiere a sistemas y métodos para separar y concentrar células, por ejemplo, células regenerativas de una amplia variedad de tejidos. La presente invención se refiere particularmente a sistemas y métodos 2 automatizados para separar y concentrar células regenerativas, por ejemplo células madre y/o células progenitoras, de tejido adiposo. 2. Descripción de la Técnica Relacionada La medicina regenerativa controla y dirige en una forma clínicamente orientada dirige la capacidad de la células regenerativas, por ejemplo células madre y/o células progenitoras, (es decir la células maestras no especializadas del cuerpo), para renovarse en forma indefinida y desarrollarse en células especializadas maduras. Las células madre se encuentran en embriones durante las etapas tempranas de desarrollo, en tejido fetal y en algunos órganos y tejidos de adultos (Pera et al., 2000). Las células madre embriónicas (a continuación referidas como "ESCs") se conoce que se convierten en muchos sino en todos los tipos de células y tejidos del cuerpo. ESCs no sólo contienen toda la información genética del individuo, sino también contienen la capacidad naciente de convertirse en cualquiera de las 200+ células y tejidos del cuerpo. De esta manera, estas células tienen tremendo potencial para medicina regenerativa. Por ejemplo, ESCs puedan desarrollarse en tejidos específicos tales como corazón, pulmón o riñón que luego pueden emplearse para reparar órganos dañados o enfermos (Assady et al., 2001 ; Jacobson et al., 2001 ; Odorico et al., 2001). Sin embargo, los tejidos derivados de ESC tienen limitaciones clínicas. Ya que las ESCs los elementos se derivan de otro individuo es decir un embrión, hay riesgo de que el sistema inmune del receptor rechace el nuevo material biológico. Aunque las drogas inmunosupresoras para evitar dicho rechazo están disponibles, dichas drogas también se sabe que bloquean las inmunorespuestas deseables tales como aquellas contra infecciones bacterianas y virus. Aún más, el debate ético sobre la fuente de ESCs, es decir embriones, está bien documentado y presenta un obstáculo adicional y probablemente insuperable para el futuro previsible. Las células madre de adulto (a continuación referidas en forma intercambiable como "ASCs") representan una alternativa al uso de ESCs. Las ASCs residen tranquilamente en muchos tejidos no embriónicos supuestamente en espera para responder a trauma u otros procesos de enfermedad destructiva de manera tal que puedan sanar al tejido lesionado (Arvidsson et al., 2002; Bonner-Weir and Sharma, 2002; Ciarke and Frisen, 2001 ; Crosby and Strain, 2001 ; Jiang et al., 2002a). De manera notable, la evidencia científica emergente indica que cada individuo transporta un depósito de ASCs los que puede compartir con las ESCs la capacidad por volverse muchos sino todos los tipos de células y tejidos (Young et al.,2001 ; Jiang et al., 2002a; Jiang et al. , 2002b; Schwartz et al., 2002). De esta manera, las ASCs como las ESCs tienen tremendo potencial por aplicaciones clínicas de medicina regenerativa. Poblaciones de ASC se ha mostrado que están presentes en uno o más de médula ósea, piel, músculo, hígado y cerebro (Jiang et al., 2002b; Alison, 1998; Crosby and Strain, 2001). Sin embargo, la frecuencia de ASCs en estos tejidos es baja. Por ejemplo, ia frecuencia de células madre mesenquimales en médula ósea se estima entre 1 en 100,000 y 1 en 1 ,000,000 células nucleadas (D'lppolito et al., 1999; Banfi et al., 2001 ; Falla et al., 1993). Similarmente, la extracción de ASCs de la piel involucra una serie complicada de etapas de cultivo celular durante varias semanas (Toma et al., 2001 ) y la aplicación clínica de ASCs derivadas de músculo esquelético requiere una fase de cultivo de dos a tres semanas (Hagege et al., 2003). De esta manera, cualquier aplicación clínica propuesta de ASCs de estos tejidos requiere incrementar el número de células, pureza y madurez en procesos de purificación celular y cultivo celular. Aunque las etapas de cultivo celular pueden proporcionar un número incrementado de células, pureza y madurez, lo hacen a un costo. Este costo puede incluir una o más de las siguientes dificultades técnicas: Pérdida de función celular debido a envejecimiento de las células, pérdida de poblaciones de la células no madre potencialmente útiles, retrasos en aplicación potencial de células a los pacientes, costo monetario incrementado, e incrementado riesgo de contaminación de la células con microorganismos ambientales durante el cultivo. Recientes estudios que examinan los efectos terapéuticos de ASCs derivadas de médula ósea, han empleado esencialmente médula entera para superar los problemas asociados con el cultivo celular (Horwitz et al., 2001 ; Orlict al., 2001 ; Stamm et al., 2003; Strauer et al., 2002). Los beneficios clínicos sin embargo han sido inferiores a lo óptimo, un resultado casi seguro relacionado a la dosis limitada de ASC y la pureza inherentemente disponible en la médula ósea. Recientemente, se ha mostrado que el tejido adiposo es una fuente de ASCs (Zuk et al., 2001 ; Zuk et al., 2002). A diferencia de la médula ósea, piel, músculo, hígado y cerebro, el tejido adiposo es en comparación, fácil de recolectar en cantidades relativamente grandes (Commons et al., 2001 ; Katz et al., 2001 b). Además, ASCs derivadas de tejido adiposo se ha mostrado que poseen la capacidad en general de generar múltiples tejidos ¡n vitro, incluyendo hueso, grasa, cartílago y músculo (Ashjian et al., 2003; Mizuno et al., 2002; Zuk et al., 2001 ; Zuk et al., 2002). De esta manera, el tejido adiposo presenta una fuente óptima para ASCs para utilizar en medicina regenerativa.

Métodos adecuados para recolectar ASCs derivadas de tejido adiposo sin embargo pueden faltar en la técnica. Métodos existentes pueden adolecer de una cantidad de desventajas. Por ejemplo, los métodos existentes pueden carecer de la habilidad de alojar en forma óptima un dispositivo de aspiración para remoción de tejido adiposo. Los métodos existentes también pueden carecer de automatización parcial o completa de la recolección de la fase de tejido adiposo a través de procesamiento de fases de tejido (Katz et al., 2001a) y/o Los métodos existentes además pueden carecer la capacidad de volumen mayor a 100 mi de tejido adiposo. Los métodos existentes aún pueden carecer de un sistema cerrado parcial o completamente de la recolección de la fase de tejido adiposo, a través del procesamiento de fases de tejido. Finalmente, los métodos existentes pueden carecer de la capacidad de desecho de componentes para atenuar los riesgos concomitantes de contaminación cruzada de material de una muestra a otra. En resumen, los muchos métodos de la técnica previa para recolectar ASCs de tejido adiposo, no parecen superar las dificultades técnicas asociadas a recolección de ASCs de la piel, músculo, hígado y cerebro, descritos anteriormente. De acuerdo con esto, queda una necesidad a la técnica por sistemas y métodos que son capaces de recolectar poblaciones de células regenerativas, por ejemplo ASCs con rendimiento incrementado, consistencia y/o pureza y hacerlo rápidamente y de forma confiable, con una necesidad disminuida o no existente para manipulación post-extracción. En forma ideal, dicho dispositivo, sistema o método, producirán células regenerativas en una forma adecuada para colocación directa en un receptor. COMPENDIO DE LA INVENCION La presente invención se refiere a sistema y métodos altamente versátiles, capaces de separar y concentrar un tejido determinado para producir células regenerativas, por ejemplo células madre y progenitoras adecuadas para reinfusión en un sujeto. En particular, la presente invención proporciona un sistema automatizado para separar y concentrar células regenerativas de tejido. Los tipos de tejido que pueden procesarse por los sistemas y métodos de la presente invención, incluyen pero no están limitados a tejido adiposo, sangre, médula ósea, músculo, piel, hígado, tejido conectivo, fascia y otros tejidos suaves y líquidos o componentes de tejido. En una modalidad preferida, la presente invención proporciona un sistema automatizado para separar y concentrar células regenerativas de tejido adiposo que son adecuadas para re-infusión en un sujeto. Un sistema para separar y concentrar células de tejido adiposo de acuerdo con la presente descripción, en general incluye una o más de una cámara de recolección una cámara de procesamiento, una cámara de desechos, una cámara de salida y una cámara de muestra. Las diversas cámaras se acoplan en conjunto mediante uno o más conductos tal que fluidos que contienen material biológico pueden pasar de una cámara a otra en una ruta de tejido/fluido estéril y cerrada. En ciertas modalidades, la cámara de desechos, la cámara de salida y la cámara de muestra son opcionales. El sistema también incluye una pluralidad de filtros. Los filtros son efectivos para separar las células madre y/o progenitoras de, entre otras cosas colágeno, adipocitos, y agentes de disgregación de tejidos, que pueden estar presentes en la solución, en conexión con el procesamiento de tejido adiposo. En una modalidad, un montaje de filtro incluye el dispositivo de filtración de fibras huecas. En otra modalidad, el montaje del filtro incluye un dispositivo de filtro percolante que puede o no utilizarse con un proceso de sedimentación. En una modalidad preferida el montaje del filtro comprende un dispositivo de centrifugado que puede o no utilizarse con un dispositivo y proceso de elutriación. Todavía en otra modalidad, el sistema comprende una combinación de estos dispositivos de filtro. Las funciones de filtrado de la presente invención pueden ser dobles, con algunos filtros que retiran cosas de la concentración final tales como colágeno, lípidos libres, adipocitos libres y colagenasa residual, y con otros filtros que se utilizan para concentrar el producto final. En otras modalidades, uno o más componentes del sistema se automatizan e incluyen un dispositivo de procesamiento interno y programas asociados que controlan muchas de las funciones de procesamiento. Componentes del sistema pueden ser desechabies tales que porciones del sistema pueden ser descartadas después de un solo uso. Dicho sistema también comprende un componente re-utilizable que incluye el dispositivo de procesamiento (computadora y programas de soporte lógico asociados) y otros componentes tales como motores, bombas, etc. En una modalidad, un método para tratar un paciente incluye las etapas de: a) proporcionar un sistema de remoción de tejido; b) retirar tejido adiposo de un paciente utilizando el sistema de remoción de tejido, el tejido adiposo tiene una concentración de células madre; c) procesar al menos una parte del tejido adiposo para obtener una concentración de células regenerativas diferente a la concentración de células regenerativas del tejido adiposo antes de procesamiento; d) administrar las células regenerativas a un paciente sin retirar las células regenerativas del sistema de remoción de tejido antes de administrarlas al paciente, para de esta manera tratar al paciente.

Cualquier característica o combinación de características aquí descritas se incluyen dentro del alcance de la presente invención siempre que las características incluidas en dicha combinación no sean mutuamente inconsistentes como será aparente del contexto, esta especificación y el conocimiento de una persona con destreza en la técnica. Ventajas adicionales y aspectos de la presente invención son aparentes de la siguiente descripción detallada y reivindicaciones.

BREVE DESCRIPCION DE LOS DIBUJOS La Figura 1 es una ilustración de un sistema para separar y concentrar células regenerativas de tejido que incluye un montaje de filtro. La Figura 2 es una ilustración de un sistema similar a la Figura 1 que tiene una pluralidad de montajes de filtro en una configuración en serie. La Figura 3 es una ilustración de un sistema similar al de la Figura 1 que tiene una pluralidad de montaje de filtro en una configuración paralela. La Figura 4 es una ilustración de un sistema para separar y concentrar células regenerativas de tejido, que incluye una cámara centrífuga. La Figura 5 es una vista seccional de una cámara de recolección que incluye un filtro prefijado utilizado en un sistema para separar y concentrar células regenerativas de tejido. La Figura 6 es una vista seccional de una cámara de procesamiento de un sistema para separar y concentrar células regenerativas de tejido que utiliza un sistema de filtración percolante.

La Figura 7 es una vista seccional de una cámara de procesamiento de un sistema para separar y concentrar células regenerativas utilizando un dispositivo de centrífuga para concentrar las células regenerativas. La Figura 8 es otra vista seccional de la cámara de procesamiento de la Figura 7. Las Figuras 9A, 9B y 9C ¡lustran un componente de elutriación en uso con el sistema de la invención. La Figura 10 es una ilustración de un sistema para separar y concentrar células regenerativas de tejido que utiliza presión de vacío para mover fluidos a través del sistema. Un sistema con vacío puede construirse al aplicar una bomba de vacío o fuente de vacío a la salida del sistema, controlar una velocidad predeterminada para extraer tejido y fluido pasantes, utilizando un sistema de llaves de paso, ventilaciones y abrazaderas, para controlar la dirección y sincronización del flujo. La Figura 11 es una ilustración de un sistema para separar y concentrar células regenerativas de tejido utilizando presión positiva para mover fluidos a través del sistema. Un sistema de presión positiva utiliza medios mecánicos taies como una bomba peristáltica para empujar o propulsar el fluido de tejido a través del sistema a una velocidad determinada, utilizando válvulas, llaves de paso, ventilaciones y abrazaderas para controlar la dirección y sincronización del flujo. La Figura 12A ilustra un proceso de filtración en donde la corriente de alimentación del fluido circula tangencialmente a los poros del filtro. La Figura 12B Ilustra un proceso de filtración en donde la corriente de alimentación del fluido circula perpendicular a los poros del filtro.

La Figura 13 es una ilustración de un equipo desechable ejemplar para un sistema de la invención. La Figura 14 es una ilustración de un componente re-utilizable ejemplar para un sistema de la invención. La Figura 15A es una ilustración de un dispositivo ejemplar de la invención ensamblado utilizado el equipo desechable de la Figura 13 y un componente re-utilizable de la Figura 14. La Figura 15B es un diagrama de flujo que ilustra etapas pre-programadas ejemplares, implementadas a través de un programa de soporte lógico, que controlan modalidades automatizadas de un sistema de la presente invención. Dos parámetros de procesamiento alternos se ilustran indicando la versatilidad del sistema. DESCRIPCION DETALLADA DE LAS MODALIDADES ACTUALMENTE PREFERIDAS La presente invención se refiere a sistemas y métodos rápidos y confiables, para separar y concentrar células regenerativas, por ejemplo células madre y/o células progenitoras de una amplia variedad de tejidos, incluyendo pero no limitados a tejido adiposo, médula ósea, sangre, piel, músculo, hígado, tejido conectivo, fascia, cerebro y otros tejidos del sistema nervioso, vasos sanguíneos y otros tejidos suaves o líquidos o componentes de tejido o mezclas de tejidos (por ejemplo una mezcla de tejidos incluyendo piel, vasos sanguíneos, tejido adiposo y conectivo). En una modalidad preferida, el sistema separa y concentra células regenerativas de tejido adiposo. En otra modalidad preferida, el sistema se automatiza de manera tal que todo el método desde separación a concentración de las células regenerativas, puede realizarse en secuencia continua, con mínima intervención del usuario. En una modalidad particularmente preferida, las células regenerativas obtenidas utilizando los sistemas y métodos de la presente invención, son adecuadas para colocar en un receptor. De preferencia, todo el procedimiento desde extracción de tejido hasta separación, concentración y colocación de las células regenerativas en el receptor será realizado en la misma instalación, sin duda incluso dentro de la misma habitación del paciente que se somete al procedimiento. Las células regenerativas pueden emplearse en un período de tiempo relativamente corto después de extracción y concentración. Por ejemplo, las células regenerativas pueden estar listas para usos en aproximadamente una hora desde la cosecha o recolección de tejido de un paciente y en ciertas situaciones pueden estar listos para usos aproximadamente 10 a 40 minutos desde la cosecha o recolección del tejido. En una modalidad preferida, las células regenerativas pueden estar listas para utilizarse en aproximadamente 20 minutos desde la recolección del tejido. Toda la duración del procedimiento desde la extracción a separación y concentración, puede variar dependiendo una cantidad de factores, incluyendo el perfil del paciente, tipo de tejido que se recolecta y la cantidad de células regenerativas que se requieren para una aplicación terapéutica determinada. Las células también pueden colocarse en el receptor, en combinación con otras células, tejido, fragmentos de tejido, andamios y otros estimulantes de crecimiento y/o diferenciación celular en el contexto de un solo procedimiento operativo con la intención de derivar un beneficio terapéutico estructural o cosmético al receptor. Se entiende que cualquier adicional manipulación de las células regenerativas más allá de la fase de separación y concentración del sistema, requerirá tiempo adicional proporcional con la forma de dicha manipulación.

Pacientes que sufren de una amplia variedad de enfermedades y desórdenes pueden beneficiarse de las células regenerativas de la presente invención. Por ejemplo, pacientes que sufren de enfermedades y desórdenes cardiovasculares, enfermedades y desórdenes de hígado, enfermedades y desórdenes renales, desórdenes de músculo esquelético, lesiones y desórdenes de pulmón, diabetes, enfermedades y desórdenes intestinales, desórdenes del sistema nervioso, enfermedad de Parkinson, Alzheimer, enfermedades y desórdenes relacionados a ataque, enfermedades y desórdenes del sistema hematopoyético, lesiones, úlceras y otras enfermedades y desórdenes de la piel, lesión traumática, quemadura, radiación o lesiones o desórdenes químicos u otros inducidos por toxinas, y enfermedades y desórdenes relacionados con huesos y cartílagos, pueden tratarse utilizando las células regenerativas que se obtienen a través de los sistemas y métodos de la presente invención. En modalidades particulares, enfermedades y desórdenes que están mediados por angiogénesis y arteriogénesis pueden tratarse con las células regenerativas que se obtienen utilizando los sistemas y métodos la presente invención. Por ejemplo, pueden tratarse infartos agudos al miocardio, cardiomiopatía isquémica, enfermedad periférica vascular, ataque isquémico, necrosis tubular aguda, heridas isquémicas, sepsis, enfermedad intestinal isquémica, retinopatía diabética, neuropatía, nefropatía, vasculitis, encefalopatía isquémica, disfunción eréctii, lesiones a la médula espinal, isquémicas y/o traumáticas, fallas de sistemas de múltiples órganos, enfermedad isquémica de encías e isquemia relacionada a transplantes. Además, enfermedades y desórdenes que afectan más de un sistema fisiológico, por ejemplo lesión traumática que involucra tanto tejidos suaves como duros, el efecto de envejecimiento, desórdenes de múltiples órganos, etc., también pueden tratarse con células regenerativas que se obtienen utilizando los sistemas y métodos de la presente invención. Las células regenerativas también pueden utilizarse para promover reparación de tendones y cartílagos y para una variedad de aplicaciones cosméticas y estructurales clínicas y no clínicas incluyendo la aplicación de transferencia de grasa autóloga. Aplicaciones cosméticas incluyen por ejemplo reestructuración de pliegues faciales y arrugas, labios, pechos y nalgas, así como otros defectos de tejido suave. Las células regenerativas también pueden utilizarse para aplicaciones de ingeniería de tejido conocidas en la técnica. A fin de que la presente invención pueda ser comprendida más fácilmente, primero se definen ciertos términos. Definiciones adicionales se establecen a través de la descripción detallada. Cómo se emplea aquí, "células regenerativas" se refieren a cualesquiera células heterogéneas u homologas que se obtienen utilizando los sistemas y métodos de la presente invención, que provocan o contribuyen a regeneración, restauración o sustitución completa o parcial de estructura o función de un órgano, tejido, o unidad fisiológica o sistema, para de esta manera proporcionar un beneficio terapéutico estructural o cosmético. Ejemplos de células regenerativas incluyen: ASCs, células endoteliales, células precursoras endoteliales, células progenitoras endoteliales, macrófagos, fibroblastos, pericitos, células de músculo liso, preadipocitos, adipocitos diferenciados o des-diferenciados, queratinocitos, células precursoras y progenitoras unipotentes y multipotentes (y su progenie) y linfocitos. Un mecanismo por el cual las células regenerativas pueden proporcionar un beneficio terapéutico estructural o cosmético es al incorporarlas o su progenie en tejidos o componentes de tejido recientemente generados existentes o reparados. Por ejemplo, ASCs y/o su progenie pueden incorporarse en hueso, músculo u otro tejido estructural o funcional recientemente generado y de esta manera provocar o contribuir a una mejora terapéutica estructural o cosmética. Similarmente, células endoteliales o células precursoras o progenitoras endoteliales y su progenie pueden incorporarse en vasos sanguíneos existentes, recientemente generados, reparados o expandidos para de esta manera provocar o contribuir a un beneficio terapéutico estructural o cosmético. Otro mecanismo por el cual las células regenerativas pueden proporcionar un beneficio terapéutico estructural o cosmético es por expresión y/o secreción de moléculas por ejemplo, factores de crecimiento que promueven creación, retención, restauración y/o regeneración de estructura o función de un tejido o componente de tejido determinado. Por ejemplo, las células regenerativas pueden expresar y/o secretar moléculas que resultan en crecimiento mejorado de tejidos o células que luego participan directa o indirectamente en estructura o función mejoradas. Células regenerativas pueden expresar y/o secretar factores de crecimiento incluyendo por ejemplo factor de crecimiento endotelial vascular (VEGF), factor de crecimiento de placenta (P1 GF), bFGF, IGF-II, Eotaxina, G-CSF, GM-CSF, lL-12p40/p70, IL-12 p70, IL-13, IL-6, IL-9, Leptina, MCP-1 , M-CSF, MIG, PF-4,TIMP-1 , TIMP-2, TNF-a, trombopoyetina, y sus.isoformas que pueden realizar una o mas de las siguientes funciones: estimular el desarrollo de nuevos vasos sanguíneos, es decir, promover angiogénesis; mejorar suministro de oxígeno de vasos sanguíneos pequeños pre-existentes (colaterales) al expandir su capacidad de transporte de sangre; inducir movilización de células regenerativas de sitios distantes del sitio de lesión, para de esta manera mejorar la capacidad de receptor de asentamiento y migración de éstas células en el sitio de lesión; estimular el crecimiento y/o promover la supervivencia de células dentro de un sitio de lesión, de esta manera promoviendo retención de función o estructura; suministrar moléculas con propiedades anti-apoptósicas, de esta manera reduciendo la tasa o probabilidad de muerte celular y pérdida permanente de función; e interactuar con células regenerativas endógenas y/u otros mecanismos fisiológicos. Las células regenerativas pueden emplearse en su forma "nativa" como están presentes en o separadas y concentradas del tejido, utilizando los sistemas y métodos de la presente invención, o pueden modificarse por estímulo o cebado con factores de crecimiento u otros modificadores de respuesta biológica, por transferencia de genes (transferencia transitoria o estable), por adicional sub-fraccionación de la población resultante en base a propiedades físicas (por ejemplo tamaño o densidad) adherencia diferencial a un material de fase sólida, expresión de superficie celular o moléculas intracelulares, cultivo celular u otra manipulación, modificación o fraccionación ex vivo o in vivo como se describe adicionalmente aquí. Las células regenerativas también pueden emplearse en combinación con otras células o dispositivos, tales como andamios materiales o dispositivos sintéticos o biológicos, que suministran factores, drogas, productos químicos u otros agentes que modifican o mejoran las características relevantes de las células como se describe adicionalmente aquí. Como se emplea aquí, "composición de células regenerativas" se refiere a la composición de células típicamente presentes en un volumen de líquido después de que un tejido, por ejemplo, un tejido adiposo, se lava y al menos se disgrega parcialmente. Por ejemplo, una composición de células regenerativas de la invención comprende múltiples tipos diferentes de células regenerativas, incluyendo ASCs, células endoteliales, células precursoras endoteliales, células progenitoras endoteliales, macrófagos, fibroblastos, pericitos, células de músculo liso, preadipocitos, adipocitos diferenciados o des-diferenciados, queratinocitos, células progenitoras y precursoras unipotentes y multipotentes (y su progenie) y linfocitos. La composición de células regenerativas también puede contener uno o más contaminantes tales como colágeno, que puede estar presente en la fragmentación de tejido o colagenasa residual u otra enzima o agente empleado en o que resulta del proceso de disgregación de tejido aquí descrito. Como se emplea aquí, "medicina regenerativa" se refiere a cualquier beneficio terapéutico estructural o cosmético que se deriva de la colocación, ya sea directa o indirectamente de células regenerativas en un sujeto. La medicina regenerativa abarca todas las enfermedades y desordenes aquí descritos, así como aquellos conocidos en la técnica. Como se emplea aquí "célula madre" se refiere a una célula regenerativa multipotente con el potencial para diferenciar una variedad de otros tipos de células, que realizan una o mas funciones específicas y tienen la capacidad por auto-renovarse. Algunas de las células madre aquí descritas pueden ser multipotentes. Como se emplea aquí, "célula progenitora" se refiere a una célula regenerativa multipotente con el potencial por diferenciarse en más de un tipo de células y tiene o no tiene habilidad limitada por renovarse. "Célula progenitora" como se emplea aquí, también se refiere a una célula unipotente con el potencial por diferenciar en solo un tipo de célula sencilla que realiza una o mas funciones específicas y no tiene o tiene habilidad limitada por renovarse. En particular como se emplea aquí, "célula progenitora endotelial" se refiere a una célula multipotente o unipotente con el potencial por diferenciar en célula endoteliales vasculares. Como se emplea aquí, "célula precursora" se refiere a una célula regenerativa unipotente, con el potencial por diferenciar en un tipo de célula. Células precursoras y su progenie pueden retener capacidad proliferativa extensa, por ejemplo linfocitos y células endoteliales, que pueden proliferar bajo condiciones apropiadas. Como se emplea aquí "número de células madre" o "frecuencia de células madre", se refiere al número de colonias observadas en un ensayo clonogénico, en donde células derivadas de tejido adiposo (ADC) se revisten en baja densidad celular (<10,000 células/pozo) y desarrollan en medio de crecimiento que soporta el crecimiento SC (por ejemplo medio DME /F12 suplementado con suero bovino fetal, suero de caballo al 5% y agentes antibióticos/antimicóticos). Se desarrollan células por dos semanas después de lo cual los cultivos se tiñen con hematoxilina y colonias de 50 células se cuentan como CFU-F. La frecuencia de células madre se calcula como el número de CFU-F observadas por 100 células nucleadas revestidas (por ejemplo, 15 colonias contadas en una placa iniciada con 1 ,000 células regenerativas nucleadas da una frecuencia de células madre de 1.5%). El número de células madre se calcula como la frecuencia de células madre multiplicada por el número total de células ADC nucleadas obtenidas. Un alto porcentaje (aprox. 100%) de CFU-F desarrolladas de células regenerativas, expresa la molécula de superficie celular CD105 que también se expresa por células madre derivadas de médula ósea (Barry et al., 1999). CD105 también se expresa por células madre derivadas del tejido adiposo (Zuk et al., 2002).

Como se emplea aquí el término "tejido adiposo" se refiere a grasa incluyendo el tejido conectivo que almacena la grasa. Tejido adiposo contiene múltiples tipos de células regenerativas, incluyendo ASCs y células progenitoras y precursoras endoteliales. Como se emplea aquí el término "unidad de tejido adiposo" se refiere a una cantidad discreta o susceptible a medir de tejido adiposo. Una unidad de tejido adiposo puede medirse al determinar el peso y/o volumen de la unidad. Con base en los datos anteriormente identificados, una unidad de lipoaspirado procesado, al extraerse de un paciente tiene un componente celular en donde al menos 0.1% del componente celular son células madre; esto es, tiene una frecuencia de células madre, determinada como se describió anteriormente de al menos 0.1%. Con referencia a la presente descripción, una unidad de tejido adiposo puede referirse a toda la cantidad de tejido adiposo retirado del paciente o una cantidad que es menos que la cantidad completa de tejido adiposo retirado del paciente. De esta manera una unidad de tejido adiposo puede combinarse con otra unidad de tejido adiposo para formar una unidad de tejido adiposo que tiene un peso o volumen que es la suma de las unidades individuales. Como se emplea aquí, el término "porción" se refiere a una cantidad de material que es menos que un todo. Una porción menor se refiere a una cantidad que es menor al 50% y una porción mayor se refiere a una cantidad mayor al 50%. De esta manera, una unidad de tejido adiposo que es menos que la cantidad completa de tejido adiposo retirado del paciente, es una porción del tejido adiposo retirado. Como se emplea aquí como el término "lipo aspirado procesado" se refiere a tejido adiposo que se ha procesado para separar el componente celular activo (por ejemplo el componente que contienen regenerativo) de adipocitos maduros y tejido conectivo. Esta fracción se refiere aquí como "células derivadas de tejido adiposo" o "ADC". Típicamente, ADC se refiere al precipitado de células regeneradas que se obtiene al lavar y separar y concentrar las células del tejido adiposo. El precipitado típicamente se obtiene al centrifugar la suspensión de las células, de manera tal que la células se agregan en el fondo de una cámara centrífuga o concentrado de células. Como se emplea aquí, los términos "administrar", "introducir", "suministrar", "colocar" y "trasplantar" se emplean en forma intercambiable y se refieren a la colocación de células regenerativas de la invención en un sujeto por un método o ruta que resulta en al menos localización parcial de las células regenerativas en el sitio deseado. Las células regenerativas pueden administrarse por cualquier ruta apropiada que resulte en suministro a un sitio deseado en el sujeto, en donde al menos una porción de las células o componentes de la célula permanecen viables. El período de viabilidad de las células después de administración a un sujeto puede ser tan corto como unas cuantas horas como por ejemplo, 24 horas, hasta unos cuantos días, hasta tan prolongado como varios años. Como se emplea aquí, el término "tratar" incluye reducir o aliviar cuando menos un efecto adverso o un síntoma de una enfermedad o desorden. Como se emplea aquí, "dosis terapéuticamente efectiva de células regenerativas" se refiere a una cantidad de células regenerativas que es suficiente para lograr un efecto clínico benéfico o deseado. Dicha dosis puede ser proporcionada en una o más administraciones. Sin embargo, la determinación precisa de lo que se considera una dosis efectiva, puede basarse en factores individuales de cada paciente, incluyendo pero no limitados, la edad del paciente, tamaño, tipo o extensión de la enfermedad, etapa de la enfermedad, rutas de administración de las células regenerativas, y el tipo o extensión de terapias suplementaria empleada, proceso de la enfermedad y tipo de tratamiento deseado (es decir tratamiento agresivo contra convencional). Como se emplea aquí, el término "sujeto" incluye animales de sangre caliente, de preferencia mamíferos, incluyendo humanos. En una modalidad preferida, el sujeto es un primate. En una modalidad aún más preferida, el sujeto es un humano. Como se establece previamente aquí, células regenerativas, por ejemplo células madre y progenitoras, pueden recolectarse de una amplia variedad de tejidos. El sistema de la presente invención puede utilizarse para todos estos tejidos. Sin embargo tejido adiposo es una fuente especialmente rica de células regenerativas. De acuerdo con esto, el sistema de la presente invención se ilustra aquí utilizando tejido adiposo como una fuente de células regenerativas a manera de ejemplo sólo y no de limitación. Puede obtenerse tejido adiposo por cualquier método conocido por una persona destreza ordinaria en la especialidad. Por ejemplo, puede retirarse tejido adiposo de un paciente por liposucción (con jeringa o energizado) o por Npectomía, e.g. lipoplastía asistida por succión, lipoplastía asistida por ultrasonido, y lipectomía de escisión o sus combinaciones. El tejido adiposo se retira y recolecta y puede procesarse de acuerdo con cualquiera de las modalidades de un sistema de la invención aquí descrito. La cantidad del tejido recolectado depende de factores numerosos, incluyendo el índice de masa corporal y la edad del donador, el tiempo disponible para recolección, la disponibilidad de sitios de cosecha de tejido adiposo accesibles, medicamentos y condiciones concomitantes y pre-existentes (tal como terapia anticoaguiante), y el propósito clínico por el cual se recolecta el tejido. Por ejemplo, el porcentaje de células regenerativas de 100 mi de tejido adiposo extraídas de un individuo delgado es mayor que las extraídas de un donador obeso (Tabla 1 ). Esto probablemente refleja un efecto diluyente del contenido de grasa incrementado en cada individuo obeso. Por lo tanto, puede ser conveniente de acuerdo con un aspecto de la invención el obtenerse grandes cantidades de tejido de donadores con sobrepeso en comparación con las cantidades que se retira de pacientes más delgados. Esta observación también indica que la utilidad no se limita a individuos con grandes cantidades de tejido adiposo. Tabla 1 : Efecto de índice de Masa Corporal en Tejido y Rendimiento Celular. Estado de índice de Masa Cantidad del Tejido Rendimiento de Células Corporal Obtenido (g) Regenerativas (x 107) Normal 641+142 2.1 +0.4 Obeso 1 ,225+173 2.4+0.5 Valor p O03 0J3 Después de que se procesa el tejido adiposo, la células regenerativas resultantes están sustancialmente libres de adipocitos maduros y tejido conectivo. De acuerdo con esto, el sistema de la presente invención genera una pluralidad heterogénea de células regenerativas derivadas de tejido adiposo que puede emplearse para propósitos de investigación y/o terapéuticas. En una modalidad preferida, las células son adecuadas para colocación o re-infusión dentro del cuerpo de un receptor. En otras modalidades, las células pueden emplearse para investigación, por ejemplo las células pueden emplearse para establecer líneas de células madre o células progenitores pueden sobrevivir por periodos prolongados del tiempo y ser utilizados para mayor estudio. Ahora se hace referencia en detalle a las modalidades actualmente preferidas de la invención, ejemplo de las cuales se ilustran en los dibujos acompañantes. Cuando sea posible, los mismos o similares números de referencia se utilizan en los dibujos y la descripción para referirse a partes iguales o semejantes. Habrá de notarse que los dibujos están en forma simplificada y no son a escala precisa. Con referencia a la presente descripción, para propósitos de conveniencia y claridad solamente, términos direccionales tales como superior, fondo, izquierda, derecha, arriba, abajo, sobre, encima, por debajo, por detrás, posterior, frontal, distante, y próximo, se utilizan respecto a los dibujos acompañantes. Estos términos direccionales no deberían ser considerados para limitar el alcance de invención en forma alguna. Aunque la presente descripción se refiere a ciertas modalidades ¡lustrados, habrá entenderse que estos modalidades se presentan a manera de ejemplo y no a manera de limitación. La intención de la siguiente descripción detallada aunque discute modalidades ejemplares, habrá de considerarse para cubrir todas las modificaciones alternativas y equivalentes de las modalidades que pueden caer dentro del espíritu y alcance de la invención como se define por las reivindicaciones anexas. La presente invención puede utilizarse en conjunto con diversos procedimientos médicos que son convencionalmente usados en la especialidad. Ahora con referencia a las figuras, un sistema 10 de la presente invención DGA comprende una o más de una cámara de recolección de tejido 20, una cámara de procesamiento 30, una cámara de desechos 40 y una cámara de salida 50 y una cámara de muestra 60. Las diversas cámaras se acoplan en conjunto mediante uno o más conductos 12 de manera tan que aquellos que contienen material biológico puedan pasar de una cámara a otra mientras que mantienen una ruta de tejido/fluido cerrada y estéril. Los conductos pueden comprender cuerpos rígidos o flexibles referidos en forma intercambiable aquí como lumen y tubos, respectivamente. En ciertas modalidades, los conductos están en la forma de tuberías flexibles, tal como tubería de polietileno empleará convencionalmente en ambientes químicos, silicona o cualquier otro material conocido en la técnica. Los conductos 12 puedan variar de tamaño dependiendo de si se desea paso fluido o tejido. Los conductos 12 puedan variar en tamaño dependiendo de la cantidad de tejido fluido que se cicla a través del sistema. Por ejemplo, para el paso del fluido, los conductos pueden tener un diámetro en el intervalo de aproximadamente 0.1524 a 1.905 cm (aproximadamente 0.060 a aproximadamente 0.750 pulgadas) y para el paso de tejido los conductos pueden tener un diámetro en el intervalo de 0.79-1.905 cm (0.312 a 0.750 pulgadas). En general, el tamaño de los conductos se elige para equilibrar el volumen que pueden alojar los conductos y el tiempo requerido para transportar el tejido o fluido a través de los conductos. En modalidades automatizadas del sistema, los parámetros anteriores, es decir, volumen y tiempo para transporte, deben ser identificados de manera tal que podrán transmitirse señales apropiadas al dispositivo de procedimiento del sistema. Esto permite que el dispositivo mueva volúmenes precisos del líquido y tejido de una cámara a otra. La tubería flexible empleada deberá ser capaz de soportar presión negativa para reducir la probabilidad de colapso. La tubería flexible empleada deberá también ser capaz de soportar presión 24 positiva que se genera por ejemplo, una bomba de desplazamiento positivo, que puede utilizarse en el sistema. Todas las cámaras del sistema pueden comprender una o más compuertas, por ejemplo Las compuertas de salida 22 o entrada 21 , que aceptan conexiones de tubería estándar y aguja de succión y jeringa. Las compuertas pueden ser una compuerta sellada tal como una compuerta de acceso para aguja de jeringa cerrada con septo de hule 51. Las compuertas de entrada pueden acoplarse a una o mas cánulas (no mostradas) mediante conductos. Por ejemplo, una compuertas de entrada de tejido 21 pueden acoplarse a una cánula de liposucción de un sólo uso integrada y el conducto puede ser una tubería flexible. Los conductos en general se ubican para proporcionar pasaje de fluido de una cámara del fluido a otra. Para este objetivo, los conductos y compuertas pueden acoplarse por ejemplo a un dispositivo de succión (no mostrado) que puede ser operado manual hubo automáticamente. El dispositivo de succión puede ser por ejemplo, una jeringa o una bomba eléctrica. El dispositivo de succión deberá ser capaz de proporcionar suficiente presión negativa para aspirar tejidos de un paciente. En general, cualquier dispositivo de succión conveniente conocido por una persona con destreza ordinaria en la especialidad, por ejemplo un cirujano, podrá ser empleado. Los conductos 12 además pueden comprender una o más abrazaderas (no mostradas) para controlar el flujo de material entre varios componentes del sistema. Las abrazaderas son útiles para mantener la esterilidad del sistema al sellar efectivamente diferentes regiones del sistema. En forma alterna, los conductos 12 pueden comprender una o más válvulas 14 que controlan el flujo del material a través del sistema. Las válvulas 14 se identifican como círculos abiertos en las figuras. En modalidades preferidas, las válvulas pueden ser válvulas de pellizco electromecánicas. En otra modalidad, las válvulas pueden ser válvulas neumáticas. Todavía en otras modalidades, las válvulas pueden ser válvulas hidráulicas o válvulas mecánicas. Estas válvulas de preferencia se activan por un sistema de control que puede acoplarse a palancas. Las palancas pueden manipularse manualmente de manera tal que las palancas de estiren. En modalidades automatizadas, el sistema de control puede acoplarse a las palancas así como a un dispositivo procedimiento que pueda activar las válvulas en condiciones de activación predeterminadas. En ciertas modalidades automatizadas, la activación de las válvulas puede ser automatizada parcialmente y sujeta parcialmente a la preferencia del usuario de manera tal que el proceso pueda ser optimizado. Todavía en otras modalidades, ciertas válvulas pueden ser activar las manualmente y otros automáticamente a través de un dispositivo de procedimiento. Las válvulas 14 también pueden emplearse en conjunto con una o más bombas, por ejemplo, bombas peristálticas 34 o bombas de desplazamiento positivo (no mostradas). Los conductos 12 y/o las válvulas 14 también pueden comprender sensores 29, por ejemplo sensores ópticos, sensores ultrasónicos, sensores de presión u otras formas de monitores conocidos en la técnica, que son capaces de distinguir entre los diversos componentes fluidos y niveles de fluidos que circulan a través del sistema. En una modalidad preferida, los sensores 29 pueden ser sensores ópticos. El sistema también puede incluir una pluralidad de filtros 36. En ciertas modalidades, los filtros puedan estar dentro de una cámara de sistema 28. Diferentes cámaras dentro del sistema pueden comprender diferentes filtros. Los filtros son efectivos para separar las células regenerativas, por ejemplo, células madre y/o células progenitoras, de células indeseables y agentes de disgregación que pueden emplearse de acuerdo con el sistema. En una modalidad, un montaje de filtro 36 incluye un dispositivo de filtrado de fibras huecas. En otra modalidad un montaje del filtro 36 incluye un dispositivo de filtro percolante que puede o no ser empleado con un proceso de sedimentación. En una modalidad adicional, el montaje del filtro 36 comprende un dispositivo de centrifugado, que puede o no utilizarse con dispositivo y proceso de elutriación. Todavía en otra modalidad, el sistema comprende una combinación de estos dispositivos de filtro. Las funciones de filtrado de la presente invención pueden ser dobles, con algunos filtros que retiran cosas de la concentración final tales como colágeno, lípidos libres, adipocitos libres y colagenaza residual, y con otros filtros que se utilizan para concentrar el producto final. Los filtros del sistema pueden comprender una pluralidad de poros en intervalos de diámetro y/o longitud desde 20 a 800 pm. En una modalidad preferida, la cámara de recolección 20 tiene un filtro prefijado 28 con una pluralidad de poros en intervalos de 80 a 400 pm. En una modalidad preferida, la cámara de recolección 20 tiene un filtro prefijado 20 con una pluralidad de poros de 265 a 400 pm. En otras modalidades, los filtros pueden ser desprendibles/o desechables. El sistema también puede comprender uno o más dispositivos de control de temperatura (no mostrados) que se ubican para ajustar la temperatura del material contenido dentro de una o más cámaras del sistema. El dispositivo de control de temperatura puede ser un calentador, un refrigerante, o ambos, es decir, puede ser capaz de conmutar entre un calentador y un refrigerante. El dispositivo de temperatura puede ajustar la temperatura de cualquier material que pase a través del sistema, incluyendo el tejido, los agentes de disgregación, los agentes de resuspensión, los agentes de enjuague, los agentes de lavados, o los aditivos. Por ejemplo, enfrentamiento de tejido adiposo facilitará disgregación, mientras que el incremento de la salida de células relativas es conveniente para mantener la viabilidad. También, si se requieren reactivos pre-calentados para óptimo procesamiento de tejido, el papel del dispositivo de temperatura será mantener la temperatura pre-determinada en vez de incrementar o disminuir la temperatura. Para mantener cerrada una ruta de fluido/tejido estéril, todas las compuertas y válvulas pueden comprender un cierre que mantenga la configuración sellada del sistema. Ei cierre puede ser una membrana que es impermeable al fluido, aire u otros contaminantes o podrá ser cualquier otro cierre conocido en la especialidad. Además, todas las compuertas del sistema pueden diseñarse de manera tal que puedan alojar jeringas, agujas u otros dispositivos para retirar los materiales en las cámaras sin comprometer la esterilidad del sistema. Como se establece aquí, puede extraer tejido de un paciente mediante cualquier método reconocido en la técnica. El tejido aspirado puede extraerse antes de colocarse en el sistema para tratamiento. El tejido aspirado típicamente se transfiere a la cámara de recolección 20 a través de conductos 12 mediante una compuerta de entrada sellada, tal como una compuerta de acceso para arrojar jeringas, cerrada con septo (mostradas en la cámara de recolección). En forma alterna, la etapa de extracción de tejido puede ser parte del sistema. Por ejemplo, la cámara de recolección 20 puede comprender una línea de vacío 11 que facilita remoción de tejido utilizando una cánula estándar insertado en el paciente. De esta manera, en esta modalidad, todo el sistema está conectado el paciente. El tejido puede introducirse en la cámara de recolección 20 a través de una compuerta de entrada 21 mediante un conducto como 12a que es parte de una ruta estéril cerrada. La cámara de recolección 20 puede comprender una pluralidad de cilindros 28 o latas rígidas o flexibles o sus combinaciones. Por ejemplo, la cámara de recolección 20 puede comprender una o más latas rígidas de tamaños diversos. La cámara de recolección 20 también puede comprender una o más bolsas flexibles. En dichos sistemas, la bolsa de preferencia se proporciona con un soporte, tal como un bastidor interno o externo, que ayuda a reducir la probabilidad de que la bolsa de aplaste ante la aplicación de succión a la bolsa. La cámara de recolección 20 ser dimensiona para contener las cantidades necesarias de salino para lavar y disgregar apropiadamente el tejido antes de la etapa de lavado y concentrado del proceso realizado en la cámara de procesamientos 30. De preferencia, el volumen de tejido o fluido presente en la cámara de recolección 20 3 fácilmente evaluado a simple vista. Por ejemplo, para obtener células regenerativa tejido adiposo, una cámara de recolección conveniente tiene la capacidad por contener 800 mi de lipo aspirado y 1200 mi de salino. De acuerdo con esto, en una modalidad, la cámara de recolección 20 tiene una capacidad de al menos 2 litros. En otro modalidad, para separar y concentrar glóbulos rojos de la sangre, la cámara de recolección 20 tiene al menos una capacidad de 1.5 litros. En general, el tamaño de la cámara de recolección 20 varía dependiendo el tipo y cantidad de tejido recolectado del paciente. La cámara de recolección 20 puede dimensionarse para contener tan poco como aproximadamente 5 mi hasta aproximadamente 2 litros de tejido. Para volúmenes de tejido menores, por ejemplo, 5 a 100 mis, el tejido puede recolectarse en una jeringa antes de transferir a la cámara de recolección 20. La cámara de recolección 20 puede construirse utilizando cualquier material biocompatible conveniente que pueda ser esterilizado. En una modalidad preferida, la cámara de recolección 20 se construye de material desechable que satisfacer los requerimientos de biocompatibilidad para contacto intravascular como 23 se describe en la norma ISO 10993. Por ejemplo, puede utilizarse policarbonato acrílico o ABS. La ruta de fluidos de la cámara de recolección 20 de preferencia está libre de pirógenos, es decir adecuada para uso en sangre sin peligro de transmisión de enfermedades. En una modalidad, la cámara de recolección 20 se construye de un material que permite al usuario determinar vlsualmente el volumen aproximado de tejido presente en la cámara. En otras modalidades, el volumen de tejido y/o fluido de la cámara recolección 20 se determina por sensores automatizados 29. La cámara de recolección 20 de preferencia se diseña de manera tal que en una modalidad automatizada, el sistema puede determinar el volumen de tejido y/o fluido dentro de la cámara con un grado de precisión razonable. En una modalidad preferida, el sistema detecta el volumen dentro de la cámara de recolección con una precisión de más o menos 15%. En una modalidad particular que se proporciona a manera de ejemplo solamente, la cámara de recolección 20 está en la forma de una cámara rígida como por ejemplo una cámara construida de policarbonato grado médico que contiene un filtro prefijado aproximadamente por poliéster grado médico cónico 28 con un tamaño de malla de 265 pm (ver Figura 5). El recipiente de recolección de tejido rígido pueda tener un tamaño de aproximadamente 20.32 cm (8 pulgadas) de alto y aproximadamente 12.7 cm (5 pulgadas) de diámetro, el espesor de pared puede ser de aproximadamente 0.3175 cm (0.125 pulgada). Se puede tener acceso al interior del cilindro por ejemplo a través de una o más compuertas para tubería de succión, una o más compuertas con tubería para conexión a través de tecnología de exploración computaclonal de modos de enlaces posibles, estéril, y/o una o más compuertas para acceso a perforación de aguja a través de un septo de hule. El filtro prefijado 28 en el interior de la cámara de recolección 20, de preferencia se 3 estructura para retener tejido adiposo y pasar tejido no adiposo tal como por ejemplo los tejidos se retiran del paciente. Más específicamente, el filtro 28 puede permitir paso de lípidos libres, sangre y salino, mientras que retiene fragmentos de tejido adiposo durante, o en otro modalidad después, la recolección inicial del tejido adiposo. En ese aspecto, el filtro 28 incluye una pluralidad de poros, ya sea del mismo o de diferentes tamaños, pero en el intervalo en tamaño de aproximadamente 20 pm a 5 mm. En una modalidad preferida, el filtro 28 incluye una pluralidad de poros de 400 pm. En la modalidad preferida, el filtro 28 es malla de poliéster grado médico de aproximadamente 200 pm de espesor con un tamaño de polo de aproximadamente 265 pm y alrededor de 47% de área abierta. Este material retiene el tejido durante enjuague, pero permite que las células pasen a través de la malla después de disgregación del tejido. De esta manera, cuando los tejidos se aspiran del paciente, el tejido no adiposo puede separarse del tejido adiposo. La misma funcionalidad puede lograrse con diferentes materiales, tamaño de malla, y el número y tipo de compuertas. Por ejemplo, tamaños de poro de malla menores a 100 pm o tan grandes como varios miles de mieras, lograrán el mismo propósito de permitir el paso de salino y células de sangre mientras que retienen agregados y fragmentos de tejido adiposo. Similarmente, puede lograrse el mismo propósito por uso de un material plástico rígido alterno, o por muchas otras modificaciones que serán conocidas por aquellos con destreza en la técnica. El sistema 10 también puede comprender una o más fuentes de solución 22. La fuente de solución puede comprender una fuente de solución de lavado 23, y una fuente de agente de disgregación de tejido 24 tal como colagenasa. La cámara de recolección 20 está constituida por rutas de fluido cerradas que permiten que las soluciones o agentes de lavado y disgregación sean agregados al tejido en una forma aséptica. Los recipientes para la solución de lavado 23 y los agentes de disgregación 24 pueden ser cualquiera recipiente conveniente que mantenga sus contenidos en una forma estéril, por ejemplo, una bolsa plegable, tal como una bolsa IV empleada en entornos clínicos. Estos recipientes pueden tener conductos 12, tales como el conducto 12e, acoplado a la cámara de recolección 20, de manera tal que la solución de lavado y el agente de disgregación puedan suministrarse al interior de la cámara de recolección 20. La solución de lavado y en la gente de disgregación puedan suministrarse al interior de la cámara de recolección 20 a través de cualquier forma reconocida en la técnica, incluyendo simple presión de gravedad aplicada al exterior de los recipientes para el salino 23 y/o los agentes de disgregación 24 o al colocar una bomba de desplazamiento positivo en los conductos, por ejemplo, el conducto 12d en la Figura 4. En modalidades automatizadas, ei dispositivo de procesamiento del sistema calcula diversos parámetros, por ejemplo, el volumen de salino y el tiempo o número de ciclos requeridos para lavar, así como la concentración o cantidad de agente de disgregación y el tiempo requerido para disgregación, con base en la información inicialmente suministrada por el usuario (por ejemplo, volumen del tejido que se procesa). De forma alterna, las cantidades, tiempos etc., pueden ser manipulados manualmente por el usuario. El tejido y/o fluido dentro de la cámara de recolección deberán mantenerse a una temperatura en el intervalo de 30° Celsius a 40° Celsius. En una modalidad preferida, la temperatura de la suspensión dentro de la cámara de recolección se mantiene a 37° Celsius. En ciertas modalidades, si el procedimiento quirúrgico o la aplicación terapéutica requiere ser retrasado, el tejido selecto puede almacenarse en la cámara de recolección para uso posterior. El tejido puede almacenarse en o aproximadamente la temperatura ambiente o aproximadamente 4° Celsius por hasta 96 horas. La solución de lavado puede ser cualquier solución conocida por una persona con destreza en la técnica, incluyendo salino o cualquier otra solución de electrolitos amortiguada o no amortiguada. Los tipos del tejido que se procesan dictarán los tipos o combinaciones de soluciones de lavado empleadas. Típicamente, la solución de lavado, tal como salino, entra a la cámara de recolección 20 después de que el tejido adiposo fue retirado del paciente y colocado en la cámara de recolección. Sin embargo, ia solución de lavado puede suministrarse a la cámara de recolección 20 antes de que se extraiga el tejido adiposo o puede suministrarse en la cámara de recolección 20 en forma concurrente con el tejido adiposo. En la cámara de recolección 20, la solución de lavado y el tejido adiposo extraído pueden mezclarse por cualquier medio incluyendo los métodos descritos a continuación. Por ejemplo, el tejido puede lavarse por agitación (lo que lleva el máximo la viabilidad celular y minimiza la cantidad del líquido libre liberado). En una modalidad, el tejido se agita al girar toda la cámara de recolección 20 a través de un arco de grados variantes (por ejemplo, a través de un arco de aproximadamente 45 grados a aproximadamente 90 grados) a velocidades variantes, por ejemplo, aproximadamente 30 revoluciones por minuto. En otras modalidades, el tejido se agita al girar toda la cámara de recolección 20, en donde la cámara de recolección 20 comprende una o más paletas o proyecciones conectadas rígidamente a una superficie interior de la cámara de recolección, a través de un arco de grados variantes (por ejemplo, a través de un arco de aproximadamente 45 grados a aproximadamente 90 grados) a velocidades variantes, por ejemplo, aproximadamente 30 revoluciones por minuto. La rotación de la cámara de recolección 20 descrita anteriormente puede lograrse con un mecanismo de impulso conectado a o en proximidad con la cámara de recolección 20. El mecanismo difuso puede ser una simple correa o engranaje u otro mecanismo de impulso conocido en la técnica. La velocidad de rotación puede ser por ejemplo 30 revoluciones por minuto. En general, se ha encontrado que superiores velocidades generen más grandes volúmenes de lípidos libres y eso puede no ser lo óptimo.

En otras modalidades, el tejido se agita al colocar una flecha giratoria 25 dentro de la cámara de recolección 20, en donde la flecha giratoria comprende una o más paletas 25a o proyecciones conectadas rígidamente a la flecha giratoria 25 que pasa a través de la mezclar conforme se hace girar la flecha. En ciertas modalidades, la flecha giratoria 25 con paletas 25a rígidamente conectadas puede apoyarse en el fondo de la cámara de recolección 20. Esto puede lograrse por ejemplo al colocar el dispositivo tipo paleta en un campo magnético de centrifugado (por ejemplo, un agitador magnético). En forma alterna, la agitación del tejido puede lograrse utilizando un agitador simple conocido en la técnica, es decir un dispositivo que implementa agitación ascendente y descendente sin rotación. El tejido también puede lograrse utilizando cualquier otro medio reconocido en la especialidad incluyendo balanceo, agitación, inversión, etc. Después de una cantidad deseada de ciclos de lavado, un agente de disgregación de tejido puede suministrarse a la cámara de recolección 20 para separar las células regenerativas de los componentes del tejido adiposo restantes.

El agente de disgregación puede ser cualquier agente de disgregación conocido por una persona con destreza en la técnica. Agentes de disgregación que puedan emplearse incluyen proteasas neutras, colegenasa, tripsina, lipasa, hialuronidasa, deoxiribonucleasa, miembros de la familia de mezclas de enzimas Blendzyme, por ejemplo, liberasa Hl, pepsina, energía ultrasónica u otra física, láser, microondas, otros dispositivos mecánicos y/o sus combinaciones. Un agente de disgregación preferido de la invención es colagenasa. Los agentes de disgregación pueden agregarse con otras soluciones. Por ejemplo, salino tal como salino suministrado de una fuente de salino 23 como se describió anteriormente, puede agregarse al tejido adiposo junto con o inmediatamente seguido por adhesión de colagenasa. En una modalidad, el tejido adiposo lavado se mezcla con una solución de enzimas que contiene colagenasa en o alrededor de 37 grados C por aproximadamente 20-60 minutos. En otras modalidades, una concentración superior de colagenasa o agente similar, puede agregarse para disminuir el tiempo de digestión. El tejido adiposo lavado y el agentes de disgregación del tejido pueden luego agitarse en formas similares a los métodos de agitación descritos anteriormente hasta que se disgrega el tejido adiposo lavado. Por ejemplo, el tejido adiposo lavado y el agente de disgregación de tejido pueden aceptarse por rotación de la cámara de recolección completa a través de un arco de aproximadamente 90 grados, al tener una flecha que contiene una o más paletas que pasan a través de la solución conforme se gira la flecha, y/o recolección que contiene paletas o proyecciones en la superficie anterior de la cámara de recolección. Dependiendo del propósito por el cual se utilizarán las células derivadas de adiposo, el tejido adiposo ya puede estar parcialmente disgregado o completamente disgregado. Por ejemplo, en modalidades en donde las células derivadas de tejido adiposo se van a combinar con una unidad de tejido adiposo, puede ser conveniente ei disgregado parcialmente el tejido adiposo recolectado, para retirar una función del tejido adiposo parcialmente disgregado y luego continuar la disgregación de la porción restantes de tejido adiposo que queda en la cámara de recolección. En forma alterna, una porción de tejido adiposo lavado puede retirarse y apartarse en un recipiente de muestra antes que cualquier digestión. En otra modalidad, el tejido adiposo cosechado se disgrega parcialmente para concentrar células antes de volver a introducir ai paciente. En una modalidad, el tejido adiposo se mezcla con un agente de disgregación de tejido por un periodo tiempo generalmente menor a aproximadamente 20 minutos. Una porción del tejido parcialmente disgregado luego puede retirarse de la cámara de recolección y el restante tejido disgregado parcialmente puede ser adicionalmente disgregado al mezclar ei tejido adiposo con un agente de disgregación de tejido por otros 40 minutos. Cuando las células derivadas de tejido adiposo se van a utilizar como una población esencialmente pura de células regenerativas, el tejido adiposo puede ser totalmente disgregado. Después de digestión, la solución de tejido y agentes de disgregación se deja que sedimente por un periodo tiempo suficiente para permitir que. los componentes flotantes y no flotantes de la solución se diferencien dentro de la cámara de recolección. Típicamente, el tiempo está en un intervalo de aproximadamente 15 segundos a varios minutos pero puede implementarse otros tiempos en modalidades modificadas. La capa flotante está constituida de las células regenerativas que requieren mayor lavado y concentración. La capa no flotante comprende sangre, colágeno, lípidos y otros componentes de células no regenerativas del tejido. La capa no flotante debe retirarse de la cámara de desecho. De acuerdo con esto, la cámara de recolección 20 de preferencia comprende una compuerta de salida 22 en el punto más bajo de la cámara, de manera tal que sangre y otros componentes no flotantes de tejido puedan drenarse a uno o más recipientes de desecho 40 mediante uno o más conductos 12. La cámara de recolección 20 en general están en (o puede colocarse en) una posición vertical de manera tal que las compuertas de salida 22 se ubican en el fondo de salida de la cámara de recolección. El drenado puede ser pasivo o activo. Por ejemplo, los componentes no flotantes descritos anteriormente pueden drenarse utilizando gravedad, al aplicar presión positiva o negativa, por uso de bombas 34 o por uso de ventilación 32. En modalidades automatizadas, el dispositivo de procesamiento puede enviar señales a ciertas válvulas y/o bombas para drenar la capa no flotante de la cámara de recolección 20. Las modalidades automatizadas también pueden comprender sensores 29 que pueden detectarse cuando la interfase entre los líquidos flotantes y no flotantes se han alcanzado. Las modalidades automatizadas también pueden comprender un sensor 29, por ejemplo, un sensor óptico, que puede ser capaz de detectar un cambio en la refracción de luz del exponente del efluente que circula en el conducto que sale de la cámara recolección. El cambio apropiado en la refracción de luz puede señalar la presencia de la capa flotante en los conductos de salida que indican que la capa no flotante se ha drenado. Los sensores 29 luego pueden señalar al dispositivo de procesamiento para que proceda con la siguiente etapa. En ciertas modalidades, sin embargo el tejido puede procesarse para recuperar los componentes de células no degenerativas del tejido. Por ejemplo, en ciertas aplicaciones terapéuticas o de investigación, pueden desearse colágeno, proteínas, componentes de matriz o estromales, lípidos, adipocitos u otros componentes de tejido. En dichas modalidades, es la capa flotante que comprende las células regenerativas que se debe retirarse como se describió anteriormente a la cámara desecho. La capa no flotante se retiene entonces en el sistema para mayor procesamiento según se requiera. Una vez que la capa no flotante se retira, la capa flotante que comprende las células regenerativas puede ser lavada una o mas veces para retirar contaminantes residuales. De acuerdo con esto, la cámara de recolección 20 típicamente incluye una o más compuertas 21 , para permitir que la solución de lavado sea suministrada al interior de la cámara, y una o más compuertas 22 permitan que desecho y otros materiales sean dirigidos afuera de la cámara de recolección 20. Por ejemplo, la cámara de recolección puede incluir una o más compuertas de entradas selladas como se describe aquí. La cámara de recolección 20 también puede incluir una o más tapas (no mostrados), tales como la tapa superior y la tapa de fondo para asegurar adicionaimente que el sistema permanece estéril mientras que la solución de lavado se suministra a la cámara de recolección y/o desechos se transportan fuera. Las compuertas 21 pueden proporcionarse en las tapas de las cámaras de recolección o en una pared lateral de la cámara de recolección. El proceso de lavado con solución de lavado fresca puede repetirse hasta que el contenido residual de contaminantes no flotantes en la solución alcance un nivel pre-determinado. En otras palabras, el material restante en la cámara de recolección 20, que comprende el material flotante de la mezcla anteriormente descrita, incluyendo fragmentos de tejido adiposo, puede ser lavado una o más de sus adicionales hasta que la cantidad de material indeseado se reduzca a un nivel predeterminado deseado. Un método para determinar el punto extremo de lavado es medir la cantidad de células de glóbulos rojos en la solución de tejido. Esto puede lograrse al medir la luz absorbida en la longitud de onda 540 nm. En una modalidad preferida, se considera aceptable un intervalo entre aproximadamente 0.546 y 0.842. Durante el lavado/o disgregación, uno o más aditivos pueden agregarse a los diversos recipientes según se requiera para mejorar los resultados. Algunos ejemplos de aditivos incluyen agentes que optimiza lavado y disgregación, aditivos que mejoran la viabilidad de la población de células activas durante el procesamiento, agentes antimicrobianos (por ejemplo, antibióticos), aditivos que lisan adipocitos y/o células de glóbulos rojos, o aditivos que enriquecen poblaciones celulares de interés (por adherencia diferencial a porción de fase sólida o para de otra forma promover la reducción sustancial o enriquecimiento de poblaciones celulares). Otros aditivos posibles incluyen aquellos que promueven la recuperación y viabilidad de las células regenerativas (por ejemplo, inhibidores de caspasa) o que reduce la probabilidad de reacción adversa ante infusión o colocación (por ejemplo, inhibidores de re-agregación de células o tejido conectivo). Después de que ha transcurrido un tiempo suficiente de sedimentación, la fracción no flotante de la mezcla resultante de fragmentos de tejido adiposo lavados y agentes de disgregación de tejido contendrá células regenerativas, por ejemplo, células madre y otras células progenitoras derivadas de adiposo. Como se discute aquí, la fracción no flotante que contiene las células regenerativa será transferida a la cámara de procesamiento 30 en donde las células regenerativas de interés, tales como las células madre derivadas de adiposo, se separarán de otras células y materiales presentes en la porción no flotante de la mezcla. Esta fracción no flotante se refiere aquí como la composición de células regenerativas y comprende muchos tipos diferentes de células, incluyendo células madre, células progenitoras, células precursoras endoteliales, adipocitos y otras células regenerativas aquí descritas. La composición de células regenerativas también puede contener uno o más contaminantes, tales como colágeno y otras proteínas de tejido conectivo y sus fragmentos, que estuvieron presentes en los fragmentos del tejido adiposo, o colagenasa residual del proceso de disgregación del tejido. La cámara de procesamiento 30 de la invención de preferencia se ubica dentro del sistema, de manera tal que la composición de células regenerativas se mueve desde la cámara de recolección 20 a la cámara de procesamiento 30 mediante tuberías 12, válvulas 14 y bomba 34, en una forma estéril. La cámara de procesamiento se dimensiona para alojar mezclas tejido/fluido en intervalos de 10 mL a 1.2 L. En una modalidad preferida, la cámara de procesamiento se dimensiona para alojar 800 mLs. En ciertas modalidades, toda la composición de células regenerativas de la cámara de recolección 20 se dirige a la cámara de procesamiento 30. Sin embargo, en otros modalidades, una porción de la composición de células regenerativas se dirige a la cámara de procesamiento 30 y otro porción se dirige a una región diferentes del sistema, por ejemplo, la cámara de muestra 60, para recombinarse con células procesadas en la cámara del procedimiento 30 en un tiempo posterior. La cámara de procesamiento 30 puede construirse utilizando cualquier material biocompatible conveniente que pueda ser esterilizado. En una modalidad preferida, la cámara de procesamiento 30 se construye de material 40 desechable que satisface los requerimientos de biocompatibilidad para el contacto intravascular, como se describe en la norma ISO 10993. Por ejemplo, puedan emplearse policarbonato, acrílico, ABS, copolímeros de etilen vinil acetato o estireno-butadieno (SBC). En otra modalidad, la ruta de fluido de la cámara de procesamiento desechable está libre de pirógenos. La cámara de procesamiento puede estar en la forma de una bolsa de plástico, tales como aquellas empleadas convencionalmente en procesamiento de sangre en bancos de sangre; o en otros modalidades pueden ser estructuralmente rígida (Figura 6). En una modalidad, la cámara de procesamiento 30 puede ser similar a la cámara de procesamiento descrita en ia solicitud de patente de los E.U.A. Número de Serie 10/316,127, presentada en diciembre 7, 2001 y en la solicitud de patente de los E.U.A. Número de Serie 10/325,728, presentada en diciembre 20, 2002, los contenidos de las cuales en su totalidad aquí se incorporan por referencia. La cámara de procesamiento 30 puede construirse en cualquier forma adecuada para separar y concentrar células, incluyendo filtración y centrifugación y/o sus combinaciones. En ciertas modalidades, la composición de células regenerativas de la cámara de recolección 20 se introduce en la cámara de procesamiento 30 en donde la composición puede filtrarse para separar/o concentrar una población de células regenerativas particular. La filtración de células es un método para separar componentes particulares y celular de otros componentes diferentes o tipos de células. Por ejemplo, la composición de células regenerativa de la dimensión comprenden múltiples tipos diferentes de células, incluyéndose células madre, células progenitoras y adipocitos así como uno o más contaminantes tales como colágeno, que está presente en los fragmentos del tejido adiposo, o colagenasa residual del proceso de disgregación del tejido. El filtro 36 presente en la cámara de procesamiento 30 puede permitir separación y concentración de una sub-población particular de células regenerativas, por ejemplo células madre o células progenitoras endoteliales, etc. Algunas variables que están asociados con filtración de células a partir de un líquido, incluyen pero no están limitadas al tamaño del poro del medio de filtro, geometría (forma) del poro, área superficial del filtro, dirección del flujo de la solución filtrada, región transmembrana, dilución de la población de células particulares, tamaño y forma de partículas así como tamaño de células y viabilidad celular. De acuerdo con la presente discusión, las células particulares que se desean separar o filtrarse típicamente son células madre derivadas de adiposo. Sin embargo, en ciertas modalidades, las células particulares pueden incluir células progenitoras derivados de adiposo, tales como células precursoras endoteliales, solas o en combinación con las células madre. La composición de células regenerativas puede dirigirse a través de un montaje de filtro, tal como el montaje del filtro 36. En ciertas modalidades, el montaje del filtro 36 comprende una pluralidad de filtros que se estructuran para realizar diferentes funciones y separar la composición de células regenerativas en distintas partes o componentes. Por ejemplo, uno de los filtros puede configurarse para separar colágeno de la composición de células regenerativas, uno de los filtros puede configurarse para separar adipocitos y/o . componentes lípidos de la composición de células regenerativas y uno de los centros puede combinarse para separar enzimas residuales, tales como el agente de disgregación del tejido, de la composición de células regenerativas. En ciertas modalidades, uno de los filtros es capaz de realizar dos funciones, tal como separar colágeno y al agente de disgregación de tejido de la composición. La pluralidad de filtros típicamente se dispone en serie; sin embargo, al menos una porción de los filtros puede disponerse en paralelo por igual. El montaje en serie de los filtros del montaje del filtro 36 se ilustra en la Figura 2. Un montaje paralelo en los filtros del montaje 36 se ilustra en la Figura 3. En una modalidad, el montaje del filtro 36 comprende un primer filtro, un segundo filtro, y un tercer filtro. El primer filtro se configura para retirar particular de colágeno presentes en la composición de células regenerativas. Estas partículas de colágeno típicamente son de aproximadamente 0.1 miera de diámetro y pueden ser de hasta 20 mieras de largo. Las partículas de colágeno puedan ser los tamaños variantes dependiendo de la digestión. También pueden ser fibrilas, lo que significa que tienen giros y torcidos. Cualquiera de los filtros aquí descritos puede elaborarse de poliéstersulfona, poliéster, PTFE, polipropileno, PVDF, o posiblemente celulosa. Hay dos posibilidades para filtrar el colágeno. Una es intentar retirar primero las partículas más grandes, permitir que las células pasen, lo que requiere un filtro probablemente en el intervalo de 10 mieras. El segundo método es utilizar un filtro tamaño más pequeño, tal como 4.5 mieras, con la intención de que el colágeno sea bien digerido, para atrapar las células, y permitir que el colágeno pase. Esto requerirá un medio para flotar las células retirándolas del filtro. También puede haber una posibilidad de implementar un filtro que atraiga y retenga las fibras de colágeno. El segundo filtro se configura para retirar adipocitos inmaduros libres que no son flotantes en la composición de células regenerativas. En una modalidad, el segundo filtro puede construirse de poliéster y tener un tamaño de poros entre aproximadamente 30 y aproximadamente 50 mieras, con un tamaño de poros preferido que es de aproximadamente 40 mieras. Aunque se refiere como un segundo filtro, la colocación de este dispositivo puede estar en una primera posición, en esa segunda, para facilitar una remoción inicial de células y partículas más grandes. El tercer filtro se configura para retirar la colagenasa no usada o residual u otro agente de disgregación de tejido presente en la composición. En una implementación preferida, la colagenasa puede degenerar con el tiempo. En una modalidad, el tercer filtro comprende una pluralidad de poros que tienen un diámetro o longitud menor a 1 pm. En ciertas modalidades, los poros pueden tener diámetros que son más pequeños que 1 m. En ciertas modalidades, los poros tienen diámetros entre 10 kD y 5 mieras. En ciertas modalidades, el tercer filtro puede configurarse para concentrar la población de células regenerativas en un pequeño volumen de salino u otra solución de lavado como aquí se discute. Como se refiere actualmente, sólo el filtro final es la unidad de fibras huecas. No es necesario que ninguno de los filtros sea del tipo de fibras huecas. La unidad de fibras huecas se emplea para el filtro final en una implementación preferida, debido a que es más eficiente para retirar la colagenasa con el efecto nocivo más pequeño a las células regenerativas. En una modalidad en donde el dispositivo es una colección de ítems de inventario, los tres filtros están en alojamientos separados. Es factible tener el primer y segundo filtros combinados en un alojamiento si una unidad de fibras huecas se utiliza para el tercer filtro. Si el filtro final no es una configuración de fibras huecas entonces todos los tres filtros pueden estar contenidos en un alojamiento. Los filtros del montaje de filtros 36 pueden ubicarse en ia cámara de procesamiento 30 o pueden proporcionarse como componentes separados de la cámara de procesamiento 30. Además, los filtros de montaje de filtros 36 pueden proporcionarse en múltiples cámaras de procesamiento u en una forma en línea. En ciertas modalidades, los conductos o tubería pueden actuar como una cámara o cámaras de procesamiento. La cámara de procesamiento puede reducirse en tamaño de manera tal que se convierte en el volumen interior de los conductos que conectan los filtros. Este tipo de sistema funcionará correctamente si el volumen de solución de tejido se dimensiona apropiadamente. De esta manera, los conductos pueden actuar como en la cámara de procesamiento al contener el fluido con células conforme se pasan a través de los filtros. Debe tenerse cuidado en minimizar el volumen de los conductos, de manera tal que las células/tejido no se pierdan innecesariamente en el proceso de cebado y operación del sistema. Con referencia a la modalidad anteriormente descrita, la composición de células regenerativas que contiene las células lavadas y el colágeno residual, adipocitos y/o agente de disgregación de tejido, puede dirigirse a través del primer filtro para retirar al menos una porción de y de preferencia sustanciaimente todas las partículas de colágeno de la composición, de manera tal que están presentes menos y de preferencia nada de partículas de colágeno en la solución filtrada. La composición de células regenerativas filtrada que contiene los adipocitos y/o agente de disgregación de tejido no digerido, luego pueden dirigirse a través de! segundo filtro para retirar al menos una porción de y de preferencia sustanciaimente todos los adipocitos libres de la composición de células regenerativas filtradas. Subsecuentemente, la composición de células regenerativas filtrada dos veces que contiene el agente de disgregación de tejido no digerido, pueden dirigirse a través del tercer filtro tal como un dispositivo de filtrado de fibras huecas, como se discute aquí para retirar o reducir el agente de disgregación de tejido no digerido de la composición de células regenerativas. La composición de células regenerativas se filtra tres veces (es decir, la composición que queda después de pasarse a través del primero, segundo, y tercer filtros) luego pueden ser dirigida a múltiples salidas, que pueden incluir una porción de la cámara de procesamiento 30 que comprende múltiples salidas. Estas salidas pueden servir para mantener la presión necesaria, así como proporcionar conexiones mediante conductos a otros recipientes, que pueden incluir la cámara de recolección 20, la cámara de salida 50, y/o el recipiente de desechos 40. En una modalidad, un filtro del montaje del filtros 36 comprende un miembro de filtración de fibras huecas. O, en otras palabras, el filtro comprende la colección de tubos huecos formados con el medio filtro. Ejemplos de medios de filtro que pueden emplearse con el sistema descrito 10 incluyen polisulfona, poliéstersulfona o un material de éster mixto, y semejantes. Estas fibras huecas o tubos huecos de medio filtro pueden estar contenidos en un cartucho cilindrico de montaje de filtros 36. Los tubos o fibras individuales de medio de filtro, típicamente tienen un diámetro interior que está en el intervalo desde aproximadamente 0.1 mm a aproximadamente 1 mm con un valor preferido que es de aproximadamente 0.5 mm. El diámetro y longitud de un cartucho cilindrico conveniente determinarán el número de tubos individuales de medio filtro que pueden colocarse dentro del cartucho. Un ejemplo de un cartucho de filtro de fibras huecas conveniente es el filtro del flujo tangencial catálogo Fiber FloR #M-C-050-K (Minntech, Minneapolis, Minnesota). El tamaño de poros del medio filtro puede estar en el intervalo de entre aproximadamente 10 kiloDaltons y aproximadamente 5 mieras, con un tamaño de poros preferido que este aproximadamente 0.5 mieras. En el filtro de fibras huecas, cada tubo hueco tiene un cuerpo con un primer extremo, segundo extremo, y un lumen ubicado en el cuerpo y que se extiende entre el primer extremo y el segundo extremo. El cuerpo de cada grupo hueco incluye una pluralidad de poros. Los poros en generalmente se orientan en el cuerpo, de manera tal que se filtra una composición de células regenerativas al circular a través del lumen del cuerpo, y los productos a filtrado pasan tangencialmente a través de los poros, como se muestra en la Figura 12A. En otras palabras, las partículas más pequeñas en un líquido pasan tangencialmente a través de los poros respecto al flujo del fluido por el lumen del cuerpo. La composición con las células regenerativas pasa a través del lumen de cada tubo hueco cuando la composición se filtra. De preferencia, el flujo de la composición es tangencial a los poros del cuerpo de cada tubo hueco. Al utilizar un flujo tangencial de fluido, la eficiente filtración de las células madre puede mejorarse respecto a otras técnicas de filtración. Por ejemplo, de acuerdo con algunas técnicas de filtración, los poros de los medios de filtro se colocan de manera tal que filtro se orienta perpendicular al flujo del fluido de manera tai que el medio de filtro bloqueé la ruta o trayectoria del fluido que se filtra, como su muestra en la Figura 12B. En este tipo de filtración, las partículas que separan por filtración de la composición de células regenerativas, por ejemplo, las células madre, tienden a acumularse en un lado del filtro y bloquear el flujo del fluido a través de los poros. Este bloqueo puede reducir la eficiencia del filtro. Además, las células se comprimen constantemente por la presión del flujo fluido así como el peso de las células que se acumulan en el lado corriente arriba del filtro. Esto puede llevar a lisis incrementada de células madre. De esta manera, en estas técnicas de filtración,, en donde el flujo del fluido es paralelo a la orientación de los poros en el filtro, tanto las células grandes como partículas pequeñas pueden dirigirse en forma indeseable contra el medio del filtro conforme el fluido se pasa a través de los poros. Consecuentemente, productos más grandes en el líquido tales como células pueden bloquear los poros, de esta manera disminuyendo el efecto de filtrado e incrementando la ocurrencia de ruptura o lesiones de células. En contraste, en la configuración de fibras huecas del presente sistema 10, el fluido que se filtra fluye dentro del lumen de tubo hueco. La porción del fluido que tiene la capacidad de pasar a través de los poros el cuerpo del filtro lo hace con el auxilio de presión positiva del fluido en el interior del cuerpo así como presión negativa que se aplica al exterior del cuerpo. En esta modalidad, las células típicamente no están sujetos a la presión del flujo del fluido o el peso de otras células, por lo tanto las fuerzas de corte o cizalla en ias células madre se reducen. De esta manera, la eficiencia de la filtración puede mejorarse por religión en proporciones de obturación y la reducción en lisis de células regenerativas. Debido al tamaño del salino y moléculas de proteínas iniciadas, durante filtración, estas moléculas y otros pequeños componentes pasar a través de los poros de los tubos cuerpos al exterior de los tubos huecos y se dirigen al recipiente de desechos 40. En una modalidad, se mejora la filtración al generar un vacío en el exterior del medio de filtro con tubos huecos. Debido al tamaño de ias células regenerativas, por ejemplo, células madre o células progenitoras, estas células típicamente no puede pasar a través de los poros el cuerpo y por lo tanto permanecen en el interior del filtro de tubos huecos (por ejemplo, en los lúmenes de los tubos) y se dirigen de regreso a la cámara de procesamiento 30 mediante un conducto entre el filtro y la cámara de procesamiento o la cámara de salida 50. En una modalidad específica, el filtro de fibras huecas tiene aproximadamente un tamaño de poros de 0.05 miera, y contiene aproximadamente 50 cm de área superficial del medio de filtro. Un tubo de medio individual típicamente tiene un diámetro de aproximadamente 0.5 mm. Al procesar 130 mi de la composición de células regenerativas, aproximadamente 120 mi del salino adicional pueden agregarse a la composición. El tiempo de procesamiento o de filtro puede ser de aproximadamente 8 minutos. El diferencial de las presiones en cualquier lado del cuerpo del tubo de fibras huecas (por ejemplo, la presión dentro del lumen del cuerpo, y fuera del cuerpo) se considera la presión trans-membrana. La presión trans-membrana puede estar en el intervalo de aproximadamente 1 mm de Hg a 500 mm de Hg con una presión preferida que es de aproximadamente 200 mm de Hg. La viabilidad y recuperación de las células nucleadas promedio utilizando filtración de fibras huecas puede ser 80% de células viables. La cantidad de colagenasa que típicamente se respira en dicho sistema es igual una reducción tres log. Por ejemplo si la concentración inicial de colagenasa en la composición de células regenerativas que se transfieren desde la cámara de recolección a la cámara de procesamiento es 0.078 U/ml ia concentración de colagenasa de la composición de células regenerativas final sería 0.00078 U/ml. La colagenasa se retira en el filtro de fibras huecas y el filtro de fibras huecas corresponde al tercer filtro anteriormente discutido. Las cámaras de procesamiento que ilustran uno o más métodos de filtración celular descritos anteriormente se ¡lustran en las figuras, particularmente en las Figuras 1-3. Con referencia a las Figuras 1-3, entre la cámara de procesamiento 30 y la cámara de filtrado del montaje de filtro 36, puede proporcionarse una bomba, tal como la bomba 34. Además, sensores de presión y ventilación, tales como la ventilación 32 y el sensor de presión 39, puede proporcionarse en línea con la cámara de procesamiento 30 y el montaje de filtro 36. Accesorios de la cámara de salida 50 también puede proporcionarse. Estos componentes opcionales (por ejemplo, la bomba 34, la ventilación 32, el sensor de presión 39, y los accesorios para la cámara de salida 50) pueden proporcionarse entre la cámara de procesamiento 30 y el montaje de filtro 36, de manera tal que líquido contenido en la cámara de procesamiento 30 puede circular a uno o más de estos componentes opcionales ante de circular a través del montaje de filtros 36. Por ejemplo, puede fluir líquido a través de la bomba 34 antes de pasarse al montaje del filtro 36. O, puede pasar líquido a través del sensor de presión 39 antes de pasar a través del montaje de filtros para obtener la presión de líquido pre-filtro en el sistema. En ciertas situaciones, uno o más de estos componentes también puede proporcionarse como un elemento de la cámara de procesamiento 30, tal como la ventilación 32, como se muestra en la Figura 6. 6. En la modalidad ¡lustrada, el sensor de presión 39 está en línea para determinar la presión de la composición de células regenerativas que se generan por la bomba 34 conforme entran la cámara del filtro del montaje de filtros 36. Esta construcción puede facilitar la supervisión de la presión trans-membrana a través de la membrana de filtro. Pueden agregarse salino adicional u otra solución amortiguadora y de lavado a la composición de células regenerativas para llegar a la remoción de proteínas indeseadas conforme con la composición de filtro a través del montaje de filtros 36. Este lavado repetido puede realizarse múltiples veces para mejorar la pureza de las células regenerativas. En ciertas modalidades, el salino puede agregarse en cualquier etapa que se considere necesario para mejorar la filtración. En una modalidad específica, que se proporciona a manera de ejemplo y no de limitación, las proteínas indeseadas y salinas u otra solución de lavado se retiran de la siguiente forma. La composición con las células regenerativas, así como partículas o fragmentos de tejido conectivo y colágeno, adipocitos, y colágeno son ciclados a través de una serie de filtros on hasta que se alcanza un volumen mínimo. El volumen mínimo es una función del volumen de retención total del sistema y alguna constante predeterminada. El volumen de retención es el volumen de líquido que está contenido en la tubería y conductos si todas las cámaras de procesamiento están vacías. En una modalidad, el volumen mínimo es 15 mi. Cuando el volumen mínimo se alcanza, un volumen predeterminado de solución de lavado se introduce en el sistema para mezclarse con la composición de células regenerativas. Está mezcla de solución de lavado y la composición con las células regenerativas, luego se cicla a través de los filtros hasta que el volumen mínimo se alcanza nuevo. Este ciclo pueden repetirse múltiples veces para mejorar la pureza de las células regenerativas, o en otras palabras para incrementar la proporción de células regenerativas en la composición con los otros materiales en la composición. Ver Figuras 10 y 11. Después de que se ha determinó que la composición de células regenerativas se ha limpiado de proteínas indeseadas y concentrado lo suficiente (en modalidades ejemplares, concentraciones mínimas dentro de un intervalo de aproximadamente 1 x 105 a 1 x 107 células/ml podrán emplearse y en una modalidad preferida, la concentración mínima puede ser aproximadamente 1 x 107 células/ml), una cámara de salida 50 tal como una bolsa de salida, pues conectarse a una cámara de salida de la cámara de procesamiento 30 y/o el montaje de filtros 36, dependiendo de la modalidad específica. Una ventilación, tal como una ventilación 32, luego puede abrirse para facilitar la salida de las células regenerativas concentradas. En una implementación, esta determinación de cuando se ha alcanzado la concentración mínima, se realiza empíricamente después de que se han corrido experimentos y programado en los controles electrónicos de dispositivos. La determinación puede ser una alimentación en el proceso de lo que se desea producir, es decir, que tantas células madre/progenitoras se desean, o el intervalo de concentración celular. Con base en datos científicos, una cantidad predefinida de tejido adiposo requiere ser obtenida y colocada en el sistema para lograr la salida deseada. Con la ventilación 32 abierta, una bomba, tal como la bomba 34, puede funcionar para transferir las células regenerativas concentradas en la bolsa de salida. En una modalidad, la bolsa de salida 50 es similar a una bolsa de sangre vacía que tiene un tubo con un accesorio en el extremo. En una forma estéril, el accesorio en la bolsa de salida puede conectarse a la puerta de salida y las células regenerativas concentradas pueden transferirse a la bolsa de salida. Como se ¡lustra en las Figuras 1-3, una bomba de vacío 26 puede proporcionarse en el sistema 10 para cambiar la presión en el sistema, entre otras cosas. Por ejemplo, la bomba ele vacío 26 puede acoplarse a la cámara de recolección 20 mediante un conducto, tal como el conducto 12b, para provocar una disminución de presión dentro de la cámara de la recolección 20. La bomba de vacío 26 también puede acoplarse a la cámara de procesamiento 30 mediante un conducto, tal como el conducto 12g. Respecto a la operación de la bomba de vacío 26 en conexión con la bomba 34, dos fuentes o bombas de vacío pueden implementarse o una sola puede implementarse al utilizar válvulas que dirigen la extracción de vacío a los diferentes conductos que lo requieren en puntos específicos en el proceso. Además, la bomba de vacío 26 puede acoplarse al recipiente deshechos 40 mediante un conducto, tal como el conducto 12f. Con referencia a las Figuras 10 y 11 , la presión generada por la bomba de vacío 26 puede emplearse para dirigir el flujo de fluidos, incluyendo las células regenerativas, a través de los conductos 12. Esta presión puede suministrarse en múltiples direcciones, por ejemplo por control automático o manual de la posición de una o más válvulas 14 en el sistema 10. El sistema 0 puede hacerse que funcione adecuadamente con el uso de presión positiva o a través del uso de presión negativa y sus combinaciones. Por ejemplo, las células regenerativas pueden extraerse a través del primer y segundo filtros descritos anteriormente en un recipiente con lados suaves que se conecta al tercer filtro. El recipiente de lados suaves puede estar en línea (serie) conectado adelante del tercer filtro. La cámara de salida final puede ser un recipiente de lados suaves que está en el otro lado (por ejemplo, el lado corriente abajo) del tercer filtro. En esta modalidad, se emplea presión para mover las células regenerativas desde un recipiente de lados suaves a un segundo recipiente de lados suaves a través del filtro. En otra modalidad del sistema 10, la filtración de las células madre y/o células progenitoras derivadas de tejido adiposo puede lograrse utilizando una combinación de filtración percolante y sedimentación. Por ejemplo, dicho sistema utiliza salino que se pasa a través de una composición de células regenerativas del tejido (por ejemplo, la composición que contiene las células madre y/o células progenitoras derivadas de adiposo) y luego a través de un filtro. Algunas de las variables que se asocian con el filtrado percolante de células de una composición de células regenerativas que incluyen, pero muestran limitadas a, tamaño adecuado de medio filtro, geometría o forma de poros, área superficial del filtro, dirección del flujo de la composición de células regenerativas que se filtre, gasto del flujo del salino de infusión, presión trans-membrana, dilución de la población celular, tamaño de células y viabilidad.

En una modalidad del sistema 10, la cámara de procesamiento 30 utiliza un montaje de filtros 36 que implementa filtrado percolante y sedimentación para separar y concentrar las células regenerativas. A manera de ejemplo, y no a manera de limitación, la cámara de procesamiento 30 se define como un cuerpo generalmente cilindrico que tiene una pared lateral 30a, una superficie 30b, y una superficie de fondo 30c, como se ilustra en la Figura 6. Una ventilación estéril 32 se proporciona en la superficie superior 30b. En la modalidad de la Figura 6, la cámara de procesamiento 30 se ilustra que incluye un montaje de filtro 36, que incluye dos filtros, tal como un filtro de poros grandes 36a, y un filtro de poros pequeños 36b. Los tamaños de poros de los filtros 36a y 36b típicamente están en un intervalo entre aproximadamente 0.05 mieras y aproximadamente 10 mieras. El filtro de poros grandes 36a puede comprender poros con un diámetro aproximado de 5 µ?t?, y el tamaño de poros pequeños 36b puede comprender poros con un diámetro de aproximadamente 1-3 µ??. En una modalidad, los filtros tienen un área superficial de aproximadamente 785 mm2. Los filtros 36a y 36b dividen un interior de la cámara de procesamiento 30 para incluir una primera cámara 37a, una segunda cámara 37b, dio una tercer cámara 37c. Como se ilustra en la Figura 6, la primera cámara 37a se ubica entre la segunda cámara 37b y la tercera cámara 37c. Además, la primera cámara 37a se ilustra que es la región de la cámara de procesamiento 30 que tiene una compuerta de entrada 31a y una compuerta de salida 31b. La cámara de procesamiento ilustrada 30 incluye una pluralidad de compuertas que proporcionan rutas de comunicación desde el exterior de la cámara al interior para cámara de procesamiento 30, tal como las compuertas 31a, 31 b y 31 c. Las compuertas 31 a, 31 b y 31c se ilustran dispuestas en la pared lateral 30a. Sin embargo, las compuertas 31a, 31 b y 31c pueden ubicarse en otras regiones por igual. La compuerta 31 a se ilustra como una compuerta de entrada de muestra, se construye para acoplarse de manera tal que una composición que contiene células regenerativas puede pasar al interior de la cámara de procesamiento 30. La compuerta 31 b se muestra como una compuerta de salida, construida para acoplarse a un conducto de manera tal que las células separadas y concentradas puedan retirarse del interior de la cámara de procesamiento 30. La compuerta 31 se ilustra para acoplarse a un conducto para suministro de una solución de lavado fresca, tal como suele ser al interior de la cámara de procesamiento 30. En uso, las células regenerativas pueden introducirse en la cámara central 37a mediante la compuerta de entrada 31a. Salino u otro amortiguador 112 en la cámara de fondo 37b a través de la compuerta de entrada 31 c. El salino puede dirigirse a través de la composición de células regenerativas en la cámara 37a a una velocidad aproximada de 10 ml/min. El gasto del flujo del salino es tal que contraataca la fuerza de gravedad. El flujo de salino da a las células en la cámara la habilidad por separarse con base en la densidad de las células. Típicamente, conforme el salino se fuerza hacia arriba a través de la composición, las células más grandes en la composición sedimentarán al fondo de la cámara central 37a y las células más pequeñas y proteínas serán arrastradas a través del segundo filtro 36b a la cámara superior 37c. Este filtrado se logra al ajustar el gasto del flujo del salino, de manera tal que las células más grandes se hacen rodar en sitio, lo que permite que las partículas más pequeñas se liberen y arrastren con el salino. La ventilación estéril 32 se incluye en la cámara 30, para asegurar que se mantenga el gradiente de presión correcto en las tres cámaras dentro de la unidad de procesamiento. La cámara superior 37c puede comprender un medio absorbente 33. El propósito del medio absorbente es atrapar las proteínas indeseadas en la solución, para asegurar que no crucen de nuevo el medio de filtro a la solución de procesamiento, si por ejemplo disminuye el gasto del flujo de salino. Un medio absorbente puede ser un tipo de material filtro que es absorbente, o atrae materiales o componentes para filtrarse. Una compuerta del flujo de salida puede agregarse sobre el filtro superior para ayudar a separar o extraer desechos. Otra modalidad de esto puede ser aplicar un ligero vacío desde la parte superior para ayudar a extraer el desecho. Medio absorbente pueden implementarse cuando, como en la modalidad ilustrada, los gastos de flujo son relativamente pequeños. Excesos de salino y proteínas luego se arrastran a un recipiente de desecho. Cuando las células más grandes, (por ejemplo, las células madre derivadas de tejido adiposo y/o células progenitoras) se han separado lo suficiente de las células y proteínas más pequeñas, la composición que contiene las células separadas puede concentrarse, como se discute aquí. La composición puede además concentrarse después de que se ha retirado de la cámara 37a a través de la compuerta de salida 37b o mientras que está en la cámara 37a. En una modalidad, la concentración de células en la composición se aumenta de la siguiente manera. Después de que las células se han separado lo suficiente de los filtros, tales como los filtros 36a y 36b, pueden desplazarse entre sí. Este movimiento tiene el efecto de reducir el volumen entre los dos filtros (por ejemplo, el volumen de la cámara 37a). Un miembro vibrador también puede proporcionarse en conexión con la cámara de procesamiento 30 para facilitar la concentración de las células en la composición. En una modalidad, el miembro de vibración puede acoplarse al filtro 36b (por ejemplo, el filtro de poros pequeños). La vibración puede reducir una incidencia de células que se atrapan en los filtros. La reducción en volumen de la composición permite que el salino en exceso se retire como desecho y las células se concentren en volumen más pequeño. En otra modalidad, la concentración de las células regenerativas se logra de la siguiente manera. Después de que las células se han separado lo suficiente, la composición de células regenerativas puede transferirse a otra cámara (no mostrada) que utiliza gravedad para filtrar en exceso salino. En una modalidad preferida, la sedimentación puede ocurrir al mismo tiempo que la percolación. Esta sedimentación puede lograrse al introducir la composición sobre un filtro que tiene un tamaño de poros en el intervalo de aproximadamente 10kD a 2 mieras. En una modalidad, un filtro conveniente tiene un tamaño de poros de aproximadamente 1 miera. La fuerza de gravedad permitirá que el salino y partículas más pequeñas se pasen a través del filtro mientras que evita que las células de la composición fluyan a través del filtro. Después de que se ha obtenido la concentración deseada y después de que las partículas más pequeñas filtradas se han retirado por debajo del filtro, la composición de células regenerativas puede agitarse para retirar las células del filtro y subsecuentemente, las células regenerativas concentradas pueden transferirse a la bolsa de salida. Las partículas más pequeñas pueden extraerse como desecho a través de una salida. En una modalidad particular, la composición de células regenerativas de la cámara de recolección 20 se transporta a la cámara de procesamiento 30, en donde la composición puede centrifugarse para separar y concentrar células regenerativas. Los principios de centrifugación son bien conocidos en la técnica y no se repetirán aquí por razones de brevedad. Dispositivos, componentes y parámetros de centrifugación reconocidos en la técnica, estándar, se utilizan aquí. Una cámara de procesamiento ejemplar para utilizar como parte de un dispositivo centrífugo, se ilustra en las Figuras 7 y 8. Típicamente, un dispositivo centrífugo provoca que una cámara centrifuga (tal como aquella mostrada en la Figura 7) gire alrededor de un eje para de esta manera incrementar la fuerza en las células en la solución para que sea mayor que la gravedad. Los materiales más densos o más pesados en la solución, típicamente se sedimentan en un extremo de la cámara centrífuga, es decir, una cámara de salida 50 de la Figura 7, para formar un precipitado de células regenerativas. El precipitado luego puede re-suspenderse para obtener una solución con una concentración deseada de células y/o un volumen deseado de células y medio. La cámara de procesamiento mostrada en la Figura 7 se construye para separar y concentrar células utilÍ2ando tanto fuerzas centrifugas como gravitacionales. Específicamente, durante centrifugación, la fuerza centrifuga dirige los componentes más densos de la composición de células regenerativas, por ejemplo, las células regenerativas, hacia los extremos más externos de la cámara centrífuga. Conforme la cámara centrífuga se frena y eventualmente se detiene, la fuerza gravitacional ayuda a las células regenerativas a permanecer en los extremos más externos de la cámara centrífuga y formar un precipitado celular. De acuerdo con esto, los componentes indeseados de la composición de células regenerativas, es decir, el desecho, pueden retirarse sin perturbar el precipitado celular. Todavía en otra modalidad de la invención, la cámara de procesamiento puede comprender un concentrador de células en la forma .de un filtro con membrana de centrifugado. En una modalidad adicional del proceso de centrifugado, también puede aplicarse elutriación centrífuga. En esta modalidad, las células pueden separarse con base en la velocidad de sedimentación de células individuales tal que la fuerza direccional (por ejemplo, hacia afuera) aplicada por centrifugación provoca que células y solutos sedimenten a diferentes velocidades. 58 En elutriación, la velocidad de sedimentación de la población de células objetivo se opone por un gasto de flujo opuesto (por ejemplo, hacia adentro) aplicado al bombear solución en la dirección opuesta a la fuerza centrífuga. El control flujo se ajusta de manera tal que las células y partículas dentro de la solución se separen. La elutriación se ha aplicado en muchas instancias de separación celular (Inoue, Carsten et al. 1981 ; Hayner, Braun et al. 1984; Noga 1999) y los principios y prácticas empleados para optimizar parámetros centrífugos y flujo, pueden aplicarse aquí a la luz de la presente descripción por una persona con destreza en la técnica. La Figura 9 ilustra principios asociados con una implementación de elutriación de acuerdo con la presente invención. La modalidad de elutriación puede ser similar a una implementación de centrifugado en la medida de que una fuerza se aplica a la solución utilizando un rotor de centrifugado. Algunas de las variables que se asocian con la separación de elutriación actualmente incorporada incluyen pero no están limitadas, al tamaño y forma de la cámara de centrifugado, el diámetro del rotor, la velocidad del rotor, el diámetro de la tubería de contra flujo, el gasto de flujo del contra flujo, así como el tamaño y densidad de las partículas y células que se van a retirar de la solución. Como en centrifugación, las células regenerativas pueden separarse con base en densidades de células individuales. En una modalidad, la composición de células regenerativas, por ejemplo la solución que contiene las células regenerativas y la colagenasa, se introducen en una cámara de un motor de centrifugado, como su ¡lustra la Figura 9.1. Después de que la solución se agrega a la cámara, se agrega salino adicional a la cámara a un gasto de flujo predeterminado. El gasto de flujo del salino puede predeterminarse como una función de la velocidad del rotor, el diámetro de células, y la constante de la cámara que se ha establecido empíricamente. El gasto de flujo 59 se controlará por ejemplo con un dispositivo similar a una bomba IV. Un propósito del salino adicional es proporcionar una condición dentro de la cámara de rotor en donde las partículas más grandes se moverán a un lado de la cámara y las partículas más pequeñas se moverán al otro, como se ilustra en ia Figura 9.2. El flujo se ajusta, de manera tal que en esta aplicación, las partículas más pequeñas saldrán de la cámara y se moverán a un recipiente de desecho, como se ilustra en la Figura 9.3. Este movimiento resulta en la solución en la cámara del rotor que tiene una población substancialmente homogénea de células, tales como células madre. Después de que se ha determinado que las células madre se han separado del resto de los ítems en la solución (con proteínas y líquidos libres indeseados que se han retirado de la cámara), se detiene el contra flujo. Las células dentro de la cámara luego formarán un precipitado concentrado en la pared exterior de la cámara. El contra flujo se invierte y el precipitado celular se transfiere a la bolsa de salida. Como se establece previamente aquí, la cámara de procesamiento 30 o la cámara de salida 50 pueden incluir una o más compuertas, por ejemplo, las compuertas 51 o 52. Una o más de estas compuertas pueden diseñarse para transportar las células regenerativas que se obtienen utilizando cualquier combinación de métodos descritos anteriormente, o una porción de éstos, mediante conductos a otros dispositivos quirúrgicos, dispositivos de cultivo celular, dispositivos de marinado celular, dispositivos de terapia de genes, o dispositivos de purificación. Estas compuertas también pueden diseñarse para transportar las células regenerativas mediante conductos a cámaras o recipientes adicionales dentro del sistema o como parte de otro sistema para los mismos propósitos descritos anteriormente. Las compuertas y conductos también pueden utilizarse 60 para agregar uno o más adhesivos, por ejemplo, factores de crecimiento, fluidos de re-suspensión, reactivos de cultivo celular, reactivos de expansión celular, reactivos de conservación celular o reactivos de modificación celular, incluyendo agentes que transfiere genes a las células. Las compuertas y conductos también pueden ser utilizados para transportar las células regenerativas a otros objetivos tales como materiales de implante (por ejemplo, andamios o injertos de huesos); así como otros implantes y dispositivos quirúrgicos. Mayor procesamiento de las células también puede iniciarse ai reconfigurar las inter-conexiones de los equipos desechables del sistema existente, reprogramar el dispositivo de procesamiento del sistema existente, al proporcionar recipientes y/o cámaras diferentes o adicionales para los sistemas existentes, al transportar las células a uno o más sistemas o dispositivos adicionales y/o cualquiera combinación de los mismos. Por ejemplo, el sistema puede reconfigurarse por cualquiera de los medios anteriormente descritos, tal que las células regenerativas obtenidas utilizando el sistema pueden someterse a uno o más de los siguientes: expansión celular (de uno o más tipos de células regenerativas) y mantenimiento celular (incluyendo enjuague de hoja celular y el cambio de medio); sub-cultivado; siembra de células; trasfección transitoria (incluyendo siembran de células transfectadas de un suministro a granel); recolección (incluyendo recolección enzimática, no enzimática y recolección por raspado mecánico); medición de viabilidad celular; revestimiento de células (por ejemplo en placas de micro titulación, incluyendo selección de células de pozos individuales para expansión, expansión de células en pozos frescos); supervisión de alto rendimiento; aplicaciones de terapia celular; aplicaciones de terapia genes; aplicaciones de ingeniería de tejidos; aplicaciones de proteínas terapéuticas; aplicaciones de vacunas virales; recolección de células regenerativas o sobre nadante para formación de banco o supervisión, medición de crecimiento celular, lisis, inoculación, infección o inducción; generación de líneas celulares (incluyendo células de hibridomas); cultivo de células para estudios de permeabilidad, células para estudio de resistencia viral y RNAi, células para estudios de animales con genes inoperativos y transgénicos, estudios de purificación de afinidad; aplicaciones biológicas estructurales; aplicaciones de ingeniería de proteínas y desarrollo de ensayo. Por ejemplo, si la expansión de una población de células regenerativas se requiere para una aplicación particular, puede ser utilizado un enfoque que utiliza condiciones de cultivo para expansión preferencial de la población, mientras que otras poblaciones se mantienen (y de esta manera reducen por dilución con las células selectas de crecimiento) o se pierden debido a ia ausencia de condiciones de crecimiento requeridas. Sekiya et al., han descrito condiciones que puedan emplearse en este aspecto para células madre derivadas de médula ósea (Sekiya et al., 2002). Este enfoque (con o sin adherencia diferencial al plástico de cultivo de tejidos) puede aplicarse a una modalidad adicional de esta invención. En esta modalidad, el precipitado de células regenerativas final se retira de la cámara de salida y coloca en un segundo sistema que proporciona el componente de cultivo celular. Este puede estar en la forma de un incubador de cultivo del tejido de laboratorio convencional o un dispositivo tipo Bio-reactor tal como aquel descrito por Tsao et al., en la patente registrada con el número 6,001 , 642, o por Armstrong et al., en la patente de los E.U.A. No. 6,238,908. En una modalidad alterna, la expansión celular o el componente de cultivo celular pueden agregarse el sistema existente, por ejemplo, en una cámara 62 de salida, permitiendo a adherencia a corto plazo y/o cultivo celular de las poblaciones de células derivadas de adiposo. Esta modalidad alterna permitirá integración del cultivo celular y/o el componente de expansión celular al sistema y elimina la necesidad por retirar las células del sistema y colocarlas en otro. Durante el procesamiento, puede agregarse uno o más aditivos a o proporcionarse con las diversas cámaras o recipientes según se requiera para mejorar los resultados. Estos aditivos también pueden proporcionarse como parte de otro sistema asociado con el sistema existente o separado del sistema existente. Por ejemplo, en ciertas modalidades, los aditivos se agregan o proporcionan sin necesidad por retirar las células regenerativas del sistema. En otras modalidades, los aditivos se agregan o proporcionan por conexión de un nuevo recipiente o cámara que comprende los aditivos en una compuerta no usada del sistema en una forma estéril. Todavía en otras modalidades, los aditivos se agregan o proporcionan en un segundo sistema o dispositivo que no se conecta al sistema de la presente invención. Algunos ejemplos de aditivos incluyen agentes que optimizan el lavado y disgregación, aditivos que mejoran la viabilidad de la población de células activas durante procesamiento, agentes antimicrobianos (por ejemplo, antibióticos), aditivos que lisan adipocitos y/o células de glóbulos rojos, o aditivos que enriquecen poblaciones celulares de interés (por adherencia diferencial a porciones de fase sólida o para de otra forma promover la reducción o enriquecimiento sustancial de poblaciones celulares) como se describe aquí. Por ejemplo, para obtener una población de células regenerativas homogénea, cualquier método conveniente para separar y concentrar el tipo de células regenerativas particular podrá emplearse, tal como el uso de anticuerpos específicos de células que reconocen y liga antígenos presentes, por ejemplo en 63 células madre o células progenitoras, por ejemplo, células precursoras endoteliales. Estos incluyen tanto selección positiva (selección de las células objetivo), selección negativa (remoción selectiva de células indeseadas), o sus combinaciones. Marcadores intracelulares tales como enzimas también pueden emplearse para seleccionar utilizando moléculas que fluorescen cuando son accionadas por enzimas específicas. Además, un material de fase sólida con propiedades aditivas selectas para permitir adherencia diferencial y/o elusión de una población particular de células regenerativas dentro del precipitado de células final puede insertarse en la cámara de salida del sistema. Una modalidad alterna de este enfoque de adherencia diferencial sería incluir el uso de anticuerpos y/o combinaciones de anticuerpos que reconocen moléculas superficiales expresadas diferencialmente en células regenerativas objetivo y células indeseadas. La selección en base a expresión de marcadores de superficie celulares específicos (o sus combinaciones) es otra técnica comúnmente aplicada en donde se conectan anticuerpos (directa o indirectamente) a una estructura de soporte de fase sólida (Geiselhart et al., 1996; Formanek et al., 1998; Graepler et al., 1998; Kobari et al., 2001 ; Mohr et al., 2001 ). En otra modalidad, el precipitado celular puede ser re-suspendido, cubierto en capas (por debajo) con material fluido formado en un gradiente de densidad continua o discontinua y colocado en una centrifuga para separación de poblaciones celulares en base a la densidad celular. En una modalidad similar, enfoques de flujo continuo tales como aféresis (Smith, 1997), y elutriación (con o sin contracorriente) (Lasch et al., 2000) (Ito and Shinomiya, 2001 ) también pueden emplearse. Otros ejemplos de aditivos pueden incluir componentes estructurales 64 o biológicos adicionales, tales como factores de diferenciación celular, promotores de crecimiento, agentes ¡nmunosupresores, dispositivos médicos, o cualesquiera combinaciones de los mismos, como se discute aquí. Por ejemplo, otras células, tejidos, fragmentos de tejido, factores de crecimiento tales como VEGF y otros factores de crecimiento angiogénicos o arteriogénicos, compuestos biológicamente activos o inertes, andamios re-absorbibles u otros aditivos pretendidos para mejorar el suministro, eficacia, tolerabilidad o función de la población de células regenerativas, pueden agregarse. La población de células regenerativas también puede modificarse por inserción de ADN o por colocación de un sistema de cultivo celular (como se describe aquí o conoce en la técnica) de manera tal que cambie, mejore o suplemente la función de las células regenerativas para derivación de un propósito estructural o terapéutico. Por ejemplo, técnicas de transferencia de genes para células madre se conocen por personas con destreza ordinaria en la especialidad, como se describe (Morizono et al., 2003; Mosca et al., 2000), y pueden incluir técnicas de transfección viral, y más específicamente, técnicas transferencia de genes con virus adeno-asociados como se describe (Walther and Stein, 2000) y (Athanasopoulos et al., 2000). Técnicas sin base viral también pueden realizarse como se describe (Muramatsu et al., 1998). Un gen que codifica uno o más factores de diferenciación celular, por ejemplo, uno o varios factores de crecimiento, o una o varias citoquinas, también pueden agregarse. Ejemplos de diversos agentes de diferenciación celular se describen en (Gimble et al., 1995; Lennon et al., 1995; Majumdar et al., 1998; Caplan and Goldberg, 1999; Ohgushi and Caplan, 1999; Pittenger et al., 1999; Caplan and Brunder, 2001 ; Fukuda, 2001 ; Worrster et al., 2001 ; Zuk et al., 2001 ). Genes que codifican factores anti-apoptósicos o agentes también pueden emplearse. La adición del gen (o 65 combinación de genes) puede ser por cualquier tecnología conocida en la especialidad, incluyendo pero no limitada, a transducción adenoviral, "pistolas de genes", transducción mediada por liposomas y transducción mediada por retrovirus o lentivirus, plásmidos, virus adenoasociados. Estas células regenerativas luego pueden implantarse junto con un material portador que contiene vehículo de suministro de genes capaces de liberar y/o presentar genes a las células con el tiempo, de manera tal que la transducción puede continuar o iniciarse in situ. Cuando las células y/o tejido que contiene las células se administran a un paciente diferente al paciente del cual las células y/o tejidos se obtuvieron, uno o más agentes inmunosupresores pueden administrarse al paciente que recibe las células y/o tejido, para reducir y de preferencia de evitar, rechazo de trasplante. Como se emplea aquí, el término "droga o agente inmunosupresor" se pretende que incluya agentes farmacéuticos que inhiben o interfieren con función inmune normal. Ejemplos de agentes inmunosupresores adecuados con los métodos aquí descritos, incluyen agentes que inhiben las rutas de co-estímulo de células T/células B tales como agentes que interfieren con el acoplamiento de células T y células B mediante las rutas CTLA4 y B7, como se describe en la publicación de patente de los E.U.A. No. 20020182211. Un agente inmunosupresor preferido es ciclosporina A. Otros ejemplos incluyen niofeniiato mofetil, rapamicína y globulina anti timocitos. En una modalidad, la droga inmunosupresora se administra con al menos otro agente terapéutico. La droga inmunosupresora se administra en una formulación que es compatible con la ruta de administración sí se administra a un sujeto a una dosis suficiente para lograr el efecto terapéutico deseado. En otra modalidad, la droga inmunosupresora se administra en forma transitoria por un tiempo suficiente para inducir tolerancia a las células regenerativas de la invención. 66 En estas modalidades, las células regenerativas pueden contactarse, combinarse, mezclarse o agregarse a los aditivos a través de cualquier forma reconocida en la técnica, incluyendo dispositivos tales como los dispositivos de agitación y métodos asociados aquí descritos. Por ejemplo, oscilación, inversión, compresión pulsada o rodillos de movimiento pueden emplearse. En otro aspecto, la población celular puede colocarse en el receptor y circundarse por un forro de plástico reabsorbible u otros materiales y componentes relacionados tales como aquellos fabricados por MacroPore Biosurgery, Inc. (ver por ejemplo las patentes de los números 6,269,716; 5,919,234; 6,673,362; 6,635,064; 6,653,146; 6,391 ,059; 6,343,531 ; 6,280,473). En todas las modalidades anteriores, al menos una porción de las células regenerativas separadas y concentradas pueden ser crio-conservadas, como se describe en la solicitud de patente de los E.U.A. con No. de Serie 10/242,094, con titulo PRESERVATION OF NON EMBRYONIC CELLS FROM NONHEMATOPOIETIC TISSUES (CONSERVACIÓN DEL CÉLULAS NO E BRIÓNICAS A PARTIR DE TEJIDOS NO HEMATOPOYÉTICOS) presentada en septiembre 12, 2002, que reclama el beneficio de la solicitud de patente provisional de los E.U.A. No. de Serie 60/322,070, presentada en septiembre 14, 2001 que fue cedida comúnmente y los contenidos de la cuai en su totalidad se incorporan expresamente aquí por referencia. Al final del procesamiento, las células regenerativas pueden ser recuperadas manualmente de la cámara de salida. Las células pueden cargarse en un dispositivo de suministro tal como una jeringa, al colocar en el receptor ya sea por la técnica subcutánea, intramuscular, u otra, permitiendo suministrar las células al sitio de recepción dentro del paciente. En otras palabras, pueden colocarse células en el paciente por cualesquiera medios conocidos por personas con destreza ordinaria en ia especialidad. Modalidades preferidas incluyen colocación por aguja o catéter, o por implante quirúrgico directo. En otras modalidades, las células pueden ser transportadas automáticamente a una cámara de salida que puede estar en la forma de un recipiente, jeringa o catéter, etc., que puede emplearse para colocar las células en el paciente. El recipiente también puede ser utilizado para almacenar las células para uso posterior o para crio-conservación. Todos los métodos de recuperación se realizan en forma estéril. En la modalidad de implante quirúrgico, las células pueden aplicarse en asociación con aditivos tales como una matriz preformada o andamio como se describe aquí. En modalidades preferidas de la invención (por ejemplo, la modalidad mostrada en la Figura 4), el sistema es automatizado. En otra modalidad, el sistema tiene tanto como componentes automatizados como manuales. El sistema puede comprender uno o más componentes desechables conectados en o montados en un componente o módulo de equipo físico reutilizable. Los sistemas automatizados de la invención proporcionan pantallas de exhibición (ver Figura 16) que señalan una operación adecuada del sistema. Los sistemas automatizados también pueden comprender una pantalla que proporciona estados de procedimiento y/o instrucciones de etapa por etapa respecto a la adecuada configuración de los componentes desechables del sistema. La pantalla también puede indicar problemas o fallas en el sistema si concurren y proporcionan guía para "solución de problemas", de ser apropiado. En una modalidad, la pantalla es una pantalla de interfase de usuario que permite al usuario alimentar parámetros al sistema a través de, por ejemplo, una pantalla sensible al tacto. Los sistemas parcial y totalmente automatizados pueden incluir un 68 dispositivo de procesamiento (por ejemplo, microprocesador o computadora personal) y programas de soporte lógico asociados que proporcionan la lógica de control para que el sistema opere y automatice una o más etapas del proceso con base en alimentación del usuario. En ciertas modalidades, uno o más aspectos del sistema pueden ser programables por usuario mediante el soporte lógico que reside en el dispositivo de procesamiento. El dispositivo de procesamiento puede tener uno o más programas de soporte lógico pre-programados en memoria de sólo lectura (ROM). Por ejemplo, el dispositivo de procesamiento puede tener soporte lógico pre-programado ajustado a la medida, para procesar sangre, otro programa para procesar tejido adiposo, para obtener pequeños volúmenes de células regenerativas y otro programa para procesar tejido adiposo para obtener grandes volúmenes de células regenerativas. El dispositivo de procesamiento también puede tener soporte lógico pre-programado que proporciona al usuario con parámetros apropiados para optimizar el proceso con base en la alimentación del usuario de información relevante tal como la cantidad de células regenerativas requeridas, el tipo de tejido que se procesa, el tipo de manipulación post-procesamiento requerido, el tipo de aplicación terapéutica, etc. El soporte lógico o programa también puede permitir automatización de etapas tales como controlar el ingreso y salida de fluidos y tejidos sobre las rutas de tubería particulares, al controlar bombas y válvulas del sistema; controlar la secuencia adecuada y/o dirección de activación; detectar bloqueos con sensores de presión; mecanismos de mezclado, medir la cantidad de tejido y/o fluido al moverse sobre una ruta particular utilizando mecanismos volumétricos; mantener temperaturas de los diversos componentes utilizando dispositivos de control térmico; e integrar el procesos de separación y concentración con mecanismos de 69 sincronización y soporte lógico. El instructivo de procesamiento también puede controlar velocidades centrífugas con base en el tipo de tejido que se procesa y/o la población celular o sub-población que se recolecta, y el tipo de procedimientos a realizar (por ejemplo, mejora de tejido utilizando tejido adiposo aumentado con células regenerativas o procesamiento de células por aplicaciones de reparación de huesos utilizando injertos de huesos revestidos con células regenerativas). El dispositivo de procesamiento también puede incluir compuertas paralelas o en serie estándar u otros medios de comunicación con otras computadoras o redes. De acuerdo con esto, el dispositivo de procesamiento puede ser una unidad autónoma o estar asociado con uno o más dispositivos adicionales para los métodos de procesamiento adicionales aquí descritos. El soporte lógico puede permitir recolección automatizada de "datos de operación" incluyendo por ejemplo, los números de lotes de componentes desechables, mediciones de temperatura y volumen, parámetros de volumen de tejido y número de células, dosis de enzima aplicada, tiempo de incubación, identidad del operador, fecha y hora, identidad del paciente, etc. En una modalidad preferida del dispositivo, un sistema de reconocimiento de caracteres, tal como un sistema de lectura de código de barras, se integrará para permitir alimentación de datos de estas variables (por ejemplo números de lote y fecha de caducidad del equipo desechable, número del lote y fecha de caducidad de colagenasa, identificadores de paciente/muestra, etc.) al dispositivo de tratamiento como parte de documentación del proceso. Esto reducirá la oportunidad de errores de alimentación de datos. Este sistema de lectura de código de barras puede incorporarse fácilmente en el dispositivo de procesamiento utilizando una USB u otra compuerta de interfase y sistema conocidos en la técnica. De esta manera, el 70 dispositivo proporciona control integrado de alimentación de datos y documentación del proceso. Un reporte de impresión de estos parámetros sería parte de los parámetros definidos por usuarios de una operación programada del sistema. Naturalmente, esto requeriría la integración de un componente de impresora (equipo físico y controlador) o controlador de impresora en soporte lógico más un conector de salida de interfase para una impresora (por ejemplo, una compuerta USB) en el equipo físico del dispositivo. En ciertas modalidades, el sistema es un sistema totalmente automatizado. Por ejemplo, el usuario puede seleccionar inicialmente la cantidad de tejido a procesar, conectar el sistema al paciente y el sistema puede aspirar automáticamente el tejido requerido y separar y concentrar células regenerativas en una secuencia in-interrumpida sin mayor alimentación del usuario. El usuario también puede alimentar la cantidad de células regenerativas requeridas y permitir que el sistema aspire la cantidad necesaria de tejido y procesar el tejido. Un sistema totalmente automatizado también incluye un sistema que es capaz de reconfigurarse con base en una cantidad de (por ejemplo, dos o más) parámetros de alimentación del usuario, por ejemplo, número de ciclos de lavado, velocidad de centrifugación, etc. El sistema también puede operar en modo semi-automático durante el cual el sistema pasa a través de ciertas etapas sin intervención del usuario pero requiere intervención del usuario antes de que puedan ocurrir ciertos procesos. En otras modalidades, el sistema es un sistema integrado sencillo que exhibe instrucciones para guiar al usuario a realizar operaciones predeterminadas en tiempo predeterminado. Por ejemplo, el dispositivo de procesamiento pueda señalar a los usuarios a través de las etapas necesarias para adecuada inserción de tubería, cámaras y otros componentes del sistema. De acuerdo con esto, el usuario puede 71 asegurar que se realice la secuencia adecuada de operaciones. Dicho sistema puede requerir adicionalmente confirmación de cada etapa operacional por el usuario para evitar activación o terminación accidental de etapas en el proceso. En una modalidad adicional, el sistema puede iniciar prueba automatizada para confirmar inserción correcta de tubería, cámaras, ausencia de bloqueos, etc. Todavía en otra modalidad, el sistema de la presente invención es capaz de programarse para realizar múltiples procesos de separación y concentración a través de control automatizado de flujo de tejido a través del sistema. Esta característica puede ser importante, por ejemplo, durante cirugía en un paciente en donde el tejido que de otra forma se perdería, se recolecta en el sistema y células regenerativas del tejido se separan y concentrar y regresan al paciente. Como se estableció anteriormente, componentes del sistema puedan ser desechables (aquí referidos como "equipos desechables"), de manera tal que porciones del sistema puedan ser descartadas después de un solo uso. Esta implementación puede ayudar el asegurar cualquier superficie que entre contacto con el tejido del paciente, será descartada adecuadamente después de ser utilizada. Un equipo desechable ejemplar se ilustra en la Figura 13. En una modalidad preferida, los componentes desechables del sistema son pre-esterilizados y empacados para ser utilizables "de inventario" que son fáciles de utilizar y fáciles de cargar y que elimina la necesidad por muchas conexiones de tubería y direccionamiento complejo de conexiones de tubería. Estos componentes desechables son relativamente económicos de fabricar y por lo tanto no crean un gasto sustancial debido a su eliminación. En una modalidad, el sistema desechable (referido aquí en forma intercambiable como "equipos desechables") comprende, consiste esencialmente de, o consistente de la cámara reflexión 20, la cámara de procesamiento 30, la cámara de desechos 40, la cámara de salida 50, los montajes de filtros 36, la bolsa de muestra 60 y los conductos asociados 12 o tubería. En modalidades preferidas de los equipos desechables del sistema, la cámara de recolección 20 y la cámara de procesamiento 30 se conectan mediante conductos 12 que se alojan en un bastidor o marco rígido. La red de sellos giratoria (Figuras 7 y 8) de una cámara de procesamiento 30 también puede alojarse en el mismo marco rígido. En otra modalidad preferida, las diversas cámaras y contenedores del equipo desechable comprenden las interfases necesarias que son capaces de comunicar con el dispositivo de procesamiento del sistema de manera tal que las bombas, válvulas, sensores y otros dispositivos que automatizan el sistema se activan o desactivan apropiadamente según se requiera, sin intervención del usuario. Las interfases también reducen el tiempo y destreza requeridos para configurar el sistema y también reducen errores al indicar como configurar adecuadamente el sistema y alertar al usuario en el caso de una configuración errónea. La mayoría de los equipos desechables de la invención tendrán muchos elementos comunes. Sin embargo, la persona con destreza ordinaria reconocerá que diferentes aplicaciones del sistema puedan requerir componentes adicionales que puedan ser parte de los equipos desechables. De acuerdo con esto, los equipos desechables además pueden comprender una o más agujas o jeringas adecuadas para obtener tejido adiposo u otro del paciente y regresar células regenerativas al paciente. El número de tipo y variedad de agujas y jeringas incluidas dependerán del tipo y cantidad de tejido que se procesa. Los equipos desechables además pueden comprender uno o más recipientes rígidos o flexibles para contener los fluidos de lavado y otros reactivos de procesamiento empleados 73 en el sistema. Por ejemplo, los equipos desechables pueden comprender recipientes para contener salino, enzima y cualesquiera otros fluidos de tratamiento o reemplazo requeridos por el procedimiento. Además, convenientes soluciones de lavado, fluidos de re-suspensión, aditivos, agentes o materiales de trasplante pueden proporcionarse con los equipos desechables para utilizar en conjunto con los sistemas y métodos de la invención. Cualquier combinación de componentes del sistema, equipo o suministros aquí descritos o de otra forma requeridos para practicar la invención, pueden proporcionarse en la forma de un equipo. Por ejemplo, un equipo de la invención que incluyen, por ejemplo, la longitud y el recorrido de aguja óptimos para la liposucción basada en jeringa y jeringas estériles contienen el medio de filtro preferido, que permite el procesamiento de pequeños volúmenes de tejido. Otros equipos y suministros de ejemplares que pueden utilizarse con la invención y que también pueden incluirse con los equipos de la invención se citan en las Tablas II y La Tabla II a continuación identifica ejemplos de suministros que pueden emplearse para obtener células regenerativas derivadas de tejido adiposo de acuerdo con los sistemas y métodos de la presente invención. Tabla II Descripción Distribuidor Cantidad Nota Jeringa 10 mi Becton- Dickinson Según se Opcional, empleado para requiera liposucción Aguja de punta Según se Opcional, empleado para Roma 14GA requiera liposucción Paquete sencillo Baxter FenwaI 1 Bolsa de procesamiento 74 Descripción Distribuidor Cantidad Nota para sangre (600 de células principales; la mi) bolsa tiene un adaptador de pico en línea y dos compuertas del pico libres Paquete de Baxter Fenwal Equipo de bolsa Quad transferencia con acoplador (150 mi) Paquete de Baxter Fenwal Bolsa de desechos transferencia con acoplado (1 L) Acoplador de Baxter Fenwal muestra en sitio Salino 0.9% (para Baxter Fenwal inyección) Aguja filosa 14GA Monoject Según se Para agregar tejido de requiera liposucción a la bolsa Aguja filosa 20GA Monoject 3 Para agregar colagenasa a y retirar células PLA 0.2 Filtro Sterflip Millipore Para filtrar colagenasa 0.2µ Sujetadores de Terumo ME*ACS 121 para sello de aluminio sellado temporal de tubo Teruflex 75 Descripción Distribuidor Cantidad Nota Cojín de Triadine Según se 10-3201 preparación de requiera Povidona Yodo Liberasa H1 Roche Ver nota de procedimiento 1 Coiagenasa Oblea TSCD Terumo ISC*W017 para utilizar con soldadura de tubo estéril TSCDI La Tabla III, siguiente, identifica equipo que pueden empleai los sistema y métodos aquí descritos. Tabla III Descripción Vendedor Cantidad Nota Centrifuga Sorvall Fisher Scientific 75-004-367 Legend T Easy Set Rotor Kendro/Sorvall 1 Rotor TTH-750 Cuba de rotor Kenro/Sorvall 4 Cubas redondas 75006441 Adaptador para Kendro/Sorvall 00511 bolsas de 150 mi Expresador de Baxter Fenwal 4R4414 plasma 76 Descripción Vendedor Cantidad Nota Sellador de tubo Sebra Modelo 1060 Soldadura de Terumo 3ME*SC201AD tubería estéri TSCD Agitador térmico LabLine 4637 LabLine Abrazadera estilo Davron hemostática de plástico "desechable" Juegos de bolsas de Bolsas llenas compensación agua utilizada compensar centrífuga Cámara Biohazard Sharp Cámara Biohazard Waste El componente re-utilizable del sistema comprende, consiste esencialmente de, o consiste de mecanismo de agitación, para la cámara de recolección, la bomba y sensores diversos que activan válvulas y controles de bomba, el motor de centrifuga, el bastidor giratorio del motor de centrifuga, la pantalla de interfase de usuario y compuertas USB, un dispositivo o configuración de enclavamiento o exploración computacional de modo de enlace posible de un ligando a una enzima, receptor o ADN, para conectar el equipo desechable, de manera tal que el equipo desechable se conectan en forma segura con y forma inferíase con el componente de equipo físico re utilizable y otros dispositivos asociados. Un componente re-utilizable ejemplar se ilustra en la Figura 14. En modalidades preferidas, el componente re-utilizable incluye medios para separar y concentrar las células regenerativas de la composición de células regenerativas, por ejemplo, una centrifuga giratoria. En esta modalidad, el componente re-utilizable se diseña, conecta con e interconecta, con una porción de la cámara de procesamiento (que comprende una cámara centrífuga) del equipo desechable, como se muestra en la Figura 15A. Se entiende que los medios para separar y concentrar células regenerativas en el componente re-utilizable no se limitan a una centrífuga giratoria sino también pueden incluir cualquier otra configuración aquí descrita, incluyendo un filtro de membrana de centrifugación. El componente re-utilizable también puede alojar al dispositivo de procesamiento aquí descrito que contiene soporte lógico pre-programado para llevar a cabo diversos procedimientos de procesamiento de tejido diferentes y activar selectivamente las diversas bombas y válvulas del sistema de conformidad. El procesador también puede incluir capacidad para almacenamiento de datos, para almacenar información de donador/paciente, procesar o recolectar información y otros datos para posterior descarga o compilación. El componente re-utilizable puede emplearse con una variedad de equipos desechables.. El equipo desechable se conecta al componente re-utilizable por ejemplo a través de una configuración o dispositivo de enclavamiento para conectar el equipo desechable, de manera tal que el equipo desechable se conectan seguramente con interconecta con el componente de equipo físico re- utilizable en la forma que el dispositivo de procesamiento presente en el componente re-utilizable puede controlar, es decir 78 enviar y recibir señales a y de los diversos componentes de equipo desechable así como diversos componentes del componente reutilizable y otros dispositivos y sistemas asociados. En una modalidad, un equipo desechable para utilizarse en el sistema, comprende una cámara de recolección 20, que puede alojar aproximadamente 800 mi de tejido; una cámara de procesamiento 30 que puede procesar la composición de células regenerativas generadas por aproximadamente 800 mL de tejidos de lavado y digerido en la cámara de recolección 20; una cámara de salida 50 que puede alojar al menos 0.5 mL de células regenerativas; y un recipiente de desechos 40 que puede alojar aproximadamente 10 mL. En esta modalidad, el dispositivo de equipo físico no es mayor a 60.96 x 45.72 x 91.44 cm (24 x 18 x 36"), de largo ancho y alto respectivamente. Dimensiones alternas de los diversos componentes de los equipos desechables así como el dispositivo de equipo físico pueden construirse según se requieran y se pretenden abarcados por la presente invención sin limitación. Los componentes desechables del sistema son fáciles de colocar en el dispositivo. Una ilustración del equipo desechable utilizada ensamblada en conjunto con un componente re-utilizable correspondiente, se ilustra en la Figura 15A. El sistema de preferencia se diseña de manera tal que puede detectar un componente desechable cargado inadecuadamente. Por ejemplo, los componentes de cada equipo desechable pueden tener marcas de guía de color para alinear e insertar adecuadamente la tubería, cámara, etc. en sitios apropiados del sistema. En modalidades adicionales, el sistema descrito aquí es una unidad portátil. Por ejemplo, la unidad portátil puede ser capaz de moverse desde un sitio donde ha ocurrido recolección de tejido adiposo, a otro sitio para recolección de tejido adiposo. En ciertas implementaciones, la unidad portátil es adecuada para recolectar y procesar tejido adiposo a lado de la cama del paciente. De esta manera, una unidad portátil puede ser parte de un sistema que puede pasarse de paciente a paciente. De acuerdo con esto, la unidad portátil puede estar en ruedas que se enclavan en sitio y de esta manera puede colocarse fácilmente y utilizarse en un sitio conveniente, en una posición estable y segura a través del procedimiento. En otras modalidades, la unidad portátil se diseña para configurar y operar en una superficie plana tal como un mostrador. La unidad portátil también puede estar circunscrita en una unidad de alojamiento. La unidad portátil además puede comprender colgadores, ganchos, etiquetas, básculas y otros dispositivos para ayudar en el procedimiento. Todos los componentes re-utilizables aquí descritos del sistema tales como la centrífuga, el dispositivo de procesamiento, pantalla de exhibición, puede montarse en la unidad portátil del sistema. Modalidades manuales alternas para obtener células regenerativas también está dentro del alcance de esta invención. Por ejemplo, en una modalidad, puede procesarse tejido adiposo utilizando cualquier combinación de los componentes del sistema, equipo y/o suministros aquí descritos. Una modalidad manual del sistema de la invención puede practicarse de acuerdo con las siguientes etapas e información, que se proporcionan a manera de ejemplo y no ha manera de limitación. Primero, se recolecta tejido adiposo del paciente. Una línea para recuperación de tejidos, o acoplador de sitio de muestreado se abre y se inserta una espiga en una compuerta lateral de la bolsa para sangre de 600 mi. Aproximadamente 10 mi tejido adiposo se recolecta en una jeringa de 10 mi a través de la cánula roma. La cánula roma se reemplaza con una aguja relativamente filosa (14G). El sitio de muestreados se limpia con un limpiador 80 de yodo. El tejido adiposo se inyecta en la bolsa de 600 mi a través del sitio de muestreado. La jeringa y aguja luego se descartan en la cámara Sharps. Estas etapas se repiten para colocar suficiente tejido en la bolsa. Se determina suficiente tejido en una base caso-por-caso con base en las especificaciones clínicas del paciente y la aplicación. En segundo, se lava el tejido adiposo aspirado. Una bolsa de salino pre-calentado (37°C) se cuelga sobre la superficie de trabajo. Una abrazadera blue hempostat se coloca en la tubería entre la bolsa de 600 mi y la espiga. La abrazadera se cierra para sellar la tubería. La espiga en la bolsa de 600 mi se utiliza para entrar a la bolsa de salino (en esta configuración, se usa la aguja en la bolsa de 600 mi para entrar a la bolsa de salino a través del septo de hule, limpiar el septo con yodo antes de inserción de la aguja). La abrazadera se libera y aproximadamente 150 mi de salino se deja que entre a la bolsa de 600 mi. La abrazadera blue se cierra cuando el volumen deseado de salino ha entrado a la bolsa de 600 mi. La bolsa de 600 mi se invierte 10-15 veces sobre aproximadamente 15 segundos. Una segunda abrazadera blue se aplica a la tubería que lleva desde la bolsa de desecho de 3L a la espiga. La espiga en la bolsa de 3L se utiliza para entrar a la bolsa de 600 mi. La bolsa de 600 mi se cuelga invertida sobre la superficie de trabajo, y se permite que repose por aproximadamente un minuto. La abrazadera blue que lleva la bolsa 3L se separa. Fluido de desechos se deja que fluya a la bolsa de 3L. La abrazadera blue se aplica para detener el flujo antes de que entre a la tubería de tejido. La bolsa de 600 mi se baja a la superficie de trabajo. Estas etapas se repiten dos veces más. Si el desecho de salino todavía aparece notablemente rojo, se indica un tercer ciclo adicional. Un termosellador se emplea para sellar la tubería entre la bolsa de desecho 3L y la bolsa de 600 mi. El 81 sello se realiza aproximadamente al punto medio en la tubería. La bolsa de desecho de 3L se remueve y descarga. La bolsa de 600 mi se regresa a la superficie de trabajo. En tercer lugar, se digiere el tejido adiposo lavado. La abrazadera se blue la tubería entre el salino y la bolsa de 600 mi se libera para permitir que aproximadamente 150 mi de salino entren a la bolsa de 600 mL. El sitio de muestreados en la bolsa de 600 mi se limpia con un limpiador de yodo. Colagenasa se inyecta a través del sitio de muestreado en la bolsa de 600 mi. La colagenasa se prepara para descongelar una ampolleta de colagenasa en un baño de agua a 37°C, o equivalente, diferente a microondas. Una jeringa de 1 mi con aguja 22G se inserta en ampolleta. La colagenasa se retira en la aguja. La aguja se retira y reemplaza con un filtro de 0.2µ y la segunda aguja 22G. La colagenasa luego se expulsa de la jeringa a través del filtro y aguja de 0.2µ y la aguja. La digestión del tejido adiposo se realiza a una concentración final de colagenasa de 0.1-0.2 unidades Wünsch/ml. El cojín de calentamiento se coloca en el oscilador. Durante este tiempo, la bolsa de salino, mientras que aún está conectada, se coloca al lado del oscilador. Se tiene cuidado en asegurar que la tubería que lleva a la bolsa de salino se ubica de manera tal que no quede atrapada en el oscilador cuando está en movimiento. El controlador de cojín de calentamiento se ajusta a 37°C. La bolsa de 600 mi se coloca en el oscilador. El oscilador se ajusta al máximo. La bolsa se observa para asegurar que es estable, y se deja que oscile por aproximadamente una hora (55+10 mins). En cuarto lugar, se recupera la composición de células regenerativas. La bolsa se retira del oscilador. Una abrazadera blue se aplica a la tubería cerrada que anteriormente llevaba a la bolsa de desecho. El dispositivo de conexión estéril 82 se utiliza para conectar el equipo de bolsa quad (pre-preparado de acuerdo con las siguientes instrucciones) a la tubería que anteriormente estaba conectada a la bolsa de desecho. El paquete quad puede verse como dos paquetes quad enlazados. Se identifica la tubería dividiéndola en dos paquetes, se dobla la tubería sobre sí misma, y se desliza un núcleo de metal sobre la tubería doblada (sobre ambas piezas de tubería). Se desliza el bucle aproximadamente 1.27 cm (0.5 pulgada). El pliegue formado en el codo actúa para sellar la tubería. Se utiliza un homeostato para plegar parcialmente el bucle cerrado. El bucle no se pliega muy apretado debido a que el bucle requerirá ser retirado durante el procesamiento. La bolsa de 600 mi se cuelga invertida sobre la superficie de trabajo, y se deja que repose por aproximadamente 3 minutos. La abrazadera blue en la tubería que lleva al equipo quad se libera para drenar la fracción celular (la capa de grasa amarillo/naranja) en el equipo quad. Se tiene cuidado en evitar que la capa de grasa entre a la tubería. Durante proceso, la tubería puede ser plegada manualmente para frenar el flujo conforme la capa de grasa se acerca a la tubería. El tubo que conduce al equipo de bolsa quad luego se cierra con una abrazadera blue, la bolsa de 600 mi se regresa a la superficie de trabajo y la bolsa de salino se cuelga. La abrazadera blue en la tubería entre el salino y la bolsa de 600 mi, se libera para permitir que aproximadamente 150 mi de salino entren a la bolsa de 600 mi. La bolsa de 600 mi se invierte aproximadamente 10-15 veces por aproximadamente 15 segundos. La bolsa de 600 mi luego se cuelga invertida sobre la superficie de trabajo, y se deja que repose por aproximadamente 3-5 minutos. La abrazadera blue en la tubería que lleva al equipo quad se libera, y la fracción celular (la capa bajo la capa de grasa amarillo/naranja) se drena al equipo quad. Se tiene cuidado en evitar que la capa de grasa entre la tubería. Por ejemplo, el flujo puede frenarse conforme la capa de 83 grasa se acerca a la tubería a desplegar manualmente la tubería. La tubería que conduce al equipo de la bolsa quad se cierra con una abrazadera blue. La tubería que lleva desde el equipo quad a la bolsa de 600 mi luego se termosella. La bolsa de 600 mi luego se retira y descarta. En quinto lugar, la composición de células regenerativas se lava. Se coloca un sujetador de metal en la tubería entre las dos bolsas llenas para sellar la tubería. El equipo quad se coloca en una báscula. Se agrega agua a un segundo equipo quad "modelo" para compensar el equipo quad. El equipo quad y el equipo compensado se colocan en cubas opuestas de la centrífuga. Para el filtro hueco, las células se lavan y colocan en la bolsa, y se sella tubería entre la bolsa y el montaje de filtros de células hueco anteriormente descrito. Utilizando una bomba peristáltica, el fluido se pasa a través del montaje de filtro y el concentrador celular se recolecta en una bolsa en dirección de corriente abajo. Se tiene cuidado en asegurarse que las bolsas del equipo quad no se compriman y estén verticales. La centrífuga se opera a 400xg por 10 minutos. El equipo quad se retira de la centrifuga y coloca en el prensa para exprimir plasma. Se tiene cuidado en colocar las bolsas en el prensa para exprimir de manera tal que la tubería dura en la parte superior de la bolsa este justo en la parte superior de la placa posterior. Si la bolsa es muy alta, se retendrá demasiado salino, si es muy baja la tubería interferirá con la capacidad de la placa frontal para cerrar y de nuevo se retendrá demasiado salino. Una abrazadera blue se aplica a cada una de las líneas que lleva desde el equipo quad lleno al vacío. Los bucles de metal y las abrazaderas blue se retiran para permitir que fluya sobrenadante al equipo quad vacío. Se expresa lo más de salino posible, pero se tiene cuidado en no desprender el precipitado celular. La tubería que recorre dentro de cada una de las bolsas que contienen sobrenadante, se termosella. Las bolsas 84 de desecho que contienen el sobrenadante, se retiran. Abrazaderas blue se aplican a la tubería que llevan a cada una de las bolsas del equipo quad que contiene células. Las bolsas se retiran de la prensa para exprimir de plasma. Un dispositivo de conexión estéril se utiliza para conectar la tubería que llega al paquete quad a la bolsa de salino. El sujetador blue que lleva a uno de las bolsas del equipo quad se retira para permitir que aproximadamente 150 mi de salino fluya dentro de la bolsa y después el sujetador se vuelve a aplicar para detener el flujo de salino. La bolsa del equipo quad llena luego se invierte aproximadamente 10-15 veces por aproximadamente 15 segundos. La abrazadera blue que lleva a la bolsa del equipo quad vacío luego se retira y todos los contenidos de la bolsa llena se drenan en la bolsa vacía. La abrazadera con bucle de metal se vuelve a aplicar para sellar la tubería entre dos bolsas de equipo quad. La tubería entonces se termosella y la bolsa de salino se retira. La bolsa del equipo quad completa luego se invierte aproximadamente 10-15 veces durante aproximadamente 15 segundos. Otro equipo quad modelo se coloca en la báscula y se vuelve a compensar con el equipo quad de células. Las bolsas de equipo quad (una llena, una vacía) luego se colocan en la centrífuga, de manera tal que las bolsas de equipo quad no se comprimen y están verticales. La centrífuga se opera a aproximadamente 400xg por 10 minutos. El equipo quad luego se retira de la centrífuga y se coloca cuidadosamente en el espesor de plasma, de manera tal que la tubería dura en la parte superior de la bolsa esté justo en la parte superior de la placa posterior. Si la bolsa está muy alta, será retenido demasiado salino, si está muy baja la tubería interferirá con la capacidad de la placa frontal para cerrar y de nuevo se retendrá demasiado salino. El bucle de metal se retira para expresar todo el sobrenadante de la bolsa llena en 85 la bolsa vacía teniendo cuidado de no desprender el precipitado de células regenerativas. La tubería entre las bolsas se sella, y la bolsa llena (desecho) se retira y descarta. Luego se inserta un nuevo acoplador de sitio de muestreado en la bolsa restante. Las células del precipitado celular luego se re-suspenden en el salino residual (de haber) para obtener una concentración de la célula regenerativas. La resuspensión puede realizarse por una manipulación suave de la bolsa (por ejemplo compresión y frotación). Un ejemplo particular del sistema que incorpora la presente invención se muestra en la Figura 4. La Figura 4 ilustra un sistema y método automatizados para separar y concentrar células regenerativas de tejido, por ejemplo, tejido adiposo, adecuado para re-infusión dentro del paciente. En ciertas modalidades del sistema mostradas en la Figura 4, el sistema además incluye una etapa automatizado para aspirar una cantidad determinada de tejido del paciente. El sistema mostrado en la Figura 4 comprende el equipo desechable mostrado en la Figura 13, que se conecta al componente re-utilizable del sistema mostrado en la Figura 14, para llegar a una modalidad automatizada del sistema mostrado en la Figura 15A. El equipo desechable se conectan al componente re-utilizable a través de, por ejemplo un dispositivo o configuración de enclavamiento o exploración computacional de abordaje, que conecta el equipo desechable con el componente re-utilizable de manera tal que el equipo desechable se conecta en forma segura con y asocia con el componente de equipo físico re-utilizable en una forma en que el dispositivo de procesamiento presente en el componente re utilizable puede controlar, e interconectar, es decir enviar y recibir señales a y de los diversos componentes del equipo desechable así como diversos componentes del componente re-utilizable, y otros dispositivos y sistemas asociados. 86 El usuario puede conectar el equipo desechable al componente re-utilizable, alimentar ciertos parámetros utilizando la ¡nterfase de usuario, por ejemplo, el volumen de tejido que se recolecta, conectar el sistema al paciente, y el sistema realiza automáticamente todas las etapas mostradas en la Figura 4, en una secuencia no interrumpida utilizando parámetros de alimentación de usuario y/o preprogramados. Una secuencia semejante se muestra en la Figura 15B. En forma alterna, el tejido puede aspirarse manualmente del paciente por el usuario y transportado al sistema para procesamiento, es decir, separación y concentración de células regenerativas. Específicamente, como se muestra la Figura 4, tejido, por ejemplo tejido adiposo, puede retirarse del paciente utilizando el conducto 12 introducido en la cámara de recolección 20. Una ilustración detallada de la cámara de recolección de la Figura 4 se ilustra en la Figura 5. Como se muestra en la Figura 5, la cámara de recolección 20 puede comprender una línea de vacío 11 que facilita remoción del tejido utilizando una cánula estándar. El usuario puede suministrar el volumen estimado de tejido dirigido a la cámara de recolección 20 en este punto. El tejido se introduce en la cámara de recolección 20 a través de una compuerta de entrada 21 que es parte de una ruta de fluido cerrado que permite al tejido, salino y otros agentes sean agregados al tejido en una forma aséptica. Un sensor óptico de sistema, por ejemplo el sensor. 29, puede detectar cuando está presente alimentación del usuario del volumen de tejido en la cámara de recolección 20. En ciertas modalidades, se está presente menos tejido en la cámara de recolección 20 que en la alimentación del usuario, el usuario tendrá la opción de empezar a procesar el volumen de tejido que este presente en la cámara de recolección 20. En ciertos componentes, una porción del tejido retirado del paciente puede ser dirigida 87 a la cámara de muestra 60 a través del uso de una bomba, por ejemplo, una bomba peristáltica, mediante un conducto, que puede ser activada mediante alimentación del usuario se utiliza la interfase del usuario. Un sensor 29 puede señalar el dispositivo de procesamiento presente en el componente re-utilizable que active las etapas requeridas para lavar y disgregar el tejido. Por ejemplo, el dispositivo de procesamiento puede introducir un volumen predeterminado de agente de lavado con base en el volumen de tejido recolectando utilizando válvulas y bombas automatizadas. Este ciclo puede ser repetido en la cámara de recolección hasta que el sensor óptico determine que el líquido efluente es suficientemente claro y carente de material indeseado. Por ejemplo, un sensor óptico 29 sobre el conducto dirige fuera de la cámara de recolección 12b o 12d, puede detectar que los materiales indeseados sean retirados y puedan indicar al dispositivo de procesamiento para cerrar las válvulas requeridas e iniciar la siguiente etapa. A continuación, el dispositivo de procesamiento puede introducir una cantidad pre programada de agentes de disgregación, con base en el volumen del tejido recolectado. El dispositivo de procesamiento puede también activar la agitación del tejido en la cámara de recolección por un periodo predeterminado de tiempo con base en el volumen de tejido inicial recolectado o con base en la alimentación de usuario. En la modalidad mostrada en la Figura 4, una vez que el agente de disgregación, por ejemplo colagenasa, se agrega a la cámara de recolección 20 a través de la fuente de colagenasa 24, el motor en la cámara de recolección 20 se activa mediante el dispositivo de procesamiento. El motor activa la flecha giratoria 25 que comprende un agitador magnético y un dispositivo tipo paleta en donde una o más paletas 25a se conectan rígidamente a la jaula de filtro 27 de 88 un filtro pre-fijado a la cámara de recolección 28. Las paletas agitan en la presencia del agente de disgregación, de manera tal que las células regenerativas se separan del tejido. La solución de la cámara de recolección 20 se deja que sedimente por un periodo predeterminado de tiempo. La porción flotante de ia solución se deja que ascienda a la parte superior de la solución. Una vez que transcurre el período de tiempo predeterminado, las válvulas y bombas necesarias se activan por el dispositivo de procesamiento para retirar la porción no flotante de la cámara de desechos 40. La transferencia en la cámara de desechos 40 continúa hasta que el sensor 29 sobre el conducto que dirige fuera de la cámara de recolección 2b o 12d puede detectar que la sección flotante de la solución está a punto de ser transferida a ia cámara de desechos 30. Por ejemplo, un sensor 29 sobre el conducto que dirige fuera de la cámara de recolección 12b o 12d, puede detectar que los materiales indeseados sean retirados y puedan señalar al dispositivo de procesamiento para cerrar las válvulas requeridas. En este punto, la fracción no flotante de la soiución, es decir, la composición de células regenerativas se mueve a la cámara de procesamiento 30. Esto se logra a través del uso de las necesarias válvulas y bombas peristálticas. En ciertas modalidades, antes de transferir la composición de células regenerativas a la cámara de procesamiento 30, puede agregarse un volumen adicional de salino a la fracción flotante de la solución que queda en la cámara de recolección 20. Puede repetirse otro ciclo de lavado. Después de este ciclo, la solución se deja que sedimente y la fracción no flotante (que contienen las células regenerativas) se transporta a la cámara de procesamiento 30 y la fracción flotante se drena a la cámara de desechos 40. El ciclo de lavado adicional se utiliza para optimizar la 89 transferencia de todas las células regenerativas separadas a la cámara de procesamiento 30. Una vez que la composición de células regenerativas se transporta a la cámara de procesamiento 30 mediante los conductos 12, la composición puede someterse a una o más etapas de lavado adicional antes del inicio de la fase de concentración. Esto asegura la remoción de desechos y contaminantes residuales de la cámara de recolección 20. Similarmente, subsecuente a la etapa de concentración, la composición de células regenerativas puede someterse a una o más etapas de lavado adicionales para retirar contaminantes residuales. Los materiales indeseados pueden retirarse de la cámara de procesamiento 30 a la cámara de desechos 40 en la misma forma, es decir, control de válvulas y bombas mediante señales desde el dispositivo de tratamiento, como se describió anteriormente. Las diversas modalidades de la cámara de procesamiento 30 mostradas en la Figura 4, se describen en detalle a continuación. La cámara de procesamiento 30 mostrada en la Figura 4 está en la forma de una cámara centrífuga. Una ilustración detallada de la cámara de procesamiento de la Figura 4 se ilustra en la Figura 7 y 8. Dicha cámara de procesamiento 30 generalmente comprende una red de sellos giratorios 30.1 , que comprende un alojamiento exterior 30.2, uno o más sellos 30.3, uno o rnás cojinetes 30.4 y un punto de conexión 30.6 para conectar la cámara de procesamiento al dispositivo de centrífuga presente en el componente reutilizable del sistema; una o más rutas de fluido 30.5 en la forma de conductos se extienden fuera del sello giratorio y terminan en una cámara centrífuga en cada extremo que está en la forma de una cámara de salida 50 alojada en un bastidor 53, en donde el bastidor comprende una o mas compuertas 52 y una o más en asas para reubicar manualmente la cámara de salida 50. La red de sellos giratorios 30.1 se incluye para asegurar que las rutas de fluido de la cámara de procesamiento pueda mantenerse en una condición estéril. Además, las rutas de fluido de la cámara de procesamiento pueden accesarse en una forma estéril (por ejemplo, para agregar agentes o solución de lavado) en cualquier tiempo, incluso mientras que la cámara centrífuga de la cámara de procesamiento esta centrifugándose. La red de sellos giratorios 30.1 mostrada en la Figura 7 y 8 incluyen una flecha giratoria que comprende dos o mas cojines 30.4, tres o mas sellos de lámina 30.3, y un alojamiento exterior 30.2. En esta modalidad, los cojines 30.4 comprenden además una flecha exterior e interior (no mostrada) referida aquí como guía. Estas guías pueden ser separadas por esferas rectificadas con precisión. Las guías y esferas que comprenden los cojinetes se fabrican de preferencia con material adecuado para contactar con fluido corporal, o se revisten con material adecuado para contacto con fluido corporal. En una modalidad preferida, las guías y esferas se fabrican utilizando por ejemplo, nitruro de silicona u óxido de zirconio. Además, en esta modalidad, los sellos de tres labios comprenden un canal en forma de "U" circular (no mostrado) así como un resorte circular (no mostrado). El canal en forma de "U" circular, de preferencia se fabrica utilizando material flexible de manera tal que se forme una unión a prueba de fuga con la flecha giratoria de la red de sellos giratorios 30.1. Adicionalmente, los sellos de labio de preferencia se orientan en una forma tal que la presión de la composición de células regenerativas que fluye a través de la cámara de procesamiento, provoca que el montaje de sello apriete su unión con la flecha giratoria mediante tensión incrementada. Los sellos pueden 91 asegurarse en posición mediante uno o más sujetadores circulares (no mostrado) que son capaces de expansión y/o colapso según se requiera, a fin de acoplar una ranura en el alojamiento exterior 30.2 de la red de sellos giratorios 30.1. El caior generado por o cerca de la red de sellos giratorios 30.1 debe controlarse para evitar lisis de las células en la solución, que se desplazan a través del pasaje. Esto puede lograrse por ejemplo al seleccionarse material duro para construir la flecha giratoria, pulir el área de la flecha giratoria que entre en contacto con los sellos y reducir el contacto entre la flecha giratoria y el sello. En otra modalidad, la red de sellos giratorios 30.1 comprende un solo sello de hule 30.3 y un empaque de aire (no mostrado). Este sello y empaque proporcionan una ruta tortuosa para cualquier materia biológica que puede comprometer la esterilidad del sistema. En otra modalidad, la red de sellos giratorios 30.1 comprende múltiples sellos cargados a resortes 30.3 que aislan las rutas de fluido individuales. Los sellos 30.3 se fabrican de un material que puede esterilizarse así como sellar la flecha giratoria sin lubricante. En otra modalidad, la red de sello giratorio 30.1 está comprendida por un par de discos cerámicos (no mostrados), que crean las diferentes rutas de fluido y pueden soportar la rotación del sistema y no provocar lisis celular. En otra modalidad, la ruta de fluidos flexible y se permite que bobine y desembobine con respecto a la cámara de procesamiento. Esto se logra al hacer que la ruta de fluidos flexible gire una revolución por cada dos revoluciones de la cámara de procesamiento 30. Esto elimina totalmente la necesidad por un sello giratorio. La composición de células regenerativas se bombea desde la cámara de recolección 20 sobre una ruta de fluido a través del eje de rotación de la red de sellos giratorios 30.1 y después se divide en un mínimo de dos rutas de fluido 30.5, 92 cada una de las cuales radia hacia afuera desde el eje central de la cámara de procesamiento 30 y termine cerca de los extremos exteriores de la cámara de procesamiento 30, es decir dentro de las cámaras de centrífuga que alojan las cámaras de salida 50 (Figuras 7 y 8). De acuerdo con esto en una modalidad preferida, la cámara de procesamiento 30 comprende dos o más cámaras de salida 50 como se ilustra en las Figuras 7 y 8. Estas cámaras de salida 50 se ubican de manera tal que estén en una orientación durante el procedimiento 30.7 y otra ubicación para recuperar células regenerativas concentradas 30.8. Por ejemplo, los cambios de salida se inclinan en un ángulo durante el procedimiento y otro ángulo para recuperación celular. El ángulo para recuperación celular es más vertical que el ángulo de procedimiento. Las dos posiciones de la cámara de salida 50 pueden ser manipuladas manualmente a través de un asa 53 que se proyecta fuera de la cámara de procesamiento 30. Las células regenerativas pueden ser recuperadas manualmente de las cámaras de salida 50 cuando se encuentran en la orientación de recuperación 30.8 utilizando una jeringa. En otra modalidad, la ruta de fluido 30.5 se construye de manera tal que se divide fuera de la cámara de procesamiento y luego conecta con los extremos exteriores de la cámara de procesamiento 30, es decir, dentro de las cámaras de centrífuga que alojan las cámaras de salida 50 (no mostrado). En esta modalidad, pueden transportarse grandes volúmenes de composición de células regenerativas y/o aditivos, soluciones, etc. a la cámara centrífuga y/o las cámaras de salida directamente. Con referencia a las Figuras 4 y 7-9, entre la cámara de recolección 20 y la cámara de procesamiento 30, puede proporcionarse una bomba 34 y una o más válvulas 14. En una modalidad preferida, las válvulas 14 son válvulas electromecánicas. Además, sensores tales como el sensor de presión 29, pueden 93 proporcionarse en línea con la cámara de procesamiento 30 y la cámara de recolección 20. Las válvulas, bombas y sensores actúan en concierto con el dispositivo de procesamiento presente en el componente reutiiizable (Figura 14) para automatizar las etapas de concentración de sistema. Los sensores detectan la presencia de la composición de células regenerativas en las cámaras de centrífuga y activan el dispositivo de centrífuga a través de comunicación con el dispositivo de procesamiento del sistema. La composición de células regenerativas luego se somete a una carga preprogramada por un tiempo preprogramado con base en la cantidad de tejido originalmente recolectado y/o la alimentación de usuario. En ciertas modalidades, esta etapa puede ser repetida ya sea automáticamente o a través de la alimentación de usuario. Por ejemplo, la composición se somete a una carga de aproximadamente 400 veces la fuerza de gravedad por un periodo de aproximadamente 5 minutos. La cámara de salida 50 se construye de manera tal que los extremos exteriores de la cámara forman un pequeño depósito para las células y partículas densas. La cámara de salida 50 retiene las partículas densas en lo que se denomina un "precipitado celular", mientras que permiten retirar al sobrenadante más ligero a través de una ruta de fluido, por ejemplo una ruta de fluido que está sobre el eje de rotación de la red de sello giratorios 30.1 y recorre desde el punto bajo al centro de la cámara de procesamiento 30 a través de la red de sello giratorios 30.1 al recipiente de desecho 40. Las válvulas 14 y bombas 34 señalan a! dispositivo de procesamiento para activar etapas para dirigir el sobrenadante al recipiente de desecho 40, sin perturbar el precipitado celular presente en la cámara de salida 50. El precipitado celular que se obtiene utilizando el sistema mostrado en la Figura 4, comprende las células regenerativas concentradas de la invención. 94 En algunas modalidades, después de que se retira el sobrenadante y dirige a la cámara de desechos 40, puede utilizarse una ruta de fluido 30.5 para resuspender el precipitado celular que se forma después de centrifugación con soluciones adicionales y/u otros aditivos. La re-suspensión del precipitado celular de esta manera permite mayor lavado de las células regenerativas para retirar proteínas indeseadas y compuestos químicos así como incrementar el flujo de oxigeno a las células. La suspensión resultante puede someterse a otra carga de aproximadamente 400 veces la fuerza de gravedad por otro periodo de aproximadamente 5 minutos. Después de que se forma un segundo precipitado celular, y se retira el sobrenadante resultante a la cámara de desechos 40, un lavado final en la forma descrita anteriormente puede realizarse con salino o alguna otra solución amortiguadora apropiada. Este lavado repetido puede realizarse múltiples veces para mejorar la pureza de la solución celular regenerativa. En ciertas modalidades, el salino puede agregarse en cualquier etapa que se considere necesaria para mejorar el procesamiento. Las concentraciones de las células regenerativas obtenidas utilizando el sistema mostrado en la Figura 4 pueden variar dependiendo de la cantidad de tejido recolectado, la edad del paciente, perfil del paciente, etc. Rendimientos ejemplares se proporcionan en la Tabla 1. El precipitado final presente en la cámara de salida 50 puede entonces ser recuperado en forma aséptica utilizando una jeringa apropiada después de que la cámara de salida 50 se ubica en la orientación apropiada para remoción de células. En otras modalidades, el precipitado final puede ser pasado automáticamente a un recipiente en la cámara de salida 50, que puede retirarse y almacenarse o ser utilizado según se requiera. Este recipiente puede ser de cualquier forma o tamaño apropiado. Por ejemplo, el recipiente puede ser una 95 jeringa. En ciertas modalidades, el recipiente de salida 50 mismo puede ser termosellado (ya sea en forma automática o manual) y aislarse de los otros componentes de la cámara de procesamiento para subsecuente recuperación y uso de las células regenerativas en aplicaciones terapéuticas como aquí se describe, incluyendo re-infusión al paciente. Las células también pueden someterse a procesamiento adicional como se describe aquí, ya sea antes de recuperación de la cámara de salida o después de transferencia a un segundo sistema o dispositivo. Ei componente reutilizable mostrado en la Figura 14 se construye de manera tal que pueda conectarse a uno o más sistemas o dispositivos adicionales para mayor procesamiento, según se requiera. Aunque los sistemas y métodos anteriores se han descrito aquí con un grado de especificidad, se entiende que la presente descripción se hace a manera de ejemplo solamente y que modificaciones a la estructura del sistema y la secuencia de los métodos especificados pueden realizarse por una persona con destreza en la técnica y se pretenden abarcados por la presente invención. Se han citado previamente una cantidad de publicaciones y patentes. Cada una de las publicaciones y patentes citadas aquí, se incorporan por referencia en su totalidad. EQUIVALENTES Aquellos con destreza en la técnica reconocerán o serán capaces de evaluar el utilizar no más que la experimentación rutinaria, muchos equivalentes a las modalidades específicas de la invención aquí descrita. Estos equivalentes se pretenden abarcados por las siguientes reivindicaciones.

Claims

REIVINDICACIONES 1. Un sistema automatizado para separar y concentrar células regenerativas de tejido, caracterizado porque comprende: (a) una cámara de recolección para recibir tejido retirado de un paciente, en donde la cámara de recolección facilita la disgregación del tejido, de manera tal que las células regenerativas se separen del tejido; y (b) una cámara de procesamiento conectada a la cámara de recolección, para recibir el tejido disgregado de la cámara de recolección; y (c) un dispositivo de centrifugado que puede conectar a la cámara de procesamiento, en donde el dispositivo de centrifugado concentra células regenerativas del tejido disgregado presente en la cámara de procesamiento; y (d) un dispositivo de procesamiento programable capaz de comunicación con y que controla la cámara de recolección, la cámara de procesamiento, el dispositivo de centrifugado y conexiones asociadas.
2. El sistema de conformidad con la reivindicación 1 , caracterizado porque el tejido es tejido adiposo.
3. El sistema de conformidad con la reivindicación 1 , caracterizado porque las células regenerativas son células madre.
4. El sistema de conformidad con la reivindicación 1 , caracterizado porque las células regenerativas son células progenitoras.
5. El sistema de conformidad con la reivindicación 1 , caracterizado porque las células regenerativas son una combinación de las células madre y células progenitoras.
6. El sistema de conformidad con la reivindicación 1 , caracterizado porque las células regenerativas separadas y concentradas son adecuadas para infusión en un paciente. 97
7. El sistema de conformidad con la reivindicación 6, caracterizado porque las células regenerativas se utilizan para tratar a un paciente.
8. El sistema de conformidad con la reivindicación 1 , caracterizado porque la cámara de recolección está comprendida adicionalmente por un filtro alojado en una jaula de filtro, dentro de la cámara de recolección para retener tejido y separar por filtrado componentes que no son de tejido, seleccionados del grupo que consiste de lípidos libres, sangre y solución de lavado.
9. El sistema de conformidad con la reivindicación 1 , caracterizado porque la cámara de recolección facilita la disgregación del tejido a través de agitación de una flecha giratoria que comprende paletas, tal que las paletas faciliten la disgregación del tejido conforme se agita la flecha giratoria.
10. El sistema de conformidad con la reivindicación 9, caracterizado porque las paletas se conectan a una jaula de filtro dentro de la cámara de recolección.
11. El sistema de conformidad con la reivindicación 9, caracterizado porque la flecha giratoria se agita a través de un agitador magnético.
12. El sistema de conformidad con la reivindicación 1 , caracterizado porque la cámara de recolección facilita la disgregación del tejido a través de rotación de una flecha giratoria que comprende paletas tal que las paletas faciliten la disgregación del tejido conforme se gira la flecha giratoria.
13. El sistema de conformidad con la reivindicación 9, caracterizado porque la flecha giratoria se gira a través de un mecanismo de impulso.
14. El sistema de conformidad con la reivindicación 1 , caracterizado porque además comprende una fuente de solución de lavado. 98
15. El sistema de conformidad con la reivindicación 14, caracterizado porque la solución de lavado es salino.
16. El sistema de conformidad con la reivindicación 1 , caracterizado porque además comprende una fuente de agentes de disgregación.
17. El sistema de conformidad con la reivindicación 16, caracterizado porque el agente de disgregación se elige del grupo que consiste de colagenasa, tripsina, lipasa, hialurolirasa, deoxiribonucleasa, Liberasa H1 , pepsina o sus mezclas.
18. El sistema de conformidad con la reivindicación 1 , caracterizado porque la cámara de procesamiento comprende una o más cámaras de centrífuga para contener el tejido disgregado presente en la cámara de procesamiento durante centrifugado del tejido disgregado en el dispositivo de centrífuga.
19. El sistema de conformidad con la reivindicación 18, caracterizado porque la una o más cámaras de centrifugado comprenden adicionalmente una o más cámaras de salida para recolectar las células regenerativas concentradas durante centrifugado del tejido disgregado en el dispositivo de centrífuga.
20. El sistema de conformidad con la reivindicación 29, caracterizado porque una o más cámaras de salida están inclinadas a un ángulo diferente durante centrifugado y a un ángulo diferente para recolección de las células regenerativas concentradas.
21. El sistema de conformidad con la reivindicación 29, caracterizado porque una o más cámaras de salida pueden ser reubicadas manualmente para llegar a un ángulo para recolección de las células regenerativas concentradas.
22. El sistema de conformidad con la reivindicación 21 , caracterizado porque las células regenerativas concentradas se retiran utilizando una jeringa. 99
23. El sistema de conformidad con la reivindicación 1 , caracterizado porque la cámara de procesamiento comprende un sello giratorio para facilitar la recolección del tejido disgregado en una forma estéril.
24. El sistema de conformidad con la reivindicación 23, caracterizado porque el sello giratorio comprende una flecha giratoria, dos o más cojinetes, tres o más sellos de labio, un alojamiento exterior, un canal circular y un resorte circular.
25. El sistema de conformidad con la reivindicación 23, caracterizado porque el sello giratorio comprende una flecha giratoria, un sello de hule sencillo, un empaque de aire, uno o más sellos cargados a resorte y dos discos cerámicos.
26. El sistema de conformidad con la reivindicación 1 , caracterizado porque además comprende una cámara de desechos.
27. El sistema de conformidad con la reivindicación 26, caracterizado porque la cámara de desechos recibe los componentes de células no regenerativas del tejido retirado del paciente.
28. El sistema de conformidad con la reivindicación 27, caracterizado porque los componentes de células no regenerativas presentes en la cámara de desechos se centrifugan para separar y concentrar componentes incluyendo colágeno, proteínas, lípidos, adipocitos y componentes de matriz.
29. El sistema de conformidad con la reivindicación 27, caracterizado porque los componentes de células no regenerativas presentes en la cámara de desechos se filtran para separar y concentrar componentes incluyendo colágeno, proteínas, lípidos, adipocitos y componentes de matriz.
30. El sistema de conformidad con la reivindicación 1 , caracterizado porque la cámara de recolección y la cámara de procesamiento se conectan a través de tubería. 100
31. El sistema de conformidad con la reivindicación 30, caracterizado porque la tubería además comprende sensores.
32. El sistema de conformidad con la reivindicación 1 , caracterizado porque la cámara de recolección y la cámara de procesamiento además comprenden una o más válvulas, bombas, sensores o sus combinaciones.
33. El sistema de conformidad con la reivindicación 30, caracterizado porque la cámara de recolección, la cámara de procesamiento y la tubería son desechables.
34. El sistema de conformidad con la reivindicación 1 , caracterizado porque el dispositivo de centrifugación y el dispositivo de procesamiento son reutilizables.
35. El sistema de conformidad con la reivindicación 32, caracterizado porque el dispositivo de centrifugación además comprende un motor de centrífuga, un controlador de motor de centrífuga y un controlador de freno de centrífuga.
36. El dispositivo de procesamiento de conformidad con la reivindicación 1 , caracterizado porque el dispositivo de procesamiento controla la cámara centrifuga, la cámara de procesamiento y la cámara de centrífuga al dirigir flujo de tejido a través del uso de una o más bombas.
37. El dispositivo de procesamiento de conformidad con la reivindicación 36, caracterizado porque las bombas son bombas peristálticas..
38. El dispositivo de procesamiento de conformidad con la reivindicación 37, caracterizado porque las bombas son reutilizables.
39. El dispositivo de procesamiento de conformidad con la reivindicación 1 , caracterizado porque el dispositivo de procesamiento además 101 comprende una interfase de usuario para que un usuario alimente parámetros al sistema.
40. El dispositivo de procesamiento de conformidad con la reivindicación 1 , caracterizado porque el dispositivo de procesamiento además comprende una pantalla de exhibición para exhibir instrucciones que guían a un usuario para alimentar parámetros, confirmar etapas preprogramadas, advertencia de errores o sus combinaciones.
41. El dispositivo de procesamiento de conformidad con la reivindicación 1 , caracterizado porque una porción del tejido retirado del paciente, se utiliza para separar y concentrar células regenerativas y la porción distante se aparta.
42. El dispositivo de procesamiento de conformidad con la reivindicación 41 , caracterizado porque la porción restante de tejido se aparta en una cámara de muestra.
43. El dispositivo de procesamiento de conformidad con la reivindicación 1 , caracterizado porque uno o más aditivos se agregan al sistema.
44. El dispositivo de procesamiento de conformidad con la reivindicación 43, caracterizado porque los aditivos se eligen de factores de crecimiento, fluidos de resuspensión, reactivos de cultivo celular, reactivos de expansión celular, reactivos de conservación celular o reactivos de modificación celular o sus combinaciones.
45. Un sistema para cultivar células regenerativas, caracterizado porque comprende (a) retirar tejido de un paciente; y (b) proporcionar un primer sistema para separar y concentrar células regenerativas; y (c) proporcionar un 102 segundo sistema, en donde el segundo sistema se conecta al primer sistema, para cultivar las células regenerativas.
46. Un sistema para separar y concentrar células regenerativas de tejido, que comprende: (a) una cámara de recolección para recibir tejido retirado de un paciente, en donde la cámara de recolección facilita la disgregación del tejido, tal que las células regenerativas se separen del tejido; y (b) una cámara de procesamiento conectada a la cámara de recolección, para recibir el tejido disgregado de la cámara de recolección; y (c) al menos un montaje de filtro, en donde el montaje de filtro concentra las células regenerativas del tejido disgregado.
47. El sistema de conformidad con la reivindicación 46, caracterizado porque el montaje de filtro comprende un dispositivo de filtrado percolante y un dispositivo de sedimentación.
48. El sistema de conformidad con la reivindicación 46, caracterizado porque el montaje de filtro comprende un dispositivo de filtración de fibras huecas.
49. Sistema de conformidad con la reivindicación 46, caracterizado porque el montaje de filtro comprende un dispositivo de filtración percolante.
50. Sistema de conformidad con la reivindicación 46, caracterizado porque el montaje de filtro comprende un dispositivo de elutriación.