MXPA02003067A - Uso de combinacion de ester sorbitano de polioxietileno y octoxinol como adjuvante y su uso en vacunas. - Google Patents

Abstract

La presente invencion se refiere a un sistema adjuvante novedoso, que comprende un tensioactivo de ester sorbitano de polioxietileno en combinacion con octoxinol y vacunas que comprenden el sistema adjuvante junto con un antigeno. Adicionalmente se proporcionan metodos para fabricar los adjuvantes y vacunas, y el uso de los adjuvantes y vacunas en la profilaxis o terapia de una enfermedad.

Description

USO DE COMBINACIÓN DE ESTER SORBITANO DE POLIOXIETILENO Y OCTOXINOL COMO ADJUVANTE Y SU USO EN VACUNAS Campo del Invento La presente invención se refiere a un sistema adjuvante novedoso que comprende un tensioactivo de éster sorbitano de polioxietileno en combinación con un octoxinol. La presente invención proporciona los adjuvantes novedosos, las vacunas que los contienen y métodos para su fabricación y para su formulación en vacunas. También se proporciona el uso de los adjuvantes o vacunas de la presente invención en la profilaxis o terapia de una la enfermedad. Los adjuvantes son particularmente útiles como adjuvantes de mucosa, aunque también son efectivos en forma sistémica. Los adjuvantes son especialmente útiles dentro del contexto de las vacunas de influenza. Además de eliminar el requerimiento de inyecciones dolorosas y el efecto negativo asociado con respecto al cumplimiento por parte del paciente debido al "miedo de la aguja", la vacunación mucosa es atractiva ya que sea ha demostrado en animales que la administración mucosa de antígenos tiene una mayor eficacia de inducir respuestas protectoras en superficies mucosas, las cuales son la ruta de entrada de muchos patógenos. Además, se ha sugerido que la vacunación mucosa, tal como vacunación intranasal, puede inducir la inmunidad mucosa no únicamente en la mucosa nasal, si no también en sitios de mucosa distantes tales como la mucosa genital (Mestecky, 1987, Revista de Inmunología Clínica, 7, 265-276; McGhee y Kiyono, Agentes Infecciosos y enfermedad 1993, 2, ? 55-73). Además de la mucha investigación en el campo, los adyuvantes de mucosa seguros y efectivos que son adecuados para uso en humanos, permanecen para ser identificados. La presente invención proporciona una solución a éste problema. 5 Se han descrito los usos médicos de ciertos tensioactivos no iónicos. Por ejemplo, se ha descrito la administración intranasal de éteres y esteres de polioxietileno para aumentar la captación de insulina en la cavidad nasal (Hirai y asociados, 1981, Revista internacional de Farmacéuticas, 9, 165-172; Hirai y asociados, 1981, Revista Internacional de Farmacéuticas, 9, 173-184). Se han utilizado otros tensioactivos no iónicos en formulaciones de vacunas. Por ejemplo, las preparaciones de vacunas que comprenden una mezcla con adiciones ya sea de aceite de castor de polioxietileno o glicéridos de ácido caprílicos/cápricos, con monoésteres de sorbitano de polioxietileno, y un antígeno, tienen la capacidad de inducir respuestas inmunes sistémicas después de la administración tópica a una membrana mucosa (WO 94/17827). Ésta solicitud de patente describe la combinación del tensioactivo no iónico TWEEN20™ (monoéster sorbitano de polioxíetileno) y lmwitor742™ (glicéridos de ácido caprílico/cáprico), o una combinación de TWEEN20™ y aceite de castor de polioxietileno, tienen la capacidad de aumentar la respuesta inmune sistémica después de la inmunización intranasal. También se han descrito en la literatura (Gizurarson y asociados, 1996, Investigación de Vacunas, 5, 69-75; Aggerbeck y asociados, 1997, Vacuna, 15, 307-316; Tebbey y asociados, Inmunología Viral, 1999; 12(1 ):41-5), detalles del efecto de ésta ^^M ^&j £& i » , „ formulación en el aumento de la respuesta inmune hacia antígenos administrados en forma intranasal. En los ejemplos mostrados en el documento WO94/1782, (en particular del ejemplo 4) es muy alta (36%) la concentración de TWEEN 20™ que se requiere para aumentar la respuesta inmune, mientras que el 28% incluso en la presencia de un glicérido de ácido caprílico-cáprico no aumenta el surgimiento de la respuesta inmune. Los tensioactivos no iónicos también han sido formulados de tal manera que forman vesículas de tensioactivos no iónicos (comúnmente conocidas como NISV, Patente Norteamericana No. 5, 679, 355). Tales formulaciones de tensioactivos no iónicos, con frecuencia en la presencia de colesterol, forman vesículas de bicapas de lípídos que atrapan el antígeno dentro de la fase acuosa interna o dentro de la propia bicapa. Los documentos WO 96/36352 y US 5, 653, 987), describeN un agente farmacéutico líquido que comprende al menos dos aumentadores de absorción y agua, principalmente para la administración oral de insulina en donde la cantidad de cada agente que aumenta la absorción está presente en una concentración de desde 1 hasta 10% p/p de la formulación total. Los tensioactivos comúnmente se utilizan en la formulación de adyuvantes de emulsión de aceite para administración sistémica, y funcionan para estabilizar las gotas de aceite. Por ejemplo, los esteres de sorbitan de polioxietileno (TWEEN™) y los esteres de ácido graso de sorbitan (SPAN™), se utilizan para estabilizar el aceite en emulsiones de agua (EP 0399843 B, WO 95/17210).

En el pasado se han preparado vacunas del virus influenza mediante el uso de Tritón X-100 o una mezcla de TWEEN y éter con el virus de influenza fragmentado. Una comparación clínica de la inmunogenicidad sistémica de las dos divisiones, muestra que son comparables (Gross y asociados 1981, J. Clin Microbiol 14,534-8). Se han investigado otros tensioactivos con respecto a su efecto en la inmunogenicidad de la vacuna fragmentado resultante. En un estudio comparativo de administración parenteral, Mukhlis y asociados (1984 Vacuna 2, 199-203) mostró que todo el virus fue más inmunogénico que el virus interrumpido por detergente, aunque tal diferencia entre los detergentes diferentes Tritón X-100 y el bromo de amonio trimetílo de cetilo (CTAB) produjeron divisiones inmunogénicas marginalmente superiores a las del empígeno de detergente. La presente solicitud descubrió de manera sorprendente que los esteres sorbitan de polioxietileno, en combinación con un octoxinol actúan juntos como un potente adyuvante para vacunas. De manera conveniente, tales composiciones pueden ser administradas en forma sistémica, aunque también son potentes en la inducción de respuestas inmunes sistémicas cuando las composiciones de vacunas son administradas en la mucosa. Las respuestas inmunes inducidas por la administración mucosa de vacunas de la presente invención, pueden ser al menos tan altas como las observadas después de una inyección sistémica de una vacuna convencional.

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La presente invención proporciona adjuvantes seguros y potentes f que son fáciles de fabricar, y que pueden ser administrados ya sea a través de rutas mucosas o sistémicas. En un primer aspecto, la presente invención proporciona un adjuvante que comprende un éster sorbitano de polioxietileno y un octoxinol. En otro aspecto, la presente invención proporciona una vacuna que comprende un adjuvante de acuerdo con la misma, junto con un antígeno. 10 Es particularmente preferida una composición de vacuna que comprenda un adjuvante de acuerdo con la presente invención con el antígeno del virus para la administración a una superficie mucosa, en particular a la mucosa nasal. Sin embargo, existen rutas de administración alternativas y otros posibles antígenos para utilizarse en una vacuna de acuerdo con la presente invención, los cuales se describirán mas adelante. Los octoxinoles y esteres sorbítanos de polioxietileno se describen en la publicación "Sistemas de tensioactivos" editores: Adwon y Florence (1983, Chapman y Hall). La serie octoxinol, que incluye t- 20 octilfenoxipolietoxietanol (TRITÓN X-100™) también se describe en la Entrada del índice Merk 6858 (página 1162, 12a. Edición, Merck and Co., Inc. Whitehouse Station, N.J., EUA; ISBN 0911910-12-3). Los esteres sorbitanos de polioxietileno que incluyen monooleatos sorbitano de polioxietileno (TWEEN 80™, se describen en la Entrada del índice Merck 7742 (página, 1308, 12a edición, Merck and Co., Inc, i^a i á J-*.*» s. . ~. A.^- Whitehouse Station, N.J..EUA; ISBN 0911910-12-3.). Ambos pueden ser manufacturados utilizando los métodos aquí descritos, o comprados en fuentes comerciales, tales como Sigma Inc. Los octoxinoles preferidos para utilizare en los adjuvantes de acuerdo con la presente invención, incluyen otros tensioactivos no iónicos de la serie Tritón, tales como Tritón X-45, Tritón X-102, Tritón X-114, Tritón X-165, Tritón X-205, Tritón X-305, Tritón N-57, Tritón N-101 y Tritón N-128, aunque es particularmente preferido t-octilfenoxipolietoxietanol (Tritón X-100). Los adjuvantes de la presente invención comprenden un éster sorbitano de polioxietileno y un octoxinol. Preferentemente, el octoxinol es t-octilfenoxipolietoxietanol (Tritón X-100™). Preferentemente, el éster sorbitano de polioxietileno es monooleato sorbítano de polioxietileno (TWEEN 80™). El adjuvante de acuerdo con la presente invención, puede comprender adicionalmente de manera conveniente una sal biliar o un derivado de ácido cólico. Por lo tanto, el adjuvante puede comprender un éster sorbitano de polioxietileno tal como monooleato sorbítano de polioxietileno (Tween 80), un octoxinol tal como t-octilfenoxipolietoxietanol (Tritón X-100) y una sal biliar o derivado de ácido cólico, tal como deoxicolato de sodio o taurodeoxicolato . En una modalidad preferida, la presente invención proporciona, una formulación adjuvante que comprende monooleato sorbitano de polioxietileno (Tween 80), t-octilfenoxipolietoxietanol (Tritón X-100) y deoxicolato de sodio.

Preferentemente, la concentración total de tensioactivos no iónicos Mr presentes en la formulación adjuvante, es menor al 40%, más preferentemente hasta aproximadamente 20%. Un rango preferido es de entre aproximadamente 0.001% hasta el 20%, más preferentemente de 0.01% a 10% y lo más preferentemente hasta aproximadamente 2% (p/v). Los tensioactivos no iónicos individuales tienen las concentraciones preferidas en la composición de la vacuna final que se indican a continuación: polietoxíetanoles octil o nonilfenoxi tales como Tritón X-100 u otros detergentes de la serie Tritón: desde 0.001% hasta 20%, preferentemente desde 0.001% hasta 10%, más preferentemente desde 0.001% hasta 1% y lo más preferentemente desde 0.005% hasta 0.1% (p/v); esteres sorbitano de polioxietileno tales como Tween 80: desde 0.01 hasta 1%, lo más preferentemente aproximadamente 0.0% (p/v). 15 Los rangos particularmente preferidos para las concentraciones de los tensioactivos no iónicos son: Tween 80™: de 0.01 hasta 1%, más preferentemente aproximadamente 0.1% (p/v); Tritón X-100™: de 0.001 hasta 0.1, más preferentemente de 0.005 hasta 0.02% (p/v). Un aspecto de la presente invención, es una formulación de vacuna que comprende un tensioactivo de éster sorbitano de polioxietileno en combinación con un octoxinol, en donde el antígeno presente en la vacuna no está atrapado dentro de una vesícula de tensioactívo no ¡ónico. --¡ÉÉf ^ £&i*&*¿ fc,.j iíi rt .1 Mam nifjfjt ? ¡ Los antígenos del virus influenza para utilizarse en la vacuna de acuerdo con la presente invención, pueden tener cualquier forma de antígenos de influenza adecuados para elevar una respuesta inmune, incluyendo víruses completos vivos o desactivados, víruses fragmentado o antígenos de subunidad preparados a partir de víruses completos o a través de medios recombínantes. El virus influenza para la producción del antígeno, puede ser crecido en huevecillos embrionados en un proceso convencional, o el virus puede ser crecido en cultivo de tejido. Los substratos celulares adecuados para el cultivo de tejido de influenza, incluyen por ejemplo, células de riñon de perro tales como células MDCK, células de un clon de MDCK, o células similares a MDCK, células de riñon de mono tales como células AGMK incluyendo células Vero, y cualesquiera otros tipos de células adecuadas para la producción del virus influenza para los propósitos de vacunación. Los substratos celulares adecuados también incluyen células humanas, por ejemplo células MRC-5. Los substratos celulares adecuados no se limitan a líneas celulares, por ejemplo también se incluyen células primarias tales como fibroblastos de embrión de pollo. Se prefiere una preparación de antígeno del virus influenza que comprende el virus dividido, el cual ha pasado por una serie de pasos de purificación. Por lo tanto, la preparación de antígenos se puede producir a través de un numero de diferentes procesos comercialmente aplicables, por ejemplo el proceso flu fragmentado descrito en la patente No. DD 300 833 y DD 211 444, incorporadas a la presente invención como referencia. t.i i.* .t á.: La vacuna de influenza fragmentado disponible en el mercado incluye Fluarix™ la cual es vendida por SmithKIine Beecham. Por lo tanto, una formulación de vacuna preferida de acuerdo con la presente invención, comprende huevecillos o cultivo de tejido derivados del antígeno de influenza, preferentemente el antígeno de influenza fragmentado, junto con un éster sorbitano de polioxietileno y un octoxinol, comprendiendo adicionalmente de manera opcional una sal biliar o derivado de ácido cólico. Más preferentemente, la formulación comprende el antígeno del virus de influenza fragmentado, monooleato sorbitano de polioxietileno, (Tween 80), t-octilfenoxipolietoxíetanol (Tritón X-100) y deoxicolato de sodio. La vacuna influenza de acuerdo con la presente invención, es preferentemente una vacuna influenza multivalente que comprende dos o más cepas de influenza. Más preferentemente es una vacuna trivalente que comprende tres cepas. Las vacunas de influenza convencionales comprenden tres cepas de influenza, dos cepas A y una cepa B. Sin embargo, las vacunas monovalentes que pueden ser útiles por ejemplo en una situación pandémica, no se excluyen de la presente invención. Una vacuna de flu pandémica monovalente, probablemente contendrá el antígeno de influenza procedente de una sola cepa A. Las preparaciones de vacuna de la presente invención, se pueden utilizar para proteger o tratar un mamífero susceptible a, o que padece de alguna enfermedad, administrando la vacuna a través de una ruta mucosa, tal como la ruta ora/vocal/intestinal/vaginal/rectal o nasal. Tal jjja é ?..i?Í i administración puede tener forma de gota, rocío o polvo seco. Las formulaciones de vacunas nebulizadas o aerosolizadas también forman parte de la presente invención. Las formulaciones entéricas tales como cápsulas y granulos gastro resistentes para administración oral, 5 supositorios para administración rectal o vaginal también forman parte de la presente invención. La presente invención también puede ser utilizada para aumentar la inmunogenicidad de antígenos aplicados a la piel (administración dérmica o transcutánea). Además, los adyuvantes de la presente invención pueden ser administrados en forma parenteral, por ejemplo intramuscular o administración subcutánea. Cuando se utilizan para vacunación intranasal, las vacunas de la presente invención tienen una naturaleza preferentemente hemolítíca. Dependiendo de la ruta de administración, se puede utilizar una variedad de aparatos de administración. Por ejemplo, para administración intranasal se puede utilizar un aparato de rocío tal como el disponible en el mercado en Acuspray™ (Becton Dickinson). Los aparatos de rocío preferidos para uso intranasal, son aparatos para los cuales el desempeño del aparato no depende de la presión aplicada por parte del usuario. Éstos aparatos son conocidos como aparatos de umbral de presión. El líquido es liberado de la boquilla únicamente cuando se logra una presión de umbral. Éstos aparatos hacen más fácil lograr un rocío con un tamaño de gota regular. Los aparatos de umbral de presión adecuados para utilizarse con la presente invención, son conocidos en la técnica y se describen por ejemplo en el documento WO 91/13281 y EP 311 863 B. Tales aparatos están disponibles en el mercado en Pfeiffer GmbH. Los aparatos intranasales preferidos producen gotas (medidas utilizando agua como líquido) dentro del rango de 1 a 200µm, preferentemente 10 a 120µm. Debajo de 10µm existe el riesgo de inhalación, por lo tanto es deseable tener gotas de no más del 5% debajo de 10µm. Las gotas arriba de 120µm no se pueden esparcir así como las gotas más pequeñas, de modo que es deseable tener gotas no mayores a aproximadamente 5% arriba de 120µm. La administración de bidosis es una característica preferida adicional de un aparato de administración intranasal para utilizarse con las vacunas de acuerdo con la presente invención. Los aparatos de bidosís contienen dos subdosis de una sola dosis de vacuna, una subdosis para administración a cada fosa nasal. Generalmente, las dos subdosis están en una sola cámara y la construcción del aparato permite la eficiente administración de una sola subdosis al mismo tiempo. La presente invención proporciona en un aspecto adicional, un equipo que comprende un aparato de administración intranasal tal como se describe en la presente invención, que contiene una formulación de vacuna de acuerdo con la misma. En una modalidad preferida de este aspecto de la presente invención, el aparato de administración intranasal se llena con una vacuna de influenza. Para ciertas formulaciones de vacuna, se pueden incluir otros componentes de vacunas en la formulación. Como tal, las formulaciones de adyuvante de la presente invención también pueden comprender un ácido biliar o derivado de ácido cólico. Preferentemente, el derivado de ácido cólico es una sal del mismo, y más preferentemente una sal de sodio del mismo. Los ejemplos de ácidos biliares y derivados de los mismos incluyen el propio ácido cólico, ácido deoxicólico, taurodeoxicolato, ácido cólico quenodeoxi, ácido ursodeoxicólico, ácido litocólico, ácido yodeoxicolicólico y derivados similares a derivados amidopropil-2-hidroxi-1-propanosulfónico, glico, tauro, amidopropil-1-propanosulfónico de los ácidos biliares antes mencionados, o deoxicolamida N, N-bis (3DGIuconoamidopropilo). Un ejemplo preferido particular es deoxicolato de sodio (NaDOC) el cual puede estar presente en la dosis de vacuna final. Preferentemente, la formulación adyuvante de la presente invención es conveniente cuando está en la forma de una solución acuosa o una suspensión de formas no vesiculares. Tales formulaciones son fáciles de fabricar en forma reproducible, y también fáciles de esterilizar (filtración terminal a través de una membrana de poros de 450 ó 220nm) y también son fáciles de administrar a la mucosa nasal en la forma de un rocío sin la degradación de la estructura física del complejo del adyuvante. En un aspecto adicional de la presente invención, se proporciona un método para preparar una vacuna, en donde el método comprende mezclar con adiciones un adjuvante de acuerdo con la presente invención con un antígeno. En un aspecto aún adicional, se proporciona un método para inducir o aumentar una respuesta inmune en un sujeto, que comprende mezclar 1*4. »*fc . con adiciones el antígeno y el adjuvante de la presente invención, y administrar la mezcla al sujeto. Preferentemente, la ruta de administración al sujeto es a través de una superficie mucosa y más preferentemente a través de la mucosa nasal. Cuando la vacuna se administra a través de la mucosa nasal, la vacuna es administrada preferentemente en la forma de un rocío. En un método preferido para inducir o aumentar una respuesta inmune, se induce una respuesta sistémica por medio de una administración nasal de la vacuna. Por lo tanto, una vacuna de mucosa de acuerdo con la presente invención, tiene preferentemente la capacidad de inducir una respuesta inmune sistémica cuando se administra a través de una ruta de mucosa. La presente invención proporciona además el uso de un éster sorbitano de polietileno y un octoxinol en la fabricación de una formulación adjuvante, en particular una formulación adjuvante para aplicación a la mucosa de un paciente. La presente invención también se refiere al uso de un éster sorbitano de polioxietileno, un octoxinol y un antígeno, en la fabricación de una formulación de vacuna, especialmente una formulación de vacuna para aplicación a la mucosa. Preferentemente, el antígeno es el antígeno del virus influenza. Se prefieren de manera particular los adjuvantes y vacunas para administración a la mucosa nasal. Preferentemente, la administración de una vacuna de conformidad con la presente invención, comprende la administración de una dosis de inicio o de refuerzo de la vacuna, tal como una dosis de inicio o de refuerzo de la vacuna de influenza que comprende una preparación del antígeno de influenza. Se considera que las composiciones de la presente invención, serán utilizadas para formular vacunas que contengan antígenos derivados de una amplia variedad de fuentes. Por ejemplo, los antígenos pueden incluir preparaciones antigénicas o de antígenos derivados de humano, bacterias, ácido nucleico viral o patógenos, antígeno derivado de tumor o preparaciones antigénicas, antígenos derivados de huésped, incluyendo péptidos GnRH e IgE, proteínas o péptidos producidos en forma recombinante y proteínas de fusión quimérica. Preferentemente, las formulaciones de la presente invención contienen un antígeno o composición antigénica que tiene la capacidad de obtener una respuesta inmune contra un patógeno humano, en donde el antígeno o composición antigénica es derivada de VIH-1, (tal como tat, nef, gp120 ó gp160), víruses de herpes humano, tal como gD ó derivados de los mismos o proteína Temprana Inmediata tal como ICP27 procedente de VSH1 ó VSH2, citomegalovirus (esp. Humanos) tal como gB ó derivados de los mismos), Rotavirus (incluyendo víruses atenuados vivos), virus Epstein Barr (tal como gp350 ó derivados de los mismos), Virus Zoster Varicela (tal como gpl, II y IE63), o de un virus de hepatitis tal como virus de hepatitis B (por ejemplo antígeno de Superficie de Hepatitis o un derivado del mismo), virus de hepatitis A, virus de hepatitis C y virus de hepatitis E, o de otros patógenos vírales, tales como paramixovíruses: virus Sincítial Respiratorio (tal como proteínas F y G ó derivados de las mismas), virus de parainfluenza, virus de sarampión, virus de paperas, víruses de papiloma humano (por ejemplo VPH6, 11, I 16, 18, ..), flavivíruses (por ejemplo Virus de Fiebre Amarilla, Virus del Dengue, virus de Encefalitis por nacimiento de garrapata, Virus de Encefalitis Japonesa) o virus de Influenza (todo el virus vivo o desactivado, virus de influenza fragmentado crecido en huevesillos o células MCDK, o células Vero o todos los virosomas flu (tal como son descritos por R. Glick, Vacuna 1992, 10, 915-920) o proteínas purificadas o recombinantes de los mismos, tales como HA, NP, NA, ó proteínas M, o combinaciones de los mismos) o derivados de patógenos bacterianos tales como Neisseria spp, incluyendo N. gonorrhea, incluyendo N. meningitidis, (por ejemplo polisacáridos capsulares y conjugados de los mismos, proteínas de enlace de transferina, proteínas de enlace de lactoferina, PilC, adhesinas); S. pyogenes (por ejemplo proteínas M ó fragmentos de los mismos, protease C5A, ácidos lipoteicoicos), S. agalactiae, S. mutans; H. ducreyi; Moraxella spp, Incluyendo M catarrhalis, también conocida como Branhamella catarrhalis (por ejemplo adhesinas e invasinas de peso molecular alto y bajo); Bordetella spp, incluyendo B. pertussis (por ejemplo pertactina, toxina de pertussis ó derivados de la misma, hemaglutinina filamentosa, ciclasa de adenílato, fimbriae), B. parapertussis y B. bronchiseptica; Mycobacterium spp; incluyendo M. tuberculosis (por ejemplo ESAT6, Antígeno 85A, -B ó -C), M. bovis, M. leprae, M. avium, M. paratuberculosis, M. smegmatis; Legionella spp, incluyendo L. pneumophila; Escherichia spp, incluyendo enterotoxic E. coli (por ejemplo factores de colonización, toxina lábil por calor derivados de la misma, toxina estable por calor o derivados de la -\ JFI?AÁ misma), E. coli enterohemorrágico, E. coli enteropatogénico (por ejemplo toxina similar a toxina shiga o derivados de la misma); Vibrio spp, incluyendo V. cholera (por ejemplo toxina de cólera y derivados de la misma); Shigella spp, Incluyendo S. sonnei, S. dysenteriae, S. flexnerii; Yersina spp, incluyendo Y. Enterocolítica (por ejemplo una proteína Yop), Y. pestis, Y. pseudotuberculosis; Campylobacter spp, incluyendo C. jejuni (por ejemplo toxinas, adhesinas e invasinas) y C. coli; Salmonella spp, incluyendo S. tiphi, S. paratyphi, S. choleraesuis, S. enteritidis; Listeria spp, incluyendo L. monocytogenes; Helicobacter spp, incluyendo H. pylori (por ejemplo ureasa, catalasa, toxina de vacuolación); Pseudomonas spp, incluyendo P. aeruginosa; Staphilococcus spp, incluyendo S. aureus, S. epidermidis; Enterococcus spp, incluyendo E. faecalis, E. faecium; Clostridium spp, incluyendo C. tetani (por ejemplo toxina de tétanos y derivados de la misma), C. botulinum (por ejemplo toxina de botulinum y derivados de la misma), C. difficile (por ejemplo toxina de clostridium A ó B y derivados de los mismos); Bacillus spp, incluyendo B. anthracis (por ejemplo toxina de botulinum y derivados de la misma); Corynebacterium spp, incluyendo C. diphtheriae (por ejemplo toxina de difteria y derivados de la misma); Borrelia spp, incluyendo B. burgdorferi (por ejemplo OspA, OspC, DbpA, DbpB), B. garinii (por ejemplo OspA, OspC, DbpA, DbpB), B. afzelii (por ejemplo OspA, OspC, DbpA, DbpB), B. andersonii (por ejemplo OspA, OspC, DbpA, DbpB), B. hermsii; Ehrlichia spp, incluyendo E. equi y el agente del Ehrliquiosis Granulocítico Humano; Rickettsia spp, incluyendo R. rickettsii; Chlamydia spp, incluyendo C. trachomatis (por ejemplo MOMP, proteínas de enlace de eparina) C. pneumoniae (por IM.Í ?-.a -iíl í- ? tí i. -t ejemplo MOMP, proteínas de enlace de eparina) C. psittaci; Leptospira spp, incluyendo T. interrogans; Treponema spp, incluyendo T. pallidum (por ejemplo las proteínas de membrana exterior raras), T. denticola, T. hyodysenteriae; ó derivados de parásitos tales como Plasmodium spp, incluyendo P. falciparum; Toxoplasma spp, incluyendo T. gondii (por ejemplo SAG2, SAG3, Tg34); Entamoeba spp, incluyendo histolytica; Babesia spp, incluyendo B. microti; Trypanosoma spp, incluyendo 7. Cruzi; Giardia spp, incluyendo G. lamblia; Leshmania spp, incluyendo L. major; Pneumocystis spp, incluyendo P. carinii; Trichomonas spp, incluyendo T. vaginalis; Schisostoma spp, incluyendo S. mansoni, ó derivados de levadura tales como Candida spp, incluyendo C. albicans; Cryptococcus spp, incluyendo C. neoformans. Las vacunas de bacteria preferidas comprenden antígenos derivados de Streptococcus spp, incluyendo S. pneumoniae (por ejemplo polisacáridos capsulares y conjugados de los mismos, PsaA, PspA, estreptolisina, proteínas de enlace de colina) y el Pneumolicin de antígeno de proteína (Acta Bioquímica Biofísica, 1989, 67, 1007; Rubins y asociados, Patogénesis Microbiana, 25, 337-342), y derivados de toxificados mutantes de los mismos (WO 90/06951; WO 99/03884). Otras vacunas de bacterias preferidas comprenden antígenos derivados de Haemophilus spp, incluyendo H. influenzae tipo B (por ejemplo PRP y conjugados del mismo), H. influenzae no tipificable, por ejemplo OMP26, adhesinas de alto peso molecular, P5, P6, proteína D y lipoproteína D, y fimbrina y péptídos derivados de fimbrina (Patente Norteamericana 5, 843, 464) ó múltiples variantes de copia o proteínas de fusión de los mismos. Otras vacunas de bacterias preferidas comprenden antígenos derivados de Morexella Catarrhalis (incluyendo vesículas de membrana exterior de los mismos, y OMP106 (WO 97/41731)) y de Neisseria mengitidis B (incluyendo vesículas de membrana exterior del mismo, (WO 96/29412). Los derivados del antígeno de Superficie de Hepatitis B son bien conocidos en la técnica e incluyen, inter alia, aquellos antígenos PreS1, PreS2 S establecidos y descritos en las solicitudes de Patente Europea No. EP-A-414 374; EP-A-0304 578, y EP 198-474. En un aspecto preferido la formulación de vacuna de la presente invención comprende el antígeno VIH-1, gp120, especialmente cuando se expresa en células CHO. En una modalidad adicional, la formulación de vacuna de la presente invención comprende gD2t, tal como se definió anteriormente. En una modalidad preferida de la presente invención, las vacunas que contienen el adyuvante reclamado comprenden antígeno derivado del Virus de Papiloma Humano (VPH) considerado por ser el responsable de verrugas genitales, (VPH 6 ó VPH 11 y otros), y los víruses VPH responsables de cáncer cervical (VPH16, VPH18 y otros). Las formas particularmente preferidas de vacunas profilácticas o terapéuticas de verrugas genitales comprenden partículas L1 ó capsómeros y proteínas de fusión que comprenden uno o más antígenos seleccionados de las proteínas de VPH 6 y VPH 11 E6, E7, L1, y L2. Las fórmulas más preferidas de proteína de fusión son. L2E7 tal como se describe en el documento WO 96/26277, y la proteína D (1/3)-E7 descrita en el documento GB 97179535 (PCT/EP98/05285). l .i.

Una composición de vacuna de profilaxis o terapéutica de infección o cáncer cervical por VPH preferida, puede comprender antígenos VPH 16 ó 18. Por ejemplo, los monómeros de antígeno L1 ó L2 ó los antígenos L1 ó L2 presentados juntos como una partícula similar a virus (VLP) o la proteína L1 sola presentada sola en un VLP o estructura de capsómero. Tales antígenos, partículas similares a virus y capsómeros ya son conocidos. Se debe ver por ejemplo los documentos WO94/00152, WO94/20137, WO94/05792, y WO93/02184. Se pueden incluir proteínas tempranas adicionales solas o como proteínas de fusión tales como preferentemente E7, E2 ó E5 por ejemplo; las modalidades particularmente preferidas de esto incluyen un VLP que comprende proteínas de fusión L1E7 (WO 96/11272). Los antígenos VPH 16 particularmente preferidos comprenden proteínas tempranas E6 ó E7 en fusión con un portador de proteína D para formar Proteína D-E6 ó E7 procedentes de VPH 16 o combinaciones de las mismas; o combinaciones de E6 ó E7 con L2 (WO 96/26277). De manera alternativa, el E6 y E7 de proteínas tempranas de VPH 16 ó 18, pueden ser presentadas en una sola molécula, preferentemente una fusión de Proteínas D-E6/E7. Tal vacuna puede contener opcionalmente cualquiera o ambas de las proteínas E6 y E7 procedentes de VPH 18, preferentemente en la forma de una proteína de fusión de Proteína D-E6 ó Proteína D-E7Ó una proteína de fusión de Proteína D E6/E7. ¡s^^^&&^^^^3é&m La vacuna de la presente invención puede comprender tradicionalmente antígenos de otras cepas de VPH, preferentemente de las cepas VPH 6, 11, 31, 33 ó 45. Las vacunas de la presente invención comprenden además antígenos derivados de parásitos que causan Malaria. Por ejemplo, los antígenos preferidos procedentes de Plasmodia falciparum incluyen RTS.S y TRAP. RTS es una proteína híbrida que comprende substancialmente toda la parte de terminal C de la proteína circumsporozoite (CS) de P. falciparum enlazada a través de cuatro aminoácidos de la parte preS2 del antígeno de superficie de Hepatitis B al antígeno de la superficie (S) del virus de hepatitis B. su estructura completa se describe en la solicitud de Patente Internacional No. PCT/EP92/02591, publicada bajo el número WO 93/10152 que reclama la prioridad de la solicitud de patente de Reino Unido No. 9124390.7. Cuando se expresa en RTS de levadura se produce una partícula de lipoproteína, y cuando sé coexpresa con el antígeno S procedente de VBH, se produce una partícula mezclada conocida como RTS,S. En la solicitud de Patente Internacional No. PCT/GB89/00895, publicada bajo el número WO 90/01496 se describen antígenos TRAP. Una modalidad de la presente invención es una vacuna de Malaria en donde la preparación antigénica comprende una combinación de los antígenos RTS.S y TRAP. Otros antígenos de plasmodia que son probablemente candidatos para ser componentes de una vacuna de Malaria de multietapas son P.faciparum MSP1, AMA1, MSP3, EBA, GLURP, RAP1, RAP2, Secuestrim, PfEMPI, Pf332, LSA1, LSA3, STARP, SALSA, PfEXPI, Pfs25, Pfs28, PFS27/25, Pfs16, Pfs48/45, Pfs230 y sus análogos en Plasmodium spp. Las formulaciones también pueden contener un antigeno anti-tu or y ser útiles para cánceres de tratamiento ínmunoterapéuíico. Por ejemplo, la formulación adyuvante tiene utilidad con antígenos de expulsión de tumores tales como cánceres de próstata, mamarios, colorectales, de pulmón, pancreáticos, renales o de melanoma. Los antígenos de ejemplo incluyen MAGE 1 y MAGE 3 u otros antigenos MAGE para el tratamiento de melanoma, PRAME, BAGE o GAGE (Robbins y Kawakami, 1996, Opciones Normales en Inmunología 8, páginas 628 a 636: Van den Eynde y asociados, Revista Internacional de Investigación Clínica y de Laboratorio (presentada en 1997); Corréale y asociados (1997), Revista del Instituto Nacional de Cáncer 89, página 293. De hecho estos antígenos son expresados en un amplio rango de tipos de tumor tales como melanoma, carcinoma de tumor, carcinoma de sarcoma y de vejiga. Otros antígenos específicos de tumor son adecuados para utilizarse con el adyuvante de la presente invención e incluyen, pero no se limitan a antigeno específico de próstata (PSA) o Her-2/neu, KSA (GA733), MUC-1 y antígeno carcinoembriónico (CEA), Por lo tanto, en un aspecto de ia presente invención, se proporciona una vacuna que comprende una composición adyuvante de acuerdo con la presente invención y un antigeno de expulsión de tumor. Adícionaimeníe, el aníígeno puede ser una auto hormona de pépíido tai como una hormona de liberación de hormonas de Gonadotropina de toda ta longitud (GnRH, WO 95/20600), un péptído largo de 10 ..t-jt.* k4..i aminoácidos cortos, en ei tratamiento de muchos cánceres o inmunocastración. Se considera que las composiciones de la presente invención serán utilizadas para formular vacunas que contienen antígenos derivados de Borrelia sp.. Por ejemplo, los antígenos pueden incluir ácido nucleico, antigeno derivado de patógeno o preparaciones antigénicas, proteínas o péptidos producidos en forma recombinante y proteínas de fusión quimérica. En particuiar. el antigeno es OspA. E! OspA puede ser una proteína madura total en una forma Sipidada en virtud de la célula huésped (E: Coli) denominada (Lipo-OspA) o un derivado no lipidado. Tales derivados no lipídados incluyen una proteína de fusión NS1-OspA no iipidada que tiene los primeros 81 aminoácidos de terminal N de ia proteína no estructural (NS1) del virus influenza y la proteína OspA completa, y otra, MDP-OspA, es una forma no lipidada de OspA que transporta 3 aminoácidos de terminal N adicionales. Las vacunas de la presente invención pueden utilizarse para la profilaxis o terapia de alergia. Tales vacunas podrían comprender antigenos específicos de alergénicos (por ejemplo Dev p1) y no específicos de alergénicos (por ejemplo póptidos derivados de IgE humano, incluyendo pero sin limitarse a decapéptído Stanworth (EP 0 477 231 B1)). La cantidad de proteina en cada dosis de vacuna es seleccionada como una cantidad que induce una respuesta ínmunoprotectora sin efectos secundarios significativos, adversos en vacunas típicas. Tal cantidad variará dependiendo del inmunogén específico que se emplee y i-.t.j .j i .¿.¿ .'..U . Ifi ?¿?.ff~, i^M. gj^^a?í de cómo se presente. Generalmente, se espera que cada dosis comprenderá de 1 a 1000 µg de proteina, preferentemente de 1 a 500 µg, preferentemente de 1 a 100 µg, lo más preferentemente de 1 a 50 µg. Se puede determinar una cantidad óptima de una vacuna en particular mediante estudios estándares que comprenden la observación de una respuesta inmune apropiada en sujetos. Después de una vacunación inicial, los sujetos pueden recibir una o más inmunizaciones de refuerzo espaciadas en forma adecuada. Las vacunas de ia presente invención también pueden ser administradas de forma oral. En tales casos el excipiente farmacéuticamente aceptable también puede incluir amortiguadores antiácidos, o cápsulas entéricas o microgránulos. Las vacunas de ia presente invención también pueden ser administradas a través de la ruta vagina!. En tales casos, ios excipientes farmacéuticamente aceptables también pueden incluir emulsificantes, polímeros, tales como CARBOPOL.0 , y otros estabilizadores conocidos de cremas y supositorios vaginales. Las vacunas de la presente invención, también pueden ser administradas en forma rectal. En tales casos los excipientes también pueden incluir ceras y polímeros conocidos en la técnica para formar supositorios rectales. Las formulaciones de ia presente invención también pueden ser utilizadas para propósitos tanto profilácticos como terapéuticos. Por io tanto, la presente invención proporciona un método para tratar a un mamífero susceptible a o que padece de una enfermedad infecciosa o cáncer, o alergia, o padecimiento auto inmunoíógico. En un aspecto adicional de Sa presente invención, se proporciona una combinación de adyuvante y una vacuna tai como se describe en la presente invención, para utilizarse en medicina. En una modalidad alternativa relacionada con ia presente invención, ei adyuvante de la presente invención puede ser combinado adicionalmente con otros adyuvantes, incluyendo toxina de Cólera y su sub-unidad B, el lípido Monofosforiio A y su derivado no tóxico de lipido de monofosforilo 3-de-O-acilado A, (tal como se describe en la Patente de! Reino Unido No. GB 2220,211), fracciones de saponina inmunológicamente activa, por ejemplo, Quíi A derivado de la corteza del árbol de Quillaja Saponaria Mohna de América del Sur y derivados de las mismas (por ejemplo QS21, Patente Norteamericana No. 5.057,540), y el sistema adyuvante de oligonucleótído CpG (tal como se describe en la publicación WO 96/0255). especialmente 5'TCG TCG TTT TGT CGT TTT GTC GTT3' (SEQ ID NO. 1), La presente invención se ilustra pero no se limita a los siguientes ejemplos. En los ejemplos que se encuentran más adelante, utilizamos el virus completo de flu crecido con huevecillos, desactivado con formaldehído, o el virus fragmentado de éter-Tween o virus crecido por huevecillos fragmentado NaDOC suplementado con Tritón X-100. Las concentraciones del Tween-80 y Tritón X-100 se muestran en los siguientes ejemplos. Ejemplo 1, Método que se utiliza para medir las respuestas de anticuerpo (Ab) en sueros ELISA para la medida de Abs !g de suero especifico de influenza: t it * ^ . fe . I í .

Se recubren inmunoplacas Maxisorp Nuric durante la noche a una temperatura de 4"C con 50 µi/depósito de 1 µg/ml HA de virus de influenza desactivada p-propíolactona (BPL) (suministrado por el fabricante SSD GmBH, Dresden. Alemania) diluido en PBS. Se bloquean los sitios ubres en ia placas (1 hora a 37*0), utilizando amortiguador de saturación: PBS que contiene 1% de BSA, 01% de Monolaurato sorbitano de polioxieíüeno (TWEEN 20) Posteriormente, se incuban durante 1 hora 30 minutos a una temperatura de 37'C, diiuciones en serie de 2 dobleces (en amortiguador de saturación, 50 µl por depósito) de un suero de referencia agregado en la forma de una curva estándar (suero que tiene un tituiador de punto medio expresado como ELISA Unidad/ml y puesto en la fiecha A) y muestras de suero (comenzando con una dilución 1/100 y puestos en las fiechas de la B a ¡a H). Posteriormente, la placas son ¡avadas (x3) con amortiguador de ¡avado (PBS, 0.1% de Monolaurato sorbitano de poíioxietüeno (TWEEN 20)), Posteriormente, se incuban (50 µf/depósito) durante 1 hora 30 minutos a una temperatura de 37°C. Ig antihumano de cabra bíotinado (Amersham) diluido 1/3000 en amortiguador de saturación. Después de 3 lavados, y la adición subsecuente de conjugado de peroxidasa de estreptavidin-rábano (Amersham) las placas son ¡avadas 5 veces e incubadas durante 20 minutos a temperatura ambiente con 50 µi/depósito dei amortiguador de revelación (OPDA 04 mg/ml (Sigma) y H202 0.3% en 50mM pH 45 de amortiguador de citrato) La revelación se detiene agregando 50 µl/depósito de H2S04 2N Las densidades ópticas son medidas a 492 y 630 nm utilizando un ínmulector Biorad 3550. Las titulaciones de ? A tal< **-£ &jjéyd.jrl-a& anticuerpo son calculadas por el método matemático de 4 parámetros utilizando el software SoftMaxPro. Actividad de Inhibición de Hemaqlutinación (HAI) de suero Abs específico de flu en ratones. Se trataron primero los sueros (25 ul) durante 20 minutos a temperatura ambiente (RT) con 100 µl de borato 0.5M de amortiguador (pH 9) y 125 µl de caolina comprada en Dade Behring. Después de la centrifugación (30 minutos, 3000 RPM o 860 g), se tomaron 100 µl de sobrenadante (correspondiente a una dilusión de 1/10 del suero) y se incubaron durante una 1 hora a una temperatura de 4°C con 0.5% de células de glóbulos rojos de pollo. Se recolectó el sobenadante después de la centrifugación durante 10 minutos a 3200 RPM (970 g). Ambas operaciones se realizaron para eliminar los factores de hemaglutinación natural contenidos en los sueros. Posteriormente, los 25 µl de sueros tratados son diluidos en 25 µl de PBS (serie de dilusiones de dos dobleces comenzando en 1/20) en placas Greiner de 96 depósitos. Se agregó el virus completo desactivado por BPL ( 25ul / depósito) en una concentración de 4 unidades de hemaglutinación (por ejemplo en una dilusión la cual es 4 dobleces inferior que la ultima que provoca una aglutinación de las células de glóbulos rojos) durante 30 minutos a RT bajo agitación. Posteriormente se agregaron las células de glóbulos rojos de pollo (25 µl/ depósito) durante una hora a RT. Finalmente las placas se mantuvieron durante la noche a una temperatura de 4°C antes de ser leídas. El títulador HAI corresponde al inverso de la última dilusión de suero inhibiendo la hemaglutinación inducida por el virus. jemplo 2, Efecto de TWEEN 80 y Tritón en la inmunogenicidad intranasal de todo el virus de influenza desactivado en ratones. Anteriormente, las evaluaciones preclínicas de las vacunas de influenza alternativas (por ejemplo, vacunas parenterales adjuvadas, vacunas basadas en ADN o vacunas suministradas en forma mucosa) se habían llevado a cabo principalmente en animales "naive". En general, los resultados prometedores obtenidos a partir de estos estudios, no fueron confirmados en humanos. Esto se debió probablemente al hecho de que la mayoría de los adultos habían sido "preparados" inmunologicamente por medio de infecciones naturales antes de la vacunación, a diferencia de los animales "naive". Por lo tanto, la mejor forma de evaluar las vacunas de influenza intranasal en modelos de animales, podría ser probar su capacidad de reforzar las respuestas inmune establecidas previamente en animales preparados en forma nasal. En el presente ejemplo se evaluó el efecto de Tween 80 y Tritón X-100 en tales respuestas. La preparación se realizó en ratones hembra Balb/c (8 semanas de edad) en el día 0, administrando con una pipeta (bajo anestesia) en cada fosa nasal, 2.5 µg de HA de virus de influenza A/Beijíng/262/95 desactivado por BPL contenido en 10ul de PBS. Después de 28 días, los ratones (6/animales/grupo) fueron reforzados en forma intranasal (bajo anestesia) con 20 µl de solución con (10 µl por fosa nasal, administrada en la forma de gotas mediante una pipeta) que contiene 5 µg de HA de virus de influenza A/Beijing/262/95 desactivado por BPL ya sea en A:PBS;B:TWEEN80 (0.11%) además de Tritón X-100 (0.074%); o mediante C: inyección intramuscular de 1.5 µg de HA de la vacuna de influenza. Los antígenos fueron suministrados por el fabricante SSD GmBH (Dresden, Alemania). Las respuestas HAI Ab fueron medidas en los sueros, tal como se describe en el ejemplo 1. Tal como se muestra 5 en la figura 1, cuando se forma con TWEEN80 y Tritón, el virus de influenza desactivado suministrado en forma intranasal tiene la capacidad de reforzar las respuestas HAI Ab sistémicas establecidas previamente en forma tan eficiente como la vacuna de influenza parenteral clásica. Sin embargo, el mismo antígeno proporcionado en forma intranasal en la ausencia de TWEEN80 y Tritón, es significativamente menos inmunogénico. Comparación de la inmunogenicidad de una vacuna de influenza fragmentado intranasal con TWEEN 80 y Tritón X-100, con una vacuna parenteral convencional con licencia (Fluarix™) en sujetos adultos saludables. Formulaciones utilizadas en el estudio. Se han evaluado dos formulaciones (A, B) de antígenos de influenza fragmentado derivados por huevecillos. A es una formulación intranasal y B es Fluarix™/a-Risk R proporcionado en forma intramuscular. Las formulaciones contienen 3 antígenos vírión fragmentado desactivados preparados a partir de cepas recomendadas por WHO de la temporada 1998-1999. El aparato utilizado para la administración intranasal es la jeringa intranasal Accuspray™ de Becton Dickinson. En cada fosa nasal se 25 rociaron 100 µl de la formulación A. ÜIIIÜ- A-i¿i.ta. , A. t ti^,,. ,, ^.

^Composición de ia Formulación La formulación intranasal (A) contenía los siguientes virions fragmentado desactivados. 1.30µg HA A/beijing/262/95 (H1N1) 2.30µg HA A/Sydney/5/97 (H3N2) 3.30µg HA de B/Harbin/7/94 y solución salina amortiguada por fosfato con pH 7.4 i 0.1, 0.1% de TWEEN80. 0.015% de Triton-X-100, 0.0045% de deoxicolato de sodio y tiomersal debajo de 35 µg/mi. El volumen de una dosis fue de 200 µl (subdosis de 10Oµl para cada fosa nasal). El comparador Fluarix™/a-Rix R es la vacuna de influenza fragmentado trivalente desactivada comercial de SmithKIine Beecham Bíologícals. La dosis de 500 µl se administra en forma intramuscular. Esta dosis contiene; 15 µgHa de las tres cepas mencionadas anteriormente, Tween 80 entre 500 y mil µg por ml (0.05% - 0.1%), Tritón X-100 entre 50 y 170 µg/ml (0.005% - 0.017%), de oxicolato de sodio máximo de 100 µg/ml, tiomersal 100 µg/ml y solución salina amortiguada por fosfato con pH de entre 6.8 y 7.5. Estudio de Inmunogenicidad. Un estudio abierto controlado y aleatorio, evaluó la inmunogenicidad de una vacuna de influenza fragmentado intranasal formulada con Tween 80 y Tritón X-100, comparada con la vacuna l-Á.,t,.¿' a . i tqaJ, ,,. i .*^& ai X parenteral convencional (por ejemplo Fluarix™). Veinte sujetos adultos saludables (con edades de 18 a 40 años) recibieron una dosis de Fluarix™, y 10 sujetos recibieron una dosis de la vacuna de influenza intranasal. La formulación intranasal (200ul) contenía los siguientes viriones desactivados: 30 µg de A/Beíjing/262/95 de hemaglutinina (H1N1) 3.0 µg de A/Sydney/5/97 de hemaglutínina (H3N2), 30 µg de B/Harbin/7/94 de hemaglutínina con solución salina amortiguada por fosfato (pH 7.4 +/- 0.1)Tween 80 (0.1%), Tritón X-100 (0.015%), deoxicolato de sodio (0.0045%) y tiomersal (<35µg/ml). Hubo un periodo de seguimiento de 8 días de los síntomas locales y generales y ambas vacunas fueron bien toleradas con respecto a la seguridad y reactogenicidad. No se reportaron casos adversos serios relacionados con la vacunación. La inmunogenicidad de las vacunas se examinó evaluando los tituladores de inhibición de hemaglutinación de suero (Hl) para determinar el rango de suero conversión (definido como el porcentaje de vacunas que tienen al menos un incremento de 4 dobleces en los tituladores Hl de suero en el día 21, comparados con el día 0 para cada cepa de vacuna), factor de conversión (definido como el incremento en dobleces en Tituladores Promedio Geométricos Hl (GMTs) en el día 21 comparados con el día 0 para cada cepa de vacuna) y rango de suero protección (definido como el porcentaje de vacunas con un titulador Hl de suero >40 después de la vacunación (para cada cepa de la vacuna), esto es aceptado como protección de indicación. Generalmente, una vacuna de influenza necesita tener más o igual al 40% del rango de sueroconversión, más o igual al 70% del rango de sueroprotección y un factor de conversión > a 2.5 para cada cepa, con el objeto de cumplir con los requerimientos de regulación internacional. Esto aplica para adultos de entre 18 y 60 años; y aplican criterios diferentes para los ancianos. Además, la respuesta de anticuerpo IgA de mucosa, se evaluó mediante el Ensayo Inmunoabsorbente Enlazado por Encimas (Elisa). En la tabla 1 se pueden observar los rangos de sueropositividad, sueroconversión y sueroprotección Hl veintiún días después de una dosis de Fluarix™ o la formulación intranasal.

En todos los casos el factor de conversión (incremento en dobleces en Hl GMTs de suero después de la vacunación) fue mayor a 2.5, el nivel requerido para una vacuna de influenza exitosa.

El porcentaje de sujetos con incremento de dos dobleces o de cuatro dobleces en la proporción de anticuerpo IgA mucosa específico/total entre el día 21 y el día 0 (dosis 1), se puede observar en la Tabla 2.

Resumen Los resultados de inmunogenicidad tabulados anteriormente, muestran que la formulación intranasal produjo niveles de sueropositivídad, sueroconversión y sueroprotección similares a los producidos mediante la vacuna parenteral convencional (Fluarix™), 21 días después de una dosis. La formulación intranasal produjo una mejor respuesta IgA de mucosa después de una dosis que la vacuna parenteral convencional (Fluarix™).

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Claims (18)

1. REIVINDICACIONES 1. El uso de una combinación de un éster sorbitano de polioxietileno y octoxinol en la preparación de un adjuvante para aplicación a una superficie mucosa de un paciente.
2. 2. El uso de conformidad con la reivindicación 1, en donde el éster sorbitano de polioxietileno es monooletato sorbitano de polioxietileno (Tween 80™).
3. 3. El uso de conformidad con la reivindicación 1 ó 2, en donde el octoxinol es t-octilfenoxipolietoxietanol (TRITÓN X-100™).
4. 4. El uso de conformidad con cualesquiera de las reivindicaciones de la 1 a la 3, que comprenda además una sal biliar o un derivado de ácido cólico.
5. 5. El uso de un adjuvante de conformidad con cualesquiera de las reivindicaciones de la 1 a la 4, junto con un antígeno, en la fabricación de una vacuna para administración mucosa.
6. 6. El uso de conformidad con la reivindicación 5, en donde el antígeno es seleccionado del grupo que comprende: Virus de Inmunodeficiencia Humana, Virus Zoster de Varicela, Virus de Herpes Simple tipo 1, Virus de Herpes Simple tipo 2, citomegalovirus Humano, Virus del Dengue, Hepatitis A, B, C, o E, Virus Sincitial Respiratorio, Virus de Papiloma Humano, Virus Influenza, Hib, Virus de Meningitis, Salmonella, Neisseria, Borrelia, Chlamydia, Bordetella, Streptococcus, Micoplasma, Micobacteria, Hemofilus, Plasmodium o Toxoplasma, stanworth o antígenos asociados con tumor (TMA), MAGE, BAGE, GAGE, MUC-1, Her-2 neu, LnRH, CEA, PSA, KSA, o PRAME. É& .4¿_I i¿ l*Á^lrf^*fc"--*-f¿fc.^?aa^^<u¿Jj-fc^..ri . ^. y.iA--í I* bti
7. 7. El uso de conformidad con la reivindicación 6, en donde el antígeno es un antígeno o preparación antigénica procedente del virus de influenza.
8. 8. El uso de conformidad con la reivindicación 7, en donde la preparación antigénica es una preparación de virus de influenza fragmentado.
9. 9. El uso de conformidad con la reivindicación 7 ó la reivindicación 8, para la fabricación de una vacuna para profilaxis contra influenza.
10. 10. El uso de conformidad con cualesquiera de las reivindicaciones de las 5 a la 9, para la fabricación de una vacuna para uso en medicina.
11. 11. Un método para producir una vacuna, en donde el método comprende mezclar con adiciones (a) un éster sorbitano de polioxietileno, (b) un octoxínol e (c) un antígeno, y proporcionar la vacuna en la forma de una dosis de vacuna para administración mucosa.
12. 12. El método de conformidad con la reivindicación 11, en donde la vacuna se proporciona en un aparato de aerosol o rocío intranasal.
13. 13. Un aparato de aerosol o rocío, mas particularmente un aparato de bidosis, lleno de una vacuna que comprende un éster sorbitano de polioxietileno, un octoxinol y un antígeno.
14. 14. El aparato de rocío o aerosol de conformidad con la reivindicación 13, en donde el antígeno es un antígeno de influenza o una preparación antigénica. ?9,
15. 15. El aparato de rocío o aerosol de conformidad con la reivindicación 14, en donde la preparación antigénica es una preparación de virus de influenza fragmentado.
16. 16. Un método para tratar un mamífero que padece o es susceptible 5 a una infección patógena, o cáncer o alergia en donde el método comprenda administrar a la mucosa del mamífero, una cantidad segura y efectiva de una composición de vacuna que comprende un éster sorbitano de polioxietileno, un octoxinol y un antígeno.
17. 17. El método de conformidad con la reivindicación 16, en 0 donde la vacuna se administra en forma intranasal.
18. 18. El método de conformidad con la reivindicación 16 ó la reivindicación 17, en donde la vacuna es una vacuna del virus de influenza que comprende un antígeno de influenza o preparación 5 antigénica, tal como una preparación del virus de influenza fragmentado.