MXPA03008498A - Procesamiento en dos fases de polimeros termosensibles para uso como biomateriales. - Google Patents

Abstract

Un sistema de dos pasos para preparar biomateriales a partir de precursores polimericos se divulga. El metodo involucra (a) configurar los precursores polimericos por medio de inducir gelacion termica de una solucion acuosa de los precursores polimericos y (b) curar los precursores polimericos por medio de reticular grupos reactivos en los precursores polimericos para producir un material curado. La reaccion de curado involucra ya sea una reaccion de adicion de tipo Michael o una reaccion de foto-polimerizacion de radicales libres para reticular los materiales polimericos. Los biomateriales producidos por este metodo tienen una variedad de usos biomedicos, incluyendo entrega de medicamentos, micro-encapsulado, e implantacion.

Description

PROCESAMIENTO EN DOS FASES DE POLÍMEROS TERMO- SENSIBLES PARA USO COMO BIOMATERIALES Antecedentes de la Invención La invención se refiere al campo de métodos para hacer biomateriales poliméricos. Biomateriales sintéticos, incluyendo hidrogeles poliméricos y copolimeros solubles en agua, son usados en una variedad de aplicaciones biomédicas, incluyendo aplicaciones farmacéuticas y quirúrgicas. Pueden usarse, por ejemplo, para entregar moléculas terapéuticas a un sujeto, como adhesivos o selladores, para ingeniería de tejidos y estructuras de soporte de sanado de heridas, y para encapsulado de células y otros materiales biológicos. El uso de dispositivos poliméricos para la liberación de compuestos farmacéuticamente activos ha sido investigada para tratamientos terapéuticos, de largo plazo, de varias enfermeda-des. Es importante que el polímero sea biodegradable y biocompa-tible. Además, las técnicas usadas para fabricar el dispositivo polimérico y cargar el medicamento deben ser no tóxicas, resultar en formas de dosis que sean seguras y efectivas para el paciente, minimizar la irritación del tejido que rodea la zona, y ser un medio compatible para que el medicamento sea entregado. Mientras que mucho progreso se ha hecho en el campo de biomateriales poliméricos, desarrollos adicionales se necesitan para que tales biomateriales se usen de manera óptima en el cuerpo. Idealmente, las técnicas para preparar materiales poliméricos para uso como materiales de encapsulado o para la entrega controlada de medicamentos, incluyendo medicamentos de péptidos y proteínas, deberán ser muy suaves y gentiles, ser capaces de proceder en un ambiente acuoso, permitir reticulación subsecuente o simultánea para estabilidad química y mecánica, y proporcionar materiales que sean estables por un tiempo específico bajo condiciones fisiológicas. Actualmente, hay unos pocos métodos para generar materiales poliméricos que alcanzan estos requerimientos exigentes. Muchos de los polímeros mas comúnmente usados para tales aplicaciones tienen problemas asociados con sus propiedades fisicoquímicas y el método de fabricación. Así, existe una necesidad fuerte por biomateriales poliméricos mejorados y métodos para su preparación. Compendio de la Invención La presente invención presenta un método para preparar un biomaterial a partir de un precursor polimérico. El método incluye los pasos de (a) proporcionar un precursor polimérico, incluyendo grupos 'reactivos, que sufre gelación térmica inversa en solución acuosa; (b) formar el precursor por medio de inducir térmicamente gelación de una solución acuosa del precursor; y (c) curar el precursor polimérico por medio de reticular los grupos reactivos para producir un biomaterial. Los precursores poliméri-eos son, por ejemplo, poliéteres o copolimeros de bloques, con por lo menos uno de los bloques siendo un poliéter, poli (N-alquil acrilamida) , hidroxipropilcelulosa, poli (alcohol vinilico) , poli (etil (hidroxietil ) celulosa) , polioxazolina, o un derivado conteniendo grupos reactivos en una o mas cadenas laterales o como grupos terminales. En una forma de realización, el paso de curado involucra reticular el precursor polimérico usando una reacción de adición de tipo Michael. Para esta reacción, el donador Michael es, por ejemplo, un tiol o un grupo conteniendo un tiol, y el receptor Michael es, por ejemplo, un acrilato, una acrilamida, una quinona, una maleimida, una vinil sulfona, o un vinil piridinio . Alternativamente, el paso de curado involucra una reacción de polimerización de radical libre que ocurre en presencia de un sensibilizador y un iniciador. El sensibilizador es, por ejemplo, un colorante, tal como etil eosina, eosina Y, fluoresceina, 2 , 2-dimetoxi-2-fenil acetofenona, 2-metoxi-2-fenilacetofenona, canforquinona, rosa de bengala, azul de metileno, eritrosina, floxima, tionina, riboflavina, verde de metileno, naranja de acridina, colorante de xantina, o colorantes de tioxantina. Iniciadores ejemplares incluyen trietanolamina, trietilamina, etanolamina, N-metil dietanolamina, N,N-dimetil bencilamina, dibencil amina, N-bencil etanolamina, N-isopropil bencilamina, tetrametil etilenodiamina, persulfato de potasio, tetrametil etilenodiamina, lisina, ornitina, histidina, y arginina . En un aspecto relacionado, la invención presenta geles compatibles fisiológicamente preparados por los métodos anteriores. Los geles pueden prepararse en tales formas como cápsulas, cuentas, tubos, fibras huecas, o fibras sólidas. Los geles pueden también incluir una molécula bioactiva, tal como una proteina, moléculas de ocurrencia natural o sintéticas, partículas virales, azúcares, polisacáridos, medicamentos orgánicos o inorgánicos, y moléculas de ácido nucleico. Células, tales como células de islote pancreático, fibroblastomas de piel humana, células de ovario de hámster chino, insulomas de células beta, células de leucemia linfoblástica, fibroblastomas 3T3 de ratón, células de mesencefalón ventral que secretan dopamina, células de neuroblas-toide, células de médula adrenal, y células T, pueden también encapsularse en los geles de la invención. En otro aspecto, la invención presenta vehículos de entrega de medicamentos que incluyen geles preparados por los métodos anteriores y sustancias terapéuticas. La invención además proporciona un método para entregar una sustancia terapéutica a un animal, v.gr., un humano, que involucra poner en contacto una célula, tejido, órgano, sistema de órganos, o cuerpo del animal con este vehículo de entrega. La sustancia terapéutica puede ser, por ejemplo, un pro-fármaco, una molécula orgánica sintetizada, una molécula orgánica que ocurre naturalmente, un ácido nucleico, v.gr.f un ácido nucleico anti-sentido, una proteina o péptido biosintético, una proteina o péptido que ocurre naturalmente, o una proteina o péptido modificado. Otras características y ventajas de la invención serán aparentes a partir de su siguiente descripción detallada y de las reivindicaciones . Por "ácido nucleico anti-sentído" se entiende una secuencia de ácido nucleico que es complementaria a y se enlaza a una secuencia de sentido de ácido nucleico, v.gr., para prevenir la transcripción o traducción. Por "molécula bioactiva" se entiende cualquier molécula capaz de conferir un efecto terapéutico por cualquier medio a un sujeto, v.gr., un paciente. Por "biomaterial" se entiende un material que se pretende para contacto con el cuerpo, ya sea ante la superficie del cuerpo o implantado dentro de él. Por "conjugación" o "conjugado" se entiende la alteración de enlaces múltiples carbono-carbono, carbono-heteroátomo, o heteroátomo-heteroátomo con enlaces sencillos. Por "material curado" se entiende un material polimérico que ha sufrido las fases de configuración y de curado. Por "curar" o "fase de curado" se entiende la estabilización de un material polimérico a través de la reticulación de grupos terminales o laterales reactivos. La fase de curado de la invención se basa en una reacción química, tal como una reacción de adición de tipo Michael o una reacción de polimerización de radicales libres. Por "iniciador" se entiende una molécula que, después de transferencia de electrones, genera un radical libre e inicia una reacción de polimerización de radicales. Por "LCST" o "Temperatura de Solución Critica Inferior" se entiende la temperatura a la cual un polímero sufre gelación térmica inversa, es decir, la temperatura por debajo de la cual el copolímero es soluble en agua y por encima de la cual el polímero sufre separación de fase para formar un gel semi-sólido .

En formas de realización deseables, la LCST para un polímero está entre 10 y 90°C. Por "precursor polimérico" se entiende un material polimérico que no ha sufrido una fase de configuración o curado. Por "polimerización" o "reticulación" se entiende el enlace de moléculas de componente de precursor múltiples que resulta en un aumento sustancial de peso molecular. "Reticulación" indica además ramificación, típicamente para convertir una red de polímero . Por "pro-fármaco" se entiende un compuesto terapéuticamente inactivo que se convierte a la forma activa de un medicamento por actividad enzimática o metabólica in vivo. Los términos "proteína", "polipéptido" y "péptido" se usan de manera intercambiable en la presente y se refieren a cualquier cadena de dos o mas aminoácidos que ocurren naturalmen-te o modificados unidos por uno o mas enlaces de péptidos, independientemente de su modificación post-traducción (v.gr., glicosilación o fosforilación) . Por "gelación térmica inversa", "gelación térmica", o "gelación inducida térmicamente" se entiende el fenómeno por el cual una solución de polímero espontáneamente aumenta en viscosidad, y en muchos casos se transforma en un gel semi-sólido, conforme la temperatura de la solución se incrementa por encima de la LCST del polímero. Por "sensibilizador" se entiende una sustancia química que a través de una interacción con luz UV y/o visible genera un radical por intercambio de electrones entre su estado excitado y otra molécula. Por "configurar" o "fase de configuración" se entiende una fase en el procesamiento de un material polimérico en el cual el material se forma y configura a partir de una solución homogénea. La fase de configuración de la presente invención se basa, por ejemplo, en una gelación inducida térmicamente de una solución acuosa del material polimérico. Breve Descripción de los Dibujos La figura 1 es un diagrama esquemático mostrando una reacción de foto-polimerización de radicales libres. La figura 2 es una gráfica mostrando el cambio en el módulo elástico y viscoso de una solución de polímero con temperatura incrementada.

La figura 3 es un par de gráficas mostrando el cambio en el módulo elástico y viscoso de una solución de polímero (sujeta a curado sin gelación térmica) sobre el tiempo. La figura 4 es una gráfica mostrando el cambio en el módulo elástico y viscoso de una solución de polímero (sujeta a curado con gelación térmica) sobre el tiempo. Descripción Detallada de la Invención Se ha descubierto que es posible formar materiales curados en presencia de materiales biológicos sensibles por medio de usar reacciones de curado altamente sensibles que son capaces de proceder bajo condiciones fisiológicas (tal como adición de tipo Michael de tioles en olefinas pobres en electrones) y por medio de usar precursores poliméricos que tienen citotoxicidad despreciable. El carácter suave de las reacciones de curado permite la incorporación de moléculas biológicas o bioactivas (v.gr., péptidos, proteínas, ácidos nucleicos, y medicamentos) en materiales poliméricos, sin afectar de manera adversa la actividad de estas moléculas sensibles. También permite a las células y agregados de células que se incorporen satisfactoriamente en el material polimérico. Con base en este descubrimiento, se ha desarrollado una nuevo técnica de procesamiento para la preparación de biomateria-les útiles para encapsulado de células, entrega controlada de compuestos bioactivos, e implantación. La técnica emplea un enfoque de dos pasos para producir biomateriales a partir de precursores poliméricos que involucra (1) una fase de configuración con base en fenómenos físicos y (2) una fase de curado que utiliza una reacción química para estabilizar al material polimérico. En particular, el método involucra el uso secuencial de gelación térmica reversible seguido por reticulación química por reacción de grupos presentes en el material polimérico para producir un producto curado. Este método no solamente permite que los materiales poliméricos sean configurados con un tratamiento térmico de conformación, sino también hace posible ajustar la hidrofobicidad y la tasa de degradación hidrolítica de los materiales . Procesamiento y estructura de los precursores poliméricos Los materiales curados de la invención se pueden formar, por ejemplo, en encapsuladores comerciales. Para propósitos de encapsulado, las fases de configuración y de curado se llevan a cabo secuencialmente después de la formación de gotas regulares de los precursores poliméricos, con o sin material biológico disperso en ellos. Las fases de configuración y de curado se llevan a cabo en un baño apropiado donde las gotas se recolectan, de preferencia usando una diferencia de temperatura entre el baño y la solución de goteo para la fase de configuración y las reacciones pH- o foto-activadas para la fase de curado . La fase de configuración emplea un fenómeno conocido como gelación térmica. Un número de polímeros tienen una solubilidad en agua que se modifica mas allá de un cierto punto de temperatura. Estos polímeros exhiben una temperatura crítica, la cual define su solubilidad en agua. Los polímeros que tienen una temperatura de solubilidad crítica inferior (LCST) son solubles a bajas temperaturas (v.gr., temperatura ambiente) pero no son solubles por encima de una temperatura mayor, es decir, por debajo de la LCST, los polímeros son sustancialmente solubles en la cantidad seleccionada en el solvente, mientras que por encima de la LCST, soluciones de este polímero forman un sistema de fases múltiples. Este comportamiento de solubilidad inversa lleva al fenómeno de gelación térmica, con el cual una solución de polímero acuoso aumenta espontáneamente en viscosidad, generalmente transformándose en un gel semi-sólido, conforme la temperatura de la solución se incrementa por encima de la LCST del polímero. Por medio de utilizar polímeros que exhiben gelación térmica inversa, es posible configurar al material polimérico por tratamiento térmico de conformación. El material curado de la invención de preferencia se hace de polímeros que son resistentes a la absorción de proteínas, tal que se limiten reacciones inflamatorias cuando el material se implanta o de otra forma entra en contacto directo con tejidos vivos. Los precursores poliméricos deberán tener una Temperatura de Solubilidad Crítica Inferior (LCST) en agua, es decir, una gelación reversible que ocurre ante el calentamiento y se basa en la liberación de moléculas de agua estructuradas alrededor de la cadena de un polímero con hidrofilicidad limitada. Copolimeros de tri-bloques de la serie Plurónica (poli (etileno glicol-bl-propileno glicol-bl-etileno glicol) ) o copolimeros de tetra-bloques de la serie Tetrónica proporcionan estructura conveniente, debido que están disponibles comercial-mente en una variedad de composiciones, se caracterizan por LCST bien definida, pueden funcionalizarse en su extremo fácilmente, y dependiendo de la composición, muestran LCST en cualquier rango de temperaturas deseado entre 10 y 90°C. Otros esqueletos de polímero, tales como poli (N-isopropil acrilamida) (PNIPAM) y otras acrilamidas N-sustituidas, poli (metil vinil éter), poli (óxido de etileno) (PEO) de peso molecular conveniente, hidroxipropilcelulosa, poli (alcohol vinílico) , poli (etil (hidroxietil) celulosa) , y poli (2-etiloxazolína) , pueden usarse satisf ctoriamente para esta aplicación, con la introducción opcional de grupos funcionales en las cadenas laterales por vía de copolime ización (o como grupos terminales en el caso de PEO) (Esquema 1) .

Plurónico Tetrónico Hidroxipropil celulosa Esquema 1 LCST's ejemplares son entre 15 y 25°C para soluciones teniendo una concentración de precursor polimérico de <20-25% peso/peso. Este rango de temperaturas asegura que los precursores poliméricos puedan procesarse fácilmente por debajo de la LCST sin daño de congelación excesivo al material biológico disperso en ella. La concentración de polímero de <20-25% peso/peso asegura que el material curado permanezca esencialmente a base de agua, mantiene la viscosidad de la solución acuosa de precursores poliméricos baja, y reduce cualquier efecto citotóxico potencial. Los polímeros con comportamiento de LCST pueden usarse como materiales de recubrimiento. En una forma de realización de la invención, los precursores poliméricos se usan para recubrimientos de conformación de, por ejemplo, la superficie interna de tuberías. En esta forma de realización, la fase de configuración genera una capa de material polimérico a través de gelación de una solución acuosa de los precursores poliméricos en las paredes de las tuberías, las cuales se mantienen a una temperatura por encima de la LCST. Una reacción pH- o foto-activada (fase de curado) puede seguir para estabilizar al recubrimiento. Reacción de Curado Después de la fase de configuración, los materiales poliméricos son sometidos a una fase de curado para proporcionar estabilidad mecánica y química. La fase de curado incrementa la estabilidad por medio de reticular grupos reactivos presentes en los materiales poliméricos. La reacción de curado necesita proceder bajo condiciones fisiológicas, sin la generación de subproductos tóxicos u ocasionar otros efectos per udiciales en el metabolismo celular. De manera acorde, la fase de curado de la invención usa ya sea una reacción de adición de tipo Michael, en la cual un componente es un nucleofilo fuerte y la otra posee una insatura-ción conjugada, o una reacción de foto-polimerización de radical libre. Ambos tipos de reacciones han sido usados satisfactoriamente para la producción de biomateriales orgánicos en presencia de material celular (ver, v.gr., Hubbell y colaboradores, solicitud de patente US 09/496,231, solicitada el 1 de febrero de 2000; Hubbell y colaboradores, patente US 5,858,746; y Hubbell y colaboradores, patente US 5,801,033). Estas reacciones producen un material reticulado en la fase de curado a través de la reacción de grupos funcionales en los extremos del polímero o en las cadenas laterales del polímero. Como se explica posteriormente, la estructura química de los grupos de reacción depende de la técnica de polimerización particular empleada. Con estas reacciones, se puede generar una red con control preciso en la distancia entre reticulaciones, y así en las propiedades mecánicas del material curado, que dependen, principalmente, si no de forma exclusiva, del peso molecular de los precursores poliméricos . Reacciones de tipo Michael Como se discute previamente, un tipo de reacción química que puede usarse en la fase de curado es una reacción de tipo Michael, la cual involucra la reacción de adición 1,4 de un nucleófilo en un sistema insaturado conjugado (Esquema 2) .

Esquema 2 Los componentes nucleófilos de esta reacción son conocidos como donadores Michael y los componentes electrófilos son referidos como aceptantes Michael. Un sistema de reacción química adecuado utilizando una reacción de tipo Michael se describe, por ejemplo, en la solicitud de patente US 09/496,231, la solicitud de patente US 09/586,937, solicitada el 2 de junio de 2000, y la solicitud de patente US 10/047,404, solicitada el 19 de octubre de 2001. La ventaja de este sistema de reacción es que permite la producción de biomateriales reticulados en presencia de materiales biológicos sensibles, tales como medicamentos (incluyendo proteínas y ácidos nucleicos) , células, y agregados de célula. La adición de tipo Michael de grupos insaturados puede tomar lugar en buenas producciones cuantitativas a temperatura ambiente o corporal y bajo condiciones suaves con una amplia variedad de donadores Michael (ver, por ejemplo, la solicitud de patente US 09/496,231, la solicitud de patente US 09/586,937, y la solicitud de patente US 10/047,404). Mas aun, esta reacción puede fácilmente llevarse a cabo en un ambiente acuoso, v.gr., in vivo. Los aceptantes Michael, tales como vinil sulfonas o acrilamidas, pueden usarse para enlazar PEG o polisacáridos a proteínas a través de reacciones de tipo Michael con grupos amino- o mercapto-; acrilatos y muchos otros grupos insaturados pueden hacerse reaccionar con tioles para producir materiales reticulados para una variedad de aplicaciones biológicas. La reacción de tioles a pH fisiológico con grupos aceptantes Michael muestra interferencia despreciable por nucleófilos (principalmente aminas) presentes en muestras biológicas. Una de las características importantes de la reacción de adición de tipo Michael como se emplea en los presentes métodos es su selectividad, es decir, carece de reactividad lateral sustancial con grupos químicos encontrados extra-celularmente en proteínas, células, y otros componentes biológicos. Foto-polimerización de Radicales Libres La foto-polimerización es otro tipo de reacción que puede usarse para la fase de curado. Como se muestra en la figura 1, esta reacción involucra la polimerización de radicales libres de monómeros insaturados en presencia de un sensibilizador y un iniciador, o una molécula sencilla actuando como tanto un sensibilizador e iniciador, bajo la acción de o luz visible. La foto-polimerización de radicales libres de monómeros conté-niendo mas de un grupo de reacción, tales como acrilatos o acrilamidas, produce materiales reticulados que tienen un contenido despreciables de sustancias lixiviables . Debido a su alta velocidad (se completa en 2-3 minutos) , esta reacción puede emplearse satisfactoriamente en la síntesis de biomateriales (ver, por ejemplo, Pathak y colaboradores, Journal of the American Chemical Society 114:8311-8312 (1992); Mathur y colaboradores, Journal of Macromolecular Science-Reviews in Macromolecular Chemistry and Physics, C36: 405-430 (1996); Moghaddam y colaboradores, Journal of Polymer Science: Part A: Polymer Chemistry 31:1589-1597 (1993); y Zhoa y colaboradores, Polymer Preprints 38:526-527 (1997)). La selectividad de las reacciones que puede lograrse con las reacciones de foto-polimerización de radicales libres puede ser menor que la obtenida con las reacciones de adición de tipo Michael, descritas anteriormente . El sensibilizador puede ser cualquier colorante que absorbe luz teniendo una frecuencia entre 320 y 900 nm, es capaz de formar radicales libres, es al menos parcialmente soluble en agua, y no es tóxico con el material biológico a la concentración usada para polimerización. Existe un gran número de sensibilizadores adecuados para aplicaciones que involucran contacto con material biológico. Ejemplos de sensibilizadores incluyen colorantes tales como etil eosina, eosina Y, fluoresceína, 2,2-dimetioxi-2-fenil acetofenona, 2-metoxi-2-fenilacetofenona, canforquinona, rosa de bengala, azul de metileno, eritrosina, floxima, tionina, riboflavina, verde de metileno, naranja de acridina, colorante de xantina, y colorantes de tioxantina. Los colorantes descoloran después de la iluminación y reacción con aminas hacia un producto incoloro, permitiendo penetración de haces adicional hacia el sistema de reacción. Iniciadores adecuados incluyen, pero no se limitan a, compuestos a base de nitrógeno capaces de estimular la reacción de radicales libres, tal como trietanolamina, trietilamina, etanolamina, N-metil dietanolamina, N, N-dimetil bencilamina, dibencil amina, N-bencil etanolamina, N-isopropil bencilamina, tetrametil etielnodiamina, persulfato de potasio, tetrametil etilenodiamina, lisina, ornitina, histidina, y arginina. Ejemplos del sistema de colorante/foto-iniciador incluyen, pero no se limitan a, etil eosina con una amina, eosina Y con una amina, 2 , 2-dimetoxi-2-fenoxiacetofenona, 2-metoxi-2-fenoxiacetofenona, canforquinona con una amina, y rosa de bengala con una amina . En algunos casos, el colorante, tal como 2, 2-dimetoxi-2-fenilacetofenona, puede absorber luz e iniciar polimerización, sin cualquier iniciador adicional tal como la amina. En estos casos, solamente el colorante y los componentes precursores necesitan estar presentes para iniciar la polimerización ante la exposición de la longitud de onda apropiada de la luz. La generación de radicales libres se termina cuando la fuente de luz se remueve. La luz para foto-polimerización puede proporcionarse por cualquier fuente apropiada capaz de generar la radiación deseada, tal como una lámpara de mercurio, lámpara de UV de onda larga, láser He-Ne, o un láser de iones de argón. Fibras ópticas pueden usarse para entregar luz al precursor. Longitudes de onda apropiadas son, por ejemplo, dentro del rango de 320-800 nm, tal como alrededor de 365 o 514 nm. Sistemas adecuados para foto-polimerización de radicales libres son bien conocidos en la materia y se describen en, por ejemplo, la patente US 5, 858,746 y la patente US 5, 801, 033. Estructura de los grupos reactivos Los grupos electrófilos reactivos para la adición de tipo Michael son típicamente dobles enlaces conjugados con grupos que retiran electrones, tales como funcionalidades carbonilo, carboxilo y sulfona: En las estructuras anteriores, R representa un precursor de polímero y los dobles enlaces pueden opcionalmente sustituirse y/o tener una estructura de anillo. Los sustituyentes en los dobles enlaces pueden variar la tasa de reacción por mas de un orden de magnitud, v.gr., acrilato de poli(etileno glicol) reacciona cerca de diez veces mas rápido que el metacrilato análogo y unas cien veces mas rápido que el 2 , 2-dimetacrilato análogo. Ejemplos de grupos aceptantes Michael adecuados incluyen, pero no se limitan a, acrilatos, acrilamidas, quinonas, maleimidas, vinil sulfonas, y vinil piridinios (v.gr., 2- o 4-vinil piridinio) . Tioles o grupos conteniendo tioles son nucleófilos ejemplares para reacciones de adición de tipo Michael. Su reactividad durante la reacción de tipo Michael depende de los pKa del tiol. A pH fisiológico, existe una diferencia de hasta un orden de magnitud en la tasa de reacción de un péptido que contiene tioles con grupos acrilico si se rodea por dos cargas positivas o por dos cargas negativas. La incorporación de péptidos o material proteinico se vislumbra principalmente para obtener un material proteoliticamente degradable o para procesos de reconocimiento especifico dentro de ellos (ver, v.gr., la solicitud de patente US 10/047,404) . Las reacciones involucrando tioles que contienen grupos éster múltiples se vislumbran principalmente para obtener un material hidroliticamente degradable . Los grupos reactivos para foto-polimerización de radicales libres pueden ser, por ejemplo, esteres y amidas acrilicos y metacrilicos, o derivados estirénicos. Otros grupos reactivos adecuados, v.gr., grupos etilénicamente insaturados, pueden emplearse para foto-polimerización.

Preparación de los precursores poliméricos Los precursores poliméricos utilizados en esta invención pueden prepararse por reacción directa de polímeros funcionales. Los polímeros plurónicos terminados con grupos OH pueden convertirse a acrilatos por reacción con cloruro de acroloilo y proporcionar un precursor polimérico teniendo un aceptante Michael y propiedades termo-sensibles (ver Ejemplo 2(a) y Esquema 3) . Estos polímeros pueden además funcionalizarse por reacción de tipo Michael con un exceso de tiol multi-funcional, proporcionando precursores poliméricos con donador Michael y propiedades termo-sensibles (ver Ejemplo 2 (b) y Esquema 3) . Los plurónicos acrilados pueden también usarse en polimerización de radicales libres.

Derivado HT Esquema 3 Otros precursores poliméricos pueden prepararse siguiendo el mismo esquema que los polímeros termo-sensibles caracterizados por la presencia de grupos funcionales como grupos terminales o en las cadenas laterales, tales como copolímeros aleatorios o de bloques de N-isopropilacrilamida y N-hidroxipro-pilacrilamida obtenidos por polimerización de radicales convencional o controlada. Un precursor polimérico de aceptante Michael puede obtenerse por reacción de este polímero con cloruro de acriloilo (Esquema 4) . Un precursor polimérico de donador Michael multi-funcional puede obtenerse por reacción del polímero acrilado con un exceso de un di- o multi-tiol, v.gr., análogo a la segunda reacción del Esquema 3.

Esquema 4 Usos Terapéuticos Dado que los biomateriales de la presente invención pueden formarse en condiciones relativamente suaves con respecto a sistema de solvente, temperatura, exotermicidad, y pH, y los precursores y productos son sustancialmente no tóxicos, estos materiales son adecuados para contacto con materiales biológicos sensibles, incluyendo células o tejidos, y pueden usarse para implantación u otro contacto con el cuerpo. La reticulación por vía de la reacción de adición de tipo Michael tiene el potencial de ser auto-selectiva, dando reacciones laterales insignificantes con moléculas biológicas, incluyendo la mayoría de los medicamentos macro-moleculares y de moléculas pequeñas, asi como las moléculas en las superficies de las células a ser encapsuladas .

Los geles producidos de acuerdo con el método de la invención tienen innumerables aplicaciones biomédicas. Estas aplicaciones incluyen pero no se limitan a dispositivos de entrega de medicamentos, materiales para encapsulado y transplante de células, aplicaciones de barrera (preventivos de adhesión, selladores) , ingeniería de tejidos y estructuras de soporte de sanado de heridas, materiales para aumento quirúrgico de tejidos, y materiales para selladores y adhesivos . En una forma de realización, los geles se usan en sistemas biológicos o de entrega de medicamentos, v.gr., para entrega de una molécula bioactiva. Una molécula bioactiva puede ser cualquier molécula biológicamente activa, por ejemplo, un producto natural, un medicamento sintético, proteina (tal como factores de crecimiento o enzimas), o material genético. El vehículo debe conservar las propiedades funcionales de tal una molécula bioactiva. La molécula bioactiva puede liberarse por mecanismos de difusión o por degradación del vehículo de gel a través de una variedad de mecanismos (tales como por hidrólisis o degradación enzimática) o por otros mecanismo de sensibilidad (por ejemplo, hinchazón inducida por pH) . Dado que muchas moléculas bioactivas contienen grupos reactivos, es importante que el material que sirve como el vehículo no reaccione con las moléculas bioactivas en una manera no deseable; como tal, la alta auto-selectividad de reacciones entre insaturaciones conjugadas y tioles es muy útil en el encapsulado de medicamentos. Con respecto al encapsulado de moléculas hidrófobas, v.gr, medicamentos hidrófobos, los dominios hidrófobos creados en el material de gel como resultado de la presencia de partes hidrófobas en los copolimeros que llevan a la gelación térmica pueden ser útiles como nano- y micro-dominios hidrófobos para servir como sitios para partición fisicoquímica del medicamento para llevar a una liberación mas sostenida. Los biomateriales de la invención también tienen aplicaciones biomédicas como dispositivos de encapsulado y transplante. Tales dispositivos sirven para aislar células (v.gr., alo-injerto o xeno-inj erto) de un sistema de defensa de huésped (inmunoprotección) mientras permite transporte selectivo de moléculas tales como oxígeno, dióxido de carbono, glucosa, hormonas, e insulina y otros factores de crecimiento, con ello permitiendo que células encapsuladas retengan sus funciones normales y para proporcionar beneficios deseados, tal como la liberación de una proteína terapéutica que puede difundirse a través de la membrana de hidrogel de inmunoprotección al recipiente . Debido a la bio-compatibilidad de los biomateriales y las técnicas involucradas, en parte debido a la auto-selectividad de las químicas de reticulación, una variedad amplia de sustancias biológicamente activas y otros materiales pueden encapsular-se o incorporarse, incluyendo, pero no limitados a, proteínas, péptidos, polisacáridos , medicamentos orgánicos e inorgánicos, ácidos nucleicos, azúcares, células, y tejidos. Ejemplos de células, que pueden encapsularse, son cultivos primarios asi como lineas de células establecidas, incluyendo células transformadas. Estas incluyen, pero no se limitan a,- células de islotes pancreáticos, fibroblastomas de piel humana, células de ovario de hámster chino, insulomas de células beta, células de leucemia linfoblásticas, fibroblastomas 3T3 de ratón, células de mesencéfalo ventral que secretan dopamina, células de neuroblastoide, células de médula adrenal, y células T. Como puede observarse a partir de esta lista parcial, células de todos los tipos, incluyendo células dérmicas, neurológicas, de sangre, de órganos, de músculos, glandulares, reproductivas, y del sistema inmunológico pueden encapsularse satisfactoriamente por este método. Adicionalmente, proteínas (tales como hemoglobina) , polisacáridos, oligonucleótidos, enzimas (tales como desaminasa de adenosina) , sistemas de enzima, bacterias, microbios, vitaminas, co-factores, factores de coagulación de sangre, medicamentos (tales como TPA, estreptoqui-nasa o heparina) , antígenos para inmunización, hormonas, y retro-virus para terapia de genes pueden encapsularse por estas técnicas . Biomateriales para uso como estructuras de soporte son deseables para ingeniería de tejidos y aplicaciones de sanado de heridas: regeneración de nervios, angiogénesis, y reparación y regeneración de piel, hueso y cartílago. Tales estructuras de soporte pueden introducirse al cuerpo pre-sembrados con células o pueden depender de la infiltración de células desde fuera del material en los tejidos cercanos al biomaterial implantado. Tales estructuras de soporte pueden contener (a través de enlaces covalentes o no covalentes) moléculas interactivas de células como péptidos de adhesión y factores de crecimiento. Los biomateriales de la invención también pueden usarse como materiales para recubrir células, tejidos, micro-cápsulas, dispositivos y otros implantes. La forma de tal implante puede igualar la topografía del tejido, y un implante relativamente grande puede entregarse a través de métodos mínimamente invasores . La presente invención se ilustra por los siguientes ejemplos que describen los métodos y composiciones de la invención. Los ejemplos se proporcionan para el propósito de ilustrar la invención, y de ninguna manera pretenden limitar la invención. Ejemplo 1. Gelación Térmica de Copolímeros de Bloques Plurónicos 0.5 g de F127 plurónico sólido se dispersaron en 2 g de agua destilada y la mezcla se dejó en un baño de hielo (0°C) por 2 horas hasta su disolución completa. 50 µ? de solución de polímero fría (20% peso/peso) se transfirieron a un reómetro de placas paralelo y se sobrepusieron cuidadosamente con un aceite de silicio de baja viscosidad para minimizar la evaporación de agua. El reómetro se usó en modo oscilatorio, donde la placa exterior lleva a cabo oscilación sinoidal a la frecuencia dada (0.5 Hz) y esfuerzo dado (20 Pa) , de acuerdo con la región viscoelástica lineal del material. La temperatura se varió de 10 a 40°C en incrementos de 1°C con 4 minutos de tiempo de equilibrio en cada paso. Los módulos elástico y viscoso se incrementaron con la temperatura a diferentes tasas; el punto de gelación (registrado como el cruce de las lineas de módulo elástico y viscoso) se registró en 19°C (figura 2) . Ejemplo 2. Preparación de Derivados Plurónicos Reactivos (a) Preparación de Diacrilato de F-127 Plurónico (F127DA) . 25 g de ¡T127 plurónico se disolvieron en 250 mi de tolueno y se secaron con tamices moleculares bajo reflujo en un aparato Soxhlet por 3 horas. Después de enfriar a 0°C, 50 mi de diclorometano y 1.66 mi de trietilamina (12 mmol) se añadieron bajo argón. 0.64 ral de cloruro de acriloilo (7.9 mmol) se gotearon en la mezcla de reacción, y la solución se dejó por 6 horas bajo agitación. La mezcla entonces se filtró, se concentró en el evaporador rotatorio, se diluyó con diclorometano y se extrajo con agua dos veces. La solución de diclorometano se secó con sulfato de sodio y después se precipitó en n-hexano. (b) Preparación de Hexatiol F-127 Plurónico (F127HT) . 4 g de F127DA (diacrilato de F-127 plurónico) y 1.55 g (relación molar de tiol/acrilato ~10:1) de pentaeritritol tetrakis (3-mercaptopropionato) (QT) se disolvieron en 50 ral de l-metil-3-pirrolidona (???) . Gotas de NaOH 0.1 M se añadieron hasta que el pH de la solución se incrementó a 9. La mezcla de reacción, previamente desgasificada por burbujeo de argón, se dejó bajo atmósfera de argón y se agitó por la noche a temperatura ambiente. La solución después se concentró en el evaporador rotatorio usando una bomba de alto vacio (p = 0.3 miares) , se diluyó en diclorometano, y se extrajo con agua destilada dos veces. La solución de diclorometano se secó con sulfato de sodio y después se precipitó en dietil éter frió. El polímero seco se re-disolvió en 25 mi de NMP añadiendo 40 mg de 1, 4-ditio-DL-trieitol (DTT) . La solución se agitó bajo argón por 15 minutos y después se precipitó en dietil éter frío. 3.8 g de material incoloro se recuperaron. Ejemplo 3. Curado sin Gelación Térmica de Derivados Plurónicos Reactivos 0.185 g de F127DA sólido y 0.065 g de F127HT sólido se dispersaron en 2 g de PBS pH=7.4, y la mezcla se dejó en un baño de hielo (0°C) por 2 horas hasta disolución completa. La solución de polímero fría (11% peso/peso) se transfirió al reómetro, previamente enfriada a 5°C. La temperatura entonces se incrementó rápidamente hasta 37°C, y la prueba de oscilación se inició (frecuencia 0.5 Hz, esfuerzo 20 Pa) manteniendo la temperatura a 37 °C. El punto de gelación (registrado como el cruce de las líneas de módulo elástico y viscoso) se registraron después de 260 seg, mientras que el módulo elástico alcanzó un tope (correspondiendo a un valor de 10-12 kPa) después de unas cuantas horas (figura 3) . Ejemplo 4. Curado con Gelación Térmica de Derivados Plurónicos Reactivos 0.37 g de F127DA sólido y 0.13 g de F127HT sólido se dispersaron en 2 g de PBS pH=7.4, y la mezcla se dejó en un baño de hielo (0°C) por 2 horas hasta disolución completa. La solución de polímero fría (20% peso/peso) se transfirió al reómetro, previamente enfriada a 5°C. La temperatura entonces se incrementó rápidamente hasta 37 °C, y la prueba de oscilación se inició (frecuencia 0.5 Hz, esfuerzo 20 Pa) manteniendo la temperatura en 37 °C. Al comienzo de la medición, el módulo elástico fue mayor que el módulo viscoso, indicando que la gelación térmica ya había ocurrido; la reacción de curado ocasionó un aumento en el módulo elástico, alcanzando un tope de 40-50 kPa después de 10 horas (figura 4) . Ejemplo 5. Formación de Cuentas 0.37 g de F127DA sólido y 0.13 g de F127HT sólido se dispersaron en 2 g de PBS lOmM pH=7.4, y la mezcla se dejó en un baño de hielo (0°C) por 2 horas bajo agitación. La solución de polímero fría (20% peso/peso, pH ~7) se transfirió a una jeringa (aguja 25G1) y se goteó en una solución de baño (MEM + Suero de Bovino Fetal 10% de Dulbecco) a 37°C. Las gotas se solidificaron instantáneamente en el baño (gelación térmica) y la fase de curado se completó después de 12 horas mantenida en la incubadora a 37 °C. Las cuentas tuvieron un diámetro promedio de 3 m. Este procedimiento puede lograrse en encapsuladores comerciales para obtener cuentas sub-mm, cuyo diámetro puede regularse con la ayuda de una boquilla de vibración. La gelación puede llevarse a cabo en presencia de materiales biológicos, tales como células, enzimas, y medicamentos. El material biológico puede dispersarse en la solución de precursor polimérico. Alternativamente, la solución de gelación puede también extrudirse a través del espacio exterior de una construcción de boquilla doble, donde un material biológico es extrudido en una solución no de gelación a través de la interna; en esta manera, cápsulas se generan donde el material biológico se contiene en una cavidad interna no gelada de agua y se rodean por una membrana esférica. Ejemplo 6. Formación de Tubería 0.37 g de F127DA sólido y 0.13 g de F127HT sólido se dispersaron en 2 g de PBS 10 mM pH=7.4, y la mezcla se dejó en un baño de hielo (0°C) por 2 horas bajo agitación. La solución de polímero frío (20% peso/peso, pH ~7) se transfirió hacia un molde hecho de un cilindro equipado con una pistola interna (v.gr., una jeringa detenida), mantenida a 37°C. El gel se formó de manera instantánea y podría recuperarse inmediatamente; la fase de curado se completa después de incubar a 37 °C por 12 horas. Tubos pueden producirse también a través de un extrusor de boquilla doble, donde un fluido mas cálido (agua, aire) fluye a través del espacio interno; la solución térmicamente es gelada cuando entra en contacto directo con el fluido mas cálido y produce una construcción de cilindro hueco. El fluido mas cálido puede contener materiales biológicamente activos y con ello permitir el encapsulado de células, enzimas o medicamentos en una construcción no esférica. Otras Formas de Realización Aunque la presente invención ha sido descrita con referencia a formas de realización preferidas, un técnico en la materia puede fácilmente indagar sus características esenciales y, sin salir de su espíritu y su alcance, puede hacer varios cambios y modificaciones de la invención para adaptarla a varios usos y condiciones. Los técnicos en la materia reconocerán o serán capaces de indagar usando no mas que experimentación rutinaria, muchos equivalentes de las formas de realización específicas de la invención descritas en la presente. Tales equivalentes se pretende que estén comprendidos en el alcance de la presente invención. Todas las publicaciones patentes, y solicitudes de patente, mencionadas en esta especificación son incorporadas en la presente por referencia.

Claims (32)

1. REIVINDICACIONES 1. Un método para preparar un biomaterial, dicho método comprendiendo los pasos de: (a) proporcionar un precursor polimérico comprendiendo grupos reactivos, donde dicho precursor polimérico es sometido a gelación térmica en solución acuosa; (b) configurar dicho precursor polimérico por medio de inducir térmicamente gelación de una solución acuosa de dicho precursor polimérico; y (c) curar dicho precursor polimérico por medio de reticular dichos grupos reactivos para producir dicho biomate-rial .
2. 2. El método de la reivindicación 1, donde el precursor polimérico es un poliéter o un copolimero de bloques, donde en por lo menos uno de los bloques es un poliéter, poli (N-alquil acrilamida) , hidroxipropilcelulosa, poli (alcohol vinili-co), poli (etil (hidroxietil) celulosa) , polioxoazolina, o uno de sus derivados conteniendo grupos reactivos en cadenas laterales o como grupos terminales .
3. 3. El método de la reivindicación 1, donde dicho paso de curado (b) comprende reticular dicho precursor polimérico usando una reacción de adición de tipo Michael.
4. 4. El método de la reivindicación 3, donde dicha reacción de tipo Michael se caracteriza por la adición nucleófila de un tiol y un aceptante Michael seleccionado a partir del grupo que consiste de acrilatos, acrilamidas, quinonas, raaleimidas, vinil sulfonas, o vinil piridinios.
5. 5. El método de la reivindicación 1, donde dicho paso de curado (b) comprende reticular dicho precursor polimérico usando una reacción de foto-polimerización de radicales.
6. 6. El método de la reivindicación 5, donde dicha reacción de foto-polimerización ocurre en presencia de un sensibilizador y un iniciador.
7. 7. El método de la reivindicación 6, donde dicho sensibilizador se selecciona a partir del grupo que consiste de etil eosina, eosina Y, fluoresceina, 2 , 2- dimetoxi -2 fenil acetofenona, 2-metoxi-2-fenilacetofenona, canforquinona, rosa de bengala, azul de metileno, eritrosina, floxima, tionina, riboflavina, verde de metileno, naranja de acridina, colorante de xantina, y colorantes de tioxantina.
8. 8. El método de la reivindicación 6, donde dicho iniciador se selecciona a partir del grupo que consiste de trietanolamina, trietilamina, etanolamina, N-metil dietanolamina, N, N-dimetil bencilamina, dibencil amina, N-bencil etanolamina, N-isopropil bencilamina, tetrametil etilenodiamina, persulfato de potasio, tetrametil etilenodiamina, lisina, ornitina, histidina, y arginina.
9. 9. Un gel biocompatible preparado por el método de: (a) proporcionar un precursor polimérico comprendiendo grupos reactivos, donde dicho precursor polimérico es sometido a gelación térmica en solución acuosa; (b) configurar dicho precursor polimérico por medio de inducir térmicamente gelación de una solución acuosa de dicho precursor polimérico; y (c) curar dicho precursor polimérico por medio de reticular dichos grupos reactivos usando una reacción de adición de tipo Michael para producir dicho biomaterial.
10. 10. El gel de la reivindicación 9, donde dicho paso de configurar (b) produce cápsulas o cuentas.
11. 11. El gel de la reivindicación 9, donde dicho paso de configurar (b) produce tubos, fibras huecas, o fibras sólidas.
12. 12. El gel de la reivindicación 9, comprendiendo además una molécula bioactiva o una célula.
13. 13. El gel de la reivindicación 12, donde dicha molécula bioactiva se selecciona a partir del grupo que consiste de proteínas, moléculas que ocurren naturalmente o sintéticas, partículas virales, azúcares, polisacáridos, medicamentos orgánicos o inorgánicos, y moléculas de ácido nucleico.
14. 14. El gel de la reivindicación 12, donde dicha célula se selecciona a partir del grupo que consiste de células de islote pancreático, fibroblastomas de piel humana, células de ovario de hámster chino, insulomas de células beta, células de leucemia linfoblástica, fibroblastomas 3T3 de ratón, células de mesencéfalo ventral que secretan dopamina, células de neuroblas-toide, células de médula adrenal, y células T.
15. 15. Un vehículo de entrega de medicamentos comprendiendo : (a) un gel producido por el método de: (i) proporcionar un precursor polimérico comprendiendo grupos reactivos, donde dicho precursor polimérico es sometido a gelación térmica en solución acuosa; (ii) configurar dicho precursor polimérico por medio de inducir térmicamente gelación de una solución acuosa de dicho precursor polimérico; y (iii) curar dicho precursor polimérico por medio de reticular dichos grupos reactivos usando una reacción de adición de tipo Michael para producir dicho biomaterial; y (b) una sustancia terapéutica.
16. 16. El vehículo de entrega de la reivindicación 15, donde dicha sustancia terapéutica se selecciona a partir del grupo que consiste de moléculas orgánicas sintetizadas, moléculas orgánicas que ocurren naturalmente, ácidos nucleicos, péptidos biosintéticos, péptidos que ocurren naturalmente, y péptidos modificados .
17. 17. Un método para entregar una sustancia terapéutica a una célula, tejido, órgano, sistema de órganos, o cuerpo de un animal, dicho método comprendiendo los pasos de: (a) proporcionar un vehículo de entrega de medicamento comprendiendo una sustancia terapéutica y un gel producido por el método de : (i) proporcionar un precursor polimérico comprendiendo grupos reactivos, donde dicho precursor polimérico es sometido a gelación térmica en solución acuosa; (ii) configurar dicho precursor polimérico por medio de inducir térmicamente gelación de una solución acuosa de dicho precursor polimérico; y (iii) curar dicho precursor polimérico por medio de reticular dichos grupos reactivos usando una reacción de adición de tipo Michael para producir dicho biomaterial; y (b) poner en contacto dicha célula, tejido, órgano, sistema de órganos o cuerpo con dicho sistema de entrega de medicamentos .
18. 18. El método de la reivindicación 17, donde dicha sustancia terapéutica se selecciona a partir del grupo que consiste de proteínas, moléculas orgánicas que ocurren naturalmente o sintéticas, partículas virales, y moléculas de ácido nucleico .
19. 19. El método de la reivindicación 17, donde dicha sustancia terapéutica es un pro-fármaco.
20. 20. El método de la reivindicación 17, donde dicha molécula de ácido nucleico es una molécula de ácido nucleico anti-sentido .
21. 21. Un gel biocompatible preparado por el método de: (a) proporcionar un precursor polimérico comprendiendo grupos reactivos, donde dicho precursor polimérico es sometido a gelación térmica en solución acuosa; (b) configurar dicho precursor polimérico por medio de inducir térmicamente gelación de una solución acuosa de dicho precursor polimérico; y (c) curar dicho precursor polimérico por medio de reticular dichos grupos reactivos usando una reacción de foto-polimerización de radicales para producir dicho biomaterial.
22. 22. El gel de la reivindicación 21, donde dicho paso de configurar (b) produce cápsulas o cuentas.
23. 23. El gel de la reivindicación 21, donde dicho paso de configurar (b) produce tubos, fibras huecas, o fibras sólidas.
24. 24. El gel de la reivindicación 21, comprendiendo además una molécula bioactiva o una célula.
25. 25. El gel de la reivindicación 24, donde dicha molécula bioactiva se selecciona a partir del grupo que consiste de proteínas, moléculas que ocurren naturalmente o sintéticas, partículas virales, azúcares, polisacáridos, medicamentos orgánicos o inorgánicos, y moléculas de ácido nucleico.
26. 26. El gel de la reivindicación 24, donde dicha célula se selecciona a partir del grupo que consiste de células de islote pancreático, fibroblastomas de piel humana, células de ovario de hámster chino, insulomas de células beta, células de leucemia linfoblástica, fibroblastomas 3T3 de ratón, células de mesencéfalo ventral que secretan dopamina, células de neuroblas-toide, células de médula adrenal, y células T.
27. 27. Un vehículo de entrega de medicamentos comprendiendo : (a) un gel producido por el método de: (i) proporcionar un precursor polimérico comprendiendo grupos reactivos, donde dicho precursor polimérico es sometido a gelación térmica en solución acuosa; (ii) configurar dicho precursor polimérico por medio de inducir térmicamente gelación de una solución acuosa de dicho precursor polimérico; y (iii) curar dicho precursor polimérico por medio de reticular dichos grupos reactivos usando una reacción de foto-polimerización de radicales para producir dicho biomaterial; y (b) una sustancia terapéutica.
28. 28. El vehículo de entrega de la reivindicación 27, donde la sustancia terapéutica se selecciona a partir del grupo que consiste de moléculas orgánicas sintetizadas, moléculas orgánicas que ocurren naturalmente, ácidos nucleicos, péptidos biosintéticos, péptidos que ocurren naturalmente, y péptidos modificados .
29. 29. Un método para entregar una sustancia terapéutica a una célula, tejido, órgano, sistema de órganos, o cuerpo de un animal, dicho método comprendiendo los pasos de: (a) proporcionar un vehículo de entrega de medicamento comprendiendo una sustancia terapéutica y un gel producido por el método de : (i) proporcionar un precursor polimérico comprendiendo grupos reactivos, donde dicho precursor polimérico es sometido a gelación térmica en solución acuosa; (ii) configurar dicho precursor polimérico por medio de inducir térmicamente gelación de una solución acuosa de dicho precursor polimérico; y (iii) curar dicho precursor polimérico por medio de reticular dichos grupos reactivos usando una reacción de foto-polimerización de radicales para producir dicho biomaterial; y (b) poner en contacto dicha célula, tejido, órgano, sistema de órganos o cuerpo con dicho sistema de entrega de medicamentos .
30. 30. El método de la reivindicación 29, donde dicha sustancia terapéutica se selecciona a partir del grupo que consiste de proteínas, moléculas orgánicas que ocurren naturalmente o sintéticas, partículas virales, y moléculas de ácido nucleico .
31. 31. El método de la reivindicación 29, donde dicha sustancia terapéutica es un pro-fármaco.
32. 32. El método de la reivindicación 30, donde dicha molécula de ácido nucleico es una molécula de ácido nucleico anti-sentido .