MXPA05008695A

MXPA05008695A - Estabilizacion de composiciones virales.

Info

Publication number: MXPA05008695A
Application number: MXPA05008695A
Authority: MX
Inventors: Gary J Calton; Rita Fishelevich
Original assignee: Aurx Inc
Priority date: 2004-12-23
Filing date: 2005-08-16
Publication date: 2008-03-07
Also published as: KR20070117542A; EP1848398A4; EP1848398A1; CA2592323A1; US20080241187A1; US20060141483A1; JP2008525444A; WO2006071373A1; AU2005322522A1; NO20073807L

Abstract

Esta invencion se relaciona con composiciones de virus estabilizados, de preferencia un virus del herpes que puede ser un virus del herpes simple o virus zoster de varicela atenuado o modificado geneticamente y con un metodo para estabilizar virus e inmunizar preparaciones mediante la adicion de azucares, de preferencia glucosa y aminoacidos, de preferencia lisina.

Description

ESTABILIZACIÓN DE COMPOSICIONES VIRALES ANTECEDENTES DE LA INVENCIÓN (1) Campo de la invención . Esta invención se relaciona con métodos y composiciones para estabilizar virus vivos y composiciones de virus vivos que son especialmente útiles en la inmunización de preparaciones . (2) La descripción de la técnica relacionada incluye la información descrita de acuerdo con 37 CFR 1.97 y 37 CFR 1.98. Los virus vivos son por lo regular térmicamente inestables y los del virus del herpes especialmente también lo son. El virus del herpes simple es inestable aun a -80°C en almacenamiento prolongado. Las preparaciones de vacunas a menudo se suministran como productos congelados a bajas temperaturas o productos liofilizados y se han evaluado numerosos métodos de estabilizació . . . La Patente de EE.UU. núm. 4,147,772 describe el uso de gelatina liofilizada y un alcohol polihidrico. La Patente de EE.UU. núm. 4,337,242 describe el uso del ácido L-glutámico y L-arginina además de gelatina hidrolizada y un monosacárido. La Patente de EE.UU. núm. 4,500,512 describe el uso de una solución amortiguadora de fosfato (PBS, phosphate buffer solution) gue contiene iones de calcio y magnesio, un aminoácido y lactosa o sorbitol para una vacuna de fiebre amarilla, y proporciona ejemplos de estabilización con concentraciones muy bajas de aminoácidos (0.005-0.05 M) . La Patente de EE.UU. núm. 4,537,769 describe el uso de hidrolizados proteínicos que son muy superiores a los aminoácidos glicina, isoleucina, leucina, lisina, histidina, metionina, fenilalanina, prolina, serina, treonina, triptófano, tirosina, valina, alanina, ácido aspártico y ácido glutámico para las vacunas de influenza. La Patente de EE.UU. núm. 4,985,244 describe la estabilización de vacunas de sarampión, parotiditis o rubéola por la lactosa, sacarosa, sorbitol, glutamato e hidrolizado de gelatina .

La Patente de EE.UU. núm. 5,792,643 describe el uso de manitol, lactosa, sacarosa y trehalosa para estabilizar un retrovirus recombinante . La Patente de EE.UU. núm. 5,618,539 describe el uso de ciertas poliaminas para estabilizar el virus de polio, especialmente lisina a concentraciones de 1-2 molar. La Patente de EE.UU. núm. 5,948,411 describe una vacuna del virus de varicela vivo estabilizada mediante la adición de sacarosa, lactosa, sorbitol, cisteína, glutamato, gelatina y gelatina hidrolizada de la cual se habían retirado los iones calcio y magnesio. La Patente de EE.UU. núm. 6,258,362 describe una composición de virus del herpes liofilizado estabilizado mediante un polisacárido que tiene un peso molecular de 5,000 a 70,000 o una peptona parcialmente hidrolizada, un amortiguador y un monosacárido. • Aunque se han usado varios compuestos para estabilizar a las vacunas virales vivas, es claro que hay una necesidad de formulaciones que mejorarán la estabilidad de las preparaciones virales, en especial las del virus del herpes y más especialmente el herpes simple .

BREVE DESCRIPCIÓN DE LA INVENCIÓN .= Las modalidades de la presente invención proporcionan composiciones para mejorar la estabilidad de las vacunas de virus vivos que contienen virus vivos, tales como virus del herpes simple, especialmente tipo 1 y 2. Estos estabilizadores mejorados contienen lisina a una concentración de 0.2 a 200 g/1 y un azúcar o alcohol de azúcar de 0.2 a 200 g/1. La inclusión de lisina y glucosa en estas composiciones resulta en un mejoramiento de la estabilidad de las yacunas tanto en el estado líquido y sólido, así como rendimientos mejorados durante el proceso de cosechar los virus para la preparación de la vacuna. El uso de lisina y glucosa permite que la formulación de los estabilizadores de la vacuna no contenga productos de origen animal . Por lo tanto, es un objetivo de la presente invención proporcionar una estabilidad mejorada para un almacenamiento de virus vivos , en especial virus del herpes y más especialmente virus del herpes simple. También es un objetivo de las modalidades de la presente invención proporcionar un proceso para estabilizar virus vivos, en especial virus del herpes y más especialmente virus del herpes simple . Otro objetivo de las modalidades de la presente invención es proporcionar una fórmula estabilizada para el virus, que puede usarse para realizar preparaciones inmunizantes en especial virus del herpes y más especialmente preparaciones del virus del herpes simple. Aún otro objetivo de las modalidades de la presente invención es proporcionar preparaciones inmunizantes estabilizadas, en especial virus del herpes y más especialmente una preparación del virus del herpes simple que puede usarse en animales o humanos . y Aún otro objetivo de las modalidades de la presente invención es proporcionar un método para '" estabilizar virus conforme se extrae de las células o el medio de cultivo. Aún otro objetivo de las modalidades de la • presente invención es proporcionar una composición de virus estabilizado gue no contenga productos adicionados de '• origen animal . Estos y otros objetivos de las modalidades de la presente invención serán evidentes a partir de la siguiente descripción.

DESCRIPCIÓN DETALLADA DE LA INVENCIÓN . Las modalidades de la presente invención se relacionan con composiciones que son estabilizadores mejorados para las vacunas de virus vivos. Los estabilizadores mejorados reemplazan los componentes de los estabilizadores anteriores que no proporcionan estabilidad para el virus del herpes congelado, en especial herpes simple y 'herpes simple modificado genéticamente. La presente invención también proporciona composiciones inmunizantes que comprenden virus con tales estabilizadores mejorados . Las modalidades de la presente invención representan 'un mejoramiento significativo sobre el uso de los estabilizadores de la técnica anterior que incluyen estos componentes como albúmina de suero, ya sea recombinante o animal, en donde se ha encontrado que la lisina y la glucosa estabilizan los virus vivos contra la inactivación, sin la necesidad de adicionar proteína, en especial virus del herpes . Las modalidades de las composiciones de acuerdo con la invención, en general, pueden hacerse de acuerdo con la práctica farmacéutica conocida per se, de modo gue alcancen estándares aceptables, por ejemplo, de esterilidad. La dosis del virus en una preparación congelada o liofilizada de acuerdo con un ejemplo de la invención, puede elegirse para ser tal como para producir, en el líquido diluido o reconstituido para inyección, una dosis de, por ejemplo, aproximadamente 103 a aproximadamente 108 virus ufp. Un ejemplo elegido comúnmente de un volumen de una dosis para inyección es de aproximadamente 0.1 a 0.5 ml . La preparación congelada o liofilizada puede prepararse a partir de una composición líquida gue está a la misma concentración en sus componentes principales que el líquido que va a reconstituirse o de mayor o menor concentración. El contenido de humedad del producto liofilizado puede oscilar de 0.5-15% y puede estar ^debajo de aproximadamente 10%, por ejemplo, menor de aproximadamente 5%, por ejemplo, menor de aproximadamente 2% o menos. También se proporciona por las modalidades de la invención un proceso para producir una preparación farmacéutica estabilizada de una preparación inmunizante del virus del herpes, que se dispersa en un líquido acuoso para inyección, y que comprende liofilizar una composición acuosa estéril que contiene (i) virus como componente de vacuna activo, de preferencia un virus del herpes, por ejemplo, un virus del herpes simple o virus zóster de varicela atenuado o modificado genéticamente, (ii) lisina a una concentración final en la composición acuosa estéril de 0.2 a 200 g/L (iii) y (iii) azúcar, tal como glucosa o -" lactosa o un alcohol de azúcar, por ejemplo, manitol o sorbitol .

Además, un proceso de las modalidades de la presente invención para producir una preparación farmacéutica estabilizada de una preparación inmunizante del virus del herpes, que es una preparación estabilizada congelada que comprende colocar en una ampolleta una composición acuosa estéril que contiene (i) virus como el componente inmunizante activo, de preferencia un virus del herpes* por ejemplo, un virus del herpes simple o virus zóster de varicela atenuado o modificado genéticamente, (ii) lisina a una concentración final en la composición acuosa estéril de 0.2 a 200 g/L (iii) y (iii) azúcar, tal como glucosa o lactosa o un alcohol de azúcar, tal como manitol o sorbitol, que después puede tener agua o un amortiguador farmacéuticamente apropiado adicionado para diluir la preparación a un nivel apropiado de osmolalidad, tal que pueda ajustarse en un humano o animal sin daño. La liofilización del producto puede llevarse a cabo durante cualquier periodo apropiado de acuerdo con la práctica de liofilización convencional, por ejemplo, a una temperatura menor que la temperatura de transición vitrea del líquido congelado que va a liofilizarse, y el producto puede estar en la forma de una torta seca sólida dentro de -una ampolleta de vidrio, de preferencia bajo condiciones estériles. El proceso de secado por congelado puede comprender las etapas de proceso conocidas per se para lograr el secado de dos etapas, en el que una primera etapa de sublimación del contenido de agua se lleva a cabo a una temperatura de, por ejemplo, aproximadamente -40 grados C, o menor, y después la temperatura de la composición se eleva a una temperatura superior, por ejemplo, 0 a +10 grados C, cuando el secado ha procedido suficientemente para que la torta formada por la composición secada parcialmente mantenga su forma a la temperatura superior, y se remueve una cantidad de agua adicional durante y después de elevar la temperatura, aun a presión reducida. El producto puede rehidratarse a conveniencia con un líquido acuoso estéril, 'por ejemplo, agua para inyección. También se proporciona, de acuerdo con las modalidades de la invención, un proceso para producir una preparación líquida de una vacuna de virus para inyección, que comprende dispersar o disolver una preparación liofilizada estéril como se especificó anteriormente, por ejemplo, una preparación farmacéutica estabilizada de un virus del herpes simple recombinante, en un líquido acuoso para inyección, para producir una composición líquida de concentración aproximadamente isotónica. Las composiciones también pueden comprender otros materiales, tales como otros coloides, que cuando están presentes son de preferencia polisacáridos o derivados de polisacáridos, tales como hidroxietil almidón. Los virus de las formulaciones pueden comprender, en general, virus vivos, de preferencia atenuados o modificados genéticamente . El virus es de preferencia un virus infeccioso, por ejemplo un virus del herpes, y puede ser un virus incapacitado genéticamente de, por ejemplo, uno de los tipos descritos o que se hace referencia en WO 92/05263 (Immunology Ltd: Inglis et al) ; L H Nguyen, D Knipe et al, J Virol 66(12) (diciembre de 1992) 7067-7072; WO 94/01573 (Akzo: Peeters et al;) WO 94/03595 (Akzo: Visser et al;) WO 94/21807 (Cantab Pharmaceuticals Research Ltd; Inglis et al) ; WO 95/18852 (Harvard College and Dana-Farber Cáncer Institute: D Knipe, et al); WO 96/04395 (Lynxvale Ltd: P Speck) ; WO 96/26267 (Cantab Pharmaceuticals Research Ltd: MEG Boursnell et al); US 6,207,168 (University of Maryland at Baltimore: Aurelian) ; US 6,054,131 (University of Maryland at Baltimore: Aurelian) y US 6,013,265 (University sf Maryland at Baltímore: Aurelian) . Las modalidades de la invención se aplican particularmente, por ejemplo, para los virus del herpes y los poxvirus entre otros . Las aplicaciones particularmente útiles para la estabilización de HSV, por ejemplo HSV-2, por ejemplo, en la forma de HSV-2 incapacitado tales como se describe en WO 94/21807 (Cantab Pharmaceuticals : Inglis et al) , WO 96/26267 (Cantab Pharmaceuticals Research Ltd: MEG Boursnell et al), US 6,207,168 (University of Maryland at Baltimore: Aurelian), US 6,054,131 (University of Maryland at Baltimore: Aurelian) y US 6,013,265 (University of Maryland at Baltimore: Aurelian), por ejemplo en las modalidades donde el virus del herpes porta material genético exógeno que codifica un inmunomodulador o un antigeno heterólogo. Otros virus del herpes, tales como, por ejemplo virus zóster de varicela, virus del herpes de bovino y virus de pseudorrabia también pueden formularse como se describe en la presente con resultados similares. Ejemplos de las composiciones de la invención, por ejemplo, pueden comprender inmunógenos y vacunas y preparaciones de vectores virales para el uso in vivo y ex vivo. Las composiciones pueden comprender inmunógenos además de los virus descritos anteriormente, por ejemplo, inmunomoduladores, tales como interleucinas, por ejemplo IL-12; y los estabilizadores y excipientes conocidos per se, tal como puede desearse para los propósitos de una aplicación dada que se está estudiando.

EJEMPLO 1 Una preparación del virus del herpes atenuado que tiene una titulación de lxlO8 ufp/mL tuvo histidina, prolina o histidina adicional (0.002%) con glucosa o prolina (0.002%) con adición de glucosa, se mantuvieron a 23°C, a 4°C y a -20°C. En ios días 0, 7 y 21, las titulaciones se determinaron por una prueba en placa. El siguiente cuadro 1 proporciona las titulaciones (000' s ufp en 6 uL) encontradas en el día indicado. CUADRO 1 El ejemplo 1 mostró que cada tratamiento experimental proporcionó una viabilidad prolongada en cada temperatura comparado con los controles . EJEMPLO 2 Una preparación del virus del herpes atenuado que tiene una titulación» de lxlO8 ufp/mL tuvo lisina adicional (0.9 M) o lisina (0.9 M) con glucosa (2%) adicionada y se mantuvieron a temperatura ambiente, 23°C y a 4°C y a -20°C. En los días 0, 14 y 28, las titulaciones se determinaron por una prueba en plaga. El siguiente cuadro 2 proporciona las titulaciones (000' s ufp en 1 uL) encontradas en el día indicado . CUADRO 2 El ejemplo 2 mostró un prolongación en el tiempo de vida del virus por la lisina o una mezcla de lisina y glucosa.

EJEMPLO 3 Una preparación del virus del herpes atenuado que tiene una titulación de lxl07 ufp/mL en una concentración final de lisina 0.875 M y con glucosa al 2% adicionada, se mantuvieron a temperatura ambiente (aproximadamente 23°C) , 4°C y -20°C. En los días 0 y 28 se determinaron las titulaciones por una prueba en placa. La siguiente Tabla 3 proporciona 3»as titulaciones (000' s ufp en 7 uL) encontradas en el día indicado. CUADRO 3 El ejemplo 3 mostró una prolongación del tiempo de vida del virus por la lisina y glucosa a -20°C.

EJEMPLO 4 Una preparación del virus del herpes atenuado que tiene una titulación de lxlO8 ufp/mL se diluyó a una concentración final de lisina 0.3, 0.5 y 0.7 M con glucosa al 2% adicionada y las alícuotas se mantuvieron a -20°C. En la semana 0 y 9, se determinaron las titulaciones por una placa en placa. El siguiente cuadro 4 proporciona las titulaciones (con relación al día 0 a 100%) encontradas en la semana 9. CUADRO 4 El ejemplo 4 mostró que las tres concentraciones de lisina con glucosa prolongaron el tiempo de vida del herpes simple a -20°C. , EJEMPLO 5 Las preparaciones de herpes atenuado que tienen titulaciones de 6xlOs ufp/mL y 1.6xlOd ufp/mL en lisina 0.3 M con glucosa al 2% (concentraciones finales) se colocaron en ampolletas y se almacenaron a -80°C durante 24 meses. La titulación se determinó por una prueba en placa. El virus fue estable durante este periodo sin una disminución en la titulación. ?l Ejemplo 5 mostró la viabilidad del herpes que se mantuvo en lisina 0.3 M y glucosa al 2% durante 24 meses a -80°C.

EJEMPLO 6 Las preparaciones de herpes atenuado, herpes simple 2, en las que el dominio PK se ha eliminado, preparadas mediante los métodos descritos en la patente de EE.UU. 6,207,168, incorporada en la presente por referencia, que tienen las titulaciones de 1.6xlOe ufp/mL se prepararon con una fórmula de estabilización de lisina 0.3 M y glucosa al 2% (concentraciones finales) y se probaron para la actividad terapéutica en cobayos. Los cobayos se infectaron con HSV-2 (3xlOd ufp) en la pata (día 0) y se inmunizaron con la preparación anterior o se inmunizaron de forma simulada con PBS por inoculación subcutánea en el flanco en el día 7 y 17 después de la infección, y todos los animales siguieron el desarrollo de la enfermedad recurrente. El virus del herpes simple recombinante estabilizado proporcionó una reducción de 67% en la protección de recurrencias de la enfermedad recurrente en los animales infectados anteriormente. El Ejemplo' 6 mostró inmunización con una vacuna de herpes formulada con una fórmula de estabilización de lisina 0.3' M y glucosa al 2%, que retuvo efecto protector contra la infección por herpes. i? EJEMPLO 7 Las preparaciones de herpes atenuado que tienen titulaciones de 1.6xlOs ufp/mL se prepararon con una fórmula de estabilización de lisina 0.3 M y glucosa al 2% (concentraciones finales) y se probaron para la actividad terapéutica en humanos que se conocía que estaban i§ infectados con herpes genital (HSV-2) y que tuvieron un mínimo de 4-20 recurrencias en el año anterior. La prevención de la recurrencia se observó en 44% de- los pacientes tratados, mientras que 87% de los pacientes tratados con placebo tuvieron una recurrencia. Algunos de los pacientes tratados recibieron preparaciones de virus 28 estabilizados como se describe en el Ejemplo 5 que se habían preparado más de 12 meses previamente.

El Ejemplo 7 mostró que la vacuna de herpes formulada con una fórmula de estabilización de lisina 0.3 M y glucosa al 2%, mantuvo su efecto protector contra la recurrencia de herpes en humanos que se conocía que estaban infectados con herpes genital (HSV-2) después del almacenamiento durante 24 meses . Será evidente para los experimentados en la técnica que los ejemplos y modalidades descritos en la presente son a manera1 de ilustración y no de limitación, y que pueden usarse otros ejemplos sin apartarse del espíritu y alcance de la presente invención, como se establece en las reivindicaciones anexas .

Claims

REIVINDICACIONES: 1. Una preparación de virus vivos que comprende: (a) herpes simple y (b) lisina a una concentración de 0.2 a 200 g/L y 5 (c) un azúcar o alcohol de azúcar de 0.2 a 200 g/L.
2. La preparación según la reivindicación 1, en donde el azúcar ó alcohol de azúcar es glucosa.
3. Una preparación de virus vivo preparada liofilizando la preparación según la reivindicación 1. jßh
4. Un proceso para preparar vacunas estabilizadas que contienen virus vivos atenuados, el proceso comprende poner en contacto virus vivos atenuados con una cantidad efectiva del agente de estabilización según la reivindicación 1.
5. El proceso según la reivindicación 4, en donde el virus vivo es un virus del herpes . 1S
6. El proceso según la reivindicación 4, en donde el virus del herpes es un virus del herpes tipo 2.
7. El proceso según la reivindicación 6, en donde el virus del herpes es un virus del herpes tipo 2 en donde » el dominio PK se ha eliminado.
8. El proceso según la reivindicación 4, en donde b la etapa de poner en contacto se lleva a cabo antes de la etapa de liofilización.
9. Un agente estabilizador para el agente de inmunización viral del virus del herpes vivo, que comprende lisina y glucosa.
10. El agente de estabilización según la reivindicación 9, en donde el agente de inmunización es un virus del herpes de tipo 2.
11.- El agente de estabilización según la reivindicación 10, en donde el virus del herpes es un herpes simple de tipo 2 en el que el dominio PK se ha eliminado .
12. Un método para preparar un agente de inmunización de virus vivos que comprende mezclar un virus del herpes vivo con un estabilizador que comprende una solución acuosa de un azúcar o alcohol de azúcar a 1-100 g/1 y lisina de 2 a 20 g/1.
13. El método según la reivindicación 1, en donde el virus vivo es un virus del herpes simple de tipo 2 en el que el dominio PK se ha eliminado.
14. Un método para cosechar un virus del herpes vivo para el uso en un agente inmunizante de virus vivo que incluye la etapa de interrumpir las células que contienen el virus en presencia de un estabilizador, que comprende una solución acuosa de un azúcar o alcohol de azúcar a 1-200 g/1 y lisina de 0.2 a 200 g/1.
15. El método según la reivindicación 14, en donde el azúcar o alcohol de azúcar es glucosa.
16. El método según la reivindicación 14, en donde el virus del herpes vivo es un virus de herpes simple de tipo 2.
17. El método según la reivindicación 16, en donde el virus del herpes es un herpes simple de tipo 2 en el que el dominio PK se ha eliminado.
18. Un método para cosechar virus de herpes simple para el uso en un agente de inmunización de virus vivo que incluye la etapa de separar el medio de crecimiento de las células en el que el herpes simple crece, y adicionar un estabilizador al medio de crecimiento que contiene el virus excretado, que comprende lisina y azúcar o alcohol de azúcar, para proporcionar una concentración final del azúcar o el alcohol de azúcar a 1-200 g/1 y de la lisina de 0.2 a 200 g/1.
19. El método según la reivindicación 18, en donde el azúcar o alcohol de azúcar es glucosa.
20. El método según la reivindicación 18, en donde el virus del herpes es herpes simple de tipo 2.
21. El método según la reivindicación 20, en donde el virus del herpes es un herpes simple de tipo 2 en el que el dominio PK se ha eliminado. EXTRACTO DE LA EXPOSICIÓN Esta invención se relaciona con composiciones de virus estabilizados, de preferencia un virus del herpes que puede ser un virus del herpes simple o virus zóster de varicela atenuado o modificado genéticamente y con un método para estabilizar virus e inmunizar preparaciones mediante la adición de azúcares, de preferencia glucosa y aminoácidos, de preferencia lisina.